TIPI DI BIOTECNOLOGIE TRADIZIONALI: ROSSE, BIANCHE E VERDI

Ricorda: gli ogm (organismi geneticamente modi cati) sono organismi ingegnerizzati tramite le
tecnologie del DNA ricombinante.
- BIOTECNOLOGIE ROSSE
Sono biotecnologie che creano OGM con caratteristiche vantaggiose nel campo MEDICO e
GENETICO (terapia genica). Alla base della ricerca medica e genetica c'è la sperimentazione sui
MODELLI MURINI (Topi) che condividono con l'uomo quasi il 98% del genoma (omologia di
sequenza). Topi modi cati geneticamente a partire dalle cellule embrionali staminali quindi non
ancora di erenziate.
1. TOPI KNOCK OUT: le cellule embrionali staminali prelevate da una femmina vengono
raccolte in vitro e modi cate geneticamente in modo da ELIMINARE o spegnere GENI
MALATTIA (il gene non viene trascritto). Le cellule modi cate si iniettano in una blastocisti che
viene poi impiantata. I topi appena nati sono delle CHIMERE (=> hanno genoma parentale dei
genitori ed il genoma modi cato delle cellule embrionali). I topi knock out si creano per
STUDIARE GLI EFFETTI del SILENZIAMENTO di un gene su un organismo.
Tecnica usata: GENE TARGETING. Il gene viene silenziato inserendo per ricombinazione
omologa un vettore nella sua sequenza oppure nella sequenza del suo promotore. Si deve
quindi conoscere esattamente la posizione e la sequenza del gene.
1. TOPI KNOCK IN: a di erenza di quelli Knock out nelle cellule embrionali staminali viene
INSERITO un gene MALATTIA (esempio un gene oncogene) al posto della copia sana. Si crea
quindi un MODELLO in vivo di una MALATTIA.

- BIOTECNOLOGIE BIANCHE
Sono biotecnologie che creano OGM con caratteristiche vantaggiose nel campo CHIMICO e
FARMACOLOGICO.
- Organismi OGM creati modi cando il loro genoma con geni umani che codi cano per
FARMACI, ORMONI, ANTICORPI a scopi terapeutici. E.COLI OGM: sono modi cati allo scopo
di SINTETIZZARE FARMACI come l'INSULINA UMANA che ha sostituito la somministrazione di
insulina bovina, anticorpi, vaccini proteici (il primo vaccino italiano contro l'epatite B ) o fattori
della coagulazione (per malattie della coagulazione). I batteri sono quindi dei bioreattori.
Tecnica usata: CLONAGGIO GENICO

- Piante OGM: create modi cando il loro genoma con geni di solito umani o in alcuni casi
batterici che codi cano per anticorpi particolari. Sono chiamate FARMACIE VERDI o plant
molecolar pharming.
1. Pianta del tabacco OGM: è una specie vegetale che si presta facilmente alle modi che
genetiche. Il genoma è modi cato per produrre ANTICORPI usati nelle immunoterapie contro il
CANCRO, anticorpi contro l'EBOLA, ormoni della crescita, anticorpi contro TOSSINE
BATTERICHE che vengono liberate nelle acque potabili.
Tecnica usata: GENI inseriti in PLASMIDI del batterio AGROBACTERIUM, un batterio usato anche
nelle biotecnologie verdi che quando INFETTA un organismo gli TRASFERISCE IL SUO
MATERIALE GENETICO.

- ANIMALI OGM creati modi cando il loro genoma con geni di solito umani che alterano le
caratteristiche di un prodotto nale di una via metabolica.
1. PHARMING PECORE o MUCCHE OGM: la modi cazione avviene a livello EMBRIONALE ed i
nati hanno la capacità di PRODURRE LATTE con caratteristiche particolari: per esempio
uguale al LATTE MATERNO umano, arricchito di sostanze nutritive o con farmaci, latte senza
lattosio o potenziare la produzione del latte.
Tecnica usata: si prelevano le cellule fecondate da una femmina e si raccolgono in vitro, dove si
INIETTANO I GENI DI INTERESSE no allo stadio di BLASTOCISTI. Questa viene poi impiantata
nell'utero di una madre surrogata.
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- BIOTECNOLOGIE VERDI
Sono biotecnologie che creano OGM con caratteristiche vantaggiose nel campo AGRICOLO-
ALIMENTARE ed ECOLOGICO-AMBIENTALE.

1. PIANTE TRANSGENICHE con geni di origine batterica che conferiscono RESISTENZA a

determinati PARASSITI (insetti), a malattie (es tumori fungini) o a STRESS AMBIENTALI (piante in
grado di sopravvivere in casi di siccità estrema).
- Mais BT: è un OGM creato combinando il genoma del mais con un gene del batterio BACILLUS
detto gene cry. Questo gene rende le piante resistenti ai parassiti e contemporaneamente immuni
a tumori di origine fungina (tossici anche per l'uomo e per i suoli).
Tecnica usata: il GENE CRY viene inserito in un PLASMIDE e lasciato in coltura con
embrioni del mais resi competenti.

2. PIANTE TRANSGENICHE con geni di origine batterica o eucariotica che

POTENZIANO i MICRONUTRIENTI della pianta stessa (caratteristiche nutrizionali) o
INSERISCONO MACRONUTRIENTI nuovi.
- GOLDEN RICE: è un OGM creato combinando il genoma del riso con 3 geni del BATTERIO
ERWINIA e della pianta del Narciso che codi cano per la VITAMINA A o BETA CAROTENE.
Arricchendo le piante dal punto di vista nutrizionale, queste possono essere usate per contrastare
alcune delle malattie causate da carenze nutrizionali o contrastare addirittura la malnutrizione o la
sottonutrizione in alcuni paesi del mondo.
Tecnica usata: i geni scelti sono inseriti in plasmidi del batterio AGROBACTERIUM e lasciati in
coltura con embrioni del riso.

3. BATTERI TRANSGENICI con geni di origine batterica che creano nuove vie metaboliche in
grado di creare BIOCOMBUSTIBILI (bioetanolo o biodiesel) in alternativa ai combustibili fossili.
- MICRORGANISMI OGM: sono batteri creati combinando il loro genoma con geni di origine
batterica in grado di SCINDERE la CELLULOSA o altri POLISACCARIDI che derivano dagli
SCARTI VEGETALI e fermentarli (è inserita la via metabolica della fermentazione alcolica) per
produrre bioetanolo o acidi grassi (catene idrocarburiche).
Tecnica usata: i geni scelti sono inseriti in un plasmide e trasferiti con i meccanismi di
TRASFERIMENTO ORIZZONTALE genetico nei batteri riceventi.

4. BATTERI TRANSGENICI con geni di origine batterica o eucariotici in grado di PURIFICARE

LE ACQUE o i SUOLI dagli inquinanti o rilevare alcuni tipi di inquinanti.
- E.COLI OGM: sono batteri creati combinando il loro genoma con geni MERT e MERP (derivati
da trasposoni) in grado di inglobare attraverso la membrana cellulare metalli pesanti come
mercurio. Questi batteri sono montati su MATRICI SOLIDE porose biosostenibili che vengono
messe nelle acque o nei suoli per PURIFICARLI dai METALLI PESANTI (bio ltri).
- E.COLI OGM: sono batteri creati combinando il loro genoma con geni GFP (dalle meduse) che
CODIFICANO per PROTEINE che in presenza di idrocarburi, come tracce di petrolio, emettono
una FLUORESCENZA. Quindi posti in acqua o nei suoli possono essere usati come BIOSENSORI
di inquinanti.
Tecnica usata: i geni scelti sono inseriti in un plasmide e trasferiti con i meccanismi di
TRASFERIMENTO ORIZZONTALE genetico nei batteri riceventi.
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 CRISPR E CAS9
- Nel 2010 due scienziate (due donne—> se esce il ruolo della donna) hanno notato che in un
batterio nel ceppo dello streptococco c’era un processo di memoria immunitaria (=>quando un
virus arriva penetra e rilascia frammenti di dna, il batterio memorizza la sequenza vitali
producendo RNA che tiene all’interno della cellula => non avendo sistema immunitario quindi
sfruttano gli RNA messaggeri). Nel nostro corpo abbiamo il sistema immunitario. Quando il
virus infetta di nuovo lo stesso batterio ma esso ha la memoria immunitaria la proteina CAS 9
(endonucleasi di restrizione), guidata dagli rna, TAGLIA e FRAMMENTA il nuovo genoma virale
per non farsi infettare
- 2011 hanno CREATO in VITRO un sistema casp uomo

Il sistema Crispr Cas9 è una forbice molecolare altamente precisa e sensibile che taglia il
genoma in qualsiasi punto e con una altissima sensibilità. Esso scorre lungo il genoma e quando
l’RNA incontra la sua parte complementare il Cas taglia. Il genoma così facendo si può anche
RISCRIVERE sapendo il gene che posso andare ad inserire (perché è omologo) => se ho il
genoma e lo devo riscrivere TOLGO prima la PARTE INTERESSATA, CANCELLO , TAGLIO e
RISCRIVO la parte in questione come voglio.

Cas 9 è la proteina, a cui è attaccato l’RNA, io posso guidare attraverso l’RNA nei punti precisi
(non serve più una sequenza palindroma). Se a questo sistema lego un DNA esogeno non solo
taglio ma sostituisco anche riscrivendo. Sto inserendo una informazione che prima non c’era
poiché il DNA esogeno che creo può essere di qualsiasi tipo, posso anche inserire un
PROMOTORE (parte da dove parte la trascrizione) anche dove non ci sono geni

Le caratteristiche:
- È un SISTEMA CELLULARE che lo rende più probabile che sia sicuro rispetto ai sistemi
arti ciali
- È SEMPLICE da CREARE perché sequenziando tutto il genoma sequenziare le sequenze
di rna è facilissimo
- È molto ECONOMICO (si compone di : endonucleasi di restrizione + dna esogeno + rna
guida)
- È VELOCE
- È VERSATILE perché lo posso usare per tutte le cellule
- Modi ca in maniera rapida ed economico una speci ca regione del dna, qui non parliamo di
geni ma di nucleotidi, è ancora più speci co. CURA, ATTUA e INSERISCE una MUTAZIONE
PUNTIFORME (es: devo andare in una sequenza di 4 nucleotidi, creo l’RNA omologo ai 4
nucleotidi e creo dna esogeno di 4 nucleotidi da inserire, RNA guida la Cas nei 4 nucleotidi, Cas
taglia e il DNA esogeno si inserisce)
- Ha SOSTITUITO LE TECNOLOGIE DI INGEGNERIA GENETICA
- Si adatta facilmente alle cellule embrionali
- Si può ereditare con l’AUTOREPLICAZIONE (si introduce nelle cellule dell’individuo che si
vuole modi care un GENE DRIVE che codi ca per tutto il sistema crisp e cas, questo gene
viene ereditato in tutte le generazioni dalla progenie => attuato sulle zanzare) Limiti :
- È ECONOMICO = il fatto che lo sia ci fa superare il limite economico della potenza genica, ho
perso l’unico freno per poterla utilizzare per quello che voglio
- Si è scoperto che nella METÀ DELLE CELLULE EMBRIONALI MUOIONO perché il sistema non
è perfetto (se ho sequenze troppo simili all’interno del genoma cas9 non distingue con precisione
e va ad inserire dna esogeno dove non va inserito)
- Ha ABBATTUTO il MURO tra TERAPIA GENETICA e l’EOGENETICA (insieme di tecniche che
hanno origine antichissime e che al tempo del nazismo sono state usate nel desiderio di voler
creare una razza superiore)

APPLICAZIONI
- MALARIA (dal plasmodio all’uomo)=> zanzare è il vettore di trasmissione, il plasmodio sceglie
la zanzara anopheles, prendendo le cellule embrionali mettiamo il gene drive che disattivi geni
che portano l’organismo a sopravvivere. Nelle cellule adulte di attivano i processi di sportosi
mentre nelle cellule embrionali si blocca la fertilità. Crisp e Cas si sostituisce alla selezione
naturale.
- ANEMIA FALCIFORME E TALASSEMIA riattiva i geni dell’ emoglobina fetale
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 - HIV =>prendo un virus che infetta la cellule umane con l’HIV, il genoma del virus sta nel nostro
genoma, il Crisp e cas trova grazie ai suoi RNA i genomi virali e li elimina entrando nel nucleo
delle cellule
- cellule CAR-T (immunoterapia = per tante patologie soprattutto per il cancro che si basano sul
potenziamento del sistema immunitario per attaccare le cellule malate) (nelle prime fasi quando
un tumore sta crescendo il nostro sistema immunitario cerca di combattere le cellule tumorali
che eludono il sistema immunitario, se si potenzia quest’ultimo elimino la capacità del tumore
di nascondersi) si chiamano cellule car-t, si prelevano quelle del paziente e si coltivano in vitro,
tramite vescicole primiriche, crisp e cas entra nei linfociti t e va a riscriverne il genoma
potenziandoli.
- XENOTRAPIANTI (trapianti da animali), se ho bisogno di una valvola umana ma non che derivi
da un umano faccio nascere specie animali con un genoma che esprime geni umani speci ci,
- SELEZIONE DI EMBRIONI a SESSO NOTO
BIOLOGIA SINTETICA (SYNBIO)
Non è un insieme di tecnologie per la ricerca ma vuole CREARE qualcosa di arti ciale, va oltre le
biotecnologie, CREA CIRCUITI METABOLICI ORGANICI SINTETICI e le costruisco secondo le
proprie esigenze. Devo ricostruire e riprogrammare il genoma e tutti i circuiti delle vie metaboliche
arti ciali.
- BEYOND MEAT : produce carne sintetica di origine vegetale nata nel 2009 con sede a Los
Angeles
- GINKGO BIO WORKS: azienda specializzata nell’utilizzo dell’ ingegneria genetica per produrre
batteri con applicazioni industriali
- PIVOT BIO: crea microorganismi che catturano azoto e lo utilizza come fertilizzante naturale
Due tecniche:
- BOTTOM UP parte dalle biomolecole e crea cellule arti ciali (es da fosfolipidi a membrane, da
amminoacidi a proteine ecc...)
- TOP DOWN da una cellula e ne spengo i geni guardando solo gli essenziali (che compongono
il genoma minimo), un gene non essenziale non serve e quindi non è necessario codi carlo:
- GENI ESSENZIALI: essenziale codi carli
- GENI QUASI ESSENZIALI : non sanno la funzione ma se non ci sono la cellula non
sopravvive —> si pensa siano correlati alla relazione organismo-ambiente
- GENI NON ESSENZIALI (la cellula sopravvive anche senza)
Nel 2010 si è individuato un genoma minimo MYCOPLASMA di 483 geni, nel 2016 un batterio
sintetico dello stesso ceppo presenta 473 geni essenziali di cui 149 quasi essenziali. Quando
prendo una cellula arti ciale che deve sopravvivere a ermo che debba vivere nell’ambiente
circostante e che quindi abbia dei geni essenziali che glielo permettano.
- In BIOECONOMIA sono state create le cellule PACKMAN che imitano il trasporto attivo di
spazzini di inquinanti cellule biocarburante o bioplastiche
- A livello AMBIENTALE la FOTOSINTESI POTENZIATA ha permesso il riciclo di CO2
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