Strisci

di spermatozoi
e
Conteggio anomalie
 Spermatogenesi:
Differenziamento post-meiotico
FASE
FASE INIZIALE DI
FASE DEL ACROSOMIALE MATURAZIONE
SPERMATIDE GOLGI FASE
Flagello AVANZATA DI
MATURAZIONE
Nucleo
Granulo Mitocondrio
acrosomiale
Nucleo Cappuccio Nucleo
Vescicola acrosomiale acrosomiale

Porzione terminale
Porzione principale

Collo

Mitocondrio

Testa
Valutazione morfologica dello spermatozoo
 Anomalie spermatozoi
Anomalie a carico della testa
Sperm. normale

Microcefalia e flagello fuso

Macrocefalia e flagello spesso

 Anomalie spermatozoi
Inserzione errata Doppia coda Tratto mediano assottigliato

Microcefalia Acefalia
Flagello attorcigliato

Goccia citoplasmatica

Assottigliamento del flagello, Flagello ingrossato e

testa amorfa e inserzione errata malformazione acrosoma
 PREPARAZIONE DI STRISCI DI SPERMATOZOI E
COLORAZIONE CON TRICROMICA DI BRYAN

Occorrente:
•  sospensione cellulare
•  pipette pasteur o di plastica
•  vetrini coprioggetto
•  vetrini porta-oggetto
•  Tricromica di Brayn
•  soluzione 1% acido acetico
•  carta asciugatutto Goccia di
sospensione
2
•  Torrette
1 cellulare

Preparazione di strisci di spermatozoi murini

 
1.  Dopo aver attaccato l’etichetta sul vetrino,
mettere una goccia di sospensione sul bordo del
vetrino porta-oggetti, ben pulito, con una pipetta 3 4
Pasteur cercando di evitare la formazione di bolle
d’aria
2.  Utilizzando un vetrino coprioggetto, distribuire la
goccia lungo il margine interno del vetrino;
3.  Lasciar scorrere il coprioggetto lungo il vetrino
porta-oggetti mantenendo un’inclinazione di 45°
ed una velocità costante;
4.  Asciugare all’aria
 PREPARAZIONE DI STRISCI DI SPERMATOZOI E
COLORAZIONE CON TRICROMICA DI BRYAN

Colorazione strisci di spermatozoi murini

 
1.  Colorare per 20 min a temperatura ambiente in Tricromica di Bryan (0.1 g eosina, fast green FCF e
giallo naftolo S in 100 ml di soluzione acquosa di acido acetico 0.1%). Si può colorare o per
immersione o ricoprendo il vetrino con il colorante.
2.  Togliere l’eccesso di colorante asciugando con carta da filtro, facendo attenzione a che il preparato
non si asciughi. Trasferire immediatamente in acido acetico 1% per 1 min.
3.  Asciugare con carta da filtro e lasciare seccare il preparato a temperatura ambiente
4.  Osservazione dei preparati. Nucleo: giallo; acrosoma: da verde blu a blu; regione post-nucleare:
verde giallastro; pezzo intermedio: rosso brillante, talvolta verde bluastro; flagello: da bluastro a
blu-nero
5.  Contare almeno 150 spermatozoi segnare eventuali anomalie