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La trasmissione dell’informazione

replicazione
DNA dA, dG, dC, dT

trascrizione

RNA A, G, C, U

traduzione

Proteina 20 aminoacidi

Dogma centrale della biologia

GENE
promotore regione trascritta
DNA

Trascrizione

mRNA 5’ 3’

Traduzione

Proteina NH2 COOH

Funzione biologica

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La replicazione del DNA è semiconservativa

Alberts et al., L’ESSENZIALE DI BIOLOGIA MOLECOLARE DELLA CELLULA, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2005

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La polimerizzazione del DNA richiede due

elementi fondamentali:

1. STAMPO

2. INNESCO

Fase di inizio

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Sul filamento lento avvengono ripetuti eventi di “innesco”

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Topoisomerasi di tipo I. È in grado di tagliare e ri-legare

un filamento di DNA, riducendo il superavvolgimento

Due doppie eliche di

DNA sono incastrate tra Topoisomerasi di tipo II
loro

Chemioterapici:
Camptothecin per Topoisomerasi I
Etoposide per Topoisomerasi II

La DNA topoisomerasi di
tipo II effettua un legame
covalente reversibile su
entrambi i filamenti di una
delle due eliche di DNA

La reazione inversa della

DNA topoisomerasi di tipo
II ricrea la doppia elica

Le due doppie eliche di

DNA sono libere

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Il problema dei TELOMERI

Il problema dei TELOMERI

Quando arriva alla fine del cromosoma, la DNA polimerasi
non riesce a completare la sintesi del filamento ritardato

leading strand

3’ 5’
5’ 3’

3’
5’ lagging strand

?
3’

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Il problema dei TELOMERI

Le estremità (telomeri) dei cromosomi eucariotici sono

caratterizzate da lunghe ripetizioni di sequenze ricche di G:C
Le estremità dei cromosomi lineari sono protette da queste lunghe
sequenze.
Queste sono sintetizzate da uno speciale enzima chiamato
Telomerasi

La Telomerasi è una riboproteina con attività di DNA polimerasi

RNA dipendente.

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TELOMERASI La telomerasi:
1 unità RNA
1 unità catalitica

Telomerasi=trascrittasi inversa

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Il problema dei TELOMERI

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Attività della TELOMERASI

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Il problema dei TELOMERI

Curva di crescita di cellule primarie in coltura

HeLa
Numero cellule

Limite di Hayflick

Senescenza cellulare

giorni

1920-51

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Il problema dei TELOMERI

Curva di crescita di cellule primarie in coltura

ri-attivazione della Telomerasi

Numero cellule

Senescenza cellulare

giorni

Accuratezza della copia del DNA

• Sintesi di RNA: 1 errore ogni 104

• Replicazione del DNA: 1 errore ogni 107

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La DNA polimerasi:
Ha una funzione intrinseca di correzione degli errori. Infatti ha due siti
catalitici: uno per la reazione di polimerizzazione (Pol), ed uno per la
reazione esonucleolitica (Exo)

• Replicazione del DNA: 1 errore ogni 107

• Sintesi del DNA (solo polimerizzazione): 1 errore ogni 105

Accuratezza della copia del DNA

• Sintesi di RNA: 1 errore ogni 104

• Replicazione del DNA: 1 errore ogni 107

• Frequenza errori effettiva: 1 ogni 109

Esiste un meccanismo di riparazione degli appaiamenti

sbagliati diretta dal filamento (mismatch repair)

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Lesioni del DNA: le cause

“spontanee” indotte
1) La replicazione stessa: Agenti fisici e chimici:
inserzione di un nucleotide errato (causa un
“mismatch”) 1) radiazioni ionizzanti (raggi X, raggi
Inserzione di nucleotidi in più (inserzione) o in γ, e raggi cosmici)
meno (delezione).
2) agenti chimici mutageni
2) Cambiamenti chimici spontanei:
Deaminazione
Depurinazione
Ossidazione

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Danni al DNA e meccanismi di

riparazione degli errori

ü Il DNA è continuamente esposto a condizioni

che possono danneggiarlo

ü Danni che risultino in un cambiamento

permanente della sequenza = mutazioni

ü Alta frequenza di mutazioni è associata allo

sviluppo di tumori

ü Sostanze che aumentano la frequenza di

mutazioni = mutageni

ü mutageni = cancerogeni

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Danni al DNA e meccanismi di

riparazione degli errori

Sostanze cancerogene
=
Mutagene
=
Sostanze chimiche che
reagiscono con le basi del DNA

o Cancerogeni diretti Morte (apoptosi)

o Cancerogeni indiretti
(Benzopirene, Aflatoxina B)

Tipi di danno:

• Appaiamenti errati
• Basi mancanti
• Basi danneggiate
• Rottura dello scheletro fosfo-ribosidico

Meccanismi di riparazione:

• Escissione dei nucelotidi (mismatch/nucleotide excision repair)

• Escissione delle basi (base excision repair)
• Giunzione omologa (homologous recombination)
• Giunzione non omologa (non homologous end joining)

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Riparazione degli appaiamenti scorretti tra le basi

La metilazione delle CpG distingue temporaneamente

il filamento neo-sintetizzato dal filamento stampo

La metilazione del DNA è

associata alla regolazione
della cromatina ed al
silenziamento genico

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Mismatch excision repair (escissione di appaiamenti incorretti)

Ripara: appaiamento incorretto nel DNA neosintetizzato

Le DNA glicosilasi scorrono il DNA analizzando le

basi e riconoscendo quelle chimicamente modificate

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Riparazione per escissione di basi (BER)

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Nei mammiferi, la mutazione più frequente è causata

dalla deaminazione della metil-citosina in Timina

Una DNA glicosilasi

specifica riconosce
l’appaiamento
anomalo T-G

Formazione di dimeri di Timina (raggi UV !!)

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Riparazione per escissione di nucleotidi (NER)

Riparazione del danno al DNA (II)

Riparazione per escissione di basi Riparazione per escissione di

(BER) nucleotidi (NER)

Specifica per alterazioni minori Specifica per alterazioni grosse che

distorgono la struttura del DNA

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Double strand breaks

rottura del DNA su entrambi i filamenti
(causata da radiazioni ionizzanti o da inibitori delle Topoisomerasi)

Fondamentale riparare le rotture del doppio

filamento di DNA per evitare:
- riarrangiamenti cromosomici
- perdita di informazione genetica

Double strand breaks

rottura del DNA su entrambi i filamenti
(causata da radiazioni ionizzanti o da inibitori delle Topoisomerasi)

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Lesioni o danni modificano la sequenza del DNA

Conseguenza 1 Conseguenza 3
Conseguenza 2
Riparazione del
DNA Riparazione Blocco della replicazione
difettosa del DNA Blocco della trascrizione

Ridotta vitalità cellulare

Stabilità genetica

Intabilità genetica

Cancro e malattie Biodiversità

genetiche ereditarie

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