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FOSFORILAZIONE
OSSIDATIVA
(2C)
(3C)
-8 kcal/mol
Reazione fortemente esoergonica, praticamente irreversibile in vivo
decarbossilazione
ossidazione
transesterificazione
A= acile
Ciclo di Krebs e fosforilazione ossidativa
(respirazione cellulare) avvengono nei mitocondri
La respirazione cellulare
• E’ suddivisa in 3 fasi:
• Fase 1: Produzione di acetil-CoA da parte di
aminoacidi, acidi grassi e carboidrati
• Fase 2: Ossidazione dell’acetil-CoA (Ciclo
di Krebs)
• Fase 3: Trasferimento degli elettroni e
fosforilazione ossidativa (Catena
respiratoria)
Respirazione cellulare
Canali di porina
ATP sintasi
(F0F1)
Ribosomi
Creste
Ciclo di Krebs, o dell'acido citrico, o
degli acidi tricarbossilici
• E’ la via metabolica finale dove convergono il metabolismo ossidativo dei carboidrati,
degli amminoacidi e degli acidi grassi
• E’ una via aerobica (richiede la presenza dell’ ossigeno come accettore finale di elettroni)
• In questo processo gli scheletri carboniosi delle sostanze nutrienti sono convertiti a CO2 e
H2O
• E’ una via anfibolica: entra sia nei processi anabolici sia in quelli catabolici
Ruolo centrale del ciclo dell’acido
citrico nel metabolismo
Input: unita’ bicarboniosa
Output: 2 CO2, 1 GTP,
& 8 elettroni
• Un gruppo acetilico, sotto
forma di acetil-CoA (2
atomi di C), è introdotto nel
ciclo, combinandosi con
l’ossalacetato.
2. Formazione
dell’isocitrato
attraverso il
cis-aconitato.
Enzima: aconitasi.
La reazione è
reversibile
Ciclo dell’acido citrico Gli enzimi del ciclo
La CITRATO SINTASI
catalizza la condensazione di acetil-CoA e
Ossalato
Sintasi (liasi)=condensazione senza uso di ATP
Sintetasi (ligasi)=condensazione con uso di ATP
-SH
+ H+
Condensazione Idrolisi
Reazioni del ciclo di 1. Formazione del
Krebs: fase ossidativa citrato
Enzima: citrato
sintasi.
La reazione è
fortemente
esoergonica.
o
2. Formazione
dell’isocitrato
attraverso il
cis-aconitato.
Enzima: aconitasi.
La reazione è
reversibile
Ciclo dell’acido citrico Gli enzimi del ciclo
H2O
to
L’ACONITASI
i ta proteina con un centro ferro-zolfo (4Fe-4S) che catalizza
on
- ac
ci
s
H2O l’isomerizzazione reversibile del citrato e dell’isocitrato
con la formazione dell’intermedio cis-aconitato che non si
dissocia dall’enzima. Per essere ossidato a gruppo carbonilico
l’ossidrile alcoolico terziario deve essere
trasformato (trasferito) in gruppo alcoolico secondario.
Deidratazione Idratazione
La reazione viene spinta verso l’isocitrato dal consumo di questo nella tappa
successiva
3. Ossidazione
dell’isocitrato ad
α-chetoglutarato
e CO2.
Enzima: isocitrato
deidrogenasi
La ISOCITRATO DEIDROGENASI
NAD+-dipendente e Mg++ o Mn++, catalizza la decarbossilazione
ossidativa dell’isocitrato ad -chetoglutarato. Questa reazione
produce la prima molecola di CO2 e di NADH del ciclo.
L’ossalosuccinato rimane legato all’enzima.
La a-CHETOGLUTARATO DEIDROGENASI
catalizza la decarbossilazione ossidativa del
a-chetoglutarato. Questa reazione produce la seconda
molecola di CO2 e di NADH del ciclo.
L’equilibrio della reazione è fortemente spostato verso la formazione del succinil CoA, un
tioestere ad alta energia (come visto per l’ acetilCoA)
Fase rigenerativa
5. Conversione del succinil-CoA
a succinato
Enzima: succinil-CoA sintetasi
L’energia rilasciata dalla rottura
del tioestere viene utilizzata per la sintesi
di GTP, che può donare il suo gruppo
fosforico a ADP per formare ATP,
reazione catalizzata
dalla nucleoside difosfato chinasi
Ciclo dell’acido citrico Gli enzimi del ciclo
La SUCCINIL-CoA SINTETASI
accoppia la scissione del legame ad alta energia del
succinil-CoA alla sintesi di un nucleotide trifosfato.
Il nome dell’enzima si riferisce alla reazione inversa.
Nei mammiferi GTP, nei batteri e nelle piante ATP
Fase rigenerativa
Totale= 32 ATP
Componenti del ciclo di krebs
• Il ciclo di Krebs è il
cuore del metabolismo
intermedio.
• Catabolismo dei
carboidrati, degli acidi
grassi e degli aminoacidi
• I composti utilizzati
sono rimpiazzati
mediante reazioni
anaplerotiche.
(es. Carbossilazione del
piruvato tramite CO2 per
formare ossalacetato,
catalizzata dalla
piruvato carbossilasi).
Regolazione del ciclo di Krebs
Fattori che regolano la velocità del
ciclo:
• disponibilità di substrato
• inibizione da accumulo di prodotti
• inibizione allosterica retroattiva (a
feedback) dei primi enzimi del ciclo
da parte degli ultimi intermedi
Regolazione del ciclo di Krebs
Tre tappe fortemente
esoergoniche catalizzate da:
• Citrato sintasi
• Isocitrato deidrognasi
• α-chetoglutarato deidrogenasi
• NADH: ↓ le deidrogenasi
• Accumulo di prodotti: ↓ delle
tre reazioni
• ATP: ↓ citrato sintasi e
isocitrato deidrogenasi
• ADP: ↑ citrato sintasi
• Ca2+: ↑ isocitrato e α-
chetoglutarato deidrogenasi
La respirazione cellulare
• Fase 1: Produzione di
acetil-CoA da parte di
aminoacidi, acidi grassi
e carboidrati
• Fase 2: Ossidazione
dell’acetil-CoA (Ciclo di
Krebs)
• Fase 3: Trasferimento
degli elettroni (Catena
respiratoria) e
fosforilazione
ossidativa
La Fosforilazione Ossidativa
• E’ la sintesi di ATP guidata dal
trasferimento di elettroni
all’ossigeno.
• Determina la riduzione
dell’ossigeno molecolare ad
acqua.
• Gli elettroni sono forniti da
NADH e FADH2 (sotto forma di
ioni idruro H-).
• Avviene nei mitocondri
Il flusso elettronico
mitocondrile
• La membrana mitocondriale
esterna è permeabile a
piccole molecole e ioni grazie
alla presenza di numerosi
canali costituiti dalla
proteina porina.
• La membrana mitocondriale
interna è impermeabile a
quasi tutti gli ioni e piccole
molecole compresi i protoni;
le specie chimiche che
possiedono uno specifico
trasportatore sono in grado
di attraversare la membrana.
• In questa struttura sono
localizzati la CATENA
RESPIRATORIA e IL
COMPLESSO ENZIMATICO
CHE SINTETIZZA ATP
La Teoria Chemiosmotica di P. Mitchell (1961):
Trasduzione di energia
attraverso gradienti protonici transmembrana
• La fosforilazione ossidativa è un flusso di elettroni attraverso
intermedi proteici redox, trasportatori legati alla membrana
mitocondriale che comprendono chinoni, citocromi e proteine
ferro-zolfo.