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versione#A1 - Prof. A.Tonini www.andytonini.com [PER APPROFONDIMENTI VEDI CORSO DI BIOCHIMICA E FERMENTAZIONI]
1PARTE BIOTECNOLOGIE::
DEFINIZIONE: insieme di tecniche che permettono di produrre beni (sostanze, microrganismi,
...) e servizi (depurazione, analisi,...) mediante limpiego di organismi viventi, loro enzimi e loro
costituenti. In alcune applicazioni vengono utilizzati, anzich i microrganismi, gli enzimi da essi
estratti, in modo da catalizzare la reazione biologica desiderata senza la necessit di mantenere le
condizioni ottimali per le funzioni vitali dei microrganismi viventi stessi.
[in appendice storia delle biotecnologie]
1 CLASSIFICAZIONE e PRODOTTI:
BIOTECNOLOGIE INDUSTRIALI (tradizionali) - produzione di:
BIOMASSA:
produzione di microrganismi usati tal quali, in processi fermentativi diretti (pane vino birra formaggi
yogurt..), per fornire proteine per lalimentazione del bestiame, per produrre ceppi selezionati
geneticamente stabili (privi di altre specie, conservabili, riproducibili), e produrre enzimi.
METABOLITI: produzione di sostanze da parte dei microrganismi:
- metaboliti primari, composti essenziali alla vita dei microrganismi, prodotti durante il normale
processo di crescita, (es.: amminoacidi, nucleotidi, acidi organici, vitamine, proteine alcoli).
- metaboliti secondari, composti non essenziali alla vita microbica, prodotti nella fase stazionaria
quando la crescita microbica terminata (antitumorali, antibiotici, enzimi, insetticidi, ac.citrico, fitormoni, fattori di crescita).
DEPURAZIONE BIOLOGICA e BIOSENSORI:
-processi depurativi utilizzati per le acque di scarico che contengono sostanze organiche biodegradabili. I microrganismi
impiegati sono un insieme eterogeneo di molte specie (batteri, funghi, protozoi mono e pluricellulari); processi di tipo aerobico e
anaerobico. Es.: produzione di fanghi di depurazione e biogas.[vedi depurazione acque parte 4].
-biosensori: particolari trasduttori costituiti da un elemento sensibile biologicamente attivo (enzimi,
cellule, anticorpi ecc.) e da una parte elettronica; principio di funzionamento: l'elemento biologico
interagisce con il substrato da analizzare e un sistema di trasduzione (sensore) converte la risposta
biochimica in un segnale elettrico.[Es.: glucometro per diabetici per analizzare la concentraz. zucchero
nel sangue, secondo la quantit di glucosio trasformata in acido gluconico tramite un enzima].
BIOTECNOLOGIE AVANZATE:
grazie alle tecniche dellingegneria genetica oggi possibile, utilizzando particolari enzimi detti di
restrizione, tagliare il DNA di una cellula in punti particolari per inserirvi nuovi geni che consentano
alla cellula stessa si svolgere determinate funzioni (tecnica del DNA ricombinante). Applicazioni:
produzione di speciali microrganismi per la bioindustria; piante e animali transgenici pi resistenti
alle malattie, allambiente e pi produttivi o in grado di produrre, nel caso degli animali transgenici,
sostanze utili alluomo (insulina vaccini interferone steroidi proteine, enzimi, ecc.).
USI: industria alimentare, farmaceutica, cosmetica, tinture e stampa, depurazione; le principali
biotecnologie impiegano reazioni catalizzate da microrganismi, reazioni che utilizzano enzimi
immobilizzati e fermentazioni, e il settore dellingegneria genetica.
CARATTERISTICHE GENERALI di processi BIO-INDUSTRIALI:
competitivit coi processi dellind. Chimica: reazioni altamente specifiche e prodotti a elevata purezza, buona
concentrazione; reazioni effettuate a bassa T e p, bassa richiesta di energia, basse emissioni;
materie prime provenienti da altre lavorazioni, materie prime e finali con minimo impatto ambientale, scarti riciclabili,
pochi coprodotti,
criticit: necessit di accurati controlli (pH, T, p, quantit O2,...) e ambienti sterili;
SCHEMA GENERALE E FASI DEL PROCESSO:
COLTURA di lab. INOCULO FERMENTATORI SEPARAZIONE PURIFICAZIONE METABOLITA
MATERIE PRIME LAVORAZ.STERILIZZAZ.
BIOMASSA SMALTIMENTO/UTILIZZAZ.
STERILIZZAZIONE:
I processi biotecnologici necessitano di condizioni di assoluta sterilit (99%) per evitare che microrganismi estranei al processo
possano entrare in competizione con quelli principali o, eventualmente, con lattivit degli stessi enzimi, compromettendo il
buon esito del processo produttivo; sterilit non in senso assoluto, ma in senso statistico, ovvero si vuole non tanto lassoluta
assenza di organismi estranei, ma che questi siano ridotti a concentrazioni tali da non svilupparsi e costituire un problema per il
ciclo lavorativo (minori costi).
Questa operazione pu essere effettuata direttamente nel reattore solo nei processi discontinui.
Azione di sterilizzazione: in uno qualunque degli stadi che precedono la fermentazione; nello stadio di preparazione
dellinoculo; nello stadio di preparazione del substrato; durante limmissione dellaria; nella preparazione delle apparecchiature.
METODI:
1 - Sterilizzazione per filtrazione:
usata per la sterilizzazione dellaria (trascinamento di muffe o batteri), nel caso in cui la sterilizzazione termica non pu essere
economica se non per portate molto ridotte. La filtrazione consente di eliminare anche tracce di particolato, umidit, metalli
pesanti, ecc.
Filtrazione: laria passa prima attraverso un prefiltro a porosit 0,45 m, che elimina tutte le particelle che potrebbero
intasare rapidamente la successiva sterilizzazione, poi attraverso un ultrafiltro, con uno strato filtrante p.es. di membrane
filtranti in fluorocarburi con una dimensione media dei pori di 0,2 0,3 m. Sul materiale filtrante si accumulano le particelle ed
i microrganismi, quindi esso deve essere a sua volta sottoposto periodicamente a sterilizzazione con vapore o rimosso
interamente.
2- Sterilizzazione termica:
2.1- sterilizzazione delle apparecchiature prima del ciclo di lavorazione:
-diretta: per iniezione, nel reattore e in tutte le attrezzature impiegate, di vapore a 135C per 3-5 minuti,
-indiretta: con vapore in scambiatori di calore e camicie termiche a 20C per 20 minuti.
Prof. A.Tonini
2.2- sterilizzazione del brodo di fermentazione- si possono utilizzare due tecniche:
a) sterilizzazione tramite iniezione diretta di vapore; il liquido da sterilizzare viene aspirato
tramite un eiettore J1 e mescolato allo stesso vapore di riscaldamento; quindi sulla miscela
liquido/vapore che passa in un serpentino E1 si ha azione sterilizzante per il tempo sufficiente
a ridurre la carica microbica; poi si riduce la pressione tramite una valvola di espansione V1
(con contemporanea parziale vaporizzazione) che raffredda il
brodo prima di utilizzo nel fermentatore.
3 -PROCESSI BIOTECNOLOGICI:
PROC. CONTINUO - DISCONTINUO - vedi diagramma a blocchi
produzione a lotti discontinuo: per produzioni su piccola e
media scala, come il caso di molti prodotti farmaceutici e di
qualunque produzione in cui si realizzano piccole quantit di prodotto
di elevato valore commerciale. I reattori utilizzati nella produzione
discontinua (reattori batch) vengono sterilizzati prima dellavviamento
del processo, che pu avere una durata variabile da uno-due giorni ad
una settimana. In questo modo necessario ripetere frequentemente
loperazione di pulizia e sterilizzazione del reattore, ma cos facendo
sono assicurate, daltra parte, le condizioni di asetticit del processo
per tutto il ciclo di lavorazione.
processo continuo: il ciclo di lavorazione pu durare parecchi
giorni, ma pu essere pi difficile mantenere le condizioni di asetticit
e la stabilit delle colture ed necessario assicurare la sterilit dei
materiali introdotti.
Molto interessante risulta la produzione di gas combustibile a partire da biomasse di scarico (biogas, un gas ricco di metano): la
natura dei materiali di partenza (fanghi di supero degli impianti di depurazione delle acque civili) consente di conseguire un
risparmio energetico notevole, inoltre il biogas pu essere utilizzato per la produzione di altri interessanti prodotti chimici di
base.
N.B.: per i processi aerobici il tasso di consumo di ossigeno : YO2/C = Kg di Ossig. Consumato/ Kg di cellule prodotte, e anche
OUR = (Kg di Ossig. Consumato/h) / Kg di cellule prodotte.
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- ESERCIZI applicativi: - REATTORE CONTINUO CSTR-
ES.1 - Un reattore continuo alimentato con una portata di F = 50 m3/h di substrato in cui la concentrazione del fattore
limitante CSO = 2000 ppm (conc.substr.ingresso). Si determini il volume del reattore e la concentrazione cellulare sapendo
che:
1. concentrazione di regime del fattore limitante CS =1200 ppm;
2. costante di affinit Ks = 400 ppm;
3. velocit specifica massima max = 0,35 h-1 ;
4. resa cellule /substrato YC/S = 0,1.
Soluzione:
CSO = 2000 ppm = 2 kg/m3 = 2 g /dm3
CS = 1200 ppm = 1,2 kg/m3 = 1,2 g /dm3
Ks = 400 ppm = 0,4 kg/m3 = 0,4 g /dm3
Calcolo del Volume Reattore:
Bilancio di materia relativo ai microrganismi (batteri):
dCc/dt x Vol = [max x Cs/(Ks+Cs) x Cc x V] [F x Cc]
accumulo= generazione micr. - portata dei microrg.uscenti ; (Kd trascurabile)
In condizioni stazionarie si considera conc. di microrganismi Cc costante e accumulo nullo.
Si ha semplificando:
0= [max x Cs/(Ks+Cs) x V] F ; da cui possibile calcolare il volume del reattore:
V = F/ max x (Ks + Cs)/ Cs= 50/0,35 x (0,4+1,2)/1,2= 80/0,42 =190,5 m3
Calcolo della concentrazione cellulare - La concentrazione dei microrganismi sar (dal bilancio substrato):
0 = FxCS0 FxCs [max x Cs/(Ks+Cs) x Cc x V x 1/YC/S];
Cc = F x (Cso Cs) x [YC/S x (Ks+Cs)] / [V x max x Cs] =
= 50 (2-1,2)x [0,1 (0,4 +1,2)]/[190,5x0,35x1,2]=6,4/79,8 = 0,08 g/dm3
ES.2 - Un reattore continuo alimentato con una portata di F = 10 m3/h di substrato in cui la
concentrazione del fattore limitante CSO = 150000 ppm (conc.substr.ingresso). Si ha consumo di
substrato = 50%. Si determini il volume del reattore e la concentrazione cellulare sapendo che:
concentrazione di regime del fattore limitante CS =1200 ppm; costante di affinit Ks = 200 ppm;
velocit specifica massima max = 0,51 h-1 ; resa cellule /substrato YC/S = 0,08 kg cell/kg substr.
Soluzione:
CSO = 150000 ppm = 150 kg/m3 = 150 g /dm3
CS = 0,50 Cso = 75 kg/m3 = 75 g /dm3, conc. a regime di fattore limitante;
Ks = 400 ppm = 0,2 kg/m3 = 0,2 g /dm3;
V = F/ max x (Ks + Cs)/ Cs= 10x(0,2+75)/(0,51x75)=19,7 m3;
Cc = Fx(Cso Cs)x[YC/S x(Ks+Cs)]/[Vxmax x Cs] = 10x(150-75)x[0,08x(0,2+75)]/(19,7x0,51x75)= 6 g/dm3.
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ANNOTAZIONI E APPROFONDIMENTI:
N1. Biotecnologie e inquinamento
Per risolvere il problema dellinquinamento le biotecnologie sono utilizzate sia attraverso limpiego di metodi biologici per eseguire
preparazioni e lavorazioni, sia attaccando gli inquinanti dopo la loro formazione.
Il problema sempre pi complesso perch vi un numero sempre maggiore di sostanze che hanno tendenza a non degradarsi, come
idrocarburi, pesticidi, detergenti, ecc. Per questo motivo le varie tecniche biotecnologiche sono rivolte allimpiego di mescolanze di
microrganismi ed enzimi e rispettive sostanze nutritive o alla creazione di supermicrorganismi i quali, contenendo in ciascuna cellula vari tipi
di geni, sono capaci di digerire diversi tipi di sostanze inquinanti. Contro gli inquinamenti da petrolio, anche quelli che causano disastri
ecologici in mare, si impiegano batteri Super pseudomonas putida; contro i metalli in acque di scarico si impiegano batteri Pseudomonas
aeruginosa ed i batteri del genere Thiobacillus. Questi ultimi sono utilizzati per la loro particolarit di non nutrirsi di sostanze organiche, ma
di sostanze minerali, infatti sono abbondantemente presenti nel sottosuolo, soprattutto pi in profondit. Anche la desolforazione dei
combustibili, necessaria contro linquinamento da piogge acide, si pu realizzare con metodi biologici poich vi sono batteri che hanno
grande avidit per i composti dello zolfo, dei quali si nutrono.
N2. Il biogas
La produzione di biogas ha origine remota; la natura ne produce da sempre ma ha impiegato milioni di anni per trasformare, grazie allazione
di microrganismi di vario genere, le cellule morte vegetali e animali in biogas per formare i giacimenti di biogas.
La produzione biologica del metano pu essere effettuata grazie a batteri chiamati metanigeni (che si trovano, tra laltro, nello stomaco dei
bovini); le materie prime impiegate sono piuttosto abbondanti e poco costose: scoli industriali, acque di fogna urbane, liquami, rifiuti
domestici, scarti agricoli e delle industrie alimentari. Un altro metodo sfrutta lazione di alghe, che vengono fatte crescere in appositi maceri
contenenti liquami di fogna e poi raccolte in grandi ammassi per essere digerite dai batteri metanogeni.
Lutilizzazione di biocombustibili (tra cui il biogas e il bioetanolo derivati da sostanze vegetali) consente di limitare leffetto serra; infatti
lanidride carbonica immessa nellatmosfera per combustione di biocombustibili equivale a quella fissata per sintesi clorofilliana dalle nuove
colture, trasformandosi nuovamente in biomasse.
Invece lanidride carbonica prodotta dallutilizzazione di combustibili fossili non si trasforma, in tempi brevi, nuovamente in petrolio o
carbone. [vedi altro documento bioalcool]