Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

RNA-polimerasi
Tutti i tipi di RNA vengono sintetizzati nel nucleo. A sintetizzarli un enzima, detto RNA-polimerasi che,
copiando su particolari tratti del DNA (geni), ne esegue una copia complementare di quelle sequenze.
RNA-polimerasi nei procarioti
I procarioti hanno un'unica RNA-polimerasi che sintetizza tutte le forme di RNA (rRNA, tRNA, mRNA).
Il processo di trascrizione si svolge in 3 fasi:
inizio
allungamento
fine
Inizio
Per cominciare la trascrizione, lRNA-polimerasi deve riconoscere e legare saldamente l'inizio di un gene. Per
individuare il gene la molecola di RNA-polimerasi scivola (guidata da alcune proteine) lungo la doppia elica
sino a quando incontra la regione del promoter, cio una sequenza di nucleotidi che indica il punto d'inizio
della trascrizione.
Il riconoscimento ed il legame col promotore favorito da un fattore proteico dellRNA-polimerasi, chiamato
fattore (sigma). Raggiunto il promotore, lRNA-polimerasi si lega ad esso in maniera orientata, cio nella
direzione della lettura (il legame in senso opposto impossibile).
Il legame al DNA produce un cambiamento di forma della RNA-polimerasi (da un complesso chiuso ad un
complesso aperto). Tale cambiamento comporta la separazione dei filamenti di DNA (ad opera di una
subunit interna detta rudder = timone) e lo srotolamento di circa 13 bp (si forma la bolla di trascrizione).
Allinterno della bolla avviene la lettura del DNA. Davanti alla RNA-polimerasi il DNA si svolge, mentre i
filamenti che la polimerasi stessa si lascia dietro, si riavvolgono (ad opera di unaltra subunit interna detta
zipper = cerniera).
Il legame col promotore importante per svariati motivi:
consente di individuare il sito di inizio del gene da leggere;
permette di stabilire il legame iniziale col DNA;
consente di modulare la velocit lettura dellRNA-polimerasi stessa. Ci sono alcune sequenze
altamente specifiche e critiche sul promotore tali da determinare non solo la specificit del legame
tra DNA e RNA-polimerasi, ma anche influire sulla velocit di lettura di questultima. Infatti, se queste
sequenze critiche assomigliano molto al tratto di DNA (e alla catena senso, pi precisamente) da
codificare, esse impongono alla RNA-polimerasi una velocit di trascrizione notevole; mentre, se
sono molto diverse, la velocit di trascrizione lenta. Nel primo caso i promotori si dicono forti,
nel secondo caso deboli. In realt, anche altre proteine regolatrici influenzano la velocit di
trascrizione.
Allungamento
Tale fase comporta lulteriore aggiunta di ribonucleotidi. Dopo la sintesi dei primi 9 nucleotidi, lRNApolimerasi si stacca dal promotore (altrimenti non potrebbe procedere nella lettura del DNA) e va avanti con
la trascrizione, leggendo e sintetizzando il gene in questione, dallinizio alla fine, senza staccarsi. Il tutto
procede ad una velocit media di 50 nucleotidi al secondo (inferiore rispetto a quella di duplicazione del DNA
che 800 nucleotidi al secondo). La direzione di trascrizione sempre 5 3 (riferita allRNA e non al DNA!).
Fine

Quando finisce la lettura del gene, lRNA-polimerasi si stacca dal DNA. Questa operazione imposta da
elementi di controllo detti terminatori. I terminatori possono essere di due tipi, Rho-indipendenti e Rhodipendenti:
i terminatori Rho-indipendenti sono formati da due sequenze consecutive, la prima ricca di basi C e
G, la seconda una poli-A. A causa della prima sequenza si viene a formare una forcina che rallenta la
corsa della RNA-polimerasi; a causa della seconda sequenza, invece, lRNA si stacca dal DNA, in
quanto il legame A-U molto debole.
Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

i terminatori Rho-dipendenti, diversamente dai precedenti, reclutano una specifica proteina, detta
Rho (una ATPasi ad anello), la quale effettua la separazione dellRNA neosintetizzato dal DNA; questa
proteina viene a sua volta attivata da una sequenza ricca di basi G sul tratto di DNA letto.

RNA-polimerasi negli eucarioti

Negli eucarioti il processo di trascrizione molto pi complesso per diversi motivi:
1. lRNA-polimerasi non una, ma triplice
(RNA-polimerasi I, RNA-polimerasi II e
RNA-polimerasi III).
2. LRNA-polimerasi per legarsi al
promotore ha bisogno di pi fattori (e
non di uno solo, come il fattore nel
caso dei procarioti), detti fattori
generali di trascrizione;
3. altri fattori (attivatori e repressori),
direttamente o tramite il complesso
mediatore, esercitano uninfluenza sul
processo della trascrizione;
4. il promotore non unico ma multiplo;
5. diversi altri elementi, detti elementi regolatori prossimali e distali, intervengono per modulare
lattivit di trascrizione.
Analizziamo, adesso, nei particolari i cinque punti sopra esposti.
Tipi di RNA-polimerasi
A differenza dei procarioti (dove esiste un solo tipo di RNA-polimerasi), negli eucarioti ci sono molti tipi di
RNA-polimerasi. Le varie RNA-polimerasi non sono solo chimicamente diverse tra loro, ma sono anche situate
in posti diversi (le polimerasi II e III nel nucleo, la polimerasi I nel nucleolo) e riconoscono promotori diversi.
Tipo di RNA-polimerasi

Geni letti e sintetizzati

RNA-polimerasi I

RNA-ribosomiale 28S, 18S e 5.8S

RNA-polimerasi II

RNA-messaggero (mRNA), snRNA, snoRNA, miRNA e lRNA

delle telomerasi

RNA-polimerasi III

tRNA, RNA ribosomiale 5S, scRNA e alcuni snRNA

RNA-polimerasi IV e V

Sintetizzano i siRNA nelle piante.

RNA-polimerasi mitocondriale

Simile a quella dei procarioti ( poich entrambe sono state

trasferite, dai procarioti agli eucarioti durante il processo di
endosimbiosi).

RNA-polimerasi cloroplastica

Fattori di Trascrizione Generali (GTF=General Transcription Factors, o anche TF=Transcription Factors)

Si tratta di un gruppo di 6 proteine (TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH) che hanno il compito di riconoscere
il promotore e svolgere il DNA. La nomenclatura TFII sta per Trasnscription Factor of RNA-polymerase II.

Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

Senza di loro, la RNApolimerasi II non pu iniziare

la trascrizione. Infatti, si parla
di complesso di trascrizione
iniziale (o macchinario di
trascrizione) per indicare
linsieme dellRNA-polimerasi
II e dei TF.
Il primo fattore di trascrizione
ad entrare in azione durante
la trascrizione il TFIID. Si tratta di un grosso complesso proteico formato da 12 subunit; tra queste
particolarmente importante
la subunit TBP (TATA binding
protein), che si lega a livello
del TATA-box.
La TFIID piega di circa 80 la
sequenza TATA e questo
espone alcune regioni di essa
al contatto con i fattori TFIIA e
TFIIB, le quali si legano e
stabilizzano il legame del
TFIID. Successivamente, si
lega lRNA-polimarasi II assieme alla TFIIF. Gli ultimi a legarsi sono il TFIIE, TFIIJ (che una subunit del TFIIA)
ed il TFIIH (che ha la funzione di elicasi, cio di srotolare ed aprire la doppia elica del DNA).
Durante la fase di allungamento la RNA-polimerasi II si stacca da quasi tutti i fattori di trascrizione (TF). Gli
unici TF a rimanere attaccati alla RNA-polimerasi sono il TFIID (che stabilizza il legame tra lRNA-polimerasi
ed il DNA) e il TFIIH (che ha il compito di svolgere ed aprire la doppia elica del DNA).
Attivatori, repressori, co-attivatori, co-repressori e complesso mediatore
Gli attivatori e repressori sono una serie di proteine che interagiscono con particolari sequenze del DNA,
dette elementi regolatori prossimali e distali (vedi dopo), ed esercitano una funzione stimolante o inibente
sul processo di trascrizione. Essi non agiscono mai direttamente sul macchinario della trascrizione ma si
servono del complesso mediatore (che fa da mediatore, appunto, tra loro e vari TF) o di altre proteine, dette
co-attivatori e co-repressori.
Promotore (promoter)
Lapparato promoter varia a seconda della RNA-polimerasi considerata.
1. La RNA-polimerasi I, che trascrive i geni dellrRNA 28S-18S-5.8S, ha un apparato promotore formato
da:
un nucleo promotore (core) ricco in GC, che si estende da -45 a +20. A questo sito vi si lega un
complesso formato da 4 subunit, la TBP (TATA binding protein) + 3 TAF (TBP-activating factor 1,
2, 3).
Elemento a monte del promotore (UCE = upstream control element), ricco in GC, che si estende
da -180 a -107. Ad esso si lega la proteina UBF (upstream binding factor), responsabile del
ripiegamento del DNA e necessaria a portare lUCE a contatto col gruppo promotore, al fine di
attivare la RNA-polimerasi I.
2. La RNA-polimerasi II, che trascrive i geni degli mRNA, snRNA, snoRNA e miRNA ha un apparato
promoter formato da:
Nucleo promotore (core promoter), rappresentato da solo 2 o 3 dei seguenti 5 elementi:
BRE, una sequenza situata a -35 dal punto di inizio; rappresenta lelemento riconosciuto dal
TFIID.
TATA box, una sequenza posta a -25 dal punto di inizio.
Elemento iniziatore (Inr), una sequenza situata a ridosso del sito dinizio della trascrizione,
tra le posizioni 3 e +5.
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DPE (downstream promotor element), una sequenza che si trova a valle del sito dinizio,
a+30.
MTE (motif ten element) situato tra +18 e +27. Esso interagisce con lInr per lattivazione del
TFIID.
Elementi regolatori prossimali, sono posti tra -50 e -200 dal sito di inizio della trascrizione. Questi
elementi vengono riconosciuti e legati dagli attivatori (vedi dopo) ed hanno la funzione di
stabilizzare lapparato di inizio della trascrizione e di modulare la reazione di inizio. Quelli pi noti
sono:
la CCAAT-box (generalmente localizzata a -80/-100),
la GC-box (GGGCGG, generalmente a -40/-70),
la CRE.
Elementi regolatori distali (long-range regulatory elements), sono posti ad oltre -100.000 dal sito
di inizio della trascrizione. Nonostante la loro notevole distanza dal gene da trascrivere, questi
elementi, quando vengono attivati, si portano sempre in prossimit del gene, grazie allattivit dei
TF (Transcription Factors). Gli elementi pi noti sono:
Esaltatori e silenziatori (enhancers e silencers), sono sequenze grandi (circa 500 bp) che
attivano o reprimono il promotore, mediante linterazione dei TF (Transcription Factors).
Solitamente sono dislocati a notevole distanza dal promotore (a monte o a valle di esso);
talvolta, per, gli enhancers e i silencer possono anche situarsi allinterno del gene da
trascrivere.
Isolatori (insulators), sono sequenze molto grandi di DNA (da 300 a 2000 bp) che hanno
la funzione di
confinare ed isolare le varie regioni delleucromatina per evitare che il DNA di
una regione vada a mischiarsi col DNA di altre regioni;
impedire eventuali cross-reazioni attivanti da parte di geni vicini (mediante il
blocco dei silencers e degli enhancers).
Locus di controllo delle regioni (LCR = Locus control regions), un sito regolatore situato
molto lontano dal promotore ed indipendente dagli enanchers. La sua funzione quella
di rendere attivo un promotore ed il meccanismo consiste nellaprire i nucleosomi del
promotore, in modo che i TF possano legarsi ad esso (e quindi attivare il promotore
stesso). Spesso gli LCR sono tessuto-specifici cio, pur essendo presenti in tutte le cellule,
funzionano solo in quelle di un determinato tessuto grazie allintervento di proteine
attivatrici, presenti solo in quel tessuto.
Regioni di attacco alla matrice (MAR = Matrix attachment regions), sono sequenze di
DNA alle quali si lega la matrice nucleare (una fitta rete proteica che fa parte del nucleo
scheletro e che regola la disposizione della cromatina all'interno del nucleo). I MAR
servono per organizzare la cromatina in domini (regioni) e giocano un ruolo importante
nella regolazione dell'espressione genica. I geni attivi sono associati alle MAR nelle
cellule dove sono espressi, mentre non sono associati alle MAR nelle cellule dove non
sono espressi.
3. Per la RNA-polimerasi III lapparato promotore pu essere di 4 tipi:
Tipo 1 (promotore interno): formato da 2 elementi di controllo a valle del punto d'inizio
della trascrizione, detti boxA e boxC (sequenze di circa 10 basi); si trova nei geni per l'rRNA5S.
Tipo 2 (promotore interno): formato da 2 elementi di controllo a valle del punto d'inizio,
detti boxA e boxB; presente nei geni per il tRNA.
Tipo 3 (promotore a monte): formato da 3 elementi (conservati) a monte del punto di inizio,
detti Oct, PSE e TATA; presente nei geni per gli snRNA.
Tipo 4 (promotore interno + a monte): formato da due promotori interni simili a quelli del
tipo 2 (boxA e boxB) e 2 promotori a monte (TF e TATA).; presente nei geni che
trascrivono lRNA-7SL, uno degli RNA pi piccoli presenti nelle cellule (nota 1).

Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

In generale, i promotori si suddividono in due categorie, quelli contenenti e quelli non-contenenti le isole
CpG (C=citosina, p=fosfato, G=guanina: sequenze nucleotidiche, da 20-50 bp, ricche di coppie C-G).
I promotori con isole GpG sono frequenti nei geni housekeeping, cio quei geni che gestiscono le
funzioni basilari di tutte le cellule (ad esempio costruire membrane cellulari, le proteine del
citoscheletro, etc).
I promotori senza isole CpG, invece, sono frequenti nei geni altamente regolati (cio che subiscono
linfluenza di molti regolatori). Questi geni, di solito, gestiscono funzioni molto complesse (come la
difesa immunitaria e i processi digestivi).
Un numero elevato di geni (40-50%
RNA polimerasi
nelluomo) provvisto di promoter
alternativi. Si tratta di geni dotati di
Introduzione
negli eucarioti
nei procarioti
promoter opzionali coi quali possono
dare origine a proteine con caratteristiche a) Solo 1 tipo di RNA-polimerasi
Differenze coi procarioti
a) Tipi di RNA-polimerasi
biochimiche diverse, pur partendo dallo b) Bolla di trascrizione
I, II, III (IV, V, mitocondriale, cloroplatica)
stesso gene. Questo meccanismo c) Promotore
b) Fattori di trascrizione generali
coinvolto nella specificit di tessuto (cio, d) Fattore sigma
c) Attivatori, repressori, co-attivatori, corepressori e complesso mediatore.
uno stesso gene, in cellule appartenenti a e) Fasi della trascrizone
d)
Promotori
-Inizio
tessuti diversi, pu produrre pi o meno
-allungamento
per lRNA-polimerasi I
-fine
core + UCE
la proteina codificata perch influenzato
per lRNA-polimerasi II
da diversi promoter).
nucleo promotore
I promoter alternativi sono molto attivi
BRE +TATA-box + Elemento
iniziatore + DPE + MTE
durante la vita embrionale. Difetti nel
elementi regolatori prossimali
funzionamento dei promotori alternativi,
CCAAT-box + GC-box +CRE
possono essere causa di gravi malattie
elementi regolatori distali
Enhancers + silencers + insulators
genetiche. Un esempio significativo la
+ LCR + MAR
distrofia muscolare di Duchenne,
per lRNA-polimerasi III
dovuta alla mutazione del gene distrofina,
- Tipo 1 (int.): boxA, boxC
- Tipo 2 (int.): boxA, boxB
che governa la produzione della omonima
- Tipo 3 (est.): TATA, Oct, PSE
- Tipo 4 (misto): TATA, TF, boxA, boxB
proteina, componente fondamentale
e) Elementi regolatori prossimali e distali
della struttura delle fibre muscolari
solo per la RNA-polimerasi II
scheletriche e cardiache.
Elementi regolatori prossimali e distali
Vedi paragrafo sulla RNA polimerasi II
Traduzione
In questa fase, linformazione portata dallmRNA viene tradotta dai ribosomi.
Il processo si svolge in 5 tappe:
1. Attivazione dei tRNA
2. Inizio
3. Allungamento
4. Termine e rilascio
5. Modifiche post-traduzionali
Attivazione dei tRNA
Per lattivazione dei tRNA, vedi lezione 12.
Inizio (Initiation Factors IF)
Il tRNA di inizio (tRNAiMet)1, assieme allIF2 (legato ad un GTP) e alla IF5B (anchesso legato ad un GTP) si lega
alla subunit 40S del ribosoma. Questultimo si era gi legato allIF3 (che ne impedisce laccoppiamento con
la sub-unit maggiore) e allIF2 (che servir per legare la sub-unit minore allmRNA). Linsieme IF3-IF1ribosoma40S + IF5B-IF2- tRNAiMet forma il complesso di pre-inizio.

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Nel frattempo, e indipendentemente, lmRNA si lega allIF4, un fattore di inizio formato da diverse subunit,
di cui una, lIF4E (cap binding protein= proteina che
lega il cap) si lega e riconosce il cappuccio
dellmRNA, mentre laltra, la IF4A, riconosce la
coda poli-A. Il ruolo dellIF4 quello di verificare
che entrambe le estremit dellmRNA siano
presenti ed intatte e, quindi, che lmRNA sia
idoneo.
In seguito, lIF4-mRNA si unisce al complesso di
pre-inizio e forma il complesso di inizio.
Alla formazione del complesso di inizio fa seguito il
processo di scansione. In questa fase, il complesso
di inizio, partendo dallestremit 5 dellmRNA,
scorre lungo il filamento fino ad arrivare alla
tripletta AUG, che rappresenta il segnale di inizio
traduzione. Il codone di inizio AUG contenuto
allinterno di una breve sequenza nucleotidica,
detta sequenza di Kozak che viene riconosciuta dal
complesso di inizio (e che corrisponde alla sequenza pre-inizio di Shine-Dalgarno dei procarioti).
A questo punto, la subunit maggiore (60S) del ribosoma si libera dellIF6 che lo teneva bloccato e gli
impediva di legarsi alla subunit minore e si va ad unire alla subunit 40S, la quale, nel contempo, si libera di
tutti i fattori di inizio (compreso lIF1 che gli impediva di aggregarsi alla 60S).
Allungamento (Elongation Factors EF)
Dopo lunione delle due sub-unit ribosomiali, un secondo tRNA (quello con l'anticodone corrispondente al
codone successivo a quello di inizio AUG) si lega al sito A, assieme allEF1-GPT (elongation factor +GTP =
fattore di allungamento unito ad un GTP). EF1 unisce il tRNA al sito A e allmRNA (sfruttando il GTP in suo
possesso) ed effettua un controllo di qualit della corrispondenza codone-anticodone. Una volta riconosciuto
il corretto appaiamento, lEF1 si stacca dal tRNA.
A questo punto, sul ribosoma ci sono due tRNA adiacenti (uno sul sito A e laltro sul sito P) uniti ciascuno al
proprio codone sull'mRNA. Tra i due aminoacidi contigui si forma un legame peptidico. A realizzare il legame
lrRNA28S.
Lenergia necessaria per effettuare il legame peptidico fornita dallaminoacido attivato (a sua volta ricevuta
al momento dellattivazione da parte dellaminoacil tRNA-sintetetasi). In seguito al legame peptidico, la
metionina si trasferisce dal sito (P) del primo tRNA a quello (A) del secondo tRNA.
Successivamente, il ribosoma avanza di una tripletta sullmRNA. Nel fare ci, sposta il primo tRNA nel sito E
ed il secondo nel sito P, liberando, quindi, il sito A. Il fenomeno dellallungamento consentito da un altro
fattore di allungamento (EF2-GTP ) e lenergia necessaria fornita dallidrolisi del secondo GTP in GDP.
Quindi, un terzo tRNA unito allEF1-GTP si porta nel sito A si forma il legame peptidico tra il nuovo
aminoacido ed il secondo il ribosoma avanza di una tripletta e il primo tRNA (che era collocato nel sito
E) viene espulso dal ribosoma e va nel citosol mentre, il terzo tRNA passa dal sito P quello E ed un nuovo
tRNA-EF1-GTT approda nel sito A.
Lintero processo prosegue fino a quando non stata completata la lettura dellmRNA.
Termine e rilascio (Releasing Factors RF)
La sintesi si arresta quando uno o pi segnali consecutivi di stop (UGA, UAG, UAA) compaiono nel sito A. A
questo punto subentra un fattore di rilascio (releasing factor) che ha affinit con i segnali di stop e che stacca
la catena peptidica dal ribosoma. Il releasing factor non altro che un tRNA che non lega alcun aminoacido
e che induce lrRNA28S (attraverso la la sua attivit aminoacil-transferasi) a legare una molecola di acqua sul
gruppo carbossilico dellultimo aminoacido della catena proteica.
Il primo aminoacido (metionina) incorporato nella catena proteica non compare nella proteina finale perch
esso viene asportato da un enzima subito dopo linizio della sintesi proteica.
Dopo il distacco dellmRNA, il ribosoma si dissocia nelle sue due unit costituenti (40S e 60S).

Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

Una stessa molecola di mRNA viene solitamente letta da pi ribosomi contemporaneamente, con
conseguente produzione in serie di pi catene proteiche. Il complesso mRNA e ribosomi si chiama polisoma.
Modifiche post-traduzionali
Dopo essere state sintetizzate, le proteine devono subire delle modifiche per diventare proteine mature in
grado di svolgere le proprie funzioni.
Le modifiche post-traduzionali possono essere:
Chimiche
avvengono nel RER. Le modifiche pi importanti sono la N-glicosilazione, laggiunta di lipidi, la formazione di
ponti disolfuro, la fosforilazione e il taglio proteico. Questultimo importante per rendere attive molte
proteine. Infatti, di solito le proteine vengono prodotte in una forma inattiva. Un esempio di questo tipo
linsulina che viene prodotta come pro-insulina e, poi, in seguito due successivi tagli proteolitici, si trasforma
in insulina attiva.
Conformazionali ( folding)
Il processo di ripiegamento delle proteine porta alla formazione di strutture tridimensionali. Il ripiegamento
pu avvenire sia contemporaneamente alla traduzione (della sintesi proteica) che alla fine di questa. Soltanto
una volta terminato il ripiegamento le proteine possono svolgere la loro funzione fisiologica. La funzione di
una proteina (sia essa un enzima, un trasportatore, un recettore o una proteina strutturale) resa possibile
dalla sua struttura tridimensionale. Questo il motivo per il quale il ripiegamento proteico ha una notevole
importanza. Un cattivo ripiegamento delle proteine gioca un ruolo importante in svariate malattie quali
l'encefalopatia spongiforme bovina, il morbo di Alzheimer, il morbo di Parkinson, alcune varianti di fibrosi
cistica (dove la perdita di un aminoacido porta ad un cattivo ripiegamento di una proteina-pompa del cloro
e ad un suo cattivo funzionamento). La forma tridimensionale delle proteine non casuale (vedi paradosso
di Levinthal) ma dipende, in parte, dagli aminoacidi che la compongono (e, quindi, dai legami che si
stabiliscono tra essi) e, in parte, da particolari proteine chiamate foldasi (dal termine inglese fold=piega) e
chaperon molecolari.
1) Le foldasi comprendono essenzialmente due gruppi: le disolfuro-isomerasi (che crea i ponti disolfuro)
e le peptidil prolil-isomerasi (che converte tutti i legami della prolina cis in trans).
2) I chaperon (o chaperones o Heat
Schock Proteins - HSP) furono, in
origine, descritte come proteine
da
shock
termico
(vedi
esperimento della Drosofila e
Hsp70). In realt, vengono
prodotte non solo in risposta a
shock termico ma anche ad altri
fattori ambientali (presenza di
metalli pesanti, chemioterapici),
stati
patologici
(infezioni,
febbre, neoplasie) e fattori
cellulari (per es. fattori di
crescita). Tutti i chaperon hanno
una struttura in comune,
caratterizzata da una sequenza
N-terminale di 450 aminoacidi,
detta dominio ATPasico (col
quale legano lATP che serve a fornire lenergia necessaria per ripiegare le proteine), ed una sequenza
C-terminale di 200 aminoacidi, detta dominio di riconoscimento (col quale riconoscono e si legano
alla proteina da ripiegare). I chaperon si legano ai siti idrofobi delle proteine per evitare che questi,
per sfuggire allacqua, si aggreghino tra loro o con siti idrofobi di altre proteine (provocando, in
entrambi i casi, un non corretto ripiegamento della proteina). Ci sono due tipi di chaperon molecolari:

Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

i chaperoni veri e propri (di piccole dimensioni 200 KDa): si legano alla catena proteica non
appena questa esce dal ribosoma. Le principali classi di chaperoni sono la Hsp70 e le Hsp90 (Hot
schock proteins 70 e 90 sta ad indicare il peso molecolare) e la clanexina. Gli chaperoni
molecolari possono agire sia nel RER (per le proteine destinate alla via secretoria) che nel
citoplasma (per le proteine destinate alla via citoplasmatica.
le chaperonine (di grandi dimensioni 800 KDa), che si legano a proteine gi completamente
formate ma che hanno perso la propria struttura tridimensionale a causa di agenti denaturanti.

Destino delle proteine

La destinazione delle proteine viene decisa da segnali di indirizzamento, primari e secondari.
Il segnale di indirizzamento primario viene espresso non appena la proteina inizia ad essere prodotta ed
letto da una ribonucleoproteina (composta da
RNA-7SL e 6 proteine) detta particella di
riconoscimento del segnale (SRP= signal
recognize particle) che si lega in
corrispondenza delluscita del tunnel
ribosomiale. Il segnale di indirizzamento
primario costituito da:
una regione N-terminale a carica
positiva,
una regione centrale idrofobica
una regione polare adiacente al
punto dove viene effettuato il
taglio della sequenza segnale, per
liberare la proteina matura.
Una proteina neo-sintetizzata pu contenere oppure non contenere il segnale di indirizzamento primario. In
base a questo, la proteina seguir due vie:
1. Via secretoria
Se la proteina nascente ha il segnale
di indirizzamento primario viene
riconosciuta dallSRP, la quale
arresta
temporaneamente
la
traduzione (per evitare che la
proteina
venga
erroneamente
rilasciata nel citosol e/o si ripieghi
prima di essere trasferita nel reticolo
endoplasmatico) e
trascina il
ribosoma sul RER, dove lo lega al
traslocone; quindi il ribosoma porta
a termine la traduzione.
Il traslocone un complesso
proteico composto da parecchie
componenti. In particolare:
- un recettore SRP, che lega la
molecola di SRP;
- un recettore per il ribosoma, che serve per ancorare l'organulo al reticolo;
- una proteina del poro che forma un canale idrofilico tramite cui la proteina in allungamento
pu entrare nel lume del reticolo;
- un enzima peptidasi che taglia la sequenza segnale (che serviva solo per il riconoscimento e
trasporto al reticolo endoplasmatico).
Dal RER le proteine vengono, poi, veicolate verso lapparato di Golgi e da qui verso le altre
destinazioni (esterno, membrana citoplasmatica, lisosomi). Il tipo di destinazione viene deciso da
segnali di indirizzamento secondario. Alcuni di questi segnali sono stati parzialmente identificati. Per
Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

esempio, per inviare le proteine verso i lisosomi viene legato loro uno zucchero particolare (il
mannosio 6-fosfato).
2. Via citoplasmatica
Se la proteina nascente non ha il segnale non viene riconosciuta dalla SRP. Pertanto, la sintesi
continua sui ribosomi liberi (cio, non legati al RER) e la proteina risultante viene, poi, rilasciata nel
citoplasma. Qui, in base ad altri segnali, verr destinata nei vari siti (nucleo, mitocondri, perossisomi
o citoplasma). Anche in questo caso sono stati individuati alcuni segnali di indirizzamento secondario.
In particolare:
- sequenze di aminoacidi basici, intervallate da brevi tratti di aminoacidi non basici,destinano le
proteine verso il nucleo;
- sequenze di aminoacidi basici (treonina e serina), non intervallate da altri aminoacidi, destinano
le proteine verso i mitocondri.
Distruzione delle proteine
La vita media delle proteine varia da pochi minuti a parecchi giorni (ad esempio lemoglobina ha una vita
media di 120 giorni) a tutta la vita dellindividuo (per esempio le proteine del cristallino dei vertebrati).
Tutte le proteine vengono distrutte per 3 motivi:
- evitare laccumulo di quelle anormali
- evitare laccumulo di quelle normali ma divenute inutili
- favorire il riciclo degli aminoacidi
Le proteine possono essere distrutte in due modi:
- distruzione lisosomiale formazione di un autofagolisosoma e degradazione della proteina.
- distruzione ubiquitina-dipendente: le proteine da distruggere vengono legate dalle ubiquitine (una
piccola proteina formata da 70-80 aminoacidi) e, per questo, riconosciute dal proteosoma (un
complesso enzimatico che individua la proteina legata dalle ubiquitine), il quale le distrugge. Tale
processo stato individuato, per la prima volta, nei reticolociti (precursori dei globuli rossi), che non
contengono lisosomi.
Codice genetico
Il codice genetico essenziale per il passaggio di informazioni da DNA allRNA. Esso ha alcune caratteristiche
molto importanti.
1. Il codice a triplette: ogni tripletta di basi corrisponde ad un aminoacido.
2. Il codice non ha punteggiatura; i codoni sono letti consecutivamente.
3. Il codice non ha sovrapposizione: le basi sullmRNA vengono lette per gruppi di 3 e in successione (es.
AUGAAGUUGCGG pu essere letto solo come AUG-AAG-UUG-CGG e non AU-GAA-GUU-GC-GG).
4. Il codice ha segnali di inizio e di fine che ne definiscono il quadro di lettura. Il segnale di inizio quasi
sempre rappresentato dalla tripletta AUG, raramente pu essere utilizzata la tripletta GUG. Il segnale di
fine rappresentato da 3 codoni UAG, UGA, UAA. Questi ultimi sono detti codoni non-senso perch non
codificano per alcun aminoacido (mentre, quelli codificanti sono detti codoni senso).
5. Il codice quasi universale. Con poche eccezioni, tutti gli organismi condividono lo stesso linguaggio
genetico. Alcune variazioni sono state trovate nei batteri, in alcuni protozoi, nelle alghe e nei mitocondri.
Per esempio la tripletta UAG che nelluomo rappresenta un segnale di stop, in alcuni protozoi ciliati essa
codifica per laminoacido glutammina.
6. Il codice degenerato (ridondante). Tranne due eccezioni, AUG (metionina) e UGG (triptofano), per
ogni aminoacido presente pi di un codone. Questa molteplicit del codice detta degenerazione del
codice. Infatti, se due codoni hanno le prime due basi uguali e la terza diversa, laminoacido codificato
pu sempre lo stesso. Un esempio dato da CUU, CUC, CUA e CUG, tutti per leucina. La ridondanza
rende il codice genetico meno vulnerabile alle mutazioni.
7. Lanticodone vacilla. Il vacillamento (o tentennamento o wobble) dellanticodone consiste nella
variabilit di appaiamento tra la 3a base del codone e la corrispondente 1a base dellanticodone. I primi
due appaiamenti (posizioni 1 e 2 sul codone) sono fissi e rispettano la regola della complementariet (CG U-A), il terzo, invece, oscillante cio, pu non rispettare la regola della complementariet (per cui
alla C pu corrispondere anche la A o la U). Questo fenomeno dovuto alla conformazione curva
dellanticodone che, in quanto tale, non consente il perfetto appaiamento di tutte e tre le basi.
Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

In virt del vacillamento, le cellule degli eucarioti non contengono 61 (64-3 segnali di stop=61) tRNA
diversi ma solo 45-51.
8. Nella posizione 3 del codone si ritrovano spesso nucleotidi insoliti, come linosina ( e diversi altri).
9. Il codice genetico, per convenzione, scritto nella forma in cui appare nellmRNA.

Biologia 13 RNA, trascrizione e traduzione (parte 2)

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