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ISTRUZIONI PER L'USO

TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-257303.04 Rev.: Sep 2011

BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II


USO PREVISTO
BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II è un terreno selettivo per l'isolamento
di microrganismi Gram-positivi da materiali clinici e non clinici.

PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA


Metodo microbiologico.
Ellner et al. nel 1966 hanno elaborato un preparato a base di agar sangue, che è stato
denominato agar Columbia.1 Questo terreno, caratterizzato da colonie più estese e crescita più
rigogliosa rispetto ad altre basi agar sangue, è utilizzato per terreni contenenti sangue e
preparati selettivi. Ellner et al. hanno scoperto che un terreno contenente 10 mg di colistina e 15
mg di acido nalidixico per litro su base agar Columbia, arricchito con sangue di montone 5%,
supporta la crescita di stafilococchi, streptococchi emolitici ed enterococchi, mentre inibisce la
crescita di Proteus, Klebsiella e Pseudomonas.1-3 Nel corso degli anni, la resistenza dei batteri
agli antibiotici è aumentata. Ciò è vero in particolare per i bacilli Gram-negativi che dovrebbero
essere inibiti, ma spesso producono crescita, sull'agar Columbia CNA con 5% di sangue di
montone. Per assicurare una buona selettività di questo terreno, BD Columbia CNA Agar with
5% Sheep Blood, Improved è stato supplementato con una piccola quantità di aztreonam, un
monobattame che agisce unicamente contro la maggior parte dei batteri gram-negativi, senza
influenzare i microrganismi gram-positivi.4-6 Nel BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep
Blood, Improved II, la concentrazione di acido nalidixico è stata ridotta a 5,5 mg/l per
aumentare il recupero di cocchi gram-positivi, soprattutto stafilococchi, dai campioni clinici

L'agar Columbia fornisce un terreno con una base altamente nutritiva. L'aggiunta degli agenti
antimicrobici, colistina, acido nalidixico e aztreonam, rende il terreno selettivo per i
microrganismi Gram-positivi, streptococchi e stafilococchi in particolare. Il sangue di montone
consente di rilevare le reazioni emolitiche, che sono particolarmente utili per la diagnosi
presuntiva degli streptococchi. 2,3,7-9

REAGENTI
BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II
Formula* per litro di acqua purificata
Digerito pancreatico di caseina 12,0 g Agar 13,5 g
Digerito peptico di tessuto animale 5,0 Colistina 10,0 mg
Estratto di lievito 3,0 Acido nalidixico 5,5
Estratto di carne bovina 3,0 Aztreonam 3,0
Amido di granturco 1,0 Sangue di montone defibrinato 5%
Cloruro di sodio 5,0 pH 7,3 ± 0,2
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.

PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazione di colore,
essiccamento, incrinature o altri segni di deterioramento.
Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.

CONSERVAZIONE E VITA UTILE


Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono

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essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.

CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL’UTENTE


Inoculare il terreno con i ceppi elencati in basso. (per ulteriori informazioni, v. ISTRUZIONI
GENERALI PER L'USO). Incubare a 35  2 °C per 18 – 24 h, in atmosfera aerobica arricchita
con anidride carbonica.
Ceppi Risultati della crescita
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crescita da buona a eccellente, possibile beta emolisi
Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Crescita da buona a eccellente, alfa emolisi
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Crescita da buona a eccellente, beta emolisi
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Crescita da buona a eccellente
Proteus mirabilis ATCC 12453 Inibizione da parziale a completa; nessuna sciamatura
Non inoculate Rosso (color sangue)

PROCEDURA
Materiali forniti
BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II (piastre impilate Stacker da 90
mm). Microbiologicamente controllate.

Materiali non forniti


Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.

Tipi di campioni
Terreno selettivo universale per l'isolamento di numerosi batteri Gram-positivi in batteriologia
aerobica, streptococchi e stafilococchi in particolare, utilizzabile per tutti i tipi di campioni
batteriologici (v. anche CARATTERISTICHE METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA
PROCEDURA).

Procedura del test


Strisciare il campione non appena viene consegnato in laboratorio. La piastra strisciata è
utilizzata prevalentemente per isolare le colture pure dai campioni contenenti flora mista. In
alternativa, se il materiale in coltura proviene direttamente da un tampone, rotolare il tampone
su una piccola area del bordo e strisciare da questa zona inoculata. Per rilevare tutti i patogeni
contenuti nel campione, strisciare anche su terreni non selettivi appropriati, come BD Columbia
Agar with 5% Sheep Blood, e su altri terreni selettivi, come BD MacConkey II Agar. 7-10
Incubare a 35  2 °C per 42 – 48 h, in atmosfera aerobica arricchita con anidride carbonica, e
controllare le piastre dopo 18 – 24 h e 42 – 48 h.
Risultati
La morfologia tipica delle colonie su BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood,
Improved II è la seguente:
Streptococchi (non gruppo D) Piccole, da bianche a grigiastre. Beta o alfa emolisi
Enterococchi (gruppo D) Piccole, ma più grandi degli streptococchi di gruppo A, grigiastre.
Alfa (raramente beta) emolisi
Stafilococchi Grandi, da bianche a grigie o da color crema a giallo, con o senza
emolisi
Corinebatteri* Da piccole a grandi, da bianche a grigie o gialle, con o senza emolisi
Candida Piccole e bianche
Listeria monocytogenes Da piccole a medie, grigiastre, con scarsa beta emolisi
Batteri Gram-negativi Da nessuna crescita a tracce di crescita
* V. anche Limitazioni della Prozedura

Sul terreno possono crescere anche altri batteri Gram-positivi, non presenti nel precedente
elenco (v. anche PRESTAZIONI DELLA METODICA E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA).

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PRESTAZIONI METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II è un terreno migliorato
utilizzato per l'isolamento e la coltura di numerosi microrganismi Gram-positivi a crescita in
aerobiosi, ad es. streptococchi, stafilococchi, corineformi, Listeria spp. e altri. Il terreno è simile
all’agar Columbia CNA con 5% di sangue di montone, tuttavia, la sua selettività contro i batteri
Gram-negativi è migliore.
Prestazioni della metodica 11
Nel corso di valutazioni interne delle prestazioni, la crescita di oltre 45 ceppi (isolati clinici e
ceppi di raccolta) di batteri gram-positivi appartenenti alle specie indicate nella Tabella 1, è
stata testata su BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II (=CNA-II) e
comparata a BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (=CNA). BD Columbia Agar
with 5% Sheep Blood (=COL) è stato usato come terreno di riferimento per la crescita. Le
piastre sono state incubate per 18 - 24 ore in atmosfera aerobica arricchita di CO 2 .
I ceppi Proteus chinolone-resistenti sono stati completamente inibiti su CNA-II, ma hanno
sviluppato una notevole crescita su CNA e COL. Sono stati inoltre testati svariati bacilli gram-
negativi (Klebsiella pneumoniae, produttori di beta-lattamasi a spettro esteso, Enterobacter
cloacae Pseudomonas aeruginosa). Nessuno di questi ceppi è cresciuto su CNA-II, mentre
alcuni hanno sviluppato una crescita medio - leggera su CNA e tutti hanno prodotto una
crescita notevole su COL.
Su CNA-II è stato inibito un numero di batteri gram-negativi più elevato rispetto a CNA, mentre
l’isolamento di batteri gram-positivi è stato identico su entrambi i terreni selettivi o migliori su
CNA-II.
Su CNA-II, sono stati inoltre testati numerosi ceppi di Staphylococcus aureus che hanno
evidenziato una crescita debole su CNA. La crescita sviluppata da questi ceppi su CNA-II è
risultata da accettabile a eccellente. Dimensioni delle colonie e zone emolitiche su CNA-II sono
risultate comparabili a quelle su COL.

Tabella 1: specie Gram-positive analizzate e recuperate su BD Columbia CNA Agar with 5%


Sheep Blood, Improved II (incubazione: aerobica con 5-8% di anidride carbonica)
Corynebacterium diphtheriae* Staphylococcus hyicus Streptococcus. milleri
Enterococcus faecalis Staphylococcus saccharolyticus** Streptococcus. mitis
Enterococcus faecium Staphylococcus saprophyticus Streptococcus pneumoniae
Enterococcus durans Staphylococcus schleiferi Streptococcus pyogenes
Enterococcus hirae Staphylococcus xylosus Streptococcus sanguis
Listeria monocytogenes Staphylococcus warneri Streptococcus group C
Staphylococcus aureus Streptococcus agalactiae Streptococcus group F
Staphylococcus capitis Streptococcus bovis Streptococcus group G
Staphylococcus cohnii Streptococcus constellatus**
Staphylococcus epidermidis Streptococcus intermedius
* 48 hours incubation needed for detection on CNA-II and on and CNA.
** These are species that grow better when grown anaerobically; anaerobic incubation for 42 to 48 hours needed for detection on
BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II and on BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood

Sono stati inoltre analizzati sul CNA-II, e confrontati col CNA (incubazione 42-72 ore in
atmosfera anaerobica), vari cocchi anaerobi Gram-positivi (Peptostreptococcus e generi
correlati). Sebbene la maggior parte dei ceppi del test sia cresciuta su entrambi i terreni,
numerosi ceppi hanno prodotto una crescita più debole sul CNA-II che sul CNA.

Limitazioni della Prozedura


Su questo terreno possono crescere batteri Gram-negativi in grado di resistere agli ingredienti
selettivi.
Le Candida e gli altri funghi non sono inibiti su questo terreno.
Le specie aerobiche che generano spore, come Bacillus spp., pur essendo Gram-positive
possono essere inibite su BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood e sul BD Columbia
CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II.
Alcuni corinebatteri e micrococchi crescono soltanto debolmente o non crescono affatto su BD
Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II.

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Questo terreno non deve essere usato per l'isolamento di batteri anaerobi obbligati. A questo
scopo si consiglia invece di utilizzare BD Schaedler CNA Agar with 5% Sheep Blood o BD
Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood.
Il numero e i tipi di specie batteriche che si comportano come agenti infettivi è quanto mai
ampio. Pertanto, prima di usare il terreno di routine per microrganismi isolati di rado o descritti
di recente, l'utilizzatore deve verificarne l'idoneità coltivando colture pure dell'organismo in
questione.
Benché sia possibile eseguire alcuni test diagnostici direttamente sul terreno, per
un'identificazione completa è necessario effettuare test biochimici e, all'occorrenza,
immunologici usando colture pure.7,9
La base agar Columbia ha un contenuto relativamente alto di carboidrati e quindi gli
streptococchi beta-emolitici possono produrre una reazione emolitica verdastra che può essere
confusa con l'alfa emolisi.

BIBLIOGRAFIA
1. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new culture medium for
medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45:502-504.
2. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical
bacteria, vol. 1, p. 269-275.Williams & Wilkins, Baltimore, MD.
3. Chapin, K.C., and T.-L. Lauderdale. 2003. Reagents, stains, and media: bacteriology. In:
Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of
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7. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.).2003.
Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington,
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8. Ruoff, K.L., R.A. Whiley, and D. Beighton. 2003. Streptococcus. In: Murray, P. R., E. J.
Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
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10. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
11. Data on file. 2004. Becton Dickinson GmbH, Heidelberg/Germany.

CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, Improved II
REF 257303 Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
REF 257306 Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 120

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Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.

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