Elettroforesi capillare

Elettroforesi delle
proteine plasmatiche
ELETTROFORESI CAPILLARE
 ELETTROFORESI CAPILLARE
• Con il termine CE, è indicata l’elettroforesi
capillare ad alta risoluzione (“High Performance
Capillary Electrophoresis” o HPCE).
• Riduzione del calore internoriduzione delle
dimensioni del sistema elettroforetico.
• Separazione di un’ampia gamma di composti
biologici (come proteine, peptidi, aminoacidi,
acidi nucleici
 ELETTROFORESI CAPILLARE
• È possibile distinguere:
• la “Capillary Zone Electrophoresis” (CZE), basata sulla diversa
mobilità delle particelle cariche in soluzione libera;
• la “Capillary Gel Electrophoresis” (CGE), che effettua la separazione
in base alle dimensioni e alla carica;
• la “Micellar Electrokinetic Chromatography”(MEKC),
• la “Capillary Isoelectric Focusing” (CIEF) e la “Capillary
Isotachophoresis” (CITP).
• tubo (capillare) stretto, di solito realizzato in silice fusa o teflon,
avente diametro interno nel range di 25-75 μm e diametro esterno
di 350-400 μm, rivestito da uno strato protettivo di poliammide che
lo rende resistente ma anche maneggevole.
• La dissipazione termica del calore attraverso le pareti del capillare
può dar luogo a temperature più alte nel centro del capillare
piuttosto che alle pareti
ELETTROFORESI CAPILLARE
ELETTROFORESI CAPILLARE
• Gradienti di temperatura causano differenze locali di viscosità nel buffer e quindi
una migrazione non uniforme.
• E’ conveniente usare capillari con raggio interno piccolo e grande raggio esterno.
• Il grande diametro esterno invece è vantaggioso in quanto consente di ridurre le
proprietà isolanti del poliammide e migliora il trasferimento di calore verso la
periferia del capillare.
• Rimozione del calore all'esterno del capillare, che può essere realizzata con un
sistema di ventilazione opportuno.
• È possibile ottenere alte efficienze di separazione utilizzando campi elettrici
elevati (nel range 100-500 V/cm).
• La situazione ideale consisterebbe nell'applicare un potenziale il più alto possibile,
utilizzando un capillare il più corto possibile.
• Quando la lunghezza del capillare diminuisce, infatti, la quantità di calore che
deve essere dissipata aumenta, a causa della diminuzione della resistenza
elettrica del capillare.
• Scelta di un compromesso fra il potenziale applicato e la lunghezza del capillare.
Comunemente si utilizzano potenziali di circa 10-30 KV e capillari lunghi 25-75 cm
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 Elettroforesi Marcatura Lunghezza Spessore Voltaggio Risoluzione Tempo

su gel radioattiva 100 cm 200 - 600 μm 30 V/cm 500 nt 7 ore

su gel fluorescente 40 cm 100 μm 75 - 85 V/cm 600 nt 1 ora

capillare fluorescente 30 cm 100 μm 150 V/cm 700 nt 1 ora

Applicazioni dell'elettroforesi capillare

Campo biochimico
Campo farmaceutico
Enantiomeri di farmaci chirali