R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N

S o u r c e s of Mi c r o o r g a ni s m s i n F o o d s

S oil M. Fl o r a B a cill u s, Cl o st ri d ui m, E. c oli, E nt e r o b a ct e r, Fl a v o b a ct e ri u m, P s e u d o m o n a s, P r ot e u s,

L e u c o n o st o c, A c et o b a ct e r ( H e at r e si st a nt s p o r e f o r mi n g b a ct e ri a )
M. O. i n W at e ( w at e r b o r n e P s e u d o m o n a s, C h r o m o b a ct e ri u m, P r ot e u s, Mi c r o c o c c u s, B a cill u s, St r e pt o c o c c u s,
b a ct e ri a c all e d c olif o r m s.) E nt e r o b a ct e r, a n d E. c oli
Ai r b o r n e M. O. F u n g al s p o r e s a n d b a ct e ri al s p o r e s a r e p r e d o mi n a nt i n ai r, Y e a st s
M. O. i n V e g et ati o n l a cti c a ci d b a ct e ri a, P s e u d o m o n a s
M. O. f r o m A ni m al B r u c ell a s p s, M y c o b a ct e ri u m t u b e r c ul o si s, C o xi ell a b u r n etti, S al m o n ell a t y p hi a n d
p a r at y p hi, Li st e ri a m o n o c yt o g e n s, C a m p yl o b a ct e r j ej u ni, P h a e m ol yti c St r e pt o c o c c u s,
E. c oil, Cl o st ri di u m p e rf ri n g e n s a n d Cl o st ri di u m b ol uti n u m.
➢ D r y ai r c o nt ai n s m o r e o r g a ni s m s t h a n m oi st ai r

T y p e s of mi c r o o r g a ni s m a s s o ci at e d wit h f o o d – s o m e i m p o rt a nt f o o d s p oil a g e mi c r o o r g a ni s m
1. C o m m o n B a ct e ri a P r e s e nt i n F o o d
A c et o b a ct e r o xi di z e et h a n ol t o a c eti c a ci d
Al c ali g e n e s p r o d u c e s r o pi n e s s i n mil k
B r e vi b at e ri u m b a ct e ri a p r o d u c e s o r a n g e r e d pi g m e nt a n d h el p s ri p e ni n g
C a m p yl o b at e r g a st r o e nt e riti s i n h u m a n
Cl o st ri di u m G r a m p o siti v e, s p o r e f o r mi n g r o d s & o bli g at e ( st ri ct) a n a e r o b e s. M a n y s p e ci e s a r e c a p a bl e of
f e r m e nti n g c a r b o h y d r at e a n d p r o d u c e a ci d s a n d g a s e s.
 Cl o st ri di u m b ot uli n u m ( c a u s e s b ot uli s m).
 Cl o st ri di u m p e rf ri n g e n s ( c a u s e s g a s g a n g r e n e a n d f o o d p oi s o ni n g)
C o r y n e b a ct e ri u m C o r y n e b a ct e ri u m di p ht h e ri a e, c a u s e s di p ht h e ri a i n h u m a n s
Cit r o b a ct e r L a ct o s e -f e r m e nti n g, p r o d u c e y ell o w c ol o ni e s .
D e s ulf o m a c ul u m s ulf u r o xi di zi n g b a ct e ri a
E r wi ni a E r wi ni a c a r ot o v o r a i s t h e m o st i m p o rt a nt o r g a ni s m r e s p o n si bl e f o r s p oil a g e of f o o d.
Fl a v o b a ct e ri u m y ell o w t o r e d pi g m e nt s o n a g a r
s p oil a g e of r ef ri g e r at e d m e at s a n d v e g et a bl e s (H af ni a b a ct e ri a al s o s p oil a g e of
r ef ri g e r at e d f o o d)
Kl e b si ell a ( Kl e b si ell a p n u e m o ni a e )b a ct e ri al p n e u m o ni a i n h u m a n
L a ct o b a cill u s f e r m e nt t h e c a r b o h y d r at e l a ct o s e a n d c a n p r o d u c e a ci d s a n d g a s
o c c u r r e n c e i n d ai r y p r o d u ct s i s c o m m o n
Li st e ri a s p oil a g e t o fi s h a n d fi s h p r o d u ct s
M y c o b a ct e ri u m M y c o b a ct e ri u m t u b e r c ul o si s (t u b e r c ul o si s), M y c o b a ct e ri u m l e p r a e (l e p r o s y)
P r ot e u s s w a r mi n g g r o wt h o n t h e s u rf a c e of m oi st a g a r pl at e s
P s e u d o m o n a s: T h e s e a r e o n e of t h e l a r g e st f o o d b o r n e b a ct e ri a .
S al m o n ell a S al m o n ell a t y p hi a n d S al m o n ell a p a r at y p hi - c a u s e e nt e ri c f e v e r.
S hi g ell a d y s e nt e r y i n h u m a n
St a p h yl o c o c c u s G r a p e Li k e Cl u st e r s , f o o d b o r n e g a st r o e nt e riti s.
St r e pt o c o c c u s l o n g o r s h o rt c h ai n s
Vi b ri o c h ol e r a.
Y e r si ni a h u m a n pl a g u e
2. M o ul d s a n d Y e a st
❖ F u n g u s ( e u k a r y oti c s p o r e p r o d u ci n g o r g a ni s m s) N o n p h ot o s y nt h eti c & C h e m o h et e r ot r o p hi c M o d e Of N ut riti o n
• U ni c ell ul a r f u n gi— Y e a st
• M ulti c ell ul a r f u n gi— M o ul d ( T r u e F u n gi)
❖ C h e m o h et er otr o ps :- us e or g a ni c m at eri al as t h e m ai n s o ur c e of c ar b o n / e n er g y
S e x u al s p o r e s Z y g o s p o r e, A s c o s p o r e, O o s p o r e A n d B a si di o s p o r e
A s e x u al s p o r e c o ni di o s p o r e, a rt h r o s p o r e, bl a st o s p o r e a n d c hl a m y d o s p o r e , s p o r a n gi o s p o r e,.
3. Vi r u s
❖ H e p atiti s A, a s w ell a s N o r o vi r u s, a r e t w o of t h e m o st c o m m o n f o o d-b o r n e i nf e cti o n s.
4. P a r a sit e s
❖ P a r a sit e s a r e u s u all y n ot a m aj o r c a u s e of f o o d c o nt a mi n ati o n
❖ C r y pt o s p o ri di u m p a r v u m a n d Gi a r di a l a m bli a a r e t h e t w o p ri m a r y p a r a sit e s t h at c a u s e f o o d p oi s o ni n g.
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
B A C T E RI A

Mi cr o or g a ni s m

Pr otist a ki n g d o m

Pr o k ar y ot es E u c ari ot es

E x. B a ct eri a, Bl u e Gr e e n Al g a e F u n gi, ot h er al g a e, sli m e m ol ds,

Pr ot oz o a, h el mi nt h es & h u m a n
D o n ot c o nt ai n c hl o p h yll, u ni c ell ul ar
D o n ot s h o w br a n c hi n g E X C E P T -A cti n o m y c eti es .
❖ B a ct eri a h a v e cir c ul ar D N A c all e d pl as mi ds
1. M O R P H O L O G Y O F B A C T E RI A: -
a. C ell s h a p e ( 1 -5 mi cr o n i n l e n gt h) • T e c h oi c a ci d - Gr a m + v e b a ct eri a
i. S p h eri c al — c o c ci, ri n g, c o c c us • M y c oli c a ci d - A ci d f ast b a ct eri a
ii. R o a ds - b a cilli or b a cill us
iii. S pir al & c ur v e d f or m (s piril a / s pirill u m)
i v. Pl e o m or p hi c – n o d efi n e d str u ct ur e, l a c k of ri gi d c ell w all e x. h a e m o p hill us i nfl u e nz a.
2. MI C R O S C O P Y : -
a. O pti c al & li g ht mi cr os c o p e: - w et fil m & H a n gi n g Dr o p M et h o d — t ell a b o ut s h a p e, arr a n g e m e nt, m otilit y ,
& siz e of c ell
b. P h as e c o ntr ast mi cr os c o p y: -t ell a b o ut str u ct ur e wit hi n t h e c ell t h at diff ers i n t hi c k n ess & r efr a cti v e i n d e x.
3. S T AI NI N G T E C H NI Q U E S: -
a. Si m pl e st ai ni n g ( p ositi v e st ai ni n g):-m et h yl bl u e ( b asi c d y e) or b asi c f us c hi n ( b as m ati)
A bs e n c e or
pr es e n c e ar e
C ell is n e g ati v el y c h ar g e d, d y e is p ositi v e – s o pr o d u c e c ol or
di a g n os e d b. N e g ati v e st ai ni n g (f or s pir o c h et es) :- I n di a n i n k, ni gr osi a n ( c ol or s ol m e M. O. d al d et e h)
c. I m pr e g n ati o n m et h o d:- c ell & c ell str u ct ur e t o o t hi n t o s e e n u n d er or di n ar y mi cr os c o p e ---t h e y ar e
t hi c k e n e d b y i m pr e g n ati o n of sil v er o n t h e s urf a c e— us ef ul f or s pir o c h et es & b a ct eri al fl a g ell a .
d. Diff er e nti al st ai ni n g: -
Gr a m st ai ni n g ( Cri sti a n gr a m) A ci d f ast / z ei hl n el s o n ( E hrli c h )
1. Pri m ar y st ai ni n g - cr yst al vi ol et, g e nti a n vi ol et, m et h yl vi ol et S o m e b a ct eri a ar e eit h er gr a m + v e/ -v e. B ut t h e y
2. A p pli c ati o n of dil. S ol of I O DI N E-( m or d a nt d y e) n ot s h o w gr a m st ai ni n g s o w e us e a ci d f ast st ai ni n g
3. D e c ol o uriz ati o n: - b y et a n ol, a c et o n e, a nili n e
4. C o u nt er st ai ni n g: -b y C ar b ol f u es c hi n, N e utr al r e d, S afr a ni n 1. St ai ni n g wit h str o n g s ol. of C A R B O L F U S H CI N
Gr a m p ositi v e Gr a m n e g ati v e (r e d)
❖ C ar b ol f us hi n c o nt ai n 5 % p h e n ol
• R et ai n pri m ar y st ai n d e c ol oriz ati o n b y 2. A p pli c ati o n of h e at
• R esist d e c ol oriz ati o n or g a ni c s ol v e nt 3. D e c ol oriz e d b y 2 0 % H 2 S O 4
• M or e a ci di c pr ot o pl as m s o r et ai n A p p e ar c o u nt er st ai n 4. C o u nt er st ai ni n g wit h m et h yl e n e bl u e
b asi c d y e & A p p e ar B L U E/ VI O L E T R E D / PI N K 5. A ci d f ast b a ct eri a r et ai n f us hi n c ol o ur (r e d) d u e
• Gr a m r e a cti o n – r el at e d t o p er m e a bilit y of t h e b a ct eri al c ell t o hi g h c o nt e nt of u n-s a p o nifi c a bl e li pi d & O H
w all & c yt o pl as mi c m e m br a n e t o D y e -i o di n e c o m pl e x & C O O H ( m y c oli c a ci d) w hil e ot h er c o nt ai n
• Gr a m n e g ati v e b a ct eri a all o w t h e o utfl o w of t his c o m pl e x c o u nt er st ai n ( bl u e).
e. S p or e st ai n: -
❖ M o difi e d a ci d f ast st ai ni n g ❖ D or n er’s m et h o d
❖ M oll er m et h o d ❖ F c h a eff er & f ult o n m et h o d

f. C a ps ul ar st ai ni n g: -
❖ W et I n di a n i n k m et h o d
❖ Hiss’s m et h o d
❖ M a n a v el’s m et h o d
❖ M ur e’s m et h o d
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
❖ E x a m pl e of a ci d f ast or g a ni s m: - m y c o b a ct eri u m, b a ct eri al s p or es, n o c ar di a, a cti n o m y c et es,
as c os p or es i n c ert ai n y e asts.
❖ A ci d f ast n ess of b a ct eri a d e p e n d u p o n: - i nt e grit y of c ell w all & m y c oli c a ci d
❖ A ci d f ast ( 5 %) p ositi v e : - m y c o b a ct eri u m l e pr a e
❖ A ci d f ast ( 2 0 %) p ositi v e : - m y c o b a ct eri u m t u b er c ul osis
❖ Si m pl e st ai ni n g: - m or p h ol o g y di a g n os e d
❖ Diff e nti al st ai ni n g: - f or fl a g ell a, c a ps ul e, s p or es & m et a c hr o m ati c gr a n ul es d et e cti o n.

4. B A C T E RI A L C E L L W A L L :- (s h a p e ( 1 0 -2 5 n m) ri gi dit y & d u ctilit y )— n ot s e e n b y si m pl e or dir e ct li g ht

mi cr os c o p e s o d e m o nstr at e d b y
a. Pl as m ol ysis
b. Mi cr o diss e cti o n
c. R e a cti o n wit h s p e cifi c a nti b o d y
d. M e c h a ni c al r u pt ur e
e. Diff er e nti al st ai ni n g
f. El e ctr o n mi cr os c o p e
• L -a mi n o a ci ds ar e n at ur al (f or m e d i n h u m a n b o d y) a n d e nz y m es
of b o d y ar e f or m e d b y L -a mi n o a ci ds. S o b o d y e nz y m es ar e a ct
o n o nl y L -a mi n o a ci d n ot a ct o n D - a mi n o a ci d.
• W hil e b a ct eri al c ell w all m a d e u p of D -a mi n o a ci ds s o r esist a nt
t o h u m a n p e pti d as e e nz y m es.

G R A M P O SI TI V E G R A M N E G A TI V E
❖ C ell w all c o m p os e d of m u c o p e pti d e ( p e pti d o gl y c a n or • o ut er m e m br a n e of C ell w all c o m p os e d of o -
m u r ei n) f or m e d b y N A G & N A M ( alt er n ati v e c h ai n cr oss p ol ys a c c h ari d e ( o -a nti g e ni cit y) & li pi d A (li p o -
li n k e d b y p e pti d es) p ol ys a c c h ari d e) -w hi c h is a n e n d ot o xi n k/ a b oi vi n
a nti g e n
❖ It h as p ori ns c h a n n els- s er v e as diff usi o n c h a n n el • T hir d is p eri pl as mi c s p a c e -c o nt ai n h y dr ol yti c
r e c e pt ors f or v ari o us b a ct eri o p h a g e. e nz y m es ( b et a l a ct a m as e) & tr a ns p ort ers.
❖ C ell w all c o m p os e d of t hi c k l a y er of p e pt o d o gl y c a n (it
d e cr e as e p er m e a bilit y) w hi c h is c o v al e ntl y li n k wit h
Ri bit ol / Gl y c er ol t e c h oi c a ci d ( m aj or s urf a c e a nti g e n)
b y p h os p h o di est er as e b o n d.
C ell w all c o m p o siti o n
❖ P e pti d o gl y c a n ❖ P e pti d o gl y c a n
❖ Pr ot ei n ❖ Pr ot ei n
❖ P ol ys a c c h ari d e ❖ Li p o p ol ys a c h eri d e
❖ T e c h oi c a ci d ❖ P h os p h oli pi d
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
❖ Pr ot o pl ast: b a ct eri a wit h o ut c ell w all
❖ S p h er o pl ast: -b a ct eri a wit h s o m e c ell w all is r et ai n e d ( m ai nl y i n gr a m n e g ati v e)

Gr a m n e g ati v e Gr a m p o siti v e
❖ Di pl o c o c c us -2 c ells ar e i n p air • St a p h yl o c o c c us • P n e u m o ni a
C o c ci / s p h eri c al • N eiss eri a g o n o c o c c us • Mi cr o c o c c us • Str e pt o c o c c us
• N eiss eri a m e ni n g o c o c c us • s ar ci n o c o c c us
M otil e N o n m otil e M otil e N o n m otil e
❖ S al m o n ell a ❖ S hi g ell a ❖ cl ostri di u m ❖ m y c o b a ct eri u m
❖ Citr o b a ct er ❖ Kl e bsi el a ❖ c ori n o b a ct eri u m
❖ Vi bri o c h ol eri ❖ Br u c ell a ❖ a cti n o m y c eti es
B a cilli / r o d s h a p e d
❖ E. c oli ❖ P ast ur ell a ❖ l a ct o b a cill us
❖ Pr ot e us ❖ h a e m o p hil us ❖ list eri a
❖ cl ostri di u m p erfri g e n es
❖ cl ostri di u m t et a ni t y p e I V
S P O R E F O R MI N G B A CI L LI
A er o bi c B a cilli A n a er o bi c b a cilli
B a cill us a ntr a x Cl ostri di u m t et a ni
B a cill us s u btil us Cl ostri di u m b ot uli n u m
Cl ostri di u m p erfri g e ns

5. C A P S U L E & G L Y C O C A L Y X: -
a. Sti c k y vis c o us m at eri al s e cr et e d b y b a ct eri a – fr o m t h e e xtr a c ell ul ar c o ati n g ar o u n d t h e c ell.
b. P ol ys a c c h ari d e i n n at ur e ( e g. p n e u m o n o c o c c us) b ut i n p at h o g e ni c B a cill us a nt hr a cis it is
P ol y -D gl ut a mi c a ci d
c. C a ps ul e :-ti g ht b o u n d t o t h e cell & h as or g a niz e d str u ct ur e
d. Gl y c o c al y x or sli m e l a y er : - l o os el y b o u n d e d, t h e y all o w t h e c ell t o a d h er e o n t h e s urf a c e .
A n d it h as v er y l ess affi nit y t o b asi c d y e ( e g. l e u c o n ost o c k).
• T h e y pr ot e ct t h e b a ct eri a fr o m a nti b o di es p h a g o c yt osis.
• A ct as a diff u si o n b arri er f or s o m e a nti b o di es.
• C a ps ul e s w elli n g or q u ell u n g r e a cti o n ( b y n e ufi el d): - f or t y pi n g of p n e u m o n o c o o ci.
S us p e nsi o n of c a ps ul at e d b a ct eri u m + s p e cifi c a nti -c a ps ul ar s er u m

C a ps ul e s w ells d u e t o i n cr e as e i n r efr a cti vit y

N ot e: - B a c t eri a h a vi n g b ot h c a ps ul e & sli m e l a y er— str e pt o c o c c us sli v arit us
N ot e: - C a ps ul e is a nti g e ni c.
✓ C a ps ul e ar e n ot st ai n e d b y gr a m st ai ni n g
C a ps ul at e d or g a nis m Y arsi ni a, kl e bsi ell a, B. a nt hr a x, b or d et ell a, Cr y pt o c o c c us, , H. i nfl u e nz a,
p n e u m o ni a, fr es h str ai n of st a p h yl o c o c c us, str e pt o c o c c us & E. c oli

6. A P P E N D A G E S: -
H air li k e str u ct ur e t h at pr ot e ct c ell w all
• Fl a g ell a – ori gi n at e d fr o m i n n er c yt o pl as mi c m e m br a n e ( o ut gr o wt h of c yt o pl as m)
• Pilli / fi m bri a e (s e x Pilli) – ori gi n at e d fr o m o ut er m e m br a n e c ell w all
6. 1. Fl a g ell a : - ( e x c e pt s pir o c h et es t h e y h a v e e n d ofl a g ell a / p ol ar)
• P e pti d o gl y c a n S m all b as al or g a ns j ust b e n e at h t h e c yt o pl as mi c m e m br a n e . T h e y ar e r es p o nsi bl e
f or t h e m o v e m e nt of m otil e b a ct eri a.
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
• L o n g, s e mi ri gi d, h eli c al h all o w t u b ul ar str u ct u r e— c o m p os e d of t h o us a n ds of pr ot ei n – c all e d
F L A G E L LI N .
• D et e ct e d b y D ar k Fi el d Mi cr os c o p y & El e ctr o n Mi cr os c o p y.
• M otil e ( or g a n of l o c o m oti o n), its m otilit y o bs er v e d i n a g ar m e di u m . Fl a g ell a m a d e -u p of p ol ys a c c h ari d es
E x c e pt B. a nt hr a x ( p ol y p e pti d e)
• C h e m ot e cti c a n d hi g hl y a nti g e ni c.
• Att a c h e d t o c ell w all or c ell m e m br a n e or b ot h b y a b as al b o d y .
• C ell m a y h a v e o n e or m or e fl a g ell a, oft e n t h e y n ot f or m c ol o ni es.
• I n d u c e s p e cifi c a nti b o di es – n ot pr ot e cti v e b ut us ef ul f or s er o di a g n osis

P art of fl a g ell a: -
Fil a m e nt

H o o k & b as al b o d y

All ar o u n d t h e c ell
P eritri c h o us
Fl a g ell a o n e ntir e b o d y
E g. T y p h oi d b a cilli , E. c oli,
pr ot e us, list eri a, c. t et a ni
At o n e e n d / o n b ot h e n d / p ol ar
M o n otri c h o us L o p h otri c h o us A m p hitri c h o us
Si n gl e fl a g ell a I n t h e f or ms of t ufts At b ot h p ol es
E g. C h ol er a , ps e u d o m o n as, E g. S pirill a, H. p yl ori, E g. Nitr os o m o n as ,
l e gi o n el a, s pir o c h et es c a m p yl o b a ct er, vi bri o list eri a

❖ Atri c h o u s :- fl a g ell a a bs e nt e x. p ast ur ell a

6. 2. Fi m bri a e ( pili): - it is d o es N O T r el at e d t o l o c o m oti o n.

• Pili ( pil us) g e n eti c r e c o m bi n ati o n • Fi m bri a e a d h esi o n t o s urf a c es
• S h ort er & t hi n n er t h a n fl a g ell a
• It is att a c h m e nt or g a n t h at pr o m ot es c ell t o c ell c o nt a ct ( b a ct eri a + b a ct eri a). & als o
r es p o nsi bl e f or c ell a d h esi o n ( b a ct eri a + h ost) e x. E. c oli
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
• S e x pili f or m e d i n m al e o nl y. A n d h el ps i n t h e att a c h m e nt of t h os e c ells t o f e m al e
b a ct eri a.

7. G R O W T H & M U L TI P LI C A TI O N O F B A C T E RI A: -
• B a ct eri a di vi d e d b y Bi n ar y Fis si o n . ( 1---2 ---4 ---8 ---1 6).

T h e i nt er v al of ti m e b et w e e n 2 c ell di visi o n
OR
C all e d as g e n er ati o n ti m e/ p o p ul ati o n d o u bli n g ti m e
F or e x. T u b er c ul osis b a cilli 2 0 hrs
L e pr a -2 0 d a ys
E. c oli -2 0 mi n

L a g p h as e L o g p h as e /
( m a xi m u m c ell siz e o bt ai n t o w ar d e n d of l a g p h as e) e x p o n e nti al
• N o a p pr e ci a bl e i n cr e as e i n n u m b er b ut M a y b e a n • C ells st art di vi di n g
i n cr e as e i n siz e s o n u m b er of c ell
• It is ti m e f or a d a pt ati o n d uri n g w hi c h n e c ess ar y i n cr e as es
e nz. & m et a b oli c i nt er m e di at es f or m i n a d e q u at e e x p o n e nti all y /
q u a ntit y f or m ulti pli c ati o n g e o m etri c
pr o gr ati o n
St ati o n ar y p h as e
• C ell di visi o n st o p
D u e t o d e pl eti o n of
n utri e nts & a c c u m ul ati o n
of t o xi c pr o d u ct.
• N u m b er of c ell c o nst a nt

C ells ar e b us y i n
r e pli c ati n g v ari o us E x ot o xi n
N u m b er
pr ot ei ns & D N A pr o d u cti o n
of c ells
i n cr e as e

• Gr a m
v ari a bl e
L o n g est p h as e • P o p ul ati o n d e cr e as es d u e t o c ell d e at h
N o. of • Irr e g ul ar
• N utriti o n al e x h a usti o n & t o xi c
c ells st ai ni n g d u e
E xtr e m el y a c c u m ul ati o n, a ut ol yti c e nz y m e.
M a xi m u m t o st or a g e
a cti v e i n • Als o d e cr e as e i n siz e of c ells.
gr a n ul es
c ell siz e i n t his p h as e
t h e e n d of F or m ati o n of i n o v ul ati o n f or m
l a g p h as e • D e at h = pr o d n

C ells s m all er & • m a xi m u m 2 0

st ai n u nif or ml y m et a b olit e
• S p or ul ati o n

L a g p h as e L o g p h as e/ e x p o n e nti al St ati o n ar y P h as e D e at h / d e cli n e p h as e

Ti m e
❖ Vi a bl e c o u nt - l a g p h as e, l o g p h as e, st ati o n ar y p h as e, d e cli n e p h as e
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
❖ T ot al c o u nt - l a g p h as e, l o g p h as e, st ati o n ar y p h as e (i n t h e t ot al c o u nt, t h e p h as e of d e cli n e is
n ot e vi d e nt)
❖ B a ct eri a pr o d u c e s e c o n d ar y m et a b olit e pr o d u ct s u c h as e x ot o xi ns & a nti bi oti cs i n st ati o n ar y
p h as e

8. B A C T E RI A L N U T RI TI O N: -
a. Cl assifi c ati o n of b a ct eri a a c c or di n g t o t h eir e n er g y r e q uir e m e nt & o n t h eir a bilit y t o
s y nt h esiz e es s e nti al m et a b olit e r e q uir e m e nt
H et er otr o p s C h e m otr o p s P h ot otr o p s A ut otr o p es
• R e q uir e or g a ni c c ar b o n f or • o bt ai n e n er g y • B a ct eri a • B a ct eri a w hi c h s y nt h esiz e all t h eir
gr o wt h fr o m c h e mi c al w hi c h d eri v e or g a ni c c o m p o u n d t h eir o w n.
• U n a bl e t o s y nt h esiz e t h eir o w n r e a cti o n e n er g y fr o m • D o n ot r e q uir es or g a ni c c ar b o n f or
m et a b ol it e & d e p e n ds u p o n s u n li g ht gr o wt h.
pr ef or m e d or g a ni c c o p o u n d. • ar e a bl e t o utiliz e at m os p h eri c C O 2
• U n a bl e t o gr o w wit h C O 2 & nitr o g e n.
b. O n t h e b asi s of o x y g e n r e q uir e m e nt & m et a b oli s m: -

1. A er o bi c b a ct eri a R e q uir e o x y g e n f or gr o wt h. A er o bi c b a ct eri a o bt ai n e d t h eir e n er g y &

i nt er m e di at es o nl y t hr o u g h o xi d ati o n.
1. 1. O bli g at es Gr o wt h o nl y i n pr es e n c e of o x y g e n e g. Vi bri o c h ol eri
1. 2. F a c ult ati v e C a n gr o w b ot h i n pr es e n c e or a bs e n c e of o x y g e n e g. E. c oli
1. 2. 1. Tr u e f a c ult a ti v e Pr ef e nti all y o x y g e n
1. 2. 2. Mi cr o a er o p hili c Gr o w b est i n pr es e n c e of l o w o x y g e n t e nsi o n. e g. C a m p yl o b a ct er j ej u ni.

2. A n a er o bi c b a ct eri a C a n gr o w i n t h e a bs e n c e of o x y g e n e g. Cl ostri di u m b ot uli n u m

2. 1. O bli g at es Gr o w o nl y i n t h e a bs e n c e of o x y g e n

O bli g at es a er o b es M y c o b a ct eri u m, n o c ar di a, ps e u d o m o n as, B. c er e us, b ort el a, l e gi o n el a,

F a c ult ati v e a er o b es
O bli g at es a n a er o b es
F a c ult ati v e a n a er o b es
Mi cr o a er o p hili c
br u c ell a, m e ni n g o c o c ci
E. c oli
Cl ostri di u m , b a ct er oi d es
S hi g ell a, m y c o b a ct eri u m, E. c oli, st a p h yl o c o c c us, c or y n e b a ct eri u m, list eri a,
s al m o n ell a, a cti n o m y c es, B. a nt hr a x
C a m p yl o b a ct er, str e pt o c o c c us, s pir o c h et es ( b orr eli a, l e pt os pir a, tr e p o n e m a)

c. C ar b o n di -o xi d e: - all b a ct eri a n e e d e d l o w a mt of C O2 b ut br us ell a a b ort us r e q uir e hi g h

c o n c e ntr ati o n f or gr o wt h s o it is c all e d c a p n o p hili c.
d. T e m p er at ur e: -
Ps y c hr o p hili c M es o p hili c T h er m o pil es
Gr o w b el o w 2 0 0 C 2 5 – 4 0 0 C e g. G o n o c o c c us 5 5 - 8 0 0C
Ps e u d o m o n as a er u gi n os a ( 5 - 4 3 C)
0
E g. B a cill us str e ot h er m o p hil us
T D P f or m es o p hili c b a ct eri a 5 0 - 6 0 C 0

e. p H :- b est gr o wt h at p H 7. 2 – 7. 6
i. A ci d o p hili c b a ct eri a e g. L a ct o b a cilli gr o w u n d er a ci di c c o n diti o n
ii. 5 % of H 2 S O 4 kills m ost of b a ct eri a e x c e pt m y c o b a ct eri u m.
9. C U L T U R E M E DI A: -
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
a. Si m pl e m e di a: - ( b as al m e di a):- n utri e nt br ot h 2 % a g ar
b. C o m pl e x m e di a
c. S y nt h eti c & d efi n e d m e di a: - si m pl e p e pt o n e w at er m e di a 1 % p e pt o n e wit h 0. 5 % N a Cl i n
w at er.
d. E nri c h e d m e di a: - d ors et’s e g g m e di a , mil k a g ar, c h o c ol at e a g ar m e di a, l o effl er s er u m, bl o o d
a g ar
e. E nri c m e nt m e di a: -
i. T etr at hi o n at e br ot h: - f or t y p h oi d & p ar at y p h oi d
ii. S el e nit e F br ot h: - f or d ys e nt er y b a cilli
iii. L o w est e n j e ns o n m e di a f or t u b er c ul osis.
f. S el e cti v e m e di a :- i n hi biti n g s u bst a n c e is a d d e d t o a s oli d m e di a
➢ E g . D e o x y c h ol at e citr at e m e di u m f or d ys e nt er y b a cilli.
➢ L o w est e n j e ns o n m e di a f or t u b er c ul osis.

g. I n di c at or m e di a:- it c o nt ai n i n di c at or – c h a n g e i n c ol or w h e n b a ct eri al gr o wt h t a k es pl a c e
➢ S ul p hit e i n Wilso n & bl air m e di u m – S. t y p he r e d u c es s ul p hit e t o s ul p hi d e i n t h e
pr es e n c e of gl u c os e – bl a c k m et alli c s h e e n.
➢ P ot. T ell uri d e i n m eli o ds m e di u m – di p ht h eri a b a cill us – b al c k c ol o n y

h. Diff er e nti al m e di u m : -
➢ M a c C o n k e ys m e di u m – l a ct os e f er m e nt b a ct eri a gi v e r e d c ol or (p e pt o n e, l a ct os e,
a g ar, n e utr al r e d, t a ur o c h ol at e. )
➢ N a gl er’s m e di u m – l e cit h e n as e a cti vit y.
➢ Bl o o d a g ar: - diff er e nti at e h a e m ol yti fr o m n o n -h a e m ol yti c
i. S u g ar m e di u m: - 1 % of s u g ar i n p e pt o n e w at er + i n di c at or
➢ D ur h a m’ s t u b e
➢ Hiss s er u m a g ar m e di u m ( 3 % s er u m) – f or p n e u m o c o cci
j. Tr a ns p ort m e di u m: - (li k e g o n o c o c ci)-m e di a is d e vis e d f or tr a ns p orti n g c/ d as tr a ns p ort
m e di u m
➢ D o n’t s ur vi v e t h e ti m e t a k e n f or tr a ns p orti n g t h e s p e ci m e n t o t h e l a b or m a y b e
o v er gr o w n b y n o n p at h o g e ns ( e g. D ys e nt er y or c h ol er a or g a nis m i n f a c es)

➢ E g. St u art’s m e di u m - f or g o n o c o c ci
o N o n n utri e nt
o C o nt ai n r e d u ci n g a g e nt
o C h ar c o al – t o n e utr aliz e b a ct eri al i n hi bit ors.
➢ Gl y c er ol s ali n e f or st o ol
k. M e di a f or A n a er o bi c b a ct eri a : - ( cl ostri di u m b ot uli ni u m)
➢ R o b erts o n’s c o o k e d m e at m e di u m.

1 0. B A C T E RI A L T O XI N S
E x ot o xi ns
E xtr a C ell ul ar M et a b oli c Pr o d u cts – s e p ar at e d fr o m
c ult ur e b y filtr ati o n
P r o d u c e d b y b ot h gr a m p ositi v e as w ell as n e g ati v e
( m ai nl y b y gr a m p ositi v e e x c e pt s h e g ell a, c h ol er a, E. c oli
)
W at er s ol u bl e hi g h m ol. wt. pr ot ei n & e nz y m ati c s o t h e y
E n d ot o xi ns
Str u ct ur e d El e m e nt of B a ct eri a – o bt ai n e d b y c ell
l ysis
C o nt ai n o nl y gr a m n e g ati v e b a ct eri a e x c e pt list eri a
m o n o c yt o g e n us (it is gr a m p ositi v e b a ct eri a)
P h os p h oli pi d, p ol ys a c c h ari d e pr ot ei ns , n ot
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
ar e h e at l a bil e (l oss a cti vit y at 6 0 0 C) e nz y m ati c s o it is h e at st a bl e
S h o w tiss u e affi nit y s o s h o w s p e cifi c p h ar m a c ol o gi c al N o affi nit y
a cti o n
Hi g hl y a nti g e ni c, a cti o n s p e cifi c all y n e utr a liz e d b y W e a kl y a nti g e ni c, n e utr aliz ati o n of a nti b o d y is
a nti b o d y i n eff e cti v e

 Bi ol o gi c al a cti viti es of e n d ot o xi ns: -

o P yr o g e ni cit y – l et h al a cti o n – d e cr e as e bl o o d pr ess ur e
o A cti v at e c o m pli m e nt s yst e m – i ntr a v as c ul ar c o a g ul ati o n – L e u c o p e ni a
o I n hi biti o n of M a cr o p h as e – i nt erf er o n r el e as e – i n d u c e pr ost a gl a n di n s y nt h esis
o L e u c o c yt osis – i n hi bit gl u c os e & gl y c o g e n s y nt h esis i n li v er – sti m ul at e b et a l y m p h o c yt e
❖ N e ur ot o xi ns
• us u all y i n g est e d as pr ef or m e d t o xi ns
• St a p h yl o c o c c al t o xi ns ( St a p h. a ur e us)
• B ot uli n u m t o xi n ( Cl ostri di u m b ot uli n u m)
❖ E nt er ot o xi ns
• h a vi n g a dir e ct eff e ct o n i nt esti n al m u c os a ( eli cit fl ui d s e cr eti o ns)
• C h ol er a t o xi n ( Vi bri o c h ol er a e)
• E. c oli t o xi ns
❖ C yt ot o xi ns
• m u c os al d estr u cti o n ( oft e n s e e d ys e nt er y)
• S hi g ell a d ys e nt eri a e
• Cl ostri di u m p erfri n g e ns
• Cl ostri di u m diffi cil e
• S. a ur e us

1. D -v al u e ( d e ci m al r e d u cti o n ti m e, D R T) is t h e ti m e i n mi n ut es r e q uir e d t o d estr o y 9 0 % of a

p o p ul ati o n of c ells. T h e D -v al u e h as littl e r el e v a n c e t o t h e st eriliz ati o n of m e di ci n es f or i nj e cti o n,
s ur gi c al i nstr u m e nts or dr essi n gs, w h er e a pr o c ess d esi g n e d t o kill all li vi n g s p or es m ust b e
d e v el o p e d. T h e D -v al u e is us e d e xt e nsi v el y i n t h e f o o d i n d ustr y.
2. T h e F Q -v al u e is a pr o c ess-d es cri bi n g u nit e x pr ess e d i n t er ms of mi n ut es at 1 2 1. 1 ° C ( ori gi n all y
2 5 0° F) or a c orr es p o n di n g ti m e -t e m p er at ur e r el ati o ns hi p t o pr o d u c e t h e s a m e c o m pl et e s p or e-
killi n g eff e ct.
3. T h e z -v al u e is t h e i n cr e as e i n t e m p er at ur e (° C) t o r e d u c e t h e D-v al u e t o o n e -t e nt h.
4. T h er m al d e at h p oi nt ( T D P) :- l o w est t e m p er at ur e t h at kills a b a ct eri u m u n d er st a n d ar d c o n diti o n
i n a gi v e n ti m e is k n o w n as T D P. T d p f or s p or es is 1 0 00 C

1 1. M et a cr o m ati c gr a n ul es / v ol uti n e gr a n ul es / b a b es Er nst gr a n ul es / p ol ar b o di es: -

❖ C o m p os e d of p ol y m et a p h os p h at e (st or e d p h os p h at e i ntr a c ell ul ar)
❖ Str o n gl y b as o p hili c i n n at ur e, a n d st ai n r e d dis h vi ol et wit h m et h yl e n e bl u e / t ol u e d e n e bl u e

Exa m pl e of b a ct eri a c o nt ai n v ol uti n e gr a n ul es St ai ni n g b y

❖ C or y n e b a ct eri u m Di pt h eri a e ❖ L o effl er’s m et h yl e n e bl u e
❖ G ar d e n ell a V a gi n alis ❖ N eiss er’s st ai n
❖ A gr o b a ct eri u m T u m ef a c u e n c e ❖ Al b ert’s st ai n
❖ S pirill u m V ol u a nts ❖ P o n d ers st ai n
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
❖ M y c o b a ct eri a

1 2. S p e ci al p oi nts
❖ E n d ofl a gill a f o u n d i n s pir o c h et es
❖ E n d os p or es: -
o B a cill us, cl ostri di u m, s ar c e n n a a n d a cti n o m y c eti es f or m u n d er c o n diti o n of d e pl et e d
s u p pl y of n utri e nts.
o T h e y ar e hi g hl y r esist a nt d e h y dr at e d, s p e ci aliz e d r esti n g c ells / s p or es.
o Tr u e e n d os p or es f o u n d o nl y i n gr a m p ositi v e b a ct eri a & ar e a d e pt e d f or pr ol o n g e d
s ur vi v al i n i n u nf a v or a bl e c o n diti o ns.
o Pr o c ess of e n d os p or e f or m ati o n c all e d s p or ul ati o n (f or m e d i n st ati o n ar y p h as e).

St a p h yl o c o c c us Gr a p e li k e cl ust er Str e pt o c o c c us Arr a n g e d i n p airs ( c h ai n)

Di pl o c o c c us Arr a n g e d i n p air S ar c e n a Gr o u p of ei g ht
Mi cr o c o c c us N o n fl a gil at e d, o c c ur si n gl y T etr a ds Gr o u p of f o ur
S pirill a S pir o c h et es

I D E N TI FI C A TI O N O F B A C T E RI A
I nstr u m e nt al m et h o d
❖ C o u nt er c urr e nt i m m u n e el e ctr o p h or esis , G as li q ui d c hr o m at o gr a p h y , L u mi n es c e nt bi o m etr y ,
I m m u n ol o gi c al r e a cti o n
C ult ur e c h ar e ct ersti c s
St a p h yl o c o c c us p yr o g e n us S h o w b et a t y p e h a e m ol ysis wit h pi n h e a d c ol o ni es
Str e pt o c o c c us h e m ol yti c us S h o w b et a t y p e h a e m ol ysis wit h pi n p oi nt c ol o nis
Str e pt o c o c c us viri di a ns S h o w alf a t y p e h a e e m ol yti c us

❖ E n d ot o xi n s h o c k d u e t o li p o p ol ys a c c h ari d e.
❖ Ps e u d o m o n as a er u g e n os a ( G -v e) - o p p ort u nisti c i nf e cti o n
❖ F a mil y of E. c oli – s pirill a c e a e
❖ St a p h yl o c o c c us a ur e us ( G + v e) -s e pti c e mi a
❖ I n Ri d el w al k er t est – s al m o n ell a t y p hi us e d
❖ S a pr o p h yti c: - gr o w o n or g a ni c m att er of d e a d pl a nt.
❖ P e ni cilli n as e pr o d u ci n g b a ct eri a – B a c cil us M e g at er u m
❖ St a p h yl o c o c c us a ur e us – pr o d u ci n g y ell o w pi g m e nt ati o n o n gr o wt h
❖ Cl ostri di u m b ot uli ni u m & St a p h yl o c o c c us a ur e us - pr o d u c e n e ur ot o xi n w h e n i n g est e d wit h f o o d.
❖ A ur a mi n e d y e us e d i n fl u or es c e nt mi cr os c o p y
❖ T h e f u d u ci al li mit f or mi cr o bi ol o gi c al ass a y is 9 5 % - 1 0 5 %
O bli g at e i ntr a c ell ul ar or g a ni s ms I ntr a c ell ul ar p at h o g e ns
❖ S y p hilis ❖ C hl a m y di a ❖ Pl as m o di u m ❖ T o x o pl as m a
❖ Ri c k etsi a ❖ Vir us ❖ L es m a ni a ❖ m y c o b a ct eri u m
❖ M. l e pr a y ❖ L e gi o n ell a ❖ G o n o c o c c us ❖ S al m o n ell a

T e st o r g a ni s m A nti bi oti c s T e m p e r at u r e A s s a y m et h o d M e di u m u s e d
B a c cil u s s u btil u s V a n c o m y ci n
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
Mit o m y ci n
St r e pt o m y ci n 3 2 -3 5 A E
di h y d r o st r e pt o m y ci n
Rif e m p ci n 3 2 -3 5 A B
F r a m y citi n
K a n a m y ci n 3 2 -3 5 A F
का ना ए क वे न मे st r at u r e प र म ीठ ा फ़्र ाई क र क े रर फ़ ेम प ान े क े लि ए स ब टि ि ो प र घ ुम र ह े थ े
A m p hi cilli n e A D
B a cit r a ci n A A
Mi c r o c o c c u s l ut e u s
E r yt h r o m y ci n A D
Cli n d a m y ci n , li n c o m y ci n A D
ए म पी मे बा सी ेट्र को cl e a n क र क े इ ध र उ ध र फ़ ेक त े ह ै इ स लि ए व ो ि ुि ज ात े ह े|
G e nt a m y ci n
St a p h yl o c o c c u s
N e o m y ci n
e pi d e r mi di s
N o v o bi o ci n
ज न ता को न इ नो वा क् योक क ज न ता ेक e pi d e r mi di s हो ग या
Mi c r o b a ct e ri u m Bl e o m y ci n
s e g m e nt eti s
ब ब ल् िी ओ र mi c e दो अ ि ग अ ि ग s e g m e nt s मे र ख ेन प ड ते ैह|
A m p h ot e r a ci n -B
S acc hr o m yc e es
N at a m y ci n
c e r e vi si a e
N y st ati n
न ि म त a m p h o न स् िा ज ेय गो से री तो वै सी क क वै सी ट ह र ेह गी
C hl o r a m p h e ni c ol
E. c oli
S p e cti n o m y ci n
क ाि रु ाम s p e c s िे ेक आ या तो उ स की ब ब वी बो िी E. c oli
St r e pt o c o c c u s f a e ci u m G r a mi ci di n e
गल मि यो मे सा ेर क प ेड ेफ़ क ेद ते ैह|
B o r d et ell a b r o n c hi s eti c a P ol y mi xi n – B
पो िी को ल म क् स क र ेक b r o n c hi ब न ती ैह|
C a p ri o m y ci n
Kl e b si all a p n e u m o ni a
T r oli n d a m y ci n
C a p ri प ह न क र t o u r क र ोग े त ो न् य ुम ोनन य ा ह ो ज ाय ेग ा
B -l a ct u m a nti bi oti c s A A
T et r a c y cli n e B C
C y cl o s e ri n e
T o b r a m y ci n
St a p h yl o c o c c u s a u r e o u s
A mi k a ci n
Li n c o m y ci n
T yl o si n
D o x o r u bi ci n

बे िा ओ री य स अ म् मी को चा र सा ईक क ि का ल ि न् क ब ना क र उ स् पे
िा इ ि ि गा क र डा क् ि र रु बी ( 2 0 0 रु बी ) को िो ब ेर मे डा ि क र ब च ने
जा ओ
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
F r a m y c eti n B. p u mil u s प फ़्र मी ने स ब ट ि िो पे क ट्र रा ट द या
B. s u btil u s
K a n a m y ci n B. p u mil u s का ना ओ र प क् मी
St p y. A u r e u s
O x yt et r a c ylli n e B. c e r e u s v a r. ओ री य स इ त ना ल स री य स हो ग या क क o x y g e n से चा र सा ईक क ि च िा दी
T et r a c ylli n e M y c oi d e s
St p y. A u r e u s
St r e pt o m y ci n B. s u btil u s स ब ट ि िो म े घ ुम न े स े ल् य ुम ोनन य ा ह ो ग य ा कफ़ र स ब क ो इ स् क् ेच र प र ि ान ा
Kl e b si el a p n e u m o ni a
प डा

MI C R O BI O L O GI C A L A S S A Y O F VI T A MI N S

S. N. Vit a mi n T e st O r g a ni s m
1. Ri b ofl a vi n L a ct o b a cill u s c a s ei रा ई बो ेक सा ई बा बा जा र ेह ेथ
2. Ni c oti ni c A ci d / L a ct o b a cill u s a r a bi n o s a
ni c oti n a mi d e
3. P e nt ot h e ni c a ci d L a ct o b a cill u s pl a nt a r u m
4. Bi oti n L a cti c a ci d b a ct e ri a बा यो ेक त न मे िे न् िी क एल स ड ज म जा ता ैह
5. F oli c a ci d L a ct o b a cill u s c a s a ei F oli c a ci d ेफ़ क ट द या सा ई ेक उ प र
St a p h yl o c o c c u s f a e c ali s
6. A s c o r bi c a ci d Bi ol o gi c all y wit h G ui n e a Pi g सी ( ेद खो) G ui n e a Pi g
7. Vit a mi n – E Bi ol o gi c all y wit h a n R at u si n g f e rtilit y a s a n ई — मा ऊ स
i n di c at o r
8. Vit a mi n K M e a s u ri n g cl otti n g ti m e of bl o o d f r o m
c hi c k s o n c o nt r oll e d di et s & c o m p a ri n g it
wit h st a n d a r d

S o u r c e of a nti bi oti c s f r o m mi c r o o r g a ni s m

S o urc e F u n gi B a ct e ri a A cti n o m y c eti e s

P e ni cilli n
C e p h al o s p o ri n
A nti bi oti c s G ri si ofl a vi n
B a cit r a ci n A mi n o gl y c o si d e s
A z et ri o n a m C hl o r a m p h e ni c ol
C oli sti n T et r a c ylli n e
T y r ot h ri ci n M a c r oli d e s
P ol y mi xi n – B P ol y e n e s
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
C A R B O HY D R ATES
1. I N R O D U C TI O N T O C A R B O H Y D R A T E S
• C ar b o h y dr at es ar e p ol y h y dr o x y al d e h y d e or k et o n es c o m p os e d of c ar b o n, h y dr o g e n & o x y g e n, e m piri c al f or m ul a ( C. H 2 O) N,
e n er g y ( 4 C al/ g m)
• C ar b o h y dr at e m e a n s ‘ h y dr at e s of c ar b o n ’.
T a bl e: 1 Cl assifi c ati o n of C ar b o h y dr at es
S u g ar s ( m o n os a c c h ari d e, oli g os a c c h ari d e) a n d
N o n -s u g ar s ( p ol ys a c c h ari d es).

1. M O N O S A C C H A RI D E E x a m pl e s
1. 1. Tri os es Gl y c er al d e h y d es
1. 2. T etr os es Er yt hr os e
1. 3. P e nt os es Ri b os e, X yl os e
1. 4. H e x os es Gl u c os e, G al ct os e, M a n n os e, Fr u ct os e
2. DI S A C C H A RI D E E x a m pl e s
S u cr os e, L a ct os e, M alt os e
3. T RI S A C C H A RI D E E x a m pl e s
R affi n os e , G e nti a n os e
4. P O L Y S A C C H A RI D E E x a m pl e s
4. 1. H o m o p ol ys a c c h ari d e St ar c h, D e xtri ns, I n uli n, Gl y c o g e n, C ell ul os e
4. 2. H etr o p ol ys a c c h ari d e H y al ur o ni c A ci d, C h o n dr dr oiti n S ulf at e, H e p ari n,

T a bl e: 2 c o m p ositi o ns of C ar b o h y dr at es

C ar b o h y dr at es C o m p ositi o ns
S u cr os e α D -Gl u c os e + β D -Fr u ct os e
L a ct os e β D -Gl u c os e + β D -G al ct os e ( mil k s u g ar)
M alt os e α D -Gl u c os e + α D -Gl u c os e
St ar c h M alt os e + d e xtri n / Gl u c os e + d e xtri n /
A m yl os e( 1 5 – 2 0 %) + A m yl o p e cti n ( 8 0 – 8 5 %)
A m yl os e – w at er s ol u bl e, A m yl o p e cti n – i ns ol u bl e
T a bl e: 3 Gl y c osi di c Li n k a g e s i n c ar b o h y dr at es

C ar b o h y dr at es Gl y c osi di c Li n k a g e s
C ell ul os e β -1, 4
L a ct os e β -1, 4
M alt os e α -1, 4
St ar c h α -1, 4 a n d α -1, 6

T a bl e: 4 Al d os e a n d k et os e s u g ar s

Al d os e s u g ar s K et os e s u g ar s
Gl u c os e , g al a ct os e, m a n n os e Fr u ct os e, s or b os e
Al d os e s u g ar s f or m h e mi a c et al K et os e s u g ar f or m h e mi k et al

T a bl e: 5 r e d u cti o n pr o d u ct of c ar b o h y dr at es

• D – Gl u c os e ----- D - S or bit ol
• D – Fr u ct os e -----D -M a nit ol + D -S or bit ol

T a bl e: 7 E x a m pl e of r e d u ci n g s u g ar a n d n o n r e d u ci n g s u g ar s

• R e d u ci n g s u g ar Gl u c os e, Fr u ct os e, M alt os e, L a ct os e
• N o n r e d u ci n g s u g ar S u cr os e, Tr e h al os e, st ar c h

2. M E T A B O LI S M O F C A R B O H Y D R A T E S
• Gl u c os e is t h e c e ntr al m ol e c ul e i n c ar b o h y dr at e m et a b olis m s o m aj or p at h w a ys of c ar b o h y dr at e m et a b olis m ar e c o n n e ct e d it.
• BL O O D GL U C O S E
➢ 6 0 -9 0 M G / 1 0 0 M L - F A S TI N G ( P R E-P R A N DI A L), 1 0 0 -1 4 0 M G. 1 0 0 M L – P O S T -P R E N DI A L
G L U C O S E M E T A B O LI C P A T H W A Y S

H e x o s e m o n o p h o s p h at e s h u nt ( p e nt o s e p h o s p h at e T hi s p at h w a y i s a n alt er n ati v e t o gl y c ol y si s a n d t c a c y cl e f or
p at h w a y, dir e ct o xi d ati o n p at h w a y) o xi d ati o n of gl u c o s e.
Gl y c ol y sis O xi d ati o n of gl u c os e t o p yr u v at e a n d l a ct at e
Gl y c o g e n ol y si s Br e a k d o w n of gl y c o g e n t o gl u c o s e.
Gl y c o g e n e si s F or m ati o n of gl y c o g e n fr o m gl u c o s e.
Gl u c o n e o g e n e si s S y nt h e si s of gl u c o s e fr o m n o n c ar b o h y dr at e pr e c ur s or.
E g. A mi n o a ci d, gl y c er ol et c.
Citri c a ci d c y cl e ( kr e b s c y cl e or tri c ar b o x yli c a ci d c y cl e) O xi d ati o n of a c et yl c o a t o c o 2 .

Gl y c ol y si s ( e m b d e n -m e y er h of p at h w a y) O xi d ati o n of gl u c o s e t o p yr u v at e a n d l a ct at e.
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N

p at h w a y
O xi d a ti v e

S y n t h e ti c
p at h w a y
Gl y c ol ysis G Ot h er c ar b o h y dr at es
L ( Gl a ct os e, Fr u ct os e)
U
H M P s h u nt C N o n ess e nti al A. A.
O
S Li p o g e n esis
Ur o ni c a ci d E
Gl y c o g e n esis
Fi g ur e: 1 Gl u c os e m et a b olis m

3. M AJ O R P A T H W A Y S O F C A R B O H Y D R A T E M E T A B O LI S M
• Gl y c ol ysis
• Citri c a ci d c y cl e
• Gl u c o n e o g e n esis
• Gl y c o g e n esis
• Gl y c o g e n o ysis
• H M P s h u nt
• Ur o ni c a ci d pt h w a y
• G al a ct os e m et a b olis m
• Fr u ct os e m et a b olis m

3. 1. Gl y c ol y sis ( E M p at h w a y) E m b d e n-m e y er h of

▪ C o n v erti n g gl u c os e or gl y c o g e n i nt o p yr u v at e or l a ct at e, wit h pr o d u cti o n of A T P

▪ It is u ni v ers al p at h w a y i n li vi n g c ells
▪ W h e n Gl y c ol ysis o c c ur a n a er o bi c f or m l a ct at e w hil e if it is a er o bi c t h e n f or m p yr u v at e w hi c h is t h e n o xi diz e d t o f or m C O 2 a n d w at er
▪ W h e n gl y c ol ysis p at h w a y u n d er a n a er o bi c c o n diti o n 2 A T P pr o d u c e
▪ E n er g y pr o d u c e d p er m ol e c ul e of gl u c os e i n u n d er a er o bi c (i n gl y c ol ysis) c o n diti o n is 8 A T P
▪ E n er g y pr o d u c e d p er m ol e c ul e of gl u c os e w h e n it c o m pl et el y o xi diz e d ( gl y c ol ysis + citri c a ci d c y cl e) u n d er a er o bi c c o n diti o n is 3 8 A T P

3. 2. Citri c a ci d c y cl e / Kr e bs c y cl e / T C A ( Tri c ar b o x yli c a ci d )

▪ O c c urs i n t h e m atri x of t h e mit o c h o n dri o n
▪ O xi d ati o n of a c et y c o -A t o C O 2 a n d H 2 O
▪ 1 2 A T P pr o d u c e d fr o m o n e a c et y c o -A
▪ It is c at a b oli c as w ell as a n a b oli c p at h w a y

T a bl e: 1 0 E nz y m e i n hi bit or s i n Kr e bs c y cl e

I n hi bit or E nz y m e
N o n -c o m p etiti v e Fl ur o a c et at e A c o nit as e
α - k et o gl utr at e d e h y dr o g e n a s e Ars e nit e
C o m p etiti v e M al o n at e S u c ci n at e d e h y dr o g e n a s e

G e n er ati o n of A T P i n Gl u c o s e M et a b oli s m

P at h w a y E nz y m e N o. of A T P s y nt h e si s

Gl y c ol y si s Gl y c er al d e h y d e 3 - ( p) d e h y dr o gi n a s e 6
( 2 N A D H)
P h o s p h o gl y c er at e ki n a s e ( S L P) 2
P yr u v at e ki n a s e ( S L P) 2

T w o A T P c o n s u m e s i n a b o v e r e a cti o n -2
I n a er o bi c c o n diti o n 8

P yr u v at e d e h y dr o g e n a s e ( 2 N A D H) 6
* S u b str at e l e v el m e a n s dir e ct g e n er ati o n of A T P
Citri c a ci d c y cl e I s o c ytr at e d e h y dr o g e n a s e ( 2 N A D H) 6
α – k et o gl utr at e d e h y dr o g e n a s e 6
S u c ci n at e t hi o ki n a s e ( S L P) 2

S u c ci n at e d e h y dr o g e n a s e ( 2 F A D H 2) 4
M al at e d e h y dr o g e n a s e 6
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
T ot al A T P 38
p er m ol e of gl u c o s e
( U n d er a er o bi c c o n diti o n)

T ot al A T P p er m ol e c ul e of gl u c o s e 2
( U n d er a n a er o bi c c o n diti o n)

 6 A T P ar e pr o d u c e d if N A D H u s e s m al at e s h uttl e, o nl y 4 A T P ar e pr o d u c e d if gl y c er ol p h o s p h at e s h uttl e o p er at e s, i n w hi c h
c a s e t ot al A T P s y nt h e si z e d p er m ol e of gl u c o s e o xi d ati o n i s 3 6 n ot 3 8.

T a bl e: 1 1 m et a b oli c p at h w a y s a n d t h eir l o c ati o n.

P at h w a y T a k es pl a c e
Gl y c ol ysis All c ells of b o d y
Gl y c o g e n esis Li v er a n d m us cl e
Gl u c o n e o g e n esis C yt os ol of Li v er a n d ki d n e y
K er b’/ Citri c a ci d / ( T C A) c y cl e Mit o c h o n dri a
P e nt os e p h os p h at e C yt os ol
H M T s h u nt Li v er, m a m m a y gl a n d, a di p os e tiss u e, f o et al h e art

T a bl e 1 2 R at e li miti n g e nz y m e s f or v ari o us pr o c e ss e s

Pr o c e ss R at e li miti n g e nz y m e
Gl c o g e n ol ysis P h os p h oril as e
Gl y c o g e n esis Gl y c o g e n s y nt h et a s e
Gl y c ol ysis P h os p h ofr u ct o ki n as e
Gl y c o n e o g e n esis Fr u ct os e 1, 6 bi p h os p h at e
T C A c y cl e Is o citr at e d e h y dr o g e n as e
Ur e a c y cl e C ar b o m yl p h os p h at e s y nt h et as e

M .S .-m o n os a c c h ari d e, D .S .-dis a c c h ari d e

 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
Fi g ur e: I d e ntifi c ati o n t est f or c ar b o h y dr at es

Dis e as e s d u e t o e nz y m e d efi ci e n c y

Di s e a s e E n z y m e d efi ci e n c y
v o n Gi e r k e' s di s e a s e gl u c o s e -6 -p h o s p h at a s e
T a r ui' s di s e a s e m u s cl e p h o s p h of r u ct o ki n a s e
P o m p e' s di s e a s e a ci d m alt a s e

P oi nt s t o r e m e m b er
✓ St ar c h c o n si st of t w o p ol y s a c c h ari d e c o m p o n e nt s -
o W at er s ol u bl e a m yl a s e ( 1 5 -2 0 %).
o W at er i n s ol u bl e a m yl o p e cti n ( 8 0 -8 5 %).
✓ D e xtri n s ar e t h e br e a k d o w n pr o d u ct of t h e st ar c h b y t h e e n z y m e a m yl a s e or dil ut e a ci d s.
✓ I n uli n ( a p ol y m er of fr u ct o s e) i s u s e d f or a s s e s si n g ki d n e y f u n cti o n t hr o u g h m e a s ur e m e nt of gl o m er ul ar filtr ati o n r at e ( G F R)

✓ I n v ert s u g ar: h y dr ol yz e d mi xt ur e s u cr os e c o nt ai ni n g gl u c os e a n d fr u ct os e
✓ Gl y c o g e n als o k n o w n as a ni m al st ar c h
✓ H u m a ns c a n n ot di g est c ell ul os e b e c a us e t h e a bs e n c e of c ell o bi as e.
✓ H u m a n h e art c o nt ai n D -x yl os e

✓ Gl y c o pr ot ei n: - s e v er al pr ot ei ns w hi c h ar e c o v al e ntl y b o u n d wit h c ar b o h y dr at es ar e c all e d gl y c o pr ot ei n f or e x.

• C oll e g e n , I m m u n o gl o b uli n ( A nti b o d y), I ntri nsi c f a ct or, H y dr ol ys es , Pr ot as es , Fi bri n o g e n , C er ul o pl a s mi n ,Er yt hr o p oi eti n

P R O T EI N A N D A MI N O A CI D S

• A p ol y p e pti d e: - si n gl e li n e ar p ol y m er c h ai n of a mi n o a ci ds att a c h e d t o g et h er b y p e pti d e b o n ds b et w e e n t h e c ar b o x yl a n d a mi n o

gr o u ps of a dj a c e nt a mi n o a ci d r esi d u es.
• Pr ot ei ns c o nt ai n 4 k c al p er gr a m as a f u el.
• M ost of pr ot ei ns c o nsist of li n e ar p ol y m ers b uilt fr o m s eri es of u p t o 2 0 diff er e nt L -α -a mi n o a ci ds .
• All n at ur all y o c c urri n g a mi n o a ci d s l e v or ot at or y e x c e pt gl y ci n e w hi c h i s o pti c all y i n a cti v e

1. C L A S SI FI C A TI O N O F A MI N O A CI D
E ss e nti al a mi n o a ci ds
I n dis p e nsi bl e (t h eir c ar b o n s k el et o n c a n n ot
b e s y nt h esiz e d b y h u m a n b ei n g)
L E U CI N E, M E T HI O NI N E, L Y SI N E, V A LI N E,
I S O L E U CI N E, P H E N Y L A L A NI N E, T H R E O NI N E,
T R Y P T O P H A N ( L M L VI P T T )
• P R O LI N E is a I MI N O a ci d ( b e c a us e it c o nt ai n s e c o n d ar y a mi n o f u n cti o n al gr o u p)
• S E L E N O C Y S TI N E is 2 1 st a mi n o a ci d
• G L Y CI N E h as n o c hir al c e nt er
S e mi e ss e nti al N o n e ss e nti al a mi n o a ci ds
S e mi -i n dis p e nsi bl e (r e q uir e i n Dis p e ns a bl e (t h eir c ar b o n s k el et o n s y nt h esiz e d
gr o wi n g c hil dr e n b ut n ot b y m et a b oli c p at h w a y i n h u m a n b ei n g)
ess e nti al i n a d ult)
HI S TI DI N E, A R GI NI N E A L A NI N E, A S P A R A GI N E, A S P A R TI C A CI D
, G L U T A MI C A CI D C Y S T EI N E, G L U T A MI N E,
G L Y CI N E, P R O LI N E, S E RI N E A N D T Y R O SI N E

2. C H E MI C A L N A T U R E O F A MI N O A CI D
C at e g or y of a mi n o a ci d E x a m pl e

A CI DI C A S P A R TI C A CI D , G L U T A MI C A CI D, A S P A R A GI N E S, G L U T A MI N E
B A SI C HI S TI DI N E, A R GI NI N, L Y SI N E
S U L P H U R C O N T AI NI N G M E T HI O NI N, C Y S T EI N E, C Y S TI N E
K E T O G E NI C L E U CI N E, L Y CI N E
G L U G E NI C WI T H K E T O G E NI C I S O L E U CI N E, P H E N Y L A L A NI N, T Y R O SI N E, T R Y P T O P H A N
G L U C O G E NI C R E M AI NI N G 1 4 A MI N O A CI D A R E G L U C O G E NI C

3. P R O P E R TI E S O F A MI N O A CI D S
S ol u bilit y • S ol u bl e i n w at er a n d i n s ol u bl e i n or g a ni c s ol v e nt.
O pti c al pr o p erti e s • All a mi n o a ci d ar e o pti c all y a cti v e e x c e pt gl y ci n e.
A s a m p h ol yt e s • C o nt ai n b ot h a ci di c ( -C O O H) a n d b a si c ( -N H 2 ) gr o u p.
• C a n d o n at e a pr ot o n or a c c e pt a pr ot o n.

4. A MI N O A CI D A S P R E C U R S O R S
Pr ec urs or Co mpou nd na me
T y r o si n M el a ni n
Hi sti di n e Hi st a mi n e
Gl ut a m at e GABA
A r gi ni n e Nit ri c a ci d

P R O T EI N S: - P ol y m er of L – α – a mi n o a ci d s.
1. S T R U C T U R E O F P R O T EI N
• Si m pl e ( Li n e ar ) a mi n o a ci d s e q u e n c e e x. li k e as i ns uli n
P RI M A R Y • D et er mi n ati o n of a mi n o a ci d s s e q u e n c e b y S a n g er’ s (E d m a n’ r e a g e nt)
• M ai nt ai n e d b y c o v al e nt b o n d.
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
• R e g ul arl y r e p e ati n g l o c al str u ct ur es st a biliz e d b y h y dr o g e n b o n ds, El e ctr ost ati c b o n d, h y dr o p h o bi c,
v a n d er w a al f or c es.
SE C O N D ARY
• It c o nt ai n alf a h eli x, c oll a g e n h eli x, b et a pl e at e d s h e ets.
• α – h eli x i s st a bili z e d b y h y dr o g e n b o n di n g.
• O v er all s h a p e of a si n gl e pr ot ei n m ol e c ul e
T E R TI A R Y • It m ost t h er m o d y n a mi c all y st a bili z e c o nfi g ur ati o n
• E x. m y o gl o bi n, i m m u n o gl o b uli ns.
• T h e str u ct ur e f or m e d b y s e v er al pr ot ei n m ol e c ul es ( C o nsist of m or e t h a n o n e p ol y p e pti d e c h ai ns).
Q U ATE R N A RY
• E x. H e m o gl o bi n, Cr e ati n ki n as e , L a ct at e d e h y dr o g e n a s e.
I D E N TI FI C A TI O N T E S T
T est R e a g e nt C ol or

Bi ur et K O H + h y dr at e d c o p p er s ulf at e + s o di u m p ot assi u m t artr at e P ur pl e c ol or ( c o p p er c o -or di n at e c o m pl e x)

Ni n h y dri n 2, 2 -Di h y dr o x yi n d a n e -1, 3 -di o n e R u h e m a n n’s p ur pl e
S a n g er’s 1 -fl ur o 2, 4 di nitr o b e nz e n e
X a nt h o pr oti c c o n c e ntr at e d nitri c a ci d Y ell o w p pt.
Mill o n’s Mi xt ur e of s ul p h uri c a ci d a n d m er c ur y s ul p h at e nitr o p h e n ol M er c ur y c o m pl e x ( R e d p pt.)
F oli n - r e a g e nt s o di u m t u n gst at e a n d s o di u m m ol y b d at e us e d f or t h e c ol ori m etri c ass a y
S a k a g u c hi Α -n a pt h ol + s o d. h y p o cl ori d e R e d c ol or
H o p ki ns -c ol e Gl y o x yli c a ci d vi ol et p ur pl e c ol or
M olis c h t est 1 0 % α -n a p ht h ol + et h a n ol R e d p ur pl e c ol or

1. P U RI FI C A TI O N O F P R O T EI N S
T h e b a si c ai m of p urifi c ati o n of t h e pr ot ei n i s t o i s ol at e t h e p arti c ul ar pr ot ei n fr o m t h e mi xt ur e of pr ot ei n s.

2. M E T A B O LI S M O F A MI N O A CI D
❖ Ur e a c y cl e
✓ F or m ati o n of citr ulli n e
✓ F or m ati o n of ur e a, Ar gi ni n is pr e c urs or, F u mr at e is b y pr o d u ct, 4 A T P c o ns u m e d
✓ C ar b o m yl p h os p h at e s y nt h et as e r at e li miti n g st e p
✓ N or m al bl o o d ur e a 1 0 – 4 0 m g/ dl
✓ A b o ut 1 5 – 3 0 g m ur e a ( 7 – 1 5 g m nitr o g e n) ar e e x cr et e d i n uri n e / d a y

3. DI S O R D E R O F M E T A B O LI S M O F A MI N O A CI D O R D E F E C T S
Dis or d er D u e t o d efi ci e n c y of
Al k a pt o n uri a H o m o g e nt est a e o xi d as e
P h e n yl k et o n uri a P h e n yl al a ni n e h y dr o x yl as e.
G al a ct os a e mi a G al a ct os e -1 -p h os p h at e uri d yl tr a nsf er as e
M a pl e S yr u p Uri n e Dis e a s e ( M S U D) of br a n c h e d c h ai n α -k et o a ci d d e h y dr o g e n a s e
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
1. M a pl e s yr u p uri n e di s e a s e s -D ef e ct s i n m et a b oli s m of br a n c h e d c h ai n α -k et o a ci d d e h y dr o g e n a s e.
2. H art n u p’ s di s e a s e - D ef e ct s i n i nt e sti n al a b s or pti o n of tr y pt o p h a n.
3. Al bi ni s m – D ef e ct i n t yr o si n a s e.
4. P h e n yl k et o n uri a
5. Al k a pt o n uri a
P oi nt s t o r e m e m b er
✓ S el e n o c y st ei n e i s 2 1 st a mi n o a ci d a n d f o u n d at t h e sit e s of c ert ai n e n z y m e / pr ot ei n.
e. g gl ut at hi o n e p er o xi d a s e, gl y ci n e r e d u ct a s e, 5’ -d ei o di n a s e, t hi or e d o xi n r e d u ct a s e.
✓ P yrr ol y si n e i s 2 2 n d a mi n o a ci d, pr e s e nt i n pr ot ei n a n d c o d e d b y st o p c o d o n U A G.
✓ T h e ri g ht h a n d e d α -h eli x i s m or e st a bl e t h a n l eft h a n d e d h eli x.
✓ T h e tr a n sf er of a n a mi n o ( -N H 2 ) gr o u p fr o m a n a mi n o a ci d t o a k et o a ci d i s k n o w n a s tr a n s a mi n ati o n.
✓ S e c o n d ar y a n d t erti ar y str u ct ur e s of pr ot ei n ar e d et er mi n e d b y X – r a y cr y st all o gr a p h y.
✓ E sti m ati o n of nitr o g e n i n l a b m o stl y b y Kj el d a hl’ s m et h o d.
✓ Pr ot ei n ri c h di et i n cr e as e l e v el of N -a c et yl gl u c os a mi n e i n li v er t h e n pr o d u cti o n of uri n e i n i n cr e as e d s o s h o ul d n ot gi v e
pr ot ei n di et i n ki d n e y f ail ur e p ati e nt.
✓ A nti g e n – pr ot ei n a n d p ol ys a c c h ari d e
✓ A nti b o d y – gl y c o pr ot ei n
✓ I nt erf er o n – gl y c o pr ot ei n

LI PI D S

Li pi ds( h y dr o p h o bi c or a m p hi p hili c s m all m ol e c ul es) ar e t h e br o a d gr o u p of n at ur all y o c c urri n g m ol e c ul es w hi c h i n cl u d e f ats,

w a x es, st er ols, f at -s ol u bl e vit a mi ns (s u c h a s vit a mi ns A, D, E, a n d K), m o n o gl y c eri d es, di gl y c eri d es, tri gl y c eri d es a n d p h os p h oli pi ds.
T h e m ai n bi ol o gi c al f u n cti o ns of li pi ds
• St or a g e of E n er g y
• Str u ct ur al c o m p o n e nts of c ell m e m br a n es
• I m p ort a nt si g n ali n g m ol e c ul es vi a a cti v ati o n of G pr ot ei n-c o u pl e d or n u cl e ar r e c e pt ors a n d m e m b ers of s e v er al diff er e nt li pi d
c at e g ori es h a v e b e e n i d e ntifi e d a s si g n ali n g m ol e c ul es a n d c ell ul ar m ess e n g ers.
1. C L A S SI FI C A TI O N O F F A T T Y A CI D

S at ur at e d F att y A ci ds U ns at ur at e d F att y A ci ds E ss e nti al f att y a ci d

L a uri c a ci d M yrist ol ei c a ci d li n ol ei c a ci d
M yristi c a ci d P al mit ol ei c a ci d li n ol e ni c a ci d
P al miti c a ci d Ol ei c a ci d Ar a c hi d o ni c a ci d
St e ari c a ci d Li n ol ei c a ci d
Ar a c hi di c a ci d Li n o el ai di c a ci d
B e h e ni c a ci d α -Li n ol e ni c a ci d
Li g n o c eri c a ci d Ar a c hi d o ni c a ci d
C er oti c a ci d Ei c os a p e nt a e n oi c a ci d

2. C L A S SI FI C A TI O N O F LI PI D S

Cl ass D efi niti o n T y p e / e x a m pl e

Si m pl e li pi d
C o m pl e x
( c o m p o u n d)
D eri v e d li pi d
N e utr al
Mis c ell a n e o us
Est er of f att y a ci d wit h al c o h ols
Est ers of f att y a ci ds wit h al c o h ol
c o nt ai ni n g p h os p h at e, nitr o g e n,
c ar b o h y dr at es, pr ot ei ns.
O bt ai n e d fr o m h y dr ol ysis
U n c h ar g e d li pi d
❖ F at & oils (tri a c y gl y c er ol)
❖ W a x es
❖ P h os p h oli pi d
❖ Gl y c er o p h os p h oli pi d -e x. l e cit hi n, c e p h ali n
❖ Gl y c oli pi d e x. c er e br o ci d e, g a n gli osi d e
M o n o -Di & Tri gl y c er ols, c h ol est er ol a n d c h ol estr yl est er
C ar et e n oi ds, s q uili n e, b e es w a x, t er p e n es.

1. Si m pl e li pi d s: E st er s of f att y a ci d s wit h al c o h ol.

( a) F at s a n d oil s ( Tri a c yl gl y c er ol s): E st er of f att y a ci d wit h gl y c er ol.
( b) W a x e s: E st er s of f att y a ci d s wit h al c o h ol s

2. C o m pl e x ( or c o m p o u n d) li pi d s: E st er s of f att y a ci d s wit h al c o h ol s c o nt ai ni n g a d diti o n al gr o u p s s u c h a s p h o s p h at e,

nitr o g e n o u s b a s e, c ar b o h y dr at e, pr ot ei n et c.

2. 1. P h o s p h oli pi d s: C o nt ai n p h o s p h ori c a ci d i n a d diti o n t o al c o h ol a n d f att y a ci d s.

2. 1. 1. Gl y c er o p h o s p h oli pi d s: C o nt ai n gl y c er ol a s t h e al c o h ol. e. g L e cit hi n, C e p h ali n.
2. 2. S p hi n g o p h o s p h oli pi d s: C o nt ai n s p hi n g o si n e a s t h e al c o h ol. e. g S p hi n g o m y eli n.
2. 3. Gl y c oli pi d s: C o nt ai n a f att y a ci d, c ar b o h y dr at e a n d nitr o g e n o u s b a s e. Al c o h ol i s s p hi n g o si n e. e. g C er e br o si d e s,
G a n gli o si d e s.
2. 4. Li p o pr ot ei n s: C o m pl e x e s of li pi d s wit h pr ot ei n s.
3. D eri v e d li pi d s: O bt ai n e d o n h y dr ol y si s of gr o u p 1 a n d gr o u p 2 li pi d s w hi c h p o s s e s t h e c h ar a ct eri sti c s of li pi d s. e. g
gl y c er ol a n d ot h er al c o h ol s, f att y a ci d s, m o n o a n d di a c yl gl y c er ol, li pi d (f at) s ol u bl e vit a mi n s, st er oi d h or m o n e s,
h y dr o c ar b o n s a n d k et o n b o di e s.
4. Mi s c ell a n e o u s li pi d s: C o m p o u n d p o s s e s si n g t h e c h ar a ct eri sti c s of li pi d s.
e. g C ar ot e n oi d s, S q u al e n e, T er p e n e s et c.

LI PI D M E T A B O LI S M
• T h e f att y a ci d s i n t h e b o d y ar e m o stl y o xi di z e d b y β – o xi d ati o n a n d it’ s o c c ur s at β – c ar b o n at o m.
• All e n z y m e s r e q uir e d f or β – o xi d ati o n s ar e pr e s e nt i n mit o c h o n dri a.
• P al miti c a ci d ( 1 6 C) w h e n o xi di z e d r e s ult s i n 8 m ol e c ul e s of a c et at e a n d r u n t hr o u g h t h e β - o xi d ati o n c y cl e 7 ti m e s.
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
3. A B N O R M A LI TI E S O F LI PI D M E T A B O LI S M
1. Ni e m a n n -Pi c k di s e a s e
2. G a u c h er’ s di s e a s e – A c c u m ul ati o n of Gl u c o c er e br o si d e s
3. T a y -S a c h s di s e a s e -
4. H y p erli p o pr ot ei n e mi a - E x c e s s of li p o pr ot ei n i n t h e bl o o d
5. H y p oli p o pr ot ei n e mi a - d efi ci e n c y of li p o pr ot ei n i n bl o o d

4. KET O N E B O DI E S
• K et o n e b o di e s ar e w at er s ol u bl e
• K et o g e n e si s o c c ur s i n li v er b y a c et yl C o A.
• T e st f or d et e cti o n -R ot h er a’ s t e st.

5. C H O L E S T E R O L BI O S Y N T H E SI S
• C h ol est er ol is t h e m ost a b u n d a nt a ni m al st er ol. It c o nt ai ns o n e h y dr o x yl gr o u p ( at C 3), a d o u bl e b o n d ( C 5 -C 6) a n d a n
ei g ht c ar b o n si d e c h ai n att a c h e d t o C 1 7.
• C h ol est er ol i s i n v ol v e d i n s y nt h esis of bil e a ci ds, h or m o n es (s e x a n d c orti c al) a n d vit a mi n D.
• 5 st a g es
1. S y nt h esis of H M G C o A.
2. F or m ati o n of m e v al o n at e ( 6 C).
3. Pr o d u cti o n of is o pr e n oi d u nit s ( 5 C).
4. S y nt h esis of s q u al e n e ( 3 0 C).
5. C o n v ersi o n of s q u al e n e t o c h ol est er ol ( 2 7 C).

A c et yl C o – A ( 2 C) H M G C o – A ( 6 C) M e v al o n at e ( 6 C)
[ H y dr o x y M et h yl Gl ut ar at e]

L a n o st er ol ( 3 0 C) S q u al e n e I s o pr e n e u nit ( 5 C)
[ B uil di n g Bl o c k]

C h ol e st er ol ( 3 0 C)

6. T E S T F O R LI PI D S
1. Gr e a s e s p ot t e st , Oil S p ot t e st
2. U n s at ur ati o n i n f at ( H al o g e n ati o n s t e st)

C hl or of or m + Li pi d + Br o mi n e w at er

N o c h a n g e i n br o mi n e C h a n g e i n br o mi n e c ol or

S at ur at e d F att y A ci d U n s at ur at e d F att y A ci d
e g. P al miti c A ci d ( 1 6 C) e g. Ol ei c a ci d s

3. T e st f or c h ol e st er ol
a. Mi cr o s c o pi c t e st
b. S al k o w s ki r e a cti o n - St er oi d
c. Li b er m a n n b ur c h ar d r e a cti o n – St er oi d

7. T E S T T O C H E C K P U RI T Y O F F A T S A N D OI L S
• I o di n e n u m b er
• S a p o nifi c ati o n n u m b er
• R ei c h ert - M eissl ( R M) n u m b er
• A ci d n u m b er

8. P OI N T S T O R E M E M B E R
✓ T h e u ns at ur at e d f att y a ci ds - li n ol ei c a n d li n ol e ni c a ci d ar e ess e nti al t o h u m a ns, t h e d efi ci e n c y of w hi c h c a us es
p hr y n o d er m a or t o a d s ki n.
✓ Li p o g es esis (f att y a ci ds ar e s y nt h esis e d b y e xtr a mit o c h o n dri al s y st e m) --- i n – c yt os ol w hi c h is R e g ul at e d b y — a c et yl
c o -A c ar b o x yl as e.
✓ A c et yl -C o A a n d m a l o n yl-C o A ar e t h e pr e c urs ors of F att y a ci d s y nt h esis i n t h e pr es e n c e of f att y a ci d s y nt h as es. It is a n
i m p ort a nt p art of t h e li p o g e n esis pr o c ess
✓ Fr e e f att y a ci d ar e pr e c urs or of k et o n b o di es a n d K et o n e b o d y s ar e pr o d u c e d w h e n f att y a ci d o xi d ati o n i n cr e as e
( k et osis).
✓ Diff er e n c e b et w e e n oil & f at is o nl y i n p h ysi c al pr o p ert y i. e. oil is li q ui d b ut f at is s oli d at r o o m t e m p er at ur e.
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
✓ F ats & oils ar e est er of f att y a ci d wit h gl y c er ol w hil e w a x es ar e est er of f att y a ci d wit h al c o h ol ( us u all y l o n g c h ai n),
c et yl al c o h ol is m ost c o m m o nl y.

Pr o c e ss R at e li miti n g st e p( e nz y m e)
C h ol est er ol s y nt h esis H M G c o -A r e d u ct as e
F att y a ci d s y nt h esis A c et yl -c o -A c ar b o x yl as e
K et o n b o di es H M G c o - A s y nt h et a s e
Bil e a ci d 7 - α h y dr o x yl as e

✓ Li pi d tr a ns p ort

H D L ( h e alt h y) pr e d o mi n a nt li pi d i n p h os p h oli pi d C h ol est er ol tr a ns p ort P eri p h er y -t o-li v er

L D L (l et h al) pr e d o mi n a nt li pi d i n c h ol est er ol C h ol est er ol tr a ns p ort li v er -t o – tiss u e

✓ Bil e a ci ds

Pri m ar y bil e a ci d C h oli c a ci d & c h e n o d e o x y c h oli c a ci d

S e c o n d ar y bil e a ci d d e o x y c h oli c a ci d & lit h o c h oli c a ci d

N U C L EI C A CI D S

• Tr a ns mitt er s of g e n eti c i nf or m ati o n w hi c h is D N A ( d e o x yri b o n u cl ei c a ci d) a n d R N A (ri b o n u cl ei c a ci d).

• D N A (r es er v e b a n k of g e n eti c i nf or m ati o n) is dis c o v er e d b y J o h a n n Fri e dri c h Mi es c h er.
• N u cl e oti d es ( D N A & R N A) ar e pr e c urs ors of n u cl ei c a ci d.
• N u cl e oti d es ar e c o m p os e d of
o Nitr o g e n o us b as e ( p uri n e / p yri mi di n e)
o P e nt os e s u g ar (ri b os e / d e o x yri b os e)
o P h os p h at e gr o u p
• N u cl e osi d es ar e c o m p os e d of Nitr o g e n o us b as e a n d P e nt os e s u g ar.
• N u cl e oti d es a n d n u cl ei c a ci d ar e a ni o ni c d u e t o t h e n e g ati v e c h ar g es i m p art e d b y p h os p h at e gr o u p.
• Nitr o g e n o us b as e
P uri n e b as e s P yri mi di n e b as e s
DNA A d e ni n e , g u a ni n e T h y mi n e , c yt osi n e
RNA A d e ni n e , g u a ni n e Ur a cil, c yt osi n e
• T a ut o m eris m: - w h e n a m ol e c ul e e xist i n k et o (l a ct a m) a n d e n ol (l a cti m) f or m f or e x. g u a ni n e, c yt osi n e, t h y mi n e a n d
ur a cil s h o w t a ut o m eris m
• H y p o x a nt hi n e, x a nt h e n e a n d uri c a ci d ar e ot h er bi ol o gi c all y i m p ort a nt b as es w hi c h ar e pr es e nt i n c ells i n fr e e St at e.
• Uri c a ci d is t h e e n d pr o d u ct of p uri n e d e gr a d ati o n.
E u c ari oti c R N A p ol y m er as es

E nz y m e L o c ati o n
R N A p ol y m e r a s e I N u cl e ol u s
R N A p ol y m e r a s e II,III C h r o m ati n, n u cl e a r m at ri x

DNA R e pli c ati o n DNA

D N A – p ol y m er as e

DNA Tr a ns cri pti o n RNA Tr a nsl ati o n Pr ot ei n

R N A p ol y m er as e

• T h e i nt err el ati o ns hi p of t h es e t hr e e bi o m ol e c ul es ( D N A, R N A a n d Pr ot ei ns) is c all e d c e ntr al d o g m a of m ol e c ul ar bi ol o g y or

m or e c o m m o nl y t h e c e ntr al d o g m a of lif e.
• N u cl ei c a ci d o n e t h e p ol y m er of n u cl e oti d es h el d b y ‘ 3 o n 5’ P h os p h o di est er b o n d.
▪ N u cl e osi d e Nitr o g e n o us b as e + P e nt os e s u g ar
▪ N u cl e oti d e N u cl e osi d e + P h os p h at e
▪ S u g ar { D -r e b utt er D-d e o x yri b os e}
▪ Li n k e d vi a P - gl y c osi di c li n k a g e t o N-9 of a P uri n e or N -1 of p yri mi di n e b as e.
• D N A c o nt ai ns t h y mi n e w hil e R N A c o nt ai ns ur a cil.

DNA
• B asi c u nit of g e n eti c i nf or m ati o n.
• D N A is a p ol y m er of d e o x yri b o n u cl e oti d es.
• C h ar g aff’s r ul es –
( 1) P uri n es = P yri mi di n es
A + G = C + T
( 2) D N A h a s e q u al n u m b er of A = T a n d e q u al n u m bs of G ≡ C
• D o u bl e h eli c al str u ct ur e of D N A w as pr o p os e d b y W ats o n a n d Cri c k.
• F u el g e n r e a g e nt – [ f usti a n i n s ulf ur o us a ci d ] gi v es a bl uis h vi ol et c ol o ur wit h D N A.

N ot e: - D N A s y nt h esis pr o c e ss fr o m 3’ e n d t o e n d [ 3; ----5’]
R N A s y nt h esis pr o c ess fr o m 5’ e n d t o 3’ e n d [ 5’ ----3’]
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
• B -D N A – is t h e m ost pr e d o mi n at e fr o m u n d er p h ysi ol o gi c al c o n diti o n.

C o m p aris o n of diff er e nt f or ms of D N A
S. N o G e o m etr y attri b ut e A -f or m B -f or m Z -f or m
1. H eli x s e ns e Ri g ht -h a n d e d Ri g ht -h a n d e d L eft -h a n d e d

RNA
• R N A is a p ol y m er of ri b o n u cl e oti d es.
• R N A d o es n’t o b e y t h e C h ar g aff’s r ul e.
• Us u all y si n gl e str a n d e d p ol y n u cl e oti d es.

T y p e s of R N A
( 1) M ess e n g er R N A ( m -R N A) – S p e cif y s e q u e n c e of a mi n o a ci d i n pr ot ei n s y nt h esis.
( 2) Tr a nsf er R N A (t - R N A) – D eli v ers a mi n o a ci ds f or pr ot ei n s y nt h esis.
( 3) Ri b os o m al R N A (r -R N A) – Bi n di n g of m -R N A t o ri b os o m e a n d pr ot ei n s y nt h esis.

Diff er e n c e b et w e e n D N A a n d R N A
S. N C h ar a ct er DNA RNA
1. Pr es e n c e I n c hr o m os o m es a n d littl e i n mitr o c h o n dri a a n d Distri b ut e d t hr o u g ht t h e c yt o pl as m e x c e pt
c hl or o pl ast v a c u ol e.
2. Str a n ds N or m all y d o u bl e str a n d e d N or m all y si n gl e str a n d e d
3. S u g ar d e o x yri b os e s u g ar Ri b os e s u g ar
4. Nitr o g e n o us A, G, C a n d T. A, G, C a n d U.
b as es

P uri n e s

• P uri n es ar e c y cli c c o m p o u n d h a vi n g t w o ur e a r esi d u es ( - N H C O. N H -).

Cl assifi c ati o n
( 1) H y dr o x yl or o x y p uri n es – uri c a ci d, x a nt hi n e.
( 2) A mi n o uri n es – A d e ni n e a n d h u m a n e.

Uri c a ci d All o x a n + Ur e a.
X a nt h e n es All o x a n + Ur e a.
C aff ei n e Di m et h yl all o x a m + M et h yl ur e a.
T h e o p h yt hr e Di m et h yl all o x a n + Ur e a
T h e o br o mi n e Di m et h yl all o x a n + M et h yl ur e a.

Dis or d er of p uri n e m et a b olis m: -

( 1) H y p er ur e c e mi a a n d G o ut - M et a b oli c dis e a s es ass o ci at e d wit h o v er pr o d u cti o n of uri c a ci ds.
( 2) L e s c h – N y h a m s y n dr o m e -
( 3) H y p o uri c e mi a - T his is d u e t o n o n e g e n eti c d ef e cts i n t h e e nz y m e x a nt hi n e o xi d as e, it l e a ds t o f e d e x cr eti o n of x a nt hi n e
a n d h y p o x a nt hi n e.

A d e ni n e h y p o x a nt hi n e h y p o x a nt hi n e X a nt hi n e

Uri c A ci d

Uri n e a n al y sis
A. F or n or m al c o nstit u e nt
1. Ur e a – H y p o br o mi d e t est
2. Uri c a ci d – S c hiff’s t est
3. Cr e ati ni n e – J aff e’s t est
B. F or a b n or m al c o n diti o n
1. Pr ot ei n
a. H e at c o a g ul ati o n t est
▪ Uri n e m ai nl y c o nt ai ns al b u mi n w hi c h is h e at c o a g ul at a bl e pr ot ei n.
b. H ell er’s t est
2. Disti n g uis h b et w e e n h e m at uri a a n d h e m o gl o bi n ari a ort h o t ol u di n e t est
3. D et e cti o n of uri n e r e d u ci n g s u g ar – B e n e di ct’s t est
4. D et e cti o n of bl o o d i n uri n e – B e nz e di n e t est
5. T est f or k et o n e b o di es – R ot h er a t est
6. T est f or bil e s alts – H a y’s t est, P ett er k of er’s t est
7. T est f or bil e pi g m e nt – F o u c h et’s t est, G m eli n’s t est
8. T est f or ur o bili n o g e n a n d p h or p o bili n o g e n – E p nli c h’s di az o t est

E sti m ati o n of bl o o d gl u c os e
1. F oli n e w u m et h o d
2. O – T ol ui di n e m et h o d
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
3. Gl u c os e o xi d as e p er o xi d as e ( G O D – P O D) – T his is a n e nz y m ati c d et er mi n ati o n of bl o o d gl u c os e.

D et er mi n ati o n of S G P T a n d S G O T
o S G P T ( S er u m gl ut a m at e p yr u v at e tr a ns mi n a s e) of A L T –
▪ L e v el i n cr e as e i n li v er dis e as e ( h e p atits)
▪ El e v at e d l e v el of s er u m bilir u bi n -J a u n di c e
o S G O T ( S er u m gl ut a m at e o x al o a c et at e tr a ns mi n as e
▪ L e v el i n cr e as e i n h e art dis e a s e ( M y o c ar di al i nf ar cti o n)

E sti m ati o n of s er u m uri c a ci d – Uri c a ci d + P h os p h ot u n gsti c a ci d { T u n g ust u n bl u e}

E NZY MES
C H A R A C T E RI S TI C S O F E N Z Y M E S

• E nz y m es ar e bi o c at al yst t h at c o ntr ols t h e r at e of c h e mi c al r e a cti o ns wit h o ut it s elf u n d er g oi n g a n y c h a n g e.

• E nz y m es ar e n ot c o ns u m e d d uri n g a c h e mi c al r e a cti o n
• T h e y s p e e d u p r e a cti o ns
• E x hi bit st er e os p e cifi cit y --> a ct o n a si n gl e st er e ois o m er of a s u bstr at e
• E x hi bit r e a cti o n s p e cifi cit y --> n o w ast e or si d e r e a cti o ns
• T h e y ar e pr ot ei n e o us i n n at ur e.
• F u n cti o n al u nit of t h e e nz y m e i s h ol o e nz y m e.

L o os el y b o u n d
A p o e n z y m e ( P r ot ei n)
t o C o-f a ct or
H ol o e n z y m e ( P r ot ei n +
N o n -P r ot ei n)
C o -e n z y m e ( O r g a ni c)

C o -f a ct o r ( N o n P r ot ei n)

P r o st h eti c G r o u p
(I n d o r g a ni c)

Cl assifi c ati o n of e nz y m e s :- { O T H LI L}
O xi d or e d u ct as e ❖ E nz y m e i n v ol v e d i n o xi d ati o n r e d u cti o n.
❖ O xi d as e, R e d u ct as e, D e h y dr o gi n a s e et c.
Tr a nsf er as e ❖ E nz y m es t h at c at al ys e t h e tr a nsf er of f u n cti o n al gr o u p.
❖ M et h yl tr a nsf er a s e, p ol y m er as e, ki n as e et c
H y dr ol as e s ❖ C a us e h y dr ol ysis
❖ Est er as e, H eli c as e, A m yl as e, N u cl e as e et c.
L y as e ❖ E nz y m e s p e ci aliz e d i n a d diti o n or r e m o v al of w at er a m m o ni a, C O 2 et c.
❖ D e c ar b o x yl as e, Al d ol as e et c.
Is o m er as e ❖ C at al ys e t h e r e arr a n g e m e nt of m ol e c ul ar str u ct ur e t o f or m is o m ers.
❖ P h os p h o h e x ois o m er as e.
Li g as e ❖ T w o m ol e c ul es ar e j oi n e d t o g et h er
❖ S y nt h et as e, C ar b o x yl as e, T hi o ki n as e et c.
E nz y m e I n hi biti o n
• A n e nz y m e i n hi biti o n is d efi n e d as a s u bstr at e w hi c h bi n ds t h e e nz y m e a n d bri n gs a b o ut a d e cr e as e i n c at al yti c a cti vit y of
e nz y m e.
1. R e v er si bl e I n hi biti o n
• I n hi bit or bi n ds n o n-c o v al e ntl y wit h e nz y m e a n d t h e e nz y m e.
• I n hi biti o n c a n b e r e v er s e d if i n hi bit ors ar e r e m o v e d.
a. C o m p etiti v e I n hi bit or s
• W h e n b ot h s u bstr at e bi n d at s a m e si d e.
• K m v al u e i n cr e a s es w h er e as V m a x r e m ai ns u n c h a n g e d.
b. N o n -C o m p etiti v e i n hi bit or s
• W h e n s u bstr at e bi n d at diff er e nt si d e of e nz y m e.
• K m v al u e u n c h a n g e d V m a x – L o w er e d
2. Irr e v er si bl e I n hi biti o n
• I n hi bit ors bi n ds c o v al e ntl y wit h t h e e nz y m e a n d i n a cti v e t h e m.
• I o d o a ct as e is a n irr e v ersi bl e i n hi bit ors of t h e e nz y m e li k e p a p ai n a n d gl y c er al d e h y d es
• Dis ulfir a m – irr e v ersi bl y i n hi bits al d e h y d e d e h y dr o g e n as e
1. 1. S ui ci d e I n hi biti o n
• S p e ciliz e d f or m of i rr e v ersi bl e i n hi biti o n.
• I n t his c as e ori gi n al i n hi bit or is c o n v erte d t o a m o v e p ot e nt f or m b y t h e s a m e e nz y m e t h at o u g ht t o b e i n hi bit e d. S o
f or m er i n hi bit or bi n ds irr e v er si bl y wit h e nz y m e. e g. All o p uri n ol
• All o p uri n ol is a n i n hi bit or of X a nt hi n e o xi d as e, g ets c o n v ert e d t o all o x a nt hi n e a m or e effi ci e nt i n hi bit or of t his
e nz y m e.
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
• 5 -Fl u or o ur a cil is a n i n hi bit or of t h y mi d yl at e s y nt h as e g et s c o n v ert e d t o fl ur o d e o x y uri d yl at e ( m or e effi ci e nt).

3. All ost eri c I n hi biti o n

• W h e n a n i n hi bit or bi n ds wit h all ost eri c sit e c a n c a us e c o nf or m ati o n al c h a n g e at t h e s u bstr at e bi n di n g sit e. T h us
pr e v e nt bi n di n g of s u bstr at e t o t h e e nz y m e.
❖ U nit of e nz y m e - N e v er e x pr ess e d i n c o n c e ntr ati o n ( m g, g, µ g) – K at al * a b br e vi at e d as K at
❖ Ri b oz y m es ( N o n -pr ot ei n e nz y m es) – ar e gr o u p of ri b o n u cl ei c a ci ds a n d f u n cti o n a s bi ol o gi c al c at al ysts.

I m p ort a nt e nz y m e s i n t h e di a g n osis of dis e as e s

S er u m E nz y m e Dis e as e
S G P T ( A L T) Li v er Dis e as e ( H e p atitis)
S G O T ( A S T) M y o c ar di al I nf ar cti o n ( H e art att a c k)
Al k ali n e p h os p ht as e J a u n di c e
A ci d P h os p h at as e C a n c er of pr ost at e gl a n d

C o m m er ci al a p pli c ati o ns of is ol at e d e nz y m e s
E nz y m e R e a cti o n
α -a m yl as e St ar c h h y dr ol ysis
C at al as e Br e a k d o w n of h y dr o g e n p er o xi d e t o w at er a n d o x y g e n
C ell ul a s es Br e a k d o w n of c ell ul os e
Gl u c os e is o m er a s e C o n v ersi o n of gl u c os e t o fr u ct os e.
Gl u c os e o xi d as e O xi d ati o n of gl u c os e
L a ct as e H y dr ol ysis of t h e mil k s u g ar l a ct os e t o gl u c os e a n d g al a ct os e.
P e cti n as es Br e a k d o w n of p e cti n
Pr ot e as es Di g esti o n of pr ot ei n
R e n ni n C o a g ul ati o n of mil k pr ot ei n ( c as ei n).

P oi nts t o r e m e m b er
✓ C o e nz y m e s - m a n y e nz y m es c at al yz e r e a cti o ns o nl y i n t h e pr es e n c e of s p e cifi c n o n pr ot ei n or g a ni c m ol e c ul e c all e d t h e
c o e nz y m e.
✓ O pti m u m t e m p er at ur e - t e m p er at ur e at w hi c h e nz y m es a cti vit y is m a xi m u m.
✓ A bz y m e - A nti b o d y a cti n g o n e nz y m e
✓ Z y m o g e n - I n a cti v e pr e c urs or of e nz y m e
✓ Mi c h a elis a n d M e nt e n ( 1 9 1 3) pr o p os e d a n e x pl a n ati o n f or t h e eff e ct of s u bstr at e c o n c e ntr ati o n o n t h e e nz y m e s a cti vit y.

ट्र क् ल् स् [क् ]
फ़्र =
न् म् + [न् ]

✓ K m or Mi c h alis -m e nt o n c o nst. is d efi n e d a s t h e s u bstr at e c o n c e ntr ati o n t o pr o d u c e h alf m a xi m u m v el o cit y. L o w er k m v al u e

i n di c at es a str o n g affi nit y b et w e e n
✓ Is o e nz y m e s or Is oz y m es – Str u ct ur all y diff er e nt b ut f u n cti o n all y s a m e. e. g L a ct at e d e h y dr o g e n a s e( L D H)

VI T A MI N S
• T h e t er m vit a mi n w as d eri v e d fr o m " Vit a mi n e" c oi n e d b y t h e K azi mi erz F u n k .
• Vit a mi n is a n or g a ni c c o m p o u n d r e q uir e d b y a n or g a nis m as a vit al n utri e nt i n li mit e d a m o u nt s w hi c h c a n n ot b e s y nt h esiz e d
i n s uffi ci e nt q u a ntiti es b y a n or g a nis m & m ust b e o bt ai n e d fr o m t h e h e alt h y di et.
• I n h u m a ns t h er e ar e 1 3 vit a mi ns: 4 f at -s ol u bl e ( A, D, E, a n d K) a n d 9 w at er -s ol u bl e ( 8 B vit a mi ns a n d vit a mi n C).

1. T Y P E S O F VI T A MI N
1. 1. F at s ol u bl e vit a mi ns –
❖ Vit a mi n A, Vit a mi n D, Vit a mi n E, Vit a mi n K

1. 2. W at er s ol u bl e vit a mi ns –
❖ Vit a mi n B – C o m pl e x
i. T hi a mi n e ( Vit a mi n B 1 )
ii. Ri b ofl a vi n ( Vit a mi n B 2 )
iii. Ni a ci n ( Vit a mi n B 3 )
i v. P e nt ot h e ni c a ci d ( Vit a mi n B 5 )
v. P yri d o xi n e ( Vit a mi n B 6 )
vi. Bi oti n ( Vit a mi n B 7 , Vit a mi n e H)
vii. F oli c a ci d ( Vit a mi n B 9 )
viii. C o b al a mi n e ( Vit a mi n B 1 2 )
❖ Vit a mi n C ( As c or bi c a ci d)

2. S U M M A R Y O F VI T A MI N S

Vit. C h e mi c al n a m e D efi ci e n c y dis e as e

A R eti n al, r eti n ol Ni g ht bli n d n ess
B1 T hi a mi n e B eri b eri
B2 Ri b ofl a vi n Re d t o ng ue
B3 Ni a ci n/ ni c oti ni c a ci d or ni c oti n a m ai d e P ell a gr a
B5 P e nt ot h e ni c a ci d
B6 P yri d o xi n e N e ur o p at h y, c o n v ulsi o ns
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
B7 Bi oti n H air f alli n g
B9 F oli c a ci d / Pt er yl -gl ut a mi ni c a ci d M e g al o bl asti c a n a e mi a
B 12 C y n a c o b al a mi n e P er ni ci o us a n a e mi a
C As c or bi c a ci d S c ur v y – i m p air e d w o u n d h e ali n g, l oss of d e nt al C e m e nt.
D 1 Mi xt ur e of Er g o c al c ef er ol & l u mi st er ol Ri c k ettsi a
D 2 C al cif er ol Ost e o m al esi a
D 3 C h ol e c al c ef er o
E T o c o p h er ol I nf ertilit y
K1 P h yt o n a di o n e / P h yll o q ui n o n H a e m o p hili a
K2 M e n a q ui n o n e
K3 M e n a di o n e / a c et o m e n o p ht h o n e

• Vit a mi n D 1 – m ol e c ul ar c o m p o u n d of er g o c al cif er ol wit h l u mist er ol, 1: 1

• Vit a mi n D 2 - Er g o c al cif er ol ( m a d e fr o m er g ost er ol)
• Vit a mi n D 3 - c h ol e c al cif er ol ( m a d e fr o m 7 -d e h y dr o c h ol est er oli n t h e s ki n)
• Vit a mi n D 4 - 2 2 -di h y dr o er g o c al cif er ol
• Vit a mi n D 5 - Sit o c al cif er ol ( m a d e fr o m 7 -d e h y dr osit ost er ol)

• Vit a mi n w hi c h s h o w h or m o n e li k e f u n cti o ns a n d r e g ul ati o n of mi n er al m et a b olis m – Vit. D

• Vit a mi n w hi c h r e g ul at e of c ell a n d tiss u e gr o wt h a n d diff er e nti ati o n --Vit a mi n A
• Vit a mi n w hi c h a ct as a nti o xi d a nts -- Vit a mi n E, β - c ar ot e n oi d a n d s o m eti m es Vit a mi n C
• Vit a mi n w hi c h a ct as pr e c urs ors f or e n z y m e c of a ct ors --Vit a mi n B -c o m pl e x
• Vit - K 1 o bt ai n e d fr o m pl a nt a n d K 2 fr o m i nt esti n al b a ct eri a w hil e K 3 is s y nt h eti c ori gi n
• Vit -D is a pr o -h or m o n e a n d it is st er oi d al d eri v ati v e
•

S. N o Vit a mi n
1. Vit a mi n A ( R eti n ol) β – i o ni n e ri n g
2. Vit a mi n K ( N a pt h a q ui n o n e)
3. Vit a mi n e B 1 ( T hi a mi n e)
4. Vit a mi n e B 2 ( Ri b ofl a vi n)
5. Vit a mi n e B 3 ( Ni a ci n)
6. Vit a mi n B 5 ( P e nt at h o ni c A ci d)
7. Vit a mi n e B 6 ( P yr o d o xi n e)
8. Vit a mi n e B 7 ( Bi oti n, Vit a mi n H)
9. Vit a mi n B 9 ( F oli c A ci d) Vit a mi n e M
1 0. Vit a mi n e B 1 2 ( C o b al a mi n)
1 1. Vit a mi n e C ( As c or bi c a ci d)

3. VI T A MI N E I N C H E MI C A L R E A C TI O N S

N a m e of vit a mi n N a m e of c o -e nz y m e T y p e s of r e a cti o ns
T hi a mi n e T hi a mi n e p yr o p h os p h at e D e c ar b o x yl ati o n of  -k et o a ci ds
Bi oti n Bi oti n C O 2 fi x ati o n r e a cti o ns
F oli c a ci d T etr a h y dr o f oli c a ci d V ari o us r e a cti o ns i n v ol vi n g si n gl e c h ai n c ar b o n c o m p o u n ds

A L K A L OI D S
❖ P R O P E R TI E S

• N at ur e – b asi c , c o nt ai n 1 or m or e t h a n 1 nitr o g e n at o m.
• M ost al k al oi ds ar e c r yst alli n e s u bst a n c es. T h e y m a y e xist as F r e e St at e , as s alt or as N -o xi d e i n
pl a nts.
• Al k al oi d al s alts a r e w at er s ol u bl e a n d s p ari n gl y s ol u bl e (i ns ol u bl e) i n or g a ni c s ol v e nts e x c e pti o n ar e
o C aff ei n e (fr e e b as e) – s ol u bl e i n w at er
o C ol c hi ci n es (fr e e b as e) – s ol u bl e i n a ci d, al k ali, n e utr al s ol uti o n
o Q ui ni n e s ul p h at e – 1 p art s ol u bl e i n 1 0 0 0 p arts of w at er
o Q ui ni n e H Cl - 1 p art s ol u bl e i n < 1 p arts of w at er
• Fr e e Al k al oi d al b as es ar e w at er i ns ol u bl e a n d s ol u bl e i n or g a ni c s ol v e nts ( b e n z e n e, c hl or of or m)
• Al k al oi ds c o nt ai ni n g q u at er n ar y b as es ar e w at er s ol u bl e e x. -q ui ni n e
• S o m e al k al oi ds ar e w at er s ol u bl e e x -Q ui ni n e, C ol c hi ci n es, C aff ei n e.
• Cl assif y a c c or di n g t o N -at o m pr es e nt i n al k al oi ds
o 1 0 al k al oi d --- M es c ali n e, N or ps e u d o e p h e dri n e
o 2 0 al k al oi d --- E p h e dri n e
o 3 0 al k al oi d ---A tr o pi n e, R es er pi n e, M or p hi n e
o 4 0 al k al oi d ---T u b o c ur ari n e.
• V ol atil e al k al oi ds (li q ui d) ---ni c oti n e, c o nii n e — is ol at e d b y distill ati o n
• As p er gilli c a ci d ---al k al oi d N -o xi d e
• Pi p eri di n e: - n ot p oss es a n y p h ar m a c ol o gi c al a cti vit y & b ut h as N i n ri n g
• C ol c hi ci n :- n ot b asi c i n n at ur e & n ot c o nt ai n N i n ri n g b ut it is al k al oi d d u e t o p h ar m a c ol o gi c al a cti vit y
• Pr e c urs or of s hi ki mi c a ci d p at h w a y — E r yt h r os e -4 -p h os p h at e & p h os p h o e n ol p y r u v at e.
• Al k al oi d al pl a nts w hi c h c o nt ai n gl y c osi d es
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
• C ol o u r e d al k al oi d
B e b eri n e Y e ll o w
B et a vi di n e Red
S a n g u n ari n C o p p er r e d
• P r ot o & ps e u d o al k al oi d

 S y nt h e sis fr o m a mi n o a ci d
Tr u e al k al oi d
 N at o m pr es e nt i n a er o m ati c ri n g
 s y nt h esiz e d fr o m a mi n o a ci d (Als o c all e d as a mi n o al k al oi d)
Pr ot o al k al oi d  N -at o m is pr e s e nt i n si d e c h ai n i nst e a d of ar o m ati c ri n g
 E x. E p h e dri n e, C ol c hi ci n es, M us c ali n, B at ai n, H or di ni n e, C h oli n e
 N ot s y nt h esiz e d fr o m a mi n o a ci d , N i n ri n g
 T er pi n o d al & P uri n e al k al oi ds
Ps e u d o al k al oi d  T h e y d o n’t s h o w m a n y t y pi c al c h ar a ct eristi c t est of al k al oi d b ut gi v e st a n d ar d
q u alit ati v e & q u a ntit ati v e t est
 E x. C o n n ei n e, C affi n e, A c o niti n e & t a x ol ( dit er pi n e)
• T o b a c c o al k al oi d pr o d u c e i n r o ot b ut a c c u m ul at e d i n l e af w hil e s e e ds n ot c o nt ai n al k al oi d
• C ol c hi ci n e al k al oi d pr es e nt i n b ot h s e e d & c or n
• Al k al oi ds ar e or g a ni c s alt of a ci ds e x.

Al k al oi ds or g a ni c s alt of a ci ds
A c o nit e Tr a ns a c o niti c a ci d
M or p hi n e M e c o ni c a ci d
Q ui ni n e Q ui ni c a ci d

• M or p hi n e s ul p h at e i n o pi u m p o p p y - is I n or g a ni c s alt of a ci d
• Gl u c o al k al oi d ( gl y c osi di c n at ur e) h a v e a gl y c o n + s u g ar m oit y
o E x. S ol a ni n ( gl u c o al k al oi d - t o xi c) ---------s ol a ni di n e ( a gl y c o n) - al k al oi d
• S ul p h ur c o nt ai ni n g al k al oi d – Gli ot o xi n
• Sit e of f or m ati o n of al k al oi d c a n b e i d e ntifi e d b y –
▪ Gr afti n g t e c h ni q u e
▪ Usi n g R a di o is ot o p e
• Is o m eris m of al k al oi d
o M or e a cti v e i n l e v o f or m e x. ( -) m or p hi n e ( m or p hi n e s ul p h at e)
o ( ±) p a p a v eri n – o pti c all y i n a cti v e
o ( ±) H y o c y mi n e is Atr o pi n e
o (-) H y o c y mi n e is f o u n d i n atr o p a b ell a d o n e – a nti c h ol e n er gi c a cti vit y m or e t h a n a tr o pi n e

R el ati v e pr e ss ur e a cti vit y D ( -) E p h e dri n e > D( -) E p h e dri n e

A nti mi gr a n e a cti vit y (-) E r g ot a mi n e > ( +) Er g ot a mi n e
(-) Q ui ni n e is a nti m al ari al i n a cti o n ( +) Q ui ni n e ( q ui ni di n e) - a nti arrt h y mi c a cti o n
( +) D-t u b e c ur eri n e h a v e m us cl e r el a x a nt pr o p ert y

• N e utr al & sli g htl y a ci di c al k al oi d – Ri ci ni n e, T h e o p h ylli n e

• St or a g e of al k al oi d i n p ur e f or m d o n e i n V a c c u m e d esi c at or o v er d e h y dr ati n g a g e nt ( P 2 O 5 & C a Cl 2 ).
• Q ui ni n e & ci n c h o n a al k al oi d ar e di a ci di c b as e

❖ E X T R A C TI O N: - (is ol ati o n u n d er v a c u u m, r e d u c e d at m os p h eri c pr ess ur e & r ot at or t hi n fil m e v a p or at or)

o M et h o d of e xtr a cti o n
▪ S o x hl et e xtr a cti o n
▪ St as ott o pr o c ess
▪ Ki p p e n b er g e

❖ C H E MI C A L R E A G E N T S F O R A L K A L OI D S: -

C H E MI C A L T E S T F O R A L K A L OI D S
N a m e of t e st F or i d e ntifi c ati o n of R e a g e nt C ol or
1. M a y er’s Al k al oi d P ot assi u m m er c uri c i o di d e s ol uti o n Cr e a m C ol o ur
2. W a g n er’s Al k al oi d A q u e o us i o di n e s ol uti o n R e d dis h Br o w n
3. H a g er’s Al k al oi d S at ur at e d pi cri c a ci d s ol uti o n Y ell o w
4. Dr a g e n d orff’s Al k al oi d P ot assi u m bis m ut h i o di d e s ol uti o n R e d dis h Br o w n
5. A m o ni u m Ri n k er Al k al oi d A m m o ni u m Ri n k et s ol uti o ns + H Cl Fl o c c ul e nt Pi n k P pt.
6. M ur e xi d e t est C aff ei n e & P uri n e P ot assi u m c hl or at e + H Cl + N H 3 P ur pl e C ol o ur
7. Vit alis m ori n e Tr o p a n e al k al oi ds C o n c. H N O 3 + m et h a n oli c K O H Vi ol et C ol or
8. T h al e o q ui n t est Ci n c h o n a a k k al oi d Br o mi n e w at er & dil. A m m. s ol uti o n E m er al d Gr e e n
9. Fr o h d e’s t est I p e c a c al k al oi d S o d. m ol y b d at e + H 2 S O 4
1 0. V a n Ur k’s t est I n d ol e al k al oi d P -di m et h yl a mi n o b e nz el d e h y d e Bl u e
1 1. Fl u or es c e n c e Ci n c h o n a b ar k H 2 S O 4 a n d U. V.li g ht Bl u e
1 2. Fl u or es c e n c e Er g ot U. V.li g ht Red
1 3. H er p at hit e F or Q ui ni n e  P pt. r e a g e nt f or al k al oi ds - C hl or o pl ali ni c a ci d & c hl or o uri c a ci d
1 4. K ell er’s t est F or Er g o n o vi n  V a n Ur k’s t est – Q u a ntit ati v e esti m ati o n of er g ot al k al oi d
1 5. M a n dli n’s F or Str y c hi ni n  Ci n c h o n a b ar k + U V li g ht – Bl u e fl or es c e n c e
1 6. I o di c a ci d t est F or m or p hi n e  Er g ot + U V li g ht – R e d fl or es c e n c e
1 7. S c h n ei d er -w e p p e n F or m or p hi n e  P uri n e al k al oi d ( c aff ei n e, t h e o p h ylli n e, t h e o br o mi n e) -- D o n ot gi v e
t est g e n er al t est of al k al oi ds
1 8. Ki p p er -b er g er C ol c hi ci n e
 R O Y A L I N S TI T U T E O F C O M P E TI TI O N
❖ B I O S Y N T H E SI S O F A L K A L OI D S
o Tr o p a n e al k al oi d: -O r nit hi n e is t h e st arti n g m at eri al, tr o pi c a ci d is d eri v e d fr o m p h e n yl al a ni n e a n d
m et hi o ni n e is r e q uir e d f or m et h yl ati o n i n t h e bi o g e n esis of tr o p a n e al k al oi ds.

Pr e c ur s or E x a m pl e of al k al oi d
As p arti c a ci d Ni c oti ni c A ci d
P h e n yl al a ni n e Ci n n a mi c A ci d, C o u m ari n
L ysi n e Is o p ell etri n e ( L u pi ni n e)
Or nit hi n Tr o p a n e Al k al oi d
Or nit hi n e + P h e n yl al a ni n e Viri di c ati n
Or nit hi n e + ni c oti ni c a ci d Ni c oti n e
Or nit hi n e + A c et at e + P h e n yl al a ni n e C o c ai n e
T yr osi n e + P h e n yl al a ni n e P a p a v eri n e, N ar c oti n e, M or p hi n e, C ol c hi ci n es
Tr y pt o p h a n / tr y pt a mi n e R es er pi n e, S er p e nti n e, Str y c h ni n e
Tr y pt o p h a n L ys er gi c A ci d, Q ui ni n e
Tr y pt o p h a n + a c et at e Er g ot
D o p a mi n e M es c ali n e, C e p h ali n, E m eti n e, D -T u b er c ur ari n e

Or nit h i n e Atr o pi n e, h y os a y mi n e, s c o pol a mi n e, c o c ai n e, ni c oti n e, h y gri n e

P h e n y al ni n e E p h e dri n e, m es c ali n e
T yr osi n e M or p hi n e, c o d ei n e, p a p a v ari n e, t h e b ai n e.
Di h y dr o x y -p h e n yl al a ni n e E m eti n e, c ol c hi ci n es, d o p a mi n e
Tr y pt o p h a n Str y c h a ni n e, s er p e nti n e, r es er pi n e, l ys er gi c a ci d, er g ot al k al oi ds.
L ysi n e Q ui ni n e, i s o p ell et eri n e,

❖ S O U R C E O F A L K A L OI D A L P L A N T S
P art of pl a nt Al k al oi d
Seed N u x v o m o c a, P h ys osti g m a, Ar e c a
R o ot R a u w olfi a, B ell a d o n n a, As w a g a n d h a
U n d er gr o u n d st e m S a n g ui n ari a
B ar k K ur c hi, Ci n c h o n a
L e a v es C o c a L e af, L o b eli a, D u b oisi a
Fr uits C o ni u m
W h ol e pl a nt Vi n c a, E p h e dr a

❖ C H E MI C A L C L A S SI FI C A TI O N O F A L K A L OI D A L P L A N T S

1. I n d ol e ( b e nz p yrr ol e) Er g ot, N u x v o mi c a, P h y osti g m a, R a u v olfi a, Vi n c a

2. Is o- Q ui n oli n e O pi u m
3. Tr o p a n e B ell a d o n n a, D at ur a, H y os c y m us
4. Q ui n oli n e Ci n c h o n a
5. P yri di n e Ar e c a, L o b eli a
6. I mi d az ol e Pil o c ar p us J a b or a n di
7. Q ui n az oli n e V as a k a
8. P uri n e As w a g a n d h a, K ur c hi
9. A mi n o E p h e dr a, C ol c hi c u m, A c o nit e
Us es of al k al oi ds
A nti - c a n c e r Vi n c a , p o d o p h yll u m, t a x u s
A nti a st h mti c E p h e d r a , L o b eli a
A nt ifl a m m at o r y C ol c hi c u m s e e d s , T u r m e ri c
A nti s p a s m o di c s D at u r a, H y o s c y a m u s
A nti a m o e bi c K u r c hi,I p e c a c u a n h a
A nt h el mi nti c s Q u a s si a, m al e -f e r m
A st ri n g e nt M y r o b al a n, A s h o k a B a r k
P r u g ati v e S e n n a, Al o e, R h u b a r b
C a r mi n ati v e C o ri a n d e r, F e n n el , C a r a w a y, Ci n n a m o n
Bitt e r s Q u a s si a, N u x -V o mi c a, G e nti a n, Ci n c h o n a.
C a r di ot o ni c St r o p h a nt h u s, Di git ali s, s q u oll.
A n al g e si c Poppy
E x p e ct o r a nt Li q u o ri c e, v a s k a, B al s u m
H all u ci n o g e n s C a n n a bi s, C o c ai n e.