LA VIA CITOPLASMATICA

Trasporto dal citosol ai mitocondri

LA VIA CITOPLASMATICA
Trasporto dal citosol ai mitocondri
LA VIA CITOPLASMATICA
Trasporto dal citosol ai mitocondri

I mitocondri interagiscono con il reticolo endoplasmatico

Si dividono nei siti di contatto

I contatti RE-mitocondrio mediano lo scambio di lipidi tra le due membrane

Selected Mitochondrial Proteins That Are Synthesized in the Cytosol
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Mitochondrial Location Protein*
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Matrix Alcohol dehydrogenase (yeast)
Carbamoyl phosphate synthase (mammals)
Citrate synthase and other citric acid enzymes
DNA polymerase
F1 ATPase subunits α (except in plants), β, γ, and δ (in certain fungi)
Mn2+ -superoxide dismutase
Ornithine aminotransferase (mammals)
Ornithine transcarbamoylase (mammals)
Ribosomal proteins
RNA polymerase
Inner membrane ADP/ATP antiporter
CoQH2–cytochrome c reductase complex: subunits 1, 2, 5 (Fe-S protein), 6, 7, and 8
Cytochrome c oxidase subunits 4, 5, 6, and 7
Phosphate/OH− antiporter
Proteolipid of F0 ATPase
Thermogenin (brown fat)
Intermembrane space Cytochrome c
Cytochrome c peroxidase
Cytochrome b2 and c1 (subunits of CoQH2–cytochrome c reductase complex)
Outer membrane Mitochondrial porin (P70)
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* Most proteins (except the ADP-ATP antiporter, cytochrome c, and porin) are fabricated as longer precursors.
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sistemi di sintesi proteica
acellulari per lo studio del
trasporto post-
traduzionale delle
proteine mitocondriali
 Le caratteristiche dei segnali mitocondriali

I segnali più comuni per la

destinazione mitocondriale

• sono localizzati al
terminale N della proteina
• contengono 3-5 residui non
consecutivi di aminoacidi a
carica positiva (arg o lys).
• possono contenere residui
idrofobici contrapposti alle
cariche positive
POSITIVO • sono privi di aminoacidi a
POLARE carica negativa

APOLARE
 Le caratteristiche dei segnali mitocondriali

Come per altri segnali non è

importante tanto la esatta
sequenza di aminoacidi, quanto
aspetti generali del tratto della
molecola

POSITIVO In questo caso si genera una

-elica anfipatica
POLARE

APOLARE
 Le caratteristiche dei segnali mitocondriali

Sequenza segnale alcool deidrogenasi

POSITIVO

POLARE Recettore di importazione

APOLARE
 Le caratteristiche dei segnali mitocondriali

Un’unica sequenza segnale indirizza le proteine nella matrice, solo le proteine non ripiegate sono
traslocate attraverso entrambe le membrane
I traslocatori mitocondriali

TOM = translocase outer membrane

TIM = translocase inner membrane
 I traslocatori mitocondriali

Il complesso TOM

Il complesso TOM misura circa 400kDa ed è formato da un nucleo centrale costituito da Tom40,
Tom22, Tom5, Tom6 e Tom7 e dai componenti periferici Tom20 e Tom70.
Tom20/Tom22 e Tom70 funzionano da recettori per i segnali di indirizzamento mitocondriale.
Tom70 funziona inoltre come sito di ancoraggio per lo chaperone citosolico Hsp70.
 I traslocatori mitocondriali

Il complesso TIM

Il complesso TIM23 media la traslocazione attraverso la membrana interna. I componenti

centrali del complesso sono Tim23/Tim17, e Tim50.
Tim50 si associa fisicamente ad intermedi di traslocazione che si accumulano nel complesso
TOM, connettendo la traslocazione attraverso i due complessi
Il complesso può essere presente in due forme: TIM23SORT è responsabile del rilascio laterale
delle proteine nella membrana interna.
 I traslocatori mitocondriali

Il complesso TIM

TIM23Motor non presenta Tim 21 e si trova in associazione con il complesso

motore associato alla traslocasi di presequenza (PAM = Presequence
translocase-Associated Motor).
 I traslocatori mitocondriali

Il complesso PAM

Il componente principale del complesso PAM è mtHsp70. Tim44 agisce da piattaforma

molecolare per i componenti critici del motore di importo interagendo direttamente con mtHsp70
e indirettamente, attraverso interazione con Pam16, con la proteina chaperone Pam18, questa
stimola l’attività ATPasica di mtHsp70
 Ruolo dell’energia nell’importazione

La disponibilità di ATP nel citoplasma è indispensabile per

le hsp70 citoplasmatiche che dispiegano le proteine e le
avviano a recettori della membrana mitocondriale:
proteine artificialmente denaturate con UREA o mutate in
modo da impedire il folding penetrano nel mitocondrio
anche in assenza di ATP citoplasmatico.
Ruolo dell’energia nell’importazione
 Ruolo dell’energia nell’importazione

La forza proton-motrice e ATP intra-mitocondriale sono

necessari per il movimento attraverso la membrana
interna.

Mitocondri disaccoppiati non trasportano le proteine nella

matrice anche in presenza di ATP
 Ruolo dell’energia nell’importazione

È anche possibile che il potenziale trans-membrana

(200 mV), negativo all’interno e che genera un
gradiente elettrico di 400.000 V/cm trascini
“elettroforeticamente” verso la matrice le cariche
positive degli aminoacidi del segnale (3-5 residui non
consecutivi di aminoacidi a carica positiva)
Hsp70 mitocondriale trascina le proteine nella matrice
Modelli a dente di arresto
 Trasporto nella matrice

Chaperon citoplasmatici

dispiegano le proteine e le

avviano a recettori della

membrana mitocondriale.

Chaperon mitocondrali

facilitano il folding delle

proteine nella matrice

Hsc60
Trasporto nella matrice
Le proteine sono avviate ai compartimenti sub-mitocondriali attraverso più
tipi di segnali e vie
Le proteine sono avviate ai compartimenti sub-mitocondriali attraverso più
tipi di segnali e vie
Le proteine sono avviate ai compartimenti sub-mitocondriali attraverso più
tipi di segnali e vie
 Altri traslocatori mitocondriali

TIM 22 complex: media l’inserzione di alcune proteine della membrana interna

OXA complex: media l’inserzione di alcune proteine nella membrana interna.
Anche di quelle sintetizzate all’interno dei mitocondri
SAM complex: aiuta a ripiegare le proteine a barile (porine) nella membrana esterna
Trasporto nella membrana interna
Trasporto nella membrana interna
Trasporto nella membrana interna
 Trasporto nella membrana esterna

I mitocondri e i batteri usano meccanismi simili per inserire porine

nella loro membrana esterna

Complessi TOM e SAM = Sorting and Assembly Machinery

 Trasporto nella membrana esterna

I mitocondri e i batteri usano meccanismi simili per inserire porine

nella loro membrana esterna

Complessi TOM e SAM = Sorting and Assembly Machinery

Trasporto nella membrana esterna: il caso della P70

Integrazione di porine nella

membrana mitocondriale esterna
Trasporto nello spazio intermembrana
Trasporto nello spazio intermembrana

Cytochrome c heme lyase

 Trasporto nello spazio intermembrana

Il caso del citocromo c

IL CITOCROMO C È PRIVO DI SEQUENZA SEGNALE.

PROBABILMENTE GRAZIE ALLE SUE PICCOLE DIMENSIONI
DIFFONDE LIBERAMENTE E ATTRAVERSA LA MEMBRANA
ATTRAVERSO UNA PROTEINA P70, ANALOGA ALLE PORINE.

DOPO AVER RAGGIUNTO LO SPAZIO INTERMEMBRANA IL

CITOCROMO C LEGA L’EME, E CAMBIANDO CONFORMAZIONE NON
È PIÙ IN GRADO DI ATTRAVERSARE LA P70, RIMANENDO QUINDI
INTRAPPOLATO NELLA SUA SEDE