Saggi animali per valutare attivit antinfiammatoria e analgesica

Saggio delleritema da raggi UV Il saggio delleritema da raggi UV un saggio che valuta lattivit antinfiammatoria in un modello di infiammazione acuta. Si basa sul fatto che lesposizione della pelle ai raggi ultravioletti genera un infiammazione locale acuta e in particolare la formazione di un eritema, cio un arrossamento, dovuto allaumento del flusso ematico. Gli animali utilizzati sono le cavie da laboratorio di entrambi i sessi di 350g; si utilizzano 4 animali per ogni gruppo di trattamento e di controllo Il procedimento prevede che 18h prima dell'esposizione gli animali vengono lavati e depilati con una crema depilatoria sul dorso su entrambi i lati dopodich vengono risciacquati. Trascorse le 18 ore viene somministrata met dose del farmaco da testare (dissolta o sospesa nel veicolo) nel caso dei gruppi trattamento o solo il veicolo nel caso del gruppo di controllo; la dose di 10 ml/kg. Quindi gli animali sono inseriti in una cintura di pelle che presenta un foro di dimensioni 1,5 x 2,5 cm in modo tale che solo questa zona di pelle sar esposta, dopodich vengono esposti a 20 cm e per 2 min sotto una lampada UV precedentemente riscaldata per 30 min. Dopodich viene somministrata per via orale la rimanente met dose di farmaco da testare nel caso dei gruppi di trattamento o solo il veicolo nel caso del gruppo controllo. Infine si valuta la gravit delleritema con un punteggio che va da 0 nessun eritema a 4 eritema grave.

Saggio dell'edema da carragenina Il saggio delledema da carragenina un saggio che valuta lattivit antinfiammatoria in un modello di infiammazione acuta. Si basa sull'osservazione che l'iniezione per via sottocutanea di carragenina induce un infiammazione locale acuta e in particolare ledema, cio un gonfiore, dovuto allaumento della permeabilit vasale e quindi alla formazione di un essudato. Gli animali usati sono ratti Sprague Dawley di entrambi i sessi di 160-200 g; si utilizzano 10 animali per ogni gruppo di trattamento e di controllo. Il protocollo prevede che 30 min prima di effettuare il test sia somministrato il farmaco da testare nel caso dei gruppi di trattamento o un farmaco di riferimento nel caso del gruppo controllo (fenilbutazone). Successivamente vengono iniettati nellaponeurosi plantare della zampa posteriore sinistra del ratto 0,05 ml di sospensione di carragenina all1% in soluzione fisiologica (NaCl 0,9%). A questo punto si valuta l'entit delledema misurando con un pletismometro il volume delle zampe posteriori sia destra che sinistra subito dopo liniezione di carragenina e dopo 3, 6 e 24h. Ovviamente pi efficace sar il farmaco da testare, tanto minore sar ledema e quindi il volume delle zampe.

Saggio dellipertermia da lievito di birra

Il saggio dellipertermia da lievito di birra un test che valuta l'attivit antipiretica di un farmaco in un modello di infiammazione acuta. Gli animali utilizzati sono ratti Wistar di entrambi i sessi di 150 g; si utilizzano 6 animali per gruppo di trattamento e di controllo. Il protocollo prevede innanzitutto la registrazione della temperatura iniziale degli animali per via rettale mediante un termometro; successivamente si iniettano 1ml/100g di una sospensione di lievito di birra al 15% in gomma arabica al 2% sul dorso degli animali subito sotto il collo e poi si misura nuovamente la temperatura dopo 18h e dopo altri 30 min. Si mantengono nello studio solo quegli animali che hanno una temperatura di almeno 38C. A questo punto si somministra x os il farmaco da testare nel caso dei gruppi di trattamento o un farmaco di riferimento nel caso del gruppo controllo e successivamente si registrano le temperature dopo 30 minuti, 1, 2 e 3 h. Saggi infiammazione cronica Saggio del granuloma da pellettes di cotone Il saggio del granuloma da pellettes di cotone un saggio che valuta lattivit antinfiammatoria in un modello di infiammazione cronica. Si basa sul fatto che i pellets di cotone sono riconosciuti come corpi estranei dell'organismo e di conseguenza stimolano una risposta infiammatoria che determina un infiammazione cronica e la formazione di un granuloma. Gli animali utilizzati sono ratti Wistar maschi di 200 g Il protocollo prevede che l'impianto sul dorso degli animali (ovviamente anestetizzati con etere etilico) da entrambi i lati a livello scapolare di pellets di cotone di 20 mg costituiti da cotone standardizzato per uso odontoiatrico oppure da cotone grezzo. Gli animali sono quindi trattati per 7 giorni col farmaco da testare nel caso dei gruppi di trattamento o col farmaco di riferimento nel caso del gruppo controllo. Successivamente gli animali vengono sacrificati e i pellets di cotone vengono estratti, lasciati asciugare e poi pesati. Il peso netto (cio meno il peso iniziale del cotone) un indice dell'estensione del granuloma che si formato di seguito allinfezione cronica Osteoartrite da adiuvante di Freund Il saggio da adiuvante di Freund un saggio che valuta lattivit antinfiammatoria in un modello di infiammazione cronica e in particolare di osteoartrite. Si basa sul fatto che ladiuvante di Freund provoca un aumento della risposta immunitaria e quindi dellinfiammazione. Ladiuvante di Freund completo costituito da una sospensione di acqua e oli minerali (soprattutto paraffina) e frammenti di Mycobacterium tuberculosis disattivati col calore; ladiuvante incompleto privo dei micobatteri. Gli animali utilizzati sono ratti Wistar Lewis maschi di 130-200g; si utilizzano 10 animali per ogni gruppo di trattamento e di controllo. Il protocollo prevede che il 1 giorno si iniettano 0,1 ml di adiuvante completo di Freund nellaponeurosi plantare della zampa posteriore sinsitra del ratto; negli anim ali dei gruppo controllo si inietta ladiuvante incompleto. Dal 1 al 12 giorno si somministr per via orale o sottocutanea il farmaco da testare nel caso dei gruppi di trattamento o il farmaco di riferimento nel caso del gruppo controllo. Il 5 giorno s misura il volume di entrambe le zampe posteriori destra e sinistra con un pletismometro (ladiuvante provoca infiammazione e quindi edema) in maniera tale da valutare in particolar modo la lesione primaria che evidenziabile tra 3-5giorno. Dal giorno 12 al 21 non si

somministrano farmaci; dopodich il 21 giorno si misurano nuovamente entrambe le zampe posteriori destra e sinistra, si misura anche il peso corporeo dell'animale perch una diminuzione di peso un indice della gravit dell'infiammazione e infine si assegna un punteggio allosteoartrite valutando la presenza o meno di noduli e rossori alle orecchie e alla coda, di gonfiori al naso, e l'entit della lesione a livello delle zampe anteriori e posteriori. Saggio della piastra calda Il saggio della piastra calda un saggio che valuta lattivit analgesica e si basa proprio sullosservazione del tempo di reazione al dolore degli animali posti su una superficie riscaldata a 55C. Gli animali utilizzati sono topi maschi e femmine di 18-22 g; si utilizzano 10 animali per gruppo di trattamento o controllo. La procedura prevede che per prima cosa si pone l'animale sulla piastra riscaldata 55C pu essere una superficie vediamo di vetro e si misura il tempo che impiega l'animale per avere delle reazioni al dolore quali appunto leccarsi le zampe o spostarsi. Successivamente si somministra per via orale il farmaco da testare nel caso dei gruppi di trattamento o il farmaco di riferimento nel caso del gruppo controllo, quindi si effettua nuovamente la misura del tempo di reazione dopo 20 min, 1h e 1,5h dalla somministrazione del farmaco. Saggio dellimmersione della coda Il saggio dellimmersione della coda o flick tail test un saggio che misura lattivit analgesica di un farmaco. Gli animali utilizzati sono ratti Wistar femmine di 170-210g Il procedimento prevede che gli animali vengono posti in una gabbia costrittiva che permette per alla coda di muoversi liberamente, per prima cosa si misura il tempo di reazione ponendo la coda dellanimale in acqua calda a 55C e si registra il tempo che passa prima che animale ritragga la coda. A questo punto si somministra il farmaco da testare per via orale nel caso dei gruppi di trattamento o il farmaco di riferimento nel caso del gruppo controllo. Successivamente si ripete il test di immersione della coda e la registrazione dei tempi di reazione dopo , 2, 3, 4 e 6h. Il tempo di immersione non deve superare per i 15 secondi e tra un immersione l'altra la coda deve essere accuratamente asciugata. Saggio di Randal-Sellitto Il saggio di Randal e Sellitto un saggio che valuta lattivit analgesica Gli animali utilizzati sono ratti Wistar maschi di 130-175g; si utilizzano gruppi di almeno 7 animali per gruppo di trattamento o controllo e devono esserci almeno 4 gruppi trattamento Per prima cosa si iniettano 0,1 ml di lievito di birra al 20% in acqua per via sottocutanea nellaponeurosi plantare della zampa posteriore sinistra del ratto e in questo modo si induce l'infiammazione; quindi si misura la soglia del dolore in entrambe le zampe posteriori destra e sinistra utilizzando un analgesimetro, cio un apparecchio che esercita una pressione crescente sulla zampa. A questo punto viene somministrato per via orale il farmaco da testare nel caso dei gruppi di

trattamento o il farmaco di riferimento nel caso del gruppo controllo e si misura nuovamente la soglia del dolore con l'analgesimetro dopo 15 e 30 min.