PS 06 Biochimie Serica

SC.
MIRAMED SRL
DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

PS - 06
Laborator de analize medicale
Editia: 01/01.09.2014
Data aplicarii:01.09.2014
Pag. 1/35
DETERMINARI
BIOCHIMICE DIN SER
PS-06
EDITIA: 01/ 01.09.2014

REVIZIA: 0/
ELABORAT:
Responsabil analiza
Biol.Deaconu Mihaela
VERIFICAT:
SEF LABORATOR
Dr. Cara Mariana Lia
APROBAT:
Director General
Dr. Popescu Mihaela
Avertisment: Documentul de fata este proprietatea SC MIRAMED SRL, Laborator de

Analize Medicale. Reproducerea si difuzarea documentului sunt in exclusivitate dreptul
societatii SC MIRAMED SRL .Copiile sunt numerotate si controlate.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 2/35
LISTA DE DIFUZARE/RETRAGERE
Nume si prenume
Functia
1 Director general
Popescu Mihaela
2 SL
Car Mariana Lia
3 RENAR
Exemplar nr:
Editie :
Revizie:
1
01
0
2
01
0
3
01
0
Data primirii
ed/rev
aplicabile
Semnatura
01.09.2014
01.09.2014
Data
retragerii
ed/rev
retrase
Semnatura
Cine
elibereaza
documentul
Semnatura
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 3/35
INDICATORUL REVIZIILOR
Nr.
Crt.
1
Data
01.09.
2014
Editia/
revizia
1/0
Identificari modificare
Capitol, subcapitol,
pagina modificata,
continut modificari
Elaborat
RMC
Verificat
SL
Aprobat
DG
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 4/35
1. SCOP
Prezenta procedura are drept scop stabilirea regulilor si responsabilitatilor privind
analiza biochimica. Procedura foloseste personalului care efectueaza aceste determinari.
2. DOMENIU DE APLICARE
Procedura se aplica in S.C. MIRAMED SRL - Laborator de analize medicale pentru
determinarea urmatorilor analiti ai serului:
Nr.
crt.
1
Caracteristica - simbol
TRANSAMINAZA
GLUTAMICOXALACETICA (TGO)
TRANSAMINAZA
GLUTAMICPIRUVICA (TGP)
BILIRUBINA TOTALA SI DIRECTA
COLESTEROL (CHOL)
GLUCOZA (GLU)
TRIGLICERIDE (TG)
ACID URIC (UA)
FIER (FE)
HDL COLESTEROL
10
UREE
11
CREATININA
Tipul masurarii
CINETICA
CINETICA
FOTOMETRIE
END POINT
FOTOMETRIE
END POINT
FOTOMETRIE
END POINT
FOTOMETRIE
END POINT
FOTOMETRIE
END POINT
FOTOMETRIE
END POINT
FOTOMETRIE
END POINT
FOTOMETRIE
TWO POINT
FOTOMETRIE
TWO POINT
Metoda de analiza
IFCC FARA ACTIVAREA
PIRIDOXALFOSFATULUI
IFCC FARA ACTIVAREA
PIRIDOXALFOSFATULUI
DIAZONIUM ION
COLESTEROL OXIDAZA
OXIDAREA GLUCOZEI
METODA FARA CORECTIA
GLICEROLULUI
URICAZPEROXIDAZA FARA
ASCORBAT OXIDAZA
METODA COLORIMETRICA
FARA PRECIPITARE
METODA CU
POLIETILENGLICOL
METODA CU UREAZA
JAFFE
3. DOCUMENTE DE REFERINTA
3.1.1. SR EN ISO 15189:2013 - Laboratoare medicale .Cerinte particulare pentru
calitate si competenta
3.1.2. SR EN ISO 9000:2006 - Sisteme de management al calitatii.Principii
fundamentale si vocabular
3.1.3. Manual de operare analizor A15
3.1.4. Biochimie medicala Aurora Popescu, Elena Cristea, Marcela Zamfirescu
Gheorghiu, Ed. Medicala 1980
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 5/35
3.1.5.
3.1.6.
3.1.7.
3.1.8.
3.1.9.
3.1.10.
3.1.11.
3.1.12.
Biochimie I. F. Dumitru, Ed. Didactica si pedagogica, 1980

Analize de laborator si alte explorari diagnostice Ed. MedicArt 2007
Metode curente pentru analize de laborator clinic Ministerul Sanatatii,
Academia de stiinte medicale, Ed. Medicala 1982
Prospectele reactivilor utilizati la determinarea cantitativa a analizelor
solicitate.
PT-5.3 - Echipamente de laborator
PT-5.4 - Proceduri preexaminare
PT-5.6 - Asigurarea calitatii rezultatelor
PO-06 - Estimarea incertitudinii si validarea metodelor
4. DEFINITII si ABREVIERI
4.1.
Definitii
4.1.1. Masurari cinetice masurari care se bazeaza pe variatia densitatii optice
(OD) dupa adaugarea reactivului si scurgerea timpului de incubare, intr-un
interval de timp de 3 min.
Rezultatul se calculeaza ca produs intre OD si un factor specific
caracteristicii masurate.
4.1.2. Masurari fotometrice end point (punct final) bicromatic masurari care
se bazeaza pe masurarea densitatii optice (OD) a complexului colorat al
probei obtinut in urma reactiei cu un reactiv specific.
Rezultatul se calculeaza ca produs intre raportul OD proba/ODetalon si
concentratia solutiei etalon (standard)
4.1.3. Masurari fotometrice two point (punct final) bicromatic masurari care
se bazeaza pe masurarea variatiei densitatii optice (OD) aferenta formarii
complexului colorat al probei obtinut in urma reactiei cu un reactiv specific la
2 intervale de timp.
Rezultatul se calculeaza ca produs intre raportul OD proba/ODetalon si
concentratia solutiei etalon (standard)
4.2.
Abrevieri
4.2.1. LAM Laborator de Analize Medicale
4.2.2. DG Director General
4.2.3. SL Sef Laborator
4.2.4. RC Responsabilul Calitatii
4.2.5. PT Procedura Tehnica
4.2.6. PO - Procedura Operationala
4.2.7. PS- Procedura Specifica
4.2.8. IL - Instructiune de Lucru a echipamentului/aparatului
4.2.9. BA - Buletin de Analiza
5. DESCRIEREA ACTIVITATII
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 6/35
5.1.
Actiuni si masuri preventive
Fiecare pacient este codificat cu un numar de identificare unic (ID) care este alocat
automat de catre calculator in momentul inregistrarii pacientului si insoteste intreg traseul
acestuia in laborator, regasindu-se pe fisa personala, in registrele de lucru, pe buletinele
printate de echipamente si pe buletinul de analiza final.
5.1.1. Protectia personalului
Se iau urmatoarele masuri de protectie a personalului:
purtarea obligatorie de halat, manusi cand se recolteaza si efectueaza analize
medicale;
respectarea normelor de protectie a muncii si PSI specifice locului de munca;
manipularea reactivilor se face respectand reglementarile in vigoare;
echipamentele de masurare si aparatele sunt instalate de personal calificat, cu
respectarea normelor de protectia muncii si PSI si sunt manipulate de personalul din
laborator in conformitate cu instructiunile de lucru specifice.
5.1.2. Protectia echipamentelor de masurare si aparatelor

Se instaleaza si se protejeaza echipamentele de masurare si aparatelor conform
procedurii cod PT-5.3 si conform prevederilor din documentatia tehnica.
5.1.3. Verificarea starii de functionare si confirmarea metrologica a
echipamentelor de masurare si aparatelor
Se identifica starea metrologica a echipamentelor de masurare si aparatelor conform
procedurii cod PT-5.3.
Se verifica starea de functionare conform IL specifice fiecarui echipament/aparat.
5.1.4. Precautii si avertismente:
Desi serurile de control au fost testate pentru HIV si Ag HBs, conform mentiunii din
prospect, se recomanda manipularea cu atentie a acestora pentru evitarea contaminarii cu
alti agenti infectiosi. In caz particular, datorita faptului ca serurile de control sunt sintetice nu
sunt necesare masurile de precautie decat pentru evitarea contaminarii acestora.
Conform manualului tehnic al analizorului A15 probele ce urmeaza a fi analizate sunt
astfel asezate in lacasurile de probe ale analizorului:
probele pentru pacienti se pozitioneaza pe cercul exterior al rack-ului care contine 50
de lacasuri pentru probe astfel ca se pot lucra odata 50 de probe .
probele pentru urgente STAT sunt pozitionate predefinit pe cercul exterior al rackului, fiind procesate inaintea probelor nedeclarate urgenta;
controlul intern materiale de referinta / control normal si patologic, sunt pozitionate
pe rack in pozitii fixe .
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 7/35
calibratorii material de referinta de calibrare sunt amplasate, de asemenea, pe

rack in pozitii fixe deja setate.
Calibrarea analizorului se face numai atunci cand este necesar sau la schimbarea
loturilor de reactivi.
Inainte de pornirea sistemului/analizorului se efectueaza, in ordinea specificata,
urmatoarele:
se umple, daca este cazul, containarul cu apa distilata;
se configureaza parametrii si modul de lucru numai daca intervin modificari;

se programeaza materialele de control intern si numai daca intervin modificari se
programeaza materialul de calibrare;
se verifica parametrii analizelor / testelor;
se definesc interferentele/incompatibilitatile intre teste numai daca intervin

modificari;
se pun cantitatile necesare de reactiv in flacoanele pentru reactiv si se
pozitioneaza reactivii; daca analizorul a fost oprit se face o proba blanc automat;
se pun cantitatile necesare de solutii de spalare
Totodata:
se folosesc numai probe proaspat recoltate si centrifugate respectiv ser
nehemolizat.
se asigura o cantitate suficienta de proba;
se protejeaza probele si reactivii de razele solare;
reactivii sunt pastrati la frigider si sunt stabili pana la data de valabilitate indicata
de producator;
conditiile de mediu optime sunt: 15 32 C si 80 % umiditate maxima relativa,
5.2.
Modul de lucru
I. ANALIZE BIOCHIMICE PRIN METODA CINETICA

Determinarea ALANIN AMINOTRANSFERAZEI ALT, ALAT, TGP, GPT
5.2.1.1. Principiul metodei si domeniu de aplicare
Alanil aminotransferaza din ser catalizeaza transferul gruparii NH 2 (amino -) de la L
Alanina la 2 Oxaloglutarat, rezultand Piruvat si L Glutamat. Piruvatul se transforma in D
Lactat, in prezenta H++NADH si LDH (lactat dehidrogenaza):
ALAT
L Alanina + 2 Oxaloglutarat
L Glutamat + Piruvat
5.2.1.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 8/35
LDH
Piruvat + NADH +H
D Lactat + NAD+
Variatia densitatii optice pe minut (OD/min) la 340 nm, fata de apa, dupa un timp de
incubare de 60 sec, este proportionala cu activitatea enzimatica a alanin aminotransferazei,
exprimata in U/L (unitati la litru)
Valorile de referinta, pentru ser analizat la 37C, sunt:
pentru femei < 34 U/L
pentru barbati < 41 U/L
5.2.1.2. Prelevare/recoltare si conservare/pregatire probe
Probele se recolteaza de catre personalul RP si personalul de la punctele de recoltare
conform modului de lucru descris in PT-5.4.
5.2.1.3. Interferente
Valori crescute pot fi datorate hemolizei, lipemiei sau tratamentului cu oxaciclina,
ampicilina, eritromicina sau opiacee.
Valori fals scazute pot fi datorate cresterii concentratiei enzimelor serice ce consuma
acid lactic.
Transaminazele pot creste direct proportional cu nivelul uremiei (nu se cunoaste cauza).
Nu au fost observate interferente la:
acid ascorbic pana la 30 mg/dl
bilirubina pana la 40 mg/dl
hemoglobina pana la 400 mg/dl
trigliceride (lipemie) pana la 2000 mg/dl
5.2.1.4. Reactivi (Componenti si concentratii)
Reactivul 1 contine:
tampon TRIS de pH = 7,5 solutie de concentratie 110 mmol / L
L Alanina solutie de concentratie 0,6mol / L
LDH (lactat dehidrogenaza) cu activitate enzimatica de 1500 U / L
NADH de concentratie 240 umol / L
2 Oxaloglutarat de concentratie 16 mmol / L
Reactivul de lucru:
se amesteca, prin omogenizare,125 ml apa distilata cu 1 volum Reactiv
1
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 9/35
5.2.1.5. Echipamente de masurare si materiale

Analizor automat A15
5.2.1.6. Mod de lucru
5.2.1.6.1. Modul de lucru utilizand analizorul A15
Analizorul pipeteaza reactiv de lucru si ser nehemolizat si dupa un timp de incubare de
60 sec la 37oC citeste variatia DO/minut la 340 nm, proportionala cu activitatea enzimatica a
alanin aminotransferazei din ser, exprimata in unitati / litru.
5.2.1.6.2. Sensibilitate
Concentratia minima de ALT detectata este de 4 U/L.
5.2.1.6.3. Liniaritate
Reactivul este liniar pana la 900 U/L. In cazul in care concentratia de ALT depaseste
aceasta limita, este necesara o dilutie a probei, repetarea analizei, iar rezultatul se inmulteste
cu factorul de dilutie.
5.2.1.7. Exprimarea rezultatelor si a incertitudinii
Rezultatele sunt calculate automat de analizor si sunt obtinute ca urmare a aplicarii
formulei:
ALT = DO/min x F (U/L)
in care:
ALT activitatea enzimatica a alanin aminotransferazei exprimata in unitati la litru;
DO/min variatia densitatii optice pe minut;
F factor
Incertitudinea se estimeaza conform PO-06
Pentru asigurarea calitatii rezultatelor se procedeaza conform PT-5.6., respectiv se
foloseste, cu frecventa zilnica, ser de control normal si patologic
Determinarea ASPARTAT AMINOTRANSFERAZEI AST, ASAT, TGO, GOT
Aspartat aminotransferaza din ser catalizeaza transferul gruparii amino de la L
Aspartat la 2 Oxaloglutarat, rezultand Oxaloacetat si L Glutamat. Oxaloacetatul, in
prezenta malat-dehidrogenazei (MDH) si a NADH ++H+, se transforma in L Malat.
5.2.2.
ASAT
L Aspart + 2 Oxaloglutarat
L Glutamat + Oxaloacetat
MDH
Oxaloacetat + NADH + H
L Malat + NAD+
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 10/35
Variatia densitatii optice pe minut (OD/min) la 340 nm, fata de apa, dupa un timp de
incubare de 60 sec, este proportionala cu activitatea enzimatica a aspartat
aminotransferazei, exprimata in U/L (unitati la litru).
Valorile de referinta, pentru ser analizat la 37 oC, sunt:
femei < 31 U/L
barbati <35 U/L
Valori crescute pot fi datorate hemolizei, lipemiei sau tratamentului cu oxaciclina,
ampicilina, eritromicina sau opiacee. Prezenta hemoglobinei in ser indica distrugerea
eritrocitelor ceea ce duce la eliberare de ASAT.
Valori fals scazute pot fi datorate cresterii activitatii enzimelor serice ce consuma acid
lactic.
Transaminazele pot creste direct proportional cu nivelul uremiei (nu se cunoaste cauza).
acid ascorbic pana la 30 mg/dl
trigliceride (lipemie) pana la 2000 mg/dl
5.2.2.4. Reactivi (Componenti si concentratii)
Reactivul 1 contine:
tampon TRIS de pH = 7,8 solutie de concentratie 88 mmol / L
L Aspartat solutie de concentratie 260 mmol / L
NADH de concentratie 0,24 mmol / L
MDH (malat dehidrogenaza) cu activitate enzimatica de 900 U / L
LDH (lactat dehidrogenaza) cu activitate enzimatica de 1500 U/L
2 Oxaloglutarat de concentratie 12 mmol / L
Reactivul de lucru:
se amesteca, prin omogenizare,125 ml apa distilata cu1 volum Reactiv
1

Conform 5.2.1.5
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 11/35

Analizorul pipeteaza reactiv de lucru si ser nehemolizat si dupa un timp de incubare de
60 sec la 37oC citeste variatia DO/minut la 340 nm, proportionala cu activitatea enzimatica a
aspart aminotransferazei din ser, exprimata in unitati / litru.
Concentratia minima de AST detectata este de 4 U/L
Reactivul este liniar pana la 300 U/L. In cazul in care concentratia de AST depaseste
aceasta limita, este necesara o dilutie a probei, repetarea analizei, iar rezultatul se inmulteste
cu factorul de dilutie.
formulei:
AST = OD/min x F
in care:
AST activitatea enzimatica a aspartat aminotransferazei exprimata in unitati la litru;
DO/min variatia densitatii optice pe minut;
F factor
foloseste, cu frecventa zilnica, ser de control normal si patologic.
5.2.2.8. Opinii si interpretari
Alanin Aminotransferaza (ALAT/ALT), altfel numita Glutamat Piruvat Transaminaza
(GPT) si Aspartat Aminotransferaza (ASAT/AST), altfel numita Glutamat Oxalacetat
Transaminaza (GOT), sunt cele mai importante reprezentative ale grupului de enzime,
aminotransferaze sau transaminaze, ce catalizeaza conversia de cetoacizi in aminoacizi
prin transferul gruparii amino.
Deoarece ALAT este enzima specifica ficatului, este singura semnificativ crescuta in
bolile hepatobiliare. Cu toate ca, cresterea nivelului de ASAT, poate fi intalnita in asociere cu
afectiuni ale inimii sau ale scheletului muscular, la fel de bine poate fi intalnita si in afectiuni
ale parenchimului ficatului. De aceea s-au facut masuratori paralele de ASAT SI ALAT
aplicate in afectiuni distincte la ficat, la inima sau la scheletul muscular. Raportul ASAT/ALAT
este utilizat pentru diagnosticarea diferentiala in bolile ficatului. Cat timp valoarea raportului
este sub 1, aceasta indica modificari moderate ale ficatului, cresterile valorilor raportului sunt
asociate adesea cu boli severe si cronice ale ficatului.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 12/35
B. ANALIZE BIOCHIMICE PRIN METODA / FOTOMETRIA END POINT (PUNCT

FINAL) BICROMATIC
5.2.3.
Determinarea BILIRUBINEI TOTALE BIL T

Acidul sulfanilic reactioneaza cu nitritul de sodiu, formand acid sulfanilic diazotat.
In prezenta dimetilsulfoxidului, bilirubina totala reactioneaza cu acidul sulfanilic diazotat,
formand complexul de azobilirubina colorat in rosu.
Intensitatea culorii este direct proportionala cu concentratia bilirubinei totale in ser si
prezinta absorbtie maxima in vizibil la 546 nm (540 560 nm)
Valorile de referinta:
bilirubina totala adulti si copii: 0,2 1,0 mg/dl
Expunerea la lumina alba si la razele ultraviolete duc la o scadere cu pana la 20% in
ser.
De asemenea, prezenta hemoglobinei duce la valori fals crescute ale bilirubinei.
Interferentele la hemoglobina incep de la concentratii de hemoglobina de 50 mg/dl
Interferente au mai fost observate la :
acidul ascorbic peste 30 mg/dl;
lipemie (trigliceride) peste 1000 mg/dl;
5.2.3.4. Reactivi
BILIRUBINA TOTALA:
Reactiv 1:
Acid clorhidric, de concentratie 40 mmol/l
Acid sulfanilic, de concentratie 25,6 mmol/l
detergent, stabilizator, de concentraie 49,6 mmol/l
Reactiv 2:
nitrit de sodiu, de concentratie 145 mmol/l
Reactiv de lucru:
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 13/35
Se prepara de 50 parti reactiv R1 si o parte reactiv R2

Reactivii nu se expun la lumina.
Conform 5.2.1.5.
Analizorul pipeteaza reactiv de lucru cu ser nehemolizat si dupa un timp de incubare de
5 minute, citeste DO la 546 nm (540 560 nm),fata de blanc.
Concentratia minima de bilirubina totala detectata este de 0.1mg/dl iar cea de bilirubina
directa este de 0.1 mg/dl.
Reactivul pentru bilirubina totala este liniar pana la 35 mg/dl. In cazul in care
concentratia de bilirubina totala depaseste aceaste limite, se repeta testul cu proba diluata cu
solutie de clorura de sodiu (9 g/l) in proportie de 1/1, iar rezultatul se inmulteste cu 2.
formulei:
BIL. T = n x DO proba / DO standard (mg/dl)
in care:
BIL. T - concentratia de bilirubina totala sau directa exprimata in mg bilirubina totala /dl ser
sau mg bilirubina directa /dl ser;
n - concentratia standardului/solutiei etalon;
DO proba - densitatea optica a probei;
DO standard - densitatea optica a standardului / solutiei etalon.
Pentru asigurarea calitatii rezultatelor se procedeaza conform PT-5.6 respectiv se
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 14/35
Bilirubina este un produs scindat al hemoglobinei. Libera, neconjugata, bilirubina este

extrem de apolara si aproape insolubila in apa, in acest fel formeaza un complex cu albumina
pentru transportul in sange de la splina la ficat. In ficat bilirubina este conjugata cu acid
glucuronic si produsul bilirubina acid glucuronic, solubil in apa, este excretat prin canalele
biliare.
Hiperbilirubinemia poate fi cauzata de cresterea productiei de bilirubina datorata
hemolizei (icter prehepatic), in bolile parenchimatice ale ficatului (icter intrahepatic) sau in
ocluziile cailor biliare (icter posthepatic).
Hiperbilirubinemia cronica congenitala (predominant neconjugata) numita sindromul
Gilberts este foarte frecventa la populatie. Nivelele mari de bilirubina totala sunt observate la
nou nascuti (60 70%) datorate scindarii postnatale a eritocitelor si din cauza intarzierii
functionarii enzimelor de degradare a bilirubinei. Metodele obisnuite de determinare a
bilirubinei, identifica fiecare, bilirubina totala si bilirubina directa. Determinarile bilirubinei
directe masoara in special bilirubina conjugata, solubila in apa. Bilirubina indirecta
(neconjugata) poate fi, asadar etimata ca fiind diferenta dintre bilirubina totala si cea directa.
5.2.4.
Determinarea COLESTEROLULUI SERIC TOTAL - CHOL

Colesterol esterul hidrolizeaza sub actiunea catalitica a colesterolesterazei, cu
formare de colesterol si acizi grasi. Colesterolul rezultat este oxidat, sub actiunea colesterol
oxidazei, la 4 colesten 3 ona si apa oxigenata care reactioneaza cu fenolul si 4 amino
antipirina (reactie catalizata de peroxidaza), rezultand o chinona de culoare rosie si apa.
CHE
Colesterol ester + H2O
Colesterol + acid gras
CHO
Colesterol + O2
Colesterol 3 ona + H2O2
2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + Fenol
Chinona + 4 H2O
Intensitatea culorii chinonei este direct proportionala cu cantitatea de colesterol din ser
si prezinta absorbtie maxima in vizibil la 505 nm.
Valorile de referinta ale colesterolului seric total sunt: sub 200 mg/dl
Valori ale colesterolului seric total la limita de risc sunt: 200 240 mg/dl
Valori patologice ale colesterolului seric total sunt: peste 240 mg/dl.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 15/35

Nu este cazul.
5.2.4.4. Reactivi
Monoreactiv:
tampon fosfat, de concentratie 50 mmol/L cu pH = 6,9;
fenol, de concentratie 24 mmol/L
4 Aminoantipirina, de concentratie 0,5 mmol/L
enzime:
colesterol esteraza (CHE), de activitate enzimatica de 180 U/L
colesterol oxidaza (CHO), de activitate enzimatica de 200 U/L
peroxidaza (POD), de activitate enzimatica de 1000 U/L
standard: de concentratie 200 mg/dl
Conform 5.2.1.5.
Analizorul automat pipeteaza reactiv colesterol si ser, intr-una din cuvele de reactie si,
dupa un timp de incubare de 5 minute, citeste DO la 505 nm, fata de blancul de reactiv.
Concentratia minima de colesterol detectata este de 3 mg/dl.
Reactivul este liniar pana la 800 mg/dl. In cazul in care concentratia de colesterol
depaseste aceasta limita, este necesara o dilutie a probei, repetarea analizei, iar rezultatul se
inmulteste cu factorul de dilutie.
Rezultatele sunt calculate automat de analizor si sunt obtinute ca urmare a aplicarii formulei:
CHOL = n x DO proba / DO standard (mg/dl)
in care:
CHOL concentratia de colesterol seric total exprimata in mg colesterol seric total /dl ser;
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 16/35
n - concentratia standardului / solutiei etalon;

Colesterolul este un component al celulelor membranare si un precursor pentru
hormonii steroizi si acizii biliari sintetizati alaturi de celulele corpului si absorbiti cu mancare.
Colesterolul este transportat in plasma prin lipoproteine, numele complexului intre lipide si
apolipoproteine. Exista patru clase de lipoproteine:
lipoproteine cu densitate mare (HDL);
lipoproteine cu densitate mica (LDL);
lipoproteine cu densitate foarte mica (VLDL);
chilomicroni.
In timp ce LDL-ul este inchis in colesterolul transportat la celulele periferale, HDL-ul este
responsabil pentru colesterolul ridicat din celule. Cele patru clase de lipoproteine indica
relatia clara cu coronarele sclerozate. LDL colesterolul contribuie la formarea placilor
arterosclerotice in interiorul arterelor inimii si este strins legat de bolile de inima coronare si
de mortalitatea raportata. Chiar si in cazul unui colesterol total ce se incadreaza in intervalul
de valori normale, cresterile concentratiei de LDL colesterol indica un risc crescut.
HDL colesterolul are un efect protector, impiedica formarea plachetelor si indica o
relatie inversa cu extinderea bolilor cardiace coronare. De fapt, valorile mici de LDL
colesterol constitue un factor de risc independent. Determinarea nivelului individual de
colesterol total este util la determinarea screening-ului propus (testare in masa a populatiei
avand ca scop depistarea persoanelor bolnave sau predispuse la o boala), in timp ce
stabilirea factorului de risc necesita determinarea in plus a HDL- colesterolului si a LDL
colesterolului. In ultimii ani controlul clinic sever incearca utilizarea dietei, schimbarea stilului
de viata sau utilizarea de medicamente.
5.2.5.
Determinarea GLUCOZEI DIN SER - GLU

Glucoza reactioneaza cu oxigenul in prezenta de glucoz oxidaza rezultand acid gluconic si
apa oxigenata care reactioneaza cu fenolul si 4 aminoantipirina in prezenta de peroxidaza,
rezultand o chinona de culoare rosie.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 17/35
Glucoza + O2
Glucoz oxidaza
Acid Gluconic + H2O2
peroxidaza
2 H2O2 + Fenol + 4 Aminoantipirina
Chinona rosie + 4 H 2O
Intensitatea culorii chinonei este direct proportionala cu cantitatea de glucoza din ser si
prezinta absorbtie maxima in vizibil la 505 nm (492 550 nm).
Valorile de referinta sunt de 70 105 mg glucoza /dl ser.
Valorile glicemiei pot fi modificate fals ca urmare a administrarii de medicamente
(corticosteroizi, estrogeni, fenitoina, tiazide, propranolol, vitamina A), alcool.
Acid ascorbic pana la 15 mg/dl;
Bilirubina pana la 40 mg/dl;
Hemoglobina pana la 200 mg/dl;
Lipemie (trigliceride) pana la 2000 mg/dl.
5.2.5.4. Reactivi
Monoreactiv:
tampon fosfat, de concentratie 0,5 mol/L, cu pH = 7,5;
fenol, de concentratie 7,5 mmol/L;
4 aminoantipirina, de concentratie 0,4 mmol/L;
glucoz oxidaza, de activitate enzimatica de 12000 U/L;
peroxidaza, de activitate enzimatica de 660 U/L;
standard de glucoza, de concentratie 100 mg/dl.

Conform 5.2.1.5.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 18/35

5.2.5.6.1. Modul de lucru utilizand analizorul automat A15
Analizorul pipeteaza reactiv glucoza cu ser nehemolizat, intr-una din cuvele de reactie
ale analizorului. Dupa un timp de incubare de 5 minute, se citeste DO, la 505 nm, fata de
blancul de reactiv.
Concentratia minima de glucoza detectata este de 2 mg/dl.
Reactivul este liniar pana la 450 mg/dl. In cazul in care concentratia de glucoza
Rezultatele sunt editate automat de analizor intr-un exemplar (Buletin de Analiza
intermediar) si sunt obtinute ca urmare a aplicarii formulei:
GLU = n x DO proba / DO standard (mg/dl)
in care:
GLU concentratia de glucoza exprimata in mg glucoza /dl ser;
Determinarea concentratiei de glucoza in ser sau in plasma este de regula utilizata in
diagnosticarea si monitorizarea tratamentului in diabetul zaharat. Alte aplicatii au fost
detectate in hipoglicemia neonatala. Valori crescute se intalnesc in:
diabetul zaharat, inclusiv hemocromatoza, sindromul Cushing (cu diabet insulino rezistent), acromegalia si gigantismul (cu diabet insulino rezistent in stadiile
precocesi hipopituitarism ulterior);
cresterea adrenalinei circulante: injectarea de adrenalina, feocromocitom, stres
(emotii, arsuri, soc, anestezie);
pancreatita acuta;
pancreatita cronica (la unii pacienti);
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 19/35
encefalopatia Wernicke (deficit de vitamina B);

ca efect al unor medicamente (corticosteroizi, estrogeni, alcool, fenitoina, tiazide,
propranolol, vitamina A hipervitaminoza cronica).
5.2.6.
Determinarea TRIGLICERIDELOR SERICE - TG

Trigliceridele serice sunt degradate enzimatic (sub actiunea lipoprotein lipazei) la
glicerol si acizi grasi. Glicerolul se transforma in glicerol 3 fosfat (sub actiunea
glicerolkinazei), care este oxidat la dihidroxiacetona fosfat si apa oxigenata. Apa oxigenata
reactioneaza cu 4 amino antipirina (reactie catalizata de peroxidaza), rezultand o chinona
de culoare rosie si apa.
Intensitatea culorii chinonei este direct proportionala cu cantitatea de trigliceride din ser
si prezinta absorbtie maxima in vizibil la 505 nm.
LPL
Trigliceride
Glicerol + acid gras
GK
Glicerol + ATP
Glicerol 3 fosfat + O2
Glicerol 3 fosfat + ADP

GPO
Dihidroxiaceton fosfat + H2O2
POD
2 H2O2 + Aminoantipirina + 4 clorofenol
Chinona rosie + HCl + 4 H2O
Valorile de referinta sunt cuprinse intre:

40 - 145 mg trigliceride serice totale /dl pentru femei;
60 - 165 mg trigliceride serice totale /dl.
bilirubina pana la 40 mg/dl;
acid ascorbic pana la 6 mg/dl;
5.2.6.4. Reactivi
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 20/35
Monoreactiv:
tampon, de concentratie 50 mmol/L, cu pH = 7,8
4 clorofenol, de concentratie 2 mmol/l;
4 Aminopirina, de concentratie 0,7 mmol/l;
ATP, de concentratie 0,3 mmol/l;
Mg2+, de concentratie 40 mmol/l;
Na-cholat de concentratie 0,20 mmol/l
Hexacianoferat (II) de potasiu de concentratie 1 umol/l
Enzime:
lipoprotein lipaza (LPL), de activitate enzimatica de 150000 U/L;
glicerol kinaza (GK), cu activitate enzimatica de 800 U/L;
glicero 3 fosfat oxidaza (GPO), cu activitate enzimatica de 4000 U/L;
peroxidaza (POD), cu activitate enzimatica de 440 U/L;
standard de concentratie 200 mg/dl.
Conform 5.2.1.5.
Analizorul pipeteaza reactiv trigliceride si ser nehemolizat, intr-una din cuvele de reactie.
Dupa un timp de incubare de 5 minute la 37 0C, analizorul citeste DO la 505 nm, fata de
blancul de reactiv.
Concentratia minima de trigliceride detectata este de 4 mg/dl
Reactivul este liniar pana la 1000 mg/dl. In cazul in care concentratia de trigliceride
formulei:
TG = n x DO proba / DO standard (mg/dl)
in care:
TG concentratia de trigliceride serice exprimata in mg trigliceride serice /dl ser;
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 21/35

Trigliceridele sunt esteri ai glicerolului cu trei acizi grasi. Trigliceridele sunt transportate
in plasma de apolipoproteine formand lipoproteinele cu densitate foarte mica (VLDL) si
chilomicronii. Determinarea trigliceridelor este utilizata in screeningul lipidelor, pentru
detectarea riscului aterosclerotic si in monitorizarea scaderii valorilor (masuratorilor) in cazul
lipidelor.
Studii recente arata ca cresterile concentratiilor de trigliceride, combinate cu cresterile
concentratiilor de lipoproteine cu densitate mica (LDL) constitue in special un risc mare
pentru bolile coronariene ale inimii (CHD). Nivelele mari de trigliceride produc, deasemenea
variate boli ale ficatului, rinichilor si pancreasului.
5.2.7.
Determinarea ACIDULUI URIC AU; UA

Acidul uric seric este oxidat (sub actiunea uricazei) la alantoina si apa oxigenata. Apa
oxigenata reactioneaza, sub actiunea catalizatorului de peroxidaza, cu 4 aminoantipirina si
cu 2-4-diclor-fenol-sulfonat (DCPS), rezultand o chinona - complex colorat in rosu si apa.
Intensitatea culorii chinonei este direct proportionala cu cantitatea de acid uric din ser si
prezinta absorbtie maxima in vizibil la 546 nm (500 550 nm).
uricaza
Acid uric + H2O + O2
Alantoina + CO2 + H2O2
POD
DCPS + 4 Aminopirina + 2 H2O2
Chinona rosie + 3 H2O
Vlalurile de referinta sunt cuprinse intre:

Varsta
Femei
Adulti
Barbati
UM
6,6 8,8
1 30 zile
4,2 6,2
4,1 6,3
1 6 luni
4,4 6,6
4,7 6,7
6 luni 1 an
5,6 7,9
5,5 7,0
1 18 ani
5,7 8,0
5,7 8,0
mg/dl
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 22/35

lipemie (trigliceride) pana la 2000 mg/dl
5.2.7.4. Reactivi
Reactivul 1:
tampon fosfat, de concentratie 50 mmol/l, pH = 7,4
2-4-diclor-fenol-sulfonat (DCPS), de concentratie 4 mmol/l
Reactivul 2:
tampon fosfat, de concentratie 100 mmol/l, pH = 7,0
4 Aminopirina, de concentratie 1 mmol/l
uricaza, de activitate enzimatica de 60 U/L
peroxidaza (POD), de activitate enzimatica de 660 U/L
Reactivul de lucru:
se prepara prin amestecarea a o parte R1 cu o parte R2.
Conform 5.2.1.5.
Analizorul pipeteaza reactiv de lucru cu ser nehemolizat, intr-una din cuvele de reactie
ale analizorului. Dupa un timp de incubare de 5 minute la 37 0C, se citeste DO la 546 nm (500
550 nm), fata de blancul de reactiv.
Concentratia minima de acid uric detectata este de 0.2 mg/dl.
Reactivul este liniar pana la 25 mg/dl. In cazul in care concentratia de acid uric
depaseste aceasta limita, se repeta testul cu proba diluata cu solutie de clorura de sodiu (9
g/l) in proportie de 1/1, iar rezultatul se inmulteste cu 2.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 23/35

formulei:
AU = n x DO proba / DO standard
(mg/dl)
in care:
AU concentratia de acid uric exprimata in mg acid uric /dl ser;
Pentru asigurarea calitatii rezultatelor se procedeaza conform PT-5.6, respectiv se
Acidul uric si sarurile sunt produsi finali ai metabolismului purinelor. In guta, cea mai
comuna (intalnita) complicatie a hiperuricemiei, cresterea nivelului de acid uric seric, conduce
la formarea de cristale de urat de monosodiu in jurul incheieturilor (articulatiilor). De regula
cauzele cresterii nivelului de acid uric in sange sunt bolile renale cu diminuarea excretiei
produsilor reziduali, inanitie, abuzul de droguri si cresterea consumului de alcool la fel de
bine ca si utilizarea anumitor medicament. Nivelul mare de acid uric constituie, de asemenea,
un indirect factor de risc pentru bolile coronariene ale inimii. Hipouricemia este rar observata
si asociata cu rarele boli metabolice ereditare.
5.2.8.
Determinarea FIERULUI SERIC SIDEREMIE Fe; Iron

La pH = 4,8, fierul feric (Fe 3+) este eliberat dintr-un complex transferinic. Acidul
ascorbic reduce Fe3+ la Fe2+, care, cuplat cu ferozina, duce la formarea unui complex colorat.
Intensitatea culorii este direct proportionala cu cantitatea de fier trivalent din ser si
prezinta absorbtie maxima in vizibil la 600 nm.
Acid ascorbic, tampon
3+
Transferina (Fe )2
2 Fe2+ + Transferina
Fe2+ + 3 Ferene
Ferene feroasa (complex albastru)
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 24/35
Valorile de referinta ale fierului seric (g/dl) sunt:

Adulti
50 168
Copii
2 saptamani
6 luni
12 luni
2ani 12 ani
63 201
28 135
35 155
22 135
Femei
25 ani
37 165
40 ani
23 134
60 ani
39 149
Femei gravide (sapt. 12 de gestatie)
42 177

Nu se utilizeaza ser hemolizat sau lactescent pentru determinarea fierului seric.
Nu s-au observat interferente la:
hemoglobina pana la 100 mg/dl;
lipemie (trigliceride) pana la 2000 mg/dl;
cupru pana la 200 g/dl;
zinc pana la 400 g/dl.
5.2.8.4. Reactivi
Reactivul 1:
Tampon acetat, de concentratie 90 mmol/L, cu pH = 4,5;
Tiouree, de concentratie 800 mmol/l;
Reactivul 2:
Acid ascorbic, de concentratie 45 mmol/l;
Ferene, de concentratie 06 mmol/l;
Tiouree, de concentratie 20 mmol/l;
Standard:
concentratie 100 g/dl.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 25/35

Conform 5.2.1.5.
Analizorul pipeteaza reactiv R1, reactiv R2 cu ser nehemolizat, intr-una din cuvele de
reactie ale analizorului. Dupa un timp de 5 minute la 37 0C, se citeste DO la 570 nm, fata de
blancul reactivului.
Concentratia minima de fier detectata este de 5 g/dl.
Reactivul este liniar pana la 1000 g/dl. In cazul in care concentratia de fier depaseste
aceasta limita, se repeta testul cu proba diluata cu solutie de clorura de sodiu (9 g/l) in
proportie de 1/1, iar rezultatul se inmulteste cu 2
Fe3+ = DOproba / DO std/cal X n
(g/dl)
in care:
Fe3+ concentratia de fier trivalent exprimata in g fier trivalent /dl ser;
DO proba - densitatea optica a probei inainte de adaugarea ferozinei;
DO standard - densitatea optica a standardului / solutiei etalon inainte de adaugarea ferozinei;
DO finala proba - densitatea optica a probei dupa adaugarea ferozinei;
Pentru asigurarea calitatii rezultatelor se procedeaza conform PG-5.3., respectiv se
Determinarea concentratiei de fier seric (sideremia) este utilizata in diagnosticul
diferential al anemiilor, diagnosticul hemocromatozei si hemosiderozei, evaluarea deficitului
de fier, diagnosticul intoxicatiei acute cu fier.
Nivelul crescut al fierului seric se intalneste in:
hemocromatoza idiopatica,
hemosideroza prin aport excesiv de fier (transfuzii sanguine repetate,
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 26/35
terapie cu fier,
utilizare de preparate polivitaminice ce contin fier) poate atinge > 300 g/dl,
productie scazuta de eritrocite (talasemie anemie prin deficit de piridoxina),
distributie eritrocitara crescuta (anemii hemolitice),
leziuni hepatice acute (gradul cresterii este paralele cu gradul necroziei hepatice)
poate atinge > 1000 g/dl,

utilizarea anticonceptionalelor pe baza de progesteron poate atinge >200 g/dl
sarcina.
Valori scazute ale concentratiei de fier seric se intalnesc in:
anemie feripiva,
anemii normocrome (normo - sau microcitare) din infectii si boli cronice (neoplasme,
colagenoze active),
sindrom nefrotic (datorita pierderii urinare a proteinei de egare a fierului), menstruatie
(scade cu 10 30%).
Variatii diurne:
valori normale la mijlocul diminetii,
valori scazute la mijlocul dupa amiezii,
valori foarte scazute (cca 10 g/dl) la miezul noptii.
Variatia diurna dispare la valori ale fierului seric mai mici de 45 g/dl.
5.2.9.
Determinarea HDL Colesterol (fractiunea grea)

In prezenta sulfatului de magneziu, sulfat dextranul formeaza selectiv complexe
hidrosolubile cu LDL,VLDL si cu chilomicronii care sunt rezistenti la enzime modificate cu
PEG (polietilenglicol).
Adaugand R2 (enzime modificate cu PEG/4-amino-antipirine/buffer) au loc reactiile
urmatoare:
Concentratia de HDL-colesterol este determinata enzimatic de colesterol esteraza si
colesterol oxidaza cuplate cu PEG la gruparea aminoacizi
PEG colesterol esteraze
Esteri de HDL-colesterol + H2O
HDL colesterol +RCOOH
Esterii de colesterol sunt scindati cantitativ in colesterol liber si acizi grasi de colesterol
esteraze
PEG colesterol oxidaze
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 27/35
4 colestenon H2O2
HDL colesterol + O2
In prezenta oxigenului, colesterolul este oxidat de colesterol oxidaza pana la si peroxid

de hidrogen
peroxidaza
2H2O2 + 4 amino-antipyrine + HSDA + H + H2O
+ 5 H2O
+
compus albastru deschis
In prezenta peroxidazei ,peroxidul de hidrogen genereaza reactii cu 4-amino-antipirina

si HSDA cu formarea unui compus albastru deschis.Intensitatea culorii este direct
proportionala cu concentratia colesterolului si este masurat fotometric
Valorile de referinta ale HDL-colesterolului sunt prezentate mai jos:
SEX
BARBATI
FEMEI
UM RISC SCAZUT
mg/dl
> 55
mg/dl
> 65
RISC MODERAT
35-55
45-65
RISC CRESCUT
< 35
< 45
Prelevare/recoltare si conservare/pregatire probe

5.2.9.2.
Nu se utilizeaza ser hemolizat sau lactescent pentru determinarea HDL colesterol.
5.2.9.4. Reactivi
Reactivul 1:
HEPES buffer 10.07mmol/l
CHES 96.95 mmol/l pH=7.4;CHES=4-(2-hidroxietil)-1-etanesulfonic acid
dextran sulfate 1.5g/l
HSDA=4-(2-hidroxietil)-1-piperazine-etansulfonic acid
ascorbat oxidaza
perioxidaza
Reactivul 2:
HEPES buffer 10.07mmol/l
PEG-colesterol esteraza
PEG-colesterol oxidaza
peroxidaza
4-amino-antipirine;
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 28/35

Conform 5.2.1.5.
Analizorul automat pipeteaza reactiv R1, reactiv R2 HDL-colesterol si ser iar dupa
incubare citeste DO la 600nm fata de blancul de reactivi.
Concentratia minima de HDL colesterol detectata este de 3 mg/dl.
Reactivul pentru HDL colesterol este liniar pana la 275 mg/dl. In cazul in care
concentratia de HDL - colesterol depaseste aceasta limita, este necesara o dilutie a probei,
repetarea analizei, iar rezultatul se inmulteste cu factorul de dilutie.
Rezultatele sunt editate automat de semianalizor intr-un exemplar (Buletin de Analiza
intermediar) si sunt obtinute ca urmare a aplicarii urmatoarei formule:
HDL colesterol = n x DO proba / DO standard
(mg /dl)
in care:
HDL colesterol concentratia de HDL colesterol exprimata in mg HDL colesterol / dl ser;
n- concentratia standardului / solutiei etalon, pentru HDL Colesterol;
DO standard - densitatea optica a standardului / solutiei etalon;

Determinarea cantitativa a fractiunilor colesterolului serveste la evaluarea riscului de
cardiopatie coronariana si la clasificarea hiperlipidemiilor.
HDL colesterolul poate prezenta variatii la acelasi individ de cca 3,6 12,4%.
Nivelul crescut de HDL colesterol (peste 60 mg/dl) reprezinta un factor de risc mai mic
pentru cardiopatia coronariana. Valori crescute ale HDL colesterolului se intalnesc in: efort
intens, consumul moderat de alcool, tratament cu insulina, utilizare de estrogeni pe cale
orala.
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 29/35
Valori scazute ale HDL colesterolului se intalnesc in: stres si boala recenta (interventii
cgirurgicale, traumatisme), inanitie, obezitate, lipsa antrenamentului fizic, fumat, diabet
zaharat, hipo-, si hipertiroidism, boli hepatice acute si cronice, nefroza, uremie,
hipertrigliceridemia familiala, etc.
III. ANALIZE BIOCHIMICE PRIN METODA / FOTOMETRICA TWO POINT (PUNCT
FINAL) BICROMATIC
5.2.10. Determinarea CREATININEI SERICE
5.2.10.1.
Principiul metodei si domeniu de aplicare
Creatinina formeaza un complex colorat cu picratul alcalin, a carui intensitate de culoare
se citeste la un interval de 60 sec si apoi la 2 min.
Diferenta dintre intensitatea culorii la cele 2 intervale de timp este direct proportionala cu
concentratia creatininei din ser si prezinta absorbtie maxima in vizibil la 415 nm.
Valorile de referinta sunt cuprinse intre 0,6 1,3 mg creatinina/dl ser.
5.2.10.2.
5.2.10.3.
Interferente
Creatinina poate avea valori fals scazute determinate de cresterea marcata a bilirubinei
serice, sau valori fals crescute datorate formarii de complexe in ser (cu ascorbatul, acidul
uric). Nu se utilizeaza ser hemolizat pentru determinarea creatininei serice.
5.2.10.4.
Reactivi
Reactivul 1 :
Hidroxid de sodiu, de concentratie 400 mmol/l
Fosfat disodic, de concentratie 25 mmol/l;
Reactivul 2 :
Acid picric, de concentratie 35 mmol/l
Standard:
concentratie 2 mg/dl
Reactiv de lucru:
se combina un volum de Reactiv 1 cu un volum reactiv Reactiv 2.
5.2.10.5.
Echipamente de masurare si materiale
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 30/35
Conform 5.2.1.5.
5.2.10.6.
Mod de lucru
5.2.10.6.1.Modul de lucru utilizand A15
Analizorul pipeteaza reactiv de lucru cu ser nehemolizat intr-una din cuvele de reactie
ale analizorului. Dupa un timp de incubare de 1 minut la 37 0C se citeste DO1 la 570 nm, iar
dupa exact 2 minute dupa prima citire se citeste DO 2 la aceeasi lungime de unda 505 nm.
Concentratia minima de creatinina detectata este de 0.2 mg/dl.
Reactivul este liniar pana la 25mg/dl. In cazul in care concentratia de creatinina
depaseste aceasta limita, se repeta testul cu proba diluata cu solutie de clorura de sodiu (9
g/l) in proportie de 1/1 iar rezultatul se inmulteste cu 2.
5.2.10.6.4. Trasarea curbei de calibrare
Saptamanal sau de cate ori este nevoie (cand valorile serului de control nu se
incadreaza in limitele de masurare date de producator), folosind SCC, se face calibrarea
analizorului si se verifica cu SCN/SCP.
Daca rezultatele indicate pentru SCN / SCP se situeaza in intervalele indicate de
certificatul SCN/SCP, inseamna ca analizorul este corect calibrat.
Exprimarea rezultatelor si a incertitudinii
5.2.10.7.
CREATININA SERICA = n x DO proba / DO standard
(mg/dl)
in care:
CREATININA SERICA - concentratia de creatinina serica exprimata in mg creatinina /dl ser;
DO proba diferenta dintre densitatea optica a probei DO proba 1 dupa 60 sec si densitatea
optica a probei - DOproba 2 dupa 2 min;
DO standard - diferenta dintre densitatea optica a standardului / solutiei etalon - DO standard 1
dupa 60 sec si densitatea optica a standardului/solutiei etalon - DO standard 2 dupa 2 min
Pentru asigurarea calitatii rezultatelor se procedeaza conform PT-5.6, respectiv se foloseste,
cu frecventa zilnica, ser de control normal si patologic
5.2.10.8.
Opinii si interpretari
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 31/35
Determinarea concentratiei de creatinina este utilizata in diagnosticul de insuficienta

renala. Creatinina serica este un indicator mai specific si mai sensibil al functiei renale decat
ureea.
Determinarea simultana a ureei si a creatininei ofera mai multe informatii in situatiile
enumerate mai jos. Valori crescute ale creatininei se intalnesc in: ingestia de creatinina
(carne prajita), afectiuni musculare (gigantism, acromegalie), azotemia prerenala, azotemia
postrenala. Valori scazute ale creatininei se intalnesc in sarcina.
5.2.11. Determinarea UREEI SERICE
5.2.11.1.
Principiul metodei si domeniu de aplicare
Ureea este hidrolizata (sub actiunea ureazei) la amoniac si dioxid de carbon. Ionii de
amoniu reactioneaza cu 2 oxoglutarat, in prezenta unei dehidrogenaze, rezultand L
glutamate.
Diferenta dintre intensitatea culorii intr-un interval de timp cuprins intre 30 90 sec este
direct proportionala cu concentratia ureei serice si / sau urinare si prezinta absorbtie maxima
in vizibil la 340 nm.
ureaza
Ureea + 2 H2O
2 Oxoglutarat + NH4+ + NADH
2 NH4+ + 2 HCO3
GLDH
L Glutamat + NAD+ + H2O
Valorile de referinta sunt cuprinse intre 15 50 mg uree/dl ser.

5.2.11.2.
5.2.11.3.
Interferente
Nu se utilizeaza ser hemolizat, lactescent sau icteric pentru determinarea ureei serice.
De asemenea, administrarea de cloramfenicol, streptomicina, acid ascorbic, metyldopa poate
duce la valori modificate ale ureei.
Nu s-au observat interferente la:
acid ascorbic pana la 30 mg/dl;
hemoglobina pana la 500 mg/dl;
lipidemie (trigliceride) pana la 2000 mg/dl.
5.2.11.4.
Reactivi
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 32/35
Reactivul 1 :
Tampon TRIS de concentratie 80 mmol/L, cu pH = 7,8;
2 Oxoglutarat, de concentratie 6 mmol/L;
Reactivul 2 :
NADH, de concentratie 0,25 mmol/l
ureaza, de activitate enzimatica de 3750 U/L;
Glutamat dehidrogenaza (GLDH), de activitate enzimatica de 6000 U/L
Reactiv de lucru:
se combina 1 volum de Reactiv 1 cu 1 volum de Reactiv 2.
5.2.11.5.
Conform 5.2.1.5.
Echipamente de masurare si materiale
5.2.11.6.
Mod de lucru
Analizorul pipeteaza reactiv de lucru cu ser nehemolizat intr-una din cuvele de reactie.
Dupa un timp de incubare de 1 minut la 37 0C, analizorul citeste DO1 la 700 nm, iar la exact
1minut, analizorul citeste DO2 la aceeasi lungime de unda 340 nm.
Concentratia minima de uree detectata este de 5 mg/dl.
Reactivul este liniar pana la 400 mg/dl. In cazul in care concentratia de uree depaseste
aceasta limita, se repeta testul cu proba diluata cu solutie de clorura de sodiu (9 g/l) in
proportie de 1/2 iar rezultatul se inmulteste cu 3.
5.2.11.6.4. Trasarea curbei de calibrare

Saptamanal sau de cate ori este nevoie (cand valorile serului de control nu se
incadreaza in limitele de masurare date de producator), folosind SCC, se face calibrarea
analizorului si se verifica cu SCN / SCP.
Daca rezultatele indicate pentru SCN / SCP se situeaza in intervalele indicate de
certificatul SCN /SCP, inseamna ca analizorul este corect calibrat.
5.2.11.7.
Exprimarea rezultatelor si a incertitudinii
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 33/35
UREE SERICA = n x DO proba / DO standard
(mg/dl sau g/24 h)
in care:
UREE SERICA - concentratia de uree serica sexprimata in mg uree /dl ser
b diferenta dintre densitatea optica a probei DO proba 1 dupa 60 sec si densitatea optica a
probei - DOproba 2 dupa 60 sec;
DO standard - diferenta dintre densitatea optica a standardului / solutiei etalon - DO standard 1
dupa 60 sec si densitatea optica a standardului / solutiei etalon - DO standard 2 dupa 60 sec.
Pentru asigurarea calitatii rezultatelor se procedeaza conform PT-5.6., respectiv se foloseste,
cu frecventa zilnica, ser de control normal si patologic.
5.2.11.8.
Opinii si interpretari
Determinarea concentratiei de uree serica serveste in diagnosticul insuficientei renale.
O valoare scazuta a ureei de 6 8 mg/dl, se asociaza frecvent cu o stare de hiperhidratare.
Un nivel de 10 20 mg/dl indica aproape intotdeauna o functie glomerulara normala. O
crestere a ureei sanguine la 50 150 mg/dl presupune o afectare semnificativa a functiei
renale. O valoare marcata a ureei de 150 250 mg/dl este un semn concludent de afectare
severa a functiei glomerulare.
In insuficienta renala cronica, valorile ureei sanguine se coreleaza mai bine cu
simtomele de uremie decat cele ale creatininei serice.
Valori crescute ale ureei serice se mai intalnesc in: azotemia prerenala, insuficienta
cardiaca congestiva, hemoragie digestiva, infarct miocardic acut, stres, etc.
Valori scazute ale ureei serice se intalnesc in: cresterea diurezei, afectiuni hepatice
severe (insuficienta hepatica), acromegalie, malnutritie, ultima parte a sarcinii, perioada de
sugar, malbsorbtie, sindrom nefrotic,etc.
5.3. Proceduri de control a calitatii
5.3.1. Control de calitate primar: coroborarea rezultatelor, repetarea unei probe.
Repetarea analizelor se poate realiza:
folosind aceeasi metoda
de catre aceeasi operatori sau operatori diferiti;
Dupa repetarea analizelor, rezultatele se transmit automat in calculator, pastrandu-se
rezultatele initiale pentru a putea fi analizate si comparate.
Daca se constata ca analiza este neconforma atunci se procedeaza conform procedurii
PG-15
Coroborarea rezultatelor este o metoda foarte importanta de asigurare a calitatii
rezultatelor si fiecare responsabil de analiza/seful de laborator o vor folosi in practica zilnica
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 34/35
5.3.2. Control de calitate secundar consta in:

controlul de calitate cu materiale de referinta specifice - ser de control normal si
patologic
interpretarea diagramelor de control
estimarea incertitudinii de masurare
validarea metodelor.
5.3.3. Control
de calitate tertiar: participare la compararile interlaboratoare.

Analiza acestor participari se face intocmindu-se Procese Verbale de analiza a
intercompararilor si daca e cazul se deschid fise de neconformitate pentru rezultatele in afara
limitelor.
6. RESPONSABILITATI
6.1. Sef Laborator
Asigura instruirea personalului executant privind prezenta procedura
Desemneaza personalul care efectueaza acest tip de analize si care estimeaza
incertitudinea pentru metodele cantitative si indica in fisa postului;
Controleaza rezultatele etalonarii si ale masurarilor zilnice de asigurare a
calitatii rezultatelor analizei automate si da acceptul inceperii analizelor curente,
dupa caz;
Verifica corelarea rezultatelor indicate de analizor cand practic are loc validarea
rezultatului;
Decide oprirea analizelor in cazul identificarii Nc, inclusiv in cazul unor conditii
de mediu necorespunzatoare si reluarea analizelor dupa stingerea Nc.
Efectueaza interpretarea rezultatelor
Verifica si valideaza rezultatele
Decide modul de asigurare a calitatii rezultatelor, frecventa, desemneaza
executantii si verifica rezultatele;
Instruieste personalul executant privind normele PM si PSI.
Verifica efectuarea corecta a inregistrarilor efectuate in registrele de lucru.
6.2. Responsabilul de analiza
Isi insusesc prezenta procedura, IL si le respecta intocmai;

Configureaza parametrii si programeaza controlul intern
Verifica parametrii analizelor/testelor;
Defineste interferentele/incompatibilitatile intre teste numai daca intervin
modificari
Foloseste numai probe proaspat centrifugate respectiv ser nehemolizat;
Pastreaza reactivii nediluati la frigider, conform instructiunilor producatorului si ii
foloseste numai pana la data de valabilitate indicata de producator;
SC. MIRAMED SRL

PS - 06
Editia: 01/01.09.2014
Pag. 35/35
Verifica/efectueaza trasarea curbei de etalonare/calibrarea saptamanal si

pastreaza inregistrarile
Estimeaza incertitudinea pentru metodele cantitative;
Executa analiza biochimica;
Controleaza calitatea rezultatelor conform folosind ser de control normal si/sau
patologic si pastreaza inregistrarile;
Redacteaza si valideaza electronic Buletinul de analize medicale;
Transmite la SL Buletinul de analiza pentru verificare si validare/semnare;
Informeaza SL asupra problemelor ivite pentru analiza biochimica si initiaza
RNC daca SL decide.
6.3. Cadrele medii
Isi insusesc prezenta procedura, IL si le respecta intocmai;

Pregatesc cele necesare efectuarii analizei biochimice;
Asigura o cantitate suficienta de proba;
Depoziteaza infectele corespunzator in vederea predarii pentru incinerare;
6.4. Personalul Receptie Pacienti/Receptie Probe
Centralizeaza rezultatele;
Transmite la SL Buletinul de analiza pentru verificare si validare/semnare;
Elibereaza rezultate
7.
INREGISTRARI
7.1 Foaie de lucru pacienti- FL-4.4-05

PS 06 Biochimie Serica

Caricato da

Informazioni sul documento

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

PS 06 Biochimie Serica

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

SC.

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

EDITIA: 01/ 01.09.2014

Avertisment: Documentul de fata este proprietatea SC MIRAMED SRL, Laborator de

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

ACID URIC (UA)

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

Biochimie I. F. Dumitru, Ed. Didactica si pedagogica, 1980

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

5.1.2. Protectia echipamentelor de masurare si aparatelor

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

calibratorii material de referinta de calibrare sunt amplasate, de asemenea, pe

se configureaza parametrii si modul de lucru numai daca intervin modificari;

se definesc interferentele/incompatibilitatile intre teste numai daca intervin

I. ANALIZE BIOCHIMICE PRIN METODA CINETICA

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

5.2.1.5. Echipamente de masurare si materiale

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

5.2.2.5. Echipamente de masurare si materiale

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

5.2.2.6. Mod de lucru

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

B. ANALIZE BIOCHIMICE PRIN METODA / FOTOMETRIA END POINT (PUNCT

Determinarea BILIRUBINEI TOTALE BIL T

5.2.3.1. Principiul metodei si domeniu de aplicare

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

Se prepara de 50 parti reactiv R1 si o parte reactiv R2

SC. MIRAMED SRL

DETERMINARI BIOCHIMICE DIN SER

Laborator de analize medicale

Bilirubina este un produs scindat al hemoglobinei. Libera, neconjugata, bilirubina este

Determinarea COLESTEROLULUI SERIC TOTAL - CHOL

5.2.4.1. Principiul metodei si domeniu de aplicare

Colesterol 3 ona + H2O2

2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + Fenol

5.2.4.2. Prelevare/recoltare si conservare/pregatire probe