Il metodo

CRISPR/Cas9
Federica Picchi 1751792
01
IL GENOMA
Il genoma è il patrimonio
genetico di ogni individuo.
È contenuto nel nucleo di
ogni cellula dell’organismo
sottoforma di DNA.
02 L’EDITING DEL GENOMA

Il DNA esogeno differisce da

Si introduce nelle cellule
una sequenza esogena
di DNA
La riparazione del taglio avviene
quello bersaglio solo per
tramite NHEJ o HR
l’alterazione genica
da introdurre o correggere

Questa riconosce la Il «taglio» è effettuato da

sequenza target da nucleasi
modificare ingegnerizzate
(forbici molecolari)
03 CRISPR { Clustered Regularly Interspaced
Short Palindromic Repeats

COSA SONO SCOPERTA FUNZIONE

Sono una famiglia di
segmenti di DNA
contenenti brevi sequenze
ripetute, presenti in batteri
e archei
Furono osservate per la prima La loro funzione è stata
volta nel 1987 in E. Coli compresa dopo la
scoperta di un complesso
di geni a loro associati: i
geni Cas
03 STRUTTURA DEL LOCUS CRISPR

SEQUENZA SPAZIATORI
LEADER RIPETIZIONI (DNA- GENI CAS
SPACERS)
Ricca di basi azotate Alcune palindrome Derivano da patogeni Complesso di geni in
AeT che hanno tentato di grado di codificare per
infettare il batterio in nucleasi ed elicasi
passato
03 FUNZIONE DEI CRISPR

Alcuni spaziatori Il batterio utilizza queste Immunità

presenti nei CRISPR sequenze per riconoscere adattativa dei
derivano da DNA di e distruggere il genoma di procarioti
betteriofagi o DNA virus simili a quelli che
extra-cromosomico hanno originato queste
sequenze
04 FUNZIONAMENTO SISTEMA CRISPR/CAS

Grazie al
Selezione di Acquisizione Trascrizione crRNA, la
sequenze di dello spacer del locus nucleasi Cas
Invasione del
DNA del virus nel locus CRISPR per riconosce il
virus da integrare nel CRISPR del formare un virus e ne
locus CRISPR batterio crRNA degrada gli
acidi nucleici
04 IL SISTEMA CRISPR/CAS9
CAS9
I ricercatori hanno scoperto un sistema
CRISPR molto semplice che utilizza la
proteina Cas9 (un’endonucleasi)
sgRNA (RNA
GUIDA)
Jennifer Doudna e Emmanuelle
Charpentier hanno ri-ingegnerizzato
l'endonucleasi Cas9 in un sistema a due
componenti, basato su un RNA
denominato "single-guide RNA" che,
quando fuso a Cas9, può cercare e
tagliare il DNA-target specificato da
questo
04 IL SISTEMA CRISPR/CAS9
Gli scienziati creano una
sequenza genetica
1 chiamata RNA guida, che
combacia con la porzione
di DNA da modificare

Questa sequenza di RNA

2
guida viene inserita in una
cellula insieme alla proteina
Cas9, che agisce come una
forbice
04 IL SISTEMA CRISPR/CAS9

3 L’RNA guida indica la

sequenza di DNA
“target” e la proteina
Cas9 la taglia

Tramite ricombinazione
omologa, la cellula
autoripara la rottura 4
utilizzando il DNA esogeno,
completando così l'editing
05 VANTAGGI
APPROCCI
TRADIZIONALI CRISPR/Cas9

Richiede solamente di
FACILITÀ DI Occorre ingegnerizzare in identificare la sequenza dove
APPLICAZIONE laboratorio intere proteine tagliare e di fornire la guida di
RNA all’enzima Cas9

Si basano sull’introduzione di Modifica selettivamente e

MAGGIORE precisamente il DNA, senza
DNA estraneo in regioni casuali
EFFICIENZA del genoma→ rischio di inserire altre alterazioni o
comprometterne le funzioni sequenze estranee
06 LIMITAZIONI

Riconoscimento di
Errori nella riparazione
sequenze diverse da del taglio introdotto da Cas9
quella bersaglio

Problema che può essere superato

tramite l’utilizzo di forme di Cas9
modificate, che permettono di
sostituire le singole basi senza
tagliare il DNA
07 UTILIZZO DI CRISPR/CAS9

01
CERCARE
02 03
MIGLIORAMENTO
TERAPIA
NUOVE GENETICO
GENICA
TERAPIE VEGETALE E
Modificando le
Creando nuovi
sequenze di DNA ANIMALE
sistemi cellulari che
mimino alcune “malate”
patologie
08 QUESTIONE ETICA

Semplicità e rapidità
Riflessioni sui rischi NECESSITÀ DI
delle applicazioni CONTROLLI

“Designer babies” Quale tipo di

malattie curare?
Doping genetico Bisogna definire
regole entro le
quali questa
tecnologia possa
muoversi
 CONCLUSIONI
La percezione comune è che CRISPR/Cas9
sia qui per restare.

Non bisogna averne paura ma conoscerla e

regolamentarla diventa un’imperativo per la
nostra società.