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di assorbimento
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Analisi qualitativa
Assorbanza
Soluzione KMnO4
Trasmittanza e assorbanza
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Analisi quantitativa
I0 = intensità della radiazione incidente
I0 I
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Legge di Lambert e Beer
Considerando una cella, contenente una sostanza in soluzione,
attraversata da un raggio di luce monocromatica, si dimostra che:
A = - logT = e.b.c
A = assorbanza
e = coefficiente di assorbimento molare, caratteristico della
sostanza (mol-1 L cm-1)
b = cammino ottico (cm)
c = concentrazione molare della sostanza (mol/L).
La legge di Lambert e Beer descrive i fenomeni di assorbimento di radiazioni
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elettromagnetiche ed è valida per radiazioni monocromatiche e soluzioni diluite.
Scelta della lunghezza d’onda
Nell’analisi spettrofotometrica quantitativa è fondamentale
conoscere come varia l’assorbanza in funzione della
lunghezza d’onda.
Riportando in ascissa la l
Soluzione KMnO4
ed in ordinata i
corrispondenti valori di A, si
Assorbanza
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Analisi quantitativa con la spettrofotometria
di assorbimento nel campo visibile e UV
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Preparazione del campione
L’analisi può essere condotta direttamente sulla
soluzione della sostanza solo se questa presenta il
massimo di assorbimento nell’intervallo di l dello
strumento, altrimenti si ricorre ad opportune
reazioni chimiche tra la sostanza in esame ed
opportuni reagenti che portano alla formazione di
composti con massimo di assorbimento
nell’intervallo di l richiesto.
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Azzeramento e taratura dello strumento
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Determinazione della concentrazione
della sostanza in esame
La maggior parte degli strumenti sono dotati di
cellule fotoelettriche che producono un segnale
elettrico dipendente dall’intensità luminosa. Il
segnale elettrico viene poi trattato in via elettronica,
fino ad ottenere una lettura analogica o digitale di A
e/o T.
Una volta ricavata l’assorbanza della soluzione in
esame, per risalire alla concentrazione si possono
seguire diversi metodi. 18
Questo metodo può essere
applicato quando si lavora in
condizioni di proporzionalità Metodo diretto
diretta tra A e c.
Noto (dimensioni della cella)
A = e.b.c c = A/(e x b)
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Metodo della curva
(o retta) di taratura
Si può costruire una retta di taratura, misurando a
lmax l’assorbanza di soluzioni della stessa specie a
varie concentrazioni (c1, c2…), preparate per
diluizione di una soluzione madre e
diagrammando i valori di A (A1, A2…) in funzione
dei corrispondenti valori di c.
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Metodo della curva
(o retta) di taratura
A
A3
Le coordinate di A e c
individuano tanti punti
A2 quante sono le soluzioni
osservate, per i quali si fa
A1 passare la retta.
c1 c2 c3 g/100 mL 22
Metodo della curva
(o retta) di taratura
A
Si misura l’assorbanza Ax della
soluzione a concentrazione
A3 incognita cx e si risale a
quest’ultima tracciando dal
Ax
valore di Ax la parallela
A2
all’ascissa fino a incontrare la
retta e da questa la
A1 perpendicolare alla stessa
ascissa.
c1 c2 cx c3 g/100 mL
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Metodo della curva
(o retta) di taratura
Dalla concentrazione così trovata ed espressa in
g/100 mL o % p/v si risale alla % p/p della specie
contenuta nel prodotto esaminato dividendo cx per la
concentrazione effettiva cs della soluzione
esaminata:
Cx %p/p Cx
= %p/p = x 100
Cs 100 Cs
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Metodo della curva
(o retta) di taratura
Per es. se all’assorbanza misurata corrisponde la
concentrazione cx = 4.5 mg/100 mL, mentre la
concentrazione della soluzione esaminata è cs = 5
mg/100 mL, la percentuale della specie nel prodotto
è:
4.5
% p/p = x 100 = 90
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In 100 g di prodotto sono presenti 90 g della specie,
ovvero il prodotto contiene il 90% della specie
cercata. 25
Analisi quantitativa mediante
misure di assorbimento
Vantaggi:
Ampia applicabilità
Buona sensibilità (da 10-4 a 10-7 M)
Da moderata ad alta selettività
Buona accuratezza
Facilità dell’acquisizione dei dati
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Strumentazione
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Titolazioni spettrofotometriche
Una curva di titolazione spettrofotometrica
è un grafico dell’assorbanza in funzione
del volume di titolante.
Lo spettrofotometro rileva il cambiamento
di colore dell’indicatore permettendo la
determinazione accurata del punto finale
della titolazione.
Si rappresenta graficamente l’assorbanza
in funzione del pH.
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Determinazioni
spettrofotometriche
riportate in EPh IV Ed.,
IV supplememto
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