11684795910 Kit per la rilevazione della morte cellulare in situ, fluoresceina Roche

sufficient for ≤50 tests, suitable for detection

Descrizione generale

I metodi ampiamente usati per determinare l'apoptosi comprendono l'analisi del DNA genomico mediante
elettroforesi su gel di agarosio e saggi di frammentazione del DNA basati su 3H-timidina e, in alternativa, 5-
bromo-2′-desossiuridina. Tali metodi prevedono la separazione, in una data popolazione cellulare, del DNA
frammentato a basso peso molecolare dal DNA non frammentato ad alto peso molecolare. Pertanto, non
forniscono informazioni sul destino di una singola cellula in una data popolazione cellulare, o in particolare,
nelle sezioni di tessuto. In alternativa, si possono riconoscere le singole cellule apoptotiche al microscopio in
base alla caratteristica condensazione e frammentazione della cromatina nucleare; questo metodo è però
soggettivo e limitato a una finestra temporale relativamente stretta nella quale i cambiamenti morfologici
sono massimi.

Il segno distintivo dell'apoptosi è la degradazione del DNA che, nelle prime fasi, riguarda il DNA connettivo
internucleosomale. La frammentazione del DNA può produrre rotture sia a doppio che a singolo filamento
(nick). Entrambi i tipi di rottura possono essere rilevati marcando i terminali 3′-OH liberi con nucleotidi
modificati (ad es. biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceina-dUTP) in una reazione enzimatica. L′enzima
desossinucleotidil transferasi terminale (TdT) catalizza la polimerizzazione, indipendente dal DNA stampo,
dei desossiribonucleotidi all'estremità 3′ del DNA sia a singolo che a doppio filamento. Questo metodo è
stato anche definito TUNEL (TdT-mediated dUTP-X nick end labeling), cioé marcatura delle estremità
mediata da desossinucleotidil trasferasi terminale. In alternativa, gruppi 3′-OH liberi possono essere marcati
usando una DNA polimerasi mediante un meccanismo detto Nick translation. Tale meccanismo riproduce la
sequenza originale del DNA stampo. Tuttavia, il metodo TUNEL è considerato più sensibile e più veloce.

Kit per il rilevamento e la quantificazione dell'apoptosi a livello di singola cellula, basato sulla marcatura
delle rotture del filamento di DNA (tecnologia TUNEL); analisi mediante microscopia a fluorescenza o
citometria a flusso.

Specificità

La reazione TUNEL marca preferenzialmente le rotture del filamento di DNA che si generano durante il
processo di apoptosi. Ciò consente di distinguere l′apoptosi dalla necrosi e dalle rotture del filamento di
DNA indotte mediante sostanze citostatiche o irradiazione.

Applicazioni
Il kit per la rilevazione della morte cellulare in situ con fluoresceina, utilizza una tecnica non radioattiva
precisa, veloce e semplice per identificare nelle cellule e nei tessuti la morte cellulare apoptotica sia a livello
di singola cellula mediante microscopia a fluorescenza, sia da un punto di vista quantitativo mediante
citometria a flusso.[1][2] Pertanto, il kit per la rilevazione della morte cellulare in situ può essere utilizzato
con molti sistemi di analisi diversi.

Alcuni esempi sono:

rilevazione di singole cellule apoptotiche in sezioni di tessuto congelate e fissate in formalina nella ricerca di
base,[3][4][5]

determinazione della sensibilità delle cellule maligne all'apoptosi indotta da farmaci nella ricerca sul
cancro[6]

tipizzazione delle cellule in fase di morte cellulare in popolazioni eterogenee mediante procedure di
colorazione doppia[7]

Caratteristiche e vantaggi

Sensibile: la marcatura diretta mediante fluoresceina-dUTP riduce il background di fondo

Veloce: l'uso della fluoresceina-dUTP consente l'analisi dei campioni direttamente dopo la reazione TUNEL

Comodo: non richiede alcuna fase preparatoria.

Accurato: identificazione dell'apoptosi a livello molecolare (rotture del filamento di DNA) e identificazione
delle cellule nelle primissime fasi dell'apoptosi

Confezionamento

1 kit comprende 2 componenti.

Nota sulla preparazione

Soluzione di lavoro: aggiungere il volume totale (50 μL) della soluzione enzimatica ai rimanenti 450 μL di
soluzione di marcatura per ottenere 500 μL di Mix di reazione TUNEL.

Miscelare bene per equilibrare i componenti.

Altre note

Esclusivamente per ricerche di life science. Non usare a scopo diagnostico.