Topo

Mus musculus
Mammifero
Durata della gestazione: 21 giorni
Numero di piccoli: 5­12
Durata vita fino a 2 anni
Sviluppo 20 giorni
Vantaggi:
Ciclo di vita corto 
Piccola taglia
Facilita’ di riproduzione e allevamento
Simile all’uomo (rapporto uno a uno nei geni,
 80­90% omologia)

Modello per lo studio dello sviluppo e dei processi biologici nei mammiferi e nell’uomo
Patologie umane 
Svantaggi:
Costi di ricerca maggiori
Tempi piu’ lunghi di sviluppo rispetto ad invertebrati e vertebrati quali Xenopus e Zebrafish
Difficile manipolazione (piccole dimensioni, sviluppo intrauterino
   
 Gli stadi precoci dello sviluppo del topo

No vitello
No rapido sviluppo iniziale
Sviluppo di strutture extraembrionali (sacco amniotico, placenta)
Altamente regolato (embrione precoce diviso in due = gemelli;  se una delle due cellule allo stadio
 due e’ distrutta = embrione normale)

   
 Compattamento

   
 Procedimento per creare un topo chimerico

Durante gli stadi precoci, il sistema si aggiusta da se’. Embrioni regolativi
Le cellule della massa interna sono inizialmente totipotenti: possono dare origine a 
   
 qualunque parte del corpo adulto, comprese le cellule germinali
 Cellule staminali

Embrione precoce trapiantato in un rene o testicolo di un adulto = sviluppo disturbato ma non 
 arrestato e formazione del teratoma, massa disorganizzata di cellule contenente molte varieta’
 di tessuto differenziato insieme a tessuto indifferenziato che continua a proliferare

Cellule staminali embrionali: capaci di proliferare 
 indefinitamente mantenendo la loro capacita’ totipotente, 
 e di differenziare in diversi tipi cellulari. 
Derivano dalla  blastocisti

Cellule staminali adulte: derivano da tessuti adulti. 
Sistema di riparo. 
Danno origine ad una gamma ristretta di tipi cellulari

   
Le cellule ES possono essere 
mantenute in coltura 
indefinitamente senza perdere  il 
loro potenziale  di sviluppo
 
(strato nutritivo di fibroblasti)

   
 Le cellule ES possono essere differenziare in coltura in diversi tipi cellulari

   
 Preparazione di topi chimerici con cellule ES 

Prospettive:

Fonte di cellule per la riparazione di tessuti dan­
 neggiati o difettosi

Creazione topi transgenici con la tecnologia
 del DNA ricombinante  ­>

   
Preparazione di topi transgenici con cellule ES: gene targeting e ricombinazione
 omologa
Le cellule ES possono incorporare DNA per elettroporazione, trasfezione,infezione retrovirale 

gene targeting e ricombinazione 
 omologa per l’inattivazione di 
un gene oppure la sostituzione 
di un gene difettoso 

Le cellule ES vengono selezione per la mutazione inserita prima di essere impiantate nella 
   
 blastocisti
   
Produzione di topi transgenici per 
 microiniezione

Integrazione stabile in cellule somatiche e 
 germinali
Localizzazione cromosomica del DNA random
Piu’ copie tandem nello stesso locus

Percentuale sopravvivenza bassa (10­30%)
Efficienza (40%)

   
 L’epidermide ed il suo rinnovamento da parte di cellule staminali

La pelle

   
 Struttura multistratificata dell’ epidermide (epitelio squamoso)

   
Nello strato basale cellule staminali
Modi in cui le cellule staminali possono produrre due cellule figlie con destini diversi 

In caso di una ferita, cellule dell’epidermide migrano e proliferano per riparare la zone.
Divisioni simmetriche.   
   
Perdita del contatto con la lamina basale potrebbe scatenare il differenziamento terminale? 
Lo strato basale contiene sia cellule staminali che cellule che si amplificano in transito

Test della capacita’ di formare colonie
colorazione per integrina β1 per cellule staminali (in bianco )
   
Cheratina 10 per cellule in differenziamento (in verde)
BrdU per cellule che si dividono
 Le cellule staminali dell’epidermide si dividono raramente, ma formano cellule in 
 transito che si dividono un numero definito di cicli prima di differenziarsi

Meccanismo fortemente regolato: Wnt e Hedghog (cancro), Wnt (attivazione divisione delle CS,
 Notch (blocco del differ. in cellule staminali), TGF­β (segnalazione del derma per il riparo)
Overespressione delle integrine negli strati superiori dell’epidermide causa una condizione
   
 simile alla psoriasi
 Popolazione di cellule epidermali possono esere espanse in coltura per il trapianto 
  autologo e la riparazione di tessuti danneggiati

Coltivazione di cellule non danneggiate dal paziente
Prima, sostituzione immediata e temporaneadella pelle danneggiata con derma  umano o 
 artificiale (matrice artificiale a forma di foglio di collageno mescolato con un glicosammi­
 noglicano, con una sottile membrana al silicone
In seguito trapianto

 ­ > Versatilita’ delle cellule differenziate: cellule staminali neuronali possono differenziare
 in cellule ematopoietiche se trapiantate in un topo irradiato a raggi X e privo di cellule emato­
   
 poietiche
Quale futuro per le staminali umane? L’interesse è enorme.

Embrionali o da adulto?

Problemi etici con le embrionali (vari livelli di problemi)

Problemi scientifici con quelle da adulto: isolamento, funzione, ma progressi recenti:
­ maggiore versatilità di quanto previsto
­ evidenze indirette dal clonaggio in animali  

L’opinione più diffusa fra i ricercatori: 
Non è possibile dire oggi quale delle due strade potrà portare più lontano. 
Consentiteci di rispondere a questa domanda. 

   
 Il genoma di una cellula somatica può essere riprogrammato

   
 Quale futuro per le staminali umane? Embrionali o da adulto?
 

L’opinione più diffusa fra i ricercatori: 

Non è possibile dire oggi quale delle due strade potrà portare più lontano. 
Consentiteci di rispondere a questa domanda.