ALLESTIMENTO DI PREPARATO ISTOLOGICO

 ACQUISIZIONE DEL CAMPIONE (biopsia)

 FISSAZIONE (aldeidi)
 DISIDRATAZIONE (alcoli)/ DIAFANIZZAZIONE
(xilolo)
 INFILTRAZIONE (paraffina)
 INCLUSIONE (paraffina)
 TAGLIO (al microtomo, sezioni da 3-5 micrometri)
 COLORAZIONE (con colore brillante di certe componenti del tessuto)
 CONTRO COLORAZIONE (della parte rimante del tessuto con un colore di contrasto).

PREPARAZIONE DI UN CAMPIONE BIOLOGICO PER LA MICROSCOPIA OTTICA

 Acquisizione del CAMPIONE e taglio in PEZZI
 BIOPSIA, intervento chirurgico, autopsia post- mortem
 Prelevato rapidamente utilizzando strumenti adatti (bisturi).

FISSAZIONE DEL CAMPIONE

 Arresto delle attività METABOLICHE e mantenimento della sua integrità morfologica

 Generalmente per mezzo di ALDEIDI REATTIVE per 24 ore
 CROSS- LINK delle MACROMOLECOLE, in particolare PROTEINE
 Si ottiene un effetto INDURENTE sui tessuti MOLLI
 Deve essere fatto RAPIDAMENTE per evitare che gli enzimi presenti degradino il tessuto
 Quantità fissativo= rapporto 1: 10/20
 INADEGUATA FISSAZIONE: alterazione della morfologia cellulare.

REQUISITI FISSATIVI
 ELEVATO POTERE DI PENETRAZIONE
 FISSAZIONE UNIFORME
 Compatibilità con colorazioni istochimiche ed immunoistochimiche
 Agenti chimici (pH 7,4) - composti organici, inorganici
 Agenti fisici - congelamento, calore

FORMALDEIDE

 Commercialmente venduta come FORMALINA (40% soluzione acquosa)

 Si usa al 10%, neutra e tamponata
 Alto grado di penetrazione
 Formazione di legami a ponte tra residui di lisina
 No eccessive modificazioni delle strutture PROTEICHE
 No eccessivo INDURIMENTO dei TESSUTI
 No DISSOLUZIONE DEI LIPIDI

DISITRATAZIONE E DIAFANIZZAZIONE DEL CAMPIONE

 Passaggio in soluzioni a concentrazioni crescente di ETANOLO per eliminare l’acqua in maniera
graduale
  Eliminazione dell’etanolo e passaggio in XILENE (solvente organico sia della paraffina sia delle
resine di inclusione)

PARAFFINA (materiale usato per l'inclusione) non è solubile in H2O o etanolo.

INFILTRAZIONE ED INCLUSIONE DEL CAMPIONE

 In mezzo appropriato: PARAFFINA o RESINA

 Diversi passaggi in paraffina calda.
 La paraffina occupa lo spazio precedentemente occupato dall'H2O e dall’alcol.
 La paraffina FREDDA si INDURISCE e permette di sezionare il campione.

TAGLIO AL MICROTOMO
 Taglio per mezzo di un microtomo, che produce sezioni dello spessore di 3-5 µm
 Montaggio delle sezioni su vetrini per microscopia

COLORAZIONE E COPRIVETRO

 La colorazione NON può avvenire solo a seguito di SPARAFFINATURA → processo inverso

della fissazione.

TIPI DI TAGLIO
 SEZIONE LONGITUDINALE → per lunghezza maggiore del tessuto/organo
 SEZIONE TRASVERSALE → Perpendicolare al tessuto/organo
 SEZIONE OBLIQUA → Ad un certo angolo tra sezione longitudinale e

trasversale.