CRESCITA MICROBICA

Nutrienti
Tecniche di coltivazione e conta microbica
Scissione binaria e ciclo crescita microbica
Colture continue
Crescita in biofilm
Quorum sensing
Effetti ambientali sulla crescita microbica:
Temperature, pH
Pressione osmotica e ossigeno
Controllo crescita microbica:
Calore
Agenti chimici e fisici
Resistenza antibiotici

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 Composizione elementi e macromolecole

Peso cellula
E. coli=184x10-15g (184fg)

Microrganismi in grado di
Metabolizzare 62 elementi
diversi

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 Carbonio, azoto e altri macronutrienti
Eterotrofi: organismi che necessitano di carbonio organico. Degradano i polimeri organici
(aminoacidic, acidi grassi, acidi organici, zuccheri, basia zotate
Autotrofi: sintetizzano i composti organici partendo dalla CO2

Azoto : presente nelle protein sotto forma di ammoniaca (NH3), nitrato (NO3-) o azoto gassoso N2

Elementi fondamentali:
• C, N, O, H
• Fosforo (P) elemento fondamentale per gli acidi nucleici e fosfolipidi. E’ assimilato sotto forma di fosfato (PO43-)
• Zolfo presente in cisteina, metionina e in molte vitamin (tiamina, biotina, acido lipoico). La maggior parte dei
microrganismi può assimilare forme inorganiche di S, come solfato (SO42-) o solfuro di idrogeno (H2S), mentre
altri assimilano S da composti organici
• Postassio (K) è richiesto per l’attività di diversi enzimi, mentre il magnesio (Mg) stabilizza i ribosomi, le membrane e
gli acidi nucleici, ed è necessario anche per l’attività di molti enzimi.
• Il calcio (Ca) e il sodio (Na) sono nutrienti essenziali solo per pochi organismi.

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4
 Terreni di cultura: definiti e complessi
I terreni definiti sono preparati
aggiungendo all’acqua distillata quantità
precise di sostanze inorganiche o
organiche contraddistinte da un alto
grado di purezza. Pertanto, di un terreno
definito è nota l’esatta composizione (in
senso sia qualitativo sia quantitativo).
Un terreno selettivo contiene composti che
inibiscono la crescita di alcuni
microrganismi, ma non di altri. In
commercio esistono terreni selettivi per
l’isolamento di comuni patogeni intestinali,
come il batterio enterico Salmonella o i
ceppi di E. coli.
I terreni complessi impiegano derivati della
digestione di prodotti di origine microbica,
animale o vegetale come cellule di lievito
(estratto di lievito), caseina (una proteina del
latte), carne (estratto di carne), soia (brodo
tripti-co di soia), o diverse altre sostanze con
alto potere nutritivo
Un terreno differenziale è un terreno in cui viene
aggiunto un indicatore (di solito un colorante) che
cambiando colore rivela se avviene una particolare
reazione metabolica durante la crescita. Per esempio, per
rilevare i batteri lattici, che secernono acido lattico e provocano un
abbassamento del pH, è possibile incorporare nel terreno di coltura
un colorante sensi-bile al pH, che cambia colore in ambiente acido
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Terreni di cultura solidi

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Propagazione coltura microbica asettica

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Tecnica del quadrante

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Conta diretta al microscopio

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Conta diretta al microscopio: vivi/morti

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Conta diretta al microscopio

12
Conta diretta al microscopio

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 Conta diretta al microscopio

Batteri ammonio-ossidanti
nitrito-ossidanti

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Metodi per la conta vitale in piastra

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 Metodo diretto: Conta vitale in piastra (CFUs)

Metodo delle
diluizioni seriali

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Metodo indiretto: Misurazione densita’ ottica

Tempo di generazione (g)

g=n/t

n=3,3(logNt-logN0)

g=tempo di generazione
t= tempo impiegato per una generazione
n=numbero di generazioni

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Scissione binaria

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Crescita microbica

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 Aspetti quantitativi della crescita microbica

g=t/n

g=tempo di generazione
t= tempo impiegato per una generazione
n=numbero di generazioni

Numero cellule presente generazione n e’ 2n

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Aspetti quantitativi della crescita microbica

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Aspetti quantitativi della crescita microbica

Tempi di generazione con

n=[(logNt-logN0)/log2] grandezze misurabili

g=t/n
g in funzione della pendenza retta
Pendenza retta = (logNt-logN0)/t

g=t/[(logNt-logN0)/log2]

Pendenza= log2/g
g=log2/pendenza

g= tempo di generazione
n=numero generazioni
t=tempo per generazione

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 Coltura continua

K=velocita’ di crescita
La quantita’ di terreno immesso dipende dalla
D= velocita’ di diluizione D=F/V
F= velocita’ di flusso
V=volume della coltura
Stato di equilibrio K=D

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Coltura continua

K=velocita’ di crescita
La quantita’ di terreno immesso dipende dalla
D= velocita’ di diluizione D=F/V
F= velocita’ di flusso
V=volume della coltura
Stato di equilibrio K=D
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Crescita in biofilm

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 Proprieta’ biofilm

Nature Reviews Microbiology volume 14, pages 563–575 (2016)

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Sviluppo biofilm in Pseudomonas aeruginosa

27
Esempi biofilm

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 Molecola segnale c-di-GMP

Enzimi guanilato ciclasi

2GTP → c-di-GMP
Sintesi inibita quando i livelli cellulari sono alti

Domini fosfodiesterasici
c-di-GMP → pGpG e GMP
Degradano il nucleotide segnale

c-di-GMP:
• Riduce attivita’ flagellare
• Regola proteine per adesione
• Media biosintesi polisaccaridi della matrice
del biofilm

Passaggio da cellula plantonica a biofilm Accumulo di c-di-GMP (di-guanosin-monofosfato ciclico)

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Meccanismo del quorum sensing

Comportamenti coordinati:
• Formazione biofilm
• Espressione fattori virulenza
• Produzione tossine
• Motilita’ di swarming

Autoinduttore

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 Comportamenti coordinati da quorum sensing

Espressione luminescenza Espressione enterotossine

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