Lezioni Power Point FMC 2007 Protetta

BIOCHIMICA CLINICA
Corso integrato di
Medicina di Laboratorio e Diagnostica per Immagini
Prof.ssa Valeria RUGGIERO

Policlinico Universitario
070 / 5109 6498
328 4774883
ruggiero@pacs.unica.it
Universit degli Studi di Cagliari Facolt di Medicina e Chirurgia
Corso integrato di :
Medicina di Laboratorio e
Diagnostica per Immagini
BIOCHIMICA CLINICA
PATOLOGIA CLINICA
FISICA SANITARIA
RADIOBIOLOGIA
ANATOMIA RADIOLOGICA
Corso Integrato di Medicina di Laboratorio e Diagnostica per Immagini
FINALIT DEL CORSO

Il corso intende fornire :
Le basi per la comprensione ed interpretazione dei

fenomeni biochimici che stanno alla base dei
meccanismi metabolici, sia da un punto di vista
generale che per quanto riguarda le loro eventuali
modifiche indotte da alcune delle patologie piu
comuni
Le conoscenze relative alle principali metodologie
biochimiche applicate alle analisi cliniche
La consapevolezza della potenzialit e dei limiti delle
informazioni fornite dagli esami di laboratorio
La capacit di richiedere correttamente le indagini di
laboratorio
BIOCHIMICA CLINICA
LEZIONI
La frequenza obbligatoria (circa 75% presenze su tutto il CI)
Vanno firmati i fogli delle presenze
La firma di frequenza verr apposta dal Prof. Atzori (Patologia
Clinica) previo accertamento di segreteria
TIROCINI PROFESSIONALIZZANTI
Sono obbligatori e vanno certificati
Senza tale certificazione non si ammessi a sostenere lesame
Iscrizione ad uno dei gruppi entro la penultima lezione
Per ciascun gruppo, nei giorni indicati, appuntamento alle ore 8.30
presso la Reumatologia I Livello 1 Policlinico UNIVERSITARIO
(con il camice)
ESAMI
Iscrizioni on line fino a 2 giorni prima
BIOCHIMICA CLINICA
Testi consigliati
WIDMAN et Al.
Interpretazione clinica degli esami di laboratorio

Ed. McGraw_Hill
FEDERICI et Al.
Medicina di laboratorio
Ed. McGraw_Hill
KELLERMAN G.
Valori anormali di laboratorio

Ed. McGraw_Hill
BIOCHIMICA CLINICA
LEZIONI
Generalit
I LEZIONE
II LEZIONE
Tipologia e modalit di richiesta degli esami di

laboratorio
Tecniche di prelievo, conservazione e trattamento
dei materiali biologici
Fattori interferenti
III LEZIONE
Attendibilit analitica
Specificit e sensibilit cliniche
IV LEZIONE
Spettrofotometria e fluorimetria
V LEZIONE
immunochimica
BIOCHIMICA CLINICA
LEZIONI
VI LEZIONE
Elettroforesi sieroproteine
VII LEZIONE
Elettroforesi sieroproteine
VIII LEZIONE
Diagnosi e monitoraggio diabete mellito
IX LEZIONE
Esame delle urine
X LEZIONE
Esame liquido cerebrospinale (cenni)

Indici di flogosi
BIOCHIMICA CLINICA
Cenni storici
Risale ai primi decenni del 800 lidea che indagini chimiche sui
materiali biologici prelevati dal paziente potessero essere di
grande aiuto per la pratica clinica
Nella met del XIX sec. vennero introdotte alcune
determinazioni ematochimiche ed urinarie usate fino a non
moltissimi anni fa (reaz. Di Trommer e Fehling per la ricerca
del glucosio - proteinuria di Bence Jones)
CHI ESEGUIVA LE ANALISI?
allinizio chimici e farmacisti
poi dalla seconda met dell800 i medici stessi
nei primi decenni del 900,
in seguito allaumentare del
numero di indagini e della loro complessit, lattivit clinica e
quella di laboratorio si iniziano a separare
nasce nel 1941 nellOspedale Niguarda di Milano il primo
laboratorio italiano di Chimica Clinica
BIOCHIMICA CLINICA
Cos la BIOCHIMICA CLINICA
La BIOCHIMICA CLINICA pu essere definita

come una disciplina a carattere prettamente
applicativo
che
utilizza
metodologie
(bio)
chimiche
per
analizzare
materiali
biologici
ottenuti da soggetti umani al fine di ottenere
informazioni utili a scopo clinico, cio diagnostico,
prognostico e terapeutico.
BIOCHIMICA CLINICA
BIOCHIMICA CLINICA DI BASE

Si occupa in maniera generale delle
linee essenziali che portano alla
produzione
di
un
risultato
di
laboratorio, valutando il valore ed i
limiti dellesame stesso
BIOCHIMICA CLINICA SPECIALISTICA

Si
occupa
dei
diversi
analiti
considerati
singolarmente
o
in
gruppi
omogenei,
esaminando
tecniche di misura e la collocazione
in un quadro pi generale
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DI LABORATORIO
procedimento
qualitativo, semiquantitativo o quantitativo
che serve
1) ad evidenziare la presenza o a misurare la quantit, di
un costituente biochimico in un materiale biologico
2) a misurare le propriet di alcuni costituenti biologici
3) a riscontrare cellule o altri elementi
Tutti gli esami di laboratorio hanno in comune :

a) il materiale esaminato
b) le finalit del risultato
BIOCHIMICA CLINICA
FINALITA DELLA RICHIESTA DEGLI ESAMI DI LABORATORIO

SCREENING - Medicina preventiva e sociale
a)
Evidenziare :
Malattie metaboliche e neonatali (genetiche e non)
Malattie latenti
b)
Valutare fattori di rischio
c)
Controllare lo stato di salute
d)
Prevenire il danno iatrogeno
e)
Diagnosticare malattie professionali
DIAGNOSI - Diagnostica iniziale e di approfondimento
MONITORAGGIO
Decorso malattia
Efficacia terapia
BIOCHIMICA CLINICA
DATI CLINICI
(storia clinica, esame obiettivo)
IPOTESI INIZIALI
TESTS DIAGNOSTICI INIZIALI
RIDUZIONE DELLE IPOTESI
TESTS DIAGNOSTICI DI APPROFONDIMENTO
CONFERMA DIAGNOSTICA DELLE IPOTESI

TERAPIA
TESTS DIAGNOSTICI DI MONITORAGGIO
BIOCHIMICA CLINICA
MONITORAGGIO DEI FARMACI

Scopo :
a.
verificare la compliance del paziente nei confronti
della terapia
b.
controllo dei possibili effetti tossici
c.
aggiustamento terapia
E possibile dosare direttamente o indirettamente le
concentrazioni plasmatiche dei farmaci
Diretta
Antiepilettici
Antiaritmici
Antidepressivi
Antibiotici ......
Indiretta
Anticoagulanti
Antiflogistici ......
BIOCHIMICA CLINICA
TIPI DI ESAMI
La maggior parte delle analisi viene eseguita sotto forma di :
ANALISI SINGOLE
servono a fornire risposte ad una domanda precisa
(diagnosi, monitoraggio)
RAGGRUPPAMENTI DI ANALISI
emocromo
esame urine
elettroliti
sieroproteine
PROFILI BIOCHIMICI
metabolici (glucidi, lipidi)
dorgano (funzionalit epatica, pancreatica, gonadica)
funzionali (fegato, tiroide..)
BIOCHIMICA CLINICA
TIPI DI ESAMI
PROVE FUNZIONALI
studiano la perdita o lalterazione della capacit dellorganismo a
reagire a determinati stimoli (es. OGTT)
ESAMI DI SCREENING
ESAMI URGENTI
esami di elevato contenuto diagnostico
riguardanti analiti di possibile rapida modificazione nel tempo
il cui referto indispensabile per trattare pazienti acuti e gravi
affetti da malattie terapeuticamente modificabili
accettato ed eseguito dal laboratorio in qualunque momento

consegna immediata del referto al medico
BIOCHIMICA CLINICA
BIOCHIMICA CLINICA
Oggetto delle indagini :
SANGUE (intero, plasma,siero)
URINA (prima minzione,raccolta 24 ore)
Liquido cerebro-spinale
Liquido amniotico
Liquido sinoviale
Liquido seminale
Feci
Escreato
Calcoli
TUTTI SI DEFINISCONO CAMPIONI
BIOCHIMICA CLINICA
TAPPE DEL PROCESSO ANALITICO
Sono identificabili 4 momenti:

Fase pre-analitica
Fase analitica
Refertazione risultati
Interpretazione risultati
BIOCHIMICA CLINICA
Fase preanalitica : primo requisito per assicurare

lattendibilit di un risultato
lesecuzione corretta del prelievo:
a.
Porre particolare attenzione al paziente, al

procedimento, al volume
b.
Controllare interferenze farmacologiche o dietetiche
c.
Evitare processi di contaminazione (materiale

monouso, norme igieniche)
d.
Utilizzare anticoagulanti appropriati e ben miscelati
e.
Identificare correttamente il paziente e gli esami

richiesti
BIOCHIMICA CLINICA
Fase analitica
a. Esecuzione dellanalisi in tempi brevi (per evitare modificazioni
nella morfologia del materiale o nella costituzione dei suoi
elementi biochimici)
b. Metodi accurati, strumenti precisi, tecnici competenti
c. Registrazione sistematica e precisa dei risultati (gestione
computerizzata degli esami di laboratorio)
Refertazione
Chiara, completa, tempestiva, con unit di misura e valori di
riferimento
Interpretazione
a. Confronto con i valori di riferimento
b. Valutazione variazioni cronobiologiche, alimentari,
farmacologiche, fisiche, psicologiche (stress).
BIOCHIMICA CLINICA
PRELIEVO EMATICO
VENOSO
Vene sottocutanee della fossa antecubitale : mediana, cefalica,
basilica.
Il prelievo va eseguito evitando una stasi prolungata che
provocherebbe una diminuzione del volume plasmatico per
aumento della pressione idrostatica a valle della compressione
CAPILLARE
Adulto: faccia volare delle falangi distali delle dita della mano
Bambino : area periferica tallone
Il prelievo va eseguito evitando una eccessiva spremitura del
punto prescelto per
possibile passaggio
del liquido
interstiziale nel campione di sangue capillare
ARTERIOSO
emogasanalisi (O2/CO2) equilibrio acido/base (pH)
arteria radiale, brachiale, femorale
BIOCHIMICA CLINICA
SANGUE
La scelta dellutilizzazione di sangue venoso intero, del suo
plasma o del suo siero legata alle caratteristiche della
ricerca da eseguire
In genere la maggior parte delle analisi viene eseguita su
siero piuttosto che su plasma, in quanto il siero piu
limpido dal punto di vista ottico
Si utilizza sangue venoso intero per tutti i dosaggi di

sostanze presenti esclusivamente o prevalentemente negli
eritrociti (ad es. Hb, HbA1c, G6PD)
Il plasma presenta meno fenomeni emolitici, richiede meno
tempo per essere separato (basta centrifugare),
essenziale per lesecuzione dei test di coagulazione
BIOCHIMICA CLINICA
Campioni di sangue
SIERO
Prelievo con provetta senza anticoagulanti
30 minuti di tempo per far completare la coagulazione
Centrifugazione e conseguente separazione del supernatante
liquido dal coagulo (fondo)
Aspirazione del supernatante (= SIERO) e suo utilizzo
PLASMA
Prelievo con provetta CON anticoagulanti
Centrifugazione e conseguente separazione del supernatante
liquido dagli elementi corpuscolati (fondo)
Aspirazione del supernatante (= PLASMA) e suo utilizzo
SANGUE VENOSO INTERO

Prelievo con provetta CON anticoagulanti
Accurata miscelazione ed utilizzo di tutto il campione
BIOCHIMICA CLINICA
ANTICOAGULANTI
EPARINA
E un mucopolisaccaride naturalmente presente nel sangue che
esplica la sua azione come cofattore dellantitrombina III
plasmatica, in combinazione con la quale inattiva la trombina
ed il fattore X attivato, bloccando la formazione della trombina
e di conseguenza anche la trasformazione del fibrinogeno in
fibrina
Si trova in commercio come sale di sodio, di potassio, di
ammonio e di litio
CITRATO TRISODICO
Chelante che complessa gli ioni Calcio
Si utilizza per la determinazione della VES
BIOCHIMICA CLINICA
ANTICOAGULANTI
EDTA (acido etilendiaminotetracetico)
Sale bi- o trisodico o bipotassico che chela gli ioni calcio non
rendendoli piu disponibili per consentire la coagulazione
E lanticoagulante di elezione per lemocromocitometria in
quanto conserva inalterati i componenti cellulari del sangue
MISCELE DI ANTICOAGULANTI
ACD : acido citrico, citrato, destrosio
Viene utilizzato per emotrasfusioni,
ricerche immunoematologiche, enzimopatie eritrocitarie
BIOCHIMICA CLINICA
Sistema vacutainer per leffettuazione dei

prelievi ematochimici
BIOCHIMICA CLINICA
FATTORI INTERFERENTI
LA QUALITA DEI RISULTATI ANALITICI DIPENDE ALMENO IN PARTE DA
FATTORI CHE INTERVENGONO NELLA FASE PRE ANALITICA
Fase pre-analitica : prelievo, raccolta , conservazione campioni biologici
FATTORI INTERFERENTI
Biologici
Chimico fisici
Farmacologici
Et
diretti
dirette sulla reaz.
Sesso
indiretti
indirette sulla
funz.metab
Ritmi circadiani
Momenti fisiologicici
Stati psicologicici
Assunzione cibi o
bevande
BIOCHIMICA CLINICA
INTERFERENZA BIOLOGICA
ASSUNZIONE CIBI E BEVANDE (glicemia, lipemia, cristalli nelle urine)
POSTURA
In posizione eretta la distribuzione dei liquidi
fra il settore vascolare e quello interstiziale si modifica
ed il volume plasmatico diminuisce del 10% mentre quello interstiziale aumenta.
Per questo motivo nei pazienti ambulatoriali rispetto a quelli ospedalizzati
si osserva un aumento della concentrazione delle proteine e di tutte le sostanze che
circolano legate alle proteine come il calcio, il colesterolo, la bilirubina
BIOCHIMICA CLINICA
INTERFERENZA BIOLOGICA
ATTIVITA FISICA
Limmobilizzazione completa comporta una

demineralizzazione ossea con aumento nelle
urine di calcio, fosforo e idrossiprolina
Un esercizio fisico di un certo impegno pu

determinare variazioni nei livelli degli enzimi
muscolari
ETA - SESSO
RITMI BIOLOGICI (soprattutto
circadiani)Variazioni ritmiche nel tempo
di alcuni costituenti
BIOCHIMICA CLINICA
INTERFERENZA CHIMICO FISICA

Fisicamente:
Vit.A : sulla reazione per la bilirubina con metodo
diretto
Chimicamente:
es. glucosio o elettroliti endovena e prelievo
contestuale
es. aggiunta di EDTA a un campione su cui si deve
dosare il calcio
es. somministrazione di penicillina che interferisce
ossidando alcuni reattivi
INTERFERENZA FARMACOLOGICA
ad es.
diuretici (riduzione elettroliti),
antidepressivi (aumento prolattina),
allopurinolo (riduzione uricemia)
BIOCHIMICA CLINICA
EMOLISI
Causa pi frequente di interferenza.
Passaggio nel siero o nel plasma dellHb e di tutte le
sostanze contenute allinterno degli eritrociti.
Cause:
Osmotica (o chimica): presenza di acqua o sost. chimiche nelle
provette
Meccanica :
rottura meccanica della membrana

eritrocitaria (prelievo o trasporto)
Fisica :
sbalzi termici eccessivi
Patologica :
(riduzione resistenza eritrocitaria :

sferocitosi, carenze G6PD)
Conseguenze:
Interferenze fisiche nei dosaggi con tecniche colorimetriche
(assorbimento dellHb a 405 nm) o chimiche (inibizione delle
reazioni di diazotazione da parte dellHb - es,. dosaggio
bilirubina)
Passaggio nel siero o plasma di sostanze la cui concentrazione
negli eritrociti superiore a quella nel siero (es. K, LDH,
transaminasi)
BIOCHIMICA CLINICA
Trovare un risultato di laboratorio anormale del

tutto inatteso abbastanza frequente, in modo
particolare con gli attuali approcci di screening e i
monitoraggi dove spesso molti test sono richiesti
contemporaneamente e spesso sotto forma di profili
dorgano o di patologia
Prima di prendere uniniziativa clinica occorre
considerare tutte le possibili ragioni che possono
spiegare la presenza di risultati anormali
Con la pubblicazione delle linee guida proposte
dallInternational Federation of Clinical Chemistry
and Laboratory Medicine, il termine di intervallo
normale stato sostituito da
intervallo di riferimento o range di riferimento
BIOCHIMICA CLINICA
VALORI DI RIFERIMENTO
Lutilizzazione clinica dei test di laboratorio presuppone
il confronto dei valori ottenuti con i cos detti
INTERVALLI (RANGES) o VALORI
DI RIFERIMENTO
Gli intervalli di riferimento sono specifici per ciascun
metodo e per ciascun laboratorio.
NB : alcuni intervalli dipendono da et, sesso, peso,
dieta, attivit fisica
BIOCHIMICA CLINICA
Intervalli di riferimento
Spesso rappresentano i risultati del test nel 95% di
una piccola popolazione presumibilmente sana (=
non affetta dalla patologia che quel test potrebbe
identificare)
di conseguenza:
- il 5% delle persone sane avr un test non
normale
- questi individui non sono necessariemente malati ma sono
semplicemente diversi dalla maggioranza della popolazione
e
- valori che rientrano nei ranges non necessariamente
escludono la malattia.
BIOCHIMICA CLINICA
Ciascuna grandezza di un sistema ha un certo valore - VALORE

VERO - che di solito ignoto
Scopo della misura ottenere un valore VALORE ANALITICO
che rappresenti una stima quanto pi esatta possibile del valore
vero.
ATTENDIBILITA ANALITICA
Indicazione di quanto il valore vero oggetto della misura

concorda con il valore ottenuto dalla misura stessa.
E diretta conseguenza del metodo utilizzato per la misurazione
cio dellinsieme di tecniche, strumentazioni e reattivi utilizzati
BIOCHIMICA CLINICA
ATTENDIBILITA ANALITICA
Perch un metodo risulti attendibile deve possedere le seguenti

caratteristiche :
PRECISIONE
ACCURATEZZA
esecuzione
metodo (esecuzione)
SPECIFICITA
SENSIBILITA
metodo
metodo
BIOCHIMICA CLINICA
PRECISIONE
La PRECISIONE il grado di concordanza tra misure
replicate effettuate sullo stesso paziente.
Rappresenta la misura della riproducibilit del test
quando ripetuto sullo stesso campione.
Numericamente si esprime il suo contrario,
lIMPRECISIONE, che indica quanto le diverse
osservazioni si discostano luna dallaltra, e che viene
espressa come deviazione standard relativa o
coefficiente di variazione (CV)
CV = (DS / media)
x 100
ACCETTABILE UN CV < 3%
BIOCHIMICA CLINICA
Il concetto di precisione implica altre due

definizioni :
RIPETIBILITA : misura della deviazione dei dati
dal valore medio (ottenuta dalloperatore in
ununica serie analitica senza cambiare reattivi o
strumenti)
RIPRODUCIBILITA :misura della deviazione dei
dati dal valore medio (ottenuta in tempi pi
lunghi, da tecnici diversi, con lotti, soluzioni
standard e reagenti diversi)
BIOCHIMICA CLINICA
ACCURATEZZA
Si riferisce in genere ad una serie di risultati ottenuti in
condizioni stabilite :
il grado di concordanza fra la media trovata in una serie di
ripetizioni della stessa analisi sullo stesso campione ed il
valore vero della misurazione stessa.
Anche in questo caso si valuta l INACCURATEZZA che ci dice
quanto si discosta la migliore stima dal valore stesso
PRECISIONE ed ACCURATEZZA sono tra loro dipendenti per cui
un certo metodo pu essere :
Preciso ed accurato
Impreciso ed accurato
Preciso ed inaccurato
Impreciso ed inaccurato.
BIOCHIMICA CLINICA
PRECISIONE ed ACCURATEZZA
sono tra loro dipendenti
per cui un certo metodo pu essere :
Preciso ed accurato
Impreciso ed accurato
Preciso ed inaccurato
Impreciso ed inaccurato.
BIOCHIMICA CLINICA
PRECISIONE ED ACCURATEZZA
BIOCHIMICA CLINICA
La SPECIFICITA intesa come la capacit di un metodo di

misurare solo ed interamente la sostanza ricercata, senza
subire interferenze positive o negative da altro materiale
NON HA UN VALORE NUMERICO
La SENSIBILITA la pi piccola quantit di sostanza che il

metodo riesce a misurare cio a distinguere dallo zero
NON HA UN VALORE NUMERICO
Il LIMITE DI RILEVABILITA la pi piccola quantit di

sostanza che il metodo riesce a dosare.
BIOCHIMICA CLINICA
SPECIFICITA E SENSIBILITA CLINICHE

Si utilizzano per descrivere il comportamento di
un test di laboratorio utilizzato per individuare
una certa patologia.
La SENSIBILITA CLINICA di un test indica
lincidenza di risposte positive che si ottengono
effettuando il test a pazienti affetti dalla malattia
evidenziabile con quel test.
E la positivit in caso di malattia.
SENSIBILITA DEL 100% SIGNIFICA 100 RISPOSTE
POSITIVE IN 100 PAZIENTI AFFETTI DALLA MALATTIA.
BIOCHIMICA CLINICA
SPECIFICITA E SENSIBILITA CLINICHE
La SPECIFICITA CLINICA di un test indica

lincidenza di risposte negative che si ottengono
effettuando il test a soggetti non affetti dalla
malattia evidenziabile con quel test.
E la negativit in condizione di salute
SPECIFICITA
DEL
100%
SIGNIFICA
100
RISPOSTE NEGATIVE IN 100 PERSONE SANE.
BIOCHIMICA CLINICA
La SENSIBILITA CLINICA E la positivit in caso di malattia.

SENSIBILITA DEL 100% SIGNIFICA 100 RISPOSTE POSITIVE IN 100 PAZIENTI AFFETTI
DALLA MALATTIA.
La SPECIFICITA CLINICA E la negativit in condizione di salute
SPECIFICITA DEL 100% SIGNIFICA 100 RISPOSTE NEGATIVE IN 100 PERSONE SANE.
BIOCHIMICA CLINICA
BIOCHIMICA CLINICA
TEST
Sono stati esaminati 80 soggetti, 40 non affetti da alcuna

patologia e 40 affetti dalla patologia in esame
Tutti i soggetti sono stati sottoposti a due test, A e B, entrambi

miranti ad identificare la patologia in oggetto
Sono risultati positivi al test A 25 dei pazienti affetti dalla

patologia e 10 dei soggetti non affetti dalla patologia
Sono risultati positivi al test B 22 dei pazienti affetti dalla

patologia e 20 dei soggetti non affetti dalla patologia
QUALE IL TEST PIU ADATTO PER LO SCREENING DELLA
PATOLOGIA OGGETTO DELLO STUDIO?
BIOCHIMICA CLINICA
TECNICHE ANALITICHE
Nellesecuzione delle analisi di chimica clinica hanno trovato larga
applicazione diverse metodiche strumentali:
FOTOMETRIA e SPETTROFOTOMETRIA
FLUORIMETRIA
CROMATOGRAFIA
ELETTROFORESI
TURBIDIMETRIA e NEFELOMETRIA
MICROSCOPIA
RADIOIMMUNOMETRIA
BIOLOGIA MOLECOLARE
BIOCHIMICA CLINICA
Moltissime reazioni utilizzate in Chimica Clinica vengono valutate

mediante mezzi che misurano le interazioni tra la materia ed unenergia
radiante emessa da una sorgente luminosa.
Le diverse sostanze hanno la possibilit di assorbire radiazioni luminose

(ed questo il motivo per cui appaiono colorate).
Dal punto di vista chimico il colore di una sostanza dipende dalla

presenza in essa di alcuni gruppi chimici, detti cromofori, costituiti da
legami insaturi tipo C=C, N=N,C=O, N=O caratterizzati dalla presenza di
elettroni che richiedono solo una modesta quantit di energia per
eccitarsi.
Quando latomo assorbe energia

energetico (transizione elettronica)
Poich la quantit di energia utile per una transizione elettronica varia

da sostanza a sostanza. Potranno essere assorbite solo le radiazioni la
cui frequenza tale da originare una quantit di energia sufficiente a
provocare una variazione di livello energetico
viene
alterato
il
suo
equilibrio
LO STUDIO DELLE RADIAZIONI ASSORBITE

SPETTRO DI ASSORBIMENTO
PERMETTE DI CARATTERIZZARE ED IDENTIFICARE MOLTISSIMI COMPOSTI
BIOCHIMICA CLINICA
Lassorbimento delle radiazioni da parte delle soluzioni

dipende dal numero e dal tipo di sostanze che in essa sono
disciolte.
La legge che regola tale assorbimento la LEGGE DI
LAMBERT e BEER
D.O. = k * l * c
k = costante caratteristica della sostanza in esame
l = lunghezza cammino ottico
c = concentrazione della sostanza
l * c = numero di molecole che il raggio incontra cio la
CONCENTRAZIONE DELLA SOLUZIONE
BIOCHIMICA CLINICA
Tutte le volte che abbiamo una soluzione in grado di assorbire

radiazioni luminose ne possiamo stabilire la concentrazione
valutando la differenza
I - I = ASSORBANZA
Per motivi strumentali pi pratico calcolare il rapporto
I / I
TRASMITTANZA (T)
la trasmittanza legata alla concentrazione della soluzione

dalla relazione
T = 10
-klc
dato che per la Legge di Lambert e Beer D.O. = klc si avr

DO = -logT
Fra la concentrazione delle soluzioni e la loro densit ottica
esiste una proporzionalit diretta , fra la trasmissione e la
concentrazione esiste una proporzionalit inversa.
Gli strumenti calcolano direttamente il log della percentuale di
trasmissione che viene definito
DENSITA OTTICA DELLA SOLUZIONE
BIOCHIMICA CLINICA

Per lo studio degli spettri di assorbimento si usano gli SPETTROFOTOMETRI
- Permettono misurazioni quantitative dellintensit luminosa in quanto
lelemento fotosensibile non locchio ma un fotomoltiplicatore
- Si utilizzano per misure nellU.V., Visibile ed Infrarosso
- Permettono di selezionare lunghezze donda monocromatiche
Di fondamentale importanza la
costruzione di una curva di taratura
dello strumento per lanalita
ricercato : CURVA STANDARD
D.O.
Si sottopongono ad un procedimento
analitico uguale a quello usato per i
campioni delle soluzioni a titolo noto
ed a concentrazioni scalari
dellanalita in esame (standards)
Si costruisce quindi una curva che
mette a confronto le concentrazioni
degli standard con le D:O: misurate
Si confronta la D.O. dei campioni con
quella della curva standard
BIOCHIMICA CLINICA
Concentrazione
TURBIDIMETRIA e NEFELOMETRIA
ANALISI DEI SISTEMI DISPERSI
Quando un raggio di luce si propaga in un mezzo omogeneo, percorre un
cammino rettilineo
Quando invece attraversa un mezzo contenente una fase dispersa (colloidi o
precipitati) una parte viene assorbita ed una parte diffusa per fenomeni di
riflessione, rifrazione, diffrazione
I due fenomeni coesistono sempre ma il prevalere delluno o dellaltro dipende
da
omogeneit
dimensione
delle particelle disperse
concentrazione
disomogenee, grandi
molto concentrate
omogenee,piccole
poco concentrate
TURBIDIMETRIA
prevale lassorbimento
NEFELOMETRIA
prevale la diffusione
BIOCHIMICA CLINICA
NEFELOMETRIA
Si basa sulla propriet delle
soluzioni disperse fini a
diffondere in tutte le direzioni
un raggio incidente
Si misura la luce diffusa ad una
angolazione diversa da quella
della luce incidente
E una metodica molto precisa,

sensibile ed accurata
Le sue applicazioni sono
sempre piu numerose
soprattutto sotto forma di
reazioni immunochimiche
BIOCHIMICA CLINICA
IMMUNOCHIMICA
COMPRENDE TUTTE QUELLE METODICHE ANALITICHE CHE UTILIZZANO REAZIONI

ANTIGENE-ANTICORPO PER IDENTIFICARE O QUANTIFICARE DETERMINATE SOSTANZE
CHIMICHE
Gli ANTICORPI sono le sostanze prodotte in seguito alla stimolazione da

parte dellantigene.
Tutte le molecole dotate di attivit anticorpale vengono raggruppate sotto
il termine di IMMUNOGLOBULINE
La loro struttura fondamentalmente simile :

4 catene polipeptidiche unite da ponti disolfuro
(catene pesanti e catene leggere)
Si dividono in 5 classi, (IgG, IgA, IgM, IgD, IgE)diverse per PM e
composizione in catene pesanti
BIOCHIMICA CLINICA
IMMUNOCHIMICA
E possibile marcare antigeni o anticorpi con traccianti che ne

rendano possibile il loro dosaggio nei liquidi biologici.
METODI IMMUNOCHIMICI CON TRACCIANTI
RADIOATTIVI
RIA
(Ag*)
IRMA
(Ac*)
NON RADIOATTIVI
ENZIMI (EIA- ELISA)
FLUOROCROMI
SOST. LUMINESCENTI
METALLI
VIRUS
BIOCHIMICA CLINICA
Attualmente i metodi immunoenzimatici sono i piu utilizzati

E possibile fissare un antigene od un anticorpo su una fase
solida (per es. micropozzetti) e semplificare cos la fase di
allontanamento dei composti non legati.
Lattivit del marcatore enzimatico adeso allantigene o
allanticorpo viene per lo piu misurata con metodi
colorimetrici
Gli enzimi vengono fatti reagire con substrati cromogenici
molto stabili che, sottoposti a catalisi enzimatica, si
trasformano in prodotti colorati cio ad alto coefficiente di
assorbimento
molecolare
e
quindi
valutabili
spettrofotometricamente
Si possono marcare :
gli antigeni (EIA : Enzyme Immuno Assay) o
gli anticorpi (IRMA).
La tecnica pi utilizzata prevede un sistema che utilizza un
anticorpo legato covalentemenete ad una matrice insolubile
(ELISA : Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay).
BIOCHIMICA CLINICA
IMMUNOCHIMICA
Fra gli enzimi pi utilizzati ricordiamo :
la perossidasi da rafano,
la fosfatasi alcalina,
la glucosio ossidasi
la glucosio 6 fosfato deidrogenasi
Essi reagiscono con il loro substrato

determinando la formazione di un composto
colorato e quindi rivelabile
spettrofotometricamente.
BIOCHIMICA CLINICA
E.I.A.
Substrato con
antigene coattato
30 Minuti
Incubazione
Siero Diluito
1:80 con PBS
30 Minuti
Incubazione
PEROSSIDASI
Coniugato
BIOCHIMICA CLINICA
E.I.A.
15 Minuti
Incubazione
CROMOGENO
INCOLORE
ACIDO SOLFORICO
(STOP)
BIOCHIMICA CLINICA
ANALISI QUANTITATIVA
A B C D E
1
2
3
4
5
6
7
8
Calibratore 1
Calibratore 2
Calibratore 3
Positivo
Negativo
Campione n1
Campione n2
Campione n3
Piastra
BIOCHIMICA CLINICA
2
20
RU/mL
200
RU/mL
200
20
x
Cut-off
2
D.O.
ANALISI QUALITATIVA
A B C D E
1
2
3
4
5
6
7
8
Cut-off
Positivo
Negativo
Campione n1
Campione n2
Campione n3
Piastra
BIOCHIMICA CLINICA
20
RU/mL
RU/mL
x
20
x
Pos
Cut-off
Neg
BIOCHIMICA CLINICA
IMMUNOCHIMICA
Una singola molecola di antigene contiene diversi
determinanti antigenici detti EPITOPI
La stimolazione antigenica determina la produzione di
anticorpi da parte dei linfociti B, ma ciascuna cellula B
pu formare anticorpi solo contro un epitopo antigenico
ANTICORPI MONOCLONALI
Sono anticorpi specifici per un singolo epitopo, cio
prodotti da una singola linea cellulare B = CLONE
BIOCHIMICA CLINICA
Tali anticorpi sono di un solo tipo in quanto derivanti da

un solo clone di cellule e per le loro caratteristiche di
omogeneit chimico fisica o immunochimica. Possono
venire impiegati al posto degli anticorpi tradizionali per
realizzare tecniche analitiche sensibili , specifiche e,
soprattutto, assolutamente standardizzabili.
Attualmente gli anticorpi monoclonali vengono usati per :
dosaggio di antigeni, ormoni, farmaci
tipizzazione e separazione citologica
tipizzazione tissutale
diagnostica malattie infettive e virali
BIOCHIMICA CLINICA
Nella figura A,B,C,D rappresentano 4 differenti antigeni.

A uguale a B tranne che per le tendine alle finestre e per il
cespuglio(2)
C diverso da A e B per buona parte delle sue caratteristiche
D completamente diverso da B e da C ed ha solo un particolare
(1) in comune con A.
BIOCHIMICA CLINICA
Qual la differenza in termini di specificit di risposta tra gli

anticorpi mono e poli clonali ?
Lanticorpo policlonale anti C riconosce A,B. e C; non riconosce solo D.
Lanticorpo monoclonale anti-(1) distingue A da B e C ma riconosce anche D
Lanticorpo monoclonale anti-(2) riconosce solo A
BIOCHIMICA CLINICA

FLUORIMETRIA
Tecnica che si utilizza per determinare sostanze presenti nei

fluidi biologici in concentrazioni particolarmente basse
Si misura la fluorescenza che determinate sostanze
presentano naturalmente o dopo opportuna reazione chimica
Sono sostanze che contengono sistemi di doppi legami
coniugati, molecole planari rigide e sostituenti chimici tipo
OH. NH2,
-OR, -NHR
La fluorescenza quindi una propriet caratteristica di alcune

sostanze che quando eccitate dcon radiazioni di unopportuna
lunghezza donda sono in grado di riemettere lenergia con una
lunghezza donda maggiore di quella che hanno assorbita
Le migliori sorgenti di eccitazione sono le radiazioni luminose
ad alta energia e pertanto le radiazioni UV si prestano bene
per eccitare la fluorescnza nel campo del visibile
BIOCHIMICA CLINICA

FLUORIMETRIA
Gli elettroni di una molecola non eccitata si trovano normalmente

nel livello a pi basso contenuto energetico (Eo)
Un fotone assorbito dalla molecola provoca la transizione (A) di
un elettrone ad uno dei livelli vibrazionali del 1 stato eccitato
La molecola pu restare allo stato eccitato per un tempo
brevissimo (10-8 sec) ed in questo tempo tende a perdere
lenergia assorbita tornando allo stato fondamentale (D)
Molecole particolari , con struttura grande e piuttosto rigida,
perdono solo una parte dellenergia assorbita (D1 e D2) e
riportano lelettrone al pi basso livello vibrazionale del 1
stato eccitato.
Il successivo assestamento energetico porta alla discesa
dellelettrone fino al livello fondamentale (PROCESSO F) con
conseguente
emissione
di
un
fotone
con
energia
evidentemente minore di quello di eccitazione
BIOCHIMICA CLINICA
Livelli vibrazionali
D1
D2
E1
F
PRIMO STATO
ECCITATO
D (10-8 sec)
Livelli vibrazionali
STATO
FONDAMENTALE
E0
BIOCHIMICA CLINICA

FLUORIMETRIA
Si definisce FLUORESCENZA lemissione di energia che avviene

in un tempo compreso fra 10 -9 e 10 -3 sec. dopo leccitazione
Si definisce FOSFORESCENZA se il tempo supera i 10 -3

secondi
La sensibilit dei metodi fluorimetrici circa 1000 10000
volte superiore a quella dei metodi fotometrici.
I procedimenti applicabili in chimica clinica sono
DI TIPO DIRETTO se la sostanza da dosare naturalmemte
fluorescente (barbiturici, porfirine)
DI TIPO INDIRETTO se la sostanza da dosare diventa
fluorescente in seguito a reazioni con altre sostanze
BIOCHIMICA CLINICA

FLUORIMETRI e SPETTROFLUORIMETRI
Sono strumenti analoghi a fotometri e spettrofotometri ma

costruiti in modo che il fotorivelatore venga colpito solo dalle
rdaiazioni emesse dal campione fluorescente
La SORGENTE LUMINOSA in genere una lampada ai vapori di
mercurio o allo Xenon
Il SISTEMA OTTICO formato da :
filtro primario (eccitazione)
cella di reazione
filtro secondario (sbarramento)
fotorivelatore
BIOCHIMICA CLINICA
30 Minuti
Incubazione
I.F.I
Substrato
Crithidiae l.
Siero Diluito
1:80 con PBS
FITC
BIOCHIMICA CLINICA
30 Minuti
Incubazione
I.F.I.
495 nm
500 nm
FITC
525 nm
10-9/10-3
FILTRO DI ECCITAZIONE
FILTRO DI SBARRAMENTO
BIOCHIMICA CLINICA

PROTEINE
Le proteine plasmatiche sono un insieme molto eterogeneo di composti

diversi
Per la maggior parte vengono sintetizzate nel fegato
eccetto
Ig: plasmacellule,
alcune frazioni del complemento:macrofagi,
alcune Lp:cellule intestinali
Anche il catabolismo avviene principalmente nel fegato
pu avvenire anche a livello renale e gastrointestinale (albumina)
TURNOVER METABOLICO
AUMENTO SINTESI
orm. somatotropo
androgeni
estrogeni
insulina
orm. tiroidei a conc. fisiol.
AUMENTO CATABOLISMO
glucocorticoidi
glucagone
orm. tiroidei ad alte conc.
BIOCHIMICA CLINICA
Funzioni delle proteine

A)
NUTRIZIONALI : fonte di aA
sintesi proteica
scopo energetico
sintesi di lipidi e glucidi (dopo deaminazione)
B)
REGOLAZIONE EQUILIBRIO ACIDO BASE : al pH del sangue (arterioso7.35-7.45

venoso 7.32-7.42) funzionano da sistema tampone (1/5 del potere tampone del
sangue) comportandosi da ac. deboli che si possono combinare con una base per
dare il sale corrispondente
C)
MANTENIMENTO PRESSIONE COLLOIDO OSMOTICA : le proteine non possono

diffondere attraverso la membrana semipermeabile della parete vasale dei
capillari per cui esercitano una pressione colloido osmotica diretta verso
linterno del vaso che tende a richiamare liquidi e bilancia la pressione
idrostatica del plasma che ha direzione opposta.
(responsabile principale : albumina)
D)
TRASPORTO :
veicolano molti composti che altrimenti risulterebbero insolubili nel plasma
(lipidi, ormoni steroidei e tiroidei)
rendono atossiche legandole diverse sostanze
(farmaci, ferro, calcio, rame)
E)
COAGULAZIONE : sono proteine quasi tutte le sostanze interessate

meccanismo a cascata della coagulazione, compreso il fibrinogeno
E)
IMMUNITARIA : anticorpi, componenti del complemento
F)
ENZIMATICA : sono enzimi circa il 4% delle proteine plasmatiche
BIOCHIMICA CLINICA
al
Distribuzione delle proteine negli spazi extravascolari
Le plasmaproteine presenti nel torrente circolatorio

distribuiscono variamente negli spazi extravascolari
si
nel liquido interstiziale,

nel liquido sinoviale
nel liquido cerebrospinale,
nelle cavit sierose
nel liquido intraoculare
comunque in equilibrio con il pool plasmatico.
Il contenuto proteico dei liquidi extravascolari pertanto

variabile ed legato fondamentalmente
alla composizione proteica del plasma,

al peso molecolare delle proteine e al loro volume idrodinamico
al grado di permeabilit della parete capillare.
BIOCHIMICA CLINICA
DOSAGGIO PROTEINE
PROTEINE TOTALI
RIFRATTOMETRO
Ricava la concentrazione delle proteine misurando il cambiamento dellindice di
rifrazione del campione causato dalla presenza in soluzione delle proteine
interferenze : elevati livelli bilirubina, lipidi, emolisi
COLORIMETRIA
Utilizza coloranti che in seguito al legame con le proteine variano la loro
assorbanza (biureto e solfato di rame alcalino con misurazione a 545 nm per la
valutazione delle proteine totali)
PROTEINE SPECIFICHE
TURBIDIMETRO NEFELOMETRO
ELETTROFORESI
IMMUNOENZIMATICA - RADIOIMMUNOLOGIA
BIOCHIMICA CLINICA
v.r. PROTEINE TOTALI
6 8 g/dl
RIDUZIONE P.T.
AUMENTO P.T.
apporto insufficiente
(anche se con riduz. ALB)

epatiti croniche
cirrosi
malattie iperplastiche
dieta neopl. dig. malassorb
Perdita
proteinuria ustioni emorragie
Eccessivo catabolismo
febbre persistente
Difetto sintesi proteica

epatopatie croniche
BIOCHIMICA CLINICA
..ricordiamo che..
le proteine sono molecole dotate di carica
devono la loro carica elettrica alla ionizzazione dei loro gruppi
aminici (+) carbossilici ed imidazolici (-).
a seconda del pH del mezzo in cui si trova disciolta la proteina,
la ionizzazione pu portare ad una prevalenza di cariche
positive o negative oppure ad un equivalenza dei due tipi di
cariche.
il valore di pH che corrisponde a questa condizione si definisce
punto isoelettrico (pI)
le proteine sono quindi sostanze anfotere in quanto possono
dissociare sia in ioni positivi che negativi.
pH > pI
prevalgono cariche negative
pH < pI
prevalgono cariche positive
BIOCHIMICA CLINICA

ELETTROFORESI
Lelettroforesi un metodo di
separazione basato sulla diversa
velocit di migrazione di particelle
elettricamente cariche attraverso
una soluzione sotto linfluenza di un
campo elettrico applicato.
La migrazione legata a diversi

fattori :
*natura del mezzo
*campo elettrico applicato
* massa, dimensioni, carica e forma
delle particelle
MOBILITA ELETTROFORETICA
Tecnica difficilmente applicabile alla

separazione di particelle piccole (che
arriverebbero agli elettrodi in tempi
brevissimi) ma mezzo di separazione
eccellente per le macromolecole, in
particolare proteine.
BIOCHIMICA CLINICA
ELETTROFORESI SIEROPROTEINE
La migrazione viene fatta avvenire su di un supporto solido

per cui possibile, al termine della migrazione, fissare e
colorare le bande proteiche e , mediante luso di un
DENSITOMETRO, calcolare in modo semiquantitativo la
quantit percentuale delle singole frazioni.
I supporti sono di due tipi :
1) quelli che separano le proteine in base alla loro densit di
carica elettrica - rapporto fra dimensioni della molecola e
carica elettrica totale (acetato di cellulosa e gel di agarosio)
2) quelli che separano sia in base alla densit di carica che
alla forma e dimensione delle singole proteine in quanto
formano dei gel porosi in cui il diametro dei pori uguale a
quello delle molecole proteiche per cui si ottiene un setaccio
molecolare che separa anche molecole con uguale densit di
carica ma diverso PM (es. il gel di poliacrilammide)
BIOCHIMICA CLINICA
ANALISI DELLA STRISCIA

Dopo la migrazione, lanalisi della striscia viene effettuata
mediante
un
densitometro,
apparecchio
che
misura
lassorbanza delle varie bande colorate .
Se il densitometro collegato ad un registratore si pu
ottenere il cosidetto tracciato elettroforetico (in ordinata
lassorbanza ed in ascissa la posizione delle bande)
Lelaborazione dei dati relativi a ciascuna area corrispondente
alle singole bande rispetto allarea totale consente di
esprimere i risultati in concentrazioni percentuali.
BIOCHIMICA CLINICA
BIOCHIMICA CLINICA
Acetato di cellulosa
BIOCHIMICA CLINICA
ELETTROFORESI DELLE SIEROPROTEINE

ALBUMINA
BIOCHIMICA CLINICA
Le sieroproteine sottoposte ad elettroforesi su acetato di cellulosa si
dividono in 5 frazioni fondamentali :
ALBUMINA
1
2
GLOBULINE (1 glicoproteina acida - 1 antitripsina)
GLOBULINE (2 macroglobulina aptoglobina)

GLOBULINE (transferrina - lipoproteina - fraz.C3 complemento)
GLOBULINE (immunoglobuline)
BIOCHIMICA CLINICA
BIOCHIMICA CLINICA
ALBUMINA
BIOCHIMICA CLINICA
Albumina
1.
2.
Sintetizzata dal fegato

Un soggetto adulto normale
sintetizza circa 14 gr di
albumina al giorno
Non viene degradata da un
organo specifico
Il 30-40% dellalbumina si
trova nel plasma, la parte
rimanente nei liquidi
interstiziali dei vari tessuti,
nei muscoli e nella cute
Funzioni principali:
Influenza sulla pressione
colloido-osmotica o oncotica
Trasporto di numerose
sostanze
Lalbumina rappresenta la
frazione proteica pi cospicua
(3.6-4.9 g/dl) pari al 60% del
contenuto proteico totale
1.
2.
Aumento dellalbumina:
Disidratazione
Malattie caratterizzate da
diarrea e vomito
Coma diabetico
Morbo di Addison
3.
4.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Diminuzione dellalbumina
Edema
Sindromi nefrosiche (0.5-0.3
g/dl)
Insufficiente apporto proteico
Rallentato o ostacolata sintesi
Eccessivo catabolismo proteico
Gravidanza
Difetto genetico
IPOALBUMINEMIA VERA
albumina < 3.20 g/dl
BIOCHIMICA CLINICA

ALFA1GLICOPROTEINA ACIDA
ALFA1ANTITRIPSINA inibisce la tripsina e altri enz. proteol. proteina fase acuta
ALFA 1
BIOCHIMICA CLINICA
ALFA2 MACROGLOBULINA
APTOGLOBINA
sintetizzata nel fegato
catabolismo Hb
Proteina fase acuta
tra le pi grosse prot.plasm.

inibitore non specifico degli enz.prot.
AUMENTI
Estrogeni
Gravidanza
Sindrome nefr.
Diabete
Epatopat. croniche
DIMINUZIONI
Artrite Reumatoide
Eclampsia
Diminuzioni
epatopatie parenchimali
emolisi intravascolare
ALFA 2
BIOCHIMICA CLINICA
SINDROME NEFROSICA
Diminuzione dellalbumina
Aumento alfa2-macroglobulina
Leggera diminuzione gamma
Albumina 1
BIOCHIMICA CLINICA

BETA GLOBULINE
Transferrina
Compl. C3
lipoproteine
BIOCHIMICA CLINICA
TRANSFERRINA (TRF)
Concentrazione 200-300 mg/dl
Sintetizzata dal fegato e in minor

misura dal sistema RE e da
ghiandole endocrine
Principale proteina plasmatica di

trasporto del ferro
Il ferro rilasciato dal catabolismo
dellemoglobina si lega al TRF e
viene trasportato al reticolo
endoteliale
I dosaggi di TRF sono utili nella

diagnostica differenziale delle
anemie
Aumenti:
gravidanza,
iposideremia,
epatite acuta
Diminuzioni:
flogosi cronica
atransferrinemia congenita
FRAZIONE C3 del COMPLEMENTO
Concentrazione: 80-140 mg/dl
Aumenti (per blocco del

catabolismo)
nella cirrosi biliare primitiva
nella colestasi gravi
Diminuzioni
nel lupus eritematoso
malattie emolitiche autoimmuni
BIOCHIMICA CLINICA
GAMMA GLOBULINE
BIOCHIMICA CLINICA
Gammopatie
BIOCHIMICA CLINICA

GAMMAPATIE
MONOCLONALI
Affezioni
caratterizzate
da
iperproliferazione di un clone di
cellule della linea linfocitaria B
1. Gammopatie monoclonali maligne

a. Discrasie plasmacellulari:
mieloma multiplo e forme
particolari di mieloma (leucemia
plasmacellulare)
b. Sindromi linfoproliferative:
Malattie di Waldenstrom
Malattia delle catene pesanti
Leucemia linfatica cronica e
alcuni linfomi
2. Gammopatie monoclonali di incerto
significato
a. Forme asintomatiche o benigne
b. Forme associate ad affezioni
neoplastiche non linfoidi, a
processi flogistici cronici, a
sarcoma di Kaposi e AIDS, ecc.
POLICLONALI
Epatopatie: cirrosi macronodulare
post-necrotica, cirrosi micronodulare
di Laennec, cirrosi biliare primitiva,
epatite cronica aggressiva
Malattie del collagene: lupus
eritematoso, artrite reumatoide,
sclerodermia, sindrome di Sjorden
Infezioni: tubercolosi, endocardite
batterica subacuta, mononucleosi
infettiva, osteomielite, pielonefrite,
sifilide, toxoplasmosi, istoplasmosi,
malaria;
Altre malattie: fibrosi cistica,
sarcoidosi
BIOCHIMICA CLINICA
Gammopatia monoclonale
Diminuzione albumina
Aumento a BASE STRETTA in regione gamma
Albumina 1
BIOCHIMICA CLINICA
Cirrosi epatica
Diminuzione dellalbumina (sintesi)
Aumento gamma globuline (gammopatia policlonale)
fusione -
Albumina 1
BIOCHIMICA CLINICA
RAPPORTO ALBUMINA/GLOBULINE
A/G 1.2 1.7
Se inferiore a 1 = rapporto invertito
RIDUZIONE RAPPORTO A/G
1.DIMINUZIONE ALB
2.AUMENTO GLOBULINE
(vedi riduzione P.T.)
malattie flogistiche o
degenerative
3.ENTRAMBE
LE CAUSE
F.ATTIVA
F.CRONICA
aumento
FRAZIONI
FRAZIONI
RAPIDE
LENTE
1 2
BIOCHIMICA CLINICA
Anomalie del tracciato dovute ad artefatti
Emolisi:
nei campioni modestamente emolizzati lemoglobina viene legata
dallaptoglobina con la formazione di un complesso Hb-Hp dotato di
minore mobilit elettroforetica rispetto allaptoglobina
nei campioni vistosamente emolizzati lemoglobina, presente in eccesso
rispetto alla capacit di legare dellHp, migra allelettroforesi nella zona
inter 2-1, sovrapponendosi in parte alla transferrina
Invecchiamento:
interessa soprattutto le -globuline e pu portare allattenuazione o alla
completa scomparsa della banda 2
BIOCHIMICA CLINICA
REGOLAZIONE GLICEMIA
Nei soggetti normali il mantenimento di livelli di glucosio entro
un range di valori ben definito deriva dal mantenimento di un
equilibrio dinamico fra
a) Assunzione e neoformazione di glucosio
b) Consumo di glucosio
Sintesi di glicogeno
Insulina
Assorb. Intest.
Glicogenolisi
Gluconeogenesi
GLUCOSIO
Glicolisi
Adrenalina Glucagone
Tiroxina Cortic.Glucoatt
Glicogenolisi
Gluconeogenesi
BIOCHIMICA CLINICA
DOSAGGIO GLUCOSIO
I livelli di glucosio nel sangue sono la risultante dei
processi metabolici a carico dei carboidrati
(glicogenogenesi glicogenolisi glicolisi..)
Variazioni di glucosio nel sangue sono espressione di
alterazioni nel metabolismo glucidico:
IPOGLICEMIA
GLICEMIA NORMALE
70 110 mg/dl
BIOCHIMICA CLINICA
IPERGLICEMIA
DOSAGGIO GLUCOSIO
La determinazione viene eseguita su plasma o su siero.

Se la determinazione non viene eseguita subito
necessario bloccare la glicolisi (NB : le cellule del sangue
consumano ogni ora circa il 7% del glucosio presente)
Si pu utilizzare come anticoagulante il floruro di sodio
METODI
A. Tradizionali si basavano sul potere riducente del
glucosio
B. Colorimetrici (condensazione del glucosio con amine
aromatiche e formazione di composti colorati)
C. Enzimatici
BIOCHIMICA CLINICA
METODI ENZIMATICI DOSAGGIO GLUCOSIO

A. GLUCOSIO OSSIDASI
Glucosio + O2 + H2O
H2O2 + o-Dianisidina
GIALLA
GOD
POD
ac gluconico + H2O2
o-dianisidina
INCOLORE
Interferenze : sost. riducenti come ac. ascorbico, bilirubina,

alcuni antibiotici
BIOCHIMICA CLINICA
METODI ENZIMATICI DOSAGGIO GLUCOSIO

A. ESOCHINASI
Esochinasi
Glucosio + ATP
Glucosio6P +
NADP+
Glucosio6P + ADP
G6PDH
6P Gluconato + NADPH + H+
Non assorbe
Assorbe
BIOCHIMICA CLINICA
AUTOCONTROLLO GLICEMIA
Esistono diversi sistemi per lautocontrollo domiciliare
della glicemia
In genere utilizzano sistemi potenziometrici che
sfruttano reazioni di riduzione e successiva
ossidazione di ioni ferricianuro ad opera del glucosio
con produzione di elettroni e quindi di una corrente
elettrica che viene misurata
BIOCHIMICA CLINICA
CURVA DA CARICO ORALE DI GLUCOSIO

OGTT
oral glucose tollerance test
Basale (a digiuno) ..prelievo

CARICO = 75 g glucosio in 200-250 acqua
30 min..prelievo
60 min..prelievo
90 min..prelievo
120 min..prelievo
BIOCHIMICA CLINICA
CRITERI DIAGNOSTICI DIABETE

SINTOMI
+
GLICEMIA A DIGIUNO (mg/dl)
<110 NORMALE
>126
DIABETE
confermare dopo un paio di giorni
nello stesso laboratorio
senza dire nulla al paziente di modo che non metta in atto strategie alimentari
111 e 125.9
ALTERATA GLICEMIA A DIGIUNO (IFG)

OGTT + : DIABETE
OGTT - : ripetere ogni anno
GLICEMIA OCCASIONALE >200 DIABETE
Valore a 120
BIOCHIMICA CLINICA
<140
NORMALE
140 199
IGT
> 200
DIABETE
CRITERI DIAGNOSTICI
Si possono quindi definire 4 stati :
1.
2.
3.
4.
Normale
Alterata glicemia a digiuno (IFG)
Ridotta tolleranza al glucosio (IGT)
Diabete
UNA DIAGNOSI DI IFG O DI IGT NON INDICA NECESSARIAMENTE
UNA PROGRESSIONE A DIABETE (dal 2 al 12% dei soggetti con
IGT sviluppa il diabete)
BIOCHIMICA CLINICA
RACCOMANDAZIONI PER LESECUZIONE DELLA OGTTT

(NON IN GRAVIDANZA)
INDICAZIONI
SOGGETTI CON GLICEMIA A DIGIUNO TRA 110 E 125 MG/DL

SOGGETTI CON GLICEMIA TRA 100 E 109 MG/DL SOLO SE
AL DI SOPRA DEI 45 ANNI
IN PRESENZA DI FAMILIARITA PER DIABETE TIPO II
BMI>25 kg/m2
CONTROINDICAZIONI - il test NON va eseguito in
SOGGETTI CON DOCUMENTATA PREGRESSA DIAGNOSI DI DIABETE

IN CORSO DI PATOLOGIE ACUTE, INFEZIONI RECENTI, CONVALESCENZA PER
INTERVENTI CHIRURGICI
BIOCHIMICA CLINICA

(NON IN GRAVIDANZA)
IL TEST VA EFFETTUATO A DIGIUNO
NEI 3 GIORNI PRECEDENTI IL TEST E BENE CHE
IL TEST VA RIMANDATO
LALIMENTAZIONE NON SUBISCA RESTRIZIONI

SIA MANTENUTA LA CONSUETA ATTIVITA FISICA
NEL CORSO DI PATOLOGIE ACUTE,

NEL PERIODO DI CONVALESCENZA DOPO INTERVENTI CHIRURGICI,
DOPO LUTILIZZO TEMPORANEO DI FARMACI CHE POSSONO INTERFERIRE
ANTIARITMICI
ANTIBIOTICI,
ANTICONVULSIVANTI,
ANTIDEPRESSIVI
ANTIINFIAMMATORI NON STEROIDEI
ANTISTAMINICI
ANTIVIRALI
BETABLOCCANTI
GLICOCORTICOIDI
BIOCHIMICA CLINICA
EFFETTI SULLINSULINORESISTENZA DI FARMACI CHE INTERFERISCONO CON LA

TOLLERANZA GLUCIDICA (ESCLUSI GLI IPOGLICEMIZZANTI)
ANTIARITMICI (amiodarone,chinidina, disopramide)

ANTIDEPRESSIVI (clozapina, fluoxetina, litio)
DIURETICI (spironolattone)
VITAMINE (biotina, niacina, piridossina, vit E)
ANTIBIOTICI (ciprofloxacina, levofloxacina,nitrofurantoina..)

ANTICONVULSIVANTI (carbamazepina, fenitoina)
FANS (acido acetilsalicilico, paracetamolo)
ANTIVIRALI (indinavir, stavutidina..)
BETABLOCCANTI (acebutololo, celiprololo..)
CALCIOANTAGONISTI (ditiazem, nifepidina..)
DIURETICI TIAZIDICI (ciclopentiazide, idroclorotiazide, metazolone..)
GLICOCORTICOIDI (betametasone,metilprednisolone..)
NEUROLETTICI (clorpromazina)
ORMONI TIROIDEI (calcitonina, tiroxina)
STUPEFACENTI (cocaina, morfina)
ANTISTAMINICI (difenidramina, idrossizina)

BIOCHIMICA CLINICA

(NON IN GRAVIDANZA)
MODALITA DI ATTESA DOPO IL CARICO
SOGGETTO A RIPOSO
SENZA MANGIARE E FUMARE
A TEMPERATURA COSTANTE
SENZA BERE PER ALMENO 15 MINUTI DALLASSUNZIONE DEL CARICO E DOPO SOLO
ACQUA A T AMBIENTE
TEST DA RIPETERE SE SI MANIFESTA VOMITO
BIOCHIMICA CLINICA
NB
Sebbene sia attualmente il miglior test disponibile, lOGTT un

test relativamente impreciso poich ai possibili errori analitici si
aggiunge la variazione biologica allingestione del glucosio.
Per es. un inopportuna diminuzione dellassunzione di carboidrati
nei giorni precedenti il test pu portare ad una alterazione della
tolleranza al glucosio
Uno stato di forte stress o la presenza di una malattia possono
provocare moderati aumenti della glicemia che non devono essere
considerati diagnostici di diabete fino a quando il test non viene
ripetuto in condizioni pi normali.
BIOCHIMICA CLINICA
Esempi di richieste INUTILI di OGTT

1. Pazienti che si presentano per la prima volta con
sintomi di iperglicemia o glicosuria (in genere
bambini)
1. In questo caso si deve effettuare una glicemia a digiuno o
casuale, non lOGTT che potrebbe ritardare la terapia
2. Per monitorizzare o scegliere una terapia
3. In un periodo di stress , o in concomitanza con altre

malattie, o in corso di terapie (per es con
corticosteroidi) che possono far aumentare i livelli di
glucosio nel sangue
BIOCHIMICA CLINICA
TEST PER IL DIABETE GESTAZIONALE

Anche in gravidanza : <126 mg/dl a digiuno e >200 mg/dl random
minicarico : OGCT (oral glucose challenge test)da 50 g

glucosio e determinazioni a digiuno e dopo 1 ora
Test positivo per valori a 1 ora > 140 mg/dl da
confermare con OGTT da 75g
CONFERMATA LA NON NECESSARIETA DEL DIGIUNO

(riduzione cut off proposta a 130 mg/dl per aumentare la sensibilit)
MA SI PREFEISCE ATTENERSI AL DIGIUNO
OGTT da 75 g in qualunque momento della

gravidanza
ove ci sia il sospetto diagnostico
Ripetizione OGTT da 75 se la prima normale, alla 2628 sett
BIOCHIMICA CLINICA
DIABETE GESTAZIONALE
1. SCREENING alle donne in gravidanza in presenza di
fattori di rischio quali:
1.
2.
3.
4.
Et >30
Obesit
Familiarit
Precedenti di diabete gestazionale
2. FOLLOW UP con una OGTT a 75g

1. 6-8 settimane dopo il parto
2. Ogni 1-2 anni durante let fertile
BIOCHIMICA CLINICA
MONITORAGGIO DIABETE
GLICEMIA A DIGIUNO
GLICEMIA 2 ORE DOPO IL PASTO
EMOGLOBINA GLICOSILATA - HbA1C
v.r. < 7%
(si sta valutando di portarlo a 6.5%)
per controllare landamento della malattia negli ultimi 3 mesi (emivita globulo
rosso)
per controllare la compliance del paziente
MICROALBUMINURIA
Nel DIABETE TIPO I serve a prevenire il danno renale
Nel DIABETE TIPO II serve a prevenire il danno cardiovascolare
FRUTTOSAMMINA (ALBUMINA GLICOSILATA) per controllare landamento
della malattia nelle ultime 3 settimane (emivita albumina)
In Sardegna (alta incidenza di talassemici politrasfusi) si pu utilizzare al
posto dellHb glicosilata
BIOCHIMICA CLINICA
BAS
30
60
90
120
106
187
212
216
176
102
168
185
180
130
87
182
200
208
163
114
206
267
288
244
56
90
130
138
128
90
228
258
210
131
113
166
213
276
274
110
132
168
165
147
BIOCHIMICA CLINICA
BAS
30
60
90
120
IGT
106
187
212
216
176
102
168
185
180
130
IGT
87
182
200
208
163
DM
114
206
267
288
244
56
90
130
138
128
90
228
258
210
131
DM
113
166
213
276
274
IGT
110
132
168
165
147
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

CAMPIONE
Prime urine del mattino
il pz. urina la notte prima di andare a

dormire e butta queste urine
immediatamente dopo il risveglio

raccoglie il campione, eliminando il
primo mitto
queste
urine,
essendo
state
trattenute in vescica per circa 8 ore,
sono le pi concentrate ed anche le
pi acide, pertanto gli elementi
corpuscolati sono pi stabili
Urine 24 ore
il pz. urina appena sveglio e butta

queste urine
Raccoglie dalle urine successive e per

tutta la giornata fino alla prima urina
del mattino successivo conservando
il contenitore in frigorifero
Annotare volume
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE
NORME GENERALI
Paziente
Accurata igiene genitali esterni
Contenitori
puliti, asciutti, sterili
con etichette sul contenitore e non
sul coperchio
eventuale aggiunta di conservanti
(urine 24 ore)
Campioni
refrigerazione fino allesecuzione
dellanalisi
ERRATA CONSERVAZIONE
CRESCITA BATTERICA
Alcalinizzazione del pH in seguito alla
degradazione dellurea da parte dei batteri
con formazione di ammoniaca
Aumento dei nitriti per riduzione batterica
dei nitrati
Aumento di torbidit con precipitazione di
materiale amorfo
Lisi di cellule e cilindri in ambiente alcalino
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Urobilinogeno
Pigmenti biliari
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
GIALLO PAGLIERINO
urina normale
MARRONE
bilirubina farmaci
ROSSO LIMPIDO
emoglobina farmaci
ROSSO TORBIDO
sangue
INCOLORE
glomerulonefr. cr
diabete
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
LIMPIDE
proteine
TORBIDE
cellule
batteri
cristalli
LATTESCENTI
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
piuria
cellule vaginali
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
<500
oliguria
Peso specifico
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
Nelle 24 ore 1200-1500 ml

>2000
poliuria
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Quantificano la concentrazioe di soluti nelle urine
PESO SPECIFICO
(rapporto)
1.010 -1.030
Osmolarit
mosmoli/Kg H2O
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
rapporto fra la massa di una

soluzione e una massa di un
ugual volume di acqua pura
OSMOLARITA
numero di particelle sciolte in

soluzione
850-1400 mosmoli/Kg H2O
Losmolarit corrisponde bene al PS in stati non

patologici
Nelle nefropatie la correlazione meno affidabile
perch le sostanze ad alto PM (es proteine)
contribuiscono pi al valore del Peso Specifico che
dellosmolarit
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Osmolarit
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
v.r. 5- 8
(ricca di carne
alimentazione
(in genere 5-6)
vegetariana)
Come sottoprodotti del metabolismo vengono prodotti

diversi acidi (cloridrico,solforico, fosforico, lattico,
carbonico)
Vengono escreti dal rene insieme a cationi (Na)
Le cellule tubulari riassorbono il Na e lo scambiano con lH
per cui lurina diventa acida
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Osmolarit
Esame chimico
pH
Glucosio
glicemia >180 mg/dl

GLICOSURIA
glicemia normale
v.n. assente
< 15 mg/dl
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
diminuzione soglia
renale
tubulopatie (mancato
riassorbimento glu)
falsi positivi
candeggianti, perossidi (microbi)
falsi negativi
sost riducenti (ac. ascorbico) tempi

prolungati (consumo di glucosio ad
opera degli el. cellulari)
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Osmolarit
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
v.n. assenti
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
Esame microscopico
Metabolismo lipidi incompleto

Chetonemia
Chetonuria acetone
- ac. acetacetico - ac. idrossibutirrico
DIABETE MELLITO NON COMPENSATO

DIETE (ipocaloriche, ipoglucidiche)
STATI TOSSICI
FEBBRE (bambini)
VOMITO (bambini)
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
PROTEINURIA
Funzionale (lieve)
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Osmolarit
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
vn: tracce <10 mg/dl
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
Esame microscopico
Dopo intenso esercizio fisico
Disidratazione
Febbre
ORTOSTATISMO
1 test : al mattino NEG

2 test dopo 2 ore camm POS)
Da rigurgito
Proteine aumentate a livello ematico (Hb, Miogl, Ig) vengono
filtrate dai glomeruli e passano nelle urine
Glomerulare
Selettiva : si perdono proteine a basso PM (ALB, TRANSF)
Non selettiva : si perdono tutte le frazioni proteiche
Monoclonale : con lelettroforesi si evidenzia una banda stretta
fra e (proteina di Bence Jones- cat. leggere Ig- mieloma)
Tubulare
Si perdono proteine a basso PM (alfa1 e beta2 microglobuline)
MICROALBUMINURIA :albumina a concentrazioni

comprese fra 2 e 20 mg/dl monitoraggio diabete
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
EMATURIA = EMAZIE INTEGRE NELLE URINE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Osmolarit
Cause
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
vn:tracce
Pigmenti biliari
Nitriti
renali
pelvi/uret
vescicali
uretrali
extra renali
glomerulonefriti
calcolosi
neoplasie
uretriti
affezioni
prost
TBC
neoplasie
calcolosi
calc.incun
K colon
retto
neoplasie
stenosi
cistiti
calcolosi
pieliti
TBC
infezioni acute
traumi
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
emopatie
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE Emoglobina
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Osmolarit
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
Esame microscopico
Bilirubina B.INDIRETTA
+ Albumina
Valori aumentati :
CALCOLOSI BILIARE
K TESTA PANCREAS
EPATITI
IPERBILIRUBINEMIA CONGENITA
SRE
FEGATO
Distacco dallalbumina
CONIUGAZ con AC.GLUCURONICO B.DIRETTA
95%
Circolo
enteroepatico
INT. TENUE
Urobilinogeno
DIABETE MELLITO NON CO
5%
vn:<1 mg/dl
SANGUE
URINE
BIOCHIMICA CLINICA
BILE
URINE
Tracce
DIETE (ipocaloriche, ipoglu

STATI TOSSICI
FEBBRE (bambini)
VOMITO (bambini)
FECI
80%
ESAME DELLE URINE

LESAME COMPRENDE
Esame fisico
Colore
Trasparenza
Volume
Peso specifico
Osmolarit
Esame chimico
pH
Glucosio
Corpi chetonici
Proteine
Emoglobina
Pigmenti biliari
Nitriti
MEZZO INDIRETTO PER EVIDENZIARE

INFEZIONI URINARIE
Normalmente nelle urine sono presenti nitrati
di provenienza alimentare.
Alcuni batteri gram-negativi in possesso di
reduttasi specifiche, riducono i nitrati a nitriti
se:
lurina rimane in vescica per almeno 4 ore
nella dieta sono presenti quantit adeguate
di nitrati
Esame microscopico
BIOCHIMICA CLINICA
ESAME DELLE URINE : esame microscopico

Campione di urine:
biopsia tissutale liquida delle vie urinarie

ottenuta in maniera indolore
(Mahon 1990, Manfredini 1995)
TEST :
Prima minzione del mattino
Esame entro le 2 ore (altrimenti refrigerazione)
Letto al microscopio con in mano il referto delles.
chimico
Centrifugazione per 5 (circa 12 ml)
Vetrini con camere a volume determinato
esame di 20 campi micr (40X) : n medio
RARI IN MODICO N NUMEROSI TAPPETO
(+)
(++)
(+++)
(++++)
senza colorazione/contrasto fase:

cilindri, cristalli, muco
con colorazione sopravitale : el. cellulari
luce polarizzata : cristalli
BIOCHIMICA CLINICA

ELEMENTI FIGURATI
globuli rossi
globuli bianchi
in ammassi : proc. infiamm. acuto
cellule epiteliali :
basse vie urinarie (larghe, a forma di foglia)

alte vie urinarie (piccole, nucleo centrale)
cilindri
ialini (pi frequenti)
epiteliali
granulosi
ematici
microorganismi
1
2
flora batterica
parassiti
Muco
spermatozoi
BIOCHIMICA CLINICA

ELEMENTI FIGURATI
globuli rossi
globuli bianchi
cellule epiteliali:
cilindri
epiteliali
granulosi
ematici
microorganismi
flora batterica
parassiti
Muco
spermatozoi
BIOCHIMICA CLINICA

ELEMENTI FIGURATI
globuli rossi
globuli bianchi
cellule epiteliali :
cilindri
epiteliali
granulosi
ematici
microorganismi
flora batterica
parassiti
muco
BIOCHIMICA CLINICA
ELEMENTI NON FIGURATI

Sali
amorfi
URINE ACIDE : urati (precipitato bianco)

URINE ALCALINE : fosfati (precipitato rosa)
carbonati
cristallini
URINE ACIDE : acido urico
URINE ALCALINE : fosfati
ossalati
Calcoli
sali di calcio
Fosfati tripli
acido urico
cistina
Fosfati amorfi
fosfato ammonio magnesiaco
ossalati
BIOCHIMICA CLINICA
LIQUIDO CEFALORACHIDIANO
Si definisce LIQUOR il liquido che riempie tutti gli spazi lasciati liberi
dallencefalo e dal midollo spinale allinterno della dura madre.
VOLUME : adulto 160 ml, neonato 40 60 ml
ASPETTO : incolore e limpido ad acqua di rocca, sterile
PRELIEVO (puntura lombare) :
Spazio intervertebrale fra la IV e la V vertebra lombare
(RARO) spazio fra latlante e losso occipitale
Posizione del paziente :

Seduto con il busto flesso in avanti (pressione liquorale pi alta)
Decubito laterale con testa flessa sul torace ed arti inferiori flessi
sulladdome
BIOCHIMICA CLINICA
LIQUIDO CEFALORACHIDIANO
CONTAMINAZIONI
(FREQUENTE)
sangue
derivante
da
lesioni
di
vasi
sanguigni
nellattraversamento di cute, sottocute, fascia muscolare e dura madre
->Far defluire il liquido in diverse provette graduate ed opportunamente
numerate. In questo modo :
Si pu capire se il sangue deriva da lesioni accidentali duante il
prelievo o da emorragia subaracnoidea
Si pu distribuire il campione in pi contenitori da mandare ognuno ad
un settore del laboratorio
ANALISI : entro un ora, conservazione campione a t ambiente
INDAGINI BIOCHIMICHE PIU COMUNI :
Glucosio :(glicorrachia) Si valuta lipoglicorrachia : meningiti, ipoglicemie
Proteine :(protidorrachia) (proteine totali, albumina, Ig)
INDAGINI NON BIOCHIMICHE
Aspetto macroscopico
Conta cellulare e differenziale
Identificazione microrganismi
BIOCHIMICA CLINICA
INDICI di FLOGOSI
La FLOGOSI (infiammazione) una fisiologica reazione di
difesa dellorganismo nei confronti di alcuni agenti lesivi:
Traumatici
Microbici
termici
Immunitari
tumorali
che serve a ripristinare lintegrit anatomica e funzionale della
parte colpita
Per restare fisiologica la reazione deve essere proporzionata
allevento lesivo :
se linfiammazione insufficiente lagente nocivo provoca un
danno tissutale
se linfiammazione eccessiva per intensit e durata provoca
una
MALATTIA INFIAMMATORIA
BIOCHIMICA CLINICA
INDICI di FLOGOSI
Levoluzione del processo infiammatorio pu essere
sintetizzata in alcune fasi :
vasodilatazione del microcircolo
con aumento permeabilit vascolare
essudazione di liquidi e proteine plasmatiche
migrazione leucocitaria nel sito dellinfiammazione
restitutio ad integrum
oppure cronicizzazione dello stato flogistico

In genere la reazione infiammatoria si limita ad espressioni
locali, ma talvolta pu provocare ripercussioni sistemiche
che vengono indicate come
FASE ACUTA
Durante tale fase si ha aumento della produzione di un
gruppo di proteine definite PROTEINE DELLA FASE ACUTA
BIOCHIMICA CLINICA
PRINCIPALI INDICI di FLOGOSI

ESAME EMOCROMOCITOMETRICO
leucocitosi
piastrinosi
anemia
VELOCITA DI ERITROSEDIMENTAZIONE (VES)
PROTEINE FASE ACUTA

ipercupremia
ipozinchemia
iposideremia
OLIGOELEMENTI
BIOCHIMICA CLINICA
Velocit di eritrosedimentazione VES

ESR (erythrocyte sedimentation rate)
Il test determina la velocit a cui gli eritrociti sedimentano
quando il sangue, reso incoagulabile, viene posto in una pipetta
di piccolo calibro in posizione verticale
Fenomeno riconducibile allinterazione di forze fisiche diverse:

Tendenza dei GR ad aggregarsi (rouleaux = ammassi di GR
legati non da legami anticorpali o covalenti ma
semplicemente dallattrazione superficiale) e quindi a
sedimentare
NB : la capacit di aggregazione dei GR influenzata dalla
presenza di elevate concentrazioni di macromolecole
(globuline, fibrinogeno) che riducono le forze repulsive che
tengono lontani i GR per cui aumenta la loro tendenza ad
aggregarsi
Capacit del plasma di mantenere in sospensione i GR
stessi (la viscosit del plasma) :
BIOCHIMICA CLINICA
Velocit di eritrosedimentazione VES

ESR (erythrocyte sedimentation rate)
IN CONDIZIONI NORMALI la risultante fra forze di coesione e

repulsione rende scarsa laggregazione delle emazie
IN CONDIZIONI PATOLOGICHE le alterazioni a livello

plasmatico (aumento di fibrinogeno e delle altre proteine
asimmetriche come Ig CER HPT) determinano un attenuarsi
delle cariche negative delle emazie che tendono cos ad
aggregarsi
BIOCHIMICA CLINICA
ves
u d m : mm/h
v.r. < 15 mm alla prima ora
Tecnica di Westergreen :
Pipetta graduata lunga 200 mm
Sangue reso incoagulabile per diluizione con citrato di sodio
Si misura la distanza fra il livello iniziale del sangue e la parte

superiore della colonna di eritrociti sedimentati dopo 1 ora.
ALTERAZIONI DELLA VES

Problemi tecnici :
Alterato rapporto volumetrico fra sangue ed anticoagulante
Miscelazione imperfetta
Esecuzione oltre le 4 ore dal prelievo
Influenze :
AUMENTI : anemie-iperlipemie gravi
gravidanza contraccettivi orali
DIMINUZIONI : farmaci - poliglobulie
crioglobulinemia
anomalie eritrocitarie
Test non specifico
BIOCHIMICA CLINICA
BIOCHIMICA CLINICA
VES
NUOVA TECNICA
Una ridottissima quantit di sangue (150 ml) trattato con EDTA

viene aspirato in un tubo lungo 300 mm ad alta velocit di modo
che i globuli rossi si dispongano in maniera ordinata
Il flusso viene bruscamente fermato di modo che i globuli rossi si
ridispongano in maniera casuale e si inizino a formare i rouleaux
Il campione viene letto in un fotometro capillare che valuta la
differenza di assorbanza nei diversi momenti
a) allinizio (DO intermedia)
b) durante la brusca accellerazione (DO in aumento)
c) allo stop (DO in diminuzione perch passa pi luce fra gli
spazi vuoti creati dalla formazione dei rolueaux)
Viene costruita una curva cinetica che proporzionale alla curva
di sedimentazione a 1 ora di Westergreen
Tutto il procedimento viene effettuato in 20 secondi
(circa 1000 letture)
BIOCHIMICA CLINICA
VES
NUOVA TECNICA
Vengono superati i problemi che
si avevano con la tecnica di
Westergreen in quanto la
misurazione:
a)Non influenzata dalla t
Il fotometro termostatato
b) Non dipende dalla forza di gravit
non influenzata dall Hct
quindi dal n di globuli rossi
La misurazione dipende solo
dalleffetto delle proteine di fase
acuta che facilitano la formazione
dei rouleaux.
BIOCHIMICA CLINICA
AUMENTI DELLA VES

(in azzurro solo per la tecnica di Westergreen)
Problemi tecnici :
Alterato rapporto volumetrico fra sangue ed anticoagulante
Miscelazione imperfetta
Esecuzione oltre le 4 ore dal prelievo
Influenze :
FATTORI PLASMATICI : fibrinogeno, gamma globuline,
colesterolo
FATTORI ERITROCITARI : numero, dimensioni
rapporto superficie/volume (i microciti sedimentano pi
lentamente)
alteraz. Morfologiche (le cell. falciformi non sono in grado di
formare rouleaux)
CONDIZIONI
Iperglobulinemia
Iperfibrinogenemia
Anemia (Hct 30-40%)
Macrocitosi
Gravidanza
Et > 50 aa
BIOCHIMICA CLINICA
SCOPI MISURAZIONE VES

1.
Segnalare la presenza di processi infiammatori
2.
Controllare il decorso o lo stato di attivit di una malattia
3.
Individuare patologie infiammatorie o neoplastiche occulte
TEST SCARSAMENTE SENSIBILE e SCARSAMENTE SPECIFICO
BIOCHIMICA CLINICA
PROTEINE FASE ACUTA

In corso di infiammazione , grazie allintervento di alcune citochine (IL6
TNF) il fegato (in larga parte) produce una serie di proteine dette
proteine della fase acuta.
Il fegato, mentre aumenta la produzione delle proteine della fase acuta,
riduce la produzione di altre proteine, la pi nota delle quali lalbumina.
PROTEINE DELLA COAGULAZIONE
Fibrinogeno Protrombina - Fattore VIII- Plasminogeno

INIBITORI DELLE PROTEASI
1 antitripsina - 1 antichimotripsina
PROTEINE DI TRASPORTO
Aptoglobina- Emopessina -Ceruloplasmina

PROTEINE DEL COMPLEMENTO
ALFA 1 GLICOPROTEINA ACIDA
PROTEINA C REATTIVA
BIOCHIMICA CLINICA
PROTEINE
MOBILITA
ELETTROFORETICA
VALORI RIFERIMENTO
(mg/dl)
PCR
< 0.8
1antitripsina
AAT
88 - 174
2 volte
1glicoproteina acida
AAG
51 - 117
4 volte
Aptoglobina
HPT
36 - 195
3 volte
Ceruloplasmina
CER
22 - 58
1/2 volta
Fraz C3 del complento

C3
79 - 152
1/2 volta
Fibrinogeno
FIB
200 - 450
3 volte
BIOCHIMICA CLINICA
INCREMENTO RISPETTO
ALLA NORMA
1000 volte
PCR v.r. < 0.8 mg/dl
Proteina formata da 5 subunit identiche legate con legami non covalenti

Reagisce in vitro con il polisaccaride C dello Pneumococco
Reagisce con i gruppi fosforilcolinici di molte strutture ed in grado di
fissarsi a diversi substrati a livello delle lesioni tissutali con attivazione del
sistema del complemento e dei conseguenti effetti flogistici
Il suo aumento nel siero indice attendibile e precoce di un processo
flogistico o necrotico in atto qualunque sia la causa
E un test sensibile ma non specifico
La sintesi inizia gi nelle prime ore seguenti linstaurarsi del processo
flogistico
La produzione resta elevata fino a che persiste la reazione
infiammatoria, poi si riduce precocemente e si normalizza prima del
ritorno alla normalit della VES
La precocit della sua comparsa e la brevissima emivita (1 gg) rendono
le variazioni nella sua concentrazione molto pi aderenti alla realt di
altri indici di flogosi.
BIOCHIMICA CLINICA
FIBRINOGENO v.r. 200-450 mg/dl
I livelli di fibrinogeno aumentano in corso di flogosi

Gli aumenti sono pi tardivi e non correlano tanto con il
livello di infiammazione quanto con lentit della lesione
tissutale
La concentrazione di fibrinogeno influenza la VES in quanto

i GR ricoperti di fibrinogeno sedimentano pi velocemente
BIOCHIMICA CLINICA
Pu fornire molte informazioni sullo stato del paziente.
1.
2.
3.
IN CASO DI FLOGOSI si riscontra

una diminuzione dellalbumina
un aumento delle alfa 1 e alfa 2 globuline
un aumento a base larga del picco delle gamma globuline
(in presenza di disordini immunologici, es AR)
BIOCHIMICA CLINICA

Lezioni Power Point FMC 2007 Protetta

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BIOCHIMICA CLINICA

Prof.ssa Valeria RUGGIERO

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Corso Integrato di Medicina di Laboratorio e Diagnostica per Immagini

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FINALIT DEL CORSO

Le basi per la comprensione ed interpretazione dei

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Interpretazione clinica degli esami di laboratorio

Valori anormali di laboratorio

Universit degli Studi di Cagliari Facolt di Medicina e Chirurgia

Tipologia e modalit di richiesta degli esami di

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Diagnosi e monitoraggio diabete mellito

Esame delle urine

Esame liquido cerebrospinale (cenni)

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Universit degli Studi di Cagliari Facolt di Medicina e Chirurgia

Cos la BIOCHIMICA CLINICA

La BIOCHIMICA CLINICA pu essere definita

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BIOCHIMICA CLINICA DI BASE

BIOCHIMICA CLINICA SPECIALISTICA

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Tutti gli esami di laboratorio hanno in comune :

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FINALITA DELLA RICHIESTA DEGLI ESAMI DI LABORATORIO

Valutare fattori di rischio

Controllare lo stato di salute

Prevenire il danno iatrogeno

Diagnosticare malattie professionali

DIAGNOSI - Diagnostica iniziale e di approfondimento

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CONFERMA DIAGNOSTICA DELLE IPOTESI

TESTS DIAGNOSTICI DI MONITORAGGIO

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MONITORAGGIO DEI FARMACI

Universit degli Studi di Cagliari Facolt di Medicina e Chirurgia

Universit degli Studi di Cagliari Facolt di Medicina e Chirurgia

accettato ed eseguito dal laboratorio in qualunque momento

Universit degli Studi di Cagliari Facolt di Medicina e Chirurgia

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TAPPE DEL PROCESSO ANALITICO

Sono identificabili 4 momenti:

Universit degli Studi di Cagliari Facolt di Medicina e Chirurgia

Fase preanalitica : primo requisito per assicurare

Porre particolare attenzione al paziente, al

Controllare interferenze farmacologiche o dietetiche

Evitare processi di contaminazione (materiale

Utilizzare anticoagulanti appropriati e ben miscelati

Identificare correttamente il paziente e gli esami

Universit degli Studi di Cagliari Facolt di Medicina e Chirurgia

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Si utilizza sangue venoso intero per tutti i dosaggi di

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SANGUE VENOSO INTERO

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EDTA (acido etilendiaminotetracetico)

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