CHIMICA GENERALE:

25 ml di una soluzione di NaOH vengono titolati fino al raggiungimento del punto di equivalenza, utilizzando un volume di 28ml di HCl 0,1M. Calcola
la concentrazione della soluzione di NaOH.
o 0.342 M
o 0,112M
o 0,211M
o 0,098M

In un’analisi colorimetrica dello ione Fe++, si ottiene la retta di taratura: A = 0,2 [Fe++] + 0,05 con la [Fe] in ppm.
Per un campione incognito viene misurata un A di 0,6. Calcolare la [Fe++] in ppm.
o 2,5ppm
o 2,25ppm
o 2,75ppm
o 2,00ppm

A seguito della titolazione pHmetrica di 10ml di una soluzione di HCl incognita, utilizzando come agente titolante NaOH 0,1M, si ottiene la seguente
curva di titolazione: (a 0ml, pH2; a 11ml pI, a 22ml pH12)
Sulla base dei dati che si possono ottenere dal grafico, calcolare la concentrazione della soluzione di HCl incognita.
o 0,011M
o 0,09M
o 0,11M
o 0,009M

La legge di Lambert-Beer: A = [ ] x L x epsilon. L rappresenta:

o La lunghezza del raggio luminoso incidente sul campione
o Il coefficiente di estinzione molare
o La lunghezza d’onda della luce assorbita
o La lunghezza del cammino ottico che la luce percorre nel campione

Nella titolazione del perossido di idrogeno H2O2 con il permanganato di potassio KMnO4, l’indicatore è:
o Metilarancio
o H2O2
o Fenantrolina
o KMnO4

Calcolare la molarità di una soluzione ottenuta aggiungendo 60l di H2O a 40ml di soluzione 0,5M HCl
o 0,2M
o 0,05M
o 0,1M
o 0,4M

Per determinare la concentrazione per via pH-etrica, al pH-etro si collega:

o Un indicatore acido-base
o Un termometro
o Un colorimetro
o L’elettrodo a vetro

In una tecnica colorimetrica del Fe++, la specie chimica che viene fatta reagire per ottenere una colorazione misurabile allo spettrofotometro è:
o Permanganato di potassio
o Metilarancio
o Orto-fenantrolina
o Idrossido di sodio

Quanti ml di H2O vanno aggiunti a 20ml di una soluzione madre di Na2CO4 5,0M per avere una concentrazione finale di 2,5M?
o 60ml
o 40ml
o 20ml
o 10ml

Quanti ml di H2O vanno aggiunti a 20ml di HCl 0,1M per avere una soluzione diluita 1:25?
o 120ml
o 960ml
o 240ml
o 480ml
25ml di soluzione H2O2 vengono titolati fino al raggiungimento del punto di equivalenza, utilizzando un volume di 30ml di KMnO4 0,1M secondo la
reazione: 5 H2O2 + 2 MnO4- + 6 H+ 🡪 5 O2 + 2 Mn2+ +8 H2O. Calcolare la concentrazione della soluzione di H2O2.
o 0,3M
o 0,25M
o 0,1M
o 0,2M

25ml di soluzione HCl vengono titolati fino al raggiungimento del punto di equivalenza, utilizzando un volume di 25ml di Na2Co3 0,1M secondo la
reazione: 2 HCl + Na2CO3 🡪 CO2 + H2O + 2NaCl. Calcolare la concentrazione della soluzione di HCl.
o 0,05M
o 0,2M
o 0,4M
o 0,1M

Per preparare 50ml di una soluzione di NaOH 0,2M, si dispone di una soluzione madre con concentrazione 2,5M. quanti ml di soluzione madre si
devono prelevare e portare a volume?
o 1,2ml
o 2,4ml
o 0,4ml
o 4,0ml

Con quante soluzioni a pH noto si deve tarare il pH-metro?

o 1
o 2
o 3
o 4

In una titolazione, il punto di equivalenza è:

o Il punto in cui gli ml di agente titolante aggiunti sono uguali a quelli della soluzione da titolare
o Il punto in cui l’ambiente di reazione è riducente
o Quanto la quantità di agente titolante aggiunto è esattamente quella stechiometricamente necessaria per far reagire tutto il reagente
incognito presente nella soluzione da titolare
o Il punto in cui i ml di indicatore aggiunti sono uguali ai ml di agente titolante

Il punto di viraggio di un indicatore è il momento:

o Durante la titolazione, in cui una variazione repentina di colore della soluzione indica il raggiungimento del punto di equivalenza
o In cui il pH della soluzione è neutro
o In cui l’agente titolante reagisce con la specie da titolare
o In cui la soluzione da titolare ha un pH maggiore di 7

La legge di Lambert-Beer è:
o A=[ ] x L x epsilon
o A=[ ]2 x L2 x epsilon
o A=[ ] x L2 x epsilon
o A=[ ]2 x L x epsilon

In una titolazione pH-metrica di H3PO4 con NaOH, si allestisce l’esperimento come in figura. All’inizio della titolazione, il pH sarà:
(NaOH in buretta, H3PO4 nel becher, con anche il pH-metro)
o <7
o >10
o =7
o >7

In una tecnica colorimetrica, la taratura dello spettrofotometro:

o È la pratica mediante la quale si sottopongono ad assorbimento ad una determinata lunghezza d’onda un certo numero di soluzioni a
concentrazione nota delle specie da titolare
o È la determinazione della concentrazione della specie incognita in soluzione
o È la regolazione della lunghezza d’onda dello spettrofotometro
o È la determinazione dello spettro di assorbimento della specie da analizzare in soluzione

In una tecnica colorimetrica, la retta di taratura dello spettrofotometro:

o È la funzione che lega A alla lunghezza d’onda assorbita
o È la retta che mette in funzione l’A di soluzioni a concentrazione nota della specie chimica di cui si vuole determinare la concentrazione
o È la retta che determina se la specie in esame assorbe o meno la luce a una data lunghezza d’onda
o Determina il buon funzionamento dello spettrofotometro

Nella titolazione pH-metrica di HCl con NaOH nella curva di titolazione completa sarà possibile individuare quanti punti di equivalenza?
 o 0
o 1
o 2
o 3

In una titolazione redox, l’indicatore serve:

o Per indicare il raggiungimento del punto di equivalenza
o Come agente titolante
o Per indicare la presenza dell’agente titolante
o Per colorare l’ambiente di reazione

In una titolazione A-B, l’indicatore serve:

o Come agente titolante
o Per colorare l’ambiente di reazione
o Per indicare la presenza dell’agente titolante
o Per indicare il raggiungimento del punto di equivalenza

Nella titolazione redox:

o L’agente titolante e la specie da titolare sono riducenti
o L’agente titolante e la specie da titolare sono ossidanti
o L’agente titolante è una specie non redox attiva
o Se l’agente titolante è un ossidante, la specie da titolare è un riducente, e viceversa
________________________________________________________________________________________________________________________
CHIMICA ORGANICA:

Disporre le seguenti miscele di eluenti in ordine di polarità CRESCENTE:

1. Acetato di etile
2. Etere di petrolio : acetato di etile 9 : 1
3. Acetato di etile : etanolo 9 : 1
4. Etere di petrolio : acetato di etile 5 : 5
5. Etanolo

o 2<4<1<3<5
o 5<3<2<4<1
o 1<4<2<5<3
o 5<3<1<4<2

Data la seguente TLC, indicare Rf della sostanza in analisi:

(D=6cm X=0,9cm)
o 0,25
o 0,85
o 0,51
o 0,15

Sulla base della loro polarità e considerando un’ipotetica TLC su silice, attribuire a ciascuna delle seguenti molecole uno degli Rf riportati:
(A idrocarburo aromatico e semplice; B alcol; C etere ; D acido carbossilico)
Rf1=0,18 Rf2=0,32 Rf3=0,40 Rf4=0,95
o A2 – B3 – C4 – D1
o A1 – B4 – C3 – D2
o A4 – B2 – C3 – D1
o A3 – B2 – C1 – D4

Data la seguente TLC, come si può intervenire per DIMINUIRE l’Rf delle sostanze e quindi migliorare la separazione?
(Eluente= etere di petrolio : acetato di etile 3 : 7. Le macchie sono molto attaccate e vicine al fronte)
o Diminuendo la polarità della miscela eluente
o Aumentando la porzione di acetato di etile
o Diminuendo la quantità della miscela eluente
o Aumentando la polarità della miscela eluente

Data la seguente TLC, come si può intervenire per AUMENTARE l’Rf delle sostanze e quindi migliorare la separazione?
(Eluente= etere di petrolio : acetato di etile 7 : 3. Le macchie sono molto attaccate e vicine alla partenza)
o Aumentare la proporzione di eluente più polare
o Utilizzare una TLC più lunga
o Diminuire la porzione dell’eluente più polare
o Aumentare la porzione di etere di petrolio

Che tecnica si usa per filtrare un solido da un liquido nel caso si debba recuperare il solido?
 o Filtrazione sottovuoto
o Evaporazione al rotavapor
o Cristallizzazione
o Filtrazione per gravità

Che tecnica si usa per allontanare un solido da un liquido nel caso si debba recuperare il liquido?
o Cristallizzazione
o Filtrazione per gravità
o Filtrazione sottovuoto
o Estrazione L-L

Che tecnica si usa per estrarre un composto organico (o una miscela di composti) da una matrice solida?
o Colonna croatografica
o Estrazione solido-liquido
o Estrazione liquido-liquido
o Filtrazione sottovuoto

Quale di questi è un requisito fondamentale per l’estrazione liquido-liquido?

o Bisogna usare uguali quantità dei 2 solventi
o I 2 solventi devono essere organici
o Il composto da estrarre deve essere ugualmente solubile nei 2 solventi
o I 2 solventi devono essere immiscibili

Per eliminare tracce di H2O dalla fase organica dopo estrazione L-L bisogna:
o Evaporare al rotavapor
o Trattare con sodio solfato anidro e quindi filtrare
o Cristallizzare il soluto
o Trattare con polvere di silice e quindi filtrare

Che tecnica si usa per recuperare un composto organico da una soluzione di un solvente organico in cui è disciolto?
o Filtrazione per gravità
o Filtrazione sottovuoto
o Evaporazione al rotavapor
o Estrazione solido-liquido

L’estrazione liquido-liquido è:
o Una tecnica cromatografica
o Una tecnica per la purificazione che sfrutta la diversa solubilità del soluto al variare della T°
o Una tecnica analitica basata sulla polarità
o Una tecnica separativa che sfrutta la diversa ripartizione di un soluto tra 2 fasi liquide immiscibili

Dopo un’estrazione liquido-liquido on H2O/solvente organico:

o La fase organica va anidrificata con sodio solfato
o La fase acquosa va anidrificata con sodio solfato
o La fase organica va sempre estratta 2 volte
o La fase acquosa va sempre estratta 2 volte

L’estrazione L-L è una tecnica di separazione che sfrutta:

o La diversa ripartizione di un soluto tra due fasi liquide immiscibili tra loro
o Diverse T° di ebollizione
o La diversa ripartizione di un soluto tra una fase mobile e una fase stazionaria
o La diversa solubilità tra una sostanza e le sue impurezze a varie T°

Per separare i seguenti composti presenti in miscela in un solvente organico, bisogna:

naftalene (doppio anello benzene) e anilina (anello benzene e ammina)
o Estrarre anilina con soluzione acquosa basica
o Estrarre con soluzione acquosa basica, recuperare fase organica (naftalene) e acidificare fase acquosa, recuperando anilina
o Estrarre con soluzione acquosa acida, recuperare la fase organica 8naftalene) e basificare la fase acquosa, recuperando l’anilina
o Estrarre il naftalene con un solvente organico

L’aggiunta di soluzione basica alla fase organica in cui è sciolto eugenolo (un acido) causa:
(eugenolo + NaOH 🡪 sale, al contrario si aggiunge HCl)
o La formazione della base coniugata che è solubile in fase acquosa
o La formazione della base coniugata che è solubile in fase organica
o La formazione dell’acido coniugato
o La precipitazione dell’eugenolo solido
Come si può ottenere l’eugenolo dalla sua base coniugata?
(eugenolo + NaOH 🡪 sale, al contrario si aggiunge HCl)
o Aumentando la T°
o Trattando con sodio solfato
o Trattando con una soluzione acquosa acida
o Trattando con una soluzione acquosa basica

Che tecnica si usa per purificare un composto organico dalle sue impurezze?
o Cristallizzazione
o Anidrificazione
o Acidificazione
o Evaporazione al rotavapor

La seguente TLC indica che:

P partenza 1 macchia in alto
S sovrapposizione 2 macchie, 1 in basso e 1 in alto
R reazione 2 macchie, 1 in basso e 1 in alto
o La reazione è completa
o Il substrato di partenza è convertito in un prodotto di reazione meno polare
o La reazione non è avvenuta
o Il substrato di partenza è parzialmente convertito nel prodotto

La seguente TLC indica che:

P partenza 1 macchia in basso
S sovrapposizione 3 macchie, 2 in alto e 1 in basso
R reazione 2 macchie, entrambe in alto
o Il substrato di partenza si è parzialmente convertito in 2 prodotti
o Il substrato di partenza si è convertito in 2 prodotti più polari
o La reazione è completa
o Non è avvenuta alcuna reazione

La seguente TLC indica che:

P partenza 1 macchia in alto
S sovrapposizione 2 macchie, 1 in basso e 1 in alto
R reazione 1 macchia in basso
o La reazione si è conclusa
o Si stanno formando due prodotti di reazione
o Il prodotto è meno polare del substrato di partenza
o La reazione non è conclusa

La seguente TLC indica che:

P partenza 1 macchia in basso
S sovrapposizione 2 macchie, 1 in basso e 1 in alto
R reazione 1 macchia in alto
o Il substrato di partenza si è convertito in un prodotto di reazione meno polare
o Il substrato di partenza si è parzialmente convertito nel prodotto
o Il substrato di partenza si è convertito in un prodotto di reazione più polare
o La reazione non è avvenuta

Si mettono a reagire 1g d acido salicilico (PM=138,1207) e 1,2g di anidride acetica (PM=102,0886). Si ottengono 0,8g di prodotto (PM=180,16).
Calcolare la resa% di reazione.
o 80%
o 37,8%
o 23,4%
o 61,3%

La cromatografia su silice come fase stazionaria, è una tecnica separativa che sfrutta come principio chimico-fisico:
o Dimensioni delle molecole
o Polarità
o Afifnità specifiche
o Interazioni ioniche

Durante una separazione di una miscela mediante colonna cromatografica su silice, i composti più polari:
o Verranno eluiti prima dei composti meno polari
o Saliranno più in alto sulla lastrina
o Saranno trattenuti dalla silice di più rispetto ai composti meno polari
o Non verranno trattenuti dalla silice
Durante una separazione di una miscela mediante colonna cromatografica su silice, i composti meno polari:
o Verranno eluiti dopo i composti più polari
o Saliranno più in alto sulla lastrina
o Saranno trattenuti dalla silice di più rispetto ai composti più polari
o Verranno eluiti prima di quelli più polari

La TLC è una tecnica cromatografica:

o Preparativa per scambio ionico
o Analitica per scambio ionico
o Analitica per adsorbimento
o Preparativa per affinità

La colonna cromatografica, con silice in fase stazionaria, è una tecnica cromatografica:

o Preparativa per adsorbimento
o Preparativa per affinità
o Analitica per scambio ionico
o Analitica per adsorbimento
________________________________________________________________________________________________________________________
BIOLOGIA MOLECOLARE:

Calcolare l’efficienza di trasformazione sapendo che sono stati usati 5ng di DNA plasmidico per trasformare, e sono state ottenute 500 colonie:
o 10.000
o 1.000
o 100.000
o 100

Volete assemblare una miscela di ligazione tra un vettore di dimensioni 10.000bp e un frammento di DNA di 1.500bp. volendo liitare la
ricircolarizzazione del vettore, utilizzate il rapporto molare vettore:inserto 1:3. Quanti ng di frammento di DNA da clonare utilizzereste, avendo
deciso di aggiungere alla miscela di ligazione 20ng di vettore?
o 15
o 21
o 7
o 9

Quale sei seguenti ER taglia generando estremità piatte?

o Sall: G/TCGAC
o Hpal: GTT/AAC
o Sacl: GAGCT/C

Quale dei seguenti ER taglia generando estremità sporgenti 5’?

o PmII: CAC/GTG
o NsII: ATGCA/T
o HpII: C/CGG

Volete preparare 50ml di gel di Agarosio allo 0,7%. Il tampone TAE da soluzione stock è pari a 25X. Determina:
a. Quantità di Agarosio
b. Quantità di TAE 25X
o a. 0,7g b. 0.5ml
o a. 0,35g b. 0,5ml
o a. 750mg b. 2ml
o a. 350mg b. 2ml

Volete allestire 150microlitri di reazione PCR. Uno dei componenti da aggiungere è rappresentato dalla miscela di dNTP, la cui concentrazione finale
deve essere pari a 100micromolare. Determinare il volume da prelevare se la soluzione stock della miscela di dNTP ha la concentrazione 5mM:
o 3microlitri
o 30microlitri
o 2microlitri
o 6microlitri

Dati i seguenti valori di OD600 in una curva di crescita microbica, la fase di crescita esponenziale è da:
(grafico illeggibile, troppo piccolo)
o 150-180 min
o 60-120 min (prima di quanto si pensasse)
o 180-210 min
o 0-30 min

Considerando questi primers:

 1. GCGCTGAGCCTGACGGTGCGAG
2. CCGAGCATGGTCCTCCGAGTCGC
3. GGCTGACCTGACGGTGGAG
4. GAGCATGGTACTCCGAGTCAC
Quale coppia ha Tm adatte per poter essere usata in PCR?
o 2-3
o 3-4
o 1-4
o 1-2
________________________________________________________________________________________________________________________
MICROBIOLOGIA:

La mureina si trova nella parete batterica, ed è costituita da:

o Amminoacidi e amminozuccheri
o Glicoproteine
o Acidi teicoici e lipidi
o Lipopolisaccaridi e amminoacidi

La crescita di una coltura microbica si misura attraverso diversi metodi. Quale di questi è diretto:
o Peso secco
o Conta vitale in piastra
o Assorbanza allo spettrofotometro
o Massa

A seguito della colorazione di Gram, un batterio si definisce Gram+ se:

o Risulta colorato di viola
o Risulta incolore
o Risulta colorato di rosa
o Risulta colorata solo la parete batterica

La crescita in coltura microbica si misura attraverso diversi metodi. Quale di questi è un metodo indiretto:
o Dimensioni della cellula
o Conta vitale in piastra
o Assorbanza misurata allo spettrofotometro
o Dimensioni della colonia

La parete dei Gram- è caratterizzata dall’avere:

o Amminoacidi
o Lipopolisaccaridi
o Peptidoglicano
o Acidi micolici

La colorazione di Gram permette di identificare se un batterio è un:

o Gram + o gram –
o Colorato
o Gram –
o Gram +

Quale delle seguenti tecniche è una tecnica di sterilizzazione?

o Includere i batteri a 60°C
o Scaldare a 80°C
o Incubare a 37°C
o Filtrazione

Risultato negativo al test dell’ossidasi significa che un batterio è capace di effettuare:

o Incapace di crescere
o Fermentazione
o Respirazione
o Fermentazione alcolica

Risultato positivo al test dell’ossidasi significa che un batterio è capace di effettuare:

o Incapace di crescere
o Fermentazione
o Respirazione
o Fermentazione alcolica

Cosa si intende con antibiogramma?

 o Analisi per valutare se un miro organismo è sensibile o resistente a un determinato antibiotico
o Analisi per valutare se un micro organismo è in grado di crescere su una determinata fonte di C
o Analisi per la classificazione dei microorganismi secondo Gram
o Analisi per valutare se un microorganismo è in grado di crescere su Trp

Un microorganismo cresciuto in presenza di composti come la diidroberberina, può formare un alone di inibizione. Questo indica che:
o Il micro lo usa come composto per la crescita
o Il composto non ha attività antimicrobica
o Il composto ha attività antimicrobica
o Il micro è resistente alla presenza del composto

Considerando la curva di crescita microbica, come si chiama la fase in cui il microrganismo si sta dividendo e presenta attività metabolica?
o Lag o latenza
o Esponenziale
o Morte
o Stazionaria

Avete inoculato 100ml di terreno minimo con 1,2ml di preinoculo di E.coli in modo da avere in beuta OD600 pari a 0,05. Qual è il valore di OD600
del preinoculo?
o 2,4
o 4,17
o 0,4
o 0,0006

Una coltura di E.coli in terreno minimo minerale contenente acetato come unico composto organico sta crescendo in mdoo esponenziale. Alle
12.00 contiene 105 CFU/ml, alle 13.00 2x105, alle 14 4x105. Quale sarà il titolo approssimativo della colonia alle 18.00?
o 3,2x106
o 6,4x106
o 1,3x107
o 5,2x107

Un microorganismo in presenza di un antibiotico può formare un alone di inibizione. La formazione dell’alone indica che:
o Il micro è intermedio alla presenza dell’antibiotico
o Non da indicazioni utili
o Il micro è sensibile alla presenza dell’antibiotico
o Il micro è resistente alla presenza dell’antibiotico

Il test dell’indolo serve per verificare la capacità di un microorganismo di metabolizzare:

o Trp
o Indolo
o Indolo e Trp
o Piruvato

Un microorganismo è definito resistente ad un antibiotico se cresce:

o Dando colorazione viola
o Non formando alone di inibizione
o Solo su terreno agarizzato
o Formando alone di inibizione

La presenza di enzimi come superossido dismutasi o catalasi può spiegare come i batteri siano:
o Incapaci di respirare senza O2
o Capaci di crescere in presenza di O2
o Incapaci di usare O2 per il loro metabolismo
o Incapaci di produrre radicali liberi se esposi a O2
________________________________________________________________________________________________________________________
BIOCHIMICA:

Quale ione è necessario per l’attività di PNPasi?

o Cl -
o NH 4+
o PO4 3-
o Fe 3+

Il materiale di partenza del laboratorio di biochimica:

o Estratto di citoplasma
o Risospensione di cellule batteriche
o Miscela di proteine note
 o Soluzione di enzima puro

La colonna cromatografica serve per:

o Purificare la proteina di interesse
o Eliminare la PNPasi
o Caratterizzare la proteina di una miscela
o Quantificare la proteina con His-tag

Come è stata clonata la PNPasi per la purificazione?

o Senza tag
o Con His-tag
o Con FLAG-tag
o In fuzione con GST

La purificazione mediante cromatografia di affinità consente di separare le molecole in funzione di:

o Idrofobicità
o Dimensione e forma
o Legame specifico tra due molecole
o Forza ionica

L’attività enzimatica della PNPasi è tipicamente monitorata attraverso:

o Assorbimento spettroscopico dell’enzima
o Emissione della fluorescenza dell’enzima
o Assorbimento spettroscopico di un prodotto di reazione
o Misura del peso molecolare dell’enzima

La PNPasi viene recuperata dopo la centrifugazione sfruttando il fatto che:

o È una proteina citoplasmatica
o È una proteina di membrana
o Aggrega e si deposita nel pellet
o È stata secreta dalle cellule

Per determinare la concentrazione proteica di un campione incognito occorre costruire una retta di taratura riportando:
o In ascissa i valori di assorbimento a 595nm e in ordinata i corrispondenti ug di proteina
o In ascissa il volume aggiunto in cuvetta e in ordinata i corrispondenti valori di assorbimento a 595nm
o In ascissa i ug di proteina e in ordinata i corrispondenti valori di assorbimento a 595nm
o In ascissa i ul di proteina e in ordinata i corrispondenti valori di assorbimento a 595nm

In seguito alla purificazione, ci si aspetta che la resa proteica:

o Sia aumentata per la perdita di contaminanti
o Sia diminuita per la perdita di contaminanti
o Sia diminuita per la perdita di materiale non proteico
o Sia aumentata per la perdita di PNPasi

In seguito alla purificazione, ci si aspetta che la resa enzimatica della PNPasi sia:
o Diminuita per la parziale perdita di enzima
o Aumentata per la perdita di contaminanti
o Aumentata perché l’enzima è più puro
o Diminuita, ma solo nel caso in cui l’enzima sia stato denaturato

Il grafico dei doppi reciproci:

o Ha un’intercetta sull’asse delle ascisse indipendente dalla vmax
o Ha un’intercetta sull’asse delle ascisse uguale a Km/vmax
o Ma una pendenza indipendente da Km
o Ha una pendenza tanto maggiore quanto maggiore vmax

L’His-tag della proteina i lega alla resina della colonna di purificazione grazie alla presenza di:
o Estratto grezzo
o Ioni cobalto
o Eluati
o Imidazolo

Quale dei seguenti parametri dipende dalla concentrazione dell’enzima?

o Km
o Numero di turnover
o k1
o Vmax
Definisci l’estratto grezzo:
o L’insieme delle proteine che non si legano alla colonna
o L’insieme delle proteine ottenute tramite purificazione
o L’insieme delle proteine eluite dalla colonna
o Il contenuto delle cellule in seguito alla lisi

Nell’estratto grezzo è presente:

o Il substrato della reazione catalizzata da PNPasi
o Solo la proteina da purificare
o Contenuto della cellule
o Tutte le proteine ad eccezione di quelle da purificare

Per eluire la PNPasi dalla colonna, occorre aggiungere:

o Acqua
o Eluati
o Imidazolo
o Tampone di lisi

Il volume del campione da aggiungere a 1ml di reattivo di Bradford deve essere:

o < 10microlitri
o > 100microlitri
o > 500microlitri
o < 1microlitro

Il picco di assorbanza del Coomassie Brilliant Blue è:

o 100nm
o 280nm
o 595nm
o 340nm

L’intensità della banda su un gel SDS-PAGE dipende:

o Dal tampone usato per la corsa elettroforetica
o Dalla quantità di proteina presente
o Dalla quantità di beta-mercaptoetanolo nel sample buffer
o Dalla complessità del campione in esame

Per visualizzare le proteine su gel di poliacrilammide al termine della corsa, si utilizza:

o Anticorpo 2°
o Anticorpo 1°
o Colorante Coomassie Blue
o Imidazolo

L’unità enzimatica internazionale U:

o Viene normalmente determinata determinando il contenuto proteico totale del preparato in esame
o È definita come la quantità di moli di prodotto formate al minuto, nelle condizioni del test, dall’enzima che si sta dosando
o Divisa per il volume della miscela di reazione in ml dà la velocità di reazione
o Viene normalmente determinata misurando la velocità di reazione in diverse condizioni

A concentrazione di substrato saturante:

o La velocità di reazione varia al variare della concentrazione di enzima
o La reazione ha raggiunto l’equilibrio chimico
o La velocità di reazione non varia al variare della concentrazione di enzima
o La velocità di reazione è semimassimale

Quale di questi composti viene utilizzato per ottenere l’estratto grezzo?

o RNAsi 0,5M
o Fosfato
o Tampone di lisi
o Imidazolo

Quale scopo ha avuto la centrifugazione durante il lab?

o Promuovere la lisi cellulare
o Recuperare proteine secrete dalla cellula
o Miscelare opportunamente la soluzione di cellule
o Separare la frazione solubile da quella insolubile
Definisci l’attività sperimentale di biochimica:
o Purificare e determinare l’attività enzimatica di una proteina
o Determinare l’attività enzimatica di una proteina con diversi substrati
o Purificazione e determinazione della struttura della proteina
o Determinazione della struttura 3° di una proteina, e la sua attività enzimatica

Il gradiente discontinuo di imidazolo viene usato per:

o Rompere la membrana cellulare
o Eluire la proteina purificata dalla colonna
o Ottenere l’estratto grezzo
o Lavare la colonna

Il picco/volume escluso, è costituito da:

o Eluati
o Proteine che non si legano alla colonna
o PNPasi
o PNPasi e proteine che non si legano alla colonna

Quale di queste tecniche è comunemente usata per il dosaggio proteico:

o SDS-PAGE elettroforesi
o Metodo di Bradford
o Cromatografia ad affinità
o Western blot

Il reattivo di Bradford contiene:

o Fosfato
o Imidazolo
o Coomassie Brilliant Blue
o BSA

Il reattivo di Bradford reagisce con:

o His-tag
o Imidazolo
o Proteine in soluzione
o SDS aggiunto al campione

Il metodo di Bradford è:
o Lineare a qualsiasi concentrazione
o Parabolico
o Lineare da 10 a 100 microgrammi di proteina
o Lineare in breve intervallo di concentrazioni

La migrazione delle proteine nell’SDS-PAGE permette di determinare:

o Lunghezza della sequenza aa della proteina
o Carica superficiale della proteina
o MM della proteina
o Idrofobicità della sequenza aa della proteina

Nel Western blot l’Ab 2° riconosce specificamente:

o Il latte usato per saturare
o L’Ab 1° specie-specifico
o La proteina trasferita su filtro
o L’SDS

La determinazione sperimentale della Km richiede:

o Misure di v a concentrazione saturante di substrato
o Misure di velocità a diverse concentrazioni di substrato
o Conoscenza esatta della concentrazione di enzima nelle miscele di reazione usate per misurare la v
o Misure di v a diverse concentrazioni di enzima

Il grafico dei doppi reciproci:

o Ha pendenza tanto maggiore quanto maggiore la vmax
o Ha intercetta sulle ascisse uguale a Km/vmax
o Ha intercetta sulle ascisse indipendente da vmax
o Ha pendenza indipendente da Km

Cosa si intende per saggio accoppiato di attività enzimatica?

 o Un metodo di dosaggio cin cui si segue la reazione catalizzata dell’enzima in esame utilizzando una seconda reazione catalizzata da un
enzima saturante
o Un metodo di dosaggio cin cui si segue la reazione catalizzata dell’enzima in esame utilizzando una seconda reazione catalizzata da un
enzima il cui prodotto non è spettrofotometricamente misurabile
o Un metodo di dosaggio in cui si segue direttamente la reazione catalizzata dall’enzima in esame
o Un metodo di dosaggio cin cui si segue la reazione catalizzata dell’enzima in esame utilizzando una seconda reazione catalizzata da un
enzima limitante

L’unità di misura della vmax è:

o Mg min -1
o mM min-1
o mM min
o mg min-1

A concentrazioni di substrato saturante:

o La v di reazione è semimassimale
o La v di reazione varia al variare della concentrazione di enzima
o La v di reazione non varia al variare della concentrazione di enzima
o La reazione ha raggiunti l’equilibrio

Come si calcola l’indice di purificazione?

o Rapporto tra attività enzimatica U/ml di ciascun passaggio di purificazione, e quella del 1°
o Rapporto tra attività specifica U/mg di ciascun passaggio, e quella del 1°
o Rapporto tra attività specifica U/mg di ciascun passaggio, e quella del 1° , moltiplicando x100
o Rapporto tra concentrazione proteica mg/ml di ciascun passaggio, e quella del 1°

Quale di queste è una tecnica comunemente usata per purificare le proteine:

o Western blot
o Cromatografia di affinità
o Metodo di Bradford
o HPLC

Il numero di molecole del reattivo di Bradford è proporzionale a:

o Volume della soluzione aggiunta
o Numero di proteine presenti in soluzione
o Imidazolo in soluzione
o pH della soluzione

Il detector dello spettrofotometro misura.

o La luce assorbita
o L’intensità della luce incidente
o L’intensità della luce trasmessa
o La velocità di reazione

L’SDS-PAGE avviene:
o A pH 4
o A pH 10
o In condizioni denaturanti
o In condizioni non denaturanti

Quale di queste affermazioni è vera?

o pH stacking gel > pH running gel
o pH stacking = pI della proteina di interesse
o pH stacking < pH running
o pH stacking = pH running

Il sodio dodecilfosfato, SDS, è:

o Il substrato della reazione catalizzata da PNPasi
o Il colorante reattivo di Bradford
o Una molecola anfifilica che si lega alle proteine
o Un tampone

Il molecular weight marker usato in SDS-PAGE è composto da:

o Sodio dodecil fosfato a diverse concentrazioni
o Miscela di proteine incognite
o Glicerolo a diverse concentrazioni
o Miscela di proteine note
L’unità di misura della Km è una concentrazione in:
o mM-1
o mM
o mg/ml
o U

La Km:
o Varia al variare della concentrazione di enzima
o Più è elevata, minore è la concentrazione di substrato necessaria per saturare l’enzima
o Ha le unità di misura della concentrazione
o È pari alla velocità di reazione quando l’enzima è semisaturo

Assorbanza e concentrazione sono legate tra loro dalla:

o Equazione di Michaelis e Menten
o K
o Vax
o Legge di Lambert-Beer

Il filtro di nitrocellulosa nel Western blot serve a:

o Quantificare le proteine separate sul gel
o Calcolare la massa molecolare delle proteine
o Separare le proteine in base alla massa molecolare
o Trasferire le proteine separate tramite elettroforesi

Nel western blot le proteine sul filtro di nitrocellulosa si legano a:

o Fluoro foro
o Ab 2°
o Ab specifico
o Fosfato

Un enzima è definito come una proteina che:

o Accelera solo la reazione diretta
o Accelera solo la reazione inversa
o Viene modificata al termine della reazione
o Accelera la reazione stabilizzando lo stato di transizione

Come si calcola l’attività specifica di un enzima?

o Unità totali di enzima / concentrazione della proteina
o Mg di proteina del campione x volume del campione
o Unità di enzima del campione x volume del campione
o Unità totali di enzima / quantità totale di proteine in mg

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FISIOLOGIA GENERALE:

Il terreno di coltura per le cellule di mammifero contiene:

o FBS come miscela di fattori di crescita
o DMEM come miscela di fattori di crescita
o FBS come miscela di antibiotici
o HCO3- come anione principale

Una cappa laminare a flusso verticale:

o La parte sterile è quella anteriore
o La parte sterile è quella posteriore
o Offre la maggior protezione per le cellule
o Offre la maggior protezione sia per le cellule che per l’operatore

Cosa deve contenere il terreno di coltura utilizzato in laboratorio per far crescere le cellule di mammifero?
o Siero con fattori di crescita, amminoacidi essenziali e antibiotici
o Sali minerali
o Antibiotici
o Amminoacidi essenziali e antibiotici

Per mantenere condizioni di sterilità nelle colture cellulari, è necessario:

o Utilizzare sempre antibiotici
o Nessuna risposta corretta
 o Sterilizzare i terreni di coltura mediante UV
o Filtrare i terreni di coltura prima di ogni utilizzo

Qual è l’andamento tipico della curva di crescita delle cellule di mammifero coltivate in vitro?
o Esponenziale, seguito da fase stazionaria e eventualmente fase di declino
o Lineare
o Stazionario
o Dipende dal tipo di cellule

Quale concentrazione di Sali contiene la soluzione fisiologica extracellulare per le cellule di mammifero?
o Ca 50mM di KCl
o Ca 50mM di NaCl
o Nessuna delle risposte
o Ca 10mM di CaCl2

Il differenziamento neuronale:
o È un processo che avviene in vivo e che non può essere riprodotto in vitro
o Può essere indotto in coltura mantenendo le cellule in terreno con fattori di crescita
o Nessuna delle risposte è corretta
o Si verifica quando le cellule crescono a confluenza

La concentrazione di Ca intracellulare:
o Si mantiene costante durante il ciclo cellulare
o Non è mai superiore alla concentrazione di 100nM
o Diminuisce in risposta alla stimolazione dei recettori purinergici
o Non supera mai quella extracellulare

Qual è la formula corretta da applicare per effettuare la conta delle cellule contenute in 5ml di terreno di coltura mediante una cameretta conta
cellule?
o N° medio delle cell presenti in 4 quadrati x 5 x 104
o N° di cell contenute nell’intera griglia della cameretta conta cellule
o N° medio delle cell presenti in 4 quadrati x 104
o N° di cell in 1 quadrato x 5 x 104

I recettori purinergici:
o 2APB è il loro antagonista recettoriale
o Possono inibire la PLC tramite proteina G
o Mediano ingresso di Ca dall’ambiente extracell attraverso l’isoforma P2X
o Bloccano la fuoriuscita di Ca dal reticolo, attraverso i recettori dell’IP3

Il colorante FLUO-4:
o Ha una Kd di circa 50microM
o È un colorante a singola lunghezza d’onda (non raziometrico)
o È un colorante specifico per la misura di livelli di Ca nucleari
o Compartimentalizza selettivamente nel RE

Il colorante FLUO-4:
o Viene eccitato a 488nm
o Il valore della fluorescenza assoluta è proporzionale solo alla quantità di Ca legata al colorante stesso
o È una molecola che lega in mdoo aspecifico i cationi intracellulari
o Presenta uno spettro di emissione con fluorescenza massima a 488nm

Il colorante FLUO-4:
o Entra nel nucleo
o È in grado di attraversare la membrana plasmatica se dotato di un gruppo AM
o È utile per misurare la concentrazione di Ca extracellulare
o Si lega a recettori dell’IP3

Quale delle seguenti affermazioni riguardanti FLUO-4 è vera?

o Viene eccitato a lunghezza d’onda nel visibile
o Si usa per misurare le concentrazioni di sodio nelle cellule viventi
o Emette a 488nm
o Non viene internalizzato, ma si lega a recettori di membrana

Quali sono le principali vie di ingresso di Ca nell’ambiente extracell nelle cell in stato indifferenziato?
o Canali Ca voltaggio-dipendenti
o Nessuna delle risposte è corretta
 o Recettori della rianodina
o Recettori dell’IP3

Quale di queste funzioni del sistema FLUOstar Omega è vera?

o Nessuna di quelle indicate
o Si può lavorare sia a T° che a CO2 controllata
o È possibile creare appositi protocolli per effettuare analisi di fluorescenza a diverse lunghezze d’onda
o Lavora solo con campioni di cellule in sospensione

SOCE indica:
o Ingresso di Ca mediato da canali voltaggio-dipendenti
o Ingresso di Ca mediato da recettori metabotropici
o Rilascio di Ca dal RE indotto dall’ingresso di Ca esterno
o Ingresso di Ca dall’esterno dipendente dai livelli di Ca nel RE

Il lettore di piastre FLUOstar Omega è uno strumento di lab che permette:

o Di effettuare misure in fluorescenza solo su micro piastre da 96 pozzetti
o Di effettuare esperimenti iniettando contemporaneamente fino a 3 farmaci
o Di analizzare le proprietà elettriche delle cellule
o L’analisi della fluorescenza delle cellule in adesione a T° controllata

Quale delle seguenti affermazioni su FLUO-4 è corretta?

o È usato per misurare la concentrazione di sodio nelle cell viventi
o Viene eccitato a una lunghezza d’onda nel visibile
o Emette a 488nm
o Non viene internalizzato ma si lega a rec di membrana

Un plate reader come quello utilizzato in laboratorio permette di:

o Fare analisi di singola cellula
o Fare misure di A e fluorescenza
o Analizzare la morfologia cellulare
o Separare le cellule in base alle loro dimensioni

L’incubatore usato per le colture cellulari:

o È un ambiente sterile
o Mantiene costante l’umidità
o Mantiene costante T° e pH
o Mantiene Co2 uguale a quella atmosferica

L’acido retinoico:
o È un derivato della vitamina C
o È un derivato della vitamina A
o È un enzima
o È in grado di attraversare la membrana plasmatica ma non quella nucleare

Una curva di risposta dell’azione di un composto (es. ATP inc ell F-11)
o Può essere generata usando solo 2 concentrazioni di composto
o Può essere stimata usando una funzione lineare
o Nessuna delle precedenti è corretta
o Segue un andamento previsto dall’equazione di Michaelis e Menten

Per procedere alla conta delle cellule di mammifero:

o Serve seminare le cellule nella cameretta conta cellule
o Serve staccare le cellule dalla piastra e trasferirle nella cameretta conta cellule
o Nessuna delle risposte
o Si usa uno spettrofotometro

La mobilizzazione di Ca indotta da ATP è caratterizzata da:

o Attivazione dei recettori P2X ma non del P2Y
o Inibizione del pathway PLC-IP3
o Aumento transiente di Ca in assenza di Ca nella soluzione extracellulare
o Inibizione dell’uptake di Ca nel RE

In un grafico che mostra la variazione del Ca indotta dall’ATP in funzione del tempo, F/F0 cosa rappresenta?
o La normalizzazione dei valori di fluorescenza rispetto a quello basale di una popolazione cellulare
o L’effetto dell’ATP su una singola cellula
o La concentrazione di Ca nel RE
 o Il rapporto tra lo spettro di eccitazione e quello di emissione del FLUO
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Descrivi la tecnica di titolazione redox.
Descrivi la differenza tra i recettori P2X e P2Y.
Elenca e descrivi quali tecniche sono state utilizzate per effettuare una caratterizzazione qualitativa e quantitativa di un enzima.
In base ai risultati ottenuti in laboratorio, descrivi gli effetti dell’ATP sulle cellule F-11 in assenza di Ca nella soluzione extracellulare.
Descrivere il meccanismo di SOCE.
Descrivere la procedura della colorazione di Gram.
Elencare le fasi/steps di cui si compone un ciclo di PCR.
Elencare i componenti necessari per ottenere l’amplificazione del templato scelto in una reazione di PCR.
Come si monitora l’andamento di una reazione in chimica organica?
Trasformazione di E.coli: spiega perché nel terreno selettivo deve essere presente un antibiotico, ad esempio ampicillina.
Descrivi i principali meccanismi che contribuiscono al ripristino delle concentrazioni basali di Ca intracellulare.
Descrivere brevemente i principi della cromatografia per adsorbimento.
Cosa si intende per Km e vmax?