GENETICA FORENSE

Parcial 2

Las técnicas de extracción empleadas con mayor frecuencia en el análisis forense y antropológico
de ADN son:

Extracción orgánica
Extracción con matrices de sílice
Resinas de adherencia a ácidos nucleicos
Resinas quelantes de iones

El primer paso en la extracción del ADN es el análisis de la muestra, a fin de establecer la técnica
más adecuada de extracción. Para ello se debe considerar en principio, la disgregación y el
aislamiento tisular, el cual depende:

 Tipo de indicio y orgánico

 Sustrato en que se encuentra adherido el indicio

La lisis celular es el siguiente paso en el proceso de extracción, donde Enzimas proteolíticas y

detergentes son los más utilizados.

El procedimiento de extracción diferencial involucra una lisis preferencial sobre las células
epiteliales femeninas por incubación en mezcla de SDS y proteinasa K. Los núcleos de las células
espermáticas son posteriormente lisados por un tratamiento con una mezcla de SDS, proteinase K
y ditiotreitol (DTT).

Durante esta reacción el DTT rompe los puentes disulfuro de las proteínas que constituyen la
membrana nuclear del espermatozoide.

¿Qué debe de tener para favorecer la lisis?

 Incrementa la temperatura para degradar la enzima (50 y 60°)

 Ponerla en agitación para que las muestras se disocien
 Centrifugado

Solución para poder guisar la célula

 Una sal para mantener un pH de 8

 Un detergente (guisar las membrana lipídicas)
 Enzima hidrolítica (Poteinasa Sak- desnaturalizan proteínas)
 El SDS

EXTRACCIÓN PARA LISIS DIFERENCIAL

En este tipo de extracción del DNA generalmente se une al sílice en altas concentraciones de algún
tipo de sal del caotrópica, la cual se elimina durante el lavado y elución

El mecanismo unión de ADN al sílice en alatas concentraciones de la sal no ha sido completamente

descrito, pero pueda involucrar que el agente caotrópico impida que el agua permeabilice el sílice
cargándolo negativamente
FENOL / CLOROFORMO:

La extracción orgánica involucra la suma una variedad de químicos. Primero el duodecil sulfato de
sodio (SDS) y proteinasa K, que se agregan para distender y romper las paredes celulares así como
para degradar proteínas que protegen a las moléculas de ADN mientras estas se encuentran en los
cromosomas

El fenol desnaturaliza las proteínas y componentes celulares, y el cloroformo permite la separación

de fases durante la centrifugación.

Proporciones para un cloroformo

25% de fenol
24%Cloroformo
1% Alcochol isoamílico

EXTRACCIÓN POR CHELEX

Chelex está compuesto de copolimeros de estireno divinilbenceno que contiene iones

iminodiacetato apareados, los cuales actúan como quelantes, agrupando los iones metálicos
polivalentes como el magnesio. El retiro del magnesio en la reacción inhibe a las enzimas
conocidas como nucleasas, de modo que estas se vuelven inactivas y la molécula del ADN es así
protegida.

El papel FTA es un papel absorbente basado en una matriz celulosa que contiene cuatro
substancias químicas que permiten proteger las moléculas de ADN de la degradación de nucleasas
e impidiendo el crecimiento bacteriano. Las células son lisadas al contacto con el papel y ADN de
las células blancas de las sangres es inmovilizando dentro de la matriz del papel. Como resultado,
el ADN en papel FTA se mantiene estable a temperatura ambiente durante un periodo de varios
años.

Fragmentos de tarjetas FTA antes y después de la adición de sangre. En A) se advierte la presencia

de células sanguíneas y B) purificación de la muestra.
Solo después de que el ADN de una muestra ha sido aislado, la cantidad y calidad podrá
determinarse con precisión

Se debe tener claro que no existen técnicas capaces de resolver la extracción en todas las
variedades de indicios biológicos

Las técnicas de mayor rendimiento forman parte de los kit´s comerciales, los cuales son casi
siempre de alto costo económico

Las técnicas son en su mayoría adecuaciones, por ende deben ser evaluadas a fin corroborar su
factibilidad

 Permitan resolver el aislamiento de la mayor variedad de indicios biológicos

 Ofrezcan baja pérdida de ADN y la mejor calidad del mismo
 Estar diseñadas en función de los procesos de cuantificación y amplificación por PCR, de
este último de acuerdo al tipo de marcadores
 De fácil manejo
 Procesamiento rápido y bajo costo

Las dificultades para el desarrollo de nuevas tecnologías de extracción no son diferentes a las
requeridas para otro tipo de investigaciones.

La investigación en México en el área de Genética Forense es pobre, y los recursos con los que se
cuenta son destinados al gasto de tecnología extranjera, misma que puede desarrollarse en el país.

KITS

Ventajas

 Alta sensibilidad
 Evita uso de sustancias toxicas
 De fácil manejo
 Brinda rapidez

Desventajas

 Requiere un mínimo de muestras para cuantificar

 Actividad de kit con vida media baja
 Requiere necesariamente de muestras estándares de ADN
 Impide almacenamiento por largos periodos de tiempo

Áreas exclusivas para el manejo del sistema y equipo

 Adquisición de equipo y material propio para el área de ensayo

 Campana
 Placas de calentamiento o baño seco
 Pipetas multicanales
 Tubos guantes
 Refrigerador para almacenamiento