PRÁCTICA Nº1

ESPECTROFOTOMETRÍA: Cuantificación de proteínas.

I. REACTIVO Y SOLUCIONES.

Los alumnos dispondrán de una batería de reactivos y soluciones para la realización de la práctica.

II. PROCEDIMIENTO.
1. Método de Bradford:
a. Armar blanco de absorción, soluciones para curva y muestra problema con los volúmenes
indicados en la siguiente tabla:
Solución Blanco Celda 1 Celda 2 Celda 3 Celda 4 Celda 5 MP
BSA, 10 mg/mL (µL) 0 20 30 50 75 100 40
Agua (µL) 100 80 70 50 25 0 60
Reactivo de Bradford (mL) 3 3 3 3 3 3 3

b. Dejar en reposo por 10 minutos a temperatura ambiente las celdas.

c. Medir absorbancias a 595 nm en el espectrofotómetro
d. Realizar curva de Calibrado

2. Método de Lowry:
a. Armar blanco de absorción, soluciones para la curva y muestra problema con los
volúmenes indicados en la siguiente tabla:

Solución Blanco Celda 1 Celda 2 Celda 3 Celda 4 Celda 5 MP

BSA, 1 mg/mL (µL) 0 20 40 60 80 100 50
Agua (µL) 500 480 460 440 420 400 450
RCA (µL) 500 500 500 500 500 500 500

b. Esperar 10 minutos a temperatura ambiente y agregar 2 mL de Reactivo de Folin-

Ciocalteau a todos los tubos
c. Llevar soluciones a baño termorregulado a 55ºC durante 5 minutos, luego enfriarlos
d. Realizar mediciones de absorción a 650 nm y realizar curva de calibrado