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Nucleosomi
fibra di cromatina di 30nm con nucleosomi compattati sezione di un cromosoma in forma estesa
La cromatina degli eucarioti e organizzata in diversi livelli di ripiegamento che costituiscono diverse strutture: nucleo soma fibra da 30nm ansa di cromatina
cromosoma mitotico RISULTATO: IL DNA E STATO COMPATTATO IN UN CROMOSOMA CHE E 10.000 VOLTE PIU CORTO DELLA SUA LUNGHEZZA ESTESA
Le regioni di cromatina meno condensate prendono il nome di EUCROMATINA e sono trascrizionalmente attive
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cromatina
informazione organizzata
ETEROCROMATINA
I nostri interruttori
Il gene PAX6
: codifica per la sintesi di una proteina o fattore di trascrizione che attiva lo sviluppo degli occhi e di altri organi sensoriali, cos come di alcuni tessuti nervosi ed epidermici
Il gene LFB3 : codifica per la sintesi di una proteina regolatrice coinvolta nella
espressione di diversi geni specifici del fegato .
Amplificazione dei campioni con PCR e elettroforesi mirata a riconoscere la presenza delle zone attive e la loro intensit trascrizionale.
Laboratorio 1
Dissezione di Zebrafish adulto ed estrazione di tessuto nervoso gonadi e tessuto epatico
Trattamento dei tessuti prelevati con formaldeide per legare stabilmente i nucleosomi al DNA
La Metodica FAIRE-seq
Isolamento della cromatina
Sequenziamento High Throughput del DNA purificato dalla frazione acquosa (privo di nucleosomi) Rottura del DNA per sonicazione Estrazione con fenolo-cloroformio
Laboratorio 2
Omogeinizzazione dei tessuti, rottura delle cellule, e rilascio dei nuclei
Laboratorio 3
Trattamento dei tessuti embrionali con metodo FAIRE per lestrazione del DNA trascrizionalmente attivo
Laboratorio 4
Elettroforesi dei campioni amplificati mediante PCR contenenti le sequenze PAX6 e LFB3
Laboratorio 5
Quantizzazione delle bande del DNA Calcolo della media delle misurazioni Elaborazione grafica computerizzata dei risultati
Conclusioni
Nellembrione stata rilevata unattivit trascrizionale del DNA del fegato e del cervello pi blanda allo stadio di 20h e pi intensa a quello di 28h
Nelladulto stata osservata unattivit del DNA ancora maggiore, come prevedibile in uno stadio di sviluppo ormai completo