Chimica Analitica II

[APPUNTI DEL CORSO]

Vademecum del corso del Reisenhofer e alcune definizioni di Adami. Enjoy it

Metodi Spettroscopici ................................................................................................................................................. 3 Spettroscopia UV/ vis............................................................................................................................................. 3 Vantaggi .............................................................................................................................................................. 5 Problematiche ..................................................................................................................................................... 6 Titolazioni spettrofotometriche.............................................................................................................................. 7 Spettroscopia infrarossa ........................................................................................................................................ 7 Svantaggi ............................................................................................................................................................. 8 Assorbiento Atomico ............................................................................................................................................. 8 Spettroscopia ad emissione...................................................................................................................................10 Spettrometria di massa ..............................................................................................................................................11 Metodi Cromatografici ...............................................................................................................................................13 Natura del processo di separazione .......................................................................................................................13 Gas cromatografia ................................................................................................................................................14 Cromatografia Liquida...........................................................................................................................................17 Di adsorbimento .................................................................................................................................................17 Di ripartizione .....................................................................................................................................................17 Problemi.............................................................................................................................................................18 A scambio ionico...................................................................................................................................................18 Applicazioni ........................................................................................................................................................19 Permeazione su Gel ..............................................................................................................................................19 Tecniche elettroforetiche ......................................................................................................................................20 HPLC(high performance liquid chromatography) ...................................................................................................21 L-L a fasi legate .....................................................................................................................................................21 Tarature ...............................................................................................................................................................22 Confronto fra gas cromatografia e cromatografia liquida.......................................................................................23 Metodi Elettroanalitici................................................................................................................................................24 variazione dellintensit di corrente con potenziale applicato..............................................................................24 Elettrogravimetria.................................................................................................................................................25 Sovratensioni (polarizzazioni cinetiche) ...............................................................................................................26 Applicazioni gravimetriche a i = cost...................................................................................................................27 Applicazioni gravimetriche a Ecat = cost................................................................................................................27 Elettrolisi interne, spontanee...........................................................................................................................28 Metodi coulombometrici ......................................................................................................................................28 Coulombometria a gas ........................................................................................................................................29 Titolazioni coulombometriche ............................................................................................................................29 Elettrogenerazione esterna di reagenti ...............................................................................................................30 Determinazione end-point ..................................................................................................................................30

Metodi polarografici e voltammetrici ....................................................................................................................31 Contributi a ................................................................................................................................................32

Standard addition ...............................................................................................................................................33 Legame fra e la concentrazione di analita .......................................................................................................33

Processi faradici e non faradici ............................................................................................................................34 Titolazioni amperometriche ..................................................................................................................................37 Metodi DEAD-STOP.............................................................................................................................................38 Polarografie derivate e a impulsi ...........................................................................................................................39 Importanza del DROP TIME .................................................................................................................................39 Elettrodi: HDME e MTFE .......................................................................................................................................39 ASV ( anodic stripping voltammetry ) ....................................................................................................................40 Qualit del dato .........................................................................................................................................................41 Criteri per la scelta del metodo analitico.....................................................................................................................42 Tecniche ....................................................................................................................................................................42 Tecnica, metodo, procedura o protocollo? .................................................................................................................42 Procedura analitica totale ..........................................................................................................................................43 Campionamento ........................................................................................................................................................43 Concentrazioni ...........................................................................................................................................................43

TEORIA
METODI SPETTROSCOPICI
I metodi spettroscopici si basano sullinterazione dellonda elettromagnetica con la materia. Queste sono: 1. trasmissione 2. assorbimento 3. rifrazione (deviazione dellonda alla separazione di fase di due mezzi con diversa densit) 4. riflessione (ritorno di parte dellonda) 5. scattering (in dispersioni) 6. polarizzazione Ci interessano in particolare le prime due. Fondamentale la legge di Beer, che lega lassorbimento di un dato analita con la sua concentrazione in modo lineare. Dove il coefficiente di estinzione molare, che, come A, dipende dalla lunghezza donda che osserviamo, perch ogni specie assorbir diversamente diverse lunghezze donda. b invece il cammino ottico, e C la concentrazione. Previa retta di taratura posso dunque conoscere la concentrazione di un analita incognita.

SPETTROSCOPIA UV/ VIS

Lassorbimento dovuto alla promozione di elettroni della molecola o dellatomo a livelli energetici pi elevati. A seconda dellenergia dei legami fra atomi, si pu avere la promozione dellelettrone a diverse lunghezze donda, pi o meno energetiche. Doppi legami ed elettroni spaiati daranno probabilmente assorbimento del visibile. Legami pi stabili invece daranno picchi nellUV, come nel caso del benzene, che ha due bande E nellUV lontano (difficilmente espl orabile perch lossigeno dellaria opaco a quelle lunghezze donda, e si dovrebbe operare in vuoto spinto), e una banda B nel vicino UV, che tuttavia meno intensa. Lintensit di una banda non sempre il fattore pi importante da considerare. Anche i composti inorganici, a seconda dellambiente in cui sono solvatati, assorbono nel visibile. Ad esempio il nichel, verde se solvatato da 6 molecole dacqua, diventa incolore in ambien te cloridrico, e il rame, in acqua verde, diventa blu in ambiente ammoniacale. I Sali delle terre alcaline, essendo gli orbitali f schermati dagli altri orbitali pi interni, come con il cloruro di prosidinio, non cambiano spettro di assorbimento nei diversi ambienti, e quindi sar pi facile una determinazione qualitativa. Lindagine quantitativa invece pi difficile, perch i picchi sono pi stretti, e invece si preferiscono picchi pi allargati BANDA PASSANTE!

Spettrofotometro a doppio raggio:

camp.

amp.

recorder

Blank

Sorgenti: visibile: tungsteno, con emissione costante fra 320 e 2500 nm (utilizzata in laboratorio) UV: lampada a deuterio, 180 fino a 375 nm Monocromatori: - Prisma o vetro nel visibile, opaco per agli UV o quarzo per UV o IR: NaCl, KBr, CsI - Reticolo di rifrazione o ricorda il CD: il raggio viene scomposto per riflessione. (si avr raggio leggermente meno intenso, perch riflesso, ma larga scala di utilizzo). Celle: In vetro o in quarzo. 1 cm (usata per determinare cromo complessato con difenilcarbazone), 1 mm o 2-5 cm. Rilevatori: cella fotovoltaica, che trasforma il segnale luminoso in elettrico cella a fotoconduttivit, che subisce un cambiamento della resistenza a causa della radiazione. fotomoltiplicatori, visti in laboratorio. Nel detector ci sono molte superfici di impatto, cosicch il fotone dia un segnale pi intenso. o Tubo fotomoltiplicatore: Il fotomoltiplicatore costituito da un tubo in vetro al cui interno stato praticato il vuoto, in cui presente un anodo e diversi elettrodi dinodi. I fotoni colpiscono attraverso una finestra di ingresso una superficie chiamata fotocatodo, ricoperta di uno strato di materiale che favorisce l'effetto fotoelettrico. A causa di questo effetto vengono emessi degli elettroni, chiamati fotoelettroni che sono focalizzati da un elettrodo verso lo stadio di moltiplicazione. Questo stadio costituito da una serie di elettrodi ciascuno caricato ad un potenziale superiore al precedente. Il primo elettrone emesso per effetto fotoelettrico subisce una accelerazione a causa del campo elettrico e acquisisce energia cinetica. Quando l'elettrone colpisce il primo elettrodo del dinodo provoca l'emissione secondaria di diversi elettroni di minore energia. La struttura del sistema progettata in modo che ciascun elettrone emesso da un elettrodo venga accelerato e provochi l'emissione di diversi elettroni dall'elettrodo successivo. Si ha cos un fenomeno a cascata per cui un singolo fotone che colpisce

il tubo provoca il passaggio di moltissimi elettroni. Al termine della sequenza di elettrodi gli elettroni colpiscono un anodo, ed un rapido impulso elettrico indica il rilevamento del fotone. I fotomoltiplicatori devono essere schermati magneticamente, in quanto un campo magnetico esterno (anche quello terrestre) pu deviare il percorso degli elettroni al suo interno. Il segnale uscente deve essere comunque proporzionale allintensit del raggio entrante. Prima dellanalisi deve essere effettuata una taratura, dopodich si pu usare o lassorbanza (preferita) o la trasmittanza, che un valore percentuale tale che:

Questa per non varia proporzionalmente con la concentrazione, ma in modo esponenziale con essa, essendo lassorbanza il logaritmo di T/100 cambiato di segno. Si imposta il fondo scala, a meno di non voler seguire un metodo di maggiore precisione (extreme precision), con il blank e il limite superiore con qualcosa di opaco, lo shutter. Blank: soluzione in tutto e per tutto uguale ai sample di taratura e al campione, con lunica differenza di non contenere lanalita che voglio analizzare. Aspetti della legge di Beer: se ci sono pi specie in soluzione, che assorbono alla stessa lunghezza donda in modo diverso, lassorbanza misurata sar falsata. la cella stessa dar un minimo di riflessione della radiazione. VANTAGGI Vasta applicabilit, per analiti organici ed inorganici Elevata sensibilit: fino a concentrazioni di 10-4 - 10-6 M. (con un 40'000) Misure facili e rapide Selettivit, sulla quale si pu operare, come vedremo ora. attorno ai 10'000-

Per migliorare selettivit: Si possono usare reagenti specifici, che reagiscano solo con lanalita, come nel caso di acido sulfanilico e nitriti, che assumono cos una colorazione rossa, o con il reagente di Nessler (uno iodiomercurato di potassio) per determinare N ammoniacale (NH3, NH4+), che diventa rosso mattone. In laboratorio abbiamo visto il caso del difenilcarbazide che complessava ossidandosi con il cromo presente in soluzione, e assumendo colorazione rosa violacea. Si pu operare sullaggiustamento del numero di ossidazione, come nel caso del ferro (II) a ferro (III), con acqua ossigenata, per poi farlo reagire con tiocianato, e ottenere un complesso rosso sangue. Controllando il pH, per passare ad esempio da ione cromato a ione bicromato, e spostarne il picco di assorbimento. Con masking agents, eliminando cio le specie interferenti

PROBLEMATICHE Equilibri interferenti alla lettura. Se si vuole analizzare la concentrazione di un indicatore, bisogner tamponare le soluzioni del campione e standard di taratura affinch lassorbimento si possa ritenere linearmente dipendente dalla concentrazione. Ammettiamo infatti di voler determinare la concentrazione di un indicatore; questo presenter sicuramente due picchi nel visibile. Una volta scelto quale dei due prendere in considerazione, se si ponessero negli standard diverse concentrazioni iniziali note dellanalita, questo poi si dissocerebbe in parte, a seconda della concentrazione (pi concentrato, pi piccola la frazione molare della specie dissociata), variando perci laltezza del picco, che d ipende logicamente A dalla concentrazione della sola specie protonata o 1 tamp deprotonata, e non dalla loro somma. Vediamo nel grafico le assorbanze del verde di bromo cresolo a valori di pH in cui prevale la forma acida, protonata, in giallo, a valori di pH 2 basici, dove prevale la forma dissociata e a pH intermedi (verde). Se lasciassimo la soluzione non tamponata si avrebbe allora un cambiamento del pH al variare della concentrazione, tale che per soluzioni pi concentrate si C avrebbe sempre pi assorbanza alla 1 (picco giallo, specie protonata) e sempre meno intenso in 2 (picco blu, specie deprotonata). Per avere un picco stabile bisogner perci tamponare la soluzione ad un dato pH, cos da bloccare lequilibrio acido-base dellanalita ad un punto voluto, e avere una risposta lineare fra concentrazione e assorbimento. Si pu, in alternativa, lavorare sulla lunghezza donda del punto isosbestico. Si forma un isosbestico se ad una data lunghezza donda due specie hanno lo stesso coefficiente di dispersione molare . In pratica, nel diagramma assorbanza vs lunghezza donda i grafici si intersecano. Quando si ha una reazione 1 a 1 e la si segue per via spettrofotometrica nel punto isosbestico, non si nota cambiamento di assorbanza. Anche nel caso di un indicatore si ha questa situazione, e perci si pu lavorare nellisosbestico lasciando libero il pH. Infatti, per una generica reazione :

Ma allisosbestico si ha che: E dunque:

Ed essendo , possiamo conoscere la concentrazione totale della specie indipendentemente dalla coordinata di reazione, e dunque dal grado di dissociazione dellanalita. Limitazione della legge di Beer: dal monocromatore al campione arriver sempre una banda passante, ovverosia londa non rigorosamente monocromatica. Per questo bisogna basare lanalisi quantitativa su bande pi larghe, in quanto picchi stretti hanno molto diverse per lunghezze donda molto vicine.

Errore analitico: solitamente spettrofotometri hanno incertezza su T pari al 0.5%, e siccome la misura della concentrazione dipende da T, lerrore minimo che si pu fare circa all1%, e ci si verifica per una assorbanza di circa 0.43( ). Ci si pu praticamente sempre ricondurre a queste condizioni perch si pu concentrare la soluzione, facendo attenzione ad eventuali equilibri interferenti, o espandere il cammino ottico.

TITOLAZIONI SPETTROFOTOMETRICHE

1.0%

Si possono operare anche titolazioni spettrofotometriche, aggiungendo del 36% T titolante in modo da cambiare lassorbimento che si misura ad una data lunghezza donda. Ad esempio, titolando una soluzione contenente rame (II) e bismuto (III) con EDTA, e impostando il detector alla lunghezza donda di 745 nm, dove si sa essere lassorbimento del complesso rame e EDTA, si ottiene che: allinizio la soluzione incolore, e non si registra assorbimento anche dopo diverse aggiunte di EDTA, perch il bismuto un acido di Lewis pi forte del rame e tender a legare lEDTA prima di quanto faccia laltro, e il complesso che forma con lEDTA non assorbe a 745 nm. Una volta esaurito il bismuto in soluzione, lEDTA reagir con il rame, e si avr un cambiamento nellassorbimento fino a che il rame non sia tutto legato. Cos si sono titolati ambedue i cationi. Se non avessimo a disposizione un buon indicatore, lo potremmo usare comunque, e poi immettere in soluzione un buonissimo legante incolore dellanalita. Cos questo sottrae prima lanalita libero in soluzione, che lindicatore non riuscito a complessare, e poi si legher allanalita legato allindicatore, avendo una Kf pi elevata. Cos facendo, quando la soluzione torna ad essere incolore, so di aver titolato lanalita.

SPETTROSCOPIA INFRAROSSA
Usata solitamente per la determinazione qualitativa di specie organiche (un analisi quantitativa difficile perch i picchi sono molto stretti), esiste infatti il FINGERPRINT (1'500-700cm-1), una regione di spettro nella quale piccoli cambiamenti strutturali generano grandi differenze di segnale. Una molecola assorbe nellinfrarosso solo se subisce una variazione del momento di dipolo a causa di deformazione di legami fra eteroatomi.

Le tipologie vibrazionali molecolari possono essere: - Stretching (allungamento o accorciamento dei legami) - Bending (in-plane bending: scissoring e rocking; out-of-plane bending: wagging, twisting) Sorgenti: (emettono calore) Lampade di Nernst (ossidi di terre rare, refrattari) Globar (lampada in carborundum) Monocromatori: Alogenuri di metalli alcalini: NaCl, KBr, CsBr,LiF (non subisce umidit, al contrario degli altri) Campione: Se in soluzione: si scioglie preferibilmente in CCl4 (trasparente a 4000-1'300 cm-1) o solfuro di carbonio (trasparente a 1300-625 cm-1). Se come liquido puro: cammino ottico stretto, su pastiglie di NaCl o KBr. Se solidi ( < 2 ) si disperdono in KBr in rapporto 1 a 100 o si disperdono in Nujol. Se > 2 , la radiazione viene rifratta anzich assorbita e bisogna trattare in qualche modo lanalita, per ricondursi ai casi precedenti. Detector: Termocoppie Balometri (basati su variazione di resistenza) Celle pneumatiche (variazione della forma) SVANTAGGI Scarsissima riproducibilit dellanalisi. possibile infatti solo unindagine se mi-qualitativa, grazie alla specificit dello spettro. Questo viene registrato in termini di trasmittanza cos da poter ricavare subito il rapporto fra lintensit finale e quella iniziale.

ASSORBIENTO ATOMICO
Una generica molecola pu essere sottoposta a: Dissociazione (formazione di aggregati atomici) Atomizazione (dissociazione per cui la molecola si scinde nei singoli ioni) Eccitazione elettronica (promozione elettronica a livelli energetici pi alti) Emissione (ritorno dellelettrone a stati di eccitazioni inferiori, con emissione di E) Ionizzazione (formazione di un catione) Un macchinario per spettroscopia ad assorbimento atomico costituito da: Sorgente: Hollow catode. La sorgente a catodo cavo non emette una radiazione uniforme, bens uno spettro di emissione specifico dellelemento di cui il catodo composto.

Per emettere lo spettro in questione si genera una corrente ionica fra anodo e catodo, che atomizza alcune particelle di questultimo, che a loro volta emettono una radiazione quando

tornano nel loro stato fondamentale. Il cilindro cavo cosicch gli atomi che ricadono sul catodo rimangano l, e la lampada duri di pi. La radiazione cos emessa particolarmente monocromatica, e non si sarebbe potuta ottenere con un monocromatore. La banda passante di un monocromatore infatti sarebbe troppo larga, e la misura dellassorbimento atomico (differenza fra il segnale emesso e quello finale) sarebbe impossibile, data la sua piccola area, che non influirebbe sulla grande banda policromatica del monocromatore. Invece la banda di emissione atomica ha unaltezza e un area paragonabile a quella dellassorbimento, e dunque la misura possibile. Il picco pi alto dello spettro di emissione viene detto riga di risonanza, che corrisponde allemissione pi probabile (al primo orbitale libero) dellelemento. Svantaggi: la lampada pu essere usata unicamente per lanalisi dellelemento di cui il catodo composto, e dunque bisogna averne una per elemento. Chopper: Siccome anche il campione che viene bruciato, nella sua parte eccitata, emette radiazione, servir un componente del macchinario che interrompa il cammino della radiazione proveniente dalla lampada in modo da far arrivare al detector solo la radiazione emessa dalla fiamma. In questo modo si pu ricavare, per semplice sottrazione del segnale della sola fiamma dal segnale totale, leffettivo assorbimento della radiazione da parte del campione atomizzato. Infatti la fiamma provoca una lieve emissione atomica indesiderata. Consideriamo lequazione:

Dove: il numero di atomi presenti in un particolare stato eccitato. il numero di atomi presenti allo stato fondamentale. - P sono fattori statistici che fanno riferimento agli stati eccitato e fondamentale, e danno una misura della probabilit della presenza di atomi eccitati in quel determinato stadio. - E sottosegnato j lenergia necessaria alleccitamento. - K la costante di Boltzman Alla temperatura della fiamma, di circa 2'500 K, in corrispondenza delleccitazione pi probabile del sodio, si avranno solamente due atomi eccitati su 10'000 allo stato fondamentale. Per questo nellICP (che vedremo pi avanti) si arriva a temperature molto pi elevate, cos da aumentare la percentuale di atomi eccitati. (Questa emissione atomica in realt sarebbe gi sufficiente per unanalisi quantitativa del sodio, ma per altri elementi, in cui le energie di eccitamento diventano pi alte, serviranno temperature pi elevate per avere emissioni accettabili) Bruciatore: A fiamma: In questo caso il campione viene nebulizzato e mescolato ad aria e acetilene, per poi essere bruciato. I flussi di aria, acetilene e soluzione campione devono essere il pi possibili regolari per evitare fluttuazioni nella rilevazione del segnale. Delle gocce formate dalla nebulizzazione del campione passeranno attraverso labbattimento goccioline solo le pi minute, mentre le altre verranno drenate e allontanate. Il campione viene bruciato in modo che il campione vada incontro ad atomizzazione, e sia in grado, nella sua percentuale allo stato fondamentale (molto elevata, perch con il bruciatore a fiamma solo 2 atomi su 10'000 saranno eccitati), di assorbire lo spettro emesso dal catodo. A fornelletto di grafite (flameless)

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Essendo la grafite un semiconduttore, si pu scaldare il cilindretto applicando ad esso una differenza di potenziale. Questa operazione viene eseguita in ambiente inerte (N2 o Ar) di modo che il fornelletto non si ossidi. Il campione viene iniettato nel cilindretto con una minisiringa (di solito automatizzata) e posto, se solido, su una piattaforma detta lvov. Vantaggi: o i volumi di soluzione che occorrono sono minimi, mentre nel caso della fiamma si doveva avere un flusso costante, e un volume non inferiore ai 5 mL. Ci sono casi, come con i fluidi corporei, in cui prelevare grandi volumi problematico. o Il campione permane nel cilindretto, e quindi nel cammino ottico, pi a lungo di quanto non faccia nel caso della fiamma, dove la corrente ascensionale tende a portar via lanalita dopo qualche frazione di secondo. Ne deriva un ordine di grandezza di sensibilit in pi. o Consente di operare con solidi o Si pu rilevare la presenza di un elemento in qualsiasi stato di ossidazione dello stesso, perch il campione viene atomizzato. Monocromatore: perch usarlo? Qual lutilit del monocromatore posto solamente dopo il campione? Serve per isolare la riga di spettro che abbiamo deciso di considerare nellanalisi, che potrebbe essere o meno quella di risonanza, a seconda delle interferenze presenti.

SPETTROSCOPIA AD EMISSIONE
Le tecniche di emissione sono diverse 1. A fiamma: per determinazione analitica di metalli alcalini e alcalino-terrosi si pu direttamente misurare la loro emissione settando il monocromatore sulla riga di risonanza del metallo. Questo perch lelettrone o gli elettroni dellultimo orbitale sono facilmente eccitabili, e dunque una percentuale maggiore dellanalita si ecciter nel bruciatore, fornendo uninformazione quantitativa. 2. Ad arco: meno utilizzata per la scarsa riproducibilit della scarica, consiste nel porre una piccola quantit di campione fra due elettrodi di grafite ai quali viene applicata una differenza di potenziale di ~ 200 V. Ad un certo punto si ottiene una scarica che eccita il campione, che emette dunque radiazione. 3. A scintilla: anche in questo caso la scintilla e la quantit di campione utilizzata sono difficilmente riproducibili. Linformazione che ne deriva inoltre solo semi -quantitativa. Il sistema composto da due circuiti, uno primario, con un generatore di corrente alternata, e uno secondario, al quale viene applicata, attraverso un trasformatore che opera fra le due bobine dei due circuiti, una differenza di potenziale che va da 10'000 a 40'000 V, e che permette di arrivare a temperature pi elevate, e quindi riuscire ad eccitare elettroni pi legati al loro nucleo. Il circuito secondario riesce ad accumulare carica grazie ad un condensatore, che una volta saturato provocher due scariche fra le due coppie di

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elettrodi, delle quali una serve per riferimento, e laltra simile a quella descritta per larco. 4. I.C.P. (Inductively Coupled Plasma) Ultima ma non meno importante, la pi usata delle tecniche ad emissione, perch molto accurata e precisa, e perch permette di determinare in ununica analisi le concentrazioni di fino a trenta diversi analiti. Il campione, aspirato tramite una pompa peristaltica per mantenere il flusso il pi costante possibile, viene iniettato nello strumento e nebulizzato assieme ad argon, entrando in dei tubi concentrici chiamati Tubi di Crookes. In questi tubi, il gas rarefatto viene bombardato da un flusso di elettroni (una corrente elettrica), che colpendo gli ioni del gas li ionizza. Questa scarica generata dalla bobina Tesla, che genera un campo magnetico oscillante nel tempo con una frequenza di 27MHz, cos da provocare lo sfregamento, molto intenso e regolare, ed estremamente riproducibile, degli ioni di argon, che innescano il plasma. La temperatura sale in alcuni istanti a 6000-10'000 K, e per non fondere lo strumento necessario un flusso di Ar refrigerante, e che tenga il gas lontano dalle pareti di quarzo. Le emissioni danno risposte lineari in un grande intervallo di ordini di grandezza (addirittura sei ordini), e dunque serviranno detector molto avanzati, che riescano a rispondere a segnali molto deboli e molto intensi. In laboratorio abbiamo analizzato ferro, zinco, calcio e magnesio in lettura a scansione, mentre sodio e potassio con lettura simultanea.

SPETTROMETRIA DI MASSA
Una generica molecola gassosa bombardata da elettroni pu ionizzarsi (come appena visto). Siccome lo ione sar meno stabile (pi energetico) della molecola di partenza, probabile che lo ione molecolare si scinda e si frammenti. Ci che pu accadere : Frammentazione (formazione di specie radicaliche e specie cationiche) Riarrangiamento Dimerizzazione (contrariamente alle altre reazioni, la formazione di complessi dimeri di secondo ordine, e dunque dipende dalla pressione in modo diverso rispetto alle altre. Variando la pressione si pu dunque capire che frammenti siano dimeri e quali no) Comunque sia, ci che conta che in seguito a bombardamento elettronico si formano diverse specie cariche, con diverse masse. Strumento per la spettrometria di massa:

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il campione viene gassificato e introdotto nel macchinario, passando attraverso una camera di ionizzazione dove avviene il bombardamento elettronico. Una volta ionizzate, le diverse particelle generate attraverso i processi di scissione visti sopra vengono accelerate dal campo elettrico presente fra le due piastre di un condensatore, e passano attraverso un foro dellarmatura negativa entrando in un corridoio di accelerazione. Infatti si applica al fascio ionico un campo magnetico perpendicolare al moto degli ioni, che vengono deviati con traiettoria circolare caratterizzata da un raggio che dipende dalla massa e dalla carica dello ione ( che per in ogni caso sar unitaria). Regolando il campo magnetico posso perci scegliere quale particella far attraversare tutto il macchinario e arrivare nel collettore, per poi registrare un segnale come corrente ionica. Vediamo come la massa del campione uscente dipende da H, intensit del campo magnetico, e dalla velocit iniziale, v.

ATTENZIONE! Si considerano RISOLTI, in generale, due picchi che non si sovrappongano per pi del 10% della loro altezza. Questo anche per le altre tecniche. Esempio Ammettiamo di aver isolato un analita da una matrice, e di volerlo analizzare con questa tecnica. Lo spettro che si ricava variando lintensit del campo magnetico nel tempo avr tanti picchi quanti i frammenti carichi formati. Il picco pi a destra sar il segnale del frammento pi pesante, in un grafico intensit segnale vs massa del frammento, ma avr altezza molto bassa, tanto che a volte per essere rilevato deve essere amplificato. Questo perch lo ione molecolare generalmente instabile, e si frammenta in pi pezzi. Fra un alcano lineare e un PAH poliaromatico con pesi molecolari confrontabili, il secondo tender ad avere un picco molecolare pi elevato, per la maggiore stabilit del catione dovuta alla maggiore distribuzione di carica nello ione molecolare. Si nota inoltre la presenza di pi picchi, essendo gli elementi che compongono lanalita composti da una miscela isotopica. Nel caso di Cl e di Br, aventi miscele isotopiche con percentuali simili dei due isotopi che li compongono, lanalisi sar pi complicata. Per conoscere lintensit del picco a (M+1), dove M il peso della molecola, non si fa altro che moltiplicare gli elementi per la percentuale dellisotopo 1 uma pi massivo, e farne la somma, per poi paragonarla a M e avere, ad esempio, per il dodecene:

Questa lintensit relativa del segnale corrispondente allo ione molecolare con al suo interno un solo isotopo pi massivo. Per miscele di analiti, laltezza totale di un picco sar la somma delle altezze causate dai vari frammenti aventi lo stesso peso, che dipenderanno ovviamente dalle pressioni a cui i diversi analiti, in fase gassosa si ricorda, vengono immessi nello strumento. Si capisce dunque come lanalisi sia tuttaltro che semplice, sebbene su un composto isolato ( tramite cromatografia, per esempio) dia una risposta qualitativa certa, per cui non si pu confondere lanalita con un'altra specie ( per questo importante avere detector non distruttivi in cromatografia, cos da usare in serie uno spettrofotometro di massa).

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METODI CROMATOGRAFICI
Usati anche come metodi preparativi per separare composti da miscele a pi componenti. Una cromatografia si conduce su una colonna cromatografica, nella quale presente una fase stazionaria, solida o liquida, e si immette una fase mobile, liquida o gassosa. La fase mobile trasporta i componenti lungo la colonna cromatografica, che a seconda della loro affinit per luna o laltra fase, usciranno dalla colonna con tempi di ritenzione differenti.

NATURA DEL PROCESSO DI SEPARAZIONE

I componenti della miscela si ripartiranno nelle due fasi a seconda della loro affinit per luna o per laltra fase. Il comportamento allequilibrio di un qualsiasi analita pu essere descritto dalla costante di distribuzione Kd = .

Si pu tracciare cos una retta isoterma, di pendenza Kd, che descriva la distribuzione dellanalita nelle due fasi a ciascuna concentrazione. Il grafico dovrebbe essere una retta, ma spesso si riscontrano delle deviazioni dallidealit, perch allaumentare della concentrazione totale di analita presente nella colonna si potrebbe registrare una crescente affinit nei confronti di una delle due fasi, e dunque la perdita di linearit. In questo caso i segnali registrati non avranno forma gaussiana, bens presenteranno una deformazione, detta fronting quando il massimo del picco spostato verso sinistra e tailing quando spostato a destra. Dal coefficiente di distribuzione dipende il tempo di ritenzione di unanalita nella colonna, che sempre maggiore quanto pi questo affine alla fase stazionaria. Il tempo di ritenzione non va per calcolato dallinizio dellanalisi, ovvero dalliniezione del campione, bens dal cosiddetto tempo morto. Il tempo morto il tempo che trascorre dalliniezione del campione fino allarrivo della prima goccia di eluente alla fine della colonna, che viene rilevato dal detector a causa di bolle di gas eventualmente presenti, o altre impurit, o tutto ci che non viene adeguatamente cromatografato dalla colonna. In corrispondenza del tempo morto nel grafico registrato si noter una leggera oscillazione. Ovviamente durante lanalisi bene che il flusso di fase mobile venga controllato, e tenuto costante ( allora il volume di ritenzione sar proporzionale al tempo di ritenzione) o variato secondo un gradiente. Solitamente si preferisce variare la composizione della fase mobile (in cromatografia liquida, mentre in gas cromatografia si agisce sulla temperatura), cos da avere un potere eluente controllato ma che permetta unanalisi pi effettiva e veloce. I picchi sono di forma gaussiana, perch varie particelle di uno stesso analita arriveranno con diversi tempi, a seconda del tragitto seguito e della loro velocit. La distribuzione perci statistica. La risoluzione di due picchi (accettabile dal punto di vista quantitativo solo se sovrapposti per meno del 10% della loro altezza) data dalla formula:

E quindi pi i tempi di ritenzione sono diversi e pi sono stretti i picchi (la media delle larghezze delle basi), pi due picchi saranno risolti. Lampiezza di un picco determinata dallefficienza della colonna, a sua volta basata sul numero dei PIATTI TEORICI

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Un piatto teorico una sezione di colonna cromatografica in cui si instaura lequilibrio previsto dalla Kd, ovvero dove le concentrazioni di analita nella fase mobile e nella fase stazionaria sono allequilibrio. Indicando con N il numero di piatti teorici, si ha che:

Allora ad un dato tempo di ritenzione, pi alto il numero di piatti teorici della colonna, pi stretti saranno i picchi. Laltezza di un piatto teorico sar ovviamente il rapporto fra la lunghezza totale della colonna e il numero di piatti teorici. Cause dellallargamento bande: Percorsi multipli (eddy diffusion), dovuti allimpaccamento della colonna: un fattore puramente fisico, e non ha nulla a che vedere con propriet chimiche. Diffusione molecolare: un soluto tende a diffondere ( per differenza di potenziale chimico) da zone in cui pi concentrato ad altre in cui lo di meno. Resistenza alla trasmissione di massa. Legge di Van Deempter La legge di Van Deempter lega laltezza del piatto teorico alla velocit del flusso.
H

Nella formula, A dipende dallimpaccamento e dalla dimensione delle particelle che compongono la fase stazionaria della colonna, un parametro di fabbrica che non possiamo modificare agendo sul flusso, e dipende dai percorsi alternativi che lanalita pu seguire nella colonna. B un parametro che d ipende dalla diffusione dellanalita da zone dove pi concentrato a zone in cui lo meno. Pi veloce il flusso, meno diffusione pu avere luogo. Il contributo di B avr andamento iperbolico, variando molto a valori di flusso bassi e poi con minore variazione a flussi pi elevati. Il terzo parametro, C, dipende dalla resistenza al trasferimento di massa, ed dovuto al fatto che, al di l dellequilibrio di distribuzione, una specie tender ad entrare pi facilmente in un mezzo meno denso che in uno pi denso. Perci, per esempio, in cromatografia a gas, accade che lanalita riesca a passare pi facilmente nella fase gassosa, per poi essere portato via con il flusso in misura maggiore al dovuto. insomma un parametro cinetico. Cos si pu verificare un allargamento delle bande, con fenomeni di fronting, perch lanalita arriver in percentuale maggiore in un tempo inferiore al tempo normale di ritenzione. Il contributo di C perci sempre pi grande quanto pi veloce il flusso, e avr un andamento lineare. Il flusso ottimale a cui lavorare perci dipendente da questi parametri, secondo la legge di Van Deempter, e cambia a seconda del metodo scelto.

GAS CROMATOGRAFIA
Nella gas cromatografia la macchina usata ha uno schema di funzionamento simile a quello riportato in figura. La miscela contenente il

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campione immessa nella colonna da un iniettore, che deve provocarne la vaporizzazione e perci riscaldato. Se ci fosse il rischio di decomposizione termica dellanalita, occorrerebbe farlo reagire in qualche modo per ottenere un prodotto ( in quantit note e proporzionali a quelle di campione iniziale) pi volatile. Ad esempio, se volessimo analizzare un alcol, potremmo trasformarlo in un etere. Se la fase stazionaria liquida si preferisce eseguire una gas cromatografia capillare, di modo che il liquido si disponga sulle pareti del capillare e permetta unanalisi con picchi pi stretti, e dunque pi risolta. In coda al gas cromatografo si pu porre un flussimetro, in modo da valutare eventuali anomalie del flusso. Detector: TCD (thermo conducibility detector): utilizza un ponte di resistenze, sul quale viene fatto scorrere un gas ad alta conducibilit termica, come lelio. Quando arriva il campione, si avr un cambiamento di composizione del gas refrigerante in un'unica parte del ponte, causando uno sbilanciamento di resistenze dovuto al cambiamento di temperatura, che verr poi tradotto in segnale. Vantaggi: universale, NON DISTRUTTIVO Svantaggi: poco sensibile, risposta non sempre lineare e dipendente dalla temperatura di analisi e dal flusso del carrier. A ionizzazione FID (flame ionization detector): il detector si basa sulla tendenza, soprattutto di sostanze organiche, a dare ioni positivi quando bruciano. Si pu ottenere perci, per combustione, una corrente ionica che pu essere utilizzata come segnale. Il campione trasportato dal carrier viene bruciato allaria fra due piastre di un condensatore, in cui lanodo lugello stesso, e il catod o un collettore cilindrico. Quando arriva il campione, la corrente ionica prima generata solo dalla combustione di aria e idrogeno, subisce una grande variazione, che viene dunque registrata. Vantaggi: detector molto sensibile, infatti si arriva ad un LOD di concentrazioni di nanogrammi litro, e la risposta anche lineare in un intervallo di 6-7 ordini di grandezza. Svantaggi: il detector distruttivo, e si limita a sostanze organiche. (sarebbe un bene perch se ci fosse stata contaminazione ambientale del campione da parte di acqua o altri gas presenti nellatmosfera, che non verrebbero ionizzati e dunque non interferiscono con la misurazione) Termoionico: variante del FID in cui vengono aggiunti sali di Cs, Rb o K, in modo da determinare specie organiche azotate o fosforate. A cattura di elettroni (CED): il detector registra cambiamenti nellintensit di corrente elettrica causati dallassorbimento, da parte dellanalita, di elettroni lenti. necessario un gas carrier come He, Ar o N2, che venga irradiato con raggi , emessi a loro volta dallisotopo radioattivo depositato su una lamina doro. Esso emette elettroni ad elevata energia, lenti, e radiazioni e , oltre che atomi di elio. Questa corrente elettrica viene letta dal detector, e quando lanalita assorbe gli elettroni, lintensit cala, fornendo un segnale. Vantaggi: la sensibilit del detector molto elevata, nellordine dei femtogrammi (10 15 g/s), con composti contenenti atomi elettronegativi, come nitro composti, alogenuri organici, organometalli, mentre con alcoli, chetoni e idrocarburi in generale lapparecchio perde in sensibilit. Fasi stazionarie e supporti:

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Esempi di fasi stazionarie sono - Squalano: miscela di idrocarburi alifatici, con la quale si pu operare fino a 150C, efficace con idrocarburi saturi, essendo affine ad essi. - Carbowax 20M: glicole polipropilenico, col quale si pu arrivare fino a 250C, usato per alcoli, ammine, composti solfonati, o comunque polari. Queste fasi stazionarie sono liquide, e vanno perci assorbite su supporti, a meno di non optare per cromatografie capillari. Vediamone alcuni: - Carboni attivi/ grafitati: supporto apolare, con elevata superficie specifica(800-1000m2/g), con un grande potere assorbente, essendo finemente suddivisi. - Gel di silice, o allumina: supporti polari, tendono ad adsorbire molecole dacqua, e infatti il loro funzionamento si basa su siti attivi che formano legami a idrogeno (nel gel di silice, SiO2, i siti sono Si-OH, per lallumina, Al2O3, i siti sono Al-OH) - Setacci molecolari (molecular sieves): sono supporti impaccati in modo da avere cavit di 0.3-1mm. - Polimeri porosi: hanno un aspetto granulare, ed anchessi elevata superficie attiva (300-400m2/g).

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CROMATOGRAFIA LIQUIDA
DI ADSORBIMENTO di tipo preparativo, pi che analitico. La colonna cromatografica composta da una fase stazionaria solida e una fase mobile liquida, fra le quali lanalita si ripartisce a seconda dellaffinit per luna o per laltra fase. Si parla in questo caso di adsorbimento dellanalita sulla superficie della fase stazionaria, che si lega a dei siti attivi presenti su di essa. Questo si riflette sullisoterma di adsorbimento, che non pi lineare oltre una certa concentrazione di analita. Infatti ad un certo punto si avr la saturazione dei siti attivi della fase stazionaria, e lanalita verr dilavato dalla fase mobile senza essere ritenuto. Lefficienza perci crolla.
tr Cs

Ctot

Cm

DI RIPARTIZIONE La cromatografia di ripartizione prevede lutilizzo di due fasi liquide, luna adsorbita su di un supporto solido (fase liquida stazionaria) e laltra usata come eluente. Leluente e la fase stazionaria devono essere praticamente immiscibili, e dunque avere caratteristiche molto diverse, onde evitare il trascinamento della fase stazionaria stessa lungo la colonna. Questo in realt avviene comunque, perch due liquidi, per quanto differiscano in propriet, si disciolgono comunque luno nellaltro in piccola parte. P er evitare tutto ci, si pu preventivamente saturare la fase stazionaria con leluente e viceversa, cos da riscontrare durante la misurazione completa immiscibilit ( un processo che si pu evitare facendo cromatografia L-L a fasi legate). A seconda che la f.s. sia polare o meno si parla di cromatografia di ripartizione diretta o inversa. Per la diretta, si usa: - F.s.= un solvente polare trattenuto su gel di silice o allumina. - F.m.= solventi pi o meno polari, immiscibili con il solvente usato nella fase stazionaria, esempi sono cloroformio, benzene, CCl4 Per la cromatografia di ripartizione inversa, invece: - F.s.= oli di silicone, o oli minerali idrofobi assorbiti su carboni attivi - F.m.= acqua, acetone, o comunque solventi polari. Esempio: TLC La thin layer cromatography, o cromatografia su carta, una cromatografia di ripartizione diretta, che usa come fase stazionaria gel di silice o allumina distribuiti uniformemente su un foglio di vetro o alluminio, oppure una strisciolina di carta, sul quale assorbita dellacqua; come fase mobile viene usato invece un solvente organico. Per normalizzare la cromatografia, necessario introdurre il fattore di ritenzione, o di ritardo, R f, definito come il rapporto fra la distanza percorsa sul cromatogramma da parte dellanalita e quella

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percorsa dalleluente, ovvero il fronte della fase mobile. Perci il fattore di ritenzione sar sempre minore di 1, ed caratteristico della specie, come lo un punto di fusione. Fattori interferenti: lanalisi influenzata dalla qualit della carta, che non deve variare in spessore di pi di 0.2 mm, perch altrimenti il fattore di ritardo potrebbe cambiare. Inoltre, i campioni immessi devono essere piccoli, 0.01-50ng , e vanno inseriti con un capillare, onde evitare una deviazione dalla linearit dellisoterma di ripartizione e una risoluzione dei picchi insufficiente. Esecuzione del cromatogramma: - Ascendente, eluizione per capillarit (camera di sviluppo, saturata dai vapori delleluente per evitare evaporazione dalla colonna) - Disendente, eluizione per capillarit e gravit, pi veloce della precedente. - Radiale, utile per campioni pi grandi. (capsula di Petri, si ritaglia un cerchio di carta e ne si lascia una strisciolina a pescare nelleluente) PROBLEMI - Pu capitare che due macchie siano troppo vicine, o addirittura sovrapposte, ma in quel caso si pu semplicemente riutilizzare la striscia girandola ed immergendola in un altro eluente, che separi meglio i due analiti. - Un analita potrebbe essere incolore, e dunque di impossibile individuazione diretta. In questo caso si pu operare in diversi modi: o Nel caso di analita organico e supporto in vetro o alluminio, si pu porre il cromatogramma in stufa, e notare annerimenti o Altrimenti, in una situazione analoga alla precedente, si pu annerire lanalita spruzzando dellacido solforico, notando poi degli annerimenti, per disidratazione. o Si pu porre la piastra su una corrente di I2, nel caso che lanalita sia un composto organico insaturo, perch in quel caso lo iodio reagirebbe con esso a formare iododerivati, colorati. o Si pu usare fluoresceina, sempre per composti organici o Lampade UV/vis

A SCAMBIO IONICO
La cromatografia a scambio ionico viene condotta su colonne impaccate con resine naturali (come argille o zeoliti) o di sintesi, capaci di legare a dei loro siti attivi ioni di carica positiva (resine cationiche) o negativa (resine anioniche, usata in lab!) Gli scambiatori cationici avranno al loro interno funzioni acide, forti o deboli, cos che queste, deprotonandosi, assumano carica negativa e dunque attraggano cationi presenti nelleluente. Gli scambiatori anionici possiedono al contrario funzioni basiche o forti o deboli, capaci dunque di legare, una volta protonate, i diversi anioni presenti nella colonna. Gli scambiatori cationici presentano come siti attivi gruppi solfonici (forti, R-SO3- H+) o funzioni carbossiliche (deboli, R-COOH+), mentre le resine anioniche presentano sali di azoto quaternari (forti, R-N(CH3)3+OH- ) o ammine (deboli, R-NR2). La separazione di diversi anioni o cationi dipende allora dallaffinit che questi hanno per i siti attivi, che influenzer la velocit di dilavazione. Infatti si instaura una continua competizione al sito fra ioni delleluente, solitamente un tampone, e ioni del campione. Consideriamo la generica reazione A+BR = B+ AR, dove A il catione o lanione da analizzare, e B lo ione idronio o lanione ossidrile rispettivamente, mentre R la resina. Allora lequilibrio sar descritto da:

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Ponendo i coefficienti di attivit di AR e BR uguali, si ritrova:

Detto coefficiente di equilibrio pratico. Siccome per la misura si conduce su campioni di concentrazione ionica molto minore rispetto allo ione liberato dal sito attivo, e siccome i siti non saranno che in parte occupati dagli ioni dellanalita, la frazione molare di BR sar molto pi grande di AR e dunque costante durante la misura, si ottiene:

Dove Kd la costante di ripartizione dello ione fra la fase mobile e la resina. Si possono perci separare diversi ioni, a seconda del loro coefficiente di ripartizione cos definito. APPLICAZIONI - Se volessi determinare la concentrazioni di solfuro per precipitazione come sale di bario, dovrei prima liberare lo ione solfuro legato agli ioni Fe 2+ e Ag3+, perch i solfuri di questi anioni sono molto stabili. Si pu perci operare una cromatografia a scambio cationico cos da rimuovere i due cationi, avendo essi grandissima affinit per la resina. - Per concentrare una soluzione acquosa di sali, si pu condurre un primo scambio in modo da legare i cationi dei sali presenti alla resina, per poi lavare la resina con una soluzione acida molto concentrata, cos da operare un ripristino dei siti acidi, e far fuoriuscire gli ioni, in un pi piccolo volume. - Potrei preparare soluzioni acide o basiche a titolo noto, immettendo in colonna un sale con un catione o un anione molto affine alla resina, cos facendo verranno liberati ioni idronio o ossidrile nella stessa quantit, a me nota, di ione immesso nella colonna. - Separazioni di amminoacidi! Attraverso un gradiente di pH, su resina a scambio cationico con gruppi solfonici, partendo da pH inferiore a 2, di modo che tutti gli amminoacidi siano carichi positivamente e si leghino alla resina. Aumentando la forza ionica e il pH, si distaccheranno i diversi amminoacidi a seconda della loro acidit. Prima si staccheranno gli amminoacidi acidi, poi quelli neutri e infine quelli basici. Un secondo metodo a concentrazione ISOCRATICA, con resine con siti leganti, composti da ioni metallici di transizione, del tipo: Dove L il legante e A lanalita da separare. Il metallo solitamente il rame (II), che un acido di Lewis capace di accettare elettroni, e perci si lega con i diversi amminoacidi in base alla loro basicit. Si usa come eluente isocratico un tampone ammoniacale, che competer con gli amminoacidi ai siti.

PERMEAZIONE SU GEL
Questa tecnica cromatografica volta allanalisi di macromolecole, ed impostata su colonne il cui riempimento una specie porosa, che permette la separazione di diversi componenti per esclusione sterica. Il riempimento pu essere un polimero idrofilo o idrofobico.

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Polimeri idrofili, SEPHADEX: Sono usati polimeri di destrano (C6H10O5)n + epicloridrina (1,2-ossi-3-cloropropanolo), commercializzati in due tipi di polimeri, a diversa porosit: uno per molecole di peso ~700 uma, laltro per macromolecole di 800'000 uma, ovviamente polari. Questi polimeri vengono ovviamente attaccati da ossidanti forti come il cromato, il bicromato e il permanganato, e inoltre hanno un loro campo di stabilit al pH (che va da 2 a 11), ovvero vengono attaccati da acidi e basi forti, siccome contengono gruppi epossidici, che vengono idrolizzati a glicoli con catalisi acida o basica. Polimeri idrofobici, STYRAGEL: Utilizzati con solventi organici e per determinare concentrazioni di analiti apolari, si formano facendo reagire polistirene e divinilbenzene. I polimeri pi utilizzati sono: a porosit di 6nm, per molecole 800-1'600 uma, e uno a porosit di 105nm, per molecole di 20-40 x 106 uma. Importanti concetti: - Esclusione totale, ovvero quando una molecola troppo ingombrata per poter permeare nel gel, e dunque viene dilavata dalleluente nel tempo morto. - Permeazione totale, che si verifica quando una molecola cos piccola da trovarsi nelle stesse condizioni dentro e fuori dal gel, arrivando al detector assieme a tutte le altre molecole di dimensione ridotta. - Il detector registrer picchi alquanto stretti, con un primo segnale al tempo morto ed un ultimo al tempo di permeazione totale. Applicazioni: - Frazionamento di peptidi in base al loro peso molecolare - Determinazione di peso molecolare di polimeri di sintesi o naturali, usando ovviamente una molecola di confronto, con un peso molecolare noto. - Dissalatura di soluzioni acquose, con una dialisi, immergendo la soluzione target in acqua distillata, separata da questa dal polimero, che permetter il passaggio del sale ma non di molecole pi grosse.

TECNICHE ELETTROFORETICHE
Lelettroforesi si utilizza per la separazione di specie cariche in soluzioni elettrolitiche, a cui viene applicato un potenziale elettrico. Si possono analizzare: - Ioni semplici - Macromolecole - Colloidi - Micro gocce di emulsioni - Specie particellari e batteri - DNA Si possono distinguere due tipi di elettroforesi: - In fase libera (in soluzione, senza supporto) - Di zona, ovvero su supporto di carta o gel agarosio La migrazione delle cariche sar comunque determinata dallintensit del campo el ettrico, dalla carica e dal raggio dellanalita e dalla viscosit del mezzo, secondo lequazione:

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Lequazione si pu semplificare introducendo la mobilit, u, della specie carica, che lega lintensit del campo alla velocit della particella. Fattori che influenzano la migrazione: - Variazione del pH, che pu portare a formazione di complessi e a cambiamenti di carica, come nel caso di aminoacidi. - Forza ionica, che se diminuita aumenta la velocit - Temperatura, che se aumenta, accelera la diffusione, e dunque il detector rilever bande pi larghe. Il sistema deve essere dunque termostatato, facendo attenzione a non denaturare eventuali proteine che si vogliono analizzare (t< 42C) - Elettrosmosi, fenomeno per cui si crea un movimento di particelle non cariche a causa della migrazione di ioni coordinati a molecole dacqua.

HPLC(HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY)

Questa tecnica permette luso di volume di campione molto ridotti , ed ha una buona accuratezza. Il macchinario per HPLC cos composto: - Serbatoio : contenitore delleluente, a volte se ne usano due, cos da poterli miscelare in una cromatografia a gradiente. - Dispositivo (se necessario): serve per miscelare i due eluenti, per ottenere un gradiente di eluizione nel tempo. - Pompa: immette il campione, le pressioni generate possono arrivare anche a 500 atm. - Colonna: in vetro o in acciaio, 1-6 mm, e altezza 3cm-1m (colonne molto corte), il flusso delleluente inoltre molto ridotto, 60ml/h. - Riempimento: porosit 3-10 m, sono sostanzialmente di due tipi: o a particelle pellicolari: sono impiegate quasi esclusivamente per le colonne di protezione. Sono granuli sferici e non porosi di vetro o materiale polimerico, di dimensione compresa tra i 30 e i 40 m. Sulla superficie dei granuli viene depositato uno strato poroso di silice, allumina o resina a scambio ionico. Se si necessita di una fase stazionaria liquida, pu essere applicata per adsorbimento. o a particelle porose : hanno diametri compresi tra 5 e 15 m, il materiale pi usato la silice microporosa, ma possono essere costituite anche di allumina o resina a scambio ionico. Anche in questo caso vengono applicati rivestimenti specifici, legati o per adsorbimento o attraverso legami chimici alla superficie delle particelle. Lequazione di Van Deempter leggermente diversa, perch in questo caso compaiono due contributi direttamente proporzionali al flusso. Perci si lavora a flussi ridotti, di velocit 2-5mm/s. I contributi dipendono dalle dimensioni delle particelle e dallimpaccamento, e dunque non sono modificabili. Il minimo di H si ha per valori di flusso molto piccoli, ma non si possono effettuare cromatografie eterne. Dunque si opera ai valori di flusso riportati.

L-L A FASI LEGATE

Per evitare il pre-miscelamento delle fasi liquide nella cromatografia di ripartizione liquido-liquido, si possono usare polimeri, applicati a supporti solidi inerti, che possono essere polari o apolari. Nel primo caso si parla di cromatografia diretta, nel secondo caso di cromatografia inversa. I polimeri polari usati sono: PEG (polietilenglicole), ovvero , oppure ODPN

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(ossidiproprionitrile). La fase legata al polimero, ovvero la stazionaria, dovr essere polare, contenere gruppi -NH2, -CN o OH. Nella cromatografia inversa invece i polimeri che si usano sono silani, ovvero derivati organici del silicio. I supporti solidi sui quali i polimeri sono applicati possono essere: - particelle porose: 5-15m, che hanno una grande superficie attiva e capacit assorbente. Dunque vanno bene per campioni pi concentrati. Le bande per si allargano, essendo possibili molti percorsi alternativi. - Particelle a nucleo solido e rivestimento pellicolare: 37-42m, che sono molto utilizzati per miscele complesse, permettendo una maggiore risoluzione, perch hanno maggiore efficienza.

TARATURE
Taratura diretta, che consiste nellanalisi, ripetuta pi volte per ogni standard, di diverse soluzioni contenenti lanalita in concentrazione nota, cos da estrapolare una retta di taratura sulla base della quale si riesca a determinare la concentrazione del campione ignoto. importante che le concentrazioni del campione e degli standard siano abbastanza simili. Bisogna inoltre accertarsi che le condizioni ambientali e strumentali non varino nel corso della misurazione, cos questa deve essere conclusa in un lasso di tempo non troppo lungo. Standardizzazione interna. Per questo metodo si prepara una serie di soluzioni standard, con lanalita a concentrazione nota, e si aggiunge ad esse un componente, in quantit nota, di modo che si riesca a determinare se il rapporto fra la quantit di analita e standard interno e delle aree dei loro segnali (o delle altezze) varino in modo lineare. Lo standard interno deve: o essere assente nel campione di partenza o avere un picco risolto rispetto agli altri della miscela o avere concentrazione simile allanalita o Non reagire con esso o Non contenere impurit (o avere una purezza nota) Se questo verificato, allora una volta noto il rapporto , sappiamo il valore del rapporto di masse fra analita e standard interno, e perci, introducendo una quantit nota e definita di ISD (internal standard) nel campione incognito e registrando il segnale della miscela, si sa che:

Infatti il fattore di risposta relativo dellanalita nei confronti dello standard interno non sar altro che il coefficiente della retta trovata nel grafico rapporto aree vs rapporto masse.

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CONFRONTO FRA GAS CROMATOGRAFIA E CROMATOGRAFIA LIQUIDA

L.C.
Eluente a composizione isocratica Solvente debole (scarsa attitudine a trascinare analiti) Eluente a composizione isocratica
Solvente forte

G.C. bassa T

Segnale

descrizione
Tempi di ritenzione molto lunghi, con picchi via via pi larghi. Non tutti i componenti arrivano al detector nel tempo di analisi. Picchi non risolti, sovrapposti e stretti

alta T

Eluente a composizione isocratica, forza media

T intermedia

Problemi di risoluzione fra i picchi

gradiente

programma di temperatura

Picchi risolti e tr non troppo lunghi. PROCEDURA MIGLIORE

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METODI ELETTROANALITICI
I metodi elettroanalitici sfruttano reazioni chimiche di ossidoriduzione e misure di grandezze elettriche o gravimetriche che variano con la concentrazione di analita. Introduzione: Si definisce cella elettrochimica un sistema costituito da due semicelle, che contengono due soluzioni elettrolitiche nelle quali pescano due elettrodi, collegati a loro volta da un filo di materiale conduttore, che permetta il passaggio di corrente. Un componente essenziale per il funzionamento della cella il ponte salino, che pu essere sostituito da una membrana semipermeabile, che permetta diffusione di ioni da una semicella allaltra, per evitare che la reazioni si fermi a causa di accumulo di carica netta nei due comparti. Si definisce galvanica la cella elettrochimica nella quale avviene una reazione di ossidoriduzione spontanea, e capace dunque di produrre lavoro elettrico, di generare cio una differenza di potenziale, calcolabile secondo la legge di Nernst:

Una cella elettrolitica invece una cella nella quale si fanno avvenire reazioni di ossidoriduzione non spontanee applicando una differenza di potenziale agli elettrodi, e quindi compiendo lavoro esterno. In entrambi i casi il catodo lelettrodo al quale la o le specie elettroattive si riducono, mentre lanodo lelettrodo al quale si ossidano. I segni dei due elettrodi invece cambiano a seconda che si prenda in considerazione una cella galvanica o una elettrolitica. Infatti nella cella galvanica il catodo avr segno positivo, in quanto le specie che si riducono spontaneamente strappano elettroni dallelettrodo e lo lasciano con una piccola carica positiva; allanodo avviene invece il processo inverso, perci lelettrodo sar negativo. Nel caso di una cella elettrolitica invece, il catodo negativo, e si pu immaginare che, per far avvenire la riduzione non spontanea di una specie, noi dobbiamo caricare negativamente lelettrodo, che potr poi rilasciare elettroni alle specie elettroattive; lanodo invece dovr essere carico positivamente, cosicch le sp ecie elettroattive liberino gli elettroni sulla sua superficie, e si ossidino.
VARIAZIONE DELL INTENSIT DI CORRENTE CON POTENZIALE APPLICATO

Nel grafico sono rappresentati i grafici di intensit di corrente vs differenza di potenziale in diversi sistemi. Vediamo quali: 1. Nel primo caso abbiamo due elettrodi che pescano nella stessa soluzione e dunque non generano alcuna corrente. Se applichiamo un potenziale alla cella, registreremo nel circuito una corrente crescente e dipendente dal potenziale secondo la prima legge di Ohm: .

1 3

2 4

2. Nel secondo caso si tiene conto della deviazione dallidealit dovuta alla polarizzazione degli elettrodi. Infatti in una cella dove avvengono reazioni elettrodiche di elettrolisi, si generano dei gradienti di concentrazione delle specie

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elettroattive: le specie che si ossidano si troveranno in concentrazione maggiore vicino alla superficie anodica che in soluzione, e saranno invece meno concentrati sulla superficie catodica che in soluzione gli analiti che si riducono al catodo. Questi gradienti possono essere diminuiti mescolando la soluzione. 3. La polarizzazione degli elettrodi in questo caso voluta, e si utilizzano microelettrodi per aumentare la densit di corrente elettrodica, tanto che, ad un certo punto, non si registra variazione di corrente allaumentare del potenziale applicato. 4. Questo il caso della cella composta da un elettrodo di zinco immerso in una soluzione di zinco cloruro e un elettrodo ad argento-argento cloruro immerso in una soluzione di cloruro di sodio. In questo caso la cella genera una differenza di potenziale e un intensit di corrente con una reazione galvanica. La corrente convenzionalmente negativa, e diminuisce man mano che applichiamo una differenza di potenziale contraria a quella della cella. Si arriva ad una corrente nulla quando il potenziale applicato in equilibrio con quello della cella (in realt ci sono altri contributi che deve eguagliare, ma li vedremo in seguito). Dopodich la cella funzioner in modo elettrolitico, e la corrente assumer valori positivi. 5. In questo caso lelettrodo di zinco sostituito da un elettrodo a platino, cosicch la cella non pu funzionare come una pila, non essendoci zinco capace di ossidarsi (e platino in soluzione). Quando applichiamo una differenza di potenziale minore a quella della cella cos composta (che sar leggermente diverso da quella precedente per questioni di sovratensione, ma si pu trascurare questo fatto perch lo zinco si deposita come solido, non si ha sviluppo di gas), non si avr passaggio di corrente allinterno del circuito. A dire la verit si registrer una piccola corrente parassita, che aumenta allaumentare del potenziale applicato. Applicando invece un potenziale tale da cominciare lelettrolisi si registrer passaggio di corrente. Se interrompessimo lapplicazione di potenziale esterno, noteremmo che la cella segue il comportamento del grafico 4. Infatti, durante lelettrolisi, si depositato dello zinco, e la cella pu funzionare anche spontaneamente.

ELETTROGRAVIMETRIA
Il metodo elettrogravimetrico c onsiste nellutilizzare una reazione catodica ( o anodica, meno frequentemente) per depositare un analita elettroattivo allelettrodo e farne la pesata, per ricavarne la concentrazione. Affinch ci sia possibile, la reazione che avviene allelettrodo deve essere specifica, ovvero deve depositarsi solo la specie che ci interessa, e si deve depositare tutta (fino a raggiungere 10-5C0). Si usa per lanalisi il catodo Winkler, ovvero una reticella di platino, solitamente di geometria cilindrica, cos da poter essere posta attorno al contro elettrodo ed essere cos interessata da un campo elettrico costante. Si usa il platino perch un metallo nobile, che non viene facilmente ossidato, e resiste allattacco degli acidi, a meno che non sia in ambiente ossidante, acido e in presenza di cloro, perch in quel caso tenderebbe a formare sali cloro platinati. Si pu operare anche in quelle condizioni a patto di introdurre in soluzione dellidrazina, che si ossidi liberando azoto, al posto del platino. Per condurre lanalisi bisogna applicare una differenza di potenziale, tale da eguagliare il potenziale di cella nernstiano e superarlo. La differenza di potenziale applicata per inversa a quella della cella, e in realt il potenziale di cella non lunico contributo che si oppone allelettrolisi:

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Gli ultimi contributi sono dovuti alla caduta di potenziale del circuito e alle sovratensioni anodiche e catodiche. SOVRATENSIONI (POLARIZZAZIONI CINETICHE ) - Sono legate a fenomeni non nernstiani di polarizzazione dellelettrodo, che sono legate alla cinetica del processo, e per questo hanno questo nome. - Aumentano con la densit di carica dellelettrodo, e dunque per intensit di corrente pi elevate o per elettrodi pi piccoli. - Dipende dalla natura degli elettrodi. - notevole se si formano specie gassose In tabella sono riportati i valori di sovratensione catodica per lidrogeno e anodica per lossigeno, su diversi elettrodi e a diverse densit elettriche. 0.001 amp2/cm2 H2 0.024 0.015 0.9 0.01 amp2/cm2 H2 0.068 0.030 1.1

Pt platinato Pt liscio Hg

O2 0.721 0.348 -

O2 0.85 0.521 -

Per platinare lelettrodo si compie un elettrolisi, ponendo lelettrodo di platino in una soluzione di acido nitrico e acido cloridrico, cosicch venga ossidato dal primo e formi un sale di cloro (PtCl 4), che poi si deposita sullelettrodo per elettrolisi (Il potenziale di riduzione del platino sar molto basso). Questo vale anche per loro, che posto in acqua regia forma un sale di cloro, AuCl3. Questa operazione condotta proprio nellambiente che si vuole evitare nellanalisi.

Durante lelettrolisi, tuttavia, il potenziale della cella non rimane costante. Infatti, se ad esempio vogliamo far depositare del rame al catodo, la sua concentrazione diminuir costantemente in soluzione, facendo variare il potenziale catodico secondo la legge di Nernst, verso valori sempre minori. Il potenziale anodico in questo caso rimarrebbe invece quasi costante, dipendendo solo dal pH e dalla pressione di ossigeno nellaria (ossidazione dellossigeno dellacqua). Qualora tenessimo il potenziale applicato costante, si riscontrerebbe una diminuzione di intensit elettrica dovuta al fatto che la specie che si riduce si trova a concentrazioni sempre minori in soluzione, e dunque il potenziale catodico tende a cadere. Dovremmo dunque applicare una differenza di potenziale sempre maggiore per avere la stessa intensit di corrente iniziale. Se invece lasciamo il potenziale applicato fisso, diminuisce la velocit dellelettrolisi, e diminuiscono anche le sovratensioni. Per arrivare alla completezza della reazione bisognerebbe proseguire in eterno, ma ci accontentiamo del limite stabilito in precedenza, 10 -5Co. Questo fatto pu essere un problema se, volendo determinare la concentrazione di cobalto, in soluzione fossero presenti altre specie capaci di ridursi ai potenziali catodici a cui si arriva ad operare, ad esempio, se in soluzione fosse presente del cadmio (in concentrazione 1M), questo comincerebbe a depositarsi al catodo Winkler una volta giunti a -0.5V (da E0= 0.28V del cobalto). Procedura sperimentale: Prima di cominciare lanalisi bisogna pesare il catodo Winkler con una precisione al decimo di milligrammo. Dopodich si immerge il catodo nella cella e si conduce loperazione elettrolitica sotto agitazione, per impedire la polarizzazione dellelettrodo, con unancoretta magnetica o un

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motore coassiale al working electrode. Quando lelettrolisi terminata, si estrae l elettrodo Winkler dalla soluzione tenendolo sotto tensione, per evitare che la reazione galvanica, che fino a quel momento si contrastata, disciolga nuovamente lanalita nella cella. Si mette lelettrodo ad asciugare in stufa, e poi lo si pesa. Dallincremento in peso si conosce poi la quantit di analita presente. Si ripulisce il catodo usando una soluzione di acido nitrico. Un alternativa allelettrodo Winkler lelettrodo a mercurio, che scioglie i metalli pi teneri in leghe chiamate amalgame (il Fe non viene disciolto). APPLICAZIONI GRAVIMETRICHE A I = COST Questo metodo analitico adatto a soluzioni semplici, e permette di concludere alquanto rapidamente lanalisi, applicando al sistema elettrolitico un potenziale sempre maggiore per mantenere lintensit di corrente costante. Alcuni metalli che si possono analizzare con questo metodo sono: Co, Cu, Ni, Sn, Zn e Pb, che per si deposita allanodo come ossido di piombo, non da reazione catodica come gli altri. Solitamente si fa uso di complessanti, perch il deposito elettrodico diventa molto pi compatto e facile da trattare per la pesata. Ad esempio, con argento e cadmio si pu usare del cianuro, a patto di non lavorare in ambiente acido, per evitare la formazione dellacido cianidrico, mortale se inspirato, e dunque necessario lavorare sotto cappa. Per largento, ad esempio, si forma il complesso: Nulla avrebbe vietato di usare nitrato di argento, ma il deposito sarebbe stato molto pi poroso, e avrebbe trattenuto pi impurit, oltre ad essere pi difficile da pesare. Come si nota dallequazione, il segno di una specie non conta nello stabilire se la reazione anodica o catodica, quello che conta il potenziale di riduzione della specie stessa. Ovviamente specie cariche negativamente si ridurranno tendenzialmente a potenziali applicati pi elevati rispetto a specie cariche positivamente, dove lelettrone riducente riuscir a reagire pi facilmente per questioni elettrostatiche. Alluso di complessanti si ricorre ad esempio nella galvanoplastica, ovvero il processo con cui si ricopre un metallo con un altro metallo pi nobile, cos si hanno le cromature, orature, platinature, zincature, argentature APPLICAZIONI GRAVIMETRICHE A ECAT = COST Il metodo polarografico a potenziale costante si usa per soluzioni complesse, ovvero quando pi metalli siano presenti nella stessa soluzione, onde evitare reazioni interferenti allelettrodo di lavoro. Per fare ci dobbiamo inserire nel circuito esterno alla cella un potenziostato, e utilizzare un terzo elettrodo, oltre allelettrodo di lavoro e al contro elettrodo, ovvero un elettrodo di riferimento. Questo perch dobbiamo essere in grado di conoscere ad ogni istante il potenziale catodico, e variare di conseguenza la E applicata, grazie al potenziostato ed a un cursore posto su una resistenza. Siccome consideriamo completa la reazione quando C=10-5C0, sappiamo che, a seconda della quantit di elettroni che servono a ridurre lanalita, il potenziale applicato finale sar: 0.30V, 0.15V, 0.10V Infatti, per la legge di Nernst:

E quindi quando la concentrazione si riduce a quella considerata finale, si ha semplicemente:

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Alcune applicazioni di questa tecnica sono: - per depositare solo argento, e non rame, da una soluzione ottenuta sciogliendo galena(PbS) in ambiente acido. Infatti i due metalli si trovano spesso presenti nella roccia. - Per depositare cadmio in presenza di zinco, dalla blenda, solfuro di zinco. - Per separare tramite elettrolisi i singoli metalli da una miscela del tipo: Cu2+, Bi2+, Pb2+, Sn2+, Cd2+, Zn2+. Questa matrice complessa di metalli sarebbe altrimenti impossibile da analizzare per via gravimetrica. Operativamente, si aggiunge acido tartarico (pKa~7) cos da complessare il rame, il piombo, il bismuto e lo stagno. Dopodich si setta lelettrodo a : , , , Dopodich si aggiunge ammoniaca, cos da complessare i restanti cadmio e zinco, e li si precipita a: , ELETTROLISI INTERNE , SPONTANEE Un esempio la pila Daniell, nella quale la reazione spontanea porta al deposito di rame sul catodo Winkler. Si usano spesso in questo caso membrane semipermeabili di allumina, che permettano il passaggio degli ioni ma impediscano il diretto rimescolamento delle soluzioni anodiche e catodiche. Questo metodo permette di sostituire il ponte salino, ma si presenta un inconveniente, infatti si genera sulla membrana una piccola divisione di carica, che da luogo ad una differenza di potenziale, Ej, di giunto (junction), che non eliminabile ed presente in tutte le celle a giunto liquido (~0.02V) Una diretta conseguenza di questo fatto che, siccome il pH di una soluzione viene generalmente misurato usando un elettrodo a vetro, che presenta un giunto liquido, non si pu determinare il pH alla terza cifra decimale, perch il potenziale di giunto falsa la misura. Un applicazione potrebbe essere quella di determinare la quantit di Ag e Pb nella galena (sciolta in ambiente acido). In questo caso si possono preparare due soluzioni uguali, e usare in entrambe il catodo Winkler, ma in una un contro elettrodo a zinco, mentre nellaltra uno a piombo. Infatti, essendo E0Ag=+0.80, E0Pb=-0.126 e E0Zn=-0.76, nella prima cella si depositeranno spontaneamente sia largento che il piombo, mentre nella seconda cella si depositer solo largento. Per differenza fra le due pesate si riesce cos a determinare la quantit di piombo.

METODI COULOMBOMETRICI
Consistono nel calcolare la concentrazione di analita, in base alla carica passata nel sistema nellintervallo di tempo dellanalisi, facilmente ricavabile dalla formula: Dove F il Faraday, n il numero di elettroni necessari alla reazione, Q la carica, M.W. il peso molecolare del composto. Perci si possono utilizzare i metodi coulombometrici nel caso non si potesse pesare la specie formata, o per confronto con il dato ottenuto da unanalisi elettrogravimetrica. Questo metodo inoltre offre una precisione maggiore, essendo solitamente la quantit di carica molto grande, e dunque meno soggetta ad errore rispetto ad una quantit di deposito di peso molto piccolo. Ad esempio, nella determinazione del trinitrofenolo si ha una

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produzione di 18F per ogni mole che si riduce, e dunque ad un deposito non molto massivo corrisponde una quantit di carica grandissima. Vediamo i casi: - Se , allora semplicemente , e si riesce ad ottenere la quantit di analita evitando la pesata. Questo procedimento viene anche detto titolazione coulombometrica, perch in qualche modo analoga alle titolazioni con buretta. Infatti, con un circuito in cui un interruttore provochi interruzione o passaggio di corrente in modo simultaneo in due maglie, una con un cronometro e laltra con il sistema cella -potenziometro, si riesce a registrare lintensit di corrente passata semplicemente dal tempo trascorso e dalla caduta di potenziale letta dal potenziometro agli estremi di una resistenza. Lin terruttore quindi ha la stessa funzione del rubinetto di una buretta contenente titolante, e il cronometro sostituisce la graduatura della buretta. In realt linterruttore fa si che la corrente prodotta dal generatore fluisca o attraverso il sistema della cella (e chiuda il circuito del cronometro) oppure in unaltra maglia, dove presente una resistenza molto alta, cosicch il generatore continui a lavorare, per evitare sbalzi di corrente. - Se varia nel tempo, allora si pu procedere in due modi: si pu mettere nel circuito un coulombometro, che integri in continuo lintensit di corrente e misuri la quantit di carica. In questo caso per si potrebbero avere delle oscillazioni nel segnale al coulombometro perch il sistema deve essere mescolato, onde evitare polarizzazione. Altrimenti, per evitare errori connessi a queste oscillazioni, si pu operare con un coulombometro a gas. COULOMBOMETRIA A GAS In serie alla cella dove avviene lelettrolisi dellanalita a cui si interessati si pone una cella costituita da una soluzione elettrolitica nella quale immersa una micro buretta (2-5mL), con al suo interno due elettrodi in platino collegati al circuito. La buretta riempita di una soluzione elettrolitica acida di un sale di idrazina, che reagisce secondo la reazione: Dove lazoto si ossida e lidrogeno si riduce. In base al volume di gas generato, a determinate condizioni di temperatura e pressione (secondo la legge dei gas), si pu conoscere quanto la reazione sia proseguita e dunque la quantit di carica passata nella seconda cella. Essendo la cella in questione in serie alla cella primaria, la quantit di carica passata nelle due celle sar identica. TITOLAZIONI COULOMBOMETRICHE Alcune applicazioni: - Se volessimo titolare una soluzione di alogenuri, potremmo operare unelettrolisi in una cella con elettrodi ad argento e zinco (o meglio piombo, o un metallo meno nobile dellAg), in modo che largento si ossidi per elettrolisi e passi in soluzione, precipitando come sale di alogeno.

Vale lo stesso per il mercurio, che precipita come sale mercuroso, dimero di due mercuri (I). Si possono effettuare titolazioni di ioni calcio, zinco, piombo e rame con EDTA per via coulombometrica, immettendo lEDTA complessato con il mercurio (II), che si riduce allelettrodo a potenziali applicati molto bassi, liberando lEDTA che si trova d unque nelle

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condizioni di complessare gli altri ioni. Bisogna allontanare O2, essendo lanalisi effettuata a pH basico per aumentare lefficienza dellEDTA. Quindi bisogna insufflare N2. Si deve insufflare N2 anche nel caso di titolazioni acido-base, essendo lanidride carbonica disciolta nellacqua interferente con la titolazione. Si possono effettuare titolazioni previa generazione di specie instabili agli elettrodi, ad esempio argento (II) o manganese (III), cos come rame (I).

ELETTROGENERAZIONE ESTERNA DI REAGENTI Si possono preparare reagenti per via coulombometrica. Vediamo un esempio: si immette in una buretta bifida (a due punte) una soluzione di Na2SO4, e si conduce un elettrolisi con due elettrodi di platino e un batuffolo di lana di vetro che funge da setto poroso. Gli ioni dei due sali sono per pi stabili di quanto non sia lacqua stessa, il cui idrogeno si ridurr al catodo, generando H2 e ione idrossido, e il cui ossigeno si ossider allanodo, generando ossigeno gassoso e ione idronio . Cos si possono preparare acido solforico e idrossido di sodio per via elettrolitica, e possiamo conoscere la quantit di reagente generato in base alla carica passata.

DETERMINAZIONE END -POINT Si possono usare: - indicatori visuali (esempio 2. e 3.) - misure basate su propriet elettriche: o Amperometriche (esempio 1.) o Potenziometriche (nel caso della misura del pH con elettrodo a vetro, si pu applicare nellesempio 3.). o Conduttimetriche: in soluzioni elettrolitiche, che avendo una buona concentrazione ionica al loro interno conducono bene la corrente. In titolazioni di precipitazione infatti si pu avere un cambiamento di conducibilit per allontanamento di ioni. Si pongono perci in soluzione due elettrodi di platino e si misura la resistenza del circuito. Pi questa aumenta, pi la reazione procede. (applicabile allesempio 3.) o Spettrofotometriche: basate sul fatto che molti metalli cambiano colore a seconda del complessante a cui sono legati. Vediamo degli esempi: 1. Determinazione concentrazione del cicloesene. Per lanalisi si fa uso di una cella elettrolitica con due elettrodi destinati allelettrolisi per generare reagenti e due microelettrodi ai quali si applica una piccola differenza di potenziale, ai quali reagiranno solo eventuali coppie redox reversibili presenti in soluzione. Sono perci usati come indicatori di raggiungimento dellend -point. Si procede in questo modo: Si immette il campione in una soluzione acida per acido acetico, con metanolo e un sale di bromo. Il mercurio catalizza la reazione, e fra i due elettrodi della cella viene applicata una V costante, cos da fare avvenire la reazione:

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Come si vede, il prodotto della reazione catodica si allontana perch gassoso, e dunque non necessario dividere i due elettrodi in comparti separati. Una volta generato bromo dalla reazione elettrodica, esso reagir con il cicloesene presente in soluzione formando un 1,2-dibromocicloesano. Si nota che, fino al punto di equivalenza, il bromo prodotto in difetto, e reagisce tutto con il cicloesene, mentre dopo il punto di equivalenza il bromo prodotto e il bromuro ancora presente in soluzione formeranno una coppia redox reversibile, che sar in grado di reagire ai microelettrodi presenti nella cella. Solo dopo il punto di equivalenza si avr passaggio di corrente nel circuito a cui sono collegati i microelettrodi, e dunque il segnale funge da indicatore di end-point. 2. Potremmo in alternativa usare lindicatore metilarancio, che viene b romurato solo una volta che il cicloesene si esaurito, colorandosi. Questo possibile perch il metilarancio reagisce con il bromo meno di quanto non faccia il cicloesene. (costanti di stabilit) 3. Standardizzazione HCl Si usa in questo caso un indicatore acido-base, essendo il pH al punto di equivalenza neutro. In soluzione si pu mettere un elettrodo ad argento e uno a platino, che reagiscano cos:

METODI POLAROGRAFICI E VOLTAMMETRICI

Questi metodi si basano sul fenomeno della polarizzazione elettrodica, e pongono in relazione il potenziale applicato con lintensit di corrente passante nel circuito per ottenere informazioni quantitative. Infatti, si detto che, lavorando con soluzioni statiche e microelettrodi, si arriva ad un valore limite dellintensit di corrente, che non varia al variare del potenziale applicato. Si pu fare in modo, attraverso alcuni accorgimenti, che questa corrente sia proporzionale alla concentrazione di specie elettroattiva in soluzione. Vediamo un esempio di cella per polarografia. Pu essere usato un elettrodo a goccia di mercurio (DME), che consiste di un serbatoio di mercurio e un capillare che pesca nella soluzione elettrolitica, dal quale stilla la goccia di mercurio, che funge da microelettrodo ( ~ 1mm), e che andr da volume nullo a volume massimo ripetutamente, ad ogni ciclo di vita della goccia. Come contro elettrodo si pu usare un elettrodo di platino, o lo stesso mercurio che si accumula sul fondo della cella. In alcuni casi si vuole che il contro elettrodo funga anche da reference, e questo solitamente possibile, perch per lanalisi vengono usate correnti elettriche di mA o addirittura A di intensit, e dunque la quantit di analita in soluzione non varia apprezzabilmente. Questo comporta due cose: - Lanalisi pu essere ripetuta molte volte sulla stessa soluzione, senza falsare il dato quantitativo - Il contro elettrodo ha un potenziale che pu essere considerato costante, e dunque pu essere usato anche come elettrodo di riferimento. Si preferisce tuttavia utilizare un reference electrode a calomelano.

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ATTENZIONE! Lossigeno molecolare pu essere ridotto al microelettrodo di Hg dando luogo a due onde polarografiche corrispondenti a due stadi di riduzione:

Per evitare ci bisogna insufflare N2. Nel circuito esterno sono tre gli elementi fondamentali: - Un generatore di corrente continua, ovviamente presente; - Un galvanometro, capace di misurare la corrente con estrema precisione; - Un reocordo, ovvero una resistenza con cursore, che ci permette di variare il potenziale applicato alla cella nel tempo, con una scan rate solitamente di 5mV/s. Il risultato la cosiddetta onda polarografica, registrata in un grafico . A valori di potenziale pi bassi del potenziale di riduzione della specie non si registra corrente. Una volta che il potenziale tale da causare la riduzione della specie elettroativa, si registrer un brusco aumento di intensit, che per tender a diminuire velocemente nel tempo, fino a che lintensit non torna costante. In realt, come si vede dal grafico, c una piccola deriva della linea di fondo, e il valore di intensit che si misura deve riferirsi al valore che la linea di fondo avrebbe in quel punto ( vedi grafico). Si nota inoltre unoscillazione della curva, che dovuta al distaccarsi della goccia dal capillare, che dovrebbe fare scendere addirittura a zero lintensit di corrente passante. Si evita una pi brusca oscillazione, che comprometterebbe la chiarezza del grafico, mettendo nel circuito una forte resistenza. Il polarogramma ci da due informazioni analitiche: - Dal punto di vista qualitativo, il valore di potenziale per cui massima la variazione di intensit (posto a circa met dellonda), ovvero , caratteristico della specie. Dal punto di vista quantitativo invece, bisogna assicurarsi che lintensit misurata sia solamente quella diffusiva, che la sola proporzionale alla concentrazione. corrente diffusiva: unica componente proporzionale alla concentrazione. corrente capacitiva: corrente non faradica che analizzeremo in seguito. correnti connettive: dovute a spostamenti di specie cariche in soluzione, causati da differenze di temperatura o gradienti di concentrazione. Si possono eliminare tenendo la soluzione elettrolitica statica e allequilibrio termico. correnti migratorie: dovute al movimento di specie cariche a causa del campo elettrico generato fra gli elettrodi. Questo contributo non eliminabile, e dipende dal numero di trasporto dellanione in soluzione. Per uno ione i-esimo si ha che T, numero di trasporto, :

CONTRIBUTI A -

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Dove C la concentrazione dello ione e la sua conducibilit ionica individuale, che dipende dalla natura dello ione. Dunque, per fare in modo che questo contributo ignoto non falsi il valore di corrente limite, si pone in soluzione un elettrolita di trasporto, solitamente KNO 3, (perch gli ioni di cui composto si ossideranno e ridurranno a potenziali molto spinti) cos da conoscere il contributo di im. Se non controllassi il contributo delle correnti migratorie otterrei dei grafici di correnti catodiche simili a questi: nel caso di un catione (1), la corrente migratoria a cui soggetto lo porterebbe a muoversi pi velocemente verso il catodo, e dare un ilim maggiore. Nel caso di un anione (2), invece, la corrente migratoria lo trascinerebbe verso lanodo, e dunque il valore di ilim risulterebbe diminuito.

Im
(1) (2)

Im

STANDARD ADDITION Con una micro siringa di volume noto si preleva una soluzione dellanalita a concentrazione nota e la si aggiunge al campione. Ad esempio, preleviamo 50L di una soluzione di cadmio in 100ppm ad un campione di 50mL. Essendo laggiunta molto piccola rispetto al resto, si pu dire che facciamo variare la concentrazione di cadmio di 100ppb, in quanto la diluizione dellaggiunta circa uno a mille. Previa registrazione del polarogramma del solo campione, si pu ricavare la concentrazione dellanalita confrontando le due 100ppb onde, e misurando la variazione. Si ha inoltre una conferma dal punto di vista qualitativo, perch se si fosse aggiunto un 400ppb analita diverso da quello presente, si sarebbe registrato un polarogramma con due onde. LEGAME FRA E LA CONCENTRAZIONE DI ANALITA Ammettiamo che la goccia di mercurio che stilla dal capillare sia affacciata su una soluzione a concentrazione costante. Allinterfase soluzione-elettrodo si instaura per un gradiente di concentrazione della specie elettroattiva, che aumenta con il protrarsi dellanalisi, e questo condiziona il passaggio di corrente. Infatti si ha che , dove la velocit di diffusione e K la costante di proporzionalit di riduzione. Si ha per che la stessa velocit di diffusione proporzionale alla differenza di concentrazione fra la soluzione e la superficie elettrodica. Ad un certo punto, la corrente si fermer ad un valore limite, perch la concentrazione prossima allelettrodo trascurabile, e lequazione si riduce a: Lo stesso vale per la corrente anodica, a meno di un cambio di segno. Allora, per la legge di Nernst, in una cella dove sia il catodo che lanodo sono polarizzati, si ha che:

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Dove E0 soprasegnata perch invece delle attivit si sono usate le concentrazioni delle specie, che fanno riferimento ovviamente alla concentrazione sulla superficie dellelettrodo, che lunica che conta per la reazione di ossidoriduzione. Essendo: e: Lequazione diventa:

Sperimentalmente si ottiene che: per ogni goccia di mercurio, la corrente descritta dalla formula: Nel grafico i vs t, a potenziale applicato costante si riscontra un andamento analogo a quello dellonda polarografica in piccola scala. La corrente media passante nel tempo di vita della goccia solitamente .

La corrente media pu essere anche espressa tramite lequazione di Ilkovi: Dove n il numero di elettroni coinvolti nella reazione, D il tmax coefficiente di diffusione, che caratteristico della specie (dipende dallingombro sterico dellanalita e dallordine di reazione), C la concentrazione, m la massa di mercurio uscente al secondo dal capillare, t il tempo espresso in secondi e 605 un parametro che valido con queste unit di misura.

PROCESSI FARADICI E NON FARADICI Come accennato prima, la corrente diffusiva non lunica corrente sviluppata allelettrodo. Infatti la corrente limite dovuta anche a processi non faradici, ovvero non dovuti a ossidazioni e riduzioni. Il catodo in particolare, richiamer dalla soluzione specie cariche negativamente, che si disporranno attorno alla superficie della goccia, formando una specie di condensatore. Perci si sviluppa una corrente detta capacitiva, fra le due armature, dipendente dalla capacit del condensatore, che data da: Sappiamo per che la carica sullelettrodo sar uguale a quella dellarmatura del condensatore costituita dalla soluzione. Sperimentalmente si trova che la carica q uguale a: Dove la C la capacit per unit di superficie, A larea dellelettrodo e E m il potenziale dellelettrodo quando il tempo di vita della goccia finisce (area massima). Inoltre, essendo lintensit di corrente la derivata prima della carica rispetto al tempo, si ottiene: Sperimentalmente, si trova che:

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E quindi:

importante tenere a mente che:

Si pu notare allora che la corrente capacitiva sempre presente, id non dipende dalla concentrazione dellanalita in soluzione. Inoltre essa diminuisce, anche bruscamente col passare del tempo, e quindi se potessimo misurare le due intensit indipendentemente, avremmo un andamento di questo tipo: Questo dunque non influisce molto sul valore di ilim, essendo il Ic contributo della corrente capacitiva sempre minore col passare del tempo. Vediamo ora come varia ic al variare del potenziale. Se applichiamo allelettrodo potenziali molto positivi, allora lelettrodo attirer cariche negative, mentre se applichiamo ad esso potenziali negativi le cariche che attirer saranno positive. C un valore di potenziale applicato, tuttavia, al quale la corrente capacitiva assume valore nullo. Infatti a quel dato potenziale lelettrodo e la soluzione non accumulano cariche, e dunque non si comportano come armature di un condensatore. Questo valore nel caso di soluzioni acquose 0.45 V (vs SCE, standard calomelan electrode). A queste condizioni il tempo di vita della goccia massimo, e al variare del potenziale verso valori pi spinti si osserva una diminuzione sempre pi grande del life time. In figura si vede una cella per polarografia. La cella a forma di tronco di cono per permettere di usare volumi alquanto -2.0 ridotti (solitamente 20mL). presente un terzo elettrodo, di +0.4 riferimento, a calomelano, che a volte necessario separare dalla soluzione, onde evitare che lo ione Cl- interferisca con le reazioni elettrolitiche. Si nota anche che ci sono due tubicini per lingresso dellazoto nella cella: uno che entra nella soluzione, per far gorgogliare lazoto e dunque eliminare i gas presenti e interferenti (O2 e CO2); uno fuori dalla soluzione, cos da saturare il sistema senza agitare la soluzione quando si compie lanalisi. Infatti si vuole ottenere la polarizzazione dellelettrodo, che non avviene se la soluzione tenuta sotto agitazione. Applicazioni:

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Se analizzando una matrice complessa ci si trova di fronte ad un polarogramma con delle onde alquanto sovrapposte, si pu ricorrere a dei complessanti, che si leghino con lanalita la cui onda poco risolta e ne spostino lE1/2. Ad esempio, se volessimo determinare la concentrazione di ferro (III) e rame (II) in soluzione in ambiente cloridrico, le due specie darebbero un polarogramma con due potenziali di mezzonda sovrapposti. Basta aggiungere un sale di fluoro affinch si formi lesafloruro ferrico (FeF63-), che ha un potenziale di mezzonda molto pi negativo, essendo la specie carica negativamente e dunque pi difficilmente riducibile. Le due onde cos si splittano, ed possibile determinare la concentrazione dei due metalli. Dovrebbe stupire il fatto che, sebbene spesso sia necessario condurre le analisi in ambiente acido (onde evitare formazione di idrossidi), lo ione idronio non si riduca al DME. Questo dovuto al fatto che lidrogeno ha unelevata sovratensione catodica sul mercurio, di circa 1V. Per questo possibile arrivare fino a potenziali tali da ridurre Zn e Ni. Limportanza del pH notevole, quando la concentrazione (attivit) dello ione idronio rientra nella reazione elettrodica (nel caso di reazioni anodiche la concentrazione dello ione ossidrile). Ad esempio, per la riduzione di BrO3-, IO3-, Cr2O72-, NO2-. Infatti, nel caso del bromato, la reazione catodica : Il pH deve dunque rimanere costante, affinch lintensit di corrente generata dalla reazione non vari nel tempo. Certi anioni danno reazioni anodiche a valori di potenziale alquanto bassi (poco positivi o addirittura negativi), come ad esempio: Cl-, Br-, I-, CN-,SCN-. Questo fatto riduce sensibilmente il campo di indagine dellanalisi polarografica, infatti le reazioni anodiche danno onde negative, che precludono lanalisi a quei valori di potenziale. Si pu ampliare il campo di analisi nel caso di ioni come NO3- e ClO4-. Si possono analizzare anche specie organiche, e i gruppi funzionali elettroattivi sono: o Carbonilico o Carbossilico o Perossidi ed epossidi o Nitrogruppi, azogruppi o Alogenuri organici o Idrochinoni e mercaptani (che danno reazione anodica, ossidando dunque il mercurio. I mercaptani prendono il loro nome proprio da questo fatto)

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Se si volesse operare a voltaggi pi positivi di quelli permessi dalla polarografia, si potrebbe sostituire lelettrodo a Hg con uno ad oro, pi nobile e meno facilmente ossidabile. In questo caso si parla di voltammetria. Gli elettroliti di supporto che si possono utilizzare dipendono dal solvente. o Con solventi polari e protici, come acqua e alcoli, in genere si usano: KCl, KNO 3, KClO4 o Con solventi organici e aprotici come il benzene, la piridina, lacetilnitrile (CH 3CN), dimetilformammide (DMF) e dimetilsolfossido (DMSO) si usano: pi raramente LiCl, mentre pi frequentemente sali di tetralchilammonio. Ad esempio, tetrametilammonio, tetraetilammonio (E1/2=-2.4V) , e tetrabutilammonio(E1/2=-2.7V) Questi sali permettono di raggiungere potenziali estremamente negativi, ma con i dovuti accorgimenti, infatti la vita della goccia dipende dal potenziale, come gi visto, e perci bisogna usare elettrodi con tempi in principio molto lunghi.

TITOLAZIONI AMPEROMETRICHE
unalternativa alla polarografia, e consiste nel determinare la concentrazione di un analita grazie ad un titolante, dei quali almeno uno deve essere elettroattivo, e registrare lintensit di corrente sviluppata nel tempo. La cella usata solitamente composta da un contro elettrodo, una buretta per le aggiunte di titolante, e un elettrodo molto simile al DME, ma nel quale la goccia di mercurio sostituita da una pallina di platino, per evitare le fluttuazioni continue del DME. Si nota, se lanalita elettroattivo, e il prodotto della reazione non lo , che ad ogni aggiunta di titolante la i d si abbassa. Infatti si registrano polarogrammi con corrente limite sempre pi bassa. In realt non serve a nulla registrare ogni volta il polarogramma, ed molto pi pratico portarsi direttamente ad una valore Ex di potenziale tale che la corrente sia limite, e misurare quanto questa vari ad ogni aggiunta di volume. Dopodich si possono riportare i punti trovati in un diagramma , in modo da trovare per estrapolazione il punto di equivalenza. Si noti che, a differenza delle titolazioni acido-base, dove i punti importanti per lanalisi sono quelli vicini al pt. finale, in questo caso ininfluente la vicinanza al punto di equivalenza, basta che i valori di intensit non siano sfalsati. Applicazioni: - Nella titolazione di Pb2+ con ioni cromato o dicromato, per precipitazione, si possono avere due grafici diversi, a seconda del potenziale a cui si opera. Infatti a potenziali catodici pi positivi di -0.4 il piombo non si riduce, e quindi non elettroattivo e non genera nessuna corrente limite. Il grafico sarebbe di questo tipo:

Mentre se si opera a potenziali minori di -0.4, il piombo si riduce allelettrodo, e il grafico avrebbe il primo braccio pi inclinato, in questo modo:

Con il nitrato di piombo, invece, si possono precipitare come sali di piombo solfati, molibdati, floruri e cloruri, e titolarli per via amperometrica a potenziali o pi elevati della

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E1/2 della reazione anodica o pi bassi di quella di riduzione del piombo. Altrimenti, a valori di potenziale intermedi, non si registrerebbe corrente in tutta la titolazione. Con 8-idrossichinolina (chelante) sono titolabili per complessazione molti metalli di transizione.

METODI DEAD-STOP - Si basano sulla determinazione del punto finale non per estrapolazione ma per azzeramento dintensit di corrente passante fra due microelettrodi in soluzione. A questi due microelettrodi infatti applicata una differenza di potenziale di solo 0.2 V, tale da non essere sufficiente a fare avvenire ossidoriduzione di coppie redox non reversibili. Perci ammettendo di voler titolare Fe2+ con Ce3+, si pu operare in questo modo: Si aggiunge del cerio (IV), in modo che ossidi il ferro a Fe3+. Cos si genera la coppa redox ferro (II)-ferro(III), che reagir ai microelettrodi perch reversibile, dando una corrente che proporzionale alla specie delle due in difetto, ovvero il ferro (III). Una volta raggiunto il punto di semiequivalenza si otterr un massimo di intensit di corrente ai microelettrodi, essendo le concentrazioni delle specie della coppia esattamente uguali. Si avr invece un valore nullo di intensit una volta che tutto il ferro (II) si sia trasformato in ferro(III), ovvero al punto di equivalenza. Dopodich la corrente agli elettrodi comincer ad aumentare in relazione alle aggiunte di cerio (IV), che ai microelettrodi former una coppia redox con il cerio reagito con il ferro. Attenzione: le coppie redox per dare passaggio di corrente devono essere reversibili, ovvero ossidarsi e ridursi allo stesso potenziale, essere ovvero in equilibrio fra le due specie. Il ferro da una coppia reversibile in ambiente ossalico, ma non in ambiente pirofosforico. Metodo di Karl-Fischer, per la determinazione di tracce di acqua e quindi dellanidricit di un solvente organico. Si usa iodo e diossido di zolfo sciolti in piridinia, cosicch lo iodio si consumi, finch presente acqua, producendo ioduro. Una volta esaurita lacqua, aggiungendo iodio si da origine a una corrente generata ai microelettrodi dalla coppia I2/I-. La reazione che avviene :

Con larsenico (III), titolato con iodio, la situazione diversa, essendo la coppia dellacido arsenico ed arsenioso non reversibile. Si ha perci un grafico dapprima costante, schiacciato sulla linea di fondo, e poi al punto di equivalenza la coppia reversibile iodioioduro dar passaggio di corrente e quindi una retta inclinata positivamente. Titolando lo iodio con solfiti, si ha il caso inverso: una campana tipica del dead-stop, che dopo lo zero di corrente non presenta una retta inclinata.

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POLAROGRAFIE DERIVATE E A IMPULSI

Come determinare con la polarografie concentrazioni per cui ? Derivate: se il segnale di un determinato analita non molto forte, e dunque si vorrebbe amplificare, o se due segnali di due diversi analiti sono molto vicini e sovrapposti, si pu operare con il metodo della derivazione. Infatti, essendo il grafico del polarogramma del tipo (1), il grafico della derivata sar come il (2), dove il massimo in E1/2, che si distinguer molto meglio dalla linea di fondo se amplificato. (1) Inoltre, se si avessero due specie, come il cadmio e lindio, aventi potenziali di mezzonda talmente ravvicinati da dare (2) un polarogramma con un'unica onda, si pu derivare il grafico trovato, riuscendo cos a distinguere molto meglio i due picchi. Cos si ha una molto pi semplice analisi qualitativa. Per un analisi quantitativa tuttavia bisognerebbe ricorrere a complessanti, perch le bande sono ancora molto sovrapposte. A impulsi: operando con questo sistema si riesce ad avere una risposta strumentale molto pi sensibile. Il circuito viene programmato in modo da dare un leggero impulso di potenziale (5-100mV) ogni qualvolta la goccia del DME stia per cadere. Questo fa s che si registri un cambiamento di intensit di corrente registrata, che sar diverso a seconda del punto dellonda polarografica. Allinizio limpulso causer una piccola differenza di intensit, mentre quando ci si avvicina al potenziale di mezzonda il diverr pi grande. Cos, riportando in un grafico i valori di trovati contro il potenziale, si ottiene una curva con massimo, leggermente dentata, e per il resto praticamente analoga al caso della derivata. Questa tecnica pu essere applicata anche ad elettrodi stazionari. Comunque sia, molto importante che il tempo di vita della goccia sia un parametro conosciuto. IMPORTANZA DEL DROP TIME Il tempo di vita della goccia molto importante nella polarografia ad impulsi, dovendo settare il circuito in modo da avere limpulso di potenziale poco prima del drop -time. Si capisce che il tempo di vita della goccia dipende dallaltezza del capillare, che pi sar lungo pi tender a stillare velocemente. Si pu mantenere costante il livello di mercurio nel serbatoio a cui collegato il capillare, in modo da non avere variazioni di altezza della colonna durante lanalisi, con un sistema di refill. Un fattore di cui tenere conto che a voltaggi pi negativi la vita della goccia diventa pi breve, e dunque il polarogramma tenderebbe a regredire in questo modo: Perci generalmente si impiegano DME con tempi di goccia lunghi (~10s), e poi si fa cadere la goccia meccanicamente ogni 2 o 3 secondi, cos da avere tempi sempre uguali e riproducibili.

ELETTRODI : HDME E MTFE

HDME( hanging drop mercury elecrtode), o di Kemula: costituito da un capillare e da un serbatoio a tenuta stagna, per cui il mercurio, anzich gocciolare come nel DME, tende a rimanere attaccato al capillare. Lelettrodo si prepara aspirando il mercurio nel serbatoio (~4mL), dopodich si avvita un tappo per un certo numero di tacche in modo da spingere il mercurio nel capillare, e formare la goccia. Questo metodo si usa nella determinazione di Pb e Cd nelle acque di fiume e di mare, con il metodo dellASV. (vedi dopo)

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MTFE(mercury thin film electrode): Pu essere usato in alternativa allHDME, per determinare concentrazioni di metalli in acqua, anche molto diluiti, come zinco, cadmio, piombo e rame. costituito da un piccolo dischetto di grafite vetrosa (glassy carbon, GC), molto poco porosa e dunque facile da lavare, posta su un supporto di Teflon e collegata al circuito tramite un filo conduttore. Alla soluzione che si vuole analizzare si aggiunge del nitrato di mercurio (II) ,Hg(NO3)2. Il mercurio del sale si ridurr a potenziali molto ridotti, e dunque si depositer sullelettrodo di grafite una sottilissima pellicola (10-20 ), nel quale poi si amalgameranno gli altri metalli, nellASV, che vediamo ora.

ASV ( ANODIC STRIPPING VOLTAMMETRY )

Per soluzioni molto diluite si possono usare gli elettrodi HDME e MTFE per la voltammetria a scansione anodica. La procedura consiste nel applicare allelettrodo un potenziale abbastanza negativo da provocare la riduzione delle specie metalliche presenti in soluzione di cui si vuole determinare la concentrazione, e lo si applica per un tempo detto di deposizione (pre-elettrolisi). In questo lasso di tempo i diversi metalli si depositeranno sullelettrodo, sciogliendosi nel mercurio a formare un amalgama, e concentrandosi sempre di pi, tanto pi lungo il tempo di preelettrolisi. La soluzione dovr essere agitata, onde evitare la polarizzazione dellelettrodo, che bloccherebbe il deposito. Una volta che i metalli si siano concentrati, si inizia lanalisi vera e propria, diminuendo gradualmente e costantemente nel tempo il potenziale applicato allelettrodo (ecco perch stripping). Questo fa s che le specie che si erano ridotte comincino a ossidarsi e a passare in soluzione, con una reazione anodica (da qui il nome anodic). LAVS si pu condurre in scansione lineare, o a impulsi, ovvero la DP -AVS (differential pulses AVS) generalmente preferita perch la deriva della linea di fondo diminuisce di molto, e la risposta strumentale dieci volte pi sensibile. I parametri da controllare sono: - Lefficienza dellelettrolisi - Modalit di stripping (impulsi o lineare) - Tipo di elettrodo da usare: o Con MTFE si ottengono picchi pi stretti di quelli registrati in un AVS con HDME, perch nel primo caso gli ioni passano in soluzione praticamente simultaneamente, data la struttura patinale dellelettrodo MTFE, mentre per lhanging drop si avr un passaggio pi graduale dei metalli disciolti in soluzione, perch si distribuiranno fra la superficie della goccia e il corpo della stessa. - Formazione di complessi intermetallici nellamalgama, in situazioni di concentrazioni di ppm. Ad esempio, in soluzione di zinco e rame, quando questi si depositano allelettrodo si legano in un complesso difficilmente ossidabile. Dunque si pu aggiungere del gallio, cos da formare una lega fra Ga e Cu, e liberare lo zinco di cui si pu registrare il segnale. E il rame? Non c problema, si pu ripetere loperazione registrando il segnale del rame, liberandolo utilizzando un complessante dello zinco. Questo possibile perch il calo di concentrazione del metallo in soluzione non influisce sulla misura successiva, essendo molto ridotto.

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LABORATORIO
QUALIT DEL DATO
Valore vero: indicato con , il risultato dellanalisi compiuta da unanalista esperto ch e conduca un numero ipoteticamente infinito di repliche. In pratica si usano i CRM (Certified Reference Material), garantiti da organismi di preparazione e di controllo, che sono campioni reali in cui la concentrazione di ogni specie di interesse analitico o interferente riportata in un certificato. Errore assoluto: lerrore assoluto E esprime la differenza fra il valore vero e il valore ottenuto. In pratica:

Dove D lerrore sistematico (bias), d lerrore casuale, che pu essere calcolato su base statistica, G lerrore grossolano, di calcolo o di procedimento, lerrore imprevedibile, associato a parametri esterni da cui il sistema dipende. Esattezza: (trueness) esprime la vicinanza di un dato al valore vero (o assunto come tale). Il metodo pi comune per valutarla utilizzare dei CRM, oppure, in mancanza di un materiale di riferimento certificato per un dato analita, aggiungere ad un blank certificato una concentrazione di analita nota. Questa matrice prende il nome di campione spiked. Precisione: la precisione descrive laccordo fra due o pi misure replicate, ed correlata ad errori casuali, allinterno di un set di misurazioni. Il termine precisione pu essere sostituito nello specifico da ripetibilit, qualora le repliche fossero effettuate nello stesso laboratorio, dallo stesso analista, e riproducibilit, quando le misure vengono ripetute in pi laboratori, e in tempi pi lunghi. La precisione dipende perci dal tempo in cui si effettua lanalisi (ricorda lesperi enza 1 di laboratorio, dove la concentrazione di Cr scesa nel tempo) LOD: limit of detection, la minima concentrazione di analita rilevabile con un segnale, cio corrisponde ad un segnale molto simile al bianco ma da esso diverso, in modo da poter essere ricondotto allanalita in questione secondo qualche criterio specifico. Il limite di rilevabilit strettamente correlato al rumore di fondo, noise, e da questo si calcola secondo lequazione:

Dove h laltezza della linea di fondo, calcolata come media delle misure del bianco, e s la deviazione standard calcolata su un numero adeguato (>20) di misure del bianco. MDL: minimum detection limit, un altro modo per definire il limite di rilevabilit, usato da produttori di strumentazione scientifica, definito come un rapporto segnale:rumore di 2:1.

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LOQ: limit of quantification, minima altezza che il picco pu avere per ottenere uninformazione quantitativa, definito come:

CRITERI PER LA SCELTA DEL METODO ANALITICO

1. 2. 3. 4. 5. 6. Strumentazione disponibile ed equipaggiamento richiesto Confronto fra precisione richiesta e quella della tecnica per cui si vuole optare Confronto del tempo di analisi rispetto a quello di urgenza dei risultati Tempo per la messa a punto del metodo Numero di analiti da determinare Costi

TECNICHE
Classiche: si utilizzano solo reazioni chimiche, la normale vetreria e strumentazione di laboratorio e bilance, si misurano dunque solo volumi e masse. Strumentali: determinano la quantit di analita in base a una o pi propiet fisiche correlate alla concentrazione. Si basano su scoperte scientifiche e tecnologiche e prevedono utilizzo di strumentazione specifica, come ad esempio nel caso della spettrofotometria, della cromatografia o di analisi elettrochimiche. Possono essere analisi distruttive o non distruttive. Unanalisi quantitativa presuppone una taratura dello strumento, mentre unanalisi qualitativa si basa su confronto del campione con sostanze di riferimento.

TECNICA, METODO, PROCEDURA O PROTOCOLLO?

importante definire questi concetti basilari della chimica analitica. Tecnica: linsieme di principi teorici ed accorgimenti sperimenta li che permettono di determinare la composizione di una matrice in base a uno o pi fondamentali fenomeni scientifici. Metodo: lapplicazione pratica di una tecnica, volta a risolvere un specifico problema analitico. Procedura: successione degli stadi operativi principali per utilizzare un metodo analitico, delle istruzioni pratiche che definiscano gli stadi della misurazione. Protocollo: linsieme di direttive dettagliate e da seguire rigidamente affinch i risultati dellanalisi siano accettati per fini particolari, come in controversie legali o nellambito di verifica di rispondenza ad un certo parametro stabilito per legge.

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PROCEDURA ANALITICA TOTALE

Basata sul rapporto cliente-analista: le frasi sottolineate prevedono la collaborazione fra operatore e cliente, perch necessario stabilire adeguatamente alcuni parametri. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Definizione del problema dal punto di vista generale. Definizione del problema analitico. Scelta del metodo, tecnica, procedura o protocollo. Campionamento.(il cliente pu conoscere meglio il luogo) Trattamento campione Analisi Valutazione dei dati Conclusioni Relazione.

CAMPIONAMENTO
Il campionamento il prelievo di una massa di campione da una matrice pi estesa tale da essere sufficiente a permettere le analisi previste e non essere troppo ingombrante o poco maneggevole. Il campione deve essere tale che la proporzione della propriet che si vuole accertare rappresenti la proporzione della stessa propiet nella matrice, entro un dato limite derrore. Basi di un qualsiasi sistema di campionamento: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Definizione dellobbiettivo Determinazione dello scopo e dellaccuratezza voluta Identificazione del tipo di campione che si deve raccogliere Scelta dei punti e dei luoghi di campionamento Definizione dei parametri da inserire nel programma di raccolta (temperatura, umidit..) Precauzioni di sicurezza e di igiene Messa a punto di un piano che stabilizzi il numero di campioni da prelevare in base al tempo richiesto dalloperazione e allaccessibilit e distanza del luogo. 8. Selezione equipaggiamento per il campionamento 9. Individuazione degli adeguati sistemi di manipolazione, stoccaggio e trasporto dei campioni 10. Considerazione di eventuali metodi di analisi su campo 11. Definizione del metodo di documentazione Il contenitore molto importante: meglio di vetro nel caso di analiti organici e di plastica nel caso di analiti inorganici.

CONCENTRAZIONI
Si opta per diverse unit di misura nel caso di: Soluzioni acquose: o mg/L, ma per campioni con meno di 0.1mg/L si esprime il dato in g/L.

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o per concentrazioni maggiori di 10000mg/L si pu esprimere la concentrazione, se la densit d=1, in %: 10000mg/L=1% (siccome 1L pesa 1Kg e 10 g ne sono la centesima parte). o In ogni caso si pu esprimere la concentrazione in M o m. Solidi o acque di scarico (d1): o Percentuale in peso o ppm o ppb Atmosfera: o In peso: mg/m3 o g/m3. o In volume: ml/m3, chiamati anche ppm a 1atm e 25C o La concentrazione di particelle si esprime anche in numero di particelle per centimetro cubo pp/cm3, in base a misure granulometriche.