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Microbiologia Procarioti

Le cellule procariote (pro:prima e kryon:nucleo) sono cellule prive di un nucleo ben definito e delimitate dalla membrana cellulare, le cellule procariote rispetto a quelle eucariote non possiedono organuli e hanno una struttura interna molto semplice. Non avendo il nucleo il loro DNA sparso nel citoplasma. Le loro dimensioni sono dell'ordine di pochi micron. L'interno non suddiviso in organuli da membrane, anche se alcune funzionimetaboliche, come la respirazione e la fotosintesi, sono associate ad invaginazioni e ripiegamenti dellamembrana cellulare. Il genoma cellulare pi semplice di quello delle cellule eucariote ed costituito da una sola molecola circolare di DNA. assente la membrana nucleare. Il citoplasma delle cellule procariote contiene:il DNA e i ribosomi organelli responsabili della sintesi delle proteine.Oltre alla membrana cellulare il batterio possiede una parete con funzione essenzialmente di supporto strutturale dovuta alla sua rigidit (la presenza della parete protegge la cellula da eventuali lisi osmotiche cio dalla rottura della membrana cellulare).Esternamente alla parete cellulare ci pu essere uno strato pi spesso e meno rigido, detto capsula.Altre strutture presenti nel batterio sono il flagello che viene utilizzato per muoversi nei mezzi acquosi e i pili usati come ancore di fissione sulle superfici.

I batteri si dividono in due grandi ceppi gram-positivi e gram-negativi .I gram-positivi hanno una spessa parete mentre nei gram-negativi la parete sottilissima. La colorazione di Gram un esame di
laboratorio che d ragione della classificazione dei batteri in gram-positivi e gram-negativi.Le procedure sono le seguenti: Si pone nella piastra di coltura un colorante basico e idrofilo (si lega allacqua);passati i 3 minuti si opera un lavaggio con liquido di Lugol (una soluzione di iodio e ioduro di potassio) che reagisce con il colorante basico formando un composto liposolubile, che si lascia agire per circa 1 minuto; successivamente il materiale organico viene lavato con una soluzione decolorante (alcool etilico o simili) e infine con acqua; i batteri Gram + hanno trattenuto il colorante basico (viola), poich l'alcool non ha danneggiato a sufficienza la spessa parete cellulare (idrofila) che non permette al colorante di passare, mentre i Gram - sono grigiastri, privi di colorazione, questo perch l'alcool ha sciolto i lipidi della membrana esterna e danneggiando la sottile parete cellulare che non pi in grado

di trattenere il complesso cristal violetto - ioduro (liposolubile); infine, per far risaltare meglio la differenza si colora quindi il materiale con un colorante di contrasto.I batteri gram-positivi hanno una parete molto sviluppata composta principalmente da peptidoglicano formato da zuccheri legato a corti polipeptidi,Antibiotici comela penicillina (prodotto da una muffa) ha il potere di interferire con la parete cellulare batterica portando alla morte del microorganismo.Quindi i batteri gram-negativi sono immuni allantibiotico perch presentano una ridottissima parete oppure ne sono privi.

Riproduzione batterica

La riproduzione batterica avviene in due fasi distinte:incremento delle dimensioni del batterio, che sintetizza e sviluppa le varie strutture cellulari;divisione della cellula madre per originare due cellule figlie.La crescita della popolazione batterica segue un andamento caratteristico, che la rende suddivisibile in quattro fasi:DI LATENZA: i batteri sintetizzano le sostanze necessarie per prepararsi alla divisione e non aumentano di numero; la sua durata varia da specie a specie ed in relazione alle condizioni ambientali.DI CRESCITA ESPONENZIALE: ogni 10 - 60 minuti il numero di batteri raddoppia (sviluppo logaritmico).FASE STAZIONARIA: scarseggiano le sostanze nutritive ed il numero di nuove cellule equivale al numero di batteri morti.MORTE: il drastico calo di nutrienti porta alla morte di un numero di batteri superiore rispetto a quello delle cellule ancora in grado di riprodursi.

I batteri molte volte vivonoin comunit ma non formano organismi pluricellulari,anche se il loro comportamento assomiglia a quello di un organismo pluricellulare.In una comunit di batteri ogni uno si specializza a seguire un lavoro per esempio ci sono alcuni batteri che producono biofilm,una sostanza gelatinosa che permette alla comunit di essere pi resistente agli antibiotici,per esempio la placca dentale un biofilm batterico.I batteri possono scambiarsi informazioni genetiche attraverso alcuni ponti detti pili(il fenomeno detto coniugazione).Il dna batterico passato non deriva dal nucleotide ma dal plasmide piccolo filamento circolare di DNA presente nel citoplasma.Se un batterio resistente a un certo antibiotico,pu dare la sua resistenza a un altro batterio vicino e passargli una copia del plasmide grazie alla quale resistente.Questo fenomeno fa si che in poco tempo una comunit di batteri diventano tutti resistenti allo specifico antibiotico.I batteri si dividono in patogeni e non.I batteri patogeni sono gli organismi che possono danneggiarne altri,mentre quelli non patogeni on provocano alcun danno,anzi avvolte possono essere molto utili (es flora batterica,batteri compositiri del terreno,batteri azotofissatori,cianobatteri che producono ossigeno).Un batterio pu essere patogeno per diverse cause.Pu direttamente attaccare la cellula,oppure danneggiarla a causa delle sue sostanze di scarto cio le tossine (es tetano) o ancora le loro pareti possono essere antigeniche e provocare una reazione di infiammazione(L'infiammazione un

meccanismo di difesa non specifico innato attraverso la quale avviene vasodilatazione e aumento di permeabilit,che portano al passaggio di liquidi al tessuto leso ed infiltrazione di globuli bianchi nell'area di lesione).

Parete cellulare batterica Con il termine di parete batterica si indica una struttura di rivestimento cellulare posta all'esterno rispetto alla membrana e pi internamente rispetto alla capsula, con funzione essenzialmente di supporto strutturale dovuta alla sua rigidit (la presenza della parete protegge la cellula da eventuali lisi osmotiche). In base al tipo di parete che un batterio presenta, si identificano due classi di batteri: Gram-positivi Gram-negativi

Questi batteri differiscono molto dal punto di vista della struttura parietale e, anzi, la differente risposta alla colorazione di Gram proprio conseguenza diretta delle differenze dal punto di vista della parete. All'interno di queste due classi le differenze sono minime e funzionalmente poco significative.

Nei batteri Gram-positivi quasi la totalit della parete (circa il 90-95%) costituita da mureina (o peptidoglicano). La mureina, nei gram-positivi, responsabile della rigidit della parete, ed essendo una struttura pluristratificata e molto voluminosa, la responsabile del trattenimento del colorante durante la + colorazioe di Gram. Componenti quantitativamente minori della parete nei gram sono: acidi teicoici acidi teicuronici proteine (molto rare)

Esaminiamo dunque la componente principale, la mureina. A livello della mureina riconosciamo due tipi di catene che si intrecciano fra loro a formare un sistema "trama/ordito", che determina una notevole rigidit parietale. Le catene in questione sono: Le catene glicaniche: sono costituite da monomeri di N-acetilglucosamina (NAG) e acido Nacetilmuramico (NAM), uniti fra loro da legami glicosidici (1-4). Questi monomeri sono sempre alternati (non si trovano mai due NAM o due NAG consecutivi) a formare dei dimeri che sono la costituente base delle catene glicaniche. NAM e NAG differiscono solo per la presenza, nell'acido muramico, di un residuo lattilico a livello del C3; questo residuo molto importante in quanto fornisce un sito di aggancio per le catene peptidiche. catene peptidiche: alle catene glicaniche, tramite il residuo lattilico dell'acido muramico, legato quello che viene definito tetrapeptide, in quanto catene costituite da 4 aminoacidi, che si legano al gruppo COOH del'acido muramico tramite legame peptidico. Queste catene sono fondamentali per la formazione deilegami crociati: ogni catena glicanica legata ad altre catene glicaniche parallele, tramite legami che si + instaurano fra i tetrapeptidi delle due catene. Nel caso dei batteri Gram le catene peptidiche non formano legami diretti fra loro, ma sono unite tramite un ponte di pentaglicina, legato al terzo aminoacido di una e al quarto dell'altra. Da notare che, malgrado possano esserci delle variazioni a livello della composizione della catena tetrapeptidica, il terzo aminoacido, solitamente una L-Lys, deve essere un aminoacido bibasico, ovvero avere due gruppi aminici, uno per il legame con l'aminoacido precedente e uno per il legame con il ponte di pentaglicina. Da notare che solitamente il tetrapeptide composto da L e D aminoacidi che si alternano. La mureina, come detto, conferisce alla parete cellulare una notevole rigidit; quali sono i fattori che influiscono su questa caratteristica?I legami (1-4), che rendono molto compatte le catene glicaniche.L'alternanza L D-aminoacidi, d origine ad una struttura pi compatta di quella che originerebbe da un omotetrapeptide.I legami idrogeno che si stabiliscono fra catene glicaniche parallele.Il numero di ponti

crociati che si formano.Da notare che, nei gram-positivi, ogni acido muramico porta legato un tetrapeptide, ed ogni tetrapeptide forma un legame crociato; inoltre, anche grazie alla presenza del ponte di pentaglicina, che rende la struttura pi "rilassata", il peptidoglicano risulta pluristratificato, fino ad arrivare ad un numero di anche 40 strati.La mureina nei gram-negativi strutturalmente abbastanza simile alla mureina descritta dai gram-positivi e presenta, quindi, catene glicaniche e tetrapeptidi come costituenti di base; esistono tuttavia delle notevoli differenze dal punto di vista di alcuni particolari: anzitutto la mureina nei gram-negativi monostratificata; non tutti gli acidi muramici portano legato un tetrapeptide, e di conseguenza la quantit dei legami crociati molto minore rispetto a quella dei gram-positivi. Inoltre, i legami crociati sono legami diretti fra i tetrapeptidi, senza l'intermedio della pentaglicina, e risultano quindi pi corti, producono una mureina pi compatta, rendendo difficoltasa la multistratificazione (che infatti non si ha).

Coltivazione dei batteri Il modo nel quale i batteri sono coltivati e lo scopo per i quali vengono usati i mezzi di coltura variano ampiamente. I mezzi liquidi sono usati per la crescita di gruppi di colture mentre quelli solidi sono usati ampiamente per lisolazione di colture, per stimare popolazioni batteriche vitali. I mezzi di coltura possono essere preparati per essere usati anche in uno stato semisolido.Un mezzo di coltura liquido convertito allo stato semisolido per aggiunta di un agente gelificante. L'agar l'agente gelificante pi usato, ricavato dalle alghe marine e non un nutriente per la maggior parte dei microrganismi. Lagar viene usato anche grazie alle sue uniche propriet fisiche (si scioglie a circa 100C e rimane liquido fino a che non viene raffreddato a circa 40C, quindi diventa gel). I mezzi di coltura contenenti agar sono distribuiti in recipienti piatti coperti, chiamati piastre o scatole Petri, dove le cellule microbiche possono crescere e formare masse visibili chiamate colonie.

Camera di Burker
costituita da una lastra di vetro su cui inciso un reticolo composto da quadrati e rettangoli di dimensioni note. Fissando sulla lastra un apposito vetrino, si crea, tra questo e il reticolo, unintercapedine di 0,1 mm in cui viene posta una goccia di sangue prelevato dal paziente e opportunamente diluito. Gli elementi da contare si distribuiscono sul reticolo per cui, conoscendone le misure, lo spessore dellintercapedine e la diluizione del liquido, si pu risalire al numero di cellule presenti in 1 mm3.

Antibiotici
Tecnicamente si definisce antibiotico una sostanza di origine naturale prodotta da un microrganismo, capace di ucciderne un altroIl termine nell'uso comune attuale indica un farmaco, di origine naturale (antibiotico in senso stretto) o di sintesi (chemioterapico), in grado di rallentare o fermare la proliferazione dei batteri. Gli antibiotici si distinguono pertanto inbatteriostatici (cio bloccano la riproduzione del batterio, impedendone la scissione) e battericidi (cio uccidono direttamente il microrganismo).Non hanno effetto contro i virus (a parte una possibile attivit antivirale della rifampicina nei Poxvirus), i funghi e i parassiti, sui quali agiscono altri generi di chemioterapici.Tutti gli antibatterici agiscono inibendo una determinata via metabolica.Tutti gli antibatterici agiscono inibendo una determinata via metabolica.Un farmaco

batteriostatico ferma la moltiplicazione dei microrganismi,mentre un farmaco battericida uccide tutti i batteri.I principi basilari del farmaco sono selettivit e efficacia.Il farmaco selettivamente riconosce le strutture dei batteri patogeni. Lefficacia dipende dalla concentrazione che deve essere adeguata nella sede dellinfezione.Lantibiotico se abusato pu provocare gravi danni affaticando reni e fegato e distruggendo la preziosa flora intestinale.Gli antibiotici attivi sulla sintesi della parete cellulare Battericidi,bloccano la sintesi della parete portando alla lisi del batterio.I batteri possono avere una resistenza acquisita grazie al risultato di selezione dovuta allutilizzazione scorretta dellantibiotico.Il batterio pu avere resistenza acquisita cromosomiale,cio mutazioni del sito bersaglio o del sito di ingresso dellantibiotico;oppure resistenza acquisita extracromosomiale cio acquisizione di enzimi che inattivano lantibiotico da ceppi resistenti.L'antibiogramma (vengono presi i batteri responsabili alla malattia e si scopre quale antibiotico pi efficace) consigliato ogni volta che ci si deve sottoporre ad una terapia antibiotica. Permette l'uso di farmaci mirati in grado di promuovere l'eradicazione completa del ceppo batterico.l'ABG poco utilizzato nelle infezioni comuni (faringite, tosse, congiuntivite...)dato il costo e i tempi dell'esame, ma una procedura comune nelle infezioni nosocomiali e nella terapia di uretriti, cistiti, gastroenteriti, meningiti, polmoniti e in tutte le malattie ricorrenti (eradicazione incompleta del batterio).Quando viene effettuato un antibiogramma i batteri vengono allevati sullagar in una capsula di Petri,poi viene messo sulla capsula dischetti di carta che contengono antibiotico,intorno ai dischetti i batteri muoiono e si formano piccoli cerchi,i cerchi pi grandi indicano che lantibiotico efficace,quelli pi piccoli o assenti indicano che c una resistenza oppure nessun effetto.

Un altro metodo viene detto diluizioni progressive,i batteri vengono fatti crescere in un terreno liquido contente diluizioni progressive di antibiotico .

In quanto alla quantit di antibiotico si predilige usarne il minimo indispensabile (MIC).

Infezione Con il termine infezione si intende una reazione patologica dell'organismo alla penetrazione e alla moltiplicazione di microrganismi (virus, batteri, miceti, protozoi, metazoi). L'infezione correlata a una malattia infettiva.Linfezione pu essere epidemica con incidenze superiori alla norma nella popolazione,pandemica cio diffusa in ambito mondiale,endemica se presente in particolari aree geografiche (es una malattia endemica a Napoli lepatite alimentare A dovuto ai frutti di mare non cotti),sporadiche sono infezioni a sviluppo casuale e non prevedibili.I serbatoi infettivi sono luomo,gli animali e lambiente(acqua,piante,terreno.).I serbatoi umani si dividono in carriers che ospitano lagente infettivo ma non presentano sintomi e i carriers cronici che sono serbatoi di infezioni per un tempo prolungato e ignorano di avere linfezione.Molti batteri patogeni possono infettare sia luomo che gli animali.La zoonosi sono malattie trasmesse in condizioni naturali dai vertebrati alluomo.Le vie attraverso il quale penetrano gli agenti patogeni sono:cutanea,oro-fecale,ematogena,respiratoria,sessuale e placentare.Le vie di trasmissioni dei batteri sono numerose,possono avvenire attraverso lacqua,il cibo o laria (uno starnuto libera un aerosol di piccole goccioline di acqua in cui ci sono i batteri o virus).Altri mezzi di trasmissione pu essere un morso di un animale,una ferita dovuto a un chiodo o il contatto con superfici infette.Gli insetti possono essere vettori di microbi.Pensiamo a una mosca che dalla spazzatura si posa su un nostro panino depositer molti batteri.Ma ricordiamo che non tutti i batteri sono altamente patogeni,per un infezione potrebbero servire 100 batteri o addirittura 1000,tutto dipende da quanto sono patogeni.Un altro insetto veicolo di malattie la pulce che in et medievale trasmise la peste bubbonica mietendo moltissime vittime.Le infezioni ospedaliere sono quelle contratte in ospedale o in strutture sanitarie.I batteri in un ospedale possono arrivare da ovunque dai visitatori,dagli stessi medici e infermieri,dallesterno,dagli insetti ect.Le infezioni pi diffuse sono quelle del tratto urinario,respiratorio e delle ferite chirurgiche.Per far in modo di impedire al massimo la trasmissione dei batteri i medici usano mascherine,occhiali,attrezzi sterili,guanti ect

I microrganismi patogeni sono capaci di causare malattie,essi sono extracellulari(non entrano nella cellula),endocellulari facoltativi (possono entrare o non nella cellula) o obbligatori (devono entrare nella

cellula es virus).I microrganismi commensali non sono patogeni e vivono nellospite es flora intestinale.I microrganismi opportunisti diventano patogeni quando la risposta immunitaria si abbassa.Secondo i postulati di KOCH il patogeno deve essere:presente in tutti i casi di malattia,isolato dal paziente e cresciuto in coltura pura,in grado di riprodurre la malattia se inoculato in un ospite sano,riisolabile dallospite infetto.I batteri altamente patogeni sono rari,molti microbi sono potenzialmente patogeni,mentre la maggioranza dei batteri innoqua.I batteri altamente virulenti anche in poche unit possono creare molti problemi e addirittura la morte,mentre i batteri scarsamente virulenti per provocare danni allorganismo devono essere molti.Lorganismo umano ha molte difese contro i batteri si pensi alle lacrime che contengono il lisozima che dissolve la parete cellulare dei batteri,Oppure pensiamo alla saliva che ha un certo potere antibatterico.Nel naso i batteri vengono filtrati grazie al muco e ai peli.Nello stomaco lalta acidit distrugge molti batteri.La flora batterica intestinale ma anche le colonie presenti nelle mucose e sulla pelle competono con i batteri patogeni.Il batterio pu dare inizio allinfezione aderendo a una cellula attraverso i pili.Alcuni batteri per eludere la sorveglianza dellorganismo si lega e inattiva gli anticorpi,oppure attua un mimetismo antigenico grazie alle sue molecole di superficie simili a quelle dellospite.