inoizircserP

ilareneG
isilanA id
idoteM
IL MINISTRO

irotinetnoC
/ ilairetaM
Visto l'art. 124 del Testo Unico delle Leggi sanitarie approvato con Regio decreto 27 luglio 1934, n. 1265,

ivittaeR
modificato dalla legge 7 novembre 1942, n. 1528.
Visto il regolamento per il servizio farmaceutico, approvato con Regio decreto 30 settembre 1938, n. 1706;
Vista la legge 9 novembre 1961, n. 1242, relativa alla revisione e pubblicazione della Farmacopea Ufficiale;

itnemogrA
ilareneG
Vista la legge 22 ottobre 1973, n. 752, relativa alla ratifica ed esecuzione della Convenzione europea per
la elaborazione di una Farmacopea Europea, adottata a Strasburgo il 22 luglio 1964;
Vista la legge 23 dicembre 1978, n. 833, sulla istituzione del Servizio sanitario nazionale;

eifargonoM

ilareneG
Visto il decreto legislativo 30 giugno 1993, n. 266, recante il riordinamento del Ministero della Sanita© , a
norma dell'art. 1, comma 1, lettera h), della legge 23 ottobre 1992. n. 421;
Visto l'art. 6, comma 2-bis, del decreto legislativo 12 giugno 2001, n. 217, convertito, con modificazioni, dalla
legge 3 agosto 2001, n. 317, concernente, fra l'altro, l'istituzione del Ministero della Salute;

ehcituecamraF
emroF
Visto l'art. 115 del decreto legislativo 31 marzo 1998, n. 112, recante conferimento di funzioni e compiti
amministrativi dello Stato alle Regioni ed agli Enti locali, in attuazione del capo I della legge 15 marzo 1997, n. 59;
Visto il decreto ministeriale 9 ottobre 1998 (del quale e© stato dato avviso nella Gazzetta Ufficiale n. 1 del
2 gennaio 1999), con il quale e© stato approvato il testo della X edizione della Farmacopea Ufficiale della Repub-

eiretaM
blica italiana;

emirP
Visti i decreti ministeriali 21 dicembre 1988, 17 aprile 1991 e 29 agosto 1996, pubblicati, rispettivamente, nelle
Gazzette Ufficiali n. 12 del 16 gennaio 1989, n. 152 del 1‘ luglio 1991 e n. 270 del 18 novembre 1996, con i quali
sono stati approvati il testo e gli aggiornamenti del Formulario Nazionale della Farmacopea Ufficiale della
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Repubblica italiana;
Vista la Farmacopea Europea, IV edizione, aggiornata ed integrata in base alle risoluzioni del Comitato
di sanita© pubblica del Consiglio d'Europa (accordo parziale), adottata a seguito delle decisioni prese dalla
Commissione europea di Farmacopea in applicazione delle disposizioni dell'art. 6 della Convenzione europea
ehcitapoemO
inoizaraperP

predetta;
Sentita la Commissione permanente per la revisione e la pubblicazione della Farmacopea Ufficiale, prevista
dalla citata legge 9 novembre 1961, n. 1242;
Ritenuto di dover procedere all'approvazione del testo della nuova edizione della Farmacopea Ufficiale
della Repubblica italiana, predisposto dalla predetta Commissione anche sulla base delle decisioni adottate dalla
ecidnI

Commissione europea di farmacopea;

V
 Decreta:

Art. 1.
Eé approvato il testo della XI Edizione della Farmacopea Ufficiale della Repubblica italiana.
Esso sostituisce, a tutti gli effetti, quello della X edizione e del Formulario Nazionale.

Art. 2.
La XI Edizione della Farmacopea Ufficiale sara© pubblicata dall'lstituto Poligrafico e Zecca dello Stato ed
entrera© in vigore a partire dal novantesimo giorno successivo alla pubblicazione, nella Gazzetta Ufficiale della
Repubblica italiana, del comunicato relativo alla emanazione del presente decreto, fatto salvo per le ûNorme di
Buona Preparazione dei Medicinali in Farmaciaý che entreranno in vigore dal 1‘ gennaio 2003.

Roma, 2 maggio 2002

Il Ministro
Girolamo Sirchia

VI
 inoizircserP

ilareneG
CONTENUTO

I. PREFAZIONE IX

isilanA id
idoteM
II. INTRODUZIONE XI
III. INTRODUZIONE ALLA IV EDIZIONE DELLA FARMACOPEA EUROPEA XIII
IV. COMMISSIONE PERMANENTE PER LA REVISIONE E LA PUBBLICAZIONE DELLA
FARMACOPEA UFFICIALE XIX

irotinetnoC
/ ilairetaM
V. COMMISSIONE EUROPEA DELLA FARMACOPEA XXI
VI. CONTENUTO DELLA XI EDIZIONE XXIX
CAPITOLI GENERALI
1. Prescrizioni generali 3

ivittaeR
1. Prescrizioni generali della Farmacopea Europea 3
1. FU1 Prescrizioni generali della Farmacopea Ufficiale 16
2. Metodi di analisi 19
2.1. Apparecchiature 23

itnemogrA
ilareneG
2.2. Metodi generali fisici e fisico-chimici 29
2.3. Identificazione 107
2.4. Saggi limite 117
2.5. Saggi 143

eifargonoM

ilareneG
2.6. Saggi biologici 165
2.7. Dosaggi biologici 215
2.8. Metodi generali di farmacognosia 245

ehcituecamraF
2.9. Saggi e procedimenti tecnologici 257

emroF
3. Materiali usati nella fabbricazione di contenitori e Contenitori 305
3.1. Materiali usati nella fabbricazione di contenitori 309
3.2. Contenitori 357
4. Reattivi 377
eiretaM

emirP
5. Argomenti generali 525
MONOGRAFIE
Monografie generali 611
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Forme farmaceutiche 651

Materie prime 703
Preparazioni farmaceutiche specifiche 795
ehcitapoemO

Preparazioni omeopatiche 1087

inoizaraperP

TABELLE 1093
NORME DI BUONA PREPARAZIONE DEI MEDICINALI IN FARMACIA 1157
Decreto di recepimento della 4’ edizione della Farmacopea Europea 1169
Decreto di recepimento del supplemento 4.1 alla 4’ edizione della Farmacopea Europea 1217
ecidnI

INDICE 1223

VII
 inoizircserP

ilareneG
I. PREFAZIONE

isilanA id
idoteM
Recentemente due cultori della materia, ricordando il detto ``le farmacopee sono lo specchio dei loro tempi'', hanno sot-

irotinetnoC
/ ilairetaM
tolineato che l'evoluzione della Farmacopea Ufficiale della Repubblica Italiana e© avvenuta, sin dalla pubblicazione
della VII edizione (1965), nel rispetto di tale criterio. Senza dubbio possiamo affermare che anche il contenuto dei testi
ora pubblicati ben si adegua ai tempi presenti. La realta© europea e© infatti riflessa dai testi della 4’ edizione della Far-
macopea Europea recepita nelle sue due lingue ufficiali. La realta© nazionale, caratterizzata dallo sviluppo dei generici
e da una risorgente attivita© preparatoria in farmacia, trova riscontro nel contenuto della XI edizione della FU che com-

ivittaeR
prende ora anche la maggior parte dei testi del Formulario Nazionale le cui specifiche sono rimaste, tranne qualche
eccezione, quelle pubblicate nel 1980.
L'attuale formato di un considerevole numero di monografie di preparazioni farmaceutiche specifiche permette
al farmacista l'adattamento delle preparazioni stesse alle esigenze di ogni singolo paziente; e© oggi questa l'attivita©

itnemogrA
ilareneG
``officinale'' essenziale gia© diffusa in molti Paesi dell'UE specie in base alla disponibilita© in farmacia di una vasta
gamma di medicinali tradizionali preparati industrialmente.
Una situazione che contrasta con il criterio della ``farmacopea specchio dei tempi'' e© quella legata al fatto che norme
legislative degli anni trenta ancora in vigore nel nostro Paese impongono la presenza nella FU di testi il cui contenuto

eifargonoM

ilareneG
dovrebbe oggi trovare spazio in altri siti, tra l'altro, piu© adeguati per un loro aggiornamento in tempo reale; mi riferisco,
ad esempio, alla Tabella 7. Tutte le tabelle sono state comunque revisionate in attesa di un pronto intervento da parte
del legislatore che potra© definire una loro nuova collocazione.

ehcituecamraF
Voglio ringraziare tutti i membri della Commissione permanente per la revisione e pubblicazione della Farmacopea
Ufficiale e gli esperti che con il loro generoso impegno hanno reso possibile la pubblicazione di questa XI edizione

emroF
della FU.
Il Presidente della Commissione
Prof. Enrico Garaci
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI

IX
 Introduzione

inoizircserP

ilareneG
II. INTRODUZIONE

isilanA id
idoteM
Con la XI edizione della Farmacopea Ufficiale e© stato Sono stati soppressi alcuni testi obsoleti e quei testi
apportato un ulteriore contributo a quel processo di relativi a preparazioni farmaceutiche specifiche i cui
principi attivi non sono descritti in una farmacopea del-

irotinetnoC
adeguamento della Farmacopea italiana all'Europa,

/ ilairetaM
processo iniziato nel 1998 con la pubblicazione della l'Unione europea.
X edizione. La Farmacopea Ufficiale della Repubblica La XI edizione della FU rimane cos|© strumento di sup-
Italiana risulta cos|© costituita dai testi di cui alla pre- porto al SSN sia in relazione al processo di autorizza-
sente XI edizione nonchë dai testi della 4’ edizione della zione all'immissione in commercio dei generici che per
Farmacopea Europea e successivi supplementi, recepiti quanto riguarda l'attivita© preparatoria delle farmacie
ospedaliere e private.

ivittaeR
direttamente in lingua inglese e francese . *
La decisione di recepire i testi europei nelle lingue uffi- L'adeguamento ormai prossimo della gestione delle
ciali del Consiglio d'Europa si e© rivelata una scelta piu© farmacie alle procedure di un Sistema di Assicura-
che appropriata; basta infatti considerare che zione di Qualita© come fattore evolutivo importante,
e© stato uno dei motivi che ha stimolato la Commis-
^ la pubblicazione dei supplementi alla 4’ edizione

itnemogrA
sione alla revisione, nella stessa ottica, delle Norme

ilareneG
della Farmacopea Europea avra© un ritmo quadri- di Buona Preparazione dei Medicinali in Farmacia.
mestrale; Le nuove norme, nella assunzione che in farmacia
^ i testi europei non possono essere adeguati ad non debbano essere preparati i medicinali che sono
alcun contesto nazionale. reperibili in commercio, costituiscono per il farmaci-
sta un decalogo a garanzia della qualita© delle sue

eifargonoM
La inclusione, nella XI edizione della FU, dei testi che

ilareneG
costituivano gran parte del Formulario Nazionale ``formule'' officinali e magistrali.
rende ancora testimonianza della tradizione farmaceu- Ad ulteriore ma parziale supporto per il farmacista
tica nazionale. La suddivisione di tali testi nelle parti che nella esecuzione della sua attivita© preparatoria
A, B e C e© stata eliminata; i titoli delle singole mono- deve disporre dei pertinenti testi (monografie di

ehcituecamraF
grafie sono stati adeguati alle direttive comunitarie che materie prime, monografie generali, ecc.) di Farma-
impongono l'uso dei cos|© detti ``termini standard'' euro- copea, inclusi quelli europei recepiti in lingua inglese

emroF
pei. Cio© ha permesso anche di raggruppare in un unico e francese, la Commissione, considerando la non
testo monografie singole, relative a categorie diverse di obbligatorieta© di detenzione in farmacia della 4’ edi-
una data forma farmaceutica, contenenti lo stesso prin- zione della Farmacopea Europea, ha ritenuto oppor-
cipio attivo; cos|© ad esempio le due monografie presenti tuno inserire nella XI edizione della FU anche un
nel Formulario Nazionale con i titoli ``Lidocaina clori- certo numero di testi europei prevalentemente di
eiretaM

emirP
drato, crema'' e ``Lidocaina cloridrato, unguento'' sono carattere generale tradotti in lingua italiana; tra que-
ora raggruppate in un'unica monografia dal titolo sti figurano anche le monografie generali relative al
``Lidocaina preparazione semisolida per applicazione capitolo ``Omeopatia''.
cutanea''. Eé continuata anche la revisione e l'aggiornamento delle
ehcituecamraF

Tabelle. Per quanto riguarda la tabella 8 si e© deciso in

inoizaraperP

ehcificepS

Il contenuto dei testi e© stato in generale adattato solo relazione all'art. 34 del R.D. 1706/38, di riportare per i
formalmente alle esigenze attuali. Sara© doveroso, a nuovi inserimenti di principi attivi presenti nella
tempi brevi, promuovere una armonizzazione, tra le Farmacopea Europea solo le dosi massime per l'adulto,
farmacopee nazionali dei Paesi dell'Unione Europea, dosi oltre le quali il farmacista, ``salvo il caso di dichia-
delle specifiche di quei testi presenti in piu© di una delle razione del medico'' non puo© procedere alla spedizione
ehcitapoemO
inoizaraperP

citate farmacopee nazionali; e© infatti da tener presente della prescrizione magistrale; per tali principi attivi
che le norme di ogni farmacopea nazionale costitui- non compaiono piu© le dosi abituali. Resta invece inva-
scono nell'UE norme sovranazionali. riato quanto era riportato nella X ed. della FU. Il titolo
öööö della tabella 8 ``Dosi abituali e massime per l'adulto'' e©
* L'obbligo della detenzione in farmacia e© relativo alla sola XI edi- stato
dulto,
pertanto cambiato in ``Dosi dei medicinali per l'a-
oltre le quali il farmacista non puo© fare la spedi-
zione della FU; sono infatti esclusi da tale obbligo i testi in lingua
ecidnI

inglese o francese che costituiscono la 4’ edizione della Farmacopea zione, salvo il caso di dichiarazione speciale del
Europea. medico''.

XI
Introduzione

Nel caso di principi attivi non presenti nella Tabella 8 il Il testo ``Avvertenze. Droghe vegetali: disposizioni
farmacista dovrebbe fare riferimento al ``dosaggio mas- generali'' non e© piu© formalmente presente. Infatti il
simo'' indicato per il medicinale registrato che lo con- suo contenuto e© stato suddiviso includendolo in
tiene alla concentrazione piu© elevata. parte nelle ``Norme di Buona Preparazione dei Medi-
La tabella 7 e© stata aggiornata e per quanto possibile cinali in Farmacia'' ed in parte nelle Prescrizioni
revisionata. Bisogna infatti considerare che questa Generali della FU. Eé anche opportuno sottolineare
tabella, derivando da singoli Decreti Legislativi, non che alcuni concetti generali presenti in tale testo sono
puo© che indicare le sostanze con i termini usati dai stati ripresi nella monografia generale europea ``Dro-
decreti stessi ai quali si fa riferimento. ghe vegetali''.

XII
 inoizircserP

ilareneG
III. INTRODUZIONE ALLA IV EDIZIONE

DELLA FARMACOPEA EUROPEA

isilanA id
idoteM
La Farmacopea Europea viene preparata sotto gli (c) predisporre la preparazione delle monografie da
includere nella Farmacopea Europea ed adottarle;
auspici del Consiglio d'Europa, a seguito della applica-

irotinetnoC
/ ilairetaM
zione della Convenzione sulla elaborazione di una Far- (d) raccomandare la definizione dei limiti di tempo
macopea Europea (Serie dei Trattati Europei n. 50) entro i quali le sue decisioni di carattere tecnico,
come emendata dal Protocollo alla Convenzione (Serie relative alla Farmacopea Europea, dovranno
dei Trattati Europei n. 134) firmato dai Governi del- essere applicate nei territori delle Parti Con-
l'Austria, del Belgio, della Bosnia Erzegovina, di Cipro, traenti.''
della Croazia, della Danimarca, della Finlandia, della In accordo con i termini della Convenzione, le Parti

ivittaeR
Francia, della Germania, della Grecia, dell'Irlanda, Contraenti si impegnano ad adottare le necessarie
dell'Islanda, dell'Italia, del Lussemburgo, della Norve- misure per assicurare che le monografie della Farmaco-
gia, dei Paesi Bassi, del Portogallo, del Regno Unito di pea Europea diventino norme ufficiali applicabili nei
Gran Bretagna e dell'Irlanda del Nord, della Repub- loro rispettivi territori.

itnemogrA
ilareneG
blica Ceca, della ``ex Repubblica Iugoslava di Macedo-
nia'', della Repubblica Slovacca, della Slovenia, della OBIETTIVO DELLA FARMACOPEA EUROPEA

Spagna, della Svezia, della Svizzera, della Turchia, del-

l'Ungheria e dalla Comunita© Europea. L'obiettivo della Farmacopea Europea e© la promozione
della salute pubblica mediante la messa a punto di

eifargonoM
La Commissione di Farmacopea Europea (``la Commis- norme comuni riconosciute e che devono essere utiliz-

ilareneG
sione''), che ha la responsabilita© della preparazione zate dal personale sanitario e da chi coinvolto con la
della Farmacopea, e© costituita conformemente alle qualita© dei medicinali. Tali norme o specifiche debbono
disposizioni dell'articolo 5 della sopra menzionata essere appropriate a costituire la garanzia in materia
Convenzione. E' composta dalle delegazioni nominate di sicurezza d'uso dei medicinali per i pazienti e consu-

ehcituecamraF
dalle Parti Contraenti. Ogni delegazione e© formata da matori. La loro esistenza:

emroF
non piu© di tre membri scelti per la loro competenza ^ facilita la libera circolazione dei prodotti medici-
negli argomenti trattati dalla Commissione. nali in Europa;
Sono ammessi alle Sessioni della Commissione, in ^ assicura la qualita© dei prodotti medicinali esportati
accordo con le Regole di Procedura, osservatori prove- dall'Europa.

eiretaM

emirP
nienti da Stati non-Membri della Convenzione e da Le monografie e gli altri testi della Farmacopea Euro-
organizzazioni internazionali. pea vengono elaborati in modo da essere adatti alle esi-
genze:
Le funzioni della Commissione definite dall'articolo 6 ^ delle autorita© regolatorie;
ehcituecamraF

della Convenzione emendata dal Protocollo sono:

inoizaraperP

ehcificepS

^ di chi e© coinvolto nel controllo della qualita© ;

^ dei produttori delle materie prime e dei prodotti
Articolo 6 medicinali.
La Farmacopea Europea e© largamente usata a livello
ehcitapoemO
inoizaraperP

``Con il vincolo di quanto disposto dall'articolo 4 della internazionale ed e© intenzione della Commissione lavo-
presente Convenzione, le funzioni della Commissione rare sempre piu© a contatto con gli utilizzatori della Far-
saranno: macopea per poter meglio soddisfare alle loro esigenze
e facilitare la loro collaborazione. A tal fine saranno
(a) determinare i principi generali applicabili alla ela- messe in atto procedure piu© idonee per ottenere infor-
borazione della Farmacopea Europea; mazioni concernenti la priorita© di elaborazione di
ecidnI

nuove monografie ed il modo di migliorare la qualita©

(b) stabilire i relativi metodi di analisi; della Farmacopea.

XIII
III. Introduzione alla IV edizione della farmacopea europea

SEGRETARIATO TECNICO E LABORATORIO trata in vigore della Quarta Edizione questa situazione
DELLA FARMACOPEA cambiera© e le monografie generali si applicheranno a
La Commissione della Farmacopea Europea ha un tutte le sostanze e preparazioni che rientrano nello
Segretariato Tecnico, situato a Strasburgo, con scopo della sezione Definizione della monografia gene-
personale scientifico ed amministrativo. Il Laboratorio rale tranne quando un preambolo ne limiti l'applica-
della Farmacopea Europea, parte integrante del zione, per esempio, alle sole sostanze e preparazioni
Segretariato, ha, tra gli altri impegni, la responsabilita© che sono l'oggetto di una monografia di Farmacopea.
della definizione e verifica di tutte le sostanze di riferi- Durante il corso della Terza Edizione sono state intro-
mento necessarie per le monografie della Farmacopea. dotte un certo numero di nuove monografie generali;
Il Segretariato Tecnico e© una divisione amministrativa la Quarta Edizione contiene, inter alia, una nuova
del Direttorato Europeo per la Qualita© dei Medicinali monografia generale Sostanze per uso farmaceutico
(EDQM) del Consiglio d'Europa. (2034) le cui disposizioni influenzano molte monogra-
fie relative a singole sostanze attive e ad eccipienti.
PRINCIPI GENERALI Nelle edizioni precedenti, riferimenti a monografie
generali pertinenti erano inclusi in singole monografie,
Le regole generali per l'interpretazione dei testi della per esempio quelle sui sierimmuni, preparazioni radio-
Farmacopea sono riportate nelle Prescrizioni Generali. farmaceutiche e vaccini. Questi riferimenti non erano
Devono essere tenute presenti anche le seguenti infor- completamente sistematici e la continuazione di tale
mazioni. procedura, con l'aumento del numero di monografie
I principi generali che si applicano per l'elaborazione generali, avrebbe richiesto, sistematicamente, un ecces-
delle monografie della Farmacopea Europea sono defi- sivo uso di riferimenti incrociati. Inoltre, poichë l'appli-
niti in guide tecniche. La Guida tecnica per l'elabora- cazione di alcune monografie generali dipende dal pro-
zione delle monografie, che si riferisce essenzialmente a cesso di produzione la cui completa conoscenza non e©
monografie di sostanze chimiche, e© disponibile come necessariamente disponibile alla Commissione, i riferi-
numero speciale di Pharmeuropa (vedi sotto, alla voce menti incrociati potrebbero essere verosimilmente
Pubblicazioni). Sono in preparazione altre guide tecni- incompleti. Alla luce di queste considerazioni la Com-
che che tratteranno specifici aspetti connessi con mono- missione ha deciso di eliminare praticamente tutti i rife-
grafie relative ad altri gruppi di prodotti. I principi rimenti incrociati, tranne nei casi in cui e© necessario
applicati vengono rivisti periodicamente senza pero© chiarire l'applicazione di una monografia generale. Per
una loro completa applicazione retrospettiva tal chë aiutare gli utenti ad identificare le monografie generali
monografie gia© pubblicate possono non seguire le da applicare, nella parte interna della copertina della
ultime raccomandazioni. Quarta Edizione e dei suoi Supplementi e© stampata
Le procedure per i saggi e le determinazioni quantita- una lista delle monografie generali; nella versione elet-
tive pubblicate nelle singole monografie sono state con- tronica e© invece usato un segnale di avviso. E' pertanto
validate secondo la pratica in atto al tempo della loro essenziale che gli utenti si familiarizzino con questa
elaborazione e per lo scopo per il quale erano state pro- lista e con le monografie pertinenti prima di usare le
poste. monografie delle singole sostanze o preparazioni.
E' noto che i capitoli generali vengono utilizzati anche La monografia sui Prodotti aventi il rischio di trasmet-
al di fuori delle monografie della Farmacopea; in tali tere gli agenti delle encefalopatie spongiformi animali
circostanze e© raccomandato agli utilizzatori di consul- (1483) presenta una particolare difficolta© per la sua
tare la Guida Tecnica che riporta informazioni detta- applicazione. Nella Terza Edizione un certo numero di
gliate sull'applicazione di molti metodi generali. monografie pertinenti aveva un riferimento alla mono-
grafia generale ma questi riferimenti non erano com-
. pleti në e© facile identificare tutte le sostanze interessate
Monografie generali
senza una piena conoscenza del loro metodo di prepa-
La Farmacopea contiene un certo numero di monogra- razione o di sintesi. Inoltre la monografia generale si
fie generali relative a classi di sostanze, preparazioni o applica anche alle sostanze che vengono usate durante
tipi di forme farmaceutiche. Nella Terza Edizione lo la produzione e per le quali non e© disponibile una
scopo di molte monografie generali era limitato a monografia. I precedenti riferimenti sono stati pertanto
quelle sostanze e preparazioni per le quali era presente eliminati e, per aiutare gli utenti ad identificare le
nella Farmacopea una specifica monografia. Con l'en- sostanze che potenzialmente rientrano nello scopo

XIV
 III. Introduzione alla IV edizione della farmacopea europea

inoizircserP
della monografia generale, e© stata compilata una lista intorno ad una rotazione pari a zero, poteva non essere

ilareneG
di sostanze che possono essere o sono pertinenti; questa sufficientemente discriminante a causa della bassa rota-
lista e© pubblicata, per informazione, su Pharmeuropa zione ottica specifica degli enantiomeri, la Commis-
ed e© anche reperibile nel sito web dell'EDQM; si sottoli- sione ha cambiato atteggiamento. Un saggio per il
nea il fatto che la lista non e© esaustiva e che pertanto carattere racemico, basato sulla rotazione ottica, viene

isilanA id
rimane all'utente la responsabilita© di accertare se una ora incluso solo quando la conoscenza del valore nume-

idoteM
data sostanza, anche se non inclusa nella lista, ricade rico della rotazione ottica specifica degli enantiomeri
nello scopo della monografia generale. indica che tale saggio e© discriminante in termini di
. In accordo con la Convenzione Europea purezza enantiomerica. Qualora altre tecniche, come
Uso di animali

sulla protezione degli animali usati per scopi sperimentali ad esempio il dicroismo circolare, possono servire allo

irotinetnoC
/ ilairetaM
o scientifici (1986), la Commissione si e© impegnata a scopo, esse saranno prescritte in sostituzione della rota-
ridurre nei saggi di farmacopea l'uso di animali, zione ottica.
quando possibile; incoraggia inoltre quelli che sono Polimorfismo . Quando una sostanza puo© dar luogo al
coinvolti con il suo lavoro a cercare procedure alterna- poliformismo, cio© e© normalmente riportato nella
tive. Un metodo alternativo o modificato viene adot- sezione Caratteri. In generale, le monografie non speci-

ivittaeR
tato dalla Commissione solo quando e© stato chiara- ficano una forma cristallina particolare; eccezional-
mente dimostrato che esso permette un adeguato con- mente, in poche monografie, viene specificata la forma
trollo per i fini della farmacopea. cristallina richiesta, per esempio, mediante una identifi-
. Con la pubblicazione della Quarta Edizione e© cazione per spettrofotometria di assorbimento nell'in-
Idrati
frarosso nella quale viene detto che lo spettro deve

itnemogrA
stato cambiato il modo di definire i titoli delle mono-

ilareneG
grafie per le forme idrate. Per tutte le monografie pub- essere registrato con la sostanza in fase solida senza
blicate per la prima volta nella Quarta Edizione, il ricristallizzazione e che la sostanza chimica di riferi-
grado di idratazione, se del caso, verra© indicato nel mento fornita e© della forma cristallina richiesta. Tutta-
titolo della monografia. Nelle precedenti edizioni il via, per le sostanze che non facciano parte di questi casi
eccezionali, puo© essere necessario, per la loro utilizza-

eifargonoM
grado di idratazione veniva indicato solo nei casi di esi-

ilareneG
stenza di piu© forme. Se per una data sostanza viene zione in certe forme farmaceutiche, che il fabbricante
pubblicata una monografia per la forma anidra ed una utilizzi una forma cristallina particolare. L'indicazione
per la forma idrata, il termine ``anidro'' verra© incluso riportata nella sezione Caratteri ha per obiettivo quello
nel titolo della forma corrispondente. Per evitare ai di segnalare agli utilizzatori la necessita© di valutare

ehcituecamraF
produttori un non necessario lavoro di etichettatura o questo aspetto durante lo sviluppo di una forma farma-

emroF
similare, la citata procedura non verra© applicata retro- ceutica. Dovra© essere consultata anche la monografia
spettivamente alle monografie gia© pubblicate a meno sulle Sostanze per uso farmaceutico (2034).
di ragioni connesse a misure di salute pubblica, ovvero Specificita© dei dosaggi . Nella elaborazione delle mono-
a motivi di sicurezza, come nel caso di una sostanza grafie sulle sostanze chimiche, l'approccio general-
contenente una grande quantita© di acqua. mente preferito dalla Commissione e© quello di control-
eiretaM

emirP
. Le monografie sulle sostanze chirali lare le impurezze mediante una sezione Saggi accurata-
Sostanze chirali

che descrivono un particolare enantiomero contengono mente definita piu© che con un metodo di dosaggio
un saggio, per confermare la purezza enantiomerica, specifico per il principio attivo. E' percio© l'insieme delle
specifiche di una monografia che permette di garantire
ehcituecamraF

basato, generalmente, sulla misurazione della rotazione

inoizaraperP

ehcificepS

ottica. Le monografie che descrivono i racemi sono, al che il prodotto e© di qualita© adeguata.
riguardo, eterogenee in quanto, durante la Terza Edi- Impurezze . Molte monografie, particolarmente quelle
zione, ci sono stati cambiamenti nella gestione dell'ar- pubblicate recentemente, hanno in appendice una lista
gomento. Le vecchie monografie, infatti, non sempre di impurezze, note o potenziali, che sono tenute sotto
ehcitapoemO
inoizaraperP

hanno un saggio per mostrare il carattere racemico controllo dai vari saggi. Le impurezze note (denomi-
anche se ora tale saggio e© generalmente riconosciuto nate anche come ``impurezze effettive'') sono quelle
come un parametro di qualita© necessario. Durante il che sono state trovate nei lotti della sostanza in que-
corso della Terza Edizione in tutte le monografie sui stione; le impurezze potenziali sono quelle che ci si
racemi e© stato incluso un saggio per il carattere race- aspetta di trovare sulla base del processo di fabbrica-
mico, basato sulla misurazione della rotazione ottica. zione, ma che di fatto non sono state osservate nei lotti
ecidnI

Quando pero© e© stato mostrato che in molti casi un sag- della sostanza durante l'elaborazione della monografia.
gio basato sulla rotazione ottica, anche con stretti limiti Questa lista e© destinata a facilitare l'uso della monogra-

XV
III. Introduzione alla IV edizione della farmacopea europea

fia specialmente durante il processo di autorizzazione nisce un quadro unificato per la normalizzazione dei
al commercio dei medicinali (vedi Impurities in new dispositivi medici. A seguito di un accordo tra le varie
drug substances, ``ICH tripartite note for guidance'', parti coinvolte, la Commissione ha deciso che le mono-
maggio 1995 e successive revisioni). Una serie di impu- grafie sui dispositivi medici saranno soppresse non
rezze potenziali per una sostanza ottenuta mediante appena le norme previste dalla direttiva verranno ela-
un dato processo di fabbricazione puo© essere confron- borate. Le specifiche incluse nella sezione sui conteni-
tata con l'elenco al fine di stabilire se la monografia tori saranno adattate o, in certi casi, soppresse in modo
permette un controllo sufficiente. E' intenzione della da tener conto delle future norme sviluppate nell'am-
Commissione includere tali elenchi, quando possibile, bito della direttiva. Le monografie sui fili di sutura
nelle nuove monografie e di aggiungerli nel processo di sono mantenute nella Farmacopea; esse sono state
revisione delle monografie esistenti. modificate per renderle conformi alle disposizioni della
Le impurezze non vengono fornite come sostanze di direttiva e debbono ora essere considerate come norme
riferimento, në possono essere fornite per scopi speri- del tipo previsto dalla direttiva stessa. Questo adatta-
mentali, tranne quando richiesto per l'applicazione mento delle monografie ha richiesto la soppressione di
della monografia; in questo caso, al nome dell'impu- alcune monografie di specifici tipi di suture in favore
rezza, segue l'acronimo SCR. di un approccio piu© generale.
. Una monografia generale
I requisiti relativi ai solventi residui
Preparazioni omopatiche
Solventi residui.
sulle preparazioni omeopatiche fu a suo tempo inserita
sono riportati nella monografia Sostanze per uso farma- nella Seconda Edizione della Farmacopea. Nella
ceutico (2034) e nei capitoli generali 2.4.24 Identifica- Quarta Edizione sono state incluse un certo numero di
zione e controllo dei solventi residui e 5.4 Solventi residui. monografie relative a sostanze utilizzate per le prepara-
Pertanto, tutte le sostanze attive e gli eccipienti sono zioni omeopatiche ed altre monografie sono in fase di
soggetti al relativo controllo dei solventi residui anche sviluppo. Tutti questi testi sono stati raggruppati in
quando nessun saggio e© specificato nella singola mono- una sezione separata. Quando la stessa sostanza viene
grafia. I requisiti riportati sono stati armonizzati con usata in preparazioni diverse, omeopatiche e non
la linea guida ICH su tale argomento. omeopatiche, si deve far riferimento alla monografia
. Quando necessario per l'appli- presente nella sezione principale, non omeopatica, della
farmacopea.
Materiali di riferimento

cazione di una monografia, i materiali di riferimento

vengono preparati e forniti agli utenti. Questi materiali . La descrizione, nella Farmacopea, di un arti-
di riferimento vengono scelti per la loro adeguatezza
Brevetti

colo soggetto a protezione brevettuale non conferisce

agli scopi definiti nella monografia e non sono necessa- në implica alcuna autorizzazione all'uso di tali brevetti
riamente adeguati per altri usi. Viene data ogni infor- da parte di persone diverse dai proprietari dei brevetti
mazione necessaria all'uso proposto; per esempio, viene in questione.
fornito un contenuto dichiarato e non un certificato di Le monografie riguardanti droghe
analisi in quanto quest'ultimo non e© rilevante per l'uso Specie protette.

vegetali possono far riferimento a materiale ottenuto

proposto. Ai materiali di riferimento non viene attri- da specie di piante protette. L'inclusione di queste
buita una data di scadenza; tali materiali sono sottopo- monografie non porta alcun pregiudizio alle disposi-
sti ad un periodico e regolare controllo per assicurare zioni derivanti da leggi nazionali ed internazionali sulla
la loro continua adeguatezza. Quando viene fornito un protezione di queste specie.
determinato valore per un certo parametro, per esem-
pio il contenuto chimico, non e© indicata l'incertezza
per il valore assegnato. I materiali di riferimento ven- PROCEDURA DI CERTIFICAZIONE

gono forniti per permettere all'analista di verificare la E' stata messa in atto una procedura per la certifica-
conformita© o la non conformita© con una monografia. zione della adeguatezza delle monografie della Farma-
Quando si valuta la conformita© non si deve tener conto copea per il controllo della purezza di un prodotto
dell'incertezza del valore assegnato in quanto tale incer- ottenuto mediante un dato processo [vedi Comitato
tezza e© gia© inclusa nei limiti prescritti. di Salute Pubblica (Accordo Parziale) Risoluzione
Dispositivi medici . Monografie relative ad articoli con- AP-CSP (99) 4 o ogni successiva revisione reperibile
siderati come dispositivi medici, sono state incluse in presso l'EDQM o sul suo sito web] a supporto dell'uso
tutte le edizioni della Farmacopea. Per gli Stati Membri delle monografie nelle richieste per l'autorizzazione
dell'Unione Europea e© in vigore una direttiva che defi- alla immissione in commercio di un medicinale.

XVI
 III. Introduzione alla IV edizione della farmacopea europea

inoizircserP
La procedura di certificazione e© stata recentemente mulata dalla Commissione. Questa data e© , di norma,

ilareneG
estesa per coprire il rischio da encefalopatia spongi- circa sei mesi dopo la pubblicazione. Quando una
forme trasmissibile (TSE). I certificati possono essere monografia deve entrare in vigore ad una data ante-
rilasciati per le monografie pubblicate. Informazioni riore a quella della successiva pubblicazione della Far-
dettagliate sul funzionamento di questa procedura macopea o di un suo supplemento, una Risoluzione

isilanA id
sono reperibili presso il Segretariato o sul sito web del Comitato di Sanita© Pubblica riporta l'intero testo

idoteM
EDQM (http://www.pheur.org). Una lista dei certifi- che deve entrare in vigore; tale testo viene anche pubbli-
cati concessi e© pubblicata su Pharmeuropa e sul sito cato, per informazione, su Pharmeuropa e sul sito web.
web EDQM.
Programma di revisione . Le monografie e gli altri testi

irotinetnoC
della Farmacopea vengono revisionati, quando neces-

/ ilairetaM
sario, mediante una decisione della Commissione.
PUBBLICAZIONI

La Farmacopea Europea e© disponibile, nella versione Le proposte di revisione sono pubblicate su Pharmeuropa.
inglese e francese, come volume con tre supplementi
annuali ed anche sotto forma di CD-ROM.
, il Foro della Farmacopea Europea, e©

ivittaeR
ARMONIZZAZIONE INTERNAZIONALE
Pharmeuropa

pubblicato quattro volte in un anno come supporto per La Farmacopea Europea e© coinvolta in un processo di
la elaborazione delle monografie e come mezzo di infor- armonizzazione con la Farmacopea Giapponese e la
mazione sulla Farmacopea e materie ad essa correlate. Farmacopea degli Stati Uniti mediante una struttura
E' disponibile, per abbonamento, presso l'EDQM. informale denominata Pharmacopoeial Discussion

itnemogrA
ilareneG
Sito Web . Le informazioni sulle attivita© e su molti altri Group (PDG). Le attivita© sono sviluppate in accordo
aspetti della Farmacopea Europea si trovano sul sito con quelle della Conferenza Internazionale sulla Armo-
web dell'EDQM (http://www.pheur.org). nizzazione (ICH). L'informazione sullo stato dei testi
Entrata in vigore . La data di entrata in vigore delle armonizzati viene data nel capitolo 5.8. I capitoli gene-

eifargonoM
monografie viene fissata da una risoluzione del Comi- rali armonizzati hanno un preambolo che indica l'inter-

ilareneG
tato di Sanita© Pubblica (Accordo Parziale) del Consi- cambiabilita© del testo con quello delle altre due farma-
glio d'Europa a seguito di una raccomandazione for- copee.

ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI

XVII
 inoizircserP

ilareneG
IV. COMMISSIONE PERMANENTE PER LA REVISIONE

E LA PUBBLICAZIONE DELLA FARMACOPEA UFFICIALE

isilanA id
(D.M. 12 giugno 1998, 6 giugno 2001 e 11 novembre 2001)

idoteM

irotinetnoC
/ ilairetaM
LA COMMISSIONE Segreteria Tecnica della Farmacopea Ufficiale:

(1998-2002)
Direttore: FARINA dr.ssa Anna
CAPPELLI dr.ssa Anna Maria, LANZI sig.ra Anna
Maria, MARSILI sig.ra Daniela, FUCILI sig.na Ema-
Presidente: GARACI prof. Enrico nuela (contrattista).

ivittaeR
Hanno collaborato con la Segreteria Tecnica gli esperti:
Presidente: BENAGIANO prof. Giuseppe (fino al BRINA dr.ssa Barbara, DONATI dr.ssa Enrica,
6.6.2001) TUCCI dott. Paolo.
Altri esperti ed associazioni che hanno collaborato per la

itnemogrA
Vice Presidente: CIGNITTI prof. Maurizio pubblicazione della XI Ed. della FU

ilareneG
Esperti:
Segretario: FARINA dr.ssa Anna BARCUCCI dott. Ettore, BELLENTANI dott. Lean-
dro, BERNABEI prof.ssa Maria Teresa, CANGIANO
Componenti:ALHAIQUE prof. Franco, dr.ssa Giovanna, DEGRASSI dott. Daminano, DE

eifargonoM

ilareneG
AVICO dott. Ustik, MARCHI dott. Giovanni, DE PASQUALE prof.ssa
BIGNARDI prof. Gaetano, Anna, DELBO' dr.ssa Marisa, DENTI dott. Massimo,
BINETTI dott. Luigi (fino all'11.11.2001), GATTINI dott. Arrigo, GENGA dott. Rodolfo, GER-
CASINI prof. Giovanni, MANI dott. Claudio, GIULIANI dott. Luigi, GUA-

ehcituecamraF
CICCONETTI dott. Pierandrea, LANO dr.ssa Caterina, LANZI dott. Mario, LAVAGGI
CIRANNI dr.ssa Elena, dr.ssa Maria Grazia, MINGHETTI prof.ssa Paola,

emroF
CONTI dr.ssa Gabriella (fino al 6.6.2001), MIRAGLIA dott. Vito, MONTANARI prof.ssa Luisa,
DE GIULI dott. Claudio, MONZALI dr.ssa Clara, MUSTAZZA dott. Carlo,
DEL BASSO dr.ssa Paola, NICOLETTI dr.ssa Loredana, ORLANDO dr.ssa
DEL FAVERO prof. Albano, Maria, OSMETTI dr.ssa Giuseppina, PEDRANI dott.
Massimo, PESENTI dr.ssa Massimilla, PETRICONI
eiretaM
DONATO dr.ssa Anna Maria (dal 6.6.2001),

emirP
dott. Sergio, PINI dott. Carlo, POZZI dott. Roberto,
GALLI dr.ssa Maria Cristina, REMONDINI dott. Roberto, SALVADORI prof. Piero,
GUARINO dott. Carmine (dall'11.11.2001), SCHREPFER dott. Rodolfo, SCUDERI dott. Gian-
LATORRE dott. Francesco, carlo, SERINO dott. Enrico, SUPPA dr.ssa Adriana,
ehcituecamraF

MACRIé prof. Agostino, TEDESCHI dott. Stefano, TOLLIS dr.ssa Maria, TOR-
inoizaraperP

ehcificepS

MARABELLI prof. Romano, TORELLA prof. Vincenzo, TOPPAN dott. Giuliano,

MARTINI dott. Nello, WIRZ dr.ssa Maria.
OREFICI dr.ssa Graziella, Associazioni:
QUAGLIA prof.ssa Maria Giovanna, Associazione dei produttori di materie prime per l'in-
ehcitapoemO
inoizaraperP

RICCIERI prof. Fulvio, dustria farmaceutica (ASCHIMFARMA Federchi-

RIGAMONTI prof. Sandro, mici); Associazione Farmaceutici dell'Industria (AFI);
SALIS dott. Carlo, Associazione Nazionale Industrie Farmaci Generici
SERRA prof. Gino, (ASSOGENERICI); Federazione degli Ordini dei Far-
SILVESTRINI prof. Bruno, macisti Italiani (FOFI); Federazione Nazionale Unita-
TADDEI dott. Giancarlo, ria dei Titolari di Farmacia Italiani (FEDERFARMA);
ecidnI

VETTORE prof. Luciano Societa© Italiana Farmacisti Preparatori (SIFAP);

VINCIERI prof. Franco Francesco. Societa© Italiana di Farmacia Ospedaliera (SIFO).

XIX
 inoizircserP

ilareneG
V. COMMISSIONE EUROPEA

isilanA id
idoteM
DELLA FARMACOPEA

irotinetnoC
COMPOSIZIONE DELLA COMMISSIONE, DEI SUOI GRUPPI DI ESPERTI

/ ilairetaM
E DEL SEGRETARIATO AL 28 FEBBRAIO 2001

Presidente: Derek H. CALAM Vice-presidenti: Henning G. KRISTENSEN

Alexandra TSOKA

ivittaeR
MEMBRI DELLA COMMISSIONE

itnemogrA
ilareneG
Austria Kristof LISZKA Germania S. EBEL
Ernst LUSZCZAK Dietrich KRUëGER
Andreas MAYRHOFER D. SCHNAëDELBACH
Belgio Luc ANGENOT Grecia Michael A. KOUPPARIS

eifargonoM

ilareneG
Jos HOOGMARTENS S. PHILIANOS
Paule JACQMAIN Alexandra TSOKA
Bosnia-Erzegovina A. MEHMEDAGIC Irlanda T.A. McGUINN

ehcituecamraF
Michael MORRIS
Joan O'RIORDAN

emroF
Cipro E. KKOLOS
Commissione Islanda G. BALDURSDOTTIR
Europea Maurice ROBERT I.J. PETERSEN

eiretaM
Italia Maurizio CIGNITTI

emirP
EMEA Steven FAIRCHILD Anna FARINA
Graziella OREFICI
Croazia Dragica BEGIC
I. STARESINIC-SERNHORST Lussemburgo
ehcituecamraF

Jacqueline GENOUX-HAMES
inoizaraperP

ehcificepS

L. STEFANINI ORESIC
Norvegia Gunhild BRUGAARD
Danimarca Kirsten BRÒNNUM-HANSEN Valborg HOLTEN
Per HELBOE Randi WINSNES
ehcitapoemO
inoizaraperP

Finlandia Kristiina JAëRVINEN Paesi Bassi Dries DE KASTE

Kaarina SINIVUO J.W. DORPEMA
Liisa TURAKKA Pieter H.VREE
Francia Jean-Paul FOURNIER Portogallo J.M. CORREIA NEVES
ecidnI

An LE SOUSA LOBO
Alain NICOLAS Rui MORGADO

XXI
V. Commissione Europea

Regno Unito John A. GOLDSMITH Svezia Marianne EK

R.C. HUTTON Ingvar SJOëHOLM
J. M. MIDGLEY S. Jorgen VESSMAN
Svizzera Heiner LUDWIG
Rep. Ceca Jiri PORTYCH Ulrich SALZMANN
M. TRAVNICKOVA Silvia WEBER BRUNNER
ûex-Rep. Iugoslava
Rep. Slovacca N. CHALABALA di Macedoniaý N. POPOSKI
Ruzena MARTINCOVA Angel SIMOV
J. SLANY
Turchia Orhan CANBOLAT
Slovenia Martina CVELBAR Enver IZGUë
E. TOMAZIN Ungheria Hilda KOëSZEGI-SZALAI
Jozsef J. LIPTAK
Spagna A. VARDULAKI

MEMBRI SUPPLENTI

Austria J. KURZ Lussemburgo M. BACKES-LIES

Josef TRENKER Jean-Louis ROBERT

Belgio Jacques DE BEER Paesi Bassi Ellen DE ROOIJ-LAMME

Luc DELATTRE Peter M.J.M. JONGEN
A.J. VLIETINCK Jan-Anton NORDER

Danimarca D. MANNION Regno Unito Aileen M.T. LEE

A.M. SÒRENSEN Marie L. RABOUHANS
Lene THOMSEN M. I. ROBERTSON

Finlandia N. SEVON Rep. Slovacca Daniel GRANCAI

Jan LUCANSKY
Ladislav SOVIK
Francia Thierry BOURQUIN
Hendrick Jan DE JONG Slovenia Barbara RAZINGER-MIHOVEC
Corinne SAINT-REQUIER

Germania Gerhard FRANZ Svezia Christina GRAFFNER

Rainer MOHR
M. SCHWANIG
Svizzera Eugen WACHBERGER
Italia Massimo DI MUZIO
Agostino MACRIé Ungheria Tamas L. PAAéL
Loredana NICOLETTI Ilona TOëROëK

XXII
 V. Commissione Europea

inoizircserP

ilareneG
LISTA DEGLI ESPERTI DESIGNATI DALLE AUTORITAè NAZIONALI

PER PARTECIPARE AL LAVORO DELLA FARMACOPEA EUROPEA

(GRUPPI DI ESPERTI O CONSULTAZIONE TRAMITE CORRISPONDENZA)

Susan AGERHOLM Charlotte BORENSZTEJN

isilanA id
idoteM
Jean-Marc AIACHE Ben BORSJE
Ferhan AKTAN Thierry BOURQUIN
Concepcion ALONSO Bernard BOUYSSIERE
Rolf Josef ALTERMATT-MUëLLER B. BRAKE

irotinetnoC
/ ilairetaM
H. ALTORFER Bernard BRANCQ
Denis AMIOT Harald BREIVIK
Hanspeter AMSTUTZ Per O. BREMER
Linda ANDERSON Einar BREVIK
Cyrille ANDRES T. BRINGHAMMAR

ivittaeR
Luc ANGENOT A.F. BRISTOW
Alejandro Fidel ANGULO Kirsten BRÒNNUM-HANSEN
Gunnar ANTONI Lukas BRUCKNER
Astrid ARBIN Ivan BUBEN

itnemogrA
ilareneG
Alfredo ARDIA Volker BUëHLER
Jean-Claude ARGOUD A. BULT
Wilfried ARZ G. BUNIVA
Nataliya Nikolaevna ASMOLOVA Malcolm BURGE

eifargonoM
Gudjon Atli AUDUNSSON Roger BURGENER

ilareneG
Teresa AZCONA LLANEZA Patrizia BUSI
Elizabeth Ann BAKER Derek H. CALAM
Kemal Husnu Can BASER Kandemir CANEFE

ehcituecamraF
Michel BAUER Salvador CANIGUERAL FOLCARA
D. BAYLOCQ-FERRIER J. CAPORAL

emroF
Alain BAYOL Gunnar CARLIN
Gerhard BECK Sergio CAROLI
Leandro BELLENTANI Eva CASTREN
L.R. BERKENBOSCH J.P. CAUDRON
eiretaM

emirP
A. BERTOCCHI Rosa M. CEPEDA CASARES
J. BERTRAM Vivienne CHRIST
S. BESSET Christian-Peter CHRISTIANSEN ehcituecamraF

P. BIANCHINI J.M. CIURANA I GAY

inoizaraperP

ehcificepS

P. BILLOT Giovanni COLLI

J.-P. BINDER Pierre-Albert COMPAGNON
Hanno BINDER Angel CONCHEIRO NINE
Anette BJERREGAARD Marina COTTA RAMUSINO
ehcitapoemO
inoizaraperP

W. BLACKSTOCK Philippe COURTIADE

M. BLANCO Edgard CRAENHALS
M. BLOCH Duncan CRAIG
Giovanni BOCCARDI Jacques CROMMEN
Jean-Luc BOISSONNAT Martina CVELBAR
Shirley BOLIS Jacques Christian DARBORD
ecidnI

Josë BONNARD R. DAS

XXIII
V. Commissione Europea

A.G. DAVIDSON Rainer FENDT

Alan L. DAVISON Ton FOëRCH
Jacques DE BEER L. FOSSE
Leo DE GALAN Isabelle FOURASTEè
Hendrick Jan DE JONG Jean-Paul FOURNIER
Dries DE KASTE Bruno FRANK
Carmen DE LA MORENA CRIADO Gerhard FRANZ
Anna DE PASQUALE Florence FUCHS
Renaud Kiesgen DE RICHTER Hans Hagen FUëLDNER
Ellen DE ROOIJ-LAMME I.G.S. FURMINGER
Luc DELATTRE Corrado GALEFFI
Reto DELLA CASA Margherita GALLIANO RASPINO
Paolo DELLAVEDOVA David GANDERTON
Angelo DELMIGLIO Andreas GARDI
Joseph DEMEESTER Jesus GARICANO AISA
Jan DEN HARTIGH Didier GARONNAT
DEQUATRE Andrea GAZZANIGA
Massimo DI MUZIO Nicole GIBELIN
Josë Carlos DIEZ-MASA Michel GIRARD
Roland DOBBELAER R. GLUëCK
Eè . DOELKER Chris T. GODDARD
Milada DOLEZALOVA John A. GOLDSMITH
Thomas DOLL Juan Francisco GOMEZ BEJERANO
Jeanne DONY-CROTTEUX Christina GRAFFNER
J.W. DORPEMA Marta GRANSTROëM
Maria Helena DOS ANJOS RODRIGUES AMARAL Norbert GREIDZIAK
A. DRAKE E. GRIFFITHS
H. DREISMANN Gerhard GROHMANN
Giovanni DUGO Kerstin GROëNINGSSON
S. EBEL Peter GRONSKI
A. ECKLE J.L. GROSSIORD
Kurt EGER Emanuel GUADAGNINO
Erling EHRIN Giuseppe GUALANDI
Marianne EK GUERIS
Mohamed EL HAJJI J.P. GUIMBARD
Jean-Pierre ETCHEGARAY Miche© le GUITTET
Òystein EVENSEN Sylvie GUYOMARD-DEVANLAY
B. EVERETT Klaus HABERER
Brigitte EVRARD Vëronique HAHN
Josë Luis FABREGAS Lilian HAMILTON
H.H. FAHRENKROG Margit HANDLOS
Charles J. FALLAIS M. HANOCQ
Albert FARRUGIA Steen Honorë HANSEN
Jocelyne FAVET P. HARGREAVES
Gemma L.M. FEENSTRA-BIELDERS Goetz HARNISCHFEGER
Peter FEIGENWINTER Vassiliki HARTOFYLAX
A .F. FELL H. HAëUSLER

XXIV
 V. Commissione Europea

inoizircserP
Karl Heinz HAUSMANN O. KRIECH

ilareneG
Ingrid HEGGER Henning G. KRISTENSEN
Per HELBOE Burt H. KROES
Irmtraud HELD M. KROON
Keith HELLIWELL A. KRSTULOVIC

isilanA id
idoteM
P. HENRYS Dietrich KRUëGER
Jaakko-Juhani HIMBERG Michael KRUëGER
H. HINDRIKS T. KRUSIUS
B. HINSCH Harry V. KUPPERS

irotinetnoC
/ ilairetaM
Patrick HOET Tapani KURONEN
Rikke HOFF-JÒRGENSEN Francesco LA TORRE
Per HOLMQVIST LAëAëKELAITOS
Valborg HOLTEN Marijke LAMBERT
Jos HOOGMARTENS Frans W. LANGKILDE

ivittaeR
Philippe HUBERT Mervi LANKINEN
Lars J. HUSAGER Christophe LAROCHE
Stefania ICART Annie LASSERRE
H. IGEL John LAVDIOTIS

itnemogrA
ilareneG
G. IRMSCHER Aileen M.T. LEE
Juan Pedro ITURRALDE PARDO Kenneth J. LEIPER
E. IZEBOUD P.N. LELIE
Enver IZGUë Ulla LENNMARKER

eifargonoM
Fatih IZGUë Herman H. LENSING

ilareneG
Kristiina JAëRVINEN Franck LEVEILLER
R. JEE J. LIMBERG
Jana JERABKOVA Gerd LINDGREN

ehcituecamraF
C. JERSCH Silvano LONARDI
Edgar JOHN Esperanza LOPEZ

emroF
Maxwell C.R. JOHNSON C. LORTEAU-SOURGEN
Peter M.J.M. JONGEN Heiner LUDWIG
Juan Ignacio JORQUERA M. MAFTOUH
Thomas W. JUNGI Antonio MANES
eiretaM

emirP
Bo KARLEN Warren C. MANN
Jan KARLSEN F. MAQUIN
T. KARTNIG B. MARIE
KAëSEBORN Ana Maria MARQUES GONCALVES
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Jean Michel KAUFMANN Ramon MARTINEZ PACHECO

Ernst KELLER D.L. MASSART
Lawrence KELLY J.H.A. MATHOêT
B. KHEMIS Andreas MAYRHOFER
ehcitapoemO
inoizaraperP

Maryle© ne KOBISCH B. MAZIERE

Gu« nter KOCH H.P. MERKLE
C.P.F. KONING K.H. MEYER
B. KOëPPEL Geerd J. MEYER
Franciscus Gerardus KORSE Jacques MICHAUD
Hilda KOëSZEGI-SZALAI John M. MIDGLEY
ecidnI

Katjusa KREFT Catherine MINTY

XXV
V. Commissione Europea

A.C. MOFFAT Massimo PEDRANI

M. MOLLER CHRISTENSEN Giuseppe PELLICIA
B. MONEGIER DU SORBIER Maurice PENSAERT
Luisa MONTANARI Michel PEè PIN
Vicente MONTEJO DE GARCINI J.M. PERSON
Patrick MONTENOISE P. PETRIN
Manfred MOOS L. PEYRON
J. MOREL S. PHILIANOS
Laurence MOUILLOT Geoffrey F. PHILLIPS
B.W. MUëLLER C. PICARD
Hartwig MUëLLER Roger D. PICKETT
Michael MUTZ Gu« lhan PILLI
Pascale NABET Hële© ne PLACE
A. NAGELL M. PLANCHON
Philip S. NEWLANDS Wolfgang POHLER
Ian David NEWTON Gilles PONCHEL
Robin A.J. NICHOLAS Stephen POOLE
Steven C. NICHOLS Poly POPOVA
Alain NICOLAS Esperanza PORQUERAS ALCUBILLA
Loredana NICOLETTI Gise© le PORTIER
M. NIEDER Juhani POSTI
Per NILSSON Roberto POZZI
Stephan NITSCHE PRILLEUX
J.M. NIVET Martin PUNZENGRUBER
J. NORWIG Ain RAAL
Ningur NOYANALPAN J. RABIANT
C.M. NUëBLING Marie L. RABOUHANS
Patrick J. O'CONNOR Alain RAGON
Joan O'RIORDAN Adriano RAMELLO
Edgar OHST Gerhard RAUCH
Bo OLSSON H.H.T. RAYMAKERS
Graziella OREFICI G. REBER
Maria ORLANDO Alessandro REGOLA
Hans Peter OTTIGER Franz REIGEL
M. OTTNAD Ascensao Maria RIBEIRO CAMPOS FARINHA
Carsten OVERBALLE-PETERSEN M. RICHTER
Gijs M. OVERVLIET Jean-Louis ROBERT
Kare ÒYDVIN J. ROBERTSON
J. OZOLINS Yves ROCHEè
Tamas L. PAAéL A. RODRIGUEZ
A. PADILLA Euge© ne ROETS
PAN XUE TIAN Gabriela ROHR
Geoff PARKIN Christopher G. ROLLS
Berit Smestad PAULSEN Vëronique ROSILIO
Jiri L. PAVEL Richard ROëSSLER
B. PEDERSEN Ales ROTAR
Poul Steen PEDERSEN Maria-Sol RUIZ

XXVI
 V. Commissione Europea

inoizircserP
Jordi RUIZ COMBALIA Robert SOUSSAIN

ilareneG
Michael SAENGER Ewald SPINGLER
Corinne SAINT-REQUIER Jurg STALDER
Piero A. SALVADORI Roland STERN
Anna Maria SALVATI VACCARI O. STICHER

isilanA id
idoteM
G. SAMES Riccardo STRADI
Eva SANDBERG Borut STRUKELJ
Antonio SANTORO Rainer SUCHI
Ivan SANTOS Janet SUKER

irotinetnoC
/ ilairetaM
Olivier SASLAWSKI Erika SUNDSTROëM
T.A.B. SAUNDERS Maryse SURGOT
Magali SAUTEL Karl Gustav SVENSSON
Gabriele SCHAëFFNER Lennart SVENSSON
J.J.C. SCHEFFER L.O. SVENSSON

ivittaeR
Jeannot SCHELCHER Pierre-Cyril TCHORELOFF
E. SCHLAëFLI Stefano TEDESCHI
Stephan SCHMIDT Michel THEVENIN
Anne-Christine SCHMIDT-MELBYE Robin C.THORPE

itnemogrA
ilareneG
D. SCHNAëDELBACH M. TIRU
M. SCHNEIDER Maria TOLLIS
Theres SCHNEIDER Ana Isabel TORRES-SUAREZ
Michel SCHOENTJES Josef TRENKER

eifargonoM
Urszula SCHOëNHAUSEN Liisa TURAKKA

ilareneG
Ju« rg SCHRANK Michael TUëRCK
D. SCHULZ Uros URLEB
Volker SCHULZE Luisa VALVO

ehcituecamraF
M. SCHWANIG Olga VAN BERKEL
Julie A. SEATON F.J. VAN DE VAART

emroF
Gerhard SEIPKE G. VAN DEDEM
Rainer SEITZ Willem G. VAN DER SLUIS
Giorgio SEKULES Heim VAN DER VELDE
Carlo SESSA Cees VAN DER VLIES
eiretaM

emirP
Hanfried SEYFARTH H.VAN DOORNE
Ekrem SEZIK Hans P.VAN EGMOND
Angel SIMOV Daniel VAN GYSEGEM
Kaarina SINIVUO J. VAN NOORDWIJK
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

L. SIRET Jos F.H.VAN ROMPAY

Carl Einar SJÒGREN Erick VANDAMME
Ingvar SJOëHOLM Philippe VANNIER
Wenche SKARE Mario VANNINI
ehcitapoemO
inoizaraperP

Graham G. SKELLERN Michel VEILLARD

Mikael SKOOG N. Murti VEMURI
Roland Joe SMITH Alfons VERBRUGGEN
R.M. SMITH S.VERLAINE
Terry SNAPE Christopher H.VERMAAT
A.M. SÒRENSEN Peep VESKI
ecidnI

Elli SOULI S. Jorgen VESSMAN

XXVII
V. Commissione Europea

Philippe VILLATTE Brigitte JACQUEL

Jean-Claude VINCENT-FALQUET Dankward JAëKEL
J.F. VIRET Andrea LODI
Eva VITKOVA Agne© s MATHIEU
A.J. VLIETINCK Isabelle MERCIER
Eugen WACHBERGER Catherine MILNE
M. WAGLER Ellen PEL
C. WASTIEL Guy RAUTMANN
Karin WATERKAMP Ulrich ROSE
Stephen WATERS Monica SORINAS-JIMENO
D.G. WATSON Sylvie THOLOMIER
Silvia WEBER BRUNNER
M. WEDA Pubblicazione:
Eckhard WEICHERT
Volker WESSELY Claude COUNE
Larry W. WHITEHOUSE Catherine BERENS
P. WIERTZ Hans-Joachim BIGALKE
A.C. WILLIAMS Lynne HENDERSON
Elisabeth M. WILLIAMSON Alice ITAGAKI
Helena WINDEMANN Valërie MEAU
Randi WINSNES Catherine NICOLAS
Maria WIRZ Paul WELLS
Dieter WITTHAUER
Elsbieta WOJTASIK Certificazione:
N. YACOUBI
Giorgio ZANNI Corinne POUGET
Tatjana B. ZEUGIN Susanne BAHRKE
Stephan ZIENTARA Hële© ne BRUGUERA
A. ZOLA Franc° ois-Xavier LERY
Vittorio ZURLETTI Andrew McMATH
SEGRETARIATO DELLA COMMISSIONE
Pascale POUKENS-RENWART
Assicurazione di qualita© :
EUROPEA DELLA FARMACOPEA

Direttore:
A. ARTIGES Vincent EGLOFF
Pierre LEVEAU
Amministratori scientifici (Segretariato tecnico,
Laboratorio e Standardizzazione biologica): Traduzione:
Peter CASTLE (Segretario della Commissione) Michelle BACQUE
John MILLER Beno|ªt BERNARD
Jean-Marc SPIESER Sandra FROMWEILER
Anne-Sophie BOUIN Rex HUISH
Karl Heinz BUCHHEIT
Emmanuelle CHARTON Pubbliche relazioni:
Arnold DAAS
Marie-Emmanuelle ESPOSITO-FARESE Caroline LARSEN-LE TARNEC

XXVIII
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
VI. CONTENUTO DELLA XI EDIZIONE

isilanA id
idoteM
DELLA FARMACOPEA UFFICIALE

La XI edizione della Farmacopea Ufficiale, con I testi nazionali, a loro volta, si contraddistinguono nel

irotinetnoC
modo seguente:

/ ilairetaM
l'inclusione delle monografie del Formulario Nazio- ^ i capitoli generali contengono nel loro numero di
nale, contiene ora, in un unico volume, tutti i testi identificazione anche il simbolo FU (ad esempio 1.
nazionali; ad essi sono stati comunque aggiunti un FU.1).
certo numero di testi europei di carattere generale ^ le singole monografie si distinguono in quanto non
citati frequentemente per riferimento nei testi nazio- riportano alcun numero di identificazione.
nali.

ivittaeR
Per aiutare il lettore alla consultazione della XI edi-
I testi europei sono cos|© contraddistinti: zione della Farmacopea Ufficiale riportiamo alcune
^ i capitoli generali sono preceduti da alcuni numeri, liste che riguardano le variazioni formali apportate ai
come ad esempio 5.2.1.; il primo numero identifica testi nazionali, testi che erano presenti nella X edizione
il capitolo mentre gli altri identificano l'ordine di della FU e nel Formulario Nazionale, ed i testi sop-

itnemogrA
ilareneG
posizione nel capitolo stesso; pressi.
Per quanto riguarda la parte europea si rimanda ai
^ le monografie riportano il loro numero di identifi- decreti di recepimento della 4’ edizione della Farmaco-
cazione posto, in alto, a destra del titolo della pea Europea e del suo primo supplemento riportati
monografia. nella parte finale del presente volume.

eifargonoM

ilareneG
TESTI SOPPRESSI

Metodi generali

ehcituecamraF
Chiusure in materiale elastomero per contenitori per polveri per preparazioni iniettabili (3.2. FU.1)
Chiusure in materiale elastomero per contenitori per preparazioni iniettabili oleose (3.2. FU.2)

emroF
Determinazione degli idrocarburi alogenati a bassa massa molecolare nell'acqua per preparazioni iniettabili (2.2.
FU.3)
Identificazione e determinazione quantitativa degli amminoacidi nelle soluzioni perfusionali (2.2. FU.4)
Nefelometria e torbidimetria (2.2. FU1)

eiretaM
Soluzioni perfusionali per dialisi anticoagulanti (soluzioni parenterali di grande volume) (5.1. FU.1)

Noretinodrel emirP
ehcituecamraF

Monografie

Oli per preparazioni iniettabili

inoizaraperP

Belladonna estratto idroalcoolico molle

ehcificepS

Burro di cacao Poligala estratto idroalcoolico molle

Calcitonina di salmone preparazione iniettabile Sierimmune antirabico
Cefalexina sodica Trimetafano camsilato
Cellulosa ossidata Vaccino rabico
ehcitapoemO
inoizaraperP

Chenopodio essenza Zafferano

Fenotiazina
Furazolidone Testi del Formulario Nazionale

Gliceridi poliglicolisati insaturi Acido borico soluzione idroalcoolica 3 per cento

Gliceridi poliglicolisati saturi Alluminio acetato basico soluzione
Lauroceraso Alluminio acetato crema 4 per cento
ecidnI

Metiltiouracile Alluminio acetato liquido soluzione

XXIX
VI. Contenuto della XI Edizione

Ammonio cloruro soluzione perfusionale 0,89 per cento Miele rosato

Antiemorroidali supposte Morfina cloridrato soluzione orale 4 per cento
Antimicotica solforata soluzione Oleo-calcarea pomata
Argento proteinato gocce auricolari 4 per cento Oleosa crema base grassa
Calendula crema 10 per cento Olio di vaselina sterile 10 ml
Camomilla elisir 10 per cento Ossicodone cloridrato e paracetamolo capsule 5 mg ÿ

Carbossipolimetilene crema base 10 mg ossicodone cloridrato e 325 mg paracetamolo

Ossicodone cloridrato e paracetamolo compresse 5 mg
Carbossipolimetilene gel base
ÿ

10mgossicodone cloridratoe325 mgparacetamolo

Carbossipolimetilene gel base idroalcoolico Piombo acetato basico soluzione
Cascara compresse rivestite 250 mg Poligala e narceina sciroppo
Cascara elisir 50 per cento Polisorbato crema base
Cicloserina compresse 250 mg Pozione gassosa soluzione
Citronella composta soluzione idroalcoolica Rabarbaro sciroppo 5 per cento
Clorexidina acetato soluzione idroalcoolica 0,07 per cento Ringer acetato con glucosio soluzione perfusionale
Collodio all'acido salicilico Ringer con glucosio soluzione perfusionale
Cotone emostatico Ringer lattato con glucosio soluzione perfusionale
Efedrina cloridrato sciroppo 0,1 per cento Salolo 3 per cento e mentolo 1 per cento soluzione
Elettrolitica di reintegrazione con glucosio e sodio glu- alcoolica
conato soluzione perfusionale Saponato con canfora linimento
Elettrolitica di reintegrazione con glucosio e sodio lat- Sodio e potassio bicarbonato soluzione da diluire 2
tato soluzione perfusionale mEq/ml
Elettrolitica di reintegrazione con potassio, glucosio e Sodio lattato soluzioni perfusionali 1,87 11,2 per cento
ÿ

sodio gluconato soluzione perfusionale Sodio laurilsolfato crema base

Elettrolitica di reintegrazione con sodio gluconato Sodio laurilsolfato unguento base
soluzione perfusionale Specie (Species ad ptisanas)
Elettrolitica di reintegrazione pH 7,4 con sodio gluco- Specie composta per tisana al sambuco
nato soluzione perfusionale Specie composta per tisana al tarassaco
Elettrolitica reidratante II soluzione perfusionale Specie composta per tisana al tiglio
Elettrolitica selettiva soluzione perfusionale Specie composta per tisana al timo
Eosina soluzione 1 per cento 2 per cento
ÿ
Specie composta per tisana all'achillea
Eosina soluzione idroalcoolica 1 per cento 2 per cento
ÿ
Specie composta per tisana all'altea
Eritromicina etilsuccinato fiale 100 mg/2 ml Specie composta per tisana all'anice
Fucsina fenica soluzione idroalcoolica Specie composta per tisana all'assenzio
Glicerolo camomilla e malva microclismi 3 g 6 g 9 g Specie composta per tisana alla betulla
Specie composta per tisana alla camomilla
ÿ ÿ

Glucosio sciroppo Specie composta per tisana alla centaurea

Iodopovidone con glucosio unguento Specie composta per tisana alla genziana
Ittiolo ovuli 1 g Specie composta per tisana alla gramigna
Lassativa emulsione Specie composta per tisana alla melissa
Lassativi vegetali compresse rivestite Specie composta per tisana alla senna
Laudano gocce orali (morfina 1 per cento) Specie composta per tisana alla valeriana
Laudano soluzione idroalcoolica (morfina 0,05 per cento) Tampone fosfato pH 6,8 7,0 8,0 soluzioni perfu-
ÿ ÿ

Lidocaina cloridrato e noradrenalina bitartrato fiale 50 sionali

mg e 0,05 mg/5 ml 200 mg e 0,2 mg/10 ml
ÿ Tisane
Lievito di birra compresse 400 mg Valeriana estratto secco compresse rivestite 50 mg
Matita emostatica Zinco cuprica soluzione

XXX
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
TESTI NON RIPORTATI IN QUANTO PUBBLICATI COME TESTI EUROPEI

Monografie di materie prime

isilanA id
idoteM
X EDIZIONE IV EDIZIONE DELLA FARMACOPEA EUROPEA

Acido stearico Acido stearico

irotinetnoC
/ ilairetaM
Acido tannico Acido tannico
Ambroxolo cloridrato Ambroxolo cloridrato
Arancia amara scorza Arancia amara epicarpo e mesocarpo
Arnica Arnica fiore

ivittaeR
Balsamo del Tolu© Balsamo del Tolu©
Belladonna estratto secco Belladonna foglia estratto secco titolato
Bezafibrato Bezafibrato
Biancospino Biancospino foglia e fiore

itnemogrA
ilareneG
Bismuto salicilato basico Bismuto salicilato basico
Boldo Boldo foglia
Carbacolo Carbacolo
Cefatrizina propilen glicolato Cefatrizina glicole propilenico

eifargonoM

ilareneG
Centella Centella
Esilresorcina Esilresorcinolo
Fenolftaleina Fenolftaleina

ehcituecamraF
Fuco Fuco

emroF
Ginepro Ginepro
Ginseng Ginseng
Gliceril beenato Glicerolo dibeenato
Lobelina cloridrato Lobelina cloridrato

eiretaM

emirP
Magnesio aspartato acido Magnesio aspartato diidrato
Malva fiore Malva fiore
Melissa Melissa foglia
ehcituecamraF
inoizaraperP

Mirra tintura Mirra tintura

ehcificepS

Passiflora Passiflora fiore

Pentazocina cloridrato Pentazocina cloridrato
Pirenzepina dicloridrato Pirenzepina dicloridrato monoidrato
ehcitapoemO
inoizaraperP

Rosmarino essenza Rosmarino essenza

Sodio etilmercuriotiosalicilato Tiomersal
Stanozololo Stanozololo
Sulfaguanidina Sulfaguanidina
Timo essenza Timo essenza
ecidnI

Trietanolammina Trolamina

XXXI
VI. Contenuto della XI Edizione

Monografie di preparazioni farmaceutiche specifiche (Formulario Nazionale)

FORMULARIO NAZIONALE IV EDIZIONE DELLA FARMACOPEA EUROPEA

Clorexidina gluconato soluzione concentrata 20 per cento Clorexidina digluconato soluzione

Soluzione di Eurocollins Soluzioni per la conservazione degli organi

TESTI I CUI TITOLI SONO CAMBIATI

Monografie di materie prime

X EDIZIONE XI EDIZIONE

Belladonna estratto fluido Belladonna estratto fluido titolato

Camomilla estratto idroalcoolico secco ad alto titolo Camomilla estratto idroalcoolico secco titolato
Carciofo estratto idroalcoolico secco Carciofo estratto idroalcoolico secco titolato
Mirtillo nero estratto idroalcoolico secco ad alto titolo Mirtillo nero estratto idroalcoolico secco titolato

Monografie di preparazioni farmaceutiche specifiche (Formulario Nazionale)

Vengono riportate due versioni dello stesso elenco:

^ una versione con i nuovi titoli in ordine alfabetico (la presenza del simbolo ^ nel titolo indica l'introduzione di
alcuni nuovi metodi analitici),
^ una versione con i vecchi titoli in ordine alfabetico.
XI EDIZIONE FORMULARIO NAZIONALE

Acido acetilsalicilico compresse Acido acetilsalicilico compresse 100 mg ^ 500 mg

Acido acetilsalicilico compresse gastroresistenti Acido acetilsalicilico compresse gastroresistenti 500 mg
Acido acetilsalicilico e codeina fosfato compresse Acido acetilsalicilico e codeina fosfato compresse
250 mg acido acetilsalicilico e 10 mg codeina fosfato
Acido ascorbico compresse Acido ascorbico compresse 500 mg
Acido borico bagno oculare Bagno oculare soluzione
Acido borico soluzione cutanea Acqua borica soluzione 3 per cento
Acido borico unguento Vaselina borica unguento 3 per cento
Acido etacrinico compresse Acido etacrinico compresse 50 mg
Acido lattico ovuli Acido lattico ovuli 500 mg
Acido nalidixico compresse Acido nalidixico compresse 500 mg
Acido nalidixico sciroppo Acido nalidixico sciroppo 6 per cento
Acido salicilico soluzione cutanea Acido salicilico soluzione idroalcoolica 1 per cento ^ 2
per cento
Acido salicilico soluzione cutanea oleosa Acido salicilico soluzione oleosa 2 per cento ^ 5 per
cento ^ 10 per cento
Acido salicilico unguento Salicilicounguento 2 per cento ^ 5 per cento ^ 10 per cento
Acido salicilico e resorcinolo soluzione cutanea Acido salicilico composto soluzione idroalcoolica
Acido tricloroacetico soluzione cutanea Acido tricloroacetico soluzione 50 per cento
Adrenalina collirio soluzione Adrenalina soluzione oftalmica 1 per cento
Adrenalina preparazione iniettabile Adrenalina fiale 0,5 mg/1 ml ^ 1 mg/1 ml
Alcool saponato soluzione cutanea Alcool saponato soluzione

XXXII
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Lanolina alcooli crema base
Alcooli di lanolina crema e unguento base Lanolina alcooli unguento base
Allopurinolo compresse Allopurinolo compresse 100 mg
Allume composto polvere per soluzione cutanea Allume composto polvere da diluire

isilanA id
idoteM
Alluminio ossido idrato compresse masticabili Alluminio idrossido compresse masticabili 500 mg
Alluminio ossido idrato e magnesio trisilicato com- Alluminio idrossido e magnesio trisilicato compresse
presse masticabili masticabili 120 mg alluminio idrossido e 250 mg
magnesio trisilicato

irotinetnoC
/ ilairetaM
Alluminio ossido idrato e magnesio trisilicato polvere Antiacida composta polvere
per sospensione orale
Aloperidolo compresse Aloperidolo compresse 1 mg 2 mg
Aloperidolo preparazione iniettabile Aloperidolo fiale 2 mg/1 ml
Amitriptilina compresse rivestite Amitriptilina compresse rivestite 10 mg

ivittaeR
Ammonio cloruro concentrato sterile Ammonio cloruro soluzione da diluire 3 mEq/ml
Amoxicillina capsule Amoxicillina capsule 250 mg 500 mg
Amoxicillina compresse Amoxicillina compresse 1 g
Amoxicillina granulato per sospensione orale Amoxicillina triidrato granulato per la preparazione di

itnemogrA
ilareneG
una sospensione (2,5 per cento e 5 per cento di amoxi-
cillina) per uso orale
Ampicillina capsule Ampicillina capsule 250 mg 500 mg
Ampicillina sodica preparazione iniettabile ^ Ampicillina sodica polvere sterile per preparazioni

eifargonoM
iniettabili 250 mg 500 mg 1000 mg

ilareneG
Anfifila crema base Anfifila crema base
Antazolina e nafazolina collirio soluzione Antazolina e nafazolina soluzione oftalmica di antazolina
solfato 0,5 per cento e nafazolina nitrato 0,025 per cento

ehcituecamraF
Argento nitrato collirio soluzione Argento nitrato soluzione oftalmica 1 per cento

emroF
Argento nitrato matita cutanea Matita al nitrato d'argento
Argento proteinato gocce nasali Argento proteinato gocce nasali 0,5 per cento 1 per
cento 2 per cento
Atropina collirio soluzione Atropina solfato soluzione oftalmica 0,5 per cento ^
1 per cento
eiretaM

emirP
Atropina compresse Atropina solfato compresse 0,250 mg
Atropina preparazione iniettabile Atropina solfato fiale 0,5 mg/1 ml ^ 1 mg/1 ml
Atropina preparazione oftalmica semisolida Atropina solfato pomata oftalmica 0,5 per cento p/p
ehcituecamraF
inoizaraperP

Bacitracina e polimixina preparazione oftalmica semi- Bacitracina e polimixina pomata oftalmica di bacitra-
ehcificepS

solida cina 500 U.I./g e polimixina B solfato 10.000 U.I./g

Bacitracina e polimixina unguento Bacitracina e polimixina unguento di bacitracina 500
U.I./g e polimixina B solfato 30.000 U.I./g
ehcitapoemO

Benzalconio concentrato per soluzione cutanea Benzalconio cloruro soluzione concentrata 1 per cento
inoizaraperP

Benzile benzoato unguento Benzile benzoato unguento 20 per cento

Benzilpenicillina benzatinica preparazione iniettabile ^ Benzilpenicillina benzatinica polvere sterile per prepa-
razioni iniettabili 600.000 U.I. ^ 1.200.000 U.I.
Benzilpenicillina potassica preparazione iniettabile ^ Benzilpenicillina potassica polvere sterile per prepara-
zioni iniettabili 1.000.000 U.I.
ecidnI

Benzoile perossido crema ^ Benzoile perossido crema 5 per cento ^ 10 per cento

XXXIII
VI. Contenuto della XI Edizione

Betametasone preparazione semisolida per applica- Betametasone dipropionato crema 0,05 per cento
Betametasone dipropionato unguento 0,05 per cento
zione cutanea
Betametasone dipropionato 0,05 per cento e neomicina
Betametasone e neomicina preparazione semisolida per solfato 0,5 per cento crema
applicazione cutanea Betametasone dipropionato 0,05 per cento e neomicina
solfato 0,5 per cento unguento
Bromosulfoftaleina preparazione iniettabile Bromosulfoftaleina sodica fiale 500 mg/10 ml
Calcio carbonato e magnesio idrossido compresse Calcio carbonato e magnesio idrossido compresse 500
mg calcio carbonato e 150 mg magnesio idrossido
Calcio cloruro concentrato sterile Calcio cloruro fiale da diluire 500 mg/10 ml ^ 1 g/10 ml
Calcio cloruro soluzione da diluire 0,5 mEq/ml
Calcio cloruro e magnesio cloruro concentrato sterile Calcio e magnesio cloruro soluzione da diluire 1 mEq/ml
Calcio gluconato preparazione iniettabile Calcio gluconato fiale 500 mg/5 ml ^ 1000 mg/10 ml
Calcio idrossido emulsione cutanea Oleo-calcareo linimento
Calcio idrossido soluzione cutanea Acqua di calce soluzione
Calcio idrossido unguento Antiscottature unguento
Canfora crema ^ Canforata crema 10 per cento
Canfora soluzione cutanea ^ Canfora soluzione idroalcoolica 10 per cento
Canfora soluzione cutanea oleosa ^ Canfora soluzione oleosa 10 per cento
Canfora e metile salicilato crema ^ Canfosalicilica crema
Canfora, eucaliptolo e mentolo unguento ^ Balsamico per adulti unguento
Carbone composto compresse Carbone composto compresse
Carbone polvere per sospensione orale Carbone attivo polvere
Carbone e alluminio ossido idrato polvere per sospen- Carbone adsorbente antiacido polvere
sione orale
Cefalexina capsule Cefalexina capsule 250 mg ^ 500 mg
Cefalexina compresse Cefalexina compresse 1 g
Cefalexina granulato per sospensione orale Cefalexina granulato per la preparazione di una
sospensione (5 per cento) di cefalexina per uso orale
Cefalotina preparazione iniettabile ^ Cefalotina sodica polvere sterile per preparazioni iniet-
tabili 1000 mg
Cetrimide concentrato per soluzione cutanea Cetrimide soluzione concentrata 40 per cento
Chinidina solfato compresse Chinidina solfato compresse 200 mg
Chinina cloridrato concentrato sterile Chinina cloridrato fiale da diluire 500 mg/2 ml
Chinina solfato compresse rivestite Chinina solfato compresse rivestite 250 mg
Clofenotano polvere cutanea Clofenotano polvere aspersoria 10 per cento
Cloramfenicolo capsule Cloramfenicolo capsule 250 mg
Cloramfenicolo collirio soluzione Cloramfenicolo soluzione oftalmica 0,5 per cento
Cloramfenicolo unguento oftalmico Cloramfenicolo pomata oftalmica 1 per cento
Cloramfenicolo palmitato sciroppo Cloramfenicolo palmitato sciroppo 2,5 per cento
Cloramfenicolo sodio succinato preparazione iniet- Cloramfenicolo sodio succinato polvere sterile per pre-
tabile ^ parazioni iniettabili 1 g
Clordiazepossido compresse rivestite Clordiazepossido cloridrato compresse rivestite 20 mg
Clorochina fosfato compresse Clorochina bifosfato compresse 250 mg
Clorpromazina compresse rivestite Clorpromazina cloridrato compresse rivestite 25 mg ^
100 mg
Clorpromazina preparazione iniettabile Clorpromazina cloridrato fiale 25 mg/2 ml
Clorpromazina sciroppo Clorpromazina cloridrato sciroppo 50 mg/10 ml

XXXIV
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Clorpropamide compresse Clorpropamide compresse 250 mg
Cloxacillina capsule Cloxacillina capsule 250 mg ^ 500 mg
Cloxacillina granulato per soluzione orale Cloxacillina sodica granulato per la preparazione di una
soluzione (2,5 per cento) di cloxacillina per uso orale
Cloxacillina preparazione iniettabile ^ Cloxacillina sodica polvere sterile per preparazioni

isilanA id
idoteM
iniettabili 500 mg
Codeina capsule Codeina fosfato capsule 60 mg
Codeina compresse Codeina fosfato compresse 30 mg ^ 60 mg
Codeina e paracetamolo capsule Codeina fosfato e paracetamolo capsule 30 mg codeina

irotinetnoC
/ ilairetaM
fosfato e 325 mg paracetamolo
Codeina e paracetamolo compresse Codeina fosfato e paracetamolo compresse 30 mg
codeina fosfato e 325 mg paracetamolo
Codeina e sodio benzoato sciroppo Codeina fosfato e sodio benzoato sciroppo di codeina
fosfato 0,15 per cento e sodio benzoato 1 per cento

ivittaeR
Colchicina compresse Colchicina compresse 0,5 mg
Cortisone compresse Cortisone acetato compresse 25 mg
Desametasone compresse Desametasone compresse 0,5 mg
Destrometorfano compresse masticabili Destrometorfano bromidrato compresse boccali masti-

itnemogrA
cabili 7,65 mg

ilareneG
Destrometorfano gocce orali Destrometorfano bromidrato gocce 1,5 per cento
Destrometorfano sciroppo Destrometorfano bromidrato sciroppo 0,3 per cento
Dexpantenolo crema Dexpantenolo crema 5 per cento
Dexpantenolo crema idrofoba Dexpantenolo crema grassa 5 per cento

eifargonoM

ilareneG
Dexpantenolo composto crema Dexpantenolo composto crema
Diazepam compresse rivestite Diazepam compresse rivestite 5 mg
Diazepam preparazione iniettabile Diazepam fiale 10 mg/2 ml
Difenidramina compresse Difenidramina cloridrato compresse 25 mg

ehcituecamraF
Difenidramina sciroppo Difenidramina cloridrato sciroppo 0,25 per cento

emroF
Digitossina compresse Digitossina compresse 0,10 mg
Digitossina preparazione iniettabile Digitossina fiale 0,10 mg/1 ml ^ 0,25 mg/1 ml
Digossina compresse Digossina compresse 0,125 mg ^ 0,250 mg
Digossina preparazione iniettabile Digossina fiale 0,10 mg/1 ml ^ 0,25 mg/1 ml

eiretaM
Dimenidrinato compresse Dimenidrinato compresse 50 mg

emirP
Dimeticone capsule Dimeticone capsule 40 mg ^ 80 mg
Dimeticone crema Dimeticone crema 10 per cento
Dopamina concentrato sterile Dopamina fiale da diluire 10 mg/2 ml ^ 50 mg/10 ml
ehcituecamraF
inoizaraperP

Doxiciclina capsule Doxiciclina capsule 100 mg

ehcificepS

Efedrina compresse Efedrina cloridrato compresse 25 mg

Efedrina preparazione iniettabile Efedrina cloridrato fiale 10 mg/1 ml ^ 25 mg/ 1 ml
Elettrolitica bilanciata di mantenimento con glucosio I
ehcitapoemO
inoizaraperP

infusione endovenosa Elettrolitiche bilanciate di mantenimento con glucosio

Elettrolitica bilanciata di mantenimento con glucosio II soluzioni perfusionali I ^ II
infusione endovenosa
Elettrolitica di mantenimento con glucosio infusione Elettrolitica di mantenimento con glucosio soluzione
endovenosa perfusionale
Elettrolitica equilibrata enterica infusione endovenosa Elettrolitica equilibrata enterica soluzione perfusionale
ecidnI

Elettrolitica equilibrata gastrica infusione endovenosa Elettrolitica equilibrata gastrica soluzione perfusionale

XXXV
VI. Contenuto della XI Edizione

Elettrolitica equilibrata gastrica con glucosio al 10 per Elettrolitica equilibrata gastrica con glucosio al 10 per
cento infusione endovenosa cento soluzione perfusionale
Elettrolitica equilibrata pediatrica infusione endo- Elettrolitica equilibrata pediatrica soluzione perfusio-
venosa nale
Elettrolitica reidratante I infusione endovenosa Elettrolitica reidratante I soluzione perfusionale
Elettrolitica reidratante III infusione endovenosa Elettrolitica reidratante III soluzione perfusionale
Elettrolitica reidratante III con glucosio infusione Elettrolitica reidratante III con glucosio soluzione per-
endovenosa fusionale
Elettrolitica reidratante con glucosio e calcio gluconato Elettrolitica reidratante con glucosio e calcio gluconato
infusione endovenosa soluzione perfusionale
Elettrolitica reidratante soluzione orale Soluzione salina per reidratazione orale soluzione orale
Emetina preparazione iniettabile Emetina cloridrato fiale 20 mg/1 ml
Ergometrina compresse Ergometrina maleato compresse 0,5 mg
Ergometrina preparazione iniettabile Ergometrina maleato fiale 0,20 mg/1 ml
Ergotamina compresse Ergotamina tartrato compresse 1 mg
Ergotamina preparazione iniettabile Ergotamina tartrato fiale 0,25 mg/1 ml
Eritromicina crema Eritromicina crema 3 per cento
Eritromicina soluzione cutanea Eritromicina lozione 2 per cento ^ 3 per cento
Eritromicina etilsuccinato granulato per sospensione Eritromicina etilsuccinato granulato per la prepara-
orale zione di una sospensione (2,5 per cento e 4 per cento
di eritromicina) per uso orale
Eritromicina lattobionato preparazione iniettabile ^ Eritromicina lattobionato polvere sterile per prepara-
zioni iniettabili 500 mg ^ 1 g
Eritromicina stearato compresse rivestite con film Eritromicina stearato compresse rivestite 250 mg
Etambutolo compresse rivestite Etambutolo cloridrato compresse rivestite 200 mg ^
400 mg
Eucalipto composto gocce nasali Eucalipto composto gocce nasali
Eucalipto e pino silvestre unguento Balsamico per bambini unguento
Eugenolo e clorobutanolo soluzione dentale Odontalgiche gocce dentali
Fenilbutazone compresse rivestite Fenilbutazone compresse rivestite 200 mg
Fenilbutazone supposte Fenilbutazone supposte 250 mg
Fenilefrina collirio soluzione Fenilefrina cloridrato soluzione oftalmica 1 per cento
Fenilefrina gocce nasali soluzione Fenilefrina cloridrato gocce nasali 0,25 per cento
Fenilefrina e idrocortisone gocce nasali sospensione Fenilefrina cloridrato e idrocortisone acetato gocce
nasali di fenilefrina cloridrato 0,3 per cento e idro-
cortisone acetato 0,5 per cento
Fenitoina compresse Fenitoina sodica compresse 100 mg
Fenitoina sciroppo Fenitoina sciroppo 0,6 per cento p/v
Fenobarbital compresse Fenobarbitale compresse 20 mg ^ 50 mg ^ 100 mg
Fenobarbital supposte Fenobarbitale supposte 20 mg ^ 85 mg
Fenobarbital sodico liquido per uso orale Fenobarbitale elisir 0,55 per cento
Fenobarbital sodico preparazione iniettabile Fenobarbitale sodico fiale 30 mg/1 ml ^ 100 mg/2 ml
Fenolo gocce auricolari Glicerina fenica gocce auricolari 1 per cento
Fenolo soluzione cutanea Fenolo soluzione 1 per cento
Fenolsulfonftaleina preparazione iniettabile Fenolsulfonftaleina fiale 6 mg/1 ml
Fenossimetilpenicillina compresse Fenossimetilpenicillina compresse 125 mg ^ 500 mg
Fenossimetilpenicillina granulato per soluzione orale Fenossimetilpenicillina potassica granulato per la pre-
parazione di una soluzione (2,5 per cento) di fenossi-
metilpenicillina potassica per uso orale

XXXVI
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Ferroso solfato compresse rivestite Ferroso solfato compresse rivestite 200 mg
Fisostigmina preparazione iniettabile Fisostigmina salicilato fiale 1 mg/1 ml
Fluoresceina collirio soluzione Fluoresceina sodica soluzione oftalmica 0,5 per cento 1
per cento
Fruttosio infusione endovenosa Fruttosio soluzioni perfusionali 5 ^ 10 ^ 20 per cento

isilanA id
idoteM
Ftalilsulfatiazolo compresse Ftalilsulfatiazolo compresse 500 mg
Furosemide compresse Furosemide compresse 25 mg
Furosemide preparazione iniettabile Furosemide fiale 20 mg/2 ml
Gentamicina preparazione iniettabile Gentamicina solfato fiale 40 mg ^ 80 mg/2 ml

irotinetnoC
/ ilairetaM
Glicerolo gel Amido glicerolato
Glicerolo soluzione rettale Glicerolo microclismi
Glicerolo supposte Glicerolo supposte 750 mg ^ 1000 mg ^ 1500 mg ^
2500 mg
Glicerolo unguento Glicerina unguento 15 per cento ^ 20 per cento

ivittaeR
Glicerolo con sodio cloruro infusione endovenosa Glicerolo con sodio cloruro soluzione perfusionale di
glicerolo 10 per cento e sodio cloruro 0,9 per cento
Glicina soluzione per irrigazione Glicina soluzione 1,5 per cento
Glicina e mannitolo soluzione per irrigazione Glicina e mannitolo soluzione per irrigazione glicina 1

itnemogrA
per cento e mannitolo 1 per cento

ilareneG
Glucosio gel oftalmico Glucosio gel oftalmica 35 per cento
Glucosio fiale 5 ^ 10 ^ 20 ^ 33 per cento
Glucosio preparazioni parenterali Glucosio soluzioni perfusionali 5 ^ 10 ^ 20 ^ 30 ^ 33 ^
50 ^ 70 per cento

eifargonoM

ilareneG
Glucosio con potassio cloruro infusione endovenosa Glucosio con potassio cloruro soluzioni perfusionali I ^ II
Glucosio con sodio cloruro infusione endovenosa Glucosio con sodio cloruro soluzioni perfusionali I ^ II ^ III
Griseofulvina compresse Griseofulvina compresse 125 mg ^ 250 mg

ehcituecamraF
Ictammolo gocce auricolari soluzione ^ Glicerina ittiolata gocce auricolari
Ictammolo unguento ^ Ittiolo unguento 10 per cento ^ 20 per cento

emroF
Ictammolo unguento emulsionante ^ Ittiolo unguento lavabile 10 per cento ^ 20 per cento
Idroclorotiazide compresse Idroclorotiazide compresse 25 mg 50 mg
Idrocortisone preparazione oftalmica semisolida Idrocortisone acetato pomata oftalmica 1 per cento
2 per cento

eiretaM

emirP
Idrocortisone preparazione semisolida per applicazione Idrocortisone acetato crema 1 per cento
cutanea Idrocortisone acetato unguento 1 per cento
Idrocortisone e neomicina collirio sospensione Idrocortisone acetato sospensione 1,5 per cento in solu-
zione di neomicina solfato 0,5 per cento
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Idrocortisone e neomicina preparazione oftalmica Idrocortisone acetato1,0 per cento e neomicina solfato 0,5
semisolida per cento pomata oftalmica
Idrocortisone acetato 1,0 per cento e neomicina solfato
Idrocortisone e neomicina preparazione semisolida per 0,5 per cento crema
ehcitapoemO
inoizaraperP

applicazione cutanea Idrocortisone acetato 1,0 per cento e neomicina solfato

0,5 per cento unguento
Idroxocobalamina polvere per preparazione iniettabile Idroxocobalamina liofilizzato 100 ^ 1000 ^ 5000 g con l

diluente
Imipramina compresse rivestite Imipramina cloridrato compresse rivestite10 mg ^ 25 mg
Iodio soluzione cutanea Iodio soluzione alcoolica I
ecidnI

Iodio soluzione orale Iodio soluzione alcoolica II

XXXVII
VI. Contenuto della XI Edizione

Iodio unguento Iodo-iodurato unguento

Iodio e acido salicilico soluzione cutanea Iodio-salicilica soluzione idroalcoolica
Iodio e glicerolo soluzione Iodio soluzione glicerica
Ipecacuana sciroppo emetico Ipecacuana sciroppo emetico 7 per cento
Isoniazide compresse Isoniazide compresse 100 mg ^ 200 mg
Isoniazide sciroppo Isoniazide sciroppo 1 per cento
Isoprenalina preparazione iniettabile Isoprenalina cloridrato fiale 0,2 mg/1 ml
Lidocaina preparazione iniettabile Lidocaina cloridrato fiale 50 mg/5 ml ^ 200 mg/10 ml
Lidocaina preparazione semisolida per applicazione Lidocaina
Lidocaina
cloridrato crema 2 per cento
cloridrato unguento 2 per cento
cutanea
Lidocaina cloridrato 1,5 per cento e idrocortisone ace-
Lidocaina e idrocortisone preparazione semisolida per tato 1 per cento crema
applicazione cutanea Lidocaina cloridrato 1,5 per cento e idrocortisone ace-
tato 1,0 per cento unguento
Litio carbonato capsule Litio carbonato capsule 300 mg
Litio carbonato compresse Litio carbonato compresse 300 mg
Macrogol unguento base Polietilenglicoli unguento base
Cetomacrogol crema base
Macrogol cetostearile etere crema e unguento base Cetomacrogol crema base grassa
Cetomacrogol unguento base
Magnesio carbonato e acido citrico compresse Limonata citro-magnesiaca compresse
Magnesio carbonato e acido citrico granulato efferve- Citrato di magnesia effervescente granulato
scente per soluzione orale
Magnesio carbonato e acido citrico polvere per solu- Limonata citro-magnesiaca polvere
zione orale
Magnesio cloruro concentrato sterile Magnesio cloruro soluzione da diluire 0,5 mEq/ml
Magnesio idrossido compresse masticabili Magnesio idrossido compresse masticabili 300 mg
Magnesio solfato fiale da diluire 1 g/10 ml ^ 2 g/10 ml
Magnesio solfato concentrato sterile ^ 2,5 g/10 ml
Magnesio solfato soluzione da diluire 2 mEq/ml
Mannitolo infusione endovenosa Mannitolo soluzioni perfusionali 5 ^ 10 ^ 18 per cento
Mannitolo e sodio cloruro infusione endovenosa Mannitolo con sodio cloruro soluzione perfusionale
mannitolo 5 per cento e sodio cloruro 0,45 per cento
Mannitolo e sorbitolo soluzione per irrigazione Mannitolo e sorbitolo soluzione mannitolo 0,54 per
cento e sorbitolo 2,7 per cento
Mentolo composto soluzione per suffumigi Alcool mentolato composto soluzione concentrata
Mentolo polvere cutanea Talco mentolato polvere aspersoria 1 per cento
Merbromina soluzione cutanea Merbromina soluzione 2 per cento
Mercurio ossido giallo preparazione oftalmica semi- Mercurio ossido giallo pomata oftalmica 1 per cento 2
solida per cento
Metadone sciroppo Metadone cloridrato sciroppo 0,1 per cento
Metile salicilato unguento ^ Metile salicilato unguento
Metilprednisolone compresse Metilprednisolone compresse 4 mg ^ 8 mg
Metilrosanilinio cloruro soluzione cutanea ^ Cristal violetto soluzione 1 per cento
Metiltioninio soluzione cutanea ^ Blu di metilene soluzione 1 per cento
Metiltioninio preparazione iniettabile ^ Blu di metilene fiale 50 mg/5 ml ^ 100 mg/10 ml
Metronidazolo compresse Metronidazolo compresse 250 mg
Metronidazolo compresse vaginali Metronidazolo compresse vaginali 500 mg

XXXVIII
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Mirra e ratania soluzione gengivale Gengivario soluzione
Morfina cloridrato preparazione iniettabile Morfina cloridrato fiale 10 mg/1 ml ^ 20 mg/1 ml
Morfina cloridrato sciroppo Morfina cloridrato sciroppo 0,1 ^ 1 ^ 2 per cento
Morfina solfato compresse Morfina solfato compresse 20 mg ^ 40 mg ^ 60 mg
Morfina cloridrato e atropina preparazione iniettabile
Morfina cloridrato e atropina solfato fiale 10 mg e 0,5

isilanA id
idoteM
mg/1 ml
Nafazolina collirio soluzione Nafazolina nitrato soluzione oftalmica 0,025 per cento
Naloxone preparazione iniettabile Naloxone cloridrato fiale 0,04 mg/2 ml ^ 0,4 mg/1 ml
Neomicina collirio soluzione Neomicina solfato soluzione oftalmica 0,5 per cento

irotinetnoC
Neomicina preparazione oftalmica semisolida Neomicina solfato pomata oftalmica 0,5 per cento

/ ilairetaM
Niaouli essenza gocce nasali Olio gomenolato gocce nasali 1 per cento ^ 2 per cento
Niaouli essenza e mentolo gocce nasali Rinobalsamiche gocce nasali
Nicotinamide compresse Nicotinamide compresse 250 mg
Nistatina compresse rivestite Nistatina compresse rivestite 500.000 U.I.
Nistatina sciroppo Nistatina sciroppo 100.000 U.I.

ivittaeR
Nitrofural compresse vaginali Nitrofurazone compresse vaginali 50 mg
Nitrofurantoina compresse Nitrofurantoina compresse 50 mg
Nitrofurantoina sciroppo Nitrofurantoina sciroppo 0,5 per cento
Nitroglicerina compresse sublinguali Nitroglicerina compresse boccali 0,5 mg

itnemogrA
ilareneG
Noradrenalina concentrato per soluzione iniettabile Noradrenalina tartrato fiale da diluire 2 mg/1 ml
Olio di ricino capsule Olio di ricino capsule 1 g
Omatropina collirio soluzione Omatropina bromidrato soluzione oftalmica 2 per cento
Papaverina preparazione iniettabile Papaverina cloridrato fiale 30 mg/2 ml 50 mg/3 ml
Paracetamolo compresse Paracetamolo compresse 500 mg

eifargonoM

ilareneG
Paracetamolo sciroppo Paracetamolo elisir 2,5 per cento
Paracetamolo supposte ^ Paracetamolo supposte 400 mg
Paraffina liquida emulsione ^ Olio di vaselina emulsione 40 per cento
Pentamidina preparazione iniettabile ^ Pentamidina isetionato polvere sterile per preparazioni

ehcituecamraF
iniettabili 200 mg

emroF
Petidina preparazione iniettabile Petidina cloridrato fiale 100 mg/2 ml
Pilocarpina collirio soluzione Pilocarpina cloridrato soluzione oftalmica 1 per cento
^ 2 per cento ^ 4 per cento
Pilocarpina preparazione oftalmica semisolida Pilocarpina cloridrato pomata oftalmica 1 per cento ^
2 per cento ^ 4 per cento
eiretaM

emirP
Pino composto soluzione per suffumigi Pino composto soluzione concentrata
Piperazina capsule Piperazina adipato capsule 300 mg
Pirimetamina compresse Pirimetamina compresse 25 mg
Potassio acetato concentrato sterile Potassio acetato soluzione da diluire 3 mEq/ml
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Potassio cloruro concentrato sterile Potassio cloruro soluzione da diluire 2 mEq/ml 3 ^ mEq/ml
Potassio cloruro soluzione orale Potassio cloruro soluzione orale 10 per cento p/v
Potassio fosfato concentrato sterile Potassio fosfato soluzione da diluire 2 mEq/ml
Potassio fosfato monobasico compresse Potassio fosfato monobasico compresse 500 mg
Potassio iodato compresse Potassio iodato compresse 170 mg
ehcitapoemO
inoizaraperP

Potassio ioduro compresse Potassio ioduro compresse 130 mg

Potassio ioduro gocce Potassio ioduro gocce 50 per cento
Potassio lattato concentrato sterile Potassio lattato soluzione da diluire 2 mEq/ml
Potassio permanganato compresse per soluzione Potassio permanganato compresse 100 mg ^ 250 mg
cutanea (per soluzioni ad uso esterno)
Povidone-iodio soluzione cutanea Iodopovidone soluzione 10 per cento
ecidnI

Povidone-iodio unguento Iodopovidone unguento 10 per cento

XXXIX
VI. Contenuto della XI Edizione

Primachina compresse rivestite Primachina fosfato compresse rivestite 132 mg (equiva-

lente a 75 mg di base)
Probenecid compresse Probenecid compresse 500 mg
Procainamide compresse Procainamide cloridrato compresse 250 mg
Procainamide preparazione iniettabile Procainamide cloridrato fiale 500 mg/5 ml
Prometazina compresse rivestite Prometazina cloridrato compresse rivestite 25 mg
Prometazina crema Prometazina crema 2 per cento
Propifenazone compresse Propifenazone compresse 300 mg
Propifenazone supposte Propifenazone supposte 50 mg ^ 150 mg ^ 350 mg
Reserpina compresse Reserpina compresse 0,1 mg
Rifampicina capsule Rifampicina capsule 150 mg ^ 300 mg
Rifampicina sciroppo Rifampicina sciroppo 2 per cento
Ringer infusione endovenosa Ringer soluzione perfusionale
Ringer acetato infusione endovenosa Ringer acetato soluzione perfusionale
Ringer lattato infusione endovenosa Ringer lattato soluzione perfusionale
Saccarosio sciroppo Sciroppo semplice
Sali e glucosio polvere orale Sali per reidratazione orale con glucosio polveri per uso
orale A-B
Scopolamina preparazione iniettabile Scopolamina bromidrato fiale 0,25 mg/1 ml
Senna composta polvere orale Senna composta polvere
Sodio acetato concentrato sterile Sodio acetato soluzione da diluire 3 mEq/ml
Sodio bicarbonato compresse Sodio bicarbonato compresse 500 mg
Sodio bicarbonato concentrato sterile Sodio bicarbonato soluzione da diluire 1 mEq/ml
Sodio bicarbonato infusione endovenosa Sodio bicarbonato soluzioni perfusionali 1,4 ^ 5
^ 7,5 ^ 8,4 per cento
Sodio calcio edetato concentrato sterile Calcio edetato bisodico fiale da diluire 1 g/10 ml
Sodio carbonato gocce auricolari Sodio carbonato gocce auricolari 6 per cento
Sodio citrato compresse Sodio citrato compresse 500 mg
Sodio citrato concentrato sterile Sodio citrato soluzione da diluire 6,16 mEq/ml
Sodio citrato preparazione iniettabile Sodio citrato fiale 38 mg/1 ml ^ 76 mg/2 ^ ml 190 mg/
5 ml ^ 380 mg/10 ml
Sodio citrato e acido citrico preparazione iniettabile Sodio citrato e acido citrico fiale 1 g e 600 mg/10 ml
Sodio cloruro concentrato sterile Sodio cloruro soluzioni da diluire 2 mEq/ml ^ 3 mEq/ml
Sodio cloruro gocce nasali soluzione Sodio cloruro gocce nasali 0,9 per cento
Sodio cloruro gocce nasali viscose 0,9 per cento
Sodio cloruro fiale 18 mg/2 ml ^ 45 mg/5 ml ^ 90 mg/
Sodio cloruro infusione endovenosa 10 ml - 180 mg/20 ml
Sodio cloruro soluzioni perfusionali 0,9 ^ 3 ^ 5 per cento
Sodio edetato concentrato sterile Sodio edetato fiale da diluire 0,5 g/5 ml ^ 2 g/10 ml
Sodio fluoruro compresse Sodio fluoruro compresse 0,55 mg e 2,2 mg (equivalenti
a 0,25 mg e 1 mg di fluoro)
Sodio fosfato soluzione rettale Fosfato sodico acido clisma
Sodio indigotindisolfonato preparazione iniettabile Sodio indigotindisolfonato fiale 40 mg/10 ml ^ 80 mg/
5 ml
Sodio lattato concentrato sterile Sodio lattato soluzioni da diluire 2 mEq/ml ^ 3 mEq/ml
Sodio nitroprussiato concentrato sterile Sodio nitroprussiato fiale da diluire 100 mg/5 ml

XL
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Sodio nitroprussiato polvere e solvente per prepara- Sodio nitroprussiato polvere per preparazioni inietta-
zione iniettabile bili 100 mg
Sodio salicilato compresse gastroresistenti Sodio salicilato compresse gastroresistenti 500 mg
Sodio stibogluconato preparazione iniettabile Sodio stibogluconato soluzione iniettabile 33 per cento
equivalente a 10 per cento di antimonio 30 ml e

isilanA id
idoteM
100 ml
Sodio tiosolfato concentrato sterile Sodio tiosolfato fiale da diluire 1000 mg/10 ml
Sodio tiosolfato infusione endovenosa Sodio tiosolfato soluzione perfusionale 25 per cento
Soluzione per circolazione extracorporea Soluzione cardioplegica

irotinetnoC
Soluzione polisalinica con potassio concentrato sterile Soluzione polisalinica concentrata con potassio solu-

/ ilairetaM
zioni da diluire I ^ II
Soluzione polisalinica senza potassio concentrato Soluzione polisalinica concentrata senza potassio solu-
sterile zione da diluire
Streptomicina preparazione iniettabile Streptomicina solfato polvere sterile per preparazioni
iniettabili 1000 mg

ivittaeR
Sulfacetamide collirio soluzione Sulfacetamide sodica soluzione oftalmica 10 per cento
Sulfacetamide preparazione oftalmica semisolida Sulfacetamide sodica pomata oftalmica 10 per cento
Sulfadiazina compresse Sulfadiazina compresse 500 mg
Sulfadiazina concentrato sterile Sulfadiazina sodica fiale da diluire 250 mg/l ml

itnemogrA
ilareneG
Sulfadimetoxina compresse Sulfadimetossina compresse 500 mg
Sulfametopirazina compresse Sulfametopirazina compresse 500 mg
Sulfametopirazina sciroppo Sulfametopirazina sciroppo 5 per cento
Teofillina-etilendiammina compresse rivestite Aminofillina compresse rivestite 200 mg
Teofillina-etilendiammina preparazione iniettabile Aminofillina fiale 240 mg/10 ml

eifargonoM

ilareneG
Teofillina-etilendiammina supposte Aminofillina supposte 100 mg ^ 300 mg
Tetracaina supposte Tetracaina cloridrato supposte 15 mg
Tetraciclina capsule Tetraciclina cloridrato capsule 250 mg
Tetraciclina preparazione iniettabile ^ Tetraciclina cloridrato polvere sterile per preparazioni

ehcituecamraF
iniettabili 250 mg

emroF
Tiabendazolo compresse Tiabendazolo compresse 500 mg
Tiopentale sodico polvere per preparazione iniettabile ^ Tiopentale sodico polvere sterile per preparazioni iniet-
tabili 0,5 g ^ 1 g ^ 1,5 g
Tioridazina compresse rivestite Tioridazina cloridrato compresse rivestite 25 mg ^ 50 mg
Tolbutamide compresse Tolbutamide compresse 500 mg
eiretaM

emirP
Trifluoperazina compresse rivestite Trifluoperazina cloridrato compresse rivestite 2 mg
Valeriana capsule Valeriana capsule 50 mg
Vaselina e lanolina unguento base Lanovaselina unguento base
Vitamine B compresse rivestite Vitamine del complesso B compresse rivestite
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Zinco ossido pasta cutanea Zinco all'acqua pasta

Zinco ossido polvere cutanea Talco allo zinco ossido polvere aspersoria 10 per cento
Zinco ossido sospensione cutanea Olio e zinco ossido linimento
Zinco ossido unguento Zinco ossido unguento 10 per cento
Zinco ossido composto polvere cutanea Talco timolato polvere aspersoria
ehcitapoemO
inoizaraperP

Zinco ossido e acido salicilico pasta cutanea Pasta di Lassar

Zinco ossido e glicerolo pasta cutanea Pasta molle di Unna
Zinco ossido e olio di mandorla unguento Olio di mandorla con zinco unguento
Zinco solfato collirio soluzione Zinco solfato soluzione oftalmica 0,5 per cento
Zinco solfato compresse Zinco solfato compresse 200 mg
Zolfo e acido salicilico unguento Solfo-salicilico unguento
ecidnI

Zolfo e potassio carbonato unguento Solfo-alcalino unguento

XLI
VI. Contenuto della XI Edizione

FORMULARIO NAZIONALE XI EDIZIONE

Acido acetilsalicilico compresse 100 mg ^ 500 mg Acido acetilsalicilico compresse

Acido acetilsalicilico compresse gastroresistenti 500 mg Acido acetilsalicilico compresse gastroresistenti
Acido acetilsalicilico e codeina fosfato compresse 250 Acido acetilsalicilico e codeina fosfato compresse
mg acido acetilsalicilico e 10 mg codeina fosfato
Acido ascorbico compresse 500 mg Acido ascorbico compresse
Acido etacrinico compresse 50 mg Acido etacrinico compresse
Acido lattico ovuli 500 mg Acido lattico ovuli
Acido nalidixico compresse 500 mg Acido nalidixico compresse
Acido nalidixico sciroppo 6 per cento Acido nalidixico sciroppo
Acido salicilico composto soluzione idroalcoolica Acido salicilico e resorcinolo soluzione cutanea
Acido salicilico soluzione idroalcoolica 1 per cento ^ Acido salicilico soluzione cutanea
2 per cento
Acido salicilico soluzione oleosa 2 per cento ^ 5 per Acido salicilico soluzione cutanea oleosa
cento ^ 10 per cento
Acido tricloroacetico soluzione 50 per cento Acido tricloroacetico soluzione cutanea
Acqua borica soluzione 3 per cento Acido borico soluzione cutanea
Acqua di calce soluzione Calcio idrossido soluzione cutanea
Adrenalina fiale 0,5 mg/1 ml ^ 1 mg/1 ml Adrenalina preparazione iniettabile
Adrenalina soluzione oftalmica 1 per cento Adrenalina collirio soluzione
Alcool mentolato composto soluzione concentrata Mentolo composto soluzione per suffumigi
Alcool saponato soluzione Alcool saponato soluzione cutanea
Allopurinolo compresse 100 mg Allopurinolo compresse
Allume composto polvere da diluire Allume composto polvere per soluzione cutanea
Alluminio idrossido compresse masticabili 500 mg Alluminio ossido idrato compresse masticabili
Alluminio idrossido e magnesio trisilicato compresse Alluminio ossido idrato e magnesio trisilicato com-
masticabili 120 mg alluminio idrossido e 250 mg presse masticabili
magnesio trisilicato
Aloperidolo compresse 1 mg ^ 2 mg Aloperidolo compresse
Aloperidolo fiale 2 mg/1 ml Aloperidolo preparazione iniettabile
Amido glicerolato Glicerolo gel
Aminofillina compresse rivestite 200 mg Teofillina-etilendiammina compresse rivestite
Aminofillina fiale 240 mg/10 ml Teofillina-etilendiammina preparazione iniettabile
Aminofillina supposte 100 mg ^ 300 mg Teofillina-etilendiammina supposte
Amitriptilina compresse rivestite 10 mg Amitriptilina compresse rivestite
Ammonio cloruro soluzione da diluire 3 mEq/ml Ammonio cloruro concentrato sterile
Amoxicillina capsule 250 mg ^ 500 mg Amoxicillina capsule
Amoxicillina compresse 1 g Amoxicillina compresse
Amoxicillina triidrato granulato per la preparazione di Amoxicillina granulato per sospensione orale
una sospensione (2,5 per cento e 5 per cento di amo-
xicillina) per uso orale
Ampicillina capsule 250 mg ^ 500 mg Ampicillina capsule
Ampicillina sodica polvere sterile per preparazioni Ampicillina sodica preparazione iniettabile
iniettabili 250 mg ^ 500 mg ^ 1000 mg
Anfifila crema base Anfifila crema base
Antazolina e nafazolina soluzione oftalmica di antazolina Antazolina e nafazolina collirio soluzione
solfato0,5 percentoenafazolinanitrato0,025percento
Antiacida composta polvere Alluminio ossido idrato e magnesio trisilicato polvere
per sospensione orale
Antiscottature unguento Calcio idrossido unguento
Argento nitrato soluzione oftalmica 1 per cento Argento nitrato collirio soluzione

XLII
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Argento proteinato gocce nasali 0,5 per cento ^ 1 per Argento proteinato gocce nasali
cento ^ 2 per cento
Atropina solfato compresse 0,250 mg Atropina compresse
Atropina solfato fiale 0,5 mg/1 ml ^ 1 mg/1 ml Atropina preparazione iniettabile
Atropina solfato pomata oftalmica 0,5 per cento p/p Atropina preparazione oftalmica semisolida

isilanA id
idoteM
Atropina solfato soluzione oftalmica 0,5 per cento ^ Atropina collirio soluzione
1 per cento
Bacitracina e polimixina pomata oftalmica di bacitra- Bacitracina e polimixina preparazione oftalmica semi-
cina 500 U.I./g e polimixina B solfato 10.000 U.I./g solida
Bacitracina e polimixina unguento di bacitracina Bacitracina e polimixina unguento

irotinetnoC
/ ilairetaM
500 U.I./g e polimixina B solfato 30.000 U.I./g
Bagno oculare soluzione Acido borico bagno oculare
Balsamico per adulti unguento Canfora, eucaliptolo e mentolo unguento
Balsamico per bambini unguento Eucalipto e pino silvestre unguento
Benzalconio cloruro soluzione concentrata 1 per cento Benzalconio concentrato per soluzione cutanea

ivittaeR
Benzile benzoato unguento 20 per cento Benzile benzoato unguento
Benzilpenicillina benzatinica polvere sterile per prepa- Benzilpenicillina benzatinica preparazione iniettabile
razioni iniettabili 600.000 U.I. 1.200.000 U.I.
Benzilpenicillina potassica polvere sterile per prepara- Benzilpenicillina potassica preparazione iniettabile
zioni iniettabili 1.000.000 U.I.

itnemogrA
ilareneG
Benzoile perossido crema 5 per cento ^ 10 per cento Benzoile perossido crema
Betametasone dipropionato crema 0,05 per cento Betametasone preparazione semisolida per applica-
zione cutanea
Betametasone dipropionato 0,05 per cento e neomicina
solfato 0,5 per cento crema Betametasone e neomicina preparazione semisolida per

eifargonoM

ilareneG
Betametasone dipropionato 0,05 per cento e neomicina applicazione cutanea
solfato 0,5 per cento unguento
Betametasone dipropionato unguento 0,05 per cento Betametasone preparazione semisolida per applica-
zione cutanea

ehcituecamraF
Blu di metilene fiale 50 mg/5 ml ^ 100 mg/10 ml Metiltioninio preparazione iniettabile

emroF
Blu di metilene soluzione 1 per cento Metiltioninio soluzione cutanea
Bromosulfoftaleina sodica fiale 500 mg/10 ml Bromosulfoftaleina preparazione iniettabile
Calcio carbonato e magnesio idrossido compresse 500 Calcio carbonato e magnesio idrossido compresse
mg calcio carbonato e 150 mg magnesio idrossido
Calcio cloruro fiale da diluire 500 mg/10 ml ^ 1 g/10 ml Calcio cloruro concentrato sterile
eiretaM

emirP
Calcio cloruro soluzione da diluire 0,5 mEq/ml
Calcio e magnesio cloruro soluzione da diluire 1 mEq/ml Calcio cloruro e magnesio cloruro concentrato sterile
Calcio edetato bisodico fiale da diluire 1 g/10 ml Sodio calcio edetato concentrato sterile
ehcituecamraF

Calcio gluconato fiale 500 mg/5 ml ^ 1000 mg/10 ml Calcio gluconato preparazione iniettabile
inoizaraperP

ehcificepS

Canfora soluzione idroalcoolica 10 per cento Canfora soluzione cutanea

Canfora soluzione oleosa 10 per cento Canfora soluzione cutanea oleosa
Canforata crema 10 per cento Canfora crema
Canfosalicilica crema Canfora e metile salicilato crema
ehcitapoemO
inoizaraperP

Carbone adsorbente antiacido polvere Carbone e alluminio ossido idrato polvere per sospen-
sione orale
Carbone attivo polvere Carbone polvere per sospensione orale
Carbone composto compresse Carbone composto compresse
Cefalexina capsule 250 mg ^ 500 mg Cefalexina capsule
Cefalexina compresse 1 g Cefalexina compresse
ecidnI

Cefalexina granulato per la preparazione di una Cefalexina granulato per sospensione orale
sospensione (5 per cento) di cefalexina per uso orale

XLIII
VI. Contenuto della XI Edizione

Cefalotina sodica polvere sterile per preparazioni iniet- Cefalotina preparazione iniettabile
tabili 1000 mg
Cetomacrogol crema base
Cetomacrogol crema base grassa Macrogol cetostearile etere crema e unguento base
Cetomacrogol unguento base
Cetrimide soluzione concentrata 40 per cento Cetrimide concentrato per soluzione cutanea
Chinidina solfato compresse 200 mg Chinidina solfato compresse
Chinina cloridrato fiale da diluire 500 mg/2 ml Chinina cloridrato concentrato sterile
Chinina solfato compresse rivestite 250 mg Chinina solfato compresse rivestite
Citrato di magnesia effervescente granulato Magnesio carbonato e acido citrico granulato efferve-
scente per soluzione orale
Clofenotano polvere aspersoria 10 per cento Clofenotano polvere cutanea
Cloramfenicolo capsule 250 mg Cloramfenicolo capsule
Cloramfenicolo palmitato sciroppo 2,5 per cento Cloramfenicolo palmitato sciroppo
Cloramfenicolo pomata oftalmica 1 per cento Cloramfenicolo unguento oftalmico
Cloramfenicolo sodio succinato polvere sterile per pre- Cloramfenicolo sodio succinato preparazione iniet-
parazioni iniettabili 1 g tabile
Cloramfenicolo soluzione oftalmica 0,5 per cento Cloramfenicolo collirio soluzione
Clordiazepossido cloridrato compresse rivestite 20 mg Clordiazepossido compresse rivestite
Clorochina bifosfato compresse 250 mg Clorochina fosfato compresse
Clorpromazina cloridrato compresse rivestite 25 mg ^ Clorpromazina compresse rivestite
100 mg
Clorpromazina cloridrato fiale 25 mg/2 ml Clorpromazina preparazione iniettabile
Clorpromazina cloridrato sciroppo 50 mg/10 ml Clorpromazina sciroppo
Clorpropamide compresse 250 mg Clorpropamide compresse
Cloxacillina capsule 250 mg ^ 500 mg Cloxacillina capsule
Cloxacillina sodica granulato per la preparazione di una Cloxacillina granulato per soluzione orale
soluzione (2,5 per cento) di cloxacillina per uso orale
Cloxacillina sodica polvere sterile per preparazioni Cloxacillina preparazione iniettabile
iniettabili 500 mg
Codeina fosfato capsule 60 mg Codeina capsule
Codeina fosfato compresse 30 mg ^ 60 mg Codeina compresse
Codeina fosfato e paracetamolo capsule 30 mg codeina Codeina e paracetamolo capsule
fosfato e 325 mg paracetamolo
Codeina fosfato e paracetamolo compresse 30 mg Codeina e paracetamolo compresse
codeina fosfato e 325 mg paracetamolo
Codeina fosfato e sodio benzoato sciroppo di codeina Codeina e sodio benzoato sciroppo
fosfato 0,15 per cento e sodio benzoato 1 per cento
Colchicina compresse 0,5 mg Colchicina compresse
Cortisone acetato compresse 25 mg Cortisone compresse
Cristal violetto soluzione 1 per cento Metilrosanilinio cloruro soluzione cutanea
Desametasone compresse 0,5 mg Desametasone compresse
Destrometorfano bromidrato compresse boccali masti- Destrometorfano bromidrato compresse masticabili
cabili 7,65 mg
Destrometorfano bromidrato gocce 1,5 per cento Destrometorfano bromidrato gocce orali
Destrometorfano bromidrato sciroppo 0,3 per cento Destrometorfano bromidrato sciroppo
Dexpantenolo composto crema Dexpantenolo composto crema
Dexpantenolo crema 5 per cento Dexpantenolo crema
Dexpantenolo crema grassa 5 per cento Dexpantenolo crema idrofoba
Diazepam compresse rivestite 5 mg Diazepam compresse rivestite
Diazepam fiale 10 mg/2 ml Diazepam preparazione iniettabile
Difenidramina cloridrato compresse 25 mg Difenidramina compresse

XLIV
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Difenidramina cloridrato sciroppo 0,25 per cento Difenidramina sciroppo
Digitossina compresse 0,10 mg Digitossina compresse
Digitossina fiale 0,10 mg/1 ml ^ 0,25 mg/1 ml Digitossina preparazione iniettabile
Digossina compresse 0,125 mg ^ 0,250 mg Digossina compresse
Digossina fiale 0,10 mg/1 ml ^ 0,25 mg/1 ml Digossina preparazione iniettabile

isilanA id
idoteM
Dimenidrinato compresse 50 mg Dimenidrinato compresse
Dimeticone capsule 40 mg ^ 80 mg Dimeticone capsule
Dimeticone crema 10 per cento Dimeticone crema
Dopamina fiale da diluire 10 mg/2 ml ^ 50 mg/10 ml Dopamina concentrato sterile
Doxiciclina capsule 100 mg Doxiciclina capsule

irotinetnoC
/ ilairetaM
Efedrina cloridrato compresse 25 mg Efedrina compresse
Efedrina cloridrato fiale 10 mg/1 ml ^ 25 mg/ 1 ml Efedrina preparazione iniettabile
Elettrolitica di mantenimento con glucosio soluzione Elettrolitica di mantenimento con glucosio infusione
perfusionale endovenosa
Elettrolitica equilibrata enterica soluzione perfusionale Elettrolitica equilibrata enterica infusione endovenosa

ivittaeR
Elettrolitica equilibrata gastrica con glucosio al 10 per Elettrolitica equilibrata gastrica con glucosio al 10 per
cento soluzione perfusionale cento infusione endovenosa
Elettrolitica equilibrata gastrica soluzione perfusionale Elettrolitica equilibrata gastrica infusione endovenosa
Elettrolitica equilibrata pediatrica soluzione perfu- Elettrolitica equilibrata pediatrica infusione endove-
sionale nosa

itnemogrA
ilareneG
Elettrolitica reidratante con glucosio e calcio gluconato Elettrolitica reidratante con glucosio e calcio gluconato
soluzione perfusionale infusione endovenosa
Elettrolitica reidratante I soluzione perfusionale Elettrolitica reidratante I infusione endovenosa
Elettrolitica reidratante III con glucosio soluzione per- Elettrolitica reidratante III con glucosio infusione
fusionale endovenosa

eifargonoM

ilareneG
Elettrolitica reidratante III soluzione perfusionale Elettrolitica reidratante III infusione endovenosa
Elettrolitica bilanciata di mantenimento con glucosio I
Elettrolitiche bilanciate di mantenimento con glucosio infusione endovenosa
soluzioni perfusionali I ^ II Elettrolitica bilanciata di mantenimento con glucosio II

ehcituecamraF
infusione endovenosa

emroF
Emetina cloridrato fiale 20 mg/1 ml Emetina preparazione iniettabile
Ergometrina maleato compresse 0,5 mg Ergometrina compresse
Ergometrina maleato fiale 0,20 mg/1 ml Ergometrina preparazione iniettabile
Ergotamina tartrato compresse 1 mg Ergotamina compresse
Ergotamina tartrato fiale 0,25 mg/1 ml Ergotamina preparazione iniettabile
eiretaM

emirP
Eritromicina crema 3 per cento Eritromicina crema
Eritromicina etilsuccinato granulato per la prepara- Eritromicina etilsuccinato granulato per sospensione
zione di una sospensione (2,5 per cento e 4 per cento orale
di eritromicina) per uso orale
ehcituecamraF
inoizaraperP

Eritromicina lattobionato polvere sterile per prepara- Eritromicina lattobionato preparazione iniettabile
ehcificepS

zioni iniettabili 500 mg ^ 1 g

Eritromicina lozione 2 per cento ^ 3 per cento Eritromicina soluzione cutanea
Eritromicina stearato compresse rivestite 250 mg Eritromicina stearato compresse rivestite con film
Etambutolo cloridrato compresse rivestite 200 mg ^ 400 mg Etambutolo compresse rivestite
ehcitapoemO
inoizaraperP

Eucalipto composto gocce nasali Eucalipto composto gocce nasali

Fenilbutazone compresse rivestite 200 mg Fenilbutazone compresse rivestite
Fenilbutazone supposte 250 mg Fenilbutazone supposte
Fenilefrina cloridrato e idrocortisone acetato gocce Fenilefrina e idrocortisone gocce nasali sospensione
nasali di fenilefrina cloridrato 0,3 per cento e idro-
cortisone acetato 0,5 per cento
ecidnI

Fenilefrina cloridrato gocce nasali 0,25 per cento Fenilefrina gocce nasali soluzione
Fenilefrina cloridrato soluzione oftalmica 1 per cento Fenilefrina collirio soluzione

XLV
VI. Contenuto della XI Edizione

Fenitoina sciroppo 0,6 per cento p/v Fenitoina sciroppo

Fenitoina sodica compresse 100 mg Fenitoina compresse
Fenobarbitale compresse 20 mg ^ 50 mg ^ 100 mg Fenobarbital compresse
Fenobarbitale elisir 0,55 per cento Fenobarbital sodico liquido per uso orale
Fenobarbitale sodico fiale 30 mg/1 ml ^ 100 mg/2 ml Fenobarbital sodico preparazione iniettabile
Fenobarbitale supposte 20 mg ^ 85 mg Fenobarbital supposte
Fenolo soluzione 1 per cento Fenolo soluzione cutanea
Fenolsulfonftaleina fiale 6 mg/1 ml Fenolsulfonftaleina preparazione iniettabile
Fenossimetilpenicillina compresse 125 mg ^ 500 mg Fenossimetilpenicillina compresse
Fenossimetilpenicillina potassica granulato per la pre- Fenossimetilpenicillina granulato per soluzione orale
parazione di una soluzione (2,5 per cento) di fenossime-
tilpenicillina potassica per uso orale
Ferroso solfato compresse rivestite 200 mg Ferroso solfato compresse rivestite
Fisostigmina salicilato fiale 1 mg/1 ml Fisostigmina preparazione iniettabile
Fluoresceina sodica soluzione oftalmica 0,5 per cento Fluoresceina collirio soluzione
^ 1 per cento
Fosfato sodico acido clisma Sodio fosfato soluzione rettale
Fruttosio soluzioni perfusionali 5 ^ 10 ^ 20 per cento Fruttosio infusione endovenosa
Ftalilsulfatiazolo compresse 500 mg Ftalilsulfatiazolo compresse
Furosemide compresse 25 mg Furosemide compresse
Furosemide fiale 20 mg/2 ml Furosemide preparazione iniettabile
Gengivario soluzione Mirra e ratania soluzione gengivale
Gentamicina solfato fiale 40 mg ^ 80 mg/2 ml Gentamicina preparazione iniettabile
Glicerina fenica gocce auricolari 1 per cento Fenolo gocce auricolari
Glicerina ittiolata gocce auricolari Ictammolo gocce auricolari soluzione
Glicerina unguento 15 per cento ^ 20 per cento Glicerolo unguento
Glicerolo con sodio cloruro soluzione perfusionale di Glicerolo con sodio cloruro infusione endovenosa
glicerolo 10 per cento e sodio cloruro 0,9 per cento
Glicerolo microclismi Glicerolo soluzione rettale
Glicerolo supposte 750 mg ^ 1000 mg ^ 1500 mg ^ 2500 mg Glicerolo supposte
Glicina e mannitolo soluzione per irrigazione glicina Glicina e mannitolo soluzione per irrigazione
1 per cento e mannitolo 1 per cento
Glicina soluzione 1,5 per cento Glicina soluzione per irrigazione
Glucosio con potassio cloruro soluzioni perfusio- Glucosio con potassio cloruro infusione endovenosa
nali I ^ II
Glucosio con sodio cloruro soluzioni perfusionali I ^ Glucosio con sodio cloruro infusione endovenosa
II ^ III
Glucosio fiale 5 ^ 10 ^ 20 ^ 33 per cento Glucosio preparazioni parenterali
Glucosio gel oftalmica 35 per cento Glucosio gel oftalmico
Glucosio soluzioni perfusionali 5 ^ 10 ^ 20 ^ 30 ^ 33 ^ Glucosio preparazioni parenterali
50 ^ 70 per cento
Griseofulvina compresse 125 mg ^ 250 mg Griseofulvina compresse
Idroclorotiazide compresse 25 mg ^ 50 mg Idroclorotiazide compresse
Idrocortisone acetato crema 1 per cento Idrocortisone preparazione semisolida per applicazione
Idrocortisone acetato unguento 1 per cento cutanea
Idrocortisone acetato pomata oftalmica 1 per cento ^ Idrocortisone preparazione oftalmica semisolida
2 per cento
Idrocortisone acetato 1,0 per cento e neomicina solfato
0,5 per cento crema Idrocortisone e neomicina preparazione semisolida per
Idrocortisone acetato 1,0 per cento e neomicina solfato applicazione cutanea
0,5 per cento unguento

XLVI
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Idrocortisone acetato 1,0 per cento e neomicina solfato 0,5 Idrocortisone e neomicina preparazione oftalmica
per cento pomata oftalmica semisolida
Idrocortisone acetato sospensione 1,5 per cento in solu- Idrocortisone e neomicina collirio sospensione
zione di neomicina solfato 0,5 per cento
Idroxocobalamina liofilizzato 100 ^ 1000 ^ 5000 g con Idroxocobalamina polvere per preparazione iniettabile

isilanA id
idoteM
l

diluente
Imipramina cloridrato compresse rivestite10 mg ^ 25 mg Imipramina compresse rivestite
Iodio soluzione alcoolica I Iodio soluzione cutanea
Iodio soluzione alcoolica II Iodio soluzione orale

irotinetnoC
Iodio soluzione glicerica Iodio e glicerolo soluzione

/ ilairetaM
Iodio-salicilica soluzione idroalcoolica Iodio e acido salicilico soluzione cutanea
Iodo-iodurato unguento Iodio unguento
Iodopovidone soluzione 10 per cento Povidone-iodio soluzione cutanea
Iodopovidone unguento 10 per cento Povidone-iodio unguento
Ipecacuana sciroppo emetico 7 per cento Ipecacuana sciroppo emetico

ivittaeR
Isoniazide compresse 100 mg ^ 200 mg Isoniazide compresse
Isoniazide sciroppo 1 per cento Isoniazide sciroppo
Isoprenalina cloridrato fiale 0,2 mg/1 ml Isoprenalina preparazione iniettabile
Ittiolo unguento 10 per cento ^ 20 per cento Ictammolo unguento
Ittiolo unguento lavabile 10 per cento ^ 20 per cento Ictammolo unguento emulsionante

itnemogrA
ilareneG
Lanolina alcooli crema base Alcooli di lanolina crema e unguento base
Lanolina alcooli unguento base
Lanovaselina unguento base Vaselina e lanolina unguento base

eifargonoM
Lidocaina cloridrato crema 2 per cento

ilareneG
Lidocaina cloridrato unguento 2 per cento Lidocaina preparazione semisolida per applicazione
cutanea
Lidocaina cloridrato 1,5 per cento e idrocortisone ace-
tato 1 per cento crema Lidocaina e idrocortisone preparazione semisolida per

ehcituecamraF
Lidocaina cloridrato 1,5 per cento e idrocortisone ace- applicazione cutanea

emroF
tato 1,0 per cento unguento
Lidocaina cloridrato fiale 50 mg/5 ml ^ 200 mg/ 10 ml Lidocaina preparazione iniettabile
Limonata citro-magnesiaca compresse Magnesio carbonato e acido citrico compresse
Limonata citro-magnesiaca polvere Magnesio carbonato e acido citrico polvere per solu-
zione orale
eiretaM

emirP
Litio carbonato capsule 300 mg Litio carbonato capsule
Litio carbonato compresse 300 mg Litio carbonato compresse
Magnesio cloruro soluzione da diluire 0,5 mEq/ml Magnesio cloruro concentrato sterile
Magnesio idrossido compresse masticabili 300 mg Magnesio idrossido compresse masticabili
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Magnesio solfato fiale da diluire 1 g/10 ml ^ 2 g/10 ml

^ 2,5 g/10 ml Magnesio solfato concentrato sterile
Magnesio solfato soluzione da diluire 2 mEq/ml
Mannitolo con sodio cloruro soluzione perfusionale Mannitolo e sodio cloruro infusione endovenosa
ehcitapoemO
inoizaraperP

mannitolo 5 per cento e sodio cloruro 0,45 per cento

Mannitolo e sorbitolo soluzione mannitolo 0,54 per Mannitolo e sorbitolo soluzione per irrigazione
cento e sorbitolo 2,7 per cento
Mannitolo soluzioni perfusionali 5 ^ 10 ^ 18 per cento Mannitolo infusione endovenosa
Matita al nitrato d'argento Argento nitrato matita cutanea
Merbromina soluzione 2 per cento Merbromina soluzione cutanea
ecidnI

Mercurio ossido giallo pomata oftalmica 1 per cento ^ Mercurio ossido giallo preparazione oftalmica semi-
2 per cento solida

XLVII
VI. Contenuto della XI Edizione

Metadone cloridrato sciroppo 0,1 per cento Metadone sciroppo

Metile salicilato unguento Metile salicilato unguento
Metilprednisolone compresse 4 mg ^ 8 mg Metilprednisolone compresse
Metronidazolo compresse 250 mg Metronidazolo compresse
Metronidazolo compresse vaginali 500 mg Metronidazolo compresse vaginali
Morfina cloridrato e atropina solfato fiale 10 mg e 0,5 Morfina cloridrato e atropina preparazione iniettabile
mg/1 ml
Morfina cloridrato fiale 10 mg/1 ml ^ 20 mg/1 ml Morfina cloridrato preparazione iniettabile
Morfina cloridrato sciroppo 0,1 ^ 1 ^ 2 per cento Morfina cloridrato sciroppo
Morfina solfato compresse 20 mg 40 mg ^ 60 mg Morfina solfato compresse
Nafazolina nitrato soluzione oftalmica 0,025 per cento Nafazolina collirio soluzione
Naloxone cloridrato fiale 0,04 mg/2 ml ^ 0,4 mg/1 ml Naloxone preparazione iniettabile
Neomicina solfato pomata oftalmica 0,5 per cento Neomicina preparazione oftalmica semisolida
Neomicina solfato soluzione oftalmica 0,5 per cento Neomicina collirio soluzione
Nicotinamide compresse 250 mg Nicotinamide compresse
Nistatina compresse rivestite 500.000 U.I. Nistatina compresse rivestite
Nistatina sciroppo 100.000 U.I. Nistatina sciroppo
Nitrofurantoina compresse 50 mg Nitrofurantoina compresse
Nitrofurantoina sciroppo 0,5 per cento Nitrofurantoina sciroppo
Nitrofurazone compresse vaginali 50 mg Nitrofural compresse vaginali
Nitroglicerina compresse boccali 0,5 mg Nitroglicerina compresse sublinguali
Noradrenalina tartrato fiale da diluire 2 mg/1 ml Noradrenalina concentrato sterile
Odontalgiche gocce dentali Eugenolo e clorobutanolo soluzione dentale
Oleo-calcareo linimento Calcio idrossido emulsione cutanea
Olio di mandorla con zinco unguento Zinco ossido e olio di mandorla unguento
Olio di ricino capsule 1 g Olio di ricino capsule
Olio di vaselina emulsione 40 per cento Paraffina liquida emulsione
Olio e zinco ossido linimento Zinco ossido sospensione cutanea
Olio gomenolato gocce nasali 1 per cento ^ 2 per cento Niaouli essenza gocce nasali
Omatropina bromidrato soluzione oftalmica 2 per cento Omatropina collirio soluzione
Papaverina cloridrato fiale 30 mg/2 ml ^ 50 mg/3 ml Papaverina preparazione iniettabile
Paracetamolo compresse 500 mg Paracetamolo compresse
Paracetamolo elisir 2,5 per cento Paracetamolo sciroppo
Paracetamolo supposte 400 mg Paracetamolo supposte
Pasta di Lassar Zinco ossido e acido salicilico pasta cutanea
Pasta molle di Unna Zinco ossido e glicerolo pasta cutanea
Pentamidina isetionato polvere sterile per preparazioni Pentamidina preparazione iniettabile
iniettabili 200 mg
Petidina cloridrato fiale 100 mg/2 ml Petidina preparazione iniettabile
Pilocarpina cloridrato pomata oftalmica 1 per cento ^ 2 Pilocarpina preparazione oftalmica semisolida
per cento ^ 4 per cento
Pilocarpina cloridrato soluzione oftalmica 1 per cento Pilocarpina collirio soluzione
^ 2 per cento ^ 4 per cento
Pino composto soluzione concentrata Pino composto soluzione per suffumigi
Piperazina adipato capsule 300 mg Piperazina capsule
Pirimetamina compresse 25 mg Pirimetamina compresse
Polietilenglicoli unguento base Macrogol unguento base
Potassio acetato soluzione da diluire 3 mEq/ml Potassio acetato concentrato sterile
Potassio cloruro soluzione da diluire 2 mEq/ml ^ Potassio cloruro concentrato sterile
3 mEq/ml
Potassio cloruro soluzione orale 10 per cento p/v Potassio cloruro soluzione orale
Potassio fosfato monobasico compresse 500 mg Potassio fosfato monobasico compresse

XLVIII
 VI. Contenuto della XI Edizione

inoizircserP

ilareneG
Potassio fosfato soluzione da diluire 2 mEq/ml Potassio fosfato concentrato sterile
Potassio iodato compresse 170 mg Potassio iodato compresse
Potassio ioduro compresse 130 mg Potassio ioduro compresse
Potassio ioduro gocce 50 per cento Potassio ioduro gocce
Potassio lattato soluzione da diluire 2 mEq/ml Potassio lattato concentrato sterile

isilanA id
idoteM
Potassio permanganato compresse 100 mg ^ 250 mg Potassio permanganato compresse per soluzione
(per soluzioni ad uso esterno) cutanea
Primachina fosfato compresse rivestite 132 mg (equiva- Primachina compresse rivestite
lente a 75 mg di base)
Probenecid compresse 500 mg Probenecid compresse

irotinetnoC
/ ilairetaM
Procainamide cloridrato compresse 250 mg Procainamide compresse
Procainamide cloridrato fiale 500 mg/5 ml Procainamide preparazione iniettabile
Prometazina cloridrato compresse rivestite 25 mg Prometazina compresse rivestite
Prometazina crema 2 per cento Prometazina crema
Propifenazone compresse 300 mg Propifenazone compresse

ivittaeR
Propifenazone supposte 50 mg ^ 150 mg ^ 350 mg Propifenazone supposte
Reserpina compresse 0,1 mg Reserpina compresse
Rifampicina capsule 150 mg ^ 300 mg Rifampicina capsule
Rifampicina sciroppo 2 per cento Rifampicina sciroppo
Ringer acetato soluzione perfusionale Ringer acetato infusione endovenosa

itnemogrA
ilareneG
Ringer lattato soluzione perfusionale Ringer lattato infusione endovenosa
Ringer soluzione perfusionale Ringer infusione endovenosa
Rinobalsamiche gocce nasali Niaouli essenza e mentolo gocce nasali
Sali per reidratazione orale con glucosio polveri per uso Sali e glucosio polvere orale
orale A-B

eifargonoM

ilareneG
Salicilico unguento 2 per cento ^ 5 per cento ^ Acido salicilico unguento
10 per cento
Sciroppo semplice Saccarosio sciroppo
Scopolamina bromidrato fiale 0,25 mg/1 ml Scopolamina preparazione iniettabile

ehcituecamraF
Senna composta polvere Senna composta polvere orale
Sodio acetato soluzione da diluire 3 mEq/ml Sodio acetato concentrato sterile

emroF
Sodio bicarbonato compresse 500 mg Sodio bicarbonato compresse
Sodio bicarbonato soluzione da diluire 1 mEq/ml Sodio bicarbonato concentrato sterile
Sodio bicarbonato soluzioni perfusionali 1,4 ^ 5 ^ 7,5 Sodio bicarbonato infusione endovenosa
^ 8,4 per cento

eiretaM
Sodio carbonato gocce auricolari 6 per cento Sodio carbonato gocce auricolari

emirP
Sodio citrato compresse 500 mg Sodio citrato compresse
Sodio citrato e acido citrico fiale 1 g e 600 mg/10 ml Sodio citrato e acido citrico preparazione iniettabile
Sodio citrato fiale 38 mg/1 ml ^ 76 mg/2 ml ^ 190 mg/ Sodio citrato preparazione iniettabile
ehcituecamraF

5 ml ^ 380 mg/10 ml
inoizaraperP

ehcificepS

Sodio citrato soluzione da diluire 6,16 mEq/ml Sodio citrato concentrato sterile
Sodio cloruro fiale 18 mg/2 ml ^ 45 mg/5 ml ^ 90 mg/
10 ml ^ 180 mg/20 ml Sodio cloruro infusione endovenosa
Sodio cloruro soluzioni perfusionali 0,9 ^ 3 ^ 5 per cento
ehcitapoemO
inoizaraperP

Sodio cloruro gocce nasali 0,9 per cento Sodio cloruro gocce nasali soluzione
Sodio cloruro gocce nasali viscose 0,9 per cento
Sodio cloruro soluzioni da diluire 2 mEq/ml ^ 3 mEq/ml Sodio cloruro concentrato sterile
Sodio edetato fiale da diluire 0,5 g/5 ml ^ 2 g/10 ml Sodio edetato concentrato sterile
Sodio fluoruro compresse 0,55 mg e 2,2 mg (equivalenti Sodio fluoruro compresse
a 0,25 mg e 1 mg di fluoro)
ecidnI

Sodioindigotindisolfonatofiale40mg/10ml^ 80mg/5 ml Sodio indigotindisolfonato preparazione iniettabile

XLIX
VI. Contenuto della XI Edizione

Sodio lattato soluzioni da diluire 2 mEq/ml ^ 3 mEq/ml Sodio lattato concentrato sterile
Sodio nitroprussiato fiale da diluire 100 mg/5 ml Sodio nitroprussiato concentrato sterile
Sodio nitroprussiato polvere per preparazioni inietta- Sodio nitroprussiato polvere e solvente per prepara-
bili 100 mg zione iniettabile
Sodio salicilato compresse gastroresistenti 500 mg Sodio salicilato compresse gastroresistenti
Sodio stibogluconato soluzione iniettabile 33 per cento Sodio stibogluconato preparazione iniettabile
equivalente a 10 per cento di antimonio 30 ml e
100 ml
Sodio tiosolfato fiale da diluire 1000 mg/10 ml Sodio tiosolfato concentrato sterile
Sodio tiosolfato soluzione perfusionale 25 per cento Sodio tiosolfato infusione endovenosa
Solfo-alcalino unguento Zolfo e potassio carbonato unguento
Solfo-salicilico unguento Zolfo e acido salicilico unguento
Soluzione cardioplegica Soluzione per circolazione extracorporea
Soluzione polisalinica concentrata con potassio solu- Soluzione polisalinica con potassio concentrato sterile
zioni da diluire I ^ II
Soluzione polisalinica concentrata senza potassio solu- Soluzione polisalinica senza potassio concentrato
zione da diluire sterile
Soluzione salina per reidratazione orale soluzione orale Elettrolitica reidratante soluzione orale
Streptomicina solfato polvere sterile per preparazioni Streptomicina preparazione iniettabile
iniettabili 1000 mg
Sulfacetamide sodica pomata oftalmica 10 per cento Sulfacetamide preparazione oftalmica semisolida
Sulfacetamide sodica soluzione oftalmica 10 per cento Sulfacetamide collirio soluzione
Sulfadiazina compresse 500 mg Sulfadiazina compresse
Sulfadiazina sodica fiale da diluire 250 mg/l ml Sulfadiazina concentrato sterile
Sulfadimetossina compresse 500 mg Sulfadimetoxina compresse
Sulfametopirazina compresse 500 mg Sulfametopirazina compresse
Sulfametopirazina sciroppo 5 per cento Sulfametopirazina sciroppo
Talco allo zinco ossido polvere aspersoria 10 per cento Zinco ossido polvere cutanea
Talco mentolato polvere aspersoria 1 per cento Mentolo polvere cutanea
Talco timolato polvere aspersoria Zinco ossido composto polvere cutanea
Tetracaina cloridrato supposte 15 mg Tetracaina supposte
Tetraciclina cloridrato capsule 250 mg Tetraciclina capsule
Tetraciclina cloridrato polvere sterile per preparazioni Tetraciclina preparazione iniettabile
iniettabili 250 mg
Tiabendazolo compresse 500 mg Tiabendazolo compresse
Tiopentale sodico polvere sterile per preparazioni iniet- Tiopentale sodico preparazione iniettabile
tabili 0,5 g ^ 1 g ^ 1,5 g
Tioridazina cloridrato compresse rivestite 25 mg ^ 50 mg Tioridazina compresse rivestite
Tolbutamide compresse 500 mg Tolbutamide compresse
Trifluoperazina cloridrato compresse rivestite 2 mg Trifluoperazina compresse rivestite
Valeriana capsule 50 mg Valeriana capsule
Vaselina borica unguento 3 per cento Acido borico unguento
Vitamine del complesso B compresse rivestite Vitamine B compresse rivestite
Zinco all'acqua pasta Zinco ossido pasta cutanea
Zinco ossido unguento 10 per cento Zinco ossido unguento
Zinco solfato compresse 200 mg Zinco solfato compresse
Zinco solfato soluzione oftalmica 0,5 per cento Zinco solfato collirio soluzione
TESTI NUOVI

Base per emulsione cutanea

Basi per preparazioni liquide per uso orale
Gel base per preparazione semisolida per applicazione
cutanea

L
 ecidnI
ilareneG isilanA id irotinetnoC ilareneG emirP ehcificepS ehcitapoemO
ilareneG ehcituecamraF
ivittaeR ehcituecamraF
inoizircserP idoteM / ilairetaM itnemogrA eifargonoM emroF eiretaM inoizaraperP
inoizaraperP
CAPITOLI GENERALI
 1. Prescrizioni generali

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
1.1. Prescrizioni generali della Farmaco- 1.FU. Prescrizioni generali della Farmaco-

idoteM
pea Europea . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 pea Ufficiale . . . . . . . . . . . . . . . . 16
1.1.1. Generalita© . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 1.FU.1. Monografie di preparazioni farma-
1.1.2. Altre disposizioni relative ai capitoli ceutiche specifiche . . . . . . . . . . . . 16
generali e monografie . . . . . . . . . 6 1.FU.2. Gas medicinali . . . . . . . . . . . . . . . . . 17

irotinetnoC
/ ilairetaM
1.1.3. Capitoli generali . . . . . . . . . . . . . . . 7 1.FU.3. Droghe vegetali . . . . . . . . . . . . . . . . 17
1.1.4. Monografie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 1.FU.4. Abbreviazioni . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
1.1.5. Abbreviazioni e simboli . . . . . . . . . . 11 1.FU.5. Sinonimi ed espressioni . . . . . . . . . . 17
1.1.6. Unita© del Sistema Internazionale
(S.I.) utilizzate nella Farmacopea
e corrispondenza con altre unita© 12

ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI
 Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

inoizircserP

ilareneG
1. PRESCRIZIONI GENERALI

isilanA id
idoteM
Le Prescrizioni Generali della Farmacopea Euopea si Salvo indicazione contraria nelle Prescrizioni Generali
applicano a tutte le monografie e gli altri testi che costi- o nelle monografie, le specifiche delle monografie costi-
tuiscono la Farmacopea Ufficiale della Repubblica tuiscono requisiti obbligatori. I capitoli generali diven-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Italiana (*). tano obbligatori quando citati in una monografia, a
Le monografie e i testi nazionali contenuti nella FU XI meno che il riferimento viene fatto in modo che risulti
ed. debbono soddisfare anche alle Prescrizioni generali manifesta l'intenzione di citare i testi a solo titolo di
della Farmacopea Ufficiale. informazione.

ivittaeR
Gli ingredienti attivi (le sostanze medicinali), gli ecci-
1.1. PRESCRIZIONI GENERALI DELLA pienti (le sostanze ausiliarie), le preparazioni farmaceu-
FARMACOPEA EUROPEA tiche e gli altri prodotti descritti in una monografia
sono destinati ad un uso umano o veterinario (se non
esplicitamente ristretto ad uno solo di questi usi).

itnemogrA
ilareneG
1.1.1. GENERALITAé

Un prodotto e© di qualita© ``Farmacopea'' quando e© con-

Le Prescrizioni Generali si applicano a tutte le mono- forme a tutte le specifiche descritte nella monografia.
grafie ed altri testi della Farmacopea Europea. Cio© non implica che per un fabbricante sia obbligatorio
I testi ufficiali della Farmacopea Europea sono pubbli- effettuare l'insieme dei saggi di una monografia per
cati in inglese e francese. Gli Stati firmatari della valutare la conformita© alla Farmacopea prima del rila-

eifargonoM
Convenzione per una Farmacopea Europea possono

ilareneG
scio di un prodotto. Il fabbricante puo© accertarsi che
tradurli in altre lingue. In caso di dubbio o disputa un prodotto e© di qualita© ``Farmacopea''da dati ottenuti,
si deve fare riferimento alle sole versioni inglese e per esempio, da studi di convalida del processo di pro-
francese. duzione e dei controlli in corso di produzione. La neces-
Nei testi della Farmacopea Europea, la parola ``Farma- sita© di soddisfare alle esigenze della Farmacopea non

ehcituecamraF
copea'' senza ulteriore qualificazione significa Farma- esclude la possibilita© di ricorrere ad un rilascio parame-

emroF
copea Europea. L'abbreviazione ufficiale Ph. Eur. puo© trico in circostanze ritenute appropriate dalle Autorita©
essere usata per indicare la Farmacopea Europea. competenti.
Quando per designare un prodotto si fa uso del titolo o
del sottotitolo di una monografia, il prodotto cos|© desi- I saggi e dosaggi descritti sono i metodi ufficiali a par-
gnato soddisfa alle specifiche della corrispondente tire dai quali sono basate le norme della Farmacopea.
eiretaM

emirP
monografia. I riferimenti alle monografie, nei testi della Con l'accordo della Autorita© competente possono
Farmacopea, vengono fatti indicando il titolo della essere usati, ai fini del controllo, metodi analitici alter-
monografia ed il numero di serie in corsivo. nativi a condizione che tali metodi permettano, senza
Una preparazione farmaceutica deve essere conforme equivoci, di decidere che le norme delle monografie
ehcituecamraF
inoizaraperP

sarebbero state soddisfatte qualora fossero stati usati i

ehcificepS

per l'intero periodo di validita© . Gli altri prodotti costi-

tuenti l'oggetto di una monografia devono soddisfare a metodi ufficiali. In caso di dubbio o di disputa, i metodi
questa monografia per tutta la durata della loro utiliz- di analisi della Farmacopea sono i soli riconosciuti
zazione. Il periodo di validita© attribuito ad una deter- validi.
minata preparazione ed il tempo a decorrere dal quale
ehcitapoemO
inoizaraperP

tale periodo deve essere calcolato, vengono definiti Certe sostanze che sono oggetto di una monografia
dalla Autorita© competente in base ai risultati sperimen- possono esistere in diverse qualita© appropriate per usi
tali relativi agli studi di stabilita© . differenti. Se non diversamente indicato nella monogra-
öööö
* La Farmacopea Ufficiale della Repubblica Italiana e© , oggi,
fia, le specifiche si applicano a tutte le qualita© della
costitutita dai testi di cui alla presente XI edizione nonchë dai testi sostanza. In alcune monografie, particolarmente quelle
della 4’ edizione della Farmacopea Europea, e successivi supplementi, sugli eccipienti, puo© essere messa in appendice, per
ecidnI

recepiti, direttamente in lingua inglese e francese, con appropriati informazione, una lista di proprieta© connesse con la
decreti ministeriali. funzionalita© che sono importanti per l'uso della

5
Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

sostanza stessa. Alcuni metodi per la determinazione di 1.1.2. ALTRE DISPOSIZIONI RELATIVE AI CAPI-

una o piu© di queste proprieta© possono essere presenti, TOLI GENERALI E MONOGRAFIE

egualmente a titolo di informazione.

Quantita© . Nei saggi con limiti numerici e nei dosaggi, le
Monografie generali . Le sostanze e le preparazioni che quantita© indicate, per l'esecuzione analitica, sono
sono oggetto di una singola monografia debbono essere approssimate. La quantita© realmente usata, che puo©
conformi con le specifiche delle pertinenti ed applicabili differire per non piu© del 10 per cento da quella indicata,
monografie generali. deve essere esattamente pesata o misurata; il risultato
e© calcolato in base a questa quantita© esatta. Nei saggi
Le monografie generali si applicano a tutte le sostanze e dove il limite non e© numerico, ma dipende usualmente
preparazioni nell'ambito dello scopo riportato nella dal confronto con il comportamento di una sostanza
sezione Definizione della monografia generale stessa di riferimento nelle stesse condizioni, viene utilizzata
eccetto quando un preambolo ne limita l'applicazione la quantita© indicata. I reattivi vengono utilizzati nelle
come ad esempio alle sostanze e preparazioni che sono quantita© prescritte.
l'oggetto di una monografia della Farmacopea. Le quantita© sono pesate o misurate con una accura-
Le monografie generali delle forme farmaceutiche si tezza corrispondente al grado di precisione indicato.
applicano a tutte le preparazioni del tipo in esse defi- Nel caso delle pesate, la precisione corrisponde a piu© o
nito. Le specifiche non sono necessariamente esaustive meno 5 unita© dopo l'ultima cifra indicata (ad esempio
per una data monografia; esigenze supplementari a 0,25 g deve essere interpretata come una quantita© com-
quelle prescritte nella monografia generale possono presa tra 0,245 g e 0,255 g). Per la misura dei volumi,
essere imposte dalle Autorita© competenti. se la cifra dopo il punto decimale e© zero o finisce con
uno zero (per esempio 10,0 ml o 0,50 ml), si utilizza a
. Il termine ``Autorita© compe- seconda del caso una pipetta, un pallone tarato o una
buretta; negli altri casi puo© essere impiegato un cilindro
Termini convenzionali

tenti'' indica un organismo nazionale, sopranazionale

o internazionale investito del potere decisionale per o una pipetta graduata. I volumi indicati in microlitri
l'argomento in questione. Puo© essere, ad esempio, una vengono misurati mediante una micropipetta o microsi-
autorita© della farmacopea nazionale, o una autorita© di ringa.
registrazione o del laboratorio di controllo. Eé tuttavia ammesso che, in certi casi, la precisione con
la quale le quantita© vengono indicate non corrisponda
L'espressione ``se non diversamente giustificato ed al numero di cifre significative indicato in uno specifico
autorizzato'' significa che le specifiche debbono essere limite numerico. Le pesate e le misure vengono in
rispettate a meno che, l'Autorita© competente, dopo giu- questo caso effettuate con un sufficiente grado di
stificazione autorizzi in un caso particolare una modi- accuratezza.
fica o una esenzione.
Apparecchi e procedure . La vetreria volumetrica soddi-
Espressioni presentate al condizionale (``dovrebbero'') sfa ai requisiti di Classe A delle appropriate Norme
costituiscono informazioni o consigli. Internazionali stabilite dalla Organizzazione Interna-
zionale di Normalizzazione.
In certe monografie o altri testi, i termini ``adeguato'' o Se non diversamente prescritto, le procedure analitiche
``appropriato'' sono usati per qualificare un reattivo, vengono effettuate ad una temperatura compresa tra
microrganismo, un metodo, ecc.; se i criteri di adegua- 15 ‘C e 25 ‘C.
tezza non sono descritti nella monografia, l'adegua-
tezza stessa deve essere riconosciuta dall'autorita© com- Se non diversamente prescritto, i saggi comparativi
petente. vengono effettuati in tubi identici di vetro incolore, tra-
sparente, neutro aventi un fondo piatto; i volumi di
Metodi intercambiabili . Alcuni capitoli generali conten- liquido prescritti debbono essere usati per tubi con un
gono l'affermazione che il testo in questione e© armoniz- diametro interno di 16 mm; tubi con un diametro
zato con il corrispondente testo della Farmacopea interno piu© grande possono essere usati a condizione
Giapponese e/o della Farmacopea degli Stati Uniti e che il volume di liquido usato venga adeguato (2.1.5).
che questi testi sono intercambiabili. Questo implica Volumi uguali dei liquidi da comparare vengono esami-
che se una sostanza o una preparazione risulta con- nati secondo l'asse verticale dei tubi contro un fondo
forme ad una specifica utilizzando un metodo inter- bianco o, se necessario, contro un fondo nero. L'esame
cambiabile di una di queste farmacopee essa e© con- viene effettuato con luce diffusa. Tutti i solventi impie-
forme anche con i requisiti della Farmacopea Europea. gati in un saggio o dosaggio che prevede l'uso di un

6
 Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

inoizircserP
indicatore vengono preventivamente neutralizzati in ^ per cento m/m (percentuale, massa su massa)

ilareneG
presenza di quell'indicatore, a meno che non sia esprime il numero di grammi di sostanza in 100
prescritto un saggio in bianco. grammi di prodotto finale;
Bagno maria . Il termine ``bagno-maria'' significa un ^ per cento V/V (percentuale, volume su volume)
bagno di acqua bollente a meno che non venga indicata esprime il numero di millilitri di sostanza in

isilanA id
acqua ad un'altra temperatura. Possono essere usati 100 millilitri di prodotto finale.

idoteM
altri metodi di riscaldamento a condizione che la tem- L'espressione ``parti per milione (ppm)'' si riferisce a
peratura sia vicina, ma non superiore ai 100 ‘C o alla massa su massa, se non diversamente specificato.
temperatura prescritta.
. I termini ``seccare

irotinetnoC
TEMPERATURA

/ ilairetaM
Seccare e calcinare a massa costante

a massa costante'' e ``calcinare a massa costante'' signi-

ficano che due pesate consecutive non differiscono per Quando una procedura analitica indica una tempera-
piu© di 0,5 mg; la seconda pesata viene effettuata dopo tura senza specificarla numericamente, le espressioni
un ulteriore periodo di essiccamento o calcinazione generali utilizzate hanno i seguenti significati:
appropriato alla natura e quantita© del residuo.
In congelatore: sotto - 15 ‘C

ivittaeR
Dove e© prescritto l'essiccamento utilizzando una delle
espressioni ``in essiccatore'' o ``nel vuoto'', esso viene In frigorifero: tra 2 ‘C e 8 ‘C
effettuato usando le condizioni descritte in 2.2.32. In luogo fresco: tra 8 ‘C e 15 ‘C
Perdita all'essiccamento. a temperatura ambiente tra 15 ‘C e 25 ‘C

itnemogrA
ilareneG
REATTIVI 1.1.3. CAPITOLI GENERALI

La realizzazione corretta delle procedure analitiche

descritte nella Farmacopea e la attendibilita© dei risul-
tati dipende, in parte, dalla qualita© dei reattivi usati. CONTENITORI (RECIPIENTI)

eifargonoM

ilareneG
I reattivi sono descritti nel capitolo generale 4.
Si assume che i reattivi utilizzati siano di qualita© anali- I materiali utilizzati nella fabbricazione dei contenitori
tica; per alcuni reattivi, i saggi per determinare la loro (recipienti) sono descritti nel capitolo generale 3.1.
adeguatezza sono inclusi nelle specifiche. Le denominazioni generali utilizzate per i materiali ed
in particolare per le materie plastiche, comprendono

ehcituecamraF
ciascuna una gamma di prodotti che differiscono non

emroF
SOLVENTI solo per le proprieta© del costituente principale ma
. Il termine ``soluzione'', senza indicazione anche per gli additivi usati. I metodi di analisi ed i limiti
Solventi

del solvente, indica una soluzione acquosa. Quando da applicare ai materiali dipendono dalla formulazione
l'uso dell'acqua e© prescritto o implicito per le proce- e sono percio© applicabili solo a quei materiali le cui for-
mulazioni corrispondono a quelle indicate nel pream-
eiretaM
dure analitiche descritte nella Farmacopea o per la

emirP
preparazione dei reattivi, l'acqua usata deve essere bolo delle specifiche. L'uso di materiali aventi differenti
conforme alle specifiche della monografia Acqua depu- formulazioni, i metodi di analisi ed i limiti ad essi appli-
rata (0008). Il termine ``acqua distillata'' indica acqua cati sono soggetti all'accettazione della Autorita© com-
petente. Le specifiche per i contenitori cos|© come
ehcituecamraF

depurata preparata mediante distillazione.

inoizaraperP

descritte nel capitolo generale 3 sono state elaborate in

ehcificepS

Il termine ``etanolo'' senza altra qualificazione significa vista di una loro applicazione generale ai contenitori
etanolo anidro. Il termine ``alcool'' senza qualificazione delle categorie indicate; tuttavia per la grande varieta©
significa etanolo (96 per cento V/V). Altre diluizioni di di contenitori disponibili e di possibili nuovi sviluppi,
etanolo sono indicate con il termine ``alcool'' seguito la pubblicazione di una specifica non esclude l'uso, in
ehcitapoemO
inoizaraperP

dall'indicazione della percentuale, in volume di etanolo circostanze giustificate, di contenitori che soddisfano
(C2H6O), richiesta. ad altre specifiche, previo accordo con le Autorita©
competenti.
ESPRESSIONE DEL CONTENUTO Nelle monografie della Farmacopea puo© essere fatto
riferimento alle definizioni e specifiche per i contenitori
Nel definire il contenuto, l'espressione ``per cento'' comprese in questa sezione. Le monografie generali
ecidnI

viene usata, a seconda delle circostanze, con uno dei per le forme farmaceutiche possono richiedere, nella
seguenti due significati: sezione Definizione/Produzione l'uso di certi tipi di

7
Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

contenitori; altre monografie possono indicare, nella dotto finito o su specifici lotti o su ogni lotto prima del
sezione conservazione, il tipo di contenitore che e© rac- rilascio del prodotto. Queste disposizioni possono non
comandato per l'uso. essere sempre verificabili su un campione del prodotto
finito da un analista indipendente esterno. L'Autorita©
competente puo© assicurarsi che le istruzioni sono state
1.1.4. MONOGRAFIE
seguite, per esempio, esaminando i dati ricevuti dal pro-
duttore, mediante una ispezione all'officina di produ-
zione o con saggi su appropriati campioni.
TITOLI
L'assenza di una sezione ``Produzione'' non significa
I titoli delle monografie sono redatti in francese e in che non sia richiesto di fare attenzione ai punti sopra
inglese, nelle rispettive versioni; c'e© anche un sottotitolo riferiti. Un prodotto descritto in una monografia della
in latino. Farmacopea deve essere prodotto conformemente ai
principi delle buone norme di fabbricazione e confor-
memente agli appropriati accordi internazionali, e ai
MASSE ATOMICHE E MOLECOLARI RELA- regolamenti sopranazionali e nazionali sui prodotti per
TIVE uso umano e veterinario.
La massa atomica relativa (Ar) o la massa molecolare Quando relativa
nella sezione ``Produzione'' una monografia
ad un vaccino definisce le caratteristiche del
relativa (Mr) e© indicata, se e dove appropriato, all'inizio ceppo di vaccino
di ciascuna monografia. Le masse atomiche e moleco- fermare queste da usare, tutti i saggi descritti per con-
lari relative cos|© come le formule brute e di struttura esempio di metodicaratteristiche
appropriati.
sono riportati come
non costituiscono norme analitiche per le sostanze
descritte.
CARATTERI
DEFINIZIONE Le disposizioni presenti nella sezione ``Caratteri'' non
Il contenuto della sezione ``Definizione'' costituisce una debbono essere interpretate in senso stretto në costitui-
definizione ufficiale della sostanza, preparazione o scono delle specifiche.
altro formulato oggetto della monografia. . Le indicazioni sulla solubilita© nella sezione
Solubilita©

Limiti del contenuto . I limiti del contenuto indicati sono ``Caratteri'' sono espresse in termini aventi il seguente
quelli determinati mediante il metodo descritto nel significato con riferimento ad una temperatura com-
``Dosaggio''. presa tra 15 ‘C e 25 ‘C.
Droghe vegetali . Nelle monografie delle droghe vege-
tali, la definizione indica se l'oggetto della monografia Volune approssimativo di solvente

e© , ad esempio, l'intera droga o la droga in forma di pol-

Indicazione
in millilitri per grammo di sostanza

vere. Nel caso in cui una monografia si applica alla

droga in forme diverse, per esempio alla droga come Solubilissimo meno di 1
tale o alla droga in forma di polvere, la definizione lo Molto solubile da 1 a 10
precisa chiaramente.
Solubile da 10 a 30
Moderatamente solubile da 30 a 100
PRODUZIONE Poco solubile da 100 a 1000
Le disposizioni presenti nella sezione ``Produzione'' Molto poco solubile da 1000 a 10000
richiamano l'attenzione su aspetti particolari del pro- Praticamente insolubile piu© di 10000
cesso di fabbricazione ma non sono necessariamente
esaustive. Esse costituiscono delle istruzioni ai fabbri- Il termine ``parzialmente solubile'' e© usato nel caso di
canti. Possono riferirsi, ad esempio alle materie prime, miscele di cui solo alcuni dei componenti si disciolgono.
allo stesso processo di fabbricazione, alla sua convalida Il termine ``miscibile'' e© usato per descrivere un liquido
e controllo, a saggi in corso di fabbricazione o a saggi che e© miscibile in tutte le proporzioni con il solvente
che debbono essere effettuati dal fabbricante sul pro- indicato.

8
 Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

inoizircserP
IDENTIFICAZIONE . Per

ilareneG
Indicazione del contenuto ammesso di impurezze

saggi comparativi, il contenuto approssimativo di

I saggi riportati nella sezione ``Identificazione'' non un'impurezza tollerata, o della somma delle impurezze,
sono designati per dare una conferma assoluta della puo© essere indicato a solo titolo informativo. Se non e©
struttura chimica o composizione del prodotto; essi prescritto l'impiego di una sostanza di riferimento del-

isilanA id
sono rivolti a dare la conferma, con un accettabile l'impurezza menzionata, il contenuto di questa impu-

idoteM
livello di sicurezza, che il prodotto e© conforme alla rezza puo© essere espresso come concentrazione nomi-
descrizione riportata sull'etichetta. nale della sostanza usata per preparare la soluzione di
Alcune monografie hanno una suddivisione in ``Prima riferimento specificata nella monografia, salvo indica-
identificazione'' e ``Seconda identificazione''. Il saggio zione contraria. L'accettazione o il rigetto del prodotto

irotinetnoC
/ ilairetaM
o saggi che costituiscono la ``Seconda identificazione'' in esame viene fatto sulla base della conformita© o della
possono essere usati al posto del saggio o saggi della non conformita© al saggio prescritto.
``Prima identificazione'' a condizione che possa essere . Per le droghe vegetali, le ceneri solfori-
dimostrato che la sostanza o la preparazione appar-
Droghe vegetali

che, le ceneri totali, le materie estraibili con acqua o

tenga, senza dubbio, ad un lotto con certificato di con alcool, il contenuto di oli essenziali ed il contenuto

ivittaeR
conformita© a tutte le specifiche della monografia. di principio attivo si calcolano con riferimento alla
droga cos|© come si presenta, cioe© non essiccata, salvo
indicazione contraria nella monografia.
SAGGI E DOSAGGI
. Quando in una determinazione e© indicato

itnemogrA
Equivalenti

ilareneG
Scopo . Le norme non sono definite per tener conto di un equivalente, ai fini della Farmacopea solo le cifre
tutte le possibili impurezze. Non si deve presumere, ad che lo compongono vanno utilizzate nell'applicazione
esempio, che una impurezza non rivelabile con i saggi delle prescrizioni della monografia.
prescritti viene tollerata se il senso comune e la buona
pratica farmaceutica esigono che essa sia assente. Vedi

eifargonoM

ilareneG
anche di seguito nel paragrafo Impurezze. CONSERVAZIONE
. Quando il risultato di un saggio o di un dosag-
Le informazioni e le raccomandazioni fornite nella
Calcolo

gio deve essere calcolato rispetto alla sostanza secca o

anidra o su un altro specifico riferimento, la determina- sezione ``Conservazione'' non costituiscono specifiche

ehcituecamraF
zione della perdita all'essiccamento, del contenuto in di farmacopea; le Autorita© competenti possono definire
e imporre condizioni particolari di conservazione.

emroF
acqua o altra specifica proprieta© , viene effettuata
mediante il metodo prescritto nell'appropriato saggio I prodotti descritti nella Farmacopea devono essere
della monografia. Le parole ``sostanza secca'' o conservati in condizioni che permettano di evitare
``sostanza anidra'' ecc. appaiono tra parentesi dopo il qualsiasi contaminazione e, nei limiti del possibile,
risultato. qualsiasi alterazione. Quando sono raccomandate
eiretaM

emirP
Limiti . I limiti prescritti sono basati su dati ottenuti con condizioni speciali di conservazione, compreso il tipo
la normale pratica analitica; essi tengono conto dei nor- di contenitore (1.4. Capitoli generali) e i limiti di tempe-
mali errori analitici, delle variazioni accettabili con- ratura, si trovano indicazioni specifiche nella mono-
nesse con la fabbricazione e la preparazione cos|© come grafia.
ehcituecamraF
inoizaraperP

Le seguenti espressioni vengono usate nelle mono-

ehcificepS

di un certo grado di degradazione ritenuto accettabile.

Non debbono essere applicate ulteriori tolleranze ai grafie sotto la sezione ``Conservazione'' con il seguente
limiti prescritti per determinare se il formulato esami- significato.
nato soddisfa alle specifiche della monografia. In un contenitore ermeticamente chiuso significa che un
ehcitapoemO
inoizaraperP

Nel determinare la conformita© con un limite numerico, prodotto deve essere conservato in un recipiente a
il valore calcolato di un risultato di un saggio o di un chiusura ermetica (3.2). Quando il recipiente viene
dosaggio viene arrotondato al numero di cifre significa- aperto in atmosfera di forte umidita© si dovranno pren-
tive indicate, salvo indicazioni contrarie. L'ultima cifra dere le necessarie misure precauzionali. Se necessario
viene aumentata di una unita© quando la parte eliminata si puo© ridurre il grado di umidita© nel recipiente
e© eguale o eccede una mezza unita© ; quando la parte mediante un essiccante appropriato, a condizione che
ecidnI

numerica eliminata e© inferiore ad una mezza unita© , il quest'ultimo non venga in contatto diretto con la
numero non si modifica. sostanza da conservare.

9
Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

Protetto dalla luce. Questa indicazione significa che il metaboliti naturali). Le altre impurezze rivelabili sono
prodotto deve essere conservato in un recipiente di quelle impurezze potenziali che non sono state rivelate
materiale che assorba la luce attinica in misura in nessun campione della sostanza durante l'elabora-
sufficiente per proteggere il contenuto da ogni altera- zione della monografia o che sono presenti in quantita©
zione provocata da questa; si puo© anche usare un reci- inferiori allo 0,1 per cento e che, come dimostrato,
piente chiuso messo in un involucro che assicuri una vengono controllate dai saggi della monografia stessa.
tale protezione o collocato in un luogo privo di luce
attinica.
PROPRIETA' CORRELATE ALLA FUNZIO-
NALITAé
ETICHETTE
In annesso ad una monografia puo© essere riportata, a
In generale l'etichettatura e© soggetta a normative sopra- titolo di informazione, una lista di proprieta© correlate
nazionali e nazionali e ad accordi internazionali. alla funzionalita© che non sono oggetto di specifiche
Le indicazioni riportate nella sezione ``Etichette'' non ufficiali ma che sono tuttavia importanti per l'utilizza-
sono pertanto esaustive e del resto, ai fini della Farma- zione di una sostanza (vedi 1.1. Generalita© ).
copea sono vincolanti solo quelle indicazioni necessarie
a dimostrare la conformita© o non conformita© con la
monografia stessa. Ogni altra informazione e© riportata SOSTANZE DI RIFERIMENTO, PREPARA-
come raccomandazione. Quando nella Farmacopea si ZIONI DI RIFERIMENTO E SPETTRI DI
usa il termine ``etichetta'' questo significa che le indica- RIFERIMENTO
zioni di etichettatura possono essere apposte sul conte-
nitore, sull'imballaggio o sul foglietto illustrativo che In certe monografie e© richiesto l'impiego di sostanze, di
accompagna l'imballaggio, in conformita© a quanto preparazioni o di spettri di riferimento, scelti rispetto
deciso dalla Autorita© competente. all'uso che ne e© prescritto nelle monografie della
Farmacopea e non necessariamente adatti ad altri
scopi. La Commissione Europea della Farmacopea
AVVERTENZE non puo© essere ritenuta responsabile di conseguenze
Certe sostanze descritte nelle monografie e certi reattivi derivanti da eventuali errori dovuti ad un uso diverso
il cui uso e© prescritto per i saggi e le determinazioni da quello prescritto.
della Farmacopea possono essere pericolosi per la Le sostanze di riferimento, le preparazioni di riferi-
salute se non vengono manipolati prendendo misure mento e gli spettri di riferimento relativi alle monogra-
precauzionali adeguate. E' indispensabile osservare in fie europee sono stabiliti dalla Commissione Europea
ogni momento i principi di buona pratica di laborato- della Farmacopea e si possono ottenere dal Segreta-
rio, di controllo della qualita© e le prescrizioni in vigore. riato Tecnico di Strasburgo e costituiscono i campioni
Certe monografie possono contenere un'avvertenza in ufficiali da usare in caso di controversia. Una lista delle
corsivo che attira l'attenzione del lettore su particolari sostanze di riferimento, delle preparazioni di riferi-
pericoli. L'assenza di una tale avvertenza non significa mento e degli spettri puo© essere ottenuta dal Segreta-
tuttavia che non sussista pericolo. riato Tecnico.
Materiali di riferimento diversi possono essere usati per
IMPUREZZE le analisi dette di ``routine'' purchë vengano calibrate
rispetto ai materiali di riferimento stabiliti dalla
A titolo di informazione puo© essere data una lista Commissione Europea di Farmacopea.
di tutte le impurezze, note e potenziali, che sono con- Le informazioni necessarie per l'uso corretto delle
trollate, come dimostrato, dai vari saggi di una mono- sostanze e delle preparazioni di riferimento sono ripor-
grafia. La lista puo© essere suddivisa in due parti chia- tate sull'etichetta, sul foglietto o sull'opuscolo allegato.
mate ``Impurezze qualificate''e ``Altre impurezze rivela- In mancanza di indicazioni riguardanti l'essiccamento,
bili''. Le prime sono quelle gia© accettate dalla Autorita© la sostanza o preparazione di riferimento deve essere
competente, come qualificate; tra queste possono essere utilizzata cos|© come ricevuta. Non vengono forniti
anche incluse le impurezze considerate qualificate per certificati di analisi në altre informazioni che non siano
altre ragioni (per esempio impurezze che costituiscono necessarie per l'impiego prescritto del prodotto. Non e©

10
 Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

inoizircserP
indicata alcuna data di scadenza: i prodotti sono garan- nD20 Indice di rifrazione.

ilareneG
titi idonei all'uso al momento dell'invio e possono p.e. Punto di ebollizione.
essere utilizzati di regola nel corso dei 6 mesi seguenti
la ricezione se vengono conservati in recipienti chiusi p.f. Punto di fusione.
nelle condizioni indicate sul foglietto allegato; tra-
PBR Preparazione Biologica di Riferimento.

isilanA id
scorso questo periodo e© necessario consultare il Segre-

idoteM
tariato Tecnico. La stabilita© del contenuto dei recipienti ppm Parti per milione.
dopo l'apertura non puo© essere garantita. R Sostanza o soluzione definite nei ``Reat-
Sostanze Chimiche di . L'abbreviazione
Riferimento tivi''.
SCR indica una sostanza chimica di riferimento stabi-

irotinetnoC
/ ilairetaM
lita dalla Commissione Europea della Farmacopea. Rf Usata in cromatografia per indicare il
Certe sostanze chimiche di riferimento sono utilizzate rapporto tra la distanza percorsa da
per i dosaggi microbiologici degli antibiotici; la loro una sostanza e la distanza percorsa
attivita© e© espressa in Unita© Internazionali sia sull'eti- dal fronte del solvente.
chetta, sia sul foglietto allegato e definita nelle stesse Rst Usata in cromatografia per indicare il

ivittaeR
condizioni di quelle delle preparazioni biologiche di rapporto tra la distanza percorsa da una
riferimento. sostanza e la distanza percorsa da una
Preparazioni Biologiche di . La maggior
Riferimento sostanza di riferimento.
parte delle preparazioni biologiche di riferimento pri-
RV Sostanza usata come standard primario

itnemogrA
marie menzionate nella Farmacopea sono gli appro-

ilareneG
priati Standard Internazionali e Preparazioni Biologi- in analisi volumetrica.
che di Riferimento Internazionali stabiliti dall'Organiz- SCR Sostanza Chimica di Riferimento.
zazione Mondiale della Sanita© . Siccome queste
sostanze sono generalmente disponibili solo in quantita© U.I. Unita© Internazionale.

eifargonoM
limitate, sono state stabilite delle Preparazioni Biologi-

ilareneG
che di Riferimento (indicate con l'abbreviazione PBR) U. Ph. Eur. Unita© Farmacopea Europea.
da usare nei casi appropriati. Quando possibile, l'atti-
vita© della preparazione biologica di riferimento e© Abbreviazioni usate nelle monografie sulle immunoglo-

espressa in Unita© Internazionali. Quando non esistono

ehcituecamraF
buline, immunosieri e vaccini

corrispondenti standard internazionali o preparazioni DL50 La quantita© , statisticamente determinata,

emroF
internazionali di riferimento, l'attivita© e© espressa in di una sostanza che, quando sommini-
unita© della Farmacopea. strata per la via indicata, provoca la morte
Spettri di . Lo spettro di riferimento e©
riferimento del 50 per cento degli animali trattati entro
accompagnato da informazioni concernenti le condi- un dato tempo.

eiretaM
zioni da usare per la preparazione del campione e per

emirP
DLM Dose letale minima.
la registrazione dello spettro. Dose L+/10 La piu© piccola quantita© di una tossina
che, nelle condizioni del saggio, quando
mescolata con 0,1 U.I. di antitossina e
ehcituecamraF

1.1.5. ABBREVIAZIONI E SIMBOLI

inoizaraperP

somministrata per la via specificata,

ehcificepS

A Assorbanza. causa la morte degli animali trattati

A11 per
cm
cento Assorbanza specifica. entro un dato tempo.
Ar Massa atomica relativa. Dose L+ La piu© piccola quantita© di una tossina
che, nelle condizioni del saggio, quando
ehcitapoemO
inoizaraperP

[ ]D20
a Potere rotatorio specifico. mescolata con 1 U.I. di antitossina e
d2020 Densita© relativa. somministrata per la via specificata,
causa la morte degli animali trattati
k Lunghezza d'onda. entro un dato tempo.
M Molarita© . Dose 1r/100 Lapiu© piccola quantita© ditossine che, nelle
condizioni del saggio, quando mescolata
ecidnI

Mr Massa molecolare relativa. con 0,01 U.I. di antitossina ed iniettata per

11
Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

via intradermica causa, entro un dato Institut Pasteur,

tempo, una reazione caratteristica al 25 Rue du Docteur Roux
punto di inoculazione. 75724 Paris Cedex 15, France
Dose Lp/10 La piu© piccola quantita© di tossina che, NCIMB National Collection of Industrial and Marine
nelle condizioni del saggio, quando Bacteria Ltd
mescolata con 0,1 U.I. di antitossina e 23 St. Machar Drive
somministrata per la via specificata, pro- Aberdeen AB2 1RY, Great Britain
voca la paralisi degli animali trattati NCPF National Collection of Pathogenic Fungi
entro un dato tempo. London School of Hygiene and Tropical
Medicine
Dose Lo/10 La piu© grande quantita© di tossina che, nelle Keppel Street,
condizioni del saggio, quando mescolata London WC1E 7HT, Great Britain
con 0,1 U.I. di antitossina e somministrata NCTC National Collection of Type Cultures
per la via specificata, non determina sin- Central Public Health Laboratory
tomi ditossicita© neglianimalitrattati entro Colindale Avenue
un dato tempo. London NW9 5HT, Great Britain
Dose Lf La quantita© di tossina o anatossina che, NCYC National Collection of Yeast Cultures
mescolata con 1 U.I. di antitossina, floc- AFRC Food Research Institute
cula nel periodo di tempo piu© breve. Colney Lane
DICC50 La quantita© , statisticamente determi- Norwic NR4 7UA, Great Britain
nata, di un virus che infetta il 50 per S.S.I. Statens Serum Institut
cento delle colture cellulari inoculate. 80 Amager Boulevard
DIU50 La quantita© , statisticamente determi- KÖbenhavn, Danmark
nata, di un virus che infetta il 50 per
cento delle uova embrionate inoculate. 1.1.6. UNITAé DEL SISTEMA INTERNAZIONALE

DI50 La quantita© , statisticamente determi- (SI) UTILIZZATE NELLA FARMACOPEA E

nata, di un virus che infetta il 50 per CORRISPON DENZA CON ALTRE UNITAé .

cento degli animali inoculati.

DP50 La dose, statisticamente determinata, di SISTEMA INTERNAZIONALE DI UNITAé (SI)
un vaccino che, nelle condizioni del sag-
gio, protegge il 50 per cento degli ani- Il Sistema Internazionale di Unita© comprende tre classi
mali dalla dose di prova dei microrgani- di unita© , ovvero le unita di base, le unita derivate e le
smi o delle tossine contro cui il vaccino unita© supplementari(1). Le unita© di base e le loro defini-
e© attivo. zioni sono riportate nella Tabella 1.6.-1.
ED50 La dose, statisticamente determinata, di Le unita© derivate possono essere formate mediante
un vaccino che, nelle condizioni del sag- combinazione delle unita© di base secondo relazioni
gio, induce anticorpi specifici nel 50 per algebriche che correlano le grandezze corrispondenti.
cento. Alcune di queste unita© derivate hanno nomi e simboli
speciali. Le unita© SI utilizzate nella Farmacopea sono
Collezioni di microrganismi
mostrate in Tabella 1.6.-2.
ATCC American Type Culture Collection Alcune unita© importanti e largamente usate al di
10801 University Boulevard fuori del Sistema Internazionale sono riportate nella
Manassas, Virginia 20110-2209, USA Tabella 1.6.-3.
C.I.P. Collection de Bactëries de l'Institut Pasteur I prefissi riportati in Tabella 1.6.-4. sono usati per for-
B.P. 52, 25 Rue du Docteur Roux mare i nomi ed i simboli dei multipli e sottomultipli
75724 Paris Cedex 15, France decimali delle unita© SI.
IMI International Mycological Institute öööö
Bakcham Lane
Surrey TW20 9TY, Great Britain (1) Le definizioni delle unita© usate nel Sistema Internazionale
sono riportate nel libretto ``Le Syste© me International d'Unitës (SI)''
I.P. Collection Nationale de Culture de Microor- pubblicato dal Bureau International des Poids et Mesures, Pavillon
ganismes (C.N.C.M.) de Breteuil, F-92310 Sevres.

12
 Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

inoizircserP

ilareneG
Tabella 1.6.-1. - Unita© SI di base
Grandezza Unita©

isilanA id
idoteM
Definizione

Nome Simbolo Nome Simbolo

irotinetnoC
/ ilairetaM
Lunghezza l metro m Il metro e© la lunghezza del camino percorso, nel vuoto, dalla
luce, nell'intervallo di tempo di 1/299792458 di secondo.

ivittaeR
Massa m chilogrammo kg Il chilogrammo e© eguale alla massa del prototipo internazio-
nale del chilogrammo.

itnemogrA
ilareneG
Il secondo e© la durata di 9 192 631 770 periodi della radiazione
Tempo t secondo s corrispondente alla transizione tra i due livello iperfini dello
stato fondamentale dell'atomo di cesio-133.

eifargonoM

ilareneG
L'ampe© re e© l'intensita© di una corrente costante che, mantenuta
in due conduttori paralleli e rettilinei, di lunghezza infinita, di
Corrente elettrica I ampe© re A sezione circolare trascurabile e distanziati di 1 metro nel vuoto,-7
determina, tra questi conduttori, una forza uguale a 2 10 2

newton su ogni metro di lunghezza.

ehcituecamraF
emroF
Temperatura T kelvin K Il kelvin e© la frazione 1/273,16 della temperatura termodina-
termodinamica mica del punto triplo dell'acqua.

eiretaM

emirP
La mole e© la quantita© di sostanza di un sistema contenente
Quantita© di sostanza n mole mol tante entita© elementari quanti sono gli atomi contenuti in
0,012 chilogrammi di carbonio-12(*).
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

La candela e© l'intensita© luminosa, in una data direzione, di una

sorgente che emette una radiazione monocromatica della fre-
ehcitapoemO

Intensita© luminosa Iv candela cd

inoizaraperP

quenza di 540 1012 hertz e la cui intensita© energetica in que-

2

sta direzione e© di 1/683 watt per steradiante.

(*) Quando si usa la mole, le entita© elementari devono essere specificate e possono essere atomi, molecole, elettroni, ioni, altre parti-
celle oppure raggruppamenti specificati di tali particelle.
ecidnI

13
Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

Tabella 1.6.-2. - Unita© SI usate nella Farmacopea e corrispondenza con altre unita©
Grandezza Unita©

Conversione di altre unita© in unita© SI

Espressione in unita© SI Espressione in altre
Nome Simbolo Nome Simbolo
di base unita© SI

Numero d'onda v uno al metro 1/m m-1

Lunghezza micrometro mm 10-6-9m
d'onda k
nanometro nm 10 m
Superficie A, S metro quadrato m2 m2
Volume V metro cubo m3 m3 1 ml = 1 cm3 = 10-6 m3
Frequenza v hertz Hz s-1
Densita© q chilogrammo al kg/m3 kg m-31 1 g/ml = 1 g/cm3 = 103 kg m-3 1

metro cubo
Velocita©  metro al secondo m/s m s-1
1

Forza F newton N m kg s-2

1 1 1 dyne = 1 g cm s-2 = 10-5 N
1 1

1 kp = 9,806 65 N
Pressione p pascal Qa m-1 kg s-21 1 N m-21 1 dyne/cm2 = 10-1 Pa = 10-1 N m-2 1

1 atm = 101 325 a = Q

101,325 kPa5
1 bar = 10 Pa = 0,1 MPa
1 mm Hg = 133,322 387 Pa
1 Torr = 133,322 368 Pa
1 psi = 6,894 757 kPa
Viscosita© g pascal secondo Pa s 1 m-1 kg s-11 1 N s m-2
1 1 1 P = 10-1 Pa s = 10-1 N s m-2
1 1 1

dinamica 1 cP = 1 mPa s 1

Viscosita© v metro quadrato m2/s m2 s-1 1 Pa s m3 kg-1

1 1 1 1 St = 1 cm2 s-1 = 10-4 m2 s-1
1 1

cinematica al secondo N m s kg-1

1 1 1

Energia W joule J m2 kg s-2

1 1 Nm 1 1 erg = 1 cm2 g s-2 = 1 dyne cm = 10-7 J
1 1 1

1 cal = 4,1868 J
Potenza, P watt W m2 kg s-3
1 1 N m-1 s-1
1 1 1 erg/s = 1 dyne cm -1s-1 = -7 -1
1 1

flusso energetico Js
1 10 W = 10 N m s = 10 J s
-7 -7 1 1 1

Dose assorbita (di D gray Gy m2 s-2 1 J kg-1

1 1 rad = 10-2 Gy
energia radiante)
Potenziale elettri- U volt V m2 kg s-3 A-1
1 1 1 W A-11

co, forza elettro-

motrice
Resistenza elettri- R ohm X m2 kg s-3 A-2
1 1 1 V A-11

ca
Quantita© di elet- Q coulomb C As 1

tricita©
Attivita© di un ra- A becquerel Bq s-1 1 Ci = 37 109 Bq = 37 109s-1
2 2

dionuclide
Concentrazione c mole al metro mol/m3 mol m-3 1 1 mol/l = 1M = 1 mol/dm3
di quantita© di- cubo = 103 mol m-3
1

sostanza, con-
centrazione mo-
lare
Concentrazione q chilogrammo al kg/m3 kg m-3 1 1 g/l = 1 g/dm3 = 1 kg m-3 1

in massa metro cubo

14
 Prescrizioni generali della Farmacopea Europea

inoizircserP
Tabella 1.6.-3. Tabella 1.6.-4.

ilareneG
Unita© usate con il Sistema Internazionale Multipli e sottomultipli decimali delle unita©
Unita©
Fattore Prefisso Simbolo Fattore Prefisso Simbolo
Grandezza Valore in unita© SI

1018 esa E 10-1 deci d

isilanA id
Nome Simbolo

idoteM
minuto min 1 min = 60 s 1015 peta P 10-2 centi c
Tempo ora h 1 h = 60 min = 3600 s
giorno d 1 d = 24 h = 86 400 s 1012 tera T 10-3 milli m
Angolo piano grado ‘ 1‘ = ( /180) rad
p 109 giga G 10-6 micro m

irotinetnoC
/ ilairetaM
Volume litro l 1 l = 1 dm3 = 10-3 m3 106 mega M 10-9 nano n
Massa tonnellata t 1 t = 103 kg 103 chilo k 10-12 pico p
102 etto h 10-15 femto f
Frequenza di giri al r/min 1 r/min = (1/60) s-1
rotazione minuto 101 deca da 10-18 atto a

ivittaeR
ööööööö
Note

itnemogrA
ilareneG
1. La Farmacopea utilizza la temperatura Celsius (simbolo t), definita dall'equazione.
t = T - To
dove To = 273,15 K per definizione. La temperatura Celsius o centigrada e© espressa in gradi Celsius (simbolo

eifargonoM
‘C). L'unita© ``grado Celsius'' e© uguale all'unita© ``kelvin''.

ilareneG
2. Le espressioni pratiche delle concentrazioni usate nella Farmacopea sono definite nelle Prescrizioni generali.
3. Il radiante e© l'angolo piano compreso fra due raggi di un cerchio che intercettano nella circonferenza un arco
di lunghezza uguale al raggio.

ehcituecamraF
4. Nella Farmacopea le condizioni di centrifugazione sono definite con riferimento alla accelerazione dovuta

emroF
alla gravita© (g):
g = 9,80665 m s-2 1

5. Nella Farmacopea vengono usate certe grandezze senza dimensioni: la densita© relativa (2.2.5), l'assorbanza

eiretaM
(2.2.25), l'assorbanza specifica (2.2.25), l'indice di rifrazione (2.2.6).

emirP
6. L'unita© microkatal e© definita come l'attivita© enzimatica che, in condizioni definite, provoca la trasformazione
(per esempio l'idrolisi) di 1 micromole di substrato al secondo. ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI

15
Prescrizioni generali della Farmacopea Ufficiale

1.FU. PRESCRIZIONI GENERALI DELLA quanto alcuni risultati sono necessari per la verifica di
FARMACOPEA UFFICIALE specifiche delle singole monografie della preparazione
farmaceutica. Cos|© ad esempio nel caso delle com-
1.FU.1. MONOGRAFIE DI PREPARAZIONI FAR- presse, capsule e supposte e© utile eseguire subito il sag-
MACEUTICHE SPECIFICHE gio della uniformita© di massa (previsto nella monogra-
. Il titolo della monografia di una preparazione fia generale) in quanto fornisce un elemento necessario
Titolo

farmaceutica specifica e© in genere una combinazione (massa media) per poter calcolare la quantita© di prepa-
della denominazione comune italiana (o equivalente) razione da utilizzare per l'esecuzione della ``Determina-
del principio attivo (o di uno o piu© dei principi attivi) zione quantitativa''.
presente nella forma farmaceutica con il piu© appro- Il riferimento sopra citato puo© non essere esaustivo;
priato termine standard, a volte anche nella ``forma infatti e© responsabilita© degli utilizzatori della farmaco-
abbreviata'', della preparazione farmaceutica specifica pea accertare l'applicabilita© delle diverse monografie
in questione. Cos|© ad esempio il titolo della monografia generali alla monografia della singola preparazione far-
relativa ad una soluzione per uso cutaneo contenente maceutica. Al riguardo si fa osservare che l'attuale
iodio e© : Iodio soluzione cutanea. ``politica'' della Farmacopea Europea e© quella di non
Nel caso in cui sono presenti monografie di due o piu© utilizzare i riferimenti espliciti alle monografie generali
preparazioni farmaceutiche che contengono differenti (vedi introduzione alla 4 Edizione della Farmacopea
sali della stessa sostanza, quest'ultima viene indicata Europea).
nel titolo mantenendo anche il nome dell'agente salifi-
cante. Cos|© ad esempio per le compresse che conten- . Quanto riportato in questa sezione costi-
gono Chinina solfato il titolo della relativa monografia
Definizione

tuisce una definizione ufficiale della preparazione che

e© ``Chinina solfato compresse'' mentre per le compresse e© oggetto della monografia.
che contengono Chinina cloridrato il titolo e© ``Chinina
cloridrato compresse''. Viceversa nei titoli delle mono- I nomi delle singole sostanze che compongono la forma
grafie relative a preparazioni farmaceutiche che con- farmaceutica sono riportati in corsivo e la sostanza
tengono tutte l'idrocortisone acetato e© presente solo il indicata deve rispondere alle specifiche di qualita© ripor-
nome ``idrocortisone'' in quanto non c'e© ambiguita© tra tate nella rispettiva monografia. E' pertanto implicito
una monografia e l'altra. che la corrispondenza a tali specifiche deve essere
I termini standard sono stati a volte sostituiti con ter- accertata sulla sostanza tal quale prima del suo impiego
mini delle pertinenti monografie generali. Cos|© ad per la preparazione della forma farmaceutica finita.
esempio nel caso di monografie di categorie diverse Inoltre qualunque componente anche se non menzio-
della stessa preparazione (ad es. crema e unguento) lo nato esplicitamente, deve comunque soddisfare a
specifico termine standard e© stato sostituito con la ter- quanto previsto dalla monografia generale Sostanze
minologia usata nella monografia generale della forma per uso farmaceutico (2034).
farmaceutica; in questo modo la monografia avente In alcune monografie la definizione e© data in termini
per titolo ``Betametasone preparazione semisolida per qualitativi menzionando il (i) solo(i) principio(i) atti-
applicazione cutanea'' sostituisce le vecchie monografie vo(i) e omettendo ogni riferimento quantitativo;
Betametasone crema e Betametasone unguento. I ter- comunque i dosaggi autorizzati sono riportati in cor-
mini standard delle preparazioni farmaceutiche, sono sivo alla fine di ogni monografia.
periodicamente pubblicati dal Consiglio d'Europa.
Oltre al titolo principale, quando utile, sono stati man- In altre monografie la definizione e© presentata con una
tenuti titoli sussidiari legati essenzialmente all'uso tra- composizione quali-quantitativa precisa che deve essere
dizionale della stessa preparazione farmaceutica; per rigorosamente rispettata; fa eccezione l'eventuale pre-
la monografia ``Iodio soluzione cutanea'' e© stato ad senza di additivi prevista nelle pertinenti monografie
esempio riportato il titolo tradizionale ``Tintura di generali.
iodio''; questi titoli possono costituire anche essi titoli
ufficiali, il cui uso comunque deve essere concordato L'indicazione ``preparata di recente'' sta a significare
con le autorita© di registrazione. che la preparazione in questione deve essere effettuata
non piu© di 24 ore prima dell'uso.
Riferimenti a monografie generali . Le monografie delle
preparazioni farmaceutiche specifiche contengono di La frase ``puo© contenere un antimicrobico'' implica che
norma un preambolo in corsivo che riporta il riferi- la preparazione in questione deve essere protetta in
mento ad una monografia generale. La esecuzione di maniera efficace e rispondente a quanto descritto in
alcune di queste specifiche e© a volte prioritaria in ``Efficacia della conservazione antimicrobica (5.1.3)''.

16
 Prescrizioni generali della Farmacopea Ufficiale

inoizircserP
. I saggi previsti nelle monografie generali non tradizionali (ossido di azoto, ossido di carbonio, ecc.)

ilareneG
Saggi

sono di norma riportati nella monografia specifica. In trovano comunque spazio, discorsivamente, nell'ambito
casi particolari viene comunque indicata non solo l'ese- di singoli testi.
cuzione, ma anche il metodo per l'esecuzione del saggio
stesso. 1.FU.3. DROGHE VEGETALI

Oltre a quanto previsto nella monografia generale

isilanA id
idoteM
Convalida dei metodi analitici . Le procedure per i saggi ``Droghe vegetali'' e nel capitolo 2.8 Metodi di farmaco-
e per la determinazione quantitativa sono state convali- gnosia dovranno esigersi, se non diversamente giustifi-
date al tempo della loro elaborazione. cato ed autorizzato, i seguenti limiti di accettabilita© :
Condizioni di conservazione . Le condizioni di conserva- Aflatossine: 5 ppb per l'aflatossina B1 e 10 ppb per le

irotinetnoC
zione relative alla temperatura non sono riportate nelle aflatossine totali.

/ ilairetaM
singole monografie. E' infatti responsabilita© del fabbri- Metalli pesanti: 3 mg/kg per il piombo, 0,5 mg/kg per il
cante ottemperare a quanto previsto dalle normative cadmio e 0,3 mg/kg per il mercurio.
vigenti. Perdita all'essiccamento: quando non sia fissato un
Periodo di validita© (Scadenza) . Il periodo di validita© limite, le droghe vegetali non devono contenere piu© del
delle singole preparazioni non e© riportato nelle relative 10 per cento di umidita© .

ivittaeR
monografie. E' responsabilita© del fabbricante definirlo I prodotti importati devono rispondere alle esigenze del
in conformita© alle normative in vigore. D.M. (ministero dell'Agricoltura) del 23 giugno 1989,
. Le etichette dei prodotti medicinali che fanno suppl. G.U. n. 181 del 4 agosto 1989 e successivi aggior-
namenti.
Etichette

riferimento a monografie di preparazioni farmaceuti-

itnemogrA
ilareneG
che specifiche debbono soddisfare a quanto previsto
dalla Direttiva 92/27/EEC. 1.FU.4. ABBREVIAZIONI

1.FU.2. GAS MEDICINALI

b.m. Bagno maria.
. Si definiscono gas medicinali i gas la cui I.R. Infrarosso.

eifargonoM

ilareneG
Definizione

monografia e© presente nella farmacopea come il carbo- p.i. Preparazione iniettabile.

nio diossido (anidride carbonica), l'aria medicinale, l'a-
zoto, l'ossigeno, l'azoto protossido. U.V. Ultravioletto.
Sono assimilate ai gas medicinali le miscele ottenute tra

ehcituecamraF
i gas sopraindicati, le cui caratteristiche ovviamente Var Varieta© .
corrispondono alle caratteristiche indicate nelle specifi-

emroF
che monografie. EOPS Esenti da organismi patogeni specificati.
Conservazione . I gas medicinali possono essere conser- UFC Unita© formante colonia.
vati sia allo stato liquido che allo stato di gas com- UFP Unita© formante pustola o unita© formante
presso; nel caso di conservazione in bombole allo stato placca.
eiretaM

emirP
di gas compresso o liquefatto, occorre rispettare la spe-
cifica normativa in vigore. 1.FU.5. SINONIMI ED ESPRESSIONI

Titolo delle monografie. Il titolo delle monografie dei Nelle monografie e in altri testi della Farmacopea si usa
gas medicinali costituiti da ``ossidi'' evidenzia per primo molto sovente, in luogo del termine ``Contenitore'', il
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

il nome dell'elemento diverso dall'ossigeno (i.e. carbo- sinonimo ``Recipiente''; cio© vale in particolare per la
nio diossido, azoto protossido). Questo stesso criterio sezione ``Conservazione'' delle forme farmaceutiche
e© stato usato anche per i nomi di tutti gli ossidi che sono finite nella quale si impiega anche l'espressione ``in con-
presenti nei titoli di altri testi di farmacopea; i termini fezione ben chiusa''.
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI

17
 2. Metodi di analisi

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
2.1. Apparecchiature . . . . . . . . . . . . . . . 23 2.6. Saggi biologici . . . . . . . . . . . . . . . . . 165

idoteM
2.2. Metodi fisici e fisico-chimici . . . . . . 29 2.7. Dosaggi biologici . . . . . . . . . . . . . . . 215
2.3. Identificazione . . . . . . . . . . . . . . . . . 107 2.8. Metodi generali di farmacognosia . . 245
2.4. Saggi limite . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 117 2.9. Saggi e procedimenti tecnologici . . . 257
2.5. Saggi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 143

irotinetnoC
/ ilairetaM
ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 2.1. Apparecchiature

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
2.1. Apparecchiature . . . . . . . . . . . . . . . 23 2.1.4. Setacci . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

idoteM
2.1.1. Contagocce . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23 2.1.5. Tubi per saggi comparativi . . . . . . . 24
2.1.2. Tabella comparativa della porosita© 2.1.6. Tubi per la determinazione di gas . . 25
dei filtri a setto poroso . . . . . . . . . 23
2.1.3. Lampade a luce ultravioletta per

irotinetnoC
/ ilairetaM
scopi analitici . . . . . . . . . . . . . . . . 23

ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Lampade a luce ultravioletta per scopi analitici

inoizircserP

ilareneG
2.1. APPARECCHIATURE 2.1.2. TABELLA COMPARATIVA DELLA PORO-
(1)
SITAé DEI FILTRI A SETTO POROSO

Tabella 2.1.2.-1.
2.1.1. CONTAGOCCE
Numero di Diametro mas-

isilanA id
Regno

idoteM
porosita© simo (in micro- Germania Francia
(2)
Unito
(Ph. Eur.) metri) dei fori

Il termine ûgocceý si riferisce a gocce normali rilasciate

da un contagocce normale come di seguito descritto. 1,6 inferiore a 1,6 5f ÿ ÿ

I contagocce normali (Figura 2.1.1.-1) sono costruiti ÿ 1 - 2,5 5 ÿ 5

con vetro praticamente incolore. L'estremita© inferiore 4 1,6 - 4 ÿ ÿ ÿ

irotinetnoC
4 - 6 5

/ ilairetaM
ha un orifizio circolare a bordo piano, ad angolo retto ÿ

10 4 - 10
ÿ

4f
ÿ

4
rispetto all'asse.
ÿ

16 10 - 16 4 4 ÿ

40 16 - 40 3 3 3
ÿ 40 - 50 ÿ ÿ 2
100 40 - 100 2 2 ÿ

100 - 120 1

ivittaeR
ÿ ÿ ÿ

160 100 - 160 1 1 ÿ

ÿ 150 - 200 0 0 ÿ

250 160 - 250 ÿ ÿ ÿ

ÿ 200 - 500 ÿ 00 ÿ

Diametri in

itnemogrA
ilareneG
micrometri Usi speciali
< 2,5 Filtrazione batteriologica
4 10 Filtrazione ultra-fine, separazione di
ÿ

microrganismi di grosso diametro

eifargonoM
10 40 Filtrazione analitica, filtrazione molto fine

ilareneG
ÿ

del mercurio, dispersione molto fine dei gas

40 100 Filtrazione fine, filtrazione del mercurio,
ÿ

dispersione fine dei gas

100 160 Filtrazione di materiale grossolano, disper-

ehcituecamraF
ÿ

sione e lavaggio dei gas, supporto per altri

materiali filtranti

emroF
160 500 Filtrazione di materiali molto grossolani,
ÿ

dispersione e lavaggio dei gas.

(1) I limiti indicati sono solo approssimativi.
(2) La Farmacopea Europea ha adottato il sistema proposto dalla
Organizzazione Internazionale per la Standardizzazione (ISO).

eiretaM

emirP
2.1.3. LAMPADE A LUCE ULTRAVIOLETTA PER

Figura 2.1.1.-1. - Contagocce normale SCOPI ANALITICI

ehcituecamraF

Dimensioni in millimetri Come sorgente di luce ultravioletta viene utilizzato

inoizaraperP

ehcificepS

il vapore di mercurio in lampada di quarzo. La parte

visibile dello spettro emesso dalla lampada puo© essere
eliminato con l'uso di un filtro adeguato. Quando la
Possono essere usati altri contagocce, purchë sod- Farmacopea, in un saggio, prescrive l'uso di luce ultra-
violetta alla lunghezza d'onda di 254 nm o di 365 nm,
ehcitapoemO
inoizaraperP

disfino al seguente saggio. Venti gocce di acqua R utilizzare uno strumento costituito da una lampada a
a 20 1 ‘C che fluiscono liberamente dal contagocce,
6
vapori di mercurio e da un filtro che da© una banda di
tenuto in posizione verticale, ad una velocita© costante emissione con intensita© massima a circa 254 nm
di una goccia al secondo, pesano 1000 50 mg. Il con-
6 o 365 nm. La lampada usata deve essere in grado
tagocce deve essere accuratamente pulito prima del- di evidenziare con certezza, su un supporto di gel di
l'uso. Eseguire tre determinazioni per ciascun conta- silice G R posto in posizione normale alla radiazione,
ecidnI

gocce. Nessun risultato puo© deviare piu© del 5 per cento una macchia di riferimento di sodio salicilato avente
dalla media delle tre determinazioni. un diametro di circa 5 mm.

23
Tubi per saggi comparativi

Per fare cio© applicare 5 ml di una soluzione (0,4 g/l) di Tolleranza intermedia (+Z): non piu© del 6 per cento del
sodio salicilato R in alcool R(1) , per lampade che hanno numero totale delle aperture deve avere dimensioni
la massima intensita© a 254 nm, e 5 ml di una soluzione comprese tra ûnominale + Xý e ûnominale + Zý, dove:
(2 g/l) in alcool R(1) per lampade che hanno la massima
intensita© a 365 nm. La distanza tra la lampada e la
lastra cromatografica deve essere la stessa sia nel sag- Z X 2Y ˆ
‡

gio qui descritto che in quello prescritto in un saggio di

farmacopea. Diametro del filo d: i diametri dei fili riportati in
(1) L'alcool R usato non deve essere fluorescente. Tabella 2.1.4.-1 si riferiscono ai fili di una rete metallica
montata su un telaio. Le dimensioni nominali dei dia-
2.1.4. SETACCI metri dei fili possono differire da questi valori entro i
limiti dmax e dmin. I limiti definiscono un intervallo
I setacci sono costruiti con materiale adatto ed hanno ammesso del 15 per cento delle dimensioni nominali
maglie quadrate. Per scopi diversi dalle procedure ana-
6

litiche, possono essere usati setacci con maglie circo-

raccomandate. In un setaccio di riferimento i fili deb-
lari; i diametri interni di queste sono 1,25 volte l'aper-
bono avere lo stesso diametro nelle direzioni di trama
tura della maglia quadrata del setaccio corrispondente.
ed ordito.
Non deve avvenire alcuna reazione tra il materiale del (2) Vedi International Standard ISO 3310/1 (1975).
setaccio e la sostanza da setacciare. Il grado di finezza
e© prescritto nella monografia utilizzando il numero del
setaccio che indica l'apertura della maglia in microme- 2.1.5. TUBI PER SAGGI COMPARATIVI

tri, riportato in parentesi dopo il nome della sostanza.

Massima tolleranza(2) per una apertura (+X): la dimen- I tubi utilizzati per i saggi comparativi sono tubi cali-
sione di ciascuna apertura non deve superare la dimen- brati, in vetro incolore con un diametro interno uni-
sione nominale piu© di ÿX, dove: forme. Il fondo e© trasparente e piatto. Esaminare la
2 w 0;75 1 colonna di liquido secondo l'asse verticale del tubo, su
X ˆ
3 4 ÿ 0;25 1
w ‡ fondo bianco o, se necessario, su fondo nero. Effettuare
w = larghezza dell'apertura l'esame in luce diffusa. Si assume che saranno usati tubi
con un diametro interno di 16 mm. Possono essere usati
Tolleranza per l'apertura media ( Y): la dimensione
6
tubi con diametro interno piu© grande, ma il volume del
dell'apertura media non deve discostarsi dalla dimen- liquido esaminato deve essere poi aumentato in modo
sione nominale piu© di Y, dove:
6 che l'altezza del liquido nei tubi non sia inferiore a
quella che si ottiene quando vegngono usati il volume
Y w27 1; 6
0;98
ˆ ‡
prescritto di liquido e tubi di 16 mm di diametro
interno.
Tabella 2.1.4.-1. - Valori in micrometri
Tolleranza per le aperture Diametri dei fili
Numero dei setacci

(Dimensione nominale Massima tolleranza Tolleranza per la Tolleranza Dimensioni nominali

Limiti ammissibili
delle aperture) per una apertura media dell'apertura intermedia raccomandate

+ X 6Y +Z d d max dmin

11200 770 350 560 2500 2900 2100

8000 600 250 430 2000 2300 1700
5600 470 180 320 1600 1900 1300
4000 370 130 250 1400 1700 1200
2800 290 90 190 1120 1300 950
2000 230 70 150 900 1040 770
1400 180 50 110 710 820 600
1000 140 30 90 560 640 480
710 112 25 69 450 520 380
500 89 18 54 315 360 270
355 72 13 43 224 260 190
250 58 9,9 34 160 190 130
180 47 7,6 27 125 150 106
125 38 5,8 22 90 104 77
90 32 4,6 18 63 72 54
63 26 3,7 15 45 52 38
45 22 3,1 13 32 37 27
38 ÿ ÿ ÿ 30 35 24

24
 Tubi per la determinazione di gas

inoizircserP
sono riportate nelle istruzioni fornite con il tubo rivela-

ilareneG
2.1.6. TUBI PER LA DETERMINAZIONE DI GAS

I tubi per la determinazione di gas sono tubi cilindrici, tore. Se l'olio usato non e© citato nelle istruzioni, il fab-
sigillati, costituiti da materiale trasparente inerte e bricante del tubo deve verificare la reattivita© e se neces-
costruiti per permettere il passaggio di gas. Essi conten- sario fornire un tubo specifico per questo olio.
gono reattivi adsorbiti su substrati inerti che sono Tubo per la determinazione del diossido di carbonio . Eé un
tubo di vetro sigillato contenente filtri adsorbenti e ade-

isilanA id
adatti per la visualizzazione della sostanza da determi-

idoteM
nare e, se necessario, anche strati e/o filtri adsorbenti guati supporti per gli indicatori idrazina e cristalvioletto.
preliminari per eliminare sostanze che interferiscono Il valore minimo indicato e© 100 ppm, con una deviazione
con il gas da determinare. Lo strato di indicatore con- standard relativa del 15 per cento al massimo.
6

tiene un solo reattivo per la determinazione di una data Tubo per la determinazione del diossido di zolfo . Eé un
impurezza oppure piu© reattivi per la determinazione di tubo di vetro sigillato contenente filtri adsorbenti e ade-

irotinetnoC
/ ilairetaM
piu© sostanze (tubo monostrato o tubo multistrato). guati supporti per l'indicatore amido iodurato. Il valore
Il saggio viene effettuato facendo passare il volume minimo indicato e© 0,5 ppm, con una deviazione stan-
richiesto del gas in esame attraverso il tubo indicatore. dard relativa del 15 per cento al massimo.
6

La lunghezza dello strato colorato o l'intensita© di una Tubo per la determinazione dell'olio . Eé un tubo di vetro
variazione di colore su una scala graduata da© una indi- sigillato contenente filtri adsorbenti ed un adeguato
cazione della impurezza presente nel gas. supporto per l'indicatore acido solforico. Il valore

ivittaeR
La verifica della calibrazione dei tubi per la determina- minimo indicato e© 0,1 mg/m3, con una deviazione stan-
zione dei gas viene effettuata seguendo le istruzioni del dard relativa del 30 per cento al massimo.
6

fabbricante. Tubo per la determinazione del monossido di azoto e del

Condizioni operative. Operare secondo le istruzioni del diossido di azoto . E' un tubo di vetro sigillato contenente
fabbricante o procedere come segue: filtri adsorbenti e adeguati supporti per uno strato di un

itnemogrA
ilareneG
Il recipiente contenente il gas da analizzare e© collegato ossidante (sale di Cr(VI)) e per l'indicatore difenilbenzi-
con un adatto regolatore di pressione ed una valvola a dina. Il valore minimo indicato e© 0,5 ppm, con una devia-
spillo. Collegare la valvola con un tubo flessibile zione standard relativa del 15 per cento al massimo.
6

munito di una estremita© ad Y e regolare il flusso di gas Tubo per la determinazione del monossido di carbonio . E'
in esame per spurgare il sistema con un appropriato un tubo di vetro sigillato contenente filtri adsorbenti e

eifargonoM
flusso (vedi Figura 2.1.6.-1). Preparare il tubo indica- adeguati supporti per gli indicatori pentossido di iodio

ilareneG
tore e collegarlo alla pompa seguendo le istruzioni del (I2O5), diossido di selenio e acido solforico fumante.
fabbricante. Collegare l'estremita© aperta del tubo indi- Ilvalore minimo indicatoe© 5 ppm o meno, con una devia-
catore al tubo corto ed azionare la pompa per un zione standard relativa del 15 per cento al massimo.
6

appropriato numero di volte in modo da far passare . Eé un

ehcituecamraF
Tubo per la determinazione del solfuro di idrogeno

un adeguato volume di gas in esame attraverso il tubo tubo di vetro sigillato contenente filtri adsorbenti e
stesso. Leggere il valore corrispondente alla lunghezza adeguati supporti per un indicatore costituito da un

emroF
dello strato colorato o all'intensita© di colore sulla scala sale di piombo appropriato. Il valore minimo indicato
graduata. Se si ottiene un risultato negativo, i tubi indi- e© 1 ppm o meno, con una deviazione standard relativa
catori debbono essere controllati con un gas di calibra- del 10 per cento al massimo.
6

zione contenente l'appropriata impurezza. Tubo per la determinazione del vapore d'acqua . Eé un
Considerata l'ampia varieta© disponibile di oli per il tubo sigillato contenente filtri adsorbenti e adeguati
eiretaM

emirP
compressore, e© necessario verificare la reattivita© dei supporti per l'indicatore magnesio perclorato. Il valore
tubi rivelatori di olio per l'olio usato nel compressore minimo indicato e© 67 ppm o meno, con una deviazione
stesso. Le informazioni sulla reattivita© per i diversi oli standard relativa del 20 per cento al massimo.
6 ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

Figura 2.1.6.-1.- Apparato per tubi per la determinazione dei gas.

ecidnI

25
 2.2. Metodi fisici

inoizircserP

ilareneG
e fisico-chimici

isilanA id
idoteM
2.2. Metodi fisici e fisico-chimici . . . . . 29 2.2.26. Cromatografia su carta . . . . . . . . . 48

irotinetnoC
/ ilairetaM
2.2.1. Limpidezza e grado di opalescenza 2.2.27. Cromatografia su strato sottile . . . 49
dei liquidi . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 2.2.28. Gas cromatografia . . . . . . . . . . . . . 51
2.2.2. Grado di colorazione dei liquidi . . 29 2.2.29. Cromatografia liquida . . . . . . . . . . 53
2.2.3. Determinazione potenziometrica 2.2.30. Cromatografia per esclusione . . . . 55
del pH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31 2.2.31. Elettroforesi . . . . . . . . . . . . . . . . . . 56
2.2.4. Correlazione tra reazione della

ivittaeR
soluzione, pH approssimato e 2.2.32. Perdita all'essiccamento . . . . . . . . . 64
colorazione di alcuni indicatori . 33 2.2.33. Spettrometria di risonanza magne-
2.2.5. Densita© relativa . . . . . . . . . . . . . . . 33 tica nucleare . . . . . . . . . . . . . . . . 64
2.2.6. Indice di rifrazione . . . . . . . . . . . . 34 2.2.34. Termogravimetria . . . . . . . . . . . . . 65

itnemogrA
2.2.7. Potere rotatorio . . . . . . . . . . . . . . . 34 2.2.35. Osmolalita© . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66

ilareneG
2.2.8. Viscosita© . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35 2.2.36. Determinazione potenziometrica
2.2.9. Metodo del viscosimetro a capillare 35 della concentrazione ionica utiliz-
2.2.10. Metodo del viscosimetro a corpo zando elettrodi ione-selettivi . . . . 66
rotante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36 2.2.37. Spettrometria di fluorescenza a rag-

eifargonoM
2.2.11. Intervallo di distillazione . . . . . . . . 37 gi-X . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68

ilareneG
2.2.12. Punto di ebollizione . . . . . . . . . . . . 38 2.2.38. Conduttivita© . . . . . . . . . . . . . . . . . 69
2.2.13. Determinazione dell'acqua per 2.2.39. Distribuzione della massa moleco-
distillazione . . . . . . . . . . . . . . . . 38 lare nei destrani . . . . . . . . . . . . . 70
2.2.14. Punto di fusione - metodo al capil-

ehcituecamraF
lare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39 2.2.40. Spettrofotometria nel vicino infra-
rosso . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

emroF
2.2.15. Punto di fusione - metodo al capil-
lare aperto . . . . . . . . . . . . . . . . . 39 2.2.41. Dicroismo circolare . . . . . . . . . . . . 74
2.2.16. Punto di fusione - metodo della 2.2.42. Densita© dei solidi . . . . . . . . . . . . . . 76
fusione istantanea . . . . . . . . . . . 40 2.2.43. Spettrometria di massa . . . . . . . . . 77
2.2.17. Punto di gocciolamento . . . . . . . . . 40 2.2.44. Carbonio organico totale nell'acqua

eiretaM
2.2.18. Punto di solidificazione . . . . . . . . . 41 per uso farmaceutico . . . . . . . . . 81

emirP
2.2.19. Titolazione amperometrica . . . . . . 42 2.2.45. Cromatografia a fluido supercritico 82
2.2.20. Titolazione potenziometrica . . . . . 42 2.2.46. Tecniche di separazione cromato-
2.2.21. Fluorimetria . . . . . . . . . . . . . . . . . 42 grafica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
2.2.22. Spettrometria di emissione atomica 43
ehcituecamraF
inoizaraperP

2.2.47. Elettroforesi capillare . . . . . . . . . . 89

ehcificepS

2.2.23. Spettrometria di assorbimento ato- 2.2.48. Spettrometria Raman . . . . . . . . . . 96

mico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44 2.2.49. Metodo del viscosimetro a sfera
2.2.24. Spettrofotometria di assorbimento cadente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99
nell' infrarosso . . . . . . . . . . . . . . 45
2.2.25. Spettrofotometria di assorbimento 2.2.54. Focalizzazione isoelettrica . . . . . . . 99
ehcitapoemO
inoizaraperP

nell'ultravioletto e nel visibile . . 47 2.2.FU.1. Microscopia elettronica analitica . 102

ecidnI
 Grado di colorazione dei liquidi

inoizircserP
Tabella 2.2.1.-1.

ilareneG
2.2. METODI FISICI E FISICO-CHIMICI

Sospensione di riferimento I II III IV

2.2.1. LIMPIDEZZA E GRADO DI OPALESCENZA

DEI LIQUIDI
Standard di opalescenza 5,0 ml 10,0 ml 30,0 ml 50,0 ml

isilanA id
idoteM
In tubi da saggio identici, di vetro neutro, incolori, tra- Acqua R 95,0 ml 90,0 ml 70,0 ml 50,0 ml
sparenti, a fondo piatto ed aventi un diametro interno
compreso tra 15 mm e 25 mm, confrontare il liquido in
esame con la sospensione di riferimento preparata al

irotinetnoC
momento dell'uso; i tubi da saggio vanno riempiti per

/ ilairetaM
2.2.2. GRADO DI COLORAZIONE DEI LIQUIDI

un'altezza di 40 mm. Confrontare i liquidi dopo 5 min Per apprezzare il grado di colorazione dei liquidi nelle
dalla preparazione della sospensione di riferimento, sfumature di colore bruno-giallo-rosso si effettua, come
osservando verticalmente lungo l'asse del tubo contro specificato nella monografia, uno dei due procedimenti
fondo nero alla luce diffusa del giorno. La diffusione seguenti.
della luce deve essere tale da permettere di differenziare

ivittaeR
facilmente la sospensione di riferimento I dall'acqua R Una soluzione e© incolore se ha l'aspetto dell'acqua R o
e la sospensione di riferimento II dalla sospensione di del solvente o se non e© piu© intensamente colorata della
riferimento I. soluzione di riferimento B9.
Un liquido e© considerato limpido se la sua limpidezza e© METODO I

itnemogrA
ilareneG
la stessa di quella dell'acqua R o del solvente utilizzato
se esaminato nelle condizioni descritte precedente- In tubi da saggio identici, di vetro neutro, incolori,
mente, o se la sua opalescenza non e© piu© intensa di trasparenti ed aventi un diametro esterno di 12 mm,
quella della sospensione di riferimento I. confrontare 2,0 ml del liquido in esame con 2,0 ml di
acqua R o di solvente oppure della soluzione di riferi-

eifargonoM

ilareneG
mento (vedi Tabelle delle soluzioni di riferimento)
indicata nella monografia. Confrontare i colori osser-
REATTIVI vando orizzontalmente per trasparenza contro fondo
bianco alla luce diffusa del giorno.

ehcituecamraF
Idrazina solfato soluzione. Disciogliere 1,0 g di idrazina
solfato R in acqua R e diluire a 100,0 ml con lo stesso

emroF
METODO II
solvente. Lasciare a riposo per 4-6 h.
In tubi da saggio identici, di vetro neutro, incolori,
Esametilentetrammina soluzione. Disciogliere 2,5 g di trasparenti ed aventi un diametro interno compreso
esametilentetrammina R in 25,0 ml di acqua R in una tra 15 mm e 25 mm ed a fondo piatto, confrontare il
beuta da 100 ml con tappo a smeriglio. liquido in esame con acqua R o con il solvente, oppure
eiretaM

emirP
Sospensione primaria di opalescenza. Aggiungere con la soluzione di riferimento (vedi Tabelle delle solu-
25,0 ml di idrazina solfato soluzione nella beuta conte- zioni di riferimento), come indicato nella monografia;
nente la soluzione di esametilentetrammina. Mescolare la colonna del liquido e© alta 40 mm. Confrontare i
colori osservando verticalmente per trasparenza contro
ehcituecamraF

e lasciare a riposo per 24 h. Questa sospensione e© sta-

inoizaraperP

fondo bianco alla luce diffusa del giorno.

ehcificepS

bile per 2 mesi avendo cura che sia conservata in un

recipiente di vetro a pareti perfettamente lisce; la
sospensione non deve aderire al vetro e deve essere REATTIVI
mescolata con cura prima dell'uso.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Soluzioni primarie

Standard di opalescenza. Diluire 15,0 ml di sospensione

primaria di opalescenza a 1000,0 ml con acqua R. Que- Soluzione gialla. Disciogliere 46 g di ferro(-ico) cloruro R
sta sospensione e© preparata al momento dell'uso e puo© in circa 900 ml di una miscela di 25 ml di acido clori-
essere conservata al massimo per 24 h. drico R e 975 ml di acqua R e diluire a 1000,0 ml con la
stessa miscela. Titolare e portare poi la soluzione ad
Sospensioni di riferimento. Preparare le sospensioni di rife- un contenuto di 45,0 mg di FeC13.6H2O per millilitro
ecidnI

rimento secondo le indicazioni della Tabella 2.2.1.-1. mediante aggiunta della stessa miscela acida. Proteg-
Mescolare ed agitare prima dell'uso. gere la soluzione dalla luce.

29
Grado di colorazione dei liquidi

Titolazione. Porre in una beuta con tappo a smeriglio Soluzioni standard

della capacita© di 250 ml, 10,0 ml di soluzione, 15 ml Usando le tre soluzioni primarie, preparare le cinque
di acqua R, 5 ml di acido cloridrico R e 4 g di potassio soluzioni standard nel modo seguente:
ioduro R, chiudere la beuta, lasciare a riposo per 15 min
al buio e aggiungere 100 ml di acqua R. Titolare lo iodio
liberato con sodio tiosolfato 0,1 M usando, come indica- Tabella 2.2.2.-1.
tore, 0,5 ml di amido soluzione R, aggiunto alla fine
della titolazione. Volume in millilitri

Soluzione

1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M equivale a 27,03 mg di

Acido
standard Soluzione Soluzione Soluzione
cloridrico

FeC13.6H2O.
gialla rossa blu
(10 g/l HCl)

B (bruna) 3,0 3,0 2,4 1,6

Soluzione rossa. Disciogliere 60 g di cobalto cloruro R GB (giallo-brunastra) 2,4 1,0 0,4 6,2
in circa 900 ml di una miscela di 25 ml di acido clori- G (gialla) 2,4 0,6 0,0 7,0
drico R e di 975 ml di acqua R e diluire a 1000,0 ml con GV (giallo-verdastra) 9,6 0,2 0,2 0,0
la stessa miscela. Titolare e aggiustare la soluzione ad R (rossa) 1,0 2,0 0,0 7,0
un contenuto di 59,5 mg di CoC12.6H2O per millilitro
mediante aggiunta della stessa miscela acida.
Titolazione. Porre in una beuta con tappo a smeriglio Soluzioni di riferimento per i Metodi I e II

della capacita© di 250 ml, 5,0 ml della soluzione, 5 ml di Usando le cinque soluzioni standard, preparare le
idrogeno perossido soluzione diluita R e 10 ml di una solu- seguenti soluzioni di riferimento.
zione (300 g/1) di sodio idrossido R. Bollire cautamente
per 10 min, lasciar raffreddare e aggiungere 60 ml
di acido solforico diluito R e 2 g di potassio ioduro R. Tabella 2.2.2.-2.- Soluzioni di riferimento B
Chiudere la beuta e disciogliere il precipitato agitando
cautamente. Titolare lo iodio liberato con sodio tiosol- Volume in millilitri

fato 0,1 M usando, come indicatore, 0,5 ml di amido Soluzione

soluzione R aggiunto alla fine della titolazione. Il punto

di riferimento Acido cloridrico
Soluzione standard B
(10 g/l HCl)

di fine titolazione e© raggiunto quando la soluzione vira

al rosa. B1 75,0 25,0
B2 50,0 50,0
1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M equivale a 23,79 mg di B3 37,5 62,5
B4 25,0 75,0
CoC12.6H2O. B5 12,5 87,5
B6 5,0 95,0
Soluzione blu. Disciogliere 63 g di rame(-ico) solfato R B7 2,5 97,5
in circa 900 ml di una miscela di 25 ml di acido clori- B8 1,5 98,5
drico R e di 975 ml di acqua R e diluire a 1000,0 ml con B9 1,0 99,0
la stessa miscela. Titolare e aggiustare la soluzione ad
un contenuto di 62,4 mg di CuSO4.5H2O per millilitro
mediante aggiunta della suddetta soluzione acida. Tabella 2.2.2.-3.- Soluzioni di riferimento GB
Titolazione. Porre in una beuta con tappo a smeriglio Volume in millilitri

della capacita© di 250 ml, 10,0 ml della soluzione, 50 ml

Soluzione

di riferimento

di acqua R, 12 ml di acido acetico diluito R e 3 g di potas-

Acido cloridrico
Soluzione standard GB
(10 g/l HCl)

sio ioduro R. Titolare lo iodio liberato con sodio tiosol-

fato 0,1 M usando, come indicatore, 0,5 ml di amido GB1 100,0 0,0
soluzione R aggiunto alla fine della titolazione. Il punto GB2 75,0 25,0
di fine titolazione e© raggiunto quando la soluzione GB3 50,0 50,0
mostra un leggero colore marrone pallido. GB4 25,0 75,0
GB5 12,5 87,5
GB6 5,0 95,0
1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M equivale a 24,97 mg di GB7 2,5 97,5
CuSO4.5H2O.

30
 Determinazione potenziometrica del pH

inoizircserP
Tabella 2.2.2.-4.- Soluzioni di riferimento G

ilareneG
Conservazione

Per il Metodo I, le soluzioni di riferimento possono

Volume in millilitri
essere conservate al riparo dalla luce in tubi di vetro
Soluzione
incolore, trasparente e neutro, saldati ed aventi un dia-
metro esterno di 12 mm. Per il Metodo II preparare le
di riferimento
Acido cloridrico

isilanA id
Soluzione standard G

idoteM
soluzioni di riferimento al momento dell'uso a partire
(10 g/l HCl)

dalle soluzioni standard.

G1 100,0 0,0
G2 75,0 25,0

irotinetnoC
G3 50,0 50,0

/ ilairetaM
2.2.3. DETERMINAZIONE POTENZIOMETRICA
G4 25,0 75,0 DEL pH
G5 12,5 87,5
G6 5,0 95,0
G7 2,5 97,5 Il pH e© un numero che rappresenta convenzionalmente
la concentrazione degli ioni idrogeno di una soluzione
acquosa. Per ragioni pratiche la sua definizione e© speri-

ivittaeR
mentale. Il pH di una soluzione in esame si esprime in
riferimento con quello di una soluzione di riferimento
Tabella 2.2.2.-5.- Soluzioni di riferimento GV (pHS) secondo l'equazione:

itnemogrA
ilareneG
Volume in millilitri
E ÿ ES
pH ˆ pHS ÿ
k
Soluzione

di riferimento
Acido cloridrico
Soluzione standard GV
(10 g/l HCl)

dove E e© il potenziale, espresso in volt, della cella

eifargonoM
contenente la soluzione in esame ed ES e© il potenziale,

ilareneG
GV1 25,0 75,0 espresso in volt, della cella contenente la soluzione a
GV2 15,0 85,0 pH noto (pHS).
GV3 8,5 91,5
GV4 5,0 95,0 Tabella 2.2.3.-1.- Valori di k a differenti temperature

ehcituecamraF
GV5 3,0 97,0

emroF
GV6 1,5 98,5
GV7 0,75 99,25
Temperatura ‘C k

15 0,0572

eiretaM
20 0,0582

emirP
25 0,0592
Tabella 2.2.2.-6.- Soluzioni di riferimento R 30 0,0601
35 0,0611 ehcituecamraF

Volume in millilitri
inoizaraperP

La determinazione potenziometrica del pH si effettua

ehcificepS

Soluzione

di riferimento
Acido cloridrico
misurando la differenza di potenziale tra due elettrodi
appropriati immersi nella soluzione in esame; uno di
Soluzione standard R
(10 g/l HCl)

questi e© un elettrodo sensibile agli ioni idrogeno (gene-

R1 100,0 0,0 ralmente un elettrodo a vetro) e l'altro un elettrodo di
ehcitapoemO
inoizaraperP

R2 75,0 25,0 riferimento (ad esempio l'elettrodo a calomelano

R3 50,0 50,0
saturo).
R4 37,5 62,5 Apparecchio. L'apparecchio di misura e© un voltmetro
R5 25,0 75,0 con una resistenza di entrata almeno 100 volte supe-
R6 12,5 87,5
riore a quella degli elettrodi utilizzati. Eé di solito gra-
duato in unita© di pH ed ha una sensibilita© tale da
ecidnI

R7 5,0 95,0 discriminare almeno 0,05 unita© di pH oppure almeno

0,003 V.

31
Determinazione potenziometrica del pH

Tabella 2.2.3. -2.- pH delle soluzioni tampone di riferimento a temperature diverse

Potassio fosfato Potassio fosfato
Sodio carbonato
monobasico monobasico
Potassio Potassio Potassio citrato Disodio 0,025 M +
Potassio ftalato 0,025 M + 0,0087 M +
tetraossalato tartrato acido monobasico tetraborato Sodio bicar-
acido 0,05 M Sodio fosfato Sodio fosfato
0,05 M (saturo a 25 ‘C) 0,05 M 0,01 M bonato
Temperatura
dibasico dibasico
0,025 M
‘C
0,025 M 0,0303 M

C4H3KO8 C4H5KO6 C6H7KO7 C8H5KO4 KH2PO4 + KH2PO4 + Na2B4O7, Na2CO3 +

2H2O Na2HPO4 Na2HPO4 10 H2O NaHCO3

15 1,67 ö 3,80 4,00 6,90 7,45 9,28 10,12

20 1,68 ö 3,79 4,00 6,88 7,43 9,23 10,06
25 1,68 3,56 3,78 4,01 6,87 7,41 9,18 10,01
30 1,68 3,55 3,77 4,02 6,85 7,40 9,14 9,97
35 1,69 3,55 3,76 4,02 6,84 7,39 9,10 9,93

4 pH 1 + 0,001 0,0014 0,0022 + 0,0012 0,0028 0,0028 0,0082 0,0096

4 t † ÿ ÿ ÿ ÿ ÿ ÿ

(1) Variazioni di pH per gradi Celsius

Metodo. Se non e© diversamente prescritto nella mono- Potassio tartrato acido saturo a 25 ‘C. Agitare vigoro-
grafia, tutte le misure vengono effettuate alla stessa samente un eccesso di C4H5KO6 con acqua R a 25 ‘C.
temperatura (da 20 ‘C a 25 ‘C). La tabella 2.2.3.-2 Filtrare o decantare. Preparare immediatamente prima
indica le variazioni di pH rispetto alla temperatura per
dell'uso.
un certo numero di soluzioni tampone di riferimento
Potassio citrato monobasico 0,05 M. Disciogliere 11,41 g
usate per la taratura. Per una correzione della tempera-
tura, quando necessario, attenersi alle istruzioni del di C6H7KO7 in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo
stesso solvente. Preparare immediatamente prima
costruttore. L'apparecchio viene tarato con la soluzione
tampone di potassio ftalato acido (standard primario) dell'uso.
e con un'altra soluzione tampone avente diverso pH Potassio ftalato acido 0,05 M. Disciogliere 10,13 g di
(preferibilmente una di quelle mostrate nella Tabella C8H5KO4, essiccati a 110-135 ‘C, in acqua R e diluire a
2.2.3.-2). Il pH di valore intermedio di una terza solu-
1000,0 ml con lo stesso solvente.
zione tampone, letto sulla scala, non deve differire piu©
di 0,05 unita© di pH dal valore corrispondente a questaPotassio fosfato monobasico 0,025 M + sodio fosfato
soluzione. Immergere gli elettrodi nella soluzione in dibasico 0,025 M. Disciogliere 3,39 g di KH2PO4 e 3,53 g
esame ed effettuare la lettura nelle stesse condizioni di Na2HPO4 entrambi essiccati per 2 h a 110-130 ‘C,
usate per le soluzioni tampone. in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Quando l'apparecchio e© usato frequentemente, i con- Potassio fosfato monobasico 0,0087 M + sodio fosfato
trolli devono essere effettuati ad intervalli regolari. In
dibasico 0,0303 M. Disciogliere 1,18 g di KH2PO4 e
caso contrario il controllo deve essere effettuato prima
di ogni misura. 4,30 g di Na2HPO4, essiccati per 2 h a 110-130 ‘C, in
acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Tutte le soluzioni in esame e le soluzioni tampone di riferi-
mento devono essere preparate usando acqua esente da Disodio tetraborato 0,01 M. Disciogliere 3,80 g di
anidride carbonica R. Na2B4O7.10H2O in acqua R e diluire a 1000,0 ml con
lo stesso solvente. Conservare al riparo dalla anidride
Prepazione delle soluzioni tampone di riferimento carbonica atmosferica.
Potassio tetraossalato 0,05 M. Disciogliere 12,61 g di Sodio carbonato 0,025 M + sodio bicarbonato 0,025 M.
C4H3KO8.2H2O in acqua R, e diluire a 1000,0 ml con Disciogliere 2,64 g di Na2CO3 e 2,09 g di NaHCO3 in
lo stesso solvente. acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.

32
 Densita© relativa

inoizircserP

ilareneG
2.2.4. CORRELAZIONE TRA REAZIONE DELLA SOLUZIONE, pH APPROSSIMATO E COLORAZIONE

DI ALCUNI INDICATORI

Tabella 2.2.4.-1.

isilanA id
idoteM
Reazione pH Indicatore Colore

irotinetnoC
/ ilairetaM
Alcalina > 8 Tornasole cartina R Blu
Blu timolo soluzione R (0,05 ml) Grigio o blu violetto
Debolmente alcalina 8,0-10,0 Fenolftaleina cartina R (0,05 ml) Incolore o rosa
Blu timolo soluzione R (0,05 ml) Grigio

ivittaeR
Fortemente alcalina > 10 Fenolftaleina cartina R Rosso
Blu timolo soluzione R (0,05 ml) Blu violetto

itnemogrA
6,0-8,0 Rosso metile soluzione R Giallo

ilareneG
Neutra

Rosso fenolo soluzione R (0,05 ml)

Neutra al rosso metile 4,5-6,0 Rosso metile soluzione R Rosso-arancione
Neutra alla fenolftaleina < 8; 0 Fenolftaleina soluzione R (0,05 ml) Incolore, rosa o rosso per aggiunta di 0,05 ml
di base 0,1 M

eifargonoM

ilareneG
Acida < 6 Rosso metile soluzione R Arancio o rosso
Blu bromotimolo soluzione R1 Giallo

ehcituecamraF
Debolmente acida 4,0-6,0 Rosso metile soluzione R Arancio

emroF
Verde bromocresolo soluzione R Verde o blu
Fortemente acida < 4 Rosso Congo cartina R Verde o blu

eiretaM

emirP
2.2.5. DENSITAé RELATIVA La densita© 20 di una sostanza e© il rapporto tra la sua
q

massa e il suo volume a 20 ‘C. Essa e© espressa in chilo-

La densita© relativa d 2020 di una sostanza e© il rapporto fra grammi per metro cubo (1 kg m-3 = 10-3 g cm-3).
ehcituecamraF

1 1
la massa di un certo volume della sostanza e la massa
inoizaraperP

ehcificepS

di un uguale volume d'acqua entrambi pesati a 20 ‘C.

Determinare la densita© relativa d 2020 con precisione al Le relazioni numeriche fra la densita© relativa e la
densita© espressa in chilogrammi per metro cubo sono
numero dei decimali indicati nella monografia, usando le seguenti:
un picnometro, una bilancia idrostatica o un areome-
ehcitapoemO
inoizaraperP

tro. Non si tiene conto della spinta dell'aria durante la

pesata; questo puo© indurre l'errore di 1 unita© nella terza 20 = 998,202 d 2020 o d 2020 = 1,00180 10-3202

cifra decimale.
Due altre definizioni sono comunemente utilizzate. 20 = 999,972 d 204 o d 204 = 1,00003 10-320 2

La densita© relativa d 204 di una sostanza e© il rapporto fra

la massa di un certo volume della sostanza a 20 ‘C e la
ecidnI

massa di un uguale volume d'acqua a 4 ‘C. d 204 = 0,998230 d 2020

33
Potere rotatorio

2.2.6. INDICE DI RIFRAZIONE potere rotatorio specifico m t e© comunemente espresso

‰ Š

in milliradianti per metri quadrati per chilogrammo

L'indice di rifrazione di un mezzo rispetto all'aria e© (mrad m kg ).
1
2
1
-1
uguale al rapporto tra il seno dell'angolo di incidenza La Farmacopea adotta le seguenti definizioni conven-
di un raggio luminoso nell'aria ed il seno dell'angolo di zionali.
rifrazione del raggio rifratto nel mezzo considerato.
Se non e© diversamente prescritto, l'indice di rifrazione L'angolo di rotazione ottica di un liquido non diluito e©
viene determinato a 20 0,5 ‘C con riferimento alla l'angolo di rotazione , espresso in gradi (‘), del piano
a
6

lunghezza d'onda della riga D del sodio ( = 589,3 nm); di polarizzazione alla lunghezza d'onda della riga D
il simbolo e© n20D.
k
del sodio ( = 589,3 nm), misurato a 20 ‘C, usando
k

uno strato di 1 decimetro. Nel caso di una soluzione, il

I rifrattometri normalmente determinano l'angolo metodo di preparazione e© stabilito nella monografia.
limite. In questi apparecchi la parte essenziale e© un Il potere rotatorio specifico 20D di un liquido e© l'angolo
prisma, ad indice di rifrazione conosciuto, messo a con- ‰ Š

di rotazione , espresso in gradi (‘), del piano di pola-

tatto con il liquido da esaminare. a

rizzazione alla lunghezza d'onda della riga D del sodio

Per tarare l'apparecchio usare i liquidi di riferimento ( = 589,3 nm), misurato a 20 ‘C, sulla sostanza liquida
elencati nella Tabella 2.2.6.-1. Il valore dell'indice di
k

in esame, riferito ad uno strato di 1 decimetro e diviso

rifrazione di ciascun liquido di riferimento e© riportato per la densita© espressa in grammi per centimetro cubo.
in etichetta. Il potere rotatorio specifico 20D di una sostanza in solu-
‰ Š

Tabella 2.2.6.-1. zione e© l'angolo di rotazione , espresso in gradi (‘),

a

del piano di polarizzazione alla lunghezza d'onda della

n/ t riga D del sodio ( = 589,3 nm), misurato a 20 ‘C, su
k
Liquido di riferimento D D (coefficiente di temperatura)
una soluzione della sostanza in esame, riferito ad uno
Trimetilpentano SCR 0,00049 strato di 1 decimetro e ad una concentrazione di
Toluene SCR
ÿ

0,00056 1 grammo di sostanza per millilitro. Il potere rotatorio

Metilnaftalene SCR
ÿ

0,00048 specifico di una sostanza in soluzione viene sempre rife-

rito ad un determinato solvente e ad una data concen-
ÿ

Quando si usa la luce bianca, il rifrattometro deve avere trazione.

un sistema di compensazione. L'apparecchio da© letture Nel sistema convenzionale adottato dalla Farmacopea,
esatte almeno alla terza cifra decimale e possiede un il potere rotatorio specifico e© espresso mediante il suo
dispositivo che permette di lavorare alla temperatura valore senza unita© ; le unita© attuali, gradi per millilitri
prescritta. Il termometro e© graduato ad intervalli di per decimetro per grammo [(‘) ml dm-1 g-1], sono sot-
1 1 1

0,5 ‘C o meno. tointese.

Il fattore di conversione dal Sistema Internazionale a
quello della Farmacopea e© il seguente:
2.2.7. POTERE ROTATORIO

t t
Il potere rotatorio e© la proprieta© posseduta dalle ‰ m Š ˆ ‰ Š 20; 1745
sostanze chirali di fare ruotare il piano di polarizza-
zione della luce polarizzata. In certi casi precisati, nella monografia, l'angolo di
La rotazione ottica e© considerata essere positiva (+) per rotazione puo© essere misurato a temperature diverse da
le sostanze destrorotatorie (i. e. quelle che ruotano il 20 ‘C e ad altre lunghezze d'onda.
piano di polarizzazione in senso orario) e negativa (-) Il polarimetro deve permettere letture di circa 0,01‘.
per le sostanze levorotatorie. Il controllo della scala dell'apparecchio si esegue gene-
Il potere rotatorio specifico m t e© la rotazione, ralmente facendo uso di lame di quarzo certificate.
‰ Š

espressa in radianti (rad) e misurata alla temperatura t La linearita© della scala puo© essere verificata con l'im-
e alla lunghezza d'onda , data da uno strato dello spes-
k
piego di soluzioni di saccarosio.
sore di 1 metro di un liquido o di una soluzione conte- Metodo. Determinare lo zero del polarimetro e l'angolo
nente 1 chilogrammo di sostanza otticamente attiva di rotazione della luce polarizzata alla lunghezza d'onda
per metro cubo di soluzione. Per ragioni pratiche, il della riga D del sodio ( = 589,3 nm) a 20 0,5 ‘C.
k 6

34
 Metodo del viscosimetro a capillare

inoizircserP
Le misure possono essere effettuate a temperature La viscosita© cinematica v, espressa in metri quadrati per

ilareneG
diverse solo se la monografia indica la correzione di secondo, si ottiene dividendo la viscosita© dinamica 
temperatura da apportare al potere rotatorio misurato. per la densita© del liquido, espressa in chilogrammi
q

Determinare lo zero dell'apparecchio con il tubo per metro cubo, misurata alla stessa temperatura,
chiuso, vuoto nel caso di sostanze liquide, o riempito v =. Laviscosita© cinematica e© normalmente espressa
ˆ

isilanA id
in millimetri quadrati per secondo.

idoteM
con il solvente prescritto nel caso di sostanze solide.
Calcolare il potere rotatorio specifico applicando le Un viscosimetro a capillare puo© essere usato per la
seguenti formule. determinazione della viscosita© di liquidi newtoniani
mentre un viscosimetro a corpo rotante puo© essere

irotinetnoC
usato per la determinazione della viscosita© dei liquidi

/ ilairetaM
Per le sostanze liquide non diluite: 20 ˆ
l 20 ‰ Š
D 1 newtoniani e non-newtoniani.
20 1000 Altri viscosimetri possono essere impiegati, a condi-
Per le sostanze in soluzione: D l c ‰ Š ˆ
zione che la precisione non sia inferiore a quella otte-
nuta con i viscosimetri di seguito descritti.
1

dove c e© la concentrazione della soluzione in g/l.

ivittaeR
Calcolare il contenuto c in g/l o il contenuto c' in
per cento m/m di una sostanza disciolta usando le 2.2.9. METODO DEL VISCOSIMETRO A CAPIL-
seguenti formule:

itnemogrA
ilareneG
LARE

c 1000 c 1000 La determinazione della viscosita© usando un appro-

priato viscosimetro capillare viene effettuata alla tem-
0

l 20D l 20
ˆ ˆ
Š 120
D
peratura di 20 0,1 ‘C, salvo indicazione contraria. Il
1‰ Š 1‰
6

eifargonoM
tempo necessario perchë il livello del liquido si sposti

ilareneG
= angolo di rotazione, espresso in gradi, letto da un segno all'altro si misura con un cronometro a un
a 20 0,5 ‘C;
6
quinto di secondo.
l = lunghezza, in decimetri, del tubo polarimetrico;
20 = densita© a 20 ‘C in grammi per centimetro cubo. Il risultato e© valido solo se le due letture consecutive

ehcituecamraF
Per gli scopi della Farmacopea, la densita© e© non differiscono piu© dell'1 per cento. La media di non
meno di tre letture fornisce il tempo di deflusso del

emroF
sostituita dalla densita© relativa (2.2.5); liquido in esame.
c = concentrazione della sostanza in g/l;
c' = contenuto della sostanza in per cento m/m. Calcolare la viscosita© dinamica  (2.2.8) in millipascal
secondi, usando la formula:

eiretaM

emirP
 kt
ˆ

2.2.8. VISCOSITAé

k = costante del viscosimetro espressa in millimetri

La viscosita© dinamica o coefficiente di viscosita© e© la quadrati per secondo quadrato,
ehcituecamraF

g
inoizaraperP

forza tangenziale riferita all'unita© di superficie, detta

ehcificepS

forza di taglio , ed espressa in pascal, necessaria per

s  = densita© del liquido in esame espressa in milli-
spostare, parallelamente al piano di scorrimento, uno grammi per millimetro cubo ed ottenuta moltipli-
strato di liquido di 1 metro quadrato alla velocita©  † cando la sua densita© relativa (d 2020) per 0,9982,
di 1 metro al secondo, rispetto ad uno strato parallelo
ehcitapoemO
inoizaraperP

situato ad una distanza (x) di 1 metro. t = tempo di deflusso, in secondi, del liquido in esame.
Il rapporto d/dx costituisce un gradiente di velocita© e
rappresenta la velocita© di taglio D, espressa in secondi La costante k si determina usando un appropiato
reciproci (s-1), per cui  = t/D. liquido per la taratura del viscosimetro indicato in Far-
macopea.
L'unita© della viscosita© dinamica e© il pascal-secondo
Per calcolare la viscosita© cinematica (mm2 s-1) usare la
ecidnI

(Pa s). Il sottomultiplo piu© correntemente usato e© il mil-

1 1

lipascal-secondo (mPa s). 1 formula seguente: v = kt.

35
Metodo del viscosimetro a corpo rotante

Tabella 2.2.9.-1.
Numero di grandezza Costante nominale Intervallo della Diametro interno Volume del bulbo Diametro interno

del viscosimetro del viscosimetro viscosita© cinematica del tubo R C del bulbo N
mm2 s-2
1 mm2 s-1
1 mm ( 2%)
6 ml ( 5%)
6 mm
1 0,01 3,5 - 10 0,64 5,6 2,8 - 3,2
1A 0,03 6 - 30 0,84 5,6 2,8 - 3,2
2 0,1 20 - 100 1,15 5,6 2,8 - 3,2
2A 0,3 60 - 300 1,51 5,6 2,8 - 3,2
3 1,0 200 - 1000 2,06 5,6 3,7 - 4,3
3A 3,0 600 - 3000 2,74 5,6 4,6 - 5,4
4 10 2000 - 10000 3,70 5,6 4,6 - 5,4
4A 30 6000 - 30000 4,07 5,6 5,6 - 6,4
5 100 20000 - 100000 6,76 5,6 6,8 - 7,5

La determinazione puo© essere fatta utilizzando un Metodo. Riempire il viscosimetro attraverso il tubo (L)
apparecchio (vedi figura 2.2.9.-1) che corrisponde alle con una quantita© sufficiente del liquido in esame, prece-
specifiche descritte nella Tabella (2.2.9.-1)(1). dentemente portato a 20 ‘C, se non diversamente pre-
Il tempo minimo di deflusso deve essere di 350 s per il scritto, e riempire il bulbo (A), ma in modo che il livello
viscosimetro di grandezza no. 1 e di 200 s per tutte le del liquido nel bulbo (B) sia al di sotto dell'orifizio del
altre grandezze. tubo di ventilazione (M). Immergere il viscosimetro in
un bagno ad acqua a 20 0,1 ‘C, se non diversamente
6

prescritto, mantenere il viscosimetro in posizione verti-

cale e lasciare a riposo per non meno di 30 min per sta-
bilire l'equilibrio termico. Chiudere il tubo (M) e innal-
zare il livello del liquido del tubo (N) fino ad una
altezza di circa 8 mm superiore al segno (E). Mantenere
il liquido a questo livello chiudendo il tubo (N) e
aprendo il tubo (M). Aprire il tubo (N) e misurare, con
un cronometro a un quinto di secondo, il tempo impie-
gato dal liquido per scendere dal segno (E) al segno (F).

2.2.10. METODO DEL VISCOSIMETRO A CORPO

ROTANTE

I viscosimetri a corpo rotante correntemente usati si

basano sulla misurazione delle forze di taglio in seno
ad un mezzo liquido posto tra due cilindri coassiali
uno dei quali e© mosso da un motore e l'altro e© trascinato
dalla rotazione del primo. In queste condizioni la deter-
minazione della viscosita© (o viscosita© apparente)
diventa una misurazione (M) dell'angolo di deviazione
del cilindro trascinato, che corrisponde al momento
della forza di torsione espresso in newton-metri.
Per un flusso laminare, la viscosita© dinamica , espressa
Figura 2.2.9.- 1.- Viscosimetro a livello sospeso in pascal-secondi, e© data dalla formula:
Dimensioni in millimetri
(1) La Farmacopea Europea descrive il sistema proposto dall'Orga- ˆ
1 M  
1 1
! 4: h R2A R2B
2 ÿ
nizzazione Internazionale per la Standardizzazione (ISO).

36
 Intervallo di distillazione

inoizircserP
dove h e© l'altezza d'immersione in metri del cilindro tra-

ilareneG
2.2.11. INTERVALLO DI DISTILLAZIONE

scinato nel mezzo liquido, RA e RB sono i raggi dei cilin- L'intervallo di distillazione e© l'intervallo di tempera-
dri espressi in metri, essendo RA piu© piccolo di RB e ! tura, corretta per una pressione di 101,3 kPa (760 Torr),
e© la velocita© angolare espressa in radianti per secondo. entro il quale un liquido od una determinata frazione
La costante k dell'apparecchio (1) puo© essere determi- di liquido, distilla nelle condizioni seguenti.

isilanA id
nata a diverse velocita© di rotazione utilizzando un

idoteM
liquido per la taratura dei viscosimetri, indicato in Apparecchio. Eé costituito da (vedi Figura 2.2.11.-1) un
pallone da distillazione (A), con un tubo refrigerante
Farmacopea. La viscosita© quindi corrisponde alla rettilineo (B) che si fissa al braccio laterale del pallone
relazione: e una allunga (C) attaccata alla parte terminale del
M refrigerante. La parte terminale del refrigerante puo© ,

irotinetnoC
/ ilairetaM
 k alternativamente, essere piegata e sostituire l'allunga.
!
ˆ

Un termometro e© sistemato nel collo del pallone in

Metodo. Misurare la viscosita© seguendo le istruzioni per modo che l'estremita© superiore del serbatoio di mercurio
l'uso del viscosimetro a corpo rotante. La temperatura si trovi 5 mm piu© in basso della giunzione della parete
inferiore del tubo laterale. Il termometro e© graduato a
per misurare la viscosita© e© indicata nella monografia.

ivittaeR
0,2 ‘C e la sua scala copre un intervallo di circa 50 ‘C.
Nel caso di sistemi pseudoplastici e di altri sistemi Durante la determinazione il pallone, incluso il suo
non-newtoniani, la monografia precisa il tipo di visco- collo, e© protetto dalle correnti d'aria mediante un
simetro da usare e indica la velocita© angolare o la velo- appropriato schermo.
cita© di taglio da usare nella misura. Se non e© possibile Metodo. Porre nel pallone (A) 50,0 ml del liquido

itnemogrA
ilareneG
ottenere esattamente la velocita© di taglio indicata, uti- in esame e qualche frammento di materiale poroso.
lizzare una velocita© di taglio leggermente piu© elevata Raccogliere il distillato in un cilindro da 50 ml gra-
ed una velocita© di taglio leggermente piu© bassa ed duato a 1 ml. Un raffreddamento a circolazione d'acqua
interpolare. e© indispensabile per i liquidi che distillano al di sotto
di 150 ‘C. Scaldare il pallone in modo da raggiungere

eifargonoM

ilareneG
(1) Gli apparecchi commerciali sono forniti di tabelle con le costanti rapidamente l'inizio dell'ebollizione e leggere la tempe-
dell'apparecchio in relazione all'area superficiale dei cilindri usati e ratura al momento in cui la prima goccia del distillato
alla loro velocita© di rotazione. cade nel cilindro. Aggiustare la temperatura in modo

ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

Figura 2.2.11.-1. - Apparecchio per la determinazione dell'intervallo di distillazione

ecidnI

Dimensioni in millimetri

37
Determinazione dell'acqua per distillazione

da ottenere una velocita© costante di distillazione di Correggere la temperatura osservata in funzione della
2-3 ml per minuto e leggere la temperatura quando la pressione barometrica, mediante la formula:
totalita© o la quantita© di liquido indicata, misurata a t1 t2 k 101; 3 b
20 ‘C, ha distillato. ˆ ‡ ÿ †

Correggere le temperature osservate in funzione della t = temperatura corretta;

pressione barometrica mediante la formula: 1
t2 = temperatura letta, alla pressione barometrica b;
t1 t2 k 101; 3 b
ˆ ‡ ÿ †

k = fattore di correzione (come riportato in Tabella

t1 = temperatura corretta; 2.2.11.-1 del capitolo Intervallo di distillazione);
t2 = temperatura letta, alla pressione barometrica b; b = pressione barometrica, in chilopascal, durante la
distillazione.
k = fattore di correzione (come riportato in Tabella
2.2.11.-1 se il fattore non e© dato);
b = pressione barometrica, in chilopascal, durante la
distillazione. 2.2.13. DETERMINAZIONE DELL'ACQUA PER

DISTILLAZIONE

Tabella 2.2.11.-1. ö Correzione della temperatura L'apparecchio (vedi Figura 2.2.13.-1) e© costituito da un
in funzione della pressione pallone di vetro (A) collegato con un tubo (D) ad un
altro tubo cilindrico (B) a sua volta attaccato ad un col-
k
lettore graduato (E) ad un refrigerante a ricadere (C).
Temperatura di distillazione Fattore di correzione
Il collettore (E) e© graduato a 0,1 ml. Come
fino a 100 ‘C 0,30
sorgente di calore e© preferibile usare un riscaldatore
tra 100 ‘C e 140 ‘C 0,34
elettrico con regolatore a reostato o un bagno ad olio.
tra 140 ‘C e 190 ‘C 0,38 La parte superiore del pallone ed il tubo di raccordo
tra 190 ‘C e 240 ‘C 0,41 possono essere protetti termicamente.
sopra i 240 ‘C 0,45 Metodo. Pulire il tubo collettore ed il refrigerante
dell'apparecchio, lavare bene con acqua ed asciugare.
Introdurre nel pallone ben secco 200 ml di toluene R e
2.2.12. PUNTO DI EBOLLIZIONE circa 2 ml di acqua R. Distillare per 2 h, lasciar raffred-
dare per circa 30 min e leggere il volume dell'acqua
Il punto di ebollizione e© la temperatura corretta alla con l'accuratezza di 0,05 ml. Introdurre nel pallone
quale la tensione di vapore di un liquido e© uguale a una quantita© di sostanza, pesata con l'accuratezza
101,3 kPa. dell'1 per cento, che possa dare circa 2 - 3 ml di acqua.
Apparecchio. L'apparecchio e© quello utilizzato per l'in- Se la sostanza e© di consistenza pastosa, pesare in una
tervallo di distillazione (2.2.11) con la differenza che il navicella costituita da un foglio metallico. Aggiungere
termometro e© inserito nel collo del pallone in modo alcuni pezzi di materiale poroso e scaldare il pallone
che la parte inferiore del bulbo sia a livello con il bordo dolcemente per 15 min. Quando il toluene inizia a bol-
inferiore del collo del pallone da distillazione, il quale lire, distillare alla velocita© di due gocce circa al secondo
viene appoggiato su piastra di materiale isolante con finchë la maggior parte di acqua e© stata raccolta, poi
un foro di 35 mm di diametro. aumentare la velocita© di distillazione a circa quattro
gocce al secondo. Quando tutta l'acqua e© stata raccolta,
Metodo. Porre nel pallone (A) 20 ml del liquido in esame pulire l'interno del refrigerante con toluene R, conti-
e qualche frammento di materiale poroso. Riscaldare nuare la distillazione per 5 min, interrompere il riscal-
in modo da raggiungere rapidamente il punto di ebolli- damento e lasciar raffreddare il tubo collettore a tem-
zione e leggere la temperatura alla quale il liquido passa peratura ambiente. Fare cadere le goccioline d'acqua
dal collo laterale del pallone nel refrigerante. che aderiscono alle pareti del tubo.

38
 Punto di fusione - metodo al capillare aperto

inoizircserP
Quando l'acqua e il toluene si sono completamente Quando prescritto nella monografia, lo stesso apparec-

ilareneG
separati, leggere il volume dell'acqua e calcolarne la chio e lo stesso metodo vengono utilizzati per la deter-
percentuale nella sostanza usando la formula: minazione di altri fattori, quali la formazione del meni-
sco o l'intervallo di fusione, che caratterizzano il com-
1000 n2 n1
ÿ † portamento alla fusione di una sostanza.

isilanA id
m Apparecchio. L'apparecchio e© costituito da:

idoteM
^ un appropriato vaso di vetro contenente un bagno
n1 = numero di millilitri di acqua ottenuti nella prima liquido
di
(ad esempio: acqua, paraffina liquida o olio
silicone) e connesso con un adeguato dispositivo
distillazione, di riscaldamento,

irotinetnoC
/ ilairetaM
n2 = numero di millilitri totali di acqua ottenuti in ^ un dispositivo meccanico di agitazione adatto ad
ambedue le distillazioni, assicurare una uniformita© della temperatura del
m = massa in grammi della sostanza. bagno,
^ un appropriato termometro graduato con intervalli
non superiori a 0,5 ‘C, e avente un segno di immer-

ivittaeR
sione. L'intervallo di temperatura del termometro
non e© superiore a 100 ‘C,
^ tubi capillari in vetro duro, esenti da alcali, chiusi ad
una estremita© , con pareti da 0,10 mm a 0,15 mm di
spessore e aventi un diametro interno compreso tra

itnemogrA
ilareneG
0,9 e 1,1 mm.
Metodo. Se non diversamente prescritto essiccare la
sostanza, finemente polverizzata, in vacuo e su gel di
silice anidro R per 24 h. Introdurre in un tubo capillare

eifargonoM
una quantita© sufficiente di sostanza in modo da for-

ilareneG
mare una colonna compatta di 4-6 mm in altezza.
Innalzare la temperatura del bagno a circa 10 ‘C al di
sotto del punto di fusione presunto. Quindi regolare il
riscaldamento dell'apparecchio a circa 1 ‘C al minuto.

ehcituecamraF
Quando la temperatura e© di circa 5 ‘C inferiore al

emroF
punto di fusione presunto, introdurre correttamente il
tubo capillare nello strumento. Nel caso del dispositivo
descritto sopra, sistemare il tubo capillare in modo che
l'estremita© inferiore chiusa si trovi a meta© altezza del
bulbo del termometro il cui segno di immersione e© a

eiretaM
livello della superficie del liquido. Leggere la tempera-

emirP
tura alla quale l'ultima particella passa in fase liquida.
Taratura dell'apparecchio. L'apparecchio puo© essere
tarato utilizzando sostanze di riferimento per il punto
ehcituecamraF

Figura 2.2.13.-1. - Apparecchio per la determinazione didellafusione, quali quelle dell'Organizzazione Mondiale
inoizaraperP

ehcificepS

dell'acqua mediante distillazione Sanita© o altre appropriate sostanze.

Dimensioni in millimetri
2.2.15. PUNTO DI FUSIONE - METODO AL
ehcitapoemO
inoizaraperP

CAPILLARE APERTO

2.2.14. PUNTO DI FUSIONE - METODO AL

Per alcune sostanze il punto di liquefazione, chiamato
CAPILLARE
comunemente punto di fusione, viene determinato con
il metodo seguente.
Il punto di fusione determinato mediante il metodo al Utilizzare tubi capillari di vetro aperti alle due estre-
capillare e© la temperatura alla quale l'ultima particella mita© , di 80 mm di lunghezza, aventi un diametro
di una sostanza solida, introdotta nel tubo capillare a
ecidnI

esterno di 1,4 - 1,5 mm e un diametro interno di 1,0 -

formare una colonna compatta, passa in fase liquida. 1,2 mm.

39
Punto di gocciolamento

Introdurre in ciascuno di cinque capillari una quantita© polverizzata ed eventualmente essiccata secondo le
di sostanza, precedentemente trattata come descritto, indicazioni riportate nel metodo per il tubo capillare;
in modo da formare in ciascun capillare una colonna pulire la superficie dopo ogni prova. Annotare la tem-
di circa 10 mm in altezza; lasciare i capillari a riposo peratura t1 alla quale per la prima volta la sostanza
per un tempo appropriato e alla temperatura prescritta. fonde istantaneamente appena tocca la superficie del
Fissare uno dei capillari ad un termometro graduato a metallo. Interrompere il riscaldamento. Durante il raf-
0,2 ‘C in modo tale che la sostanza si trovi vicino al freddamento far cadere delle particelle della sostanza
bulbo del termometro. Introdurre il termometro con il ad intervalli regolari sul blocco; pulire la superficie
capillare in un recipiente in modo che la distanza tra il dopo ogni prova. Leggere la temperatura t2 alla quale
fondo dello stesso e l'estremita© inferiore del bulbo del la sostanza cessa di fondere istantaneamente quando
termometro sia di 1 cm. Riempire il recipiente con viene in contatto con il metallo.
acqua fino ad un'altezza di 5 cm e innalzare la tempera- Taratura dell'apparecchio. L'apparecchio puo© essere
tura dell'acqua alla velocita© di 1 ‘C al minuto. tarato usando sostanze di riferimento per il punto di
La temperatura alla quale la sostanza comincia ad fusione, quali quelle dell'Organizzazione Mondiale
innalzarsi nel tubo capillare e© considerata come punto della Sanita© o altre sostanze appropriate.
di fusione.
Ripetere l'operazione con gli altri quattro tubi capillari
e calcolare il risultato come media delle cinque letture.
2.2.17. PUNTO DI GOCCIOLAMENTO

2.2.16. PUNTO DI FUSIONE - METODO DELLA Il punto di gocciolamento e© la temperatura alla quale la
FUSIONE ISTANTANEA
prima goccia della sostanza in esame in via di fusione
Il punto di fusione ottenuto con il metodo della fusione cade da un adatto contenitore, in condizioni definite.
istantanea si calcola usando l'espressione:
t1 t2
‡

2
dove t1 e© la prima temperatura e t2 la seconda tempera-
tura lette nelle condizioni sotto riportate.
Apparecchio. Eé costituito da un blocco di metallo inat-
taccabile dalle sostanze in esame, buon conduttore di
calore come l'ottone, con la superficie superiore piana
ed accuratamente pulita. Il blocco e© riscaldato uni-
formemente in tutta la sua massa per mezzo di un
dispositivo a gas o elettrico con regolatore di preci-
sione. Il blocco ha una cavita© cilindrica del diametro
sufficiente per contenere un termometro che deve essere
mantenuto nella stessa posizione durante la taratura
dell'apparecchio e la determinazione del punto di
fusione della sostanza in esame. La cavita© cilindrica e©
parallela alla faccia superiore levigata del blocco ed e©
distante da essa circa 3 mm. L'apparecchio si tara con
sostanze di riferimento appropriate aventi punto di
fusione noto.
Metodo. Riscaldare rapidamente il blocco fino a circa
10 ‘C al di sotto della temperatura di fusione presunta,
quindi regolare la velocita© del riscaldamento a circa
1 ‘C al minuto. Ad intervalli regolari far cadere
regolarmente sul blocco, in vicinanza del bulbo del Figura 2.2.17-1. - Apparecchio per la determinazione
termometro, alcune particelle della sostanza in esame del punto di gocciolamento - Dimensioni in millimetri

40
 Punto di solidificazione

inoizircserP
Apparecchio. L'apparecchio (vedi Figura 2.2.17.-1) e© e 25 mm di diametro posta nell'interno di un'altra

ilareneG
formato da due ghiere metalliche (A) e (B) avvitate tra provetta di circa 160 mm di lunghezza e 40 mm di
loro. La ghiera (A) e© fissata ad un termometro a mercu- diametro. La provetta interna e© chiusa con un tappo
rio. Una capsula metallica (F) e© fissata solidamente alla munito di termometro di circa 175 mm di lunghezza,
parte inferiore della ghiera (B) per mezzo di due placche graduato a 0,2 ‘C e fissato in modo che il bulbo si trovi
di fissaggio (E). Dei supporti fissi (D), di 2 mm di lun- a circa 15 mm dal fondo della provetta. Il tappo ha un

isilanA id
idoteM
ghezza, determinano l'esatta posizione della capsula e foro che permette l'introduzione del gambo di un agita-
servono per centrare il termometro. Un foro (C), prati- tore costituito da una bacchetta di vetro o di altro mate-
cato nella parete della ghiera (B), permette di equili- riale adatto, di cui una delle estremita© forma un anello
brare la pressione. La superficie di gocciolamento della di circa 18 mm di diametro perpendicolare alla bac-
capsula deve essere levigata ed i bordi del foro di uscita chetta. La provetta interna e la sua camicia sono man-

irotinetnoC
/ ilairetaM
devono essere ad angolo retto. La parte inferiore del tenute al centro di un contenitore cilindrico da 1 litro
termometro a mercurio ha la forma e le dimensioni contenente un adatto liquido refrigerante che riempie
indicate nella figura; il termometro permette misure di il recipiente fino a 20 mm dall'orlo. Un termometro e©
temperatura da 0 ‘C a 110 ‘C e, sulla sua scala, una mantenuto nel bagno refrigerante.
distanza di 1 mm rappresenta una differenza di 1 ‘C.
Il bulbo di mercurio del termometro ha un diametro di Metodo. Porre nella provetta una quantita© sufficiente

ivittaeR
3,5 0,2 mm ed una altezza di 6,0 0,3 mm. L'apparec- della sostanza in esame, liquida o precedentemente
fusa, in modo che essa ricopra interamente il bulbo del
6 6

chio descritto e© posto nell'asse di una provetta di circa

200 mm di lunghezza e con un diametro esterno di circa termometro e determinare il punto di solidificazione
40 mm ed e© fissato a questa per mezzo di un tappo for- approssimato con un rapido raffreddamento. Porre
nito di una scanalatura laterale. Il foro d'uscita della la provetta interna in un bagno la cui temperatura e© di

itnemogrA
ilareneG
capsula e© posto a circa 15 mm dal fondo della provetta. circa 5 ‘C superiore al punto di solidificazione appros-
Il tutto e© immerso in un bicchiere cilindrico, da circa simato e mantenere fino alla quasi totale fusione dei
1 litro, riempito con acqua. Il fondo della provetta e© cristalli. Riempire il contenitore cilindrico di acqua o
posto a circa 25 mm dal fondo del bicchiere. Il livello di una soluzione satura di sodio cloruro ad una
dell'acqua raggiunge la parte superiore della ghie- temperatura di circa 5 ‘C inferiore al punto di solidi-

eifargonoM
ra (A). Un agitatore assicura l'uniformita© della tempe- ficazione previsto. Inserire la provetta interna nella

ilareneG
ratura dell'acqua. provetta esterna, assicurandosi della presenza di alcuni
Metodo. Riempire completamente la capsula con la germi cristallini ed agitare vigorosamente fino alla soli-
sostanza in esame senza farla fondere, salvo indica- dificazione. Annotare la temperatura piu© alta osservata
zione contraria. Eliminare con una spatola l'eccesso di nel corso della solidificazione.

ehcituecamraF
sostanza alle due estremita© della capsula. Dopo aver

emroF
avvitato le ghiere (A) e (B), spingere la capsula
nel suo alloggiamento nella ghiera (B) fino a toccare i
supporti. Eliminare con una spatola quella parte di
sostanza che e© stata spinta dal termometro all'esterno
della capsula. Porre l'apparecchio nel bagno d'acqua

eiretaM
rispettando le posizioni sopra descritte. Scaldare il

emirP
bagno ad acqua e quando la temperatura e© a circa
10 ‘C sotto il punto di gocciolamento previsto, regolare
la velocita© di riscaldamento a circa 1 ‘C al minuto.
Determinare la temperatura al momento della caduta
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

della prima goccia. Effettuare almeno tre determina-

zioni, ogni volta con un nuovo campione della
sostanza. Lo scarto tra le letture non deve essere supe-
riore a 3 ‘C. Il punto di gocciolamento e© dato dalla
media delle tre letture.
ehcitapoemO
inoizaraperP

2.2.18. PUNTO DI SOLIDIFICAZIONE

Il punto di solidificazione e© la temperatura massima

osservabile durante la solidificazione di un liquido
sopraraffreddato.
ecidnI

Apparecchio. L'apparecchio (vedi Figura 2.2.18.-1) e© Figura 2.2.18.-1. - Apparecchio per la determinazione del
costituito da una provetta di circa 150 mm di lunghezza punto di solidificazione - Dimensioni in millimetri

41
Fluorimetria

2.2.19. TITOLAZIONE AMPEROMETRICA zione della quantita© di titolante aggiunta. La differenza

di potenziale si misura a intensita© di corrente nulla o
Nella titolazione amperometrica il punto di fine titola- praticamente nulla.
zione si determina seguendo la variazione dell'intensita© Apparecchio. L'apparecchio usato (un normale poten-
di corrente misurata tra due elettrodi (un elettrodo indi- ziometro o un dispositivo elettronico) comprende un
catore e uno di riferimento, oppure due elettrodi indica- voltmetro che permette letture al millivolt.
tori) immersi nella soluzione in esame e mantenuti ad
una differenza di potenziale costante, in funzione della L'elettrodo indicatore da usare dipende dalla sostanza
quantita© di titolante aggiunta. in esame e puo© essere un elettrodo a vetro o di metallo
(per esempio platino, oro, argento o mercurio). L'elet-
Il potenziale dell'elettrodo indicatore e© sufficiente ad trodo di riferimento e© generalmente un elettrodo a calo-
assicurare una corrente di diffusione per la sostanza melano o un elettrodo ad argento-cloruro d'argento.
elettroattiva. Per titolazioni acido-base, se non e© diversamente pre-
Apparecchio. L'apparecchio e© costituito da una sorgente scritto, si usa una coppia di elettrodi vetro/calomelano
di corrente a voltaggio regolabile e un microamperome- o vetro/argento-cloruro d'argento.
tro ad alta sensibilita© ; il sistema di misura e© costituito Metodo. Riportare in un grafico le variazioni della
di solito da un elettrodo indicatore (per esempio un differenza di potenziale in funzione della quantita© di
elettrodo di platino, o un elettrodo a goccia di mer- titolante aggiunto, continuando l'aggiunta oltre il
curio, o un elettrodo a disco rotante o un elettrodo di punto di equivalenza presunto. Il punto di fine tito-
carbone) e da un elettrodo di riferimento (per esempio lazione corrisponde ad una brusca variazione della
un elettrodo a calomelano o un elettrodo ad argento- differenza di potenziale.
cloruro di argento).
Talvolta si usa un apparecchio a tre elettrodi: un 2.2.21. FLUORIMETRIA

elettrodo indicatore, un elettrodo di riferimento e un

elettrodo ausiliario polarizzato. La fluorimetria e© un metodo che si basa sulla misura
dell'intensita© della luce fluorescente emessa dalla
Metodo. Aggiustare il potenziale dell'elettrodo indica- sostanza in esame rispetto a quella emessa da un cam-
tore al valore prescritto e riportare in un grafico l'inten- pione di riferimento.
sita© di corrente iniziale ed i valori ottenuti durante la Metodo. Disciogliere la sostanza in esame in un sol-
titolazione in funzione della quantita© di titolante vente o in una miscela di solventi come riportato nella
aggiunto. Aggiungere il titolante in non meno di tre monografia; trasferire la soluzione nella cella o nel tubo
porzioni successive per un totale di circa l'80 per cento di un fluorimetro ed illuminarla con un fascio di luce
del volume teorico corrispondente al punto di equiva-
lenza presunto. I tre valori devono trovarsi su una linea eccitatrice di lunghezza d'onda corrispondente a quella
retta. Continuare ad aggiungere il titolante oltre il indicata in monografia e il piu© possibile monocroma-
punto di equivalenza presunto in non meno di tre por- tica.
zioni successive. I valori ottenuti devono trovarsi su Misurare l'intensita© della luce emessa ad un angolo di
una linea retta. Il punto di intersezione delle due rette 90‘ rispetto alla direzione della luce eccitatrice dopo
rappresenta il punto di fine titolazione. averla filtrata attraverso un filtro che lasci passare
Nella titolazione amperometrica con due elettrodi indi- in modo predominante la radiazione fluorescente.
catori l'intera curva di titolazione riportata sul grafico Possono essere usati altri tipi di apparecchi purchë for-
e© usata per determinare il punto di fine titolazione. niscano risultati identici.
Per misure quantitative mettere nel fluorimetro prima il
solvente o la miscela di solventi impiegati per sciogliere
2.2.20. TITOLAZIONE POTENZIOMETRICA la sostanza e regolare lo strumento sullo zero; mettere
poi la soluzione di riferimento e regolare la sensibilita©
Nella titolazione potenziometrica il punto di fine tito- dello strumento in modo da leggere un valore superiore
lazione e© determinato seguendo la variazione della a 50. Se la seconda regolazione e© stata fatta aggiu-
differenza di potenziale tra due elettrodi (un elettrodo stando la larghezza della fenditura, ripetere l'azzera-
indicatore e uno di riferimento oppure due elettrodi mento e la misura dell'intensita© della fluorescenza della
indicatori), immersi nella soluzione in esame, in fun- soluzione di riferimento. Infine introdurre nell'apparec-

42
 Spettrometria di emissione atomica

inoizircserP
chio la soluzione a concentrazione ignota e leggere il determinare, utilizzando il metodo della curva di tara-

ilareneG
corrispondente valore sull'apparecchio. Calcolare la tura (Metodo I) o il metodo dell'incremento standard
concentrazione cx della sostanza nella soluzione in (Metodo II).
esame mediante la formula:
Metodo I - Metodo della curva di taratura

isilanA id
cx IIxcs

idoteM
Preparare come prescritto la soluzione della sostanza in
ˆ
s esame (soluzione in esame). Preparare almeno tre solu-
zioni di riferimento dell'elemento che deve essere deter-
cx = concentrazione della soluzione in esame, minato le cui concentrazioni comprendano il valore
cs = concentrazione della soluzione di riferimento, previsto per la soluzione in esame. Tutti i reattivi utiliz-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Ix = intensita© della luce emessa dalla soluzione in zati nella preparazione della soluzione in esame ven-
esame, gono aggiunti, nella stessa concentrazione, alle solu-
Is = intensita© della luce emessa dalla soluzione di rife- zioni di riferimento.
rimento. Introdurre la soluzione in esame e ciascuna soluzione di
Se l'intensita© della fluorescenza emessa non e© diretta- riferimento nello strumento di analisi almeno tre volte

ivittaeR
mente proporzionale alla concentrazione, la misura e leggere ogni volta il valore ottenuto dopo stabilizza-
puo© essere effettuata usando una curva di taratura. In zione. Lavare ogni volta l'apparecchio con il bianco e
alcuni casi le misure possono essere fatte utilizzando accertarsi che la lettura ritorni al valore iniziale otte-
un campione di riferimento fisso (per es. un vetro fluo- nuto con il bianco.
rescente o una soluzione di una sostanza fluorescente Costruire una curva di taratura utilizzando le medie

itnemogrA
ilareneG
diversa); in tali casi la concentrazione della sostanza in delle letture ottenute con le soluzioni di riferimento e
esame deve essere determinata usando una curva di determinare la concentrazione dell'elemento nella solu-
taratura precedentemente ricavata nelle stesse condi- zione in esame per mezzo della curva di taratura cos|©
zioni. ottenuta.

eifargonoM

ilareneG
2.2.22. SPETTROMETRIA DI EMISSIONE ATO- Metodo II - Metodo dell'incremento standard
MICA
Introdurre, in almeno tre palloni tarati identici, volumi
La spettrometria di emissione atomica e© un metodo per uguali della soluzione della sostanza in esame (solu-
determinare la concentrazione di un elemento in una zione in esame) preparata come prescritto. Aggiungere

ehcituecamraF
sostanza, misurando l'intensita© di una delle righe di a tutti i palloni, tranne uno, volumi crescenti di una

emroF
emissione del vapore atomico dell'elemento generato soluzione di riferimento, di concentrazione nota dell'e-
dalla sostanza. La determinazione si effettua alla lun- lemento da determinare, in modo da ottenere una serie
ghezza d'onda corrispondente. di soluzioni contenenti quantita© progressivamente cre-
Apparecchio. Eé costituito essenzialmente da un genera- scenti dell'elemento stesso e scelte in modo da ottenere
tore di atomi dell'elemento da determinare (fiamma, delle risposte situate in una parte lineare della curva.
eiretaM

emirP
plasma, arco, ecc.), un monocromatore e un rivelatore. Portare quindi il contenuto di ciascun pallone a volume
Se il generatore e© una fiamma, l'acqua R e© il solvente con il solvente.
scelto per la preparazione delle soluzioni in esame e Introdurre ciascuna delle soluzioni nel dispositivo
delle soluzioni di riferimento. Possono essere utilizzati di analisi per almeno tre volte e leggere ogni volta il
ehcituecamraF
inoizaraperP

anche solventi organici purchë siano osservate le pre-

ehcificepS

cauzioni necessarie per evitare che il solvente influenzi valore ottenuto dopo stabilizzazione. Lavare ogni volta
l'apparecchio con il solvente e accertarsi che la lettura
la stabilita© della fiamma. ritorni al valore iniziale ottenuto con il bianco.
Metodo. Utilizzare uno spettrometro di emissione ato- Calcolare l'equazione lineare del grafico mediante il
mica attenendosi alle istruzioni fornite dal produttore metodo dei minimi quadrati e risolverla in modo da
ehcitapoemO
inoizaraperP

ed operando alla lunghezza d'onda prescritta. Intro-

durre una soluzione in bianco nel generatore di atomi ottenere la concentrazione dell'elemento da determi-
e regolare lo strumento sullo zero. Introdurre la solu- nare nella soluzione in esame.
zione di riferimento a concentrazione piu© alta e rego- Alternativamente riportare su un grafico la media delle
lare la sensibilita© in modo da ottenere una lettura letture in funzione della quantita© aggiunta del-
appropriata. l'elemento da determinare. Estrapolare la retta con-
ecidnI

Le misure si effettuano per confronto con soluzioni di giungente i punti nel grafico fino all'intersezione con
riferimento a concentrazione nota dell'elemento da l'asse delle concentrazioni. La distanza tra questo

43
Spettrometria di assorbimento atomico

punto e l'intersezione degli assi rappresenta la concen- determinare, utilizzando il metodo della curva di tara-
trazione dell'elemento da determinare nella soluzione tura (Metodo I) o il metodo dell'incremento standard
in esame. (Metodo II).
Se e© richiesta una tecnica di campionamento di un
solido, il procedimento da seguire e© interamente Metodo 1 - Metodo della curva di taratura
descritto nella monografia. Preparare come prescritto la soluzione della sostanza in
esame (soluzione in esame). Preparare almeno tre solu-
zioni di riferimento dell'elemento che deve essere deter-
2.2.23. SPETTROMETRIA DI ASSORBIMENTO
minato le cui concentrazioni comprendono il valore
previsto per la soluzione in esame. Tutti i reattivi utiliz-
ATOMICO

La spettrometria di assorbimento atomico e© un metodo zati nella preparazione della soluzione in esame ven-
per determinare la concentrazione di un elemento in gono aggiunti, nella stessa concentrazione, alle solu-
una sostanza misurando l'assorbimento di una radia- zioni di riferimento e alla soluzione in bianco.
zione da parte del vapore atomico dell'elemento gene- Introdurre la soluzione in esame e ciascuna soluzione di
rato dalla sostanza. La determinazione si effettua alla riferimento nel dispositivo di analisi almeno tre volte e
lunghezza d'onda di una delle righe spettrali dell'ele- leggere ogni volta il valore ottenuto dopo stabilizza-
mento in questione. zione. Lavare ogni volta l'apparecchio con il bianco e
Apparecchio. Eé costituito essenzialmente da una sor- accertarsi che la lettura ritorni al valore iniziale otte-
gente di radiazioni, un generatore di atomi dell'ele- nuto con il bianco.
mento da determinare (fiamma, forno, ecc.), un mono- Se e© stato utilizzato un forno, questo viene pulito
cromatore ed un rivelatore. mediante flambaggio dopo le letture.
Il metodo per introdurre la sostanza in esame dipende Costruire una curva di taratura utilizzando le medie
dal tipo di generatore di atomi utilizzato. Se e© una delle letture ottenute con le soluzioni di riferimento e
fiamma, le sostanze vengono nebulizzate e l'acqua R e© determinare la concentrazione dell'elemento nella solu-
il solvente scelto per preparare le soluzioni in esame e zione in esame per mezzo della curva di taratura cos|©
le soluzioni di riferimento. Possono essere utilizzati ottenuta.
anche solventi organici purchë siano osservate le pre- Se e© richiesta una tecnica di campionamento di un
cauzioni necessarie per evitare che il solvente influenzi solido, il procedimento da seguire e© interamente
la stabilita© della fiamma. Se e© un forno, le sostanze pos- descritto nella monografia.
sono essere introdotte disciolte in acqua R o in un sol-
vente organico, ma con questa tecnica e© anche possibile Metodo II - Metodo dell'incremento standard
introdurre campioni solidi. Introdurre, in almeno tre palloni tarati identici, volumi
Il vapore di atomi puo© anche essere generato all'esterno uguali della soluzione della sostanza in esame (solu-
dello spettrometro, come ad esempio con il metodo del zione in esame) preparati come prescritto. Aggiungere
vapore freddo per il mercurio o per certi idruri. Per il a tutti i palloni, tranne uno, volumi crescenti di una
mercurio gli atomi sono generati per riduzione chimica soluzione di riferimento, di concentrazione nota dell'e-
ed il vapore atomico e© trascinato da una corrente di un lemento da determinare, in modo da ottenere una serie
gas inerte dentro la cella di assorbimento sistemata di soluzioni contenenti quantita© progressivamente cre-
lungo il percorso ottico dello strumento. Gli idruri ven- scenti dell'elemento stesso e scelte in modo da ottenere
gono sia mescolati al gas che alimenta il bruciatore, sia delle risposte situate in una parte lineare della curva.
trasportati da un gas inerte dentro una cella riscaldata, Portare quindi a volume il contenuto di ciascun pallone
nella quale vengono poi dissociati in atomi. con il solvente.
Metodo. Utilizzare uno spettrometro di assorbimento Introdurre ciascuna delle soluzioni nel dispositivo di
atomico attenendosi alle istruzioni del produttore ed analisi almeno tre volte e leggere ogni volta il valore
operando alla lunghezza d'onda prescritta. Introdurre ottenuto dopo stabilizzazione. Lavare ogni volta l'ap-
nel generatore di atomi una soluzione in bianco e aggiu- parecchio con il solvente e accertarsi che la lettura
stare il rivelatore in modo da leggere il valore massimo ritorni al valore iniziale ottenuto con il bianco.
di trasmittanza sull'apparecchio di misura. Introdurre Se e© stato utilizzato un forno, questo viene pulito
la soluzione di riferimento a concentrazione piu© alta e mediante flambaggio dopo le letture.
regolare la sensibilita© in modo da ottenere una appro- Calcolare l'equazione lineare del grafico mediante il
priata lettura dell'assorbanza. metodo dei minimi quadrati e risolverla in modo da
Le misure si effettuano per comparazione con soluzioni ottenere la concentrazione dell'elemento da determi-
di riferimento a concentrazione nota dell'elemento da nare nella soluzione in esame.

44
 Spettrofotometria di assorbimento nell'infrarosso

inoizircserP
Alternativamente riportare su un grafico la media delle e 0,1 mm. L'assorbimento dovuto al solvente e© compen-

ilareneG
letture in funzione delle quantita© aggiunte dell'elemento sato ponendo nel raggio di riferimento una cella uguale
da determinare. Estrapolare la retta congiungente i contenente il solvente usato.
punti nel grafico fino all'intersezione con l'asse delle Solidi. Esaminare i solidi dispersi in un adatto liquido
concentrazioni. La distanza tra questo punto e l'inter- (pasta) o in un solido (pasticca di alogenuro). Quando
sezione degli assi rappresenta la concentrazione dell'e-

isilanA id
viene indicato nella monografia, utilizzare un film di

idoteM
lemento da determinare nella soluzione in esame. massa fusa fra due finestre trasparenti all'infrarosso.
Se e© richiesta una tecnica di campionamento di un (a) Pasta. Triturare una piccola quantita© della sostanza
solido, il procedimento da seguire e© interamente in esame con la minima quantita© di paraffina liquida R
descritto nella monografia. o di altro liquido appropriato; 5-10 mg di sostanza in
esame sono generalmente sufficienti a dare una giusta

irotinetnoC
/ ilairetaM
quantita© di pasta. Comprimere questa pasta fra due
finestre trasparenti all'infrarosso.
(b) Pasticca. Se non e© diversamente specificato, tritu-
2.2.24. SPETTROFOTOMETRIA DI ASSORBI-

rare 1-2 mg di sostanza in esame con 300-400 mg di

MENTO NELL'INFRAROSSO

Gli spettrofotometri nell'infrarosso sono usati per potassio bromuro R o di potassio cloruro R, seccati e
finemente polverizzati. Queste quantita© generalmente

ivittaeR
registrare-1 gli spettri-1nella regione ottica compresa fra
4000 cm e 670 cm (2,5 m -1,5 m) o in alcuni casi sono sufficienti a preparare una pasticca di circa
13 mm di diametro e ad ottenere uno spettro di inten-
l l

fino a 200 cm (50 m). Gli spettrofotometri in trasfor-

-1 l
sita© adeguata. Triturare con cura la miscela in un mor-
mata Fourier usano una radiazione policromatica e cal- taio, trasferirla uniformemente in uno stampo adatto e
colano lo spettro nel dominio di frequenza a partire sottoporlo, sotto -2vuoto, ad una pressione di circa

itnemogrA
dai dati iniziali mediante la trasformata di Fourier. Pos-

ilareneG
sono essere anche usati spettrofotometri aventi un 800 mPa (8 t cm ). Molti fattori, come per es. una
1

sistema ottico capace di produrre radiazioni monocro- mescolanza non perfetta, una insufficiente o eccessiva
polverizzazione, la presenza di umidita© o di altre impu-
matiche nella regione utilizzata per la misura. General- rezze nel mezzo disperdente, possono portare alla for-
mente lo spettro e© dato in funzione della trasmittanza, mazione di pasticche imperfette. Una pasticca e© scar-

eifargonoM
e dal rapporto fra l'intensita© della radiazione trasmessa tata quando ad occhio nudo non si presenta perfetta-

ilareneG
e quella della radiazione incidente. L'assorbanza (A) e© mente omogenea o quando la trasmittanza a circa
definita come il logaritmo in base 10 del reciproco della 2000 cm-1 (5 m), in assenza di una specifica banda di
l

trasmittanza (T): assorbimento, e© inferiore al 75 per cento senza compen-

sazione.

ehcituecamraF
   
A log10 T log10 IIo
1 Gas. Esaminare i gas in una cella trasparente alla radia-

emroF
ˆ ˆ
zione infrarossa, con una lunghezza del cammino ottico
di circa 100 mm. Fare il vuoto nella cella e riempirla,
T I =I o; alla pressione desiderata, mediante un rubinetto o una
valvola ad ago utilizzando una appropriata linea di tra-
ˆ

I o intensita© della radiazione incidente,

ˆ
sferimento di gas tra la cella ed il contenitore della
I intensita© della radiazione trasmessa. sostanza in esame. Se necessario, aggiustare la pres-
eiretaM

emirP
sione nella cella alla pressione atmosferica utilizzando
ˆ

un gas trasparente alla radiazione infrarossa (per esem-

pio azoto R o argon R). Per evitare le interferenze di
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE assorbimento dovute all'acqua, all'anidride carbonica
ehcituecamraF

o ad altri gas atmosferici, porre nel raggio di riferi-

inoizaraperP

ehcificepS

Misura per trasmissione o assorbimento . Preparare la mento una cella identica che sia stata o vuotata di qual-
sostanza secondo uno dei metodi seguenti: siasi gas o riempita con il gas trasparente alla radia-
Liquidi. Esaminare un liquido sia sotto forma di un film zione infrarossa.
tra due finestre trasparenti alla radiazione infrarossa o Misura per riflessione multipla . Quando prescritto in
monografia, preparare la sostanza con uno dei metodi
ehcitapoemO
inoizaraperP

in una cella di cammino ottico adatto e ugualmente tra-

sparente alla radiazione infrarossa. seguenti:
Soluzioni. Disciogliere la sostanza in un idoneo sol-
Liquidi o solidi in soluzione. Preparare una soluzione in vente secondo quanto descritto nella monografia. Eva-
adatto solvente. Scegliere la concentrazione e lo porare la soluzione su finestra di tallio bromo-ioduro o
spessore del cammino ottico in modo da avere uno di altra sostanza idonea.
spettro soddisfacente. Generalmente buoni risultati si Solidi. Depositare la sostanza in esame, assicurando un
ecidnI

ottengono con concentrazioni comprese fra 10 g/l e contatto omogeneo, su finestra di tallio bromo-ioduro
100 g/1 e con un cammino ottico compreso fra 0,5 mm o di altra sostanza idonea.

45
Spettrofotometria di assorbimento nell'infrarosso

Misura per riflettanza totale . Porre la

attenuata Verifica della scala del numero d'onda. Puo© essere effet-
sostanza da esaminare a stretto contatto con un prisma tuata con l'aiuto di un film di polistirene che presenta
per riflettanza totale attenuata. minimi di trasmissione (massimi di assorbimento) ai
numeri d'onda (in cm-1) indicati nella seguente Tabella
IDENTIFICAZIONE USANDO SOSTANZE DI 2.2.24-1. I numeri in parentesi indicano l'accuratezza
RIFERIMENTO con la quale questi valori sono stati stabiliti.
Preparare la sostanza in esame e la sostanza di riferi-
mento con lo-1stesso procedimento e registrare gli spettri Tabella 2.2.24.-1. Minimi di trasmissione e tolleranze
tra 4000 cm e 670 cm (2,5-15 m) nelle stesse condi-
-1 l
accettabili di un film di polistirene
zioni strumentali. I minimi di trasmissione nello spettro
ottenuto con la sostanza in esame corrisponde in posi- 3060,0 ( 1,5) cm-1
zione e intensita© relativa a quelli nello spettro ottenuto
6

con la sostanza di riferimento (SCR). 2849,5 ( 1,5) cm-1

Quando lo spettro registrato allo stato solido mostra 6

delle differenze nella posizione dei minimi di trasmis-

sione (massimi di assorbimento), trattare la sostanza 1942,9 ( 1,5) cm-1
6

in esame e la sostanza di riferimento nella stessa

maniera in modo che esse cristallizzino o vengano 1601,2 ( 1,5) cm-1
6
prodotte nella stessa forma, oppure procedere come
descritto nella monografia e quindi registrare gli 1583,0 ( 1,5) cm-1
spettri. 6

IDENTIFICAZIONE USANDO SPETTRI DI RIFE- 1154,5 ( 1,5) cm-1

6

RIMENTO
Controllo del potere di risoluzione. Registrare lo spettro 1028,3 ( 1,5) cm-1
6

di un film di polistirene avente lo spessore di 0,04 mm.

La differenza x (vedi Figura 2.2.24.-1) tra la percen-
tuale di -1trasmittanza al massimo di trasmissione A a Metodo. Preparare la sostanza in esame secondo le
2870 cm (3,48 m) e quella al minimo di trasmissione
l
istruzioni che accompagnano lo spettro di riferimento.
B a 2849,5 cm-1 (3,51 m) deve essere superiore a 18.
l
Registrare lo spettro della sostanza in esame nelle
La differenza y tra la percentuale di trasmittanza al stesse condizioni strumentali usate per la verifica del
massimo di trasmissione C a 1589 cm-1 (6,29 m) -1e
potere di risoluzione. Registrare lo spettro e sovrap-
l

quella al minimo di trasmissione D a 1583 cm

(6,32 m) deve essere superiore a 12. porre su di esso le bande di assorbimento del polistirene
a 2849,5 cm-1 (3,51 m), a 1601,2 cm-1 (6,25 m) e a
l
l l

1028,3 cm-1 (9,72 m). Confrontare i due spettri ed i

l

massimi del polistirene sopra indicati. Facendo riferi-

mento alla posizione dei massimi del polistirene,
le posizioni dei massimi significativi nello spettro
della sostanza in esame e nello spettro di riferimento
devono corrispondere, sulla scala dei numeri d'onda,
allo 0,5 per cento circa. Le intensita© relative dei mas-
simi devono concordare nei due spettri.
IMPUREZZE NEI GAS

Per le analisi delle impurezze utilizzare una cella tra-

sparente alla radiazione infrarossa e di un adatto cam-
mino ottico (ad es. da 1 m a 20 m). Riempire la cella
come descritto alla voce Gas. Per identificare e quantifi-
Figura 2.2.24.-1. - Spettro caratteristico del polistirene care le impurezze procedere come descritto nella mono-
usato per il controllo del potere di risoluzione grafia.

46
 Spettrofotometria di assorbimento nell'ultravioletto e nel visibile

inoizircserP
dell'olmio perclorato soluzione R, le linee di una lam-

ilareneG
2.2.25. SPETTROFOTOMETRIA DI ASSORBI-

MENTO NELL'ULTRAVIOLETTO E NEL pada ad idrogeno o a deuterio o le linee del vapore di

VISIBILE mercurio, come mostrato in Tabella 2.2.25.-1. La tolle-
ranza ammessa e© di 1 nm per la regione ultravioletta
6

Determinazione dell'assorbanza. L'assorbanza (A) di e di 3 nm per la regione del visibile.

6

isilanA id
una soluzione e© definita come il logaritmo in base 10

idoteM
del reciproco della trasmittanza (T) per una luce mono- Tabella 2.2.25.-1. Massimi di assorbimento
cromatica ed e© espressa mediante l'equazione: per il controllo delle lunghezze d'onda
A = log10 (1/T) = log10 (I0/I) 241,15 nm (Ho) 404,66 nm (Hg)
253,7 nm (Hg) 435,83 nm (Hg)

irotinetnoC
/ ilairetaM
T = I/I0, 287,15 nm (Ho) 486,0 nm (D ) b

I0 = intensita© della radiazione monocromatica incidente, 302,25 nm (Hg) 486,1 nm (H ) b

I = intensita© della radiazione monocromaticatrasmessa. 313,16 nm (Hg) 536,3 nm (Ho)

In assenza di altri fattori fisico-chimici, l'assorbanza 334,15 nm (Hg) 546,07 nm (Hg)
misurata (A) e© proporzionale al cammino ottico della 361,5 nm (Ho) 576,96 nm (Hg)

ivittaeR
cella (b) attraverso la quale la luce passa e alla concen- 365,48 nm (Hg) 579,07 nm (Hg)
trazione (c) della sostanza in soluzione secondo l'equa- Controllo dell'assorbanza. Controllare l'assorbanza
zione: usando una soluzione di potassio dicromato R alle lun-
ghezze d'onda indicate in Tabella 2.2.25.-2 nella quale

itnemogrA
A cb

ilareneG
ˆ e1 1
per ciascuna lunghezza d'onda sono riportati i valori
" coefficiente di estinzione molare se b e© espresso in esatti dell'assorbanza specifica e i limiti permessi.
ˆ

centimetri e c in moli per litro. La tolleranza ammessa per l'assorbanza e© di 0,01. 6

L'espressione A11 cm
percento rappresentante l'assorbanza spe-
Tabella 2.2.25.-2.

eifargonoM

ilareneG
cifica di una sostanza disciolta, si riferisce all'assorbanza
di una soluzione, avente la concentrazione di 10 g/l, in Lunghezza d'onda
A11 per cento
una cella di 1 centimetro e misurata ad una data lun- (nanometri) cm Limiti di tolleranza

ghezza d'onda tale che: 235 124,5 122,9 - 126,2

ehcituecamraF
A11 per cento ˆ 10" 257 144,5 142,8 - 146,2
cm 313 48,6 47,0 - 50,3

emroF
Mr
350 107,3 105,6 - 109,0
Se non diversamente prescritto, misurare, a 20 1‘ C,6

l'assorbanza alla lunghezza d'onda indicata con un Per il controllo dell'assorbanza usare una soluzione di
cammino ottico di 1 cm, rispetto allo stesso solvente o potassio dicromato preparata come segue. Disciogliere

eiretaM
alla stessa miscela di solventi. L'assorbanza del solvente

emirP
57,0-63,0 mg di potassio dicromato R previamente essic-
misurata rispetto all'aria, alla lunghezza d'onda indi- cati a massa costante a 130 ‘C in acido solforico
cata, deve essere preferibilmente inferiore a 0,2 ma 0,005 M e diluire a 1000,0 ml con lo stesso acido.
comunque non superiore a 0,4. Tracciare lo spettro di Limite della luce diffusa. La luce diffusa puo© essere rive-
ehcituecamraF

assorbimento riportando in ordinata l'assorbanza o

inoizaraperP

lata, ad una data lunghezza d'onda, con soluzioni o fil-

ehcificepS

una sua funzione ed in ascissa la lunghezza d'onda o tri appropriati; per esempio l'assorbanza di una solu-
una sua funzione. zione (12 g/l) di potassio cloruro R, in una cella da
Quando in una monografia e© riportato un singolo 1 cm aumenta bruscamente tra 220 nm e 200 nm ed e©
valore per indicare la posizione di un massimo, si maggiore di 2 tra 198 nm e 202 nm quando confrontata
ehcitapoemO

intende che il valore ottenuto puo© differire di 2 nm.

inoizaraperP

6 con acqua come liquido di compensazione.

Apparecchio. Spettrofotometri adatti per misure nella Risoluzione (per analisi qualitative). Quando prescritto
regione ultravioletta e visibile dello spettro sono costi- in una monografia, misurare il potere risolutivo dello
tuiti da un sistema ottico capace di fornire luce mono- strumento come segue: registrare lo spettro di una solu-
cromatica nella regione 200-800 nm e da un dispositivo zione di toluene R allo 0,02 per cento V/V in esano R.
idoneo per misurare l'assorbanza. Il rapporto minimo tra l'assorbanza al massimo a
ecidnI

Controllo delle lunghezze d'onda.Verificare la scala delle 269 nm e l'assorbanza al minimo a 266 nm e© riportato
lunghezze d'onda usando i massimi di assorbimento in monografia.

47
Cromatografia su carta

Larghezza della fenditura spettrale (per analisi quantita- metanolo R come liquido di compensazione. Lo spettro
tive). Per evitare errori dovuti alla larghezza della fendi- presenta un piccolo estremo negativo situato tra due
tura spettrale, quando si usa uno strumento la cui lar- grandi estremi negativi rispettivamente a 261 nm e a
ghezza della fenditura e© variabile alla lunghezza d'onda 268 nm, come indicato nella Figura 2.2.25.-1. Se non
scelta, la larghezza della fenditura deve essere piccola diversamente prescritto nella monografia, il rapporto
in riferimento alla larghezza a meta© altezza della banda A/B (vedere Figura 2.2.25.-1) non e© inferiore a 0,2.
di assorbimento, ma abbastanza grande per ottenere
un alto valore di IO. Pertanto, la larghezza della fendi-
tura deve sempre essere tale che una sua ulteriore ridu-
zione non dia una variazione nella lettura dell'assor-
banza, altrimenti si compie un errore nella lettura.
Celle. La tolleranza sul cammino ottico delle celle usate
e© di 0,005 cm. Riempite dello stesso solvente, le celle
6

che conterranno la soluzione in esame ed il bianco

devono avere la stessa trasmittanza. Se cos|© non fosse,
si dovra© procedere ad una appropriata correzione.
Le celle devono sempre essere pulite e maneggiate con
cura.
SPETTROFOTOMETRIA IN DERIVATA
La spettrofotometria in derivata comporta la trasfor-
mazione dello spettro di assorbimento (derivata di
ordine zero) in spettri in derivata di primo, secondo o
piu© alto ordine.
Uno spettro in derivata prima e© un grafico del gradiente
della curva di assorbimento (entita© del cambiamento
dell'assorbanza con la lunghezza d'onda dA/d ) k

rispetto alla lunghezza d'onda.

Uno spettro in derivata seconda e© un grafico della curva-
tura dello spettro2 di assorbimento rispetto alla lun-
ghezza d'onda (d A/d 2). La derivata seconda a ogni
k

lunghezza d'onda e© correlata alla concentrazione

k
Figura 2.2.25.-1.
mediante le equazioni seguenti:

d2A d2A11 per cento c b d2 A cb Procedimento. Preparare la soluzione della sostanza in

cm esame, aggiustare lo strumento secondo le istruzioni
0
e

d 2
k
ˆ
d
k
2
2
10 ˆ
d k
2
2
10 del produttore e calcolare la quantita© della sostanza da
c concentrazione del soluto assorbente in grammi
0
ˆ
determinare come prescritto nella monografia.
per litro.
2.2.26. CROMATOGRAFIA SU CARTA

Apparecchio. Usare uno spettrofotometro che soddisfa

ai requisiti descritti precedentemente ed equipaggiato CROMATOGRAFIA ASCENDENTE
con un modulo di differenziazione resistenza-capacita© Apparecchio. Eé costituito da una vasca cromatografica
di tipo analogico o un differenziatore digitale o di altri di vetro a bordo smerigliato, di dimensioni adatte a
mezzi per ottenere spettri in derivata. Alcuni metodi quelle del foglio di carta da utilizzare, munita di un
per ottenere spettri in derivata seconda producono uno coperchio di vetro che assicura una chiusura ermetica
spostamento della lunghezza d'onda rispetto allo spet- e provvista, nella parte superiore, di un dispositivo che
tro di ordine zero e cio© deve essere preso in considera- consente la sospensione della carta per cromatografia
zione se e© il caso. e che puo© essere abbassato senza aprire la vasca. Sul
Potere di risoluzione. Quando prescritto in una mono- fondo della vasca si trova una vaschetta per la fase
grafia, registrare lo spettro in derivata seconda di una mobile nella quale puo© essere immersa la carta. La
soluzione (0,2 g/l) di toluene R in metanolo R, usando carta per cromatografia e© una carta da filtro adatta,

48
 Cromatografia su strato sottile

inoizircserP
tagliata in modo che la migrazione della fase mobile solvente e il resto della carta ricade liberamente, la

ilareneG
avvenga nel senso delle fibre della carta, in strisce di linea si trovi qualche centimetro al disotto della bac-
lunghezza sufficienti e di larghezza di almeno 2,5 cm. chetta-guida e parallela a questa. Con una micropipetta
Metodo. Porre nella vaschetta uno strato di circa 2,5 cm deporre, sulla linea tracciata con la matita, il volume
della fase mobile indicata nella monografia e, se questa di soluzione indicato nella monografia. Se il volume
lo prescrive, versare la fase stazionaria tra le pareti totale da applicare dovesse produrre una macchia di

isilanA id
idoteM
della vasca e la vaschetta. Chiudere la vasca e lasciare diametro superiore a 10 mm, deporre la soluzione in
a riposo per 24 h a 20-25 ‘C e mantenere la vasca a que- frazioni, lasciandole ogni volta essiccare prima della
sta temperatura per tutta la durata delle operazioni. successiva applicazione. Se la stessa striscia di carta
A 3 cm da una delle estremita© della carta, tracciare viene utilizzata per piu© di un cromatogramma, le solu-
con la matita, una sottile linea parallela al bordo della zioni deposte lungo la linea a matita sono poste a 3 cm

irotinetnoC
/ ilairetaM
carta. Con una micropipetta deporre, sulla linea trac- almeno di distanza l'una dall'altra. Introdurre la carta
ciata con la matita, il volume di soluzione indicato nella nella vasca, rimettere il coperchio e lasciare a riposo per
monografia. Se la macchia raggiunge un diametro 1 h e 30 min. Attraverso l'orifizio del coperchio versare
superiore a 10 mm, deporre la soluzione in frazioni, poi nella apposita vaschetta la fase mobile in quantita©
lasciando ogni volta essiccare il solvente prima della sufficiente, richiudere e lasciare che l'eluizione proceda
per la distanza e tempo prescritti. Togliere la carta dalla

ivittaeR
successiva applicazione. Se la stessa striscia di carta
viene utilizzata per piu© di un cromatogramma, le solu- vasca e lasciar seccare all'aria. Durante il periodo di elui-
zioni deposte lungo la linea a matita sono poste a 3 cm zione, la carta deve essere protetta da luce intensa.
almeno di distanza l'una dall'altra. Introdurre poi la
carta nella vasca, rimettere il coperchio e lasciare a

itnemogrA
riposo per 1 h e 30 min. Immergere la carta nella fase

ilareneG
2.2.27. CROMATOGRAFIA SU STRATO SOTTILE

mobile e lasciare che l'eluizione proceda per la distanza Principio. La cromatografia su strato sottile e© una tec-
ed il tempo prescritti. Rimuovere la carta dalla vasca e nica di separazione nella quale la fase stazionaria e©
lasciare essiccare all'aria. Durante il periodo di elui- costituita da un materiale adeguato, steso in strato sot-
zione, proteggere la carta dalla luce intensa. tile ed uniforme su un supporto (lastra) di vetro, di

eifargonoM
metallo o di plastica. Le soluzioni di analiti sono depo-

ilareneG
CROMATOGRAFIA DISCENDENTE sitate sulla lastra prima dell'eluizione. La separazione
Apparecchio. Eé costituito da una vasca cromatografica e© basata sull'adsorbimento, la ripartizione, lo scambio
di vetro a bordo smerigliato, di dimensioni adatte a ionico o una combinazione di questi meccanismi e si
quelle del foglio di carta da utilizzare, munita di un effettua per migrazione (eluizione) di soluti (soluzioni

ehcituecamraF
coperchio di vetro che assicura una chiusura ermetica di analiti) in un solvente o in una miscela appropriata
di solventi (fase mobile) attraverso lo strato sottile (fase

emroF
e provvisto di un orifizio centrale di circa 1,5 cm di dia-
metro; questo orifizio e© otturato da una lastra di vetro stazionaria).
smerigliato o da un tappo. Nella parte superiore della
vasca, su dei supporti, e© disposta una vaschetta per la APPARECCHI
fase mobile munita di un dispositivo che permette di La cromatografia si effettua usando lastre gia©
eiretaM
sostenere il foglio di carta da cromatografia. Sui due

emirP
Lastre.

lati della vaschetta, parallelamente e leggermente al di ricoperte come descritto nel capitolo Reattivi (4.1.1).
sopra dei suoi bordi, sono fissate due bacchette di vetro Precondizionamento delle lastre. Puo© essere necessario
destinate a servire da supporto alla carta, in modo tale lavare le lastre prima della separazione. Questo puo©
che non tocchi le pareti della vasca in nessun punto. essere fatto con la migrazione di un solvente appro-
ehcituecamraF
inoizaraperP

priato. Le lastre possono anche essere impregnate con

ehcificepS

La carta per cromatografia e© una carta da filtro appro-

priata, tagliata in strisce, di lunghezza sufficiente e di procedure come l'eluizione, l'immersione o la spruzza-
larghezza compresa tra 2,5 cm e la lunghezza della tura. Al momento dell'uso, le lastre possono essere atti-
vaschetta, in modo che la migrazione della fase mobile vate, se necessario, mediante riscaldamento in stufa a
avvenga nel senso delle fibre della carta. 100-105 ‘C per 1 h.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Metodo. Porre nel fondo della vasca uno strato di circa Vasca cromatografica . E' una vasca con il fondo piatto,
2,5 cm del solvente indicato nella monografia; chiudere o dotata di due vaschette di materiale trasparente,
la vasca, lasciare a riposo per 24 h a 20-25 ‘C. Mante- inerte, di dimensioni appropriate per le lastre usate, e
nere a questa temperatura per tutta la durata delle ope- munita di un coperchio che assicuri una chiusura erme-
razioni. Con la matita tracciare sul foglio di carta una tica. Per l'eluizione orizzontale la vasca e© provvista di
sottile riga orizzontale; la distanza tra questa riga e una vaschetta per la fase mobile e contiene, inoltre, un
ecidnI

una delle estremita© della carta deve essere tale che, dispositivo per indirizzare la fase mobile verso la fase
quando questa estremita© e© fissata nella vaschetta del stazionaria.

49
Cromatografia su strato sottile

Micropipette, microsiringhe, capillari tarati monouso o orizzontalmente la lastra nella camera e collegare il
altri dispositivi idonei per effettuare una corretta depo- dispositivo che indirizza la fase mobile secondo le istru-
sizione delle soluzioni. zioni del fabbricante. Se prescritto, eluire la lastra ini-
, per misu- ziando contemporaneamente alle due estremita© . Chiu-
Dispositivo per la rivelazione di fluorescenza

rare la fluorescenza diretta o l'inibizione della fluore- dere la camera e mantenerla a 20-25 ‘C. Togliere la
scenza. lastra dalla vasca quando la fase mobile ha percorso la
distanza indicata nella monografia. Seccare la lastra e
Reattivi di visualizzazione per rivelare, mediante spruz- procedere alla rivelazione dei cromatogrammi nel
zatura, esposizione a vapori o immersione, le macchie modo prescritto.
separate. Nel caso di una cromatografia bidimensionale, seccare
le lastre dopo la prima eluizione ed effettuare una
METODO seconda eluizione nella direzione perpendicolare alla
Eluizione verticale. Rivestire le pareti della vasca prima.
cromatografica con carta da filtro. Versare nella vasca
cromatografica una quantita© di fase mobile, sufficiente VALUTAZIONE VISIVA
alla luce delle dimensioni della vasca, in modo da otte-
nere, dopo saturazione della carta da filtro, uno strato gramma ottenutoLaconmacchia
Identificazione. principale, nel cromato-
di appropriata profondita© in relazione alle dimensioni tata visivamente con lalamacchia soluzione in esame, e© confron-
corrispondente nel cro-
della lastra da usare. Per la saturazione della vasca cro- matogramma ottenuto con la soluzione
matografica ricoprirla con il coperchio e lasciare a confrontando il colore, la dimensione die ilriferimento, fattore di
riposo, a 20-25 ‘C, per 1 h. Se non diversamente indi- ritenzione (Rf) di entrambe le macchie.
cato, la separazione cromatografica e© effettuata in una Il fattore di ritenzione (R ) e© definito come il rapporto
vasca satura. tra la distanza dal punto
f
di applicazione al centro della
Depositare il volume prescritto delle soluzioni in por- macchia e la distanza percorsa, dal fronte del solvente,
zioni sufficientemente piccole in modo da ottenere dal punto di applicazione.
bande o macchie circolari ad un'appropriata distanza
dal bordo inferiore e dai lati. Depositare le soluzioni Verifica del potere di separazione per l'identificazione.
su una linea parallela al bordo inferiore della soluzione Normalmente e© sufficiente la conformita© al saggio di
e ad una distanza di almeno 10 mm tra loro. idoneita© descritto nel capitolo Reattivi (4.1.1). Solo in
Dopo che il solvente delle soluzioni deposte e© evapo- terioparticolari
casi
di verifica
la monografia prescrive un ulteriore cri-
del potere di separazione.
rato, porre la lastra nella vasca cromatografica assicu-
randosi che sia in posizione il piu© possibile verticale e Saggio delle sostanze correlate . La macchia(e) seconda-
che le macchie, o le bande, siano sempre al di sopra del ria(e) nel cromatogramma ottenuto con la soluzione in
livello della fase mobile. Richiudere la vasca cromato- esame e© (sono) confrontata(e), visivamente, con le mac-
grafica e lasciarla a 20-25 ‘C al riparo dalla luce solare. chie corrispondenti nel cromatogramma ottenuto con
Togliere la lastra dalla vasca quando la fase mobile ha la soluzione di riferimento contenente l'impurezza(e) o
percorso la distanza prescritta. Seccare la lastra e pro- con le macchie nel cromatogramma ottenuto con la
cedere alla rivelazione dei cromatogrammi nel modo soluzione di riferimento preparata diluendo la solu-
prescritto. zione in esame.
Nel caso di una cromatografia bidimensionale, seccare Verifica del potere di separazione. I requisiti per la veri-
le lastre dopo la prima eluizione ed effettuare una fica del potere di separazione sono descritti nella speci-
seconda eluizione nella direzione perpendicolare a fica monografia.
quella della prima. Verifica del potere di rivelazione. Il potere di rivelazione
. Ad un'appropriata distanza dal e© considerato soddisfacente se la macchia, o la banda,
bordo inferiore della lastra e dai lati della stessa deposi- nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferi-
Eluizione orizzontale

tare il volume prescritto delle soluzioni in porzioni suf- mento piu© diluita e© nettamente visibile.
ficientemente piccole, in modo da ottenere macchie cir-
colari del diametro di 1-2 mm o bande lunghe 5-10 mm DETERMINAZIONE QUANTITATIVA
per 1-2 mm. Deporre le soluzioni parallelamente al
bordo inferiore della lastra con un intervallo di almeno I requisiti per la risoluzione e la separazione sono pre-
5 mm tra le macchie. Dopo che il solvente delle solu- scritti nella specifica monografia.
zioni deposte e© evaporato, introdurre una quantita© Le sostanze separate mediante cromatografia su strato
sufficiente di fase mobile nella vaschetta della camera sottile e che rispondono alla irradiazione UV-Visibile,
cromatografica usando una siringa o una pipetta; porre possono essere determinate quantitativamente diretta-

50
 Gas cromatografia

inoizircserP
mente sulla lastra, usando un'appropriata strumenta- funzione della lunghezza del percorso e riportare la

ilareneG
zione. Durante il movimento della piastra, o del dispo- radioattivita© di ciascun picco risultante come percen-
sitivo di misura, si esamina la lastra, misurando la tuale della quantita© totale di radioattivita© .
riflettanza o la trasmittanza della luce incidente. I criteri per la valutazione dell'idoneita© del sistema
Analogamente, puo© essere misurata la fluorescenza sono descritti nel capitolo Tecniche cromatografiche di
usando un appropriato sistema ottico. Le sostanze che separazione (2.2.46). In questo capitolo e© anche ripor-

isilanA id
idoteM
contengono radionuclidi possono essere quantificate in tato il grado delle correzioni dei parametri del sistema
tre modi: direttamente, portando la lastra presso un cromatografico che possono essere effettuate per soddi-
appropriato contatore o viceversa (vedere Preparazioni sfare i criteri di idoneita© del sistema.
radiofarmaceutiche (125)), tagliando la lastra in strisce
e misurando la radioattivita© di ciascuna striscia usando

irotinetnoC
/ ilairetaM
un appropriato contatore, oppure rimuovendo la fase 2.2.28. GAS CROMATOGRAFIA

stazionaria, disciogliendola in un'adatta miscela di La gas cromatografia (GC) e© una tecnica di separazione
scintillazione e misurando la radioattivita© usando un cromatografica basata sulla differenza nella distribu-
contatore a scintillazione liquida. zione delle specie tra due fasi, non miscibili, nelle quali
. L'apparecchio per la quantificazione la fase mobile e© un gas di trasporto che attraversa o

ivittaeR
passa sulla fase stazionaria contenuta in una colonna.
Apparecchio

diretta sulla piastra e© costituito da:

^ un dispositivo per la deposizione esatta e riproduci- Si utilizza per sostanze, o loro derivati, che possono
bile della quantita© delle sostanze sulla lastra; essere volatilizzati alle temperature impiegate.
^ un dispositivo meccanico per muovere la lastra, o il La gas cromatografia si basa su meccanismi di adsorbi-
mento, di distribuzione di massa e di esclusione.

itnemogrA
dispositivo di quantificazione, lungo l'asse x o l'asse y;

ilareneG
^ un registratore e un appropriato integratore o un
computer; APPARECCHIO
^ per le sostanze rispondenti alla irradiazione UV-Visi- L'apparecchio e© costituito da un iniettore, una colonna
bile: per misurare la riflettanza o la trasmittanza si cromatografica contenuta in un forno, un rivelatore ed

eifargonoM
usa un fotometro con una sorgente di luce, un dispo- un sistema di acquisizione dei dati (un integratore o un

ilareneG
sitivo ottico in grado di generare una luce monocro- registratore a carta). Il gas di trasporto fluisce attra-
matica ed una fotocellula di adeguata sensibilita© . verso la colonna con una pressione o un flusso control-
Nei casi in cui si misura la fluorescenza e© inoltre lati e quindi attraverso il rivelatore.
necessario un filtro monocromatico, per selezionare La cromatografia si effettua a temperatura costante o

ehcituecamraF
una particolare regione spettrale della luce emessa; secondo un prefissato programma di temperatura.

emroF
^ per le sostanze contenenti radionuclidi: un appropriato
contatore di radioattivita© . E' necessario verificare Iniettori

Se non diversamente prescritto nella monografia, gene-

l'intervallo di linearita© del dispositivo di conteggio. ralmente si effettua l'iniezione diretta delle soluzioni.
Metodo . Preparare la soluzione della sostanza in esame L'iniezione puo© essere effettuata sia direttamente in
come prescritto nella monografia (soluzione in esame) testa della colonna, usando una siringa o una valvola
eiretaM

emirP
e, se necessario, preparare le soluzioni di riferimento di iniezione, sia in una camera di vaporizzazione che
della sostanza da determinare usando lo stesso solvente puo© essere fornita di un separatore di flusso.
della soluzione in esame. Depositare lo stesso volume L'iniezione della fase vapore puo© essere eseguita utiliz-
di ciascuna soluzione sulla lastra ed eluire. zando sistemi di iniezione a spazio di testa statici o
ehcituecamraF
inoizaraperP

dinamici.
ehcificepS

Sostanze rispondenti alla irradiazione UV-Visibile: pre-

parare e depositare non meno di tre soluzioni di riferi- I sistemi di iniezione a spazio di testa dinamico (purge
mento della sostanza in esame; le cui concentrazioni and trap) sono costituiti da un dispositivo mediante il
comprendono il valore presunto della soluzione in quale le sostanze volatili in soluzione sono fatte passare
esame (circa 80, 100 e 120 per cento). Spruzzare con il nella colonna adsorbente mantenuta a bassa tempera-
ehcitapoemO
inoizaraperP

reattivo previsto, se necessario, e registrare la riflet- tura. Le sostanze trattenute sono poi deadsorbite nella
tanza, la trasmittanza o la fluorescenza nei cromato- fase mobile mediante riscaldamento rapido della
grammi ottenuti con la soluzione in esame e con le solu- colonna adsorbente.
zioni di riferimento. Usare i risultati ottenuti per calco- I sistemi di iniezione a spazio di testa statico compren-
lare la quantita© di sostanza nella soluzione in esame. dono una camera di riscaldamento del campione, con-
Sostanze contenenti radionuclidi: preparare e depositare trollata termostaticamente nella quale i contenitori,
ecidnI

una soluzione in esame contenente circa il 100 per cento chiusi, contenenti i campioni solidi o liquidi sono man-
del valore presunto. Determinare la radioattivita© come tenuti per un tempo prestabilito affinchë i componenti

51
Gas cromatografia

volatili del campione possono raggiungere l'equilibrio L'elio o l'azoto sono generalmente impiegati come gas
tra la fase non gassosa e la fase vapore. Dopo che si e© di trasporto per colonne impaccate, mentre i gas di tra-
stabilito l'equilibrio una quantita© prestabilita dello spa- sporto piu© comunemente usati per le colonne capillari
zio di testa del contenitore e© convogliata nel gas croma- sono l'azoto, l'elio e l'idrogeno.
tografo. Rivelatori
Fasi stazionarie

Le fasi stazionarie sono contenute in colonne che pos- Sono generalmente usati rivelatori a ionizzazione di
sono essere: fiamma, ma possono essere usati altri rivelatori come:
^ una colonna capillare di silice fusa la cui parete a cattura di elettroni, azoto-fosforo, a spettrometria di
interna e© rivestita con la fase stazionaria; massa, a conduttivita© termica, spettrofotometro nell'in-
^ una colonna impaccata con particelle inerti impre- frarosso con trasformata di Fourier, o altri a seconda
gnate con la fase stazionaria; dello scopo dell'analisi.
^ una colonna impaccata con una fase stazionaria
solida. METODO
Le colonne capillari hanno un diametro interno (Ò) di Equilibrare la colonna, l'iniettore ed il rivelatore alla
0,1-0,53 mm ed una lunghezza di 5-60 m. La fase temperatura e al flusso di gas specificati nella monogra-
liquida o stazionaria, che puo© essere chimicamente fia fino ad ottenere una linea di base stabile. Preparare
legata alla superficie interna, e© un film dello spessore la(e) soluzione(i) in esame e la(e) soluzione(i) di riferi-
di 0,1-5,0 mm. mento come prescritto. Le soluzioni devono essere
Le colonne impaccate, di vetro o di metallo, hanno esenti da particelle solide.
generalmente una lunghezza di 1-3 m ed un diametro I criteri per la valutazione dell'idoneita© del sistema
interno (Ò) di 2-4 mm. Le fasi stazionarie sono costi- sono descritti nel capitolo Tecniche di separazione cro-
tuite, generalmente, da polimeri porosi o supporti solidi matografica (2.2.46). In questo capitolo e© anche ripor-
impregnati con una fase liquida. tato il grado delle correzioni dei parametri del sistema
I supporti per l'analisi di composti polari, in colonne cromatografico che possono essere effettuate per soddi-
impaccate con una fase stazionaria a bassa capacita© e sfare i criteri di idoneita© del sistema.
a bassa polarita© , devono essere inerti per evitare lo
scodamento dei picchi. La reattivita© dei materiali di
supporto puo© essere ridotta mediante silanizzazione GAS CROMATOGRAFIA A SPAZIO DI TESTA
prima del rivestimento con la fase liquida. Spesso si STATICO
usa la terra di infusori lavata con acidi e calcinata. La gas cromatografia a spazio di testa e© una tecnica
I materiali sono disponibili con particelle di diverse particolarmente adatta per la separazione e la determi-
dimensioni; le dimensioni delle particelle piu© comune- nazione di composti volatili presenti in campioni solidi
mente usate sono comprese nell'intervallo tra 150 mm o liquidi. Il metodo si basa sull'analisi della fase vapore
e 180 mm e tra 125 mm e 150 mm. in equilibrio con la fase solida o liquida.
Fase mobile

Il tempo di ritenzione e l'efficienza del picco dipendono

dal flusso del gas di trasporto; il tempo di ritenzione e© APPARECCHIO
direttamente proporzionale alla lunghezza della L'apparecchio e© costituito da un gas cromatografo
colonna e la risoluzione e© proporzionale alla radice provvisto di un dispositivo per introdurre il campione
quadrata della lunghezza della colonna. Per le colonne che puo© essere collegato ad un modulo che, automatica-
impaccate, il flusso del gas di trasporto e© generalmente mente, controlla la pressione e la temperatura.
espresso in millilitri per minuto alla pressione atmosfe- Se necessario, puo© essere aggiunto un dispositivo per
rica ed a temperatura ambiente. Il flusso e© misurato eliminare i solventi.
all'uscita del rivelatore, sia con un dispositivo mecca-
nico tarato, sia con un tubo a bolla, mentre la colonna Introdurre il campione in esame in un contenitore prov-
e© alla temperatura di funzionamento. Per un dato visto di una chiusura idonea e di un sistema a valvola
volume di flusso la velocita© lineare del gas di trasporto che permette il passaggio del gas di trasporto. Il conte-
attraverso la colonna impaccata e© inversamente pro- nitore e© posto in una camera termostaticamente
porzionale alla radice quadrata del diametro interno controllata ad una temperatura definita per il campione
della colonna. Un flusso di 60 ml/min, in una colonna in esame.
con diametro interno di 4 mm, e di 15 ml/min, per una Mantenere il campione a questa temperatura fino al
colonna con diametro interno di 2 mm, danno identiche raggiungimento dell'equilibrio tra la fase solida o
velocita© lineari e, quindi, tempi di ritenzione simili. liquida e la fase vapore.

52
 Cromatografia liquida

inoizircserP
Introdurre il gas di trasporto nel contenitore e, dopo il (multiple head space extraction)

ilareneG
Prelievi successivi

tempo prescritto, aprire una valvola appropriata in Se prescritto, il metodo dei prelievi successivi e© intera-
modo che il gas si espanda verso la colonna cromato- mente descritto nella monografia.
grafica, trascinando con së i composti volatili.
Per l'introduzione dei campioni, anzichë un cro-

isilanA id
matografo specificamente equipaggiato, si possono uti- 2.2.29. CROMATOGRAFIA LIQUIDA

idoteM
lizzare anche siringhe a tenuta d'aria e un cromatografo
La cromatografia liquida e© un metodo di separazione
convenzionale. L'equilibrio si realizza in una cameracromatografica basata sulla differenza di distribuzione
separata e la fase vapore viene trasferita nella colonna
delle specie tra due fasi non miscibili, in cui la fase
prendendo tutte le precauzioni necessarie ad evitare mobile e© un liquido che passa attraverso la fase stazio-

irotinetnoC
qualsiasi cambiamento nell'equilibrio. naria contenuta in una colonna.

/ ilairetaM
La cromatografia liquida si basa, soprattutto, su un
METODO meccanismo di adsorbimento, di distribuzione di
massa, di scambio ionico, di esclusione o di interazione
Usando le preparazioni di riferimento, determinare i stereochimica.
parametri strumentali appropriati per ottenere una

ivittaeR
risposta adeguata. APPARECCHIO
Taratura diretta

Introdurre separatamente, in recipienti identici, la pre- L'apparecchio e© costituito, generalmente, da un sistema

parazione in esame e ciascuna delle preparazioni di rife- di pompaggio, un iniettore, una colonna cromatogra-
fica (puo© essere usata una colonna con controllo della

itnemogrA
rimento, come prescritto nella monografia, evitando il

ilareneG
contatto tra il sistema di campionamento ed i cam- temperatura), un rivelatore ed un sistema di acquisi-
pioni. zione dei dati (puo© essere usato un integratore o un
registratore a carta). La fase mobile proviene da uno o
Chiudere ermeticamente i recipienti e porli in una piu© serbatoi e fluisce attraverso la colonna, general-
camera, controllata termostaticamente, alla tempera- mente ad una velocita© costante, e passa poi attraverso

eifargonoM
tura e pressione prescritte nella monografia; dopo il rivelatore.

ilareneG
l'equilibrazione effettuare la cromatografia nelle condi-
zioni prescritte. Sistemi di pompaggio

Nella cromatografia liquida i sistemi di pompaggio

Aggiunte standard sono necessari per rilasciare la fase mobile ad un flusso

ehcituecamraF
Introdurre in una serie di recipienti idonei ed identici, costante. Le fluttuazioni della pressione devono essere
quantita© uguali della preparazione in esame. A tutti i minimizzate per es. facendo passare il solvente pressu-

emroF
recipienti meno uno, aggiungere quantita© appropriate rizzato attraverso un dispositivo di smorzamento di
di una preparazione di riferimento contenente una con- impulso. Le tubazioni e le connessioni sono in grado di
centrazione nota della sostanza da determinare, in resistere alla pressione sviluppata dal sistema di pom-
modo da ottenere una serie di preparazioni a concen- paggio. Le pompe per cromatografia liquida possono
trazione progressivamente crescente della sostanza. essere provviste di un dispositivo atto a liberare il
eiretaM

emirP
Chiudere ermeticamente i recipienti e porli in una sistema dalle bolle di aria intrappolata.
camera controllata termostaticamente, alla tempera- I sistemi controllati da microprocessori sono in grado
tura e pressione prescritte nella monografia; raggiunto di rilasciare una fase mobile di composizione costante
l'equilibrio, effettuare la cromatografia nelle condizioni (eluizione isocratica) o di composizione variabile
ehcituecamraF
inoizaraperP

prescritte. (eluizione a gradiente) a seconda di un programma

ehcificepS

Calcolare l'equazione lineare del grafico, mediante il prefissato. In caso dell'eluizione a gradiente sono
metodo dei quadrati minimi e, con questa, calcolare la disponibili dei sistemi di pompaggio che rilasciano il
concentrazione della sostanza da determinare nella pre- solvente(i) proveniente(i) da recipienti diversi e la
parazione in esame. miscelazione del solvente puo© essere realizzata sia
ehcitapoemO
inoizaraperP

Alternativamente, riportare su un grafico la media prima della pompa (a bassa pressione) che dopo la
delle letture in funzione della quantita© aggiunta della pompa (ad alta pressione).
sostanza da determinare. Estrapolare la retta congiun- Iniettori

gente i punti nel grafico fino all'intersezione con l'asse La soluzione campione viene introdotta nel flusso della
delle concentrazioni; la distanza, tra questo punto e fase mobile alla sommita© o vicino alla sommita© della
l'intersezione degli assi, rappresenta la concentrazione colonna usando un sistema di iniezione che puo© operare
ecidnI

della sostanza da determinare nella preparazione in ad alta pressione. Si possono usare iniettori a volume
esame. fisso o dispositivi a volume variabile comandati

53
Cromatografia liquida

manualmente oppure tramite un campionatore auto- In alcuni casi e© possibile effettuare una cromatografia
matico. Il riempimento parziale manuale dell'iniettore in fase normale, con silice non modificata, grafite
puo© causare una minore precisione del volume di inie- porosa o silice polare modificata chimicamente, per
zione. es. cianopropil o diol, come fasi stazionarie, e una fase
mobile non polare.
Per le separazioni analitiche, la dimensione delle parti-
Fasi stazionarie

Esistono molti tipi di fasi stazionarie usate in cromato- celle delle fasi stazionarie piu© comunemente usate
grafia liquida, quali: variano tra 3 mm e 10 mm. Le particelle possono essere
^ silice, allumina o grafite porosa, usate in cromato- sferiche o irregolari, di porosita© e area superficiale spe-
grafia in fase normale, dove la cromatografia e© cifica variabili. Questi parametri contribuiscono al
basata sulle differenze di adsorbimento e/o di distri- comportamento cromatografico di una particolare fase
buzione di massa, stazionaria. In caso di fase inversa, la natura della fase
^ resine o polimeri con gruppi acidi o basici, usati in stazionaria, l'entita© del legame, per es. espresso come
cromatografia a scambio ionico, dove la separazione carico di carbonio, e se la fase stazionaria subisce un
e© basata sulla competizione tra gli ioni che devono trattamento finale (per es. i gruppi silanolici residui
essere separati e quelli nella fase mobile, sono silanizzati) sono ulteriori fattori determinanti. La
^ silice porosa o polimeri, usati nella cromatografia formazione di code (tailing) dei picchi, in particolare
per esclusione, dove la separazione e© basata sulle dif- nel caso di sostanze basiche, puo© verificarsi quando
ferenze tra i volumi delle molecole, corrispondenti sono presenti gruppi silanolici residui.
all'esclusione sterica, In cromatografia analitica si usano colonne di acciaio
^ diversi supporti modificati chimicamente preparati a inossidabile, se non diversamente prescritto nella
partire da polimeri, silice o grafite porosa, usati in monografia, di diversa lunghezza e diametro interno
cromatografia liquida in fase inversa, dove la separa- (Ò). Le colonne con diametro interno inferiore a 2 mm
zione si basa principalmente sulla distribuzione delle sono spesso definite come colonne ``microbore''. La
molecole tra la fase mobile e la fase stazionaria, temperatura della fase mobile e della colonna devono
^ fasi stazionarie particolari modificate chimicamente, essere mantenute a valori costanti durante
per es. derivati della cellulosa o dell'amilosio, pro- l'analisi. La maggior parte delle separazioni sono effet-
teine o peptidi, ciclodestrine ecc., per la separazione tuate a temperatura ambiente, ma le colonne possono
di enantiomeri (cromatografia chirale). essere riscaldate per ottenere un'efficienza piu© alta.
La maggior parte delle separazioni si basano su mecca- Si raccomanda di non riscaldare le colonne a tempera-
nismi di ripartizione che utilizzano silice modificata tura superiore a 60 ‘C a causa della potenziale degrada-
chimicamente, come fase stazionaria, e solventi polari, zione della fase mobile o a cambiamenti che si verifi-
come fase mobile. La superficie del supporto, per es. i cano nella composizione della fase mobile.
gruppi silanolici della silice, e© fatta reagire con diversi
reattivi sililanti per produrre silil-derivati, legati cova- Fasi mobili

Nella cromatografia in fase normale si usano i solventi

lentemente, che ricoprono un grande numero di siti meno polari. La presenza di acqua nella fase mobile
attivi sulla superficie del supporto. La natura della fase deve essere controllata accuratamente in modo da otte-
legata e© un parametro importante per determinare le nere risultati riproducibili. Nella cromatografia liquida
proprieta© di separazione del sistema cromatografico. in fase inversa si usano fasi mobili acquose, con o senza
Le fasi legate comunemente usate sono riportate di modificatori organici.
seguito: I componenti della fase mobile vengono generalmente
ottil = Si-(CH2)7-CH3 C8 filtrati per eliminare le particelle con dimensioni supe-
ottadecil = Si-(CH2)17-CH3 C18 riori a 0,45 mm. Le fasi mobili multicomponenti sono
fenil = Si-(CH2)n-(C6H5) C6H5 preparate misurando i volumi richiesti (a meno che
cianopropil = Si-(CH2)3-CN CN non siano specificate le masse) dei singoli componenti,
amminopropil = Si-(CH2)3-NH2 NH2 che vengono poi mescolati. Alternativamente, i solventi
diol = Si-(CH2)3-OCH(OH)-CH2-OH possono esser rilasciati da singole pompe controllate
Se non diversamente indicato dal fabbricante, le da valvole dosatrici, mediante le quali si effettua il
colonne di silice a fase inversa sono considerate stabili mescolamento secondo la proporzione desiderata.
in fasi mobili che hanno un pH apparente compreso I solventi, per evitare la formazione di bolle nella cella
nell'intervallo tra 2,0 e 8,0. Le colonne contenenti gra- del rivelatore, vengono generalmente degassati prima
fite porosa o particelle di materiali polimerici, come il del pompaggio mediante il passaggio di elio, mediante
copolimero stirene-divinilbenzene, sono stabili ad inter- ultrasuoni o utilizzando, in linea, moduli a membrana
valli di pH piu© ampi. selettiva, operando contro vuoto.

54
 Cromatografia per esclusione

inoizircserP
I solventi per la preparazione della fase mobile sono supporto. L'intervallo della dimensione dei pori del

ilareneG
generalmente esenti da stabilizzanti e sono trasparenti supporto determina l'intervallo delle grandezze mole-
alla lunghezza d'onda di rivelazione, se si usa un rivela- colari entro il quale puo© avere luogo la separazione.
tore all'ultravioletto. I solventi e gli altri componenti Le molecole abbastanza piccole da penetrare all'in-
impiegati devono essere di qualita© appropriata. Le cor- terno di tutti i pori del supporto vengono eluite al
rezioni del pH, se necessarie, vengono eseguite solo sul

isilanA id
,

volume di permeazione totale (Vt), mentre le molecole

idoteM
componente acquoso della fase mobile e non sulla di dimensioni piu© grandi della dimensione massima dei
miscela. Se si usano soluzioni tampone, si effettua un pori del supporto migrano, lungo la colonna, passando
lavaggio adeguato del sistema con una miscela di acqua attraverso gli spazi tra le particelle del supporto stesso,
ed il modificatore organico della fase mobile (5 per senza essere trattenute, e sono eluite al volume di esclu-
cento V/V) per prevenire la cristallizzazione di sali

irotinetnoC
sione (Vo volume interstiziale). La separazione delle

/ ilairetaM
dopo la cromatografia. molecole di soluto sulla base della grandezza moleco-
Le fasi mobili possono contenere altri componenti per lare avviene tra il volume di esclusione e il volume di
es. contro-ioni nella cromatografia a scambio ionico o permeazione totale. Buone separazioni si ottengono
un selettore chirale per cromatografia che usa una fase normalmente nei primi due terzi di questo intervallo.
stazionaria non chirale. Apparecchio. E' costituito, essenzialmente, da una

ivittaeR
colonna cromatografica di lunghezza e diametro
Rivelatori
interno (Ò) variabili, se necessario termostatata, riem-
I rivelatori piu© comunemente usati sono gli spettro- pita di un supporto, idoneo a separare le sostanze in
fotometri ultravioletto/visibile (UV/Vis) compresi i un appropriato intervallo di dimensioni molecolari,
rivelatori a serie di diodi. Si possono anche usare spet- attraverso il quale l'eluente passa ad una velocita©

itnemogrA
ilareneG
trofotometri di fluorescenza, rifrattometri differenziali, costante. Una estremita© della colonna e© , in genere, col-
rivelatori elettrochimici, spettrometri di massa, rivela- legata con un dispositivo adatto per l'introduzione del
tori a diffusione della luce, rivelatori di radioattivita© ed campione, come un regolatore di flusso, una siringa
altri rivelatori particolari. attraverso un setto, una valvola di iniezione. Questa
METODO estremita© della colonna puo© anche essere collegata con

eifargonoM

ilareneG
Equilibrare la colonna con la fase mobile e la velocita© di una pompa adatta a controllare il flusso dell'eluente.
flusso prescritte, a temperatura ambiente o alla tempe- Il campione puo© essere anche applicato direttamente
ratura specificata nella monografia, fino ad ottenere sulla superficie drenata del supporto oppure, se il cam-
una linea di base stabile. Preparare la soluzione(i) della pione ha una densita© superiore a quella dell'eluente,
esso puo© essere stratificato all'interfaccia fra supporto

ehcituecamraF
sostanza in esame e la soluzione(i) di riferimento richie- ed eluente. L'uscita della colonna e© collegata, general-
ste. Le soluzioni devono essere esenti da particelle

emroF
solide. mente, ad un rivelatore automatico, collegato ad un
I criteri per la valutazione dell'idoneita© del sistema registratore che permette il monitoraggio delle concen-
sono descritti nel capitolo Tecniche di separazione trazioni relative dei componenti, separati, del cam-
cromatografica (2.2.46). In questo capitolo e© anche pione. I rivelatori si basano, generalmente, su proprieta©
fotometriche, rifrattometriche o di luminescenza.
eiretaM
riportato il grado delle correzioni dei parametri del

emirP
sistema cromatografico che possono essere effettuati Se necessario, si puo© collegare al sistema un collettore
per soddisfare i criteri di idoneita© del sistema. automatico di frazioni.
Il supporto puo© essere molle, ad esempio un gel rigon-
fiato, o rigido, costituito cioe© da materiale come il
ehcituecamraF
inoizaraperP

vetro, la silice o un polimero organico reticolato,

ehcificepS

2.2.30. CROMATOGRAFIA PER ESCLUSIONE

La cromatografia per esclusione e© una tecnica cromato- compatibile con il solvente usato. I supporti rigidi
grafica che separa le molecole, in soluzione, in funzione richiedono, generalmente, sistemi pressurizzati che
delle loro dimensioni. Nel caso di fasi mobili organiche, permettono separazioni piu© rapide. La scelta della fase
la tecnica e© chiamata cromatografia per permeazione su mobile dipende dalla natura del campione, dal mezzo
ehcitapoemO
inoizaraperP

gel; nel caso di fasi mobili acquose, e© usato il termine di separazione e dal metodo di rivelazione. Prima di
cromatografia a filtrazione su gel. Il campione, intro- effettuare la separazione, il supporto viene preparato
dotto in una colonna riempita con un gel o con un con opportuno trattamento e la colonna impaccata
materiale di riempimento poroso, e© trasportato dalla come descritto nella monografia, o secondo le istru-
fase mobile attraverso la colonna. La separazione si zioni del produttore.
realizza mediante scambi ripetuti delle molecole del I criteri per la valutazione dell'idoneita© del sistema
ecidnI

soluto tra il solvente della fase mobile e lo stesso sono descritti nel capitolo Tecniche di separazione
solvente trattenuto (fase stazionaria) entro i pori del cromatografica (2.2.46). In questo capitolo e© anche

55
Elettroforesi

riportato il grado delle correzioni dei parametri del lare. Le interazioni opposte della forza elettrica e del
sistema cromatografico che possono essere effettuati setaccio molecolare producono flussi di migrazione
per soddisfare i criteri di idoneita© del sistema. differenziata a seconda delle dimensioni, delle forme e
delle cariche delle particelle. A causa delle loro
proprieta© fisico-chimiche diverse, le differenti macro-
Determinazione della composizione relativa dei compo-

Effettuare la separazione come indicato nella monogra- molecole di una miscela migreranno, durante l'elettro-
nenti delle miscele

foresi, con
fia. Se possibile, controllare l'eluizione dei componenti frazioni distinte.differenti velocita© e saranno separate in
e misurare le aree corrispondenti dei picchi. Se per la sono essere condotte Le separazioni elettroforetiche pos-
rivelazione si utilizza una proprieta© chimico-fisica nei (per esempio separazione in sistemi senza fasi di supporto
confronti della quale tutti i componenti da determinare della elettroforesi capillare) in soluzione libera nel caso
presentano risposte equivalenti (per esempio se essi come lastre su strato sottile, film e in mezzi stabilizzanti
hanno la stessa assorbanza specifica), calcolare la o gel.
quantita© relativa di ciascun componente dividendo
l'area del picco corrispondente per la somma delle ELETTROFORESI LIBERA O CON LA TEC-
aree dei picchi di tutti i componenti di interesse. Se le NICA DEL LIMITE MOBILE
risposte alla proprieta© usata per la rivelazione dei com-
ponenti di interesse non sono equivalenti, calcolare il Questo metodo e© usato principalmente per la determi-
contenuto con l'ausilio delle curve di taratura ottenute nazione della mobilita© , essendo le caratteristiche speri-
con gli standard di taratura prescritti nella monografia. mentali direttamente misurabili e riproducibili. Questo
metodo si applica soprattutto alle sostanze di elevata
La cromatografia di esclusione puo© essere utilizzata per massa molecolare relativa e bassa diffusibilita© . All'ini-
Determinazione delle masse molecolari

determinare le masse molecolari mediante confronto zio fisico

i ``limiti'' sono individuati con un procedimento
come la rifrattometria o la conduttometria. Dopo
con appropriati standard di taratura indicati nella l'applicazione di un dato campo elettrico, per un tempo
monografia. I volumi di ritenzione degli standard di esattamente misurato,
taratura possono essere riportati in funzione del loga- loro posizioni relative.si osservanoLe
i nuovi ``limiti'' e le
condizioni sperimentali
ritmo delle loro masse molecolari. La rappresentazione devono permettere la determinazione di tanti ``limiti''
grafica ha, generalmente, l'andamento di una retta quanti sono i costituenti.
compresa fra i valori limite di esclusione e di permea-
zione totale caratteristici del supporto di separazione
usato. Le masse molecolari possono essere determinate ELETTROFORESI DI ZONA USANDO UN
a partire dalla curva di taratura. La curva di taratura SUPPORTO
della massa molecolare e© valida solo per il particolare
sistema soluto macromolecolare/solvente utilizzato Questo metodo richiede solo l'uso di piccole quantita© di
nelle specificate condizioni sperimentali. campione.
La natura del supporto come carta, gel di agar, acetato
di cellulosa, amido, agarosio, metacrilammide, gel
Determinazione della distribuzione delle dimensioni

La cromatografia per esclusione puo© essere utilizzata misto, introduce un numero di fattori aggiuntivi che
molecolari di polimeri

per determinare la distribuzione delle dimensioni mole- modificano la mobilita© :

colari dei polimeri. Tuttavia, il confronto tra i campioni a) per la sinuosita© dei canalicoli del mezzo di supporto,
puo© essere valido solo per risultati ottenuti nelle stesse la distanza apparentemente percorsa e© inferiore alla
condizioni sperimentali. Le sostanze di riferimento distanza reale,
usate per la taratura e i metodi per la determinazione b) alcuni mezzi di supporto non sono elettricamente
della distribuzione della dimensione molecolare dei neutri. Poichë il mezzo costituisce una fase staziona-
polimeri sono specificati nella monografia. ria, esso puo© provocare talvolta un considerevole
flusso elettroendosmotico,
c) qualunque riscaldamento dovuto all'effetto joule
2.2.31. ELETTROFORESI
puo© provocare un'evaporazione del liquido dal
PRINCIPIO GENERALE mezzo di supporto, e questo, per capillarita© , provoca
Sotto l'influenza di un campo elettrico le particelle cari- uno spostamento della soluzione dai margini verso
che, disciolte o disperse in una soluzione elettrolitica, il centro e la forza ionica tende, di conseguenza, ad
migrano verso l'elettrodo che ha la polarita© opposta. aumentare progressivamente.
Nell'elettroforesi su gel i movimenti delle particelle La velocita© di migrazione dipende quindi da quattro
sono ritardati dalle interazioni con la matrice del gel fattori principali: la mobilita© della particella carica, il
circostante, che si comporta come un setaccio moleco- flusso elettroendosmotico, il flusso di evaporazione,

56
 Elettroforesi

inoizircserP
l'intensita© del campo. E' quindi necessario operare in il tempo prescritto. Alla fine, togliere la corrente,

ilareneG
condizioni sperimentali ben definite ed impiegare, estrarre il supporto dalla camera, lasciar essiccare e
quando possibile, sostanze di riferimento. procedere alla rivelazione.
Un apparecchio per elettroforesi e© costituito da:
^ un generatore che fornisce corrente continua il cui

isilanA id
ELETTROFORESI SU GEL DI POLIACRI-

idoteM
voltaggio puo© essere controllato e, preferibilmente,
stabilizzato, LAMMIDE
^ una camera per elettroforesi, generalmente a forma di Nell'elettroforesi su gel di poliacrilammide la fase
parallelepipedo, di vetro o di plastica rigida, con due stazionaria e© costituita da un gel preparato a partire

irotinetnoC
compartimenti separati, anodico e catodico, conte- da una miscela di acrilammide e N,N'-metilenbisacri-

/ ilairetaM
nenti la soluzione elettrolitica. In ciascun comparti- lammide. I geli possono essere preparati in tubi lunghi
mento e© immerso un elettrodo ad esempio di platino 7,5 cm e con un diametro interno di 0,5 cm; una sola
o di grafite. Questi sono collegati, mediante un soluzione viene deposta in ciascun tubo.
appropriato circuito isolato, al corrispondente termi- Apparecchio. E' costituito da due serbatoi, destinati a
nale del generatore di corrente in modo da formare contenere le soluzioni tampone, costruiti con un mate-

ivittaeR
l'anodo ed il catodo. Il livello di liquido nei due riale appropriato, quale il polimetilmetacrilato. Essi
compartimenti e© mantenuto alla stessa altezza per sono disposti verticalmente, uno sopra l'altro, e cia-
evitare il sifonometro. scuno di essi e© munito di un elettrodo di platino. Questi
La camera per l'elettroforesi e© munita di un coperchio due elettrodi sono collegati ad una sorgente di corrente
che assicura una chiusura ermetica al fine di mante-

itnemogrA
che permette di operare a intensita© costante oppure a

ilareneG
nere un'atmosfera satura di umidita© e ridurre l'evapo- tensione costante. L'apparecchio e© munito, alla base
razione del solvente durante le operazioni. Puo© essere del serbatoio superiore, di un numero di giunti equidi-
utilizzato un dispositivo di sicurezza che interrompe stanti dall'elettrodo.
la corrente quando si apre il coperchio. Per potenze
misurate attraverso la striscia superiori a 10 W con- Metodo. Generalmente, le soluzioni devono essere

eifargonoM
degassate prima della polimerizzazione e i geli usati

ilareneG
viene raffreddare il supporto.
^ un sistema di sostegno per il supporto: subito dopo la loro preparazione. Preparare la miscela
di gel come prescritto e versarla in tubi di vetro idonei,
Elettroforesi su striscia. La striscia di supporto, chiusi all'estremita© inferiore con un tappo, ad una
preventivamente bagnata con la stessa soluzione altezza uguale in ciascun tubo, fino a circa 1 cm dal

ehcituecamraF
elettrolitica, pesca con ciascuna estremita© in un com- bordo superiore del tubo, avendo cura di evitare la for-

emroF
partimento ed e© convenientemente tesa e fissata su un mazione di bolle d'aria nei tubi. Ricoprire la miscela di
adatto sostegno che permette di evitare la diffusione gel con uno strato di acqua R per evitare il contatto
dell'elettrolita come un telaietto orizzontale, un sup- con l'aria e lasciare a riposo. La formazione del gel
porto a V rovesciato o una superficie uniforme con richiede normalmente circa 30 min ed e© completa
punti di contatto ad idonei intervalli. quando appare una netta delimitazione tra il gel e lo

eiretaM
strato d'acqua. Eliminare lo strato d'acqua. Riempire

emirP
Elettroforesi su gel. Il dispositivo e© costituito essenzial- il serbatoio inferiore con la soluzione tampone pre-
mente da una lastra di vetro (ad esempio un vetrino scritta e togliere i tappi ai tubi. Porre i tubi nei giunti
da microscopio) su tutta la superficie del quale e© depo- del serbatoio superiore in modo che la loro estremita©
sto uno strato di gel aderente e di spessore costante. inferiore peschi nella soluzione tampone del serbatoio
ehcituecamraF
inoizaraperP

Il collegamento tra il gel e la soluzione elettrolitica e©

ehcificepS

assicurato in diverse maniere, a seconda del tipo di inferiore. Riempire con cura i tubi con la soluzione
apparecchio usato. Devono essere prese precauzioni tampone prescritta. Preparare le soluzioni in esame e
per evitare la condensazione dell'umidita© o l'essicca- le soluzioni di riferimento contenenti il marcatore colo-
mento dello strato solido. rato prescritto e renderle dense disciogliendo in esse,
per esempio, saccarosio R. Depositare le soluzioni sulla
ehcitapoemO
inoizaraperP

^ dispositivi di misura o mezzi di rivelazione. superficie del gel utilizzando un tubo diverso per
ciascuna soluzione. Aggiungere la stessa soluzione
Metodo. Introdurre la soluzione elettrolitica nei com- tampone nel serbatoio superiore. Collegare gli elettrodi
partimenti degli elettrodi. Porre il supporto, adeguata- al generatore di corrente e procedere all'elet-
mente imbevuto con la soluzione elettrolitica, nella troforesi, utilizzando la corrente di intensita© o di ten-
camera secondo le indicazioni specificate per il tipo di sione costante prescritta e operando alla temperatura
ecidnI

apparecchio usato. Localizzare la linea di partenza e prescritta. Interrompere la corrente quando il marca-
deporre il campione. Applicare la corrente elettrica per tore e© migrato quasi entro il serbatoio inferiore.

57
Elettroforesi

Togliere immediatamente i tubi dall'apparecchio ed dipende dal valore di pK dei gruppi ionizzati e dalle
estrudere il gel. Individuare la posizione delle bande dimensioni della molecola. E' influenzata dal tipo, dalla
nell'elettroforetogramma operando come prescritto. concentrazione e dal pH del tampone, dalla tempera-
tura e dalla forza del campo cos|© come dalla natura del
ELETTROFORESI SU GEL DI POLIACRI- materiale di supporto.
LAMMIDE CON SODIO DODECILSOLFATO
ELETTROFORESI SU GEL DI POLIACRILAM-
(SDS-PAGE)
Campo di applicazione . L'elettroforesi su gel di poliacri- MIDE CON DENATURAZIONE
lammide e© usata per la caratterizzazione qualitativa Il metodo citato come esempio e© limitato all'analisi di
delle proteine nelle preparazioni biologiche, per il con- polipeptidi monomerici con un intervallo di massa di
trollo della purezza e le determinazioni quantitative. 14000-100000 dalton. E' possibile ampliare l'intervallo
Obiettivo . L'analisi mediante elettroforesi su gel e© un di massa usando diverse tecniche (per es. gel in
metodo appropriato per identificare e valutare l'omo- gradiente, sistemi tampone particolari) ma queste
geneita© delle proteine nelle preparazioni farmaceutiche. tecniche non vengono discusse in questo capitolo.
Il metodo e© normalmente usato per la misurazione delle L'elettroforesi su gel di poliacrilammide con denatura-
masse molecolari delle subunita© proteiche e per la zione che usa sodio dodecilsolfato (SDS-PAGE), e© il
determinazione della composizione delle subunita© delle metodo elettroforetico piu© comune usato per valutare
proteine purificate. la qualita© farmaceutica di prodotti proteici e sara© il
In commercio sono ampiamente disponibili gel pronti fulcro del metodo riportato come esempio. Tipica-
all'uso e reattivi che possono essere usati in luogo di mente, l'elettroforesi analitica delle proteine e© effettuata
quelli descritti in questo testo, purchë essi diano risul- su gel di poliacrilammide in condizioni che assicurano
tati equivalenti e soddisfino i requisiti di validita© ripor- la dissociazione delle proteine nelle singole subunita©
tati nella sezione Convalida del saggio. polipeptidiche e che limitano l'aggregazione. Per disso-
ciare le proteine, prima di depositarle sul gel, si usa
CARATTERISTICHE DEI GEL DI POLIACRILAM- generalmente sodio dodecilsolfato (SDS), detergente
MIDE anionico forte, associato al calore. I polipeptidi denatu-
Le proprieta© di setaccio dei gel di poliacrilammide sono rati si legano al SDS, diventano carichi negativamente
stabilite dalla rete tridimensionale di fibre e pori che si e presentano un consistente rapporto carica-massa
forma quando la bifunzionale bisacrilammide forma indipendente dal tipo di proteina. Poichë la quantita© di
legami incrociati con le catene adiacenti di poliacrilam- SDS legata e© quasi sempre proporzionale alla massa
mide. La polimerizzazione e© catalizzata da un sistema, molecolare del polipeptide e non dipende dalla sua
che genera radicali liberi, costituito da ammonio per- sequenza, il complesso SDS-polipeptide migra attra-
solfato e tetrametilendiammina. verso i gel di poliacrilammide con mobilita© che dipen-
In un gel, all'aumentare della concentrazione dell'acri- dono dalla dimensione del polipeptide.
lammide corrisponde la diminuzione della dimensione Le mobilita© elettroforetiche di tutti i complessi polipep-
effettiva dei suoi pori. La dimensione effettiva dei pori tide-detergente risultanti e© funzionalmente correlata
di un gel e© definita, a livello operativo, dalle sue pro- alla loro massa molecolare. La migrazione dei com-
prieta© di setaccio molecolare, cioe© dalla resistenza che plessi SDS avviene verso l'anodo in modo prevedibile,
esso oppone alla migrazione delle macromolecole. con i complessi a bassa massa molecolare che migrano
Esistono dei limiti alla concentrazione di acrilammide piu© velocemente di quelli a massa molecolare piu©
che si puo© impiegare. Infatti, a concentrazioni troppo grande. La massa molecolare di una proteina puo©
elevate di acrilammide i gel si rompono piu© facilmente quindi essere valutata dalla sua mobilita© relativa in
e diventano difficili da manipolare. Quando la dimen- SDS-PAGE tarata e il presentarsi di una singola banda
sione dei pori di un gel diminuisce, diminuisce anche la in tale gel e© da considerare un criterio di purezza.
velocita© di migrazione di una proteina attraverso il gel. Comunque, modificazioni della struttura principale del
Aggiustando la dimensione dei pori di un gel, mediante polipeptide, come la N-glicosilazione o la O-glicosila-
variazioni della concentrazione dell'acrilammide, e© pos- zione, hanno un impatto significativo sulla massa mole-
sibile rendere ottimale la capacita© di risoluzione del colare apparente di una proteina poichë il sodio dode-
metodo per un determinato prodotto proteico. Quindi, cilsolfato si lega alla parte glucidica in maniera diversa
un dato gel e© caratterizzato, fisicamente, dalla sua di come si lega al polipeptide. Quindi non si mantiene
composizione in acrilammide e bisacrilammide. un rapporto carica-massa costante. La massa moleco-
Oltre alla composizione del gel, lo stato della proteina e© lare apparente di proteine che hanno subito modifica-
un componente importante della mobilita© elettrofore- zioni post-translazionali non riflette realmente la massa
tica. Nel caso delle proteine, la mobilita© elettroforetica della catena polipeptidica.

58
 Elettroforesi

inoizircserP
parte anteriore e gli ioni glicinato, relativamente piu©

ilareneG
Condizioni riducenti

Le subunita© polipeptidiche e la struttura tridimen- lenti, nella parte posteriore. Si forma un gradiente di
sionale sono spesso mantenute, nelle proteine, dalla voltaggio elevato localizzato tra il fronte degli ioni
presenza di legami disolfuro. Un risultato dell'analisi iniziali e quello degli ioni in posizione finale, che pro-
SDS-PAGE in condizioni riducenti e© la rottura di que- voca la formazione di complessi SDS-proteina in una
zona sottile (stack) e la loro migrazione tra le fasi clo-

isilanA id
sta struttura attraverso la riduzione dei ponti disolfuro.

idoteM
La denaturazione completa e la dissociazione delle ruro e glicinato. Entro ampi limiti, a seconda dell'al-
proteine mediante trattamento con 2-mercaptoetanolo tezza del campione depositato, tutti i complessi SDS-
o ditiotreitolo (DTT) provocano la distensione (unfol- proteina si concentrano in una regione molto stretta
ding) dello scheletro polipeptidico e la successiva com- ed entrano nel gel di risoluzione come una zona sottile
ben definita e ad alta densita© proteica. Il gel di impacca-

irotinetnoC
plessazione con SDS. In queste condizioni, la massa

/ ilairetaM
molecolare delle subunita© polipeptidiche puo© essere mento, a pori larghi, non ritarda la migrazione della
calcolata mediante regressione lineare in presenza di maggior parte delle proteine ed e© usato principalmente
standard di massa molecolare appropriata. come mezzo anticonvettivo. All'interfaccia tra il gel di
risoluzione e quello di impaccamento, le proteine subi-
Condizioni non riducenti
scono un netto rallentamento dovuto alla dimensione
Per alcune analisi, la dissociazione completa della piu© piccola dei pori del gel di risoluzione. Una volta

ivittaeR
proteina nelle subunita© peptidiche non e© desiderabile. entrate nel gel di risoluzione le proteine continuano a
In assenza del trattamento con agenti riducenti come il migrare lentamente a causa dell'effetto di setaccio eser-
2-mercaptoetanolo o il DTT, i legami disolfuro cova- citato della matrice. Gli ioni glicinato raggiungono le
lenti restano intatti e la forma oligomerica della proteine che poi si muovono in uno spazio a pH uni-
proteina viene conservata. I complessi SDS-proteine

itnemogrA
forme formato dal tris(idrossimetil)amminometano e

ilareneG
oligomeriche migrano piu© lentamente dei loro com- dalla glicina. L'azione di setacciatura molecolare pro-
plessi SDS-subunita© polipeptidiche. Inoltre le proteine voca la separazione dei complessi SDS-polipeptide
non ridotte possono non essere completamente saturate sulla base della loro massa molecolare.
con il SDS e, quindi, possono non essere legate al deter-
gente secondo un rapporto di massa costante. Questo

eifargonoM

ilareneG
provoca determinazioni della massa molecolare di PREPARAZIONE DI GEL DI POLIACRILAMMIDE
queste molecole, mediante SDS-PAGE, meno lineari SODIO DODECILSOLFATO VERTICALI PER TAM-
rispetto alle analisi di polipeptidi completamente dena- PONI DISCONTINUI
turati poichë, al fine di un confronto valido, e© necessa-

ehcituecamraF
rio che sia gli standard che le proteine non note siano
in una configurazione simile. Comunque, la colora-
Assemblaggio dello stampo

emroF
zione di una singola banda in tale gel e© da considerare Lavare, con un detergente blando, due lastre di vetro
un criterio di purezza. (dimensioni: per es. 10 cm 8 cm), il pettine di polite-
2

trafluoroetilene, i due spaziatori e il tubo di gomma di

CARATTERISTICHE DELL'ELETTROFORESI SU silicone (diametro per es. 0,6 mm 35 cm) e lavare
2

GEL IN SISTEMA TAMPONE DISCONTINUO abbondantemente con acqua. Asciugare tutto con carta

eiretaM
adsorbente o tessuto. Lubrificare gli spaziatori con

emirP
Il metodo elettroforetico piu© usato per la caratterizza- grasso non siliconico. Posizionare gli spaziatori a
zione di miscele complesse di proteine prevede l'uso di 2 mm dal bordo di ciascuno dei due lati corti della
un sistema tampone discontinuo costituito da due gel lastra di vetro ed a 2 mm dal bordo di uno dei lati lun-
vicini ma distinti: un gel (inferiore) di risoluzione o di ghi della lastra corrispondente al fondo del gel. Iniziare
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

separazione ed un gel (superiore) di impaccamento a collocare il tubo sulla lastra di vetro usando uno spa-
(stacking gel). I due gel hanno differenti porosita© , pH e ziatore come guida. Avvolgere il tubo con cura al fondo
forza ionica. Inoltre, si utilizzano ioni mobili differenti, dello spaziatore e seguire il lato lungo della lastra di
nel gel e nei tamponi degli elettrodi. La discontinuita© vetro. Mantenere il tubo in posizione con un dito sul
del tampone agisce concentrando campioni di grande lato lungo della lastra, piegarlo di nuovo per seguire il
ehcitapoemO
inoizaraperP

volume nel gel di impaccamento, con conseguente secondo lato corto, usando lo spaziatore come guida.
aumento della risoluzione. Quando si applica la Posizionare la seconda lastra di vetro in perfetto
corrente si verifica una caduta di tensione attraverso la allineamento e mantenere lo stampo assemblata
soluzione campione che porta le proteine nel gel di mediante la pressione della mano. Applicare due pinze
impaccamento. Gli ioni glicinato, contenuti nel su ciascuno dei due lati piu© corti dello stampo poi, con
tampone dell'elettrodo, seguono le proteine nel gel di precauzione, applicare quattro altre pinze sul lato piu©
ecidnI

impaccamento. Si forma una regione di frontiera lungo dello stampo per il gel formando cos|© il fondo
mobile con gli ioni cloruro, altamente mobili, nella dello stampo. Verificare che il tubo corra lungo il lato

59
Elettroforesi

della lastra di vetro e non sia stato espulso durante direttamente sulla superficie del gel di separazione poli-
l'applicazione delle pinze. Lo stampo e© ora pronto e merizzato. Inserire immediatamente un pettine di poli-
puo© essere versato il gel. tetrafluoroetilene, pulito, nella soluzione del gel di
impaccamento, avendo cura di evitare l'intrappola-
Preparazione del gel
mento di bolle d'aria. Aggiungere un eccesso della solu-
Per l'elettroforesi su gel di poliacrilammide sodio dode- zione del gel di impaccamento in modo da riempire
cilsolfato in tampone discontinuo, si raccomanda di completamente gli spazi del pettine. Lasciare polime-
versare il gel di separazione, di lasciarlo solidificare e rizzare il gel in posizione verticale e a temperatura
quindi versare il gel di impaccamento, questo perchë la ambiente.
composizione dei due gel in acrilammide-bisacrilam-
mide tampone e pH sono differenti.
Preparazione del gel di separazione. In una beuta prepa-
rare il volume appropriato di soluzione contenente la
Caricamento del gel nell'apparecchio per elettroforesi e

concentrazione di acrilammide desiderata per il gel in separazione elettroforetica

questione, usando i valori riportati nella tabella A polimerizzazione completata (30 min circa), rimuo-
2.2.31.-1. Mescolare i componenti nell'ordine riportato. vere con cautela il pettine di politetrafluoroetilene.
Se del caso, prima di aggiungere la soluzione di ammo- Lavare immediatamente le pareti con acqua o con
nio persolfato e la tetrametilendiammina (TEMED), SDS-PAGE soluzione tampone di eluizione R per elimi-
filtrare la soluzione, se necessario, sotto vuoto attra- nare l'acrilammide non polimerizzata. Se necessario,
verso una membrana di cellulosa acetato (diametro dei aggiustare i pozzetti del gel di impaccamento con
pori 0,45 mm); mantenere la soluzione sotto vuoto agi-
tando l'unita© di filtrazione fino a che non si formano un'ago
Rimuovere
ipodermico spuntato unito a una siringa.
le pinze da un lato corto della lastra di
piu© bolle nella soluzione. Aggiungere quantita© appro- vetro, rimuovere
priate della soluzione di ammonio persolfato e di tetra- Procedere allo ilstessotubo e posizionare di nuovo le pinze.
modo sull'altro lato corto.
metilendiammina (TEMED) come indicato in Tabella Rimuovere il tubo dalla parte inferiore del gel e mon-
2.2.31.-1, agitare e versare immediatamente nell'aper-
tura tra le due lastre di vetro dello stampo. Lasciare tare il gel in un apparecchio per elettroforesi. Aggiun-
uno spazio sufficiente per il gel di impaccamento (la gere le soluzioni tamponi per l'elettroforesi ai serbatoi
lunghezza dei denti del pettine piu© 1 cm). Usando una inferiore e superiore. Eliminare le bolle che sono intrap-
sottile pipetta di vetro, coprire accuratamente la solu- polate sul fondo del gel tra le lastre di vetro. Questo si
zione con isobutanolo saturato con acqua. Lasciare realizza nel modo migliore usando un ago ipodermico
polimerizzare il gel in posizione verticale a temperatura curvo con attaccata una siringa. Non eseguire mai una
ambiente. pre-eluizione prima del caricamento dei campioni poi-
Preparazione del gel di impaccamento. A polimerizza- chë pone.
si distruggerebbe la discontinuita© di sistemi tam-
Prima del caricamento del campione lavare accu-
zione completata (30 min circa), eliminare l'isobuta- ratamente i pozzetti con una piccola quantita© di SDS-
nolo e lavare la sommita© del gel piu© volte con acqua PAGE soluzione tampone per la eluizione R. Preparare
per rimuovere l'isobutanolo stratificato e l'acrilammide la soluzione in esame e la soluzione di riferimento nella
non polimerizzata. Rimuovere il piu© possibile di liquido
dalla sommita© del gel e poi eliminare l'acqua rimanente soluzione tampone raccomandata e trattarle come
con un foglio di carta. In una beuta preparare il volume descritto nella specifica monografia. Depositare il
appropriato di soluzione contenente la concentrazione volume appropriato di ciascuna soluzione nei pozzetti
di acrilammide desiderata per il gel in questione, del gel di impaccamento. Dare inizio all'elettroforesi
usando i valori riportati nella Tabella 2.2.31.-2. Mesco- secondo le istruzioni raccomandate dal produttore del-
lare i componenti nell'ordine riportato. Se del caso, l'apparecchio. I produttori di apparecchi per SDS-
prima di aggiungere la soluzione di ammonio persol- PAGE possono fornire gel con area superficiale e spes-
fato e la tetrametilendiammina (TEMED), filtrare sore diversi. Il tempo di corsa dell'elettroforesi e la cor-
la soluzione, se necessario, sotto vuoto attraverso rente o il voltaggio possono variare come descritto dal
una membrana di cellulosa acetato (diametro dei pori produttore dell'apparecchio, al fine di ottenere una
0,45 mm); mantenere la soluzione sotto vuoto agitando separazione ottimale. Verificare che il fronte colorato
l'unita© di filtrazione fino a quando nella soluzione si muova lungo il gel di separazione. Quando il colore
non si formano piu© bolle. Aggiungere quantita© appro- ha raggiunto il fondo del gel arrestare l'elettroforesi.
priate della soluzione di ammonio persolfato e di Rimuovere il gel dall'apparecchio separando le lastre
tetrametilendiammina (TEMED) come indicato in di vetro. Togliere gli spaziatori, tagliare ed eliminare il
Tabella 2.2.31.-2, agitare e versare immediatamente gel di impaccamento ed procedere immediatamente
nell'apertura tra le due lastre di vetro dello stampo con la colorazione.

60
 Elettroforesi

inoizircserP
Tabella 2.2.31.-1. Preparazione del gel di risoluzione

ilareneG
Volumi dei componenti (ml) per uno stampo del volume di

Componenti della soluzione

5 ml 10 ml 15 ml 20 ml 25 ml 30 ml 40 ml 50 ml

isilanA id
Acrilammide 6 per cento

idoteM
Acqua R 2,6 5,3 7,9 10,6 13,2 15,9 21,2 26,5
Acrilammide soluzione(1) 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 8,0 10,0
1,5 M Tris (pH 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
100 g/l SDS(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
100 g/l APS(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5

irotinetnoC
/ ilairetaM
TEMED(5) 0,004 0,008 0,012 0,016 0,02 0,024 0,032 0,04
Acrilammide 8 per cento

Acqua R 2,3 4,6 6,9 9,3 11,5 13,9 18,5 23,2

Acrilammide soluzione(1) 1,3 2,7 4,0 5,3 6,7 8,0 10,7 13,3
1,5 M Tris (pH 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5

ivittaeR
100 g/l SDS(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
100 g/l APS(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
TEMED(5) 0,003 0,006 0,009 0,012 0,015 0,018 0,024 0,03
Acrilammide 10 per cento

Acqua R 1,9 4,0 5,9 7,9 9,9 11,9 15,9 19,8

itnemogrA
ilareneG
Acrilammide soluzione(1) 1,7 3,3 5,0 6,7 8,3 10,0 13,3 16,7
1,5 M Tris (pH 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
100 g/l SDS(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
100 g/l APS(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
TEMED(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02

eifargonoM

ilareneG
Acrilammide 12 per cento

Acqua R 1,6 3,3 4,9 6,6 8,2 9,9 13,2 16,5

Acrilammide soluzione(1) 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 16,0 20,0
1,5 M Tris (pH 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5

ehcituecamraF
100 g/l SDS(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
100 g/l APS(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5

emroF
TEMED(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02
Acrilammide 14 per cento

Acqua R 1,4 2,7 3,9 5,3 6,6 8,0 10,6 13,8

Acrilammide soluzione(1) 2,3 4,6 7,0 9,3 11,6 13,9 18,6 23,2
1,5 M Tris (pH 8,8)(2) 1,2 2,5 3,6 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5

eiretaM

emirP
100 g/l SDS(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
100 g/l APS(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
TEMED(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02 ehcituecamraF
inoizaraperP

Acrilammide 15 per cento

ehcificepS

Acqua R 1,1 2,3 3,4 4,6 5,7 6,9 9,2 11,5

Acrilammide soluzione(1) 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 20,0 25,0
1,5 M Tris (pH 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5
100 g/l SDS(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
100 g/l APS(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5
ehcitapoemO
inoizaraperP

TEMED(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02

(1) Acrilammide soluzione: acrilammide/bisacrilammide (29:1) 30 per cento soluzione R.
(2) 1,5 M Tris (pH 8,8): tampone soluzione tris-cloridrato 1,5 M a pH 8,8 R.
(3) 100 g/l SDS: una soluzione (100 g/l) di sodio dodecilsolfato R.
(4) 100 g/l APS: una soluzione (100 g/l) di ammonio persolfato R. L'ammonio persolfato fornisce i radicali liberi che guidano la polimerizza-
zione di acrilammide e di bisacrilammide. Poichë la soluzione di ammonio persolfato si decompone lentamente, le soluzioni devono
essere preparate settimanalmente.
ecidnI

(5) TEMED: tetrametiletilendiammina R.

61
Elettroforesi

Tabella 2.2.31.-2. Preparazione del gel di impaccamento

Volumi dei componenti (ml) per uno stampo del volume di

Componenti della soluzione

1 ml 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml 6 ml 8 ml 10 ml

Acqua R 0,68 1,4 2,1 2,7 3,4 4,1 5,5 6,8

Acrilammide soluzione(1) 0,17 0,33 0,5 0,67 0,83 1,0 1,3 1,7
1,0 M Tris (pH 6,8)(2) 0,13 0,25 0,38 0,5 0,63 0,75 1,0 1,25
100 g/l SDS(3) 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1
100 g/l APS(4) 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1
TEMED(5) 0,001 0,002 0,003 0,004 0,005 0,006 0,008 0,01
(1) Acrilammide soluzione: acrilammide/bisacrilammide (29:1) 30 per cento soluzione R.
(2) 1,0 M Tris (pH 6,8): tampone soluzione tris-cloridrato 1,5 M a pH 6,8 R.
(3) 100 g/l SDS: una soluzione (100 g/l) di sodio dodecilsolfato R.
(4) 100 g/l APS: una soluzione (100 g/l) di ammonio persolfato R. L'ammonio persolfato fornisce i radicali liberi che guidano la polimerizza-
zione di acrilammide e di bisacrilammide. Poichë la soluzione di ammonio persolfato si decompone lentamente, le soluzioni devono
essere preparate settimanalmente.
(5) TEMED: tetrametiletilendiammina R.
RIVELAZIONE DELLE PROTEINE NEI GEL NOTA: le soluzioni alcooliche acide usate in questa
procedura non fissano completamente le proteine
La colorazione con blu di Comassie e© il metodo piu© nel gel. Questo puo© causare la perdita di alcune
comune di colorazione delle proteine, con un livello proteine a bassa massa molecolare durante la colo-
di rivelazione dell'ordine di 1-10 g di proteina per razione e la decolorazione dei gel sottili. La fissazione
banda. La colorazione con l'argento e© il metodo di permanente si ottiene lasciando il gel a riposo per 1 h,
colorazione piu© sensibile delle proteine nel gel e puo© in una miscela di 1 volume di acido tricloroacetico R,
rivelare una banda contenente da 10 ng a 100 ng di 4 volumi di metanolo R e 5 volumi di acqua R, prima
proteine. dell'immersione nella soluzione colorante di blu di
Comassie.
Tutte le fasi di colorazione del gel vengono eseguite a
temperatura ambiente agitando dolcemente (per es.
con un vibratore circolare) in un recipiente appro-
priato. Durante la colorazione dei gel si devono Colorazione con argento

indossare i guanti per evitare la colorazione delle

dita. Immergere il gel in un grande eccesso di soluzione per
il fissaggio R e lasciare a riposo per 1 h. Eliminare
la soluzione per il fissaggio, aggiungere una solu-
Colorazione al blu di Comassie
zione fresca per il fissaggio ed incubare almeno per
Immergere il gel in un grande eccesso di soluzione 1 h o per una notte intera se necessario. Eliminare
colorante di Comassie R e lasciare a riposo per la soluzione per il fissaggio e lavare il gel con un
almeno 1 h. Eliminare la soluzione colorante. grande eccesso di acqua R per 1 h. Immergere il gel
per 15 min in una soluzione (1 per cento V/V) di glu-
Decolorare il gel con un grande eccesso di soluzione taraldeide R. Lavare il gel due volte, per 15 min, con
decolorante R. Rinnovare alcune volte la solu- un grande eccesso di acqua R. Immergere il gel in
zione decolorante fino a quando le bande proteiche argento nitrato reattivo R, preparato di recente, per
colorate saranno chiaramente distinguibili sullo 15 min ed al buio. Lavare per tre volte, per 5 minuti,
sfondo chiaro. Piu© accuratamente il gel e© decolorato, il gel con un grande eccesso di acqua R. Immer-
piu© piccola e© la quantita© di proteina che puo© essere gere il gel per 1 min circa nella soluzione di sviluppo R
rivelata. La decolorazione puo© essere resa piu© rapida fino ad ottenere una colorazione soddisfacente.
aggiungendo alla soluzione decolorante R alcuni Fermare lo sviluppo mediante incubazione nella
grammi di resina a scambio anionico o una piccola soluzione di arresto R per 15 min. Lavare il gel con
spugna. acqua R.

62
 Elettroforesi

inoizircserP
ESSICCAMENTO DEI GEL DI POLIACRI- rante usato come tracciante. Le distanze di migra-

ilareneG
LAMMIDE-SDS COLORATI zione normalizzate cos|© ottenute sono definite mobi-
lita© relative delle proteine (relative al fronte del colo-
I gel sono trattati in modo leggermente differente rante) e convenzionalmente indicate con Rf.
a seconda del metodo di colorazione usato. Per la Costruire un diagramma del logaritmo delle masse

isilanA id
colorazione con blu di Comassie dopo la fase di deco- molecolari relative (Mr) degli standard proteici in

idoteM
lorazione, lasciare a riposo il gel in una soluzione funzione dei valori Rf. I grafici ottenuti sono legger-
(100 g/l) di glicerolo R per almeno 2 h (oppure incu- mente sigmoidi. Le masse molecolari non note pos-
bare per una notte, se possibile). Per la colorazione sono essere determinate mediante l'analisi di regres-
con argento aggiungere al lavaggio finale una fase sione lineare o mediante interpolazione delle curve

irotinetnoC
/ ilairetaM
della durata di 5 min in una soluzione (20 g/l) di gli- del log di Mr in funzione di Rf purchë i valori otte-
cerolo R. nuti per i campioni non noti siano disposti lungo la
Immergere due fogli di cellulosa porosa in acqua R parte lineare del grafico.
per 5-10 min. Disporre uno dei fogli su un dispositivo
per l'essiccamento. Sollevare delicatamente il gel e

ivittaeR
deporlo sul foglio di cellulosa. Eliminare le bolle d'a- CONVALIDA DEL SAGGIO
ria eventualmente imprigionate e versare alcuni milli-
litri di acqua R lungo i bordi del gel. Ricoprire il gel
con il secondo foglio di carta ed eliminare le bolle Il saggio e© valido solo se le proteine utilizzate come
d'aria eventualmente imprigionate. Terminare l'as- marcatore della massa molecolare sono distribuite

itnemogrA
ilareneG
semblaggio del sistema per l'essiccamento. Introdurre lungo l'80 per cento della lunghezza del gel e se,
in stufa, o lasciar a temperatura ambiente, fino a che nell'intervallo di separazione richiesto (per es. l'inter-
il gel risulta secco. vallo che comprende il prodotto e il suo dimero o il
prodotto e le impurezze correlate), la separazione

eifargonoM
ottenuta per le bande proteiche principali presenta

ilareneG
DETERMINAZIONE DELLA MASSA MOLE- una relazione lineare tra il logaritmo della massa
COLARE molecolare e l'Rf. Ulteriori requisiti di convalida per
la soluzione in esame possono essere specificati nella
La massa molecolare delle proteine viene determinata relativa monografia.

ehcituecamraF
confrontando la loro mobilita© con quella di marcatori

emroF
proteici di massa molecolare nota. Per la taratura
dei gel esistono miscele di proteine, con masse mole-
colari note con precisione, mescolate per ottenere DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DELLE
una colorazione uniforme. Queste miscele sono otte- IMPUREZZE
nibili per differenti intervalli di masse molecolari.
eiretaM

emirP
Le soluzioni madre, concentrate, di proteine di massa Qualora nella specifica monografia sia specificato
molecolare nota, vengono diluite nell'appropriato il limite dell'impurezza, si deve preparare una
tampone utilizzato per la soluzione in esame e depo- soluzione di riferimento corrispondente a quella
ste sullo stesso gel dove viene depositato il campione concentrazione di impurezza, diluendo la soluzione
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

proteico in esame. in esame. Per esempio, quando il limite e© il 5 per

Immediatamente dopo l'elettroforesi segnare la posi- cento, la soluzione di riferimento dovrebbe essere
zione del colorante azzurro bromofenolo utilizzato una diluizione 1:20 della soluzione in esame. Nessuna
come tracciante per identificare il fronte elettrofore- impurezza (nessuna banda oltre alla principale) in
ehcitapoemO
inoizaraperP

tico degli ioni. Questo puo© essere realizzato trac- un elettroforetogramma ottenuto con la soluzione
ciando delle tacche lungo il bordo del gel o inserendo in esame puo© essere piu© intensa della banda princi-
un ago imbevuto nell'inchiostro di china. Dopo la pale ottenuta con la soluzione di riferimento. In con-
colorazione del gel misurare le distanza di migra- dizioni convalidate le impurezze possono essere
zione di ciascuna banda proteica (marcatori e bande quantificate mediante normalizzazione rispetto alla
non note) a partire dalla parte superiore del gel di banda principale usando un densitometro. In questo
ecidnI

separazione. Dividere la distanza di migrazione di caso deve essere convalidata la linearita© delle ri-
ciascuna proteina per la distanza percorsa dal colo- sposte.

63
Spettrometria di risonanza magnetica nucleare

2.2.32. PERDITA ALL'ESSICCAMENTO mediante eccitazione simultanea di tutte le transizioni

per mezzo di un impulso a frequenza multipla seguito
La perdita all'essiccamento e© la perdita di massa da una analisi computerizzata del segnale di decadi-
espressa in per cento m/m. mento libero della radiazione emessa quando il sistema
Metodo. Porre la prescritta quantita© di sostanza in ritorna allo stato iniziale (spettrometria ad impulso).
esame in un adatto recipiente tarato e previamente Uno spettro di risonanza magnetica protonica si pre-
essiccato nelle condizioni richieste per la sostanza in senta come un insieme di segnali che corrispondono a
esame. Essiccare la sostanza fino a massa costante o protoni e che sono caratteristici del loro intorno
per il tempo indicato, secondo uno dei seguenti procedi- nucleare ed elettronico nella molecola. La separazione
menti: tra un dato segnale e quello di una sostanza di riferi-
a) ``in essiccatore'': l'essiccamento si effettua su ani- mento e© chiamata spostamento chimico ( ) e viene
d

dride fosforica R alla pressione atmosferica e a tem- espressa in parti per milione (ppm); essa caratterizza il
peratura ambiente; tipo di protone in termini del suo intorno elettronico.
b) ``nel vuoto'': l'essiccamento si effettua su anidride I segnali sono frequentemente suddivisi in gruppi di
fosforica R ad una pressione compresa fra 1,5 kPa e picchi correlati, chiamati doppietti, tripletti ...multi-
2,5 kPa, a temperatura ambiente; pletti; questa suddivisione e© dovuta alla presenza di
campi magnetici permanenti originati da nuclei vicini,
c) ``nel vuoto'' con l'indicazione dell'intervallo di tem- in particolare da altri protoni distanti da due a cinque
peratura; l'essiccamento si effettua su anidride fosfo- legami di valenza. L'intensita© di ciascun segnale, deter-
rica R ad una pressione compresa fra 1,5 kPa e minata dall'area sotto il segnale, e© proporzionale al
2,5 kPa, nell'intervallo di temperatura indicato nella numero dei protoni equivalenti.
monografia;
d) ``in stufa'' con l'indicazione dell'intervallo di tempe- Apparecchio. Uno spettrometro di risonanza magnetica
ratura; l'essiccamento si effettua in stufa alla tempe- nucleare, ad onda continua, e© costituito da un magnete,
ratura indicata nella monografia. un generatore a scansione di bassa frequenza, un
porta-campione, un emettitore e ricevitore di radiofre-
e) ``sotto vuoto spinto''; l'essiccamento si effettua su quenze, un registratore e un integratore elettronico.
anidride fosforica R ad una pressione non superiore Uno spettrometro ad impulso e© anche corredato di un
a 0,1 kPa, alla temperatura indicata nella monogra- emettitore di impulsi e di un elaboratore elettronico
fia. per acquisire, memorizzare i dati e per la loro trasfor-
Se sono richieste altre condizioni, il procedimento da mazione matematica in uno spettro convenzionale.
applicare viene integralmente descritto nella singola Utilizzare uno spettrometro di risonanza magnetica
monografia. nucleare operante a non meno di 60 MHz per 1H. Salvo
indicazione contraria, attenersi alle istruzioni del pro-
2.2.33. SPETTROMETRIA DI RISONANZA duttore. Prima di registrare lo spettro verificare che:
MAGNETICA NUCLEARE
1) La risoluzione sia uguale o inferiore a 0,5 Hz,
La spettrometria di risonanza magnetica nucleare misurando la larghezza del picco a meta© altezza
(NMR) si basa sul fatto che alcuni nuclei come 1H, utilizzando una appropriata espansione di scala
13C, 19F e 31P, hanno un momento magnetico nucleare della:
permanente. Posti in un campo magnetico esterno - banda a 7,33 ppm o a 7,51 ppm del multi-
(campo principale), essi assumono, in riferimento alla
d d

pletto simmetrico di una soluzione al 20 per cento

direzione di questo, certi orientamenti ben definiti, ai V/V di diclorobenzene R in acetone deuterato R,
quali corrispondono livelli di energia distinti. Per un
dato valore di campo, avverranno delle transizioni tra - oppure della banda a 0,00 ppm di una solu-
d

livelli di energia vicini a seguito dell'assorbimento di zione al 5 per cento V/V di tetrametilsilano R in
radiazioni elettromagnetiche a lunghezze d'onda carat- cloroformio deuterato R.
teristiche nelle radiofrequenze. 2) Il rapporto segnale-rumore (S=R), misurato
La determinazione di queste frequenze puo© essere fatta nell'intervallo tra 2 ppm e 5 ppm sullo spettro
d d

sia mediante ricerca sequenziale delle condizioni di ottenuto con una soluzione all'1 per cento V/V di
risonanza (spettrometria ad onda continua) che etilbenzene R in cloroformio deuterato R, e© almeno

64
 Termogravimetria

inoizircserP
di 25:1. Questo rapporto e© calcolato come media sione adatta in funzione dell'apparecchio usato.

ilareneG
di cinque successive determinazioni dall'espres- Quando sono richieste determinazioni quantitative,
sione: attenersi a quanto prescritto.
S=R 2; 5 H
ˆ
A
Spettrometria ad impulso

isilanA id
Regolare i comandi dello spettrometro, cioe© l'angolo di

idoteM
A = ampiezza, misurata in millimetri, del impulso, l'ampiezza dell'impulso e l'intervallo di tempo
picco piu© alto del quadrupletto dovuto tra gli impulsi successivi, la larghezza spettrale ed il
al gruppo metilene dell'etilbenzene centrato numero di punti (risoluzione), la velocita© di acquisi-
a 2,65 ppm. Questa ampiezza viene misu- zione dei dati, secondo le istruzioni del fabbricante e
d

irotinetnoC
rata a partire dalla linea di base, costruita accumulare il numero necessario dei segnali di decadi-

/ ilairetaM
come mediana del rumore, su entrambi i mento liberi. Dopo la trasformazione matematica delle
lati del quartetto, ed a una distanza di informazioni con l'elaboratore, aggiustare il controllo
almeno 1 ppm dal suo centro, di fase in modo da ottenere il piu© possibile un assorbi-
H = altezza da picco a picco del rumore di mento puro e tarare lo spettro in rapporto alla fre-
fondo, misurata in millimetri, ottenuta tra quenza di risonanza del riferimento interno di sposta-

ivittaeR
d 4 ppm e 5 ppm.
d menti chimici. Visualizzare, su di un opportuno termi-
3) L'ampiezza delle bande satelliti di rotazione non e© nale, lo spettro memorizzato. Per le misurazioni
superiore al 2 per cento dell'altezza del picco del quantitative, trattare l'integrale seguendo le prestazioni
campione in un tubo la cui velocita© di rotazione e© dell'apparecchio.

itnemogrA
appropriata per lo spettrometro usato.

ilareneG
4) Per misure quantitative verificare la ripetibilita© 2.2.34. TERMOGRAVIMETRIA

della risposta dell'integratore usando una solu-

zione al 5 per cento V/V di etilbenzene R in cloro- L'analisi termica e© un gruppo di tecniche nelle quali
formio deuterato R. Effettuare cinque scansioni viene misurata la variazione di una proprieta© fisica di

eifargonoM
successive e determinare la media dei valori una sostanza in funzione della temperatura. Le tecniche

ilareneG
ottenuti per i protoni dei gruppi fenile ed etile. piu© comunemente usate sono quelle che misurano i
Nessuno dei valori individuali differisce piu© del cambiamenti di energia o di massa di un campione di
2,5 per cento dalla media. sostanza.
Metodo. Disciogliere la sostanza in esame come La termogravimetria e© una tecnica nella quale la massa

ehcituecamraF
descritto e filtrare: la soluzione deve essere limpida. di un campione di sostanza viene registrata in funzione

emroF
Utilizzare un riferimento interno per lo spostamento della temperatura utilizzando un programma di con-
chimico che, salvo diversa indicazione, consiste in una trollo della temperatura stessa.
soluzione contenente dallo 0,5 per cento V/V all'1,0 per Apparecchiatura. I componenti essenziali di una termo-
cento V/V di tetrametilsilano R (TMS) in solventi orga- bilancia sono un dispositivo per riscaldare o raffred-
nici deuterati o da 5 g/l a 10 g/l di sodio tetradeuteriodi- dare la sostanza secondo un dato programma di tempe-
eiretaM

emirP
metilsilapentanoato R (TSP) in deuterio ossido R. Prele- ratura, un portacampione in un'atmosfera controllata,
vare la quantita© necessaria e registrare lo spettro. una elettrobilancia e un registratore. Lo strumento
puo© essere accoppiato ad un dispositivo che permette
l'analisi dei prodotti volatili.
ehcituecamraF

Spettrometria ad onda continua

inoizaraperP

Aggiustare lo spettrometro in modo che l'apparecchio Verifica della temperatura. Controllare la scala di tem-
ehcificepS

funzioni quanto piu© possibile in assorbimento puro e peratura usando nichel o altri adatti materiali secondo
utilizzare una potenza di radiofrequenza tale da evitare le istruzioni del fabbricante.
la saturazione dei segnali. Regolare i controlli dello Taratura della elettrobilancia. Porre una adeguata
spettrometro in modo che il segnale piu© intenso nello quantita© di calcio ossalato monoidrato SCR nel porta-
ehcitapoemO
inoizaraperP

spettro della sostanza in esame raggiunga, press'a poco, campione e registrare la massa. Impostare la velocita©
l'estremita© superiore della carta di registrazione e che di riscaldamento secondo le istruzioni del fabbricante
il segnale del riferimento interno corrisponda ad uno e dare inizio all'aumento di temperatura. Registrare la
spostamento chimico di 0,00 ppm. Registrare lo spet- curva termogravimetrica come un grafico avente la
d

tro nell'intervallo prescritto e, salvo indicazione contra- temperatura sull'asse delle ascisse, con valori crescenti
ria, ad una velocita© di scansione non superiore a 2 Hz da sinistra a destra e la massa sull'asse delle ordinate
ecidnI

al secondo. Registrare l'integrale dei segnali nello con valori crescenti verso l'alto. Fermare l'aumento di
stesso intervallo dello spettro e ad una velocita© di scan- temperatura a circa 230 ‘C. Misurare sul grafico la

65
Determinazione potenziometrica della concentrazione ionica utilizzando elettrodi ione-selettivi

distanza tra il tratto piano iniziale e quello finale della rente o della differenza di potenziale, che puo© essere
curva massa-temperatura che corrisponde alla perdita graduato in abbassamento di temperatura o diretta-
di massa. La perdita di massa dichiarata per il calcio mente in osmolalita© ,
ossalato monoidrato SCR e© riportata in etichetta. - e© generalmente presente un dispositivo per l'agita-
Metodo. Applicare la stessa procedura alla sostanza in zione del campione.
esame usando le condizioni stabilite nella monografia.
Calcolare la perdita di massa della sostanza in esame Tabella 2.2.35.-1.- Soluzioni di riferimento
dalla distanza misurata sul grafico ottenuto; esprimere per la taratura dell'osmometro
la perdita di massa come per cento m/m. Massa

Se l'apparecchiatura viene usata frequentemente effet- in grammi

sodio
tuare regolarmente la verifica della temperatura e la cloruro R
di Osmolalita© Osmolalita© Coefficiente Abbassamento

reale ideale osmotico crioscopico

taratura, altrimenti effettuare questi controlli prima di per (mosmol/kg) (mosmol/kg) molale (C)

ogni misura. chilogrammo

diacqua R
3,087 100 105,67 0,9463 0,186
2.2.35. OSMOLALITAé
6,260 200 214,20 0,9337 0,372
9,463 300 323,83 0,9264 0,558
L'osmolalita© e© un modo pratico per esprimere il contri- 12,684 400 434,07 0,9215 0,744
buto dei vari soluti presenti in una soluzione alla pres- 15,916 500 544,66 0,9180 0,930
sione osmotica della soluzione stessa. 19,147 600 655,24 0,9157 1,116
22,380 700 765,86 0,9140 1,302
Una approssimazione accettabile dell'osmolalita© m din

una soluzione acquosa e© data da: Metodo. Preparare le soluzioni di riferimento come
descritto in Tabella 2.2.35.-1. Determinare lo zero dello
m =vm
U strumento con acqua R. Tarare lo strumento con le
Se il soluto non e© ionizzato v = 1; altrimenti v e© il soluzioni di riferimento; introdurre nella cella di misura
numero totale di ioni preesistenti o formatisi per solvo- da 50 a 250 ml del campione ed attivare il sistema di
lisi da una molecola di soluto. raffreddamento. Generalmente il dispositivo per l'agi-
m = molalita© della soluzione, ovvero il numero di moli tazione e© programmato per operare ad una temperatura
di soluto per chilogrammo di solvente, inferiore all'abbassamento crioscopico previsto onde
evitare il sopraraffreddamento; un dispositivo appro-
U = coefficiente osmotico molale che tiene conto delle priato indica il raggiungimento dell'equilibrio. Prima
interazioni tra ioni di carica opposta presenti di ogni misura lavare la cella con la soluzione in esame.
nella soluzione. Esso dipende dal valore di m. Effettuare le stesse operazioni con la soluzione in
Con l'aumentare della complessita© delle soluzioni esame. Leggere direttamente l'osmolalita© o calcolarla a
diventa difficile da misurare. partire dall'abbassamento crioscopico misurato. Il sag-
L'unita© di misura dell'osmolalita© e© la osmole per chilo- gio e© valido solo se il valore trovato e© compreso fra
grammo (osmol/kg), ma essa viene comunemente due valori della scala di taratura.
espressa anche in milliosmoli per chilogrammo
(mosmol/kg). 2.2.36. DETERMINAZIONE POTENZIOMETRI-

Se non diversamente prescritto, l'osmolalita© si deter- CA DELLA CONCENTRAZIONE IONICA

mina mediante misura dell'abbassamento del punto di UTILIZZANDO ELETTRODI IONE-SE-

congelamento. La seguente relazione esiste tra l'osmo- LETTIVI

lalita© e l'abbassamento del punto di congelamento T: 4

In un sistema ideale il potenziale E di un elettrodo ione-
T 1000 mosmol/kg selettivo varia linearmente con il logaritmo dell'attivita©
m ai di un dato ione, come espresso dalla equazione di
4
ˆ
1; 86
2

Nernst:
Apparecchio. Lo strumento (osmometro) e© costituito da:
- un sistema di raffreddamento del recipiente usato per E E0 2; 303 RT
ˆ
ziF log ai
‡

la misura,
- un sistema di misura della temperatura, costituito da E0 = parte del potenziale costante dovuto all'apparec-
una resistenza sensibile alla temperatura (termistore), chio utilizzato,
con un appropriato dispositivo di misura della cor- R = costante dei gas,

66
 Determinazione potenziometrica della concentrazione ionica utilizzando elettrodi ione-selettivi

inoizircserP
T = temperatura assoluta, zando un tampone prescritto nella monografia, equili-

ilareneG
F = numero di Faraday, brare l'elettrodo immergendolo nella soluzione in
zi = carica dello ione compreso il suo segno. esame, agitando lentamente e uniformemente fino ad
ottenere una lettura costante.
A forza ionica costante: Se il sistema di elettrodi si utilizza di frequente, e© neces-
E E0 zk log f Ci

isilanA id
sario verificare regolarmente la ripetibilita© e la stabilita©

idoteM
ˆ ‡
i delle risposte, nonchë la linearita© della curva di taratura
o l'algoritmo del calcolo, in un intervallo di concentra-
Ci = concentrazione molare dello ione, zioni comprendente quello della soluzione in esame.
f = coefficiente di attivita© (ai = fCi), Nel caso contrario, effettuare il controllo prima di ogni

irotinetnoC
/ ilairetaM
k = RTF determinazione. La risposta dell'elettrodo puo© essere
considerata lineare se la pendenza S della curva di
Tabella 2.2.36.-1.- Valori di k a differenti temperature taratura e© approssimativamente uguale a k=zi , per unita©
di pCi.
Temperatura (‘C) k Metodo I (taratura diretta)

ivittaeR
20
25
0,0582
0,0592
Misurare, almeno per tre volte consecutive, il poten-
30 0,0602 ziale di almeno tre soluzioni di riferimento, le cui con-
centrazioni comprendono quella presunta della solu-
Se: zione in esame. Calcolare la curva di taratura o ripor-

itnemogrA
tare su un grafico il potenziale medio E ottenuto nei
E0 zk logf E0 e S zk

ilareneG
‡
i
ˆ
i
0
ˆ
confronti della concentrazione dello ione da determi-
nare, espressa come - log Ci o pCi.
S = pendenza della curva di taratura dell'elettrodo, Preparare la soluzione in esame come descritto nella
si ottiene: monografia; misurare il potenziale per tre volte e con

eifargonoM
il valore medio del potenziale calcolare la concentra-

ilareneG
E E0 Slog Ci che ponendo - logC pCi da©
ˆ
0
‡ ˆ
zione dello ione da determinare, utilizzando la curva
luogo a E E0 SpCi
ˆ
0
ÿ
di taratura.
Effettuare la determinazione potenziometrica della
concentrazione ionica misurando la differenza di Metodo II (metodo delle aggiunte multiple)

ehcituecamraF
potenziale tra due appropriati elettrodi immersi nella Preparare la soluzione in esame come descritto nella
soluzione in esame; l'elettrodo indicatore e© un elettrodo

emroF
selettivo per lo ione da determinare e l'altro e© un elet- monografia. Misurare il potenziale all'equilibrio ET di
trodo di riferimento. un volume VT della soluzione a concentrazione inco-
gnita CT dello ione da determinare. Effettuare almeno
Apparecchio. Utilizzare un voltmetro che permette di tre aggiunte consecutive di un volume VS trascurabile
effettuare misure con una precisione di almeno 0,1 mil- confrontato a VT (VS 0,01 VT ) di una soluzione di rife-
eiretaM

emirP


livolt e la cui resistenza e© almeno cento volte superiore rimento a concentrazione CS compresa nella parte
a quella dell'elettrodo utilizzato. lineare della curva di taratura. Dopo ciascuna
Gli elettrodi ione-selettivi possono essere elettrodi pri- aggiunta, misurare il potenziale e calcolare la diffe-
mari con una membrana cristallina o non cristallina o renza di potenziale E tra il potenziale misurato e ET .
ehcituecamraF

4
inoizaraperP

con una matrice rigida (per esempio elettrodi a vetro), E e© correlato alla concentrazione dello ione da deter-
ehcificepS

o elettrodi con trasportatori mobili carichi (positiva- minare mediante l'equazione:

mente o negativamente) o non carichi, o elettrodi sensi- 
C s V s

bilizzati (elettrodi a substrato enzimatico, elettrodi 4 E Slog 1 C V
ˆ ‡

indicatori di gas). L'elettrodo di riferimento e© general- T T

ehcitapoemO
inoizaraperP

mente un elettrodo argento-argento cloruro o un elet- oppure

trodo a calomelano, con dei liquidi di giunzione ade-
guati, che non producono alcuna interferenza. 10 E=S 1 CCS VVS
4

Procedimento. Effettuare ciascuna misura ad una tem-

ˆ ‡
T T
peratura costante a 0,5 ‘C, tenendo conto della
variazione della costante dell'elettrodo con la tempera- VT = volume della soluzione in esame,
6
ecidnI

tura (vedi Tabella 2.2.36.-1). Aggiustare la forza ionica CT = concentrazione dello ione da determinare nella
ed eventualmente il pH della soluzione in esame utiliz- soluzione in esame,

67
Spettrometria di fluorescenza a raggi-X

VS = volume aggiunto della soluzione di riferimento, 2.2.37. SPETTROMETRIA DI FLUORESCENZA A

CS = concentrazione dello ione da determinare nella

(1)
RAGGI-X

soluzione di riferimento,
S = pendenza dell'elettrodo determinata sperimen- La spettrometria di fluorescenza a raggi X dispersiva e©
talmente, ad una temperatura costante, misu- un procedimento che utilizza la misura dell'intensita©
rando la differenza tra i potenziali ottenuti con della radiazione fluorescente emessa da un elemento
due soluzioni di riferimento le cui concentra- avente una massa atomica tra 11 e 92 quando viene
zioni differiscono per un fattore dieci e sono eccitato da una radiazione primaria continua di rag-
situate in un intervallo dove la curva di tara- gi X. L'intensita© della fluorescenza prodotta da un dato
tura e© lineare. elemento dipende dalla concentrazione di questo ele-
Riportare su un grafico 10 E=S (asse y) in funzione di mento nel campione ma anche dall'assorbimento da
4

VS (asse x) ed estrapolare la linea ottenuta fino ad parte della matrice della radiazione incidente e di quella
intersecare l'asse x. All'intersezione, la concentrazione fluorescente. A bassi livelli, dove la curva di taratura e©
CT , riferita allo ione da determinare, della soluzione in lineare, l'intensita© della radiazione fluorescente emessa
esame viene data dall'equazione: da un elemento in una data matrice, a lunghezza d'onda
stabilita, e© direttamente proporzionale alla concentra-
zione di questo elemento e inversamente proporzionale
CT CVS VS
ˆ al coefficiente di assorbimento di massa della matrice
T
a questa lunghezza d'onda.
Metodo III (metodo della singola aggiunta) Metodo. Regolare e utilizzare lo strumento secondo le
Ad un volume VT della soluzione in esame preparata istruzioni date dal fabbricante. I campioni liquidi ven-
come descritto nella monografia, aggiungere un volume gono posti direttamente nello strumento; i campioni
VS di una soluzione di riferimento contenente una solidi vengono compressi in forma di pastiglie dopo
quantita© nota dello ione da determinare e tale da dare averle mescolate, se necessario, con un adatto legante.
una risposta situata nella parte lineare della curva di Per determinare la concentrazione di un elemento in
taratura. Preparare un bianco nelle stesse condizioni. un campione, e© necessario misurare la frequenza degli
Misurare per non meno di tre volte i potenziali della impulsi prodotta da una o piu© preparazioni standard
soluzione in esame e della soluzione in bianco, prima e contenenti quantita© note di questo elemento in una data
dopo le aggiunte della soluzione di riferimento. Calco- matrice e calcolare o misurare il coefficiente di assorbi-
lare la concentrazione CT dello ione da determinare uti- mento di massa della matrice del campione in esame.
lizzando l'equazione seguente ed effettuando le corre- Taratura. Da una soluzione per la taratura o da una
zioni necessarie per il bianco: serie di diluizioni dell'elemento in esame in varie
CT 10 E=S VCS VSV V
ˆ
matrici, determinare la pendenza della curva di tara-
tura b0 mediante l'equazione seguente:
4
T ‡ S† ÿ T

VT = volume della soluzione in esame o del bianco,

CT = concentrazione dello ione da determinare nella b0 1 ˆ
ICN
C
M
soluzione in esame,
VS = volume aggiunto della soluzione di riferimento, M = coefficiente di assorbimento della matrice M,
CS = concentrazione dello ione da determinare nella calcolato o misurato,
soluzione di riferimento,
4 E = differenza tra le medie dei potenziali misurati ICN = tasso di impulsi netto,
prima e dopo le aggiunte VS ,
S = pendenza dell'elettrodo determinata sperimental- C = concentrazione dell'elemento da determinare
mente, ad una temperatura costante, misurando nella preparazione standard.
le differenze tra i potenziali ottenuti da due solu-
zioni di riferimento le cui concentrazioni differi- Coefficiente di assorbimento di massa della matrice del
scono di un fattore dieci e sono situate entro un campione. Se la formula empirica del campione in
intervallo dove la curva di taratura e© lineare. esame e© nota, calcolare il suo coefficiente di assorbi-

68
 Conduttivita©

inoizircserP
mento di massa dalla composizione elementare nota e ne segue che:

ilareneG
dai coefficienti di assorbimento di massa tabulati degli
elementi. Se la composizione elementare e© sconosciuta,
determinare il coefficiente di assorbimento di massa R 1 LS o  R1 LS
ˆ 2 ˆ 2

della matrice del campione, misurando l'intensita© IU

isilanA id
della radiazione X diffusa (effetto Compton), mediante

idoteM
l'equazione seguente: L'unita© di conduttivita© nel Sistema Internazionale
1 a bI e© il siemens per metro (S m-1). In pratica, la condut-
1

MP
ˆ ‡ U tivita© elettrica di una soluzione si esprime in siemen

irotinetnoC
per centimetro (S cm-1) o in microsiemen per centi-

/ ilairetaM
1

MP = coefficiente di assorbimento di massa del cam- metro (S cm ). L'unita© di resistivita© nel Sistema Inter-
-11

pione, nazionale e© l'ohm-metro ( m). La resistivita© di una

X1

soluzione in generale si esprime in ohm-centimetro

IU = radiazione X diffusa. ( cm). Salvo indicazione contraria, la temperatura
X1

Determinazione della frequenza netta degli impulsi dell'e- diresistivita©

riferimento per l'espressione della conduttivita© o

ivittaeR
lemento da determinare nel campione. Calcolare la fre- e© di 20 ‘C.
quenza netta degli impulsi IEP N dell'elemento da deter-
minare dall'intensita© misurata della riga di fluorescenza Apparecchio. L'apparecchio utilizzato (conduttimetro o
e dall'intensita© della/e riga/righe di fondo, tenendo resistivimetro) permette di determinare il valore della

itnemogrA
ilareneG
conto dell'eventuale presenza, nel tubo, di contami- resistenza della colonna di liquido tra gli elettrodi del
nanti. dispositivo di misura (cella di misura). L'apparecchio e©
Calcolo del contenuto in tracce. Se la concentrazione alimentatoeffetti della
da una corrente alternata per evitare gli
polarizzazione degli elettrodi. Eé munito di
dell'elemento si trova nella parte lineare della curva di un dispositivo di compensazione per la temperatura o

eifargonoM
taratura, essa puo© essere calcolata utilizzando la for- di un termometro

ilareneG
mula seguente: di precisione.

C bIEP1 f La cella per la conduttivita© contiene due elettrodi paral-

N
leli di platino ricoperti di nero di platino, ciascuno con

ehcituecamraF
ˆ 2
0 MP
una superficie S, e separati l'uno dall'altro da una

emroF
f = fattore di diluizione. distanza L. Entrambi sono generalmente protetti da un
tubo di vetro che permette un buono scambio tra la
(1) G. Andermann, M. W. Kemp, Analytical Chemistry 1306 (1958). soluzione e gli elettrodi.
30

Z.H. Kalmann, L. Heller, Analytical Chemistry 946 (1962).

34

R.C. Reynolds, Jr., The American Mineralogist 1133 (1963).

eiretaM
La costante C della cella di misura e© data in cm-1 e si

emirP
46

R.O. Mu« ller, Spectrochimica Acta 143 (1964).

calcola mediante l'espressione seguente:
20

R.O. Mu« ller, Spektrochemische Analyse mit Ro« ntgenfluoreszenz, R.

Oldenburg, Mu« nchen Wien (1967).
L
ehcituecamraF

C
inoizaraperP

ehcificepS

ˆ
S
2.2.38. CONDUTTIVITAé

La conduttivita© di una soluzione () e© , per definizione, = coefficiente numerico adimensionale, caratteri-
stico della forma della cella.
ehcitapoemO
inoizaraperP

l'inverso della resistivita© (). Quest'ultima si definisce

come il quoziente tra il campo elettrico e la densita©
di corrente. La resistenza R ( ) di un conduttore
X Reattivi. Preparare tre soluzioni di riferimento di potas-
di sezione S (cm2) e lunghezza L (cm) viene data sio cloruro R contenenti rispettivamente, 0,7455 g,
dall'espressione: 0,0746 g e 0,0149 g di potassio cloruro R per 1000,0 g di
soluzione, utilizzando acqua esente da anidride carbo-
R  LS nica R, preparata da acqua distillata R, la cui condutti-
ecidnI

vita© non supera i 2 mS cm-1.

ˆ
1

69
Distribuzione della massa molecolare nei destrani

La conduttivita© e la resistivita© di queste tre soluzioni a piu© riprese con acqua esente da anidride carbonica R
20 ‘C sono riportate nella tabella seguente: preparata a partire da acqua distillata R e per non meno
di due volte con la soluzione acquosa in esame a
Tabella 2.2.38.-1. - Conduttivita© e resistivita© 20 0,1 ‘C o ad una temperatura indicata nella mono-
delle soluzioni di potassio cloruro
6

grafia. Effettuare misure successive come descritto

Concentrazione in g per Conduttivita© Resistivita©
nella monografia.
1000,0 g di soluzione S1cm -1
X1cm

0,7455 1330 752

0,0746 133,0 7519 2.2.39. DISTRIBUZIONE DELLA MASSA MOLE-

0,0149 26,6 37594 COLARE NEI DESTRANI

Nel caso in cui la determinazione non possa essere Effettuare una cromatografia per esclusione (2.2.30).
effettuata alla temperatura di 20 ‘C, utilizzare l'equa- Soluzione in esame. Disciogliere 0,200 g della sostanza
zione seguente per correggere la conduttivita© delle solu- in esame nella fase mobile e diluire a 10 ml con la fase
zioni di potassio cloruro indicate in tabella. L'equa- mobile.
zione e© valida solo per le temperature nell'intervallo di Soluzione del tracciante. Disciogliere 5 mg di glucosio R
20 5 ‘C.
6 e 2 mg di destrano V0 SCR in 1 ml di fase mobile.
CT C20 1 0; 021 T 20
ˆ ‰ ‡ ÿ †Š
Soluzioni per la taratura. Disciogliere separatamente, in
T = temperatura prescritta nella monografia, 1 ml della fase mobile, 15 mg di destrano 4 per la tara-
CT = conduttivita© della soluzione a T ‘C, tura SCR, 15 mg di destrano 10 per la taratura SCR,
C20 = conduttivita© della soluzione a 20 ‘C. 20 mg di destrano 40 per la taratura SCR, 20 mg di
destrano 70 per la taratura SCR e 20 mg di destrano 250
Procedimento per la taratura SCR.
Determinazione della costante della cella Soluzione per l'idoneita© del sistema. Disciogliere, in 1 ml
Scegliere una cella di misura adatta alla conduttivita© della fase mobile, 20 mg di destrano 40 per il saggio di
della soluzione in esame. La costante della cella deve efficienza SCR (per l'analisi di destrano 40) o 20 mg di
essere tanto piu© elevata quanto piu© la conduttivita© destrano 60/70 per il saggio di efficienza SCR (per l'ana-
attesa e© grande (bassa ) in modo che il valore R misu-
q
lisi di destrano 60 o di destrano 70).
rato sia il piu© grande possibile rispetto all'apparecchio Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
utilizzato. Le celle comunemente -1 utilizzate hanno usando:
costanti di cella dell'ordine di 0,1 cm , 1 cm-1 e 10 cm-1. ^ una colonna, lunga 30 cm e del diametro interno di
Utilizzare una soluzione di riferimento di potassio clo- 10 mm, impaccata con agarosio reticolato per croma-
ruro R adatta per la misura. Lavare la cella ogni volta tografia R o una serie di colonne, lunghe 30 cm e del
con acqua esente da anidride carbonica R preparata a diametro interno di 10 mm, impaccate con gel di
partire da acqua distillata R e per almeno due volte polietere idrossilato per cromatografia R,
con la soluzione di cloruro potassio utilizzata per la
determinazione della costante della cella. Misurare la ^ come fase mobile, ad una velocita© di flusso di
resistenza della cella utilizzando la soluzione di potassio 0,5-1 ml per minuto, (mantenuta costante a 1 per 6

cloruro R a 20 0,1 ‘C o alla temperatura indicata cento per ora), una soluzione contenente 7 g di sodio
solfato anidro R e 1 g di clorobutanolo R in 1 litro di
6

nella monografia. La costante C (in cm-1) della cella e©

data dall'espressione: acqua R,
C RKCl KCl
ˆ 2 ^ come rivelatore un rifrattometro differenziale,
^ un iniettore a volume fisso da 100 ml a 200 ml.
RKCl = resistenza misurata, espressa in mega-ohm, Mantenere il sistema a temperatura costante ( 0,1 ‘C).
KCl = conduttivita© della soluzione di riferimento di 6

potassio cloruro R utilizzata espressa in s. cm-1. Taratura del sistema cromatografico . Iniettare piu© volte
La costante C misurata della cella non deve essere il volume scelto della soluzione del tracciante. Il croma-
superiore al 5 per cento del valore indicato. togramma ottenuto presenta due picchi il primo dei
quali corrisponde al destrano V0 SCR e il secondo corri-
Determinazione della conduttivita© della soluzione in sponde al glucosio R. Dal volume di eluizione del picco
esame
corrispondente al destrano V0, calcolare il volume
Dopo la taratura dell'apparecchio con una delle solu- morto V0 e dal picco corrispondente al glucosio calco-
zioni di riferimento, lavare la cella di misura a lare il volume totale Vt.

70
 Distribuzione della massa molecolare nei destrani

inoizircserP
Iniettare il volume scelto di ciascuna soluzione per Taratura mediante calcolo della curva. Calcolare, dalle

ilareneG
la taratura. Tracciare la linea di base di ciascuno dei equazioni (2) e(1) (3) sotto riportate utilizzando un
cromatogrammi ottenuti. Dividere ciascun cromato- metodo adatto , i valori per b1; b2; b3; b4; e b5 che
gramma in p (almeno 60) bande verticali uguali (corri- danno i valori di Mw entro il 5 per cento del valore
spondenti a volumi uguali di eluizione). In ciascuna dichiarato di ciascuno dei destrani per il saggio di tara-
banda i, corrispondente al volume di eluizione Vi, misu- tura e 180 2 per il glucosio.

isilanA id
idoteM
6

rare l'altezza yi del tracciato cromatografico al di (2)

Mi b5 e b4 b1Ki b2Ki2 b3Ki3
†

sopra della linea di base e calcolare il coefficiente di ˆ ‡

‡ ‡ ‡ †

distribuzione Ki utilizzando l'espressione:

p
X
Vi Vo y i Mi

irotinetnoC
(1)

/ ilairetaM
ÿ † †

V t Vo
ÿ †
Mw ˆ
i 1
ˆ

p (3)
X
Vo = volume morto della colonna, determinato utiliz- yi
i 1
zando il picco corrispondente al destrano Vo
ˆ

SCR, nel cromatogramma ottenuto con la solu- p = numero delle bande che dividono i cromato-

ivittaeR
zione del tracciante, grammi,
Vt = volume totale della colonna, determinato utiliz- yi = altezza del tracciato cromatografico sopra la
zando il picco corrispondente al glucosio nel linea di base nella banda i,
cromatogramma ottenuto con la soluzione del Mi = massa molecolare nella banda i.
tracciante,

itnemogrA
ilareneG
Vi = volume di eluizione della banda i nel cromato-
gramma ottenuto con ciascuna delle soluzioni
per la taratura.
Effettuare la taratura utilizzando uno dei seguenti

eifargonoM
metodi.

ilareneG
Taratura mediante costruzione di una curva. Per cia-
scuno dei destrani per la taratura calcolare il coeffi-
ciente di distribuzione Kmax corrispondente all'altezza
massima del tracciato cromatografico, utilizzando

ehcituecamraF
l'espressione (1).

emroF
Riportare su carta semilogaritmica i valori di Kmax
(sull'asse delle x) rispetto alla massa molecolare dichia-
rata al massimo del tracciato cromatografico Mmax †

di ciascuno dei destrani per la taratura e del glucosio.

Tracciare una prima curva di taratura attraverso i
eiretaM

emirP
punti ottenuti, estrapolandola dal punto Kmax ottenuto
con il destrano 250 per la taratura SCR al piu© basso
valore di K ottenuto per questo destrano SCR (Figura
2.2.39.-1). Utilizzando questa prima curva di taratura,
ehcituecamraF
inoizaraperP

trasformare, per ciascun cromatogramma, tutti i valori

ehcificepS

Ki nelle corrispondenti masse molecolari Mi , in modo

da ottenere la distribuzione delle masse molecolari.
Calcolare per ciascun destrano per la taratura, la media
delle masse molecolari Mw , utilizzando l'equazione (3)
ehcitapoemO
inoizaraperP

sotto riportata. La curva di taratura e© accettabile se i

valori calcolati per Mw non differiscono piu© del 5 per
cento da quelli dichiarati per ciascuno dei destrani per
la taratura e la differenza media e© entro il 3 per
6
Figura 2.2.39.-1. Esempio di una curva di taratura. La
cento. Diversamente spostare la curva di taratura lungo linea tratteggiata corrisponde alla parte di curva estrapo-
l'asse y e ripetere il procedimento sopra descritto finchë lata. Le linee orizzontali al fondo della figura rappresen-
ecidnI

i valori calcolati e dichiarati per Mw non differiscano tano la larghezza e la posizione del tracciato cromatogra-
piu© del 5 per cento. fico ottenuto con ciascuno dei destrani per la taratura.

71
Distribuzione della massa molecolare nei destrani

Idoneita© del sistema cromatografico . Iniettare il volume Calcolare Mw per la frazione di destrano compresa nel
scelto della appropriata soluzione per l'efficienza del 10 per cento inferiore della curva di distribuzione che e©
sistema. stata eluita entro e dopo la banda m utilizzando l'e-
Massa molecolare media dei destrani per il saggio di effi- spressione:
cienza SCR. p
X
Calcolare la massa molecolare media Mw come indi- yi Mi †

cato al paragrafo ''Taratura del sistema cromatogra- Mw i m

(7)
ˆ

fico'', utilizzando o la curva di taratura o i valori otte- ˆ

p
X
yi
nuti per b1 ; b2; b3; b4 e b5. Il saggio e© valido solo se Mw i m
e© compreso tra: ˆ

- 41000 e 47000 (destrano 40 per il saggio di efficienza

SCR), dove m e© definita dalle espressioni seguenti:
- 67000 e 75000 (destrano 60/70 per il saggio di efficienza
SCR). p
X p
X
!

Massa molecolare media della frazione di destrano com- yi  0:1 yi (8)

presa nel 10 per cento superiore della curva di distribu- i m
ˆ i 1
ˆ

zione. p
X p
X
!
Calcolare Mw per la frazione di destrano compresa nel yi > 0 :1 yi (9)
10 per cento superiore della curva di distribuzione che i m 1
ˆ ÿ i 1
ˆ

e© stata eluita entro la banda n utilizzando l'equazione:

n
X
y i Mi p = numero delle bande che dividono i cromato-
grammi,
†

Mw i 1
ˆ
(4)
ˆ
n
X
yi yi = altezza del tracciato cromatografico sopra la
i 1
ˆ linea di base nella banda i,
dove n e© definita dalle espressioni seguenti: Mi = massa molecolare nella banda i.
n p ! Il saggio e© valido solo se Mw della frazione di destrano
X
yi 0:1
X
yi (5) compresa nel 10 per cento inferiore della curva di distri-
i 1
ˆ


i 1
ˆ
buzione e© compreso tra:
n p ! - 6000 e 8500 (destrano 40 per il saggio di efficienza
X
yi > 0:1
X
yi (6) SCR),
i 1
ˆ i 1
ˆ
- 7000 e 11000 (destrano 60/70 per il saggio di efficienza
SCR).
p = numero di bande che dividono i cromato-
grammi,
yi = altezza del tracciato cromatografico sopra la Distribuzione della massa molecolare del destrano da

. Iniettare il volume scelto della soluzione in

linea di base nella banda i, analizzare

esame e come indicato al paragrafo ``Idoneita© del

Mi = massa molecolare nella banda i. sistema cromatografico'' calcolare le Mw corrispon-
Il saggio e© valido solo se Mw della frazione di destrano denti, rispettivamente, alla distribuzione della massa
compresa nel 10 per cento superiore della curva di molecolare totale, alla frazione di destrano compresa
distribuzione e© compreso tra: nel 10 per cento superiore della curva di distribuzione
- 110000 e 130000 (destrano 40 per il saggio di efficienza e alla frazione di destrano compresa nel 10 per cento
SCR); inferiore della curva di distribuzione.
- 190000 e 230000 (destrano 60/70 per il saggio di effi- öööö
cienza SCR).
(1) Un metodo iterativo e©
il metodo Gauss-Newton modificato da
Massa molecolare media della frazione di destrano com- Hartley (O. Hartley, Tecnometrics (1961) e G. Nilsson e K. Nilsson.
presa nel 10 per cento inferiore della curva di distribu- , 3

J. Chromat. , 137 (1974). Puo© essere utilizzato un programma per

zione.
101

microcomputer capace di una regressione non lineare.

72
 Spettrometria nel vicino infrarosso

inoizircserP
pione, bisogna aver cura di posizionare la sonda stessa

ilareneG
2.2.40. SPETTROMETRIA NEL VICINO INFRA-

ROSSO in modo da assicurare che essa rimanga ferma durante

l'acquisizione degli spettri e che le condizioni di misura
La spettrometria nel vicino infrarosso e© una tecnica parti- siano il piu© possibile riproducibili da un campione
colarmente utile per l'identificazione delle sostanze orga- all'altro.
niche. Sebbene gli spettri siano limitati alle risonanze dei In tutti i casi la compensazione delle interferenze di

isilanA id
legami C-H, N-H, O-H e S-H essi generalmente conten-

idoteM
gono molte informazioni. Comunque gli spettri dipendono fondo deve essere fatta in maniera appropriata alla
da diversi parametri come dimensioni delle particelle, configurazione ottica dello strumento, per esempio,
polimorfismo, solventi residui, umidita© ... che non possono deve essere sottratta dallo spettro del campione una
essere sempre controllati. Per questa ragione il confronto registrazione di riferimento di uno standard interno od
esterno di riflessione.

irotinetnoC
/ ilairetaM
diretto tra lo spettro ottenuto con la sostanza in esame e Le dimensioni delle particelle e lo stato di idratazione o
quello di riferimento generalmente non e© possibile; e© di solvatazione devono essere prese in considerazione.
richiesto pertanto un adeguato trattamento matematico . Questo metodo general-
convalidato dei dati. Per misure di transflessione

mente si applica ai liquidi, diluiti o non diluiti, e ai

Apparecchio. Gli spettrofotometri per la registrazione solidi in soluzione o in sospensione.
degli spettri nella regione del vicino infrarosso sono Esaminare il campione in una cella con un appropriato

ivittaeR
costituiti da: riflettore a diffusione, fatto di metallo o di una sostanza
- un filtro, un reticolo o un interferometro capace di for- inerte (per esempio ossido di titanio), che non mostri
nire l'intero intervallo della radiazione elettromagne- uno spettro nella regione del vicino infrarosso ed intro-
tica nella -1regione da -1circa 780 nm a circa 2500 nm dotto ad una appropriata concentrazione nel campione.
(12821 cm a 4000 cm ),

itnemogrA
I campioni sono esaminati come descritto in ``Per

ilareneG
- un mezzo per raccogliere e misurare l'intensita© della misure di trasmissione'' o ``Per misure di riflessione dif-
radiazione trasmessa o riflessa (trasmissione o rifles- fusa''.
sione), come ad esempio una sfera di integrazione, una
sonda a fibra ottica ecc., accoppiato ad un appropriato CONTROLLO DELLE PRESTAZIONI DELLO
rivelatore,

eifargonoM
- un mezzo per il trattamento matematico dei dati spet- STRUMENTO

ilareneG
trali ottenuti. Usare l'apparecchio secondo le istruzioni del fabbri-
cante ed eseguire le verifiche prescritte ad intervalli
PREPARAZIONE DEI CAMPIONI regolari, secondo l'uso dell'apparecchio e delle sostanze
da esaminare.

ehcituecamraF
Per misure di . Questo metodo general-
trasmissione

emroF
mente si applica ai liquidi, diluiti o non diluiti, e ai Verifica della scala delle lunghezze d'onda (eccetto che

). Verificare la scala delle lun-

solidi in soluzione. per apparecchi con filtro

ghezze d'onda impiegate, generalmente nella regione

Esaminare i campioni in una cella di appropriato cam- tra 780 nm e 2500 nm, usando appropriati standards
mino ottico (generalmente da 0,5 mm a 4 mm), traspa- di lunghezza d'onda con massimi caratteristici alle lun-
rente alle radiazioni del vicino infrarosso, o per immer- ghezze d'onda in esame, per esempio polistirene o ossidi

eiretaM
sione nel campione di una idonea sonda a fibre ottiche, di terre rare.

emirP
la quale dara© uno spettro situato in una zona di trasmit-
tanza compatibile con le specifiche dell'apparecchio e
Verifica della riproducibilita© della lunghezza d'onda

). Verificare la
appropriate allo scopo.
(eccetto che per apparecchi con filtro

riproducibilita© della lunghezza d'onda usando stan-

Quando si registra uno spettro nel vicino infrarosso di dards appropriati, per esempio polistirene o ossidi di
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

un campione liquido debbono essere presi in considera- terre rare. La deviazione standard delle lunghezze
zione i rischi di interferenze dipendenti dalla tempera- d'onda deve essere consistente con le specifiche dello
tura o ogni altro effetto di disturbo sugli spettri. spettrofotometro.
In tutti i casi la compensazione delle interferenze di . Verificare la
fondo deve essere fatta in maniera appropriata alla riproducibilita© della risposta usando appropriati stan-
Verifica della riproducibilita© della risposta
ehcitapoemO
inoizaraperP

configurazione ottica dello strumento, per esempio dards, per esempio resine termoplastiche riflettive ver-
deve essere sottratta dallo spettro del campione una niciate con nero di carbone. La deviazione standard
registrazione di riferimento dell'aria (per i liquidi) o delle risposte deve essere consistente con le specifiche
del solvente (per le soluzioni). dello spettrofotometro.
Per misure di riflessione diffusa . Questo metodo gene- . Determinare il rumore
ralmente si applica ai solidi.
Verifica del rumore fotometrico

fotometrico usando un appropriato standard di riflet-

ecidnI

Esaminare i campioni in un contenitore appropriato. tanza, per esempio una piastra di ceramica bianca
Quando si immerge la sonda a fibre ottiche nel cam- riflettiva o resina termoplastica riflettiva. Effettuare

73
Dicroismo circolare

una registrazione dello standard di riflettanza in con- 2.2.41. DICROISMO CIRCOLARE

formita© con le raccomandazioni del fabbricante dello Le sostanze otticamente attive assorbono, ad una data
spettrofotometro e calcolare il rumore fotometrico o lunghezza d'onda, la luce circolarmente polarizzata
da picco a picco o per una data lunghezza d'onda. In destra in maniera diversa dalla luce circolarmente pola-
questo ultimo caso il rumore fotometrico e© rappresen- rizzata sinistra; tale proprieta© e© chiamata dicroismo cir-
tato dalla deviazione standard delle risposte. Il rumore colare.
fotometrico e© consistente con le specifiche dello spet-
trofotometro. La misura diretta da© un valore algebrico medio:
DA AL AR
ˆ ÿ

REALIZZAZIONE DI UN ARCHIVIO DI A = assorbanza dicroica circolare,

SPETTRI DI RIFERIMENTO D

AL = assorbanza della luce circolarmente polarizzata

Registrare gli spettri di un appropriato numero di lotti sinistra,
della sostanza che siano stati completamente control- AR = assorbanza della luce circolarmente polarizzata
lati come prescritto nella monografia e che mostrino le destra.
variazioni tipiche (e.g. produttore, dimensione delle
particelle...) della sostanza da analizzare. L'insieme Il dicroismo circolare e© calcolato usando l'equazione:
degli spettri rappresenta l'informazione che definisce il
margine di similarita© per quella sostanza e che costitui- A
sce il dato archiviato nell'insieme dei dati spettrali per " ˆ "L ÿ "R ˆ
D

identificare la sostanza stessa. Il numero di sostanze

D
c l 2

nell'archivio dipende dalle specifiche applicazioni. " = dicroismo circolare molare o assorbanza dicroica
La raccolta di spettri nell'archivio puo© essere effettuata
D

molare differenziale, espressa in litro mole-1 cm-1,

in modi diversi definiti dalla tecnica matematica usata
1 1

"L = assorbanza molare (2.2.25) della luce circolar-

per l'identificazione. Questi possono essere: mente polarizzata sinistra,
- spettri individuali rappresentanti la sostanza, "R = assorbanza molare della luce circolarmente
- spettri medi di ogni sostanza ed una descrizione della polarizzata destra,
variabilita© . c = concentrazione della soluzione in esame in
La selettivita© dell'insieme dei dati utilizzati per identifi- mole litro-1,
1

care positivamente un certo materiale e discriminarlo l = cammino ottico della cella in centimetri.
adeguatamente nei confronti di altri materiali nell'ar- Per caratterizzare il dicroismo circolare possono essere
chivio, deve essere stabilita dalla procedura di conva- usate anche le seguenti unita© :
lida. Questa selettivita© deve essere verificata periodica- Fattore di dissimmetria:
mente per assicurare nel tempo la validita© dell'insieme g "" D

dei dati; cio© e© necessario specialmente a seguito di ˆ

importanti variazioni connesse con la sostanza come,

ad esempio, cambiamento del produttore o del processo " = assorbanza molare (2.2.25).
di produzione del materiale. Ellitticita© molare:
Questo insieme di dati e© quindi valido solo se usato
nello strumento con il quale sono stati prodotti i dati Alcuni tipi di strumenti danno direttamente il valore di
stessi o su uno strumento simile purchë sia stato dimo- ellitticita© , espresso in gradi. Quando si usano tali
H

strato che l'insieme dei dati trasferiti sia rimasto valido. strumenti, l'ellitticita© molare [ ] puo© essere calcolata
H

. Preparare il campione da esaminare nello mediante la seguente equazione:

M
Metodo

stesso modo utilizzato per produrre l'insieme dei dati H 2

presenti nell'archivio. Per facilitare il confronto tra gli ‰H Š ˆ

c l 10
2 2

spettri si puo© calcolare, sia per lo spettro del campione

che per gli spettri di riferimento dell'archivio, una ade- [ ] = ellitticita©
H molare, espressa in gradi cm2 deci-
1 1

guata trasformazione matematica dello spettro regi- mole ,

-1
strato in log (1/T) o log (1/R) come, per esempio, la H = valore della ellitticita© dato dallo strumento,
derivata seconda o la correzione di diffusione moltipli- M = massa molecolare relativa della sostanza da esa-
cativa. minare,
Il confronto delle trasformate dello spettro del cam- c = concentrazione della soluzione da esaminare in
pione e degli spettri di riferimento dell'archivio richiede g/ml,
l'uso di una adeguata tecnica chemometrica. l = cammino ottico della cella in centimetri.

74
 Dicroismo circolare

inoizircserP
L'ellitticita© molare e© correlata al dicroismo circolare Vac caratteristica del campione da esaminare. La fase

ilareneG
molare ( ) mediante la seguente equazione:
De da© il segno del dicroismo circolare. Il rapporto Vac/Vc
4500 e© proporzionale all'assorbimento differenziale A D

;
‰HŠ ˆ 2 303 D e

 3300D " responsabile del segnale. L'intervallo delle lunghezze
d'onda normalmente coperto da un dicrografo e© com-

isilanA id
La ellitticita© molare e© spesso usata nelle analisi delle preso tra 170 nm e 800 nm.

idoteM
proteine e degli acidi nucleici. In questo caso la concen-
trazione molare e© espressa in termini di ``residuo mono-
merico'', calcolato mediante l'espressione:
Calibrazione dell'apparecchiatura

irotinetnoC
/ ilairetaM
massa molecolare Precisione della scala di assorbanza. Disciogliere
numero di amminoacidi 10,0 mg di isoandrosterone R in diossano R e diluire a
10,0 ml con lo stesso solvente. Registrare lo spettro del
La massa molecolare relativa media del residuo mono- dicroismo circolare della soluzione tra 280 nm e
merico e© pari a 100-120 (generalmente 115) per le pro- 360 nm. Il valore " misurato al massimo (304 nm) e©

ivittaeR
teine e circa 330 per gli acidi nucleici (come sale pari a +3,3.
D

sodico).
Apparecchiatura . La sorgente di luce (S) e© una lampada Puo© essere usata anche una soluzione di acido
allo xenon (Figura 2.2.41.-1); la luce passa attraverso (1S)-(+)-10-canforsolfonico R.

itnemogrA
un doppio monocromatore (M) dotato di prismi di

ilareneG
quarzo (P1, P2). Linearita© della modulazione. Disciogliere 10,0 mg di
Il fascio di luce lineare proveniente dal primo monocro- acido (1S)-(+)-10-canforsolfonico R in acqua R e
matore e© suddiviso in due componenti polarizzate ad diluire a 10,0 ml con lo stesso solvente. Determinare la
angolo retto nel secondo monocromatore. La fenditura esatta concentrazione dell'acido canforsolfonico nella

eifargonoM

ilareneG
d'uscita del monocromatore elimina il fascio straordi- soluzione mediante spettrofotometria nell'ultravioletto
nario. (2.2.25), considerando che l'assorbanza specifica a
La luce polarizzata e monocromatica passa attraverso 285 nm deve essere 1,49.
un modulatore birifrangente (Cr): il risultato e© l'otteni-

ehcituecamraF
mento di una luce circolarmente polarizzata, alternata. Registrare lo spettro del dicroismo circolare tra 185 nm
e 340 nm. Misurata al massimo a 290,5 nm, " e© com-

emroF
Il fascio passa quindi attraverso il campione da esami- preso D

tra +2,2 e +2,5. Il valore di " misurato al mas-

nare (C) e raggiunge un fotomoltiplicatore (PM) simo (192,5 nm) e© compreso tra ^ 4,3 e ^ 5.
D

seguito da un circuito amplificatore che produce due

segnali elettrici: uno e© una corrente diretta Vc e l'altro Puo© anche essere usato l'(1S)-(+)- o l'antipodo
e© una corrente alternata alla frequenza di modulazione (1R)-(^)ammonio-10-canforsolfonato R.
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI

Figura 2.2.41-1. Schema ottico di un dicrografo

75
Densita© dei solidi

2.2.42. DENSITAé DEI SOLIDI B. La densita© di cristallo misurata e© il rapporto massa/

volume dopo la misurazione della massa e del volume
La densita© dei solidi corrisponde alla loro massa media di un monocristallo.
per unita© di volume e tipicamente e© espressa in grammi
per centimetro cubo (g/cm3) anche se l'unita© interna-
zionale e© il3 chilogrammo per metro cubo (1 g/cm3 = DENSITAé DI PARTICELLA
1000 kg/m ). La densita© di particella tiene conto sia della densita© di
A differenza dei gas e dei liquidi la cui densita© dipende cristallo che della porosita© intraparticellare (pori chiusi
solo dalla temperatura e dalla pressione, la densita© di e/o aperti). Pertanto la densita© di particella dipende
una particella solida dipende anche dal suo assembla- dal valore misurato del volume che a sua volta dipende
mento molecolare e quindi varia con la struttura cri- dal metodo della misurazione. La densita© di particella
stallina e il grado di cristallinita© . puo© essere determinata mediante uno dei due metodi
Se una particella solida e© amorfa o parzialmente seguenti.
amorfa, la sua densita© puo© dipendere anche dalla storia A. Densita© mediante il picnometro o densita© picnome-
della preparazione e del trattamento. trica: e© determinata misurando (con un picnometro
Quindi, a differenza dei fluidi, la densita© di due solidi adaspostamento di gas (2.9.23)), il volume occupato
chimicamente equivalenti puo© essere differente e questa di gas spostato dalladipolvere.
una massa nota polvere equivalente al volume
differenza riflette una differenza nella struttura dello nometriche della densita© , il Nelle misurazioni pic-
volume determinato
stato solido. La densita© delle particelle costituenti e© include il volume occupato dai pori aperti; tuttavia,
una importante caratteristica fisica delle polveri farma- esso esclude il volume occupato dai pori chiusi o dai
ceutiche. pori inaccessibili al gas. Per l'elevata diffusivita© del-
La densita© di una particella solida puo© assumere valori l'elio, che e© il gas preferenzialmente usato, molti dei
differenti in funzione del metodo usato per misurare il pori aperti sono accessibili al gas stesso. Quindi, la
volume della particella. Eé utile distinguere tre livelli di densita© picnometrica di una polvere finemente maci-
espressione della densita© : nata non e© generalmente molto differente dalla den-
^ la densita© di cristallo che include solo la frazione sita© di cristallo.
solida del materiale; la densita© di cristallo e© chia-
mata anche densita© reale; B. Densita© mediante un porosimetro al mercurio o densita©
^ la densita© di particella che include anche il volume porosimetrica
granulare).
al mercurio (e© anche chiamata densita©
Anche con questo metodo il volume deter-
dovuto ai pori intraparticellari, minato esclude i contributi dei pori chiusi; comun-
^ la densita© di un insieme di particelle (bulk density) que, esso include solo il volume dei pori aperti piu©
che include anche il volume vuoto interparti- grandi di una certa dimensione limite. Questa dimen-
cellare formatosi nel letto della polvere; la densita© sione limite del poro, o diametro minimo di accesso,
di un insieme di particelle e© chiamata anche densita© dipende dalla massima pressione d'intrusione del
apparente. mercurio applicata durante la misurazione; alle nor-
mali pressioni operative il mercurio non penetra nei
pori piu© piccoli accessibili all'elio. Da un unico cam-
DENSITAé DI CRISTALLO pione possono essere ottenute varie densita© granulari
poichë, per ciascuna pressione di intrusione del mer-
La densita© di cristallo di una sostanza e© la massa media curio applicata, puo© essere determinata una densita©
per unita© di volume, in assenza di tutti gli spazi che che corrisponde alla dimensione limite dei pori a
non sono parte fondamentale del reticolo cristallino quella pressione.
molecolare. E' una proprieta© intrinseca della sostanza,
e quindi dovrebbe essere indipendente dal metodo di DENSITAé DI INSIEME E DENSITAé DA
determinazione. La densita© di cristallo puo© essere cal-
colata o semplicemente misurata. IMPACCAMENTO O COMPRESSIONE
A. La densita© di cristallo calcolata e© ottenuta usando La densita© di insieme di una polvere include il contri-
dati cristallografici (dimensione e composizione della buto del volume vuoto interparticellare. La densita© di
cella unitaria) ottenuti da un cristallo perfetto (per insieme, dipende quindi sia dalla densita© delle particelle
esempio dati di diffrazione ai raggi X) e la massa mole- della polvere che dalla disposizione spaziale delle parti-
colare della sostanza. celle nel letto di polvere.

76
 Spettrometria di massa

inoizircserP
La densita© di insieme di una polvere e© spesso molto dif- introduzione liquida diretta, il campione e© posto sulla

ilareneG
ficile da misurare in quanto il piu© piccolo disturbo del estremita© di una barretta cilindrica (in un crogiolo di
letto di polvere puo© dar luogo ad una nuova densita© . quarzo, su un filamento o su una superficie metallica).
Cos|© che nel riportare la densita© di insieme e© essenziale La barretta e© introdotta nello spettrometro mediante
specificare come e© stata fatta la determinazione. un sistema che consente di mantenere un vuoto prima-
rio intermedio tra la pressione atmosferica e il vuoto

isilanA id
idoteM
A. La densita© di insieme (bulk density) e© determinata secondario dell'apparecchiatura.
misurando in un cilindro graduato (2.9.15) il volume
di una massa nota di polvere, sottoposta precedente- Altri sistemi di introduzione del campione permettono
mente a setacciatura. di analizzare i componenti di una miscela man mano
che essi vengono separati da un appropriato apparec-

irotinetnoC
B. La densita© da compressione (tapped density) e© otte-

/ ilairetaM
nuta mediante impaccamento meccanico di un cam- chio connesso allo spettrometro di massa.
pione di polvere contenuto in un cilindro. Dopo l'os- . L'uso di
servazione del volume iniziale, il cilindro e© battuto Gas cromatografia/spettrometria di massa

adatte colonne (capillari o semi-capillari) permette

meccanicamente (2.9.15) e le letture del volume ven- all'estremita© della colonna di venire introdotta diretta-
gono effettuate fino a che non si osserva piu© un'ulte- mente nella sorgente dell'apparecchiatura senza l'uso

ivittaeR
riore variazione del volume (2.9.15). di un separatore.
Cromatografia liquida/spettrometria di massa . Questa
combinazione e© particolarmente utile per le analisi di
2.2.43. SPETTROMETRIA DI MASSA

La spettrometria di massa e© basata sulla misurazione composti polari, che sono insufficientemente volatili o

itnemogrA
ilareneG
diretta del rapporto tra la massa e il numero di cariche troppo labili al calore per poter essere analizzati
elementari (m/z) positive o negative degli ioni in fase mediante gas cromatografia accoppiata con la spettro-
gassosa derivanti dalla sostanza da analizzare. Questo metria di massa. Questo metodo e© reso complicato
rapporto e© espresso in unita© di massa atomica dalla difficolta© di ottenere ioni in fase gassosa da una
(1 u.m.a. = un dodicesimo della massa del 12C) o in dal- fase liquida, il che richiede interfacce altamente specifi-

eifargonoM

ilareneG
ton (1 Da = massa dell'atomo di idrogeno). che quali:
Gli ioni, prodotti nella sorgente ionica dell'apparecchia- ^ introduzione diretta del liquido: la fase mobile e©
tura, sono accelerati e poi separati mediante l'analizza- nebulizzata e il solvente e© evaporato prima della
tore prima di raggiungere il rivelatore. Tutte queste ope- sorgente ionica dell'apparecchiatura,

ehcituecamraF
razioni hanno luogo in una camera dove un sistema di

emroF
pompaggio mantiene un livello di vuoto compreso tra ^ interfaccia a fascio di particelle: la fase mobile, che
10-3 e 10-6 Pa. puo© scorrere ad una velocita© di flusso di circa
Lo spettro risultante mostra l'abbondanza relativa delle 0,6 ml/min, e© nebulizzata in una camera di desolva-
varie specie ioniche presenti in funzione di m/z. Il tazione in modo che solo gli analiti, in forma neu-
segnale corrispondente ad uno ione sara© rappresentato tra, raggiungano la sorgente ionica dello strumento;

eiretaM

emirP
da molti picchi corrispondenti alla distribuzione stati- questa tecnica e© usata per i composti di polarita©
stica dei vari isotopi di quello ione. L'insieme dei picchi relativamente bassa con masse molecolari minori
e© chiamato profilo isotopico e (almeno per le molecole di 1000 Da,
piccole) il picco rappresentante l'isotopo piu© abbon-
^ interfaccia con nastro di trascinamento: la fase
ehcituecamraF

dante per ciascun atomo e© detto picco monoisotopico.

inoizaraperP

ehcificepS

L'informazione ottenuta nella spettrometria di massa e© mobile, che puo© fluire ad una velocita© fino a
essenzialmente qualitativa (determinazione della massa 1 ml/min, e© depositata sulla superficie di un nastro
molecolare, informazione sulla struttura dai frammenti mobile; dopo l'evaporazione del solvente, i compo-
osservati) o quantitativa, usando standard interni o nenti da analizzare sono portati in successione alla
sorgente ionica dell'apparecchio dove vengono
ehcitapoemO
inoizaraperP

esterni, con limiti di rilevabilita© che vanno dalla pico- ionizzati; questa tecnica e© poco adatta per composti
mole alla femtomole. molto polari o labili al calore.
INTRODUZIONE DEL CAMPIONE Altri tipi di accoppiamento (``electrospray'', ``thermo-
spray'', ionizzazione chimica a pressione atmosferica)
Il primo passo di un'analisi e© l'introduzione del cam- sono considerati vere e proprie tecniche di ionizzazione
ecidnI

pione nell'apparecchiatura senza arrecare troppo e vengono descritti nella sezione sui modi di ionizza-
disturbo al vuoto. Con un metodo comune, chiamato zione.

77
Spettrometria di massa

Cromatografia con fluidi supercritici/spettrometria di (pochi microlitri al minuto). Queste tecniche di ionizza-
massa . La fase mobile, costituita usualmente da ani- zione permettono anche di analizzare lastre di cromato-
dride carbonica in fase supercritica, passa in fase gas- grafia su strato sottile, applicando uno strato sottile di
sosa dopo aver attraversato un restrittore scaldato matrice alla superficie di queste lastre.
posto tra la colonna e la sorgente ionica.
. L'eluente
Ionizzazione per desorbimento di campo e ionizzazione
Elettroforesi capillare/spettrometria di massa . Il campione e© vaporizzato vicino ad un fila-
e© introdotto nella sorgente ionica, in alcuni casi dopo
di campo

mento di tungsteno coperto con microaghi (ionizza-

l'aggiunta di un altro solvente in modo da ottenere una zione di campo) o depositato su questo filamento (desor-
velocita© di flusso dell'ordine di alcuni microlitri al bimento di campo). Un voltaggio di circa 10 kV, appli-
minuto. Questa tecnica e© limitata dalle piccole quantita© cato tra questo filamento e un controelettrodo, ionizza
di campione introdotto e dalla necessita© di usare tam- il campione. Queste due +.tecniche producono essenzial-
poni volatili. mente ioni molecolari M e (M + H)+ e sono usati per
composti a bassa polarita© e/o labili al calore.
MODI DI IONIZZAZIONE Ionizzazione per desorbimento mediante laser assistita

Il campione, allo stato gassoso, e©

da matrice (``matrix-assisted laser desorption ionisa-
Impatto elettronico.
. Il campione, in un'adatta matrice e
ionizzato mediante un fascio di elettroni la cui energia
tion'', MALDI)

depositato su un supporto di metallo, e© ionizzato da un

(in genere 70 eV) e© maggiore dell'energia della ionizza- fascio laser a impulsi la cui lunghezza d'onda rientra
zione del campione. Oltre allo ione molecolare M+., si tra l'UV e l'IR (gli impulsi durano da un picosecondo
osservano frammenti caratteristici della struttura mole- a alcuni nanosecondi). Questo modo di ionizzazione
colare. Questa tecnica e© limitata essenzialmente dalla gioca un ruolo essenziale nella analisi di composti a
necessita© di vaporizzare il campione. Cio© la rende ina- grande massa molecolare (piu© di 100000 Da) ma puo©
datta per composti polari, labili al calore o ad alta essere utilizzata solo con analizzatori a tempo di volo
massa molecolare. L'impatto elettronico e© compatibile (vedi sotto).
con l'accoppiamento della gas cromatografia alla spet-
trometria di massa e qualche volta con l'uso della cro- ``Electrospray'' . Questo tipo di ionizzazione e© effettuato
matografia liquida. a pressione atmosferica. I campioni, in soluzione, sono
. Questo tipo di ionizzazione coin- introdotti nella sorgente mediante un tubo capillare, la
Ionizzazione chimica

volge un reattivo gassoso come il metano, l'ammoniaca, cui estremita© ha un potenziale di 5 kV. Per facilitare la
l'ossido di azoto, il diossido d'azoto o l'ossigeno. +Lo nebulizzazione puo© essere usato un gas. La desolvata-
spettro^ e© caratterizzato da ioni del tipo (M+H) o zione delle risultanti microgocce da© luogo, nella fase
(M^H) , o ioni addotti formatisi dall'analita e dal gas gassosa, a ioni con carica unitaria o multipla. La velo-
usato. Si producono meno frammenti rispetto all'im- cita© di flusso varia da pochi microlitri per minuto ad
patto elettronico. Una variante di questa tecnica e© usata 1 ml/min. Questa tecnica e© adatta per i composti polari
quando la sostanza e© labile al calore: il campione, e per l'investigazione di biomolecole con masse moleco-
applicato ad un filamento, e© vaporizzato molto rapida- lari fino a 100000 Da. Puo© essere accoppiata alla cro-
mente mediante l'effetto Joule-Thomson (ionizzazione matografia liquida o all'elettroforesi capillare.
chimica per desorbimento). Ionizzazione chimica a pressione atmosferica (``atmos-

pheric-pressure chemical ionisation'', APCI) . La ioniz-

Ionizzazione mediante bombardamento con atomi veloci
zazione e© effettuata a pressione atmosferica mediante
(``fast atom bombardment'', FAB) o con ioni

.
veloci
l'azione di un elettrodo mantenuto ad un potenziale di
(``liquid secondary-ion mass spectrometry'',

Il campione, disciolto in una matrice viscosa come il

LSIMS)
diversi kilovolts e posto nel cammino della fase mobile,
glicerolo, e© applicato ad una superficie metallica e che e© nebulizzata sia da effetti termici che dall'uso di
ionizzato mediante un fascio di atomi neutri come l'ar- un flusso di azoto. Gli ioni risultanti hanno cariche uni-
+ quando positivi e di tipo
gon o lo xenon o ioni cesio ad alta+ energia cinetica. Si tarie e sono del tipo (M + H)
producono ioni del tipo (M+H) o (M^H)- o ioni (M ^ H)- quando negativi. Le elevate velocita© di flusso
addotti formatisi dalla matrice o dal campione. Questo che possono essere usate con questo tipo di ionizza-
tipo di ionizzazione, adatto per i composti polari e zione (fino a 2 ml/min) rendono questa tecnica ideale
labili al calore, permette l'analisi di masse molecolari per l'accoppiamento alla cromatografia liquida.
fino a 10000 Da. La tecnica puo© essere combinata ``Thermospray'' . Il campione, in una fase mobile costi-
con la cromatografia liquida mediante aggiunta tuita da acqua e modificatori organici e contenente un
dell'1-2 per cento di glicerolo alla fase mobile; comun- elettrolitavolatile(generalmenteacetatodiammonio),
que, le velocita© di flusso devono essere molto basse e© introdotto in forma nebulizzata dopo aver attraver-

78
 Spettrometria di massa

inoizircserP
sato un tubo capillare di metallo a temperatura control- corrispondenti ioni. Per ioni con una sola carica l'inter-

ilareneG
lata. Velocita© di flusso accettabili sono dell'ordine di 1- vallo di massa e© compreso tra 2000 Da e 15000 Da.
2 ml/min. Gli ioni dell'elettrolita ionizzano i composti Alcuni ioni possono decomporsi spontaneamente (tran-
da analizzare. Questo processo di ionizzazione puo© sizioni metastabili) o a causa di collisioni con un gas
essere sostituito o rafforzato da una scarica elet- (dissociazione attivata da collisione (CDA)) in regioni
trica di circa 800 volts, specialmente quando i solventi libere da campo tra la sorgente ionica e il rivelatore.

isilanA id
idoteM
sono interamente organici. Questa tecnica e© compati- L'esame di queste decomposizioni e© molto utile per la
bile con l'uso di cromatografia liquida accoppiata con determinazione di strutture e la caratterizzazione di
la spettrometria di massa. specifici composti in miscele e coinvolge la spettrome-
tria di massa in tandem. Esistono molte di queste tecni-

irotinetnoC
che in funzione della regione in cui si verifica la decom-

/ ilairetaM
ANALIZZATORI posizione:
Differenze nella performance degli analizzatori dipen- ^ modo dello ione figlio (determinazione degli ioni
dono principalmente da due parametri: di decomposizione di un dato ione genitore):
^ l'intervallo nel quale i rapporti m/z possono essere B/E = costante, MIKES (``mass-analysed ion kinetic
misurati, detto intervallo di massa, energy spectroscopy'', Spettroscopia dell'energia cine-

ivittaeR
^ il loro potere di separazione, caratterizzato dalla tica degli ioni mediante analisi di massa),
capacita© di separare due ioni di uguali intensita© con ^ modo dello ione genitore (determinazione di tutti gli
rapporti m/z che differiscono di M e la cui sovrap-
D
ioni che mediante decomposizione danno uno ione
posizione e© espressa come una data percentuale con uno specifico rapporto m/z): B /E = costante,
2

itnemogrA
della definizione di valle; per es. un potere di sepa-

ilareneG
razione (M/ M) di 1000 con una definizione di valle
D ^ modo della perdita di un frammento neutro (neutral-
del 10 per cento consente la separazione di rapporti loss mode, rilevamento di tutti gli ioni che perdono
m/z di 1000 e 1001 con un valore dell'intensita© del lo stesso frammento):
segnale che ritorna al 10 per cento sopra la linea di B/E (1-E/E0)ÃÙÄ costante, dove E0 e© il voltaggio di base

eifargonoM
base. Comunque, il potere di separazione in alcuni del settore elettrico.

ilareneG
casi (analizzatori a tempo di volo, quadrupoli, ana-
lizzatori a trappola ionica) puo© essere definito come Quadrupoli . L'analizzatore e© costituito da quattro barre
il rapporto tra la massa molecolare e l'ampiezza del metalliche parallele che hanno una sezione cilindrica o
picco a meta© altezza (50 per cento della definizione iperbolica. Esse sono disposte simmetricamente

ehcituecamraF
di valle). rispetto alla traiettoria degli ioni; le coppie diagonal-
mente opposte all'asse di simmetria delle barre sono

emroF
. Gli ioni pro-
collegate elettricamente. I potenziali alle due coppie di
Analizzatori magnetici ed elettrostatici

dotti nella sorgente ionica sono accelerati mediante un

voltaggio V e focalizzati verso un analizzatore magne- barre sono opposti. Essi sono la risultante di una com-
tico (campo magnetico B) o un analizzatore elettrosta- ponente costante e di una componente alternata. Gli
tico (campo elettrostatico E) a seconda della configura- ioni prodotti nella sorgente di ioni sono trasmessi e
separati variando i voltaggi applicati alle barre in modo
eiretaM
zione dello strumento. Essi seguono una traiettoria di

emirP
raggio r secondo la legge di Laplace: che il rapporto tra il voltaggio continuo e il voltaggio
alternato rimanga costante. I quadrupoli hanno gene-
m=z B2Vr
22 ralmente un intervallo di massa tra 1 u.a.m. e
2000 u.a.m. ma alcuni possono raggiungere anche le
ehcituecamraF

ˆ
inoizaraperP

ehcificepS

4000 u.a.m. Sebbene essi abbiano un potere risolutivo

Possono essere usati due tipi di scansione per racco- inferiore a quello degli analizzatori con settore magne-
gliere e misurare i vari ioni prodotti dalla sorgente di tico, consentono tuttavia di ottenere il profilo monoiso-
ioni: una scansione di B mantenendo V fisso o una topico di ioni a carica singola per l'intero intervallo di
scansione di V con B costante. L'analizzatore magne- massa. E' possibile ottenere spettri usando tre quadru-
ehcitapoemO
inoizaraperP

tico e© generalmente seguito da un settore elettrico che poli disposti in serie Q1, Q2, Q3 (Q2 serve come cella di
agisce come un filtro ad energia cinetica e consente di collisione e non e© un analizzatore in senso proprio; il
aumentare in modo apprezzabile il potere di risoluzione gas di collisione piu© comunemente usato e© l'argon).
dello strumento. Il potere di risoluzione massimo di un I tipi di scansione piu© comuni sono i seguenti:
tale strumento (doppio settore) e© compreso tra 10000 e
150000 e nella maggior parte dei casi permette di calco- ^ modo dello ione figlio: Q1 seleziona uno ione m/z i
ecidnI

lare il valore del rapporto m/z con una accuratezza suf- cui frammenti ottenuti per collisione in Q2 sono
ficiente a determinare la composizione elementare dei analizzati da Q3,

79
Spettrometria di massa

^ modo dello ione genitore: Q3 filtra solo uno specifico presenta l'intensita© relativa delle differenti specie ioni-
rapporto m/z, mentre Q1 scansiona un dato inter- che presenti come funzione di m/z. I risultati sono
vallo di massa. Sono rivelati solo gli ioni che si essenzialmente qualitativi. Per una piu© rapida identifi-
decompongono per dare lo ione selezionato cazione e© possibile utilizzare collezioni di spettri di rife-
da Q3, rimento.
^ modo della perdita di un frammento neutro: Q1 e Q3 Modo frammentometrico (rilevamento di ioni selezio-

scansionano un certo intervallo di massa ma ad un nati). Il segnale acquisito e© limitato ad uno (rilevamento
``offset'' corrispondente alla perdita di un fram- di un singolo ione (``single ion monitoring'', SIM)) o ad
mento caratteristico di un prodotto o di una fami- alcuni (rilevamento di piu© ioni (``multiple ion monito-
glia di composti. ring'', MIM)) ioni caratteristici della sostanza da ana-
E' anche possibile ottenere degli spettri combinando lizzare. Il limite di rivelazione di questo modo puo©
analizzatori a quadrupolo con strumenti aventi un set- essere considerevolmente abbassato. Usando standard
tore magnetico o elettrostatico; questi strumenti sono esterni o interni (per es., standard deuterati) si possono
chiamati spettrometri di massa ibridi. effettuare saggi quantitativi o semiquantitativi. Questi
. Il principio e© lo stesso di saggi non possono essere effettuati con analizzatori a
tempo di volo.
Analizzatori a trappola di ioni

quello di un quadrupolo, questa volta con i campi elet-

trici in tre dimensioni. Questo tipo di analizzatore con- Modo frammentometrico con doppia spettrometria di

sente di otteneren spettri di prodotto-ione su diverse massa (rilevamento con reazione multipla (``multiple

generazioni (MS ). reaction monitoring'', MRM)) . Viene seguita la decom-

. Gli ioni pro- posizione unimolecolare o bimolecolare di un certo pre-
cursore ionico caratteristico della sostanza da analiz-
Analizzatori a risonanza ione-ciclotrone

dotti in una cella e soggetti a un intenso campo magne-

tico uniforme si muovono in orbite circolari a frequenze zare. La selettivita© e la natura altamente specifica di
che possono essere correlate direttamente al loro rap- questo modo di acquisizione fornisce eccellenti livelli
porto m/z applicando l'algoritmo della trasformata di di sensibilita© e lo rende il piu© appropriato per studi
Fourier. Questo fenomeno e© chiamato risonanza ione- quantitativi con l'impiego di standard interni adeguati
ciclotrone. Gli analizzatori di questo tipo sono costi- (per es., standard deuterati). Questo tipo di analisi puo©
tuiti da magneti superconduttori e sono capaci di un essere effettuata solo con apparati costituiti da tre qua-
altissimo potere risolutivo (fino a 1000000 e piu© ) cos|© drupoli in serie, analizzatori a trappola ionica o analiz-
come di spettri MSn. Tuttavia sono richieste pressioni zatori a risonanza ciclotronica.
bassissime (dell'ordine di 10-7 Pa).
Analizzatori a tempo di . Gli ioni prodotti alla
volo
CALIBRAZIONE
sorgente ionica sono accelerati ad un voltaggio V di
10-20 kV. Essi passano attraverso l'analizzatore, costi- La calibrazione permette l'attribuzione al segnale rile-
tuito da un tubo privo di campo lungo da 25 cm a vato del corrispondente valore m/z. In linea generale
1,5 m, generalmente detto tubo di volo. Il tempo (t) per questo si effettua usando una sostanza di riferimento.
uno ione per raggiungere il rivelatore e© proporzionale Questa calibrazione puo© essere esterna (``file'' di acqui-
alla radice quadrata del rapporto m/z. Teoricamente sizione separati dall'analisi) o interna (la/e sostanza/e
l'intervallo di massa di questo analizzatore e© infinito. di riferimento e© /sono mescolata(e) con la sostanza in
In pratica e© limitato dal metodo di ionizzazione o di esame e compare nello stesso ``file'' di acquisizione). Il
desorbimento. Gli analizzatori a tempo di volo sono numero di ioni o di punti richiesto per una adeguata
principalmente usati per composti ad alta massa mole- calibrazione dipende dal tipo di analizzatore e dall'ac-
colare (fino a diverse centinaia di migliaia di Dalton). curatezza desiderata per la determinazione, per es., nel
Questa tecnica e© sensibilissima (sono sufficienti poche caso di un analizzatore magnetico, in cui il rapporto
picomoli di prodotto). L'accuratezza delle determina- m/z varia in modo esponenziale con il valore del campo
zioni e il potere risolutivo di questi strumenti possono magnetico, dovrebbero esserci piu© punti possibili.
essere aumentati considerevolmente usando uno spec-
chio elettrostatico (reflectron). RILEVAMENTO DEL SEGNALE ED ELABO-
RAZIONE DEI DATI
ACQUISIZIONE DEL SEGNALE Gli ioni separati dall'analizzatore sono convertiti in
Esistono essenzialmente tre modi possibili. segnali elettrici da un sistema di rilevamento come un
Modo dello spettro completo . Si registra l'intero segnale fotomoltiplicatore o moltiplicatore elettronico. Questi
ottenuto per l'intervallo di massa scelto. Lo spettro rap- segnali sono amplificati prima di essere riconvertiti in

80
 Carbonio organico totale nell'acqua per uso farmaceutico

inoizircserP
segnali digitali per l'elaborazione dei dati, permettendo ad intervalli appropriati come descritto di seguito. L'ap-

ilareneG
diverse funzioni quali calibrazione, ricostruzione di parecchio deve avere un limite di rivelazione, specifi-
spettri, quantificazione automatica, archiviazione, cato dal produttore, inferiore o uguale a 0,05 mg di car-
creazione o uso di collezioni di spettri di massa. I bonio per litro.
diversi parametri fisici richiesti per il funzionamento Acqua per la determinazione del carbonio organico totale.

isilanA id
dell'apparato in toto sono gestiti da un elaboratore. Usare acqua altamente purificata che soddisfa alle spe-

idoteM
cifiche seguenti:
2.2.44. CARBONIO ORGANICO TOTALE NEL- ^ conduttivita© : non superiore a 1,0 S cm-1 a 25 ‘C,
l 1

^ carbonio organico totale: non superiore a 0,1 mg/l.

L'ACQUA PER USO FARMACEUTICO

irotinetnoC
/ ilairetaM
La determinazione del carbonio organico totale (TOC) A seconda del tipo di apparecchio usato il contenuto di
e© una misura indiretta delle sostanze organiche presenti metalli pesanti e di rame puo© essere critico. E' necessa-
nell'acqua per uso farmaceutico. La determinazione rio seguire le istruzioni del produttore.
del carbonio organico totale puo© anche essere usata Preparazione della vetreria. Usare vetreria che e© stata
per controllare la esecuzione di diverse operazioni nella scrupolosamente lavata con un metodo che rimuove il

ivittaeR
preparazione dei medicinali. materiale organico. Per il lavaggio finale della vetreria
E' disponibile una varieta© di metodi accettabili per la usare acqua per la determinazione del carbonio organico
determinazione del carbonio organico totale. Questo totale.
capitolo generale, piuttosto che prescrivere un dato Soluzione standard. Disciogliere il saccarosio R, essic-

itnemogrA
metodo da utilizzare, descrive le procedure usate per

ilareneG
cato a 105 ‘C per 3 h, in acqua per la determinazione
qualificare il metodo scelto e per l'interpretazione dei del carbonio organico totale in modo da ottenere una
risultati nei saggi limite. Una soluzione standard viene soluzione contenente 1,19 mg di saccarosio per litro
analizzata ad intervalli appropriati a seconda della fre- (0,50 mg di carbonio per litro).
quenza delle determinazioni; la soluzione e© preparata Soluzione in esame. Raccogliere l'acqua in esame in un

eifargonoM
con una sostanza che si presuppone sia facilmente ossi-

ilareneG
dabile (per es. saccarosio) ad una concentrazione aggiu- recipiente ermeticamente chiuso lasciando il minimo
stata in modo da dare una risposta strumentale corri- spazio vuoto ed usando tutte le precauzioni per evitare
spondente al limite del carbonio organico totale che la contaminazione. Esaminare l'acqua nel piu© breve
deve essere misurato. L'idoneita© del sistema viene deter- tempo possibile per ridurre la contaminazione dovuta

ehcituecamraF
al recipiente e alla sua chiusura.
minata mediante l'analisi di una soluzione preparata

emroF
con una sostanza che si presume si ossidi con difficolta© Soluzione per la verifica dell'idoneita© del sistema. Discio-
(per es. 1,4-benzochinone). gliere 1,4-benzochinone R in acqua per la determinazione
del carbonio organico totale in modo da ottenere una
I vari tipi di apparecchi usati per misurare il carbonio soluzione avente una concentrazione di 0,75 mg di
organico totale nell'acqua per uso farmaceutico hanno 1,4-benzochinone per litro (0,50 mg di carbonio per

eiretaM
in comune l'obiettivo di ossidare completamente le

emirP
litro).
molecole organiche nel campione di acqua per produrre Acqua per la determinazione del carbonio organico totale
carbonio diossido seguito dalla determinazione del car- di controllo. Usare acqua per la determinazione del car-
bonio diossido prodotto; il risultato e© usato per calco- bonio organico totale ottenuta nello stesso modo di
ehcituecamraF

lare la concentrazione del carbonio nell'acqua.

inoizaraperP

ehcificepS

quella usata per preparare la soluzione standard e la

L'apparecchio usato deve discriminare tra il carbonio soluzione per l'idoneita© del sistema.
organico e il carbonio inorganico, quest'ultimo pre- Soluzioni di controllo. Oltre all'acqua per la determina-
sente come carbonato. La misura puo© essere effettuata zione del carbonio organico totale di controllo preparare
misurando il carbonio inorganico e sottraendo il valore
ehcitapoemO

appropriate soluzioni di bianco o altre soluzioni neces-

inoizaraperP

trovato dal carbonio totale oppure rimuovendo il car- sarie per stabilire la linea di base o per l'aggiustamento
bonio inorganico dal campione prima dell'ossidazione. della calibrazione seguendo le istruzioni del produttore;
La rimozione puo© anche coinvolgere molecole organi- far correre i bianchi appropriati per azzerare lo stru-
che, ma questo carbonio organico e© presente in quan- mento.
tita© trascurabili nell'acqua per uso farmaceutico. Idoneita© del sistema. Esaminare le seguenti soluzioni e
ecidnI

Apparecchio. Usare uno strumento calibrato installato registrare le risposte: acqua per la determinazione del
in linea o fuori linea. Verificare l'idoneita© del sistema carbonio organico totale (rw); soluzione standard (rs);

81
Cromatografia a fluido supercritico

soluzione per la verifica dell'idoneita© del sistema (rss). I sistemi controllati da un microprocessore devono
Calcolare l'efficienza della risposta, come percentuale, essere in grado di far muovere la fase mobile sia in con-
usando l'espressione: dizioni costanti che variabili secondo un programma
rss rw 100
ÿ definito. Nel caso di eluizione in gradiente sono dispo-
rs rw 2
nibili sistemi di pompaggio che prelevano solvente(i)
da piu© contenitori; la miscelazione dei solventi puo©
ÿ

Il sistema e© idoneo se l'efficienza della risposta non e© essere effettuata sia prima (bassa pressione) che dopo
inferiore all'85 per cento e non e© superiore al 115 per (alta pressione) della(e) pompa(e).
cento della risposta teorica.
Procedura. Far correre la soluzione in esame e regi- Iniettori

strare la risposta (ru). La soluzione in esame soddisfa L'introduzione del campione puo© essere effettuata
al saggio se ru non e© superiore a rs ^ rw. direttamente in testa alla colonna per mezzo di una val-
Il metodo puo© anche essere applicato usando una stru- vola.
mentazione in linea che e© stata adeguatamente cali-
brata e che dimostra di avere un'idoneita© del sistema Fasi stazionarie

accettabile. La posizione della strumentazione deve

essere scelta in modo da assicurare che le risposte siano Le fasi stazionarie sono contenute in colonne dello
rappresentative dell'acqua usata. stesso tipo di quelle descritte nei capitoli Cromatografia
liquida (2.2.29) (colonne impaccate) e Gas cromatogra-
fia (2.2.28) (colonne capillari). Una colonna capillare
ha un diametro interno massimo di100 m:
2.2.45. CROMATOGRAFIA A FLUIDO SUPERCRI-

TICO † l

La cromatografia a fluido supercritico (SFC) e© un Fasi mobili

metodo di separazione cromatografica nel quale la fase

mobile e© un fluido in una fase supercritica o subcritica. Generalmente la fase mobile e© costituita da diossido di
La fase stazionaria, contenuta in una colonna, puo© carbonio (anidride carbonica) che puo© contenere un
essere costituita da particelle solide finemente suddi- modificatore polare come metanolo, 2-propanolo o
vise, come silice o grafite porosa, o essere una fase chi- acetonitrile. La composizione, la pressione (densita© ), la
micamente modificata, come quella usata in cromato- temperatura e la velocita© di flusso della fase mobile pre-
grafia liquida, o, per le colonne capillari, puo© essere un scritta possono essere costanti per l'intera procedura
film liquido reticolato uniformemente distribuito sulle cromatografica (eluizione isocratica, isobara, isoter-
pareti della colonna. mica) o possono variare secondo un programma defi-
La cromatografia a fluido supercritico e© basata su mec- nito (gradiente di eluizione del modificatore, della pres-
canismi di adsorbimento o di distribuzione di massa. flusso).(densita© ), della temperatura o della velocita© di
sione

APPARECCHIATURA Rivelatori

L'apparecchiatura e© generalmente costituito da: un I rivelatori piu© comunemente usati sono gli spettrofoto-
sistema di pompaggio raffreddato, un iniettore, una metri nell'ultravioletto/visibile (UV/Vis) e rivelatori a
colonna cromatografica contenuta in un forno, un rive- ionizzazione di fiamma. Possono essere usati rivelatori
latore, un regolatore di pressione ed un dispositivo per a diffusione della luce, spettrofotometri di assorbi-
l'acquisizione di dati (un integratore o un registratore mento nell'infrarosso, rivelatori a conduttivita© termica
a carta). ed altri rivelatori particolari.

METODO
Sistema di pompaggio

I sistemi di pompaggio debbono imprimere alla fase

mobile una velocita© di flusso costante. Debbono essere Preparare la(le) soluzione(i) in esame e la(le) soluzio-
minimizzate le fluttuazioni di pressione, per es., ne(i) di riferimento come prescritto. Le soluzioni
facendo passare il solvente pressurizzato attraverso un devono essere esenti da particelle solide.
dispositivo a smorzamento di impulsi. Le tubature e le I criteri per la valutazione dell'idoneita© del sistema
connessioni devono essere in grado di resistere alle sono descritti nel capitolo Tecniche di separazione cro-
pressioni sviluppate dal sistema di pompaggio. matografica (2.2.46). In questo capitolo sono anche

82
 Tecniche di separazione cromatografica

inoizircserP
riportati i limiti entro i quali e© possibile far variare i DATI DI RITENZIONE

ilareneG
diversi parametri e soddisfare egualmente ai criteri del- Tempo di ritenzione e volume di ritenzione
l'idoneita© del sistema. In cromatografia di eluizione le misure di ritenzione
possono essere riportate come tempo di ritenzione (tR),
direttamente definito dalla posizione del massimo del

isilanA id
2.2.46. TECNICHE DI SEPARAZIONE CROMATO-

picco nel cromatogramma. Dal tempo di ritenzione

idoteM
GRAFICA

puo© essere calcolato il volume di ritenzione (VR).

Le tecniche di separazione cromatografica sono metodi VR t R v
di separazione sequenziali basati sulla distribuzione ˆ

dei componenti di un campione tra due fasi, una stazio- tR = tempo di ritenzione o distanza lungo la linea di

irotinetnoC
/ ilairetaM
naria e l'altra mobile. La fase stazionaria puo© essere base dal punto di iniezione alla perpendicolare
un solido o un liquido depositato su un supporto solido tracciata dal massimo del picco corrispondente
o un gel; essa puo© essere impaccata in una colonna, al componente considerato,
distribuita a formare uno strato o depositata come un v = velocita© di flusso della fase mobile.
film ecc. La fase mobile puo© essere gassosa, liquida o
un fluido supercritico. La separazione puo© essere

ivittaeR
Rapporto di distribuzione di massa

basata su fenomeni quali l'adsorbimento, la distribu- Il rapporto di distribuzione di massa (Dm) (detto anche
zione di massa (ripartizione), lo scambio ionico, ecc. o fattore di capacita© k' o fattore di ritenzione k) e© definito
su differenze di proprieta© fisico-chimiche delle molecole come:
come la massa, il volume, le dimensioni ecc. quantita di soluto nella fase stazionaria VS
Questo capitolo contiene le definizioni ed i metodi di Dm quantita di soluto nella fase mobile KC VM

itnemogrA
ilareneG
ˆ ˆ

calcolo dei parametri comuni a queste tecniche ed i

requisiti applicabili in modo generale per l'idoneita© del kC = coefficiente
anche come
di distribuzione all'equilibrio (noto
costante di distribuzione),
sistema. I principi di separazione, le apparecchiature
ed i metodi sono riportati nei seguenti metodi generali: S V = volume della fase stazionaria,
VM = volume della fase mobile.

eifargonoM
Cromatografia su carta (2.2.26)

ilareneG
Cromatografia su strato sottile (2.2.27) Il rapporto di distribuzione di massa di un componente
Gas cromatografia (2.2.28) puo© essere determinato dal cromatogramma usando l'e-
spressione:
Cromatografia liquida (2.2.29)
Dm tRt tM

ehcituecamraF
ÿ

Cromatografia di esclusione (2.2.30) ˆ

emroF
M
Cromatografia a fluido supercritico (2.2.45)
tR = tempo (o volume) di ritenzione o distanza lungo
la linea di base dal punto di iniezione alla per-
DEFINIZIONI pendicolare tracciata dal massimo del picco cor-
rispondente al componente considerato,

eiretaM
Le definizioni seguenti sono state usate per calcolare i tM = tempo (o volume) di ritardo: tempo (o volume)

emirP
limiti riportati nelle monografie. o distanza lungo la linea di base dal punto di
Con alcuni strumenti certi parametri, come il rapporto iniezione alla perpendicolare tracciata dal mas-
segnale-rumore, possono essere calcolati mediante un simo del picco corrispondente ad un componente
ehcituecamraF

algoritmo fornito dal produttore. Eé responsabilita© dell'uti- non trattenuto.

inoizaraperP

ehcificepS

lizzatore assicurare che i metodi di calcolo usati nel soft-

ware siano compatibili con i requisiti della Farmacopea. Coefficiente di distribuzione

Se questo non si verifica, devono essere apportate le cor- Nella cromatografia di esclusione le caratteristiche di
rezioni necessarie. eluizione di un componente in una particolare colonna
possono essere descritte dal coefficiente di distribu-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Cromatogramma
zione (KO), che e© calcolato mediante l'espressione:
Un cromatogramma e© un grafico o un'altra rappresen-
tazione della risposta del rivelatore, della concentra- KO ttR t tO
ˆ
ÿ

t O
zione dell'eluato o un'altra quantita© usata come misura
ÿ

della concentrazione dell'eluato, rispetto al tempo, al tR = tempo (o volume) di ritenzione o distanza lungo
volume o alla distanza. I cromatogrammi ideali sono la linea di base dal punto di iniezione alla perpen-
ecidnI

rappresentati da una sequenza di picchi gaussiani su dicolare tracciata dal massimo del picco corri-
una linea di base. spondente al componente considerato,

83
Tecniche di separazione cromatografica

tO = tempo (o volume) di ritardo o distanza lungo la Fattore di simmetria

linea di base dal punto di iniezione alla perpendi- Il fattore di simmetria (As) (o fattore di scodamento) di
colare tracciata dal massimo del picco corrispon- un picco (Figura 2.2.46.-2) e© calcolato mediante l'e-
dente ad un componente non trattenuto, spressione:
tt = tempo (o volume) di ritenzione o distanza lungo
la linea di base dal punto di iniezione alla perpen- As w2d0;05
ˆ

dicolare tracciata dal massimo del picco corri-

spondente ad un componente che puo© entrare w0,05 = larghezza del picco ad un ventesimo della sua
all'interno di tutti i pori della fase stazionaria. altezza,
d = distanza tra la perpendicolare tracciata dal
Fattore di ritardo massimo del picco e il punto di inizio del picco
ad un ventesimo della sua altezza.
In cromatografia planare il fattore di ritardo RF (anche Un valore pari ad 1,0 indica la completa (ideale) simme-
noto come fattore di ritenzione Rf) e© il rapporto tra la tria.
distanza dal punto di applicazione al centro della mac-
chia e la distanza percorsa dal fronte del solvente a par-
tire dal punto di applicazione:

RF ab
b = distanza di migrazione dell'analita,
a = distanza di migrazione del fronte del solvente.

DATI CROMATOGRAFICI
Il picco puo© essere definito dall'area del picco (A) o dal-
l'altezza del picco (h) e la larghezza del picco a meta©
altezza (wh) o l'altezza del picco (h) e la larghezza del Figura 2.2.46.-2.
picco tra i punti di flesso (wi). Nel caso di picchi gaus-
siani (Figura 2.2.46.-1) vale la relazione: Efficienza di una colonna e numero apparente di piatti

wh 1; 18 wi
ˆ
teorici

L'efficienza di una colonna (efficienza apparente) puo©

essere calcolata dai dati ottenuti in condizioni isoterme,
isocratiche o di isodensita© , a seconda della tecnica,
come numero apparente di piatti teorici (N) mediante
l'espressione seguente, dove i valori di tR e wh devono
essere espressi nelle stesse unita© di misura (tempo,
volume o distanza).
 2
N 5; 54 wtR
ˆ
h

tR = tempo di ritenzione o distanza (o volume) lungo

la linea di base dal punto di iniezione alla perpen-
dicolare tracciata dal massimo del picco corri-
spondente al componente considerato,
wh = larghezza del picco a meta© altezza.
Il numero apparente di piatti teorici varia con il compo-
Figura 2.2.46.-1 nente, con la colonna e il tempo di ritenzione.

84
 Tecniche di separazione cromatografica

inoizircserP
DATI DI SEPARAZIONE Hv = altezza al di sopra della linea di base estrapolata

ilareneG
in corrispondenza del punto piu© basso della
curva che separa i picchi dovuti all'impurezza e
Risoluzione
all'analita.
La risoluzione (Rs) tra picchi di altezza simile di due
componenti puo© essere calcolata mediante l'espres-

isilanA id
idoteM
sione:
Rs 1; 18
ˆ
w w
tR2 tR1 ÿ †

h1 ‡ h2

irotinetnoC
/ ilairetaM
tR2 > tR1

tR1 e tR2 = tempi di ritenzione o distanze lungo la

linea di base dal punto di iniezione alla
perpendicolare tracciata dai massimi di
due picchi adiacenti,

ivittaeR
wh1 e wh2 = larghezza dei picchi a meta© altezza.
Una risoluzione superiore a 1,5 corrisponde ad una
separazione alla linea di base.

itnemogrA
ilareneG
L'espressione riportata precedentemente non puo©
essere applicata se i picchi sono molto dissimili in
altezza.
In cromatografia planare quantitativa le distanze di

eifargonoM

ilareneG
migrazione sono usate al posto dei tempi di ritenzione
e la risoluzione puo© essere calcolata mediante l'espres-
sione:
RS 1; 18 wa RF2w RF1

ehcituecamraF
ÿ †
ˆ
h1 ‡ h2

emroF
RF1 e RF2 = rapporti tra le distanze dal punto di appli- Figura 2.2.46.-3.
cazione ai centri delle macchie e la
distanza percorsa dal fronte del solvente
a partire dal punto di applicazione (fat- Ritenzione relativa

eiretaM
tore di ritardo), La ritenzione relativa (r) e© una stima calcolata

emirP
mediante l'espressione:
wh1 e wh2 = larghezza dei picchi a meta© altezza,
a = distanza di migrazione del fronte del sol- r ttR2 ttMÿ
ehcituecamraF

ˆ
R1 M
inoizaraperP

vente.
ÿ
ehcificepS

Rapporto picco/valle tR2 = tempo di ritenzione del picco considerato,

Il rapporto picco/valle (p/v) puo© essere impiegato come tR1 = tempo di ritenzione del picco di riferimento
(generalmente il picco corrispondente alla
criterio di idoneita© del sistema in un saggio per le
ehcitapoemO
inoizaraperP

sostanze correlate quando la separazione di un'impu- sostanza in esame),

rezza da un analita e© incompleta (Figura 2.2.46.-3). tM = tempo di ritardo: tempo o distanza lungo la
linea di base dal punto di iniezione alla perpen-
p=v HHp dicolare tracciata dal massimo del picco corri-
spondente ad un componente non trattenuto.
ˆ
v
ecidnI

Hp = altezza, al di sopra della linea di base estrapo- Nella cromatografia planare i fattori di ritardo RF2 e
lata, del picco dovuto all'impurezza, RF1 sono usati in luogo di tR2 e tR1.

85
Tecniche di separazione cromatografica

PRECISIONE DELLA DETERMINAZIONE QUAN- y = media dei valori singoli,

TITATIVA n = numero dei valori singoli.
Rapporto segnale/rumore
La deviazione standard relativa massima permessa
Il rapporto segnale/rumore (S/R) influenza la preci- (DSRmax) e© calcolata, per una serie di iniezioni della
sione della determinazione quantitativa ed e© calcolato soluzione di riferimento in funzione dei limiti di speci-
mediante l'equazione: fica predefiniti, mediante la seguente espressione:
2H 
DSRmax t KB n
p

S=R h ˆ ˆ
90%;n 1
ÿ

H = altezza del picco (Figura 2.2.46.-4) corrispon- K = costante (0,349) ottenuta dall'espressione
dente al componente considerato nel cromato-
gramma ottenuto con la soluzione di riferimento K 0;26 t90 6 5 nella quale 0;26 rappresenta la
ˆ p 2
%;
p p

prescritta, misurata dal massimo del picco alla DSR richiesta dopo 6 iniezioni per B = 1,0,
linea di base estrapolata considerando il segnale B = limite superiore dato nella definizione della
osservato su una distanza pari a venti volte la lar- singola monografia meno il 100 per cento,
ghezza a meta© altezza, assumendo che il limite superiore e© ottenuto
h = intervallo del rumore di fondo in un cromato- tenendo conto della riproducibilita© del
gramma ottenuto dopo l'iniezione o l'applica- metodo,
zione di un bianco, osservato su una distanza pari n = numero di iniezioni ripetute della soluzione
a venti volte la larghezza a meta© altezza del picco di riferimento 3 n 6 ;
  †

nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di t90%,n-1 = t di Student al 90 per cento di probabilita©
riferimento prescritta e, se possibile, disposta sim- (a due code) con n-1 gradi di liberta© .
metricamente intorno alla posizione in cui
dovrebbe essere riscontrato il picco. IDONEITAé DEL SISTEMA
I saggi di idoneita© del sistema fanno parte integrante
del metodo e vengono usati per garantire che le presta-
zioni del sistema cromatografico siano adeguate. I
parametri generalmente utilizzati per valutare la pre-
stazione della colonna sono l'efficienza apparente, il
rapporto di distribuzione di massa, la risoluzione, la
ritenzione relativa ed il fattore di simmetria. I fattori
che possono influenzare il comportamento cromatogra-
fico sono la composizione, la forza ionica, la tempera-
tura ed il pH apparente della fase mobile, la velocita© di
flusso, la lunghezza della colonna, la temperatura, la
pressione, le caratteristiche della fase stazionaria quali
la porosita© , le dimensioni ed il tipo delle particelle, l'a-
rea superficiale specifica e, nel caso di supporti in fase
Figura 2.2.46.-4. inversa, l'entita© delle modifiche chimiche (come modifi-
Ripetibilita© che superficiali finali (end-capping), carica di carbonio,
La ripetibilita© della risposta e© espressa come deviazione ecc.).
standard relativa misurata in percentuale (DSR%) di I diversi componenti della strumentazione impiegata
una serie consecutiva di misure effettuate mediante devono essere qualificati e in grado di ottenere la preci-
iniezioni o applicazioni di una soluzione di riferimento sione richiesta per la realizzazione del saggio o della
ed e© calcolata mediante l'espressione: determinazione considerata.
s I seguenti requisiti devono essere comunque rispettati,
DSR% y 100 P
ÿyi y 2
† salvo diversa indicazione nella monografia.
ˆ
ÿ n 1 ^ Il fattore di simmetria del picco principale deve
essere compreso tra 0,8 e 1,5 salvo indicazione
yi = valori singoli espressi come area del picco, altezza diversa nella monografia. Questo requisito si
del picco, o rapporto tra le aree con il metodo applica generalmente ai saggi ed alle determinazioni
della standardizzazione interna, descritte nelle monografie.

86
 Tecniche di separazione cromatografica

inoizircserP
^ La massima deviazione standard relativa permessa Nel caso di parametri critici gli aggiustamenti che per-

ilareneG
per una serie di iniezioni ripetute della soluzione di mettono di assicurare l'idoneita© del sistema sono chia-
riferimento prescritta, non deve superare i valori ramente definiti nella monografia.
riportati nella tabella 2.2.46.-1. Questo requisito si Si devono evitare gli aggiustamenti multipli che pos-
applica solo alle determinazioni quantitative e non sono avere un effetto cumulativo sull'efficienza del
si applica al saggio delle sostanze correlate.

isilanA id
sistema.

idoteM
^ Il limite di rilevazione del picco (corrispondente ad
un rapporto segnale/rumore di 3) e© inferiore al Cromatografia su strato sottile e cromatografia su carta

limite di esclusione (reporting-threshold) del saggio Composizione della fase mobile: la quantita© del compo-
delle sostanze correlate. nente minore puo© essere variata del 30 per cento in

irotinetnoC
/ ilairetaM
^ Il limite di determinazione quantitativa del picco 6

termini relativi o del 2 per cento in termini assoluti,

(corrispondente ad un rapporto segnale/rumore 6

considerare il valore piu© elevato tra i due. Nessun altro

di 10) e© inferiore o uguale al limite di esclusione componente puo© essere variato per piu© del 10 per cento
(reporting-threshold) del saggio delle sostanze in termini assoluti.
correlate. pHdelcomponenteacquosodellafasemobile: 0; 2 unita©

ivittaeR
6

Tabella 2.2.46.-1. Requisiti di ripetibilita© di pH se non diversamente indicato nella monografia,

o 1; 0 unita© di pH se si esaminano sostanze neutre.
6

Concentrazione dei sali nel tampone componente di una

Numero di iniezioni singole
fase mobile: 10 per cento.
6

itnemogrA
Volume da depositare: diminuzione fino al 20 per cento

ilareneG
3 4 5 6

B (per cento)
Massima deviazione standard relativa permessa del volume prescritto se si usano lastre con particelle
2,0 0,41 0,59 0,73 0,85 aventi dimensioni fini (2-10 m).
l

2,5 0,52 0,74 0,92 1,06 Distanza di migrazione del fronte del solvente: non deve
3,0 0,62 0,89 1,10 1,27 essere inferiore a 50 mm.

eifargonoM

ilareneG
Cromatografia liquida

AGGIUSTAMENTO DELLE CONDIZIONI CROMA- Composizione della fase mobile: la quantita© del compo-
TOGRAFICHE nente minore puo© essere variata del 30 per cento in

ehcituecamraF
6

termini relativi o del 2 per cento in termini assoluti,

Vengono riportati qui di seguito, per informazione, i
6

considerare il valore piu© elevato tra i due. Nessun altro

emroF
limiti entro i quali e© possibile far variare i diversi para- componente puo© essere variato per piu© del 10 per cento
metri di un saggio cromatografico in modo da soddi- in termini assoluti.
sfare ai criteri di idoneita© del sistema senza modificare pHdelcomponenteacquosodellafasemobile: 0; 2 unita©
fondamentalmente il metodo stesso. Le condizioni cro- 6

di pH se non diversamente indicato nella monografia,

matografiche descritte sono state convalidate durante
eiretaM
o unita© di pH 1; 0 quando si esaminano sostanze neu-

emirP
l'elaborazione della monografia. I saggi di idoneita© del tre.
6

sistema sono inclusi per assicurare che venga ottenuta Concentrazione dei sali nel tampone componente di una
la separazione richiesta per un'esecuzione soddisfacente fase mobile: 10 per cento.
del saggio o della determinazione quantitativa. Tutta-
ehcituecamraF

6
inoizaraperP

via, possono essere necessari alcuni aggiustamenti delle Lunghezza d'onda del rivelatore: non sono ammessi
ehcificepS

condizioni cromatografiche affinchë il sistema risponda aggiustamenti.

ai requisiti di conformita© specificati, in quanto le fasi
stazionarie sono descritte in modo generale e sono in Fase stazionaria:
commercio in grande varieta© , con differenze nel loro
ehcitapoemO

^ lunghezza della colonna: 70 per cento,

inoizaraperP

comportamento cromatografico. Con i metodi di cro- 6

matografia liquida in fase inversa, in particolare, non ^ diametro interno della colonna: 25 per cento,
6

sempre gli aggiustamenti dei diversi parametri danno ^ dimensione delle particelle: riduzione massima del 50
luogo ad una cromatografia soddisfacente. In questo per cento, non e© ammesso alcun aumento.
caso, puo© essere necessario cambiare la colonna con
un'altra dello stesso tipo (per es. gel di silice ottadecilsi- Velocita© di flusso: 50 per cento.
6
ecidnI

lilato) avente il comportamento cromatografico deside- Temperatura: 10 per cento, fino ad un massimo di
6

rato ma prodotta da un produttore diverso. 60 ‘C.

87
Tecniche di separazione cromatografica

Volume di iniezione: puo© essere diminuito, purchë la DETERMINAZIONE QUANTITATIVA

rivelazione e la ripetibilita© del picco/picchi da determi- . La concentrazione del
nare siano soddisfacenti. Metodo dello standard esterno

componente(i) da analizzare si determina confrontando

Gradiente di eluizione: la configurazione dell'apparec- la risposta(e) (picco/chi) ottenuta(e) con la soluzione
chiatura usata puo© modificare significativamente la in esame con la risposta(e) (picco/chi) ottenuta(e) con
risoluzione, il tempo di ritenzione e le ritenzioni relative la soluzione di riferimento.
descritte nel metodo. Cio© puo© essere dovuto ad un . Un componente che
eccessivo volume morto (dwell volume) che e© il volume Metodo dello standard interno

viene ben separato dalla sostanza in esame e che non

tra l'estremita© della colonna e il punto nel quale i due reagisce con essa (standard interno) e© aggiunto in quan-
eluenti si incontrano. tita© uguali nella soluzione in esame e nella soluzione di
riferimento. La concentrazione della sostanza in esame
Gas cromatografia si determina confrontando il rapporto tra l'area, o le
altezze, dei picchi dovuti alla sostanza in esame e allo
Fase stazionaria: standard interno nella soluzione in esame, con il rap-
^ lunghezza della colonna: 70 per cento, porto tra le aree, o le altezze, dovuti alla sostanza in
6
esame e allo standard interno nella soluzione di riferi-
^ diametro interno della colonna: 50 per cento,
6 mento.
^ dimensione della particelle: riduzione massima del Procedura di normalizzazione . Il contenuto percentuale
50 per cento, non e© permesso alcun aumento, di uno o piu© componenti della sostanza in esame e© cal-
^ spessore del film: da - 50 per cento a + 100 per cento. colato determinando l'area del picco o dei picchi come
Velocita© di flusso: 50 per cento. una percentuale dell'area totale di tutti i picchi, esclu-
6
dendo quelli dovuti ai solventi o a qualsiasi reattivo
Temperatura: 10 per cento.
6 aggiunto e quelli al di sotto del limite di esclusione.
Volume di iniezione: puo© essere diminuito purchë la Procedura di calibrazione . Determinare la relazione tra
rivelazione e la ripetibilita© siano soddisfacenti. il segnale misurato o quello stimato (y) e la quantita©
(concentrazione, massa, ecc.) della sostanza (x) e calco-
lare la funzione di calibrazione. I risultati analitici sono
calcolati dal segnale misurato o dal segnale stimato del-
Cromatografia a fluido supercritico

Composizione della fase mobile: nel caso di colonne l'analita mediante la funzione inversa.
impaccate, la quantita© del componente minore puo© Per i dosaggi e la determinazione quantitativa dei com-
essere variata del 30 per cento in termini relativi o
6
ponenti possono essere descritti nella monografia il
del 2 per cento in termini assoluti: conside-
6
metodo dello standard esterno, il metodo dello stan-
rare il valore piu© elevato tra i due. Non e© permesso dard interno o la procedura di calibrazione; general-
alcun aggiustamento per un sistema con una colonna mente non si applica la procedura di normalizzazione.
capillare. Nei saggi per le sostanze correlate si applicano general-
Lunghezza d'onda del rivelatore: non e© permesso alcun mente il metodo dello standard esterno con una sola
aggiustamento. soluzione di riferimento o la procedura di normalizza-
zione. Comunque quando, per il confronto, sia con la
Fase stazionaria: procedura di normalizzazione che con il metodo dello
standard esterno, si usa una diluizione della soluzione
^ lunghezza della colonna: 70 per cento,
6 in esame, i risultati relativi alle sostanze correlate sono
^ diametro interno della colonna: 25 per cento simili a quelli della sostanza stessa (fattore di risposta
6

(colonne impaccate), 50 per cento (colonne capil- da 0,8 a 1,2); in caso contrario il testo include i fattori
lari),
6
di correzione, valori reciproci dei fattori di
^ dimensione delle particelle: riduzione massima del 50 risposta.
per cento, non e© ammesso alcun aumento (colonne Il fattore di risposta e© una grandezza relativa, definito
impaccate). come il rapporto tra la risposta di una sostanza e quella
di un'altra aventi massa uguale e nelle condizioni
Velocita© di flusso: 50 per cento.
6
descritte nel testo.
Temperatura: 10 per cento.
6
Quando il saggio delle sostanze correlate prescrive la
Volume di iniezione: puo© essere diminuito purchë la somma delle impurezze o la determinazione quantita-
rivelazione e la ripetibilita© siano soddisfacenti. tiva di una impurezza, e© importante scegliere un appro-

88
 Elettroforesi capillare

inoizircserP
priato parametro soglia e appropriate condizioni per

ilareneG
  
l'integrazione delle aree dei picchi. In questi saggi il veo eo E ˆ
" V
limite di esclusione e cioe© l'area al di sotto della quale i
ˆ
 L
picchi non sono presi in considerazione, e© generalmente
dello 0,05 per cento. Quindi il limite soglia di un " = costante dielettrica del tampone,
sistema di raccolta dei dati corrisponde, al massimo, a = potenziale zeta della superficie del capillare.

isilanA id
idoteM
f

meta© del limite di esclusione. L'integrazione dell'area La mobilita© elettroforetica e la mobilita© elettro-osmo-
dei picchi delle impurezze che non sono completamente tica dell'analita possono agire nella stessa direzione in
separate dal picco principale, viene effettuata, preferi- direzioni opposte a seconda della carica (positiva o
bilmente, mediante estrapolazione da ûvalle a valleý negativa) del soluto in modo che la velocita© del soluto

irotinetnoC
(livellamento tangenziale). Anche i picchi dovuti al sol-

/ ilairetaM
vente(i) usato(i) per disciogliere il campione non (v) e© data da:
devono essere presi in considerazione. v vep veo
ˆ 6

Si usa la somma o la differenza tra i due termini a

2.2.47. ELETTROFORESI CAPILLARE
seconda che le mobilita© agiscano nella stessa direzione

ivittaeR
o in direzioni opposte. Nel caso in cui la velocita© elet-
PRINCIPI GENERALI tro-osmotica e© piu© elevata della velocita© elettroforetica
dei soluti, nella stessa corsa, possono essere separati
L'elettroforesi capillare e© un metodo di analisi fisico sia gli elettroliti carichi positivamente che quelli carichi
basato sulla migrazione, all'interno di un capillare e negativamente.

itnemogrA
ilareneG
sotto l'influenza di un campo elettrico a corrente conti- Il tempo (t) necessario al soluto per percorrere la
nua, di analiti carichi disciolti in una soluzione elettro- distanza (l) dall'estremita© di iniezione del capillare al
litica. punto di rivelazione (lunghezza effettiva del capillare)
La velocita© di migrazione di un analita in un campo e© dato dell'espressione:
elettrico di intensita© E e© determinata dalla mobilita© elet-

eifargonoM
t v l v  l L V

ilareneG
troforetica dell'analita e dalla mobilita© elettro-osmotica
2
ˆ ˆ
ep eo ep 6 eo †
del tampone all'interno del capillare. La mobilita© elet- 6

troforetica di un soluto (ep) dipende dalle caratteristi- La maggior parte dei capillari di silice fusa usati in elet-
che del soluto (carica elettrica, dimensioni molecolari e troforesi hanno delle cariche negative sulla parete

ehcituecamraF
forma) e da quelle del tampone nel quale si verifica la interna che producono un flusso elettro-osmotico verso
migrazione (tipo e forza ionica dell'elettrolita, pH,

emroF
viscosita© ed additivi). La velocita© elettroforetica (vep) di il catodo. Il flusso elettro-osmotico deve rimanere
un soluto, assumendo una forma sferica, e© data dall'e- costante da corsa a corsa quando si deve ottenere una
quazione: buona riproducibilita© nella velocita© di migrazione dei
   soluti. In alcune applicazioni, puo© essere necessario
vep epE 6pqr LV ridurre o eliminare il flusso elettro-osmotico modifi-

eiretaM

emirP
ˆ ˆ
cando la parete interna del capillare o cambiando il
pH della soluzione tampone.
q = carica effettiva del soluto, Dopo l'introduzione del campione nel capillare, ogni
 = viscosita© della soluzione elettrolitica, ione analita del campione migra nel mezzo elettrolitico
ehcituecamraF
inoizaraperP

r = raggio di Stoke del soluto, come zona indipendente, in funzione della sua mobilita©
ehcificepS

V = voltaggio applicato, elettroforetica. La zona di dispersione, cioe© la diffu-

L = lunghezza totale del capillare. sione di ciascuna banda di soluto, e© il risultato di diversi
fenomeni. In condizioni ideali il solo contributo all'al-
Quando lungo il capillare, riempito con il tampone, largamento della zona del soluto e© la diffusione moleco-
ehcitapoemO
inoizaraperP

viene applicato un campo elettrico, all'interno del capil- lare del soluto lungo il capillare (diffusione longitudi-
lare si genera un flusso di solvente, detto flusso elettro- nale). In questo caso ideale l'efficienza della zona,
osmotico. La velocita© del flusso elettro-osmotico espressa come il numero dei piatti teorici (N), e© data da:
dipende dalla mobilita© elettro-osmotica (eo), che a sua N ep 2 eoD LV l 6 † 2 2

volta dipende dalla densita© di carica sulla parete ˆ

interna del capillare e dalle caratteristiche del cam-

2 2
ecidnI

pione. La velocita© elettro-osmotica (veo) e© data dall'e- D = coefficiente di diffusione molecolare del soluto
quazione: nel tampone.

89
Elettroforesi capillare

Nella pratica, altri fenomeni come la dissipazione del raccomanda l'uso di un tale sistema in modo da
calore, l'adsorbimento del campione sulla parete del ottenere una buona riproducibilita© della separa-
capillare, la differenza di conduttivita© tra il campione e zione,
il tampone, la lunghezza del cilindro di campione iniet- ^ un registratore e un appropriato integratore o un
tato, le dimensioni della cella del rivelatore e i recipienti computer.
del tampone non posizionati allo stesso livello possono
anche contribuire significativamente alla dispersione La definizione del processo di iniezione e la sua auto-
della banda. mazione sono critiche per un'analisi quantitativa pre-
La separazione tra due bande (espressa come risolu- cisa. I modi di iniezione comprendono la gravita© , la
zione Rs) puo© essere ottenuta modificando la mobilita© pressione o l'iniezione sotto vuoto e l'iniezione elettro-
elettroforetica degli analiti, la mobilita© elettro-osmo- cinetica. Nel caso dell'iniezione elettrocinetica ciascun
tica indotta nel capillare e aumentando l'efficienza per componente del campione e© introdotto nel capillare in
la banda di ciascun analita, secondo l'equazione: quantita© variabile che dipende dalla sua mobilita© elet-
 troforetica, cosa che porta ad una possibile discrimina-
Rs 4N epb epa
p

ˆ
ÿ

eo †
†
zione.
ep 6

Usare il capillare, le soluzioni tampone, il metodo di

epa e epb = mobilita© elettroforetica dei due analiti precondizionamento, la soluzione campione e le condi-
separati, zioni di migrazione prescritte nella monografia della
ep = mobilita© elettroforetica media dei due sostanza considerata. La soluzione elettrolitica impie-
analiti ep 12 epb epa : gata e© filtrata per rimuovere le particelle e degassata
per evitare la formazione di bolle che potrebbero inter-
ˆ ‡ ††

ferire con il sistema di rivelazione o interrompere il

APPARECCHIO contatto elettrico nel capillare durante la separazione.
Un apparecchio per elettroforesi capillare e© composto Per ciascun metodo analitico deve essere sviluppata
da: una rigorosa procedura di lavaggio in modo da otte-
^ un alimentatore a corrente continua ad alto voltag- nere, per i soluti, tempi di migrazione riproducibili.
gio regolabile,
^ due recipienti per il tampone, mantenuti allo stesso ELETTROFORESI CAPILLARE LIBERA
livello, contenenti le prescritte soluzioni anodica e
catodica,
^ due elettrodi (il catodo e l'anodo) immersi nei conte- PRINCIPIO
nitori del tampone e connessi all'alimentatore,
^ un capillare di separazione (generalmente di silice Nell'elettroforesi capillare libera, gli analiti sono sepa-
fusa) che, quando usato con alcuni specifici tipi di rati in un capillare contenente solo il tampone senza
rivelatore, ha una finestra ottica allineata con il alcun mezzo anticonvettivo. Con questa tecnica la sepa-
rivelatore. Le estremita© del capillare pescano nei razione si realizza perchë i differenti componenti del
recipienti del tampone. Il capillare e© riempito con campione migrano come bande separate con velocita©
la soluzione prescritta nella monografia, differenti. La velocita© di ciascuna banda dipende dalla
^ un sistema di iniezione appropriato, mobilita© elettroforetica del soluto e dal flusso elettro-
^ un rivelatore in grado di controllare la quantita© osmotico nel capillare (vedere Principi generali). Si pos-
delle sostanze di interesse che passano attraverso sono usare capillari rivestiti per aumentare la capacita©
un segmento del capillare di separazione in un di separazione per quelle sostanze che sono adsorbite
tempo determinato. Il metodo di rivelazione e© gene- sulle superfici di silice fusa.
ralmente basato sulla spettrofotometria di assorbi- Usando questo tipo di elettroforesi capillare si puo© rea-
mento (UV e visibile) o sulla fluorimetria. La rivela- lizzare l'analisi di molecole piccole (Mr < 2000) e di
zione conduttivimetrica, amperometrica o mediante molecole piu© grandi (2000 < Mr < 100000). In virtu© del-
spettrometria di massa puo© essere utile per applica- l'alta efficienza ottenuta nella elettroforesi capillare
zioni specifiche. La rivelazione indiretta e© un libera, si puo© effettuare la separazione di molecole che
metodo alternativo usato per rivelare composti che hanno solo piccolissime differenze nel loro rapporto
non assorbono nell'UV o che non sono fluorescenti, tra carica e massa. Questo tipo di separazione consente
^ un sistema termostatico in grado di mantenere una anche la separazione di composti chirali mediante l'ag-
temperatura costante all'interno del capillare. Si giunta di selettori chirali nel tampone di separazione.

90
 Elettroforesi capillare

inoizircserP
OTTIMIZZAZIONE questo scopo sono disponibili capillari pronti all'uso

ilareneG
L'ottimizzazione della separazione e© un processo com- con rivestimenti costituiti da polimeri idrofili neutri,
plesso in cui possono giocare un ruolo importante cationici ed anionici.
parecchi parametri della separazione. I fattori princi-
pali da considerare nello sviluppo della separazione Parametri della soluzione elettrolitica

isilanA id
idoteM
sono i parametri della strumentazione e della soluzione Natura e concentrazione del tampone. I tamponi per l'e-
elettrolitica. lettroforesi capillare devono avere una capacita© tam-
pone appropriata nell'intervallo di pH scelto e una
Parametri della strumentazione bassa mobilita© per minimizzare la generazione di cor-

irotinetnoC
rente.

/ ilairetaM
Voltaggio. Il tempo di separazione e© inversamente pro-
porzionale al voltaggio applicato. Tuttavia un aumento E' importante ogni volta che e© possibile, adattare la
del voltaggio impiegato puo© causare un'eccessiva pro- mobilita© degli ioni del tampone alla mobilita© del soluto,
duzione di calore con un aumento della temperatura e, per limitare la distorsione della banda. E' anche impor-
come risultato di questo, la formazione di gradienti di tante il tipo di solvente usato per il campione per otte-
viscosita© nel tampone all'interno del capillare. Questo nere una focalizzazione del campione nella colonna e,

ivittaeR
fenomeno provoca l'allargamento della banda e la quindi, aumentare l'efficienza della separazione e
diminuzione della risoluzione. migliorare la rivelazione.
Temperatura. L'effetto principale della temperatura si Un aumento della concentrazione del tampone (per un
osserva sulla viscosita© del tampone e sulla conduttivita© dato pH) provoca la diminuzione del flusso elettro-

itnemogrA
ilareneG
elettrica e, quindi, sulla velocita© di migrazione. In osmotico e della velocita© del soluto.
alcuni casi un aumento della temperatura del capillare pH del tampone. Il pH del tampone puo© influenzare la
puo© causare un cambiamento conformazionale delle separazione modificando il flusso elettro-osmotico.
proteine, modificando il loro tempo di migrazione e Nella separazione di proteine e di peptidi, i cambia-
l'efficienza della separazione. menti del pH del tampone da valori superiori a valori

eifargonoM

ilareneG
Capillare. Le dimensioni del capillare (lunghezza e dia- inferiori al punto isoelettrico (pI) modificano la carica
metro interno) contribuiscono alla durata della analisi, netta del soluto da negativa a positiva. Un aumento
all'efficienza delle separazioni e alla capacita© di carico. del pH del tampone provoca generalmente un aumento
Aumentando sia la lunghezza effettiva che la lunghezza del flusso elettro-osmotico.

ehcituecamraF
totale possono diminuire i campi elettrici (lavorando a Solventi organici. Modificatori organici (metanolo, ace-

emroF
voltaggio costante) con conseguente aumento del tonitrile ecc.) possono essere aggiunti al tampone
tempo di migrazione. Per un dato tampone e un dato acquoso per aumentare la solubilita© del soluto o di altri
campo elettrico, il calore di dissipazione e, quindi, l'al- additivi e/o per influenzare il grado di ionizzazione dei
largamento della banda del campione, dipende dal dia- componenti del campione. L'aggiunta di questi modifi-
metro interno del capillare. Quest'ultimo influenza catori organici al tampone provoca generalmente una

eiretaM
anche il limite di rivelazione, dipendendo questo dal diminuzione del flusso elettro-osmotico.

emirP
volume di campione iniettato e dal sistema di rivela- Additivi per separazioni chirali. Per ottenere la separa-
zione impiegato. zione di isomeri ottici si aggiunge al tampone di separa-
Poichë l'adsorbimento dei componenti del campione zione un selettore chirale. I selettori chirali piu© comune-
ehcituecamraF
inoizaraperP

sulle pareti del capillare limita l'efficienza, nello svi- mente usati sono le ciclodestrine, ma possono essere
ehcificepS

luppo di un metodo di separazione dovrebbero essere usati anche eteri corona, polisaccaridi e proteine. Poi-
considerati dei metodi per evitare queste interazioni. chë il riconoscimento chirale deriva dalle differenti inte-
Nel caso specifico delle proteine, sono state escogitate razioni tra il selettore chirale e ciascuno degli enantio-
alcune strategie per evitare l'adsorbimento sulla parete meri, la risoluzione raggiunta per i composti chirali
ehcitapoemO
inoizaraperP

del capillare. Alcune di queste strategie (l'uso di pH dipende fortemente dal tipo di selettore chirale usato.
estremi e l'aggiunta al tampone di sostanze cariche A questo scopo per lo sviluppo di una data separazione
positivamente) richiedono, per prevenire l'adsorbi- puo© essere utile sottoporre a saggio ciclodestrine con
mento delle proteine, solo la modifica della composi- differenti dimensioni della cavita© ( -, -, o -ciclode-
a b c

zione del tampone. In altri casi, la parete interna del strine) o ciclodestrine modificate con gruppi neutri
capillare e© rivestita con un polimero, legato covalente- (metile, etile, idrossialchile ecc.) o con gruppi ionizza-
ecidnI

mente alla silice, che previene l'interazione tra le pro- bili (amminometile, carbossimetile, sulfobutiletere
teine e la superficie della silice carica negativamente. A ecc.). Quando si usano ciclodestrine modificate devono

91
Elettroforesi capillare

essere prese in considerazione le differenze esistenti; tra colati. Essi possono essere preparati in una fiala e intro-
lotto e lotto, del grado di sostituzione delle ciclode- dotti mediante la pressione in un capillare a parete rive-
stita (senza flusso elettro-osmotico). La sostituzione
strine poichë esse influenzeranno la selettivita© . Altri fat-
tori che controllano la risoluzione nelle separazioni chi- del gel prima di ogni iniezione generalmente aumenta
rali sono la concentrazione del selettore chirale, la com- la riproducibilita© della separazione. La porosita© dei gel
posizione e il pH del tampone e la temperatura. L'uso puo© essere aumentata usando polimeri a massa moleco-
di additivi organici, come il metanolo e l'urea, possono lare piu© alta (per una data concentrazione del polimero)
anche modificare la risoluzione ottenibile. o diminuendo la concentrazione del polimero (per un
polimero di data massa molecolare). Una diminuzione
della porosita© del gel provoca una diminuzione della
ELETTROFORESI CAPILLARE SU GEL mobilita© del soluto per lo stesso tampone. Poichë la dis-
PRINCIPIO soluzione di questi polimeri nel tampone produce solu-
zioni con una bassa viscosita© possono essere usate sia
Nell'elettroforesi capillare su gel, la separazione si veri- la tecnica di iniezione idrodinamica che quella elettroci-
fica nel capillare riempito con un gel che agisce come netica.
un setaccio molecolare. In questo modo per un dato
rapporto carica/massa, i componenti piu© piccoli si
muovono piu© velocemente nel capillare di quelli piu© ELETTROFORESI CAPILLARE A FOCALIZ-
grandi. L'elettroforesi capillare su gel puo© essere usata ZAZIONE ISOELETTRICA
per la separazione di macromolecole biologiche (pro- PRINCIPIO
teine e frammenti di DNA) a seconda della loro massa
molecolare. Nella focalizzazione isoelettrica, le molecole migrano
sotto l'influenza del campo elettrico, finchë esse sono
CARATTERISTICHE DEI GEL cariche, in un gradiente di pH generato da anfoliti che
hanno un ampio intervallo di valori di pI (acidi poliam-
Nell'elettroforesi capillare sono usati due tipi di gel: gel minocarbossilici), disciolti nel tampone di separazione.
chimici e gel fisici. I gel chimici, come la poliacrilam- Le tre fasi di base della focalizzazione isoelettrica sono
mide reticolata, sono preparati all'interno del capillare il caricamento, la focalizzazione e la mobilizzazione.
mediante polimerizzazione dei monomeri. Essi sono
generalmente legati alla parete di silice fusa e non pos- Fase di caricamento. Si possono usare due metodi:
sono essere rimossi senza distruggere il capillare. Se i ^ caricamento in una fase: il campione e© mescolato
gel sono usati per l'analisi delle proteine, il tampone di con gli anfoliti ed introdotto nel capillare mediante
separazione contiene generalmente sodio dodecilsol- la pressione o il vuoto;
fato e i campioni, prima dell'iniezione, sono denaturati ^ caricamento sequenziale: nel capillare sono intro-
mediante riscaldamento in una miscela di sodio dode- dotti, in successione, un tampone di caricamento,
cilsolfato e 2-mercaptoetanolo o ditiotreitolo. La sepa- gli anfoliti, il campione mescolato con gli anfoliti,
razione in gel reticolati puo© essere ottimizzata modifi- di nuovo gli anfoliti ed infine il tampone finale. Il
cando il tampone di separazione (come indicato nella volume del campione deve essere piccolo in modo
sezione elettroforesi capillare libera) e controllando la da non modificare il gradiente di pH.
porosita© del gel durante la sua preparazione. Per i gel
di poliacrilammide reticolata, la porosita© puo© essere . Quando si applica il voltaggio gli
Fase di focalizzazione

modificata cambiando la concentrazione dell'acrilam- anfoliti migrano verso il catodo o verso l'anodo a
mide e/o la proporzione dell'agente reticolante. In seconda della loro carica netta, creando un gradiente
genere, una diminuzione della porosita© del gel provoca di pH dall'anodo (pH piu© basso) al catodo (pH piu©
una diminuzione della mobilita© dei soluti. A causa della alto). Durante questa fase i componenti da separare
rigidita© di questi gel puo© essere usata solo l'iniezione migrano fino a quando essi raggiungono un pH corri-
elettrocinetica. spondente al loro punto isoelettrico (pI) e la corrente
I gel fisici sono polimeri idrofili, come poliacrilammide scende a valori bassissimi.
lineare, derivati della cellulosa, destrani ecc., che pos- Fase di mobilizzazione . Le bande dei componenti sepa-
sono essere disciolti in tamponi di separazione acquosi rati sono forzate ad attraversare il rivelatore. Tre sono
in modo da ottenere un mezzo di separazione che agisce i metodi utilizzabili:
anche da setaccio molecolare. Questi mezzi di separa- ^ nel primo metodo, la mobilizzazione e© realizzata
zione sono piu© semplici da preparare dei polimeri reti- durante la fase di focalizzazione sotto l'effetto del

92
 Elettroforesi capillare

inoizircserP
flusso elettro-osmotico; il flusso elettro-osmotico aumentare l'accuratezza. La calibrazione puo© essere

ilareneG
deve essere piccolo per consentire la focalizzazione fatta correlando il tempo di migrazione e il punto isoe-
di tutti i componenti; lettrico di una serie di marcatori proteici.
^ nel secondo metodo, la mobilizzazione si realizza Durante la fase di focalizzazione la precipitazione delle
applicando una pressione positiva dopo la fase di proteine al loro punto isoelettrico puo© essere prevenuta,

isilanA id
focalizzazione;

idoteM
se necessario, aggiungendo ai tamponi sostanze addi-
^ nel terzo metodo, la mobilizzazione, dopo la fase di tive come il glicerolo, i tensioattivi, l'urea o i tamponi
focalizzazione, e© ottenuta aggiungendo dei sali al zwitterionici. Tuttavia, a seconda della concentrazione,
recipiente del catodo o dell'anodo (a seconda della l'urea denatura le proteine.
direzione scelta per la mobilizzazione) in modo alte-

irotinetnoC
/ ilairetaM
rare il pH nel capillare quando si applica il voltag-
gio. Quando il pH e© cambiato, le proteine e gli anfo- CROMATOGRAFIA ELETTROCINETICA
liti sono mobilizzati nella direzione del recipiente MICELLARE (MEKC)
che contiene i sali aggiunti e passano attraverso il
rivelatore.

ivittaeR
La separazione ottenuta, espressa come pI, dipendeD PRINCIPIO
dal gradiente di pH (dpH =dx), dal numero di anfoliti
che hanno diversi valori di pI, dal coefficiente di diffu- Nella cromatografia elettrocinetica micellare, la sepa-
sione molare (D), dall'intensita© del campo elettrico (E) razione si realizza in una soluzione elettrolitica che con-
e dalla variazione della mobilita© elettroforetica dell'a- tiene un tensioattivo a concentrazione superiore alla

itnemogrA
ilareneG
nalita con il pH ( d=dpH):
ÿ concentrazione micellare critica (cmc). Le molecole di
s soluto sono distribuite, in funzione del coefficiente di
pI 3 ED dpH †

d=dpH
=dx partizione del soluto, tra il tampone acquoso e la fase
pseudo stazionaria costituita dalle micelle. La tecnica
D ˆ 2
ÿ †

puo© essere quindi considerata come un ibrido tra l'elet-

eifargonoM

ilareneG
troforesi e la cromatografia. E' una tecnica che puo©
OTTIMIZZAZIONE essere usata per la separazione di soluti neutri e di
I parametri principali da considerare nello sviluppo soluti carichi, mantenendo l'efficienza, la velocita© e l'a-
delle separazioni sono: deguatezza dell'elettroforesi capillare. Uno dei tensioat-

ehcituecamraF
tivi piu© usati in questa tecnica e© il tensioattivo anionico
. La focalizzazione isoelettrica capillare uti- sodio dodecilsolfato, anche se sono usati altri tensioat-

emroF
Voltaggio

lizza nella fase di focalizzazione campi elettrici altis- tivi, per esempio quelli cationici come i sali di cetiltri-
simi, da 300 V/cm a 1000 V/cm. metilammonio.
Capillari. Il flusso elettro-osmotico deve essere ridotto Il meccanismo di separazione e© il seguente. A pH neu-
o soppresso a seconda della strategia di mobilizzazione tro o alcalino e© generato un forte flusso elettro-osmo-
(vedere quanto riportato precedentemente). I capillari
eiretaM

emirP
rivestiti tendono a ridurre il flusso elettro-osmotico. tico che trascina gli ioni del tampone di separazione
nella direzione del catodo. Se si usa il sodio dodecilsol-
Soluzioni. Il recipiente del tampone dell'anodo e© riem- fato come tensioattivo, la migrazione elettroforetica
pito con una soluzione a pH inferiore al pI dell'anfolita della micella anionica avviene nella direzione opposta,
ehcituecamraF

piu© acido e il recipiente del catodo e© riempito con una

inoizaraperP

verso l'anodo. Come risultato, la velocita© di migrazione

ehcificepS

soluzione a pH piu© alto del pI dell'anfolita piu© basico. complessiva delle micelle e© rallentata rispetto al flusso
Si usano frequentemente l'acido fosforico per l'anodo e globale della soluzione elettrolitica. Nel caso di soluti
il sodio idrossido per il catodo. neutri, poichë l'analita puo© ripartirsi tra la micella e il
L'aggiunta, nella soluzione degli anfoliti, di polimeri tampone acquoso e non ha mobilita© elettroforetica, la
ehcitapoemO
inoizaraperP

come la metilcellulosa tende ad eliminare le forze con- velocita© di migrazione dell'analita dipende solo dal
vettive (se vi sono) e il flusso elettro-osmotico aumen- coefficiente di partizione tra la micella e il tampone
tando la viscosita© . In commercio sono disponibili anfo- acquoso. Nell'elettroferogramma, i picchi corrispon-
liti che comprendono intervalli di pH molto diversi e denti a ciascun soluto non carico si trovano sempre tra
possono essere mescolati, se necessario, in modo da quello del marcatore del flusso elettro-osmotico e
ottenere un intervallo di pH piu© grande. Gli intervalli quello della micella (il tempo compreso tra questi due
ecidnI

di pH piu© ampi sono usati per valutare il punto isoelet- picchi e© detto finestra di separazione). Per soluti carichi
trico, mentre gli intervalli piu© stretti sono usati per elettricamente, la velocita© di migrazione dipende sia

93
Elettroforesi capillare

dal coefficiente di partizione del soluto tra le micelle e il Parametri della strumentazione

tampone acquoso, sia dalla mobilita© elettroforetica del

soluto in assenza di micelle. Voltaggio. Il tempo di separazione e© inversamente pro-
Poichë il meccanismo di separazione nella cromatogra- porzionale al voltaggio applicato. Comunque un
fia micellare elettrocinetica di soluti neutri o debol- aumento del voltaggio puo© causare un'eccessiva produ-
mente ionizzati e© essenzialmente cromatografico, la zione di calore che causa un aumento dei gradienti di
migrazione del soluto e la risoluzione possono essere' temperatura e dei gradienti di viscosita© del tampone
spiegati in termini di fattore di capacita© del soluto (k ), nella sezione reticolata del capillare. Questo effetto
anche definito come rapporto di distribuzione di massa puo© essere significativo con tamponi ad alta condutti-
(Dm), che e© il rapporto tra il numero di moli di soluto vita© come quelli contenenti le micelle. Una scarsa dissi-
nella micella e quello nella fase mobile. Per un compo- pazione del calore provoca l'allargamento della banda
sto neutro k e© dato da:
0
e la diminuzione della risoluzione.
Temperatura. Le variazioni della temperatura del capil-
k tR tt0R  K VVS
0
ÿ
lare influenzano il coefficiente di partizione del soluto
t0 1 tm
ˆ ˆ
ÿ M tra il tampone e le micelle, la concentrazione micellare
critica e la viscosita© del tampone. Questi parametri con-
tR = tempo di migrazione del soluto, tribuiscono al tempo di migrazione dei soluti. L'uso di
un buon sistema di raffreddamento migliora la riprodu-
t0 = tempo di analisi di un soluto non trattenuto cibilita© del tempo di migrazione dei soluti.
(determinato iniettando un marcatore del Capillari. Come nel caso dell'elettroforesi capillare
flusso elettro-osmotico che non entra nella libera, le dimensioni del capillare (lunghezza e diametro
micella, per es. metanolo), interno) contribuiscono al tempo di analisi e all'effi-
tm = tempo di migrazione della micella (misurato cienza delle separazioni. Aumentando sia la lunghezza
iniettando un marcatore della micella come il efficace che la lunghezza totale possono diminuire i
Sudan III, che migra completamente assorbito campi elettrici (lavorando a voltaggio costante),
nella micella), aumenta il tempo di migrazione e conseguentemente
K = coefficiente di partizione del soluto, migliora l'efficienza della separazione. Il diametro
interno condiziona la dissipazione del calore (per un
VS = volume della fase micellare, dato tampone e per un dato campo elettrico) e conse-
VM = volume della fase mobile. guentemente l'allargamento della banda del campione.
Allo stesso modo, la risoluzione tra due soluti che
migrano molto vicini (Rs) e© data da: Parametri della soluzione elettrolitica


1
 
t0 Natura e concentrazione del tensioattivo. Il tipo di ten-
Rs 4 N
p
1 ÿ k b
0

tm
ÿ
sioattivo, nello stesso modo della fase stazionaria in
ˆ 2
kb 1 1  ttm0 ka
2 0

‡
2
0
cromatografia, influisce sulla risoluzione poichë modi-
fica la selettivita© della separazione. Anche il log k di
‡
0

un composto neutro aumenta linearmente con la con-

N = numero di piatti teorici di uno dei soluti, centrazione del tensioattivo nella fase mobile. Poichë
= selettivita© , la risoluzione nella cromatografia elettrocinetica micel-
lare raggiunge
ka e kb = fattori di capacita© rispettivamente dei due valore un massimo quando k raggiunge il
p
0

di tm 0 , modificando la concentrazione del

t
0 0

=
soluti. tensioattivo nella fase mobile cambia la risoluzione
Equazioni simili, ma non identiche, danno come risul- ottenuta.
tato valori di k e Rs per soluti carichi elettricamente. pH del tampone. Benchë il pH non modifichi il coeffi-
0

ciente di partizione dei soluti non ionizzati, puo© modifi-

OTTIMIZZAZIONE care il flusso elettro-osmotico in capillari non rivestiti.
Una diminuzione del pH del tampone fa diminuire il
I parametri principali da considerare nello sviluppare flusso elettro-osmotico e, quindi, nella cromatografia
delle separazioni mediante cromatografia micellare elettrocinetica micellare, aumenta la risoluzione dei
elettrocinetica sono i parametri strumentali e quelli soluti neutri con un tempo di analisi conseguente piu©
della soluzione elettrolitica. lungo.

94
 Elettroforesi capillare

inoizircserP
Solventi organici. Nella cromatografia elettrocinetica ^ compensare per lo spostamento del tempo di migra-

ilareneG
micellare, per aumentare la separazione di composti zione da corsa a corsa, in modo da ridurre la varia-
idrofobici, possono essere aggiunti alla soluzione elet- zione della risposta,
trolitica modificatori organici (metanolo, propanolo, ^ compensare le differenti risposte dei costituenti del
acetonitrile ecc.). L'aggiunta di questi modificatori fa campione che hanno tempi di migrazione diversi.

isilanA id
generalmente diminuire il tempo di migrazione e la

idoteM
selettivita© della separazione. Poichë l'aggiunta di modi- Quando si usa uno standard interno, occorre verificare
ficatori organici influenza la concentrazione micellare che nessun picco della sostanza in esame sia masche-
critica, si deve avere un certo equilibrio tra la concen- rato da quello dello standard interno.
trazione del modificatore organico e quella del ten-

irotinetnoC
/ ilairetaM
sioattivo per evitare l'inibizione o l'alterazione della
formazione delle micelle con conseguente assenza di CALCOLI
partizione. La dissociazione delle micelle in presenza
di un alto contenuto di un solvente organico non sem- Dai valori ottenuti, calcolare il contenuto del compo-
pre significa che la separazione non sara© piu© possibile; nente o dei componenti in esame. Quando prescritto, il
in alcuni casi l'interazione idrofobica tra il monomero contenuto percentuale di uno o piu© componenti del

ivittaeR
del tensioattivo e i soluti neutri forma dei complessi sol- campione in esame e© calcolato determinando l'area/e
vofobici che possono essere separati elettroforetica- corretta/e del/dei picco/chi come percentuale del totale
mente. delle aree corrette di tutti i picchi, esclusi quelli dovuti
Additivi per separazioni chirali. Per la separazione di al solvente o a qualsiasi reattivo aggiunto (procedura
di normalizzazione). Si raccomanda l'uso di un sistema

itnemogrA
enantiomeri mediante la cromatografia elettrocinetica

ilareneG
micellare, un selettore chirale viene incluso nel sistema di integrazione automatico (integratore o sistema di
micellare, sia legato covalentemente al tensioattivo che acquisizione e di elaborazione dei dati).
aggiunto all'elettrolita della separazione micellare. Le
micelle che hanno una parte con proprieta© di discrimi- IDONEITAé DEL SISTEMA

eifargonoM
nazione chirale comprendono i sali di N-dodecanoil-L-

ilareneG
amminoacidi, i sali biliari, ecc. La risoluzione chirale Al fine di verificare il comportamento del sistema di
puo© anche essere ottenuta usando discriminanti chirali elettroforesi capillare, si usano i parametri dell'idoneita©
come le ciclodestrine, aggiunti alle soluzioni elettroliti- del sistema. La scelta di questi parametri dipende dal
che che contengono tensioattivi achirali che formano

ehcituecamraF
le micelle. tipo di elettroforesi capillare usato. Essi sono: il fattore
di capacita© (k') (solo per la cromatografia elettrocine-

emroF
Altri additivi. Possono essere attuate diverse strategie tica micellare), il numero apparente di piatti teorici
per modificare la selettivita© aggiungendo delle sostanze (N), il fattore di simmetria (As) e la risoluzione (Rs).
chimiche al tampone. L'aggiunta di alcuni tipi di ciclo- Nelle sezioni precedenti sono state descritte le espres-
destrine al tampone puo© anche essere usata per ridurre sioni teoriche di N e Rs, di seguito sono pero© riportate
l'interazione di soluti idrofobi con le micelle, aumen-
eiretaM
equazioni piu© pratiche che consentono di calcolare que-

emirP
tando quindi la selettivita© per questo tipo di composto. sti parametri dagli elettroferogrammi.
Un altro modo usato per aumentare la selettivita© delle
separazioni in cromatografia elettrocinetica micellare e©
NUMERO APPARENTE DI PIATTI TEORICI
ehcituecamraF

l'aggiunta di sostanze in grado di modificare le intera-

inoizaraperP

ehcificepS

zioni micelle-soluto mediante adsorbimento in queste

ultime. Questi additivi possono essere sia un secondo Il numero di piatti teorici (N) puo© essere calcolato
tensioattivo (ionico o non-ionico) che provoca la for- usando l'espressione:
mazione di micelle miste, sia cationi metallici che si  2
sciolgono nelle micelle e formano complessi di coordi- N 5; 54 wtR
ehcitapoemO
inoizaraperP

nazione con i soluti. h

tR = tempo di migrazione o distanza lungo la linea di

DETERMINAZIONE QUANTITATIVA base dal punto di iniezione alla perpendicolare
Le aree dei picchi devono essere divise per il corrispon- tracciata dal massimo del picco corrispondente
al componente,
ecidnI

dente tempo di migrazione in modo da ottenere l'area

corretta al fine di: wh = larghezza del picco e meta© altezza.

95
Spettrometria Raman

RISOLUZIONE RAPPORTO SEGNALE/RUMORE

La risoluzione (Rs) tra picchi di altezza simile di due Il limite di rivelazione e il limite della determina-
componenti puo© essere calcolata usando l'espressione: zione quantitativa corrispondono rispettivamente a un
  rapporto segnale/rumore di 3 e di 10. Il rapporto
Rs 1; 18w tR2 w tR1
ˆ
ÿ † segnale/rumore (S/R) e© calcolato usando l'espressione:
S=R 2H
h1 ‡h2
ˆ
h
tR2 > tR1
H = altezza del picco corrispondente al componente
tR1 e tR2 = tempi di migrazione o distanze lungo la in questione, nell'elettroferogramma ottenuto
linea di base dal punto di iniezione alla per- con la soluzione di riferimento prescritta, misu-
pendicolare tracciato dai massimi dei due rata dal massimo del picco alla linea di base estra-
picchi adiacenti, polata del segnale osservato su una distanza
uguale a venti volte la larghezza a meta© altezza,
wh1 e wh2 = larghezza dei picchi a meta© altezza. h = ampiezza del rumore di fondo in un elettrofero-
Quando appropriato, la risoluzione puo© essere calco- gramma ottenuto dopo l'iniezione di un bianco,
lata misurando l'altezza dell'avvallamento (Hv) tra due osservato su una distanza uguale a venti volte la
picchi parzialmente risolti nella preparazione di riferi- larghezza a meta© altezza del picco nell'elettrofero-
mento e l'altezza del picco piu© piccolo (Hp) e calcolando gramma ottenuto con la soluzione di riferimento
il rapporto picco/avvallamento prescritta e, se possibile, disposta simmetrica-
mente attorno alla posizione in cui dovrebbe
p=v HHp
ˆ 1
essere riscontrato il picco.
v
FATTORE DI SIMMETRIA
Il fattore di simmetria (As) del picco puo© essere calco-
2.2.48. SPETTROMETRIA RAMAN

lato usando l'espressione: La spettrometria Raman (diffusione anelastica della

luce) e© un processo di diffusione della luce nel quale il
As w2d0;05
ˆ campione in esame viene irradiato con una intensa luce
monocromatica (generalmente luce laser); la luce dif-
w0,05 = larghezza del picco ad un ventesimo dell'al- fusa dal campione viene analizzata per valutare gli spo-
stamenti di frequenza indotti.
tezza del picco,
La spettrometria Raman e© complementare alla spettro-
d = distanza tra la perpendicolare tracciata dal metria infrarossa nel senso che entrambe le tecniche
massimo del picco e il bordo ascendente del permettono di indagare sulle vibrazioni delle molecole
picco ad un ventesimo della sua altezza. costituenti un materiale. Tuttavia le spettrometrie
I saggi per la ripetibilita© dell'area (deviazione standard Raman
per
ed infrarosso hanno sensibilita© relative diverse
gruppi funzionali differenti. La spettrometria
delle aree o del rapporto area/tempo di migrazione) e Raman e© particolarmente sensibile per i legami non
per la ripetibilita© del tempo di migrazione (deviazione polari (per es. legami C-C singoli o multipli) mentre lo
standard del tempo di migrazione) sono introdotti e© meno per i legami polari. Pertanto l'acqua, che ha un
come parametri di idoneita© . La ripetibilita© del tempo intenso spettro di assorbimento infrarosso,
di migrazione fornisce un saggio di idoneita© delle proce- diffusore Raman, tanto da essere utilizzatoe© come un debole
sol-
dure di lavaggio del capillare. Un metodo alternativo vente per la stessa spettrometria Raman.
per evitare la mancanza di ripetibilita© del tempo di
migrazione e© l'uso del tempo di migrazione relativo ad Apparecchiatura. Gli spettrometri per la registrazione
uno standard interno. di spettri Raman sono generalmente costituiti dai
Un saggio per la verifica del rapporto segnale/rumore seguenti componenti:
della preparazione di riferimento (o la determinazione ^ una sorgente di luce monocromatica, di norma un
del limite di quantificazione) puo© anche essere utile per laser, con una lunghezza d'onda nell'ultravioletto,
la determinazione delle sostanze correlate. nel visibile o nel vicino infrarosso,

96
 Spettrometria Raman

inoizircserP
^ una adeguata ottica (un insieme di lenti, specchi o IDENTIFICAZIONE E DETERMINAZIONE

ilareneG
fibre ottiche) che convoglia la luce di eccitazione e QUANTITATIVA MEDIANTE SOSTANZE DI
raccoglie la luce diffusa proveniente dal campione RIFERIMENTO
in esame,
^ un sistema ottico, monocromatore o filtro, che tra- Preparare, con la stessa procedura, la sostanza da esa-

isilanA id
minare e quella di riferimento; registrare gli spettri

idoteM
smette gli spostamenti di frequenza derivanti dalla nelle stesse condizioni operative. I massimi presenti
diffusione Raman mentre impedisce alla intensa nello spettro ottenuto con la sostanza da esaminare
frequenza incidente (diffusione Rayleigh) di rag- corrispondono, per posizione ed intensita© relativa, a
giungere il rivelatore, quelli osservati nello spettro ottenuto con la sostanza

irotinetnoC
/ ilairetaM
^ un sistema di dispersione (reticolo o prisma), accop- di riferimento (SCR).
piato con fenditure, per la scelta della lunghezza Se lo spettro ottenuto con un campione in fase solida
d'onda ed un rivelatore (generalmente un tubo foto- mostra differenze nelle posizioni dei massimi, trattare,
moltiplicatore), nello stesso modo, la sostanza da esaminare e la
oppure sostanza di riferimento, affinchë esse cristallizzino o

ivittaeR
vengano ottenute nella stessa forma o procedere
^ un sistema di dispersione (reticolo o prisma) accop- secondo quanto prescritto nella monografia; registrare
piato con un rivelatore multicanale (generalmente di nuovo gli spettri.
un sistema con accoppiamento di carica (CCD)),
La legge di Lambert-Beer non e© valida nella spettrome-
oppure tria Raman; l'intensita© Raman e© invece direttamente

itnemogrA
ilareneG
^ un interferometro con un rivelatore che permette di proporzionale alla concentrazione delle specie moleco-
registrare, nel tempo, la luce diffusa e con un lari che danno luogo al processo di diffusione. Come
sistema di gestione dati che trasforma questi nel per altre tecniche spettroscopiche la determinazione
dominio delle frequenze o dei numeri d'onda quantitativa puo© essere effettuata utilizzando quantita©
o concentrazioni note di sostanze di riferimento. Poichë

eifargonoM
mediante trasformata di Fourier.

ilareneG
questa tecnica ha una risoluzione spaziale piccola si
debbono usare accorgimenti per garantire campioni
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE rappresentativi delle sostanze di riferimento e di quelle
non note da analizzare, ad esempio assicurandosi che

ehcituecamraF
Uno spettro Raman puo© essere ottenuto da campioni esse si trovino nello stesso stato fisico o utilizzando,
solidi, liquidi o gassosi sia direttamente che mediante per le sostanze liquide, uno standard interno.

emroF
contenitori o tubi di vetro; lo spettro si ottiene di norma
senza una previa preparazione o diluizione del cam- IDENTIFICAZIONE E DETERMINAZIONE
pione stesso.
QUANTITATIVA MEDIANTE COLLEZIONI
La maggiore limitazione della spettrometria Raman e© SPETTRALI E METODI STATISTICI PER LA
eiretaM

emirP
legata al fatto che le impurezza possono dar luogo a CLASSIFICAZIONE E LA CALIBRAZIONE
fluorescenza interferendo con la rivelazione del molto
piu© debole segnale Raman. L'emissione di fluorescenza Controllo delle prestazioni dello strumento. Utilizzare
puo© essere evitata scegliendo una sorgente laser la cui l'apparecchiatura secondo le istruzioni del costruttore,
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

linea di eccitazione abbia una lunghezza d'onda piu© effettuare le calibrazioni prescritte ed i saggi di ``perfor-
lunga, ad esempio una nel vicino infrarosso. L'intensita© mance'' del sistema ad intervalli regolari in funzione
di certe linee Raman puo© essere aumentata in diversi dell'uso dell'apparecchiatura stessa e delle sostanze da
modi come nella spettrometria di ``Risonanza Raman'' analizzare. Quando si usa la spettrometria Raman per
(RR) e nella ``Surface Enhanced Raman Spectrometry'' dosaggi quantitativi o quando si mettono a punto colle-
ehcitapoemO
inoizaraperP

(SERS). zioni spettrali di riferimento a scopo di classificazione

Lo spettro di norma si ottiene utilizzando solo pochi oattenzione
calibrazione (chemometrica), deve porsi particolare
microlitri di campioni grazie alla stretta focalizzazione misure atteperal effettuare le correzioni o per prendere le
del raggio laser di eccitazione. E' necessario pertanto d'onda e della intensita© di della
controllo variabilita© del numero
risposta dello strumento.
tener presente eventuali inomogeneita© del campione
ecidnI

che possono essere in parte evitate mediante rotazione Verifica della scala dei numeri d'onda.Verificare la scala
del campione stesso. dei numeri d'onda dello spostamento Raman (normal-

97
Spettrometria Raman

mente espresso in centimetri reciproci) usando un ade- ^ differenze nella risposta strumentale,
guato standard con massimi caratteristici nell'interval-
lo dei numeri d'onda in studio, per es. una sostanza ^ differenze di focalizzazione e di geometria del cam-
organica, una lampada al Ne o linee di plasma Ar+ da pione,
un laser a ioni argon. ^ differenze nella densita© di impaccamento per i cam-
La calibrazione dovrebbe essere fatta in modo ade- pioni solidi.
guato al tipo di sostanza da analizzare per es. dovrebbe
essere usato uno standard solido quando le sostanze Appropriati criteri di accettabilita© varieranno in fun-
da analizzare sono solide cos|© come uno standard, zione dell'applicazione, ma variazioni giornaliere del
liquido, nel caso in cui i campioni siano liquidi. Sce- 6 10 per cento nell'intensita© relativa di una banda sono
gliere sostanze adeguate (per es. indene, cicloesano o ottenibili nella maggior parte dei casi.
naftalene) per le quali i numeri d'onda degli sposta- Creazione di una collezione di spettri di riferimento.
menti sono stati accuratamente determinati. Un cam- Registrare gli spettri di un adeguato numero di mate-
pione di indene puo© essere convenientemente messo in riali adeguatamente controllati (per es. come prescritto
un tubo per NMR, chiuso in atmosfera di gas inerte, e in una monografia) e che presentino quelle variazioni
conservato al buio e al freddo onde evitarne la degrada- (produttore, lotto, forma cristallina, dimensioni delle
zione. particelle, ecc.) tipiche del materiale in esame. L'in-
Tabella 2.2.48.-1. Spostamenti del numero d'onda (e tol- sieme degli spettri rappresenta l'informazione che defi-
leranze accettabili) di cicloesano, indene e naftalene nisce i confini di similarita© o i limiti quantitativi che,
ad esempio, possono essere usati per identificare la
cicloesano
a
indene
b
naftalene
a
sostanza o per verificare la quantita© formatasi in un
processo di produzione. Il numero di sostanze in un
2938,3 ( 6 1,5) ö 3056,4 (6 1,5) ``data base'' dipende dalla specifica applicazione.
2923,8 ( 6 1,5) ö ö La collezione di spettri in un ``data base'' puo© essere
2852,9 ( 6 1,5) ö ö rappresentata in maniere diverse definite dalla tecnica
ö 1609,7 ( 1,0) 1576,6 ( 1,0) matematica usata per la classificazione o per le deter-
minazioni quantitative.
6 6

1444,4 ( 6 1,0) 1552,6 (

6 1,0) 1464,5 (6 1,0)
La selettivita© di un ``data base'' che rende possibile la
1266,4 ( 6 1,0) 1205,2 (
6 1,0) 1382,2 (6 1,0) positiva identificazione di un dato materiale e permette
1157,6 ( 1,0) ö 1147,2 ( 1,0) di distinguerlo adeguatamente dagli altri materiali
dello stesso ``data base'' deve essere stabilita durante la
6 6

1028,3 ( 6 1,0) 1018,6 (

6 1,0) 1021,6 (6 1,0) procedura di convalida. Tale selettivita© deve essere
801,3 ( 1,0) 730,5 ( 1,0) 763,8 ( 1,0) regolarmente sottoposta a verifica per assicurare la
6 6 6
continua validita© dello stesso ``data base''; questo e©
ö 533,9 (
6 1,0) 513,8 (6 1,0) necessario specialmente dopo ogni ``significativa''
variazione concernente una sostanza (per es. variazione
del fornitore o del processo di produzione del mate-
a) Standard guide for Raman standards for spectrometer cali- riale) o nella messa a punto della strumentazione
bration (American Society for Testing and Materials ASTM Raman (per es. verifica della ripetibilita© del numero
E 1840). d'onda e di risposta dello spettrometro).
b) D.A. Carter, W.R. Thompson, C.E. Taylor e J.E. Pember-
ton, Applied Spectroscopy, 1995, (11), 1561-1576. Il ``data base'' e© utilizzabile solo con lo strumento con il
49
quale e© stato ottenuto; per utilizzarlo con uno stru-
Verifica della scala intensita© -risposta. Le intensita© asso- mento simile deve essere dimostrato che esso resti
lute e relative delle bande Raman sono influenzate da valido.
diversi fattori tra i quali: Metodo. Preparare ed esaminare il campione nello
^ lo stato di polarizzazione della radiazione incidente, stesso modo con il quale e© stato ottenuto il ``data base''.
^ lo stato di polarizzazione dell'ottica, Un'adatta trasformazione matematica dello spettro
Raman puo© essere effettuata per facilitare la compara-
^ l'intensita© della radiazione incidente, zione spettrale o la predizione quantitativa.

98
 Focalizzazione isoelettrica

inoizircserP
Il confronto tra spettri o trasformazioni di uno spettro, = densita© della sfera utilizzata, espressa in grammi

ilareneG
1
la predizione quantitativa di certe proprieta© o quantita© per centimetro cubo,
nel materiale in esame possono richiedere l'uso di una 2 = densita© del liquido in esame, espressa in grammi
adeguata tecnica chemometrica o statistica di calibra- per centimetro cubo, ottenuta moltiplicando la
zione o di classificazione. sua densita© relativa d2020 per 0,9982,

isilanA id
idoteM
2.2.49. METODO DEL VISCOSIMETRO A SFERA
t = tempo di caduta della sfera in secondi.
CADENTE

La determinazione della viscosita© dinamica di liquidi 2.2.54. FOCALIZZAZIONE ISOELETTRICA

irotinetnoC
/ ilairetaM
newtoniani mediante un adatto viscosimetro a sfera
cadente e© effettuata a 20 0,1 ‘C, salvo diversa indica-
6

zione nella monografia. Determinare il tempo necessa- PRINCIPI GENERALI

rio alla sfera per percorrere, nel liquido in esame, la
distanza tra i due segni ad anello. Il risultato e© valido La focalizzazione isoelettrica e© un metodo elettrofore-
solo se due misure consecutive non differiscono piu© tico che separa le proteine in base al loro punto isoelet-

ivittaeR
dell' 1,5 per cento, a meno che per l'apparecchio usato trico. La separazione viene effettuata su una piastra di
non sia definito un limite piu© ristretto. gel di poliacrilammide o di agarosio che contiene una
miscela di elettroliti anfoteri (anfoliti). Quando sono
Apparecchiatura. Il viscosimetro a sfera cadente e© costi- sottoposti ad un campo elettrico gli anfoliti migrano

itnemogrA
nel gel in modo da creare un gradiente di pH. In alcuni

ilareneG
tuito da un tubo di vetro racchiuso all'interno di un
manicotto, in modo da permettere un preciso controllo casi si usano gel aventi un gradiente di pH immobiliz-
della temperatura, e da 6 sfere di vetro, di ferro-nichel zato ottenuto mediante incorporazione di acidi e basi
o di acciaio, con densita© e diametri differenti. Il tubo e© deboli in regioni specifiche del gel al momento della
fissato in modo che l'asse sia inclinato di 10 1‘ sua preparazione. Nel momento in cui le proteine depo-

eifargonoM
sitate raggiungono la regione in cui il pH corrisponde
6

ilareneG
rispetto alla verticale. Due segni circolari sul tubo defi-
niscono la distanza che le sfere devono percorrere. al loro punto isoelettrico, la loro carica viene neutraliz-
L'apparecchio disponibile in commercio e© dotato di zata e la migrazione si ferma. Sulla base della miscela
tabelle che indicano le costanti, la densita© delle sfere e di anfoliti scelti e© possibile creare gradienti con una
l'adeguatezza delle stesse a diversi intervalli di visco- gamma diversa di pH.

ehcituecamraF
sita© .

emroF
Metodo Riempire il tubo del viscosimetro, pulito, asciu- ASPETTI TEORICI
gato e previamente portato a 20 0,1 ‘C, con il liquido
6
Quando una proteina si trova in una posizione che cor-
da esaminare evitando la formazione di bolle. Inserire risponde al suo punto isoelettrico la sua carica netta e©
la sfera appropriata all'intervallo di viscosita© del
eiretaM

emirP
liquido in esame, in modo da ottenere un tempo di nulla e la sua migrazione nella matrice del gel, sotto
caduta non inferiore a 30 s. Chiudere il tubo e mante- l'effetto del campo elettrico, si arresta. Il suo sposta-
nere la soluzione a 20 0,1 ‘C per almeno 15 min. mento per diffusione resta tuttavia possibile. Il gra-
6

Lasciar percorrere alla sfera, immersa nel liquido, la diente di pH costringe la proteina a rimanere nella posi-
ehcituecamraF
inoizaraperP

zione che corrisponde al suo punto isoelettrico, dove

ehcificepS

distanza tra i due segni circolari per una volta senza essa si trova cos|© concentrata. Questo effetto di concen-
effettuare la misura. Ripetere l'operazione e cronome- trazione e© chiamato ``focalizzazione''. L'aumento della
trare, a 1/5 di secondo, il tempo impiegato dalla sfera tensione applicata, o la riduzione della quantita© del
per cadere dal segno superiore a quello inferiore. Ripe- campione deposto, ha come effetto quello di migliorare
tere questa operazione almeno 3 volte.
ehcitapoemO
inoizaraperP

la separazione delle bande. Tuttavia la tensione che si

Calcolare la viscosita© dinamica  in millipascal-secondi puo©
essere
applicare e© limitata dal calore prodotto che deve
dissipato. L'utilizzo di gel sottili e di un sistema
mediante l'espressione: efficace di raffreddamento della piastra, controllato da
 k 1 2 t
ˆ ÿ † 2 un termostato, evita al gel di bruciare e permette di
ottenere una focalizzazione fine. La separazione e©
ecidnI

k = costante, espressa in millimetri quadrati per misurata determinando la differenza pI minima alla D

secondo quadrato, quale si realizza la separazione di due bande vicine:

99
Focalizzazione isoelettrica

s gradienti di pH immobilizzati possono essere utiliz-

pI 3 D dpH =dx † zati per separare proteine che differiscono di circa
D ˆ 2
E d =dpH
ÿ l † 0,001 unita© di pH.
La focalizzazione isoelettrica su gel puo© essere usata
D = coefficiente di diffusione della proteina, come saggio di identita© , se la migrazione sul gel e© con-
frontata con una preparazione di riferimento e con pro-
d pH = gradiente di pH, teine di taratura per la focalizzazione isoelettrica; essa
dx puo© essere usata come saggio limite, se la densita© di
E = intensita© del campo elettrico, in volt per centi-una banda da focalizzazione isoelettrica e© confrontata,
metro, soggettivamente, con la densita© delle bande che com-
d = variazione della mobilita© del soluto con il paiono in una preparazione di riferimento; essa puo©
ÿ
l

d pH pH nella regione piu© vicina al pI. anche essere usata come saggio semi-quantitativo se la
densita© e© misurata con un densitometro, o uno stru-
Poichë D e - d =dpH per una data proteina non pos- mento analogo, per determinare la concentrazione rela-
l

sono essere cambiate, due sono i mezzi possibili per tiva di proteine nelle bande.
migliorare la separazione: ridurre l'intervallo di pH e
aumentare l'intensita© del campo elettrico. APPARECCHIATURA
Un apparecchio per focalizzazione isoelettrica com-
ASPETTI PRATICI prende:
^ un generatore di corrente continua a tensione varia-
Si devono considerare con un'attenzione particolare le bile e potenza stabilizzata,
caratteristiche e/o la preparazione del campione. La ^ una camera per la focalizzazione isoelettrica di pla-
presenza di sali nel campione puo© presentare dei pro- stica rigida contenente, come supporto del gel, una
blemi ed e© preferibile preparare il campione utiliz- piastra refrigerata costruita con materiale appro-
zando, per quanto possibile, acqua deionizzata o una priato,
soluzione di anfoliti al 2 per cento con l'ausilio della
dialisi o di una filtrazione su gel, se necessario. ^ un coperchio in materiale plastico che porta degli
elettrodi di platino che vengono messi in contatto
Generalmente si utilizza una tensione di 2500 V che e© con il gel per mezzo di strisce di carta di larghezza,
considerata ottimale in condizioni operative definite. lunghezza e spessore appropriati, impregnate con
Puo© essere usata una potenza costante fino a 30 W e soluzioni degli elettroliti anodici e catodici.
si ottiene una separazione completa generalmente in
1,5-3,0 h. FOCALIZZAZIONE ISOELETTRICA SU GEL DI
Il tempo richiesto per realizzare la focalizzazione su gel POLIACRILAMMIDE: DESCRIZIONE DETTA-
di poliacrilammide su strato sottile viene determinato GLIATA DELLA PROCEDURA
mediante la deposizione di una proteina colorata (per Il metodo di seguito descritto e© una procedura di focaliz-
es. emoglobina) in punti differenti del gel e successiva zazione isoelettrica su gel di poliacrilammide, su strato
applicazione del campo elettrico: l'equilibrio si ottiene spesso, che si utilizza salvo indicazione diversa nella
quando i profili elettroforetici ottenuti con i differenti monografia.
depositi sono tutti identici. In alcuni protocolli, il punto
finale di focalizzazione e© determinato dal tempo tra-
scorso a partire dalla deposizione del campione. PREPARAZIONE DEI GEL
La risoluzione tra bande proteiche su un gel per la foca- Stampo . Lo stampo (vedere Figura 2.2.54.-1) e© costi-
lizzazione isoelettrica preparato con degli anfoliti vet- tuito da una lastra di vetro (A) sulla quale e© disposto
tori puo© essere abbastanza buona. Una risoluzione un film di poliestere (B) destinato a facilitare la mani-
migliore puo© essere ottenuta utilizzando dei gradienti polazione del gel, di uno o piu© spaziatori (C), di una
di pH immobilizzati nei quali le specie tampone, analo- seconda lastra di vetro (D) e di pinze che servono a
ghe agli anfoliti vettori, sono copolimerizzate entro la mantenere insieme i differenti elementi.
matrice del gel. Proteine con pI che differiscono di Gel di poliacrilammide al 7,5 per cento . Disciogliere
sole 0,02 unita© di pH possono essere separate utiliz- 29,1 g di acrilammide R e 0,9 di metilenbisacrilammi-
zando un gel preparato con anfoliti vettori, mentre i de R in 100 ml di acqua R. A 2,5 volumi di questa solu-

100
 Focalizzazione isoelettrica

inoizircserP
zione aggiungere la miscela di anfoliti specificata nella bordo. Chiudere con il coperchio in modo che gli elet-

ilareneG
monografia e portare a 10 volumi con acqua R. Mesco- trodi siano in contatto con gli stoppini (rispettivamente
lare accuratamente e degassare la soluzione. il polo anodico e il polo catodico). Procedere con la
. Stendere il film di poliestere focalizzazione isoelettrica applicando i parametri elet-
trici descritti nella monografia. Interrompere la cor-
Preparazione dello stampo

sulla lastra di vetro inferiore, collocare lo spaziatore,

isilanA id
poi la seconda lastra di vetro e fissare con le pinze. rente quando la migrazione della miscela delle proteine

idoteM
Prima dell'uso, porre la soluzione su un agitatore di riferimento e© stabilizzata. Utilizzare una pinza per
magnetico ed aggiungere 0,25 volumi di una soluzione rimuovere dal gel le strisce utilizzate per la deposizione
(100 g/l) di ammonio persolfato R e 0,25 volumi di tetra- e i due stoppini collegati agli elettrodi. Immergere il
metiletilendiammina R. Versare immediatamente la gel nella soluzione di fissazione per la focalizzazione isoe-

irotinetnoC
/ ilairetaM
soluzione riempiendo lo spazio tra le lastre di vetro lettrica su gel di poliacrilammide R ed incubare a tempe-
dello stampo. ratura ambiente, agitando dolcemente, per 30 min.
Togliere la soluzione, aggiungere 200 ml della soluzione
di decolorazione R ed incubare agitando continuamente
per 1 h. Scolare il gel, aggiungere la soluzione di colora-
zione al Comassie R ed incubare per 30 min. Decolorare

ivittaeR
il gel mediante diffusione passiva con la soluzione di
decolorazione R fino a che le bande siano nettamente
visibili sul fondo chiaro. Annotare la posizione e l'in-
tensita© delle bande dell'elettroforegramma come pre-

itnemogrA
scritto nella monografia.

ilareneG
VARIAZIONI RISPETTO AL METODO GENE-
RALE (SOGGETTE A CONVALIDA)

eifargonoM

ilareneG
Quando si fa riferimento ad un metodo generale sulla
Figura 2.2.54. 1 - Stampo focalizzazione isoelettrica, le variazioni di metodologia
PROCEDURA o di procedura possono essere soggette a convalida.
Queste variazioni possono comprendere:

ehcituecamraF
Smontare lo stampo e, utilizzando il film di poliestere, ^ l'uso di gel su piastra pronti per l'uso, disponibili in

emroF
trasferire il gel sul supporto raffreddato, bagnato con commercio,
alcuni millilitri di un liquido appropriato, facendo
attenzione ad evitare la formazione di bolle d'aria. ^ l'uso di gradienti di pH immobilizzati,
Preparare le soluzioni da esaminare e le soluzioni di ^ l'uso di gel cilindrici,
riferimento come indicato nella monografia. Per la
eiretaM

emirP
deposizione dei campioni, porre sul gel delle strisce di ^ l'uso di gel su piastre di dimensioni diverse, in parti-
carta con dimensioni di 10 mm 5 mm circa, poi
2 colare di gel ultrasottili (0,2 mm),
impregnarle con la quantita© prescritta delle soluzioni.
Se la concentrazione in proteina di una soluzione e© ^ variazioni della procedura di deposizione dei cam-
ehcituecamraF

pioni, in particolare dei volumi deposti o l'uso di

inoizaraperP

troppo bassa, si possono sovrapporre piu© strisce di

ehcificepS

carta (fino a 4). Deporre, in maniera analoga, la quan- maschere di deposito o di stoppini costituiti da
tita© prescritta di una soluzione contenente proteine materiale diverso dalla carta,
con punto isoelettrico noto che serviranno da marcatori ^ variazioni della condizioni di migrazione, in parti-
di pH per tarare il gel. Alcuni protocolli prevedono di colare del campo elettrico, in funzione delle dimen-
ehcitapoemO
inoizaraperP

formare nel gel, al momento della polimerizzazione, sioni del gel e dell'apparecchio, e l'uso di tempi di
dei pozzetti dove deporre le soluzioni anzichë utilizzare migrazione fissati piuttosto che una interpretazione
le strisce di carta. Tagliare due strisce di carta (stoppini) soggettiva della stabilita© della banda,
della stessa lunghezza del gel ed impregnarle con le
soluzioni elettrolitiche: acida per l'anodo ed alcalina ^ l'inclusione di una fase di pre-focalizzazione,
per il catodo. La composizione delle soluzioni anodica ^ l'uso di strumentazione automatica,
ecidnI

e catodica sono riportate nella monografia. Applicare i

due stoppini ai lati del gel ad alcuni millimetri dal ^ l'uso di gel di agarosio.

101
Microscopia elettronica analitica

CONVALIDA DELLE PROCEDURE DI FOCA- Un fenomeno noto come deriva catodica, in cui il gra-
LIZZAZIONE ISOELETTRICA diente di pH si deteriora nel tempo, puo© verificarsi se
la focalizzazione ha una durata troppo lunga. Benchë
Se vengono utilizzati dei metodi alternativi al metodo il fenomeno non sia ancora ben compreso, l'elettroen-
generale, essi devono essere convalidati. Per convali- dosmosi e l'adsorbimento di diossido di carbonio pos-
dare la separazione possono essere utilizzati i seguenti sono essere fattori che portano alla deriva catodica.
criteri: Questo fenomeno si osserva nel momento in cui la pro-
^ formazione di un gradiente di pH stabile avente le teina focalizzata migra fuori della estremita© catodica
caratteristiche desiderate, valutato utilizzando, per del gel. Per correggere questo problema possono essere
esempio, marcatori di pH colorati a punti isoelet- utilizzati i gradienti di pH immobilizzati.
trici noti, Durante la focalizzazione e© importante un raffredda-
^ confronto con l'elettroferogramma fornito con la mento efficace (4 ‘C circa) del letto su cui e© adagiato il
sostanza chimica di riferimento per la preparazione gel. Campi elettrici elevati, usati durante la focalizza-
da esaminare, zione isoelettrica, possono provocare un surriscalda-
^ ogni altro criterio di convalida prescritto nella mento ed influenzarne la qualita© .
monografia.

VARIAZIONI SPECIFICHE DEL METODO

2.2. FU.1. - MICROSCOPIA ELETTRONICA

ANALITICA

GENERALE
Nei suoi schemi generali un microscopio elettronico a
Le variazioni del metodo generale richieste per l'analisi trasmissione e© molto simile ad un microscopio ottico.
di specifiche sostanze possono essere specificate in det- Ciascuno dei due ha una sorgente di illuminazione,
taglio nelle monografie. Queste comprendono: una o piu© lenti condensatore, un obiettivo e una o piu©
^ l'aggiunta di urea nel gel di migrazione (una concen- lenti per ottenere l'ingrandimento finale voluto. La dif-
trazione 3 M e© spesso soddisfacente per mantenere ferenza fondamentale tra i due strumenti consiste
la proteina in soluzione, ma puo© essere usata fino quindi nell'impiego di un fascio di elettroni invece che
ad una concentrazione 8 M), per alcune proteine della radiazione elettromagnetica visibile, il che implica
che precipitano al loro punto isoelettrico. In questo tra l'altro che le lenti, nel caso del microscopio elettro-
caso nella formulazione del gel si aggiunge l'urea nico, sono rappresentate da campi magnetici o elettro-
per mantenere la proteina in soluzione. Se si utilizza statici. I princ|©pi di funzionamento di un microscopio
l'urea si devono usare solo soluzioni preparate di elettronico a trasmissione possono essere schematizzati
recente per prevenire la carbammilazione della pro- come segue. Il fascio elettronico viene emesso dal
teina, catodo, costituito da un filamento di tungsteno portato
^ l'utilizzo di metodi di colorazione alternativi, ad alta temperatura (2600-2800 ‘C) e mantenuto ad un
^ l'uso di additivi per il gel, come detergenti non elevato potenziale negativo rispetto all'anodo posto a
ionici (per es. ottilglucoside) o detergenti anfolitici massa. Un elettrodo ad un potenziale negativo legger-
per prevenire l'aggregazione o la precipitazione mente piu© alto del catodo circonda quest'ultimo ed ha
delle proteine. la funzione di focalizzare il fascio elettronico in modo
che all'uscita dall'anodo questo abbia gia© un buon
grado di collimazione. L'intero sistema, che prende il
ASPETTI DA CONSIDERARE nome di cannone elettronico, e© in grado di produrre un
fascio molto intenso (100-500 mA) e collimato (diame-
I campioni possono essere depositati in qualsiasi area tro minimo di circa 1 m). Il fascio passa quindi attra-
del gel ma in generale si dovrebbero depositare in aree verso la lente condensatore che permette di variare l'in-
dove si suppone che essi si focalizzino. Per proteggere tensita© e la divergenza dell'illuminazione incidente sul-
le proteine da ambienti a pH estremi i campioni non l'oggetto. Il campione da osservare e© posto immediata-
dovrebbero essere depositati in prossimita© degli elet- mente prima del piano focale della lente obiettivo che
trodi. Durante lo sviluppo del metodo l'analista puo© ne produce una immagine ingrandita sul ``piano
provare a depositare la proteina in tre posizioni sul gel oggetto'' della lente proiettore; quest'ultima forma l'im-
(per es. al centro e alle estremita© ); il comportamento di magine finale, ulteriormente ingrandita, su uno
una proteina depositata alle estremita© opposte del gel schermo fluorescente o su una lastra fotografica. Va
puo© non essere identico. sottolineato che nei moderni microscopi elettronici,

102
 Microscopia elettronica analitica

inoizircserP
oltre alla lente proiettore, sono montate una o due altre frazione elettronica possono essere interpretate come

ilareneG
lenti magnetiche, le cosiddette lenti intermedie, le cui sezioni del reticolo reciproco del cristallo osservato, di
combinazioni di lunghezza focale permettono di otte- cui permettono di calcolare alcuni dei parametri retico-
nere una ampia gamma di valori dell'ingrandimento lari. In particolare, dalle distanze R misurate tra i
finale (da 50 a 750000 ). Sono inoltre presenti due
2 2 riflessi presenti sulle figure di diffrazione e© semplice

isilanA id
lenti condensatore con le quali viene realizzato un ottenere, mediante l'equazione:

idoteM
miglior controllo della illuminazione del campione.
In definitiva, la maggior parte dei microscopi elettro- 1= d Ll=R
j j
3
ˆ

nici dispone oggi di cinque o anche sei lenti magnetiche.

La formazione di una immagine elettronica e© dovuta L = lunghezza della camera di diffrazione

irotinetnoC
/ ilairetaM
alla diversa diffusione che subisce il fascio elettronico
incidente nell'attraversare il campione. Parti del cam- l = lunghezza d'onda degli elettroni,

pione di spessore diverso diffondono gli elettroni in le dimensioni d* del reticolo reciproco del cristallo stu-
diverso grado, dando luogo a corrispondenti variazioni diato e, dalle relazioni fra reticolo diretto e reticolo
di contrasto sull'immagine. La capacita© che hanno gli reciproco, i parametri reticolari del cristallo stesso.
elettroni di passare attraverso il campione e© comunque

ivittaeR
molto ridotta, per cui solo campioni sottilissimi, di
spessore inferiore a 0,2 mm, trasmettono un fascio elet-
tronico sufficientemente intenso per produrre una Microanalisi a raggi X

immagine di buona qualita© . Gli attuali microscopi elet-

itnemogrA
tronici a trasmissione dispongono della possibilita© di La microanalisi a raggi X consente di completare l'in-

ilareneG
variare il potenziale di accelerazione degli elettroni formazione ultrastrutturale con quella relativa alla
(in alcuni strumenti fino a 300 kV), in modo da ottenere composizione chimica del campione. I vari elementi
lo stesso grado di contrasto sull'immagine quando sono che lo costituiscono possono essere infatti identificati
esaminati campioni di differente spessore. Poichë la dif- in base alla lunghezza d'onda della radiazione X carat-

eifargonoM
fusione degli elettroni dipende dalla quantita© di materia teristica emessa a seguito dell'interazione con elettroni

ilareneG
che incontrano sul loro percorso, il contrasto sull'im- di alta energia. Il riconoscimento e la misura della
magine rispecchia null'altro che la distribuzione di radiazione emessa dal campione possono essere effet-
materia nel campione, ove per quantita© di materia si tuati mediante sistemi spettroscopici sia a dispersione
intende il prodotto della densita© atomica (atomi per di lunghezza d'onda sia a dispersione di energia.

ehcituecamraF
unita© di volume dell'oggetto osservato) moltiplicato I sistemi a dispersione di lunghezza d'onda sono costi-

emroF
per il suo spessore. In definitiva, l'immagine elettromi- tuiti da uno spettrometro a cristallo e da un contatore
croscopica fornisce informazioni sul campione che non proporzionale. Lo spettrometro a cristallo invia al con-
sono direttamente paragonabili con quelle fornite da tatore una radiazione di ben precisa lunghezza d'onda,
una immagine ottenuta al microscopio ottico, ove il mentre il contatore proporzionale ne misura l'intensita©
contrasto dipende dalla composizione chimica dell'og- contando i fotoni della lunghezza d'onda selezionata,
eiretaM

emirP
getto osservato piuttosto che dalla quantita© di materia che arrivano in esso. Tale sistema di analisi permette di
che lo costituisce. Opportune dotazioni accessorie ren- rivelare fino a 10-16g per elementi con numero atomico
dono oggi possibile l'uso dei microscopi elettronici a uguale o superiore a 11 (sodio), e fino a 10 g per ele-
-14
trasmissione quali strumenti analitici di elevate presta- menti con numero atomico inferiore. Nei sistemi a
ehcituecamraF

zioni. In particolare, la tecnica della diffrazione degli

inoizaraperP

dispersione di energia viene invece utilizzato un conta-

ehcificepS

elettroni permette di ottenere informazioni sulla strut- tore a stato solido in grado di fornire direttamente e
tura cristallina dei campioni, mentre la microanalisi a con elevata risoluzione, un impulso di tensione propor-
raggi X consente di definirne la composizione chimica zionale all'energia del fotone X incidente. Gli impulsi
con una sensibilita© assai elevata. in uscita dal contatore vengono poi amplificati, digita-
ehcitapoemO
inoizaraperP

lizzati ed immagazzinati in un analizzatore multicanale

che fornisce l'intero spettro dell'emissione X del cam-
pione. Tale sistema consente un'analisi spettrale assai
Diffrazione elettronica

Gli elettroni diffusi in modo elastico dal campione for- piu© rapida di quello a dispersione di lunghezza d'onda,
mano, sul secondo piano focale della lente obiettivo, anche se con una risoluzione (capacita© di discriminare
una figura di diffrazione; per osservarla, le lenti succes- due righe dello spettro molto vicine) lievemente infe-
riore e con una minore sensibilita© per la rivelazione
ecidnI

sive all'obiettivo la proiettano, ingrandita, sul piano di

osservazione o sulla lastra fotografica. Le figure di dif- degli elementi con numero atomico inferiore a 11.

103
 2.3 Identificazione

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
2.3. Identificazione . . . . . . . . . . . . . . . . . 107 2.3.3. Identificazione delle fonotiazine me-

idoteM
2.3.1. Reazione di identificazione degli ioni diante cromatogra su strato sottile . 113
e dei gruppi funzionali . . . . . . . . . . . 107 2.3.4. Odore . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113
2.3.2. Identificazione degli oli grassi
mediante cromatogra su strato sottile 112

irotinetnoC
/ ilairetaM
ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Reazioni di identificazione degli ioni e dei gruppi funzionali

inoizircserP
quindi 1 ml di potassio iodobismutato soluzione R. Si

ilareneG
2.3. IDENTIFICAZIONE
forma immediatamente un precipitato arancio o rosso-
2.3.1. REAZIONI DI IDENTIFICAZIONE DEGLI
arancio.
IONI E DEI GRUPPI FUNZIONALI

ALLUMINIO

isilanA id
idoteM
ACETATI Disciogliere circa 15 mg di sostanza in esame in 2 ml di
acqua R o usare 2 ml della prescritta soluzione. Aggiun-
a) Scaldare la sostanza in esame con una eguale quan- gere circa 0,5 ml di acido cloridrico diluito R e circa
tita© di acido ossalico R. Si sviluppano vapori aventi 0,5 ml di tioacetammide reattivo R. Non si forma alcun

irotinetnoC
/ ilairetaM
reazione acida (2.2.4), con l'odore caratteristico di precipitato. Aggiungere goccia a goccia sodio idrossido
acido acetico. soluzione diluita R. Si forma un precipitato bianco gela-
tinoso che si discioglie in eccesso di sodio idrossido solu-
b) Disciogliere circa 30 mg della sostanza in esame in zione diluita R. Aggiungere gradualmente ammonio clo-
3 ml di acqua R o usare 3 ml della soluzione pre- ruro soluzione R. Si riforma un precipitato bianco gela-
scritta. Aggiungere successivamente 0,25 ml di lan- tinoso.

ivittaeR
tanio nitrato soluzione R, 0,1 ml di iodio 0,05 M e
0,05 ml di ammoniaca diluita R 2. Scaldare all'ebol- AMMINE PRIMARIE AROMATICHE
lizione con precauzione. Entro pochi minuti si
forma un precipitato blu o si sviluppa una colora- Acidificare la prescritta soluzione con acido cloridrico
zione blu scura.

itnemogrA
diluito R e aggiungere 0,2 ml di sodio nitrito soluzione R.

ilareneG
Dopo 1 o 2 min, aggiungere 1 ml di -naftolo soluzio-
ne R: si sviluppa una colorazione arancione o rossa
ACETILE intensa e generalmente si forma un precipitato dello
stesso colore.

eifargonoM
Porre in un tubo da saggio di circa 18 mm di diametro

ilareneG
esterno e 180 mm di lunghezza, circa 15 mg di sostanza AMMONIO, SALI
in esame o la prescritta quantita© , e 0,15 ml di acido
fosforico R. Chiudere il tubo da saggio con un tappo Aggiungere 0,2 g di magnesio ossido R alla soluzione
nel quale e© inserito un piccolo tubo da saggio, di circa prescritta; far gorgogliare aria e dirigere il gas che si

ehcituecamraF
100 mm di lunghezza e 10 mm di diametro esterno sviluppa sulla superficie di una miscela di 1 ml di acido

emroF
riempito d'acqua R, che serve da refrigerante. All'estre- cloridrico 0,1 M e 0,05 ml di rosso metile soluzione R: il
mita© del piccolo tubo sospendere una goccia di lantanio colore dell'indicatore vira al giallo; per aggiunta di
nitrato soluzione R . Eccetto che per sostanze difficil- 1 ml di una soluzione, preparata di recente, di sodio
mente idrolizzabili mettere l'apparecchio per 5 min in cobaltinitrito R si forma un precipitato giallo.
un b.m. e togliere il piccolo tubo da saggio. Rimuovere
eiretaM

emirP
la goccia e mescolarla su una piastra con 0,05 ml di AMMONIO E BASI VOLATILI, SALI
iodio 0,01 M; aggiungere al bordo 0,05 ml di ammoniaca
diluita R2. Dopo uno o due minuti si sviluppa nella Disciogliere circa 20 mg della sostanza in esame in 2 ml
zona di contatto delle due gocce una colorazione blu; il di acqua R, o usare 2 ml della soluzione prescritta.
ehcituecamraF
inoizaraperP

colore si intensifica e persiste per un breve tempo. Aggiungere 2 ml di sodio idrossido soluzione diluita R.
ehcificepS

Nel caso di sostanze difficilmente idrolizzabili scaldare la Riscaldando la soluzione si sviluppano vapori identifi-
cabili dall'odore e dalla reazione alcalina (2.2.4).
miscela lentamente fino all'ebollizione su fiamma
diretta e quindi operare secondo le indicazioni sopra
riportate. ANTIMONIO
ehcitapoemO
inoizaraperP

Disciogliere circa 10 mg della sostanza in esame in

una soluzione di 0,5 g di potassio e sodio tartrato R, in
ALCALOIDI 10 ml di acqua R scaldando leggermente, e lasciar raf-
freddare; a 2 ml di questa soluzione aggiungere, goccia
Disciogliere in 5 ml di acqua R qualche milligrammo di a goccia, sodio solfuro soluzione R: si forma un precipi-
ecidnI

sostanza in esame o la quantita© prescritta, aggiungere tato rosso-arancio solubile in sodio idrossido soluzione
acido cloridrico diluito R fino a reazione acida (2.2.4) e diluita R.

107
Reazioni di identificazione degli ioni e dei gruppi funzionali

ARGENTO di una soluzione (100 g/l) di tiourea R a 5 ml

Disciogliere circa 10 mg della sostanza in esame in della soluzione ottenuta. Si forma una colorazione
10 ml di acqua R o usare 10 ml della soluzione pre- arancione-giallastra o un precipitato arancione.
scritta. Aggiungere 0,3 ml di acido cloridrico R1. Si Aggiungere 4 ml di una soluzione (25 g/l) di
forma un precipitato bianco caseoso solubile in 3 ml di sodio fluoruro R. La soluzione non si decolora
ammoniaca diluita R1. nei 30 min successivi.
ARSENICO BROMURI
Riscaldare a b.m. 5 ml della soluzione prescritta con un
eguale volume di ipofosforoso reattivo R. Si forma un a) Disciogliere in 2 ml di acqua R una quantita© di
precipitato bruno. sostanza in esame equivalente a circa 3 mg di ione
bromuro (Br ), o usare 2 ml della soluzione pre-
-
BARBITURATI NON SOSTITUITI ALL'AZOTO scritta. Acidificare con acido nitrico diluito R e
aggiungere 0,4 ml di argento nitrato soluzione R1.
Disciogliere circa 5 mg della sostanza in esame in 3 ml Agitare e lasciare a riposo. Si forma un precipitato
di metanolo R, aggiungere 0,1 ml di una soluzione con- caseoso giallo pallido. Centrifugare e lavare il
tenente 100 g/l di cobalto nitrato R e 100 g/l di calcio precipitato con 3 porzioni ciascuna di 1 ml di
cloruro R. Mescolare e, agitando, aggiungere 0,1 ml di acqua R. Effettuare questa operazione rapida-
sodio idrossido soluzione diluita R. Si forma una colora- mente, al riparo dalla luce viva e non considerando
zione e un precipitato blu-violetto. il fatto che la soluzione sovranatante possa essere
non perfettamente chiara. Sospendere il precipitato
BENZOATI ottenuto in 2 ml di acqua R e aggiungere 1,5 ml
di ammoniaca R. Il precipitato si discioglie con dif-
a) Aggiungere 0,5 ml di ferro(-ico) cloruro soluzio- ficolta© .
ne R1 a 1 ml di soluzione in esame. Si forma un pre-
cipitato giallo-pallido, solubile in etere R. b) Introdurre in una piccola provetta una quantita©
b) Porre 0,2 g della sostanza in esame, eventualmente di sostanza in esame- equivalente a circa 5 mg di
trattata come indicato nella monografia, in una ione bromuro (Br ) o la quantita© prescritta.
provetta. Umettare con 0,2-0,3 ml di acido solfo- Aggiungere 0,25 ml di acqua R, circa 75 mg di
rico R e scaldare leggermente il fondo della pro- piombo diossido R, 0,25 ml di acido acetico R e agi-
vetta. Sulla parete interna si deposita un sublimato tare leggermente. Asciugare la parete interna della
bianco. parte superiore della provetta con carta da filtro e
lasciare a riposo per 5 min. Preparare una striscia
c) Disciogliere 0,5 g della sostanza in esame in 10 ml di carta da filtro di dimensioni appropriate e
di acqua R o usare 10 ml della soluzione prescritta. impregnarla, per capillarita© , immergendola per
Aggiungere 0,5 ml di acido cloridrico R. Il precipi- una estremita© , in una goccia di fucsina decolorata
tato ottenuto, ricristallizzato da acqua R calda e soluzione R. Introdurre immediatamente questa
seccato nel vuoto, fonde (2.2.14) fra 120 ‘C e 124 ‘C. estremita© nella provetta. A partire dalla parte infe-
riore della striscia impregnata si sviluppa in
BISMUTO 10 s una colorazione violetta che si distingue netta-
a) Aggiungere 10 ml di acido cloridrico diluito R a mente dalla colorazione rossa della fucsina visibile
0,5 g di sostanza in esame o usare 10 ml della solu- all'estremita© superiore della parte bagnata della
zione prescritta. Scaldare all'ebollizione per 1 min, stessa striscia.
raffreddare e, se necessario, filtrare. Aggiungere
20 ml di acqua R a 1 ml della soluzione ottenuta. CALCIO
Si forma un precipitato bianco o giallino che, per
aggiunta di 0,05-0,1 ml di sodio solfuro soluzione R, a) A 0,2 ml di una soluzione neutra, contenente una
diventa bruno. quantita© di sostanza in esame equivalente a circa
b) Aggiungere 10 ml di acido nitrico diluito R a circa 0,2 mg di ione calcio (Ca2+) per ml o a 0,2 ml della
45 mg della sostanza in esame o usare 10 ml della soluzione prescritta, aggiungere 0,5 ml di una solu-
soluzione prescritta; bollire per 1 min, lasciar raf- zione (2 g/l) di gliossalidrossianile R in alcool R,
freddare e, se necessario, filtrare. Aggiungere 2 ml 0,2 ml di sodio idrossido soluzione diluita R e 0,2 ml

108
 Reazioni di identificazione degli ioni e dei gruppi funzionali

inoizircserP
di sodio carbonato soluzione R. Agitare con 1-2 ml soluzione sovranatante possa non diventare perfet-

ilareneG
di cloroformio R e aggiungere 1-2 ml di acqua R. tamente limpida. Sospendere il precipitato in 2 ml
Lo strato cloroformico si colora in rosso. di acqua R e aggiungere 1,5 ml di ammoniaca R. Il
b) Disciogliere circa 20 mg di sostanza in esame o la precipitato si discioglie facilmente con la possibile
quantita© prescritta in 5 ml di acido acetico R. eccezione di poche particelle grandi che si disciol-

isilanA id
Aggiungere 0,5 ml di potassio ferrocianuro solu- gono lentamente.

idoteM
zione R. La soluzione resta limpida. Aggiungere b) Introdurre in una provetta una quantita© di
circa 50 mg di ammonio cloruro R. Si forma un pre- sostanza in-esame equivalente a circa 15 mg di ione
cipitato bianco, cristallino. cloruro (Cl ) o alla quantita© prescritta. Aggiungere
0,2 g di potassio dicromato R e 1 ml di acido solfo-

irotinetnoC
/ ilairetaM
CARBONATI E BICARBONATI rico R. Porre sull'orlo della provetta una striscia di
carta da filtro impregnata con 0,1 ml di difenilcar-
Introdurre in una provetta 0,1 g della sostanza in esame bazide soluzione R. La carta si colora in rosso-vio-
e sospenderla in 2 ml di acqua R o usare 2 ml della letto. La carta impregnata non deve venire in con-
soluzione prescritta. Aggiungere 3 ml di acido acetico tatto con il potassio dicromato.
diluito R. Chiudere immediatamente la provetta con

ivittaeR
un tappo attraversato da un tubo di vetro piegato due ESTERI
volte ad angolo retto. La soluzione o sospensione
diventa effervescente e sviluppa un gas inodore ed Aggiungere 0,5 ml di una soluzione (70 g /l) di idrossil-
incolore. ammina cloridrato R in metanolo R e 0,5 ml di una
Scaldare leggermente e far gorgogliare il gas in 5 ml circa 30 mg(100
soluzione g /l) di potassio idrossido R in alcool R a

itnemogrA
ilareneG
della sostanza in esame o alla quantita© pre-
di bario idrossido soluzione R. Si forma un preci- scritta. Scaldare all'ebollizione,
pitato bianco che si discioglie in un eccesso di acido con acido cloridrico diluito R eraffreddare,aggiungere
acidificare
0,2 ml di
cloridrico R1. ferro(-ico) cloruro soluzione R1 diluita dieci volte. Si

eifargonoM
sviluppa una colorazione rossa o rosso-bluastra.

ilareneG
CITRATI
Disciogliere una quantita© di sostanza in esame, equiva- FERRO
lente a circa 50 mg di acido citrico in 5 ml di acqua R o a) Disciogliere una quantita© di sostanza in esame
usare 5 ml della soluzione prescritta. Aggiungere

ehcituecamraF
0,5 ml di acido solforico R e 1 ml di potassio permanga- equivalente a circa 10 mg di ione ferro (Fe2+) in
1 ml di acqua R o usare 1 ml della soluzione

emroF
nato soluzione R. Riscaldare fino a scomparsa della prescritta. Aggiungere 1 ml di potassio ferricianuro
colorazione del permanganato. Aggiungere 0,5 ml di soluzione R. Si forma un precipitato blu, insolubile
una soluzione (100 g/l) di sodio nitroprussiato R in acido in acido cloridrico diluito R.
solforico diluito R e 4 g di acido solfammico R. Alcaliniz- b) Disciogliere una quantita© di sostanza in esame
zare aggiungendo, goccia a goccia, ammoniaca concen-
eiretaM
equivalente a circa 1 mg di ione ferro (Fe3+) in

emirP
trata R fino a dissoluzione completa dell'acido solfam- 30 ml di acqua R. A 3 ml di questa soluzione o a
mico. L'aggiunta di un eccesso di ammoniaca concen- 3 ml della soluzione prescritta, aggiungere 1 ml di
trata R provoca la comparsa di una colorazione acido cloridrico diluito R e 1 ml di potassio tiocia-
violacea tendente al blu-violetto.
ehcituecamraF

nato soluzione R. La soluzione si colora in rosso.

inoizaraperP

ehcificepS

CLORURI Prelevare due frazioni da 1 ml della miscela; ad

una aggiungere 5 ml di alcool isoamilico R o 5 ml
a) Disciogliere in 2 ml di acqua R una quantita© di di etere R, agitare e lasciare a riposo: la fase orga-
sostanza in- esame equivalente a circa 2 mg di ione nica si colora in rosa; all'altra porzione aggiungere
ehcitapoemO

2 ml di mercurio(-ico) cloruro soluzione R: la colo-

inoizaraperP

cloruro (Cl ) o usare 2 ml della soluzione prescritta.

Acidificare con acido nitrico diluito R e aggiungere razione rossa scompare.
0,4 ml di argento nitrato soluzione R1. Agitare e c) Disciogliere in 1 ml di acqua R una quantita© di
lasciare a riposo. Si forma un precipitato bianco sostanza in esame equivalente almeno a 1 mg di
caseoso. Centrifugare e lavare il precipitato con ione ferro (Fe3+) o usare 1 ml della prescritta solu-
tre porzioni, ciascuna di 1 ml, di acqua R. Effet- zione. Aggiungere 1 ml di potassio ferrocianuro
tuare questa operazione rapidamente, a riparo soluzione R. Si forma un precipitato blu, insolubile
ecidnI

dalla luce viva e non considerando il fatto che la in 5 ml di acido cloridrico diluito R.

109
Reazioni di identificazione degli ioni e dei gruppi funzionali

FOSFATI (ORTOFOSFATI) MAGNESIO

a) Aggiungere 5 ml di argento nitrato soluzione R1 a Disciogliere circa 15 mg della sostanza in esame in 2 ml
5 ml della soluzione prescritta, neutralizzata se di acqua R o usare 2 ml della soluzione prescritta.
necessario. Si forma un precipitato giallo la cui Aggiungere 1 ml di ammoniaca diluita R1. Si forma un
colorazione non si modifica per ebollizione e che precipitato bianco che si discioglie per aggiunta di 1 ml
si discioglie per aggiunta di ammoniaca R. di ammonio cloruro soluzione R. Aggiungere 1 ml di
b) Mescolare 2 ml di molibdovanadico reattivo R con sodio fosfato dibasico soluzione R. Si forma un precipi-
1 ml della soluzione prescritta. Si forma una colo- tato bianco cristallino.
razione gialla.
MERCURIO
IODURI
a) Deporre su una lamina di rame ben tersa circa
a) Disciogliere una quantita© di sostanza in- esame 0,1 ml di una soluzione della sostanza in esame. Si
equivalente a circa 4 mg di ione ioduro (I ) in 2 ml forma una macchia grigia scura che diventa bril-
di acqua R o usare 2 ml della soluzione prescritta. lante per sfregamento. Seccare la lamina di rame e
Acidificare con acido nitrico diluito R e aggiungere riscaldare in una provetta. La macchia scompare.
0,4 ml di argento nitrato soluzione R1. Agitare e b) Aggiungere sodio idrossido soluzione diluita R alla
lasciare a riposo. Si forma un precipitato caseoso soluzione prescritta fino a reazione fortemente
giallo pallido. Centrifugare e lavare il precipitato alcalina (2.2.4). Si forma un precipitato denso e
con tre porzioni, ciascuna di 1 ml, di acqua R. giallo (sali mercurici).
Effettuare questa operazione rapidamente, a riparo
dalla luce viva e non considerando il fatto che la
soluzione sovranatante possa non diventare perfet- NITRATI
tamente limpida. Sospendere il precipitato in 2 ml
di acqua R e aggiungere 1,5 ml di ammoniaca R. Il Aggiungere la sostanza in esame polverizzata, in quan-
precipitato non si discioglie. tita© equivalente a circa 1 mg di nitrato (NO3-) o la quan-
b) Aggiungere 0,5 ml di acido solforico diluito R, tita© di sostanza prescritta, ad una miscela di 0,1 ml di
0,1 ml di potassio dicromato soluzione R, 2 ml di nitrobenzene R e 0,2 ml di acido solforico R. Lasciare a
acqua R e 2 ml di cloroformio R a 0,2 ml di solu- riposo per 5 min, raffreddare in acqua ghiacciata, e
zione della sostanza in- esame contenente circa aggiungere lentamente, agitando, 5 ml di acqua R e
5 mg di ione ioduro (I ) per millilitro o a 0,2 ml 5 ml di sodio idrossido soluzione concentrata R. Aggiun-
della soluzione prescritta. Agitare per qualche gere 5 ml di acetone R. Agitare e lasciare a riposo. Lo
secondo e lasciare a riposo. La fase cloroformica strato superiore si colora in violetto intenso.
si colora in violetto o in rosso-violetto.

LATTATI PIOMBO
Disciogliere in 5 ml di acqua R una quantita© della a) Disciogliere circa 0,1 g della sostanza in esame in
1 ml di acido acetico R o usare 1 ml della soluzione
sostanza in esame equivalente a circa 5 mg di acido lat- prescritta. Aggiungere 2 ml di potassio cromato
tico o usare 5 ml della soluzione prescritta. Aggiungere soluzione R. Si forma un precipitato giallo, solubile
1 ml di acqua di bromo R e 0,5 ml di acido fosforico in 2 ml di sodio idrossido soluzione concentrata R.
diluito R. Scaldare a b.m. fino a scomparsa della colora-
zione, agitando, di tanto in tanto, con una bacchetta di b) Disciogliere 50 mg della sostanza in esame in 1 ml
vetro. Aggiungere 4 g di ammonio solfato R e mescolare. di acido acetico R o usare 1 ml della soluzione pre-
Aggiungere goccia a goccia, senza mescolare, 0,2 ml di scritta. Aggiungere 10 ml di acqua R e 0,2 ml di
una soluzione (100 g/l) di sodio nitroprussiato R in acido potassio ioduro soluzione R. Si forma un precipitato
solforico diluito R e, sempre senza mescolare, 1 ml di giallo. Scaldare all'ebollizione per 1-2 min. Il preci-
ammoniaca concentrata R. Lasciare a riposo per pitato si discioglie. Lasciare raffreddare. Il precipi-
30 min. Alla superficie di separazione dei due liquidi si tato ricompare sotto forma di lamine gialle bril-
forma un anello verde scuro. lanti.

110
 Reazioni di identificazione degli ioni e dei gruppi funzionali

inoizircserP
POTASSIO sfregare, se necessario, le pareti della provetta con

ilareneG
una bacchetta di vetro. Si forma un precipitato
a) Disciogliere 0,1 g della sostanza in esame in 2 ml di bianco e pesante.
acqua R o usare 2 ml della soluzione prescritta. b) Disciogliere una quantita© della sostanza in esame
Aggiungere 1 ml di sodio carbonato soluzione R e equivalente a circa 2 mg di ione sodio (Na+) in
riscaldare. Non si forma alcun precipitato. Aggiun-

isilanA id
0,5 ml di acqua R o usare 0,5 ml della soluzione

idoteM
gere 0,05 ml di sodio solfuro soluzione R alla solu- prescritta. Aggiungere 1,5 ml di metossifenilacetico
zione calda. Non si forma alcun precipitato. Raf- reattivo R e raffreddare in acqua ghiacciata per
freddare in acqua ghiacciata, aggiungere 2 ml di 30 min. Si forma un precipitato cristallino, bianco,
una soluzione (150 g/l) di acido tartarico R e voluminoso. Porre in acqua a 20 ‘C e agitare per
lasciare a riposo. Si forma un precipitato bianco

irotinetnoC
/ ilairetaM
cristallino. 5 min. Il precipitato non si scioglie. Aggiungere
b) Disciogliere circa 40 mg della sostanza in esame in 1 ml di ammoniaca diluita R1. Il precipitato si
1 ml di acqua R o usare 1 ml della soluzione pre- scioglie completamente. Aggiungere 1 ml di ammo-
scritta. Aggiungere 1 ml di acido acetico diluito R e nio carbonato soluzione R. Non si forma alcun
1 ml di una soluzione (100 g/l) di sodio cobaltini- precipitato.

ivittaeR
trito R preparata al momento dell'uso. Si forma
subito un precipitato giallo o giallo aranciato. SOLFATI
a) Disciogliere circa 45 mg della sostanza in esame in
SALICILATI 5 ml di acqua R o usare 5 ml della soluzione pre-

itnemogrA
scritta. Aggiungere 1 ml di acido cloridrico diluito R

ilareneG
a) Aggiungere 0,5 ml di ferro(-ico) cloruro solu- e 1 ml di bario cloruro soluzione R1. Si forma un
zione R1 a 1 ml della soluzione prescritta. Si forma precipitato bianco.
una colorazione violetta che persiste dopo
aggiunta di 0,1 ml di acido acetico R. b) Aggiungere 0,1 ml di iodio 0,05 M alla sospensione
b) Disciogliere 0,5 g della sostanza in esame in 10 ml ottenuta durante la reazione precedente (a). La

eifargonoM
sospensione resta gialla (distinzione dai solfiti e

ilareneG
di acqua R o usare 10 ml della soluzione prescritta. ditioniti) ma si decolora per aggiunta, goccia a goc-
Aggiungere 0,5 ml di acido cloridrico R. Il precipi- cia, di stagno(-oso) cloruro soluzione R (distinzione
tato cristallino bianco ottenuto dopo cristallizza- dagli iodati). Scaldare all'ebollizione la miscela.
zione da acqua R calda ed essiccamento, ha un Non si forma alcun precipitato colorato (distin-

ehcituecamraF
punto di fusione (2.2.14) compreso nel vuoto fra zione dai seleniati e dai tungstati).
156 ‘C e 161 ‘C.

emroF
SILICATI TARTRATI
In un crogiolo di piombo o di platino mescolare, con un a) Disciogliere circa 15 mg della sostanza in esame
filo di rame, la quantita© prescritta della sostanza in in 5 ml di acqua R o usare 5 ml della soluzione
eiretaM

emirP
esame con circa 10 mg di sodio fluoruro R e qualche goc- prescritta. Aggiungere 0,05 ml di una soluzione
cia di acido solforico R, in modo da formare un impasto (10 g/l) di ferro(-oso) solfato R e 0,05 ml di idrogeno
fluido. Coprire il crogiolo con una lamina sottile di pla- perossido soluzione diluita R. Si forma una colora-
stica trasparente nella cui faccia inferiore sia sospesa zione gialla che svanisce rapidamente. Quando
ehcituecamraF
inoizaraperP

una goccia di acqua R e scaldare leggermente. Attorno questa colorazione e© svanita aggiungere, goccia a
ehcificepS

alla goccia di acqua si forma rapidamente un anello goccia, sodio idrossido soluzione diluita R. Si forma
bianco. una colorazione blu intensa.
b) Aggiungere 0,1 ml di una soluzione (100 g/l)
SODIO di potassio bromuro R, 0,1 ml di una soluzione
ehcitapoemO
inoizaraperP

(20 g/l) di resorcinolo R e 3 ml di acido solforico R

a) Disciogliere 0,1 g di sostanza in esame in 2 ml di a 0,1 ml della soluzione della sostanza in esame
acqua R o usare 2 ml della soluzione prescritta. contenente una quantita© di sostanza, equivalente a
Aggiungere 2 ml di una soluzione (150 g/l) di potas- circa 15 mg di acido tartarico per millilitro o a
sio carbonato R e scaldare all'ebollizione. Non si 0,1 ml della soluzione prescritta. Scaldare a b.m.
forma alcun precipitato. Aggiungere 4 ml di potas- per 5-10 min. Si forma, a caldo, una colorazione
ecidnI

sio piroantimoniato soluzione R e scaldare all'ebolli- blu scura. Lasciar raffreddare e diluire la soluzione
zione. Lasciar raffreddare in acqua ghiacciata e con acqua R. Il colore vira al rosso.

111
Identificazione degli oli grassi mediante cromatografia su strato sottile

XANTINE 2.3.2. IDENTIFICAZIONE DEGLI OLI GRASSI

MEDIANTE CROMATOGRAFIA SU

Aggiungere 0,1 ml di idrogeno perossido soluzione con- STRATO SOTTILE

centrata R e 0,3 ml di acido cloridrico diluito R a pochi Esaminare mediante cromatografia su strato sottile
milligrammi della sostanza in esame o alla quantita© (2.2.27), usando lastre adatte di un adeguato gel di silice
prescritta. Evaporare a secco a b.m. fino ad ottenere ottadecilsililato per cromatografia su strato sottile ad
un residuo rosso-giallastro. Aggiungere 0,1 ml di alta efficienza.
ammoniaca diluita R 2. Il colore del residuo vira al Soluzione in esame. Se non diversamente prescritto,
rosso-violetto. disciogliere circa 20 mg (una goccia) dell'olio grasso in
3 ml di diclorometano R.
Soluzione di riferimento. Disciogliere circa 20 mg (una
ZINCO goccia) di olio di mais R in 3 ml di diclorometano R.
Deporre separatamente sulla lastra 1 ml di ciascuna
soluzione. Eluire due volte per un percorso di 0,5 cm
Disciogliere circa 0,1 g della sostanza in esame in 5 ml usando etere R. Eluire due volte per un percorso di
di acqua R o usare 5 ml della soluzione prescritta. 8 cm, usando una miscela di 20 volumi di dicloro-
Aggiungere 0,2 ml di sodio idrossido soluzione concen- metano R, 40 volumi di acido acetico glaciale R e
trata R. Si forma un precipitato bianco che si discioglie 50 volumi di acetone R. Lasciar seccare la lastra all'aria
per aggiunta di 2 ml di sodio idrossido soluzione concen- e spruzzare con una soluzione (100 g/l) di acido
trata R. Aggiungere 10 ml di ammonio cloruro soluzione fosfomolibdico R in alcool R. Scaldare la lastra a 120 ‘C
R. La soluzione resta limpida. Aggiungere 0,1 ml di per circa 3 min ed esaminare alla luce del giorno.
sodio solfuro soluzione R. Si forma un precipitato bianco Il cromatogramma ottenuto presenta delle macchie
fioccoso. caratteristiche paragonabili a quelle in Figura 2.3.2.-1.

Figura 2.3.2.-1.- Cromatogrammi caratteristici per l'identificazione degli oli grassi

1. Olio di arachidi 5. Olio di mandorla 9. Olio di colza (esente da acido erucico)

2. Olio di oliva 6. Olio di semi di soia 10. Olio di germe di grano
3. Olio di sesamo 7. Olio di semi di girasole
4. Olio di mais 8. Olio di colza

112
 Odore

inoizircserP
1 ml di dietilammina R, saturata con fenossietanolo R

ilareneG
2.3.3. IDENTIFICAZIONE DELLE FENOTIAZINE

MEDIANTE CROMATOGRAFIA SU (per es. aggiungere circa da 3 a 4 ml di fenossietanolo R

STRATO SOTTILE alla suddetta miscela di solventi fino ad intorbidamento
Esaminare mediante cromatografia su strato sottile persistente anche dopo agitazione; decantare ed utiliz-
(2.2.27) usando kieselguhr G R come sostanza di rivesti- zare il liquido sovranatante, anche se torbido). Esporre
la lastra alla luce ultravioletta di 365 nm ed esaminarla

isilanA id
mento. Impregnare la lastra ponendola nella vasca

idoteM
chiusa contenente una quantita© sufficiente della miscela dopo qualche minuto. La macchia nel cromatogramma
impregnante costituita da una soluzione contenente il ottenuto con la soluzione in esame e© simile per posi-
10 per cento V/V di fenossietanolo R e 50 g/l di polieti- zione, fluorescenza e dimensione alla macchia nel cro-
lenglicole 300 R in acetone R, in modo che sia immersa matogramma ottenuto con la soluzione di riferimento.

irotinetnoC
Spruzzare con una soluzione (10 per cento V/V) di acido

/ ilairetaM
per circa 5 mm. Quando la linea del fronte della miscela solforico R in alcool R. La macchia nel cromatogramma
di impregnazione ha percorso una distanza di almeno ottenuto con la soluzione in esame ha lo stesso colore
17 cm, estrarre la lastra e usarla immediatamente per di quella nel cromatogramma ottenuto con la soluzione
la cromatografia. Effettuare la cromatografia nella di riferimento. Le due macchie, osservate per almeno
stessa direzione dell'impregnazione. 20 min, presentano la stessa stabilita© .
Soluzione in esame. Disciogliere 20 mg della sostanza in

ivittaeR
esame in cloroformio R e diluire a 10 ml con lo stesso
solvente.
Soluzione di riferimento. Disciogliere 20 mg della corri- 2.3.4. ODORE

spondente sostanza chimica di riferimento (SCR) in

itnemogrA
ilareneG
cloroformio R e diluire a 10 ml con lo stesso solvente. Deporre 0,5 - 2,0 g della sostanza in esame come
Deporre separatamente sulla lastra 2 ml di ciascuna strato sottile, su un vetrino da orologio da 6 cm a 8 cm
soluzione ed eluire al buio per un percorso di 15 cm di diametro. Dopo 15 min, determinare l'odore o
usando una miscela di 50 ml di etere di petrolio R e verificarne l'assenza.

eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI

113
 2.4 Saggi limite

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
2.4. Saggi limite . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 117 2.4.16. Ceneri totali . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

idoteM
123
2.4.1. Ammonio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 117 2.4.17. Alluminio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 123
2.4.2. Arsenico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 117 2.4.18. Formaldeide libera . . . . . . . . . . . . . 123
2.4.2. Calcio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 118 2.4.19. Impurezze alcaline negli oli grassi . . 124
2.4.4. Cloruri . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 118 2.4.21. Oli estranei negli oli grassi mediante

irotinetnoC
/ ilairetaM
2.4.5. Fluoruri . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 118 cromatografia su strato sottile . . . . . 124
2.4.6. Magnesio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 119 2.4.22. Composizione in acidi grassi
2.4.7. Magnesio e metalli alcalino terrosi . 119 mediante gas cromatografia . . . . . . 124
2.4.8. Metalli pesanti . . . . . . . . . . . . . . . . . 119 2.4.23. Steroli negli oli grassi . . . . . . . . . . . 127
2.4.9. Ferro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122 2.4.24. Identificazione e controllo dei sol-
2.4.10. Piombo negli zuccheri . . . . . . . . . . . 122

ivittaeR
2.4.11. Fosfati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122 venti residui . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 129
2.4.12. Potassio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122 2.4.25. Etilene ossido e diossano . . . . . . . . . 136
2.4.13. Solfati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122 2.4.26. N,N-Dimetilanilina . . . . . . . . . . . . . 137
2.4.14. Ceneri solforiche . . . . . . . . . . . . . . . 122 2.4.27. Nichel negli oli vegetali idrogenati . 138
2.4.28. Acido 2-etilesanoico . . . . . . . . . . . .

itnemogrA
2.4.15. Nichel nei polioli . . . . . . . . . . . . . . . 123 139

ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Arsenico

inoizircserP
tubo ha una superficie smerigliata perfettamente piana,

ilareneG
2.4. SAGGI LIMITE
perpendicolare all'asse del tubo. Un secondo tubo di
vetro, dello stesso diametro interno e lungo 30 mm con
una simile superficie piana smerigliata, viene posto a
2.4.1. AMMONIO

Salvo diversa indicazione utilizzare il metodo A. contatto con il primo e tenuto fermo con due molle.
Inserire nel tubo inferiore 50-60 mg di piombo acetato

isilanA id
idoteM
METODO A cotone R senza comprimere o un piccolo tampone di
Disciogliere in 14 ml di acqua R contenuta in una pro- cotone e una porzione arrotolata di piombo acetato car-
vetta la quantita© prescritta della sostanza in esame, tina R, di 50-60 mg. Tra le due superfici piane dei tubi
alcalinizzare, se necessario, con sodio idrossido solu- porre un disco o un piccolo quadrato di mercurio(-ico)

irotinetnoC
bromuro cartina R sufficiente a coprire l'orifizio del

/ ilairetaM
zione diluita R e diluire a 15 ml con acqua R. Aggiun- tubo (15 mm 15 mm).
gere alla soluzione 0,3 ml di potassio tetraiodomercurato 2

soluzione alcalina R. Preparare una soluzione di riferi-

mento mescolando 5 ml di acqua R, 0,3 ml di potassio
tetraiodomercurato soluzione alcalina R e 10 ml di solu-
zione standard di ammonio (NH4 1 ppm) R. Chiudere le

ivittaeR
provette.
Dopo 5 min, l'eventuale colorazione gialla della solu-
zione in esame non e© piu© intensa di quella della solu-
zione di riferimento.

itnemogrA
ilareneG
METODO B
Introdurre in una beuta da 25 ml con tappo in polieti-
lene la prescritta quantita© della sostanza in esame fine-
mente polverizzata e discioglierla o sospenderla in 1 ml

eifargonoM
di acqua R. Aggiungere 0,30 g di magnesio ossido

ilareneG
pesante R. Chiudere immediatamente dopo aver posto
sotto il tappo un quadrato di 5 mm di argento manga-
nese cartina R impregnato con poche gocce di acqua R.
Agitare con movimento rotatorio evitando fuoruscite

ehcituecamraF
di liquido e lasciare a riposo a 40 ‘C per 30 min. Se
l'argento manganese cartina R presenta una colorazione

emroF
grigia, essa non e© piu© intensa di quella prodotta su un Figura 2.4.2.-1. - Apparecchio per il saggio limite A
eguale quadrato di argento manganese cartina R trattato per l'arsenico
nello stesso modo utilizzando una soluzione di riferi- Dimensioni in millimetri
mento, preparata contemporaneamente e nelle stesse
condizioni con il prescritto volume di soluzione stan-
eiretaM

emirP
dard di ammonio (NH4 1 ppm) R, 1 ml di acqua R e Nella beuta disciogliere in 25 ml di acqua R la prescritta
quantita© della sostanza in esame o nel caso di una
0,30 g di magnesio ossido pesante R. soluzione, aggiustare il prescritto volume a 25 ml con
acqua R. Aggiungere 15 ml di acido cloridrico R, 0,1 ml
ehcituecamraF

di stagno(-oso) cloruro soluzione R e 5 ml di potassio

inoizaraperP

ehcificepS

2.4.2. ARSENICO ioduro soluzione R, lasciare a riposo per 15 min ed intro-

METODO A durre 5 g di zinco attivato R. Riunire immediatamente
L'apparecchio (vedi Figura 2.4.2.-1) e© costituito da una leundue parti dell'apparecchio ed immergere la beuta in
beuta da 100 ml chiusa con un tappo a smeriglio, al gas di ad bagno acqua ad una temperatura che permetta
ehcitapoemO

munito di un tubo di vetro lungo circa 200 mm e del soluzione di riferimentouniformemente.

svilupparsi Preparare una
inoizaraperP

diametro interno di 5 mm. La parte inferiore del tubo 1 ml di soluzione standard nello stesso modo, utilizzando
e© affilata in modo che il diametro interno sia di diluita a 25 ml con acqua R. di arsenico (As 1 ppm) R,
1,0 mm; 15 mm al di sopra della sua estremita© , il tubo
presenta un foro laterale del diametro di 2-3 mm. Dopo almeno 2 h, la macchia eventualmente formatasi
Quando il tubo viene posizionato nel tappo, il foro late- sulla carta di mercurio bromuro utilizzato per la solu-
ecidnI

rale si dovrebbe trovare almeno 3 mm al di sotto della zione in esame non e© piu© intensa di quella ottenuta sulla
superficie inferiore del tappo. La parte superiore del carta utilizzata per la soluzione di riferimento.

117
Fluoruri

METODO B ebollizione (146 ‘C). Scaldare il generatore di vapore

Introdurre la prescritta quantita© della sostanza in d'acqua e distillare raccogliendo il distillato in una
esame in una provetta contenente 4 ml di acido clori- beuta da 100 ml contenente 0,3 ml di sodio idrossido
drico R e circa 5 mg di potassio ioduro R ed aggiungere 0,1 M e 0,1 ml di fenolftaleina soluzione R. Mantenere
3 ml di ipofosforoso reattivo R. Scaldare la miscela a un volume costante (20 ml) nel tubo durante la distilla-
b.m. per 15 min., agitandola di tanto in tanto Prepa- zione ed assicurarsi che il distillato resti alcalino
rare una soluzione di riferimento (lo standard) nello aggiungendo, se necessario, sodio idrossido 0,1 M.
stesso modo, utilizzando 0,5 ml di soluzione standard di Diluire il distillato a 100 ml con acqua R (soluzione in
arsenico (As 10 ppm) R. esame). Preparare per distillazione nello stesso modo,
una soluzione di riferimento sostituendo la sostanza
Dopo il riscaldamento a b.m. l'eventuale colorazione in esame con 5 ml di soluzione standard di fluoruro
della soluzione della sostanza in esame non e© piu© (F 10 ppm) R. Introdurre in due cilindri con tappo a
intensa di quella della soluzione di riferimento. smeriglio, 20 ml della soluzione in esame, 20 ml della
soluzione di riferimento e 5 ml di acido amminometilali-
2.4.3. CALCIO
zarindiacetico reattivo R.
Tutte le soluzioni usate in questo saggio devono essere
preparate con acqua distillata R. Dopo 20 min l'eventuale colorazione blu della solu-
Aggiungere 1 ml di ammonio ossalato soluzione R zione in esame (all'inizio colorata in rosso) non e© piu©
intensa di quella della soluzione di riferimento.
a 0,2 ml di soluzione alcoolica standard di calcio
(Ca 100 ppm) R. Dopo 1 min, aggiungere una miscela
di 1 ml di acido acetico diluito R e 15 ml di soluzione
contenente la prescritta quantita© della sostanza in
esame ed agitare. Preparare una soluzione di riferi-
mento, nello stesso modo utilizzando una miscela
di 10 ml di soluzione acquosa standard di calcio
(Ca 10 ppm) R, 1 ml di acido acetico diluito R e 5 ml di
acqua R distillata.
Dopo 15 min l'eventuale opalescenza nella soluzione in
esame non e© piu© intensa di quella della soluzione di rife-
rimento.
2.4.4. CLORURI

Aggiungere 1 ml di acido nitrico diluito R a 15 ml della

prescritta soluzione e versare la miscela, in una sola
volta, in una provetta contenente 1 ml di argento nitrato
soluzione R2. Preparare una soluzione di riferimento
nello stesso modo utilizzando 10 ml di soluzione stan-
dard di cloruro (Cl 5 ppm) R e 5 ml di acqua R. Osser-
vare le provette lateralmente su fondo nero.
Dopo riposo per 5 min al riparo dalla luce, l'eventuale
opalescenza nella soluzione in esame non e© piu© intensa
di quella della soluzione di riferimento.
2.4.5. FLUORURI

Introdurre nel tubo interno dell'apparecchio (vedi

Figura 2.4.5.-1) la prescritta quantita© di sostanza in
esame, 0,1 g di sabbia R lavata con acido e 20 ml di
una miscela di uguali volumi di acido solforico R ed Figura 2.4.5.- 1.- Apparecchio per il saggio limite
acqua R. Scaldare la guaina esterna del tubo contenente dei fluoruri
tetracloroetano R, e mantenere alla temperatura di Dimensioni in millimetri

118
 Metalli pesanti

inoizircserP
come prescritto, e 2 ml della soluzione della sostanza

ilareneG
2.4.6. MAGNESIO

in esame. Preparare un bianco usando una miscela di

Aggiungere 0,1 g di disodio tetraborato R a 10 ml della 10 ml di acqua R e 2 ml della soluzione in esame. Con-
prescritta soluzione aggiustando il pH della soluzione, frontata con il bianco la soluzione di riferimento pre-
se necessario, tra 8,8 e 9,2 con acido cloridrico diluito R senta una leggera colorazione bruna.
o sodio idrossido soluzione diluita R. Agitare con due

isilanA id
Dopo 2 min, l'eventuale colorazione bruna della solu-

idoteM
porzioni, ciascuna di 5 ml, di una soluzione (1 g/l) di zione in esame non e© piu© intensa di quella della solu-
idrossichinolina R in cloroformio R per 1 min ogni volta. zione di riferimento.
Lasciare a riposo, separare ed eliminare la fase orga-
nica. Alla soluzione acquosa aggiungere 0,4 ml di butil- METODO B

irotinetnoC
ammina R e 0,1 ml di trietanolammina R. Aggiustare il

/ ilairetaM
pH della soluzione, se necessario, tra 10,5 e 11,5. Disciogliere la sostanza in esame in un solvente orga-
Aggiungere 4 ml della soluzione cloroformica di idros- nico contenente una minima percentuale di acqua (per
sichinolina, agitare per 1 min, lasciare a riposo e sepa- es. diossano contenente il 15 per cento di acqua o ace-
rare. Per il confronto utilizzare la fase inferiore. Prepa- tone contenente il 15 per cento di acqua).
rare una soluzione di riferimento nello stesso modo uti- Aggiungere 2 ml di tampone soluzione a pH 3,5 R a

ivittaeR
lizzando una miscela di 1 ml di soluzione standard di 12 ml della prescritta soluzione, mescolare ed aggiun-
magnesio (Mg 10 ppm) R e 9 ml di acqua R. gere ad 1,2 ml di tioacetammide reattivo R mescolando
L'eventuale colorazione della soluzione ottenuta dalla immediatamente. Preparare una soluzione di riferi-
sostanza in esame non e© piu© intensa di quella della solu- mento nello stesso modo, utilizzando una miscela di
10 ml di soluzione standard di piombo (Pb 1 ppm o

itnemogrA
ilareneG
zione di riferimento. 2 ppm) R come prescritto e 2 ml della soluzione in
esame. Preparare la soluzione standard di piombo (Pb
1 ppm o 2 ppm) diluendo la soluzione standard di
2.4.7. MAGNESIO E METALLI ALCALINO TER- piombo (Pb 100 ppm) R con il solvente usato per la
sostanza in esame. Preparare un bianco usando una

eifargonoM

ilareneG
ROSI

miscela di 10 ml del solvente usato per la sostanza in

Aggiungere 0,1 g di idrossilammina cloridrato R, 10 ml esame e 2 ml della sostanza in esame. Confrontata con
di tampone ammonio cloruro soluzione a pH 10,0 R, il bianco la soluzione di riferimento presenta una leg-
1 ml di zinco solfato 0,1 M e circa 15 mg di nero mor- gera colorazione bruna.

ehcituecamraF
dente 11 miscela composta R a 200 ml di acqua R. Scal- Dopo 2 min, l'eventuale colorazione bruna della solu-
dare a circa 40 ‘C e titolare con sodio edetato 0,01 M

emroF
zione in esame non e© piu© intensa di quella della solu-
fino al viraggio dal violetto a blu netto. A questa solu- zione di riferimento.
zione aggiungere la prescritta quantita© della sostanza
in esame disciolta in 100 ml di acqua R o usare la pre- METODO C
scritta soluzione. Se la colorazione della soluzione vira
Introdurre la prescritta quantita© della sostanza in
eiretaM
al violetto, titolare con sodio edetato 0,01 M fino a

emirP
ricomparsa della colorazione blu netta. esame (2 g al massimo) in un crogiolo di silice con
4 ml di una soluzione (250 g/l) di magnesio solfato R in
Il volume di sodio edetato 0,01 M utilizzato nella acido solforico diluito R. Mescolare con una bacchetta
seconda titolazione non deve eccedere la prescritta di vetro e scaldare con precauzione. Se la miscela e©
ehcituecamraF
inoizaraperP

quantita© . liquida, evaporare lentamente a secco a b.m. Progressi-

ehcificepS

vamente scaldare fino a carbonizzazione e continuare

fino ad ottenere un residuo quasi bianco o al massimo
grigiastro. Effettuare la calcinazione ad una tempera-
tura non superiore a 800 ‘C. Lasciar raffreddare, umet-
2.4.8. METALLI PESANTI
ehcitapoemO
inoizaraperP

METODO A tare il residuo con alcune gocce di acido solforico

diluito R, evaporare, calcinare di nuovo e lasciar raf-
Aggiungere 2 ml di tampone soluzione a pH 3,5 R a freddare. Il periodo totale di calcinazione non deve
12 ml della prescritta soluzione acquosa. Mescolare essere superiore a 2 h. Riprendere il residuo per due
ed aggiungere ad 1,2 ml di tioacetammide reattivo R volte con 5 ml di acido cloridrico diluito R. Aggiungere
mescolando immediatamente. Preparare una soluzione 0,1 ml di fenolftaleina soluzione R e poi ammoniaca con-
ecidnI

di riferimento nello stesso modo utilizzando 10 ml di centrata R fino ad ottenere una colorazione rosa. Raf-
soluzione standard di piombo (Pb 1 ppm o 2 ppm) R, freddare, aggiungere acido acetico glaciale R fino a

119
Metalli pesanti

decolorazione ed ancora 0,5 ml in eccesso. Se necessa- per la soluzione in esame, calcinare, riprendere con
rio filtrare e lavare il filtro ed infine diluire a 20 ml con acido cloridrico, aggiungere ammoniaca e poi acido
acqua R. A 12 ml della soluzione cos|© ottenuta, aggiun- acetico. Diluire a 20 ml con acqua R. A 10 ml della
gere 2 ml di tampone soluzione a pH 3,5 R. Mescolare, soluzione aggiungere 2 ml della soluzione ottenuta
aggiungere ad 1,2 ml di tioacetammide reattivo R e con la sostanza in esame e 2 ml di tampone soluzione a
mescolare immediatamente. Preparare una soluzione pH 3,5 R. Mescolare, aggiungere ad 1,2 ml di tioace-
di riferimento utilizzando 4 ml di una soluzione (250 tammide reattivo R e mescolare immediatamente.
g/l) di magnesio solfato R in acido solforico diluito R ed Preparare un bianco usando una miscela di 10 ml di
il prescritto volume di soluzione standard di piombo acqua R e 2 ml della soluzione ottenuta con la sostanza
(Pb 10 ppm) R. Nelle stesse condizioni descritte per la in esame. Confrontata con il bianco, la soluzione di
soluzione in esame calcinare, riprendere con acido clo- riferimento presenta una leggera colorazione bruna.
ridrico, aggiungere ammoniaca e quindi acido acetico. Dopo 2 min, l'eventuale colorazione bruna della solu-
Diluire a 20 ml con acqua R. A 10 ml della soluzione, zione della sostanza in esame non e© piu© intensa di
aggiungere 2 ml della soluzione ottenuta con la quella della soluzione di riferimento.
sostanza in esame e 2 ml di tampone soluzione a
pH 3,5 R. Mescolare, aggiungere ad 1,2 ml di tioacetam-
mide reattivo R e mescolare immediatamente. Preparare
un bianco usando una miscela di 10 ml di acqua R METODO E
e 2 ml della soluzione ottenuta con la sostanza in
esame. Confrontata con il bianco, la soluzione di riferi- Disciogliere la prescritta quantita© della sostanza in
mento presenta una leggera colorazione bruna. esame in 30 ml di acqua R o nel volume indicato.
Dopo 2 min, l'eventuale colorazione bruna della solu- Preparare l'apparecchio di filtrazione adattando l'im-
zione della sostanza in esame non e© piu© intensa di boccatura di una siringa da 50 ml, senza il pistone, ad
quella della soluzione di riferimento. un supporto contenente sulla placca una membrana fil-
trante (porosita© 3 mm) e al di sopra un pre-filtro (vedi
Figura 2.4.8.-1).
METODO D Trasferire la soluzione in esame nel corpo della siringa,
inserire il pistone e comprimerla regolarmente fino a
In un crogiolo di silice mescolare intimamente 0,5 g di filtrazione completa. Aprire il supporto, togliere il pre-
magnesio ossido R1 con la prescritta quantita© della filtro e verificare che sulla membrana filtrante non vi
sostanza in esame. Calcinare al rosso fino ad ottenere siano impurezze, altrimenti sostituirla e ripetere l'ope-
una massa omogenea, da bianca a bianco-grigiastra. razione nelle stesse condizioni.
Se dopo 30 min di calcinazione la miscela resta colo- Aggiungere 2 ml di tampone soluzione a pH 3,5 R e
rata, lasciar raffreddare, mescolare con una bacchetta 1,2 ml di tioacetammide reattivo R al prefiltrato o al
di vetro e ripetere la calcinazione. Se necessario ripetere prescritto volume di prefiltrato. Mescolare, lasciare a
l'operazione. Scaldare a 800 ‘C per circa 1 h. Ripren- riposo per 10 min e filtrare di nuovo, come descritto
dere il residuo con due porzioni, ciascuna di 5 ml, di precedentemente, ma invertendo l'ordine dei filtri,
una miscela di volumi uguali di acido cloridrico R1 ed in modo che il liquido attraversi la membrana filtrante
acqua R. Aggiungere 0,1 ml di fenolftaleina soluzione R prima del pre-filtro (vedi Figura 2.4.8.-1). La filtra-
e poi ammoniaca concentrata R fino ad ottenere una zione deve essere effettuata lentamente e uniforme-
colorazione rosa. Raffreddare, aggiungere acido acetico mente premendo leggermente, ma in maniera costante,
glaciale R fino a decolorazione e ancora 0,5 ml in sul pistone della siringa. Dopo filtrazione completa
eccesso. Se necessario filtrare, lavare il filtro ed infine aprire il supporto, rimuovere la membrana filtrante
diluire a 20 ml con acqua R. A 12 ml della soluzione ed asciugare con carta da filtro. Preparare una solu-
cos|© ottenuta, aggiungere 2 ml di tampone soluzione a zione di riferimento nello stesso modo utilizzando il
pH 3,5 R. Mescolare, aggiungere ad 1,2 ml di tioacetam- prescritto volume della soluzione standard di piombo
mide reattivo R e mescolare immediatamente. Preparare (Pb 1 ppm) R.
una soluzione di riferimento come segue. Aggiungere
la quantita© prescritta di soluzione standard di piombo La colorazione della macchia ottenuta con la soluzione
(Pb 10 ppm) R a 0,5 g di magnesio ossido R1. Essiccare in esame non e© piu© intensa di quella ottenuta con la
in stufa a 100-105 ‘C. Nelle stesse condizioni descritte soluzione di riferimento.

120
 Metalli pesanti

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
idoteM

irotinetnoC
/ ilairetaM
ivittaeR
itnemogrA
Figura 2.4.8.-1. - Apparecchiatura per il saggio limite E per i metalli pesanti

ilareneG
Dimensioni in millimetri

METODO F cautela 5 ml di acqua R ed esaminare il colore della

eifargonoM
soluzione. Se la soluzione e© gialla aggiungere con cau-

ilareneG
Soluzione in esame. Introdurre la quantita© prescritta o il tela 1 ml di idrogeno perossido soluzione concentrata R
volume della sostanza in esame in un pallone Kjeldahl ed evaporare di nuovo fino a comparsa di fumi bianchi
da 100 ml, pulito ed asciutto (puo© essere usato un pal- e densi ed a ridurre il volume della soluzione a 2-3 ml.
lone da 300 ml se la reazione provoca una schiuma Se la soluzione e© ancora gialla, ripetere l'aggiunta di

ehcituecamraF
abbondante). Fissare il pallone ad un angolo di 45‘. 5 ml di acqua R e 1 ml di idrogeno perossido soluzione

emroF
Se la sostanza in esame e© solida aggiungere un volume concentrata R fino a che la soluzione diventa incolore.
di una miscela di 8 ml di acido solforico R e 10 ml di Raffreddare, diluire con cautela con acqua R e trasfe-
acido nitrico R sufficiente ad umettare accuratamente rire, lavando, in un tubo da 50 ml per il confronto del
la sostanza; se la sostanza in esame e© un liquido, colore, assicurandosi che il volume finale non sia
aggiungere alcuni millilitri di una miscela di 8 ml di superiore a 25 ml. Usando una cartina indicatore con
eiretaM

emirP
acido solforico R e 10 ml di acido nitrico R. Scaldare leg- breve intervallo di pH, portare il pH della soluzione a
germente fino a quando inizia la reazione; lasciare svol- 3,0- 4,0 con ammoniaca concentrata R1 (se si desidera
gere la reazione ed aggiungere ulteriori porzioni della si puo© usare ammoniaca diluita R1 qualora ci si avvicini
stessa miscela di acidi, scaldare dopo ogni aggiunta, all'intervallo specificato), diluire a 40 ml con acqua R e
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

fino a che e© stato aggiunto un totale di 18 ml della mescolare. Aggiungere 2 ml di tampone soluzione a
miscela di acidi. Aumentare il calore e bollire legger- pH 3,5 R e 1,2 ml di tioacetammide reattivo R. Mesco-
mente fino a che la soluzione scurisce. Raffreddare, lare immediatamente. Diluire a 50 ml con acqua R
aggiungere 2 ml di acido nitrico R e scaldare di nuovo e mescolare. Preparare una soluzione di riferimento
fino a che la soluzione scurisce. Continuare il riscalda- nello stesso modo e nello stesso momento usando
ehcitapoemO
inoizaraperP

mento seguito dall'aggiunta di acido nitrico R fino a il volume prescritto di soluzione standard di piombo
persistenza della stessa colorazione scura.; poi scaldare (Pb 10 ppm) R.
fortemente fino alla comparsa di fumi bianchi e densi.
Raffreddare, aggiungere con cautela 5 ml di acqua R, Esaminare le soluzioni verticalmente su fondo chiaro.
bollire leggermente fino a comparsa di fumi bianchi e Dopo 2 min la colorazione bruna della soluzione in
densi e continuare a riscaldare per ridurre il volume esame non deve essere piu© intensa di quella della solu-
ecidnI

della soluzione a 2-3 ml. Raffreddare, aggiungere con zione di riferimento.

121
Ceneri solforiche

2.4.9. FERRO 2.4.12. POTASSIO

Disciogliere in acqua R, la prescritta quantita© della Aggiungere 2 ml di una soluzione (10 g/l) di sodio
sostanza in esame e diluire a 10 ml o con lo stesso sol- tetrafenilborato R, preparata di recente, a 10 ml della
vente oppure usare 10 ml della prescritta soluzione. prescritta soluzione. Preparare una soluzione di riferi-
Aggiungere 2 ml di una soluzione (200 g/l) di acido mento, nello stesso modo, utilizzando una miscela di
citrico R e 0,1 ml di acido tioglicolico R. Mescolare, 5 ml di soluzione standard di potassio (K 20 ppm) R e
alcalinizzare con ammoniaca R e diluire a 20 ml con 5 ml di acqua R.
acqua R. Preparare una soluzione di riferimento nello
stesso modo utilizzando 10 ml di soluzione standard di Dopo 5 min, l'eventuale opalescenza della soluzione in
ferro (Fe 1 ppm) R. esame non e© piu© intensa di quella della soluzione di rife-
Dopo 5 min l'eventuale colorazione rosa della solu- rimento.
zione in esame non e© piu© intensa di quella della solu-
zione di riferimento. 2.4.13. SOLFATI

2.4.10. PIOMBO NEGLI ZUCCHERI

Tutte le soluzioni usate in questo saggio devono essere
Determinare il piombo mediante spettrometria di preparate con acqua distillata R.
assorbimento atomico (Metodo II, 2.2.23). Aggiungere 1 ml di una soluzione (250 g/l) di bario
Soluzione in esame. Disciogliere 20,0 g della sostanza in cloruro R a 1,5 ml di soluzione standard di solfato
esame in una miscela di volumi uguali di acido acetico (SO4 10 ppm) R1. Agitare e lasciare a riposo per 1 min.
diluito R ed acqua R e diluire a 100,0 ml con la stessa Aggiungere 15 ml della soluzione in esame e 0,5 ml di
miscela di solventi. Aggiungere 2,0 ml di una soluzione acido acetico R. Preparare una soluzione di riferimento
satura (circa 10 g/l) di ammonio pirrolidinditiocarbam- nello stesso modo, usando 15 ml della soluzione stan-
mato R e 10,0 ml di metilisobutilchetone R, agitando dard di solfato (SO4 10 ppm) R al posto della soluzione
per 30 s al riparo dalla luce viva. Lasciare separare le in esame.
fasi e utilizzare quella metilisobutilchetonica. Dopo 5 min l'eventuale opalescenza della soluzione in
Soluzioni di riferimento. Preparare tre soluzioni di rife- esame non e© piu© intensa di quella della soluzione di rife-
rimento nello stesso modo della soluzione in esame ma rimento.
aggiungendo, rispettivamente, 0,5 ml, 1,0 ml e 1,5 ml di
soluzione standard di piombo (Pb 10 ppm) R oltre a
20,0 g della sostanza in esame. 2.4.14. CENERI SOLFORICHE

Azzerare lo strumento con metilisobutilchetone R trat-

tato come descritto per la soluzione in esame, senza Riscaldare a 600 50 ‘C, per 30 min, un crogiolo di
6

l'aggiunta della sostanza in esame. Misurare l'assor- platino, porcellana o quarzo, lasciar raffreddare in un
banza a 283,3 nm usando come sorgente di radiazione essicatore su gel di silice e pesare. Introdurre nel cro-
una lampada a catodo cavo al piombo ed una fiamma giolo la prescritta quanita© della sostanza in esame e
aria-acetilene. pesare. Umettare la sostanza con una piccola quantita©
La sostanza in esame contiene non piu© di 0,5 ppm di di acido solforico R (generalmente 1 ml) e riscaldare dol-
piombo, se non diversamente prescritto. cemente alla piu© bassa temperatura possibile fino a
che il campione e© completamente carbonizzato. Dopo
raffreddamento, bagnare il residuo con una piccola
2.4.11. FOSFATI
quantita© di acido solforico R, riscaldare dolcemente fino
Aggiungere 4 ml di solfomolibdico reattivo R3 a 100 ml a cessazione dello sviluppo di fumi bianchi, quindi
di soluzione preparata e, se necessario, neutralizzata riscaldare a 600 50 ‘C fino a che il residuo e© comple-
6

come prescritto. Agitare ed aggiungere 0,1 ml di sta- tamente incenerito. Garantire che non si producano
gno(-oso) cloruro soluzione R1. Preparare una soluzione fiamme durante l'intero procedimento. Lasciar raffred-
di riferimento, nello stesso modo, utilizzando 2 ml di dare il crogiolo in un essiccatore, su gel di silice, pesarlo
soluzione standard di fosfato (PO4 5 ppm) R e 98 ml di nuovamente e calcolare la massa residua.
acqua R. Confrontare, dopo 10 min, i colori usando Se la massa del residuo cos|© ottenuta supera il limite
20 ml di ciascuna soluzione. prescritto, continuare l'ignizione, come indicato prece-
L'eventuale colorazione della soluzione in esame non e© dentemente, fino a massa costante, a meno che non sia
piu© intensa di quella della soluzione di riferimento. prescritto diversamente.

122
 Formaldeide libera

inoizircserP
Preparare un bianco nello stesso modo utilizzando la

ilareneG
2.4.15. NICHEL NEI POLIOLI

prescritta soluzione.
Determinare il nichel mediante spettrometria di assor- Misurare l'intensita© della fluorescenza (2.2.21) della
bimento atomico (Metodo II, 2.2.23). soluzione in esame (I1), della soluzione di riferimento
Soluzione in esame. Disciogliere 20,0 g della sostanza in (I2) e del bianco (I3) con un'eccitazione a 392 nm e un
esame in una miscela di volumi uguali di acido acetico

isilanA id
filtro secondario con una banda di trasmissione cen-

idoteM
diluito R ed acqua R e diluire a 100,0 ml con la stessa trata a 518 nm o un monocromatore regolato alla stessa
miscela di solventi. Aggiungere 2,0 ml di una soluzione lunghezza d'onda.
satura (circa 10 g/l) di ammonio pirrolidinditiocarbam- La fluorescenza (I1 - I3) della soluzione in esame
mato R e 10,0 ml di isobutilmetilchetone R ed agitare non e© superiore a quella della soluzione di riferimento
per 30 s al riparo dalla luce viva. Lasciar separare le fasi

irotinetnoC
/ ilairetaM
ed usare la fase isobutilmetilchetonica. (I2 - I3).
Soluzioni di riferimento. Preparare tre soluzioni di rife-
rimento nello stesso modo della soluzione in esame, 2.4.18. FORMALDEIDE LIBERA

ma aggiungendo, rispettivamente, 0,5 ml, 1,0 ml e Usare il metodo A se non diversamente prescritto. Il
1,5 ml di soluzione standard di nichel (Ni 10 ppm) R metodo B e© adatto per i vaccini ai quali e© stato aggiunto

ivittaeR
oltre a 20,0 g di sostanza in esame. sodio metabisolfito per neutralizzare l'eccesso di for-
Azzerare lo strumento utilizzando isobutilmetil- maldeide.
chetone R trattato come descritto nella preparazione
della soluzione in esame ma senza l'aggiunta della METODO A
sostanza in esame. Misurare l'assorbanza a 232,0 nm

itnemogrA
Per i vaccini per uso umano, preparare una diluizione

ilareneG
utilizzando come sorgente di radiazione una lampada 1 a 10 del vaccino da esaminare. Per le anatossine batte-
a catodo cavo al nichel ed una fiamma aria-acetilene. riche per uso veterinario, preparare una diluizione 1 a
La sostanza in esame non contiene piu© di 1 ppm di 25 del vaccino da esaminare.
nichel, se non diversamente prescritto. Aggiungere 4 ml di acqua R e 5 ml di acetilacetone reat-

eifargonoM
tivo R1 ad 1 ml della diluizione. Immergere la provetta

ilareneG
in un b.m. a 40 ‘C per 40 min. Esaminare le provette
lungo l'asse verticale. La soluzione in esame non e© piu©
2.4.16. CENERI TOTALI

Riscaldare al rosso per 30 min un crogiolo di silice o di intensamente colorata di una soluzione di riferimento
platino, lasciar raffreddare in un essiccatore e pesare. preparata contemporaneamente e nello stesso modo

ehcituecamraF
Se non diversamente prescritto, distribuire uniforme- usando, invece della diluizione del vaccino in esame,

emroF
mente nel crogiolo 1,00 g della sostanza o della droga 1 ml di una diluizione di formaldeide soluzione R conte-
vegetale polverizzata in esame. Essiccare a 100-105 ‘C nente 20 g di formaldeide (CH2O) per millilitro.
l

per 1 h e calcinare fino a massa costante in un forno a

muffola a 600 25 ‘C lasciando raffreddare il crogiolo
6 METODO B
in essiccatore dopo ogni trattamento. Evitare la forma- Aggiungere a 0,5 ml di una diluizione 1 a 100 del vac-
eiretaM

emirP
zione di fiamma durante tutta la procedura. Se dopo cino in esame, 5 ml di una soluzione (0,5 g/l) di metil-
prolungata calcinazione le ceneri contengono ancora benzotiazolone idrazone cloridrato R e 0,05 ml di polisor-
particelle nere, riprendere con acqua calda, filtrare su bato 80 R. Chiudere la provetta, agitare e lasciare a
filtro di carta esente da ceneri e calcinare il residuo e la riposo per 60 min. Aggiungere 1 ml di ferro(-ico) clo-
ehcituecamraF

carta da filtro. Unire il filtrato con le ceneri, evaporare

inoizaraperP

ruro-acido solfammico reattivo R e lasciare a riposo per

ehcificepS

con cautela e calcinare fino a massa costante. 15 min. L'assorbanza (2.2.25) della soluzione, misurata
a 628 nm utilizzando la miscela dei reattivi come
bianco, non e© superiore a quella di una soluzione di
riferimento preparata contemporaneamente e nello
2.4.17. ALLUMINIO
ehcitapoemO
inoizaraperP

Porre la prescritta soluzione in un imbuto separatore ed stesso modo, usando 0,5 ml di una diluizione di formal-
agitare con due porzioni, ciascuna di 20 ml, e quindi deide soluzione R contenente 5 g di formaldeide
l

con ulteriori 10 ml di una soluzione (5 g/l) di idrossichi- (CH2O) per millilitro.

nolina R in cloroformio R. Diluire le soluzioni clorofor- Se il vaccino da esaminare e© una emulsione, separare la
miche riunite a 50,0 ml con cloroformio R (soluzione in fase acquosa nel modo seguente. Aggiungere al vaccino
esame). un uguale volume di isopropile miristato R e mescolare.
ecidnI

Preparare una soluzione di riferimento nello stesso Aggiungere a 3 volumi della miscela 2 volumi di acido
modo utilizzando la prescritta soluzione standard. cloridrico 1 M, 3 volumi di cloroformio R e 4 volumi di

123
Oli estranei negli oli grassi mediante gas cromatografia

una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R, mescolare accu- grassi possono essere ottenuti da una soluzione di
ratamente e centrifugare a 15000 g per 60 min. Racco- sapone preparata durante la determinazione delle
gliere la fase acquosa e misurarne il volume. Usare la sostanze insaponificabili.
fase acquosa per il saggio della formaldeide descritto Soluzione in esame. Disciogliere in 4 ml di cloroformio R
precedentemente, aggiustando la concentrazione della 40 mg della miscela di acidi grassi ottenuta dalla
formaldeide nella soluzione di riferimento per tenere sostanza in esame.
conto della diluizione del vaccino durante la separa- Soluzione di riferimento. Disciogliere in 4 ml clorofor-
zione delle fasi. Se la procedura descritta non permette mio R 40 mg della miscela di acidi grassi ottenuta da
di separare la fase acquosa aggiungere 100 g/l di poli- una miscela di 19 volumi di olio di mais R e 1 volume
sorbato 20 R alla soluzione di sodio cloruro e ripetere di olio di colza R.
la procedura centrifugando a 22500 g.
Deporre separatamente sulla lastra 3 ml di ciascuna
soluzione. Eluire per un percorso di 8 cm usando una
2.4.19. IMPUREZZE ALCALINE NEGLI OLI miscela di 10 volumi di acqua R e 90 volumi di acido
GRASSI
acetico glaciale R. Seccare la lastra a 110 ‘C per
In una provetta mescolare 10 ml di acetone R, distillato 10 min. Lasciar raffreddare, se non diversamente pre-
di recente e 0,3 ml di acqua R ed aggiungere 0,05 ml scritto, porre la lastra in una vasca cromatografica,
di una soluzione (0,4 g/l) di blu bromofenolo R in con un idoneo coperchio ermetico, che e© stata prece-
alcool R. Se necessario, neutralizzare con acido clori- dentemente saturata con vapori di iodio ponendo
drico 0,01 M o con sodio idrossido 0,01 M. Aggiungere iodio R in un cristallizzatore sul fondo della vasca.
10 ml dell'olio in esame, agitare e lasciare a riposo. Dopo un po' di tempo diventano visibili delle macchie
Non piu© di 0,1 ml di acido cloridrico 0,01 M sono richie- marroni o marroni giallastre. Rimuovere la lastra e
sti per il viraggio al giallo dello strato superiore. lasciar riposare per alcuni minuti. Quando il colore
marrone del fondo scompare, spruzzare con amido solu-
zione R. Appaiono delle macchie blu che possono
diventare marroni all'essiccamento e di nuovo diven-
tare blu dopo spruzzamento con acqua R. Il cromato-
2.4.21. OLI ESTRANEI NEGLI OLI GRASSI

gramma ottenuto con la soluzione in esame presenta

MEDIANTE CROMATOGRAFIA SU

sempre una macchia con un Rf di circa 0,5 (acido

STRATO SOTTILE

Esaminare mediante cromatografia su strato sottile oleico) e una macchia con un Rf di circa 0,65 (acido
(2.2.27), usando kieselguhr G R come sostanza di rivesti- linoleico) corrispondenti alle macchie nel cromato-
mento. Impregnare una lastra ponendola in una vasca gramma ottenuto con la soluzione di riferimento.
cromatografica contenente la quantita© necessaria di Con alcuni oli puo© essere presente una macchia con un
una miscela di 10 volumi di paraffina liquida R e Rf di circa 0,75 (acido linolenico). Per confronto con la
90 volumi di etere di petrolio R in modo che si immerga macchia nel cromatogramma ottenuto con la soluzione
per almeno 5 mm al di sotto della superficie del liquido. di riferimento, verificare l'assenza di una macchia con
Quando la miscela di impregnazione ha percorso una un Rf di circa 0,25 (acido erucico) nel cromatogramma
distanza di almeno 12 cm dal lato inferiore della lastra, ottenuto con la soluzione in esame.
rimuovere la lastra e lasciar evaporare il solvente per
5 min. Effettuare la cromatografia nella stessa dire-
zione della impregnazione. 2.4.22. OLI ESTRANEI NEGLI

MEDIANTE GAS CROMATOGRAFIA

OLI GRASSI

Preparazione della miscela di acidi grassi. Riscaldare,

per 45 min con un refrigerante a ricadere, 2 g di olio Il saggio per gli oli estranei si effettua sugli esteri meti-
con 30 ml di potassio idrossido soluzione alcoolica lici degli acidi grassi contenuti nell'olio in esame.
0,5 M. Aggiungere 50 ml di acqua R, lasciar raffred-
dare, trasferire in un imbuto separatore ed estrarre con METODO A
tre porzioni, ciascuna di 50 ml, di etere R. Scartare gli
estratti eterei, acidificare la fase acquosa con acido Questo metodo non e© applicabile agli oli che conten
cloridrico R ed estrarre con tre porzioni, ciascuna di gono gliceridi di acidi grassi con un gruppo epossi-,
50 ml, di etere R. Riunire gli estratti eterei e lavare con idroepossi-, ciclopropilico o ciclopropenico, o a quelli che
tre porzioni, ciascuna di 10 ml, di acqua R; eliminare le contengono in grande quantita© acidi grassi il cui numero
acque di lavaggio, seccare l'etere su sodio solfato ani- di atomi di carbonio nella catena e© inferiore a otto, o ad
dro R e filtrare. Evaporare l'etere a b.m. Utilizzare il oli il cui indice di acidita© e© superiore a 2,0.
residuo per preparare la soluzione in esame. Gli acidi Esaminare mediante gas cromatografia (2.2.28).

124
 Oli estranei negli oli grassi mediante gas cromatografia

inoizircserP
Soluzione in esame. Quando prescritto nella monogra- poli [(cianopropil)metilfenilmetilsilossano] R o di

ilareneG
fia, essiccare l'olio in esame prima della metilazione. macrogol 20000 R (dello spessore di 0,1-0,5 mm) o
Pesare 1,0 g di olio in un pallone a fondo tondo con un'altra fase stazionaria adatta,
collo a smeriglio, della capacita© di 25 ml, munito di ^ elio per cromatografia R o idrogeno per cromatogra-
refrigerante a ricadere e di un dispositivo che permette fia R come gas di trasporto ad una velocita© di flusso
di far passare una corrente di gas nel pallone. Aggiun-

isilanA id
di 1,3 ml/min (per una colonna con diametro interno

idoteM
gere 10 ml di metanolo anidro R e 0,2 ml di una solu- di 0,32 mm),
zione (60 g/l) di potassio idrossido R in metanolo R. ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma,
Fissare il refrigerante a ricadere, far passare attraverso
la miscela una corrente di azoto R ad una velocita© di ^ un rapporto di divisione 1:100 o inferiore secondo il
diametro interno della colonna utilizzata (1:50 per

irotinetnoC
circa 50 ml per min. Agitare e scaldare all'ebollizione.

/ ilairetaM
Quando la soluzione e© limpida (generalmente circa una colonna di 0,32 mm).
10 min), continuare a scaldare ancora per 5 min. Mantenere la temperatura della colonna a 160-200 ‘C,
Raffreddare il pallone sotto acqua corrente e trasferire in relazione alla lunghezza e al tipo di colonna utiliz-
il contenuto in un imbuto separatore. Lavare il pallone zata (200 ‘C per una colonna lunga 30 m e rivestita
con 5 ml di eptano R, versare nell'imbuto separatore ed con macrogol 20000 R), quella della camera di iniezione

ivittaeR
agitare. Aggiungere 10 ml di una soluzione (200 g/l) di e del rivelatore a 250 ‘C. Se necessario, o quando pre-
sodio cloruro R ed agitare vigorosamente. Lasciar sepa- scritto, aumentare la temperatura della colonna da
rare le fasi e trasferire lo strato organico in una fiala 170 ‘C a 230 ‘C alla velocita© di 3 ‘C per min (per una
contenente sodio solfato anidro R. Lasciare a riposo e colonna di macrogol 20000 R).
filtrare. Iniettare 0,5 ml della soluzione di riferimento (a).

itnemogrA
ilareneG
Soluzione di riferimento (a). Preparare 0,50 g della Aggiustare la sensibilita© del rivelatore in modo che l'al-
miscela delle sostanze per la taratura con la composi- tezza del picco principale nel cromatogramma ottenuto
zione prescritta (Tabelle 2.4.22) nella monografia speci- sia il 50-70 per cento della scala totale del registratore.
fica (usare la composizione descritta nella Tabella Determinare i tempi di ritenzione dei diversi acidi
2.4.22.1 quando la monografia non menziona una solu-

eifargonoM
grassi che compongono la miscela. Iniettare 1 ml della

ilareneG
zione specifica). Disciogliere in eptano R e diluire a soluzione di riferimento (b) ed aggiustare il rapporto
50,0 ml con lo stesso solvente. segnale/rumore del picco corrispondente al metile miri-
Soluzione di riferimento (b). Diluire 1,0 ml della solu- stato.
zione di riferimento (a) a 10,0 ml con eptano R. Iniettare 0,5-1,0 ml della soluzione in esame. Registrare i

ehcituecamraF
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito cromatogrammi per un tempo pari a 2,5 volte il tempo

emroF
usando: di ritenzione del metile oleato. Valutare il cromato-
^ una colonna di vetro o di acciaio inossidabile, lunga gramma come di seguito indicato.
2-3 m e con diametro interno di 2-4 mm, impaccata Quando si usano le miscele per la taratura descritte
con terra d'infusori per gas cromatografia R (125- nelle Tabelle 2.4.22.-1 e 2.4.22.-3 il saggio e© valido
solo se:
eiretaM
200 mm), impregnata con il 5-15 per cento di polieti-

emirP
lenglicole succinato R o di polietilenglicole adipato R, ^ nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di rife-
^ azoto per cromatografia R, come gas di trasporto, ad rimento (a) il numero dei piatti teorici (n) (2.2.28),
una velocita© di flusso di 25 ml/min, calcolato per il picco corrispondente al metile stea-
rato, non e© inferiore a 2000 per la colonna impaccata
ehcituecamraF
inoizaraperP

^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma.

ehcificepS

e a 30000 per la colonna capillare,

Mantenere la temperatura della colonna a 180 ‘C e ^ nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di rife-
quella della camera di iniezione e del rivelatore a rimento (a), la risoluzione (Rs) (2.2.28) tra i picchi
200 ‘C. Se necessario, o quando prescritto, aumentare corrispondenti al metile oleato e al metile stearato
la temperatura da 120 ‘C fino a 200 ‘C alla velocita© di non e© inferiore a 1,25 per la colonna impaccata e a
ehcitapoemO
inoizaraperP

5 ‘C al minuto. 1,8 per quella capillare,

Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito ^ nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di rife-
usando alternativamente: rimento (b) il rapporto segnale/rumore (2.2.28) del
^ una colonna capillare di vetro o di quarzo, (preferi- picco corrispondente al metile miristato non e© infe-
bilmente un tubo aperto con parete rivestita) lunga riore a 5.
ecidnI

10-30 m e con diametro interno di 0,2-0,8 mm, la cui Quando si usa la miscela per la taratura 2 il saggio e©
superficie interna e© rivestita con uno strato di valido solo se:

125
Oli estranei negli oli grassi mediante gas cromatografia

^ nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di rife- METODO B

rimento (a), il numero dei piatti teorici (n) (2.2.28) Questo metodo non e© applicabile agli oli che contengono
calcolato per il picco corrispondente al metile gliceridi di acidi grassi con un gruppo epossi-, idro-
caprato non e© inferiore a 1500 per la colonna impac- epossi-, ciclopropilico o ciclopropenilico o ad oli il cui
cata e a 15000 per quella capillare, indice di acidita© e© superiore a 2,0.
^ nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di rife- Soluzione in esame. Introdurre 0,100 g della sostanza in
rimento (a), la risoluzione (Rs) (2.2.28) tra i picchi esame in un tubo da centrifuga da 10 ml con un tappo
corrispondenti al metile caprilato e al metile caprato a vite. Disciogliere con 1 ml di eptano R e 1 ml di dime-
non e© inferiore a 2 per le colonne impaccate e a 4 tilcarbonato R e mescolare vigorosamente scaldando
per quelle capillari, leggermente (50-60 C). Aggiungere, mentre si scalda
^ nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di rife- ancora, 1 ml di una soluzione (12 g/l) di sodio R in
rimento (b) il rapporto segnale/rumore (2.2.28) del metanolo anidro R, preparato con le precauzioni neces-
picco corrispondente al metile caproato non e© infe- sarie, e mescolare vigorosamente per circa 5 min.
riore a 5. Aggiungere 3 ml di acqua distillata R e mescolare vigo-
rosamente per circa 30 s. Centrifugare per 15 min a
VALUTAZIONE DEI CROMATOGRAMMI 1500 g. Iniettare 1 ml della fase organica.
Soluzione di riferimento e valutazione dei cromato-
Evitare condizioni operative che diano sovrapposizione grammi. Senza prescrizioni specifiche nella singola
dei picchi (presenza di componenti con tempi di riten- monografia, procedere come descritto nel metodo A.
zione vicini, come per esempio, gli acidi linolenico ed Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
arachidico). usando:
Analisiqualitativa. Costruire le curveditaraturausando il - una colonna di silice fusa lunga 30 m e con diametro
cromatogramma ottenuto con la soluzione di taratura e interno di 0,25 mm rivestita con macrogol 20000 R
le indicazioni riportate nellaTabella 2.4.22.-1: (spessore della pellicola 0,25 mm),
a) in condizioni operative isoterme, riportando i loga- - elio per cromatografia R come gas di trasporto ad una
ritmi del tempo di ritenzione ridotto in funzione del velocita© di flusso di 0,9 ml/min,
numero di atomi di carbonio dell'acido grasso; identifi- - un rivelatore a ionizzazione di fiamma,
care i picchi per mezzo della linea retta cos|© ottenuta e - un iniettore con rapporto di divisione (1:100),
della ``lunghezza di catena equivalente'' dei differenti con il seguente programma di temperatura:
picchi. La curva di taratura degli acidi saturi e© una
retta. I logaritmi dei tempi di ritenzione ridotti degli Tempo Temperatura Intervallo

acidi insaturi sono situati su questa linea in punti corri-

Commento
(min) (‘C) (‘C/min)

spondenti a numeri non interi di atomi di carbonio noti Colonna 0 - 15 100 - isoterma
come ``lunghezza di catena equivalente''; 15 - 36 100 225
! 10 gradiente lineare
b) con una programmazione lineare della temperatura, 36 - 61 225 - isoterma
riportando il tempo di ritenzione in funzione del Cameradiiniezione 250
numero di atomi di carbonio dell'acido grasso; effet- Rivelatore 250
tuare l'identificazione facendo riferimento alla curva
di taratura. METODO C
Analisi quantitativa. Utilizzare il metodo di normalizza- Questo metodo non e© applicabile agli oli che contengono
zione nel quale la somma delle aree dei picchi del cro- gliceridi di acidi grassi con gruppi epossi-, idroperossi-,
matogramma, ad eccezione di quella del solvente, corri- aldeidi, chetoni, ciclopropilici e ciclopropenilici, e a com-
sponde al 100 per cento. Utilizzare preferibilmente un posti acetilenici e polinsaturi coniugati perchë provoca la
integratore elettronico. Calcolare la quantita© di ciascun distruzione parziale o completa di questi gruppi.
componente determinando l'area del picco corrispon- Soluzione in esame. Disciogliere 0,10 g della sostanza in
dente come percentuale della somma delle aree di tutti esame in 2 ml di una soluzione (20 g/l) di sodio idrossi-
i picchi. Trascurare i picchi la cui area e© inferiore allo do R in metanolo R in una beuta da 25 ml e bollire sotto
0,05 per cento dell'area totale. un refrigerante a ricadere per 30 min. Aggiungere
In alcuni casi, per esempio in presenza di acidi grassi 2,0 ml di metanolo boro-trifluoruro soluzione R attra-
con un numero di atomi di carbonio uguale o inferiore verso il condensatore e bollire per 30 min. Aggiungere
a 12, i fattori di correzione possono essere prescritti 4 ml di eptano R attraverso il condensatore e bollire
nella singola monografia per convertire l'area del picco per 5 min. Raffreddare e aggiungere 10,0 ml di una
in percentuale (m/m). soluzione satura di sodio cloruro R, agitare per circa

126
 Steroli negli oli grassi

inoizircserP
15 s e aggiungere una quantita© di soluzione satura di

ilareneG
2.4.23. STEROLI NEGLI OLI GRASSI

sodio cloruro R tale che la fase superiore sia portata

nel collo del pallone. Riunire 2 ml della fase superiore, SEPARAZIONE DELLA FRAZIONE STEROLICA
lavare con tre porzioni, ciascuna di 2 ml, di acqua R ed Preparare le sostanze insaponificabili e quindi isolare la
essiccare su sodio solfato anidro R.
Soluzioni di riferimento, procedimento cromatografico e frazione sterolica degli oli grassi mediante cromatogra-

isilanA id
idoteM
valutazione dei cromatogrammi. Senza una prescrizione fia su strato sottile (2.2.27) usando una lastra ricoperta
specifica nella singola monografia, procedere come di uno strato di gel di silice G R dello spessore di 0,3-
descritto nel metodo A. 0,5 mm.
Tabella 2.4.22.-1. Sostanze per la taratura* Soluzione in esame (a). In un pallone da 150 ml

irotinetnoC
/ ilairetaM
munito di un refrigerante a ricadere, porre un volume
Composizione (per cento m/m) di una soluzione (2 g/l) di betulina R in diclorometano R
contenente una quantita© di betulina corrispondente a
Miscela delle seguenti
Lunghezza della
Programma lineare circa il 10 per cento del contenuto di steroli del cam-
pione utilizzato per la determinazione (per esempio
catena equivalente **
Isoterma
sostanze della temperatura

nel caso dell'olio di oliva aggiungere 500 ml di solu-

ivittaeR
(1) (2)

Metile laurato R 12,0 12,0 5 10

Metile miristato R 14,0 14,0 5 15 zione di betulina, nel caso di altri oli vegetali aggiun-
Metile palmitato R
Metile stearato R
16,0
18,0
16,0
18,0
10
20
15
20
gere 1500 ml). Se la monografia richiede il contenuto
Metile arachidato R 20,0 20,0 40 20 dei singoli steroli come percentuale della frazione ste-
Metile oleato R 18,6 18,3 20 20 rolica, l'aggiunta di betulina puo© essere omessa. Eva-

itnemogrA
ilareneG
porare a secco in corrente di azoto R. Aggiungere
5,00 g (m g) della sostanza in esame. Aggiungere 50
Tabella 2.4.22.-2 Sostanze per la taratura* ml di potassio idrossido soluzione alcoolica 2 MR e
m/m) scaldare a b.m. per 1 h, agitando frequentemente. Raf-
freddare a temperatura inferiore a 25 ‘C e trasferire
Composizione (per cento

eifargonoM

ilareneG
Lunghezza della il contenuto del pallone in un imbuto separatore con
Miscela delle seguenti catena equivalente **
Isoterma
Programma lineare

100 ml di acqua R. Agitare con precauzione il liquido

usando tre porzioni, da 100 ml ciascuna, di etere
sostanze della temperatura
(1) (2)

Metile caproato R 6,0 6,0 5 10 esente da perossidi R. Riunire le fasi eteree

Metile caprilato R 8,0 8,0 5 35

ehcituecamraF
Metile caprato R 10,0 10,0 10 35 in un altro imbuto separatore contenente 40 ml di
acqua R, agitare leggermente per alcuni minuti,

emroF
Metile laureato R 12,0 12,0 20 10
Metile miristato R 14,0 14,0 40 10 lasciare separare ed eliminare la fase acquosa. Lavare
piu© volte la fase eterea con diverse porzioni di acqua R,
Tabella 2.4.22.-3 Sostanze per la taratura* da 40 ml ciascuna, finchë la fase acquosa non sia
piu© alcalina alla fenolftaleina. Trasferire la fase eterea

eiretaM
in un pallone tarato lavando l'imbuto separatore con

emirP
Composizione (per cento m/m)
etere esente da perossidi R. Distillare l'etere usando
Lunghezza della
precauzioni appropriate ed aggiungere al residuo
6 ml di acetone R. Eliminare con cautela il solvente
Miscela delle seguenti catena equivalente ** Programma lineare
Isoterma
sostanze della temperatura
ehcituecamraF

in corrente di azoto R. Essiccare a 100-105 ‘C fino a

(1) (2)
inoizaraperP

Metile miristato R 14,0 14,0 5 15

ehcificepS

Metile palminato R 16,0 16,0 10 15 massa costante. Lasciar raffreddare in essiccatore e

Metile stearato R
Metile arachidato R
18,0
20,0
18,0
20,0
15
20
20
15
pesare. Disciogliere il residuo nel minimo volume di
Metile oleato R 18,6 18,3 20 15 diclorometano R.
Metile eicosenoato R 20,2 20,2 10 10 Soluzione in esame (b). Trattare 5,00 g di olio di colza R
ehcitapoemO
inoizaraperP

Metile beenato R 22,0 22,0 10 5

Metile lignocerato R 24,0 24,0 10 5 come descritto per la sostanza in esame a partire dalle
parole ``Aggiungere 50 ml di potassio idrossido soluzione
* Per la gas cromatografia su colonna capillare con sistema di rap-
porto di divisione, si raccomanda di aggiungere nella miscela per la
alcoolica 2 MR''.
taratura il componente della miscela in esame che possiede la catena
piu© lunga.
Soluzione in esame (c). Trattare 5,00 g di olio di gira-
** Questo valore, che e© calcolato usando le curve di taratura, e© dato a sole R come descritto per la sostanza in esame a partire
ecidnI

titolo indicativo per una colonna di polietilenglicole succinato R (1) e dalle parole ``Aggiungere 50 ml di potassio idrossido
per una colonna di macrogol 20000 R (2). soluzione alcolica 2 M''.

127
Steroli negli oli grassi

Soluzione di riferimento. Disciogliere 25 mg di coleste- Lasciare a riposo in un essiccatore su anidride fosforica

rolo R e 10 mg di betulina R in 1 ml di diclorometano R. R per 30 min. Centrifugare se necessario ed utilizzare
Utilizzare una lastra differente per ciascuna soluzione il liquido sopranatante.
in esame. Deporre separatamente come banda di Soluzione di riferimento (b). Agli steroli separati dall'o-
20 mm per 3 mm, 20 ml della soluzione di riferimento e lio di girasole R mediante cromatografia su strato sot-
come bande di 40 mm per 3 mm, 0,4 ml delle soluzioni tile aggiungere, per milligrammo di residuo, 0,02 ml di
in esame (a), (b) e (c). Eluire per un percorso di 18 cm una miscela preparata di recente, di 1 volume di cloro-
usando una miscela di 35 volumi di etere R e 65 volumi trimetilsilano R, 3 volumi di esametildisilazano R e
di esano R. Seccare le lastre in corrente di azoto R. 9 volumi di piridina anidra R. Agitare con precauzione
Spruzzare con una soluzione (2 g/l) di diclorofluore- fino a dissoluzione completa degli steroli. Lasciare a
sceina R in etanolo R ed esaminare alla luce ultravio- riposo in un essiccatore su anidride fosforica per
letta a 254 nm. Il cromatogramma ottenuto con la solu- 30 min. Centrifugare se necessario ed utilizzare il
zione di riferimento presenta bande corrispondenti al liquido sopranatante.
colesterolo e alla betulina. I cromatogrammi ottenuti
con le soluzioni in esame presentano bande con valori
simili per Rf corrispondenti agli steroli. Da ciascuno Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
dei cromatogrammi prelevare un'area della sostanza di usando:
rivestimento corrispondente all'area occupata dalle
bande degli steroli e anche un'area situata a 2-3 mm al ^ una colonna in silice fusa, lunga 20-30 m e con dia-
di sopra e al di sotto delle zone visibili corrispondenti metro interno di 0,25-0,32 mm, rivestita interna-
alla soluzione di riferimento. Porre questi prelievi sepa- mente con poli[metil(95)fenil(5)]silossano R o con
ratamente in tre palloni da 50 ml. Aggiungere a ciascun poli[metil(94)fenil(5)vinil(1)]silossano R (spessore
pallone 15 ml di diclorometano R bollente ed agitare. del film 0,25 mm),
Filtrare ciascuna soluzione su un filtro di vetro a setto
poroso (40) e lavare ciascun filtro con tre porzioni, di ^ idrogeno per cromatografia R come gas di trasporto
15 ml ciascuna, di diclorometano R. Introdurre in tre ad una velocita© di flusso di 30-50 cm per secondo o
diversi palloni tarati il filtrato e i liquidi di lavaggio elio per cromatografia R ad una velocita© di flusso di
ottenuti rispettivamente da ciascun filtro, evaporare a 20-35 cm per secondo. Misurare la velocita© di flusso
secco in corrente di azoto R e pesare. come segue: mantenere le condizioni operative
indicate per la determinazione degli steroli ed iniet-
DETERMINAZIONE DEGLI STEROLI tare 1-3 ml di metano o di propano. Misurare il tempo
Esaminare mediante gas cromatografia (2.2.28). Effet- in secondi necessario al gas per attraversare la
tuare le operazioni al riparo dell'umidita© e preparare le colonna dal momento dell'iniezione alla comparsa
soluzioni immediatamente prima dell'uso. del picco (tM). La velocita© e© data da L/tM, dove L e©
la lunghezza della colonna in centimetri,
Soluzione in esame. Agli steroli separati dalla sostanza
in esame mediante cromatografia su strato sottile ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma,
aggiungere per milligrammo di residuo, 0,02 ml di una ^ un iniettore con rapporto di divisione (1/50 o 1/100).
miscela, preparata di recente, di 1 volume di clorotrime-
tilsilano R, 3 volumi di esametildisilazano R e 9 volumi Mantenere la temperatura della colonna a 260 ‘C,
di piridina anidra R. Agitare con precauzione fino a dis- quella della camera di iniezione a 280 ‘C e quella del
soluzione completa degli steroli. Lasciare a riposo in rivelatore a 290 ‘C.
un essiccatore su anidride fosforica R per 30 min.
Centrifugare se necessario ed utilizzare il liquido sopra- Iniettare 1 ml di ciascuna soluzione.
natante.
Il cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferi-
Soluzione di riferimento (a). A nove parti degli steroli mento (a) presenta quattro picchi principali corrispon-
separati dall'olio di colza R mediante cromatografia su denti al colesterolo, al brassicasterolo, al campesterolo
strato sottile, aggiungere una parte di colesterolo R. e al -sitosterolo e il cromatogramma ottenuto con la
Aggiungere alla miscela, per milligrammo di residuo,
b

soluzione di riferimento (b) presenta quattro picchi

0,02 ml di una miscela preparata di recente, di 1 volume principali corrispondenti al campesterolo, allo stigma-
di clorotrimetilsilano R, 3 volumi di esametildisilaza- sterolo, al -sitosterolo e al 7-stigmasterolo. I tempi
b D

no R e 9 volumi di piridina anidra R. Agitare con pre- di ritenzione degli steroli rispetto al -sitosterolo sono
b

cauzione fino a dissoluzione completa degli steroli. riportati nella Tabella 2.4.23.-1.

128
 Identificazione e controllo dei solventi residui

inoizircserP
Tabella 2.4.23.-1. - Tempi di ritenzione degli steroli

ilareneG
2.4.24. IDENTIFICAZIONE E CONTROLLO DEI

relativi al -sitosterolo SOLVENTI RESIDUI

ottenuti con due differenti colonne

Le procedure di saggio prescritte in questo metodo
Poli[metil(95) Poli[metil(94)
generale possono essere usate:

isilanA id
fenil(5)]- fenil(5)vinil(1)]-

idoteM
silossano silossano

i. per l'identificazione della maggior parte dei sol-

Colesterolo 0,63 0,67 venti residui della Classe 1 e della Classe 2 in una
Brassicasterolo 0,71 0,73 sostanza attiva, in un eccipiente o in un prodotto
24-Metilencolesterolo 0,80 0,82 medicinale se i solventi residui non sono noti;

irotinetnoC
/ ilairetaM
Campesterolo 0,81 0,83 ii. come saggio limite per i solventi della Classe 1 e
Campestanolo 0,82 0,85 della Classe 2 se presenti nella sostanza attiva, nel-
Stigmasterolo 0,87 0,88 l'eccipiente o nel prodotto medicinale;
D7-Campesterolo 0,92 0,93 iii. per la quantificazione dei solventi della Classe 2 se i
5,23-Stigmastadienolo 0,95 0,95 limiti sono superiori a 1000 ppm (0,1 per cento) o

ivittaeR
D

Clerosterolo 0,96 0,96 per la quantificazione dei solventi della Classe 3 se

b-Sitosterolo 1 1 richiesto.
Sitostanolo 1,02 1,02
5-Avenasterolo 1,03 1,03 I solventi residui della Classe 1, della Classe 2 e della
Classe 3 sono elencati nel capitolo generale 5.4. Solventi

itnemogrA
D

ilareneG
D5,24-Stigmastadienolo 1,08 1,08 residui.
D7-Stigmastenolo 1,12 1,12
7-Avenasterolo 1,16 1,16 Sono descritti tre diluenti per la preparazione campione
e le condizioni da applicare per l'iniezione a spazio di
D

Betulina 1,4 1,6

testa del campione gassoso nel sistema cromatografico.

eifargonoM
Sono prescritti due sistemi cromatografici ma si preferi-

ilareneG
Il picco corrispondente allo standard interno (betulina) sce il Sistema A mentre il Sistema B e© usato normal-
deve essere nettamente separato dai picchi degli steroli mente per la conferma dell'identita© . La scelta della pro-
da determinare. cedura per la preparazione del campione dipende dalla
Per il cromatogramma ottenuto con la soluzione in solubilita© della sostanza da esaminare e in alcuni casi

ehcituecamraF
esame identificare i picchi e calcolare il contenuto per dai solventi residui da controllare.
centuale di ciascun sterolo nella frazione sterolica della

emroF
sostanza in esame mediante l'espressione seguente: I solventi residui seguenti non sono rivelati rapida-
A 100 mente nelle condizioni di iniezione a spazio di testa
S 2
descritte: formammide, 2-etossietanolo, 2-metossieta-
nolo, etilenglicole, N-metilpirrolidone e solfolano. Per

eiretaM
A = area del picco corrispondente al componente da il controllo di questi solventi residui dovrebbero essere

emirP
determinare, impiegate altre procedure appropriate.
S = somma delle aree dei picchi corrispondenti ai Quando la procedura e© applicata per dosare quantitati-
componenti indicati nella Tabella 2.4.23.-1. vamente i solventi residui in una sostanza, essa deve
ehcituecamraF
inoizaraperP

Se richiesto nella monografia, calcolare il contenuto essere convalidata.

ehcificepS

di ciascuno sterolo, in milligrammi per 100 g della

sostanza in esame mediante l'espressione seguente:
A ms 100
2 2
PROCEDIMENTO
As m
ehcitapoemO

Esaminare mediante gas cromatografia a spazio di

inoizaraperP

testa statico (2.2.28).

A = area del picco corrispondente al componente da
determinare, Preparazione campione 1 . E' destinata al controllo dei
As = area del picco corrispondente alla betulina, solventi residui delle sostanze solubili in acqua.
m = massa del campione della sostanza in esame in Soluzione campione (1). Disciogliere 0,200 g della
grammi,
ecidnI

sostanza in esame in acqua R e diluire a 20,0 ml con lo

ms = massa della betulina R aggiunta in milligrammi. stesso solvente.

129
Identificazione e controllo dei solventi residui

Preparazione campione 2 . E' destinata al controllo dei Soluzione di riferimento (b) (Classe 2). Introdurre
solventi residui delle sostanze insolubili in acqua. 1,0 ml della soluzione del solvente (b) e 5,0 ml del
diluente appropriato in una fiala da iniezione.
Soluzione campione (2). Disciogliere 0,200 g della Soluzione di riferimento (c). Introdurre 5,0 ml della
sostanza in esame in N,N-dimetilformammide R soluzione campione e 1,0 ml della soluzione del solvente
(DMF) e diluire a 20,0 ml con lo stesso solvente. (c) in una fiala da iniezione.
Preparazione campione 3 . E' destinata al controllo di Soluzione di riferimento (d). Introdurre 1,0 ml della
N,N-dimetilacetammide R e/o N,N-dimetilformam- soluzione del bianco e 5,0 ml del diluente appropriato
mide R, se si conosce o si sospetta che una o entrambe in una fiala da iniezione.
queste sostanze siano presenti nella sostanza da esami- Chiudere le fiale con una membrana di gomma a tenuta,
nare. rivestita di politetrafluoroetilene e fissare con la relativa
Soluzione campione (3). Disciogliere 0,200 g della ghiera in alluminio. Agitare per rendere omogenea la
sostanza in esame in 1,3-dimetil-2-imidazolidinone R soluzione.
(DMI) e diluire a 20,0 ml con lo stesso solvente. Si possono usare le seguenti condizioni a spazio di testa
statico:
In alcuni casi nessuna delle procedure di preparazione
sopra riportata e© appropriata. In questo caso si deve
dimostrare che il diluente da usare per la preparazione
Procedura di preparazione del campione

della soluzione campione e le condizioni a spazio di

Parametri operativi

testa statico sono adeguate.

1 2 3

Temperatura di equilibrio (‘C) 80 105 80

Soluzione del solvente (a). Diluire 1,0 ml di solventi resi- Tempo di equilibrio (min) 60 45 45
duo di Classe 1 soluzione SCR a 100,0 ml con acqua R. Temperatura della linea di trasfe- 85 110 105
Diluire 1,0 ml di questa soluzione a 10,0 ml con rimento (‘C)
acqua R.
Gas di trasporto: Azoto per cromatografia R o Elio per cromatogra-
Soluzione del solvente (b). Disciogliere quantita© appro- fia R ad una pressione appropriata
priate dei solventi residui Classe 2 in dimetilsolfossido R
e diluire a 100,0 ml con acqua R. Diluire in modo da Tempo di pressurizzazione (s) 30 30 30
ottenere una concentrazione pari a 1/20 dei limiti indi- Volume di iniezione (ml) 1 1 1
cati nella Tabella 2 (vedi 5.4. Solventi residui).
Soluzione del solvente (c). Disciogliere 1,00 g del sol- Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
vente o dei solventi presenti nella sostanza da esami- usando:
nare in dimetilsolfossido R o acqua R, se del caso, e
diluire a 100,0 ml con acqua R. Diluire in modo da otte- SISTEMA A
nere una concentrazione pari a 1/20 dei limiti indicati ^ una colonna capillare o semi-capillare in silice fusa,
nella Tabella 1 o 2 (vedi 5.4. Solventi residui). lunga 30 m e con diametro interno di 0,32-0,53 mm,
Soluzione del bianco. Procedere come descritto per la la cui parete interna e© rivestita con uno strato retico-
soluzione del solvente (c) ma senza l'aggiunta del sol- lato costituito dal 6 per cento di policianopropilfenil-
vente o dei solventi (utilizzare questa soluzione per silossano e dal 94 per cento di polidimetilsilossano
verificare l'assenza di picchi interferenti). (spessore dello strato 1,8-3 mm),
^ azoto per cromatografia R o elio per cromatografia R
Soluzione in esame. Introdurre 5,0 ml della soluzione come gas di trasporto, un rapporto di divisione 1:5,
campione ed 1,0 ml della soluzione del bianco in una con una velocita© lineare di circa 35 cm/s,
fiala da iniezione. ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma (per i solventi
Soluzione di riferimento (a) (Classe 1). Introdurre residui clorurati di Classe 1 si puo© usare uno spettro-
1,0 ml della soluzione del solvente (a) e 5,0 ml del metro di massa o un rivelatore a cattura di elettroni).
diluente appropriato in una fiala da iniezione. Mantenere la temperatura della colonna a 40 ‘C per
20 min, aumentarla di 10 ‘C per minuto fino a 240 ‘C
Soluzione di riferimento (a1) (Classe 1). Introdurre e poi mantenerla a 240 ‘C per 20 min; mantenere la
5,0 ml della soluzione campione e 1,0 ml della soluzione temperatura della camera di iniezione a 140 ‘C e quella
del solvente (a) in una fiala da iniezione. del rivelatore a 250 ‘C.

130
 Identificazione e controllo dei solventi residui

inoizircserP
Nel caso di interferenza della matrice usare il: Mantenere la temperatura della colonna a 50 ‘C per

ilareneG
20 min, poi aumentarla di 6 ‘C per minuto fino a
SISTEMA B 165 ‘C e mantenerla poi a 165 ‘C per 20 min; mantenere
- una colonna capillare o semi-capillare in silice fusa, la temperatura della camera di iniezione a 140 ‘C e
lunga 30 m e con diametro interno di 0,32-0,53 mm quella del rivelatore a 250 ‘C.

isilanA id
la cui parete interna e© rivestita con macrogol 20000 R

idoteM
(spessore del rivestimento 0,25 mm), Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione di riferi-
- azoto per cromatografia R o elio per cromatografia R mento (a) nella colonna descritta nel Sistema A e regi-
come gas di trasporto, un rapporto di divisione 1:5, strare il cromatogramma in condizioni tali che possa
con una velocita© lineare di circa 35 cm/s, essere misurato il rapporto segnale/rumore per l'1,1,1-

irotinetnoC
/ ilairetaM
- un rivelatore a ionizzazione di fiamma (per i solventi tricloroetano. Il rapporto segnale/rumore deve essere
residui clorurati di Classe 1 si puo© usare uno spettro- almeno pari a cinque. Un cromatogramma tipo e©
metro di massa o un rivelatore a cattura di elettroni). mostrato nella Figura 2.4.24.-1.

ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

4: benzene; 10: carbonio tetracloruro; 14: 1,2-dicloroetano; 15: 1,1-dicloroetilene; 52: 1,1,1-tricloroetano.

Figura 2.4.24. - 1. - Cromatogramma tipo dei solventi di Classe 1

ecidnI

ottenuto usando le condizioni descritte per il Sistema A e la Procedura 1. Rivelatore a ionizzazione di fiamma.

131
Identificazione e controllo dei solventi residui

Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione di riferi- Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione
mento (a1) nella colonna descritta nel Sistema A. I pic- in esame nella colonna descritta nel Sistema B.
chi dovuti ai solventi residui di Classe 1 sono ancora Se nel cromatogramma ottenuto non c'e© un picco
rivelabili. che corrisponde ad uno dei picchi dei solventi
residui dei cromatogrammi ottenuti con la solu-
Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione zione di riferimento (a) o (b), la sostanza in esame
di riferimento (b) nella colonna descritta nel soddisfa i requisiti del saggio. Se un picco nel
Sistema A e registrare il cromatogramma in cromatogramma ottenuto con la soluzione in esame
condizioni tali da determinare la risoluzione tra corrisponde ad uno dei picchi dei solventi resi-
l'acetonitrile e il diclorometano. Il sistema e© adatto dui ottenuti con la soluzione di riferimento (a)
se il cromatogramma ottenuto e© simile al cro- o (b) e conferma la corrispondenza ottenuta usando
matogramma riportato nella Figura 2.4.24.-2 e la il Sistema A, procedere come segue.
risoluzione tra l'acetonitrile e il diclorometano
e© almeno 1,0. Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione
di riferimento (c) nella colonna descritta per il
Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione Sistema
la
A o il Sistema B. Se necessario, aggiustare
sensibilita© del sistema in modo che l'altezza del
in esame nella colonna descritta nel Sistema A. picco corrispondente
Se nel cromatogramma ottenuto, non c'e© un picco ficato sia almeno il 50 alpersolvente cento
residuo identi-
della scala totale
che corrisponde ad uno dei picchi dei solventi del registratore.
residui dei cromatogrammi ottenuti con la solu-
zione di riferimento (a) o (b), la sostanza in esame Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione
soddisfa i requisiti del saggio. Se un picco nel di riferimento (d) nella colonna. Non dovrebbe
cromatogramma ottenuto con la soluzione in esame essere osservato alcun picco interferente.
corrisponde a uno dei picchi dei solventi residui
ottenuti con la soluzione di riferimento (a) o (b) Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione in
si deve usare il Sistema B. esame e 1 ml della fase gassosa della soluzione di
Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione di riferimento
zioni per due
(c) nella colonna. Ripetere queste inie-
volte.
riferimento (a) nella colonna descritta nel Sistema
B e registrare il cromatogramma in modo da poter L'area media del picco del solvente/i residuo/i
misurare il rapporto segnale/rumore per il benzene. nei cromatogrammi ottenuti con la soluzione
Il rapporto segnale/rumore deve essere almeno cin- in esame non e© maggiore della meta© dell'area me-
que. Un cromatogramma tipo e© mostrato nella dia del picco del solvente/i residuo/i corrispon-
Figura 2.4.24.-3. dente nei cromatogrammi ottenuti con la soluzione
di riferimento (c). Il saggio e© valido solo se la devia-
Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione di zione standard relativa delle differenze tra le aree
riferimento (a1) nella colonna descritta nel Sistema dei picchi dell'analita ottenuti con le iniezioni
B. Sono ancora rivelabili i picchi dovuti ai solventi ripetute per tre volte della soluzione di riferimento
residui della Classe 1. (c) e la soluzione in esame, e© al massimo il 15
per cento.
Iniettare 1 ml della fase gassosa della soluzione
di riferimento (b) nella colonna descritta nel Un diagramma di flusso della procedura e© mostrato
Sistema B e registrare il cromatogramma in con- nella Figura 2.4.24.-5.
dizioni tali da determinare la risoluzione tra l'aceto-
nitrile e il tricloroetilene. Il sistema e© adatto se Se un solvente residuo (Classe 2 o Classe 3) e© pre-
il cromatogramma ottenuto e© simile al cro- sente ad un livello uguale o superiore allo
matogramma riportato nella Figura 2.4.24.-4 e la 0,1 per cento, il contenuto puo© essere determi-
risoluzione tra l'acetonitrile e il tricloroetilene e© nato quantitativamente mediante il metodo delle
almeno 1,0. aggiunte standard.

132
 Identificazione e controllo dei solventi residui

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
idoteM

irotinetnoC
/ ilairetaM
ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
3: acetonitrile; 11: cloroformio; 13: cicloesano; 16a: cis-1,2-dicloroetilene; 17: diclorometano; 29: esano;
30: 2-esanone; 34: metanolo; 49: piridina; 51: toluene; 53: 1,1,2-tricloroetilene; 54: xilene orto, meta, para;
58: clorobenzene; 61: tetralina; 62: metilcicloesano; 63: nitrometano; 64: 1,2-dimetossietano.
Figura 2.4.24.-2. - Cromatogramma dei solventi residui di Classe 2 ottenuto usando le condizioni

eifargonoM
descritte per il Sistema A e la Procedura 1. Rivelatore a ionizzazione di fiamma.

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

4: benzene; 10: carbonio tetracloruro; 14: 1,2-dicloroetano; 15: 1,1-dicloroetilene; 52: 1,1,1-tricloroetano.
ecidnI

Figura 2.4.24. 3. Cromatogramma dei solventi residui di Classe 1 ottenuto usando le condizioni
descritte per il Sistema B e la Procedura 1. Rivelatore a ionizzazione di fiamma.

133
Identificazione e controllo dei solventi residui

3: acetonitrile; 11: cloroformio 13:cicloesano

16a: cis-1,2,-dicloretilene; 17: diclorometano; 23: 1,4-diossano;

29: esano; 30: 2-esanone; 34: metanolo;

49: piridina; 51: toluene; 53: 1,1,2-tricloroetilene;

54: xilene, orto, meta, para; 58: clorobenzene; 61: tetralina;

62: metilcicloesano; 63: nitrometano; 64: 1,2-dimetossietano

Figura 2.4.24. 4. Cromatogramma tipo dei solventi residui di Classe 2 ottenuto usando le condizioni
descritte per il Sistema B e la Procedura 1. Rivelatore a ionizzazione di fiamma.

134
 ilareneG isilanA id irotinetnoC ilareneG emirP ehcificepS ehcitapoemO
ilareneG ehcituecamraF
ivittaeR ehcituecamraF
ecidnI
inoizircserP idoteM / ilairetaM itnemogrA eifargonoM emroF eiretaM inoizaraperP
inoizaraperP

135
Identificazione e controllo dei solventi residui
Etilene ossido e diossano

2.4.25. ETILENE OSSIDO E DIOSSANO 0,1 ml di una soluzione (10 mg/l) di acetaldeide R, pre-
parata di recente, e 0,10 ml di diossano soluzione R.
Il saggio e© destinato alla determinazione di residui del- Chiudere e mescolare in modo da ottenere una solu-
l'etilene ossido e del diossano in campioni solubili in zione omogenea. Lasciare a riposo a 70 ‘C per 45 min.
acqua o in dimetilacetammide. Per le sostanze che sono Possono essere usate le seguenti condizioni di iniezione
insolubili o non sufficientemente solubili in questi sol- a spazio di testa statico:
venti, la preparazione della soluzione campione e le
condizioni di spazio di testa da impiegare sono date ^ temperatura di equilibrio: 70 ‘C (90 ‘C per le solu-
nella singola monografia. zioni in dimetilacetammide),
Esaminare mediante gas cromatografia a spazio di ^ tempo di equilibrio: 45 min,
testa (2.2.28). ^ temperatura della linea di trasferimento: 75 ‘C
A. Per i campioni solubili o miscibili con acqua, puo© (150 ‘C per le soluzioni in dimetilacetammide),
essere usato il procedimento seguente. ^ gas di trasporto: elio per cromatografia R,
Soluzione in esame. Pesare 1,00 g (MT) della sostanza da ^ tempo di pressurizzazione: 1 min,
esaminare in una fiala da 10 ml (possono essere usate ^ tempo di iniezione: 12 s.
altre dimensioni che dipendono dalle condizioni di ope-
razione) e aggiungere 1,0 ml di acqua R. Chiudere e Il procedimento cromatografico puo© essere effettuato
mescolare in modo da ottenere una soluzione omoge- usando:
nea. Lasciare a riposo a 70 ‘C per 45 min. ^ una colonna capillare di vetro o di quarzo lunga 30 m
Soluzione di riferimento (a). Pesare 1,00 g (MR) della e con diametro interno di 0,32 mm la cui superficie
sostanza da esaminare in una fiala identica da 10 ml, interna e© rivestita con uno strato di polidimetilsilos-
aggiungere 0,50 ml di ossido di etilene soluzione R3 e sano R dello spessore di 1,0 mm,
0,50 ml di diossano soluzione R1. Chiudere e mescolare ^ elio per cromatografia R o azoto per cromatografia R
in modo da ottenere una soluzione omogenea. Lasciare come gas di trasporto ad una velocita© lineare di circa
a riposo a 70 ‘C per 45 min. 20 cm per secondo e un rapporto di partizione di
Soluzione di riferimento (b). Introdurre 0,50 ml di 1:20,
ossido di etilene soluzione R3, in una fiala da 10 ml, - un rivelatore a ionizzazione di fiamma.
aggiungere 0,1 ml di una soluzione (10 mg/l) di acetal-
deide R, preparata di recente, e 0,1 ml di diossano solu- Mantenere la temperatura della colonna a 50 ‘C per
zione R1. Chiudere e mescolare in modo da ottenere 5 min, poi aumentarla di 5 ‘C per minuto fino a
una soluzione omogenea. Lasciare a riposo a 70 ‘C per 180 ‘C; aumentarla ancora di 30 ‘C per minuto fino a
45 min. 230 ‘C e mantenerla a 230 ‘C per 5 min; mantenere la
temperatura della porta di iniezione a 150 ‘C e quella
B. Per i campioni solubili o miscibili con dimetilace- del rivelatore a 250 ‘C.
tammide, puo© essere usato il procedimento seguente.
Iniettare un volume adatto, per esempio 1,0 ml, della
Soluzione in esame. Pesare 1,00 g (MT) della sostanza da fase gassosa della soluzione di riferimento (b). Aggiu-
esaminare in una fiala da 10 ml (possono essere usate stare la sensibilita© del sistema in modo che le altezze
fiale di altre dimensioni in funzione delle condizioni di dei picchi dovuti all'etilene ossido e all'acetaldeide nel
operazione) e aggiungere 1,0 ml di dimetilacetammide R cromatogramma ottenuto siano almeno il 15 per cento
e 0,20 ml di acqua R. Chiudere e mescolare in modo da della scala totale del registratore. Il saggio e© valido solo
ottenere una soluzione omogenea. Lasciare a riposo a se la risoluzione tra i picchi corrispondenti all'acetal-
90 ‘C per 45 min. deide e all'ossido di etilene e© almeno 2,0 e il picco del
Soluzione di riferimento (a). Pesare 1,00 g (MR) della diossano e© rivelato con un rapporto segnale-rumore di
sostanza da esaminare in una fiala da 10 ml, aggiungere almeno 5.
1,0 ml di dimetilacetammide R, 0,10 ml di diossano solu- Iniettare separatamente volumi adatti, per esempio
zione R e 0,10 ml di ossido di etilene soluzione R2. 1,0 ml (o lo stesso volume usato per la soluzione di rife-
Chiudere e mescolare in modo da ottenere una solu- rimento (b)), della fase gassosa della soluzione in esame
zione omogenea. Lasciare a riposo a 90 ‘C per 45 min. e della soluzione di riferimento (a). Ripetere il procedi-
Soluzione di riferimento (b). Introdurre 0,10 ml di ossido mento ancora due volte. Le aree medie dei picchi del-
di etilene soluzione R2 in una fiala da 10 ml, aggiungere l'ossido di etilene e del diossano nel cromatogramma

136
 Etilene ossido e diossano

inoizircserP
ottenuto con la soluzione in esame non sono maggiori N,N-

ilareneG
2.4.26. DIMETILANILINA

della meta© dell'area media del picco corrispondente nel

cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferi- A. Esaminare mediante gas cromatografia (2.2.28),
mento (a) (1 ppm di ossido di etilene e 50 ppm di dios- usando N,N-dietilanilina R come standard interno.
sano).
Soluzione dello standard interno. Disciogliere 50 mg di

isilanA id
idoteM
Verifica della precisione N,N-dietilanilina R in 4 ml di acido cloridrico 0,1 M e
Per ciascuna iniezione in doppio, calcolare per l'ossido diluire a 50 ml con acqua R. Diluire 1 ml di questa solu-
di etilene e per il diossano la differenza tra l'area dei zione a 100 ml con acqua R.
picchi ottenuti con la soluzione in esame e quella dei Soluzione in esame. In un tubo con tappo a smeriglio

irotinetnoC
/ ilairetaM
picchi ottenuti con la soluzione di riferimento (a). disciogliere 0,50 g della sostanza da esaminare in
Il saggio e© valido solo se la deviazione standard relativa 30,0 ml di acqua R. Aggiungere 1,0 ml della soluzione
dei tre valori ottenuti per l'ossido di etilene non e© supe- dello standard interno. Portare ad una temperatura di
riore al 15 per cento e la deviazione standard relativa 26-28 ‘C. Aggiustare 1,0 ml di sodio idrossido soluzione
dei tre valori ottenuti per il diossano non e© superiore concentrata R e mescolare fino a dissoluzione completa.
al 10 per cento. Se le pesate usate per la soluzione in Aggiungere 2,0 ml di trimetilpentano R. Agitare per

ivittaeR
esame e la soluzione di riferimento differiscono di piu© 2 min e lasciar separare le fasi. Usare lo strato supe-
dello 0,5 per cento da 1,00 g, devono essere fatte le
dovute correzioni. riore.
Quando e© richiesta una determinazione quantitativa il Soluzione di riferimento. Disciogliere 50,0 mg di

itnemogrA
ilareneG
contenuto di ossido di etilene o di diossano in parti per N,N-dimetilanilina R in 4,0 ml di acido cloridrico 0,1 M
milione e© calcolato dall'espressione: e diluire a 50,0 ml con acqua R. Diluire 1,0 ml di questa
AT C soluzione a 100,0 ml con acqua R. Diluire 1,0 ml di que-
2

AR M T A T M R sta soluzione a 30,0 ml con acqua R. Aggiungere 1,0 ml

della soluzione dello standard interno e 1,0 ml di sodio

eifargonoM
2 † ÿ 2 †

ilareneG
idrossido
AT = area del picco corrispondente all'ossido di etilene trimetilpentanosoluzione concentrata R. Aggiungere 2,0 ml di
nel cromatogramma ottenuto con la soluzione in le fasi. Usare loR.strato Agitare per 2 min e lasciare separare
superiore.
esame,
AR = area del picco corrispondente all'ossido di etilene Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito

ehcituecamraF
nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di usando:

emroF
riferimento (a), - una colonna capillare di silice fusa lunga 25 m e con
MT = massa della sostanza in esame nella soluzione in diametro interno di 0,32 mm rivestita con polimetilfe-
esame in grammi, nilsilossano R reticolato (spessore della pellicola
MR = massa della sostanza in esame nella soluzione di 0,52 mm),
eiretaM

emirP
riferimento in grammi,
C = la quantita© dell'ossido di etilene aggiunto alla - elio per cromatografia R come gas di trasporto, con
un rapporto di partizione 1:20, una colonna con una
soluzione di riferimento (a) in microgrammi. pressione di testa di 50 kPa e una valvola di flusso di
ehcituecamraF

Il contenuto di diossano in parti per milione e© calcolato 20 ml/min,

inoizaraperP

ehcificepS

dall'espressione:
- un rivelatore a ionizzazione di fiamma,
DT C
2

D R M T D T MR
2 † ÿ 2 † - una linea di flusso costituita da una colonna lunga
circa 1 cm impaccata con terra d'infusori per gas cro-
ehcitapoemO
inoizaraperP

DT = area del picco corrispondente al diossano nel cro- matografia R impregnata con il 10 per cento m/m di
matogramma ottenuto con la soluzione in esame, polidimetilsilossano R.
DR = area del picco corrispondente al diossano nel Mantenere la temperatura della colonna a 150 ‘C per
cromatogramma ottenuto con la soluzione di 5 min, aumentarla di 20 ‘C per minuto fino a 275 ‘C e
riferimento (a), mantenerla a 275 ‘C per 3 min; mantenere la tempera-
C = la quantita© di diossano aggiunto alla soluzione di tura del rivelatore a 300 ‘C e quella della porta di inie-
ecidnI

riferimento (a) in microgrammi. zione a 220 ‘C.

137
Nichel negli oli vegetali idrogenati

I tempi di ritenzione sono: N,N-dimetilanilina circa Soluzione in esame. Pesare 0,100 g (m) della sostanza in
3,6 min, N,N-dietilanilina circa 5,0 min. esame in un adatto recipiente di digestione resistente
Iniettare 1 ml della soluzione in esame e 1 ml della solu- all'alta pressione (fluoropolimero o vetro al quarzo),
zione di riferimento. aggiungere 6,0 ml di acido nitrico R e 2,0 ml di idrogeno
perossido soluzione concentrata R. Preparare una solu-
B. Esaminare mediante gas cromatografia (2.2.28), zione in bianco nella stessa maniera. Porre i recipienti
usando naftalene R come standard interno. chiusi in una stufa a microonde da laboratorio e dige-
Soluzione dello standard interno. Disciogliere 50 mg di rire con un appropriato programma, per es. 250 W per
naftalene R in cicloesano R e diluire a 50 ml con lo 10 min; 600 W per 5 min; 400 W per 5 min; 250 W per
stesso solvente. Diluire 5 ml di questa soluzione a 7 min. Lasciar raffreddare i recipienti di digestione
100 ml con cicloesano R. prima di aprirli. Trasferire quantitativamente nei pal-
Soluzione in esame. Aggiungere 5 ml di sodio idrossido loni, diluire a 25,0 ml con acqua R e mescolare.
1 M e 1,0 ml della soluzione dello standard interno a
1,00 g della sostanza da esaminare in un tubo con tappo Soluzioniditaratura.Aggiungere1,0ml di acidonitricoR,
a smeriglio. Chiudere il tubo e agitare vigorosamente 2,0 ml di idrogeno perossido soluzione concentrata R
per 1 min. Centrifugare se necessario e usare lo strato a 10,0 ml di soluzione standard di nickel (Ni 10 ppm) R
superiore. e diluire a 20,0 ml con acqua R. Introdurre in quattro
palloni tarati 20 ml, 50 ml, 100 ml e 150 ml di questa solu-
Soluzione di riferimento. Aggiungere 2 ml di acido clori- zione, aggiungere a ciascun pallone 6,0 ml di acido
drico R e 20 ml di acqua R a 50,0 mg di N,N-dimetilani- nitrico R, diluire con acqua R a 25,0 ml e mescolare per
lina R, agitare per disciogliere e diluire a 50,0 ml con ottenere delle soluzioni di taratura contenenti rispetti-
acqua R. Diluire 5,0 ml di questa soluzione a 250,0 ml vamente 4 ng/ml, 10 ng/ml, 20 ng/ml e 30 ng/ml (ppb)
con acqua R. Trasferire 1,0 ml di quest'ultima soluzione di nichel.
in un tubo con tappo a smeriglio e aggiungere 5 ml di
sodio idrossido 1 M e 1,0 ml della soluzione dello stan- Soluzione di azzeramento. Diluire 6,0 ml di acido nitri-
dard interno. Chiudere il tubo e agitare vigorosamente co R in acqua R e diluire a 25,0 ml con lo stesso sol-
per 1 min. Centrifugare se necessario e usare lo strato vente.
superiore.
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito Metodo. Preparare miscele di 1 volume di una soluzione
utilizzando: (5,0 g/l) di magnesio nitrato R e rispettivamente di
- una colonna di vetro lunga 2 m e con diametro 2 volumi della soluzione del bianco, della soluzione in
interno di 2 mm impaccata con terra d'infusori esame, delle soluzioni di taratura e della soluzione di
silanizzata per gas cromatografia R impregnata con il azzeramento.
3 per cento m/m di polimetilfenilsilossano R,
- azoto per cromatografia R come gas di trasporto ad Determinare le assorbanze di tutte le soluzioni in esame
una velocita© di flusso di 30 ml/min, a 232,0 nm usando un adatto spettrometro di assorbi-
- un rivelatore a ionizzazione di fiamma. mento atomico con fornace di grafite equipaggiato con
un sistema ad effetto Zeeman per la compensazione
Mantenere la temperatura della colonna a 120 ‘C e del fondo, un tubo rivestito di materiale pirolitico con
quella della porta di iniezione e del rivelatore a 150 ‘C. piattaforma, una lampada a catodo cavo a nichel. Man-
Iniettare 1 ml della soluzione in esame e 1 ml della solu- tenere la temperatura di essiccamento della fornace a
zione di riferimento. 100 ‘C per 10 s dopo un'innalzamento di 10 s, la tempe-
ratura di incenerimento a 1400 ‘C per 10 s dopo un'in-
nalzamento di 20 s, e la temperatura di atomizzazione
2.4.27. NICHEL NEGLI OLI VEGETALI IDROGE-
a 2500 ‘C per 5 s. Usare la soluzione di azzeramento
NATI
per azzerare lo strumento. Determinare la funzione di
Esaminare mediante spettrometria di assorbimento taratura utilizzando i dati ottenuti con le soluzioni di
atomico (Metodo I, 2.2.23). taratura. Con la taratura esterna, determinare le con-
centrazioni della soluzione in esame e della soluzione
AVVERTENZE: se vengono usati recipienti di digestione del bianco dalle assorbanze corrispondenti. Se necessa-
chiusi ad alta pressione ed apparecchiature di laboratorio rio, diluire con la soluzione di azzeramento in modo
a microonde, si devono conoscere le istruzioni di sicurezza da ottenere una lettura che rientri nell'intervallo di
e di operazione date dal produttore. taratura delle assorbanze (fattore di diluizione f).

138
 Acido 2-Etilesanoico

inoizircserP
Calcolare il contenuto in (mg/g (ppm) di Ni nel cam- - elio per cromatografia R come gas di trasporto ad una

ilareneG
pione usando l'espressione: velocita© di flusso di 10 ml/min,
c f2 - un rivelatore a ionizzazione di fiamma,
m 402 con il seguente programma di temperatura:

isilanA id
c = concentrazione misurata in nanogrammi per milli-

idoteM
litro, Tempo Temperatura Intervallo
Commento

f = fattore di diluizione,
(min) (‘C) (‘C/min)

Colonna 0 - 2 40 - isoterma
m = massa della sostanza da esaminare in grammi. 2 - 7,3 40 220
! 30 gradiente lineare

irotinetnoC
7,3 - 10,3 200 - isoterma

/ ilairetaM
2.4.28. ACIDO 2-ETILESANOICO Porta di iniezione 200
Esaminare mediante gas cromatografia (2.2.28), usando Rivelatore 200
l'acido 3-cicloesilpropionico R come standard interno.
Soluzione dello standard interno. Disciogliere 100 mg di Iniettare 1 ml della soluzione in esame e 1 ml della solu-
acido 3-cicloesilpropionico R in cicloesano R e diluire a

ivittaeR
100 ml con lo stesso solvente. zione di riferimento.
Soluzione in esame. Aggiungere 4,0 ml di una soluzione Il saggio e© valido solo se la risoluzione tra i picchi corri-
al 33 per cento V/V di acido cloridrico R a 0,300 g della spondenti all'acido 2-etilesanoico (primo picco) e allo
sostanza da esaminare. Agitare vigorosamente per standard interno e© almeno 2,0.

itnemogrA
Calcolare il contenuto percentuale di acido 2-etilesa-

ilareneG
1 min con due porzioni, ciascuna di 1,0 ml, della solu-
zione dello standard interno. Lasciar separare le fasi noico mediante l'espressione:
(se necessario, centrifugare per una migliore separa- AT 2 I R 2 m R 2 2
zione). Usare gli strati superiori riuniti. AR 2 I T 2 m T
Soluzione di riferimento. Disciogliere 75,0 mg di acido 2-

eifargonoM

ilareneG
etilesanoico R nella soluzione dello standard interno e AT = area del picco corrispondente all'acido 2-etilesa-
diluire a 50,0 ml con la stessa soluzione. A 1,0 ml della noico nel cromatogramma ottenuto con la solu-
soluzione ottenuta aggiungere 4,0 ml di una soluzione zione in esame,
al 33 per cento V/V di acido cloridrico R. Agitare vigo- AR = area del picco corrispondente all'acido 2-etilesa-
rosamente per 1 min. Lasciar separare le fasi (se neces-

ehcituecamraF
sario, centrifugare per una migliore separazione). noico nel cromatogramma ottenuto con la solu-
zione di riferimento,

emroF
Aggiungere 1,0 ml della soluzione dello standard I T = area del picco corrispondente allo standard
interno allo strato inferiore. Agitare vigorosamente interno nel cromatogramma ottenuto con la
per 1 min. Lasciar separare le fasi (se necessario, centri- soluzione in esame,
fugare per una migliore separazione). Usate gli strati
superiori riuniti. I R = area del picco corrispondente allo standard

eiretaM

emirP
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito interno nel cromatogramma ottenuto con la
utilizzando: soluzione di riferimento,
- una colonna di silice fusa di grosso calibro lunga 10 m mT = massa della sostanza da esaminare nella solu-
e con diametro interno di 0,53 mm rivestita con zione in esame in grammi,
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

macrogol 20000 2-nitroetereftalato R (spessore della mR = massa dell'acido 2-etilesanoico nella soluzione di
pellicola 1,0 (mm), riferimento in grammi.
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI

139
 2.5 Saggi

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
2.5. Saggi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 143 2.5.18. Fosforo nei vaccini polisaccaridici . . 149

idoteM
2.5.1. Indice di acidita© . . . . . . . . . . . . . . . . 143 2.5.19. O-Acetile nei vaccini polisaccaridici 149
2.5.2. Indice di esteri . . . . . . . . . . . . . . . . . 143 2.5.20. Esosammine nei vaccini polisaccari-
2.5.2. Indice di ossidrile . . . . . . . . . . . . . . . 143 dici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 150
2.5.4. Indice di iodio . . . . . . . . . . . . . . . . . 144 2.5.21. Metilpentosi nei vaccini polissaccari-

irotinetnoC
/ ilairetaM
2.5.5. Indice di perossidi . . . . . . . . . . . . . . 144 dici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 150
2.5.6. Indice di saponificazione . . . . . . . . . 145 2.5.22. Acidi uronici nei vaccini polisaccari-
2.5.7. Sostanze insaponificabili . . . . . . . . . 145 dici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 151
2.5.8. Determinazione dell'azoto amminico 2.5.23. Acido sialico nei vaccini polisaccari-
primario aromatico . . . . . . . . . . . 146 dici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 151
2.5.9. Determinazione dell'azoto . . . . . . . . . . 146 2.5.24. Carbonio diossido nei gas . . . . . . . . 152

ivittaeR
2.5.10. Combustione in ossigeno . . . . . . . . . 146 2.5.25. Carbonio monossido nei gas . . . . . . 152
2.5.11. Titolazioni complessometriche . . . . 146 2.5.26. Azoto monossido e azoto nei gas . . 153
2.5.12. Semi-micro determinazione dell'ac- 2.5.27. Ossigeno nei gas . . . . . . . . . . . . . . . 154
qua . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 147 2.5.28. Acqua nei gas . . . . . . . . . . . . . . . . . 154

itnemogrA
2.5.13. Alluminio nei vaccini adsorbiti . . . . 148 2.5.29. Diossido di zolfo . . . . . . . . . . . . . . . 154

ilareneG
2.5.14. Calcio nei vaccini adsorbiti . . . . . . . 148 2.5.30. Sostanze ossidanti . . . . . . . . . . . . . . 155
2.5.15. Fenolo nei sierimmuni e nei vaccini 148 2.5.31. Ribosio nei vaccini polisaccaridici . . 155
2.5.16. Proteine nei vaccini polisaccaridici . 148 2.5.32. Microdeterminazione dell'acqua . . . 155
2.5.17. Acidi nucleici nei vaccini polisaccari- 2.5.33. Proteine totali . . . . . . . . . . . . . . . . . 156

eifargonoM
dici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 149 2.5.34. Acido acetico nei peptidi sintetici . . 161

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Indice di ossidrile

inoizircserP
Tabella 2.5.3.-1.

ilareneG
2.5. SAGGI

Quantita©
Volume
Indice presunto di sostanza
é
2.5.1. INDICE DI ACIDITA
IOH da esaminare
di reattivo acetilante

in millilitri

L'indice di acidita© IA e© il numero che esprime in milli-

in grammi

isilanA id
idoteM
grammi la quantita© di potassio idrossido necessaria 10-100 2,0 5,0
per neutralizzare gli acidi liberi presenti in 1 g di una 100-150 1,5 5,0
sostanza. 150-200 1,0 5,0
Disciogliere 10,00 g della sostanza in esame, o la quan- 200-250 0,75 5,0

irotinetnoC
/ ilairetaM
tita© prescritta (m g), in 50 ml di una miscela di volumi 250-300 0,60 o 1,20 5,0 o 10,0
uguali di alcool R e di etere R, neutralizzata in prece- 300-350 1,0 10,0
denza, salvo diversa specificazione, con potassio idros- 350-700 0,75 15,0
sido 0,1 M, usando 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R1 700-950 0,5 15,0
come indicatore. Quando la sostanza da esaminare si e©
disciolta, titolare con potassio idrossido 0,1 M fino a

ivittaeR
Scaldare il pallone a b.m. per 1 h, mantenendo il livello
che il colore rosa persiste per almeno 15 s (n ml di dell'acqua circa 2,5 cm al di sopra del livello del liquido
potassio idrossido 0,1 M). contenuto nel pallone. Togliere il pallone dal bagno e
lasciare raffreddare. Aggiungere dall'estremita© supe-
IA 5; 610 n
riore del refrigerante, 5 ml di acqua R. Se la soluzione

itnemogrA
m

ilareneG
ˆ

si intorbida, aggiungere una quantita© sufficiente di piri-

dina R per chiarificarla, annotando il volume aggiunto.
Agitare il pallone e riportare nel b.m. per 10 min.
2.5.2. INDICE DI ESTERI
Togliere il pallone e lasciare raffreddare. Lavare il refri-
gerante e le pareti del pallone con 5 ml di alcool R, pre-

eifargonoM

ilareneG
L'indice di esteri IE e© il numero che esprime in milli- cedentemente neutralizzato in presenza di fenolftaleina
grammi la quantita© di potassio idrossido necessaria soluzione R1. Titolare con potassio idrossido soluzione
per saponificare gli esteri presenti in 1 g di una alcoolica 0,5 M, usando come indicatore 0,2 ml di
sostanza. Eé calcolato dall'indice di saponificazione IS fenolftaleina soluzione R1 (n1 ml di potassio idrossido

ehcituecamraF
e dall'indice di acidita© IA. soluzione alcoolica 0,5 M). Effettuare una prova in

emroF
IE IS IA bianco nelle stesse condizioni (n2 ml di potassio idros-
sido soluzione alcoolica 0,5 M).
ˆ ÿ

IOH 28; 05 mn2 n1 IA

ˆ
ÿ †
‡

eiretaM

emirP
2.5.3. INDICE DI OSSIDRILE

METODO B
L'indice di ossidrile IOH e© il numero che esprime in mil-
ligrammi la quantita© di potassio idrossido necessaria Introdurre la quantita© prescritta della sostanza da esa-
per neutralizzare l'acido combinato mediante acila- minare (m g) in una beuta da 5 ml perfettamente
ehcituecamraF
inoizaraperP

zione in 1 g di una sostanza.

ehcificepS

asciutta munita di opportuno tappo a smeriglio o in

materia plastica ed aggiungere 2,0 ml di anidride pro-
pionica reattivo R. Chiudere la beuta e agitare dolce-
METODO A mente fino a dissoluzione della sostanza. Lasciare a
ehcitapoemO

riposo per 2 h, salvo indicazione diversa. Togliere il

inoizaraperP

Introdurre la quantita© della sostanza da esaminare tappo e trasferire la beuta col suo contenuto in una
indicata nella Tabella 2.5.3.-1 (m g) in un pallone per beuta a collo largo da 500 ml contenente 25,0 ml di
acetilazione da 150 ml munito di un refrigerante ad una soluzione (9 g/l) di anilina R in cicloesano R e
aria, a meno che un'altra quantita© non sia prescritta 30 ml di acido acetico glaciale R. Agitare il contenuto
nella monografia. Aggiungere la quantita© di anidride della beuta, lasciare a riposo per 5 min, aggiungere
acetica soluzione R1 indicata nella Tabella 2.5.3.-1 e col- 0,05 ml di cristal violetto soluzione R e titolare con acido
ecidnI

legare al refrigerante ad aria. perclorico 0,1 M fino ad ottenere una colorazione verde

143
Indice di perossidi

smeraldo (n1 ml di acido perclorico 0,1 M). Effettuare Quando la monografia non specifica il metodo da utiliz-
una prova in bianco nelle stesse condizioni (n2 ml di zare, deve essere applicato il metodo A. Ogni cambia-
acido perclorico 0,1 M). mento dal metodo A al metodo B dovrebbe essere convali-
dato.
IOH 5; 610 mn1 n2
ˆ
ÿ †

Per considerare l'acqua presente determinarne il conte-

Metodo A

nuto (y per cento) mediante il metodo semimicro Introdurre 5,00 g (m g) della sostanza da esaminare in
(2.5.12). una beuta da 250 ml provvista di tappo a smeriglio.
Aggiungere 30 ml di una miscela di 2 volumi di cloro-
L'indice di ossidrile e© quindi dato dall'equazione: formio R e 3 volumi di acido acetico glaciale R. Agitare
IOH = (indice di ossidrile determinato) - 31,1 y fino a dissoluzione della sostanza ed aggiungere 0,5 ml
di potassio ioduro soluzione satura R. Agitare per 1 min
esatto e aggiungere quindi 30 ml di acqua R. Titolare
con sodio tiosolfato 0,01 M aggiungendo il titolante len-
tamente, agitando continuamente, fino a scomparsa
2.5.4. INDICE DI IODIO

L'indice di iodio II e© il numero che esprime in grammi quasi completa della colorazione gialla. Aggiungere
la quantita© di alogeno calcolata come iodio che puo© 5 ml di amido soluzione R e continuare la titolazione,
essere fissata nelle condizioni prescritte da 100 g di agitando energicamente, fino a scomparsa della colora-
una sostanza. zione (n1 ml di sodio tiosolfato 0,01 M). Effettuare una
Salvo diversa prescrizione, usare le quantita© seguenti prova in bianco nelle stesse condizioni (n2 ml di sodio
(Tabella 2.5.4.-1) per la determinazione: tiosolfato 0,01 M). Il volume di sodio tiosolfato 0,01 M
usato nella prova in bianco non deve essere superiore a
Tabella 2.5.4.-1 0,1 ml.
Indice presunto II Quantita© di sostanza da esaminare

(grammi ) Ip 10 nm1 n2
ˆ
ÿ †

meno di 20 1,0
20 - 60 0,5 - 0,25 Metodo B

60 - 100 0,25 - 0,15 Effettuare le operazioni evitando l'esposizione alla luce

piu© di 100 0,15 - 0,10 attinica.
Introdurre la quantita© prescritta della sostanza da esa- Introdurre 50 ml di una miscela di 2 volumi di trimetil-
minare (m g) in un pallone da 250 ml, con tappo a sme- pentano R e 3 volumi di acido acetico glaciale R in
riglio, precedentemente asciugato o lavato con acido una beuta e richiudere. Agitare ruotando la beuta
acetico glaciale R e discioglierla in 15 ml di clorofor- fino a che la sostanza da esaminare (m g; vedi Tabel-
mio R, salvo prescrizione diversa. Aggiungere lenta- la 2.5.5. - 1) si e© disciolta. Usando una adatta pipetta
mente 25,0 ml di iodio bromuro soluzione R1. tarata, aggiungere 0,5 ml di potassio ioduro soluzione
Chiudere il pallone e lasciare al buio per 30 min, salvo satura R e richiudere. Lasciare a riposo la soluzione
diversa indicazione, agitando frequentemente. Aggiun- per 60 1 s, agitando accuratamente la soluzione
6

gere 10 ml di una soluzione (100 g/l) di potassio iodu- almeno tre volte e poi aggiungere 30 ml di acqua R.
ro R e 100 ml di acqua R. Titolare con sodio tiosol-
fato 0,1 M, agitando energicamente, fino a scomparsa Tabella 2.5.5.-1
quasi completa della colorazione gialla. Aggiungere
5 ml di amido soluzione R e continuare la titolazione Indice di perossidi atteso
Massa della sostanza

aggiungendo sodio tiosolfato 0,1 M goccia a goccia, fino da esaminare (g)

a scomparsa della colorazione (n1 ml di sodio tiosol- da 0 a 12 da 2,00 a 5,00

fato 0,1 M). Effettuare una prova in bianco nelle stesse da 12 a 20 da 1,20 a 2,00
condizioni (n2 ml di sodio tiosolfato 0,1 M). da 20 a 30 da 0,80 a 1,20
da 30 a 50 da 0,500 a 0,800
II 1; 269 mn2 n1
ˆ
ÿ †

da 50 a 90 da 0,300 a 0,500
Titolare la soluzione con sodio tiosolfato 0,01 M (V1 ml),
2.5.5. INDICE DI PEROSSIDI
aggiungendolo gradualmente con agitazione costante e
L'indice di perossidi IP e© il numero che esprime, in mil- vigorosa, fino alla scomparsa della colorazione gialla
liequivalenti di ossigeno attivo, la quantita© di perossidi dello iodio. Aggiungere 0,5 ml circa di amido soluzio-
contenuta in 1000 g di una sostanza, come determinato ne R1 e continuare la titolazione, agitando costante-
mediante il metodo descritto di seguito. mente vicino al punto di fine titolazione, per liberare

144
 Sostanze insaponificabili

inoizircserP
tutto lo iodio dallo strato di solvente. Aggiungere la immediatamente (ancora caldo) con acido cloridrico

ilareneG
soluzione di sodio tiosolfato goccia a goccia fino alla 0,5 M (n1 ml di acido cloridrico 0,5 M). Effettuare una
scomparsa della colorazione blu. prova in bianco nelle stesse condizioni (n2 ml di acido
In base al volume di sodio tiosolfato 0,01 M utilizzato, cloridrico 0,5 M).
puo© essere necessario titolare con sodio tiosolfato 0,1 M.
Is 28; 05 mn2 n1

isilanA id
AVVERTENZE: per un indice di perossidi uguale o ÿ †

idoteM
ˆ

superiore a 70 c'e© un ritardo di 15-30 s nella neutralizza-

zione con l'indicatore di amido, a causa della tendenza
del trimetilpentano a galleggiare sulla superficie del
mezzo acquoso e a causa del tempo necessario per
mescolare adeguatamente la miscela del solvente e

irotinetnoC
2.5.7. SOSTANZE INSAPONIFICABILI

/ ilairetaM
del titolante acquoso, ovvero nel liberare le ultime Il termine ``sostanze insaponificabili'' si applica alle
tracce di iodio. Si raccomanda di usare sodio tiosol- sostanze non volatili a 100-105 ‘C ottenute mediante
fato 0,1 M per un indice di perossidi superiore a 150. estrazione con un solvente organico dalla sostanza da
Si puo© aggiungere una piccola quantita© (0,5-1,0 per esaminare dopo saponificazione. Il risultato e© calcolato
cento m/m) di un emulsionante con un alto HLB (per come per cento m/m.
esempio polisorbato 60) in modo da ritardare la separa-

ivittaeR
zione delle fasi e diminuire il ritardo nella liberazione Usare vetreria smerigliata sgrassata
dello iodio. Introdurre la prescritta quantita© della sostanza da esa-
Effettuare una determinazione in bianco (V0 ml). Se minare (m g) in un pallone da 250 ml, munito di refrige-
nella determinazione in bianco il volume di titolante rante a ricadere. Aggiungere 50 ml di potassio idrossido
supera 0,1 ml, sostituire i reattivi inquinati e ripetere la

itnemogrA
soluzione alcoolica 2 M e scaldare a b.m. per 1 h, agi-

ilareneG
determinazione. tando frequentemente. Raffreddare a temperatura infe-
Ip 1000 Vm1 V0 c
ˆ
ÿ † riore a 25 ‘C e trasferire il contenuto del pallone in un
imbuto separatore con l'aiuto di 100 ml di acqua R.
Agitare il liquido con prudenza con tre quantita© , da
c concentrazione del sodio tiosolfato soluzione in 100 ml ciascuna, di etere esente da perossidi R. Riunire

eifargonoM

ilareneG
ˆ

moli per litro. le fasi eteree in un altro imbuto separatore contenente

40 ml di acqua R, agitare dolcemente per qualche
minuto, lasciar separare ed eliminare la fase acquosa.
2.5.6. INDICE DI SAPONIFICAZIONE
Lavare la fase eterea con due quantita© , da 40 ml
L'indice di saponificazione IS e© il numero che esprime, ciascuna, di acqua R poi lavare successivamente con

ehcituecamraF
in milligrammi, la quantita© di potassio idrossido neces- 40 ml di una soluzione (30 g/l) di potassio idrossido R e

emroF
saria per neutralizzare gli acidi liberi e per saponificare con 40 ml di acqua R; ripetere questa procedura per tre
gli esteri contenuti in 1 g della sostanza. volte. Lavare la fase eterea alcune volte, ciascuna con
Per la determinazione usare, salvo diversa prescrizione, 40 ml di acqua R, fino a che la fase acquosa non risulta
le quantita© indicate nella Tabella 2.5.6. - 1. piu© alcalina alla fenolftaleina. Trasferire la fase eterea
in un pallone tarato lavando l'imbuto separatore con

eiretaM
Tabella 2.5.6. - 1 etere esente da perossidi R.

emirP
Rimuovere per distillazione l'etere con le precauzioni
Indice presunto I Quantita© del campione (g)
appropriate ed aggiungere al residuo 6 ml di acetone R.
da 3 a 10 da 12 a 15 Eliminare con cautela il solvente in corrente d'aria.
ehcituecamraF

Essiccare a 100-105 ‘C fino a massa costante. Lasciare

inoizaraperP

da 10 a 40 da 8 a 12
ehcificepS

da 40 a 60 da 5 a 8 raffreddare in un essiccatore e pesare (a g).

da 60 a 100 da 3 a 5
da 100 a 200 da 2,5 a 3 Sostanze insaponificabili 100a
ˆ
m per cento
da 200 a 300 da 1 a 2
ehcitapoemO
inoizaraperP

da 300 a 400 da 0,5 a 1

Disciogliere il residuo in 20 ml di alcool R, precedente-
Introdurre la prescritta quantita© della sostanza da esa- mente neutralizzato in presenza di fenolftaleina solu-
minare (m g) in un pallone di vetro borosilicato da zione R e titolare con sodio idrossido soluzione alcoolica
250 ml, munito di refrigerante a ricadere. Aggiungere 0,1 M. Se il volume di sodio idrossido soluzione alcoolica
25,0 ml di potassio idrossido soluzione alcoolica 0,5 M e 0,1 M usato e© superiore a 0,2 ml, la separazione fra le
qualche pallina di vetro. Inserire il refrigerante e scal- due fasi non e© completa; il residuo pesato non puo©
ecidnI

dare a ricadere per 30 min, salvo indicazione diversa. essere considerato come ``sostanze insaponificabili''. In
Aggiungere 1 ml di fenolftaleina soluzione R1 e titolare caso di dubbio il saggio deve essere ripetuto.

145
Titolazioni complessometriche

2.5.8. DETERMINAZIONE DELL'AZOTO AMMI- 2.5.10. COMBUSTIONE IN OSSIGENO

NICO PRIMARIO AROMATICO

Disciogliere la quantita© prescritta della sostanza da Salvo prescrizione diversa, la beuta da combustione
esaminare in 50 ml di acido cloridrico diluito R o in e© una beuta di vetro borosilicato della capacita© di
altro solvente indicato ed aggiungere 3 g di potassio almeno 500 ml, con un tappo a smeriglio provvisto
bromuro R. Raffreddare in acqua ghiacciata e titolare di un porta-campione, per esempio in platino o in
aggiungendo lentamente e sotto costante agitazione platino-iridio.
sodio nitrito 0,1 M. Polverizzare finemente la sostanza in esame e porre
Determinare il punto di fine titolazione elettrometrica- la quantita© prescritta di campione al centro di un
mente o mediante l'uso dell'indicatore prescritto. pezzo di carta da filtro avente le dimensioni di circa
30 mm 40 mm e fornito di una linguetta di circa
2

2.5.9. DETERMINAZIONE DELL'AZOTO 10 mm di larghezza per 30 mm di lunghezza. Se e© pre-

scritta una carta impregnata con litio carbonato,
METODO SEMIMICRO bagnare il centro della carta con una soluzione satura
Introdurre in un pallone da mineralizzazione una quan- di litio carbonato R ed essiccare in stufa prima dell'uso.
tita© della sostanza da esaminare (m g) contenente circa Avvolgere la sostanza da esaminare nella carta e met-
2 mg di azoto, aggiungere 4 g di una miscela polveriz- terla sul portacampione. Introdurre nella beuta acqua R
zata costituita da 100 g di potassio solfato R, 5 g di o la soluzione prescritta che deve assorbire i prodotti
rame(-ico) solfato R e 2,5 g di selenio R e tre palline di della combustione, sostituire l'aria con l'ossigeno per
vetro. Portare sul fondo qualsiasi particella aderente al mezzo di un tubo che arriva fino al livello del liquido.
collo del pallone usando 5 ml di acido solforico R Bagnare il collo della beuta con acqua R e chiudere.
lasciandolo scorrere sulle pareti del pallone, e mesco- Accendere la linguetta di carta con un mezzo appro-
lare il contenuto ruotando il pallone. Chiudere il pal- priato osservando le precauzioni necessarie, e mante-
lone in maniera non ermetica, per es. mediante un nere fermamente chiusa la beuta durante la combu-
bulbo di vetro a gambo corto, per evitare una perdita stione. Agitare energicamente la beuta fino a dissolu-
eccessiva di acido solforico. All'inizio scaldare gradual- zione completa dei prodotti della combustione,
mente, poi aumentare la temperatura fino ad ebolli- raffreddare e dopo circa 5 min, salvo indicazione
zione forte con condensazione dell'acido lungo il collo diversa, aprirla con cautela. Lavare con acqua R le parti
del pallone; si devono prendere precauzioni per evitare smerigliate, le pareti della beuta e il portacampione.
che la parte superiore del pallone si surriscaldi. Conti- Riunire i prodotti della combustione e le acque di
nuare a scaldare per 30 min salvo indicazione diversa. lavaggio e procedere come descritto nella monografia.
Raffreddare, aggiungere con precauzione 25 ml di
acqua R per disciogliere la parte solida, raffreddare di
nuovo e porre in un apparecchio da distillazione in cor- 2.5.11. TITOLAZIONI COMPLESSOMETRICHE

rente di vapore. Aggiungere 30 ml di sodio idrossido ALLUMINIO

soluzione concentrata R e distillare immediatamente
facendo passare il vapore attraverso la miscela. Racco- Introdurre 20,0 ml della soluzione indicata in una beuta
gliere circa 40 ml di distillato in 20,0 ml di acido clori- da 500 ml, aggiungere 25,0 ml di sodio edetato 0,1 M e
drico 0,01 M ed un volume di acqua R sufficiente perchë 10 ml, di una miscela di volumi uguali di una soluzione
l'estremita© del refrigerante rimanga immersa. Verso la (155 g/l) di ammonio acetato R e di acido acetico
fine della distillazione, abbassare la beuta contenente diluito R. Bollire per 2 min e raffreddare. Aggiungere
l'acido, in modo che l'estremita© del refrigerante non vi 50 ml di etanolo R e 3 ml di una soluzione (0,25 g/l) di
peschi piu© e facendo attenzione che l'acqua sulla parete ditizone R in etanolo R preparata di recente. Titolare
esterna del refrigerante non cada nel contenuto della l'eccesso di sodio edetato con zinco solfato 0,1 M fino
beuta. Titolare il distillato con sodio idrossido 0,01 M al viraggio dal blu-verdastro al violetto-rossastro.
usando come indicatore rosso metile indicatore misto R 1 ml di sodio edetato 0,1 M equivale a 2,698 mg di Al.
(n1 ml di sodio idrossido 0,01 M).
Ripetere il saggio usando circa 50 mg di glucosio R BISMUTO
al posto della sostanza da esaminare (n2 ml di sodio
idrossido 0,01 M). Introdurre la soluzione prescritta, preparata con acido
nitrico R, in una beuta da 500 ml. Diluire a 250 ml con
Contenuto di azoto 0; 01401mn2 n1 per cento
ˆ
ÿ †
acqua R e, salvo indicazione diversa, aggiungere, goccia
a goccia e sotto agitazione, ammoniaca concentrata R

146
 Semi-micro determinazione dell'acqua

inoizircserP
fino a che la miscela diventa opalescente. Aggiungere

ilareneG
2.5.12. SEMI-MICRO DETERMINAZIONE DEL-

0,5 ml di acido nitrico R. Scaldare a circa 70 ‘C fino a L'ACQUA

scomparsa completa dell'opalescenza. Aggiungere circa

50 mg di arancio xilenolo miscela composta R e titolare Il recipiente per titolazione, della capacita© di circa
con sodio edetato 0,1M fino al viraggio dal violetto-rosa 60 ml, e© munito di due elettrodi di platino, di un tubo

isilanA id
al giallo. per l'immissione di azoto, di un tappo che si adatta

idoteM
1 ml di sodio edetato 0,1 M equivale a 20,90 mg di Bi. all'estremita© di una buretta e di un tubo per l'immis-
sione di aria protetto da un essiccante. Introdurre la
sostanza da esaminare attraverso un tubo di immis-
CALCIO sione laterale che puo© essere chiuso con un tappo a sme-

irotinetnoC
/ ilairetaM
riglio. Eseguire l'agitazione, durante la titolazione,
Introdurre la soluzione prescritta in una beuta da magneticamente o mediante un flusso di azoto secco
500 ml e diluire a 300 ml con acqua R. Aggiungere attraverso la soluzione.
6,0 ml di sodio idrossido soluzione concentrata R e circa Determinare il punto di fine titolazione per amperome-
15 mg di calcone-acido carbossilico miscela composta R. tria. Un circuito appropriato e© costituito da un poten-
Titolare con sodio edetato 0,1 M fino al viraggio dal ziometro di circa 2000 W, collegato con una pila di

ivittaeR
violetto al blu netto. 1,5 V che permette di applicare un potenziale variabile.
1 ml di sodio edetato 0,1 M equivale a 4,008 mg di Ca. Questo potenziale si aggiusta in modo da far passare
una corrente iniziale bassa attraverso gli elettrodi di
PIOMBO platino collegati in serie ad un microamperometro.

itnemogrA
ilareneG
L'ago del microamperometro devia ad ogni aggiunta di
Introdurre la soluzione prescritta in una beuta da reattivo, ma ritorna immediatamente alla posizione ini-
500 ml e diluire a 200 ml con acqua R. Aggiungere circa ziale. Alla fine della reazione si ottiene una deviazione
50 mg di arancio xilenolo miscela composta R e esameti- che persiste almeno per 30 s.
lentetrammina R fino a che la soluzione diventa rosa- Usare lo iodosolforoso reattivo R dopo aver determinato

eifargonoM

ilareneG
violetto. Titolare con sodio edetato 0,1 M fino al virag- il suo equivalente in acqua (4.1.1). I reattivi e le solu-
gio dal rosa-violetto al giallo. zioni usati devono essere mantenuti allo stato anidro e
1 ml di sodio edetato 0,1 M equivale a 20,72 mg di Pb. si devono prendere precauzioni per prevenire l'esposi-
zione all'umidita© atmosferica. Il reattivo iodosol-

ehcituecamraF
foroso R e© protetto dalla luce, conservato preferi-
bilmente in una bottiglia provvista di una buretta

emroF
MAGNESIO
automatica.
Introdurre la soluzione prescritta in una beuta da La composizione dei reattivi iodosolforosi disponibili in
500 ml e diluire a 300 ml con acqua R. Aggiungere commercio spesso differisce da quella dello iodosolforoso
10 ml di tampone ammonio cloruro soluzione a reattivo R per sostituzione della piridina con altri

eiretaM
pH 10,0 R e 50 mg circa di nero mordente 11 miscela

emirP
composti basici. L'uso di tali reattivi deve essere preventi-
com-posta R. Riscaldare a circa 40 ‘C e titolare a questa vamente convalidato per verificare, in ciascun caso, la
temperatura con sodio edetato 0,1 M fino al viraggio stechiometria e l'assenza di incompatibilita© tra la
dal violetto al blu netto. sostanza sottoposta a saggio e il reattivo (1.1. Prescri-
ehcituecamraF
inoizaraperP

1 ml di sodio edetato 0,1 M equivale a 2,431 mg di Mg. zioni generali).

ehcificepS

Salvo diversa indicazione, usare il metodo A.

ZINCO Metodo A . Introdurre circa 20 ml di metanolo anidro R
o del solvente indicato nella monografia nel recipiente
Introdurre la soluzione prescritta in una beuta da
ehcitapoemO

di titolazione e titolare fino al punto di fine titolazione

inoizaraperP

500 ml e diluire a 200 ml con acqua R. Aggiungere circa amperometrico con iodosolforoso reattivo R. Introdurre
50 mg di xilenolo arancio miscela composta R ed esame- rapidamente la quantita© prescritta della sostanza in
tilentetrammina R fino a che la soluzione diventa rosa- esame nel recipiente di titolazione. Agitare per 1 min e
violetta. Aggiungere 2 g di esametilentetrammina R in titolare di nuovo con iodosolforoso reattivo R fino al
eccesso. Titolare con sodio edetato 0,1M fino al viraggio punto di fine titolazione amperometrico.
dell'indicatore dal rosa-violetto al giallo.
ecidnI

Metodo B . Introdurre circa 10 ml di metanolo anidro R

1 ml di sodio edetato 0,1 M equivale a 6,54 mg di Zn. o del solvente indicato nella monografia nel recipiente

147
Proteine nei vaccini polisaccaridici

di titolazione e titolare fino al punto di fine titolazione parazione in esame. Aggiungere da 1,0 ml a 0,2 ml di
amperometrico con iodosolforoso reattivo R. Trasferire acido cloridrico diluito R e diluire a 3,0 ml con acqua R.
rapidamente nel recipiente di titolazione la quantita© Misurare l'assorbanza a 620 nm.
prescritta della sostanza da esaminare conveniente-
mente polverizzata e un volume esattamente misurato
di iodosolforoso reattivo R sufficiente a dare un eccesso 2.5.15. FENOLO NEI SIERIMMUNI E NEI VAC-

di circa 1 ml o il volume indicato nella monografia. CINI

Lasciare a riposo il recipiente di titolazione chiuso, Omogenizzare la preparazione in esame. Diluire un

protetto dalla luce, per 1 min o per il tempo indicato volume appropriato con acqua R in modo da ottenere
nella monografia, agitando di tanto in tanto. Titolare una soluzione che contenga, presumibilmente, 15 mg di
l'eccesso di iodosolforoso reattivo R fino ad ottenere fenolo per ml. Preparare una serie di soluzioni di riferi-
di nuovo la bassa corrente iniziale usando metanolo mento con fenolo R contenenti, rispettivamente, 5 mg,
anidro R o il solvente prescritto nella monografia al 10 mg, 15 mg, 20 mg e 30 mg di fenolo per millilitro.
quale e© stata aggiunta una quantita© esattamente nota Aggiungere a 5 ml della soluzione in esame e a 5 ml di
di acqua R equivalente a circa 2,5 g/l. ciascuna soluzione di riferimento, rispettivamente,
5 ml di tampone soluzione a pH 9,0 R, 5 ml di amminopi-
razolone soluzione R e 5 ml di potassio ferricianuro
2.5.13. ALLUMINIO NEI VACCINI ADSORBITI
soluzione R. Lasciare a riposo per 10 min e misurare
Omogenizzare la preparazione in esame e prelevarne l'intensita© della colorazione a 546 nm. Costruire la
una quantita© appropriata, che si presume contenga curva di taratura e calcolare il contenuto in fenolo della
preparazione in esame.
5-6 mg di alluminio, introducendola in un pallone
da combustione da 50 ml. Aggiungere 1 ml di acido
solforico R, 0,1 ml di acido nitrico R e qualche pallina 2.5.16. PROTEINE NEI VACCINI POLISACCARI-

di vetro. Scaldare la soluzione fino allo svolgersi di DICI

densi fumi bianchi. Se a questo stadio si verifica carbo-

nizzazione, aggiungere ancora qualche goccia di acido Soluzione in esame. Utilizzare un pallone tarato di
nitrico R e mantenere l'ebollizione fino a decolorazione. volume appropriato per la preparazione di una
Lasciare raffreddare per qualche minuto, aggiungere soluzione contenente circa 5 mg per millilitro di poli-
con precauzione 10 ml di acqua R e far bollire fino ad saccaride secco. Trasferire quantitativamente il conte-
ottenere una soluzione limpida. Lasciare raffreddare, nuto di un contenitore nel pallone e portare a volume
aggiungere 0,05 ml di metilarancio soluzione R e neutra- con acqua R. Trasferire 1 ml della soluzione in una pro-
lizzare con sodio idrossido soluzione concentrata R vetta di vetro e aggiungere 0,15 ml di una soluzione
(da 6,5 a 7 ml). Se si forma un precipitato, aggiungere, (400 g/l) di acido tricloroacetico R. Agitare, lasciare
goccia a goccia sufficiente acido solforico diluito R per a riposo per 15 min, centrifugare per 10 min a
discioglierlo. Trasferire la soluzione in una beuta da 5000 giri/min e eliminare il sopranatante. Aggiungere
250 ml e lavare il pallone da combustione con 25 ml di 0,4 ml di sodio idrossido 0,1 M al residuo della centrifu-
acqua R. Aggiungere 25,0 ml di sodio edetato 0,02 M, gazione.
10 ml di tampone acetato soluzione a pH 4,4 R e qualche Soluzioni di riferimento. Disciogliere 0,100 g di albu-
pallina di vetro e far bollire moderatamente per 3 min. mina bovina R in 100 ml di sodio idrossido 0,1 M (solu-
Aggiungere 0,1 ml di piridilazonaftolo soluzione R e zione madre contenente 1 g di proteina per litro).
titolare la soluzione calda con rame solfato 0,02 M fino Diluire 1 ml della soluzione madre a 20 ml con sodio
al viraggio al bruno-porpora. Effettuare contempora- idrossido 0,1 M (diluizione di lavoro (a), contenente
neamente una titolazione in bianco senza il vaccino. 50 mg di proteina per litro). Diluire 1 ml della soluzione
1 ml di sodio edetato 0,02 M equivale a 0,5396 mg di Al. madre a 4 ml con sodio idrossido 0,1 M (diluizione di
lavoro (b), contenente 250 mg di proteina per litro).
Trasferire in 6 provette di vetro 0,10 ml, 0,20 ml e
2.5.14. CALCIO NEI VACCINI ADSORBITI 0,40 ml della diluizione di lavoro (a) e 0,15 ml, 0,20 ml
e 0,25 ml della diluizione di lavoro (b). Portare il conte-
Tutte le soluzioni usate per questo saggio devono essere nuto di ciascuna provetta al volume di 0,40 ml con sodio
preparate con acqua distillata R. idrossido 0,1 M.
Determinare il calcio mediante spettrometria di emis- Preparare una prova in bianco usando 0,40 ml di sodio
sione atomica (Metodo I, 2.2.22). Omogenizzare la pre- idrossido 0,1 M.

148
 O -Acetile nei vaccini polisaccaridici

inoizircserP
Aggiungere 2 ml di cupri-tartarica soluzione R3 a cia- Aggiungere 0,2 ml di acido solforico R a tutte le provette

ilareneG
scuna provetta, agitare e lasciare a riposo per 10 min. e scaldare in un bagno di olio a 120 ‘C per 1 h e poi a
Aggiungere a ciascuna provetta 0,2 ml di una miscela 160 ‘C fino a comparsa di fumi bianchi (circa 1 h).
di volumi uguali di fosfomolibdotungstico reattivo R ed Aggiungere 0,1 ml di acido perclorico R e scaldare a
acqua R, preparata immediatamente prima dell'uso. 160 ‘C fino a che la soluzione si decolora (circa

isilanA id
Chiudere le provette, mescolare per capovolgimento e 90 min). Raffreddare ed aggiungere a ciascuna provetta

idoteM
lasciare a riposo al buio per 30 min. Il colore blu deve 4 ml di acqua R e 4 ml di ammonio molibdato reattivo R.
mantenersi per 60 min. Se necessario, centrifugare per Scaldare a b.m. a 37 ‘C per 90 min e raffreddare. Por-
ottenere delle soluzioni limpide. tare al volume di 10,0 ml con acqua R. Il colore blu
Misurare l'assorbanza (2.2.25) di ciascuna soluzione a deve mantenersi per diverse ore. Misurare l'assorbanza

irotinetnoC
/ ilairetaM
760 nm utilizzando il bianco come liquido di compensa- (2.2.25) di ciascuna soluzione a 820 nm utilizzando il
zione. Costruire la curva di taratura con le assorbanze bianco come liquido di compensazione. Costruire la
delle sei soluzioni di riferimento e con i corrispondenti curva di taratura con le assorbanze delle tre soluzioni
contenuti in proteina e leggere dalla curva il contenuto di riferimento in funzione della quantita© di fosforo pre-
in proteina presente nella soluzione in esame. sente nelle soluzioni e leggere dalla curva la quantita©
di fosforo nella soluzione in esame.

ivittaeR
O
2.5.17. ACIDI NUCLEICI NEI VACCINI POLISAC-

CARIDICI 2.5.19. -ACETILE NEI VACCINI POLISACCARI-

DICI

Soluzione in esame. Utilizzare un pallone tarato di

itnemogrA
Soluzione in esame. Utilizzare un pallone tarato di

ilareneG
volume appropriato per la preparazione di una solu-
zione contenente circa 5 mg per millilitro di polisacca- volume idoneo per la preparazione di una soluzione
ride secco. Trasferire quantitativamente il contenuto di contenente circa 5 mg per millilitro di polisaccaride
un recipiente del vaccino nel pallone e portare a volume secco. Trasferire quantitativamente il contenuto di un
con acqua R. Diluire, se necessario, la soluzione in recipiente del vaccino nel pallone e portare a volume

eifargonoM
esame per ottenere un valore di assorbanza adatto allo con acqua R. Diluire la soluzione in modo che i volumi

ilareneG
strumento utilizzato. Misurare l'assorbanza (2.2.25) usati nel saggio contengano dai 30 mg ai 600 mg di ace-
a 260 nm utilizzando acqua R come liquido di compen- tilcolina cloruro (O-acetile). Introdurre 0,3 ml, 0,5 ml e
sazione. 1,0 ml in doppio in sei provette (tre soluzioni di rea-
zione e tre soluzioni di correzione).

ehcituecamraF
L'assorbanza di una soluzione (1 g/l) di acido nucleico,
misurata a 260 nm, e© 20. Soluzioni di riferimento. Disciogliere 0,150 g di acetilco-

emroF
lina cloruro R in 10 ml di acqua R (soluzione madre con-
tenente 15 g di acetilcolina cloruro per litro). Immedia-
2.5.18. FOSFORO NEI VACCINI POLISACCARI-
tamente prima dell'uso, diluire 1 ml della soluzione
DICI
madre a 50 ml con acqua R (diluizione di lavoro (a),
Soluzione in esame. Utilizzare un pallone tarato di contenente 300 mg di acetilcolina cloruro per millilitro).
eiretaM

emirP
volume appropriato per la preparazione di una solu- Immediatamente prima dell'uso diluire 1 ml della solu-
zione contenente circa 5 mg per millilitro di polisacca- zione madre a 25 ml con acqua R (diluizione di lavoro
ride secco. Trasferire quantitativamente il contenuto di (b), contenente 600 mg di acetilcolina cloruro per milli-
un recipiente del vaccino nel pallone e portare a volume litro). Introdurre 0,1 ml e 0,4 ml della diluizione di
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

con acqua R. Diluire la soluzione in esame in modo lavoro (a) in doppio (soluzioni di reazione e di corre-
che il volume usato nel saggio (1 ml) contenga circa zione) in quattro provette e 0,6 e 1,0 ml della diluizione
6 mg di fosforo. Trasferire 1,0 ml della soluzione in una di lavoro (b) in doppio (soluzioni di reazione e di corre-
provetta da calcinazione da 10 ml. zione) in altre quattro provette.
ehcitapoemO

Soluzioni di riferimento. Disciogliere 0,2194 g di potas- Preparare una prova in bianco usando 1 ml di acqua R.
inoizaraperP

sio fosfato monobasico R in 500 ml di acqua R per otte- Portare il volume di ciascuna provetta a 1 ml con
nere una soluzione contenente l'equivalente di 0,1 mg acqua R. A ciascuna provetta di correzione ed al bianco
di fosforo per millilitro. Diluire 5,0 ml della soluzione aggiungere 1,0 ml di acido cloridrico 4 M. A ciascuna
a 100,0 ml con acqua R. Trasferire in tre provette da cal- provetta aggiungere 2,0 ml di idrossilammina soluzione
cinazione 0,5 ml, 1,0 ml e 2,0 ml della soluzione. alcalina R. Lasciare procedere la reazione per 2 min
ecidnI

Preparare una soluzione come bianco con 2,0 ml di esatti ed aggiungere a ciascuna provetta 1,0 ml di acido
acqua R in una provetta da calcinazione. cloridrico 4 M. Aggiungere a ciascuna provetta 1,0 ml

149
Metilpentosi nei vaccini polisaccaridici

di una soluzione (100 g/l) di ferro(-ico) cloruro R in b.m. a 90 ‘C per 45 min e poi raffreddare a t.a. Aggiun-
acido cloridrico 0,1 M, chiudere le provette e agitare gere a ciascuna provetta 2,5 ml di alcool R e 1,0 ml di
vigorosamente per eliminare le bolle. Misurare l'assor- una soluzione di dimetilamminobenzaldeide (discio-
banza (2.2.25) di ciascuna soluzione a 540 nm utiliz- gliere, immediatamente prima dell'uso, 0,8 g di dimeti-
zando il bianco come liquido di compensazione. Per lamminobenzaldeide R in 15 ml di alcool R ed aggiun-
ciascuna soluzione di reazione sottrarre l'assorbanza gere 15 ml di acido cloridrico R) e portare il volume di
della corrispondente soluzione di correzione. Costruire ciascuna soluzione a 10 ml con alcool R. Chiudere le
una curva di taratura con le assorbanze corrette per le provette, agitare per capovolgimento e lasciare a riposo
quattro soluzioni di riferimento e il corrispondente con- al buio per 90 min. Misurare l'assorbanza (2.2.25) di
tenuto in acetilcolina cloruro e leggere dalla curva il ciascuna soluzione a 530 nm utilizzando il bianco come
contenuto in acetilcolina cloruro nella soluzione in liquido di compensazione. Costruire la curva di tara-
esame per ciascun volume esaminato. Calcolare la tura con le assorbanze delle quattro soluzioni di riferi-
media dei tre valori. mento e il corrispondente contenuto di esosammina e
1 mole di acetilcolina cloruro (181,7 g) equivale a 1 mole leggere dalla curva la quantita© di esosammina presente
di O-acetile (43,05 g). nella soluzione in esame.
2.5.21. METILPENTOSI NEI VACCINI POLISAC-
2.5.20. ESOSAMMINE NEI VACCINI POLISACCA-
CARIDICI
RIDICI

Soluzione in esame. Utilizzare un pallone tarato di Soluzione in esame. Utilizzare un pallone tarato di
volume idoneo per la preparazione di una soluzione volume idoneo per la preparazione di una soluzione
contenente circa 5 mg per millilitro di polisaccaride contenente circa 5 mg per millilitro di polisaccaride
secco. Trasferire quantitativamente il contenuto di un secco. Trasferire quantitativamente il contenuto di un
recipiente del vaccino nel pallone e portare a volume recipiente del vaccino nel pallone e portare a volume
con acqua R. Diluire la soluzione in modo che i volumi con acqua R. Diluire la soluzione in modo che i volumi
usati nel saggio contengano dai 125 mg ai 500 mg di glu- usati nel saggio contengano dai 2 mg ai 20 mg di ramno-
cosammina (esosammina). Trasferire 1,0 ml della solu- sio (metilpentosi). Introdurre in tre provette 0,25 ml,
zione diluita in una provetta graduata. 0,50 ml e 1 ml della soluzione diluita.
Soluzioni di riferimento. Disciogliere 60 mg di gluco- Soluzioni di riferimento. Disciogliere 0,100 g di ramno-
sammina cloridrato R in 100 ml di acqua R (soluzione sio R in 100 ml di acqua R (soluzione madre contenente
di riferimento contenente 0,500 g di glucosammina 1 g di metilpentosio per litro). Immediatamente prima
per litro). Introdurre rispettivamente 0,25 ml, 0,50 ml, dell'uso, diluire 1 ml della soluzione madre a 50 ml
0,75 ml e 1,0 ml di questa soluzione in quattro provette con acqua R (diluizione di lavoro contenente 20 mg di
graduate. metilpentosio per litro). Introdurre 0,10 ml, 0,25 ml,
Preparare una prova in bianco usando 1 ml di acqua R. 0,50 ml, 0,75 ml e 1,0 ml della diluizione di lavoro in
cinque provette.
Portare il volume di ciascuna provetta ad 1 ml con Preparare un bianco usando 1 ml di acqua R.
acqua R ed aggiungere 1 ml di una soluzione (292g/l)
di acido cloridrico in ciascuna provetta. Chiudere le Portare il volume di ciascuna provetta a 1 ml con
provette e scaldare a b.m. per 1 h. Raffreddare a t.a. acqua R. Porre le provette in acqua ghiacciata ed
Aggiungere a ciascuna provetta 0,05 ml di una solu- aggiungere a ciascuna provetta, goccia a goccia e agi-
zione (5 g/l) di timolftaleina R in alcool R. Aggiungere tando continuamente, 4,5 ml di una miscela raffreddata
una soluzione (200g/l) di sodio idrossido R fino alla di 1 volume di acqua R e 6 volumi di acido solforico R.
comparsa del colore blu e poi acido cloridrico 1 M fino Scaldare le provette a t.a. poi porle a b.m. per alcuni
a che la soluzione diventa incolore. Portare il volume minuti. Raffreddare a t.a. Aggiungere a ciascuna pro-
di ciascuna provetta a 10 ml con acqua R (idrolizzati vetta 0,10 ml di una soluzione (30 g/l) di cisteina clori-
neutralizzati). Trasferire in una seconda serie di pro- drato R, preparata immediatamente prima dell'uso.
vette graduate da 10 ml, 1 ml di ciascuno degli idroliz- Agitare e lasciare a riposo per 2 h. Misurare l'assor-
zati neutralizzati. Aggiungere a ciascuna provetta 1 ml banza (2.2.25) di ciascuna soluzione a 396 nm e a
di acetilacetone reattivo (una miscela, preparata imme- 430 nm utilizzando il bianco come liquido di compensa-
diatamente prima dell'uso, di 1 volume di acetilaceto- zione. Calcolare per ciascuna soluzione la differenza
ne R e 50 volumi di una soluzione (53 g/l) di sodio car- tra l'assorbanza misurata a 396 nm e quella misurata a
bonato anidro R). Chiudere le provette e scaldare a 430 nm. Costruire la curva di taratura con la differenza

150
 Acido sialico nei vaccini polisaccaridici

inoizircserP
delle assorbanze delle cinque soluzioni di riferimento e siringa, trasferire 4,0 ml di questa soluzione in una cella

ilareneG
con i corrispondenti contenuti di metilpentosio e leg- per ultrafiltrazione da 10 ml idonea al passaggio di
gere dalla curva, per ciascun volume esaminato, la molecole di massa molecolare relativa inferiore a
quantita© di metilpentosio presente nella soluzione in 50000. Lavare la siringa due volte con acqua R e
esame. Calcolare la media dei tre valori. trasferire le acque di lavaggio nella cella per ultrafiltra-

isilanA id
zione. Effettuare l'ultrafiltrazione agitando in maniera

idoteM
costante sotto azoto R e ad una pressione di circa
2.5.22. ACIDI URONICI NEI VACCINI POLISAC-
150 kPa. Riempire la cella con acqua R ogni volta che
CARIDICI
il volume del liquido scende ad 1 ml e continuare fino
Soluzione in esame. Utilizzare un pallone tarato di a quando sono filtrati 200 ml e il volume rimanente

irotinetnoC
/ ilairetaM
volume idoneo per la preparazione di una soluzione nella cella e© di circa 2 ml. Usando una siringa, trasferire
contenente circa 5 mg per millilitro di polisaccaride il volume residuo di liquido in un pallone tarato da
secco. Trasferire quantitativamente nel pallone il conte- 10 ml. Lavare la cella con tre porzioni, ciascuna di
nuto di un contenitore del vaccino e portare a volume 2 ml, di acqua R, trasferire le acque di lavaggio nel pal-
con acqua R. Diluire la soluzione in modo che i volumi lone tarato e diluire a 10,0 ml con acqua R (soluzione
usati nel saggio contengano dai 4 mg ai 40 mg di acido in esame). In ciascuna di due provette introdurre

ivittaeR
glucuronico (acidi uronici). Introdurre 0,25 ml, 0,50 ml 2,0 ml della soluzione in esame.
e 1,0 ml della soluzione diluita in tre provette.
Soluzioni di riferimento. Disciogliere 50 mg di sodio glu- Soluzioni di riferimento. Usare le soluzioni di riferi-
curonato R in 100 ml di acqua R (soluzione madre con- mento prescritte nella monografia.

itnemogrA
ilareneG
tenente 0,4 g di acido glucuronico per litro). Immedia-
tamente prima dell'uso, diluire 5 ml della soluzione Preparare due serie di tre provette. Introdurre nelle pro-
madre a 50 ml con acqua R (diluizione di lavoro conte- vette di ciascuna serie 0,5 ml, 1,0 ml e 1,5 ml, rispettiva-
nente 40 mg di acido glucuronico per litro). Introdurre mente, della soluzione di riferimento corrispondente al
0,10 ml, 0,25 ml, 0,50 ml, 0,75 ml e 1,0 ml della dilui- tipo di vaccino in esame e aggiustare il volume in cia-

eifargonoM

ilareneG
zione di lavoro in cinque provette. scuna provetta a 2,0 ml con acqua R.
Preparare un bianco usando 1 ml di acqua R.
Portare il volume di ciascuna provetta a 1 ml con Preparare due soluzioni in bianco usando 2,0 ml di
acqua R. Porre le provette in acqua ghiacciata ed acqua R in ciascuna provetta.

ehcituecamraF
aggiungere a ciascuna di esse, goccia a goccia e agi-

emroF
tando continuamente, 5,0 ml di soluzione borica R. A tutte le provette aggiungere 5,0 ml di resorcinolo reat-
Chiudere le provette e porle a b.m. per 15 min. Raffred- tivo R. Scaldare a 105 ‘C per 15 min, raffreddare in
dare a t.a. Aggiungere a ciascuna provetta 0,20 ml di acqua fredda e trasferire le provette in un bagno di
una soluzione (1,25 g/l) di carbazolo R in etanolo R. ghiaccio. A ciascuna provetta aggiungere 5 ml di alcool
Chiudere le provette, porle a b.m. per 15 min e raffred- isoamilico R e mescolare accuratamente. Disporre le

eiretaM
provette in un bagno di ghiaccio per 15 min. Centrifu-

emirP
dare a t.a. Misurare l'assorbanza (2.2.25) di ciascuna
soluzione a 530 nm utilizzando il bianco come liquido gare e mantenere le provette nel bagno di ghiaccio fino
di compensazione. Costruire la curva di taratura con all'esame mediante spettrofotometria di assorbimento.
le assorbanze delle cinque soluzioni di riferimento e Misurare l'assorbanza (2.2.25) di ciascuna soluzione
ehcituecamraF

con i corrispondenti contenuti di acido glucuronico e sopranatante a 580 nm e a 450 nm usando alcool iso-
inoizaraperP

ehcificepS

leggere dalla curva, per ciascun volume esaminato, la amilico R come liquido di compensazione. Per ciascuna
quantita© di acido glucuronico presente nella soluzione lunghezza d'onda, calcolare l'assorbanza come media
esaminata. Calcolare la media dei tre valori. dei valori ottenuti con due soluzioni identiche. Sot-
trarre il valore medio del bianco dai valori medi otte-
ehcitapoemO
inoizaraperP

2.5.23. ACIDO SIALICO NEI VACCINI POLISAC-

nuti per le altre soluzioni.
Riportare su un grafico la differenza tra l'assorbanza a
CARIDICI

Soluzione in esame. Trasferire quantitativamente il con- 580 nm e quella a 450 nm della soluzione di riferimento
tenuto di uno o piu© recipienti del vaccino in esame in come funzione del contenuto di acido N-acetilneuram-
un pallone tarato di volume idoneo in modo da avere minico e leggere dal grafico la quantita© di acido N-ace-
ecidnI

una concentrazione di circa 250 mg per millilitro di poli- tilneuramminico (acido sialico) nella soluzione in
saccaride e portare a volume con acqua R. Usando una esame.

151
Carbonio monossido nei gas

2.5.24. CARBONIO DIOSSIDO NEI GAS ^ un tubo a U (U3) contenente anidride fosforica R
dispersa su pomice fusa preventivamente granulata,
Il diossido di carbonio nei gas si determina usando un
analizzatore ad infrarosso (vedi Figura 2.5.24-1). ^ un tubo a U (U4) contenente 30 g di anidride iodica R
L'analizzatore ad infrarosso comprende un sistema ricristallizzata in granuli, preventivamente essiccata
generatore di due identici fasci di radiazione infrarossa, a 200 ‘C e mantenuta alla temperatura di 120 ‘C (T)
costituito da spirali scaldate elettricamente al basso durante il saggio. L'anidride iodica e© impaccata nel
rosso e munito di riflettori. Un raggio attraversa la cella tubo in colonne di 1 cm separate da colonne di 1 cm
campione e l'altro raggio attraversa la cella di riferi- di lana di vetro per dare un percorso effettivo di
mento. La cella campione riceve un flusso del gas da 5 cm,
analizzare e la cella di riferimento contiene azoto R1.
Le due camere del rivelatore sono riempite di anidride ^ un tubo di reazione (F2) contenente 2,0 ml di potassio
carbonica R1 e la radiazione e© automaticamente rice- ioduro soluzione R e 0,15 ml di amido soluzione R.
vuta selettivamente. L'assorbimento di questa radia-
zione produce calore ed una espansione diversa del gas
nelle due camere, a causa dell'assorbimento di una
parte della radiazione emessa dal diossido di carbonio
contenuto nel gas in esame. La differenza di pressione
tra le due camere del rivelatore provoca una distensione
del diaframma di metallo che le separa. Questo dia-
framma fa parte di un condensatore elettrico, la cui
capacita© varia con la differenza di pressione che, a sua
volta, dipende dal contenuto in diossido di carbonio
nel gas in esame. Poichë i raggi infrarossi sono inter-
rotti periodicamente da un otturatore rotante, il segnale
elettrico e© modulato nella frequenza. Figura 2.5.25.-1. - Apparecchio per la determinazione
del monossido di carbonio nei gas
2.5.25. CARBONIO MONOSSIDO NEI GAS (dimensioni in millimetri)
METODO I Metodo. Spurgare l'apparecchio con 5,0 litri di argon R
Apparecchiatura. L'apparecchio (vedi Figura 2.5.25.-1) e© e,di seioduro
necessario, eliminare il colore blu della soluzione
aggiungendo la minima quantita© necessaria
costituito dalle seguenti parti collegate in serie: di sodio tiosolfato 0,002 M preparato di recente. Conti-
^ un tubo a U (U1) contenente gel di silice anidro R nuare il flusso finchë non sono necessari piu© di
impregnato con cromo triossido R, 0,045 ml di sodio tiosolfato 0,002 M dopo il passaggio
^ una bottiglia di lavaggio (F1) contenente 100 ml di didal5,0cilindro
litri di argon R. Far passare il gas da esaminare
nell'apparecchio, usando il volume e la
una soluzione (400 g/l) di potassio idrossido R, velocita© di flusso indicati. Far passare le ultime tracce
^ un tubo a U (U2) contenente pasticche di potassio di iodio sviluppato nel tubo di reazione facendo
idrossido R, passare attraverso l'apparecchio 1,0 litro di argon R.

Figura 2.5.24.-1. - Analizzatore ad infrarosso

152
 Azoto monossido e azoto diossido nei gas

inoizircserP
Titolare lo iodio liberato con sodio tiosolfato 0,002 M.

ilareneG
2.5.26. AZOTO MONOSSIDO E AZOTO DIOSSIDO

Effettuare una prova in bianco usando il volume pre- NEI GAS

scritto di argon R. La differenza tra i volumi di sodio

tiosolfato 0,002 M utilizzati nelle titolazioni non e© supe- Il monossido di azoto e il diossido di azoto nei gas si
riore al limite prescritto. determinano usando un analizzatore a chemilumine-

isilanA id
scenza (vedi Figura 2.5.26.-1).

idoteM
METODO II
Il monossido di carbonio nei gas si determina usando L'apparecchio e© costituito da:
un analizzatore ad infrarosso (vedi Figura 2.5.24.-1). ^ un dispositivo di filtrazione, che verifica e controlla il
L'analizzatore comprende un sistema generatore di flusso del gas in esame,

irotinetnoC
/ ilairetaM
due raggi infrarossi identici, costituito da spirali scal-
date elettricamente al basso rosso e munito ^ un convertitore che riduce il diossido di azoto a
di riflettori. Un raggio attraversa la cella campione e monossido di azoto, per determinare il contenuto
l'altro raggio attraversa la cella di riferimento. complessivo di monossido di azoto e diossido di
La cella campione riceve un flusso del gas da analiz- azoto. L'efficienza del convertitore deve essere verifi-
zare e la cella di riferimento contiene azoto R1. cata prima dell'uso;

ivittaeR
Le due camere del rivelatore sono riempite di carbo-
nio monossido R e la radiazione e© automaticamente ^ un generatore di ozono ad una velocita© di flusso con-
ricevuta selettivamente. L'assorbimento di questa trollata; l'ozono e© prodotto da scariche elettriche ad
radiazione produce calore ed una espansione diversa alto voltaggio tra due elettrodi; il generatore di
del gas nelle due camere, a causa dell'assorbi- ozono e© alimentato con ossigeno puro o con aria

itnemogrA
ilareneG
mento di una parte della radiazione emessa dal ambiente deidratata e la concentrazione di ozono
monossido di carbonio contenuto nel gas in esame. ottenuta deve eccedere fortemente il contenuto mas-
La differenza di pressione tra le due camere del simo di ossidi di azoto rivelabili,
rivelatore provoca una distensione del diafram-
ma di metallo che le separa. Questo diaframma ^ una camera di reazione nella quale il monossido di

eifargonoM

ilareneG
fa parte di un condensatore, la cui capacita© varia con azoto e l'ozono possono reagire,
la differenza di pressione che a sua volta dipende dal
contenuto in monossido di carbonio presente nel gas ^ un sistema di rivelazione della radiazione luminosa
in esame. Poichë i raggi infrarossi sono interrotti emessa alla lunghezza d'onda di 1,2 mm, costituito
periodicamente da un otturatore rotante, il segnale da un filtro ottico selettivo e da un tubo fotomoltipli-

ehcituecamraF
elettrico e© modulato nella frequenza. catore.

emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI

Figura 2.5.26.1 - Analizzatore a chemiluminescenza

153
Diossido di zolfo

2.5.27. OSSIGENO NEI GAS 2.5.29. DIOSSIDO DI ZOLFO

L'ossigeno nei gas si determina usando un analizzatore

paramagnetico. Introdurre 150 ml di acqua R nel pallone (A) (vedi
Il principio del metodo si basa sull'elevata sensibilita© Figura 2.5.29.-1) e far passare diossido di carbonio R
paramagnetica della molecola di ossigeno. L'ossigeno attraverso l'intero sistema per 15 min alla velocita© di
esercita una forte interazione con i campi magnetici, 100 ml/min. Introdurre nella provetta (D) 10 ml di idro-
che e© misurata elettronicamente, amplificata e conver- geno perossido soluzione diluita R neutralizzata con
tita per leggere la concentrazione in ossigeno. La una soluzione (1 g/l) di blu bromofenolo R in alcool al
misura della concentrazione in ossigeno dipende dalla 20 per centoV/V R. Senza interrompere il flusso di dios-
pressione e dalla temperatura e l'analizzatore deve sido di carbonio, rimuovere l'imbuto (B) ed introdurre,
essere calibrato immediatamente prima dell'uso se non attraverso il collo del pallone (A), 25,0 g della sostanza
e© automaticamente compensato per le variazioni di in esame con l'ausilio di 100 ml di acqua R. Aggiungere,
temperatura e di pressione. Poichë l'effetto paramagne- per mezzo dell'imbuto, 80 ml di acido cloridrico
tico dell'ossigeno e© lineare, lo strumento deve avere un diluito R e bollire per 1 h. Aprire il rubinetto dell'im-
idoneo intervallo che permette letture dello 0,1 per buto, fermare il flusso di diossido di carbonio, inter-
cento o migliori. rompere il riscaldamento e l'acqua di raffreddamento.
Calibrazione dello strumento. Procedere nel modo Trasferire il contenuto della provetta con l'ausilio di
seguente: una piccola quantita© di acqua R in una beuta a collo
^ regolare lo zero facendo passare attraverso lo stru- largo da 200 ml. Scaldare a b.m. per 15 min e lasciar
mento azoto R1 ad una velocita© di flusso idonea fino raffreddare. Aggiungere 0,1 ml di una soluzione (1 g/l)
ad ottenere una lettura costante. L'azzeramento di blu bromofenolo R in alcool al 20 per cento V/V R e
dovrebbe essere effettuato conformemente alle istru- titolare con sodio idrossido 0,1 M fino a che il colore
zioni del fabbricante, cambia da giallo a blu-violetto.
^ regolare il limite appropriato facendo passare aria
(20,9 per cento V/V di O2) attraverso lo strumento Calcolare il contenuto di diossido di zolfo in parti per
ad una velocita© di flusso idonea fino ad ottenere una milione dalla espressione:
lettura costante. Il limite dovrebbe essere fissato al
20,9 per cento V/V conformemente alle istruzioni
del fabbricante. 128 a
Determinazione quantitativa. Lasciare passare il gas da
2

esaminare attraverso lo strumento ad una velocita© di

flusso costante fino ad ottenere una lettura idonea. a = numero di millilitri di sodio idrossido 0,1 M utiliz-
zati.
2.5.28. ACQUA NEI GAS

L'acqua nei gas si determina usando l'igrometro elettro-

litico descritto di seguito.
La cella di misura e© costituita da una pellicola sottile di
anidride fosforica, posta tra due fili di platino a forma
di spirale che fungono da elettrodi. Il vapore acqueo
presente nel gas da esaminare e© adsorbito dall'anidride
fosforica, che viene trasformata in acido fosforico, con-
duttore di elettricita© . Una tensione continua applicata
attraverso gli elettrodi produce l'elettrolisi dell'acqua e
la rigenerazione dell'anidride fosforica. Misurare la
corrente elettrica risultante che e© proporzionale al con-
tenuto in acqua del gas in esame. Il sistema e© auto-cali-
brante dal momento che segue la legge di Faraday.
Prelevare un campione del gas in esame. Lasciare stabi-
lizzare il gas a t.a. Depurare la cella continuamente fino
ad ottenere una lettura costante. Misurare il contenuto
di acqua nel gas in esame, assicurandosi che la tempera- Figura 2.5.29.-1.- Apparecchio per la determinazione
tura sia costante in ogni parte del dispositivo usato per del diossido di zolfo
introdurre il gas nell'apparecchio. Dimensioni in millimetri

154
 Microdeterminazione dell'acqua

inoizircserP
tura dalle letture di assorbanza delle sei soluzioni di

ilareneG
2.5.30. SOSTANZE OSSIDANTI

Trasferire 4,0 g in una beuta con tappo a smeriglio da riferimento e il corrispondente contenuto di ribosio e
125 ml ed aggiungere 50,0 ml di acqua R. Inserire il leggere dalla curva la quantita© di ribosio nella soluzione
tappo ed agitare per 5 min. Trasferire il contenuto in in esame per ciascun volume esaminato. Calcolare la
una provetta da centrifuga, con tappo a smeriglio da media dei tre valori.

isilanA id
idoteM
50 ml e centrifugare. Trasferire 30,0 ml del liquido
sopranatante limpido in una beuta con tappo a smeri- 2.5.32. MICRODETERMINAZIONE DELL'ACQUA

glio da 125 ml. Aggiungere 1 ml di acido acetico PRINCIPIO

glaciale R e 0,5 g-1,0 g di potassio ioduro R. Inserire il
tappo, agitare e lasciare a riposo per 25-30 min al buio.

irotinetnoC
La titolazione coulometrica dell'acqua si basa sulla rea-

/ ilairetaM
Aggiungere 1 ml di amido soluzione R e titolare con zione quantitativa dell'acqua con il diossido di zolfo e
sodio tiosolfato 0,002 M fino a che il colore del com- lo iodio in un mezzo anidro in presenza di una base
plesso amido-iodio scompare. Effettuare una determi- con sufficiente capacita© tampone. Rispetto al metodo
nazione in bianco. Non sono necessari piu© di 1,4 ml di volumetrico descritto precedentemente (2.5.12), lo iodio
sodio tiosolfato 0,002 M (0,002 per cento, calcolato e© prodotto elettrochimicamente nella cella di reazione

ivittaeR
come H2O2) mediante ossidazione dello ioduro. Lo iodio prodotto
1 ml di sodio tiosolfato 0,002 M equivale a 34 mg di all'anodo reagisce immediatamente con l'acqua e il
sostanze ossidanti, calcolate come idrogeno perossido. diossido di zolfo contenuti nella cella di reazione.
La quantita© di acqua nella sostanza e© direttamente pro-

itnemogrA
porzionale alla quantita© di elettricita© fino al punto di

ilareneG
2.5.31. RIBOSIO NEI VACCINI POLISACCARI-
fine titolazione. Quando viene consumata tutta l'acqua
DICI
nella cella il punto di fine titolazione e© raggiunto ed
Soluzione in esame. Per la preparazione di una solu- appare cos|© un eccesso di iodio.
zione contenente circa 5 mg per millilitro di polisacca- 1 mole di iodio equivale a 1 mole di acqua, una quantita©

eifargonoM

ilareneG
ride secco usare un pallone tarato di adatto volume. di elettricita© di 10,71 C equivale a 1 mg di acqua.
Trasferire quantitativamente il contenuto di un conte- Eliminare l'umidita© dal sistema mediante pre-elettro-
nitore nel pallone e portare a volume con acqua R. lisi. Singole determinazioni possono essere effettuate
Diluire la soluzione in modo che i volumi usati nel sag- successivamente nella stessa soluzione di reazione,

ehcituecamraF
gio contengano 2,5-25 g di ribosio. Introdurre 0,20 ml
l
rispettando le seguenti condizioni:
e 0,40 ml della soluzione diluita, in triplicato, in idonei

emroF
contenitori. ^ ogni componente della miscela in esame deve essere
compatibile con gli altri componenti,
Soluzioni di riferimento. Disciogliere 25 mg di ribosio R
in acqua R e diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente ^ non deve verificarsi nessun altra reazione,
(soluzione madre contenente 0,25 g/l di ribosio). ^ il volume e la capacita© dell'acqua del reattivo elettro-
eiretaM

emirP
Immediatamente prima dell'uso, diluire 1 ml della solu- litico devono essere sufficienti.
zione madre a 10,0 ml con acqua R (diluizione di lavoro La titolazione coulometrica e© ristretta alla determina-
contenente 25 mg/l di ribosio). Introdurre 0,10 ml, zione quantitativa di piccole quantita© di acqua; si rac-
0,20 ml, 0,40 ml, 0,60 ml, 0,80 ml e 1,0 ml della dilui- comanda un intervallo di circa 10 g-10 mg di acqua.
ehcituecamraF
inoizaraperP

zione di lavoro in sei provette.

ehcificepS
l

Preparare una soluzione del bianco usando 2 ml di L'accuratezza e la precisione del metodo sono determi-
acqua R. nate essenzialmente dall'entita© con la quale l'umidita©
atmosferica viene esclusa dal sistema. Il sistema deve
Portare il volume di ciascuna provetta a 2 ml con essere controllato mediante la misurazione dell'entita©
ehcitapoemO
inoizaraperP

acqua R ed agitare. Aggiungere a ciascuna provetta della deriva della linea base.
2 ml di una soluzione (0,5 g/l) di ferro(-ico) cloruro R
in acido cloridrico R ed agitare. Aggiungere 0,2 ml di APPARECCHIO
una soluzione (100 g/l) di orcinolo R in etanolo R. Porre
i tubi a b.m. per 20 min. Raffreddare in acqua ghiac- L'apparecchio e© costituito da una cella di reazione, gli
ciata. Misurare l'assorbanza (2.2.25) di ciascuna solu- elettrodi ed un agitatore magnetico. La cella di reazione
ecidnI

zione a 670 nm usando la soluzione del bianco come consiste di un grande compartimento anodico e di un
liquido di compensazione. Tracciare una curva di tara- compartimento piu© piccolo catodico. Entrambi i com-

155
Proteine totali

partimenti possono essere separati da un diaframma a 2.5.33. PROTEINE TOTALI

seconda della struttura dell'elettrodo. Ciascun compar-

timento contiene un elettrodo di platino. I campioni Molti dei metodi di dosaggio descritti in questo capi-
liquidi o solubilizzati vengono introdotti attraverso un tolo possono essere eseguiti usando kit commerciali.
setto, usando una siringa. Alternativamente puo© essere
usata una tecnica di evaporazione: il campione e© scal- Metodo 1

dato in un tubo (stufa) e l'acqua e© evaporata e traspor-

tata nella cella per mezzo di un flusso di gas inerte Una proteina in soluzione assorbe luce ultravioletta ad
secco. In generale, dovrebbe essere evitata l'introdu- una lunghezza d'onda di 280 nm, per la presenza nella
zione di campioni solidi nella cella. Comunque, quando sua struttura di aminoacidi aromatici, in particolare
si verifica questo caso, il solido si introduce attraverso tirosina e triptofano; questa proprieta© puo© essere usata
una porta sigillata. Devono essere prese appropriate per il dosaggio. Se il tampone usato per disciogliere
precauzioni per evitare l'introduzione di umidita© dall'a- una proteina ha un'alta assorbanza rispetto a quella
ria, come lavorare in una cappa a guanti con atmosfera dell'acqua, e© presente una sostanza interferente. Questa
di gas inerte secco. La procedura analitica e© controllata interferenza puo© essere ovviata usando il tampone
mediante un adatto dispositivo elettronico, dotato di come liquido di compensazione ma se la sostanza inter-
un ``display'' numerico. ferente produce un'alta assorbanza, i risultati possono
essere comunque compromessi. A basse concentra-
zioni, fenomeni di adsorbimento della proteina sulle
METODO pareti della cella possono ridurre significativamente il
contenuto nella soluzione. Questo puo© essere prevenuto
Riempire i compartimenti della cella di reazione con il con la preparazione di campioni con una concentra-
reattivo elettrolitico per la microdeterminazione dell'ac- zione piu© alta o usando nella preparazione un deter-
qua R in accordo con le istruzioni del produttore ed gente non ionico.
effettuare la titolazione coulometrica fino ad un punto Soluzione in esame. Disciogliere nel tampone prescritto
di fine titolazione stabile. Introdurre la prescritta quan- una quantita© adatta della sostanza in esame in modo
tita© della sostanza da esaminare nella cella di reazione, da ottenere una soluzione con una concentrazione di
agitare per 30 s, se non diversamente indicato nella proteina compresa tra 0,2 mg/ml e 2 mg/ml.
monografia, e titolare di nuovo fino ad un punto di fine Soluzione di riferimento. Preparare una soluzione con
titolazione stabile. Quando si usa una stufa, la pre- una sostanza di riferimento appropriata per la proteina
scritta quantita© di campione viene introdotta nel tubo da determinare; utilizzare lo stesso tampone e la stessa
e scaldata. Iniziare la titolazione solo dopo che l'acqua concentrazione proteica della soluzione in esame.
e© evaporata passando dal campione alla cella di titola-
zione. Leggere il valore numerico dal ``display'' dello Procedimento. Mantenere la soluzione in esame, la
strumento e calcolare, se necessario, la percentuale o soluzione di riferimento e il liquido di compensazione
la quantita© di acqua che e© presente nella sostanza. Effet- alla stessa temperatura durante lo svolgimento di que-
tuare una titolazione in bianco quando richiesta dal sto saggio. Determinare le assorbanze (2.2.25) della
tipo e dalla preparazione del campione. soluzione in esame e della soluzione di riferimento in
celle di quarzo a 280 nm, usando il tampone prescritto
come liquido di compensazione. Per ottenere risultati
VERIFICA DELL'ACCURATEZZA accurati la risposta deve essere lineare nell'intervallo
delle concentrazioni proteiche che devono essere deter-
Tra due successive titolazioni del campione introdurre minate.
una quantita© di acqua, accuratamente pesata, dello Dispersione della luce. L'accuratezza della determina-
stesso ordine di grandezza della quantita© di acqua pre- zione della proteina puo© essere diminuita dalla disper-
sente nel campione utilizzando sia l'acqua R o la solu- sione della luce da parte del campione in esame. Se le
zione standard per la microdeterminazione dell'acqua R, proteine in soluzione sono presenti come particelle con
ed effettuare la titolazione coulometrica. L'entita© dimensioni dello stesso ordine di grandezza della lun-
del recupero e© compresa tra il 97,5 per cento e il ghezza d'onda della luce utilizzata (da 250 nm a
102,5 per cento, per una aggiunta di 1000 g di H2O e
l 300 nm), la dispersione del fascio di luce produce un
tra il 90,0 per cento al 110,0 per cento per un'aggiunta aumento apparente dell'assorbanza del campione in
di 100 g di H2O.
l esame. Per calcolare il contributo all'assorbanza a

156
 Proteine totali

inoizircserP
280 nm dovuto alla dispersione, determinare le assor- stesse. Qualora nel campione in esame sia necessaria la

ilareneG
banze della soluzione in esame alle lunghezze d'onda separazione delle sostanze interferenti dalla proteina,
di 320 nm, 325 nm, 330 nm, 335 nm, 340 nm, 345 nm procedere prima della preparazione della soluzione in
e 350 nm. Riportare il logaritmo dell'assorbanza osser- esame come descritto di seguito per le sostanze interfe-
vata in funzione del logaritmo della lunghezza d'onda renti. L'effetto delle sostanze interferenti puo© essere

isilanA id
e determinare mediante regressione lineare la curva di minimizzato mediante diluizione, purchë la concentra-

idoteM
taratura che meglio si adatta ai punti riportati sul gra- zione della proteina in esame rimanga abbastanza ele-
fico. Determinare, per estrapolazione dalla curva, il vata per una misurazione accurata.
logaritmo dell'assorbanza a 280 nm. L'antilogaritmo Usare acqua distillata R per preparare tutti i tamponi e i
di questo valore e© l'assorbanza attribuita alla disper- reattivi usati in questo metodo.

irotinetnoC
/ ilairetaM
sione della luce. Correggere i valori osservati sot-
traendo l'assorbanza attribuita alla dispersione della Soluzione in esame. Disciogliere nel tampone prescritto
luce dall'assorbanza totale a 280 nm per ottenere il una quantita© appropriata della sostanza in esame, in
valore di assorbanza della proteina nella soluzione. modo da ottenere una soluzione con una concentra-
Per ridurre l'effetto della dispersione della luce, special- zione compresa nell'intervallo della curva di taratura.
mente se la soluzione e© notevolmente torbida, puo© Un tampone adatto dara© luogo ad una soluzione con

ivittaeR
essere eseguita una filtrazione con un filtro da 0,2 m l pH compreso tra 10,0 e 10,5.
che non adsorbe la proteina o una chiarificazione Soluzioni di riferimento. Disciogliere nel tampone pre-
mediante centrifugazione. scritto la sostanza di riferimento per la proteina che
Calcoli. Per effettuare i calcoli usare i valori corretti. deve essere determinata. Diluire porzioni di questa

itnemogrA
ilareneG
Calcolare la concentrazione della proteina nella solu- soluzione con lo stesso tampone in modo da ottenere
zione in esame (CU) dall'equazione seguente: almeno cinque soluzioni di riferimento con concentra-
CU CS AU =AS
ˆ † zioni della proteina uniformemente distribuite in un
adatto intervallo compreso tra 5 g/ml e 100 g/ml.
l l

eifargonoM
CS concentrazione della proteina nella soluzione

ilareneG
ˆ
Soluzione del bianco. Usare il tampone utilizzato per
di riferimento preparare la soluzione in esame e le soluzioni di riferi-
AU e AS assorbanze corrette, rispettivamente, della
ˆ mento.
soluzione in esame e della soluzione di rife- Reattivo al rame solfato. Disciogliere 100 mg di rame

ehcituecamraF
rimento. solfato R e 0,2 g di sodio tartrato R in acqua distillata R

emroF
e diluire a 50 ml con lo stesso solvente. Disciogliere
Metodo 2
10 g di sodio carbonato anidro R in acqua distillata R e
Questo metodo (comunemente chiamato dosaggio di diluire a 50 ml con lo stesso solvente. Versare lenta-
Lowry) e© basato sulla riduzione del cromogeno dell'a- mente, mescolando, la soluzione di sodio carbonato
nella soluzione di rame solfato. Utilizzare entro le 24 h.
eiretaM
cido fosfomolibdotungstico provocata dalla proteina,

emirP
nel reattivo fosfomolibdotungstico; questa riduzione Reattivo alcalino al rame. Mescolare 1 volume di reat-
da© luogo ad un massimo di assorbanza a 750 nm. Il tivo al rame solfato, 2 volumi di una soluzione (50 g/l)
reattivo fosfomolibdotungstico reagisce in particolare di sodio dodecilsolfato R e 1 volume di una soluzione
ehcituecamraF

con i residui di tirosina nella proteina. Lo sviluppo di (32 g/l) di sodio idrossido R. Conservare a temperatura
inoizaraperP

ehcificepS

colore raggiunge il massimo in 20-30 min a temperatura ambiente ed utilizzare entro 2 settimane.
ambiente; successivamente si verifica una graduale per- Fosfomolibdotungstico reattivo diluito. Mescolare 5 ml
dita di colore. Poichë il metodo e© sensibile a sostanze di fosfomolibdotungstico reattivo R con 55 ml di acqua
interferenti, puo© essere usata una procedura di precipi- distillata R. Conservare a temperatura ambiente in una
ehcitapoemO
inoizaraperP

tazione della proteina dal campione in esame. La mag- bottiglia di vetro scuro.
gior parte delle sostanze interferenti causano una
minore colorazione; tuttavia alcuni detergenti danno Procedimento. Ad 1,0 ml della soluzione in esame, della
luogo ad un lieve incremento della colorazione. Un'alta soluzione del bianco e di ciascuna soluzione di riferi-
concentrazione salina puo© causare la formazione di un mento aggiungere 1,0 ml di rame alcalino reattivo e
precipitato. Poichë diverse proteine possono dare come mescolare. Lasciare a riposo per 10 min. Aggiungere
ecidnI

risposta differenti intensita© di colore, la sostanza di 0,5 ml di fosfomolibdotungstico reattivo diluito, mesco-
riferimento e la proteina in esame devono essere le lare e lasciare a riposo a temperatura ambiente per

157
Proteine totali

30 min. Determinare l'assorbanza (2.2.25) delle solu- Soluzione in esame. Disciogliere nel tampone prescritto
zioni a 750 nm, usando la soluzione del bianco come una quantita© appropriata della sostanza in esame in
liquido di compensazione. modo da ottenere una soluzione con una concentra-
zione compresa nell'intervallo della curva di taratura.
Calcoli. La relazione tra l'assorbanza e la concentra-
zione della proteina non e© lineare; comunque, se l'inter- Soluzioni di riferimento. Disciogliere nel tampone pre-
vallo delle concentrazioni usate per preparare la curva scritto la sostanza di riferimento per la proteina da
di taratura e© sufficientemente piccolo, essa si avvicinera© determinare. Diluire porzioni di questa soluzione con
alla linearita© . Riportare le assorbanze delle soluzioni lo stesso tampone in modo da ottenere almeno cinque
di riferimento in funzione delle concentrazioni della soluzioni di riferimento con concentrazioni della pro-
proteina e usare una regressione lineare per determi- teina uniformemente distribuite in un adatto intervallo
nare la curva di taratura. Determinare la concentra- compreso tra 0,1 mg/ml e 1 mg/ml.
zione della proteina nella soluzione in esame dalla Soluzione del bianco. Usare il tampone utilizzato per
curva di taratura e dall'assorbanza della soluzione in preparare la soluzione in esame e le soluzioni di riferi-
esame. mento.
Sostanze interferenti. Nella seguente procedura al cam- Reattivo al blu acido 90. Disciogliere 0,10 g di acido
pione in esame viene aggiunto dell'acido tricloroace- blu 90 R in 50 ml di alcool R. Aggiungere 100 ml di
tico-deossicolato per rimuovere le sostanze interferenti acido fosforico R, diluire a 1000 ml con acqua distillata R
mediante precipitazione delle proteine prima del sag- e mescolare. Filtrare la soluzione e conservare a tem-
gio; questa tecnica puo© anche essere usata per concen- peratura ambiente in una bottiglia di vetro scuro.
trare le proteine da una soluzione diluita. Durante la conservazione si verifica una lenta precipi-
tazione del colorante. Filtrare il reattivo prima dell'uso.
Ad 1 ml di una soluzione della sostanza in esame Procedimento. A 0,100 ml della soluzione in esame,
aggiungere 0,1 ml di una soluzione (1,5 g/l) di sodio della soluzione del bianco e di ciascuna soluzione di
deossicolato R. Mescolare usando un miscelatore vortex riferimento, aggiungere 5 ml del reattivo all'acido
e lasciare a riposo a temperatura ambiente per 10 min. blu 90. Mescolare capovolgendo i recipienti delle solu-
Aggiungere 0,1 ml di una soluzione (720 g/l) di acido zioni evitando la formazione di schiuma che provoche-
tricloroacetico R e mescolare usando un miscelatore rebbe una minore riproducibilita© . Determinare le assor-
vortex. Centrifugare a 3000 g per 30 min, decantare il banze (2.2.25) delle soluzioni di riferimento e della solu-
liquido e rimuovere ogni liquido residuo con una zione in esame a 595 nm, usando la soluzione del
pipetta. Ridisciogliere il sedimento di proteina in 1 ml bianco come liquido di compensazione. Non usare celle
di rame alcalino reattivo. spettrofotometriche al quarzo (silice) perchë il colo-
rante si lega a questo materiale.
Calcoli. La relazione tra l'assorbanza e la concentra-
Metodo 3
zione della proteina non e© lineare; comunque, se l'inter-
Questo metodo (comunemente chiamato dosaggio di vallo delle concentrazioni usate per preparare la curva
Bradford) e© basato sullo spostamento dell'assorbi- di taratura e© sufficientemente piccolo, essa si avvicinera©
mento da 470 nm a 595 nm osservato quando il colo- alla linearita© . Riportare le assorbanze delle soluzioni
rante acido blu 90 si lega alla proteina. Il colorante di riferimento in funzione delle concentrazioni della
acido blu 90 si lega piu© rapidamente ai residui di argi- proteina ed usare una regressione lineare per determi-
nina e di lisina delle proteine e questo puo© portare per nare la curva di taratura. Determinare la concentra-
proteine differenti ad una variazione nella risposta del zione della proteina nella soluzione in esame dalla
dosaggio. La proteina usata come sostanza di riferi- curva di taratura e dall'assorbanza della soluzione in
mento deve essere la stessa della proteina da determi- esame.
nare. Anche se esistono relativamente poche sostanze
interferenti, e© preferibile non avere detergenti e anfoliti Metodo 4

nel campione in esame. Campioni fortemente alcalini

possono interferire con il reattivo acido. Questo metodo (comunemente chiamato dosaggio con
acido bicinconinico o dosaggio BCA) e© basato sulla
Usare acqua distillata R per preparare tutti i tamponi riduzione, da parte della proteina, dello ione rameico
e i reattivi usati per questo metodo. (Cu2+) a ione rameoso (Cu1+). Il reattivo all'acido

158
 Proteine totali

inoizircserP
bicinconinico e© usato per rivelare lo ione rameoso. di compensazione. Dopo il raffreddamento delle solu-

ilareneG
Poche sostanze interferiscono con la reazione; quando zioni a temperatura ambiente, l'intensita© del colore
sono presenti sostanze interferenti il loro effetto puo© continua ad aumentare gradualmente.
essere minimizzato mediante diluizione, purchë la con- Calcoli. La relazione tra l'assorbanza e la concentra-
centrazione della proteina in esame rimanga ad un zione della proteina non e© lineare; comunque se l'inter-

isilanA id
valore sufficiente per una misurazione accurata. Per

idoteM
rimuovere le sostanze interferenti puo© essere usata, in vallo delle concentrazioni usate per preparare la curva
alternativa, la procedura di precipitazione della pro- di taratura e© sufficientemente piccolo, essa si avvicinera©
teina descritta nel Metodo 2. Poichë i differenti tipi di alla linearita© . Riportare le assorbanze delle soluzioni
proteine possono dare come risposta differenti intensita© di riferimento in funzione delle concentrazioni di pro-
teina ed usare una regressione lineare per determinare

irotinetnoC
/ ilairetaM
di colore, la proteina di riferimento e la proteina in la curva di taratura. Determinare la concentrazione
esame devono essere le stesse. della proteina nella soluzione in esame dalla curva di
Usare acqua distillata R per preparare tutti i tamponi e i taratura e dall'assorbanza della soluzione in esame.
reattivi usati per questo metodo.

ivittaeR
Soluzione in esame. Disciogliere nel tampone prescritto
Metodo 5

una quantita© appropriata della sostanza in esame in Questo metodo (comunemente chiamato dosaggio del
modo da ottenere una soluzione con una concentra- biureto) e© basato sull'interazione, in soluzione alcalina,
zione compresa nell'intervallo delle concentrazioni dello ione rameico (Cu ) con la proteina e conseguente
2+
delle soluzioni di riferimento. sviluppo di una assorbanza a 545 nm. Questo dosaggio

itnemogrA
ilareneG
Soluzioni di riferimento. Disciogliere nel tampone pre- presenta una differenza minima tra campioni equiva-
scritto la sostanza di riferimento per la proteina da lenti di IgG e di albumina. L'aggiunta di sodio
determinare. Diluire porzioni di questa soluzione con idrossido e del reattivo al biureto come reattivo combi-
lo stesso tampone in modo da ottenere almeno cinque nato, l'insufficiente mescolamento dopo l'aggiunta del

eifargonoM
sodio idrossido, o un tempo lungo tra l'aggiunta della

ilareneG
soluzioni di riferimento con concentrazioni della pro- soluzione di sodio idrossido e l'aggiunta del reattivo al
teina uniformemente distribuite in un adatto intervallo biureto, indurra© per i campioni di IgG una piu© alta
compreso tra 10 g/ml e 1200 g/ml.
l l
risposta rispetto ai campioni di albumina. Il metodo
dell'acido tricloroacetico, usato per minimizzare gli

ehcituecamraF
Soluzione del bianco. Usare il tampone utilizzato per
preparare la soluzione in esame e le soluzioni di riferi- effetti delle sostanze interferenti, puo© anche essere

emroF
mento. usato per determinare il contenuto di proteina in cam-
pioni in esame aventi concentrazioni inferiori a 500 g l

BCA-reattivo. Disciogliere 10 g di disodio bicinconina- per millilitro.

to R, 20 g di sodio carbonato monoidrato R, 1,6 g di Usare acqua distillata R per preparare tutti i tamponi e i
sodio tartrato R, 4 g di sodio idrossido R e 9,5 g di sodio reattivi usati per questo metodo.
eiretaM

emirP
bicarbonato R in acqua distillata R. Se necessario por-
tare il pH a 11,25 con una soluzione di sodio idrossido R Soluzione in esame. Disciogliere in una soluzione (9 g/l)
o una soluzione di sodio bicarbonato R. Diluire a di sodio cloruro R una quantita© appropriata della
1000 ml con acqua distillata R e mescolare. sostanza in esame in modo da ottenere una soluzione
ehcituecamraF
inoizaraperP

con una concentrazione compresa nell'intervallo delle

ehcificepS

Reattivo al rame-BCA. Mescolare 1 ml di una soluzione concentrazioni delle soluzioni di riferimento.

(40 g/l) di rame solfato R e 50 ml di BCA-reattivo. Soluzioni di riferimento. Disciogliere in una soluzione
Procedimento. Mescolare 0,1 ml della soluzione in (9 g/l) di sodio cloruro R la sostanza di riferimento per
la proteina da determinare. Diluire porzioni di questa
ehcitapoemO
inoizaraperP

esame, della soluzione del bianco e di ciascuna solu- soluzione con una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R
zione di riferimento con 2 ml di reattivo al rame-BCA. in modo da ottenere almeno tre soluzioni di riferi-
Incubare le soluzioni a 37 ‘C per 30 min, annotare l'ora mento con concentrazioni della proteina distri-
e lasciare raffreddare le miscele a temperatura buite uniformemente in un intervallo appropriato tra
ambiente. Entro 60 min dalla fine dell'incubazione, 0,5 mg/ml e 10 mg/ml.
determinare le assorbanze (2.2.25) delle soluzioni di
ecidnI

riferimento e della soluzione in esame in celle di quarzo Soluzione del bianco. Usare una soluzione (9 g/l) di
a 562 nm, usando la soluzione del bianco come liquido sodio cloruro R.

159
Proteine totali

Reattivo al biureto. Disciogliere 3,46 g di rame solfato R

dell'amminoacido ed il gruppo e-ammino dei residui di
in 10 ml di acqua distillata R calda e lasciar raffreddare
lisina). La sensibilita© del dosaggio puo© essere aumen-
(Soluzione A). Disciogliere 34,6 g di sodio citrato R e tata idrolizzando la proteina prima dell'aggiunta della
20,0 g di sodio carbonato anidro R in 80 ml di acqua o-ftalaldeide. L'idrolisi rende disponibile il gruppo
distillata R calda, e lasciar raffreddare (Soluzione B). -amminico degli amminoacidi costituenti per la rea-
a

Mescolare le soluzioni A e B e diluire a 200 ml con zione con il reattivo alla ftalaldeide. Il metodo richiede
acqua distillata R. Usare entro 6 mesi. Non usare il reat-
quantita© molto piccole di proteina. Ammine primarie,
tivo se sviluppa torbidita© o se contiene un qualsiasi come il tris(idrossimetil)amminometano e i tamponi
precipitato. amminoacidici, reagiscono con la ftalaldeide e devono
Procedimento. Ad un volume della soluzione in esame essere pertanto evitati o rimossi. L'ammoniaca ad alte
aggiungere un volume uguale di una soluzione (60 g/l) concentrazioni reagisce con la ftalaldeide. La fluore-
di sodio idrossido R e mescolare. Aggiungere immedia- scenza ottenuta quando l'ammina reagisce con la ftalal-
tamente il reattivo al biureto equivalente a 0,4 volumi deide puo© essere instabile. L'uso di procedure automa-
della soluzione in esame e mescolare rapidamente. tizzate per standardizzare questo metodo puo© aumen-
Lasciare a riposo ad una temperatura compresa tra tare l'accuratezza e la precisione del saggio.
15 ‘C e 25 ‘C per non meno di 15 min. Entro 90 min Usare acqua distillata R per preparare tutti i tamponi e i
dall'aggiunta del reattivo al biureto, determinare le reattivi usati per questo metodo.
assorbanze (2.2.25) delle soluzioni di riferimento e della
soluzione in esame al massimo di 545 nm, usando la Soluzione in esame. Disciogliere in una soluzione (9 g/l)
soluzione del bianco come liquido di compensazione. di sodio cloruro R una quantita© adatta della sostanza
Ogni soluzione che sviluppa torbidita© o un precipitato da esaminare. Diluire alcune porzioni di questa solu-
non e© accettabile per la determinazione della concentra-zione con una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R in
zione della proteina. modo da ottenere una soluzione a concentrazione com-
Calcoli. La relazione tra l'assorbanza e la concentra- presa nell'intervallo delle concentrazioni delle soluzioni
zione della proteina e© approssimativamente lineare di riferimento. Portare il pH della soluzione tra 8 e
entro l'intervallo indicato di concentrazioni della pro- 10,5 prima di aggiungere la ftalaldeide.
teina delle soluzioni di riferimento. Riportare le assor-
banze delle soluzioni di riferimento in funzione delle Soluzioni di riferimento. Disciogliere in una soluzione
concentrazioni della proteina ed usare una regressione (9 g/l) di sodio cloruro R la sostanza di riferimento per
lineare per determinare la curva di taratura. Calcolare la proteina da determinare. Diluire alcune porzioni di
il coefficiente di correlazione per la curva di taratura.questa soluzione con una soluzione (9 g/l) di sodio clo-
Un sistema adatto e© quello che produce una linea con ruro R in modo da ottenere almeno cinque soluzioni di
un coefficiente di correlazione non inferiore a 0,99. riferimento con concentrazioni proteiche distribuite
Determinare la concentrazione della proteina nella uniformemente in un intervallo adatto compreso tra
soluzione in esame dalla curva di taratura e dalla assor-10 g/ml e 200 g/ml. Portare le soluzioni ad un
l l

banza della soluzione in esame. pH compreso tra 8 e 10,5 prima dell'aggiunta del reat-
Sostanze interferenti. Per minimizzare l'effetto delle tivo alla ftalaldeide.
sostanze interferenti, la proteina puo© essere precipitata
Soluzione del bianco. Usare una soluzione (9 g/l) di
dal campione in esame come segue: ad 1 volume di una sodio cloruro R.
soluzione del campione in esame aggiungere 0,1 volumi
di una soluzione (500 g/l) di acido tricloroacetico R, eli-
Borato soluzione tampone. Disciogliere 61,83 g di acido
minare lo strato sopranatante e disciogliere il precipi- borico R in acqua distillata R e portare il pH a 10,4 con
tato in un piccolo volume di sodio idrossido 0,5 M. una soluzione di potassio idrossido R. Diluire a 1000 ml
Usare la soluzione ottenuta per preparare la soluzione con acqua distillata R e mescolare.
in esame.
Ftalaldeide soluzione madre. Disciogliere 1,20 g di ftal-
Metodo 6 aldeide R in 1,5 ml di metanolo R, aggiungere 100 ml di
borato soluzione tampone e mescolare. Aggiungere
Questo metodo fluorimetrico e© basato sulla derivatizza- 0,6 ml di una soluzione (300 g/l) di macrogol 23 lauril-
zione della proteina con o-ftalaldeide che reagisce con etere R e mescolare. Conservare a temperatura
le ammine primarie della proteina (l'azoto terminale ambiente ed usare entro 3 settimane.

160
 Acido acetico nei peptidi sintetici

inoizircserP
Reattivo alla ftalaldeide. A 5 ml di ftalaldeide soluzione con un rivelatore di chemioluminescenza. Un materiale

ilareneG
madre aggiungere 15 l di 2-mercaptoetanolo R. Prepa-
l di riferimento proteico relativamente puro e simile per
rare almeno 30 min prima dell'uso ed usare entro 24 h. composizione alle proteine in esame e© usato per otti-
Procedimento. Mescolare 10 l della soluzione in esame mizzare l'iniezione e i parametri di pirolisi e per valu-
tare la riproducibilita© dell'analisi.
l

e di ciascuna delle soluzioni di riferimento con 0,1 ml

isilanA id
idoteM
di reattivo alla ftalaldeide e lasciare a riposo a tempera- Calcoli. La concentrazione della proteina e© calcolata
tura ambiente per 15 min. Aggiungere 3 ml di sodio dividendo il contenuto di azoto del campione per il con-
idrossido 0,5 M e mescolare. Determinare l'intensita© tenuto teorico di azoto della proteina. Il contenuto teo-
della fluorescenza (2.2.21) delle soluzioni sia per le solu- rico di azoto della proteina puo© essere determinato
zioni di riferimento e che per la soluzione in esame con dalla composizione chimica della proteina o per con-

irotinetnoC
/ ilairetaM
una lunghezza d'onda di eccitazione di 340 nm e ad fronto con una sostanza di riferimento appropriata.
una lunghezza d'onda di emissione compresa tra
440 nm e 455 nm. Misurare l'intensita© della fluore-
scenza di un dato campione solo una volta, poichë l'ir- 2.5.34. ACIDO ACETICO NEI PEPTIDI SINTETICI

raggiamento diminuisce l'intensita© di fluorescenza. Esaminare mediante cromatografia liquida (2.2.29).

ivittaeR
Calcoli. La relazione tra la fluorescenza e la concentra- Soluzione in esame. Preparare come descritto nella
zione della proteina e© lineare. Riportare l'intensita© della monografia.
fluorescenza delle soluzioni di riferimento in funzione
delle concentrazioni delle proteine ed usare una regres- Soluzione di riferimento. Preparare una soluzione
(0,10 g/l) di acido acetico glaciale R in una miscela di

itnemogrA
sione lineare per determinare la curva di taratura.

ilareneG
Determinare la concentrazione della proteina nella 5 volumi di fase mobile B e 95 volumi di fase mobile A.
soluzione in esame dalla curva di taratura e dall'inten- Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
sita© della fluorescenza della soluzione in esame. usando:
^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 0,25 m e

eifargonoM

ilareneG
Metodo 7
con diametro interno di 4,6 mm impaccata con gel di
Questo metodo e© basato sull'analisi dell'azoto come silice ottadecilsililato per cromatografia R (5 m),
l

mezzo di determinazione di una proteina. L'interfe- ^ come fase mobile ad una velocita© di flusso di1,2 ml/min:
renza causata dalla presenza, nella proteina in esame,

ehcituecamraF
di altre sostanze contenenti azoto puo© influenzare la Fase mobile A. Diluire 0,7 ml di acido fosforico R a
1000 ml con acqua R; aggiustare il pH a 3,0 con sodio

emroF
determinazione della proteina effettuata con questo idrossido soluzione concentrata R,
metodo. Le tecniche di analisi dell'azoto distruggono il
campione in esame durante le analisi ma non sono limi- Fase mobile B. Metanolo R2,
tate al solo caso di proteina in ambiente acquoso.
Procedimento A. Procedere come prescritto per la deter-
eiretaM
Tempo Fase mobile A Fase mobile B

V/V) V/V)

emirP
minazione dell'azoto mediante digestione con acido
(min) (per cento (per cento

solforico (2.5.9) o usare una strumentazione commer- 0-5 95 5

ciale per il dosaggio Kjeldahl dell'azoto. 5 - 10 95 50
! 5 50
!

10 - 20 50 50
ehcituecamraF

Procedimento B. E' disponibile una strumentazione

inoizaraperP

20 - 22 50 95 50 5
ehcificepS

commerciale per l'analisi dell'azoto. La maggior parte

! !

degli strumenti per l'analisi dell'azoto e© basata sulla 22 - 30 95 5

pirolisi (per es. combustione del campione in ossigeno ^ come rivelatore uno spettrofotometro regolato a
a temperature che raggiungono 1000 ‘C) che dall'azoto 210 nm.
ehcitapoemO
inoizaraperP

presente nella sostanza in esame da© luogo alla forma-

zione di azoto monossido (NO) e altri ossidi di azoto Iniettare 10 l della soluzione di riferimento e 10 l della
l l

(NOx). Alcuni strumenti convertono gli ossidi di azoto soluzione in esame. Nel cromatogramma ottenuto, il
in azoto gassoso, che e© quantificato mediante un rivela- picco corrispondente all'acido acetico ha un tempo di
tore di conduttivita© termica. Altri strumenti mescolano ritenzione di 3-4 min. La linea di base presenta un
azoto monossido (NO) con ozono (O3) per produrre innalzamento, dopo l'inizio del gradiente lineare, che
diossido di azoto in uno stato eccitato (NO2*), che
ecidnI

corrisponde all'eluizione del peptide dalla colonna.

emette luce quando decade e puo© essere quantificato Determinare il contenuto di acido acetico nel peptide.

161
 2.6 Saggi biologici

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
2.6. Saggi biologici . . . . . . . . . . . . . . . . . 165 2.6.13. Contaminazione microbica dei pro-

idoteM
2.6.1. Sterilita© . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 165 dotti non obbligatoriamente sterili
2.6.2. Micobatteri . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 170 (saggi per i microrganismi spefi-
2.6.3. Saggi per i virus estranei su uova cati) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 183
embrionate . . . . . . . . . . . . . . . . . . 170 2.6.14. Endotossine batteriche . . . . . . . . . . 189

irotinetnoC
/ ilairetaM
2.6.4. Saggi per i virus della leucosi . . . . . . 171 2.6.15. Attivatore della precallicreina . . . . . 200
2.6.5. Saggi per i virus estranei su colture 2.6.16. Saggio per gli agenti estranei nei vac-
cellulari . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171 cini virali per uso umano . . . . . . . 201
2.6.6. Saggi per gli agenti estranei su pul- 2.6.17. Attivita© anticomplementare dell'im-
cino . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171 munoglobulina . . . . . . . . . . . . . . . 202
2.6.7. Micoplasmi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 172 2.6.18. Saggio per la neurovirulenza dei vac-

ivittaeR
2.6.8. Pirogeni . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 176 cini di virus vivi . . . . . . . . . . . . . . 205
2.6.9. Tossicita© anormale . . . . . . . . . . . . . . 177 2.6.19. Saggio per la neurovirulenza del vac-
2.6.10. Istamina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 178 cino poliomielitico per uso orale . 206
2.6.11. Sostanze ipotensive . . . . . . . . . . . . . 179 2.6.20. Emoagglutinine anti-A ed anti-B

itnemogrA
2.6.12. Contaminazione microbica dei pro- (metodo indiretto) . . . . . . . . . . . . 208

ilareneG
dotti non obbligatoriamente sterili 2.6.21. Tecniche di amplificazione dell'acido
(conta totale di microrganismi nucleico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 208
aerobi vivi) . . . . . . . . . . . . . . . . . . 179 2.6.22. Fattori della coagulazione attivati . . 212

eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Sterilita©

inoizircserP
Mescolare la L-cistina, l'agar, il sodio cloruro, il gluco-

ilareneG
2.6. SAGGI BIOLOGICI
sio, l'estratto di lievito solubile in acqua e l'idrolizzato
pancreatico di caseina con l'acqua R e scaldare fino
ad ottenere una soluzione. Disciogliere il sodio tioglico-
2.6.1. STERILITAé

Il saggio si applica alle sostanze, alle preparazioni o ai lato o l'acido tioglicolico nella soluzione e, se neces-
materiali che, in accordo con la Farmacopea, devono sario, aggiungere sodio idrossido 1 M in modo

isilanA id
essere sterili. Comunque un risultato soddisfacente indica

idoteM
che, dopo la sterilizzazione, la soluzione abbia un pH
solo che non sono stati riscontrati microrganismi conta- di 7,1 0,2. Se e© necessaria la filtrazione, scaldare di
minanti nel campione esaminato nelle condizioni del sag-
6

nuovo la soluzione senza bollire e filtrarla ancora calda

gio. Una linea guida concernente ulteriori regole da appli- attraverso un filtro di carta bagnato. Aggiungere la
care per dimostrare la sterilita© del lotto e© riportata alla soluzione di resazurina sodica, mescolare e ripartire il

irotinetnoC
fine di questo testo.

/ ilairetaM
terreno di coltura in appropriati recipienti facendo in
PRECAUZIONI NEI CONFRONTI DELLA CON- modo che il rapporto superficie-profondita© del terreno
TAMINAZIONE MICROBICA di coltura sia tale che non piu© del terzo superiore del
terreno subisca alla fine del periodo di incubazione un
Il saggio di sterilita© si effettua in condizioni asettiche cambiamento di colore indicativo della cattura di ossi-
usando, per esempio, una cappa a flusso laminare di geno. Sterilizzare in autoclave usando un procedimento
classe A situata in una camera sterile di classe B, o un

ivittaeR
convalidato. Conservare il terreno ad una temperatura
isolatore. Le precauzioni prese per evitare la contami- compresa tra 2 ‘C e 25 ‘C in un recipiente sterile, sigil-
nazione non devono influire sui microrganismi ricercati lato, a meno che esso non sia da utilizzare immediata-
mediante il saggio. Le condizioni di lavoro nelle quali i mente. Se necessario, rigenerare il terreno di coltura
saggi sono eseguiti sono controllate regolarmente appena prima dell'uso per esempio riscaldando a b.m.
mediante un appropriato campionamento fatto nell'a-

itnemogrA
per 20 min e raffreddando rapidamente, facendo atten-

ilareneG
rea di lavoro ed effettuando controlli appropriati come zione ad evitare l'introduzione di aria non sterile nel
quelli indicati nelle Direttive della Comunita© Europea recipiente.
e nelle associate Note esplicative sulle Buone Pratiche
di Fabbricazione. Terreno di idrolizzato di soia e caseina.
Idrolizzato pancreatico di caseina 17,0 g

eifargonoM
TERRENI DI COLTURA

ilareneG
I terreni di coltura per il saggio possono essere preparati Idrolizzato papaico di farina di soia 3,0 g
come descritti di seguito o possono essere usate formula- Sodio cloruro 5,0 g
zioni disidratate purchë soddisfino al saggio di fertilita© Potassio fosfato dibasico 2,5 g
dopo la ricostituzione. Glucosio monoidrato 2,5 g

ehcituecamraF
I terreni di coltura riportati di seguito si sono rivelati Acqua R 1000 ml
pH dopo la sterilizzazione 7,3 0,2

emroF
appropriati per il saggio di sterilita© . Il terreno di coltura 6

fluido al tioglicolato e© destinato principalmente alla Disciogliere i solidi in acqua R, scaldare leggermente
coltura di batteri anaerobi, ma permette anche di evi- per ottenere una soluzione. Raffreddare la soluzione a
denziare i batteri aerobi. Il terreno di coltura di idroliz- t.a. Aggiungere sodio idrossido 1 M, se necessario, in
zato di soia e caseina e© destinato principalmente alla modo che, dopo la sterilizzazione, la soluzione abbia
coltura di batteri aerobi ma e© anche appropriato per i un pH di 7,3 0,2. Filtrare, se necessario, per chiarifi-
eiretaM

emirP
6

funghi. Si possono usare altri terreni di coltura purchë care, distribuire in appropriati recipienti e sterilizzare
essi abbiano dimostrato di consentire la crescita di in autoclave usando un procedimento convalidato.
diversi tipi di microrganismi. Conservare il terreno ad una temperatura compresa
tra 2 ‘C e 25 ‘C in un recipiente sigillato sterile, a meno
ehcituecamraF

Terreno fluido al tioglicolato. che esso non sia usato immediatamente.

inoizaraperP

ehcificepS

L-Cistina 0,5 g I terreni di coltura usati, sia quelli descritti precedente-

Agar granulare (contenuto di umidita© mente che altri, soddisfano ai saggi seguenti effettuati
non superiore al 15 per cento) 0,75 g prima o contemporaneamente al saggio sul prodotto
Sodio cloruro 2,5 g da esaminare.
Glucosio monoidrato 5,5 g
ehcitapoemO
inoizaraperP

Estratto di lievito (solubile in acqua) 5,0 g Sterilita©. Incubare porzioni dei terreni di coltura alle
Idrolizzato pancreatico di caseina 15,0 g temperature indicate nella Tabella 2.6.1.-1 per 14 giorni.
Sodio tioglicolato oppure 0,5 g Non si deve verificare crescita di microrganismi.
Acido tioglicolico 0,3 ml Saggio di fertilita© per aerobi, anaerobi e funghi . Inocu-
Resazurina sodica soluzione (1 in 1000), 1,0 ml lare delle porzioni di terreno fluido al tioglicolato con
preparata di recente un piccolo numero di microrganismi (10-100 UFC sono
ecidnI

Acqua R 1000 ml appropriate) utilizzando almeno una specie batterica

pH dopo la sterilizzazione 7,1 0,26 aerobica ed una specie batterica anaerobica. Per il ter-

165
Sterilita©

reno di coltura di idrolizzato di soia e caseina, usare Filtrazione su membrana . Dopo trasferimento del con-
almeno una specie fungina ed una specie batterica aero- tenuto del o dei recipienti da esaminare sulla mem-
bica. Le specie appropriate per il terreno di coltura brana, aggiungere un inoculo di un piccolo numero di
sono indicate nella Tabella 2.6.1.-1. Incubare i micror- microrganismi vivi (10-100 UFC sono appropriate) alla
ganismi nelle condizioni indicate nella Tabella 2.6.1.-1 porzione finale del diluente sterile usato per lavare il fil-
per non piu© di 3 giorni nel caso di batteri e non piu© di tro.
5 giorni nel caso di funghi.
Le tecniche di mantenimento della coltura del lotto di Inoculazione diretta . Dopo trasferimento del contenuto
semenza (sistema del lotto di semenza) sono tali che i del o dei recipienti da esaminare (o i fili, per il catgut e
microrganismi vivi usati per l'inoculazione non hanno gli altri fili chirurgici per uso veterinario) sul terreno
subito piu© di 5 passaggi dal lotto di semenza primario di coltura, aggiungere un inoculo di un piccolo numero
iniziale. di microrganismi vivi (10-100 UFC sono appropriate)
I terreni di coltura sono appropriati se si verifica una al terreno di coltura.
crescita dei microrganismi chiaramente visibile.
In entrambi i casi effettuare un saggio di fertilita© come
SAGGIO DI CONVALIDA controllo positivo. Incubare tutti i recipienti contenenti
Inoculare delle porzioni di terreno fluido al tioglicolato il terreno di coltura alle temperature indicate nella
con un piccolo numero di microrganismi (10-100 UFC Tabella 2.6.1.-1 per non piu© di 3 giorni per i batteri e di
sono appropriate) sia con i batteri aerobici che anaero- 5 giorni per i funghi.
bici indicati nella Tabella 2.6.1.-1. Per il terreno di col- Se si ottiene una crescita dei microrganismi rapida e
tura di idrolizzato di soia e caseina, usare i funghi indi-
cati nella Tabella 2.6.1.-1. Effettuare un saggio come nettamente visibile dopo l'inoculazione, confrontabile
descritto nel Saggio di sterilita© del prodotto in esame visivamente con quella del contenitore di controllo
usando esattamente lo stesso metodo ad eccezione senza il prodotto, il prodotto non possiede attivita© anti-
delle seguenti modifiche. microbica nelle condizioni del saggio oppure questa
attivita© e© stata eliminata soddisfacentemente. Il saggio
Tabella 2.6.1.-1.- Microrganismi in esame appropriati di sterilita© puo© quindi essere effettuato senza ulteriore
all'uso nel Saggio di fertilita© e nel Saggio di convalida modifica.
Microrganismo Incubazione Se in presenza del prodotto da esaminare non si ottiene
una crescita microbica rapida e nettamente visibile,
Specie Ceppo appropriato Temperatura (‘C) Durata massima
confrontabile visivamente con quella dei recipienti di
controllo senza il prodotto, questo possiede un'attivita©
Tipo: batteri aerobi Per tutti gli aerobi antimicrobica che non e© stata soddisfacentemente eli-
Staphylococcus aureus ATCC 6538 minata nelle condizioni del saggio. Modificare le condi-
CIP 4.83 zioni allo scopo di eliminare l'attivita© antimicrobica e
NCTC 10788
NCIMB 9518 ripetere il saggio di convalida.
Bacillus subtilis ATCC 6633 Questa convalida si effettua:
CIP 52.62 30 - 35 3 giorni a)quando il saggio di sterilita© viene effettuato su un
NCIMB 8054
nuovo prodotto;
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
NCIMB 8626 b)se vi e© un cambiamento delle condizioni sperimentali
CIP 82.118 del saggio.
Tipo: batteri anaerobi Per tutti gli anaerobi La convalida puo© essere effettuata simultaneamente al
saggio di sterilita© del prodotto da esaminare, ma prima
Clostridium sporogenes ATCC 19404 della interpretazione dei risultati di questo saggio.
CIP 79.3 30 - 35 3 giorni
Tipo: funghi Per tutti i funghi SAGGIO DI STERILITA' DEL PRODOTTO DA
Candida albicans ATCC 10231 ESAMINARE
IP 48.72
ATCC 2091 Il saggio puo© essere effettuato usando la tecnica di fil-
IP 1180.79 20 - 25 5 giorni trazione su membrana o mediante inoculazione diretta
Aspergillus niger ATCC 16404 dei terreni di coltura con il prodotto da esaminare.
In entrambi i casi vengono inclusi appropriati controlli

166
 Sterilita©

inoizircserP
negativi usando preparazioni conosciute come sterili. trasferire il terreno di coltura sulla membrana dell'ap-

ilareneG
La tecnica di filtrazione su membrana e© usata quando parecchio. Incubare i terreni di coltura per almeno 14
la natura del prodotto lo permette, cioe© nel caso di pre- giorni, salvo indicazione diversa, a 30 - 35 ‘C nel saggio
parazioni acquose filtrabili, di preparazioni alcooliche destinato principalmente alla rivelazione dei batteri ed
o oleose e di preparazioni miscibili con o solubili in sol- a 20 - 25 ‘C nel saggio destinato principalmente alla

isilanA id
venti acquosi o oleosi che non hanno un effetto antimi- rivelazione dei funghi.

idoteM
crobico nelle condizioni del saggio. Solidi solubili. Usare per ciascun terreno di coltura una
Filtrazione su membrana . Usare filtri a membrana che quantita© , non inferiore a quella prescritta nella Tabella
hanno una dimensione nominale dei pori non superiore 2.6.1.-2, del prodotto disciolto in un solvente appro-
a 0,45 m e per i quali e© stata stabilita l'efficacia nel priato come una soluzione neutra (1 g/l) di peptone di

irotinetnoC
/ ilairetaM
l

trattenere i microrganismi. Si usano filtri in nitrato di carne o di caseina e procedere con il saggio come
cellulosa, per esempio, per le soluzioni acquose, oleose descritto precedentemente per le soluzioni acquose,
e debolmente alcooliche e filtri in acetato di cellulosa, usando una membrana appropriata al solvente scelto.
per esempio, per le soluzioni fortemente alcooliche. Fil- Oli e soluzioni oleose. Usare per ciascun terreno di col-
tri particolari possono essere necessari per alcuni pro- tura una quantita© di prodotto non inferiore a quella

ivittaeR
dotti, per esempio, per gli antibiotici. prescritta nella Tabella 2.6.1.-2. Gli oli e le soluzioni
La tecnica descritta di seguito presuppone che si usino oleose di viscosita© sufficientemente bassa possono
membrane di circa 50 mm di diametro. Se si usano filtri essere filtrati, senza diluizione, attraverso la membrana
di diametro differente, i volumi delle diluizioni e dei asciutta. Gli oli viscosi possono essere diluiti con un

itnemogrA
ilareneG
lavaggi devono essere aggiustati di conseguenza. diluente sterile appropriato come l'isopropile miristato
Gli apparecchi di filtrazione e le membrane sono steri- che ha dimostrato di non avere attivita© antimicrobica
lizzati mediante procedimenti appropriati. L'apparec- nelle condizioni del saggio. Lasciare penetrare per gra-
chio e© costruito in maniera tale che la soluzione da esa- vita© l'olio nella membrana, quindi filtrare applicando
minare possa essere introdotta e filtrata in condizioni gradualmente la pressione o l'aspirazione. Lavare la

eifargonoM

ilareneG
asettiche; deve permettere di rimuovere in maniera membrana almeno tre volte filtrando ogni volta, attra-
asettica la membrana per trasferirla nel terreno di col- verso di essa, circa 100 ml di una soluzione neutra ste-
tura o di effettuare l'incubazione dopo l'aggiunta del rile appropriata, come peptone (1 g/l) di carne o di
terreno di coltura all'apparecchio stesso. caseina contenente 10 g/l di polisorbato 80 o di altri

ehcituecamraF
Soluzioni acquose. Se appropriato, trasferire una pic- agenti emulsionanti, in concentrazione appropriata,
che dimostrino di non avere azione antimicrobica nelle

emroF
cola quantita© di un idoneo diluente sterile, come per condizioni del saggio. Trasferire la membrana o, le
esempio una soluzione neutra (1 g/l) di peptone di membrane nel terreno di coltura o nei terreni di coltura
carne o di caseina a pH 7,1 0,2, sulla membrana del-
6
o, viceversa, come descritto precedentemente per le
l'apparecchio e filtrare. Il diluente puo© contenere soluzioni acquose ed incubare alle stesse temperature e
sostanze neutralizzanti appropriate e/o sostanze inatti-
eiretaM
per gli stessi tempi.

emirP
vanti appropriate come per esempio nel caso degli anti-
biotici. Unguenti e creme. Usare per ciascun terreno di coltura
Trasferire il contenuto del o dei recipienti da sottoporre quantita© di prodotto non inferiori a quelle prescritte
nella Tabella 2.6.1.-2. Gli unguenti a base grassa e le
ehcituecamraF

al saggio sulla membrana o sulle membrane, se necessa-

inoizaraperP

emulsioni del tipo acqua in olio possono essere diluite

ehcificepS

rio dopo diluizione a circa 100 ml con il diluente sterile 1 a 100 in isopropile miristato, come descritto preceden-
prescelto, ma in ogni caso usando quantita© del prodotto temente, riscaldando, se necessario, a temperatura non
da esaminare non inferiori a quelle prescritte nella superiore a 40 ‘C. In casi eccezionali puo© essere neces-
Tabella 2.6.1.-2. Filtrare immediatamente. Se il pro- sario riscaldare a temperatura non superiore a 44 ‘C.
ehcitapoemO
inoizaraperP

dotto ha proprieta© antimicrobiche lavare la membrana Filtrare il piu© rapidamente possibile e procedere come
almeno tre volte filtrando, ciascuna volta, il volume descritto precedentemente per gli oli e le soluzioni
del diluente sterile prescelto usato nel saggio di conva- oleose.
lida. Trasferire l'intera membrana nel terreno di coltura
o tagliarla asetticamente in due parti uguali e trasferire Inoculazione diretta del terreno di coltura . Trasferire la
ciascuna meta© rispettivamente in un terreno di coltura quantita© di preparazione da esaminare, prescritta nella
ecidnI

appropriato. Usare lo stesso volume di ciascun terreno Tabella 2.6.1.-2, direttamente nel terreno di coltura in
di coltura usato nel saggio di convalida. In alternativa, modo che il volume del prodotto non sia piu© del 10 per

167
Sterilita©

cento del volume del terreno di coltura, salvo indica- Incubare i terreni di coltura inoculati per almeno 14
zione diversa. Se il prodotto da esaminare ha una atti- giorni, salvo indicazione diversa, alle temperature
vita© antimicrobica effettuare il saggio dopo averlo neu- indicate nella tabella 2.6.1.-1. Osservare le colture
tralizzato con sostanze neutralizzanti adatte o alcune volte durante il periodo di incubazione. Agi-
mediante diluizione in una quantita© sufficiente di ter- tare dolcemente ogni giorno le colture che conten-
reno di coltura. Se e© necessario usare un grande volume gono prodotti oleosi. Tuttavia, quando si usa il ter-
del prodotto, e© preferibile usare un terreno di coltura reno di coltura al tioglicolato o un altro terreno di
concentrato preparato in modo da considerare la dilui- coltura simile per la rivelazione di microrganismi
zione successiva. Se del caso, l'appropriato terreno di anaerobi, ridurre al minimo l'agitazione o il mesco-
coltura concentrato puo© essere aggiunto direttamente lamento per mantenere le condizioni di anaerobiosi.
al prodotto nel suo contenitore.
Liquidi oleosi. Usare terreni di coltura ai quali sono Catgut ed altri fili chirurgici per uso veterinario. Usare
stati aggiunti 10 g/l di polisorbato o, ad una concentra- per ciascun terreno di coltura le quantita© di prodotto
prescritte nella Tabella 2.6.1.-2. Aprire la confezione
zione appropriata, altri agenti emulsionanti che hanno sigillata operando
dimostrato di non avere azione antimicrobica nelle con- tre sezioni di filo perin ciascun condizioni asettiche e prelevare
terreno di coltura. Effet-
dizioni del saggio. tuare il saggio sul tre sezioni del filo, ciascuna lunga 30
Unguenti e creme. Preparare una diluizione di circa 1 a cm, prelevate all'inizio al centro ed alla fine del filo.
10, mediante emulsionamento con l'agente emulsio- Usare fili interi provenienti da confezioni aperte di
nante scelto in un diluente sterile appropriato, come recente. Trasferire ciascuna sezione del filo nel terreno
una soluzione neutra (1 g/l) di peptone di carne o di di coltura selezionato. Usare una quantita© di terreno di
caseina. Trasferire il prodotto diluito in un terreno di coltura sufficiente a coprire adeguatamente il materiale
coltura che non contiene alcun agente emulsionante. in esame (20 - 150 ml).
Tabella 2.6.1-2. - Quantita© di prodotto da esaminare nel Saggio di sterilita©
Quantita© minima da usare

per ciascun terreno di coltura

Tipo di preparazione Quantita© per contenitore
salvo indicazione diversa

giustificata ed autorizzata

Liquidi
inferiore ad 1 ml L'intero contenuto di un recipiente
1 ml o piu© La meta© del contenuto di un reci-
piente, ma non piu© di 20 ml
Preparazioni parenterali Solidi
inferiore a 50 mg L'intero contenuto di un recipiente
50 mg o piu© ma non oltre 300 mg La meta© del contenuto di un reci-
piente
300 mg o piu© 150 mg
Soluzioni acquose L'intero contenuto di uno o piu© reci-
pienti purchë non inferiore a 2,5 ml
Preparazioni oftalmiche ed altre pre- Altre preparazioni solubili in acqua o L'intero contenuto di uno o piu© reci-
parazioni non iniettabili in isopropile miristato pienti purchë non inferiore a 0,25 g
Preparazioni insolubili, creme ed L'intero contenuto di uno o piu© reci-
unguenti da sospendere o da emul- pienti purchë non inferiore a 0,25 g
sionare
Catgut e altri fili chirurgici per uso 3 sezioni di un filo (ciascuna di 30 cm
veterinario di lunghezza)

168
 Sterilita©

inoizircserP
OSSERVAZIONE ED INTERPRETAZIONE DEI Quando si usa la tecnica di inoculazione diretta dei ter-

ilareneG
RISULTATI reni di coltura, usare le quantita© indicate nella Tabella
Esaminare i terreni di coltura ad intervalli, durante il 2.6.1-2. I saggi per la sterilita© batterica e fungina sono
periodo di incubazione ed alla sua fine, per evidenziare effettuati sullo stesso campione del prodotto da esami-
una crescita microbica. Quando il materiale sottoposto nare. Quando il volume o la quantita© di un singolo reci-
piente non e© sufficiente per effettuare i saggi, usare il

isilanA id
al saggio rende il terreno torbido, cos|© che la presenza

idoteM
o l'assenza di crescita microbica non possa essere rapi- contenuto di due o piu© contenitori per inoculare i diffe-
damente determinata mediante esame visivo 14 giorni renti terreni di coltura.
dopo l'incubazione, trasferire porzioni appropriate del Quando il volume di liquido in un contenitore e© superiore
terreno di coltura in nuovi contenitori dello stesso ter- a 100 ml, usare il metodo di filtrazione su membrana,

irotinetnoC
salvo indicazione diversa giustificata e autorizzata.

/ ilairetaM
reno di coltura. Continuare l'incubazione del primo
contenitore e del contenitore in cui e© avvenuto il trasfe-
rimento per un totale non inferiore a 14 + 7 giorni a LINEE GUIDA ALL'USO DEL SAGGIO DI STERI-
partire dalla prima inoculazione. LITAé
Se non si riscontra una crescita microbica il prodotto da Lo scopo del saggio di sterilita© , come quello di tutti i saggi
esaminare soddisfa al saggio di sterilita© . Se si riscontra della farmacopea, e© di fornire ad un analista indipendente

ivittaeR
una crescita microbica il prodotto da esaminare non sod- i mezzi per verificare che un particolare prodotto
disfa al saggio di sterilita© a meno che non possa essere risponde ai requisiti della Farmacopea. I produttori sono
chiaramente dimostrato che il saggio non e© valido per inoltre obbligati ad effettuare questi saggi senza preclu-
cause non correlate al prodotto da esaminare. Il saggio dere l'uso di modifiche o di alternative ai metodi indicati
puo© essere considerato nonvalido solo quando si verifichi purchë esse siano soddisfacenti e, se sottoposto a saggio

itnemogrA
ilareneG
una o piu© delle seguenti condizioni: mediante un metodo ufficiale, il materiale in questione
a) i risultati del controllo microbiologico delle appa- soddisfi ai requisiti della Farmacopea.
recchiature che servono per i saggi di sterilita© rive- . Il livello di sicurezza for-
lano un'anomalia;
Linea guida per i produttori

nito dal risultato soddisfacente di un saggio di sterilita©

b) l'analisi della procedura di saggio usata durante il

eifargonoM
(l'assenza di unita© contaminate nel campione) applicato

ilareneG
saggio in questione rivela un'anomalia; alla qualita© del lotto e© una funzione dell'omogeneita©
c) si riscontra la crescita microbica nei controlli negativi; del lotto, delle condizioni di produzione e dell'efficienza
d) dopo la determinazione dell'identita© del microrgani- del piano di campionamento adottato. Quindi, ai fini
smo isolato dal saggio, la crescita di questa o di que- del presente testo, un lotto e© definito come un insieme

ehcituecamraF
ste specie puo© essere ascritta inequivocabilmente al omogeneo di recipienti sigillati preparati in maniera
tale che il rischio di contaminazione sia lo stesso per

emroF
materiale e/o alla tecnica usata durante l'esecuzione
della procedura del saggio di sterilita© . ciascuna di queste unita© .
Se il saggio e© dichiarato non valido esso e© ripetuto con Nel caso di prodotti sottoposti a sterilizzazione termi-
lo stesso numero di unita© del saggio iniziale. nale, prove fisiche, su base biologica e documentate
Se non si riscontra una crescita microbica nella ripeti- automaticamente, che mostrano il corretto trattamento

eiretaM
zione del saggio, il prodotto esaminato soddisfa al sag- dell'intero lotto durante la sterilizzazione sono di mag-

emirP
gio di sterilita© . Se si riscontra la crescita microbica nella giore sicurezza del saggio di sterilita© . Le circostanze in
ripetizione del saggio il prodotto esaminato non soddi- cui il rilascio parametrico puo© essere considerato
sfa al saggio di sterilita© . appropriato sono descritte nel capitolo 5.1.1. Metodi di
preparazione di prodotti sterili. Il metodo di prova con
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

APPLICAZIONE DEL SAGGIO ALLE PREPARA- terreni di coltura di confronto (media-fill) puo© essere
ZIONI PARENTERALI, ALLE PREPARAZIONI usato per valutare il processo di produzione in asepsi.
OFTALMICHE E AD ALTRE PREPARAZIONI A parte questo, il saggio di sterilita© resta il solo metodo
NON INIETTABILI CHE DEVONO SODDISFARE analitico conveniente per i prodotti preparati in condi-
AL SAGGIO DI STERILITAé. zioni asettiche, ed inoltre esso e© , in tutti i casi, il solo
ehcitapoemO
inoizaraperP

Quando si usa latecnica della filtrazione su membrana, se metodo analitico disponibile per tutte le autorita© che
possibile, usare l'intero contenuto del recipiente o quan- devono esaminare un campione di un prodotto per la
tita© non inferiori a quelle indicate nella Tabella 2.6.1.-2, sterilita© .
diluendo, se necessario, a circa 100 ml con una soluzione La probabilita© di rivelare i microrganismi mediante il
sterile appropriata come il peptone neutro (1 g/l) di carne saggio di sterilita© aumenta all'aumentare del numero di
o di caseina. Il volume totale lavato attraverso una mem- questi nel campione sottoposto a saggio e varia in
ecidnI

brana singola non deve essere superiore a 1000 ml, salvo accordo con la capacita© di crescita del microrganismo
indicazione diversa giustificata e autorizzata. presente. La probabilita© di rivelare livelli bassissimi di

169
Saggi per i virus estranei su uova embrionate

contaminazione, anche quando essa e© omogenea nel 2.6.2. MICOBATTERI

lotto, e© molto bassa. L'interpretazione dei risultati del Se il campione da esaminare puo© essere contaminato da
saggio di sterilita© si basa sulla supposizione che i conte- microrganismi diversi dai micobatteri, trattarlo con
nuti di tutti i recipienti del lotto, se sottoposti al saggio, una soluzione decontaminante appropriata come una
avrebbe dato lo stesso risultato. Poichë e© chiaro che non soluzione acetilcisteina-sodio idrossido o una soluzione
puo© essere sottoposto a saggio ciascun recipiente, si deve di sodio laurilsolfato.
adottare un appropriato piano di campionamento. Nel Inoculare 0,2 ml del campione, in triplicato, in ciascuno
caso di produzione asettica si raccomanda di includere di due terreni di coltura solidi appropriati (i terreni di
campioni ripartiti in recipienti all'inizio e alla fine del coltura Lo« wenstein-Jensen e Middlebrook 7H10 sono
lotto e dopo intervento significativo. Indicazioni sul considerati appropriati). Inoculare 0,5 ml del cam-
numero minimo di recipienti che si raccomanda di sotto- pione, in triplicato, in un terreno di coltura liquido
porre al saggio in funzione della dimensione del lotto appropriato. Incubare tutti i terreni di coltura a 37 ‘C
sono riportate nellaTabella 2.6.1.-3. Le raccomandazioni per 56 giorni.
devono tener conto del volume della preparazione per Stabilire la fertilita© dei terreni di coltura in presenza
recipiente, della convalida del metodo di sterilizzazione della preparazione da esaminare mediante inoculazione
e di qualsiasi altra particolare considerazione riguar- di un appropriato ceppo di Mycobacterium come il
dante la sterilita© del prodotto. ceppo BCG e se necessario usare una sostanza neutra-
Tabella 2.6.1.-3.- Numero minimo di campioni lizzante appropriata.
da sottoporre a saggio Se si sviluppano microrganismi contaminanti durante i
primi 8 giorni di incubazione, ripetere il saggio ed effet-
tuare contemporaneamente un saggio di sterilita© batte-
Numero minimo di campioni da
riologica.
La preparazione soddisfa al saggio se alla fine del
Numero di campioni nel lotto sottoporre a saggio per ciascun

terreno di coltura*

Preparazioni parenterali tempo di incubazione non si verifica la crescita di mico-

batteri in nessun terreno di coltura sottoposto al saggio.
Non piu© di 100 recipienti Il 10 per cento dei recipienti con
un minimo di 4
Piu© di 100 recipienti ma non piu© 10 recipienti 2.6.3. SAGGI PER I VIRUS ESTRANEI SU UOVA

di 500 recipienti EMBRIONATE

Piu© di 500 recipienti Il 2 per cento dei recipienti con Usare il vaccino liquido o una quantita© di vaccino liofi-
un massimo di 20 lizzato da esaminare ricostituita con il liquido indicato
Preparazioni oftalmiche ed altre in etichetta o con un altro liquido appropriato conte-
preparazioni non iniettabili nente in ogni caso antibiotici appropriati. Se prescritto
Non piu© di 200 recipienti Il 5 per cento dei recipienti con nella monografia, neutralizzare con un antisiero mono-
un minimo di 2 specifico. Diluire, se necessario, in modo che 0,2 ml di
Piu© di 200 recipienti 10 recipienti miscela contengano dieci dosi di vaccino. Inoculare la
Se il prodotto e© formulato in miscela a due gruppi di dieci uova embrionate di gal-
recipienti monodose, applicare lina, di 9-11 giorni, provenienti da allevamenti esenti
lo schema de-scritto precedente- da microrganismi patogeni specificati:
mente per le preparazioni pa- ^ inoculare 0,2 ml di miscela nella cavita© allantoidea di
renterali
ciascun uovo del primo gruppo,
Catgut e altri fili chirurgici per Ilcon2 unperminimo
cento dalle confezioni
di 5 ed un mas- ^ inoculare 0,2 ml di miscela nella membrana corio-
uso veterinario simo di 20 allantoidea di ciascun uovo del secondo gruppo.
Prodotti solidi grezzi Osservare le uova giornalmente per 7 giorni. Eliminare
Fino a 4 recipienti Ciascun recipiente gli embrioni che muoiono durante le prime 24 h come
morti per cause non specifiche: il saggio e© valido solo
Piu© di 4 ma non piu© di 50 reci-
pienti
Il 20 per cento dei recipienti con
un minimo di 4
se in ogni gruppo sopravvivono almeno sei embrioni
per piu© di 24 h dopo l'inoculazione. Esaminare tutti
Piu© di 50 recipienti Il 2 per cento dei recipienti con
un minimo di 10
gli embrioni che muoiono dopo le prime 24 h o che
sopravvivono per i 7 giorni del saggio per evidenziare
(*) Se il contenuto di un recipiente e© sufficiente per inoculare due qualsiasi anomalia. Esaminare anche le membrane
terreni di coltura, questa colonna indica il numero di recipienti neces- corio-allantoidee per rilevare qualsiasi anomalia e i
sari per entrambi i terreni di coltura. liquidi allantoidei per evidenziare la presenza di agenti

170
 Saggio per gli agenti estranei su pulcino

inoizircserP
emoagglutinanti e le cellule centrifugate che derivano allevamenti esenti da microrganismi patogeni specifi-

ilareneG
dai fluidi allantoidei per evidenziare la presenza del cati con 0,5 ml di miscela e lasciare adsorbire a 37 ‘C
virus della bronchite infettiva mediante un saggio con per 1 h. Le colture devono consistere di almeno cinque
anticorpi fluorescenti. Effettuare un secondo passaggio replicazioni e devono avere un'area totale di circa
su embrione. Riunire separatamente i materiali ottenuti 150 cm2. Osservare le colture per almeno 5 giorni per

isilanA id
a partire dagli embrioni morti e dagli embrioni vivi ed evidenziare qualsiasi effetto citopatico attribuibile al

idoteM
inoculare ciascuna miscela in dieci uova secondo le vie vaccino. Se non si osservano effetti specifici, effettuare
di somministrazione descritte sopra. Il materiale prove- ulteriori passaggi delle cellule riunite e dei fluidi prele-
niente dalle membrane corio-allantoidee e© inoculato su vati da tutte le colture ad intervalli non inferiori a
membrane corio-allantoidee e quello proveniente dai 5 giorni ed osservare durante l'intero periodo di incu-

irotinetnoC
bazione di 20 giorni. Sottoporre a saggio anche le

/ ilairetaM
liquidi allantoidei nelle cavita© allantoidee. Osservare le
uova per 7 giorni ed esaminarle come detto precedente- colture a livello del passaggio finale per evidenziare
mente. Il vaccino soddisfa al saggio se non si verifica la presenza di agenti emoadsorbenti usando eritrociti
alcuna morte o anomalia attribuibile ad esso. di pollo. Gli agenti emoadsorbenti sono microrganismi
o virus che provocano l'adsorbimento degli eritrociti
alla superficie delle colture cellulari nelle quali essi si

ivittaeR
2.6.4. SAGGIO PER I VIRUS DELLA LEUCOSI
replicano. L'emoadsorbimento puo© essere osservato
Se prescritto nella monografia, neutralizzare il vaccino mediante la procedura seguente: alla fine del periodo
usando un antisiero monospecifico. Inoculare il vac- di saggio, aggiungere una sospensione allo 0,5 per cento
cino, in ragione di 10 dosi per coltura, in colture di di eritrociti lavati a monostrati asciutti della coltura
cellulare lavata. Dopo un periodo di adsorbimento

itnemogrA
fibroblasti di pollo che hanno dimostrato di essere in

ilareneG
grado di consentire la crescita dei sottogruppi A e B di 20 min a 4 ‘C, lavare dolcemente il monostrato in
dei virus della leucosi. Le colture devono consistere di tampone fosfato soluzione salina a pH 7,4 R ed osservare
almeno cinque repliche, ciascuna avente un'area di al microscopio. Se si e© verificato l'emoadsorbimento,
circa 60 cm . Allestire delle sottocolture di fibroblasti
2 gruppi di eritrociti aderiscono al monostrato cellulare.

eifargonoM
ad intervalli di 3-4 giorni e mantenerle per un periodo Un saggio e© valido solo se almeno l'80 per cento delle col-

ilareneG
totale non inferiore a 9 giorni. Raccogliere le cellule ture sopravvive dopo ciascun passaggio. Il vaccino sod-
alla fine del passaggio7 finale e sospenderle di nuovo alla disfa al saggio se non si verifica alcun effetto citopatico
concentrazione di 10 cellule per millilitro e preparare o non si evidenzia la presenza di agenti emoadsorbenti.
un estratto. Effettuare il saggio di fissazione del com-

ehcituecamraF
plemento per l'antigene gruppo-specifico della leucosi

emroF
aviaria su ciascun estratto. Inoculare le colture di con- 2.6.6. SAGGIO PER GLI AGENTI ESTRANEI SU

trollo con i sottogruppi A e B del virus della leucosi e PULCINO

sottoporle al saggio contemporaneamente. Il vaccino Salvo indicazione diversa nella monografia, effettuare
soddisfa al saggio se non si riscontra la presenza il saggio su almeno dieci polli dell'eta© di 2 settimane,
del virus della leucosi. Se i risultati non sono conclusivi provenienti da allevamenti esenti da microrganismi
eiretaM

emirP
effettuare altre sottocolture di fibroblasti e sottoporle patogeni specificati. Inoculare a ciascun pollo 100 dosi
a saggio fino a che non si ottengono risultati inequivo- per via intramuscolare e10 dosi per via oculare. Ripetere
cabili. le inoculazioni dopo 2 settimane. Osservare gli animali
per un periodo di cinque settimane dopo la prima inocu-
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

2.6.5. SAGGIO PER I VIRUS ESTRANEI SU COL- lazione. Non devono essere somministrati agenti antimi-
TURE CELLULARI crobici agli animali durante il periodo di osservazione.
Usare il vaccino liquido o ricostituire una quantita© Raccogliere il siero da ciascun pollo prima della prima
del vaccino liofilizzato da esaminare con il liquido indi- inoculazione ed alla fine del periodo del saggio. Sotto-
ehcitapoemO
inoizaraperP

cato in etichetta o con un altro liquido appropriato. porre a saggio ciascun siero usando un metodo appro-
Se prescritto nella monografia, neutralizzare con un priato. Esaminare i sieri per evidenziare gli anticorpi
antisiero monospecifico. Diluire, se necessario, in nei confronti degli agenti di infezione descritti di
modo che 0,1 ml della miscela contengano dieci dosi seguito con l'eccezione del virus con il quale e© stato
del vaccino. Inoculare delle colture di cellule renali preparato il vaccino. Il vaccino soddisfa al saggio se
ottenute da polli provenienti da allevamenti esenti da non si riscontra la presenza di alcun agente estraneo.
ecidnI

microrganismi patogeni specificati o delle colture di Il saggio non e© valido e deve essere ripetuto se viene
cellule epatiche ottenute da embrioni provenienti da evidenziato qualsiasi anticorpo prima dell'inocula-

171
Micoplasmi

zione. Il saggio non e© valido inoltre se meno dell'80 per nutritive di ciascun nuovo lotto del terreno di coltura
cento degli animali sopravvive al termine del saggio. In sono verificate con l'appropriato microrganismo ripor-
accordo con l'autorita© competente, possono essere usati tato nella lista.
altri tipi di saggio purchë essi abbiano almeno la stessa Acholeplasma laidlawii (vaccini per uso umano e per
sensibilita© di quelli indicati ed abbiano una specificita© uso veterinario quando un antibiotico e© stato aggiunto
appropriata. durante la produzione).
Mycoplasma gallisepticum (quando un materiale di ori-
Infezione Tipo di saggio
gine aviaria e© stato usato durante la produzione o
quando il vaccino e© destinato ai polli).
Borsite infettiva (Malattia di Agar gel precipitina Mycoplasma hyorhinis (vaccini per uso veterinario di
Gumboro) origine non aviaria).
Bronchite infettiva(1) Agar gel precipitina o inibizione Mycoplasma orale (vaccini per uso umano e per uso
dell'emoagglutinazione veterinario).
Infezione da Adenovirus(2) Agar gel precipitina
Infezione da Reovirus(2) Agar gel precipitina Mycoplasma pneumoniae (vaccini per uso umano) o
Infezione da Salmonella pullo- Agglutinazione altre specie appropriate di fermentatori di D-glucosio.
rum Mycoplasma synoviae (quando un materiale di origine
Infezione da virus della leu- Sieroneutralizzazione aviaria e© stato usato durante la produzione o quando il
cosi(2) vaccino e© destinato ai polli).
Infezione da virus dell'encefalo- Agar gel precipitina o dosaggio
mielite aviaria immunoenzimatico (ELISA) I ceppi in esame sono ceppi selvaggi ed hanno subito
Influenza A(2) Agar gel precipitina non piu© di quindici sottocolture e sono conservati con-
Laringotracheite infettiva(2) Sieroneutralizzazione gelati o liofilizzati. Dopo la clonazione i ceppi sono
Malattia di Marek
Malattia di Newcastle
Agar gel precipitina
Inibizione dell'emoagglutina-
identificati come appartenenti alle specie richieste
zione mediante un metodo appropriato, per confronto con le
colture tipo, per es.:
(1) In accordo con l'autorita© competente il saggio puo© essere omesso A.laidlawii NCTC 10116 CIP 75.27 ATCC 23206
come saggio di routine su lotto se il saggio per i virus estranei su uova M. gallisepticum NCTC 10115 CIP 104967 ATCC 19610
embrionate (2.6.3) e© stato effettuato su ciascun lotto. M. hyorhinis NCTC 10130 CIP 104968 ATCC 17981
(2) In accordo con l'autorita© competente, i saggi per questi virus pos- M. orale NCTC 10112 CIP 104969 ATCC 23714
sono essere omessi come saggi di routine su lotto, salvo indicazione M. pneumoniae NCTC 10119 CIP 103766 ATCC 15531
contraria nella specifica monografia. M. synoviae NCTC 10124 CIP 104970 ATCC 25204
2.6.7. MICOPLASMI CONDIZIONI DI INCUBAZIONE
Quando il saggio dei micoplasmi e© prescritto per una Dividere i terreni di coltura inoculati in due parti uguali
banca cellulare primaria, per una banca cellulare di ed incubare uno in condizioni aerobiche e l'altro in con-
lavoro, per un lotto di semenza virale o per le cellule di dizioni microaerofiliche; per i terreni di coltura solidi
controllo, si usa sia il metodo di coltura che il metodo mantenere un'adeguata umidita© nell'atmosfera per pre-
di coltura con cellule indicatrici. Quando il saggio dei venire l'essiccamento della superficie. Per le condizioni
micoplasmi e© prescritto per una raccolta virale, per aerobiche, incubare in atmosfera di aria contenente,
una sospensione madre di vaccino o per il lotto finale per i terreni di coltura solidi, il 5-10 per cento di ani-
(lotto), si usa il metodo di coltura. Il metodo di coltura dride carbonica. Per le condizioni microaerofiliche,
con cellule indicatrici puo© essere anche usato, se neces- incubare in atmosfera di azoto contenente, per i terreni
sario, per la selezione dei terreni di coltura. di coltura solidi, il 5-10 per cento di anidride carbonica.
METODO DI COLTURA PROPRIETAé NUTRITIVE
SCELTA DEI TERRENI DI COLTURA Effettuare il saggio delle proprieta© nutritive per ciascun
Effettuare il saggio usando un numero sufficiente di ter- nuovo terreno di coltura. Inoculare i terreni di coltura
reni di coltura solidi e liquidi per assicurare la crescita, prescelti con il microrganismo in esame appropriato;
nelle condizioni di incubazione prescelte, di un piccolo usare non piu© di 100 unita© formanti colonie (UFC) per
numero di micoplasmi che possono essere presenti nel una piastra di 60 mm contenente 9 ml di terreno solido
prodotto da esaminare. I terreni di coltura liquidi e non piu© di 40 unita© formanti colonie per 100 ml di
devono contenere rosso fenolo. I terreni di coltura scelti terreno liquido; usare una piastra ed un contenitore
devono avere soddisfacenti proprieta© nutritive almeno diverso per ciascuna specie di microrganismo. Incubare
per i microrganismi indicati di seguito. Le proprieta© i terreni di coltura nelle condizioni che saranno usate

172
 Micoplasmi

inoizircserP
per il saggio del prodotto da esaminare (aerobiche, valido e deve essere ripetuto se ad una qualsiasi fase

ilareneG
microaerofiliche o entrambe a seconda dei requisiti del dello stesso piu© di una piastra e© accidentalmente conta-
microrganismo in esame). I terreni di coltura soddi- minata con batteri o funghi o e© rotta.
sfano al saggio delle proprieta© nutritive se vi e© una cre- Includere nel saggio controlli positivi preparati inocu-
scita appropriata del microrganismo in esame insieme lando non piu© di 100 unita© formanti colonie di specie
ad un appropriato cambiamento di colore dei terreni

isilanA id
appropriate, come il M. orale ed il M. pneumoniae.

idoteM
di coltura liquidi. Alla fine dei periodi di incubazione, esaminare al
SOSTANZE INIBITRICI microscopio tutti i terreni di coltura solidi inoculati
per evidenziare la presenza di micoplasmi. Il prodotto
Effettuare il saggio delle proprieta© nutritive in presenza soddisfa al saggio se la crescita di micoplasmi non si e©

irotinetnoC
/ ilairetaM
del prodotto da esaminare. Se la crescita del microrgani- verificata in nessuno dei terreni di coltura inoculati. Se
smo in esame e© notevolmente inferiore a quella riscon- si e© verificata la crescita di micoplasmi, il saggio puo©
trata in assenza del prodotto da esaminare, quest'ultimo essere ripetuto una volta usando una quantita© doppia
contiene sostanze inibitrici che devono essere neutraliz- di inoculo, di terreni di coltura e di piastre; se non si
zate (o il loro effetto deve essere contrastato, per esem- verifica la crescita di micoplasmi, il prodotto soddisfa
pio mediante diluizione) prima che sia effettuato il sag- al saggio. Il saggio non e© valido se i controlli positivi

ivittaeR
gio per i micoplasmi. Verificare l'efficacia della neutra- non presentano la crescita del particolare microrgani-
lizzazione o di un altro processo ripetendo il saggio smo in esame.
delle sostanze inibitrici dopo la neutralizzazione.
METODO DELLE COLTURE CELLULARI INDI-

itnemogrA
SAGGIO DEI MICOPLASMI NEL PRODOTTO DA CATRICI

ilareneG
ESAMINARE
Le colture cellulari sono colorate con un colorante fluo-
Per i terreni di coltura solidi, usare piastre del diametro rescente che si lega al DNA. I micoplasmi sono rivelati
di 60 mm e contenenti 9 ml di terreno di coltura. Inocu- dalla forma caratteristica o dal disegno filamentoso
lare ciascuna di almeno due piastre di terreno di coltura della fluorescenza sulla superficie cellulare e, se la con-

eifargonoM

ilareneG
solido con 0,2 ml del prodotto da esaminare ed inoculare taminazione e© importante, nelle aree circostanti.
10 ml per 100 ml di ciascun terreno di coltura liquido.
Incubare a 35-38 ‘C, in condizioni aerobiche e microae- VERIFICA DEL SUBSTRATO
rofiliche, per 21 giorni e allo stesso tempo incubare una
porzione di 100 ml non inoculata di ciascun terreno di

ehcituecamraF
Usando come substrato una coltura cellulare Vero,
coltura liquido per usarla come controllo. Se si verifica effettuare un controllo preliminare usando un inoculo

emroF
un qualsiasi cambiamento significativo del pH all'ag- di non piu© di 100 UFC (unita© formanti colonie) di un
giunta del prodotto da esaminare, riportare il terreno di ceppo che cresce rapidamente in un terreno di coltura
coltura liquido al suo valore iniziale di pH aggiungendo liquido o solido, per dimostrare che il metodo permette
una soluzione di sodio idrossido o di acido cloridrico. di rivelare i potenziali micoplasmi contaminanti come
Il primo, il secondo ed il terzo giorno dopo l'inocula- per esempio ceppi appropriati di Micoplasma hyorhinis
eiretaM

emirP
zione, allestire una sottocoltura di ciascun terreno e di Micoplasma orale. Si puo© usare un differente sub-
liquido, inoculando ciascuna di due piastre di terreno strato cellulare, per esempio la linea cellulare di produ-
solido con 0,2 ml ed incubare a 35-38 ‘C in condizioni zione, se e© stato dimostrato che essa possiede almeno
aerobiche e microaerofiliche per almeno 21 giorni. Ripe- una sensibilita© uguale per la rivelazione dei potenziali
ehcituecamraF
inoizaraperP

tere la procedura il sesto, il settimo o l'ottavo giorno e di micoplasmi contaminanti.

ehcificepS

nuovo il tredicesimo o il quattordicesimo giorno del sag-

gio. Osservare i terreni di coltura liquidi ogni 2 o 3 giorni METODO DI SAGGIO
e, se si verifica un qualsiasi cambiamento di colore,
allestire immediatamente una sottocoltura. Osservare i Prelevare almeno 1 ml del prodotto da esaminare ed
ehcitapoemO
inoizaraperP

terreni di coltura solidi una volta a settimana. usarlo per inoculare in doppio, come descritto nel para-
Ripetere il saggio se i terreni di coltura liquidi grafo Procedura, colture cellulari indicatrici che pre-
mostrano una contaminazione batterica o fungina. sentano almeno 25 cm2 di area della coltura cellulare
Se, 7 giorni dopo l'inoculazione, una piastra al mas- alla confluenza.
simo di ciascuna fase del saggio e© contaminata acciden- Includere nel saggio un controllo negativo (non infet-
talmente con batteri, funghi o e© rotta, essa puo© essere tato) e due controlli positivi infettati con micoplasmi
ecidnI

ignorata purchë che un esame immediato mostri come il M. hyorhinis ed il M. orale. Usare un inoculo
l'assenza di crescita di micoplasmi. Il saggio non e© non superiore a 100 UFC per i controlli positivi.

173
Micoplasmi

Se per le sospensioni virali l'interpretazione dei risultati glicerolo R e tampone citrato-fosfato soluzione a
e© influenzata da effetti citopatici marcati, il virus puo© pH 5,5 R; asciugare l'eccesso di soluzione sui bordi
essere neutralizzato usando un antisiero specifico che del vetrino coprioggetto.
non abbia effetti inibitori sui micoplasmi o un substrato 11. Esaminare mediante epifluorescenza (filtro di eccita-
di coltura cellulare che non consenta la crescita del zione 330 nm/380 nm, filtro barriera LP 440 nm)
virus. Per dimostrare l'assenza di effetti inibitori del con ingrandimento uguale o superiore a 100-400.
siero, effettuare saggi di controllo positivi in presenza 12. Confrontare l'aspetto microscopico delle colture in
2

ed in assenza dell'antisiero. esame con quello dei controlli negativi e positivi

esaminando per evidenziare la fluorescenza extra-
PROCEDURA nucleare. I micoplasmi formano dei punti o dei
filamenti sopra il citoplasma ed alcune volte negli
1. Allestire4 la coltura con una densita© regolare spazi intercellulari.
(2 10 4 - 2 105 cellule per millilitro, 4 10 3-
2,5 10 cellule/cm2) ed incubare a 36 1 ‘C per Ilevidenzia prodotto da esaminare soddisfa al saggio se non si
2 2 2

2 6

almeno 2 giorni. Inoculare il prodotto da esami- esame inoculate la presenza di micoplasmi nelle colture in
nare ed incubare per almeno 2 giorni; preparare controlli positivi non con esso. Il saggio non e© valido se i
almeno una sottocoltura. Coltivare l'ultima sot- priati microrganismi inmostrano esame.
la presenza degli appro-
tocoltura su vetrino coprioggetti in recipienti Il paragrafo seguente e© riportato come informazione.
appropriati o su un'altra superficie appropriata
alla procedura di saggio. Non lasciare che l'ultima TERRENI DI COLTURA RACCOMANDATI PER
sottocoltura raggiunga la confluenza poichë questo
potrebbe inibire la colorazione ed ostacolare la IL METODO DI COLTURA
visualizzazione dei micoplasmi. Si raccomandano i terreni di coltura seguenti. Si pos-
2. Rimuovere ed eliminare il terreno di coltura. sono usare altri terreni di coltura purchë sia stata dimo-
3. Lavare il monostrato con la tampone fosfato solu- plasmilasuloro
strata capacita© di favorire la crescita dei mico-
ciascun lotto in presenza ed in assenza del
zione salina a pH 7,4 R, poi con una miscela di prodotto da esaminare.
volumi uguali di tampone fosfato soluzione salina a
pH 7,4 R ed una soluzione fissante appropriata ed Mycopla-
infine con la soluzione fissante; quando si usa la sma gallisepticum.
Terreni di coltura raccomandati per rivelare il

bisbenzimmide R per colorare, una soluzione

fissante appropriata e© una miscela, preparata Terreno di coltura liquido

di recente, di 1 volume di acido acetico glaciale R e Brodo di infusione di cuore di bue (1) 90,0 ml
3 volumi di metanolo R.
4. Aggiungere la soluzione fissante e lasciare a riposo Siero Estratto
di cavallo (non riscaldato)
di lievito (250 g/l)
20,0 ml
10,0 ml
per 10 min.
5. Rimuovere ed eliminare la soluzione fissante. Tallio acetato (soluzione 10 g/l) 1,0 ml
6. Se il monostrato deve essere colorato in seguito, Rosso fenolo (soluzione 0,6 g/l) 5,0 ml
essiccarlo completamente. (Eé necessaria una parti- Penicillina (20000 U.I. per millilitro) 0,25 ml
colare attenzione per colorare i vetrini dopo l'essic- Acido desossiribonucleico (soluzione 2 g/l) 1,2 ml
camento a causa degli artefatti che si possono Aggiustare il pH a 7,8.
formare).
7. Se il monostrato deve essere colorato immediata- Preparare come descritto precedentemente sostituendo
Terreno di coltura solido

mente, eliminare la soluzione fissante mediante il brodo di infusione di cuore di bue con agar di infu-
due lavaggi con acqua sterile ed eliminare il liquido sione di cuore di bue contenente 15 g/l di agar.
di lavaggio.
8. Aggiungere bisbenzimmide soluzione di lavoro R o Mycopla-
un'altra appropriata sostanza colorante il DNA e sma synoviae.
Terreni di coltura raccomandati per rivelare il

lasciare a riposo per 10 min.

9. Rimuovere il colorante e lavare il monostrato con Terreno di coltura liquido

acqua. Brodo di infusione di cuore di bue (1) 90,0 ml

10. Fissare ciascun vetrino coprioggetto, se del caso, Vitamine essenziali (2) 0,025 ml
con una goccia di una miscela di volumi uguali di Glucosio monoidrato (soluzione 500 g/l) 2,0 ml

174
 Micoplasmi

inoizircserP
Siero di suino (inattivato a 56 ‘C per 30 min) 12,0 ml (1) Brodo di infusione di cuore di bue

ilareneG
b-Nicotinammide adenina dinucleotide Cuore di bue (per la preparazione dell'infu-
(soluzione 10 g/l) 1,0 ml sione) 500 g
Cisteina cloridrato (soluzione 10 g/l) 1,0 ml Peptone 10 g
Rosso fenolo (soluzione 0,6 g/l) 5,0 ml Sodio cloruro 5 g

isilanA id
idoteM
Penicillina (20000 U.I. per millilitro) 0,25 ml Acqua distillata fino a
Mescolare le soluzioni di -nicotinammide adenina
Sterilizzare in autoclave. 1000 ml
b

dinucleotide e cisteina cloridrato e dopo 10 min aggiun-

gere alle altre sostanze. Aggiustare il pH a 7,8. (2) Vitamine essenziali

irotinetnoC
/ ilairetaM
Terreno di coltura solido
Biotina 100 mg
Brodo di infusione di cuore di bue (1) 90,0 ml Calcio pantotenato 100 mg
Ionoagar (3) 1,4 g Colina cloruro 100 mg
Aggiustare il pH a 7,8, sterilizzare in autoclave e dopo Acido folico 100 mg
aggiungere: i-Inositolo 200 mg

ivittaeR
Vitamine essenziali (2) 0,025 ml Nicotinammide 100 mg
Glucosio monoidrato (soluzione 500 g/l) 2,0 ml Piridossale cloridrato 100 mg
Siero di suino (non riscaldato) 12,0 ml Riboflavina 10 mg
-Nicotinammide adenina dinucleotide Tiamina cloridrato 100 mg

itnemogrA
b

ilareneG
(soluzione 10 g/l) 1,0 ml
Cisteina cloridrato (soluzione 10 g/l) 1,0 ml Acqua distillata fino a 1000 ml
Rosso fenolo (soluzione 0,6 g/l) 5,0 ml (3) Ionoagar
Penicillina (20000 U.I. per millilitro) 0,25 ml Agar altamente purificato destinato all'uso in micro-

eifargonoM
biologia ed immunologia, preparato mediante una

ilareneG
Terreni di coltura raccomandati per rivelare i micopla-
procedura a scambio ionico che fornisce un prodotto
smi di origine non aviaria.
di purezza, limpidezza e potere gelificante superiore.
Terreno di coltura liquido Esso contiene circa:
Soluzione salina bilanciata di Hank (modi- Acqua 12,2 per cento

ehcituecamraF
ficata) (4) 800 ml Ceneri 1,5 per cento

emroF
Acqua distillata 67 ml Ceneri insolubili negli acidi 0,2 per cento
Infusione cuore-cervello (5) 135 ml Cloro 0
Brodo PPLO (6) 248 ml Fosfato (calcolato come P2O5) 0,3 per cento
Estratto di lievito (170 g/l) 60 ml Azoto totale 0,3 per cento
eiretaM

emirP
Bacitracina 250 mg Rame 8 ppm
Meticillina 250 mg Ferro 170 ppm
Rosso fenolo (5 g/l) 4,5 ml Calcio 0,28 per cento
Tallio acetato (56 g/l) 3 ml
ehcituecamraF
inoizaraperP

Magnesio 0,32 per cento

ehcificepS

Siero di cavallo 165 ml

Siero di suino 165 ml (4) Soluzione salina bilanciata di Hank (modificata)
Aggiustare il pH a 7,4-7,45. Sodio cloruro 6,4 g
Potassio cloruro 0,32 g
ehcitapoemO
inoizaraperP

Terreno di coltura solido

Soluzione salina bilanciata di Hank (modi- Magnesio solfato eptaidrato 0,08 g

ficata) (4) 200 ml Magnesio cloruro esaidrato 0,08 g
DEAE-destrano 200 mg Calcio cloruro anidro 0,112 g
Ionoagar (3) 15,65 g Sodio fosfato dibasico diidrato 0,0596 g
Mescolare bene e sterilizzare in autoclave. Raffreddare
Potassio fosfato monobasico anidro 0,048 g
ecidnI

a 100 ‘C. Aggiungere a 1740 ml di terreno di coltura

liquido descritto precedentemente. Acqua distillata fino a 800 ml

175
Pirogeni

(5) Infusione cuore-cervello Dispositivi di fissazione. I dispositivi di fissazione per

Infusione di cervello di vitello 200 g conigli, la cui temperatura e© misurata mediante un
apparecchio elettrico, sono costruiti in modo tale che
Infusione di cuore di bue 250 g gli animali sono trattenuti solo mediante un collare
Peptone proteosio 10 g convenientemente morbido; il resto del corpo rimane
Glucosio monoidrato 2 g relativamente libero in modo che il coniglio puo© met-
tersi in una posizione normale. Essi non sono trattenuti
Sodio cloruro 5 g con cinghie o altri metodi simili che potrebbero causare
Sodio fosfato dibasico anidro 2,5 g danno all'animale. Gli animali sono introdotti in questi
dispositivi almeno 1 h prima della prima registrazione
Acqua distillata fino a 1000 ml della temperatura e vi rimangono per tutto il saggio.
(6) Brodo PPLO Termometri. Usare un termometro o un dispositivo elet-
trico che indica la temperatura con una precisione di
Infusione di cuore di bue 50 g 0,1 ‘C ed inserirlo nel retto del coniglio ad una profon-
Peptone 10 g dita© di circa 5 cm. La profondita© di inserimento e©
Sodio cloruro 5 g costante per ogni coniglio in uno stesso saggio. Quando
e© usato un dispositivo elettrico esso puo© essere lasciato
Acqua distillata fino a 1000 ml in situ durante il saggio.
Saggio preliminare. Dopo la selezione degli animali, da
2.6.8. PIROGENI uno a tre giorni prima del saggio del prodotto da esami-
nare, trattare quegli animali che non sono stati usati
Il saggio consiste nel misurare l'aumento della tempe- durante le precedenti 2 settimane, con una iniezione
ratura corporea causato nel coniglio dalla iniezione intravenosa di 10 ml per chilogrammo di massa corpo-
intravenosa di una soluzione sterile della sostanza da rea di una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro esente da
esaminare. pirogeni riscaldata a 38,5 ‘C. Registrare la temperatura
Selezione degli animali. Usare conigli adulti sani di degli animali iniziando almeno 90 min prima dell'inie-
entrambi i sessi e di massa non inferiore a 1,5 kg, zione e continuando per 3 h dopo l'iniezione della solu-
alimentati con una dieta completa e bilanciata non zione. Gli animali che presentano una variazione della
contenente antibiotici e che non hanno subito una temperatura superiore a 0,6 ‘C non sono usati nel sag-
diminuzione della massa corporea nella settimana gio principale.
precedente il saggio. Un coniglio non e© usato in un Saggio principale. Effettuare il saggio usando un
saggio dei pirogeni: gruppo di tre conigli.
a) se e© stato usato in un saggio dei pirogeni risultato Preparazione ed iniezione del prodotto. Scaldare il
negativo nei tre giorni precedenti il saggio, o liquido da esaminare approssimativamente a 38,5 ‘C
b) se e© stato usato nelle tre settimane precedenti in un prima dell'iniezione. Il prodotto da esaminare puo©
saggio dei pirogeni nei quali la sostanza da esami- essere disciolto in, o diluito con, una soluzione (9 g/l)
nare non ha superato il saggio. di sodio cloruro esente da pirogeni o con un altro
Stabulario degli animali. Mantenere i conigli soli liquido prescritto. Iniettare lentamente la soluzione
in un'area tranquilla con un'appropriata temperatura nella vena marginale dell'orecchio di ciascun coniglio
uniforme. Privare i conigli del cibo durante la notte in un intervallo non superiore a 4 min, salvo indica-
e fino a quando il saggio e© completato; privarli dell'ac- zione diversa nella monografia. La quantita© di prodotto
qua durante il saggio. Effettuare il saggio in una stanza da iniettare varia in funzione del prodotto da esaminare
tranquilla dove non esiste il rischio di perturbazioni ed e© prescritta nella monografia. Il volume iniettato
non e© inferiore a 0,5 ml per chilogrammo e non e© supe-
che potrebbero eccitare gli animali e nella quale la tem- riore a 10 ml per chilogrammo di massa corporea.
peratura ambiente non si differenzia di piu© di 3 ‘C da Determinazione della temperatura iniziale e della tem-
quella dello stabulario o da quella alla quale i conigli peratura massima. La ``temperatura iniziale'' di ciascun
sono stati mantenuti per almeno 18 h prima del saggio. coniglio e© la media di due letture di temperatura regi-
Materiali. Vetreria, siringhe ed aghi. Lavare accurata- strate per quel coniglio in un intervallo di 30-40 min
mente tutta la vetreria, le siringhe e gli aghi con acqua immediatamente precedente l'iniezione del prodotto da
per preparazioni iniettabili e scaldare in una stufa ad esaminare. La ``temperatura massima'' di ciascun coni-
aria calda a 250 ‘C per 30 min o a 200 ‘C per 1 h. glio e© la temperatura piu© alta registrata per quel coni-

176
 Tossicita© anormale

inoizircserP
glio nelle 3 h successive l'iniezione. Registrare la tempe- La sostanza soddisfa al saggio se nessuno dei topi

ilareneG
ratura di ciascun coniglio ad intervalli non superiori a muore entro 24 h o entro il tempo specificato nella sin-
30 min, iniziando almeno 90 min prima dell'iniezione gola monografia. Se piu© di un animale muore, la
del prodotto da esaminare e continuando nelle 3 h suc- sostanza non soddisfa al saggio. Ripetere il saggio se
cessive l'iniezione. La differenza tra la temperatura muore un animale. La sostanza soddisfa al saggio se
massima e la temperatura iniziale di ciascun coniglio nessun animale del secondo gruppo muore entro l'inter-

isilanA id
idoteM
rappresenta la sua risposta. Quando questa differenza vallo di tempo specificato.
e© negativa, il risultato e© considerato come risposta zero.
I conigli che presentano, nella determinazione della SIERIMMUNI E VACCINI PER USO UMANO
temperatura iniziale, una variazione della temperatura

irotinetnoC
/ ilairetaM
superiore a 0,2 ‘C tra due letture successive sono esclusi Salvo indicazione diversa, iniettare per via intraperito-
dal saggio. In un saggio sono usati solo conigli che neale una dose umana, ma non piu© di 1,0 ml, a ciascuno
hanno una temperatura iniziale che non differisce per di 5 topi sani, di 17-22 g. La dose umana e© quella indi-
piu© di 1 ‘C da quella degli altri. Tutti i conigli che hanno cata sull'etichetta della preparazione da esaminare o
una temperatura iniziale superiore a 39,8 ‘C o inferiore sul foglietto allegato. Osservare gli animali per 7 giorni.
a 38,0 ‘C sono esclusi dal saggio. La preparazione soddisfa al saggio se nessun animale

ivittaeR
Interpretazione di risultati. Avendo effettuato il primo presenta segni di malattia. Se muore piu© di un animale,
saggio su un gruppo di tre conigli, se necessario ripetere la preparazione non soddisfa al saggio. Ripetere il sag-
su ulteriori gruppi di tre conigli fino ad un totale di gio se un animale muore o presenta segni di malattia.
quattro gruppi. Se la somma delle risposte del primo La preparazione soddisfa al saggio se nessun animale
del secondo gruppo muore o mostra segni di malattia

itnemogrA
gruppo non supera i valori riportati nella seconda

ilareneG
colonna della Tabella 2.6.8.-1, il prodotto soddisfa al nell'intervallo di tempo specificato.
saggio. Se la somma delle risposte supera i valori ripor- Il saggio deve essere effettuato anche su 2 cavie sane,
tati nella terza colonna della tabella, ripetere il saggio ciascuna di 250-350 g. Iniettare, per via intraperito-
come indicato precedentemente. Se la somma delle neale, a ciascun animale una dose umana ma non piu©

eifargonoM
risposte supera i valori riportati nella terza colonna di 5,0 ml. La dose umana e© quella indicata sull'etichetta

ilareneG
della tabella, il prodotto non soddisfa al saggio. della preparazione da esaminare o sul foglietto allegato.
Osservare gli animali per 7 giorni. La preparazione
Tabella 2.6.8.-1 soddisfa al saggio se nessun animale presenta segni di
malattia. Se muore piu© di un animale la preparazione

ehcituecamraF
Il prodotto soddisfa Il prodotto non soddisfa
non soddisfa al saggio. Ripetere il saggio se un animale

emroF
Numero di conigli al saggio se la somma al saggio se la somma
muore o presenta segni di malattia. La preparazione
soddisfa al saggio se nessun animale del secondo
delle risposte non supera delle risposte supera

gruppo muore o presenta segni di malattia nell'interval-

3 1,15 ‘C 2,65 ‘C lo di tempo specificato.
6 2,80 ‘C 4,30 ‘C

eiretaM

emirP
9 4,45 ‘C 5,95 ‘C SIERIMMUNI E VACCINI PER USO VETERI-
NARIO
12 6,60 ‘C 6,60 ‘C
Salvo indicazione diversa, iniettare per via sottocutanea
ehcituecamraF

0,5 ml della preparazione a ciascuno di 5 topi sani di

inoizaraperP

I conigli usati nel saggio dei pirogeni dove l'aumento

ehcificepS

medio della temperatura supera 1,2 ‘C sono esclusi 17-22 g. Osservare gli animali per 7 giorni. La prepara-
definitivamente. zione soddisfa al saggio se nessun animale presenta una
reazione locale o sistemica significativa. Se muore piu©
di un animale, la preparazione non soddisfa al saggio.
ehcitapoemO
inoizaraperP

2.6.9. TOSSICITAé ANORMALE

Ripetere il saggio se un animale muore o presenta una
SAGGIO GENERALE reazione locale o sistemica significativa. La prepara-
Iniettare per via intravenosa a ciascuno di 5 topi sani, zione soddisfa al saggio se nessun animale del secondo
di 17-22 g, la quantita© della sostanza da esaminare pre- gruppo muore o presenta una reazione locale o siste-
scritta nella monografia, disciolta in 0,5 ml di acqua mica significativa nell'intervallo di tempo specificato.
per preparazioni iniettabili R o in una soluzione sterile Il saggio deve essere effettuato anche su 2 cavie sane,
ecidnI

(9 g/l di sodio cloruro R). Iniettare la soluzione durante ciascuna di 250-350 g. Iniettare, per via intraperito-
un periodo di 15-30 s, salvo indicazione diversa. neale, a ciascun animale almeno 2 ml della prepara-

177
Istamina

zione. Iniettare per via sottocutanea le preparazioni che della soluzione di istamina come indicato precedente-
contengono adiuvanti. Osservare gli animali per 7 mente ed alternare ciascuna aggiunta con un volume
giorni. La preparazione soddisfa al saggio se nessun uguale di una diluizione della soluzione da esaminare,
animale presenta una reazione locale o sistemica signi- aggiustando la diluizione in modo che la contrazione
ficativa. Se muore piu© di un animale la preparazione dell'intestino, se presente, sia piu© piccola di quella
non soddisfa al saggio. Ripetere il saggio se un animale dovuta alla ``dose superiore'' di istamina. Determinare
muore o presenta una reazione locale o sistemica signi- se la contrazione, se presente, sia riproducibile e che le
ficativa. La preparazione soddisfa al saggio se nessun risposte alle dosi ``superiore'' ed ``inferiore'' di istamina
animale del secondo gruppo muore o presenta una rea- siano invariate. Calcolare l'attivita© della sostanza da
zione locale o sistemica significativa nell'intervallo di esaminare in termini di equivalenti in microgrammi di
tempo specificato. istamina base a partire dalla diluizione determinata
precedentemente.
La quantita© cos|© determinata non deve essere superiore
2.6.10. ISTAMINA al limite prescritto nella monografia.
Sacrificare una cavia di 250-350 g mantenuta a digiuno Se la soluzione da esaminare non provoca una contra-
nelle 24 h precedenti il saggio. Prelevare una porzione zione, preparare al momento una soluzione aggiun-
della parte distale dell'intestino tenue lunga 2 cm e gendo una quantita© di istamina corrispondente al
svuotare la parte isolata lavando accuratamente con la massimo tollerato dalla monografia ed annotare se la
soluzione B descritta di seguito usando una siringa. contrazione provocata dalla preparazione con l'ista-
Legare un filo sottile a ciascuna estremita© e praticare mina aggiunta corrisponde alla quantita© di istamina
una piccola incisione trasversale a meta© della porzione aggiunta. Se questo non si verifica o se le contrazioni
di intestino. Disporre tale porzione in un bagno per provocate dalla sostanza da esaminare non sono ripro-
organi avente una capacita© di 10-20 ml, contenente ducibili o se le successive risposte alle dosi ``superiore''
la soluzione B mantenuta a temperatura costante ed ``inferiore'' di istamina sono diminuite, i risultati del
(34-36 ‘C) ed attraversata da un flusso di una miscela saggio non sono validi e si deve effettuare il saggio per
di 95 parti di ossigeno e 5 parti di anidride carbonica. le sostanze ipotensive (2.6.11).
Fissare uno dei fili vicino al fondo del bagno per organi
e l'altro filo ad un miografo isotonico e registrare le Soluzione A
contrazioni dell'organo su un chimografo o un altro
strumento idoneo a fornire una registrazione continua. Sodio cloruro 160,0 g
Se si usa una leva la sua lunghezza deve essere tale che
i movimenti dell'organo siano amplificati di circa venti Potassio cloruro 4,0 g
volte. La trazione dell'intestino deve essere di circa Calcio cloruro anidro 2,0 g
9,8 mN (1 g) e deve essere aggiustata in base alla sensi- Magnesio cloruro anidro 1,0 g
bilita© dell'organo. Rinnovare il bagno per organi con
la soluzione B, lasciare a riposo per 10 min e lavare Sodio fosfato dibasico dodecaidrato 0,10 g
per 2 o 3 volte con la soluzione B. Stimolare una serie Acqua per preparazioni iniettabili R suffi-
di contrazioni mediante l'aggiunta di volumi misurati ciente a dare una soluzione di 1000 ml
di 0,2-0,5 ml di una soluzione di istamina dicloridrato R
avente una concentrazione che provoca risposte sub-
massimali riproducibili. Questa dose e© definita come Soluzione B
``dose superiore''. Lavare il bagno per organi (preferi-
bilmente facendolo traboccare senza svuotarlo) per 3 Soluzione A 50,0 ml
volte con la soluzione B prima di ciascuna aggiunta di
istamina. Le aggiunte successive devono essere fatte ad Atropina solfato 0,5 mg
intervalli regolari permettendo un completo rilascia- Sodio bicarbonato 1,0 g
mento tra due aggiunte successive (circa 2 min). Glucosio monoidrato 0,5 g
Aggiungere volumi uguali di una diluizione, a concen-
trazione molto bassa, di istamina dicloridrato R che pro- Acqua per preparazioni iniettabili R suffi-
vocano risposte riproducibili pari approssimativamente ciente a dare una soluzione di 1000 ml
a meta© di quelle ottenute con la ``dose superiore''. Que-
sta dose e© definita ``dose inferiore''. Continuare l'ag- La soluzione B deve essere preparata di recente ed
giunta regolare delle dosi ``superiore'' ed ``inferiore''' usata entro 24 h.

178
 Contaminazione microbica dei prodotti non obbligatoriamente sterili

inoizircserP
provocata dall'ultima dose della soluzione d'istamina.

ilareneG
2.6.11. SOSTANZE IPOTENSIVE

L'animale in esame non deve essere utilizzato in

Effettuare il saggio su un gatto di massa non inferiore a un altro saggio per le sostanze ipotensive se viene ap-
2 kg ed anestetizzato con cloralio idrato o con un barbi- plicato il secondo criterio o nel caso in cui la risposta
turico che consente di mantenere uniforme la pressione dell'animale alla dose piu© alta d'istamina iniettata dopo
del sangue. Proteggere l'animale dalla perdita di calore

isilanA id
la somministrazione della sostanza da esaminare sia

idoteM
corporeo e mantenerlo in modo che la temperatura inferiore alla risposta media alle dosi piu© basse d'ista-
rettale rimanga entro i limiti fisiologici. Introdurre una mina inoculate in precedenza.
cannula nella trachea del gatto. Inserire una cannula
riempita con una soluzione eparinizzata di sodio cloruro

irotinetnoC
soluzione isotonica R nell'arteria carotide comune e con-

/ ilairetaM
2.6.12. CONTAMINAZIONE MICROBICA DEI

nettere la cannula ad un dispositivo capace di dare una PRODOTTI NON OBBLIGATORIAMENTE

registrazione continua della pressione sanguigna. Inse- STERILI (CONTA TOTALE DEI MICROR-

rire nella vena femorale un'altra cannula riempita con GANISMI AEROBI VIVI)

una soluzione eparinizzata di sodio cloruro soluzione I saggi descritti di seguito consentono di determinare
isotonica R attraverso la quale possono essere iniettate numericamente batteri mesofili e funghi che possono

ivittaeR
le soluzioni di istamina e della sostanza da esaminare. crescere in condizioni aerobiche.
Determinare la sensibilita© dell'animale all'istamina I saggi sono destinati in primo luogo a determinare se
mediante iniezione per via endovenosa, ad intervalli una sostanza, che e© oggetto di una monografia di Far-
regolari, di dosi di istamina soluzione R corrispondenti macopea, soddisfa o meno ai requisiti microbiologici

itnemogrA
a 0,1 mg ed a 0,15 mg di istamina base per kg di massa specificati nella monografia in questione. Quando essi

ilareneG
corporea. Ripetere almeno tre volte l'iniezione della sono usati con questo scopo, si devono seguire le istru-
dose piu© bassa. Somministrare la seconda iniezione e zioni riportate di seguito, compreso il numero di cam-
quelle successive almeno 1 min dopo che la pressione pioni da considerare e si devono interpretare i risultati
sanguigna sia tornata al livello che aveva immediata- come indicato di seguito. I saggi possono essere anche

eifargonoM
mente prima dell'iniezione precedente. L'animale e© uti- usati per il saggio Efficacia della conservazione antimi-

ilareneG
lizzato nel saggio solo se la caduta della pressione san- crobica (5.1.3) come descritto nella Farmacopea. Essi
guigna alla dose piu© bassa e© facilmente rilevabile e possono essere usati anche per il controllo della qualita©
costante e se la dose piu© alta provoca risposte maggiori. delle materie prime e possono essere usati in associa-
Disciogliere la sostanza da esaminare in una quantita© zione con linee guida sulla Qualita© microbiologica delle

ehcituecamraF
preparazioni farmaceutiche (5.1.4). Quando sono usati
sufficiente di sodio cloruro soluzione isotonica R o in con tali scopi, per esempio da un produttore per il con-

emroF
altro solvente prescritto in modo da ottenere la concen- trollo delle materie prime e/o del prodotto finito o per
trazione prescritta. Iniettare per via endovenosa 1,0 ml la convalida del processo, la realizzazione dei saggi
di istamina soluzione R per kg di massa corporea, comprendente il numero di campioni da considerare e
seguito da due iniezioni successive della quantita© pre- l'interpretazione dei risultati e© concordata tra il produt-
scritta di soluzione da esaminare ed infine 1,0 ml di ista- tore e l'autorita© competente.
eiretaM

emirP
mina soluzione R. La seconda, la terza e la quarta inie- Effettuare la determinazione in condizioni progettate
zione sono effettuate almeno 1 min dopo che la pres- per evitare la contaminazione accidentale del prodotto
sione sanguigna e© tornata al valore che aveva da esaminare. Le precauzioni prese per evitare la conta-
immediatamente prima dell'iniezione precedente. Ripe- minazione devono essere tali da non influenzare i
ehcituecamraF
inoizaraperP

microrganismi che devono essere rivelati con il saggio.

ehcificepS

tere questa serie d'iniezioni per due volte e concludere

il saggio iniettando 1,5 ml di istamina soluzione R per Se il prodotto da esaminare ha un'attivita© antimicrobica
kg di massa corporea. deve essere adeguatamente neutralizzata. Se a questo
scopo si utilizzano sostanze inattivanti, deve essere
Il saggio e© valido se la risposta ottenuta dopo l'inie- dimostrata la loro efficacia e la non tossicita© nei con-
ehcitapoemO
inoizaraperP

zione di 1,5 ml di istamina soluzione R per kg di massa fronti dei microrganismi.

corporea e© superiore a quella ottenuta dopo la sommi- Determinare la conta totale dei microrganismi aerobi
nistrazione di 1,0 ml. La sostanza da esaminare non vivi con il metodo della filtrazione su membrana o il
soddisfa al saggio se la media delle serie di risposte alla metodo della conta su piastra come prescritto nella
sostanza e© superiore alla media delle risposte alla som- monografia.
ministrazione di 1,0 ml di istamina soluzione R per kg Il metodo del Numero Piu© Probabile (NPP) e© usato per
ecidnI

di massa corporea o se una qualsiasi delle dosi della le conte batteriche quando non e© disponibile nessun
sostanza provoca un'ipotensione maggiore di quella altro metodo. La scelta di un metodo puo© essere basato

179
Contaminazione microbica dei prodotti non obbligatoriamente sterili

su fattori come la natura del prodotto e il numero pre- richiedere l'uso di volumi piu© grandi. Puo© essere
sunto di microrganismi. Ciascun metodo scelto deve aggiunto un appropriato tensioattivo come polisor-
essere adeguatamente convalidato. bato 80 alla concentrazione di 1 g/l per favorire la
Quando il saggio e© usato insieme con il capitolo 5.1.3 o sospensione delle sostanze poco bagnabili con acqua.
5.1.4, si puo© usare il metodo della coltura in piastra, il Se il prodotto ha attivita© antimicrobica puo© essere
metodo della semina in superficie e il metodo della fil- aggiunto al diluente un agente inattivante. Se necessa-
trazione su membrana. rio portare il pH della sospensione a circa 7 e preparare
ulteriori diluizioni uno a di dieci usando lo stesso
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE diluente.
. Il campionamento del pro- Prodotti grassi . Omogeneizzare 10 g o 10 ml del pro-
dotto da esaminare con una quantita© di polisorbato 80
Piano di campionamento

dotto deve seguire un piano ben definito. Il piano di

campionamento dipende da fattori quali la dimensione sterile non superiore a meta© del suo peso o con un altro
del lotto, i rischi sanitari associati con una contamina- sterile e appropriato tensioattivo, se necessario scaldato
zione dei prodotti inaccettabilmente elevata, le caratte- a temperatura non superiore a 40 ‘C e in casi eccezio-
ristiche del prodotto e il livello presunto di contamina- nali ad una temperatura non superiore a 45 ‘C. Mesco-
zione. Salvo prescrizioni diverse, usare un campione(i) lare accuratamente e se necessario mantenere la tempe-
di 10 g o 10 ml della sostanza o della preparazione da ratura a b.m. o in una incubatrice. Aggiungere una
esaminare prelevato/i con le precauzioni indicate pre- soluzione di sodio cloruro-peptone tamponata a
cedentemente. Selezionare a caso il/i campione(i) dal pH 7,0 sufficientemente pre-riscaldata in modo da otte-
materiale complessivo o dai contenitori della prepara- nere una diluizione uno a dieci del prodotto originale.
zione. Se necessario, mescolare il contenuto di un Mescolare accuratamente mentre si mantiene la tempe-
numero sufficiente di contenitori per ottenere la quan- ratura per il tempo strettamente necessario alla forma-
tita© richiesta per formare ciascun campione, a seconda zione di un'emulsione e in ogni caso per non piu© di
della natura della sostanza o della preparazione da esa- 30 min. Si possono preparare ulteriori diluizioni uno a
minare. dieci usando una soluzione di sodio cloruro-peptone
Un esempio di un piano di campionamento applicabile tamponata a pH 7,0 contenente una concentrazione
ai prodotti, per i quali l'omogeneita© rispetto alla distri- adatta di polisorbato 80 sterile o un altro tensioattivo
buzione di microrganismi puo© essere un problema, e© il sterile.
piano di campionamento a tre livelli. In questo caso si Cerotti transdermici . Con delle pinze sterili rimuovere
prelevano cinque campioni da ciascun lotto e si analiz- la pellicola protettiva di dieci cerotti della preparazione
zano separatamente. I tre livelli riconosciuti sono: transdermica e disporli con il lato adesivo verso l'alto,
(i) campioni accettabili, cioe© campioni contenenti meno su piastre sterili di vetro o di plastica. Se necessario,
di m UFC (unita© formanti colonie) per grammo o milli- coprire la superficie adesiva con garze sterili (o un fil-
litro, dove m e© il limite specificato nella monografia tro di tessuto, a griglia, di polimero monofilamento) e
principale; trasferire i dieci cerotti in almeno 500 ml di una solu-
(ii) campioni limite, cioe© con piu© di m UFC, ma meno di zione di sodio cloruro-peptone tamponata a pH 7,0
10m UFC per grammo o millilitro; contenente attivatori appropriati come il polisor-
bato 80 e/o la lecitina. Agitare energicamente la prepa-
(iii) campioni non conformi, cioe© contenenti piu© di 10m razione per almeno 30 min (preparazione A). Prepa-
UFC per grammo o millilitro. rare nello stesso modo altri dieci cerotti, disporli in un
. Disciogliere o diluire 10 g o volume minimo di 500 ml di brodo di coltura A ed agi-
Prodotti solubili in acqua

10 ml del campione da esaminare in una soluzione di tare energicamente per almeno 30 min (prepa-
sodio cloruro-peptone tamponata a pH 7,0 o in un altro razione B).
liquido idoneo. In generale si prepara una diluizione ESAME DEL CAMPIONE
1 a 10. Comunque, le caratteristiche del prodotto o la
sensibilita© richiesta possono richiedere l'uso di altri . Usare membrane filtranti con
rapporti. Se il prodotto ha un'attivita© antimicrobica, Filtrazione su membrana

una dimensione nominale dei pori non superiore a

puo© essere aggiunto al diluente un agente inattivante. 0,45 m e per le quali sia stata accertata l'efficacia nel
Se necessario, portare il pH a circa 7 e preparare ulte- l

trattenere i batteri. Il tipo di materiale del filtro e© scelto

riori diluizioni uno a dieci usando lo stesso diluente. in modo che l'efficienza nel trattenere i batteri non sia
Prodotti non grassi insolubili in acqua . Sospendere 10 g influenzata dai componenti del campione che deve
o 10 ml del campione da esaminare in una soluzione di essere esaminato. I filtri di nitrato di cellulosa, per
sodio cloruro-peptone tamponata a pH 7,0 o in un altro esempio, possono essere usati per le soluzioni acquose,
liquido idoneo. In generale si prepara una sospensione oleose e debolmente alcooliche e i filtri di acetato di cel-
1 a 10, ma le caratteristiche di alcuni prodotti possono lulosa, per esempio, possono essere usati per le solu-

180
 Contaminazione microbica dei prodotti non obbligatoriamente sterili

inoizircserP
zioni fortemente alcooliche. L'apparecchio di filtra- 300 (100 colonie per i funghi). Considerare la media

ilareneG
zione e© disegnato in modo da consentire il trasferi- aritmetica delle conte e calcolare il numero delle unita©
mento del filtro nel terreno di coltura. formanti colonia per grammo o millilitro.
Trasferire una quantita© adatta del campione preparato b. Metodo della semina in superficie
come descritto nella sezione ûPreparazione del cam-

isilanA id
pioneý (preferibilmente rappresentante 1 g del pro- Usare piastre di Petri di 9 cm di diametro, aggiungere a

idoteM
dotto, o meno se e© previsto un numero elevato di unita© ciascuna piastra 15-20 ml di un terreno di coltura aga-
formanti colonie) per ciascuno dei due filtri a mem- rizzato liquefatto adatto per la coltivazione dei batteri
brana e filtrare immediatamente. Lavare ciascun filtro (come il terreno di coltura B) o di un terreno di coltura
con tre quantita© , ciascuna di circa 100 ml, di un liquido agarizzato liquefatto per la coltivazione dei funghi

irotinetnoC
adatto come la soluzione di sodio cloruro-peptone tam- (come il terreno di coltura C) ad una temperatura di

/ ilairetaM
ponata a pH 7,0. A questa soluzione possono essere circa 45 ‘C e lasciar solidificare. Se si usano piastre di
aggiunti tensioattivi come il polisorbato 80 o inattivanti Petri piu© grandi, aumentare conseguentemente il
degli agenti antimicrobici. Se il metodo e© validato, pos- volume dell'agar. Asciugare le piastre, per esempio in
sono essere effettuati meno di tre lavaggi. Trasferire una cappa a flusso laminare o in un incubatore. Semi-
uno dei filtri a membrana, destinato principalmente nare sulla superficie del terreno di coltura un volume

ivittaeR
alla conta dei batteri, sulla superficie di un appropriato misurato di almeno 0,1 ml di campione preparato come
terreno agarizzato, come il terreno agarizzato B, e l'al- descritto nella sezione ûPreparazione del campioneý.
tro filtro, destinato principalmente alla conta dei fun- Usare almeno due piastre di Petri per ciascun terreno e
ghi, sulla superficie di un appropriato terreno agariz- per ciascuna diluizione. Per l'incubazione e il calcolo
zato come il terreno agarizzato C. Incubare la piastra del numero delle unita© formanti colonia si procede

itnemogrA
di terreno agarizzato B a 30-35 ‘C e la piastra di terreno come descritto per il metodo della coltura in profon-

ilareneG
agarizzato C a 20-25 ‘C per cinque giorni, a meno che dita© .
non si possa ottenere una conta attendibile in un tempo
piu© breve. Selezionare le lastre con il numero piu© alto METODO DEL NUMERO PIUé PROBABILE
di colonie ma inferiore a 100 e calcolare il numero delle

eifargonoM
unita© formanti colonia per grammo o millilitro di pro- La precisione e l'accuratezza del metodo del numero piu©

ilareneG
dotto. probabile (NPP) sono inferiori a quelle del metodo di fil-
Quando si esaminano i cerotti transdermici, filtrare trazione su membrana o ai metodi della conta su piastra.
separatamente 50 ml di preparazione A attraverso cia- Risultati non attendibili sono ottenuti in particolare nella
scuna di due membrane filtranti sterili. Disporre una conta delle muffe. Per queste ragioni il metodo del numero

ehcituecamraF
membrana su terreno agarizzato B per la conta micro- piu© probabile e© riservato alla conta deibatteri in situazioni
in cui non e© possibile il ricorso ad altri metodi. Se l'uso del

emroF
bica totale e l'altra membrana su terreno agarizzato C metodo e© giustificato, procedere come segue.
per la conta dei funghi.
METODI DI CONTA SU PIASTRA Preparare una serie di almeno tre diluizioni succes-
sive uno a dieci del prodotto come descritto nella
a. Metodo di coltura in profondita© sezione ûPreparazione del campioneý. Usare tre ali-
eiretaM

emirP
quote di 1 g o di 1 ml di ciascuna diluizione per ino-
Usare delle piastre di Petri del diametro di 9 cm, culare tre provette contenenti 9-10 ml di un terreno
aggiungere a ciascuna piastra 1 ml del campione prepa- di coltura liquido (come un terreno di coltura A).
rato come descritto nella sezione ûPreparazione del Se necessario puo© essere aggiunto al terreno di col-
ehcituecamraF

campioneý e 15-20 ml di un terreno di coltura agariz- tura un agente tensioattivo come il polisorbato 80,
inoizaraperP

ehcificepS

zato liquefatto per la coltivazione dei batteri (come il o un inattivatore di agenti antimicrobici. Se si prepa-
terreno di coltura B), o 15-20 ml di un terreno di coltura rano tre diluizioni inoculare nove provette. Incubare
agarizzato liquefatto per la coltivazione dei funghi tutte le provette per cinque giorni a 30-35 ‘C. Regi-
(come il terreno di coltura C) ad una temperatura non strare per ciascuna diluizione il numero di provette
superiore a 45 ‘C. Se si usano piastre di Petri piu© grandi che presentano una crescita microbica. Se la lettura
ehcitapoemO
inoizaraperP

aumentare, conseguentemente, la quantita© di agar dei risultati e© difficile o incerta a causa della natura
usata. Preparare per ciascun terreno di coltura almeno del prodotto da esaminare, allestire una sottocultura
due piastre di Petri per ogni diluizione. Incubare le pia- nello stesso brodo o in un terreno di coltura agariz-
stre ad una temperatura compresa tra 30-35 ‘C zato adatto (come il terreno di coltura agarizzato
(20-25 ‘C per i funghi) per cinque giorni, a meno che B), per 18-24 h alla stessa temperatura ed usare que-
non sia ottenuta una conta attendibile in un tempo piu© sti risultati. Determinare il numero piu© probabile di
ecidnI

breve. Per la conta scegliere la diluizione le cui piastre batteri per grammo o millilitro di prodotto da esa-
presentino il numero piu© alto di colonie, ma inferiore a minare per mezzo della Tabella 2.6.12.-1.

181
Contaminazione microbica dei prodotti non obbligatoriamente sterili

Tabella 2.6.12.-1.- Numero piu© probabile di batteri

Tre provette per diluizione

Numero di provette positive Categoria*

Limiti di confidenza
NPP per grammo
al 95 per cento

0,1 g 0,01 g 0,001 g 1 2

0 0 0 <3 ö ö ö ö
0 1 0 3 ö x <1 17
1 0 0 3 x ö 1 21
1 0 1 7 ö x 2 27
1 1 0 7 x ö 2 28
1 2 0 11 ö x 4 35
2 0 0 9 x ö 2 38
2 0 1 14 ö x 5 48
2 1 0 15 x ö 5 50
2 1 1 20 ö x 8 61
2 2 0 21 x ö 8 63
3 0 0 23 x ö 7 129
3 0 1 38 x ö 10 180
3 1 0 43 x ö 20 210
3 1 1 75 x ö 20 280
3 2 0 93 x ö 30 390
3 2 1 150 x ö 50 510
3 2 2 210 ö x 80 640
3 3 0 240 x ö 100 1400
3 3 1 460 x ö 200 2400
3 3 2 1100 x ö 300 4800
3 3 3 >1100 ö ö ö ö
* Categoria 1: risultati normali, ottenuti nel 95 per cento dei casi.
Categoria 2: risultati meno probabili, ottenuti solo nel 4 per cento dei casi. Questi non devono essere usati per
decisioni importanti. Risultati che non sono soddisfacenti in confronto a quelli della categoria 2
non sono menzionati e sono sempre inaccettabili.

182
 Contaminazione microbica di prodotti non obbligatoriamente sterili

inoizircserP
EFFICACIA DEI TERRENI DI COLTURA E VALI- Se nella monografia e© prescritto un limite, esso deve

ilareneG
DITAé DEL METODO DI CONTA essere interpretato come segue:
Coltivare i ceppi batterici di riferimento separatamente 102 microrganismi: limite massimo accettato: 5 102,2

in recipienti contenenti un terreno di coltura liquido 103 microrganismi: limite massimo accettato: 5 103, 2
(come il terreno di coltura A) ad una temperatura com- ecc.
presa tra 30 C e 35 ‘C per 18-24 h. Coltivare i ceppi di

isilanA id
Se e© usato un piano di campionamento come, per esem-

idoteM
funghi di riferimento separatamente in un terreno di pio, quello a tre livelli, procedere come segue.
coltura agarizzato adatto (come il terreno di coltura C Calcolare la conta aerobica totale separatamente per
senza antibiotici) a 20-25 ‘C per 48 h per la Candida ciascuno dei cinque campioni. La sostanza o la prepa-
albicans e a 20-25 ‘C per 7 giorni per l'Aspergillus niger. razione supera il saggio se sono soddisfatte le condi-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Staphylococcus aureus - per es. ATCC 6538 zioni seguenti:
(NCIMB 9518, CIP 4.83); (i) nessuna singola conta totale dei microrganismi
Bacillus subtilis - per es. ATCC 6633 aerobi vivi supera il limite prescritto di un fattore
(NCIMB 8054, CIP 52.62); uguale o superiore a dieci (ossia non vi sono ûcampioni
inaccettabiliý),
Escherichia coli - per es. ATCC 8739 (ii) non piu© di due singole conte totali dei microrgani-

ivittaeR
(NCIMB 8545, CIP 53.126); smi aerobi sono comprese tra il limite prescritto e dieci
Candida albicans - per es. ATCC 10231 volte questo limite (ossia non piu© di due ûcampioni
(NCPF 3179, IP 48.72); limiteý).
Le soluzioni e i terreni di coltura raccomandati sono
Aspergillus niger - per es. ATCC 16404 descritti nel capitolo generale 2.6.13.

itnemogrA
ilareneG
(IMI 149007, IP 1431.83).
Usare la soluzione di sodio cloruro-peptone tamponata
a pH 7,0 per preparare le sospensioni di riferimento
2.6.13. CONTAMINAZIONE MICROBICA DI PRO-

contenenti circa 100 unita© formanti colonia per millili-

DOTTI NON OBBLIGATORIAMENTE STE-
RILI (SAGGI PER I MICRORGANISMI SPE-

eifargonoM
tro. Usare la sospensione di ciascuno dei microrganismi

ilareneG
CIFICATI)

separatamente come controllo dei metodi di conta, in In questo metodo generale e© proposto l'uso di alcuni
presenza e assenza del prodotto da esaminare. Quando terreni di coltura selettivi. Una caratteristica comune a
si effettua il saggio con il metodo di filtrazione su mem- tutti i terreni selettivi e© quella di non permettere la cre-
brana o con il metodo della conta su piastra, si deve scita dei microrganismi danneggiati sub-letalmente.

ehcituecamraF
ottenere, per ognuno dei ceppi in esame, una conta che Poichë i microrganismi danneggiati sub-letalmente
non differisca di piu© di un fattore 5 dal valore che si e©

emroF
calcolato per l'inoculo. Quando si effettua il saggio sono importanti per la qualita© del prodotto, nelle proce-
con il metodo del numero piu© probabile, il valore calco- dure sperimentali che si basano sull'uso di terreni selet-
lato dall'inoculo deve essere compreso nei limiti di con- tivi deve essere prevista una fase di rigenerazione.
fidenza al 95 per cento dei risultati ottenuti. Per sag- Se il prodotto in esame ha un'attivita© antimicrobica
giare la sterilita© del terreno di coltura e del diluente e questa deve essere neutralizzata adeguatamente.

eiretaM

emirP
l'esecuzione asettica del saggio, eseguire il metodo
usando come preparazione in esame una soluzione ste- Enterobatteri ed altri batteri gram-negativi

rile di sodio cloruro-peptone tamponata a pH 7,0. Non Sebbene il saggio sia destinato a rivelare i batteri appar-
si deve verificare crescita microbica. tenenti alla famiglia delle Enterobatteriacee, e© ricono-
ehcituecamraF

sciuto che possono essere rivelati anche altri tipi di

inoizaraperP

ehcificepS

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI organismi (per es. Aeromonas, Pseudomonas).

La conta batterica sara© considerata uguale al numero Ricerca dei batteri. Preparare il prodotto da esaminare
medio di unita© formanti colonia riscontrate nel terreno come descritto al capitolo 2.6.12 ma usando il terreno
di coltura agarizzato B. La conta dei funghi sara© consi- di coltura liquido D al posto della soluzione di sodio
derata uguale al numero medio delle unita© formanti cloruro-peptone tamponata a pH 7,0. Omogeneizzare
ehcitapoemO
inoizaraperP

colonia nel terreno di coltura agarizzato C. La conta ed incubare a 35-37 ‘C per un tempo sufficiente a rivi-
aerobica vitale totale e© la somma della conta batterica talizzare i batteri ma non sufficiente a favorire la molti-
e della conta dei funghi come descritto precedente- plicazione di microrganismi (generalmente 2 h ma non
mente. Se esiste evidenza che gli stessi tipi di microrga- piu© di 5 h). Agitare il contenitore, trasferire una quan-
nismi crescono su entrambi i terreni di coltura il valore tita© del contenuto (omogenato A) corrispondente ad
ottenuto puo© essere corretto. Se la conta e© effettuata 1 g o ad 1 ml di prodotto in 100 ml di terreno di coltura
ecidnI

con il metodo del numero piu© probabile il valore calco- liquido E arricchito ed incubare a 35-37 ‘C per
lato corrisponde alla conta batterica. 18-48 h. Allestire una sottocoltura su piastre di terreno

183
Contaminazione microbica di prodotti non obbligatoriamente sterili

di coltura agarizzato F. Incubare a 35-37 ‘C per 18-24 Salmonella

h. Il prodotto soddisfa al saggio se non vi e© crescita di Preparare il prodotto in esame come descritto nel
colonie di batteri gram-negativi in nessuna piastra. metodo generale 2.6.12, ma usando un terreno di col-
Valutazione quantitativa. Inoculare appropriate quan- tura liquido A al posto di una soluzione di sodio clo-
tita© di terreno di coltura liquido di arricchimento E ruro-peptone tamponata a pH 7,0. Omogeneizzare e
con l'omogenato (A) e/o diluizioni di esso contenenti incubare a 35-37 ‘C per 18-24 h. Trasferire 1 ml della
rispettivamente 0,1 g, 0,01 g e 0,001 g (o 0,1 ml, 0,01 ml coltura arricchita in 10 ml di terreno di coltura liquido
e 0,001 ml) del prodotto da esaminare. Incubare a I e incubare a 41-43‘C per 18-24 h. Allestire una sotto-
35-37 ‘C per 24-48 h. Allestire una sottocoltura di cia- coltura su almeno due differenti terreni di coltura aga-
scuna coltura su piastre di terreno di coltura agarizzato rizzati scelti tra il terreno agarizzato J, il terreno agariz-
F per ottenere un isolamento selettivo. Incubare a zato K e il terreno agarizzato L. Incubare a 35-37 ‘C
35-37 ‘C per 18-24 h. La crescita di colonie ben svilup- per 18-72 h. La probabile presenza di salmonelle e© indi-
pate, generalmente rosse o rossastre, di batteri gram- cata dalla crescita di colture aventi il seguente aspetto:
negativi rappresenta un risultato positivo. Annotare la terreno agarizzato J: colonie incolori ben sviluppate,
quantita© piu© piccola di prodotto che da© un risultato terreno agarizzato K: colonie rosse ben sviluppate
positivo e la quantita© piu© grande che da© un risultato con o senza il centro nero,
negativo. Determinare dalla Tabella 2.6.13.-1 il numero
probabile di batteri. terreno agarizzato L: colonie incolori, trasparenti e
piccole o colonie rosa o bianco
Tabella 2.6.13.-1. opaco spesso circondate da una
zona rosa o rossa.
Risultato per ciascuna quantita©
Trasferire separatamente alcune delle colonie sospette
di prodotto
in provette contenenti il terreno agarizzato M, inocu-
Numero probabile di batteri

0,1g o 0,01 g o 0,001 g o

per grammo di prodotto
lando sia in superficie che in profondita© . La presenza
0,1 ml 0,01 ml 0,001 ml
di salmonelle e© presuntivamente confermata se al punto
+ + + superiore a 1033 dell'inoculazione in profondita© , ma non sulla superficie
+ + - inferiore a 10 della coltura, si verifica un cambiamento di colore dal
e superiore a 102 2
rosso al giallo e solitamente la formazione di gas, con
+ - - inferiore a 10 o senza la produzione di idrogeno solforato nell'agar.
e superiore a 10 La conferma precisa puo© essere ottenuta mediante
- - - inferiore a 10 saggi biochimici e sierologici appropriati. Il prodotto
Per il saggio dei cerotti transdermici, filtrare 50 ml della soddisfa al saggio se le colture descritte non si svilup-
preparazione B come descritto nel metodo generale pano o se i saggi biochimici e sierologici di conferma
2.6.12. attraverso una membrana sterile da filtro, intro- sono negativi.
durre la membrana in 100 ml di terreno di coltura Pseudomonas aeruginosa
liquido arricchito E e incubare a 35-37 ‘C per 18-24 h.
Dopo l'incubazione seminare su un terreno di coltura Preparare il prodotto in esame come descritto nel
agarizzato F per la rivelazione degli Enterobatteri e di metodo generale 2.6.12 ed usare 10 ml o la quantita© cor-
altri microrganismi gram-negativi. rispondente a 1 g o 1 ml per inoculare 100 ml di terreno
di coltura liquido A, omogeneizzare ed incubare a
Escherichia coli 35-37 ‘C per 18-48 h. Allestire una sottocoltura su una
Preparare il prodotto in esame come descritto nel piastra di terreno agarizzato N ed incubare a 35-37 ‘C
metodo generale 2.6.12 ed usare 10 ml o la quantita© cor- per 18-72 h. Il prodotto soddisfa al saggio se non si
rispondente ad 1 g o ad 1 ml per inoculare 100 ml di ter- rivela la crescita di microrganismi. Se si verifica la cre-
reno di coltura liquido A, omogeneizzare e incubare a scita di bastoncelli gram-negativi, trasferire del mate-
35-37 ‘C per 18-48 h. Agitare il contenitore, trasferire riale di colonie isolate, differenti morfologicamente,
1 ml in 100 ml di terreno di coltura liquido G ed incu- nel terreno di coltura liquido A e incubare a 41-43 ‘C
bare a 43-45 ‘C per 18-24 h. Allestire una sottocoltura per 18-24 h. Il prodotto soddisfa al saggio se non si veri-
su piastre di terreno di coltura agarizzato H a 35-37 ‘C fica nessuna crescita a 41-43 ‘C.
per 18-72 h. La crescita di colonie rosse, non mucose, Per il saggio dei cerotti transdermici, filtrare 50 ml della
di batteri gram-negativi indica la probabile presenza di preparazione A, come descritto nel metodo generale
E. coli. Questo puo© essere confermato da saggi biochi- 2.6.12 attraverso una membrana sterile, introdurre la
mici adatti, come la produzione di indolo. Il prodotto membrana in 100 ml di terreno di coltura liquido A e
soddisfa al saggio se non sono rinvenute queste colonie incubare a 35-37 ‘C per 18-48 h. Dopo l'incubazione
o se i saggi biochimici di conferma sono negativi. seminare su un terreno di coltura agarizzato N.

184
 Contaminazione microbica di prodotti non obbligatoriamente sterili

inoizircserP
Staphylococcus aureus Ps. aeruginosa, E. coli e Salmonellae in presenza e in

ilareneG
assenza
Preparare il prodotto in esame come descritto nel tato positivo del prodotto in esame. Si deve ottenere un risul-
metodo generale 2.6.12 ed usare 10 ml o la quantita© cor- per i rispettivi microrganismi.
rispondente ad 1 g o 1 ml per inoculare 100 ml di ter- Clostridi
reno di coltura liquido A, omogeneizzare ed incubare
a 35-37 ‘C per 18-48 h. Allestire una sottocoltura su I saggi descritti di seguito sono destinati a scopi diversi.

isilanA id
idoteM
piastre di terreno agarizzato O ed incubare a 35-37 ‘C Il primo metodo e© destinato ai prodotti per i quali e©
per 18-72 h. Colonie nere di cocchi gram-positivi cir- essenziale escludere la presenza di clostridi patogeni e
condate da zone chiare indicano la presenza di pertanto e© necessario sottoporli al saggio per verificare
S. aureus. La conferma puo© essere effettuata mediante la loro assenza. Questi prodotti generalmente hanno
appropriati saggi biochimici come il saggio della coagu- una conta totale bassa. Il secondo metodo e© un saggio

irotinetnoC
/ ilairetaM
lasi e della desossiribonucleasi. Il prodotto soddisfa al semi-quantitativo per il Clostridium perfringens ed e©
saggio se le colonie del tipo descritto non si sviluppano destinato ai prodotti per i quali il livello di queste specie
sul terreno di coltura agarizzato O o se i saggi biochi- rappresenta un criterio di qualita© .
mici di conferma sono negativi. 1. Saggio per i Clostridi
Per il saggio dei cerotti transdermici, filtrare 50 ml della Preparare il campione da esaminare come descritto al

ivittaeR
preparazione A come descritto nel metodo generale capitolo 2.6.12. Preparare due aliquote uguali del cam-
2.6.12 attraverso una membrana sterile, introdurre la pione da esaminare corrispondenti ad 1 g o ad 1 ml del
membrana in 100 ml di terreno di coltura liquido A ed prodotto in esame. Scaldare un'aliquota a 80 ‘C per
incubare a 35-37 ‘C per 18-48 h. Dopo l'incubazione 10 min e raffreddare rapidamente. Non scaldare l'altra
seminare su un terreno di coltura agarizzato O.

itnemogrA
ilareneG
aliquota. Trasferire 10 ml di ciascuna aliquota omoge-
neizzata in due provette (38 mm x 200 mm) o in altri
Proprieta© nutritive e selettive dei terreni di coltura e vali-

dita© del saggio contenitori appropriati contenenti 100 ml del terreno

I saggi descritti di seguito devono essere effettuati di35-37 coltura P. Incubare in condizioni di anaerobiosi a
‘C per 48 h. Dopo l'incubazione, allestire delle
almeno su ciascun lotto di terreni di coltura disidratati. sottocolture

eifargonoM
Procedere come segue. Far crescere separatamente i ra Q al qualedie© stata ciascuna provetta nel terreno di coltu-

ilareneG
seguenti ceppi di riferimento in provette contenenti i in condizioni di anaerobiosi aggiunta gentamicina ed incubare
terreni di coltura indicati, a 30-35 ‘C per 18-24 h: a 35-37 ‘C per 48 h. Il pro-
dotto soddisfa al saggio se non si evidenzia la crescita
Staphylococcus aureus - per es. ATCC 6538 di microrganismi.

ehcituecamraF
(NCIMB 9518, CIP 4.83): ter- Se si verifica una crescita, allestire separatamente una

emroF
reno di coltura liquido A; sottocoltura di ciascuna forma di colonia nel terreno
Pseudomonas - per es. ATCC 9027 (NCIMB dizioni coltura Q, senza gentamicina, ed incubare in condi-
aeruginosa 8626, CIP 82.118): terreno di solo inaerobiche ed anaerobiche. La presenza di crescita
condizioni anaerobiche di bacilli gram-positivi
coltura liquido A; (con o senza endospore), che da© una reazione catalasi

eiretaM
Escherichia coli - per es. ATCC 8739 (NCIMB negativa, indica la presenza di Clostridium spp. Con-

emirP
8545, CIP 53.126): terreno di frontare, se necessario, la morfologia delle colonie nelle
coltura liquido A; due piastre ed effettuare il saggio della catalasi per
Salmonella - non e© raccomandato nessun escludere
robi
la possibilita© di Bacillus spp. aerobi ed anae-
facoltativi che danno una reazione catalasi posi-
ehcituecamraF
inoizaraperP

typhimurium tipo di ceppo (puo© essere tiva. Questo saggio

ehcificepS

anche usata una salmonella, sull'agar su colonie puo© essere effettuato direttamente
non patogena per l'uomo, dopo trasferimento suseparate, vetrino,
oppure indirettamente,
mediante l'applicazione
come Salmonella abony di una goccia di idrogeno perossido soluzione diluita R.
(NCTC 6017, CIP 80.39)): ter- La formazione di bolle di gas indica una reazione cata-
ehcitapoemO
inoizaraperP

reno di coltura liquido A. lasi positiva.

Diluire delle porzioni di ciascuna delle colture usando 2. Conta del Clostridium perfringens
una soluzione di sodio cloruro-peptone tamponata a
pH 7,0 per preparare delle sospensioni di riferimento Preparare il prodotto in esame come descritto nel
contenenti circa 1000 microrganismi aerobi per millili- metodo generale 2.6.12, e preparare diluizioni 1:100 e
tro. Miscelare volumi uguali di ciascuna sospensione e 1:1000 in una soluzione di sodio cloruro-peptone tam-
ecidnI

usare 0,4 ml (approssimativamente 100 microrganismi ponata a pH 7,0. Determinare il numero piu© probabile
di ciascun ceppo) come inoculo nei saggi per S. aureus, di batteri come descritto nella conta totale dei micror-

185
Contaminazione microbica di prodotti non obbligatoriamente sterili

ganismi aerobi vivi (2.6.12) usando il terreno di coltu- Terreno agarizzato B (idrolizzato agarizzato di soia e
ra R introdotto in provette o in altri contenitori appro- caseina)
priati contenenti un piccolo tubo Durham. Mescolare Idrolizzato pancreatico di caseina 15,0 g
agitando il meno possibile ed incubare a 45,5-46,5 ‘C Idrolizzato papaico di semi di soia 5,0 g
per 24-48 h. Le provette che presentano un anneri- Sodio cloruro 5,0 g
mento dovuto al solfuro di ferro ed un'abbondante for- Agar 15,0 g
mazione di gas nel tubo di Durham (almeno 1/10 del Acqua depurata 1000 ml
volume) indicano la presenza del Cl. perfringens. Deter- Aggiustare il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia
minare il numero piu© probabile di Cl. perfringens 7,3 0,2. Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min.
usando la Tabella 2.6.12.-1.
6

Terreno agarizzato C (agar Sabouraud-glucosio con anti-

Controlli biotici)
Usare i ceppi seguenti: Peptoni (carne e caseina) 10,0 g
Glucosio monoidrato 40,0 g
Per il metodo 1: Clostridium sporogenes per es. Agar 15,0 g
ATCC 19404 (NCTC 532) o CIP 79.3; Acqua depurata 1000 ml
Per il metodo 2: Clostridium perfringens per es. Aggiustare il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia
ATCC 13124 (NCIMB 6125, NCTC 5,6 0,2. Sterilizzare mediante riscaldamento in auto-
8237, CIP 103 409). 6

clave a 121 ‘C per 15 min. Immediatamente prima del-

Se necessario combinare con il Cl. sporogenes per verifi- l'uso, aggiungere 0,10 g di benzilpenicillina sodica e
care la selettivita© e le condizioni anaerobiche. 0,10 g di tetraciclina per litro di terreno di coltura in
La sezione seguente e© riportata come informazione e linea soluzioni sterili o, alternativamente, aggiungere 50 mg
guida; essa non costituisce una parte obbligatoria della di cloramfenicolo per litro di terreno di coltura prima
Farmacopea. della sterilizzazione.
SOLUZIONI E TERRENI DI COLTURA RACCO- Terreno liquido D (terreno al lattosio monoidrato)
MANDATI Estratto di carne di manzo 3,0 g
Le soluzioni ed i terreni di coltura seguenti si sono rive- Idrolizzato pancreatico di gelatina 5,0 g
lati soddisfacenti agli scopi per i quali essi sono pre- Lattosio monoidrato 5,0 g
scritti nel saggio della contaminazione microbica della Acqua depurata 1000 ml
Farmacopea. Si possono usare altri terreni di coltura Aggiustare il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia
se essi hanno analoghe proprieta© nutritive e selettive 6,9 0,2. Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min
6

per i microrganismi da sottoporre al saggio. e raffreddare immediatamente.

Sodio cloruro-peptone soluzione tamponata a pH 7,0 Terreno liquido di arricchimento E (terreno liquido Mos-
sel di arricchimento per gli Enterobatteri)
Potassio fosfato monobasico 3,6 g Idrolizzato pancreatico di gelatina 10,0 g
Sodio fosfato dibasico diidrato 7,2 g equivalente a Glucosio monoidrato 5,0 g
0,067 M di fosfato Bile di bue disidratata 20,0 g
Sodio cloruro 4,3 g; Potassio fosfato monobasico 3,0 g
Peptone (carne o caseina) 1,0 g Sodio fosfato dibasico diidrato 8,0 g
Acqua depurata 1000 ml Verde brillante 15 mg
A questa soluzione possono essere aggiunti tensioattivi Acqua depurata 1000 ml
o inattivatori di agenti antimicrobici come 1-10 g/l di Aggiustare il pH in modo che dopo il riscaldamento sia
polisorbato 80. 7,2 0,2. Scaldare a 100 ‘C per 30 min e raffreddare
Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min. 6

immediatamente.
Terreno liquido A (terreno liquido di idrolizzato di soia e Terreno agarizzato F (agar alla bile con glucosio, cristal
caseina) violetto, rosso neutro)
Idrolizzato pancreatico di caseina 17,0 g Estratto di lievito 3,0 g
Idrolizzato papaico di semi di soia 3,0 g Idrolizzato pancreatico di gelatina 7,0 g
Sodio cloruro 5,0 g Sali biliari 1,5 g
Potassio fosfato dibasico 2,5 g Lattosio monoidrato 10,0 g
Glucosio monoidrato 2,5 g Sodio cloruro 5,0 g
Acqua depurata 1000 ml Glucosio monoidrato 10,0 g
Aggiustare il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia Agar 15,0 g
7,3 0,2. Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min. Rosso neutro 30 mg

186
 Contaminazione microbica di prodotti non obbligatoriamente sterili

inoizircserP
Cristal violetto 2 mg Terreno agarizzato K (agar desossicolato, xilosio, lisina)

ilareneG
Acqua depurata 1000 ml Xilosio 3,5 g
Aggiustare il pH in modo che dopo il riscaldamento sia L-Lisina 5,0 g
7,4 0,2. Scaldare all'ebollizione, ma non in autoclave. Lattosio monoidrato 7,5 g
Saccarosio 7,5 g
6

Terreno liquido G (terreno liquido MacConkey)

isilanA id
Sodio cloruro 5,0 g

idoteM
Idrolizzato pancreatico di gelatina 20,0 g Estratto di lievito 3,0 g
Lattosio monoidrato 10,0 g Rosso fenolo 80 mg
Bile di bue disidratata 5,0 g Agar 13,5 g
Bromocresolo porpora 10 mg Sodio desossicolato 2,5 g
Acqua depurata 1000 ml

irotinetnoC
/ ilairetaM
Sodio tiosolfato 6,8 g
Aggiustare il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia Ferro(-ico) ammonico citrato 0,8 g
7,3 0,2. Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min.
6
Acqua depurata 1000 ml
Terreno agarizzato H (agar MacConkey) Aggiustare il pH in modo che dopo il riscaldamento sia
Idrolizzato pancreatico di gelatina 17,0 g 7,4 0,2. Scaldare appena fino all'ebollizione, raffred-
Peptoni (carne e caseina) 3,0 g
6

dare a 50 C e versare nelle piastre. Non scaldare in

ivittaeR
Lattosio monoidrato 10,0 g autoclave.
Sodio cloruro 5,0 g Terreno agarizzato L (agar al verde brillante, rosso
Sali biliari 1,5 g fenolo, lattosio monoidrato e saccarosio)
Agar 13,5 g Peptone (carne e caseina) 10,0 g

itnemogrA
Rosso neutro 30,0 mg

ilareneG
Cristal violetto 1 mg Estratto di lievito 3,0 g
Acqua purificata 1000 ml Sodio cloruro 5,0 g
Lattosio monoidrato 10,0 g
Aggiustare il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia Saccarosio 10,0 g
7,1 0,2. Bollire per 1 min agitando costantemente Agar 20,0 g

eifargonoM
6

quindi sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min.

ilareneG
Rosso fenolo 80 mg
Terreno liquido I (terreno liquido alla bile tetrationato Verde brillante 12,5 mg
verde brillante) Acqua depurata 1000 ml
Peptone 8,6 g Scaldare all'ebollizione per 1 min. Aggiustare il pH in

ehcituecamraF
Bile di bue essiccata 8,0 g modo che dopo la sterilizzazione sia 6,9 0,2. Imme-
Sodio cloruro 6,4 g
6

diatamente prima dell'uso sterilizzare in autoclave a

emroF
Calcio carbonato 20,0 g 121 ‘C per 15 min, raffreddare a 50 ‘C e versare nelle
Potassio tetrationato 20,0 g piastre.
Verde brillante 70 mg Terreno agarizzato M (agar al ferro e triplo zucchero)
Acqua depurata 1000 ml Estratto di carne di manzo 3,0 g

eiretaM
Aggiustare il pH in modo che dopo il riscaldamento sia

emirP
Estratto di lievito 3,0 g
7,0 0,2. Scaldare appena fino all'ebollizione. Non
6
Peptoni (caseina e manzo) 20,0 g
scaldare di nuovo. Sodio cloruro 5,0 g
Terreno agarizzato J (agar desossicolato citrato) Lattosio monoidrato 10,0 g
ehcituecamraF

Estratto di carne di manzo 10,0 g Saccarosio 10,0 g

inoizaraperP

ehcificepS

Peptone di carne 10,0 g Glucosio monoidrato 1,0 g

Lattosio monoidrato 10,0 g Ferro(-ico) ammonico citrato 0,3 g
Sodio citrato 20,0 g Sodio tiosolfato 0,3 g
Ferro(-ico) citrato 1,0 g Rosso fenolo 25 mg
ehcitapoemO
inoizaraperP

Sodio desossicolato 5,0 g Agar 12,0 g

Agar 13,5 g Acqua purificata 1000 ml
Rosso neutro 20 mg Scaldare all'ebollizione per 1 min agitando. Aggiustare
Acqua depurata 1000 ml il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia 7,4 0,2.
6

Aggiustare il pH in modo che dopo il riscaldamento sia Riempire le provette per un terzo della loro altezza, ste-
7,3 0,2. Portare dolcemente all'ebollizione e bollire
6 rilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min e lasciare raf-
ecidnI

per 1 min, raffreddare a 50 ‘C e versare nelle piastre. freddare in modo da avere una solidificazione a ûbecco
Non scaldare in autoclave. di clarinoý.

187
Contaminazione microbica di prodotti non obbligatoriamente sterili

Terreno agarizzato N (agar cetrimmide) Idratare l'agar, disciogliere mediante riscaldamento

Idrolizzato pancreatico di gelatina 20,0 g all'ebollizione agitando continuamente. Se necessario,
Magnesio cloruro 1,4 g aggiustare il pH in modo che dopo la sterilizzazione
Potassio disolfato 10,0 g sia 7,3 0,2. Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per
6

Cetrimmide 0,3 g 15 min. Lasciare raffreddare a 45-50 ‘C; aggiungere, se

Agar 13,6 g necessario, gentamicina solfato corrispondente a
Acqua depurata 1000 ml 20 mg di gentamicina base e versare nelle piastre.
Glicerolo 10,0 ml
Scaldare all'ebollizione per 1 min agitando. Aggiustare Terreno R (terreno lattosio monoidrato solfito)
il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia 7,2 0,2.6 Idrolizzato pancreatico di caseina 5,0 g
Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min. Estratto di lievito 2,5 g
Terreno agarizzato O (agar Baird-Parker) Sodio cloruro 2,5 g
Idrolizzato pancreatico di caseina 10,0 g Lattosio monoidrato 10,0 g
Estratto di carne di manzo 5,0 g Cisteina cloridrato 0,3 g
Estratto di lievito 1,0 g Acqua depurata 1000 ml
Litio cloruro 5,0 g Disciogliere, aggiustare a pH 7,1 0,1 e riempire 8 ml
6

Agar 20,0 g in una provetta di 16 mm 160 mm contenente un pic-

2

Glicina 12,0 g colo tubo di Durham. Sterilizzare in autoclave a

Sodio piruvato 10,0 g 121 ‘C per 15 min e conservare a 4 ‘C.
Acqua depurata 950 ml Prima dell'uso, scaldare il terreno di coltura per 5 min a
Scaldare all'ebollizione per 1 min agitando. Aggiustare b.m. e raffreddare. Aggiungere a ciascuna provetta
il pH in modo che dopo la sterilizzazione sia 6,8 0,2.6 0,5 ml di una soluzione (12 g/l) di sodio metabisolfito R
Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 min, raffred- e 0,5 ml di una soluzione (10 g/l) di ferro(-ico) ammo-
dare a 45-50 ‘C ed aggiungere 10 ml di una soluzione nico citrato, entrambe le soluzioni devono essere prepa-
sterile (10 g/l) di potassio tellurito e 50 ml di emulsione rate di recente e filtrate per membrana (dimensione dei
di rosso d'uovo. pori: 0,45 m).
l

Terreno P (terreno rinforzato per i Clostridi) AGENTI NEUTRALIZZANTI

Estratto di carne di manzo 10,0 g Possono essere usati degli agenti neutralizzanti per neu-
Peptone 10,0 g tralizzare l'attivita© degli agenti antimicrobici. Possono
Estratto di lievito 3,0 g essere aggiunti alla soluzione tamponata di sodio clo-
Amido solubile 1,0 g ruro-peptone a pH 7,0, preferibilmente prima della
Glucosio monoidrato 5,0 g sterilizzazione. Se utilizzati, deve essere dimostrata la
Cisteina cloridrato 0,5 g loro efficacia e la loro non tossicita© nei confronti dei
Sodio cloruro 5,0 g microrganismi.
Sodio acetato 3,0 g
Agar 0,5 g Un fluido neutralizzante tipico ha la seguente composi-
Acqua depurata 1000 ml zione:
Idratare l'agar, disciogliere mediante riscaldamento Polisorbato 80 30 g
all'ebollizione agitando continuamente. Se necessario, Lecitina (uova) 3g
aggiustare il pH in modo che dopo la sterilizzazione Istidina cloridrato 1g
sia circa 6,8. Sterilizzare in autoclave a 121 ‘C per 15 Peptone (carne o caseina) 1g
min. Sodio cloruro 4,3 g
Terreno Q (agar Columbia) Potassio fosfato dibasico 3,6 g
Idrolizzato pancreatico di caseina 10,0 g Sodio fosfato dibasico diidrato 7,2 g
Idrolizzato peptico di carne 5,0 g Acqua depurata 1000 ml
Idrolizzato pancreatico di cuore 3,0 g Sterilizzare in un autoclave a 121 ‘C per 15 min.
Estratto di lievito 5,0 g La concentrazione di polisorbato 80 o di lecitina puo©
Amido di mais 1,0 g essere aumentata se la soluzione ha un'insufficiente
Sodio cloruro 5,0 g capacita© neutralizzante. Alternativamente, possono
Agar (a seconda del potere gelificante) 10,0 - 15,0 g essere aggiunti i neutralizzanti riportati nella Tabella
Acqua depurata 1000 ml 2.6.13.-2.

188
 Endotossine batteriche

inoizircserP
Tabella 2.6.13.-2.- Inattivatori per gli agenti antimicrobici da aggiungere alla soluzione tamponata

ilareneG
sodio cloruro-peptone a pH 7,0
Tipo di agente antimicrobico Inattivatore Concentrazione Commento

composti fenolici Sodio laurilsolfato 4 g/l Aggiungere, dopo la sterilizzazione

Polisorbato 80 e lecitina 30 g/l e 3 g/l della soluzione tamponata,

isilanA id
idoteM
Tuorlo d'uovo 5 ml/l -50 ml/l sodio cloruro-peptone a pH 7,0
composti Sodio tioglicolato 0,5 g/l -5 g/l
organo-mercuriali
composti alogenati Sodio tiosolfato 5 g/l

irotinetnoC
/ ilairetaM
composti ammonici Tuorlo d'uovo 5 ml/l -50 ml/l Aggiungere, dopo la sterilizzazione
quaternari della soluzione tamponata,
sodio cloruro-peptone a pH 7,0
NOTA: In questo capitolo il termine ûprovettaý indica

ivittaeR
tutti i tipi di recipiente, per esempio i pozzetti di una pia-
2.6.14. ENDOTOSSINE BATTERICHE

Il saggio per le endotossine e© usato per rivelare o quan- stra per micro-titolazione.
tificare, mediante un lisato di amebociti di limulo Preparazione della soluzione madre di endotossina stan-

(Limulus polyphemus o Tachypleus tridentatus), le endo- dard

itnemogrA
tossine che derivano dai batteri gram-negativi. Ci sono La soluzione madre di endotossina standard e© prepa-

ilareneG
tre tecniche per questo saggio: la tecnica di gelifica- rata da uno standard di endotossina di riferimento che
zione, basata sulla formazione di un gel; la tecnica tur- e© stato titolato per confronto con lo Standard Interna-
bidimetrica, basata sullo sviluppo di torbidita© dopo lo zionale, per esempio Endotossina standard PBR.
sfaldamento di un substrato endogeno; la tecnica cro- Il contenuto di endotossine e© espresso in Unita© Interna-
mogena, basata sullo sviluppo di colore dopo lo sfalda- zionali (U.I.). L'equivalenza in Unita© Internazionali

eifargonoM

ilareneG
mento di un complesso sintetico peptide-cromogeno. dello Standard Internazionale e© stabilita dall'O.M.S.
In questo capitolo sono descritti i sei metodi seguenti: NOTA: Una Unita© Internazionale (U.I.) di endotossina
Metodo A. Metodo di gelificazione: saggio limite equivale ad una Unita© Endotossinica (U.E.).
Metodo B. Metodo di gelificazione: saggio semi-quan- Per la preparazione e la conservazione della soluzione

ehcituecamraF
madre di endotossina standard seguire le specifiche del

emroF
titativo foglio illustrativo e dell'etichetta.
Metodo C. Metodo cinetico turbidimetrico Preparazione delle soluzioni di endotossina standard

Metodo D. Metodo cinetico cromogeno Dopo mescolamento energico della soluzione madre di
Metodo E. Metodo cromogeno al punto finale endotossina standard preparare le serie di diluizioni

eiretaM

emirP
appropriate di questa soluzione usando acqua per il
Metodo F. Metodo turbidimetrico al punto finale. saggio delle endotossine batteriche (acqua SEB).
Effettuare il saggio con uno dei sei metodi. In caso di Usare tare la
le soluzioni nel piu© breve tempo possibile per evi-
perdita di attivita© a causa dell'adsorbimento.
dubbio o di disputa la decisione finale e© presa sulla base
ehcituecamraF

del metodo A, se non diversamente indicato nella

inoizaraperP

ehcificepS

monografia. Preparazione delle soluzioni in esame

Preparare le soluzioni in esame sciogliendo o diluendo le

Effettuare il saggio in modo da evitare la contamina- sostanze attive o i medicinali usando acqua SEB. Alcune
zione endotossinica. sostanze o preparazioni possono essere disciolte o diluite
piu© appropriatamente in altre soluzioni acquose. Se neces-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Apparecchiatura
sario, aggiustare il pH della soluzione in esame (o della
Depirogenaretuttalavetreriaeglialtriapparecchistabilial diluizione) in modo cheilpH della miscela del lisato e della
caloreinunastufaadariacaldausandounmetodoconvali- soluzioneinesamesiacompresonell'intervallodipHspeci-
dato. Generalmente, la durata e la temperatura minime ficato dal produttore del lisato. Questo generalmente si
sono 30 min a 250 ‘C. Se si utilizzano apparecchi di pla- applica a un prodotto con un pH nell'intervallo tra
stica, come piastre di micro-titolazione o puntali per 6,0 e 8,0. Il pH puo© essere aggiustato usando acidi, basi o
pipette automatiche, usare apparecchi che sono esenti da un tampone appropriato, come raccomandato dal produt-
ecidnI

endotossine rivelabili e da effetti interferenti con il saggio. tore del lisato. Gli acidi e le basi possono essere preparati

189
Endotossine batteriche

da concentrati o solidi usando acqua SEB in recipienti U.I./ml, su una serie di soluzioni preparate in 4 ripeti-
esenti da endotossine rivelabili. I tamponi devono essere zioni. La verifica della sensibilita© del lisato si effettua
convalidaticomeesentidaendotossinerivelabiliedafattori quando si usa un nuovo lotto di lisato o quando vi e©
interferenti. un cambiamento nelle condizioni sperimentali che pos-
sono influenzare la riuscita del saggio.
Determinazione della Massima Diluizione Valida
Preparare le soluzioni standard con almeno quattro con-
La Massima Diluizione Valida (MDV) e© la massima centrazioni equivalenti a 2 , , 0,5 e 0,25 diluendo la
diluizione ammessa di un campione alla quale puo©
k k k k

essere determinato il limite endotossinico. Determinare soluzione madre di endotossina standard con acqua SEB.
la MDV mediante l'espressione seguente: In ciascuna provetta mescolare un volume della solu-
zione del lisato con un volume uguale di una delle solu-
MDV limite endotossinico x concentrazione della soluzione in esame zioni standard (per es. aliquote di 0,1 ml). Quando si
ˆ
k usano flaconcini di saggio singoli o fiale contenenti
Limite endotossinico: il limite di endotossine per le lisato liofilizzato, aggiungere le soluzioni direttamente
sostanze attive somministrate per via parenterale, defi- al flaconcino o alle fiale. Incubare la miscela di rea-
nito in base alla dose, e© uguale a zione per un periodo costante in accordo con le racco-
K mandazioni del produttore del lisato (generalmente
37 1 ‘C per 60 2 min) evitando le vibrazioni. Esa-
M
6 6

minare l'integrita© del gel: per le provette, prelevare a

turno ciascuna provetta direttamente dall'incubatore e
K = dose pirogenica soglia di endotossina per chilo- capovolgerla di circa 180‘ con un movimento dolce.
grammo di massa corporea e per ora, Registrare il risultato come positivo se si e© formato un
gel compatto che non si muove per capovolgimento. Il
M = dose massima raccomandata di prodotto per chi- risultato e© negativo se non si e© formato un gel compatto.
logrammo di massa corporea e per ora. Il saggio e© valido solo se le soluzioni standard a concen-
Il limite endotossinico per le sostanze attive sommini- trazione piu© bassa presentano un risultato negativo in
strate per via parenterale e© specificato nelle monografie tutte le ripetizioni.
in unita© , quali U.I./ml, U.I./mg, U.I./Unita© di attivita© Il punto finale e© l'ultimo risultato positivo di una serie
biologica ecc. di concentrazioni decrescenti di endotossina. Calcolare
il valore medio dei logaritmi delle concentrazioni al
Concentrazione della soluzione in esame: punto finale e poi l'antilogaritmo del valore medio
- in mg/ml, se il limite endotossinico e© specificato usando l'espressione seguente:
rispetto alla massa (U.I./mg), P
Media geometrica della concentrazione al punto finale antilog f e
- in Unita© /ml, se il limite endotossinico e© specificato da ˆ

unita© di attivita© biologica (U.I./Unita© ), P

- in ml/ml, se il limite endotossinico e© specificato e= sommatoria del log delle concentrazioni al
rispetto al volume (U.I./ml). punto finale della serie di diluizioni usate,
= la sensibilita© del lisato dichiarata nella tecnica di f = numero di ripetizioni.
k

gelificazione (U.I./ml) o il punto piu© basso usato La media geometrica della concentrazione al punto
nella curva di taratura nelle tecniche turbidime- finale e© la sensibilita© misurata della soluzione del lisato
triche o cromogene. (U.I./ml). Se questa non e© inferiore a 0,5 e non e© supe-
k

riore a 2 , la sensibilita© dichiarata e© confermata ed e©

k

TECNICA DI GELIFICAZIONE (METODI A e B) usata nei saggi effettuati con questo lisato.
La tecnica di gelificazione permette la rivelazione o la
quantificazione delle endotossine e si basa sulla coagu- (ii) Saggio per i fattori interferenti

lazione del lisato in presenza di endotossine. La con-Preparare le soluzioni A, B, C e D come indicato nella
tabella 2.6.14.-1 ed usare le soluzioni in esame ad una
centrazione di endotossine richiesta per la coagulazione
del lisato in condizioni standardizzate rappresenta ladiluizione inferiore alla MDV, non contenenti endotos-
sine rivelabili, operando come descritto in 1. Saggi Preli-
sensibilita© dichiarata del lisato. Per assicurare sia la
minari, I) Verifica della sensibilita© dichiarata del lisato.
precisione che la validita© del saggio, verificare la sensi-
bilita© dichiarata del lisato e effettuare il saggio per i fat-
La media geometrica delle concentrazioni al punto
tori interferenti come descritto in 1. Saggi preliminari.
finale delle soluzioni B e C sono determinate usando
1. SAGGI PRELIMINARI l'espressione descritta in 1. Saggi Preliminari, I) Verifica
della sensibilita© dichiarata del lisato.
(i) Verifica della sensibilita© dichiarata del lisato
Il saggio per i fattori interferenti si ripete quando sono
Prima dell'uso nel saggio, verificare la sensibilita© apportati cambiamenti alle condizioni sperimentali
dichiarata della soluzione del lisato, espressa in che possono influenzare il risultato del saggio.
k

190
 Endotossine batteriche

inoizircserP
Tabella 2.6.14.-1.

ilareneG
Concentrazione di endotossina/
Fattore di Concentrazione iniziale Numero di
Soluzione Soluzione alla quale e© aggiunta Diluente
diluizione di endotossina ripetizioni
l'endotossina

isilanA id
idoteM
A Nessuna/Soluzione ö ö ö 4
in esame
B 2 /Soluzione in esame
k Soluzione in esame 1 2k 4
2 1 4

irotinetnoC
/ ilairetaM
k

4 0,5k 4
8 0,25 k 4
C 2 /Acqua SEB
k Acqua SEB 1 2k 2
2 1k 2
4 0,5 2

ivittaeR
k

8 0,25 k 2
D Nessuna/acqua SEB ö ö ö 2

itnemogrA
Soluzione A = soluzione della preparazione in esame che e© esente da endotossine rivelabili,

ilareneG
Soluzione B = saggio per l'interferenza,
Soluzione C = controllo della sensibilita© dichiarata del lisato,
Soluzione D = controllo negativo (acqua SEB).

eifargonoM
Il saggio e© valido solo se nessuna delle ripetizioni delle L'interferenza puo© essere superata mediante un tratta-

ilareneG
soluzioni A e D da© una reazione e se il risultato della mento appropriato come la filtrazione, la neutralizza-
soluzione C conferma la sensibilita© dichiarata del lisato. zione, la dialisi o il trattamento con calore. Per stabilire
se il trattamento scelto ha effettivamente eliminato l'in-
Se la sensibilita© del lisato determinata con la soluzione terferenza senza perdita di endotossine, ripetere il sag-

ehcituecamraF
B non e© inferiore a 0,5 e non e© superiore a 2 , la solu- gio per evidenziare i fattori di interferenza usando la

emroF
zione in esame non contiene fattori interferenti nelle preparazione in esame alla quale e© stata aggiunta l'en-
k k

condizioni sperimentali usate. Altrimenti la soluzione dotossina standard, dopo aver sottoposto la miscela al
interferisce con il saggio. trattamento considerato.
Se la preparazione in esame interferisce con il saggio ad 2. SAGGIO LIMITE (METODO A)
eiretaM

emirP
una concentrazione inferiore alla MDV, ripetere il sag-
gio per i fattori interferenti usando una diluizione piu©
(i) Procedura

elevata ma non superiore alla MDV. L'uso di un lisato Preparare le soluzioni A, B, C e D come indicato nella
piu© sensibile permette di usare una diluizione piu© ele- tabella 2.6.14.-2 ed effettuare il saggio su queste solu-
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

vata della preparazione in esame e questo puo© contri- zioni seguendo la procedura descritta in 1. Saggi Preli-
buire all'eliminazione dell'interferenza. minari, I) Verifica della sensibilita© dichiarata del lisato.
Tabella 2.6.14.-2.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Concentrazione di endotossina/Soluzione
Soluzione Numero di ripetizioni
alla quale e© stata aggiunta l'endotossina

A Nessuna/Soluzione in esame diluita 2

B 2 /Soluzione in esame diluita
k 2
C 2 /Acqua SEB 2
ecidnI

D Nessuna/Acqua SEB 2

191
Endotossine batteriche

Preparare la soluzione A e la soluzione B (controllo - essa non soddisfa al saggio se la preparazione in

positivo del prodotto) usando una diluizione non supe- esame e© diluita alla MDV;
riore alla MDV e trattare come descritto in 1. Saggi pre- - il saggio si ripete ad una diluizione piu© elevata ma
liminari II) Saggio per i fattori interferenti. Le soluzioni non superiore alla MDV se la preparazione in esame
B e C (controlli positivi) contengono l'endotossina stan- e© diluita ad una diluizione inferiore alla MDV.
dard ad una concentrazione corrispondente al doppio
della sensibilita© dichiarata del lisato. La soluzione D Ripetere il saggio se si ottiene un risultato positivo per
(controllo negativo) e© costituita da acqua SEB. un esemplare della soluzione A ed un risultato negativo
per l'altro esemplare. La preparazione in esame soddi-
sfa al saggio se, nella ripetizione del saggio, si ottiene
(ii) Interpretazione
un risultato negativo per entrambi gli esemplari della
Il saggio e© valido solo se entrambi le ripetizioni delle soluzione A.
due soluzioni B e C di controllo positivo sono positive 3. SAGGIO SEMI-QUANTITATIVO (METODO B)
e quelle della soluzione D di controllo negativo sono
negative. (i) Procedura

La preparazione in esame soddisfa al saggio se si Ilzione saggio quantifica le endotossine batteriche nella solu-
in esame mediante titolazione al punto finale.
ottiene un risultato negativo per entrambe le ripetizioni Preparare le soluzioni A, B, C e D come indicato nella
della soluzione A. tabella 2.6.14.-3 ed esaminare queste soluzioni secondo
Quando si ottiene un risultato positivo per entrambi gli la procedura descritta in 1. Saggi preliminari I) Con-
esemplari della soluzione A: ferma della sensibilita© dichiarata del lisato.
Tabella 2.6.14.-3.
Concentrazione di endotossina/
Diluizione Numero di
Soluzione Soluzione alla quale e© aggiunta Fattore di diluizione Concentrazione iniziale
dell'endotossina ripetizioni
l'endotossina

A Nessuna/Soluzione Acqua SEB 1 ö 2

in esame 2 2
4 2
8 2

B 2 /Soluzione in esame
k ö 1 2 k 2

C 2 /Acqua SEB
k Acqua SEB 1 2 k 2
2 1 k 2
4 0,5 k 2
8 0,25 k 2

D Nessuna/Acqua SEB ö ö ö 2

Soluzione A = soluzione in esame, ad una diluizione non superiore alla MDV, con la quale e© stato effettuato il saggio per i fattori interferenti.
Le diluizioni successive della soluzione in esame non devono essere superiori alla MDV. Usare acqua SEB per allestire due
serie di diluizioni di 1, 1/2, 1/4 e 1/8 rispetto alla diluizione con la quale e© stato effettuato il saggio per i fattori interferenti.
Se del caso possono essere usate altre diluizioni.
Soluzione B = soluzione A contenente l'endotossina standard ad una concentrazione 2 (controllo positivo del prodotto),
k

Soluzione C = due serie di acqua SEB contenente l'endotossina standard ad una concentrazione di 2 , , 0,5 e 0,25 ,
k k k k

Soluzione D = acqua SEB (controllo negativo).

192
 Endotossine batteriche

inoizircserP
Il saggio cinetico turbidimetrico (Metodo C) e© un

ilareneG
(ii) Calcoli ed interpretazione

metodo per misurare il tempo (tempo di inizio) necessa-

Il saggio e© valido solo se si riscontrano le tre condizioni rio alla miscela di reazione per raggiungere l'assor-
seguenti: banza predeterminata, o l'entita© della torbidita© svilup-
a) entrambi gli esemplari della soluzione D (controllo pata.

isilanA id
negativo) sono negativi,

idoteM
b) entrambi gli esemplari della soluzione B (controllo Ilcomandatasaggio si effettua alla temperatura di incubazione rac-
dal produttore del lisato (generalmente
positivo del prodotto) sono positivi, 37 1 ‘C).
6

c) la media geometrica della concentrazione della solu-

zione C al punto finale e© compresa tra 0,5 e 2 .

irotinetnoC
/ ilairetaM
k k

Per determinare la concentrazione di endotossina della 2. TECNICA CROMOGENA (METODI D ed E)

soluzione A, calcolare la concentrazione al punto finale
per ciascuna serie di ripetizioni moltiplicando per Questa tecnica e© usata per misurare la quantita© di cro-
k

ciascun fattore di diluizione al punto finale. moforo rilasciato da un appropriato peptide cromo-
La concentrazione di endotossina nella soluzione in geno nella reazione dell'endotossina con il lisato. A

ivittaeR
esame e© la media geometrica della concentrazione al seconda del principio di saggio impiegato questa tec-
punto finale delle due serie di diluizione (vedere l'e- nica e© classificata come saggio cromogeno al punto
spressione riportata in 1.Saggi preliminari, I) Conferma finale o saggio cromogeno-cinetico.
della sensibilita© dichiarata del lisato). Se il saggio e©

itnemogrA
effettuato con una soluzione in esame diluita, calcolare Il saggio cromogeno al punto finale (Metodo E) e©

ilareneG
la concentrazione di endotossina nella soluzione ini- basato sulla relazione quantitativa tra la concentra-
ziale moltiplicando il risultato per il fattore di dilui- zione di endotossina e la quantita© di cromoforo rila-
zione. sciata alla fine del periodo di incubazione.
Se nessuna delle diluizioni della soluzione in esame e© Il saggio cromogeno-cinetico (Metodo D) misura il

eifargonoM

ilareneG
positiva in un saggio valido, registrare la concentra- tempo (tempo di inizio) necessario alla miscela di rea-
zione di endotossina come inferiore a (o, se e© sottopo- zione per raggiungere l'assorbanza predeterminata, o
k

sto a saggio un campione diluito, come inferiore a l'entita© del colore sviluppato.
k x il fattore di diluizione piu© basso del campione). Se
tutte le diluizioni sono positive, la concentrazione di Il saggio si effettua alla temperatura di incubazione

ehcituecamraF
endotossina e© registrata come uguale o superiore al raccomandata dal produttore del lisato (generalmente

emroF
maggior fattore di diluizione moltiplicato per (per 37 1 ‘C).
k 6

es. nella tabella 2.6.14.-3, il fattore di diluizione iniziale

x 8 x ).
k

La preparazione soddisfa i requisiti del saggio se la con- 3. SAGGI PRELIMINARI

centrazione di endotossina e© inferiore a quella specifi-
eiretaM

emirP
cata nella singola monografia. Per assicurare la precisione o la validita© dei saggi turbi-
TECNICHE FOTOMETRICHE (METODI C, D, E dimetrici tuati per
o cromogeni, i saggi preliminari sono effet-
assicurare che i criteri della curva di taratura
ed F)
ehcituecamraF
inoizaraperP

siano soddisfatti e che la soluzione in esame non inter-

ehcificepS

1. TECNICA TURBIDIMETRICA (METODI C e F) ferisca con il saggio.

Questa tecnica e© un saggio fotometrico per misurare La convalida del metodo di saggio e© richiesta quando si
l'aumento della torbidita© . Questa tecnica, sulla base apporta un qualsiasi cambiamento alle condizioni spe-
ehcitapoemO

del principio di saggio impiegato, e© classificata come rimentali che possono influenzare il risultato del sag-
inoizaraperP

un saggio di torbidita© al punto finale o un saggio cine- gio.

tico-turbidimetrico.
Il saggio turbidimetrico al punto finale (Metodo F) e©
(i) Sicurezza dei criteri per la curva di taratura

basato sulla relazione quantitativa tra la concentra- Usare la soluzione di endotossina standard per prepa-
zione di endotossina e la torbidita© (assorbanza o tra- rare almeno tre soluzioni con concentrazioni diverse di
ecidnI

smissione) della miscela di reazione alla fine del endotossine per costruire la curva di taratura. Eseguire
periodo di incubazione. il saggio usando almeno tre ripetizioni di ciascuna solu-

193
Endotossine batteriche

zione di endotossina standard come raccomandato dal zione in esame e© compresa tra il 50-200 per cento della
produttore del lisato (rapporti tra i volumi, tempo di concentrazione nota di endotossina aggiunta, dopo sot-
incubazione, temperatura, pH ecc..). trazione della endotossina rivelata nella soluzione alla
Se nei metodi cinetici l'intervallo desiderato e© superiore quale non e© stata aggiunta l'endotossina.
a 2 log, devono essere preparate ulteriori soluzioni Quando il recupero di endotossina non e© compreso tra
standard per comprendere ciascun aumento logarit- gli intervalli specificati, i fattori interferenti devono
mico nell'intervallo della curva di taratura. essere eliminati come descritto nella sezione Tecnica di
gelificazione al paragrafo 1. Saggi preliminari, II) Sag-
Il valore assoluto del coefficiente di correlazione, r , j j gio per i fattori interferenti. L'efficienza del tratta-
deve essere maggiore o uguale a 0,980 per l'intervallo mento si verifica ripetendo il saggio per i fattori interfe-
di concentrazioni di endotossine indicato dal produt- renti.
tore del lisato.
4. SAGGI
(ii) Saggio per i fattori interferenti (i) Procedura

Selezionare una concentrazione di endotossina alla Seguire la procedura descritta in 3. Saggi preliminari,
meta© o vicina alla meta© della curva di taratura. II) Saggio per i fattori interferenti.
Preparare le soluzioni A, B, C e D come indicato nella
Tabella 2.6.14.-4. Effettuare il saggio su almeno due (ii) Calcoli

esemplari doppi di queste soluzioni come raccoman- Calcolare la concentrazione di endotossina di ciascuna
dato dal produttore del lisato (volume della soluzione ripetizione della soluzione A usando la curva di tara-
in esame e soluzione del lisato, rapporto tra il volume tura costruita con le serie di controlli positivi della solu-
della soluzione in esame e quello della soluzione in zione C.
esame, tempo di incubazione, ecc.). Il saggio e© valido solo se sono soddisfatti i tre requisiti
Calcolare il recupero medio dell'endotossina aggiunta seguenti:
sottraendo la concentrazione media di endotossina a) il risultato ottenuto con la soluzione D (controllo
della soluzione (se presente) da quella della soluzione negativo) non supera il limite del valore richiesto per
contenente l'endotossina aggiunta. il bianco nella descrizione del lisato impiegato,
b) i risultati ottenuti con le serie di controlli positivi,
La soluzione in esame e© considerata come esente da fat- soluzione C, soddisfa ai requisiti per la convalida
tori interferenti se, nelle condizioni del saggio, la con- definiti in 3. Saggi preliminari, I) Sicurezza dei criteri
centrazione misurata di endotossina aggiunta alla solu- per la curva di taratura,

Tabella 2.6.14.-4
Soluzione alla quale e© stata
Soluzione Concentrazione di endotossina Numero di ripetizioni
aggiunta l'endotossina

A Nessuna Soluzione in esame Non meno di 2

B Concentrazione media della Soluzione in esame Non meno di 2
curva di taratura
C Al massimo 3 concentrazioni Acqua SEB Ciascuna concentrazione
(la concentrazione piu© bassa e© ) k non meno di 2
D Nessuna Acqua SEB non meno di 2
Soluzione A = soluzione in esame che puo© essere diluita ad una concentrazione non superiore alla MDV,
Soluzione B = preparazione in esame alla stessa diluizione della soluzione A, contenente l'endotossina aggiunta ad una concentrazione
uguale o vicina alla meta© della curva di taratura,
Soluzione C = soluzione di endotossina standard alla concentrazione usata nella convalida del metodo come descritto in 3. Saggi preliminari,
I) Sicurezza dei criteri per la curva di taratura (controlli positivi),
Soluzione D = acqua SEB (controllo negativo).

194
 Endotossine batteriche

inoizircserP
c) il recupero di endotossina, calcolata dalla concentra- pirogeni che hanno una struttura differente, la conclu-

ilareneG
zione di endotossina trovata nella soluzione B dopo sione che l'assenza di endotossine batteriche nel pro-
sottrazione della concentrazione di endotossina tro- dotto implichi l'assenza di componenti pirogene e© gene-
vata nella soluzione A, e© compreso nell'intervallo del ralmente giustificata, purchë possa essere esclusa la
50-200 per cento. presenza di sostanze pirogene diverse dalle endotossine.

isilanA id
La presenza di endotossine in un prodotto puo© essere

idoteM
(iii) Interpretazione
mascherata dalla esistenza di fattori interferenti nella
La preparazione in esame soddisfa al saggio se la con- reazione tra endotossine ed il lisato di amebociti.
centrazione media di endotossina degli esemplari della Quindi l'analista, che desidera sostituire il saggio dei
soluzione A, dopo correzione per diluizione e concen- pirogeni su coniglio, richiesto in una monografia della

irotinetnoC
trazione, non e© inferiore al limite endotossinico del pro-

/ ilairetaM
farmacopea, con un saggio delle endotossine batteri-
dotto. che, deve aver dimostrato che questo saggio puo© essere
effettuato in modo soddisfacente sul prodotto in que-
5. REATTIVI stione; questo puo© implicare una procedura per l'elimi-
(i) Soluzione del lisato nazione dei fattori di interferenza.
Disciogliere, agitando dolcemente, il lisato di amebociti

ivittaeR
Come indicato nel saggio delle endotossine, prima che
in acqua SEB o in un tampone, come raccomandato un saggio su un campione possa essere considerato
dal produttore di lisato. Conservare il lisato ricosti- valido devono essere disponibili informazioni sugli
tuito, raffreddato o congelato, come indicato dal pro- aspetti seguenti.
duttore. 1.1. Si deve stabilire l'idoneita© del materiale da usare nel

itnemogrA
ilareneG
saggio. Si deve assicurare l'assenza di endotossine nel-
l'acqua SEB e negli altri reattivi e si deve verificare la
(ii) Lisato di amebociti

Il lisato di amebociti e© un prodotto liofilizzato ottenuto sensibilita© del lisato di amebociti dichiarata dal produt-
dal lisato di amebociti di limulo (Limulus polyphemus o tore.
Tachypleus tridentatus). Questo reattivo si riferisce solo

eifargonoM
al prodotto fabbricato in accordo con i regolamenti del- 1.2. Poichë il prodotto da esaminare puo© interferire con

ilareneG
l'autorita© competente. il saggio, la sensibilita© del lisato di amebociti si deter-
Il lisato di amebociti reagisce, oltre che con le endotos- mina in presenza e in assenza del prodotto in esame.
sine, con alcuni -glucani. Sono disponibili prepara- Non vi deve essere alcuna differenza significativa tra i
due valori di sensibilita© .
b

zioni di lisato di amebociti che non reagiscono con i

ehcituecamraF
glucani; esse sono preparate eliminando dal lisato di Il saggio delle endotossine batteriche (2.6.14) indica i

emroF
amebociti il fattore G che reagisce con i glucani, o ini- metodi per eliminare i fattori di interferenza; in caso di
bendo il sistema di reazione del fattore G del lisato di interferenza deve essere effettuato, dopo questo saggio,
amebociti. Queste preparazioni possono essere usate un altro saggio per verificare se l'interferenza sia stata
per il saggio delle endotossine in presenza di glucani. effettivamente neutralizzata o eliminata.

eiretaM
Questa appendice espone le ragioni dei requisiti del sag-

emirP
(iii) Acqua SEB (acqua per il saggio delle endotossine

batteriche) gio delle endotossine batteriche e poi tratta la lettura e

L'acqua SEB e© acqua per preparazioni iniettabili R o l'interpretazione dei risultati.
acqua prodotta con altre procedure che hanno dimo- La sostituzione del saggio dei pirogeni su coniglio,
ehcituecamraF

strato di non reagire con il lisato impiegato al limite di

inoizaraperP

richiesto da una monografia della farmacopea, con un

ehcificepS

rivelazione del reattivo. saggio con il lisato di amebociti implica l'uso di un

La sezione seguente si riporta solo come informazione. metodo di analisi alternativo e quindi richiede la conva-
lida; alcune linee guida sulla procedura sono riportate
SAGGIO DELLE ENDOTOSSINE BATTERICHE: nella sezione 11.
LINEE GUIDA
ehcitapoemO
inoizaraperP

1. INTRODUZIONE Il metodo di riferimento per le endotossine batteriche e©

indicato nella monografia di un dato prodotto; se non
Le endotossine prodotte da batteri gram-negativi sono e© indicato alcun metodo, il metodo di riferimento e© il
la causa piu© comune delle reazioni tossiche attribuite metodo A. Se si usa un metodo diverso da quello di rife-
alla contaminazione dei prodotti farmaceutici con piro- rimento, l'analista deve dimostrare che il metodo e©
geni; la loro attivita© pirogena e© piu© alta di quella di appropriato per questo prodotto e che fornisce un risul-
ecidnI

molte altre sostanze pirogene. Queste endotossine sono tato concordante con quello ottenuto con il metodo di
lipopolisaccaridi. Benchë esista un piccolo numero di riferimento (vedi anche la sezione 13).

195
Endotossine batteriche

2. METODO tossina e© di molto superiore ad esso ed il prodotto non

soddisfa al saggio, poichë, trattandosi di un saggio del
L'aggiunta di endotossine al lisato di amebociti puo© tipo ûtutto o nullaý, e© impossibile differenziare tra una
provocare un intorbidamento, una precipitazione o concentrazione esattamente uguale alla concentrazione
una gelificazione; nella farmacopea solo il metodo di soglia ed una piu© alta. Solo quando non si verifica una
gelificazione e© usato come criterio di valutazione nel gelificazione l'analista puo© concludere che la concentra-
primo tipo di saggio per le endotossine batteriche. Il zione di endotossina non supera la concentrazione
vantaggio e© la semplicita© di poter decidere se il pro- soglia.
dotto in esame soddisfa o meno al saggio in base all'as- Per i prodotti allo stato solido, questa concentrazione
senza o alla presenza di gelificazione visibile ad occhio soglia di endotossine per unita© di massa o per Unita©
nudo. I metodi quantitativi descritti, come i metodi C, Internazionale (U.I.) del prodotto deve essere trasfor-
D, E ed F, sono stati sviluppati successivamente; essi mata in una concentrazione di endotossine per millili-
richiedono una maggiore strumentazione, ma sono piu© tro di soluzione da sottoporre a saggio, poichë il saggio
facili da automatizzare per il controllo di routine di un puo© essere effettuato solo su una soluzione. Il caso di
grande numero di campioni dello stesso prodotto. prodotti che si presentano sempre allo stato liquido
Le endotossine possono essere adsorbite sulla superfi- (come i liquidi per infusione) e© discusso piu© avanti.
cie delle provette o delle pipette costruite con certi tipi Limite di endotossina: il limite di endotossina per le
di plastica o di vetro. Interferenze possono essere sostanze attive somministrate per via parenterale, defi-
dovute anche al rilascio di sostanze dai materiali pla- nito sulla base della dose, e© uguale a
stici. I materiali usati devono quindi essere verificati; i K
successivi lotti di provette o di pipette possono avere M
una composizione leggermente differente e quindi si
consiglia all'analista di ripetere questi saggi ogni volta K = dose soglia di endotossina avente un effetto piro-
che si usano nuovi lotti di materiali. geno per chilogrammo di massa corporea e per
La decisione di usare il saggio delle endotossine batteri- ora,
che come saggio limite implica, prima di tutto, che sia M = dose massima raccomandata di prodotto per chi-
definita una concentrazione limite di endotossina per il logrammo di massa corporea e per ora.
prodotto da sottoporre a saggio e, in secondo luogo, Il limite di endotossina dipende dal prodotto e dalla sua
che l'obiettivo del saggio sia di stabilire se la concentra- via di somministrazione ed e© indicato nella monografia.
zione di endotossina nel prodotto in esame e© al di sopra Valori di K sono riportati nella tabella 2.6.14.-5.
o al di sotto di questa soglia. I metodi quantitativi C,
D, E ed F permettono di determinare la concentrazione
di endotossine nel campione in esame ma, per la rispon- Tabella 2.6.14.-5.
denza alla farmacopea e nel controllo di qualita© di rou-
tine, la questione finale e© se questa concentrazione K (U.I. di endotossina per chilogrammo

supera o no un limite definito.

Via di somministrazione
di massa corporea e per ora)

Endovenosa 5,0
Nello stabilire una concentrazione limite di endotossina
per il prodotto da sottoporre a saggio, si deve prestare Endovenosa, per 2,5
la dovuta attenzione alla dose del prodotto: la soglia radiofarmaci
dovrebbe essere tale da assicurare che la concentra- Intratecale 0,2
zione di endotossina nel prodotto rimanga nel tempo,
al di sotto di questa soglia, anche quando la dose mas-
sima per ora, somministrata attraverso la via di sommi- Quale diluizione del prodotto deve essere usata nel sag-
nistrazione prevista, non contenga endotossine in gio per ottenere la massima sicurezza che un risultato
quantita© sufficienti a causare una reazione tossica. negativo significhi che la concentrazione di endotossina
del prodotto e© inferiore al limite di endotossina e che
Quando la concentrazione di endotossina nel prodotto un risultato positivo significa che il lisato rivela una
e© esattamente uguale al valore limite, avviene la gelifi- concentrazione di endotossina uguale o superiore al
cazione, come nel caso in cui la concentrazione di endo- limite di endotossina? Questa diluizione dipende dal

196
 Endotossine batteriche

inoizircserP
limite di endotossina e dalla sensibilita© del lisato: e© defi- = 0,4 U.I. di endotossina per millilitro.

ilareneG
k

nita come Massima Diluizione Valida e il suo valore

puo© essere calcolato come segue: MDV 5 15 50 0;14 41; 67
ˆ
2
2 ˆ

MDV limite di endotossina concentrazione della soluzione in esame

Un espediente per i saggi di routine su questo prodotto,
2

isilanA id
ˆ

idoteM
puo© essere la diluizione di 1 ml della soluzione in esame
k

Concentrazione della soluzione in esame: a 20 ml (MDV/2 arrotondato al numero intero imme-

diatamente inferiore). Comunque se questo saggio e©
^ in mg/ml se il limite di endotossina e© specificato positivo, l'analista deve diluire 1 ml a 41,67 ml e ripetere
il saggio. Sara© necessario preparare una diluizione

irotinetnoC
/ ilairetaM
rispetto alla massa (U.I./mg), 1 : 41,67 anche quando il saggio viene eseguito per
^ in Unita© /ml se il limite di endotossina e© specificato risolvere una disputa.
rispetto alle unita© di attivita© biologica (U.I./Unita© ),
^ in ml/ml se il limite di endotossina e© specificato 3. MATERIALE DI RIFERIMENTO
rispetto al volume (U.I./ml).

ivittaeR
= la sensibilita© del lisato indicata nella tecnica di L'Endotossina standard PBR e© destinata all'uso come
gelificazione (U.I./ml) o il punto piu© basso usato preparazione di riferimento. Essa e© stata titolata in con-
k

nella curva di taratura della tecnica turbidime- fronto con lo Standard Internazionale di Endotossina
trica o della tecnica cromogena. dell'O.M.S. e la sua attivita© biologica e© espressa in

itnemogrA
ilareneG
Unita© Internazionali di endotossina per fiala. L'Unita©
Quando il valore della massima diluizione valida non e© Internazionale di endotossina e© definita come l'attivita©
un numero intero, per i controlli di routine puo© essere specifica di una massa definita dello Standard Interna-
usato un appropriato numero intero piu© piccolo della zionale.
MDV (il che significa preparare una soluzione del pro-

eifargonoM
dotto meno diluita di quanto indichi la MDV). In que- parazionePer i controlli di routine puo© essere usata un'altra pre-

ilareneG
sto caso un risultato negativo indica che la concentra- di endotossina purchë sia stata titolata in
zione e© inferiore al valore limite. D'altra parte il saggio confronto con lo Standard Internazionale di Endotos-
puo© essere positivo quando la concentrazione di endo- sina o la PBR e la sua attivita© biologica sia espressa in
tossina del prodotto e© inferiore al limite di endotossina, Unita© Internazionali di endotossina.

ehcituecamraF
ma comunque alta, in modo che la reazione con il lisato

emroF
produce gelificazione. Quindi, quando un saggio con NOTA: una Unita© Internazionale (U.I.) di endotossina e©
questo ûappropriatoý fattore di diluizione e© positivo, il uguale ad una Unita Endotossinica (U.E.)
prodotto deve essere diluito alla MDV ed il saggio deve
essere ripetuto. In qualsiasi caso di dubbio o di disputa 4. ACQUA SEB
deve essere usata la MDV.
eiretaM

emirP
Questo sottolinea l'importanza della verifica della sen- La verifica dell'assenza di endotossine in questo reat-
sibilita© del lisato. tivo mediante una tecnica derivata dal saggio dei piro-
geni su coniglio e© stata abbandonata per ragioni prati-
ehcituecamraF

che e teoriche:
inoizaraperP

ehcificepS

Esempio
4.1 il saggio sul coniglio non e© abbastanza sensibile per
Sottoporre a saggio una soluzione di fenitoina sodica rivelare le endotossine nell'acqua SEB destinata ai
contenente 50 mg/ml (destinata alla somministrazione saggi sui prodotti con un bassissimo limite di endo-
endovenosa). Determinare la MDV date le seguenti tossine;
ehcitapoemO
inoizaraperP

variabili: 4.2 la precisione relativamente bassa della risposta

M = dose umana massima = 15 mg per chilogrammo basata sull'innalzamento della temperatura del
di massa corporea e per ora, coniglio richiede molte ripetizioni del saggio sul
coniglio;
c = 50 mg/ml, 4.3 i termini ûpirogeniý ed ûendotossineý si riferiscono
ecidnI

K = 5 U.I. di endotossina per chilogrammo di massa a gruppi di entita© che non coincidono completa-
corporea e per ora, mente.

197
Endotossine batteriche

Nel testo del saggio delle endotossine batteriche e© ripor- L'approccio classico sarebbe stato quello di determi-
tato che si possono usare metodi diversi dalla distilla- nare la sensibilita© del lisato in presenza e in assenza del
zione tripla per preparare l'acqua SEB. L'osmosi prodotto, calcolando in ciascun caso la media del loga-
inversa e© stata usata con buoni risultati; alcuni analisti ritmo dei fattori di diluizione, e di verificare la diffe-
preferiscono distillare l'acqua piu© di tre volte. Qualun- renza tra le due medie con il saggio t di Student.
que sia il metodo usato, il prodotto risultante deve Il saggio per i fattori interferenti nei metodi di gelifica-
essere esente da endotossine rivelabili. zione A e B richiede l'uso di campioni del prodotto nei
quali non siano rivelabili endotossine. Questo rappre-
5. pH DELLA MISCELA senta un problema teorico quando si deve sottoporre a
saggio un prodotto completamente nuovo. Quindi un
Nel saggio delle endotossine batteriche si verifica una diverso approccio e© stato adottato per i metodi quanti-
gelificazione ottimale per una miscela a pH 6,0-8,0. tativi C, D, E ed F.
Comunque, l'aggiunta del lisato al campione puo© pro-
vocare in una diminuzione del pH.
8. ELIMINAZIONE DEI FATTORI INTERFE-
RENTI
6. CONVALIDA DEL LISATO
Le procedure per eliminare i fattori interferenti non
E' importante seguire le istruzioni del produttore per devono aumentare o ridurre (per es. per adsorbimento)
preparare le soluzioni di lisato. la quantita© di endotossine nel prodotto in esame. La
Nei metodi di gelificazione A e B i fattori di diluizione via corretta per verificare questo e© di applicare le proce-
al punto finale che forniscono un risultato positivo dure ad un campione ûarricchitoý del prodotto, cioe© a
sono convertiti in logaritmi. Il motivo e© che se si riporta un campione al quale e© stata aggiunta una quantita©
in un grafico la distribuzione della frequenza di questi nota di endotossina, e quindi di misurare l'endotossina
valori logaritmici si ottiene una curva molto piu© simile recuperata.
ad una curva normale della distribuzione che alla distri- Metodi C e D. Se la natura del prodotto da analizzare
buzione della frequenza dei fattori di diluizione stessi; presenta un'interferenza che non puo© essere eliminata
infatti e© cos|© tanto simile che si accetta di usare come mediante i metodi classici, e© possibile realizzare la
modello matematico la distribuzione normale della fre- curva di taratura sullo stesso tipo di prodotto reso
quenza e di calcolare i limiti fiduciali con il saggio t di esente dalle endotossine mediante un appropriato trat-
Student. tamento o per diluizione del prodotto. Il saggio delle
endotossine e© effettuato mediante confronto con questa
7. SAGGIO PRELIMINARE PER I FATTORI curva di taratura.
INTERFERENTI L'ultrafiltrazione con filtri a membrana asimmetrica in
Alcuni prodotti non possono essere sottoposti diretta- cellulosa triacetato descritta nel saggio si e© dimostrata
mente a saggio per evidenziare la presenza di endotos- adeguata nella maggioranza dei casi. I filtri devono
sine perchë non sono miscibili con i reattivi, perchë il circostanze i derivati dellaconvalidati,
essere convenientemente
cellulosa (
perchë in alcune
-D-glucani) pos-
pH non puo© essere portato a 6,0-8,0, o perchë inibi- sono causare risultati falsamente positivi. b

scono o attivano la formazione del gel. In questo caso

e© richiesto un saggio preliminare per verificare la pre- I filtri in polisolfone si sono rivelati non appropriati
senza di fattori di interferenza; quando questi sono perchë alcuni utilizzatori hanno ottenuto risultati falsa-
riscontrati, l'analista deve dimostrare che la procedura mente positivi.
usata per rimuoverli e© efficace.
L'obiettivo del saggio preliminare e© di determinare l'i- 9. SCOPO DEI CONTROLLI
potesi nulla, cioe© che la sensibilita© del lisato in presenza
del prodotto in esame non differisce significativamente Lo scopo di un controllo preparato con acqua SEB e la
dalla sensibilita© del lisato in assenza del prodotto. Nei preparazione di riferimento di endotossina con una
metodi A e B viene usato un criterio semplice: l'ipotesi concentrazione doppia rispetto alla sensibilita© dichia-
nulla e© accettata quando la sensibilita© del lisato, in pre- rata del lisato e© di verificare l'attivita© del lisato al
senza del prodotto da esaminare, non e© inferiore a meta© momento e nelle condizioni del saggio. Lo scopo di un
e non superiore al doppio della sensibilita© del lisato controllo negativo e© di verificare l'assenza di una con-
stesso. centrazione rilevabile di endotossina nell'acqua SEB.

198
 Endotossine batteriche

inoizircserP
Il controllo positivo, che contiene il prodotto da esami- 11.4. Le informazioni necessarie sono fornite dai pro-

ilareneG
nare alla concentrazione usata nel saggio, e© destinato a duttori. I produttori sono invitati a fornire tutti i
dimostrare l'assenza di fattori inibenti al momento e dati di convalida che hanno sull'applicabilita© del
nelle condizioni del saggio. saggio delle endotossine batteriche alle sostanze
ed alle preparazioni di interesse. Questi dati com-

isilanA id
10. LETTURA ED INTERPRETAZIONE DEI prendono la preparazione del campione e ogni

idoteM
RISULTATI procedura necessaria ad eliminare i fattori interfe-
renti. Inoltre deve essere fornito qualsiasi dato
Puo© accadere che piccolissime quantita© di endotossina disponibile per un saggio in parallelo sui pirogeni
nell'acqua SEB o in qualsiasi altro reattivo o materiale che puo© contribuire o stabilire che la sostituzione

irotinetnoC
al quale il lisato e© esposto durante il saggio, possano

/ ilairetaM
del saggio dei pirogeni su coniglio con quello delle
sfuggire alla rivelazione perchë inferiori al limite di sen- endotossine batteriche e© appropriatoa.
sibilita© del lisato. Tuttavia esse possono aggiungersi alle Ulteriori requisiti sono definiti nelle sezioni seguenti.
endotossine presenti nella soluzione contenente il pro-
dotto sottoposto al saggio in modo che la quantita©
totale di endotossine presenti raggiunga il limite di sen- 12. USO DI UN SAGGIO DELLE ENDOTOSSINE

ivittaeR
sibilita© e provochi una reazione positiva. BATTERICHE DIVERSO DA QUELLO PRE-
Il rischio che questo possa accadere puo© essere ridotto SCRITTO NELLA MONOGRAFIA
sottoponendo a saggio l'acqua SEB e gli altri reattivi e Quando in una monografia e© prescritto un saggio per le
materiali usando il lisato piu© sensibile disponibile o endotossine batteriche ma non e© specificato quale dei

itnemogrA
almeno usandone uno piu© sensibile di quello impiegato sei metodi (A-F) descritti nel capitolo 2.6.14, significa

ilareneG
nel saggio sul prodotto. Tuttavia anche in questo caso che il metodo A, il saggio limite del metodo di gelifica-
il rischio di un saggio falsamente positivo non puo© zione, e© convalidato per il prodotto considerato. Se e©
essere eliminato completamente. Si deve sottolineare specificato uno degli altri metodi (B-F) questo e© quello
che questo piano di saggio offre tutte le garanzie di convalidato per il prodotto.

eifargonoM
sicurezza, contrariamente ad altri piani che potrebbero

ilareneG
portare a risultati falsamente negativi e in questo modo
condurre al rilascio di un prodotto rischioso per la 13. CONVALIDA DI METODI ALTERNATIVI
salute dei pazienti.
La sostituzione del saggio dei pirogeni su coniglio con

ehcituecamraF
11. SOSTITUZIONE DEL SAGGIO DEI PIROGENI un saggio delle endotossine batteriche o la sostituzione

emroF
SU CONIGLIO CON UN SAGGIO DELLE ENDO- usatometodo del
con un
delle endotossine batteriche indicato o
altro metodo, deve essere considerata
TOSSINE BATTERICHE come l'uso di metodi alternativi in sostituzione di un
Le monografie di prodotti farmaceutici destinati alla saggio di Farmacopea cos|© come descritto nelle Prescri-
somministrazione parenterale che possono contenere zioni Generali:
eiretaM

emirP
quantita© tossiche di endotossine batteriche richiedono ûI saggi e i dosaggi descritti sono metodi ufficiali a
il saggio delle endotossine batteriche o il saggio dei partire dai quali sono basate le norme della Farma-
pirogeni su coniglio. Come politica generale: copea. Con l'accordo dell'autorita© competente pos-
11.1. Quando in una monografia e© richiesto un saggio, e© sono essere usati, ai fini del controllo, metodi ana-
ehcituecamraF
inoizaraperP

litici alternativi, a condizione che tali metodi per-

ehcificepS

riportato solo un tipo di saggio o quello dei piro-

geni oppure quello delle endotossine batteriche. mettano, senza equivoci, di decidere che le norme
11.2. In mancanza della dimostrazione del contrario, il delle monografie sarebbero soddisfatte qualora
saggio per le endotossine batteriche e© preferito fossero usati i metodi ufficiali. In caso di dubbio o
di disputa, i metodi di analisi della Farmacopea
ehcitapoemO

rispetto al saggio dei pirogeni perchë, general-

inoizaraperP

mente, si ritiene che fornisca una protezione sono i soli riconosciuti validi.ý
uguale o migliore per il paziente. Le procedure seguenti sono suggerite per la convalida
11.3. Prima di introdurre un saggio delle endotossine diquello un metodo per le endotossine batteriche diverso da
indicato o usato nella monografia.
batteriche in una monografia, si deve dimostrare
che uno dei saggi descritti nel capitolo 2.6.14 possa 13.1. La procedura, i materiali ed i reattivi usati nel
ecidnI

essere applicato soddisfacentemente al prodotto metodo dovrebbero essere convalidati come

in esame. descritto nel saggio in questione.

199
Attivatore della precallicreina

13.2. La presenza di fattori interferenti (e, se necessario, al doppio del volume di plasma. Eluire con il tampone
la procedura per eliminarli) deve essere sottoposta A ad un flusso di 20 ml/cm2/h. Raccogliere l'eluato in
a saggio su almeno tre campioni dei lotti di produ- frazioni e registrare l'assorbanza a 280 nm (2.2.25).
zione. Si deve sottolineare che i metodi D ed E Riunire le frazioni contenenti il primo picco di proteine
usano un peptide cromogeno e richiedono reattivi in modo che il volume riunito sia circa 1,2 volte il
che non sono presenti nei metodi A, B, C ed F e volume del plasma depauperato di piastrine.
quindi non e© possibile effettuare, senza ulteriori Sottoporre a saggio il substrato riunito per verificare
saggi, l'estrapolazione per il metodo D o il l'assenza di attivita© callicreinica mescolando 1 parte
metodo E, dei risultati relativi ai fattori interfe- con 20 parti della soluzione del substrato cromogeno
renti ottenuti con i metodi A, B, C o F. preriscaldata da usare nel dosaggio ed incubare a
37 ‘C per 2 min. Il substrato e© idoneo se l'aumento
14. CONVALIDA DEL SAGGIO PER I NUOVI dell'assorbanza e© inferiore a 0,001 per minuto. Aggiun-
PRODOTTI gere alla miscela 7 g per litro di sodio cloruro R e filtrare
Le procedure descritte nei paragrafi 13.1 e 13.2 dovreb- usando una membrana filtrante (porosita© 0,45 mm).
bero essere applicate a tutti i nuovi prodotti destinati Congelare il filtrato in aliquote e conservare a -25 ‘C;
all'uso parenterale che devono essere sottoposti a sag- il substrato puo© essere liofilizzato prima della conser-
gio per evidenziare la presenza di endotossine batteri- vazione.
che secondo i requisiti della Farmacopea. Eseguire tutte le procedure dall'inizio della cromato-
grafia al congelamento in aliquote durante un'unica
2.6.15. ATTIVATORE DELLA PRECALLICREINA seduta di lavoro.
L'attivatore della precallicreina (PKA) attiva la precal- DOSAGGIO
licreina in callicreina e puo© essere dosato in base alla Il dosaggio si effettua usando preferibilmente un ana-
sua capacita© di scindere un cromoforo da un substrato lizzatore enzimatico automatico a 37 ‘C, con volumi,
peptidico sintetico cos|© che la velocita© di scissione puo© concentrazioni dei substrati e tempi di incubazione
essere misurata per via spettrofotometrica e la concen- aggiustati in modo che la velocita© di reazione sia lineare
trazione di PKA si calcola per confronto con una almeno fino a 35 U.I. per millilitro. Gli standard, i cam-
preparazione di riferimento titolata in Unita© Interna- pioni e il substrato precallicreinico possono essere
zionali. diluiti, se necessario, con il tampone B.
L'Unita© Internazionale e© l'attivita© di una quantita©
definita dello Standard Internazionale che e© costituito Incubare gli standard o i campioni diluiti per 10 min
da attivatore della precallicreina liofilizzato. L'equiva- con il substrato precallicreinico in modo che il volume
lenza in Unita© Internazionali dello Standard Interna- del campione non diluito non superi 1/10 del volume
zionale e© stabilita dall'O.M.S. totale della miscela di incubazione per evitare errori
causati da variazioni della forza ionica e del pH della
PREPARAZIONE DEL SUBSTRATO PRECALLI- miscela di incubazione. Incubare la miscela o una parte
CREINICO di essa con almeno un volume uguale di una soluzione
Per evitare un'attivazione della coagulazione, il sangue o di un appropriato substrato cromogeno sintetico spe-
il plasma utilizzati per la preparazione della precalli- cifico per la callicreina (per es. N-benzoil-l-prolil-l-
creina devono venire in contatto solo con superfici di pla- fenilalanil-l-arginina-4-nitroanilide acetato R oppure
stica o di vetro siliconato. d -prolil-l -fenilalanil-l -arginina-4-nitroanilide diclori-
Prelevare 9 volumi di sangue umano per 1 volume di drato R) disciolto nel tampone B. Registrare la velocita©
soluzione anticoagulante [ACD, CPD o una soluzione di cambiamento dell'assorbanza per minuto per un
(38 g/l) di sodio citrato R] al quale e© stato aggiunto periodo di 2-10 min, alla lunghezza d'onda specifica
1 mg per millilitro di esadimetrina bromuro R. Centrifu- per il substrato utilizzato. Preparare un bianco per
gare la miscela a 3600 g per 5 min. Separare il plasma ciascuna miscela del campione o dello standard usando
e centrifugare ancora a 6000 g per 20 min per far sedi- il tampone B al posto del substrato precallicreinico.
mentare le piastrine. Separare il plasma depauperato Correggere il DA/min sottraendo il valore ottenuto al
delle piastrine e dializzarlo contro 10 volumi di tam- bianco corrispondente. Tracciare una curva di taratura
pone A per 20 h. Depositare il plasma dializzato su utilizzando i valori ottenuti con la preparazione di rife-
una colonna cromatografica, contenente agarosio rimento e le rispettive concentrazioni; usare la curva
DEAE per cromatografia a scambio ionico R che e© stato per determinare l'attivita© PKA della preparazione da
equilibrato con il tampone A ed il cui volume e© uguale esaminare.

200
 Saggio per gli agenti estranei nei vaccini virali per uso umano

inoizircserP
Tampone A mente per almeno 14 giorni. Effettuare l'autopsia di

ilareneG
Tris(idrossimetil)amminometano R 6,055 g tutti gli animali che muoiono dopo le prime 24 h del
Sodio cloruro R 1,17 g saggio o che presentano sintomi di malattia ed esami-
Esadimetrina bromuro R 50 mg narli al fine di accertare i segni di infezione virale sia
Sodio azide R 0,100 g mediante l'osservazione macroscopica diretta sia
Disciogliere i reattivi in acqua R, aggiustare il pH a 8,0 mediante l'inoculazione di appropriate sospensioni di

isilanA id
idoteM
con acido cloridrico 2 M e diluire a 1000 ml con acqua R. tessuto, per via intracerebrale ed intraperitoneale, in
Tampone B almeno altri cinque topi, che si tengono in osservazione
Tris(idrossimetil)amminometano R 6,055 g per 14 giorni. Il lotto di semenza virale soddisfa al sag-
Sodio cloruro R 8,77 g gio se nessun topo presenta segni evidenti di infezione

irotinetnoC
attribuibili al lotto di semenza virale. Il saggio e© valido

/ ilairetaM
Disciogliere i reattivi in acqua R, aggiustare il pH a 8,0 solo se almeno l'80 per cento dei primi topi inoculati
con acido cloridrico 2 M e diluire a 1000 ml con acqua R. sopravvive al periodo di osservazione.
Cavie . Inoculare per via intraperitoneale ciascuna di
2.6.16. SAGGIO PER GLI AGENTI ESTRANEI NEI
almeno cinque cavie, di 350-450 g, con 5,0 ml del lotto
VACCINI VIRALI PER USO UMANO
di semenza virale. Osservare gli animali per almeno

ivittaeR
Nei saggi che richiedono una neutralizzazione prelimi- 42 giorni per identificare i sintomi di malattia. Effet-
nare del virus, usare anticorpi specifici che non siano tuare l'autopsia di tutti gli animali che muoiono dopo
di origine umana o di scimmia; se il virus e© stato colti- le prime 24 h del saggio o che presentano sintomi di
vato su tessuti aviari, gli anticorpi non devono essere malattia e sottoporli ad esame macroscopico; esami-
nare i tessuti al microscopio e mediante coltura per evi-

itnemogrA
di origine aviaria. Per preparare i sierimmuni, utilizzare

ilareneG
un antigene immunizzante prodotto in colture cellulari denziare segni di infezione. Sacrificare gli animali che
provenienti da una specie differente da quella utilizzata sopravvivono al periodo di osservazione ed esaminarli
per la produzione del vaccino ed esente da agenti estra- in modo analogo. Il lotto di semenza virale soddisfa al
nei. Quando si prescrive l'uso di uova EOPS, esse sono saggio se nessuna cavia presenta segni evidenti di infe-
zione attribuibili al lotto di semenza virale. Il saggio e©

eifargonoM
ottenute da un allevamento esente da patogeni

ilareneG
specificati (5.2.2). valido solo se almeno l'80 per cento delle cavie soprav-
vive al periodo di osservazione.
LOTTO DI SEMENZA VIRALE
LOTTO DI SEMENZA VIRALE E RACCOLTE
Prelevare i campioni del lotto di semenza virale al VIRALI

ehcituecamraF
momento della raccolta e, se non vengono immediata-

emroF
mente sottoposti a saggio, conservarli ad una tempera- Prelevare i campioni al momento della raccolta e, se
tura inferiore a -40 ‘C. non vengono immediatamente sottoposti a saggio, con-
. Inoculare ciascuno di almeno dieci topi servarli ad una temperatura inferiore a - 40 ‘C.
Topi adulti

adulti, di 15-20 g, con 0,03 ml del lotto di semenza Sterilita© batterica e fungina . Un campione di 10 ml sod-
virale, per via intracerebrale, e con 0,5 ml per via intra- disfa al saggio di sterilita© (2.6.1).

eiretaM

emirP
peritoneale. Osservare gli animali per almeno 21 giorni. Micoplasmi . Un campione di 10 ml soddisfa al saggio
Effettuare l'autopsia di tutti gli animali che muoiono per i micoplasmi (2.6.7).
dopo le prime 24 h del saggio o che presentano sintomi Micobatteri ( 2.6.2). Un campione di 5 ml e© sottoposto a
di malattia ed esaminarli al fine di accertare i segni di saggio per la presenza di Mycobacterium spp. mediante
ehcituecamraF
inoizaraperP

infezione virale sia tramite l'osservazione macroscopica metodi di coltura riconosciuti sensibili per la rileva-
ehcificepS

diretta, sia tramite l'inoculazione di appropriate zione di questi microrganismi.

sospensioni di tessuto, per via intracerebrale ed intrape- .
ritoneale, in almeno altri cinque topi, che si tengono in
Saggio in colture cellulari per gli altri agenti estranei

Sottoporre a saggio campioni corrispondenti, salvo

osservazione per 21 giorni. Il lotto di semenza virale diversa indicazione, a 500 dosi umane di vaccino o
ehcitapoemO
inoizaraperP

soddisfa al saggio se nessun topo presenta segni evi- 50 ml, se questa quantita© e© superiore alla prima, per
denti di infezione attribuibili alla semenza virale. Il sag- evidenziare la presenza di agenti estranei mediante ino-
gio e© valido solo se almeno l'80 per cento dei primi topi culazione in colture cellulari continue di rene di scim-
inoculati sopravvive al periodo di osservazione. mia e di cellule umane. Se il virus e© coltivato in cellule
Topi lattanti . Inoculare ciascuno di almeno venti topi, diploidi umane, sottoporre a saggio la raccolta virale
di eta© inferiore a 24 h con 0,01 ml del lotto di semenza neutralizzata, anche in un'altra coltura di cellule
ecidnI

virale, per via intracerebrale, e con almeno 0,1 ml per diploidi. Se il virus vaccinale e© coltivato in un sistema
via intraperitoneale. Osservare gli animali giornal- cellulare di una specie diversa dalla scimmia o dal-

201
Attivita© anticomplementare dell'immunoglobulina

l'uomo, inoculare anche cellule di questa specie ma di coltivato in un sistema cellulare di specie diversa dalla
un altro lotto. Incubare le cellule a 36 1 ‘C e tenerle
6 scimmia o dall'uomo, inoculare anche cellule di questa
in osservazione per un periodo di 14 giorni. Il lotto di specie ma di un altro lotto. In ciascun sistema cellulare
semenza virale o la raccolta soddisfano al saggio se nes- sottoporre a saggio almeno 5 ml. Incubare le colture
suna coltura cellulare mostra segni della presenza di inoculate ad una temperatura di 36 1 ‘C e osservarle
6

agenti estranei non attribuibili ad una contaminazione per un periodo di 14 giorni. Non deve essere riscontrata
accidentale. Il saggio e© valido solo se almeno l'80 per la presenza di agenti estranei.
cento delle colture cellulari rimangono vitali. Se la coltura cellulare usata per la produzione e© mante-
Virus aviari (saggio richiesto solo se il virus e© coltivato su nuta ad una temperatura diversa da 36 1 ‘C, si effet-
6

tessuti aviari). Neutralizzare un campione equivalente tua un saggio supplementare per gli agenti estranei alla
a 100 dosi umane o 10 ml se superiore. Usando 0,5 ml temperatura di produzione usando la stesso tipo di cel-
per uovo, inoculare per via allantoidea, un gruppo di lule utilizzate per la crescita del virus.
uova embrionate EOPS di 9-11 giorni ed un secondo
gruppo di uova embrionate EOPS di 5-7 giorni nel
Virus della leucosi aviaria (saggio richiesto solo se il

. Effettuare il saggio
virus e© coltivato su tessuti aviari)
sacco vitellino. Incubare le uova per 7 giorni. Il lotto per i virus della leucosi aviaria usando 5 ml del liquido
di semenza virale o la raccolta soddisfano al saggio se i sopranatante delle cellule di controllo.
fluidi allantoidei e vitellinici non mostrano segni della
presenza di qualsiasi agente emoagglutinante e se tutti UOVA DI CONTROLLO
gli embrioni e le membrane corio-allantoidee, esami-
nate per evidenziare qualunque patologia macrosco- Agenti emoagglutinanti . Esaminare 0,25 ml di liquido
pica, sono normali. Il saggio e© valido solo se almeno allantoideo di ogni uovo per evidenziare la presenza di
l'80 per cento delle uova inoculate sopravvive durante agenti emoagglutinanti mediante mescolamento diretto
i 7 giorni. con eritrociti di pollo e dopo un passaggio su uova
EOPS effettuato nel modo seguente. Inoculare un cam-
COLTURE CELLULARI USATE PER LA PRODU- pione di 5 ml della miscela dei liquidi amniotici delle
ZIONE: CELLULE DI CONTROLLO uova di controllo, in ragione di 0,5 ml, nella cavita©
allantoidea e nella cavita© amniotica di uova EOPS.
Esaminare al microscopio le cellule di controllo per Le uova di controllo soddisfano al saggio se non viene
verificare l'assenza di qualsiasi virus capace di causare riscontrata la presenza di agenti emoagglutinanti in
degenerazione citopatica durante il periodo di incuba- entrambi i saggi.
zione delle colture cellulari inoculate usate per la pro- . Usare un campione di 10 ml
duzione; oppure per un periodo non inferiore a 14
Virus della leucosi aviaria

della miscela dei liquidi amniotici delle uova di con-

giorni dal momento dell'inoculo delle colture cellulari trollo. Effettuare un'amplificazione mediante cinque
usate per la produzione scegliendo il piu© lungo dei due passaggi su colture cellulari di embrione di pollo esenti
periodi. Il saggio e© valido solo se almeno l'80 per cento da leucosi; effettuare il saggio della leucosi aviaria
delle cellule di controllo sopravvive alla fine del periodo usando cellule del quinto passaggio. Le uova di con-
di osservazione. trollo soddisfano al saggio se non viene riscontrata la
Al 14‘ giorno o al momento dell'ultima raccolta virale, presenza di virus della leucosi aviaria.
scegliendo il piu© lungo dei due periodi, effettuare i saggi . Inoculare campioni di 5 ml della
descritti di seguito.
Altri agenti estranei

miscela di liquidi amniotici delle uova di controllo in

Saggio per i virus emoadsorbenti . Esaminare almeno il colture di cellule umane o di scimmia. Osservare le col-
25 per cento delle colture di controllo per evidenziare ture cellulari per 14 giorni. Le uova di controllo soddi-
la presenza di virus emoadsorbenti mediante l'aggiunta sfano al saggio se non viene riscontrata la presenza di
di eritrociti di cavia. Se gli eritrociti di cavia sono stati agenti estranei. Il saggio e© valido solo se l'80 per cento
conservati, la conservazione non deve durare piu© di delle colture inoculate sopravvive alla fine del periodo
7 giorni, ad una temperatura di 5 3 ‘C. Effettuare la
6 di osservazione.
lettura su una meta© delle colture dopo incubazione a
5 3 ‘C per 30 min, e sull'altra meta© dopo incubazione
6

a 20-25 ‘C per 30 min. Non deve essere riscontrata la 2.6.17. ATTIVITAé ANTICOMPLEMENTARE DEL-

presenza di agenti emoadsorbenti. L'IMMUNOGLOBULINA

Saggio in colture cellulari per gli altri agenti estranei . Per la determinazione dell'attivita© anticomplementare
Riunire i fluidi sopranatanti delle cellule di controllo (ACA) dell'immunoglobulina, incubare una quantita©
ed esaminare per evidenziare la presenza di agenti definita del prodotto in esame (10 mg di immunoglobu-
estranei mediante inoculo di colture di cellule di rene lina) con una quantita© definita di complemento di cavia
di scimmia e di cellule umane. Se il virus vaccinale e© (20 CH50) e titolare il complemento residuo; l'attivita©

202
 Attivita© anticomplementare dell'immunoglobulina

inoizircserP
anticomplementare e© espressa come consumo percen- pecora centrifugando un volume adeguato di sangue di

ilareneG
tuale di complemento in rapporto al complemento di pecora stabilizzato, lavare le cellule almeno tre volte
controllo considerato come 100 per cento. con la soluzione tampone gelatina-barbital e preparare
L'unita© emolitica di attivita© complementare (CH50) e© una sospensione al 5 per cento V/V nella stessa solu-
la quantita© di complemento che, nelle condizioni di zione. Misurare la densita© cellulare della sospensione
reazione adottate, provoca la lisi di 2,5 10 8, su un come segue: aggiungere 0,2 ml della sospensione a

isilanA id
idoteM
2

totale di 5 108, globuli rossi sensibilizzati in maniera

2 2,8 ml di acqua R e centrifugare la soluzione lisata per
ottimale. 5 min a 1000 g; la densita© cellulare e© appropriata se l'as-
Soluzione madre di calcio e magnesio. Disciogliere sorbanza (2.2.25) del liquido sopranatante a 541 nm e©
1,103 g di calcio cloruro R e 5,083 g di magnesio cloruro 0,62 0,01. Correggere la densita© cellulare aggiun-
6

gendo la soluzione tampone gelatina-barbital secondo

irotinetnoC
R in acqua R e diluire a 25 ml con lo stesso solvente.

/ ilairetaM
Tampone barbital soluzione madre. Disciogliere 207,5 g la formula:
di sodio cloruro R e 25,48 g di barbital sodico R in
4000 ml di acqua R e aggiustare il pH a 7,3 con acido Vf V0i ; 62A ˆ
2

cloridrico 1 M. Aggiungere 12,5 ml di soluzione madre

di calcio e magnesio e diluire a 5000 ml con acqua R. V f = volume finale corretto,

ivittaeR
Filtrare attraverso un filtro a membrana (dimensione V i = volume iniziale,
dei pori 0,22 m). Conservare a 4 ‘C in recipienti di
m
A = assorbanza della sospensione iniziale a 541 nm.
vetro.
Soluzione di gelatina. Disciogliere 12,5 g di gelatina R in La sospensione corretta contiene circa 1 x 109 cellule
circa 800 ml di acqua R e scaldare funo ad ebollizione per millilitro.

itnemogrA
ilareneG
a b.m. Raffreddare a 20 ‘C e diluire a 10 litri con
acqua R. Filtrare attraverso un filtro a membrana
(dimensione dei pori 0,22 m). Conservare a 4 ‘C.
Titolazione dell'emolisina

Preparare le diluizioni di emolisina come riportato

m
Usare solo soluzioni limpide.
Soluzione di citrato. Disciogliere 8,0 g di sodio citrato R, nella Tabella 2.6.17.-1.

eifargonoM

ilareneG
4,2 g di sodio cloruro R e 20,5 g di glucosio R in 750 ml
di acqua R. Aggiustare il pH a 6,1 usando una soluzione Tabella 2.6.17.-1.
(100 g/l) di acido citrico R e diluire a 1000 ml con
acqua R. Preparazione a partire da

Soluzione tampone gelatina-barbital . Aggiungere 4

ehcituecamraF
volumi della soluzione di gelatina a 1 volume della solu-
Soluzione

emroF
Diluizione

zione madre di tampone barbital e mescolare. Aggiu-

tampone Emolisina
di emolisina
gelatina-barbital

stare il pH a 7,3, se necessario, utilizzando sodio idros- richiesta

sido 1 M o acido cloridrico 1 M. Conservare a 4 ‘C. Pre- Volume Diluizione Volume

parare ogni giorno una nuova soluzione. (millilitri) (1: .....) (millilitri)

Sangue di pecora stabilizzato. Raccogliere un volume di

eiretaM

emirP
sangue di pecora in un volume di soluzione di citrato e 7,5 0,65 non diluita 0,1
mescolare. Conservare a 4 ‘C per almeno 7 giorni e 10 0,90 non diluita 0,1
per non piu© di 28 giorni. (Sangue di pecora o globuli 75 1,80 7,5 0,2
rossi di pecora stabilizzati sono disponibili in com- 100 1,80 10 0,2
ehcituecamraF

mercio).
inoizaraperP

150 1,00 75 1,0

ehcificepS

Emolisina. Antisiero nei confronti dei globuli rossi di 200 1,00 100 1,0
pecora preparato su coniglio. (Questi antisieri sono 300 1,00 150 1,0
disponibili in commercio). 400 1,00 200 1,0
Complemento di cavia. Preparare una miscela di siero 600 1,00 300 1,0
ehcitapoemO
inoizaraperP

di cavia, proveniente da almeno dieci animali. Sepa- 800 1,00 400 1,0
rare il siero dal coagulo mediante centrifugazione a 1200 1,00 600 1,0
circa 4 ‘C. Conservare il siero in piccole quantita© ad 1600 1,00 800 1,0
una temperatura inferiore a -70 ‘C. 2400 1,00 1200 1,0
METODO 3200* 1,00 1600 1,0
4800* 1,00 2400 1,0
ecidnI

Preparazione della sospensione standardizzata di globuli

rossi di pecora al 5 per cento. Separare i globuli rossi di *eliminare 1,0 ml di miscela

203
Attivita© anticomplementare dell'immunoglobulina

Aggiungere 1,0 ml della sospensione al 5 per cento di Preparazione di globuli rossi di pecora sensibilizzati in

globuli rossi di pecora a ciascuna provetta della serie maniera ottimale (sistema emolitico).

di diluizioni di emolisina, a partire dalla diluizione Preparare un volume appropriato di emolisina diluita
1:75 e mescolare. Incubare a 37 ‘C per 30 min. contenente 2 MHU per millilitro e un uguale volume
Trasferire 0,2 ml di ciascuna miscela incubata in altret- di sospensione standardizzata di globuli rossi di pecora
tante provette pulite ed aggiungere 1,10 ml di soluzione al 5 per cento. Aggiungere la diluizione di emolisina
tampone gelatina-barbital e 0,2 ml di complemento di alla sospensione di globuli rossi e mescolare. Incubare
cavia diluito (per esempio, 1:150). Effettuare questo in a 37 ‘C per 15 min, conservare a 2-8 ‘C ed utilizzare
duplicato. entro 6 h.
Come cellule di controllo non emolizzate preparare tre Titolazione del complemento

provette contenenti ciascuna 1,4 ml di soluzione tam- Preparare una diluizione del complemento appropriata
pone gelatina-barbital e 0,1 ml di sospensione al 5 per (per esempio, 1:250) con la soluzione tampone gela-
cento di globuli rossi di pecora. tina-barbital ed eseguire la titolazione in doppio come
Come controllo per l'emolisi completa preparare tre riportato in Tabella 2.6.17.-2.
provette, contenenti ciascuna 1,4 ml di acqua R e Tabella 2.6.17.-2.
0,1 ml della sospensione al 5 per cento di globuli rossi
di pecora. Volume di soluzione

Incubare tutte le provette a 37 ‘C per 60 min e centrifu-

Volume di complemento
Numero tampone
diluito in millilitri

gare a 1000 g per 5 min. Misurare l'assorbanza (2.2.25)

della provetta gelatina-barbital
(per es. 1:250)
in millilitri

dei liquidi sopranatanti a 541 nm e calcolare il grado 1 0,1 1,2

percentuale di emolisi in ogni provetta mediante l'e- 2 0,2 1,1
spressione. 3
4
0,3
0,4
1,0
0,9
Aa A1 100
ÿ 5
6
0,5
0,6
0,8
0,7
Ab A1
ÿ
2
7 0,7 0,6
8 0,8 0,5
Aa = assorbanza delle provette contenenti le diluizioni 9 0,9 0,4
10 1,0 0,3
di emolisina, 11 1,1 0,2
12 1,2 0,1
Ab = assorbanza media delle tre provette con emolisi Tre provette - 1,3
totale, come cellule
di controllo
A1 = assorbanza media delle tre provette senza emo- allo 0 per cento
lisi. di emolisi
Usando carta millimetrata riportare su grafico il grado Tre provette - 1,3 ml di acqua
percentuale di emolisi come ordinata in funzione del al 100 per cento
di emolisi
corrispondente valore reciproco della diluizione di
emolisina come ascissa. Dall'analisi del grafico, deter- Aggiungere ad ogni provetta 0,2 ml di sospensione di
minare la diluizione ottimale di emolisina. Scegliere globuli rossi di pecora sensibilizzati, mescolare accura-
una diluizione tale che un ulteriore aumento della tamente ed incubare a 37 ‘C per 60 min. Raffreddare
quantita© di emolisina non determini un cambiamento le provette in un bagno di ghiaccio e centrifugare a
apprezzabile del grado di emolisi. Questa diluizione e© 1000 g per 5 min. Misurare l'assorbanza del liquido
definita come una unita© emolitica minima (1 MHU) in sopranatante a 541 nm e calcolare il grado di emolisi
1,0 ml. La diluizione di emolisina ottimale per la sensi- (Y) mediante l'espressione:
bilizzazione dei globuli rossi contiene 2 MHU per milli- Ac A1 ÿ

litro. Ab A1 ÿ

La titolazione dell'emolisina e© valida solo se il grado Ac = assorbanza delle provette da 1 a 12,

massimo di emolisi e© del 50-70 per cento. Se il grado Ab = assorbanza media delle provette con il 100 per
massimo di emolisi non e© compreso in questo intervallo cento di emolisi,
ripetere la titolazione utilizzando una soluzione di com- A1 = assorbanza media delle provette delle cellule di
plemento diluita di piu© o di meno. controllo con lo 0 per cento di emolisi.

204
 Saggio per la neurovirulenza dei vaccini di virus vivi

inoizircserP
Riportare su carta logaritmica Y/(1 - Y) in ascissa e la colare l'attivita© anticomplementare della preparazione

ilareneG
quantita© di complemento diluito in millilitri in ordi- in esame in rapporto al controllo del complemento
nata. Tracciare la retta che si adatta meglio ai punti e considerato come 100 per cento mediante l'espressione:
determinare l'ordinata corrispondente alla dose di com- a b 100
pletamento che causa il 50 per cento di emolisi dove
ÿ

Y/(1 - Y) = 1,0. Calcolare l'attivita© in unita© emolitiche a 2

isilanA id
idoteM
(CH50/ml) mediante l'espressione: a = attivita© complementare media (CH50/ml) del con-
Cd trollo del complemento,
Ca 5
2 b = attivita© complementare (CH50/ml) della prepara-
zione in esame.

irotinetnoC
Cd = valore inverso della diluizione del complemento,

/ ilairetaM
Ca = volume in millilitri del complemento diluito che Il saggio e© valido solo se:
provoca il 50 per cento di emolisi, ^ le attivita© anticomplementari determinate per il con-
5 = fattore di correzione che considera il numero di trollo ACA-negativo ed il controllo ACA-positivo
globuli rossi. sono entro i limiti indicati nel foglietto allegato alla
preparazione di riferimento;
Il saggio e© valido solo se la retta e© lineare tra il 15 per

ivittaeR
cento e l'85 per cento di emolisi e la pendenza e© com- ^ l'attivita© complementare del controllo (a) del comple-
presa tra 0,15 e 0,40 e preferibilmente tra 0,18 e 0,30. mento e© compresa nell'intervallo 80-120 CH50 per
millilitro.
Saggio per l'attivita© anticomplementare

itnemogrA
Diluire il complemento di cavia titolato con la solu-

ilareneG
2.6.18. SAGGIO PER LA NEUROVIRULENZA DEI

zione tampone gelatina - barbital in modo da ottenere VACCINI DI VIRUS VIVI

100 CH50/ml. Se necessario, correggere a 7 il pH del- Usare per ciascun saggio almeno dieci scimmie che
l'immunoglobulina in esame. Preparare le seguenti sono sieronegative al virus da sottoporre al saggio.
miscele di incubazione per un'immunoglobulina conte- Iniettare a ciascuna scimmia, salvo diversa indicazione,
nente 50 mg/ml:

eifargonoM
non piu© di 0,5 ml del materiale da esaminare nella

ilareneG
Tabella 2.6.17.-3. regione talamica di ciascun emisfero. La quantita© totale
di virus inoculata in ciascuna scimmia non deve essere
inferiore alla quantita© contenuta nella dose umana sin-
gola raccomandata di vaccino. Per verificare l'assenza

ehcituecamraF
Complemento
Immunoglobulina

di un virus neurovirulento selvaggio, mantenere un

di controllo
da esaminare

emroF
(in doppio)

gruppo di controllo di almeno quattro scimmie nella

Immunoglobulina (50 mg/ml) 0,2 ml - stessa gabbia o nelle immediate vicinanze delle scimmie
Tampone gelatina-barbital so- 0,6 ml 0,8 ml inoculate. Osservare le scimmie inoculate per 17-21
luzione giorni per evidenziare i sintomi di paralisi e altre mani-
festazioni di turbe neurologiche; mantenere in osserva-

eiretaM
Complemento 0,2 ml 0,2 ml zione le scimmie di controllo per lo stesso periodo piu©

emirP
10 giorni. Gli animali che muoiono entro le 48 h dall'i-
Effettuare il saggio sull'immunoglobulina in esame e niezione sono considerati morti per cause non specifi-
preparare controlli ACA-negativi e ACA-positivi che e possono essere sostituiti. Il saggio non e© valido se
usando immunoglobulina umana PBR, come indicato piu© del 20 per cento delle scimmie inoculate muore per
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

nel foglietto allegato alla preparazione di riferimento. cause non specifiche; e se i campioni di siero, prelevati
Aggiungere volumi maggiori o minori di campione e di dalle scimmie di controllo al momento dell'inocula-
soluzione tampone gelatina-barbital se la concentra- zione degli animali in esame e 10 giorni dopo che questi
zione di immunoglobulina e© diversa da 50 mg/ml; per ultimi sono stati sacrificati, mostrano segni di infezione
esempio, aggiungere 0,47 ml di soluzione tampone gela- da virus selvaggio del tipo da sottoporre a saggio o da
ehcitapoemO
inoizaraperP

tina-barbital a 0,33 ml di immunoglobulina contenente virus del morbillo. Alla fine del periodo di osserva-
30 mg/ml, per ottenere 0,8 ml. Tappare le provette ed zione, effettuare l'autopsia e gli esami istopatologici di
incubare a b.m. a 37 ‘C per 60 min. Aggiungere 0,2 ml appropriate zone del cervello per evidenziare l'even-
di ogni miscela di incubazione a 9,8 ml di soluzione tuale coinvolgimento del sistema nervoso centrale. Il
tampone gelatina-barbital per diluire il complemento. materiale soddisfa al saggio se non compaiono evidenti
Eseguire su ogni provetta la titolazione del comple- segni clinici o istopatologici inaspettati di coinvolgi-
ecidnI

mento come descritto in precedenza per misurare l'atti- mento del sistema nervoso centrale attribuibili al virus
vita© del complemento residuo (Tabella 2.6.17.-2). Cal- inoculato.

205
Saggio per la neurovirulenza del vaccino poliomielitico per uso orale

2.6.19. SAGGIO PER LA NEUROVIRULENZA DEL ad autopsia per determinare se la poliomielite e© stata
VACCINO POLIOMIELITICO PER USO la causa della morte. Gli animali che muoiono per
ORALE cause diverse dalla poliomielite vengono esclusi dalla
Le scimmie utilizzate nel saggio per la neurovirulenza valutazione. Gli animali moribondi o che sono grave-
devono soddisfare ai requisiti riportati nella monogra- mente paralizzati sono uccisi e sottoposti ad autopsia.
fia Vaccino poliomielitico per uso orale (215) e pesano Tutti gli animali che sopravvivono fino alla fine del
non meno di 1,5 kg. La patogenicita© per le scimmie periodo di osservazione sono sottoposti ad autopsia. Il
Macaca o Cercopithecus viene valutata confrontandola saggio e© valido solo se meno del 20 per cento degli ani-
con quella di una preparazione di virus di riferimento mali mostra infezione intercorrente durante il periodo
per il saggio della neurovirulenza mediante inocula- di osservazione.
zione nella regione lombare del sistema nervoso cen- Numero di sezioni esaminate . Si sottopongono ad esame
trale dopo sedazione con un'appropriata sostanza, per istologico almeno il midollo lombare, il midollo cervi-
es., il cloridrato di ketamina. Un campione di siero, cale, il bulbo inferiore e superiore, il mesencefalo, il
prelevato prima dell'iniezione, dovra© dimostrare di talamo e la corteccia cerebrale motoria di ciascuna
non contenere anticorpi neutralizzanti quando e© esami- scimmia. Le sezioni sono tagliate con uno spessore di
nato alla diluizione di 1:4 in presenza di non piu© di 15 mm e colorate con gallocianina. Il numero minimo
1000 DICC50 di ciascuno dei tre tipi di poliovirus. di sezioni esaminate e© il seguente:
Numero di scimmie . Il vaccino e il virus omotipo di rife- (a) 12 sezioni rappresentative dell'intero ingrossa-
rimento sono sottoposti a saggio contemporaneamente mento lombare;
nello stesso gruppo di scimmie. Numeri uguali di ani- (b) 10 sezioni rappresentative dell'intero ingrossa-
mali sono inoculati con il vaccino in esame e con la pre- mento cervicale;
parazione di riferimento. Gli animali sono suddivisi a (c) 2 sezioni del bulbo;
caso nei gruppi di trattamento e nelle gabbie e la loro
identita© e© codificata in modo che il trattamento rice- (d) 1 sezione del ponte e del cervelletto;
vuto da ciascun animale sia ignoto agli osservatori ed (e) 1 sezione del mesencefalo;
a coloro che valuteranno le sezioni istologiche. Il (f) 1 sezione della parte sinistra e della parte destra
numero di scimmie inoculate e© tale che nella valuta- del talamo;
zione del vaccino e della preparazione di riferimento,
ci siano non meno di 11 scimmie positive per il virus (g) 1 sezione della parte sinistra e della parte destra
tipo 1 e tipo 2 e non meno di 18 scimmie positive per il della corteccia cerebrale motoria.
virus tipo 3 (le scimmie positive sono quelle che presen- . Per la valutazione dell'attivita©
tano lesioni neuronali specifiche da virus poliomielitico Indice dell'attivita© virale

virale nelle emisezioni del midollo spinale e dell'ence-

nel sistema nervoso centrale). Piu© lotti di vaccino pos- falo, e© utilizzato un sistema di punteggio (indici) per la
sono essere sottoposti a saggio con lo stesso riferimento gravita© delle lesioni, differenziando l'infiltrazione cellu-
omotipico. Se possibile, si usano scimmie provenienti lare e la distruzione dei neuroni come segue:
dallo stesso gruppo di quarantena, altrimenti vengono
utilizzate scimmie provenienti da due gruppi ed uguali 1. Solo infiltrazione cellulare (la scimmia non viene
numeri di ciascun gruppo sono trattati con il vaccino e considerata come positiva).
con la preparazione di riferimento. Se il saggio e© effet- 2. Infiltrazione cellulare con minima lesione neuro-
tuato in due giorni lavorativi, un uguale numero di nale.
scimmie provenienti da ciascun gruppo e© inoculato in 3. Infiltrazione cellulare con estesa lesione neuronale.
ciascun giorno con il vaccino e con la preparazione di
riferimento omotipica. 4. Lesione neuronale massiva con o senza infiltrazione
Titolo virale . I titoli virali del vaccino e della prepara- cellulare.
zione di riferimento omotipica sono aggiustati in modo Gli indici sono registrati su una scheda standard(1). Una
tale da5,5 essere6,5 quanto piu© possibile uguali e compresi scimmia con lesioni neuronali nelle sezioni, ma che
tra 10 e 10 DICC50/0,1 ml. non mostra traccia del passaggio dell'ago, viene consi-
Osservazione . Tutte le scimmie sono tenute in osserva- derata positiva. Una scimmia che mostra traccia del
zione per 17-22 giorni per ricercare i sintomi di polio- passaggio dell'ago nelle sezioni, ma che non mostra
mielite o di altra infezione virale. Le scimmie che lesioni neuronali, non viene considerata positiva. Una
sopravvivono alle prime 24 h ma che muoiono prima sezione con danni da trauma ma che non mostra lesioni
dell'11‘ giorno dopo l'inoculazione vengono sottoposte specifiche da virus non viene inclusa nel conteggio.

206
 Saggio per la neurovirulenza del vaccino poliomielitico per uso orale

inoizircserP
Gli indici di gravita© si basano sull'esame delle emise- Se l'indice medio delle lesioni per il vaccino in esame e©

ilareneG
zioni delle sezioni istologiche lombari (L), cervicali (C) Xesame e C1, C2 e C3 sono costanti calcolate come
e cerebrali (B). L'indice delle lesioni (LS) per ciascuna descritto di seguito, allora il vaccino non e© accetta-
scimmia positiva si calcola come segue: bile se:
Xesame X rif > C1;

isilanA id
02 3 2 3 2 31 ÿ
Somma degli Somma degli Somma degli

idoteM
B6 indici L 7 6 indici C 7 6 indici B 7C
LS ˆ B6 7‡6 7‡6 7C 4 3
@4 Numero 5 4 Numero 5 4
il vaccino puo© essere sottoposto di nuovo a saggio una
Numero 5A

volta se:
delle emisezioni delle emisezioni delle emisezioni

Per ciascun gruppo di scimmie positive viene calcolato C1 < Xesame X rif < C2
un indice medio delle lesioni.
ÿ

irotinetnoC
/ ilairetaM
. Il confronto dell'attivita© virale del vaccino Se il vaccino e© di nuovo sottoposto a saggio, le medie
e della preparazione di riferimento si basa sull'attivita© degli indici delle lesioni per il vaccino in esame e per il
Valutazione

che si manifesta nell'ingrossamento lombare del vaccino di riferimento vengono ricalcolate. Il vaccino
midollo spinale e sul grado di diffusione dell'attivita© da non e© accettabile se:
questa regione all'ingrossamento cervicale ed al cer- X esame 1 esame 2 X rif 1 rif 2 > C :

ivittaeR
ÿ

vello. La decisione di accettare o respingere si basa sul- 3

‡ † ‡ †

2
l'indice totale di tutti gli animali sottoposti al saggio.
Nella valutazione finale sono anche presi in considera- Le costanti C1, C2 e C3 si calcolano mediante le espres-
zione i singoli animali che mostrano evidenza di una sioni:
attivita© insolitamente alta o nella regione lombare o

itnemogrA
ilareneG
s
come risultato di una diffusione da questa regione. La
C1 2; 3 2sN
2
sospensione madre monovalente soddisfa al saggio se 1
ˆ

il numero richiesto di animali e© positivo e se nessuno

dei reperti clinici e istopatologici mostra differenze
significative in patogenicita© tra il vaccino e il materiale

eifargonoM
s

ilareneG
di riferimento. I criteri per l'accettabilita© vengono ripor- C2 2; 6 2sN
2

tati di seguito.
ˆ
1
Criteri . Si effettua su ciascun vaccino di riferimento
(tipo 1, 2, e 3) un numero appropriato di saggi di quali-

ehcituecamraF
s
ficazione per la neurovirulenza (per esempio 4) per C 1 ; 6 2s2

emroF
ottenere dati sull'attivita© di tali vaccini che serviranno 3 N2 ˆ

come base dei criteri per i vaccini da sottoporre a sag-

gio. L'indice di lesione medio totale (M) per i saggi ripe-
tuti, effettuati su ciascun virus di riferimento, viene cal- N1 = numero di scimmie positive per il vaccino in
colato insieme alla ``stima combinata'' della varianza esame,

eiretaM
intra-saggio (s2) e della deviazione intra-saggio (s).

emirP
N2 = numero di scimmie positive nei due saggi,
I criteri di validita© dei risultati di un saggio su una pre- 2; 3 = deviazione normale al livello dell'1 per cento,
parazione di riferimento sono stabiliti in base ai dati
cumulativi ottenuti dai saggi di qualificazione. Non 2; 6 = deviazione normale al livello dello 0,5 per cento,
ehcituecamraF

puo© essere fornito alcun criterio applicabile in generale; 1; 6 = deviazione normale al livello del 5 per cento.
inoizaraperP

ehcificepS

per i laboratori con esperienza limitata, puo© essere utile

il seguente metodo empirico per stabilire limiti accetta- Non puo© essere utilizzato per valutare un vaccino un
bili per l'indice medio delle lesioni per la preparazione saggio per la neurovirulenza nel quale l'indice medio
di riferimento (Xrif): delle lesioni per la preparazione di riferimento (Xrif)
ehcitapoemO

non e© compatibile con le esperienze precedentemente

inoizaraperP

Tabella 2.6.19.-1. ottenute. Se il saggio e© valido, l'indice medio delle

lesioni per il vaccino in esame (Xesame) viene calcolato
e confrontato con quello del vaccino di riferimento
Limite inferiore
omotipico.
Limite superiore

Tipo 1 e 2 M-s M+s (1) Una scheda idonea viene riportata nei Requisiti per il Vaccino
ecidnI

Tipo 3 M - s/2 M+s poliomielitico per uso orale (Requisiti per le Sostanze biologiche,
n. 7, O.M.S.).

207
Tecniche di amplificazione dell'acido nucleico

2.6.20. EMOAGGLUTININE ANTI-A ED ANTI-B anche sequenze di RNA in seguito a trascrizione

(METODO INDIRETTO) inversa del RNA nel DNA complementare (cDNA) e
successiva amplificazione.
Preparare in duplicato diluizioni in serie della prepara- 3. PRINCIPIO DEL METODO
zione da esaminare con una soluzione (9 g/l) di sodio
cloruro R. Aggiungere a ciascuna diluizione di una serie La PCR e© una procedura che permette l'amplificazione
un volume uguale di una sospensione al 5 per specifica in vitro di segmenti di DNA o di RNA dopo
cento V/V di globuli rossi di gruppo A1 precedente- la trascrizione inversa nel cDNA.
mente lavati, per tre volte, con la soluzione di cloruro Dopo la denaturazione della doppia elica di DNA nel
di sodio. Aggiungere a ciascuna diluizione dell'altra DNA a catena singola, due oligonucleotidi sintetici di
serie un volume uguale di una sospensione al 5 per innesco (primers), di polarita© opposta, si appaiano alle
cento V/V di globuli rossi di gruppo B precedentemente loro rispettive sequenze complementari nel DNA che
lavati, per tre volte, con la soluzione di cloruro di sodio.
Incubare le sospensioni a 37 ‘C per 30 min e dopo deve essere amplificato. Le corte regioni a doppia elica
lavare i globuli rossi, per tre volte, con la soluzione di che si formano come risultato dell'accoppiamento spe-
cloruro di sodio. Lasciare le cellule a contatto con un cifico di basi tra i primers e la sequenza complementare
reattivo polivalente anti-globulina umana per 30 min. di DNA, delimitano il segmento di DNA che deve
Esaminare, senza centrifugare, ciascuna sospensione al essere amplificato e servono come posizioni di partenza
microscopio per evidenziare l'agglutinazione. per le sintesi in vitro di DNA mediante una DNA-poli-
merasi termostabile.
L'amplificazione del DNA attraversa le seguenti fasi:
- denaturazione mediante calore dell'acido nucleico
2.6.21. TECNICHE DI AMPLIFICAZIONE

DELL'ACIDO NUCLEICO

(sequenza bersaglio) in due catene singole;

1. INTRODUZIONE - appaiamento specifico dei primers alla sequenza ber-
Le tecniche di amplificazione dell'acido nucleico sono saglio in condizioni di reazione adatte;
basate su due differenti approcci: - estensione dei primers, che sono legati ad entrambe le
catene singole, mediane la DNA-polimerasi ad una
1. amplificazione di una sequenza bersaglio di acido temperatura adatta (sintesi del DNA).
nucleico usando, per esempio, la reazione a catena Cicli ripetuti di denaturazione al calore, appaiamento
della polimerasi (PCR), la reazione a catena della dei primers e sintesi del DNA producono un'amplifica-
ligasi (LCR) o l'amplificazione isotermica dell'acido
ribonucleico (RNA), zione esponenziale del segmento di DNA delimitato
dai primers.
2. l'amplificazione di un segnale di ibridazione usando, Il prodotto specifico della PCR, detto unita© di amplifi-
per esempio, per l'acido deossiribonucleico (DNA), cazione o amplicon puo© essere rivelato mediante una
il metodo del DNA ramificato (bDNA). In questo varieta© di metodi di specificita© e di sensibilita© appro-
caso l'amplificazione del segnale si ottiene senza priate.
che l'acido nucleico subisca ripetuti cicli di amplifi-
cazione. 4. MATERIALE IN ESAME
In questo capitolo generale, il metodo della PCR e© A causa dell'alta sensibilita© della PCR, i campioni
descritto come tecnica di riferimento. Metodi alterna- devono essere protetti in modo ottimale dalla contami-
tivi possono essere usati, se soddisfano ai requisiti di nazione esterna con sequenze bersaglio. Il campiona-
qualita© descritti di seguito. mento, la conservazione ed il trasporto del materiale in
esame sono compiuti in condizioni che minimizzano la
2. SCOPO degradazione della sequenza bersaglio. Nel caso di
sequenze bersaglio di RNA, sono necessarie speciali
Questa sezione stabilisce i requisiti per la preparazione precauzioni poichë l'RNA e© altamente sensibile alla
del campione, l'amplificazione in vitro delle sequenze degradazione da parte delle ribonucleasi. Si deve fare
di DNA e la rivelazione del prodotto specifico della particolare attenzione poichë alcuni dei reattivi
PCR. Con l'aiuto della PCR, possono essere rivelate aggiunti, come anticoagulanti o conservanti, possono
sequenze definite di DNA. Possono essere rivelate interferire con la procedura di saggio.

208
 Tecniche di amplificazione dell'acido nucleico

inoizircserP
5. METODO DI SAGGIO - il tipo di DNA-polimerasi, la composizione del tam-

ilareneG
pone e il volume di reazione usato per l'amplifica-
5.1. Prevenzione della contaminazione zione;
Il rischio di contaminazione esige una segregazione - il tipo di apparecchio per PCR usato e la velocita© di
stretta delle aree che dipende dal materiale trattato e variazione della conducibilita© termica tra l'apparec-

isilanA id
dalla tecnologia usata. I punti da considerare includono chio, la provetta di reazione ed il fluido di reazione.

idoteM
il movimento e l'abbigliamento del personale, il flusso
del materiale, il rifornimento di aria e le procedure di 5.4. Rivelazione

decontaminazione. L'amplicon generato dalla PCR puo© essere identificato

Il sistema dovrebbe essere suddiviso in compartimenti chimicadimensione,
dalla dalla sequenza, dalla modificazione

irotinetnoC
/ ilairetaM
quali: o da una combinazione di questi parametri.
La caratterizzazione per dimensione puo© essere otte-
^ area per la miscela madre (dove e© trattato esclusiva- nuta mediante elettroforesi su gel (usando agarosio o
mente materiale esente da sequenze bersaglio che gel di poliacrilammide o elettroforesi capillare) o
possano agire da stampo, per esempio primers, tam- mediante cromatografia su colonna (per esempio
poni, ecc.), HPLC). La caratterizzazione in base alla composizione

ivittaeR
^ area pre-PCR (dove sono manipolati i reattivi, i cam- della sequenza puo© essere ottenuta mediante ibrida-
pioni e i controlli), zione specifica di sonde aventi una sequenza comple-
mentare alla sequenza bersaglio o mediante segmenta-
^ area di amplificazione in PCR (dove il materiale zione del materiale amplificato che riflette i siti di
amplificato e© manipolato in un sistema chiuso), restrizione enzimatica specifici del bersaglio. La carat-

itnemogrA
ilareneG
^ area di rivelazione post-PCR (l'unica area dove il terizzazione mediante modificazione chimica puo©
materiale amplificato e© manipolato in un sistema essere ottenuta, per esempio, con l'incorporazione di
aperto). un fluoroforo negli amplicons e la successiva rivelazione
della fluorescenza conseguente all'eccitazione.

eifargonoM
La rivelazione degli amplicons puo© anche essere otte-

ilareneG
5.2. Preparazione del campione

Quando si preparano i campioni, e© necessario che la nuta usando sonde marcate per permettere una succes-
sequenza bersaglio che deve essere amplificata sia effi- siva rivelazione radio-isotopica o immuno-enzimatica.
cientemente estratta o liberata dal materiale in esame 6. VALUTAZIONE E INTERPRETAZIONE DEI
in maniera riproducibile e in modo da rendere possibile RISULTATI

ehcituecamraF
l'amplificazione nelle condizioni di reazione scelte. Pos-
sono essere impiegate una varieta© di procedure di estra- Si ottiene un risultato valido in un saggio solo se il con-

emroF
zione fisico-chimiche e/o procedure di arricchimento. trollo(i) positivo e© inequivocabilmente positivo e il con-
Additivi presenti nel materiale in esame possono inter- trollo(i)
causa
negativo e© inequivocabilmente negativo. A
dell'altissima sensibilita© del metodo PCR e del
ferire con la PCR. Le procedure descritte nel capi- rischio inerente di contaminazione, e© necessario confer-
tolo 7.3.2 devono essere usate come controllo per la mare risultati positivi ripetendo la procedura
eiretaM
di saggio

emirP
presenza di inibitori che derivano dal materiale in completa in doppio, dove possibile su una nuova ali-
esame. quota del campione. Il campione e© considerato positivo
Nel caso di sequenze di RNA che funzionano da se almeno uno dei saggi ripetuti da© un risultato posi-
stampo, bisogna aver cura di evitare l'attivita© delle ribo- tivo.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

nucleasi.
7. ASSICURAZIONE DELLA QUALITA'
5.3. Amplificazione
7.1. Convalida del sistema di dosaggio PCR

L'amplificazione in PCR della sequenza bersaglio e© Il programma di convalida deve includere la convalida
ehcitapoemO

condotta in condizioni di ciclo ottimizzate (profilo di

inoizaraperP

della strumentazione e del metodo PCR impiegato.

temperatura per la denaturazione del DNA a doppia Dovrebbe essere fatto riferimento alle linee guida ICH
elica, appaiamento ed estensione dei primers; tempi di (Q2B) Validation of Analytical Method: Methodology.
incubazione a temperature selezionate; velocita© di Per la convalida di un saggio di PCR sono indispensa-
variazione delle temperature). Questi dipendono da bili appropriate preparazioni di riferimento di lavoro
vari parametri come: ufficiali o preparazioni di riferimento interne calibrate
ecidnI

- la lunghezza e la composizione in basi dei primers e sugli Standard Internazionali per le sequenze bersaglio
delle sequenze bersaglio; per le quali sara© usato il sistema di saggio.

209
Tecniche di amplificazione dell'acido nucleico

Durante la convalida deve essere determinato il valore quella della sequenza bersaglio da esaminare, ma gli
soglia positivo. Il valore soglia positivo e© definito come amplicons devono essere chiaramente distinguibili.
il numero minimo di sequenze bersaglio per campione I controlli interni devono essere dello stesso tipo di
di volume che puo© essere rivelato nel 95 per cento dei acido nucleico (DNA/RNA) del materiale che deve
saggi. Il valore soglia positivo dipende da fattori corre- essere esaminato. Il controllo interno e© aggiunto di pre-
lati come il volume del campione estratto e l'efficacia ferenza al materiale in esame prima dell'isolamento
della metodologia di estrazione, la trascrizione del dell'acido nucleico e quindi agisce come un controllo
RNA bersaglio nel DNAc, il processo di amplificazione globale (estrazione, trascrizione inversa, amplifica-
e la rivelazione. zione, rivelazione).
Per definire il limite di rivelazione del sistema di dosag- 7.4. Valutazione esterna della qualita©

gio, deve essere fatto riferimento al punto di interru- La partecipazione a programmi di valutazione esterna
zione positivo per ciascuna sequenza bersaglio e al della qualita© e© una importante procedura di assicura-
risultato del saggio al di sopra e al di sotto del valore zione della qualita© della PCR per ciascun laboratorio e
soglia positivo. per ciascun operatore.
La seguente sezione e© data solo per informazione.
7.2. Controllo di qualita© dei reattivi

Tutti i reattivi cruciali per la metodologia usata devono LINEE GUIDA SULLA CONVALIDA DELLE
essere controllati prima dell'uso durante l'uso routina- TECNICHE DI AMPLIFICAZIONE DELL'ACIDO
rio. La loro accettazione/eliminazione e© basata su cri- NUCLEICO (NAT) PER LA RIVELAZIONE
teri di qualita© predefiniti. DELL'RNA DEL VIRUS DELL'EPATITE C (HCV)
NELLE MISCELE DI PLASMA
I primers sono una componente importante del saggio
PCR e quindi la progettazione della loro sequenza, la 1. SCOPO
purezza e la convalida del loro uso in un dosaggio La maggioranza delle procedure analitiche di amplifi-
PCR richiede attenzione. Ogni nuovo lotto di primers e© cazione degli acidi nucleici (NAT) sono saggi qualita-
saggiato per specificita© , efficienza di amplificazione e tivi (quantali) per evidenziare la presenza di acido
assenza di impurita© inibitorie prima dell'accettazione. nucleico; sono disponibili alcuni saggi quantitativi
I primers possono essere modificati (per esempio, con (interni o commerciali). Per la rivelazione della conta-
la coniugazione con un fluoroforo o un antigene) in minazione delle miscele di plasma con RNA dell'HCV,
modo da permettere l'uso di un metodo specifico di i saggi qualitativi sono adeguati e possono essere consi-
rivelazione dell'amplicon, purchë tali modificazioni derati come un saggio limite per il controllo delle impu-
non inibiscano l'accurata ed efficiente amplificazione rezze come descritto in Pharmeuropa, Dicembre 1999,
della sequenza bersaglio. Techinical Guide for the elaboration of monofraphs,
7.3. Controlli da effettuare in ogni seduta analitica Chapter III ``Validation of analytic procedures''. Que-
7.3.1. Controlli esterni ste linee guida descrivono metodi per convalidare solo
le procedure di analisi qualitativa NAT al fine di valu-
Per minimizzare il rischio di contaminazione e per assi- tare la contaminazione delle miscele di plasma con
curare sensibilita© adeguata, in ciascun saggio PCR sono RNA dell'HCV. Quindi, le due caratteristiche conside-
inclusi i seguenti controlli esterni: rate come le piu© importanti per la convalida della pro-
^ controllo positivo: contiene un numero definito di cedura analitica sono la specificita© e il limite di rivela-
copie della sequenza bersaglio, il cui numero e© deter- zione. In aggiunta, dovrebbe essere valutata la robu-
minato individualmente per ciascun sistema di stezza della procedura analitica.
dosaggio ed indicato come un multiplo del valore Tuttavia, questo documento puo© anche essere usato
soglia positivo del sistema di dosaggio; come base per la convalida di NAT in generale.
^ controllo negativo: un campione della stessa matrice Per lo scopo di questo documento, una procedura anali-
nel quale l'assenza di sequenze bersaglio sia gia© stata tica e© definita come la procedura completa a partire
dimostrata. dall'estrazione dell'acido nucleico, fino alla rivelazione
dei prodotti amplificati.
7.3.2. Controllo interno Se sono usati kit commerciali per una parte o per tutta
I controlli interni sono sequenze di acido nucleico defi- la procedura analitica, punti di convalida gia© trattati e
nite e contenenti i siti di legame del primer. I controlli documentati dal produttore del kit possono sostituire
interni devono essere amplificati con efficacia simile a la convalida da parte degli utilizzatori. Tuttavia, la pre-

210
 Tecniche di amplificazione dell'acido nucleico

inoizircserP
stazione del kit rispetto all'uso che se ne intende fare mente risultati qualitativi. Il numero dei risultati possi-

ilareneG
deve essere dimostrata dagli utilizzatori (per esempio, bili e© limitato a due, o positivo o negativo. Benchë sia
limite di rivelazione, robustezza, contaminazione cro- raccomandata la determinazione del limite di rivela-
ciata). zione, per scopi pratici, deve essere determinato un
valore soglia positivo per la procedura analitica NAT.
2. SPECIFICITAé

isilanA id
Il valore soglia positivo (come definito nel capitolo

idoteM
La specificita© e© la capacita© di valutare inequivocabil- generale 2.6.21) e© il numero minimo di sequenze bersa-
mente l'acido nucleico in presenza dei componenti che glio per volume di campione che puo© essere rivelato
ci si aspetta possano essere presenti. nel 95 per cento dei saggi. Questo valore soglia positivo
e© influenzato dalla distribuzione dei genomi virali nei
La specificita© delle procedure analitiche NAT dipende

irotinetnoC
/ ilairetaM
singoli campioni in esame e da fattori come l'efficienza
dalla scelta dei primers, la scelta della sonda (per l'ana- enzimatica e puo© comportare differenti valori soglia al
lisi del prodotto finale) e il rigore delle condizioni di 95 per cento per una singola seduta analitica.
saggio (per entrambe le fasi di amplificazione e di rive- Per determinare il valore soglia positivo, una serie di
lazione). diluizioni di un reattivo di lavoro o del virus dell'epatite
Quando si progettano i primers e le sonde deve essere C BRP, che e© stato calibrato rispetto allo Standard

ivittaeR
verificata la specificita© dei primers e delle sonde di rive- Internazionale dell'O.M.S. dell'HCV 96/790, deve
lare solo l'RNA dell'HCV confrontando le sequenze essere sottoposta a saggio in giorni differenti per esami-
scelte con le sequenze pubblicate nelle banche dati. Per nare variazioni tra i saggi. Almeno 3 serie di diluizioni
l'HCV, i primers (e le sonde) saranno normalmente indipendenti devono essere sottoposte a saggio con un

itnemogrA
scelti dalle aree della regione non codificante al 5' del

ilareneG
numero sufficiente di repliche a ciascuna diluizione per
genoma di HCV che sono altamente conservate per un numero totale di 24 risultati di saggio per ciascuna
tutti i genotipi. diluizione per permettere un'analisi statistica dei risul-
Il prodotto amplificato deve essere identificato inequi- tati.
vocabilmente mediante l'uso di uno tra i tanti metodi Per esempio, un laboratorio potrebbe sottoporre a sag-

eifargonoM

ilareneG
come amplificazione con primers localizzati su gio 3 serie di diluizioni in giorni differenti con 8 repli-
sequenze interne, analisi mediante restrizione enzima- che di ciascuna diluizione, 4 serie di diluizioni in giorni
tica, sequenziamento o ibridazione con una sonda spe- differenti con 6 repliche di ciascuna diluizione, o 6 serie
cifica. di diluizioni in giorni differenti con 4 repliche di cia-

ehcituecamraF
Per poter convalidare la specificita© della procedura scuna diluizione. Per limitare il numero di diluizioni ad
un livello maneggevole, si deve eseguire un saggio preli-

emroF
analitica, almeno 100 miscele di plasma negative per
l'RNA di HCV devono essere sottoposte a saggio e minare (usando, per es. diluizioni logaritmiche del cam-
dimostrate non reattive. Campioni adatti di miscele pione di miscela di plasma) in modo da ottenere un
non reattive sono disponibili presso l'EDQM. valore soglia positivo preliminare (per es. la diluizione
piu© alta che da© un segnale positivo). L'intervallo delle
La capacita© della procedura analitica di rivelare tutti i
eiretaM
diluizioni puo© essere poi scelto intorno al valore soglia

emirP
genotipi dell'HCV dipendera© di nuovo dalla scelta dei determinato preliminarmente (usando, per es., un fat-
primers, delle sonde e dei parametri di reazione. Questa tore di diluizione uguale o inferiore a 0,5 log e una
capacita© dovrebbe essere dimostrata usando insiemi di miscela di plasma negativa come matrice di diluizione).
riferimento caratterizzati. Tuttavia, vista la difficolta© La concentrazione dell'RNA di HCV che puo© essere
ehcituecamraF
inoizaraperP

nell'ottenere campioni di alcuni genotipi (per esempio

ehcificepS

rivelata nel 95 per cento dei saggi puo© poi essere calco-
il genotipo 6), i genotipi a prevalenza maggiore (per lata usando una valutazione statistica appropriata.
esempio in Europa i genotipi 1 e 3) dovrebbero essere Questi risultati possono servire anche per dimostrare la
rivelati ad un livello appropriato. variazione intra-dosaggio e la variazione giorno per
ehcitapoemO
inoizaraperP

3. LIMITE DI RIVELAZIONE giorno della procedura analitica.

Il limite di rivelazione di una singola procedura anali- 4. ROBUSTEZZA
tica e© la quantita© piu© bassa di acido nucleico in un cam- La robustezza di una procedura analitica e© una misura
pione che puo© essere rivelata, ma non necessariamente della sua capacita© di non essere influenzata da varia-
quantificata come valore esatto. zioni piccole ma deliberate dei parametri del metodo e
ecidnI

La procedura analitica NAT usata per la rivelazione fornisce un'indicazione della sua affidabilita© durante
dell'RNA di HCV nelle miscele di plasma da© general- l'uso normale.

211
Fattori della coagulazione attivati

La valutazione della robustezza deve essere presa in di HCV calibrato contro lo Standard Internazionale
considerazione durante la fase dello sviluppo. HCV 96/790 dell'O.M.S.) puo© essere considerato una
Dovrebbe dimostrare l'affidabilita© della procedura ana- verifica soddisfacente dell'idoneita© del sistema ed assi-
litica rispetto alle variazioni deliberate dei parametri cura che l'affidabilita© della procedura analitica sia man-
del metodo. Per la NAT, piccole variazioni nei parame- tenuta ogni volta che viene usata.
tri del metodo possono essere cruciali. Tuttavia, la
robustezza del metodo puo© essere dimostrata durante Qualificazione tecnica: si deve eseguire una installa-
il suo sviluppo quando piccole variazioni nelle concen- zione appropriata e un programma di qualificazione
trazioni dei reattivi, per es. MgCl2, primers o dNTP, operativa per ciascuna parte critica dell'apparecchia-
sono sottoposte a saggio. Per dimostrare la robustezza, tura usata. La conferma della prestazione della proce-
dovrebbero essere sottoposte a saggio e trovate positive dura analitica dopo il cambio dell'apparecchiatura cri-
almeno 20 miscele di plasma, selezionate a caso, nega- tica (per es. apparecchio per PCR) deve essere docu-
tive per l'RNA di HCV e intenzionalmente contaminate mentata mediante conduzione di un saggio parallelo
con l'RNA di HCV ad una concentrazione finale pari su 8 repliche di una miscela di plasma intenzionalmente
a 3 volte il valore soglia al 95 per cento preventiva- contaminato con RNA di HCV ad una concentrazione
mente determinato. finale pari a 3 volte il valore soglia al 95 per cento pre-
Possono anche sorgere problemi con la robustezza per i viamente determinato. Tutti i risultati devono essere
metodi che usano una fase di ultracentrifugazione ini- positivi.
ziale prima dell'estrazione dell'RNA virale. Quindi, Qualificazione dell'operatore: si deve avviare un pro-
per verificare la robustezza di tali metodi, devono gramma di qualificazione appropriato per ciascun ope-
essere sottoposte a saggio e trovate positive almeno ratore che effettua tali saggi. Per verificare la riuscita
20 miscele di plasma contenenti livelli diversi di RNA dell'addestramento ciascun operatore deve sottoporre
di HCV ma prive di anticorpi specifici per l'HCV. a saggio almeno 8 repliche di una miscela di plasma
La prevenzione della contaminazione crociata deve intenzionalmente contaminato con RNA di HCV ad
essere dimostrata mediante rivelazione accurata di un una concentrazione finale pari a 3 volte il valore soglia
insieme di almeno 20 campioni costituito da campioni al 95 per cento previamente determinato. Questo saggio
alternati di miscele di plasma negative e di miscele di (8 repliche) deve essere ripetuto due volte in due giorni
plasma negative intenzionalmente contaminate con alte separati, per es. un totale di 24 saggi effettuati in tre
concentrazioni di HCV (almeno4 102 volte il valore giorni differenti. Tutti i risultati devono essere positivi.
soglia al 95 per cento o almeno 10 UI/ml).
5. ASSICURAZIONE DELLA QUALITAé 2.6.22. FATTORI DELLA COAGULAZIONE ATTI-

Per i saggi biologici come il NAT, possono sorgere pro- VATI

blemi specifici che possono influenzare sia la convalida

sia l'interpretazione dei risultati. Le procedure di sag- Quando applicabile, determinare la quantita© di eparina
gio devono essere descritte in modo preciso sotto forma presente (2.7.12) e neutralizzarla aggiungendo protamina
di procedure operative standard (SOP). Queste dovreb- solfato R (10 mg di protamina solfato neutralizza 1 U.I. di
bero comprendere: eparina). Preparare delle diluizioni 1:10 ed 1:100 usando
^ il modo di campionamento (tipo di contenitore, ecc.), tampone tris(idrossimetil)amminometano soluzione a
^ la preparazione di mini-miscele (se del caso), pH 7,5R.Porreab.m.a 37 ‘Cunaseriediprovettedipoli-
stirene ed aggiungere a ciascuna di esse 0,1 ml di plasma
^ le condizioni di conservazione prima dell'analisi, poverodipiastrineR e 0,1 ml di una diluizione appropriata
^ l'esatta descrizione delle condizioni di saggio, com- di cefalina reattivo R o di sostituto piastrinico R. Lasciare
prese le precauzioni prese per prevenire la contami- a riposo per 60 s. Aggiungere a ciascuna provetta o 0,1 ml
nazione crociata o la distruzione dell'RNA virale, i di una delle due diluizioni o 0,1 ml della soluzione tam-
reattivi e le preparazioni di riferimento usate, pone (provetta di controllo). A ciascuna provetta aggiun-
^ l'esatta descrizione dell'apparecchiatura usata, gere immediatamente 0,1 ml di una soluzione (3,7 g/l) di
^ le formule dettagliate per il calcolo dei risultati, com- calcio cloruro R (riscaldata a 37 ‘C) e misurare il tempo
presa la valutazione statistica. che intercorre tra l'aggiunta del calcio cloruro e la forma-
zione del coagulo, entro 30 min dall'allestimento della
L'uso di un adatto controllo del saggio (per es. una diluizioneiniziale.Ilsaggioe© validosoloseiltempodicoa-
diluizione appropriata di virus dell'epatite C BRP o pla- gulazionemisuratoperlaprovettadicontrolloe© compreso
sma intenzionalmente contaminato con un campione tra 200 s e 350 s.

212
 2.7. Dosaggi biologici

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
2.7. Dosaggi biologici . . . . . . . . . . . . . . . 2.7.11. Dosaggio del fattore IX della coagu-

idoteM
215
2.7.1. Metodi immunochimici . . . . . . . . . . 215 lazione del sangue umano . . . . . . 234
2.7.2. Dosaggio microbiologico degli anti- 2.7.12. Dosaggio dell'eparina nei concentrati
biotici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 217 dei fattori della coagulazione . . . . 235
2.7.3. Dosaggio della corticotropina . . . . . 224 2.7.13. Dosaggio dell'immunoglobulina uma-

irotinetnoC
/ ilairetaM
2.7.4. Dosaggio del fattore VIII della coa- na anti-D . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 235
gulazione del sangue umano . . . . 224 2.7.14. Dosaggio del vaccino dell'epatite A 236
2.7.5. Dosaggio dell'eparina . . . . . . . . . . . 226 2.7.15. Dosaggio del vaccino dell'epatite B
(DNAr) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 237
2.7.6. Dosaggio del vaccino difterico adsor- 2.7.16. Dosaggio del vaccino pertossico acel-
bito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 227 lulare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 238

ivittaeR
2.7.7. Dosaggio del vaccino pertossico . . . 229 2.7.17. Dosaggio dell'antitrombina III umana 239
2.7.8. Dosaggio del vaccino tetanico adsor- 2.7.18. Dosaggio del fattore II della coagula-
bito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 230 zione del sangue umano . . . . . . . . 239
2.7.9. Saggio della funzione Fc dell'immu- 2.7.19. Dosaggio del fattore X della coagula-

itnemogrA
ilareneG
noglobulina . . . . . . . . . . . . . . . . . 231 zione del sangue umano . . . . . . . . 240
2.7.10. Dosaggio del fattore VII della coagu- 2.7.20. Dosaggio in vivo del vaccino inatti-
lazione del sangue umano . . . . . . 233 vato della poliomelite . . . . . . . . . . 241

eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Metodi immunochimici

inoizircserP
METODI NEI QUALI SI UTILIZZA UN ANTI-

ilareneG
2.7. DOSAGGI BIOLOGICI
GENE NON MARCATO O UN ANTICORPO NON
2.7.1. METODI IMMUNOCHIMICI
MARCATO
I metodi immunochimici sono basati sul legame

isilanA id
selettivo, reversibile e non covalente tra gli antigeni

idoteM
Metodi di immunoprecipitazione

e gli anticorpi. Questi metodi sono impiegati per I metodi di immunoprecipitazione comprendono le rea-
rivelare o quantificare gli antigeni e gli anticorpi. zioni di flocculazione e di precipitazione. Quando una
La formazione del complesso antigene-anticorpo soluzione di un antigene e© mescolata con il suo anti-
puo© essere rivelata e la quantita© del complesso for- corpo corrispondente in condizioni appropriate, i reat-

irotinetnoC
/ ilairetaM
mato puo© essere misurata con tecniche varie. Le indi- tivi formano aggregati che flocculano o precipitano.
cazioni di questo metodo generale si applicano ai Il rapporto tra le quantita© dei reattivi che producono il
metodi immunochimici che usano reattivi marcati o tempo di flocculazione piu© corto o la precipitazione
no, a seconda del caso. piu© netta e© chiamato rapporto ottimale ed e© general-
I risultati dei metodi immunochimici dipendono dalle mente prodotto da quantita© equivalenti di antigene e

ivittaeR
condizioni sperimentali, dalla natura e della qualita© di anticorpo. L'immunoprecipitazione puo© essere valu-
dei reattivi usati. Eé essenziale standardizzare i compo- tata visivamente o mediante tecniche di diffusione della
nenti di un dosaggio immunologico e usare, se disponi- luce (dosaggio per nefelometria o turbidimetria).
Un aumento di sensibilita© puo© essere ottenuto usando
bili, preparazioni di riferimento internazionali per i come reattivi particelle rivestite di antigene o di anti-

itnemogrA
dosaggi immunologici.

ilareneG
corpo (per es. il lattice).
I reattivi necessari per molti metodi immunologici sono Nei metodi di flocculazione si usano generalmente
disponibili in commercio come kits di dosaggio, cioe© diluizioni graduali di uno dei reattivi mentre nei metodi
un insieme che comprende i reattivi (in particolare l'an- di immunodiffusione (ID) la diluizione e© ottenuta
tigene e l'anticorpo) ed i materiali destinati alla deter-

eifargonoM
mediante diffusione in un gel: si ottengono gradienti di

ilareneG
minazione in vitro di una sostanza specifica, oltre alle concentrazione di uno o entrambi i reattivi in modo da
istruzioni per il loro uso corretto. I kits sono usati in creare delle zone nel gel dove il rapporto dei reattivi
accordo con le istruzioni del produttore; e© importante favorisce la precipitazione. Mentre i metodi di floccula-
accertare che essi siano appropriati all'analisi della zione si effettuano in provette, i metodi di immunodif-

ehcituecamraF
sostanza da esaminare con particolare riferimento alla fusione possono essere effettuati usando supporti diffe-
renti come provette, piastre, celle o camere.

emroF
selettivita© ed alla sensibilita© . Direttive riguardanti i kits
per dosaggi immunologici sono fornite dall'Organizza- Nel caso in cui il sistema di immunoprecipitazione con-
zione Mondiale della Sanita© , Serie Rapporti Tecnici siste di un antigene che si combina con il corrispon-
658 (1981). dente anticorpo, il sistema e© definito semplice; quando
esso prevede reattivi correlati ma non identici dal punto
eiretaM

emirP
METODI NEI QUALI SI UTILIZZA UN ANTI- di vista sierologico il sistema e© complesso e quando sono
GENE MARCATO O UN ANTICORPO MARCATO previsti alcuni reattivi non correlati dal punto di vista
sierologico il sistema e© multiplo.
I metodi che usano sostanze marcate possono impie-
ehcituecamraF

Nei metodi di diffusione semplice si stabilisce un gra-

inoizaraperP

ehcificepS

gare marcatori appropriati come enzimi, fluorofori, diente di concentrazione per uno solo dei reattivi che
luminofori e radioisotopi. Nel caso in cui il marcatore diffonde da una sorgente esterna nel gel contenente il
sia un radioisotopo il metodo e© descritto come un reattivo corrispondente ad una concentrazione relativa-
``dosaggio radioimmunologico''. Le raccomandazioni mente bassa.
ehcitapoemO

per la misura della radioattivita© riportate nella mono-

inoizaraperP

grafia Preparazioni radiofarmaceutiche (0125) si ap- L'immunodiffusione radiale singola (IDRS) e© una sem-
plice tecnica quantitativa di immunodiffusione.
plicano ai dosaggi immunologici che impiegano i Quando si stabilisce l'equilibrio tra il reattivo esterno e
radioisotopi. L'intero lavoro con i materiali radioat- quello interno, l'area di precipitazione circolare, che si
tivi deve essere fatto in conformita© con la legislazione origina a partire dal reattivo esterno, e© direttamente
nazionale e con norme di buona pratica, accettate proporzionale alla quantita© di antigene applicata ed
internazionalmente, per la protezione dai rischi di
ecidnI

inversamente proporzionale alla concentrazione del-

radiazione. l'anticorpo nel gel.

215
Metodi immunochimici

Nei metodi di diffusione doppia i gradienti di concentra- sta di pozzetti allineati. Il titolo del materiale in esame
zione si stabiliscono per entrambi i reattivi. Sia l'antigene puo© essere determinato alla diluizione piu© alta che pre-
che l'anticorpo diffondono da siti distinti in un gel ini- senta una linea di precipitazione.
zialmente neutro dal punto di vista immunologico. Sono note diverse modificazioni dei metodi di immu-
I metodi comparativi di diffusione doppia sono usati per il noelettroforesi crociata e di elettroimmunodosaggio.
confronto qualitativo di diversi antigeni rispetto ad un Altre tecniche combinano la separazione degli antigeni
anticorpo appropriato e viceversa. Il confronto e© basato per dimensioni molecolari e per proprieta© sierologiche.
sulla presenza o l'assenza di interazione tra le zone di
precipitazione. Si possono distinguere reazioni di iden- Visualizzazione e caratterizzazione delle linee di immu-

tita© , non identita© o parziale identita© antigene/anticorpo. noprecipitazione

Possono essere effettuate mediante coloranti selettivi e

Metodi immunoelettroforetici
non selettivi, mediante fluorescenza, marcatura con
L'immunoelettroforesi (IE) e© una tecnica qualitativa che enzimi o isotopi o mediante altre tecniche appropriate.
combina due metodi: l'elettroforesi su gel seguita dal- I metodi di colorazione selettiva sono generalmente
l'immunodiffusione. eseguiti per la caratterizzazione di sostanze non protei-
L'immunoelettroforesi crociata e© una modificazione del che nei precipitati.
metodo di immunoelettroforesi. Eé appropriata sia per Nei gel traslucenti come l'agar o l'agarosio, la linea di
l'analisi qualitativa che quantitativa. La prima parte precipitazione e© nettamente visibile nel gel purchë la
della procedura e© una normale elettroforesi su gel dopo concentrazione di ciascun reattivo sia appropriata.
la quale una striscia longitudinale di gel, contenente le
frazioni separate da determinare, e© tagliata e trasferita CONVALIDA DEL METODO
su un'altra piastra. L'elettroforesi nella seconda dire- Criteri di convalida
zione e© effettuata perpendicolarmente alla precedente Un metodo immunochimico quantitativo e© valido solo
corsa elettroforetica in un gel contenente l'anticorpo se:
corrispondente all'antigene ad una concentrazione rela-
tivamente piu© bassa. Per una data concentrazione di 1) l'anticorpo o l'antigene non discrimina in modo
anticorpo ed un dato spessore del gel, la relazione tra significativo tra la sostanza in esame e lo standard.
l'area dei rispettivi picchi di precipitazione e la quantita© Per un reattivo marcato, il reattivo corrispondente
di antigene corrispondente e© lineare. non discrimina significativamente tra il composto
L'elettroimmunodosaggio, spesso riportato come immu- marcato e non marcato;
noelettroforesi a cono, e© un metodo quantitativo rapido 2) il metodo non e© influenzato dall'effetto matrice, cioe©
per la determinazione di antigeni con una carica che da qualsiasi componente del campione in esame o
differisce da quella degli anticorpi e viceversa. L'elettro- dai suoi eccipienti che possono differire tra i cam-
foresi dell'antigene che si deve determinare e© effettuata pioni. Questi componenti possono essere rappresen-
in un gel contenente una concentrazione relativamente tati da alte concentrazioni di altre proteine, sali,
piu© bassa dell'anticorpo corrispondente. Il materiale in conservanti o contaminanti con attivita© proteolitica;
esame e le diluizioni dell'antigene standard usato per 3) il limite di quantificazione e© inferiore ai criteri di
la curva di taratura sono introdotti in differenti pozzetti accettazione indicati nella singola monografia;
del gel. Durante l'elettroforesi si formano delle zone di 4) la precisione del dosaggio e© tale che la varianza dei
precipitazione a forma conica che migrano a partire risultati risponde ai requisiti indicati nella singola
dai pozzetti. Il fronte del precipitato diventa staziona- monografia;
rio quando l'antigene non e© piu© in eccesso. Per una data 5) l'ordine nel quale il dosaggio e© effettuato non porta
concentrazione di anticorpo, la relazione tra la distanza ad errori sistematici.
percorsa dal precipitato e la quantita© di antigene appli- Metodi di convalida
cata e© lineare.
La contro-immunoelettroforesi e© un metodo quantita- Allo scopo di verificare questi criteri, il procedimento
tivo rapido che permette di stabilire gradienti di con- di convalida comprende i seguenti elementi:
centrazione di antigeni esterni e di anticorpi esterni in 1) il dosaggio si effettua almeno in triplicato;
un campo elettrico a seconda delle diverse cariche. 2) il dosaggio comprende almeno tre diluizioni diffe-
Le diluizioni dello standard per la taratura e le dilui- renti della preparazione standard e tre diluizioni
zioni del materiale in esame sono introdotte in una serie delle preparazioni in esame che si presume abbiano
di pozzetti allineati nel gel ed una quantita© fissa del un'attivita© simile a quelle della preparazione
reattivo corrispondente e© introdotta in una serie oppo- standard;

216
 Dosaggio microbiologico degli antibiotici

inoizircserP
3) l'ordine di dosaggio e© casuale; Queste condizioni devono essere verificate mediante

ilareneG
4) se il campione in esame e© sotto forma di siero o for- saggi di validita© per una data probabilita© , generalmente
mulato con altri componenti, lo standard e© prepa- P = 0,05. Si possono usare altri modelli matematici
rato allo stesso modo; come il modello a rapporto di pendenza, purchë questa
5) il saggio comprende la misurazione del legame non prova di validita© sia dimostrata.

isilanA id
specifico del reattivo marcato; Salvo indicazione diversa nella monografia, i limiti fidu-

idoteM
6) per il dosaggio immunologico per competizione: ciali di errore (P = 0,95) del dosaggio dell'attivita© biolo-
(a) si determina il legame massimo (competizione gica non sono inferiori al 95 per cento e non sono supe-
zero); riori al 105 per cento dell'attivita© biologica misurata.
(b) le diluizioni coprono l'intero intervallo di rispo- Effettuare il dosaggio con il metodo A o con il me-

irotinetnoC
/ ilairetaM
sta a partire dai valori piu© vicini al legame non spe- todo B.
cifico fino al legame massimo, preferibilmente per
entrambe le preparazioni standard ed in esame. A. METODO PER DIFFUSIONE
CALCOLO STATISTICO Liquefare un terreno di coltura appropriato alle condi-
zioni del dosaggio ed inocularlo ad una temperatura

ivittaeR
Per analizzare i risultati, le curve di risposta per la pre- appropriata, per esempio 48-50 ‘C per le forme vegeta-
parazione in esame e la preparazione standard possono tive, con una quantita© nota di una sospensione di
essere stimate mediante i metodi descritti nel capitolo microrganismi sensibili all'antibiotico da esaminare, in
5.3. Analisi statistica dei risultati dei dosaggi e saggi bio- modo che (con le concentrazioni di antibiotico usate

itnemogrA
logici. per il dosaggio) si formino zone di inibizione di diame-

ilareneG
Un non parallelismo significativo indica che l'anticorpo tro appropriato e nettamente definite. Porre immedia-
o l'antigene discrimina tra la preparazione in esame e tamente in piastre di Petri o in piastre rettangolari
la preparazione standard ed i risultati non sono validi. ampie una quantita© del terreno di coltura inoculato in
Nei dosaggi immunologici per competizione, i valori modo da formare uno strato uniforme dello spessore

eifargonoM
per un legame non specifico e di competizione massima di 2-5 mm. Alternativamente, il terreno di coltura puo©

ilareneG
a concentrazione elevata della preparazione in esame o essere composto da due strati di cui viene inoculato
della preparazione standard non devono essere signifi- solo quello superiore. Conservare le piastre in modo
cativamente diversi. Le differenze possono indicare che non si verifichi una crescita apprezzabile o la morte
effetti dovuti alla matrice, alla inibizione del legame o dei microrganismi prima che le piastre vengano usate

ehcituecamraF
alla degradazione del tracciante. ed in modo che la superficie del terreno di coltura sia

emroF
asciutta al momento dell'uso.
Preparare delle soluzioni della sostanza di riferimento e
dell'antibiotico da esaminare a concentrazione nota e
2.7.2. DOSAGGIO MICROBIOLOGICO DEGLI

presumibilmente della stessa attivita© usando il solvente

ANTIBIOTICI

L'attivita© biologica di un antibiotico e© valutata con- e la soluzione tampone indicati nella Tabella 2.7.2.-1.
eiretaM

emirP
frontando l'inibizione della crescita di microrganismi Applicare le soluzioni sulla superficie del terreno di col-
sensibili prodotta rispettivamente da concentrazioni tura, per es., in cilindri di porcellana sterili, di acciaio
note dell'antibiotico in esame e da una sostanza di rife- inossidabile o di un altro materiale appropriato o in
rimento. pozzetti preparati nell'agar. Si deve aggiungere lo stesso
ehcituecamraF
inoizaraperP

Le sostanze di riferimento usate nei dosaggi sono volume di soluzione a ciascun cilindro o pozzetto.
ehcificepS

sostanze la cui attivita© e© stata determinata con preci- Alternativamente usare filtri sterili di carta assorbente
sione con riferimento al corrispondente standard inter- di qualita© appropriata; impregnare i dischi con le solu-
nazionale o alla preparazione internazionale di riferi- zioni della sostanza di riferimento o con le soluzioni
mento. dell'antibiotico da esaminare e disporli sulla superficie
ehcitapoemO
inoizaraperP

Il dosaggio deve essere programmato in modo che esso dell'agar.

permetta l'esame della validita© del modello matematico Allo scopo di verificare la validita© del dosaggio, usare
sul quale si basa l'equazione dell'attivita© biologica. almeno tre dosi della sostanza di riferimento e tre dosi
Se si sceglie un modello a linee parallele, le due linee della sostanza da esaminare che hanno la stessa attivita©
logaritmiche dose-risposta (o risposta trasformata) presunta delle dosi della sostanza di riferimento. Eé pre-
della preparazione da esaminare e della preparazione feribile usare una serie di dosi in progressione geome-
ecidnI

di riferimento devono essere parallele; esse devono trica. Nei dosaggi di routine quando e© stata dimostrata
essere lineari nell'intervallo di dosi usate per il calcolo. la linearita© del sistema su un numero appropriato di

217
Dosaggio microbiologico degli antibiotici

esperimenti usando un dosaggio a tre punti, puo© essere tre concentrazioni consecutive tra un gran numero di
sufficiente un dosaggio a due punti in accordo con l'au- concentrazioni, impiegando dosi corrispondenti della
torita© competente. Tuttavia in tutti i casi di disputa soluzione di riferimento e della soluzione dell'antibio-
deve essere applicato il dosaggio a tre punti descritto tico in esame.
precedentemente.
Disporre le soluzioni in ciascuna piastra di Petri o in Distribuire un volume uguale di ciascuna soluzione
ciascuna piastra rettangolare secondo un piano statisti- in provette uguali ed aggiungere a ciascuna provetta
camente appropriato. Nelle piastre di Petri piccole, che un volume uguale del terreno di coltura inoculato
non possono contenere piu© di sei soluzioni, disporre (per es. 1 ml della soluzione e 9 ml del terreno di col-
alternativamente le soluzioni dell'antibiotico da esami- tura).
nare e le soluzioni della sostanza di riferimento, in Preparare contemporaneamente due provette di con-
modo da evitare l'interazione delle soluzioni piu© con- trollo senza antibiotico entrambe contenenti il terreno
centrate. di coltura inoculato e ad una delle quali sono stati
Incubare ad una temperatura appropriata per circa aggiunti immediatamente 0,5 ml di formaldeide R.
18 h. Un periodo di diffusione prima dell'incubazione, Queste provette sono usate per regolare gli strumenti
generalmente 1-4 h a t.a. o a circa 4 ‘C se appropriato, ottici usati per misurare la crescita.
puo© essere usato per minimizzare gli effetti della varia-
zione nel tempo tra l'applicazione delle soluzioni e per Porre tutte le provette, distribuite a caso o secondo un
migliorare la pendenza di regressione. quadrato latino o una disposizione a blocco casuale, in
Misurare i diametri con una precisione almeno di un b.m. o in un altro apparecchio appropriato che per-
0,1 mm o le aree delle zone di inibizione circolare con metta di portare rapidamente tutte le provette alla tem-
altrettanta precisione e calcolare l'attivita© biologica peratura di incubazione appropriata e mantenerle a
usando i metodi statistici appropriati. questa temperatura per 3-4 h, prendendo delle precau-
zioni per assicurare l'uniformita© della temperatura e
Usare in ciascun dosaggio un numero di ripetizioni per tempi di incubazione identici.
dose sufficiente ad assicurare la precisione richiesta.
Il dosaggio puo© essere ripetuto ed i risultati combinati Dopo l'incubazione arrestare la crescita dei microrga-
statisticamente per ottenere la precisione richiesta e nismi aggiungendo 0,5 ml di formaldeide R a ciascuna
per accertare se l'attivita© biologica dell'antibiotico da provetta o mediante riscaldamento e misurare l'opacita©
esaminare non e© inferiore al minimo richiesto. a tre cifre significative usando apparecchi ottici appro-
priati. Alternativamente usare un metodo che permetta
B. METODO TURBIDIMETRICO di misurare l'opacita© di ciascuna provetta esattamente
dopo lo stesso periodo di incubazione.
Inoculare un terreno di coltura appropriato con una
sospensione del microrganismo scelto che ha una sensi- Calcolare l'attivita© biologica usando i metodi statistici
bilita© , nei confronti dell'antibiotico da esaminare, tale appropriati.
da provocare, nelle condizioni del saggio, una inibi-
zione sufficientemente grande della crescita microbica. La linearita© della relazione dose-risposta, trasformata o
Usare una quantita© nota della sospensione scelta in no, e© spesso ottenuta solo per un intervallo molto limi-
modo da ottenere un'opacita© rapidamente misurabile tato. Eé questo intervallo che deve essere usato per cal-
dopo un periodo di incubazione di circa 4 h. colare l'attivita© e deve comprendere almeno tre dosi
Usare il terreno di coltura inoculato immediatamente consecutive allo scopo di permettere di verificare la
dopo la sua preparazione. linearita© . Nei dosaggi di routine dove la linearita© del
sistema e© stata dimostrata su un numero adeguato di
Usare il solvente e la soluzione tampone indicati nella esperimenti usando un dosaggio a tre punti, puo© essere
Tabella 2.7.2.-2 per preparare le soluzioni della sufficiente un dosaggio a due punti in accordo con l'au-
sostanza di riferimento e dell'antibiotico da esaminare torita© competente. Tuttavia in tutti i casi di disputa
aventi una concentrazione nota presumibilmente di deve essere applicato un dosaggio a tre punti.
uguale attivita© . Allo scopo di poter valutare la validita©
del dosaggio, usare almeno tre dosi della sostanza di Usare in ciascun dosaggio un numero di ripetizioni per
riferimento e tre dosi dell'antibiotico da esaminare che dose sufficiente ad assicurare la precisione richiesta.
abbiano la stessa attivita© presunta delle dosi della Il dosaggio puo© essere ripetuto ed i risultati combinati
sostanza di riferimento. Eé preferibile usare una serie di statisticamente per ottenere la precisione richiesta e
dosi in progressione geometrica. Allo scopo di ottenere per accertare che l'attivita© biologica dell'antibiotico da
la linearita© richiesta puo© essere necessario selezionare esaminare non sia inferiore al minimo richiesto.

218
 Dosaggio microbiologico degli antibiotici

inoizircserP
Tabella 2.7.2.-1. - Dosaggio per diffusione

ilareneG
Solvente
Terreno
da usare nella Soluzione
Sostanza di coltura e pH Temperatura
Antibiotico preparazione tampone Microrganismo
di riferimento finale di incubazione
della soluzione (pH)

isilanA id
(6 0,1 unita© di pH)

idoteM
madre

Saccharomyces
Amfotericina B Dimetilfor- cerevisiae
Amfotericina B SCR mammide R pH 10,5 (0,2 M) ATCC 9763 F - pH 6,1 35-37 ‘C
IP 1432-83
Micrococcus luteus

irotinetnoC
/ ilairetaM
Bacitracina zinco Acido NCTC 7743
Bacitracina zinco SCR cloridrico pH 7,0 (0,05 M) CIP 53.160 A - pH 7,0 35-39 ‘C
0,01 M ATCC 10240
Bleomicina solfato Bleomicina
SCR
solfato Acqua R pH 6,8 (0,1 M) Mycobacterium smegmatis
ATCC 607 G- pH 7,0 35-37 ‘C

ivittaeR
Bordetella bronchiseptica B - pH 7,3 35-39 ‘C
NCTC 8344
Colistina solfato Colistina solfato SCR CIP 53.157
Acqua R pH 6,0 (0,05 M) ATCC 4617
Colistimetato sodico Colistimetato sodico Escherichia coli B - pH 7,3 35-39 ‘C
SCR NCIB 8879

itnemogrA
ilareneG
CIP 54.127
ATCC 10536
Bacillus subtilis A - pH 7,9 30-37 ‘C
NCTC 8236
Diidrostreptomicina Diidrostreptomicina CIP 1.83
Acqua R pH 8,0 (0,05 M) Bacillus subtilis A - pH 7,9 30-37 ‘C

eifargonoM
solfato solfato SCR

ilareneG
NCTC 10400
CIP 52.62
ATCC 6633
Eritromicina Bacillus pumilus A - pH 7,9 30-37 ‘C
estolato Metanolo R NCTC 8241

ehcituecamraF
(vedi le mono- CIP 76.18
Eritromicina grafie) pH 8,0 (0,05 M)

emroF
etilsuccinato Eritromicina SCR Bacillus subtilis A - pH 7,9 30-37 ‘C
NCTC 10400
Eritromicina Metanolo R CIP 52.62
stearato ATCC 6633
Bacillus subtilis E - pH 7,9 30-37 ‘C
NCTC 10400

eiretaM

emirP
CIP 52.62
Framicetina solfato Framicetina solfato Acqua R pH 8,0 (0,05 M) ATCC 6633
SCR Bacillus pumilus E - pH 7,9 30-37 ‘C
NCTC 8241
CIP 76.18
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Bacillus pumilus
NCTC 8241 A - pH 7,9 35-39 ‘C
CIP 76.18
Gentamicina solfato Gentamicina solfato Acqua R pH 8,0 (0,05 M) Staphylococcus epidermidis
SCR NCIB 8853 A - pH 7,9 35-39 ‘C
ehcitapoemO

CIP 68.21
inoizaraperP

ATCC 12228
Bacillus subtilis A - pH 7,9 30-37 ‘C
Kanamicina NCTC 10400
monosolfato CIP 52.62
Kanamicina Acqua R pH 8,0 (0,05 M) ATCC 6633
Kanamicina solfato monosolfato SCR Staphylococcus aureus A - pH 7,9 35-39 ‘C
acido NCTC 7447
ecidnI

CIP 53.156
ATCC 6538 P

219
Dosaggio microbiologico degli antibiotici

Segue: Tabella 2.7.2.-1. - Dosaggio per diffusione

Solvente
Terreno
da usare nella Soluzione
Sostanza di coltura e pH Temperatura
Antibiotico preparazione tampone Microrganismo
di riferimento finale di incubazione
della soluzione (pH)
(6 0,1 unita© di pH)
madre

Bacillus pumilus E - pH 7,9 30-37 ‘C

NCTC 8241
CIP 76.18
Neomicina solfato Neomicina solfato Acqua R pH 8,0 (0,05 M) Bacillus subtilis E - pH 7,9 30-37 ‘C
SCR NCTC 10400
CIP 52.62
ATCC 6633
Staphylococcus aureus
Netilmicina solfato Netilmicina
SCR
solfato Acqua R pH 8,0þ0,1 ATCC 6538P A - pH 7,9 32-35 ‘C
CIP 53.156
Candida tropicalis F- pH 6,0 30-37 ‘C
CIP 1433-83
pH 6,0 (0,05 M) NCYC 1393
Nistatina Nistatina SCR Dimetilfor- contenente il 5%
mammide R V/V di dimetilfor- Saccaharomyces cerevisiae F- pH 6,0 30-32 ‘C
mammide R NCYC 87
CIP 1432-83
ATCC 9763
Bordetella bronchiseptica
Polimixina B solfato Polimixina
SCR
B solfato Acqua R pH 6,0 (0,05 M) NCTC 8344
CIP 53.157 B - pH 7,3 35-39 ‘C
ATCC 4617
Micrococcus luteus
Rifamicina sodica Rifamicina sodica Metanolo R pH 7,0 (0,05 M) NCTC 8340 A - pH 6,6 35-39 ‘C
SCR CIP 53.45
ATCC 9341
Bacillus subtilis
Spiramicina Spiramicina SCR Metanolo R pH 8,0 (0,05 M) NCTC 10400 A - pH 7,9 30-32 ‘C
CIP 52.62
ATCC 6633
Bacillus subtilis A - pH 7,9 30-37 ‘C
NCTC 8236
Streptomicina Streptomicina solfato CIP 1,83
solfato SCR Acqua R pH 8,0 (0,05 M) Bacillus subtilis A - pH 7,9 30-37 ‘C
NCTC 10400
CIP 52.62
ATCC 6633
Soluzione al
Tilosina per uso 2,5 per cento Una miscela di
veterinario V/V di meta- metanolo Rdi
40 volumi Micrococcus luteus
Tilosina SCR nolo R in e 60 volumi di NCTC 8340 A - pH 8,0 32-35 ‘C
Tilosina tartrato tampone tampone solu- CIP 53.45
per uso veterinario soluzione zione fosfato ATCC 9341
fosfato 0,1 M 0,1 M a pH 8,0 R
a pH 7,0 R
Bacillus subtilis
NCTC 10400
Tobramicina Tobramicina SCR Acqua R pH 8,0 (0,05 M) CIP 52.62 A - pH 7,9 30-37 ‘C
ATCC 6633
Bacillus subtilis
Vancomicina Vancomicina NCTC 8236
cloridrato cloridrato SCR Acqua R pH 8,0 CIP 52.62 A - pH 8,0 37-39 ‘C
ATCC 6633

220
 Dosaggio microbiologico degli antibiotici

inoizircserP
Tabella 2.7.2.-2. - Dosaggio turbidimetrico

ilareneG
Solvente
Terreno
da usare nella Soluzione
Sostanza di coltura e pH Temperatura
Antibiotico preparazione tampone Microrganismo
di riferimento finale di incubazione
della soluzione (pH)

isilanA id
(6 0,1 unita© di pH)

idoteM
madre

Escherichia coli
Colistina solfato Colistina solfato SCR NCIB 8666
Acqua R pH 7,0 CIP 2.83 C - pH 7,0 35-37 ‘C
Colistimetato sodico Colistimetato sodico ATCC 9637
SCR

irotinetnoC
/ ilairetaM
Klebsiella pneumoniae
Diidrostreptomicina Diidrostrepto-micina Acqua R pH 8,0 NCTC 7427 C - pH 7,0 35-37 ‘C
solfato solfato SCR CIP 53.153
ATCC 10031
Klebsiella pneumoniae D - pH 7,0 35-37 ‘C
Eritromicina NCTC 7427

ivittaeR
estolato CIP 53.153
Metanolo R pH 8,0 ATCC 10031
Eritromicina Eritromicina SCR (vedi le Staphylococcus aureus C - pH 7,0 35-37 ‘C
etilsuccinato monografie) NCTC 7447
CIP 53.156
ATCC 6538 P

itnemogrA
ilareneG
Staphylococcus aureus
Framicetina solfato Framicetina solfato Acqua R pH 8,0 NCTC 7447 C - pH 7,0 35-37 ‘C
SCR CIP 53.156
ATCC 6538 P
Staphylococcus aureus

eifargonoM
NCTC 7447

ilareneG
Gentamicina solfato Gentamicina SCR Acqua R pH 7,0 CIP 53.156 C - pH 7,0 35-37 ‘C
ATCC 6538 P
Enterococcus hirae
CIP 58.55

ehcituecamraF
Gramicidina SCR Metanolo R pH 7,0 * ATCC 10541 C - pH 7,0 35-37 ‘C
Gramicidina Staphylococcus aureus

emroF
ATCC 6538 P
* Puo© essere necessaria l'aggiunta di un detergente per evitare l'adsorbimento sul materiale durante le duilizioni, per es.,
0,1 mg/ml di polisorbato 80 R
Kanamicina
monosolfato Staphylococcus aureus

eiretaM
Kanamicina monosol- Acqua R NCTC 7477

emirP
fato SCR pH 8,0 CIP 53.156 C - pH 7,0 35-37 ‘C
Kanamicina
solfato acido ATCC 6538 P
Staphylococcus aureus
Neomicina solfato
ehcituecamraF

NCTC 7447
inoizaraperP

Neomicina solfato per dosaggio Acqua R pH 8,0 C - pH 7,0 35-37 ‘C

ehcificepS

CIP 53.156
microbiologico SCR ATCC 6538 P
Escherichia coli
Rifamicina sodica NCIB 8879
Rifamicina sodica SCR Metanolo R pH 7,0 CIP 54.127 C - pH 7,0 35-37 ‘C
ehcitapoemO
inoizaraperP

ATCC 10536
Staphylococcus aureus
NCTC 7447
Spiramicina Spiramicina SCR Metanolo R pH 7,0 CIP 53.156 C - pH 7,0 35-37 ‘C
ATCC 6538 P
Klebsiella pneumoniae
Streptomicina Streptomicina Acqua R pH 8,0 NCTC 7427 C - pH 7,0 35-37 ‘C
ecidnI

solfato solfato SCR CIP 53.153

ATCC 10031

221
Dosaggio microbiologico degli antibiotici

Segue: Tabella 2.7.2.-2. - Dosaggio turbidimetrico

Solvente
Terreno
da usare nella Soluzione
Sostanza di coltura e pH Temperatura
Antibiotico preparazione tampone Microrganismo
di riferimento finale di incubazione
della soluzione (pH)
(6 0,1 unita© di pH)
madre

Soluzione al
Tilosina per uso 2,5 per cento
veterinario V/V di meta- Staphylococcus aureus
Tilosina SCR nolo R in pH 7,0 R NCTC 6571 C - pH 7,0 37 ‘C
Tilosina tartrato tampone ATCC 9144
per uso veterinario soluzione CIP 53.154
fosfato 0,1 M
a pH 7,0 R
Staphylococcus aureus
NCTC 7447
Tobramicina Tobramicina SCR Acqua R pH 7,0 ATCC 6538 P C - pH 7,0 35-37 ‘C
CIP 53.156
ATCC 9144
Vancomicina Vancomicina Staphylococcus aureus
cloridrato cloridrato SCR Acqua R pH 8,0 ATCC 6538 P C - pH 8,0 37-39 ‘C
CIP 53.156

La sezione seguente e© riportata come informazione. manganese solfato R in modo da ottenere una concen-
trazione di 0,001 g/l ed incubare per altre 48 h. Esami-
MICRORGANISMI RACCOMANDATI nare al microscopio la sospensione per assicurare che
Il testo seguente riporta i microrganismi raccomandati vi sia una adeguata formazione delle spore (circa
e le condizioni d'uso. Si possono usare altri microrgani- 80 per cento) e centrifugare. Sospendere di nuovo il
smi purchë essi dimostrino di essere sensibili all'anti- sedimento in acqua R sterile6 in modo da ottenere una
biotico in esame e siano usati in terreni di coltura concentrazione di 10 10 - 100 106 per millilitro,
2 2

appropriati ed in condizioni idonee di temperatura e di quindi scaldare a 70 ‘C per 30 min. Conservare la

pH. La concentrazione delle soluzioni da usare sospensione ad una temperatura non superiore a 4 ‘C.
dovrebbe essere scelta in modo da assicurare una rela- Bordetella bronchiseptica. Coltivare il microrganismo in
zione lineare tra il logaritmo della dose e la risposta esame nel terreno di coltura B a 35-37 ‘C per 16-18 h.
nelle condizioni del saggio. Eliminare, lavando con acqua R sterile, la coltura batte-
Preparazione degli inoculi. Bacillus cereus var. mycoi- rica e diluire fino ad ottenere un'opacita© appropriata.
des; Bacillus subtilis; Bacillus pumilus. Preparare, come Staphylococcus aureus; Klebsiella pneumoniae; Escheri-
descritto di seguito, le sospensioni delle spore del chia coli; Micrococcus luteus; Staphylococcus epidermi-
microrganismo da usare come inoculo. dis. Preparare come descritto precedentemente per la
Coltivare i microrganismi a 35-37 ‘C per 7 giorni sulla B. bronchiseptica ma usando il terreno di coltura A ed
superficie di un terreno di coltura appropriato al quale aggiustare l'opacita© ad un valore che ha dimostrato di
sono stati aggiunti 0,001 g/l di manganese solfato R. produrre una relazione dose-risposta soddisfacente nel
Eliminare, lavando con acqua R sterile, la coltura costi- dosaggio turbidimetrico o di produrre zone di inibi-
tuita principalmente da spore. Scaldare la sospensione zione nettamente definite e di diametro conveniente
a 70 ‘C per 30 min e diluire in modo da ottenere una nel dosaggio per diffusione, a seconda del caso.
concentrazione appropriata di spore, generalmente Saccharomyces cerevisiae; Candida tropicalis. Coltivare
10 106- 100 106 per millilitro. Le sospensioni di
2 2 il microrganismo in esame nel terreno di coltura F
spore possono essere conservate per lunghi periodi di a 30-37 ‘C per 24 h. Eliminare la coltura lavando
tempo ad una temperatura non superiore a 4 ‘C. con una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R. Diluire
Alternativamente le sospensioni di spore possono con la stessa soluzione fino ad ottenere un'opacita©
essere preparate mediante coltivazione del microrgani- appropriata.
smo nel terreno di coltura C a 26 ‘C per 4-6 giorni. Soluzioni tampone. Preparare le soluzioni tampone a
Aggiungere, asetticamente, una quantita© sufficiente di pH compreso tra 5,8 e 8,0 mescolando 50,0 ml di potas-

222
 Dosaggio microbiologico degli antibiotici

inoizircserP
sio fosfato monobasico 0,2 M con la quantita© di sodio Aggiungere il polisorbato 80 alla soluzione calda degli

ilareneG
idrossido 0,2 M indicata nella Tabella 2.7.2.-3. Diluire altri ingredienti dopo la bollitura e immediatamente
con acqua R distillata di recente in modo da ottenere prima di portare a volume.
200,0 ml.
Usare queste soluzioni tampone per tutti i dosaggi Terreno C

isilanA id
microbiologici riportati nella Tabella 2.7.2.-1 ad ecce- Peptone 6 g

idoteM
zione della bleomicina solfato e dall'amfotericina B. Estratto di manzo 1,5 g
Per la bleomicina solfato, preparare la soluzione tam- Estratto di lievito 3 g
pone (pH 6,8) sciogliendo 6,4 g di potassio fosfato Sodio cloruro 3,5 g
monobasico R e 18,9 g di sodio fosfato dibasico R e Glucosio monoidrato 1 g

irotinetnoC
/ ilairetaM
diluendo a 1000 ml. Potassio fosfato dibasico 3,68 g
Potassio fosfato monobasico 1,32 g
Tabella 2.7.2.-3 Acqua fino ad ottenere 1000 ml
pH
Sodio idrossido 0,2 M
Terreno D

ivittaeR
(millilitri)

5,8 3,72
Estratto di cuore 1,5 g
6,0 5,70 Estratto di lievito 1,5 g
6,2 8,60 Peptone di caseina 5 g
6,4 12,60 Glucosio monoidrato 1 g
6,6 17,80 Sodio cloruro 3,5 g

itnemogrA
ilareneG
6,8 23,65 Potassio fosfato dibasico 3,68 g
7,0 29,63 Potassio fosfato monobasico 1,32 g
7,2
7,4
35,00
39,50
Potassio nitrato 2 g
7,6 42,80
Acqua fino ad ottenere 1000 ml

eifargonoM
7,8 45,20

ilareneG
8,0 46,80 Terreno E
Peptone 5 g
Per l'amfotericina B, preparare la soluzione tempone Estratto di carne 3 g
fosfato 0,02 M a pH 10,5 nel modo seguente: discio- Sodio fosfato dibasico,12 H2O 26,9 g

ehcituecamraF
gliere 35 mg di potassio fosfato dibasico R in 900 ml di Agar 10 g
acqua R, aggiungere 20 ml di sodio idrossido 1M e Acqua fino ad ottenere 1000 ml

emroF
diluire a 1000,0 ml con acqua R.
Si possono usare i terreni di coltura Aggiungere il sodio fosfato dibasico in soluzione sterile
Terreni di coltura.

seguenti o terreni di coltura equivalenti. dopo sterilizzazione del terreno di coltura.

Terreno A Terreno F
eiretaM

emirP
Peptone 6 g Peptone 9,4 g
Idrolizzato pancreatico di caseina 4 g Estratto di lievito 4,7 g
Estratto di manzo 1,5 g Estratto di manzo 2,4 g
Estratto di lievito 3 g Sodio cloruro 10,0 g
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Glucosio monoidrato 1 g Glucosio monoidrato 10,0 g

Agar 15 g Agar 23,5 g
Acqua fino ad ottenere 1000 ml Acqua fino ad ottenere 1000 ml
Terreno B Terreno G
ehcitapoemO
inoizaraperP

Idrolizzato pancreatico di caseina 7 g Glicerolo 10 g

Idrolizzato papaico di semi di soia 3 g Peptone 10 g
Sodio cloruro 5 g Estratto di carne 10 g
Potassio fosfato dibasico 2,5 g Sodio cloruro 3 g
Glucosio monoidrato 2,5 g
Agar 15 g Agar 15 g
10 g Acqua fino ad ottenere 1000 ml
ecidnI

Polisorbato 80
Acqua fino ad ottenere 1000 ml pH 7 0,1 dopo la sterilizzazione.
6

223
Dosaggio del fattore VIII della coagulazione del sangue umano

2.7.3. DOSAGGIO DELLA CORTICOTROPINA sopranatante limpido ad una miscela, preparata di

recente, costituita da una soluzione (45,3 g/l) di sodio
L'attivita© biologica della corticotropina si determina acetato R il cui pH e© aggiustato a 7 per aggiunta di
confrontando uno o piu© dei suoi effetti biologici con lo acido acetico R, 3 ml di acqua R e 2 ml di diclorofenolin-
stesso effetto dello Standard Internazionale, o di una dofenolo soluzione standard R. Trenta secondi dopo il
preparazione di riferimento titolata in Unita© Interna- mescolamento misurare l'assorbimento alla luce con
zionali, nelle stesse condizioni. un colorimetro usando un filtro con una trasmissione
L'Unita© Internazionale e© l'attivita© contenuta in una massima a 470 nm ed un intervallo di trasmissione di
quantita© definita dello Standard Internazionale che e© 450-520 nm. Calcolare il contenuto di acido ascorbico
costituito da lattosio e da corticotropina di maiale puri- dalla curva di riferimento preparata trattando, nello
ficata e liofilizzata. L'equivalenza in Unita© Internazio- stesso modo, appropriati volumi di una soluzione, pre-
nali dello Standard Internazionale e© stabilita© dall'Orga- parata di recente, di acido ascorbico R in una soluzione
nizzazione Mondiale della Sanita© . (25 g/l) di acido metafosforico R. Esprimere il risultato
La corticotropina PBR e© titolata in Unita© Internazionali in milligrammi per 100 g di ghiandola surrenale. Calco-
in confronto con lo Standard Internazionale. lare il risultato del dosaggio mediante i metodi statistici
usuali.
Usare ratti di entrambi i sessi e della massa di 100-200 g
con una differenza di massa tra l'animale piu© pesante e
quello piu© leggero non superiore a 15 g. Mantenere i
ratti in condizioni uniformi per almeno 7 giorni prima
2.7.4. DOSAGGIO DEL FATTORE VIII DELLA

del saggio. Il giorno prima del saggio pesare i ratti ed

COAGULAZIONE DEL SANGUE UMANO

effettuare l'ipofisectomia. Dopo l'operazione e© consen- Il fattore VIII di coagulazione del sangue e© dosato
tito l'accesso ad una soluzione (50 g/l) di glucosio R in misurando la sua attivita© biologica come cofattore nel-
una soluzione (1,8 g/l) di sodio cloruro R oltre alla dieta l'attivazione del fattore X per mezzo del fattore IX atti-
del ratto ed all'acqua. Mantenere gli animali in una vato (fattore IXa), in presenza di ioni calcio e di fosfoli-
stanza a temperatura costante compresa tra 24 ‘C e pidi. L'attivita© biologica di una preparazione di fattore
27 ‘C. Effettuare il saggio tra 18 h e 36 h dopo l'ipofi- VIII si valuta confrontando la quantita© necessaria per
sectomia. Il giorno del saggio pesare di nuovo gli ani- ottenere una determinata velocita© di formazione del fat-
mali e suddividerli a caso in sei gruppi di 8-10 animali. tore Xa in una miscela in esame contenente le sostanze
Scegliere tre dosi della preparazione di riferimento e che intervengono nell'attivazione del fattore e la quan-
tre dosi della sostanza da esaminare in modo che la tita© dello Standard Internazionale o di una prepara-
dose piu© piccola produca una piccola deplezione e la zione di riferimento, titolata in Unita© Internazionali,
dose piu© grande non produca una deplezione massimale necessaria per produrre la stessa velocita© di formazione
del contenuto di acido ascorbico surrenale. Sommini- del fattore Xa.
strare le dosi in funzione del peso corporeo degli ani-
mali, in ordine casuale, mediante iniezione sottocuta- L'Unita© Internazionale e© l'attivita© del fattore VIII di
nea. Dosi dell'ordine di 1,0 U.I., 0,5 U.I. e 0,25 U.I. per una determinata quantita© dello Standard Internazio-
100 g di massa corporea sono in genere appropriate. nale che e© costituito da un concentrato liofilizzato di
Salvo indicazione diversa, disciogliere la preparazione fattore VIII di coagulazione del sangue umano. L'equi-
di riferimento e la sostanza da esaminare in acido clori- valenza in Unita© Internazionali dello Standard Interna-
drico 0,01 M e preparare diluizioni successive con zionale e© stabilita dall'Organizzazione Mondiale della
acqua R contenente 150 g/l di gelatina R. Iniettare le Sanita© .
soluzioni entro 4 h dalla preparazione.
Tre ore dopo l'iniezione prelevare entrambe le ghian- Il fattore VIII di coagulazione del sangue umano PBR e©
dole surrenali dal ratto anestetizzato, eliminare i tessuti titolato in Unita© Internazionali in rapporto allo Stan-
estranei e pesarle il piu© rapidamente possibile per evi- dard Internazionale.
tare una perdita di massa. Sacrificare il ratto ed esami- Il metodo del dosaggio cromogeno consiste di due fasi
narlo per verificare se l'ipofisectomia effettuata sia successive: l'attivazione del fattore X, dipendente dal
completa. fattore VIII, in un reattivo di fattori di coagulazione
Tagliare ed omogeneizzare la coppia di ghiandole costituito da componenti purificati, e la scissione enzi-
surrenali in una soluzione (25 g/l) di acido meta- matica di un substrato cromogeno per mezzo del fat-
fosforico R, preparata di recente, e diluire a 10 ml con tore Xa, con liberazione di un cromoforo che puo© essere
la stessa soluzione. Lasciare a riposo l'omogenato per quantificato per via spettrofotometrica. In condizioni
30 min e centrifugare. Aggiungere 7 ml del liquido appropriate di dosaggio, esiste una relazione lineare

224
 Dosaggio del fattore VIII della coagulazione del sangue umano

inoizircserP
tra la velocita© di formazione del fattore Xa e la concen- rina. La concentrazione finale di fosfolipidi durante la

ilareneG
trazione del fattore VIII. Il dosaggio viene riassunto formazione del fattore Xa e© di 1-50 mmol per litro, pre-
mediante lo schema seguente: feribilmente tra 10-35 mmol per litro. Il reattivo con-
Fase 1 tiene ioni calcio in quantita© tale da dare una concentra-
Fattore X fattorefattore VIII attivato zione finale di 5-15 mmol per litro. La formazione
IXa; fosfolipidi; Ca fattore Xa finale del fattore Xa e© effettuata in una soluzione conte-
†

isilanA id
!

idoteM
‡‡

Fase 2
nente almeno 1 mg per millilitro di albumina umana o
bovina, adeguatamente tamponata ad un pH compreso
Substrato cromogeno fattore Xa peptide cromoforo tra 7,3 e 8,0. I componenti del reattivo completo sono
generalmente divisi in almeno due reattivi separati, nes-
! ‡

irotinetnoC
suno dei quali e© in grado di indurre da solo la forma-

/ ilairetaM
Le due fasi richiedono reattivi che si possono ottenere zione
in commercio da diversi fornitori. Anche se la composi- reattividelpossono
fattore Xa. Dopo la ricostituzione, questi due
essere combinati tra loro a condizione
zione dei singoli reattivi puo© subire alcune variazioni, che non si formino
le loro caratteristiche essenziali sono descritte nelle spe- in assenza del fattorequantita© significative di fattore Xa
cifiche che seguono. Variazioni a queste specifiche pos- bazione il fattore VIIIVIII. Nella miscela finale di incu-
deve essere il solo componente
sono essere consentite a condizione che sia stato verifi- limitante la velocita© di formazione

ivittaeR
cato che, utilizzando lo Standard Internazionale per il del fattore X.
concentrato del fattore VIII della coagulazione del san- La seconda fase della reazione consiste nella quantifi-
gue umano, i risultati ottenuti non differiscano signifi- cazione del fattore Xa formato per mezzo di un sub-
cativamente. strato cromogeno che e© specifico per il fattore Xa.
I kit di dosaggio in commercio devono essere utilizzati Generalmente esso e© costituito da un peptide corto

itnemogrA
ilareneG
conformemente alle istruzioni del produttore; e© impor- derivatizzato con tre-cinque amminoacidi, legato ad
tante accertarsi dell'idoneita© del kit usato per il do- dal substrato peptidicoLacomporta
un gruppo cromoforo. scissione di questo gruppo
uno spostamento
saggio. delle sue proprieta© cromofore verso una lunghezza
d'onda che permette la sua quantificazione per via spet-

eifargonoM
REATTIVI

ilareneG
trofotometrica. Il substrato si discioglie generalmente
Il reattivo di fattori della coagulazione e© costituito da in0,2-2
acqua e si utilizza ad una concentrazione finale di
mmol per litro. Il substrato puo© inoltre contenere
proteine purificate di origine umana o bovina. Queste appropriati inibitori che bloccano l'ulteriore forma-
comprendono il fattore X, il fattore IXa e un attivatore zione di fattore Xa e che sopprimono l'attivita© trombi-

ehcituecamraF
del fattore VIII, generalmente la trombina. Queste pro- nica e permettono di aumentare la selettivita© per il
teine sono parzialmente purificate, preferibilmente per fattore Xa.

emroF
almeno il 50 per cento, e non contengono impurezze
che interferiscono con l'attivazione del fattore VIII o
del fattore X. Il fattore X e© presente in quantita© tali da PROCEDURA DI DOSAGGIO
dare una concentrazione finale, durante la prima fase Ricostituire l'intero contenuto di una fiala della prepa-
del dosaggio, di 10-350 nmol per litro e preferibilmente razione di riferimento e quello della preparazione da
eiretaM

emirP
di 15-30 nmol per litro. Il fattore IXa si prepara per atti- esaminare mediante aggiunta di appropriate quantita©
vazione del fattore IX purificato a fattore IXa usando di acqua R; usare immediatamente. Aggiungere alle
b

il fattore XIa e mediante successiva purificazione del preparazioni ricostituite una quantita© sufficiente di pre-
fattore IXa dalla miscela di reazione. La sua concen- diluente in modo da ottenere soluzioni contenenti tra
ehcituecamraF
inoizaraperP

trazione finale durante la formazione del fattore Xa e© 0,5 Unita© Internazionali e 2,0 Unita© Internazionali per
ehcificepS

inferiore al 30 per cento di quella del fattore X, general- millilitro.

mente 1-100 nmol per litro e preferibilmente 1-10 nmol Il prediluente e© costituito dal plasma di un paziente
per litro. La trombina puo© essere presente sotto forma affetto da emofilia A grave o da un reattivo preparato
del suo precursore, la protrombina, a condizioni che la artificialmente che dia risultati che non differiscono
ehcitapoemO
inoizaraperP

sua attivazione nel reattivo sia sufficientemente rapida significativamente da quelli ottenuti utilizzando plasma
da permettere l'attivazione completa e quasi istantanea emofilico e le stesse preparazioni di riferimento e in
del fattore VIII al momento del dosaggio. I fosfolipidi esame. I materiali prediluiti devono essere stabili per
possono essere ottenuti da fonti naturali come estratti tutto il tempo richiesto per il dosaggio, per almeno
di cervello o di midollo spinale bovino o di semi di soia, 30 min a 20 ‘C e devono essere usati entro 15 min.
o possono essere preparati sinteticamente e devono Preparare altre diluizioni della preparazione in esame e
ecidnI

essere costituiti per una parte considerevole, general- della preparazione di riferimento utilizzando un tam-
mente dal 15 per cento al 35 per cento, di fosfatidilse- pone isotonico non chelante contenente l'1 per cento di

225
Dosaggio dell'eparina

albumina umana o bovina e per esempio, tris(idrossi- Verificare la validita© del dosaggio e calcolare l'attivita©
metil)amminometano o imidazolo, tamponato preferi- biologica della preparazione in esame mediante metodi
bilmente a pH tra 7,3 e 8,0. Preparare per ciascun mate- statistici usuali per un dosaggio a rapporto di pendenza
riale, almeno tre diluizioni separate ed indipendenti (per esempio 5.3. Analisi statistica dei risultati dei
preferibilmente in doppio. Preparare le diluizioni in dosaggi e saggi biologici).
modo che la concentrazione finale del fattore VIII sia
inferiore a 0,03 U.I. per millilitro e preferibilmente infe-
riore a 0,01 U.I. per millilitro durante la fase di genera- 2.7.5. DOSAGGIO DELL'EPARINA

zione del fattore Xa. L'attivita© anticoagulante dell'eparina e© determinata in

Preparare una soluzione di controllo che include tutti i vitro confrontando la sua capacita© in determinate con-
componenti eccetto il fattore VIII. dizioni di ritardare la coagulazione del plasma di mon-
tone citratato e ricalcificato, con la stessa capacita© di
Preparare tutte le diluizioni in provette di plastica e uti- una preparazione di riferimento di eparina titolata in
lizzarle immediatamente. Unita© Internazionali.
. Mescolare le diluizioni preriscaldate della pre- L'Unita© Internazionale e© l'attivita© contenuta in una
Fase 1

parazione di riferimento del fattore VIII e della prepa- quantita© definita dello Standard Internazionale, che e©
razione da esaminare con un volume appropriato del costituito da una quantita© di eparina sodica liofilizzata
reattivo di fattori della coagulazione preriscaldato o ottenuta dalla mucosa intestinale di maiale. L'equiva-
una combinazione dei suoi costituenti separati ed incu- lenza in Unita© Internazionali dello Standard Interna-
bare la miscela a 37 ‘C in provette di plastica o in poz- zionale e© stabilita dall'Organizzazione Mondiale della
zetti in micropiastra. La concentrazione dei vari com- Sanita© .
ponenti durante la formazione del fattore Xa deve L'eparina sodica PBR e© titolata in Unita© Internazionali
essere come specificato precedentemente nella sezione per confronto con lo Standard Internazionale mediante
sulla descrizione dei reattivi. Lasciare procedere la rea- i dosaggi riportati di seguito.
zione di attivazione del fattore X per un tempo appro- Effettuare il dosaggio utilizzando uno dei metodi
priato, preferibilmente arrestando la reazione prima seguenti per determinare l'inizio della coagulazione ed
che la concentrazione del fattore Xa abbia raggiunto il usando provette ed altri strumenti appropriati al
suo massimo livello al fine di ottenere una soddisfa- metodo scelto:
cente relazione dose-risposta lineare. Il tempo di attiva- a) esame visivo diretto effettuato usando preferibil-
zione viene scelto anche per ottenere una formazione mente un'illuminazione indiretta ed osservando su
di fattore Xa lineare nel tempo. Tempi di attivazione fondo nero ed opaco;
appropriati sono generalmente compresi tra 2 min e b) registrazione spettrofotometrica del cambiamento
5 min, ma sono ammesse variazioni per migliorare la della densita© ottica ad una lunghezza d'onda appros-
linearita© della relazione dose-risposta. simativamente di 600 nm;
Fase 2 . Arrestare la reazione di attivazione mediante c) rilevazione visiva del cambiamento di fluidita© incli-
aggiunta del reattivo preriscaldato contenente il sub- nando manualmente le provette;
strato cromogeno. Quantificare la velocita© di scissione d) registrazione meccanica del cambiamento di fluidita©
del substrato, che deve essere lineare con la concentra- per mescolamento, facendo attenzione a causare
zione del fattore Xa formato, misurando la variazione minimi mutamenti della soluzione durante la fase
di assorbanza ad una lunghezza d'onda appropriata iniziale di coagulazione.
usando uno spettrofotometro; l'assorbanza puo© essere
misurata sia continuamente, cosa che permette di cal- PROCEDURA DI DOSAGGIO
colare la velocita© iniziale di scissione del substrato, sia
interrompendo la reazione di idrolisi dopo un appro- I volumi nel testo sono dati come esempio e possono essere
priato intervallo, per abbassamento del pH mediante adattati allo strumento purchë siano rispettati i rapporti
aggiunta di un reattivo adatto, come acido acetico tra i differenti volumi.
(50 per cento V/V C2H4O2) o una soluzione di citrato Diluire l'eparina sodica PBR con una soluzione (9 g/l) di
(1 mole per litro) a pH 3. Aggiustare il tempo di idrolisi sodio cloruro R in modo che essa contenga un numero,
in modo da ottenere uno sviluppo lineare nel tempo noto e preciso, di Unita© Internazionali per millilitro e
del cromoforo. Tempi di idrolisi appropriati sono gene- preparare una soluzione analoga della preparazione da
ralmente compresi tra 3 min e 15 min, ma sono esaminare che si presume abbia la stessa attivita© .
ammesse variazioni se permettono di ottenere una Preparare da ciascuna soluzione, usando una soluzione
migliore linearita© nella relazione dose-risposta. (9 g/l) di sodio cloruro R, una serie di diluizioni in pro-

226
 Dosaggio del vaccino difterico adsorbito

inoizircserP
gressione geometrica in modo che il tempo di coagula-

ilareneG
2.7.6. DOSAGGIO DEL VACCINO DIFTERICO

zione ottenuto con la concentrazione piu© bassa non sia ADSORBITO

inferiore a 1,5 volte il tempo di ricalcificazione del L'attivita© biologica del vaccino difterico adsorbito si
bianco e che quello ottenuto con la concentrazione piu© determina confrontando la dose di vaccino necessaria
alta sia tale da dare una curva log dose-risposta soddi- per proteggere le cavie dagli effetti di una dose eritroge-
sfacente, come determinato in un saggio preliminare.

isilanA id
idoteM
nica di tossina difterica somministrata per via intrader-
Introdurre dodici provette in un bagno di acqua ghiac- mica o di una dose letale di tossina difterica sommini-
ciata ed etichettarle in doppio: T1, T2 e T3 per le dilui- strata per via sottocutanea, con la dose di una prepara-
zioni della preparazione da esaminare e S1, S2 e S3 per zione di riferimento, titolata in Unita© Internazionali,
le diluizioni della preparazione di riferimento. Aggiun- necessaria per ottenere la stessa protezione.

irotinetnoC
/ ilairetaM
gere a ciascuna provetta 1,0 ml di plasma substrato R1 L'Unita© Internazionale e© l'attivita© biologica contenuta
scongelato ed 1,0 ml dell'appropriata diluizione della in una quantita© definita dello Standard Internazionale,
preparazione da esaminare o della preparazione di rife- che e© costituito da una quantita© di anatossina difterica
rimento. Dopo ogni aggiunta mescolare evitando di adsorbita su idrossido di alluminio. L'equivalenza in
formare delle bolle. Prendendo le provette nell'ordine Unita© Internazionali dello Standard Internazionale e©
S1, S2, S3, T1, T2 e T3 trasferire ciascuna di esse in un

ivittaeR
b.m. a 37 ‘C, lasciare equilibrare a 37 ‘C per circa stabilita dall'Organizzazione Mondiale della Sanita© .
15 min ed aggiungere a ciascuna provetta 1 ml di una
diluizione di cefalina reattivo R al quale e© stato aggiunto METODO DELLA PROVA INTRADERMICA
un appropriato agente attivante, come il caolino in Utiliz-
modo da ottenere un appropriato tempo di ricalcifica-

itnemogrA
Selezione e ripartizione degli animali in esame.

zare nel saggio cavie albine sane provenienti da un

ilareneG
zione in bianco non superiore a 60 s. Quando viene medesimo allevamento e di dimensioni appropriate al
usato il caolino, preparare appena prima dell'uso una numero di inoculazioni prescritte, con una differenza
miscela di volumi uguali di cefalina reattivo R e una di massa corporea tra la piu© pesante e la piu© leggera
sospensione (4 g/l) di caolino leggero R in una soluzione non superiore a 100 g. Suddividere gli animali in
(9 g/l) di sodio cloruro R. Esattamente dopo 2 min

eifargonoM
almeno 6 gruppi uguali; usare gruppi costituiti da un

ilareneG
aggiungere 1 ml di una soluzione (3,7 g/l) di calcio clo- numero di animali sufficiente per ottenere risultati che
ruro R e registrare come tempo di coagulazione l'inter- soddisfino a requisiti di validita© del dosaggio descritti
vallo, in secondi, tra questa ultima aggiunta e l'inizio di seguito. Se non e© stata dimostrata la stabilita© della
della coagulazione determinato mediante la tecnica tossina di prova da usare o se non e© stata adeguata-

ehcituecamraF
prescelta. Determinare il tempo di ricalcificazione in mente standardizzata, si aggiungono 5 cavie non vacci-
bianco all'inizio ed alla fine della procedura in una

emroF
nate come controlli. Usare cavie dello stesso sesso o,
maniera simile usando 1 ml di una soluzione (9 g/l) di altrimenti, i maschi e le femmine devono essere ripartiti
sodio cloruro R al posto di una delle diluizioni di epa- in modo uguale fra i gruppi.
rina; i due valori ottenuti per il bianco non devono dif- Scegliere una pre^
ferire in maniera significativa. Trasformare i tempi di Selezione della tossina di prova.

parazione di tossina difterica che contiene da 67 a

coagulazione in logaritmi usando il valore medio per
eiretaM

emirP
le provette in doppio. Ripetere la procedura usando 133 lr/100 in 1 Lf e da 25000 a 50000 dosi minime reat-
diluizioni preparate di recente ed effettuando l'incuba- tive per la cute delle cavie in 1 Lf. Se e© stato dimostrato
zione nell'ordine T1, T2, T3, S1, S2 ed S3. che la preparazione della tossina di prova e© stabile,
non e© necessario verificare l'attivita© in ogni dosaggio.
ehcituecamraF

Calcolare i risultati mediante i metodi statistici usuali.

inoizaraperP

ehcificepS

Preparazione della soluzione della tossina di prova.

Effettuare almeno tre dosaggi indipendenti. Per ciascun Immediatamente prima dell'uso diluire la tossina di
dosaggio preparare diluizioni recenti della prepara- prova con un adatto diluente in modo da ottenere una
zione di riferimento e della preparazione da esaminare soluzione della tossina di prova che contiene circa
ed usare un'altra porzione di plasma substrato appena 0,0512 Lf in 0,2 ml. Preparare da questa una serie di
ehcitapoemO
inoizaraperP

scongelato. cinque diluizioni, in quadruplo, contenenti circa

Calcolare l'attivita© biologica della preparazione da esa- 0,0128, 0,0032, 0,0008, 0,0002 e 0,00005 Lf in 0,2 ml.
minare combinando i risultati di questi dosaggi Determinazione dell'attivita© biologica del vaccino.

mediante i metodi statistici usuali. Quando la varianza Usando una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R prepa-
dovuta alle differenze tra i dosaggi e© significativa a rare delle diluizioni del vaccino da esaminare e della
P = 0,01, puo© essere ottenuta una valutazione combi- preparazione di riferimento tali che, in entrambi i casi,
ecidnI

nata dell'attivita© biologica calcolando la media non esse formino una serie in cui il rapporto tra le diluizioni
ponderata delle attivita© biologiche misurate. non sia superiore a 2,5 e che le diluizioni intermedie,

227
Dosaggio del vaccino difterico adsorbito

quando sono inoculate per via sottocutanea alla dose di METODO DELLA PROVA LETALE.
1,0 ml per cavia, diano un indice intradermico di circa
3 quando gli animali sono sottoposti all'infezione di Selezione e ripartizione degli animali in esame. Utiliz-
prova. Attribuire una diluizione a ciascun gruppo di zare nel saggio cavie sane provenienti da un medesimo
cavie ed iniettare per via sottocutanea 1,0 ml di cia- allevamento, ciascuna di 250^350 g. Suddividere le
scuna diluizione a tutti gli animali del gruppo al quale cavie in almeno 6 gruppi uguali; usare gruppi costituiti
essa e© destinata. Dopo 28 giorni depilare i fianchi di da un numero di animali sufficiente per ottenere risul-
ciascuna cavia ed iniettare a ciascuna cavia vaccinata, tati che soddisfino i requisiti di validita© del dosaggio
per via intradermica, 0,2 ml di ciascuna delle sei dilui- descritti di seguito. Se non e© stata dimostrata la stabi-
zioni di tossina in sei siti di inoculazione diversi scelti lita© della tossina di prova da usare o se non e© stata ade-
in modo tale da minimizzare l'interferenza tra siti adia- guatamente standardizzata, aggiungere altri 4 gruppi
centi. di 5 cavie come controlli non vaccinati. Usare cavie
dello stesso sesso o, altrimenti, i maschi e le femmine
Determinazione dell'attivita© biologica della tossina di
devono essere ripartiti in modo uguale fra i gruppi.
Se necessario iniettare agli animali di controllo
Scegliere una pre^
prova.

non vaccinati diluizioni contenenti 80, 40, 20, 10 e 5 Selezione della tossina di prova.

milionesimi di 1 Lf della tossina di prova. parazione di tossina difterica che contenga almeno
100 DL50 per millilitro. Se e© stato dimostrato che la
Lettura ed interpretazione dei risultati. Esaminare tutti i preparazione della tossina di prova e© stabile, non e©
siti di inoculazione 48 h dopo l'iniezione della tossina necessario verificare la dose letale in ogni dosaggio.
di prova e registrare l'incidenza dell'eritema difterico
specifico. Registrare anche il numero di siti privi di tali Preparazione della soluzione della tossina di prova.

reazioni come indice intradermico di prova. Riportare Immediatamente prima dell'uso, diluire la tossina di
insieme gli indici intradermici di prova di tutti gli ani- prova con un adatto diluente in modo da ottenere una
mali che hanno ricevuto la stessa diluizione di vaccino soluzione della tossina di prova che contenga approssi-
ed usare questi dati con una trasformazione opportuna, mativamente 100 DL50 per millilitro. Se necessario
come (indice intradermico) 2 oppure arcsen (indice diluire un'aliquota della soluzione della tossina di
intradermico/6)2), per ottenere una valutazione dell'at- prova 1:32, 1:100 e 1:320 con lo stesso diluente.
tivita© biologica relativa per ciascuna delle preparazioni
in esame mediante analisi quantitativa a linee parallele.
Determinazione dell'attivita© biologica del vaccino.

Usando una soluzione (9g/l) di sodio cloruro R prepa-

Il saggio e© valido rare delle diluizioni del vaccino da esaminare e della
preparazione di riferimento tali che, in entrambi i casi,
Requisiti per un dosaggio valido.

solo se:
esse formino una serie in cui il rapporto tra le diluizioni
^ per il vaccino da esaminare e per la preparazione di non sia superiore a 2,5 e che le diluizioni intermedie,
riferimento l'indice intradermico medio ottenuto per quando sono inoculate per via sottocutanea alla dose
la dose piu© bassa e© inferiore a 3 e l'indice intrader- di 1,0 ml per cavia, proteggano approssimativamente il
mico medio per la della dose piu© alta e© superiore a 3; 50 per cento degli animali dagli effetti letali della quan-
^ se del caso, la diluizione di tossina che contiene tita© di tossina difterica, prescritta per questo saggio,
40 milionesimi di 1 Lf produce un eritema positivo inoculata per via sottocutanea. Attribuire una dilui-
in almeno l'80 per cento delle cavie di controllo e la zione a ciascun gruppo di cavie ed iniettare per via sot-
diluizione contenente 20 milionesimi di 1 Lf non pro- tocutanea 1,0 ml di ciascuna diluizione a tutti gli ani-
duce reazione in almeno l'80 per cento di cavie mali del gruppo al quale essa e© destinata. Dopo 28
(se non si riscontrano questi criteri deve essere sele- giorni iniettare, per via sottocutanea, a ciascun animale
zionata un'altra tossina); 1,0 ml della soluzione di tossina di prova (100 DL50).
^ i limiti fiduciali del dosaggio (P = 0,95) sono com- Determinazione dell'attivita© biologica della tossina di

Se necessario attribuire la soluzione della tossina

presi tra il 50 per cento e il 200 per cento dell'attivita© prova.

di prova e tre sue diluizioni, ciascuna ad uno di 4 gruppi

biologica misurata; di 5 cavie ed iniettare per via sottocutanea 1,0 ml di cia-
^ l'analisi statistica non mostra deviazioni dalla linea- scuna soluzione a ciascuna cavia del gruppo al quale la
rita© o dal parallelismo. soluzione e© destinata.
Il saggio puo© essere ripetuto ma quando viene eseguito Lettura ed interpretazione dei Contare il
risultati.

piu© di una volta i risultati di tutti i saggi validi devono numero di cavie sopravvissute 4 giorni dopo l'inocula-
essere combinati nella valutazione dell'attivita© biolo- zione della tossina di prova. Calcolare l'attivita© biolo-
gica. gica del vaccino da esaminare in rapporto a quella della

228
 Dosaggio del vaccino pertossico

inoizircserP
preparazione di riferimento, sulla base della propor- zione, il ceppo non e© idoneo. Preparare una sottocol-

ilareneG
zione di animali sopravvissuti in ciascuno dei gruppi di tura a partire dal ceppo e sospendere la B. pertussis rac-
cavie vaccinate, utilizzando i metodi statistici usuali. colta in una soluzione contenente 10 g/l di idrolizzato
Il saggio e© valido solo di caseina e 6 g/l di sodio cloruro ed avente un pH di
7,0^7,2 o in un'altra soluzione appropriata. Determi-
Requisiti per un dosaggio valido.

se:
nare l'opacita© della sospensione. Preparare una serie di

isilanA id
^ per il vaccino da esaminare e per la preparazione di

idoteM
riferimento la dose protettiva al 50 per cento e© com- diluizioni con la stessa soluzione ed attribuire ciascuna
presa tra la dose piu© grande e quella piu© piccola delle diluizione ad un gruppo di 10 topi. Iniettare, per via
preparazioni somministrate alle cavie; intracerebrale, a ciascun topo la dose (0,02^0,03 ml)
della diluizione attribuita al suo gruppo. Dopo
^ il numero degli animali che muore nei 4 gruppi di 5

irotinetnoC
14 giorni contare il numero di topi sopravvissuti in cia-

/ ilairetaM
inoculati con la soluzione della tossina di prova e scun gruppo. A partire dai risultati calcolare l'opacita©
con le sue diluizioni indica che la dose di prova e© presunta di una sospensione contenente 100 DL50 in
approssimativamente 100 DL50; ciascuna dose di prova. Per il saggio del vaccino da esa-
^ i limiti fiduciali del dosaggio (P = 0,95) sono com- minare preparare una sottocoltura recente dallo stesso
presi tra il 50 per cento e il 200 per cento dell'attivita© ceppo di B. pertussis e preparare una sospensione del

ivittaeR
biologica misurata; microrganismo raccolto con un'opacita© corrispondente
^ l'analisi statistica non mostra deviazioni dalla linea- circa a 100 DL50 in ciascuna dose di prova. Preparare
rita© o dal parallelismo. tre diluizioni della sospensione di prova.
Il saggio puo© essere ripetuto ma quando viene eseguito
piu© di una volta i risultati di tutti i saggi validi devono

itnemogrA
Preparare 3

ilareneG
Determinazione dell'attivita© biologica.

essere combinati nella valutazione dell'attivita© biolo- diluizioni seriali del vaccino da esaminare e 3 diluizioni
gica. simili della preparazione di riferimento in modo che si
puo© presumere che le diluizioni intermedie proteggano
circa il 50 per cento degli animali dagli effetti letali
della dose di prova di B. pertussis. Le dosi suggerite

eifargonoM
2.7.7. DOSAGGIO DEL VACCINO PERTOSSICO

ilareneG
L'attivita© biologica del vaccino pertossico si determina sono 1/8, 1/40 ed 1/200 della dose umana del vaccino
confrontando la dose di vaccino necessaria per proteg- da esaminare e 0,5 U.I., 0,1 U.I. ed 0,02 U.I. della pre-
gere i topi dagli effetti di una dose letale di Bordetella parazione di riferimento e ciascuna dose e© contenuta
pertussis, somministrata per via intracerebrale, con la in un volume non superiore a 0,5 ml. Attribuire le sei

ehcituecamraF
quantita© di una preparazione di riferimento, titolata in diluizioni una per ciascun gruppo di almeno 16 topi ed
iniettare, per via intraperitoneale, a ciascun topo una

emroF
Unita© Internazionali, necessaria per ottenere la stessa
protezione. dose della diluizione attribuita al gruppo. Dopo 14^17
L'Unita© Internazionale e© l'attivita© biologica contenuta giorni iniettare, per via intracerebrale, a ciascun ani-
in una quantita© definita dello Standard Internazionale, male di un gruppo di almeno 16 topi una dose della
che e© costituito da una quantita© di vaccino pertossico sospensione di prova. Attribuire la sospensione di
prova e 3 sue diluizioni una per ciascun gruppo di
eiretaM

emirP
essiccato. L'equivalenza in Unita© Internazionali dello almeno 10 topi ed iniettare, per via intracerebrale, una
Standard Internazionale e© stabilita dall'Organizzazione dose di ciascuna sospensione a ciascun animale del
Mondiale della Sanita© . gruppo cui la sospensione e© attribuita. Non si devono
Utiliz- considerare i topi che muoiono entro 48 h dalla prova.
ehcituecamraF

Selezione e ripartizione degli animali in esame.

inoizaraperP

zare nel saggio topi sani dell'eta© non superiore a 5 setti-

ehcificepS

mane e di un ceppo appropriato proveniente dallo Contare il numero di topi sopravvissuti in ciascun
stesso allevamento; la differenza di massa tra il topo gruppo dopo 14 giorni. Calcolare l'attivita© biologica
piu© pesante e quello piu© leggero non deve essere supe- del vaccino in esame in rapporto a quella della prepara-
riore a 5 g. Suddividere gli animali in 6 gruppi uguali zione di riferimento, sulla base del numero di animali
sopravvissuti in ciascun gruppo di almeno 16 animali.
ehcitapoemO
inoizaraperP

di almeno 16 topi e 4 gruppi di 10. I topi devono essere

dello stesso sesso o, altrimenti, i maschi e le femmine
devono essere ripartiti in modo uguale tra i gruppi. Il saggio e© valido solo se:
Selezione del ceppo di prova e preparazione della sospen-

sione di prova. Selezionare un ceppo appropriato di B. ^ per il vaccino da esaminare e per la preparazione di
pertussis in grado di causare la morte dei topi entro riferimento la dose protettiva al 50 per cento e© com-
ecidnI

14 giorni dall'iniezione intracerebrale. Se piu© del 20 presa tra la dose piu© grande e quella piu© piccola som-
per cento dei topi muore entro 48 h dalla somministra- ministrate ai topi;

229
Dosaggio del vaccino tetanico adsorbito

^ il numero di animali che muore nei 4 gruppi di Preparazione della soluzione della tossina di prova.

10 topi inoculati con la sospensione di prova e con Immediatamente prima dell'uso diluire la tossina di
le sue diluizioni indica che la dose di prova e© appros- prova con un adatto diluente in modo da ottenere una
simativamente 100 DL50; soluzione della tossina di prova che contiene approssi-
^ l'analisi statistica non mostra deviazioni dalla linea- mativamente cinquanta volte la dose paralizzante al
rita© o dal parallelismo. 50 per cento (50 DP50) per millilitro. Se necessario
Il saggio puo© essere ripetuto ma quando viene eseguito diluire un'aliquota della soluzione della tossina di
piu© di una volta i risultati di tutti i saggi validi devono prova 1:16, 1:50 e 1:160 con lo stesso diluente.
essere combinati. Determinazione dell'attivita© biologica del vaccino.

Usando una soluzione (9g/l) di sodio cloruro R prepa-

rare delle diluizioni del vaccino da esaminare e della
2.7.8. DOSAGGIO DEL VACCINO TETANICO
preparazione di riferimento tali che, in entrambi i casi,
ADSORBITO
esse formino una serie in cui il rapporto tra le diluizioni
L'attivita© biologica del vaccino tetanico adsorbito si non sia superiore a 2,5 e che le diluizioni intermedie
determina confrontando la dose di vaccino necessaria quando sono inoculate, per via sottocutanea, alla dose
per proteggere le cavie o i topi dagli effetti di una dose di 1,0 ml per cavia, proteggano circa il 50 per cento
paralizzante di tossina tetanica inoculata per via sotto- degli animali dagli effetti paralizzanti della quantita© di
cutanea, con la dose di una preparazione di riferimento, tossina tetanica, prescritta per questo saggio, inoculata
titolata in Unita© Internazionali, necessaria per ottenere per via sottocutanea. Attribuire una diluizione a cia-
la stessa protezione. Nei Paesi in cui il metodo paraliz- scun gruppo di cavie ed iniettare per via sottocutanea
zante non e© obbligatorio si puo© usare il metodo della 1,0 ml di ciascuna diluizione a tutti gli animali del
DL50. Per il metodo della DL50 il numero di animali e gruppo al quale essa e© destinata. Dopo 28 giorni iniet-
la procedura sono identici a quelli descritti per il tare, per via sottocutanea, a ciascun animale 1,0 ml
metodo paralizzante ma il punto finale e© la morte degli della soluzione di tossina di prova (contenente cin-
animali invece della paralisi. quanta volte la dose paralizzante al 50 per cento
L'Unita© Internazionale e© l'attivita© biologica contenuta (50 DP50)).
in una quantita© definita dello Standard Internazionale,
che e© costituito da una quantita© di anatossina tetanica
Determinazione dell'attivita© biologica della tossina di

Se necessario attribuire la soluzione della tossina

adsorbita su idrossido di alluminio. L'equivalenza in
prova.

di prova e tre sue diluizioni, ciascuna ad uno dei 4

Unita© Internazionali dello Standard Internazionale e© gruppi di 5 cavie ed iniettare per via sottocutanea
stabilita dall'Organizzazione Mondiale della Sanita© . 1,0 ml di ciascuna soluzione a ogni cavia del gruppo al
quale la soluzione e© attribuita.
SAGGIO SU CAVIE Lettura ed interpretazione dei risultati. Esaminare le
Selezione e ripartizione degli animali in esame . Utiliz- cavie 2 volte al giorno. Eliminare e sacrificare quelle
zare nel saggio cavie sane, ciascuna di 250^350 g, pro- che presentano chiari segni di paralisi tetanica. Cinque
venienti da un medesimo allevamento. Suddividere gli giorni dopo l'inoculazione della tossina di prova regi-
animali in almeno 6 gruppi uguali; usare gruppi costi- strare il numero di cavie che non presentano paralisi.
tuiti da un numero di animali sufficiente per ottenere Calcolare l'attivita© biologica del vaccino da esaminare
risultati che soddisfino ai requisiti di validita© del dosag- in rapporto a quella della preparazione di riferimento,
gio descritti di seguito. Se non e© stata dimostrata la sta- sulla base della proporzione di animali, sottoposti al
bilita© della tossina di prova da usare o se non e© stata saggio, esenti da paralisi in ognuno dei gruppi di cavie
adeguatamente standardizzata, aggiungere altri vaccinate, utilizzando i metodi statistici usuali.
4 gruppi di 5 cavie come controlli non vaccinati. Usare Il saggio e© valido solo se:
cavie dello stesso sesso o, altrimenti, i maschi e le fem- Requisiti di validita©.

mine devono essere ripartiti in modo uguale fra i ^ per il vaccino da esaminare e per la preparazione di
gruppi. riferimento la dose protettiva al 50 per cento e© com-
Selezionare una pre^ presa tra la dose piu© grande e quella piu© piccola som-
Selezione della tossina di prova.

parazione di tossina tetanica che contiene almeno ministrate agli animali;

cinquanta volte la dose paralizzante al 50 per cento ^ se del caso, il numero degli animali paralizzati nei
(50 DP50) per millilitro. Se e© stato dimostrato che la 4 gruppi di 5 cavie inoculate con la soluzione della
preparazione della tossina di prova e© stabile, non e© tossina di prova e con le sue diluizioni indica che la
necessario verificare la dose paralizzante in ogni dose di prova e© approssimativamente cinquanta volte
dosaggio. la dose paralizzante al 50 per cento (50 DP50);

230
 Saggio della funzione Fc dell'immunoglobulina

inoizircserP
^ i limiti fiduciali del dosaggio (P = 0,95) sono com- della soluzione di tossina di prova (contenente

ilareneG
presi tra il 50 per cento e il 200 per cento dell'attivita© cinquanta volte la dose paralizzante al 50 per cento
biologica misurata; (50 DP50).
^ l'analisi statistica non mostra deviazioni dalla linea- Determinazione dell'attivita© biologica della tossina di

rita© o dal parallelismo. Se necessario attribuire la soluzione della tossina

isilanA id
prova.

di prova e tre sue diluizioni, ciascuna ad uno di 4 gruppi

idoteM
Il saggio puo© essere ripetuto, ma in questo caso i risul-
tati di tutti i saggi validi devono essere combinati nella di 6 topi ed iniettare per via sottocutanea 0,5 ml di cia-
valutazione dell'attivita© biologica. scuna soluzione a ciascun topo del gruppo al quale la
soluzione e© attribuita.
Esaminare i topi

irotinetnoC
/ ilairetaM
SAGGIO SU TOPI Lettura ed interpretazione dei risultati.

2 volte al giorno. Eliminare e sacrificare quelli che pre-

Utiliz- sentano chiari segni di paralisi tetanica. 4 giorni dopo
l'inoculazione della tossina di prova registrare il
Selezione e ripartizione degli animali in esame.

zare nel saggio topi sani, ciascuno di 14^20 g, prove-

nienti da un medesimo allevamento. Suddividere gli numero di topi che non presentano paralisi. Calcolare
animali in almeno 6 gruppi uguali; usare gruppi costi- l'attivita© biologica del vaccino da esaminare in rapporto

ivittaeR
tuiti da un numero di animali sufficiente per ottenere a quella della preparazione di riferimento, sulla base
risultati che soddisfino ai requisiti di validita© prescritti della proporzione di animali, sottoposti al saggio,
di seguito. Se non e© stata dimostrata la stabilita© della esenti da paralisi in ognuno dei gruppi di topi vaccinati,
tossina di prova o se questa non e© stata adeguatamente utilizzando i metodi statistici usuali.
standardizzata, aggiungere 4 gruppi di 6 topi ciascuno Il saggio e© valido solo se:

itnemogrA
ilareneG
Requisiti di validita©.

come controlli non vaccinati. Usare topi dello stesso ^ per il vaccino da esaminare e per la preparazione di
sesso o, altrimenti, i maschi e le femmine devono essere riferimento la dose protettiva al 50 per cento e© com-
ripartiti in modo uguale tra i gruppi. presa tra la dose piu© grande e quella piu© piccola som-
Selezione della tossina di prova. Selezionare una prepa- ministrate ai topi;

eifargonoM
razione di tossina tetanica che contiene almeno cento

ilareneG
volte la dose paralizzante al 50 per cento (100 DP50) ^ se del caso, il numero degli animali paralizzati nei
per ml. Se e© stato dimostrato che la preparazione della 4 gruppi di 6 topi inoculati con la soluzione della tos-
tossina di prova e© stabile, non e© necessario verificare la sina di prova e con le sue diluizioni indica che la dose
dose paralizzante in ogni dosaggio. di prova e© approssimativamente cinquanta volte la
dose paralizzante al 50 per cento (50 DP50);

ehcituecamraF
emroF
Preparazione della soluzione della tossina

Immediatamente prima dell'uso diluire la tossina di

di prova.
^ i limiti fiduciali del dosaggio (P = 0,95) sono com-
prova con un adatto diluente in modo da ottenere una presi tra il 50 per cento e il 200 per cento dell'attivita©
soluzione della tossina di prova che contiene approssi- biologica misurata;
mativamente cinquanta volte la dose paralizzante al ^ l'analisi statistica non mostra deviazioni dalla linea-
50 per cento (50 DP50) in 0,5 ml. Se necessario diluire rita© o dal parallelismo.
eiretaM

emirP
un'aliquota della soluzione della tossina di prova 1:16, Il saggio puo© essere ripetuto, ma in questo caso i risul-
1:50 e 1:160 con lo stesso diluente. tati di tutti i saggi validi devono essere combinati nella
Determinazione dell'attivita© biologica del vaccino. valutazione dell'attivita© biologica.
Usando una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R prepa-
ehcituecamraF
inoizaraperP

rare delle diluizioni del vaccino da esaminare e della

ehcificepS

preparazione di riferimento tali che, in entrambi i casi, 2.7.9. SAGGIO DELLA FUNZIONE Fc DELL'IM-

esse formino una serie in cui il rapporto tra le diluizioni MUNOGLOBULINA

non sia superiore a 2,5 e che le diluizioni intermedie, Sangue umano stabilizzato. Prelevare sangue umano di
quando sono inoculate per via sottocutanea alla dose
ehcitapoemO

gruppo 0 e raccoglierlo su una soluzione anticoagulante

inoizaraperP

di 0,5 ml per topo, proteggano circa il 50 per cento degli ACD. Conservare il sangue stabilizzato a 4 ‘C per non
animali dagli effetti paralizzanti della quantita© di tos- piu© di tre settimane.
sina tetanica, prescritta per questo saggio, inoculata
per via sottocutanea. Attribuire una diluizione a cia- Tampone fosfato soluzione salina a pH 7,2. Disciogliere
scun gruppo di topi ed iniettare per via sottocutanea 1,022 g di sodio fosfato dibasico anidro R, 0,336 g di
0,5 ml di ciascuna diluizione a tutti gli animali del sodio fosfato monobasico anidro R e 8,766 g di sodio clo-
ecidnI

gruppo al quale essa e© destinata. Dopo 28 giorni iniet- ruro R in 800 ml di acqua R e diluire a 1000 ml con lo
tare, per via sottocutanea, a ciascun animale 0,5 ml stesso solvente.

231
Saggio della funzione Fc dell'immunoglobulina

Soluzione madre di calcio e magnesio. Disciogliere lasciando un volume di 200 ml. Aggiungere un volume
1,103 g di calcio cloruro R e 5,083 g di magnesio cloru- di tampone albumina-barbital soluzione, equivalente
ro R in acqua R e diluire a 25 ml con lo stesso solvente. al volume del sopranatante eliminato, sospendere di
Tampone barbital soluzione madre. Disciogliere 207,5 g nuovo le cellule e raccoglierle come descritto prima e
di sodio cloruro R e 25,48 g di barbital sodico R in ripetere la procedura di lavaggio. Portare i rimanenti
4000 ml di acqua R ed aggiustare a pH 7,3 utilizzando 200 ml a tre quarti del volume Vs ottenendo cos|© il
acido cloridrico 1 M. Aggiungere 12,5 ml della soluzione volume iniziale (Vi). Mescolare 900 ml di tampone albu-
madre di calcio e magnesio e diluire a 5000 ml con mina-barbital soluzione con 100 ml di Vi che e© quindi
acqua R. Filtrare attraverso una membrana (dimen- ridotto al volume residuo (Vr) e determinare l'assor-
sione dei pori 0,22 mm) e conservare a 4 ‘C in recipienti banza iniziale a 541 nm (A). Diluire Vr di un fattore
di vetro. uguale ad A usando il tampone albumina-barbital
Tampone albumina-barbital soluzione. Disciogliere soluzione, ottenendo cos|© il volume finale aggiustato
0,150 g di albumina bovina R in 20 ml della soluzione Vf = Vr A di globuli rossi umani sensibilizzati ed
2

madre di tampone barbital e diluire a 100 ml con aggiustando A a 1,0 0,1 per una diluizione 1:10.
6

acqua R. Legame dell'anticorpo ai globuli rossi umani tannati sen-

Acido tannico soluzione. Disciogliere 10 mg di acido tan- Preparare le seguenti soluzioni

sibilizzati con l'antigene.

nico R in 100 ml di tampone fosfato soluzione salina a in successione e in doppio, utilizzando per ciascuna
pH 7,2. Preparare immediatamente prima dell'uso. soluzione una distinta semimicrocuvetta (ad es. del tipo
Complemento di cavia. Preparare una miscela di siero di monouso) o una provetta:
cavia, ottenuto dal sangue di almeno dieci cavie. Sepa- (1) Soluzioni in esame. Se necessario, aggiustare l'im-
rare il siero dal coagulo mediante centrifugazione a munoglobulina da esaminare a pH 7, per es.
circa 4 ‘C. Conservare il siero in piccole quantita© ad mediante aggiunta di sodio idrossido 1 M. Diluire
una temperatura inferiore a -70 ‘C. Immediatamente volumi della preparazione da esaminare contenenti
prima l'inizio dell'emolisi indotta dal complemento, 30 mg e 40 mg di immunoglobulina con tampone
diluire a 125-200 CH50 per millilitro con il tampone albumina-barbital soluzione ed aggiustare il
albumina-barbital soluzione e conservare in bagno di volume a 900 ml.
ghiaccio durante il saggio. (2) Soluzioni di riferimento. Preparare come le solu-
Antigene della rosolia. Antigene della rosolia appro- zioni in esame usando immunoglobulina umana
priato per il titolo di inibizione dell'emoagglutinazione PBR.
(HIT). Titolo > 256 unita© emoagglutinanti (HA). (3) Controllo del complemento. 900 ml di tampone albu-
Separare i mina-barbital soluzione.
Aggiungere ad ogni cuvetta o provetta 100 ml di globuli
Preparazione di globuli rossi umani tannati.

globuli rossi centrifugando un volume appropriato di

sangue umano stabilizzato e lavare le cellule almeno rossi umani sensibilizzati e mescolare bene.
tre volte con il tampone fosfato soluzione salina a Incubare per 15 min a temperatura ambiente, aggiun-
pH 7,2 e sospendere poi al 2 per cento V/V nel tampone gere 1000 ml di tampone albumina-barbital soluzione,
fosfato soluzione salina a pH 7,2. Diluire 0,1 ml di raccogliere le cellule mediante centrifugazione delle
acido tannico soluzione a 7,5 ml con il tampone fosfato cuvette o delle provette (1000 g per 10 min) ed eliminare
soluzione salina a pH 7,2 (concentrazione finale 1900 ml di sopranatante. Ripristinare i 1900 ml con il
1,3 mg/l). Mescolare 1 volume della soluzione, prepa- tampone albumina-barbital soluzione ripetendo l'in-
rata di recente, con 1 volume di sospensione di globuli tero procedimento di lavaggio e lasciando alla fine un
rossi umani ed incubare a 37 ‘C per 10 min. Racco- volume di 200 ml. I campioni in esame possono essere
gliere le cellule mediante centrifugazione (400-800 g conservati in cuvette o provette sigillate a 4 ‘C per 24 h.
per 10 min), eliminare il sopranatante e lavare le cellule Per misurare l'emo-
una volta con il tampone fosfato soluzione salina a
Emolisi indotta dal complemento.

lisi, aggiungere ad ogni campione in esame 600 ml di

pH 7,2. Sospendere di nuovo le cellule tannate tampone albumina-barbital soluzione riscaldata a
all'1 per cento V/V nel tampone fosfato soluzione 37 ‘C, sospendere di nuovo le cellule mediante ripetuto
salina a pH 7,2. pipettamento (almeno cinque volte) e porre la cuvetta
Coniugazione dell'antigene ai globuli rossi umani tan- nell'apposito supporto termostatato di uno spettrofoto-
nati.Usare un volume adeguato (Vs) di cellule tannate, metro. Dopo 2 min aggiungere 200 ml di complemento
aggiungere 0,2 ml di antigene della rosolia per 1,0 ml di cavia diluito (125-200 CH50/ml), mescolare accura-
di cellule tannate ed incubare a b.m. a 37 ‘C per tamente pipettando due volte e, immediatamente dopo
30 min. Raccogliere le cellule mediante centrifugazione il secondo pipettamento, iniziare la registrazione del-
(400-800 g per 10 min) ed eliminare il sopranatante l'assorbanza, in funzione del tempo, a 541 nm, usando

232
 Dosaggio del fattore VII della coagulazione del sangue umano

inoizircserP
il tampone albumina-barbital soluzione come liquido di che e© costituito da plasma liofilizzato L'equivalenza in

ilareneG
compensazione. Interrompere la misura se l'assorbanza Unita© Internazionali dello Standard Internazionale e©
in funzione del tempo ha superato nettamente il punto stabilita dall'Organizzazione Mondiale della Sanita© .
di flesso. Il metodo del dosaggio cromogeno consiste di due fasi
. Determinare la pendenza (S) della curva di successive: l'attivazione del fattore X, sotto l'azione del

isilanA id
Valutazione

emolisi all'incirca al punto di flesso, dividendo la parte fattore VII, in una miscela di reazione contenente il

idoteM
piu© ripida della curva in intervalli di tempo t appro- D fattore tissutale, fosfolipidi e ioni calcio seguita dalla
priati (per es. t = 1 min) e calcolare S tra i punti di
D scissione enzimatica di un substrato cromogeno del fat-
intersezione adiacenti, espressi come A per minuto. Il
D tore Xa, con liberazione di un cromoforo che puo© essere
valore piu© grande di S serve come (Sexp). Inoltre deter- quantificato per via spettrofotometrica. In condizioni

irotinetnoC
appropriate di dosaggio, esiste una relazione lineare

/ ilairetaM
minare l'assorbanza all'inizio della misura (As)
mediante estrapolazione della curva, che e© pressocchë tra la velocita© di formazione del fattore Xa e la concen-
lineare e parallela all'asse del tempo nei primi minuti. trazione del fattore VII. Il dosaggio viene riassunto
Correggere (Sexp) mediante l'espressione: nella figura 2.7.10.-1.
S SAexp Fase 1

ivittaeR
0
ˆ

a Fattore VII Fattore tissutale Ca

s
Fattore VIIa Ca Fattore VIIa
‡‡
‡
† !

Calcolare la media aritmetica dei valore di S per cia-

‡‡
‡
0

scuna preparazione. Calcolare l'indice della funzione b Fattore X Fattore tissutale=fosfolipidi Fattore Xa
‡

Fc (IFc) mediante l'espressione: † !

itnemogrA
ilareneG
IFc 100 S S S S c
2
0
ÿ
0
† Fase 2
Substrato cromogeno Fattore Xa peptide cromoforo
ˆ
s c0
ÿ
0
! ‡

S = media aritmetica della pendenza corretta per la Figura 2.7.10.-1.- Rappresentazione schematica del

eifargonoM
0

preparazione da esaminare; dosaggio del fattore VII di coagulazione del sangue

ilareneG
S s = media aritmetica della pendenza corretta per la
0

Le due fasi richiedono reattivi disponibili in commercio

preparazione di riferimento; da diversi fornitori. Anche se la composizione dei sin-
S c = media aritmetica della pendenza corretta per il goli reattivi puo© subire alcune variazioni le loro caratte-

ehcituecamraF
0

complemento di controllo. ristiche essenziali sono descritte nelle specifiche che

emroF
Calcolare l'indice della funzione Fc della preparazione seguono.
da esaminare: il valore non e© inferiore a quello indicato
nel foglietto allegato alla preparazione di riferimento. REATTIVI
Il reattivo di fattore della coagulazione e© costituito da
proteine purificate di origine umana o bovina. Queste
eiretaM

emirP
2.7.10. DOSAGGIO DEL FATTORE VII DELLA

COAGULAZIONE DEL SANGUE UMANO comprendono il fattore X e il fattore tissutale trombo-

plastina/fosfolipide come attivatore del fattore VII.
Il fattore VII della coagulazione e© dosato misurando la Queste proteine sono parzialmente purificate e non
sua attivita© biologica come complesso fattore VIIa-fat- contengono impurezze che interferiscono con l'attiva-
ehcituecamraF
inoizaraperP

tore tissutale nell'attivazione del fattore X, in presenza zione del fattore VII o del fattore X. Il fattore X e© pre-
ehcificepS

di ioni calcio e di fosfolipidi. L'attivita© biologica di una sente in quantita© tali da dare una concentrazione finale,
preparazione di fattore VII viene valutata confron- durante la prima fase del dosaggio, di 10-350 nmol per
tando la quantita© necessaria per ottenere la formazione litro e preferibilmente di 14-70 nmol per litro. Possono
di una determinata aliquota di fattore Xa in una essere usate la tromboplastina di origine naturale (cer-
ehcitapoemO
inoizaraperP

miscela di reazione contenente le sostanze che interven- vello bovino o di coniglio) o preparazioni sintetiche
gono nell'attivazione del fattore X, con la quantita© come il componente fattore tissutale/fosfolipide.
dello Standard Internazionale, o con una preparazione La tromboplastina adatta per la determinazione
di riferimento, titolata in Unita© Internazionali, necessa- del tempo di protrombina viene diluita 1:5-1:50 in++tam-
ria per produrre la formazione della stessa quantita© di pone in modo che la concentrazione finale di Ca sia
fattore Xa. 15-25 mmol/litro. La formazione finale del fattore Xa
ecidnI

L'Unita© Internazionale e© l'attivita© del fattore VII di una viene eseguita in una soluzione contenente albumina
determinata quantita© dello Standard Internazionale umana o bovina ad una concentrazione tale che non si

233
Dosaggio del fattore IX di coagulazione del sangue umano

verifichi una diminuzione di assorbimento e che sia centrazione del fattore Xa abbia raggiunto il suo mas-
opportunamente tamponata a pH 7,3-8,0. Nella miscela simo livello al fine di ottenere una soddisfacente rela-
finale di incubazione il fattore VII deve essere il solo zione lineare dose-risposta. Il tempo di attivazione e©
componente limitamente la velocita© e ciascun compo- scelto anche per ottenere una formazione di fattore Xa
nente del reattivo non deve avere una propria capacita© lineare nel tempo. Tempi di attivazione appropriati
di generare il fattore Xa. sono generalmente compresi tra 2 min e 5 min, ma sono
La seconda fase della reazione consiste nella quantifi- ammesse variazioni per migliorare la linearita© della
cazione del fattore Xa formato per mezzo di un sub- relazione dose-risposta.
strato cromogeno specifico per il fattore Xa. General- Fase 2 . Arrestare la reazione di attivazione mediante
mente esso e© costituito da un corto peptide derivatiz- aggiunta del reattivo preriscaldato contenente il sub-
zato di 3-5 amminoacidi, legato ad un gruppo strato cromogeno. Quantificare la velocita© di scissione
cromoforo. La scissione di questo gruppo dal substrato del substrato, che deve essere lineare con la concentra-
peptidico sposta il massimo di assorbimento verso una zione del fattore Xa formato, misurando allo spettrofo-
lunghezza d'onda che permette la sua quantificazione tometro la variazione di assorbanza ad una lunghezza
spettrofotometrica. Il substrato si discioglie general- d'onda appropriata; l'assorbanza puo© essere misurata
mente in acqua R e si utilizza ad una concentrazione in continuo, in mdo che sia possibile calcolare la velo-
finale di 0,2-2 mmol per litro. Il substrato puo© inoltre cita© iniziale di scissione del substrato, sia interrom-
contenere appropriati inibitori che bloccano l'ulteriore pendo la reazione di idrolisi dopo un appropriato inter-
formazione del fattore Xa (aggiunta di edetato). vallo, abbassando il pH mediante aggiunta di un reat-
tivo adatto, come acido acetico (500 g/l C2H4O2) o
PROCEDURA DI DOSAGGIO una soluzione di citrato a pH 3 (1 mole per litro).
Ricostituire l'intero contenuto di una fiala della prepa- Aggiustare il tempo di idrolisi in modo da ottenere
razione di riferimento e della preparazione in esame uno sviluppo del cromoforo lineare nel tempo. Tempi
aggiungendo un'appropriata quantita© di acqua R ed di idrolisi appropriati sono generalmente compresi tra
usare entro 1 h. Aggiungere alle preparazioni ricosti- 3 min e 15 min, ma sono ammesse variazioni se queste
tuite una quantita© sufficiente di prediluente in modo permettono di ottenere una migliore linearita© nella
da ottenere soluzioni contenenti 0,5-2,0 Unita© Interna- relazione dose-risposta.
zionali di fattore VII per millilitro. Verificare la validita© del dosaggio e calcolare l'attivita©
Preparare ulteriori diluizioni della preparazione di rife- biologica della preparazione in esame mediante metodi
rimento e della preparazione in esame usando un tam- statistici usuali (per esempio 5.3. Analisi statistica dei
pone isotonico non chelante contenente l'1 per cento di risultati dei dosaggi e saggi biologici).
albumina umana o bovina tamponato preferibilmente
a pH 7,3-8,0. Per ciascun materiale, preparare almeno
tre diluizioni separate ed indipendenti preferibilmente
2.7.11. DOSAGGIO DEL FATTORE IX DI COAGU-

in duplicato. Preparare le diluizioni in modo che la

LAZIONE DEL SANGUE UMANO

concentrazione finale del fattore VII sia inferiore a Determinare l'attivita© biologica confrontando la quan-
0,005 U.I. per millilitro. tita© della preparazione da esaminare necessaria a
Preparare una soluzione di controllo che includa tutti i ridurre il tempo di coagulazione di una miscela cam-
componenti eccetto il fattore VII. pione contenente le sostanze, diverse dal fattore IX,
Preparare tutte le diluizioni in provette di plastica ed che partecipano al processo di coagulazione del sangue
usarle entro 1 h. e la quantita© di una preparazione di riferimento, tito-
. Mescolare le diluizioni della preparazione di lata in Unita© Internazionali, necessaria per produrre lo
Fase 1

riferimento del fattore VII e della preparazione da esa- stesso effetto.

minare con un volume appropriato di reattivo del fat- L'Unita© Internazionale e© l'attivita© di una determinata
tore della coagulazione preriscaldato o una combina- quantita© dello Standard Internazionale che e© costituito
zione dei suoi costituenti separati ed incubare la da un concentrato liofilizzato del fattore IX della coa-
miscela a 37 ‘C in provette di plastica o in pozzetti in gulazione del sangue umano. L'equivalenza in Unita©
micropiastra. La concentrazione dei diversi compo- Internazionali dello Standard Internazionale e© stabilita
nenti durante la formazione del fattore Xa deve essere dall'Organizzazione Mondiale della Sanita© .
come specificato precedentemente nella sezione sulla Ricostituire, separatamente, la preparazione da esami-
descrizione dei reattivi. Lasciare procedere la reazione nare e la preparazione di riferimento come indicato in
di attivazione del fattore X per un tempo appropriato, etichetta ed usarle immediatamente. Quando applica-
arrestando generalmente la reazione prima che la con- bile, determinare la quantita© di eparina presente

234
 Dosaggio dell'immunoglobulina umana anti-D

inoizircserP
(2.7.12) e neutralizzare l'eparina aggiungendo prota- priato (per esempio, 7 g/l di sodio cloruro R, 6 g/l di

ilareneG
mina solfato R (10 g di protamina solfato neutraliz-
l sodio citrato R, pH 7,3) in modo da ottenere approssi-
zano 1 U.I. di eparina). Diluire la preparazione da esa- mativamente 0,25 U.I. di eparina per millilitro. Prepa-
minare e la preparazione di riferimento con una quan- rare diluizioni seriali fino a 1:32 usando il tampone di
tita© sufficiente di tampone imidazolo soluzione a diluizione (vedi alle Soluzioni di riferimento). Lasciare
pH 7,3 R in modo da ottenere soluzioni contenenti le diluizioni a riposo per 30 min.

isilanA id
idoteM
0,5-2,0 U.I. per millilitro. Preparare diluizioni al rad- Soluzioni di riferimento. Diluire la preparazione di rife-
doppio in un intervallo da 1:10 a 1:80 usando una rimento dell'eparina con un tampone di diluizione
miscela di 1 volume di una soluzione (38 g/l) di sodio appropriato (per es., 6 g/l di tris(idrossimetil)ammino-
citrato R e 5 volumi di tampone imidazolo soluzione a metano R, 2,2 g/l di acido(etilendinitrilo)tetracetico R,

irotinetnoC
pH 7,3 R. Preparare accuratamente queste soluzioni ed

/ ilairetaM
11,3 g/l di sodio cloruro R, pH 8,4) in modo da ottenere
usarle immediatamente. approssimativamente 0,25 U.I. di eparina per millilitro.
Usare, per es., provette da incubazione mantenute a Preparare diluizioni seriali fino a 1:32.
b.m. a 37 ‘C. Introdurre in ciascuna provetta 0,1 ml di Introdurre con una pipetta 200 ml della soluzione
plasma substrato R2 e 0,1 ml di una delle diluizioni della in esame, della soluzione di riferimento o del bianco
preparazione di riferimento o della preparazione da (tampone di diluizione) e 200 ml di una soluzione di

ivittaeR
esaminare. Aggiungere a ciascuna provetta 0,1 ml di antitrombina III R (3 U.I./ml) in una serie di provette
una diluizione appropriata di cefalina R o di sostituto di plastica. Lasciare a riposo le miscele per 30 min
piastrinico R e 0,1 ml di una sospensione contenente ed aggiungere 200 ml di una soluzione di trombina
0,5 g di caolino leggero R in 100 ml di una soluzione bovina R (20 U.I./ml). Mescolare accuratamente
(9 g/l) di sodio cloruro R e lasciare a riposo per circa usando un agitatore magnetico e mantenere a 37 ‘C

itnemogrA
ilareneG
10 min inclinando le provette ad intervalli regolari. per 90 s.
A ciascuna provetta aggiungere 0,1 ml di una soluzione Preparare una soluzione di un substrato cromogeno
(7,4 g/l) di calcio cloruro R. Usando un cronometro, specifico per la trombina ad una concentrazione equi-
misurare il tempo di coagulazione, cioe© l'intervallo di valente ad almeno il doppio del valore di Km (costante
tempo tra l'aggiunta del calcio cloruro e la prima indi-

eifargonoM
di Michaelis).

ilareneG
cazione della formazione di fibrina, che puo© essere Preriscaldare la soluzione del substrato a 37 ‘C ed
osservata visivamente o mediante l'uso di un apparec- aggiungerne 200 ml a ciascuna provetta contenente il
chio appropriato. Calcolare l'attivita© biologica usando campione in esame, la preparazione di riferimento o il
i metodi statistici usuali (per esempio, 5.3 Analisi stati- bianco. Mescolare accuratamente usando un agitatore

ehcituecamraF
stica dei risultati dei dosaggi e saggi biologici). magnetico. Incubare a 37 ‘C per 90 s, arrestare la rea-

emroF
Effettuare un saggio in bianco, per assicurare che non ci zione aggiungendo 200 ml di una soluzione di acido
sia una contaminazione apprezzabile del plasma sub- acetico R (C2H4O2, 500 g/l) e misurare l'assorbanza a
strato R2 da parte del fattore IX, usando al posto della 405 nm.
preparazione da esaminare un volume corrispondente Calcolare il contenuto di eparina della preparazione in
di una miscela costituita da 1 volume di una soluzione esame usando i metodi statistici usuali (per esempio,
eiretaM
(38 g/l) di sodio citrato R e 5 volumi di tampone imida-

emirP
zolo soluzione a pH 7,3 R. Il saggio e© valido solo se il 5.3 Analisi statistica dei risultati dei dosaggi e saggi
biologici).
tempo di coagulazione misurato per il saggio in bianco
e© compreso tra 100 s e 200 s.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
2.7.13. DOSAGGIO DELL'IMMUNOGLOBULINA

UMANA ANTI-D

L'attivita© biologica dell'immunoglobulina umana anti-

2.7.12. DOSAGGIO DELL'EPARINA NEI CONCEN-

TRATI DEI FATTORI DELLA COAGULA-

ZIONE D e© determinata confrontando la quantita© necessaria a

produrre agglutinazione dei globuli rossi D-positivi
ehcitapoemO
inoizaraperP

Incubare il campione in esame con un eccesso definito con la quantita© di una preparazione di riferimento, tito-
di trombina ed un substrato cromogeno specifico per lata in Unita© Internazionali, necessaria a produrre lo
la trombina e misurare l'entita© dell'aumento dell'assor- stesso effetto.
banza (correlata alla quantita© di p-nitroanilina rila- L'Unita© Internazionale e© l'attivita© di una quantita© defi-
sciata) a 405 nm. L'entita© dell'aumento e© inversamente nita della Preparazione Internazionale di Riferimento.
proporzionale al contenuto di eparina del campione. L'equivalenza in Unita© Internazionali della Prepara-
ecidnI

Soluzioni in esame. Ricostituire la preparazione come zione Internazionale di Riferimento e© stabilita dall'Or-
indicato in etichetta e diluire con un tampone appro- ganizzazione Mondiale della Sanita© .

235
Dosaggio del vaccino dell'epatite A

Usare una miscela di globuli rossi D-positivi, aventi meno Calcolare l'attivita© biologica della preparazione in
di 7 giorni e conservati opportunamente, ottenuta da esame in Unita© Internazionali per millilitro mediante
almeno quattro donatori di gruppo O R1R1, Aggiungere l'espressione:
ad un volume appropriato di cellule, precedentemente a d
lavate per tre volte con una soluzione (9 g/l) di sodio clo- D
2

ruroR,unvolumeugualedibromelinasoluzioneR,lasciare
a riposo a 37 ‘C per 10 min, centrifugare, eliminare il a = attivita© in Unita© Internazionali per millilitro di
liquido sopranatante e lavare per tre volte con una solu- una diluizione 1 a D della preparazione di riferi-
zione (9 g/l) di sodio cloruro R. Sospendere 20 volumi di mento,
globuli rossi in una miscela di 15 volumi di siero inerte, d = fattore di diluizione della preparazione in esame
20 volumi di una soluzione (300 g/l) di albumina bovina R che corrisponde ad un dato valore di DA trovato,
e 45 volumi di una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R.
Lasciare la sospensione cos|© ottenuta in acqua ghiacciata D = fattore di diluizione della preparazione di riferi-
agitando continuamente. mento che corrisponde allo stesso valore di DA
Usando una siringa automatica tarata, preparare dilui- trovato.
zioni appropriate della preparazione in esame e della
preparazione di riferimento usando come diluente una 2.7.14. DOSAGGIO DEL VACCINO DELL'EPATITE A

soluzione contenente 5 g/l di albumina bovina R e 9 g/l Il dosaggio del vaccino dell'epatite A e© effettuato in
di sodio cloruro R. vivo, confrontando la sua capacita© , in condizioni defi-
Usare un apparecchio appropriato per l'analisi automa- nite, di indurre la formazione di specifici anticorpi nei
tica continua: mantenere la temperatura nel collettore, topi con la stessa capacita© di una preparazione di riferi-
tranne che nelle serpentine di incubazione, a 15,0 ‘C. mento, oppure in vitro, determinando il contenuto di
Pompare la sospensione di globuli rossi nel collettore antigene mediante una determinazione immunochi-
dell'apparecchio ad un flusso di 0,1 ml per min ed una mica.
soluzione (3 g/l) di metilcellulosa 450 R ad un flusso di
0,05 ml per min. Introdurre le diluizioni della prepara- DOSAGGIO IN VIVO
zione in esame e della preparazione di riferimento ad
un flusso di 0,1 ml/min per 2 min, seguite dalla solu- Il saggio sul topo illustrato piu© avanti e© riportato come
zione diluente ad un flusso di 0,1 ml/min per 4 min esempio di un metodo che e© risultato adeguato per uno
prima che sia introdotta la diluizione successiva. specifico vaccino; possono essere utilizzati anche altri
Introdurre aria ad un flusso di 0,6 ml per minuto. Incu- metodi convalidati.
bare a 37 ‘C per 18 min e poi disperdere gli agglomerati Selezione e distribuzione degli animali per il saggio.

introducendo, ad un flusso di 1,6 ml per min, una solu- Utilizzare nel saggio topi sani dello stesso lotto, di circa
zione (9 g/l) di sodio cloruro R contenente un appro- 5 settimane di eta© e di un ceppo adeguato. Utilizzare
priato agente bagnante (per esempio, polisorbato 20 R animali dello stesso sesso. Distribuire gli animali in
ad una concentrazione finale di 0,2 g/l) per non turbare almeno sette gruppi uguali (di numero appropriato ai
l'erogazione dell'aria. Lasciare sedimentare l'aggiuti- requisiti del saggio).
nato e decantare per due volte, la prima a 0,4 ml per Determinazione dell'attivita© biologica del vaccino in

min e poi a 0,6 ml per min. Lisare i globuli rossi non esame. Usare una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R
agglutinati con una soluzione contenente 5 g/l di ottoxi- contenente l'adiuvante a base di alluminio utilizzato
nolo 10 R, 0,2 g/l di potassio ferricianuro R, 0,2 g/l di per il vaccino, preparare almeno tre diluizioni del vac-
sodio bicarbonato R e 0,05 g/l di potassio cianuro R ad cino in esame e diluizioni corrispondenti della prepara-
un flusso di 2,5 ml per min. Dopo 10 min introdurre zione di riferimento. Attribuire una diluizione a ciascun
una spirale per consentire la conversione dell'emoglo- gruppo di animali e inoculare, per via sottocutanea,
bina. Registrare in continuo l'assorbanza (2.2.25) del- non piu© di 1,0 ml di ciascuna diluizione ad ogni animale
l'emolisato ad una lunghezza d'onda compresa tra del gruppo a cui quella diluizione e© destinata. Mante-
540 nm e 550 nm. Determinare l'intervallo delle con- nere un gruppo di controlli non vaccinati, iniettati per
centrazioni degli anticorpi per le quali c'e© una relazione via sottocutanea con lo stesso volume di diluente.
lineare tra la concentrazione e il risultante cambia- Dopo 28-32 giorni anestetizzare e salassare tutti gli ani-
mento di assorbanza (DA). Costruire una curva di rife- mali, tenendo separati i sieri dei singoli individui.
rimento utilizzando risultati ed usare la parte lineare Sottoporre a saggio i singoli sieri per gli anticorpi speci-
della curva per determinare l'attivita© della preparazione fici contro il virus dell'epatite A con un metodo immu-
in esame. nochimico adeguato (2.7.1).

236
 Dosaggio del vaccino dell'epatite B (rDNA)

inoizircserP
Effettuare i calcoli mediante i metodi stati- DOSAGGIO IN VIVO

ilareneG
Calcoli.

stici usuali per un saggio con una risposta quantale

(5.3. Analisi Statistica dei risultati dei dosaggi e dei saggi Uti-
biologici). Selezione e distribuzione degli animali per il saggio.

lizzare nel saggio topi sani dello stesso lotto, dell'eta© di

Per il dosaggio in questione, dalla distribuzione dei circa 5 settimane. Il ceppo di topi utilizzato per questo

isilanA id
livelli di reazione misurati per tutti i sieri del gruppo

idoteM
saggio deve dare una pendenza significativa per la
non vaccinato, determinare il massimo livello di rea- curva dose-risposta rispetto all'antigene; i topi con
zione che puo© essere previsto in un animale non vacci- aplotipo H-2q o H-2d sono adatti. Sono anche adatte
nato. Ogni risposta negli animali vaccinati che supera cavie sane ciascuna di 300-350 g (dell'eta© di circa 7 setti-
questo livello e© , per definizione, una sieroconversione. mane), provenienti dallo stesso lotto, sono anche

irotinetnoC
/ ilairetaM
Effettuare una adeguata trasformazione della percen- appropriate. Utilizzare animali dello stesso sesso.
tuale degli animali di ciascun gruppo che mostrano sie- Distribuire gli animali in almeno 7 gruppi uguali di
roconversione (per esempio, una trasformazione pro- numero appropriato ai requisiti del dosaggio.
bit) e analizzare i dati secondo il modello a linee paral-
lele usando il logaritmo della curva dose-risposta. Determinazione dell'attivita© biologica del vaccino in
Determinare l'attivita© biologica della preparazione in . Usare una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R

ivittaeR
esame
esame in rapporto a quella della preparazione di riferi- contenente l'adiuvante a base di alluminio utilizzato
mento. per il vaccino o un altro diluente appropriato, e prepa-
Condizioni di validita© . Il saggio e© valido solo se: rare almeno tre diluizioni del vaccino in esame e dilui-
^ per entrambi i vaccini, quello da sottoporre a sag- zioni corrispondenti alla preparazione di riferimento.

itnemogrA
Attribuire una diluizione a ciascun gruppo di animali

ilareneG
gio e la preparazione di riferimento, la DE50 e© com- ed inoculare, per via intraperitoneale, non piu© di
presa tra la dose piu© piccola e quella piu© grande 1,0 ml di ciascuna diluizione ad ogni animale del
somministrata agli animali, gruppo a cui quella diluizione e© destinata. Un gruppo
^ l'analisi statistica non mostra deviazione significa- di animali non viene vaccinato e riceve, per via intrape-

eifargonoM
tiva dalla linearita© o dal parallelismo, ritoneale, lo stesso volume di diluente. Dopo un appro-

ilareneG
^ i limiti fiduciali dell'attivita© biologica relativa sono priato intervallo di tempo (ad es. 4-6 settimane), aneste-
compresi tra il 33 per cento e il 300 per cento del- tizzare e salassare tutti gli animali, e raccogliere, sepa-
l'attivita© biologica stimata. ratamente, il siero di ciascuno di essi. Sottoporre a
Il limite fiduciale supe- saggio i singoli sieri per gli anticorpi specifici

ehcituecamraF
anti-HBsAg mediante un dosaggio immunochimico
Requisito dell'attivita© biologica.

riore (P = 0,95) dell'attivita© biologica relativa stimata

emroF
non e© inferiore a 1,0. adeguato (2.7.1).

DOSAGGIO IN VITRO Calcoli. Effettuare i calcoli mediante i metodi stati-

stici usuali per un dosaggio con una risposta quantale
Effettuare una determinazione immunochimica (2.7.1) (5.3 Analisi statistica dei risultati dei saggi biologici e dei
eiretaM

emirP
del contenuto di antigene con criteri di accettazione dosaggi).
convalidati rispetto al saggio in vivo. I criteri di accetta-
zione sono approvati, per una data preparazione di rife- Per il dosaggio in questione, dalla distribuzione dei
rimento, dall'autorita© competente sulla base dei dati di livelli di reazione misurati per tutti i sieri del gruppo
ehcituecamraF
inoizaraperP

convalida. non vaccinato, determinare il massimo livello di rea-

ehcificepS

zione che puo© essere previsto in un animale non vacci-

nato. Ogni risposta negli animali vaccinati che supera
2.7.15. DOSAGGIO

TE B (rDNA)
DEL VACCINO DELL'EPATI-
questo livello e© , per definizione, una sieroconversione.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Il dosaggio del vaccino dell'epatite B (rDNA) si effettua Effettuare una adeguata trasformazione della percen-
in vivo confrontando, in condizioni definite, la sua tuale di animali di ciascun gruppo che mostrano siero-
capacita© di indurre anticorpi specifici contro l'antigene conversione (per esempio una trasformazione probit) e
di superficie del virus dell'epatite B (HBsAg) nei topi o analizzare i dati secondo il modello a linee parallele
nelle cavie con la stessa capacita© di una preparazione usando il logaritmo della curva dose-risposta.
di riferimento, oppure in vitro misurando il contenuto Determinare l'attivita© biologica della preparazione in
ecidnI

in antigene mediante una determinazione immunochi- esame in rapporto a quella della preparazione di riferi-
mica. mento.

237
Dosaggio del vaccino pertossico acellulare

Condizioni di validita© . Il saggio e© valido solo se: duzione usato per il lotto esaminato nelle prove clini-
^ per entrambi i vaccini, quello da sottoporre a sag- che. La stabilita© del vaccino di riferimento dovra© essere
gio e quello di riferimento, la DE50 e© compresa tra documentata.
la dose piu© piccola e quella piu© grande sommini- Requisiti
strata agli animali, La capacita© del vaccino di indurre anticorpi non e© signi-
^ l'analisi statistica non mostra deviazione dalla ficativamente (P = 0,95) inferiore a quella del vaccino
linearita© o dal parallelismo, di riferimento.
^ i limiti fiduciali dell'attivita© biologica relativa sono Il seguente modello di saggio e© riportato come esempio di
compresi tra il 33 per cento e il 300 per cento del- un metodo che risulta soddisfacente.
l'attivita© biologica stimata. Selezione e distribuzione degli animali per il saggio.
Requisito dell'attivita© biologica. Il limite fiduciale supe- Usare nel saggio topi sani (per es. ceppi CD1) dello
riore (P = 0,95) dell'attivita© biologica relativa stimata stesso gruppo di eta© compresa, tra 4-8 settimane,
non e© inferiore a 1,0. Distribuire gli animali in 6 gruppi di numero appro-
priato ai requisiti del dosaggio. Usare tre diluizioni del
DOSAGGIO IN VITRO vaccino in esame e tre diluizioni di una preparazione
di riferimento e attribuire ciascuna diluizione ad un
Effettuare una determinazione immunochimica (2.7.1) gruppo di topi. Iniettare a ciascun topo, per via intrape-
del contenuto in antigene con criteri di accettazione ritoneale o per via sottocutanea, 0,5 ml della diluizione
convalidati rispetto al saggio in vivo. Il dosaggio immu- attribuita al suo gruppo.
noenzimatico ELISA e il dosaggio radioimmunologico Raccolta di campioni di siero. 4-5 settimane dopo la vac-
(RIA), che prevede l'uso di anticorpi monoclonali spe- cinazione, anestetizzare e salassare i singoli topi.
cifici per gli epitopi dell'HBsAg che inducono risposta Conservare i sieri a 20‘ C fino al momento del saggio
protettiva, si sono dimostrati idonei. Utilizzare un per il contenuto dell'anticorpo.
numero appropriato di diluizioni del vaccino in esame Determinazione dell'anticorpo. Sottoporre a saggio i sin-
e della preparazione di riferimento e per analizzare i goli sieri per il contenuto di anticorpi specifici nei con-
dati, che possono essere convertiti in maniera appro- fronti di ciascun componente usando un metodo conva-
priata, usare un modello a linee parallele. In commer- lidato come il saggio ELISA mostrato di seguito.
cio sono disponibili kit per la misurazione in vitro del- Saggio ELISA. Ricoprire delle piastre da microtitola-
l'HBsAg ed e© possibile adattare le loro procedure di zione (di policloruro di vinile o di polistirene come
saggio all'uso come un dosaggio di attivita© biologica in appropriato per l'antigene specifico) con l'antigene
vitro. purificato ad una concentrazione di 100 ng per poz-
I criteri di accettazione per una data preparazione di zetto. Dopo il lavaggio, i siti non reattivi sono bloccati
riferimento sono approvati dall'autorita© competente mediante incubazione con una soluzione di albumina
sulla base dei dati di convalida. sierica bovina e poi sono lavati. Sulle piastre sono pre-
parate diluizioni a raddoppio di sieri ottenuti dai topi
immunizzati con il vaccino in esame e con il vaccino di
riferimento. Dopo incubazione a 22-25 ‘C per 1 h,
2.7.16. DOSAGGIO DEL VACCINO PERTOSSICO

lavare le piastre. Aggiungere, in ciascun pozzetto, una,

ACELLULARE

La capacita© del vaccino di indurre la formazione di soluzione appropriata di enzima anti-topo IgG coniu-
anticorpi specifici e© confrontata con la stessa capacita© gato e incubare a 22-25 ‘C per 1 h. Dopo lavaggio,
di una preparazione di riferimento esaminata contem- aggiungere un substrato cromogeno dal quale l'enzima
poraneamente; gli anticorpi sono determinati usando coniugato legato libera un cromoforo che puo© essere
metodi immunochimici adatti (2.7.1) come il dosaggio quantificato mediante la misurazione dell'assorbanza
immunoenzimatico ELISA. Il saggio sui topi, mostrato (2.2.25). Le condizioni del saggio sono stabilite in modo
di seguito, usa un modello a tre punti ma, dopo conva- da ottenere una risposta lineare dell'assorbanza in fun-
lida, per il saggio di routine puo© essere usato un metodo zione del contenuto di anticorpo nell'intervallo di misu-
a diluizione singola. razione usato e con valori di assorbanza che sono com-
Vaccino di riferimento. Usare come vaccino di riferi- presi nell'intervallo 0,1-2,0.
mento un lotto di vaccino che si e© dimostrato efficace Nel saggio e© usato un antisiero di riferimento di attivita©
nelle prove cliniche o un lotto rappresentativo. biologica assegnata che serve come base per il calcolo
Per la preparazione di un lotto rappresentativo, e© neces- dei livelli di anticorpo nel saggio dei sieri. Nel saggio e©
saria una stretta aderenza al processo di pro- incluso anche un controllo standardizzato del siero.

238
 Dosaggio del fattore II di coagulazione del sangue umano

inoizircserP
Il saggio non e© valido solo se: L'entita© di variazione dell'assorbanza ( A/min) e© inver-

ilareneG
D

^ il valore trovato per il siero di controllo differisce samente proporzionale all'attivita© dell'antitrombina III.
per piu© di 2 deviazioni standard dal valore asse- Verificare la validita© del dosaggio e calcolare l'attivita©
gnato, biologica della preparazione in esame mediante i
^ l'intervallo di confidenza dell'attivita© biologica sti- metodi statistici usuali (per esempio, 5.3. Analisi stati-

isilanA id
stica dei risultati dei dosaggi e saggi biologici).

idoteM
mata e© maggiore del 50-200 per cento.
Calcoli. Calcolare i titoli anticorpali nel siero dei topi
immunizzati con il vaccino in esame e quello di riferi- 2.7.18. DOSAGGIO DEL FATTORE II DI COAGU-

mento e dai dati ottenuti, calcolare l'attivita© biologica LAZIONE DEL SANGUE UMANO

del vaccino in esame in relazione al vaccino di riferi-

irotinetnoC
/ ilairetaM
mento, usando i metodi statistici usuali. Il dosaggio del fattore II della coagulazione e© effettuato
dopo specifica attivazione per formare il fattore IIa.
Il fattore IIa e© determinato confrontando la sua attivita©
2.7.17. DOSAGGIO DELL'ANTITROMBINA III di scissione di uno specifico substrato peptidico
UMANA cromogeno con quella dello Standard Internazionale o
di una preparazione di riferimento, titolata in Unita©

ivittaeR
Il contenuto di antitrombina III della preparazione in Internazionali.
esame si determina confrontando, in presenza di un L'Unita© Internazionale e© l'attivita© del fattore II di una
eccesso di eparina, la sua capacita© di inattivare la trom- determinata quantita© dello Standard Internazionale
bina con quella di una preparazione di riferimento di che e© costituito da un concentrato liofilizzato del fatto-
antitrombina III umana concentrata, calibrata in Unita©

itnemogrA
re II della coagulazione del sangue umano. L'equiva-

ilareneG
Internazionali. Mescolare quantita© diverse della prepa- lenza in Unita© Internazionali dello Standard Interna-
razione in esame con una quantita© definita di trombina zionale e© stabilita dall'Organizzazione Mondiale della
e determinare l'attivita© della trombina residua utiliz- Sanita© .
zando un appropriato substrato cromogeno.
L'Unita© Internazionale e© l'attivita© di una determinata Il metodo del dosaggio cromogeno consiste di due fasi

eifargonoM
successive: l'attivazione del fattore II, per mezzo del

ilareneG
quantita© dello Standard Internazionale per l'antitrom- veleno di vipera, seguita dalla scissione enzimatica di
bina III umana concentrata. L'equivalenza in Unita© un substrato cromogeno del fattore IIa, con liberazione
Internazionali dello Standard Internazionale e© indicata di un cromoforo che puo© essere quantificato per
dall'Organizzazione Mondiale della Sanita© . via spettrofotometrica. In condizioni appropriate di

ehcituecamraF
Metodo. Per la preparazione in esame e per la prepara- dosaggio, esiste una relazione lineare tra l'attivita© del
zione di riferimento, preparare due serie indipendenti

emroF
fattore IIa e la scissione del substrato
di 3 o 4 diluizioni nell'intervallo compreso tra 1/75 e
1/200 a partire da 1 U.I. per millilitro utilizzando il REATTIVI
tampone tris-EDTA ASB soluzione a pH 8,4 R conte-
nente 15 U.I. di eparina per millilitro. Attivatore specifico del fattore II ottenuto dal veleno di
vipera (Ecarina) Proteina ottenuta dal veleno della
eiretaM
Riscaldare, a 37 ‘C per 1-2 min, 200 ml di ciascuna dilui-

emirP
.

zione. Aggiungere a ciascuna diluizione 200 ml di una vipera delle piramidi (Echis carinatus) che attiva specifi-
soluzione di trombina bovina R contenente 2 U.I. per catamente il fattore II. Ricostituire la preparazione
millilitro in tampone tris-EDTA ASB soluzione a secondo le istruzioni del produttore. Conservare la pre-
pH 8,4 R. Mescolare e mantenere a 37 ‘C per 1 min parazione ricostituita a 4 ‘C ed usare entro 1 mese.
ehcituecamraF
inoizaraperP

Substrato cromogeno per il fattore IIa. Substrati

ehcificepS

esatto. Aggiungere 500 ml di un substrato cromogeno

appropriato (per esempio, d-fenilalanil-l-pipecolil-l- cromogeni specifici per il fattore IIa sono: H-d-fenilala-
arginin-4-nitroanilide, ricostituito in acqua R in modo nil-l-pipecolil-l-arginina-p-nitroanilide dicloridrato,
da ottenere una soluzione contenente 4 mmoli per litro p-toluensulfonil-glicil-prolil-arginina p-nitroanilide,
ed ulteriormente diluito per il dosaggio usando tam- H-d-cicloesilglicil- -amminobutirril-arginina p-nitro-
ehcitapoemO
inoizaraperP

pone tris-EDTA ASB soluzione a pH 8,4 R privo di albu- anilide, d-cicloesilglicil-l-alanil-l-arginina-diidroace-

mina). Misurare immediatamente la variazione dell'as- tato. Ricostituire secondo le istruzioni del produttore.
sorbanza (2.2.25) a 405 nm, continuando la determina- Tampone di diluizione. Una soluzione contenente
zione per almeno 30 s. Calcolare l'entita© di variazione 6,06 g/l di tris(idrossimetil)amminometano R, 17,53 g/l
dell'assorbanza ( A/min). (Alternativamente si puo©
D di sodio cloruro R, 2,79 g/l di acido (etilendinitrilo)tetra-
usare un dosaggio al punto finale arrestando la rea- cetico R e 1 g/l di albumina bovina R o albumina uma-
ecidnI

zione con acido acetico e misurando l'assorbanza a na R. Se necessario aggiustare il pH a 8,4, usando acido
405 nm). cloridrico R.

239
Dosaggio del fattore X di coagulazione del sangue umano

METODO L'equivalenza in Unita© Internazionali dello Standard

Soluzione in esame. Diluire la preparazione in esame Internazionale e© stabilita dall'Organizzazione Mon-
con il tampone di diluizione in modo da ottenere una diale della Sanita© .
soluzione contenente 0,015 U.I. di fattore II per millili- Il metodo del dosaggio cromogeno consiste in due fasi
tro. Preparare almeno altre tre diluizioni nel tampone successive: l'attivazione del fattore X per mezzo del
di diluizione. veleno di vipera, seguita dalla scissione enzimatica di
Soluzione di riferimento. Diluire la preparazione di rife- un substrato cromogeno per il fattore Xa, con libera-
rimento con il tampone di diluizione in modo da otte- zione di un cromoforo che puo© essere quantificato per
nere una soluzione contenente 0,015 U.I. di fattore II via spettrofotometrica. In condizioni appropriate di
per millilitro. Preparare almeno altre tre diluizioni nel dosaggio, esiste una relazione lineare tra l'attivita© del
tampone di diluizione. fattore Xa e la scissione del substrato
Prima del saggio scaldare brevemente tutte le soluzioni REATTIVI
a b.m. a 37 ‘C. Attivatore specifico del fattore X ottenuto dal veleno della
Le condizioni di lavoro descritte si applicano alle pia- vipera di Russel (VVR). Proteina ottenuta dal veleno
stre di microtitolazione. Se il dosaggio e© effettuato nelle della vipera di Russel (Vipera russelli) che attiva specifi-
provette i volumi vanno corretti in modo da mantenere catamente il fattore X. Ricostituire la preparazione
le proporzioni della miscela. secondo le istruzioni del produttore. Conservare la pre-
parazione ricostituita a 4 ‘C ed usare entro 1 mese.
Utilizzare una piastra di microtitolazione mantenuta a Substrato cromogeno del fattore Xa. Substrati cromo-
37 ‘C. A ciascuna serie di pozzetti aggiungere 25 ml di geni specifici per il fattore Xa sono: N- -benzilossicar-
ciascuna diluizione della soluzione in esame o della a

bonil-d-arginil-l-glicil-l-arginina-p-nitroanilide diclo-
soluzione di riferimento. Aggiungere, in sequenza a cia- ridrato, N-benzoil-l-isoleucil-l-glutammil-glicil-l-
scun pozzetto, 125 ml del tampone di diluizione, 25 ml arginina-p-nitroanilide dicloridrato, metansulfonil-d-
di ecarina ed incubare per 2 min esatti. Aggiungere a leucil-glicil-arginina-p-nitroanilide, metossicarbonil-d-
ciascun pozzetto 25 ml di substrato cromogeno per il cicloesilalanil-glicil-arginina-p-nitroanilide acetato.
fattore IIa. Ricostituire secondo le istruzioni del produttore.
Effettuare in modo continuo la lettura della variazione Tampone di diluizione. Una soluzione contenente 3,7 g/l
dell'assorbanza a 405 nm per un periodo di 3 min, e di tris(idrossimetil)amminometano R, 2,1 g/l di imida-
determinare la media di questa variazione ( A/min).
D zolo R, 0,02 g/l di esadimetrina bromidrato R e 1 g/l di
Se non e© possibile effettuare il controllo continuo, misu- albumina bovina R o albumina umana R. Se necessario,
rare l'assorbanza a 405 nm ad appropriati intervalli aggiustare il pH a 8,4 usando acido cloridrico R.
successivi, per esempio ogni 40 s. Riportare su un gra- METODO
fico lineare l'assorbanza in funzione del tempo e calco- Soluzione in esame. Diluire la preparazione in esame
lare A/min come pendenza della linea. Calcolare l'at-
D
con il tampone di diluizione in modo da ottenere una
tivita© biologica della preparazione in esame dai valori soluzione contenente 0,18 U.I. di fattore X per milli-
D A/min di ciascuna diluizione dello standard e delle litro. Preparare almeno altre tre diluizioni nel tampone
preparazioni in esame e verificare la validita© del dosag- di diluizione.
gio mediante i metodi statistici usuali (5.3). Soluzione di riferimento. Diluire la preparazione di rife-
rimento con il tampone di diluizione in modo da otte-
nere una soluzione contenente 0,18 U.I. di fattore X
per millilitro. Preparare almeno altre tre diluizioni nel
2.7.19. DOSAGGIO DEL FATTORE X DI COAGU-

LAZIONE DEL SANGUE UMANO

tampone di diluizione.
Il dosaggio del fattore X della coagulazione e© effettuato Prima del saggio scaldare brevemente tutte le soluzioni
dopo la specifica attivazione per formare il fattore Xa. a b.m. a 37 ‘C.
La concentrazione del fattore Xa e© determinata con- Le condizioni di lavoro descritte si applicano alle pia-
frontando la sua attivita© di scissione di uno specifico stre di microtitolazione. Se il dosaggio e© effettuato nelle
substrato peptidico cromogeno con quella dello Stan- provette i volumi devono essere modificati in modo da
dard Internazionale o di una preparazione di riferi- mantenere le proporzioni della miscela.
mento, titolata in Unita© Internazionali. Utilizzare una piastra di microtitolazione mantenuta
L'Unita© Internazionale e© l'attivita© del fattore X di a 37 ‘C, aggiungere 12,5 ml di ciascuna diluizione
una determinata quantita© dello Standard Internazio- della soluzione in esame o della soluzione di riferimento
nale che e© costituito da un concentrato liofilizzato del a ciascuna serie di pozzetti. Aggiungere, in ciascun
fattore X della coagulazione del sangue umano. pozzetto, 25 ml di VVR ed incubare per 90 s esatti.

240
 Dosaggio in vivo del vaccino inattivato della poliomielite

inoizircserP
Aggiungere, a ciascun pozzetto, 150 ml di substrato

ilareneG
SAGGIO SU RATTI
cromogeno per il fattore Xa, diluito 1 a 6 con il tam- Un metodo di dosaggio in vivo appropriato consiste in
pone di diluizione. una iniezione intramuscolare negli arti posteriori di
Effettuare in modo continuo la lettura della variazione almeno 3 diluizioni del vaccino in esame e del vaccino di
dell'assorbanza a 405 nm in modo continuo per un riferimento, utilizzando per ciascuna diluizione un

isilanA id
periodo di 3 min, e determinare la media di questa varia- gruppo di 10 ratti, di un ceppo appropriato, esenti da

idoteM
zione ( A/min). Se non e© possibile effettuare il controllo
D patogeni specifici. Spesso e© necessario utilizzare 4 dilui-
continuo, misurare l'assorbanza a 405 nm ad appropriati zioni per ottenere risultati validi per tutti e 3 i sierotipi.
intervalli successivi, per esempio ogni 40 s. Riportare su Il numero di animali per ciascun gruppo deve essere suf-
un grafico lineare l'assorbanza in funzione del tempo e ficiente per ottenere risultati che soddisfano i criteri di

irotinetnoC
convalida; gruppi di 10 ratti sono generalmente suffi-

/ ilairetaM
calcolare A/min come pendenza della linea. Calcolare
cienti, ma si possono ottenere risultati validi anche con
D

l'attivita© biologica della preparazione in esame dai valori

A/min di ciascuna diluizione dello standard e delle pre- gruppi con un numero ridotto di animali. Il peso dei sin-
goli animali non deve variare di piu© del 10 per cento dalla
D

parazioni in esame e verificare la validita© del dosaggio

mediante i metodi statistici usuali (5.3). media del gruppo. Utilizzare un inoculo di 0,5 ml per
ogni ratto. L'intervallo della dose e© scelto in modo che si

ivittaeR
ottenga una risposta per tutti i 3 tipi di poliovirus. Salas-
IN VIVO sare gli animali dopo 20-22 giorni. Determinare, separa-
tamente, i titoli neutralizzanti nei confronti di tutti e 3 i
2.7.20. DOSAGGIO DEL VACCINO INAT-

TIVATO DELLA POLIOMIELITE

poliovirus usando 100 DICC50 dei ceppi Sabin come

Con questo dosaggio viene determinata la capacita© del cimento, cellule VERO o Hep2 come indicatori e le

itnemogrA
seguenti condizioni di neutralizzazione: 3 h a

ilareneG
vaccino di indurre la formazione di anticorpi neutraliz-
zanti. 35-37 ‘C e poi 18 h a 2-8 C. Dopo incubazione a 35 ‘C
Determinare l'attivita© biologica in vivo mediante uno per 7 giorni effettuare la fissazione e la colorazione e poi
dei metodi seguenti: leggere i risultati. Per un dosaggio anticorpale valido, il
titolo di ciascun virus di prova deve essere compreso

eifargonoM
nell'intervallo di 10 DICC50 e 100 DICC50 e il titolo degli

ilareneG
anticorpi neutralizzanti di un siero di riferimento non
SAGGIO SU PULCINI O SU CAVIE deve discostarsi di piu© di due diluizioni dalla media geo-
metrica del titolo del siero. L'attivita© biologica e© calco-
Preparare una serie appropriata di almeno tre diluizioni lata per confronto tra la proporzione di risposte positive

ehcituecamraF
del vaccino in esame usando un'appropriata soluzione al vaccino in esame e quelle al vaccino di riferimento
salina tamponata. Usare gruppi di animali costituiti da mediante un metodo probit o, dopo convalida, mediante

emroF
10 pulcini dell'eta© di 3 settimane o da 10 cavie, ciascuna un modello a linee parallele. Per il metodo probit si deve
del peso di 250-350 g. Attribuire una diluizione a ciascun stabilire un titolo soglia di anticorpi neutralizzanti per
gruppo ed iniettare per via intramuscolare 0,5 ml di cia- ciascun tipo di poliovirus al fine di definire una risposta
scuna diluizione ad ogni animale del gruppo. Salassare positiva. A causa della variazione tra laboratori, non e©
glianimaliilquintooilsestogiorno dopol'iniezioneerac- possibile definire valori soglia che possano essere appli-
eiretaM

emirP
cogliere separatamente ciascun siero. Esaminare i sieri, cati a tutti i laboratori. Quindi i valori soglia sono deter-
diluiti 1 a 4, per evidenziare la presenza di anticorpi neu- minati per ciascun laboratorio sulla base di un minimo
tralizzanti nei confronti di ciascuno dei poliovirus umani di tre serie di saggi con il vaccino di riferimento. Usare
1, 2 e 3. Mescolare 100 DICC50 di virus con la diluizione come valore soglia il punto mediano di una scala in log
ehcituecamraF

2, tra i titoli minimi e massimi, espressi come media geo-

inoizaraperP

delsieroedincubarea37‘C perunperiodo ditempo com-

ehcificepS

preso tra 4 h e 30 min e 6 h. Mantenere a 5 3 ‘C per 12- metrica, della serie di tre o piu© saggi. Per ciascuno dei
tre tipi di poliovirus, l'attivita© biologica del vaccino non
6

18 h. Inoculare le miscele nelle colture cellulari in modo

da rilevare la presenza di virus non neutralizzato e leggere deve essere significativamente inferiore a quella della
i risultati fino a 7 giorni dopo l'inoculazione. Per ciascun preparazione di riferimento. Il saggio e© valido solo se:
ehcitapoemO
inoizaraperP

gruppo di animali, registrare il numero di sieri che hanno ^ per il vaccino in esame e il vaccino di riferimento la
anticorpi neutralizzanti e calcolare la diluizione del vac- DE50 e© compresa tra la dose piu© piccola e la dose
cino che da© una risposta anticorpale nel 50 per cento degli piu© grande somministrata agli animali,
animali. Effettuare un saggio di controllo in parallelo uti- ^ l'analisi statistica mostra una deviazione non signi-
lizzando un'appropriata preparazione di riferimento. ficativa rispetto alla linearita© o dal parallelismo
Il vaccino soddisfa al saggio se una diluizione 1 a 100 o ^ i limiti fiduciali dell'attivita© biologica relativa
ecidnI

superiore produce una risposta anticorpale per cia- calcolata sono compresi tra il 25 per cento e il
scuno dei tre tipi di virus nel 50 per cento degli animali. 400 per cento dell'attivita© biologica calcolata.

241
 2.8. Metodi generali

inoizircserP

ilareneG
di farmacognosia

isilanA id
idoteM
2.8. Metodi generali di farmacognosia . . 245 2.8.10. Solubilita© delle essenze in alcool . . . 246
2.8.1. Ceneri insolubili nell'acido cloridrico 245 2.8.11. Dosaggio dell'1,8 - cineolo nelle

irotinetnoC
/ ilairetaM
2.8.2. Elementi estranei . . . . . . . . . . . . . . . 245 essenze . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 247
2.8.3. Stomi ed indice stomatico . . . . . . . . 245 2.8.12. Determinazione delle essenze nelle
2.8.4. Indice di rigonfiamento . . . . . . . . . . 246 droghe vegetali . . . . . . . . . . . . . . . 247
2.8.5. Acqua nelle essenze . . . . . . . . . . . . . 246 2.8.13. Residui di pesticidi . . . . . . . . . . . . . 249
2.8.6. Esteri estranei nelle essenze . . . . . . . 246 2.8.14. Determinazione dei tannini nelle dro-
2.8.7. Oli grassi ed essenze resinificate nelle

ivittaeR
essenze . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 246 ghe vegetali . . . . . . . . . . . . . . . . . 253
2.8.8. Odore e sapore delle essenze . . . . . . 246 2.8.15. Indice di amarezza . . . . . . . . . . . . . . 253
2.8.9. Residuo alla evaporazione delle 2.8.16. Residuo secco degli estratti . . . . . . . 254
essenze . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 246 2.8.17. Perdita all'essiccamento degli estratti 254

itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Stomi ed indice stomatico

inoizircserP

ilareneG
2.8. METODI GENERALI DI FARMACO- 2.8.3. STOMI ED INDICE STOMATICO

GNOSIA
STOMI
Tra i tipi di stomi (vedi Figura 2.8.3.-1), che si differen-
ziano per la forma e per la disposizione delle cellule
2.8.1. CENERI INSOLUBILI IN ACIDO CLORI-

isilanA id
che li circondano, si distinguono:
DRICO

idoteM
Le ceneri insolubili in acido cloridrico sono costituite
dal residuo ottenuto dopo estrazione con acido clori-
drico R delle ceneri solforiche o delle ceneri totali e
sono calcolate con riferimento a 100 g di droga.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Aggiungere 15 ml di acqua R e 10 ml di acido cloridri-
co R nel crogiolo contenente il residuo ottenuto nella
determinazione delle ceneri solforiche o totali. Rico-
prire con un vetro da orologio e far bollire dolcemente

ivittaeR
per 10 min e lasciar raffreddare. Filtrare attraverso un
filtro esente da ceneri e lavare il residuo con acqua R
calda fino a che il filtrato risulta neutro, essiccare il fil-
tro e poi incenerirlo scaldando fino al rosso scuro;
lasciar raffreddare in essiccatore e pesare. Ripetere l'in-

itnemogrA
ilareneG
cenerimento fino a che la differenza tra due pesate suc-
cessive non superi 1 mg.
Figura 2.8.3.-1

eifargonoM
(1) il tipo anomocitico (a cellule irregolari); gli stomi

ilareneG
2.8.2. ELEMENTI ESTRANEI

sono circondati da un numero variabile di cellule, che

Le droghe vegetali devono essere esenti da muffe, non differiscono dalle altre cellule epidermiche,
insetti e da altre contaminazioni di origine animale. (2) il tipo anisocitico (a cellule ineguali); gli stomi sono

ehcituecamraF
Se non e© diversamente prescritto, la quantita© di ele- generalmente circondati da tre cellule annesse, delle
quali una e© nettamente piu© piccola delle altre,

emroF
menti estranei non e© superiore al 2 per cento m/m.
(3) il tipo diacitico (a cellule trasversali); gli stomi sono
Gli elementi estranei sono costituiti in tutto od in accompagnati da due cellule annesse, le cui pareti
parte da: comuni formano un angolo retto con le cellule di guar-
1) Parti estranee: ogni elemento proveniente dalla dia degli stomi,

eiretaM

emirP
pianta madre, ma che non costituisce la droga, (4) il tipo paracitico (a cellule parallele); gli stomi pre-
sentano da ciascun lato uno o piu© cellule annesse, paral-
2) Materie estranee: ogni elemento, sia di origine lele all'asse longitudinale dell'ostiolo ed a quello delle
vegetale che minerale, non proveniente dalla pianta da cellule di guardia degli stomi.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

cui si ottiene la droga.

INDICE STOMATICO
Indice stomatico 100 S
2

DETERMINAZIONE DEGLI ELEMENTI ESTRA-

ˆ
E S
ehcitapoemO
inoizaraperP

NEI
S = numero degli stomi per una data superficie
fogliare,
Pesare da 100 g a 500 g di droga, oppure la quantita©
minima indicata in monografia, quindi ripartire il E = numero delle cellule epidermiche (inclusi i peli)
materiale, in un sottile strato. Esaminare ad occhio nella stessa superficie fogliare.
ecidnI

nudo o con l'aiuto di una lente (6 ). Separare gli ele-

2 Per ciascun campione di foglia calcolare la media di
menti estranei, pesare e calcolare la percentuale. almeno dieci determinazioni.

245
Solubilita© delle essenze in alcool

2.8.4. INDICE DI RIGONFIAMENTO 2.8.9. RESIDUO ALLA EVAPORAZIONE DELLE

ESSENZE

L'indice di rigonfiamento e© il volume in millilitri occu- Il residuo all'evaporazione di una essenza e© la percen-
pato da 1 grammo di droga, con la mucillagine che vi tuale in massa dell'essenza che resta dopo evaporazione
aderisce, dopo averla lasciata rigonfiare in un liquido a b.m., nelle condizioni appresso specificate:
acquoso per 4 h. Apparecchiatura. L'apparecchiatura (vedi Figura 2.8.9.-
Porre 1,0 g di droga intera, o nello stato di suddivisione 1) e© costituita da:
prescritto in monografia, in una provetta con tappo ^ un bagno-maria con coperchio munito di fori di
a smeriglio da 25 ml, a scala graduata dell'altezza di 70 mm di diametro,
125 5 mm, con suddivisioni di 0,5 ml. Se non e© diver-
6
^ una capsula da evaporazione in vetro inerte
samente prescritto, umettare la droga con 1,0 ml di rispetto al contenuto e termoresistente,
alcool R e aggiungere 25 ml di acqua R. Chiudere la ^ un essiccatore.
provetta ed agitare energicamente, ogni 10 min, per
1 h; lasciare a riposo per 3 h dopo 90 min dall'inizio
del saggio, eliminare, mediante rotazione della provetta
attorno al suo asse verticale, la maggior parte possibile
del liquido trattenuto dalla droga e le particelle di que-
sta che galleggiano sulla superficie del liquido. Misu-
rare il volume occupato dalla droga con la mucillagine
che vi aderisce. Effettuare tre saggi contemporanea-
mente.
L'indice di rigonfiamento e© dato dalla media dei tre
saggi.
2.8.5. ACQUA NELLE ESSENZE

Mescolare dieci gocce di essenza con 1 ml di carbonio

disolfuro R. La soluzione ottenuta, lasciata a riposo,
rimane limpida. Figura 2.8.9.-1.
Dimensioni in millimetri
2.8.6. ESTERI ESTRANEI NELLE ESSENZE
Metodo. Scaldare la capsula a b.m. per 1 h, lasciar raf-
Riscaldare, a b.m. per 2 min, 1 ml di essenza con 3,0 ml freddare in essiccatore e pesare. Pesare nella capsula
di una soluzione (100 g/l) di potassio idrossido R in 5,00 g di essenza, a meno che non sia altrimenti pre-
alcool R, preparata di recente. Non si devono formare scritto. Riscaldare a b.m., al riparo da correnti d'aria,
cristalli nei 30 min successivi, anche dopo raffredda- per il tempo prescritto. Lasciar raffreddare nell'essicca-
mento. tore, poi pesare.
Durante il saggio il livello dell'acqua nel b.m. e© mante-
nuto costante a circa 50 mm al di sotto del livello del
2.8.7. OLI GRASSI ED ESSENZE RESINIFICATE coperchio.
NELLE ESSENZE

Lasciare cadere una goccia di essenza su della carta da 2.8.10. SOLUBILITAé DELLE ESSENZE IN

filtro. La goccia evapora completamente nelle 24 h suc- ALCOOL

cessive senza lasciare alcuna macchia traslucida o Introdurre 1,0 ml dell'essenza in esame in una provetta
grassa. di 25 ml o di 30 ml munita di tappo a smeriglio. Porre
in un termostato mantenuto a temperatura costante
di 20 0,2 ‘C. Per mezzo di una buretta, di almeno
6

20 ml di capacita© , aggiungere alcool del titolo pre-

2.8.8. ODORE E SAPORE DELLE ESSENZE

Mescolare tre gocce di essenza con 5 ml di alcool al 90 scritto dalla monografia, a porzioni di 0,1 ml fino a dis-
per cento V/V R ed agitare con 10 g di saccarosio R pol- soluzione completa; poi continuare l'aggiunta del sol-
verizzato. L'odore ed il sapore sono simili a quelli della vente, a porzioni di 0,5 ml per volta, fino a 20 ml, agi-
pianta o delle parti della pianta da cui l'essenza e© stata tando frequentemente ed energicamente. Annotare il
ottenuta. volume di alcool impiegato allorchë e© stata ottenuta

246
 Determinazione delle essenze nelle droghe vegetali

inoizircserP
una soluzione limpida; se la soluzione si intorbida o Fare fondere di nuovo la miscela a b.m. scaldando ad

ilareneG
diventa opalescente prima che siano stati aggiunti tutti una temperatura che non superi di piu© di 5 ‘C il valore
i 20 ml di alcool, prendere nota del volume di solvente t1, e porre il tubo nell'apparecchio mantenendo la tem-
impiegato al momento della comparsa dell'intorbida- peratura 5 ‘C al di sotto del valore t1. Quando la cristal-
mento o della opalescenza e poi, se del caso, del volume lizzazione ha inizio, o quando la temperatura della
utilizzato fino al momento della scomparsa dell'intor- miscela e© scesa di 3 ‘C al di sotto del valore t1, rimesco-

isilanA id
idoteM
bidamento o dell'opalescenza. lare la miscela con l'aiuto dell'agitatore. Prendere nota
della temperatura piu© elevata t2 alla quale la miscela
Se non si riesce ad ottenere una soluzione limpida dopo cristallizza. Ripetere l'operazione fino a che i due valori
l'aggiunta di 20 ml di alcool del titolo indicato, ripetere massimi ottenuti per t2 non differiscono tra di loro di
il saggio usando un alcool di titolo piu© elevato. piu© di 0,2 ‘C. In caso di soprafusione, inoculare la cri-

irotinetnoC
/ ilairetaM
stallizzazione per aggiunta di un piccolo cristallo di un
Una essenza si dice ``solubile in n volumi o piu© di alcool di complesso costituito da 3,00 g di cineolo R e 2,10 g di
un dato titolo t'' quando la soluzione limpida in n volumi cresolo R fuso. Se il valore t2 e© inferiore a 27,4 ‘C, ripe-
resta limpida, per confronto con l'essenza non diluita, tere il dosaggio dopo aver aggiunto 5,10 g del com-
anche dopo aggiunta progressiva di nuove quantita© di plesso.
alcool dello stesso titolo, fino ad un totale di 20 volumi

ivittaeR
Il contenuto di cineolo che corrisponde alla tempera-
di alcool. tura piu© alta osservata (t2), e© indicato nella Tabella
Una essenza si dice ``solubile in n volumi di alcool di un 2.8.11.-1. Se sono stati aggiunti i 5,10 g del complesso,
dato titolo t, diventando torbida per diluizione'' se la solu- calcolare il contenuto di cineolo del campione, espresso
zione limpida in n volumi diviene torbida in n1 volumi come percentuale m/m, per mezzo della espressione:

itnemogrA
ilareneG
(n1 inferiore a 20) e resta torbida dopo aggiunta pro- 2 (A - 50)
gressiva di nuove quantita© di alcool dello stesso titolo
fino ad un totale di 20 volumi di alcool. dove A e© il valore indicato nella Tabella 2.8.11.-1.
Il contenuto di cineolo, corrispondente alla tempera-
Una essenza si dice ``solubile in n volumi di alcool di un

eifargonoM
tura massima osservata (t2), si ottiene, se necessario,

ilareneG
dato titolo t, diventando torbida tra n1 ed n2 volumi'' se la per interpolazione.
soluzione limpida in n volumi diventa torbida in n1
volumi (n1 inferiore a 20) e resta tale per aggiunta pro- Tabella 2.8.11.-1.
gressiva di nuove quantita© di alcool dello stesso titolo

ehcituecamraF
fino ad un totale di n2 volumi di alcool, quando la solu-
zione ritorna limpida (n2 inferiore a 20). t2 t2 t2 t2

emroF
Percentuale Percentuale Percentuale Percentuale

‘C
m/m ‘C
m/m ‘C
m/m ‘C
m/m
Una essenza si dice ``solubile con opalescenza'' se la solu-
di cineolo di cineolo di cineolo di cineolo

zione alcoolica presenta la stessa tinta bluastra di una 24 45,5 32 56,0 40 67,0 48 82,0
soluzione opalescente di riferimento preparata al 25 47,0 33 57,0 41 68,5 49 84,0
momento dell'uso come segue: mescolare 0,5 ml di
eiretaM
26 48,5 34 58,5 42 70,0 50 86,0

emirP
argento nitrato soluzione R2 e 0,05 ml di acido nitrico R. 27 49,5 35 60,0 43 72,5 51 88,5
Aggiungere 50 ml di una soluzione (12 mg/l) di sodio 28 50,5 36 61,0 44 74,0 52 91,0
cloruro R. Mescolare e lasciare a riposo per 5 min al 29 52,0 37 62,5 45 76,0 53 93,5
riparo dalla luce. 30 53,5 38 63,5 46 78,0 54 96,0
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

31 54,5 39 65,0 47 80,0 55 99,0

2.8.11. DOSAGGIO DELL'1,8-CINEOLO NELLE

ESSENZE
2.8.12. DETERMINAZIONE DELLE ESSENZE
ehcitapoemO
inoizaraperP

Pesare 3,00 g di essenza, recentemente seccata su sodio

NELLE DROGHE VEGETALI

solfato anidro R, in una provetta ben secca, e aggiungere La determinazione delle essenze nelle droghe vegetali si
2,10 g di cresolo R fuso. Porre il tubo nell'apparecchio effettua per distillazione in corrente di vapore in un
per la determinazione del punto di solidificazione apparecchio speciale, nelle condizioni che vengono di
(2.2.18) e lasciare raffreddare, rimescolando con l'aiuto seguito precisate. Il distillato viene raccolto nel tubo
di un agitatore. Quando ha inizio la cristallizzazione, graduato in presenza di xilene per fissare l'essenza men-
ecidnI

vi e© un leggero aumento di temperatura. Annotare il tre la frazione acquosa ritorna automaticamente nel
piu© alto valore di temperatura raggiunto (t1). pallone generatore di vapore.

247
Determinazione delle essenze nelle droghe vegetali

Apparecchiatura. L'apparecchiatura e© costituita dalle Metodo. Utilizzare un apparecchio perfettamente

seguenti parti: pulito. Effettuare il dosaggio secondo la natura della
(a) un pallone appropriato a fondo tondo, a collo corto droga in esame. Introdurre nel pallone la quantita© di
ed estremita© conica a smeriglio del diametro liquido, indicata in monografia, per la distillazione in
interno, all'estremita© piu© larga, di circa 29 mm; corrente di vapore, e qualche frammento di pietra
porosa. Adattare al pallone l'apparecchio di condensa-
(b) un apparecchio di condensazione (vedi Figura zione. Introdurre acqua R attraverso il tubo di riempi-
2.8.12.-1), in vetro a debole dilatazione termica, mento N fino al livello B. Togliere il tappo K' e intro-
che si adatta esattamente al collo del pallone, costi- durre la quantita© prescritta di xilene R, utilizzando una
tuito dalle seguenti diverse parti saldate tra loro: il pipetta, appoggiando la punta al fondo della tubatura
tappo a smeriglio K' ha un foro di sfogo ed il tubo K. Richiudere con il tappo K' assicurandosi che gli ori-
K, di 10 mm di diametro interno nella parte piu© fizi coincidano. Scaldare il liquido del pallone fino ad
larga smerigliata, ha un orifizio del diametro di ebollizione e distillare alla velocita© di 2-3 ml per minuto
1 mm circa che coincide con la foratura del tappo; se non e© diversamente prescritto.
un rigonfiamento piriforme J della capacita© di Per determinare la velocita© di distillazione, abbassare
3 ml; il tubo graduato JL e© diviso in 0,01 ml; il durante la distillazione il livello dell'acqua nell'apparec-
rigonfiamento L e© a forma di bolla ed ha una capa- chio per mezzo del rubinetto a tre vie in modo che il
cita© di circa 2 ml; un rubinetto M a tre vie; la salda- menisco si trovi nel tratto inferiore (a) (vedi Figura
tura B e© a un livello di 20 mm piu© alto del punto 2.8.12.-2). Chiudere poi il rubinetto e cronometrare il
superiore della graduazione, tempo necessario per il riempimento del rigonfiamento
(c) un idoneo apparato di riscaldamento che permetta fino al tratto superiore (b). Aprire quindi il rubinetto e
una regolazione precisa della tempeatura, continuare la distillazione, modificando il riscalda-
(d) un sostegno verticale, con anello orizzontale, rive- mento per regolare la velocita© di distillazione. Distillare
stito di materiale isolante. per 30 min, sospendere il riscaldamento e leggere, dopo
almeno 10 min, il volume di xilene che si e© raccolto nel
tubo graduato.

Figura 2.8.12.-2.
Introdurre nel pallone la quantita© di droga prescritta e
procedere alla distillazione in corrente di vapore, con
le stesse modalita© sopra specificate, per la durata e con
la velocita© indicate. Arrestare il riscaldamento e dopo
10 min leggere il volume di liquido raccoltosi nel tubo
graduato e sottrarre il volume dello xilene determinato
in precedenza. La differenza costituisce la quantita© di
essenza presente nella massa esaminata del campione.
Calcolare il risultato come millilitri per 100 g di droga.
Nel caso in cui l'essenza deve essere utilizzata per altri
procedimenti analitici, la miscela xilene-essenza priva
di acqua puo© essere recuperata come segue: togliere il
tappo K' e introdurre 0,1 ml di una soluzione (1 g/l) di
sodio fluoresceinato R e 0,5 ml di acqua R. Abbassare il
Figura 2.8.12.-1. livello della miscela xilene-essenza nella bolla L
Apparecchio per la determinazione delle essenze mediante il rubinetto a tre vie. Lasciare a riposo per
nelle droghe vegetali 5 min quindi lasciare colare la miscela lentamente, esat-
Dimensioni in millilitri tamente fino al livello del rubinetto M. Aprire il rubi-

248
 Residui di pesticidi

inoizircserP
netto in senso antiorario, in modo che l'acqua possa preparazione possono influire sul contenuto di pesticidi

ilareneG
colare dal tubo di comunicazione BM. Lavare quest'ul- nel prodotto finito, i limiti si calcolano utilizzando la
timo versando acetone R e quindi poco toluene R, nel formula seguente:
tubo di riempimento N. Ruotare ancora il rubinetto ADI M E 2 2

nello stesso senso per recuperare la miscela xilene- MDD 100

isilanA id
2
essenza in un recipiente adatto.

idoteM
E = coefficiente di estrazione legato al metodo di pre-
parazione utilizzato, determinato sperimental-
mente.
2.8.13. RESIDUI DI PESTICIDI
In casi eccezionali, possono anche essere autorizzati
limiti piu© elevati, specialmente quando una pianta

irotinetnoC
/ ilairetaM
. Ai fini della Farmacopea e© da considerare richiede un metodo di coltivazione particolare oppure
come pesticida ogni sostanza, od associazione di comportareununmetabolismo
presenta od una struttura che puo©
Definizione

tenore in pesticidi superiore alla norma.

sostanze, destinate a respingere, distruggere o combat- L'autorita© competente puo© concedere una dispensa par-
tere ogni generico inquinante, animale o specie indesi- ziale o totale del saggio se la storia completa (natura e
derate di piante che danneggiano o sono comunque di quantita© dei pesticidi utilizzati, data di ciascun tratta-

ivittaeR
nocumento durante la produzione, la trasformazione, mento effettuato durante la coltivazione e dopo il rac-
la conservazione, il trasporto o il commercio di droghe colto) del trattamento del lotto e© nota e puo© essere con-
vegetali. Il termine comprende le sostanze destinate ad trollata con precisione.
essere utilizzate come regolatori della crescita delle
Tabella 2.8.13.-1.

itnemogrA
piante, come esfolianti, come disseccanti, cos|© come le

ilareneG
sostanze applicate sulle colture sia prima che dopo la
raccolta per proteggere i prodotti dal deterioramento Sostanza
)
Limiti

durante l'immagazzinamento ed il trasporto.

(mg/kg

Alaclor 0,02

eifargonoM
. Se non e© diversamente indicato in monografia, Aldrin e dieldrin (sommati) 0,05

ilareneG
Limiti
Azinfos-metile 1,0
la droga in esame soddisfa almeno ai limiti di tolleranza Bromopropilato 3,0
indicati nella Tabella 2.8.13.-1. I limiti da applicare ai Cipermetrina (e isomeri) 1,0
pesticidi, che non sono riportati nella Tabella 2.8.13.-1 Clordano (somma di cis-, trans- e Ossiclordano) 0,05
e di cui si sospetta la presenza per una ragione qualun- Clorfenvinfos 0,5

ehcituecamraF
Clorpirifos 0,2
que, sono stabiliti sulla base dei limiti fissati dalle diret- Clorpirifos-metile 0,1

emroF
tive della Comunita© Europea 76/895 e 90/642, ivi com- DDT (somma di p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE 1,0
presi i loro annessi ed i successivi aggiornamenti. I e p,p'-TDE)
limiti per i pesticidi che non vengono riportati në nella Deltametrina 0,5
Diazinone 0,5
Tabella 2.8.13.-1 në nelle direttive della Comunita© Euro- Diclorvos 1,0
pea sono calcolati utilizzando la formula seguente: Ditiocarbammato (come CS2) 2,0

eiretaM

emirP
Endosulfano (somma di isomeri e Endosulfano solfato) 3,0
Endrin 0,05
ADI M 2 Eptacloro (somma di eptacloro e eptacloro-epossido) 0,05
MDD 100 2 Esaclorocicloesano-isomeri (oltre a g)
Esaclorobenzene
0,3
0,1
ehcituecamraF
inoizaraperP

Etion 2,0
ehcificepS

Fenitrotion 0,5
ADI = dose giornaliera accettabile, come previsto Fenvalerato 1,5
dalla FAO-OMS, in milligrammi per chilo- Fonofos 0,05
grammo di massa corporea, Fosalone 0,1
Lindano (g-Esaclorocicloesano) 0,6
ehcitapoemO
inoizaraperP

Malation 1,0
M = massa corporea in chilogrammi (60 kg), Metidation
Paration
0,2
0,5
Paration-metile 0,2
MDD = consumo giornaliero di droga in chilo- Permetrina 1,0
grammi. Piperonil butossido
Piretrine (somma di)
3,0
3,0
Pirimifos-metile 4,0
ecidnI

Se la droga e© destinata alla preparazione di estratti, di Quintozene (somma di quintozene, pentacloroanilina 1,0
tinture o di altre forme farmaceutiche, i cui metodi di e metile pentaclorofenil solfuro)

249
Residui di pesticidi

Prelievo dei campioni da analizzare limiti di rivelabilita© e di quantificazione devono

essere noti per ciascun pesticida nella matrice analiz-
Metodo. Per i recipienti di contenuto inferiore a 1 kg, zata,
prelevare dal contenuto totale, ben omogeneizzato, un - ciascun pesticida deve essere recuperato in quantita©
campione sufficiente per la esecuzione dei saggi richie- tra il 70 per cento e il 110 per cento,
sti. Per i recipienti di contenuto compreso tra 1 kg e
5 kg prelevare un campione dalla parte superiore, uno - la ripetibilita© del metodo non deve essere inferiore al
da quella mediana ed uno da quella inferiore del reci- valore indicato nella Tabella 2.8.13.-2,
piente. I tre campioni devono essere di volume uguale - la riproducibilita© del metodo non e© inferiore ai valori
e sufficiente per l'esecuzione dei saggi richiesti. Mesco- indicati nella Tabella 2.8.13.-2,
lare accuratamente i campioni e dalla miscela prelevare - la concentrazione delle soluzioni in esame e delle
una quantita© sufficiente per effettuare i saggi. Per i reci- soluzioni di riferimento e la taratura dell'apparecchio
pienti di contenuto superiore a 5 kg prelevare tre cam- sono tali che i picchi sono situati nella parte lineare
pioni di almeno 250 g, uno dalla parte superiore, uno della risposta del rivelatore.
da quella mediana ed uno da quella inferiore del conte-
nitore. Mescolare accuratamente i tre campioni e prele-
vare dalla miscela una quantita© sufficiente per effet- Tabella 2.8.13.-2
tuare i saggi richiesti.
Numero di campioni. Se il numero (n) di recipienti e© Concentrazione
Ripetibilita© Riproducibilita©

inferiore o uguale a tre, prelevare, per i differenti saggi, ) )

del pesticida

) (differenza 6 mg/kg (differenza 6 mg/kg

un campione da ciascun recipiente come indicato alla

(mg/kg

sezione Metodo. Se il numero dei recipienti e© superiore 0,010 0,005 0,01

a tre, effettuare la campionatura in base alla formula 0,100 0,025 0,05
p
n 1 , arrotondando, se necessario, al numero intero
‡
1,000 0,125 0,25
immediatamente superiore.
I campioni devono essere analizzati immediatamente
per evitare ogni possibile degradazione dei residui. Se La sezione seguente e© data a solo titolo di informazione.
cio© non e© possibile, i campioni devono essere conservati
in recipienti ermeticamente chiusi, di qualita© idonea METODI DI ANALISI
per alimenti, al riparo dalla luce e ad una temperatura
inferiore a 0 ‘C. Insetticidi organofosforati, organoclorurati e piretroidi

Reattivi . Tutti i reattivi ed i solventi devono essere I seguenti metodi analitici possono essere utilizzati per
esenti da qualsiasi contaminante, specialmente da la ricerca dei pesticidi sopra indicati. A seconda della
pesticidi, che potrebbero interferire con i risultati del- sostanza in esame, puo© essere necessario apportare
l'analisi. Eé spesso necessario utilizzare solventi di qua- delle modifiche, talvolta importanti, al procedimento
lita© speciale o, se non e© possibile, solventi che siano ridi- descritto. In ogni caso, puo© essere necessario usare, in
stillati di recente in un apparecchio interamente di aggiunta, un'altra colonna con polarita© differente o un
vetro. In ogni caso, si devono effettuare adatti saggi in altro metodo di rivelazione (spettrometria di massa...)
bianco. o un metodo differente (metodi immunochimici...) per
Apparecchiatura . Pulire gli apparecchi e specialmente confermare i risultati ottenuti.
la vetreria, in modo da eliminare ogni traccia di pesti- Questo procedimento e© valido solo per le analisi di
cidi, per esempio immergendoli per almeno 16 h in una campioni di droghe vegetali che contengono un quanti-
soluzione di detergente esente da fosfati, sciacquando tativo di acqua non superiore al 15 per cento. Le droghe
abbondantemente con acqua distillata R e lavare con vegetali con un quantitativo superiore di acqua pos-
acetone e con esano, oppure con eptano. sono essere disseccate, purchë sia stato dimostrato che
. il procedimento di essiccamento non influisca significa-
Analisi qualitativa e quantitativa dei residui di pesticidi

I procedimenti analitici utilizzati devono essere conva- tivamente sul contenuto in pesticidi.
lidati secondo le norme in vigore. In particolare, soddi-
sfano ai seguenti criteri: 1. Estrazione.

^ i metodi scelti, ed in particolare le fasi di purifica- Far macerare, per 20 min, 10 g della droga in esame,
zione, devono essere idonei per la combinazione di grossolanamente polverizzata, in 100 ml di acetone R.
residui di pesticidi/sostanza in esame e nessun effetto Aggiungere 1 ml di una soluzione contenente 1,8 g per l

dovuto a sostanze estratte contemporaneamente ml di carbofenotione R in toluene R. Omogenizzare uti-

deve interferire significativamente con i risultati. I lizzando un disintegratore ad alta velocita© per 3 min.

250
 Residui di pesticidi

inoizircserP
Filtrare e lavare il filtro ed il suo contenuto con 2 por- agitare vigorosamente fino a scomparsa dei grumi e

ilareneG
zioni successive, da 25 ml ciascuna, di acetone R. Riu- continuare ad agitare per 2 h usando un agitatore mec-
nire il filtrato ed il solvente utilizzato per il lavaggio ed canico. Condizionare la colonna, usando 1,5 ml di
evaporare quasi a secco utilizzando un evaporatore esano R. Possono essere anche utilizzate colonne
rotante ad una temperatura non superiore ai 40 ‘C. preriempite, pronte per l'uso, contenenti circa 0,50 g di
Aggiungere alcuni ml di toluene R al residuo ed evapo- un gel di silice adatto, purchë siano preventivamente

isilanA id
idoteM
rare di nuovo fino a completa eliminazione dell'acetone. convalidate.
Disciogliere il residuo in 8 ml di toluene R. Filtrare su
filtro a membrana (45 mm), sciacquare il pallone e il fil- Concentrare la soluzione B in una corrente di elio per
tro con toluene R e portare al volume di cromatografia R o azoto esente da ossigeno R fin quasi
10,0 ml con lo stesso solvente (soluzione A). a secco e riprendere il residuo con un volume appro-

irotinetnoC
/ ilairetaM
priato di toluene R (da 200 ml a 1 ml a seconda del
volume iniettato per la preparazione della soluzione
B). Trasferire quantitativamente su colonna e procedere
2. Purificazione alla cromatografia utilizzando 1,8 ml di toluene R come
fase mobile. Raccogliere l'eluato (soluzione C).
2.1. Insetticidi organofosforati, organoclorurati e pire-

ivittaeR
troidi. Esaminare mediante cromatografia per esclu-
sione (2.2.30).
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
usando:
3. Analisi quantitativa

itnemogrA
ilareneG
^ una colonna di acciaio inossidabile, lunga 0,30 m e 3.1. Insetticidi organofosforati. Esaminare mediante gas
con diametro interno di 7,8 mm impaccata con sti- cromatografia (2.2.28), usando carbofenotione R come
rene divinilbenzene copolimero R (5 mm), standard interno. Puo© essere necessario utilizzare un
secondo standard interno per identificare possibili
^ come fase mobile toluene R ad una velocita© di flusso interferenze con il picco corrispondente al carbofeno-

eifargonoM
di 1 ml per minuto. tion.

ilareneG
Prova della colonna. Iniettare 100 ml di una soluzione Soluzione in esame. Concentrare la soluzione B in cor-
contenente 0,5 g/l di rosso metile R e 0,5 g/l di blu oracet rente di elio per cromatografia R fin quasi a secco e
2R in toluene R e procedere alla cromatografia. La riprendere con 100 ml di toluene R.
colonna e© idonea solo se il colore dell'eluato vira dall'a-

ehcituecamraF
rancione al blu dopo un volume di eluizione di circa Soluzione di riferimento. Preparare almeno tre solu-

emroF
10,3 ml. Se necessario tarare la colonna, usando una zioni, contenenti gli insetticidi da determinare, in
soluzione contenente toluene R, ad una adatta concen- toluene R e carbofenotione R, a concentrazioni adatte
trazione, l'insetticida da analizzare a massa molecolare per effettuare una curva di taratura.
piu© bassa (per esempio, diclorvos) e quello a massa
molecolare piu© alta (per esempio, deltametrina). Deter- Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito

eiretaM
usando:

emirP
minare la frazione dell'eluato che contiene i due insetti-
cidi.
^ una colonna di silice fusa lunga 30 m e con diametro
Purificazione della soluzione in esame. Iniettare un interno di 0,32 mm, le cui pareti interne sono rico-
volume appropriato di soluzione A (da 100 ml a 500 ml) perte con uno strato di poli(dimetil)silossano R dello
ehcituecamraF
inoizaraperP

e procedere alla cromatografia. Raccogliere la frazione spessore di 0,25 mm,

ehcificepS

come indicato sopra (soluzione B). Gli insetticidi orga-

nofosforati eluiscono normalmente tra 8,8 ml e ^ idrogeno per cromatografia R come gas di trasporto;
10,9 ml. Gli insetticidi organoclorurati e piretroidi elui- possono essere anche utilizzati altri gas di trasporto
scono normalmente tra 8,5 ml e 10,3 ml. come elio per cromatografia R od azoto per cromato-
ehcitapoemO
inoizaraperP

2.2. Insetticidi organoclorurati e piretroidi. In una grafia R purchë il metodo sia convalidato in modo
colonna cromatografica, lunga 0,10 m e del diametro appropriato,
interno di 5 mm, introdurre un tampone di cotone idro- ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma azoto-fosforo
filo sgrassato e 0,5 g di gel di silice trattato come segue: oppure un rivelatore a spettrometria di emissione
scaldare in stufa a 150 ‘C gel di silice per cromatogra- atomica.
fia R per almeno 4 h. Lasciar raffreddare e aggiungere
ecidnI

goccia a goccia una quantita© di acqua R corrispondente Mantenere la temperatura della colonna a 80 ‘C per
all'1,5 per cento della massa del gel di silice utilizzato; 1 min, quindi innalzarla ad una velocita© di 30 ‘C

251
Residui di pesticidi

per minuto fino a 150 ‘C e mantenerla a 150 ‘C per ^ idrogeno per cromatografia R, come gas di trasporto;
3 min. Quindi innalzare la temperatura ad una velocita© altri gas quali l'elio per cromatografia R o l'azoto per
di 4 ‘C per minuto fino a 280 ‘C e mantenerla a 280 ‘C cromatografia R possono essere usati purchë il
per 1 min. Mantenere la temperatura della camera di metodo sia stato convalidato in modo appropriato,
iniezione a 250 ‘C e quella del rivelatore a 275 ‘C. Iniet- ^ un rivelatore a cattura di elettroni,
tare il volume scelto di ciascuna soluzione. Se i croma-
togrammi sono registrati nelle condizioni prescritte, i ^ un iniettore che permetta una iniezione diretta a
tempi di ritenzione relativi sono approssimativamente freddo nella colonna.
quelli elencati nella Tabella 2.8.13.-3. Calcolare il conte- Mantenere la temperatura della colonna a 80 ‘C per
nuto di ciascun pesticida a partire dall'area dei picchi e 1 min, quindi innalzarla ad una velocita© di 30 ‘C per
dalla concentrazione delle soluzioni. minuto fino a 150 ‘C e mantenerla a 150 ‘C per 3 min.
Quindi innalzare la temperatura ad una velocita© di
Tabella 2.8.13.-3. 4 ‘C per minuto fino a 280 ‘C e mantenerla a 280 ‘C
per 1 min. Mantenere la temperatura della camera di
iniezione a 250 ‘C e quella del rivelatore a 275 ‘C. Iniet-
tare il volume scelto di ciascuna soluzione. Se i croma-
Tempi

Sostanza di ritenzione

relativi
togrammi sono registrati nelle condizioni prescritte, i
tempi di ritenzione relativi sono approssimativamente
Diclorvos 0,20 quelli riportati nella Tabella 2.8.13.-4. Calcolare il con-
Fonofos 0,50 tenuto di ciascun insetticida a partire dall'area dei pic-
Diazinone 0,52
Paration-metile 0,59 chi e dalla concentrazione delle soluzioni.
Clorpirifos-metile 0,60
Pirimifos-metile 0,66 Tabella 2.8.13.-4.
Malation 0,67
Paration 0,69
Clorpirifos 0,70 Tempi

Metidation 0,78 Sostanza di ritenzione

Etion 0,96 relativi

Carbofenotion 1,00
Azinfos-metile 1,17 -Esaclorocicloesano 0,44
Fosalone 1,18
a

Esaclorobenzene 0,45
b-Esaclorocicloesano 0,49
3.2. Insetticidi organoclorurati e piretroidi. Esaminare Lindano 0,49
d-Esaclorocicloesano 0,54
mediante gas cromatografia (2.2.28) usando carbofeno- e-Esaclorocicloesano 0,56
tione R come standard interno. Puo© essere necessario Eptacloro 0,61
utilizzare un secondo standard interno per identificare Aldrin 0,68
le possibili interferenze con il picco corrispondente al cis-Eptacloro epossido 0,76
carbofenotion. o,p'-DDE 0,81
a-Endosulfan 0,82
Soluzione in esame. Evaporare la soluzione C (vedi Dieldrin 0,87
sopra), fino quasi a secco in corrente di elio per croma- p,p'-DDE 0,87
tografia R o di azoto esente da ossigeno R e riprendere o,p'-DDD 0,89
il residuo con 500 ml di toluene R. Endrin 0,91
Soluzione di riferimento. Utilizzare almeno tre soluzioni b-Endosulfan 0,92
in toluene R, contenenti gli insetticidi da determinare, o,p'-DDT 0,95
e carbofenotione R, a concentrazioni adatte per effet- Carbofenotion 1,00
tuare una curva di taratura. p,p'-DDT 1,02
cis-Permetrina 1,29
Il procedimento cromatografico puo© essere effettuato trans-Permetrina 1,31
usando: Cipermetrina* 1,40
^ una colonna di silice fusa, lunga 30 m e con diametro Fenvalerato* 1,47-1,49
interno di 0,32 mm, le cui pareti interne sono rico- Deltametrina 1,54
perte di uno strato di poli(dimetil)(difenil)silossa-
no R dello spessore di 0,25 mm circa, * La sostanza presenta numerosi picchi.

252
 Indice di amarezza

inoizircserP

ilareneG
2.8.14. DETERMINAZIONE DEI TANNINI NELLE 2.8.15. INDICE DI AMAREZZA

L'indice di amarezza e© l'inverso della diluizione di un

DROGHE VEGETALI

Effettuare tutte le operazioni di estrazione e di diluizione composto, di un liquido o di un estratto che puo© essere
al riparo dalla luce. identificata ancora come amara. E' determinato per
Nel caso di droga o di estratto secco aggiungere150 ml di confronto con chinina cloridrato, il cui indice di ama-

isilanA id
idoteM
acqua R alla quantita© indicata della droga polverizzata rezza e© fissato a 200000.
(180) o dell'estratto in un pallone a fondo tondo da 250
ml. Scaldare a b.m. per 30 min. Raffreddare sotto acqua Determinazione del fattore di correzione
corrente e trasferire quantitativamente in un pallone
tarato da 250 ml. Lavare il pallone a fondo tondo e riu- Si raccomanda di effettuare il saggio con un gruppo

irotinetnoC
/ ilairetaM
nire le acque di lavaggio nel pallone tarato, poi diluire a composto da almeno 6 persone. Bisogna sciacquare la
250,0 ml con acquaR. Lasciar depositare i solidi e filtrare bocca con acqua R prima dell'assaggio.
il liquido attraverso una carta da filtro di 125 mm di dia- Per tenere conto delle singole differenze di percezione
metro. Scartare i primi 50 ml del filtrato. dell'amarezza nell'ambito del gruppo, e© necessario
Nel caso di estratto fluido o di tintura diluire la quan- determinare un fattore di correzione per ciascuna per-
sona.

ivittaeR
tita© indicata di estratto fluido o di tintura a 250,0 ml
con acqua R. Filtrare la miscela attraverso una carta Soluzione madre. Disciogliere 0,100 g di chinina clori-
da filtro di 125 mm di diametro. Scartare i primi 50 ml drato R in acqua R e portare a 100,0 ml con lo stesso
del filtrato. solvente. Prelevare 1,0 ml di questa soluzione e portare
Polifenoli totali. Diluire 5,0 ml del filtrato a 25,0 ml con a 100,0 ml con acqua R.

itnemogrA
ilareneG
acqua R. Mescolare 2,0 ml di questa soluzione con Soluzioni di riferimento. Preparare una serie di dilui-
1,0 ml di fosfomolibdotungstico reattivo R e 10,0 ml di zioni introducendo in una prima provetta 3,6 ml di
acqua R e diluire a 25,0 ml con una soluzione (290 g/l) soluzione madre aumentando progressivamente il
di sodio carbonato R. Dopo 30 min misurare l'assor- volume di 0,2 ml nelle successive provette fino a rag-
banza (2.2.25) a 760 nm (A1), usando acqua R come giungere 5,8 ml nell'ultima provetta. Portare il conte-

eifargonoM
liquido di compensazione. nuto di ciascuna provetta a 10,0 ml con acqua R.

ilareneG
Polifenoli non assorbiti dalla polvere di pelle. A 10,0 ml Determinare come descritto di seguito la diluizione con
del filtrato aggiungere 0,10 g di pelle polvere SCR ed la piu© bassa concentrazione giudicata ancora amara.
agitare energicamente per 60 min. Filtrare e diluire Portare nella bocca 10,0 ml della soluzione piu© diluita
5,0 ml del filtrato a 25,0 ml con acqua R. Mescolare della serie e, per 30 s, far passare la soluzione da una

ehcituecamraF
2,0 ml di questa soluzione con 1,0 ml di fosfomo- parte all'altra della bocca al di sopra della lingua. Se la

emroF
libdotungstico reattivo R e 10,0 ml di acqua R e soluzione non e© giudicata amara, espellerla e attendere
diluire a 25,0 ml con una soluzione (290 g/l) di sodio 1 min; sciacquare la bocca con acqua R e dopo 10 min,
carbonato R. Dopo 30 min misurare l'assorbanza utilizzare la soluzione a concentrazione immediata-
(2.2.25) a 760 nm (A2), usando acqua R come liquido di mente superiore.
compensazione. Calcolare il fattore di correzione k per ciascun membro
eiretaM

emirP
Soluzione di riferimento. Disciogliere immediatamente del gruppo mediante l'espressione:
prima dell'uso 50,0 mg di pirogallolo R in acqua R e
diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. Diluire 5,0 ml k 5;n00
ˆ

della soluzione a 100,0 ml con acqua R. Mescolare

ehcituecamraF

2,0 ml di questa soluzione con1,0ml di fosfomolibdotung-

inoizaraperP

ehcificepS

stico reattivo R e 10,0 ml di acqua R e diluire a 25,0 ml n = numero di millilitri della soluzione madre conte-
con una soluzione (290 g/l) di sodio carbonato R. Dopo nuto nella diluizione con la piu© bassa concentra-
30 min misurare l'assorbanza (2.2.25) a 760 nm (A3), zione che e© giudicata amara.
usando acqua R come liquido di compensazione. Le persone che non percepiscono il sapore amaro con la
Calcolare il contenuto percentuale di tannini espresso soluzione di riferimento preparata utilizzando 5,8 ml
ehcitapoemO
inoizaraperP

come pirogallolo mediante l'espressione: della soluzione madre sono esclusi dal gruppo.
Preparazione del campione
62; 5 A1 A2 m2
ÿ †

A3 m1
2 Polverizzare il campione (710) se necessario. A 1,0 g del
campione, aggiungere 100 ml di acqua R bollente. Scal-
m1 massa del campione da esaminare in grammi
ecidnI

ˆ dare a b.m. per 30 min agitando continuamente.

m2 ˆ massa di pirogallolo in grammi. Lasciar raffreddare e portare a 100 ml con acqua R.

253
Perdita all'essiccamento degli estratti

Agitare energicamente e filtrare scartando i primi 2 ml. Calcolare l'indice di amarezza per ciascun membro del
Il filtrato rimanente e© etichettato come gruppo mediante l'espressione:
C-1 e possiede un fattore di diluizione (FD) di 100. Y k
Se la preparazione in esame e© un liquido, prelevarne 2

X 0; 1
1 ml e diluire a 100 ml con un solvente adatto. Questa 2

soluzione e© etichettata come C-1.

Calcolare l'indice di amarezza del campione in esame
Determinazione dell'indice di amarezza come valore medio dei valori riscontrati da ciascun
Soluzioni in esame: membro del gruppo.
10,0 ml di C-1 diluiti a 100 ml (FD = 1000)
con acqua R: C-2 2.8.16. RESIDUO SECCO DEGLI ESTRATTI

10,0 ml di C-2 diluiti a 100 ml (FD = 10000)

con acqua R: C-3 Introdurre rapidamente 2,00 g o 2,0 ml dell'estratto in
20,0 ml di C-3 diluiti a 100 ml (FD = 50000) esame in una capsula a fondo piatto del diametro di
con acqua R: C-3A circa 50 mm e con un'altezza di circa 30 mm. Evaporare
10,0 ml di C-3 diluiti a 100 ml (FD = 100000) a secco a b.m. ed essiccare in stufa a 100-105 ‘C per 3 h.
con acqua R: C-4 Lasciar raffreddare in un essiccatore su anidride fosfo-
Iniziando con la diluizione C-4 ciascun membro del rica R o gel di silice anidra R e pesare. Calcolare il risul-
gruppo determina la prima delle diluizioni che presenta tato come percentuale in massa o in grammi per litro.
un sapore amaro. Questa soluzione e© etichettata D.
Indicare come Y il fattore di diluizione (FD) della solu-
zione D. 2.8.17. PERDITA ALL'ESSICCAMENTO DEGLI

Iniziando dalla soluzione D, preparare la serie delle ESTRATTI

diluizioni seguenti: Pesare rapidamente 0,50 g dell'estratto in esame, fine-

Soluzione D (ml) 1,2 1,5 2,0 3,0 6,0 8,0 mente polverizzato, in una capsula a fondo piatto del
Acqua R (ml) 8,8 8,5 8,0 7,0 4,0 2,0
diametro di circa 50 mm e con un'altezza di circa
30 mm. Essiccare in stufa a 100-105 ‘C per 3 h. Lasciar
Determinare il numero di millilitri a partire dalla solu- raffreddare in un essiccatore su anidride fosforica R o
zione D che, dopo la diluizione a 10,0 ml con acqua R, su gel di silice anidra R e pesare. Calcolare il risultato
presenta ancora un sapore amaro (X). come percentuale in massa.

254
 2.9. Saggi e procedimenti

inoizircserP

ilareneG
tecnologici

isilanA id
idoteM
2.9. Saggi procedimenti tecnologici . . . . 257 2.9.15. Volume apparente . . . . . . . . . . . . . . 276
2.9.1. Disaggregazione delle compresse e 2.9.16. Scorrimento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 277

irotinetnoC
/ ilairetaM
delle capsule . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 257 2.9.17. Saggio per il volume estraibile delle
2.9.2. Disaggregazione delle supposte e preparazioni parenterali . . . . . . . . . 278
degli ovuli . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 258 2.9.18. Preparazioni per inalazione: valuta-
2.9.3. Saggio di dissoluzione per le forme zione aerodinamica delle particelle
farmaceutiche solide . . . . . . . . . . . . 260 fini . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 279
2.9.4. Saggio di dissoluzione per i cerotti

ivittaeR
2.9.19. Contaminazione particellare: parti-
transdermici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 264 celle non visibili . . . . . . . . . . . . . . . . 291
2.9.5. Uniformita© di massa delle forme far- 2.9.20. Contaminazione particellare: parti-
maceutiche a dose unica . . . . . . . . . 266 celle visibili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 294
2.9.6. Uniformita© di contenuto delle forme 2.9.21. Contaminazione particellare: meto-
farmaceutiche a dose unica . . . . . . . 317

itnemogrA
ilareneG
2.9.7. Friabilita© delle compresse non rive- do al microscopio . . . . . . . . . . . . . . 295
stite . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 268 2.9.22. Determinazione del tempo di ram-
2.9.8. Resistenza alla rottura delle com- mollimento di supposte lipofile . . . . 296
presse . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 269 2.9.23. Densita© picnometrica dei solidi . . . . 297
2.9.9. Misura della consistenza per pene- 2.9.24. Resistenza alla rottura di supposte e

eifargonoM
ovuli . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ilareneG
trometria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 269 298
2.9.10. Contenuto di etanolo e tabelle alcoo- 2.9.25. Rilascio di farmaco da gomme da
limetriche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 271 masticare medicate . . . . . . . . . . . . . 300
2.9.11. Saggio per metanolo e 2-propanolo 273 2.9.26. Area superficiale specifica mediante
adsorbimento di gas . . . . . . . . . . . . 300

ehcituecamraF
2.9.12. Classificazione granulometrica delle
polveri mediante setacciatura . . . . . 273 2.9.27. Uniformita© di massa delle dosi rila-

emroF
2.9.13. Saggio limite delle dimensione delle sciate da contenitori multi-dose . . . . 304
particelle per microscopia . . . . . . . . 273 2.9.28. Saggio per la massa o il volume rila-
2.9.14. Area superficiale specifica per per- sciabile di preparazioni liquide e
meabilita© all'aria . . . . . . . . . . . . . . . 274 semi- solide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 304

eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Disaggregazione delle compresse e delle capsule

inoizircserP
in grado di alzarlo e abbassarlo in modo uniforme ad

ilareneG
2.9. SAGGI E PROCEDIMENTI TECNO-

LOGICI una frequenza costante compresa tra 28 e 32 cicli per

minuto per un'ampiezza di 50-60 mm.
2.9.1. DISAGGREGAZIONE DELLE COMPRESSE
Il sistema e© sospeso nel liquido indicato e in un adatto

isilanA id
E DELLE CAPSULE
recipiente, preferibilmente un becher da un litro.

idoteM
Questo saggio di disaggregazione determina se le com- Ilnella volume del liquido e© tale che, quando il cestello e©
posizione piu© alta, la rete e© almeno 15 mm sotto
presse o le capsule si disaggregano entro il tempo pre- la superficie
scritto quando sono poste in un mezzo liquido nelle bassa, la retedel e©
liquido e, quando e© nella posizione piu©
almeno 25 mm sopra la base del becher
condizioni sperimentali di seguito indicate.

irotinetnoC
e le estremita© superiori aperte dei tubi rimangono sopra

/ ilairetaM
La disaggregazione si intende raggiunta quando: la superficie del liquido. Un opportuno termostato
a) nessun residuo rimane sulla rete del cestello, o mantiene la temperatura del liquido a 36-38 ‘C.
b) se c'e© un residuo, e© costituito da una massa molle, Gli elementi meccanici descritti possono subire modifi-
senza nucleo palpabile, duro, non inumidito, o che purchë rimangano inalterate le caratteristiche

ivittaeR
c) rimangono solo frammenti del rivestimento (com- descritte dei tubi di vetro e della rete.
presse), o solo frammenti dell'involucro (capsule) sulla
rete del cestello; se si e© usato un disco (capsule), fram- Metodo. Introdurre in ciascuno dei sei tubi una com-
menti dell'involucro possono aderire alla superficie pressa o una capsula e, se indicato, aggiungere un disco;
inferiore del disco. sospendere il sistema nel becher contenente il liquido

itnemogrA
ilareneG
Applicare uno dei seguenti metodi come appropriato. indicato. Mettere in funzione l'apparecchio e, trascorso
il tempo prescritto, sollevare il cestello e osservare lo
stato delle compresse o delle capsule. Perchë il saggio
SAGGIO A - CAPSULE E COMPRESSE DI DIMEN- sia considerato positivo, tutte le compresse o le capsule
SIONE NORMALE devono essersi disaggregate.

eifargonoM

ilareneG
Apparecchiatura. La parte principale dell'apparecchio
(vedi Figura 2.9.1.-1) e© costituita da un sistema rigido a
cestello che sostiene sei tubi cilindrici in vetro lunghi

ehcituecamraF
77,5 2,5 mm, del diametro interno di 21,5 mm,

emroF
6

con pareti dello spessore di circa 2 mm. Ciascun

tubo e© dotato di un disco cilindrico del diametro di
20,7 0,15 mm e dello spessore di 9,5 0,15 mm,
6 6

realizzato in plastica trasparente con densita© relativa

di 1,18-1,20. Ciascun disco ha cinque fori del diametro

eiretaM
di 2 mm, uno al centro e gli altri quattro disposti rego-

emirP
larmente su un cerchio del raggio di 6 mm dal centro
del disco. Sulla superficie laterale del disco, quattro sca-
nalature equidistanti sono tagliate in modo che sulla
superficie superiore del disco siano 9,5 mm di larghezza
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

e 2,55 mm di profondita© e nella parte inferiore 1,6 mm

quadrati. I tubi sono tenuti verticali da due dischi di
plastica trasparente, separati e sovrapposti, di 90 mm
di diametro e 6 mm di spessore, con sei fori. I fori sono
equidistanti dal centro del disco ed equamente distan-
ehcitapoemO
inoizaraperP

ziati tra di loro. Sotto il disco inferiore e© fissata una rete

metallica costituita da fili di acciaio inossidabile del
diametro di 0,635 mm e con apertura delle maglie di
2,00 mm. I dischi sono tenuti rigidamente in posizione,
ad una distanza di 77,5 mm, da barre metalliche verti-
cali situate nella parte periferica; una barra metallica e©
ecidnI

anche fissata al centro del disco superiore per permet- Figura 2.9.1-1
tere di collegare il cestello ad un dispositivo meccanico Dimensioni in millimetri

257
Disaggregazione delle supposte e degli ovuli

SAGGIO B - COMPRESSE E CAPSULE GRANDI

Apparecchiatura. La parte principale dell'apparec-

chio (vedi Figura 2.9.1.-2) e© costituita da un sistema
rigido a cestello che sostiene tre tubi cilin-
drici in vetro lunghi 77,5 2,5 mm, del diametro
6

interno di 33 0,5 mm e con pareti dello spessore di

6

2,5 0,5 mm. Ciascun tubo e© dotato di un disco

6

cilindrico del diametro di 31,55 0,15 mm e dello

6

spessore di 16,4 0,1 mm, realizzato in plastica tra-

6

sparente con densita© relativa di 1,18-1,20. Ciascun

disco ha sette fori del diametro di 3,15 mm, uno al
centro e gli altri sei disposti regolarmente su un cer-
chio del raggio di 4,2 mm dal centro del disco. I tubi
sono tenuti verticali da due dischi di plastica traspa-
rente, separati e sovrapposti, di 97 mm di diametro e
9 mm di spessore, con tre fori. I fori sono equidistanti
dal centro del disco ed equamente distanziati tra di
loro. Sotto il disco inferiore e© fissata una rete metal-
lica costituita da fili di acciaio inossidabile del diame-
tro di 0,62 0,02 mm e con apertura delle maglie di
6

2,0 0,2 mm. I dischi sono tenuti rigidamente in

6

posizione, ad una distanza di 77,5 mm, da barre

metalliche verticali situate nella parte periferica; una
barra metallica e© anche fissata al centro del disco
superiore per permettere di collegare il cestello ad un
dispositivo meccanico destinato ad alzarlo e abbas- Figura 2.9.1.-2.
sarlo in modo uniforme ad una frequenza costante Dimensioni in millimetri
compresa tra 29 e 32 cicli per minuto per un'ampiezza
di 55 2 mm. Metodo. Introdurre in ciascuno dei tre tubi una com-
pressa o una capsula e aggiungere un disco; sospendere
6

il sistema nel becher contenente il liquido indicato.

Il sistema e© sospeso nel liquido indicato e in un Mettere in funzione l'apparecchio per il tempo pre-
adatto recipiente, preferibilmente un becher da un scritto, sollevare il cestello e osservare lo stato delle
litro. Il volume del liquido e© tale che, quando il compresse o delle capsule.
cestello e© nella posizione piu© alta, la rete e© almeno
15 mm sotto la superficie del liquido e, quando e© nella
posizione piu© bassa, la rete e© almeno 25 mm sopra la
2.9.2. DISAGGREGAZIONE DELLE SUPPOSTE E

DEGLI OVULI

base del becher e le estremita© superiori aperte dei tubi

rimangono sopra la superficie del liquido. Un oppor- Questo saggio serve a determinare se le supposte o gli
tuno termostato mantiene la temperatura del liquido ovuli, quando posti in un mezzo liquido nelle condi-
a 35-39 ‘C. zioni sperimentali di seguito descritte, rammolliscono
o si disaggregano entro il tempo prescritto.
Gli elementi meccanici descritti possono subire La disaggregazione si considera raggiunta quando:
modifiche purchë rimangano inalterate le caratteristi-
che descritte dei tubi di vetro e della rete. a) la dissoluzione e© completa,

258
 Disaggregazione delle supposte e degli ovuli

inoizircserP
b) i componenti della supposta o dell'ovulo si sepa-

ilareneG
rano: quelli grassi fusi alla superficie del liquido,
le polveri insolubili al fondo e i componenti solu-
bili si disciolgono. Secondo il tipo di preparazione,
i componenti possono distribuirsi in uno o piu© di

isilanA id
idoteM
questi modi,

c) si verifica un rammollimento del campione che

puo© essere accompagnato da apprezzabile cambia-

irotinetnoC
/ ilairetaM
mento della forma senza separazione completa dei
componenti. Il rammollimento deve essere tale
che la supposta o l'ovulo non abbiano piu© un
nucleo solido che resiste alla pressione di una bac-
chetta di vetro,

ivittaeR
d) la rottura dell'involucro di gelatina di capsule ret-
tali o vaginali consente la fuoriuscita del conte-

itnemogrA
ilareneG
nuto,

e) non rimane alcun residuo sulla piastra perforata o,

se rimane, esso e© costituito solo da una massa

eifargonoM

ilareneG
molle o schiumosa senza nucleo solido che offra
resistenza alla pressione di una bacchetta di vetro Figura 2.9.2. - 1.- Apparecchio per la disaggregazione
(compresse vaginali). di supposte ed ovuli
Dimensioni in millimetri

ehcituecamraF
Apparecchiatura. L'apparecchio (Figura 2.9.2.-1) e© Metodo. Utilizzare tre supposte od ovuli. Collocare

emroF
costituito da un tubo di vetro o di adatta plastica tra- ognuno di essi sul disco inferiore di un apparecchio,
sparente, di appropriato spessore, all'interno del porre quest'ultimo nel tubo e fissare. Invertire gli appa-
quale si inserisce, per mezzo di tre ganci, un disposi- recchi ogni 10 min. Dopo il tempo indicato nella mono-
tivo metallico consistente in due dischi di acciaio grafia, esaminare i campioni. Perchë il saggio sia posi-
tivo, devono essersi disaggregati tutti i campioni.
eiretaM

emirP
inossidabile perforati, ciascuno dei quali ha 39 fori
del diametro di 4 mm; il diametro dei dischi e© pratica-
mente uguale a quello interno del tubo, i dischi sono MODO DI OPERARE PER LE COMPRESSE VAGI-
distanziati di circa 30 mm. Il saggio si effettua NALI
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

usando tre apparecchi, ognuno dei quali contiene un

singolo campione. Ciascun apparecchio si colloca, se Utilizzare l'apparecchiatura sopra descritta, disposta in
non e© diversamente prescritto, in un becher della modo che appoggi sui ganci (vedi Figura 2.9.2.-2). Porla
capacita© di almeno 4 litri, riempito con acqua mante- in un becher di diametro appropriato contenente acqua
ehcitapoemO

mantenuta a 36-37 ‘C, con il livello appena sotto al

inoizaraperP

nuta a 36-37 ‘C. Gli apparecchi possono anche essere disco perforato superiore. Con una pipetta aggiustare
posti insieme in un recipiente della capacita© di il livello con acqua a 36-37 ‘C fino a ricoprire con un
almeno 12 litri. Il becher e© dotato di un lento agita- lieve strato uniforme i fori del disco. Usare tre com-
tore e di un dispositivo che terra© i cilindri verticali a presse vaginali. Porre ognuna di queste sul disco supe-
non meno di 90 mm sotto la superficie dell'acqua e riore di un apparecchio e coprire quest'ultimo con una
consentira© di ruotarli di 180‘ attorno ad un'asse oriz- lastra di vetro per mantenere condizioni appropriate di
ecidnI

zontale senza farli uscire dall'acqua. umidita© . Trascorso il tempo fissato nella monografia,

259
Saggio di dissoluzione per le forme farmaceutiche solide

esaminare lo stato dei campioni. Perchë il saggio sia APPARECCHIATURA

considerato positivo, tutti i campioni devono essersi
disaggregati. La scelta dell'apparecchio da usare dipende dalle carat-
teristiche fisico-chimiche della forma di dosaggio. Tutte
le parti dell'apparecchio che possono venire in contatto
con la preparazione o con il mezzo di dissoluzione sono
chimicamente inerti e non adsorbono o reagiscono o
interferiscono con il campione in esame. Tutte le parti
metalliche dell'apparecchio che possono venire in con-
tatto con la preparazione o con il mezzo di dissoluzione
devono essere di adatto acciaio inossidabile o rivestite
con un materiale adatto ad assicurare che tali parti
non reagiscano o interferiscano con la preparazione o
con il mezzo di dissoluzione. Nessuna parte dell'appa-
recchio o della struttura deve dar luogo in modo sensi-
bile a movimento, agitazione o vibrazione oltre a quelli
derivanti dall'elemento ruotante o dal sistema a flusso
A. lastra di vetro D. acqua continuo.
B. compressa vaginale E. cristallizzatore, becher
C. superficie dell'acqua Eé preferibile utilizzare un apparecchio che permetta
l'osservazione della preparazione in esame e dell'agita-
Figura 2.9.2.-2 tore durante il saggio.
Apparecchio ad agitatore a paletta. L'apparecchio (vedi
2.9.3. SAGGIO DI DISSOLUZIONE

FORME FARMACEUTICHE SOLIDE

PER LE
Figura 2.9.3.-1) e© costituito da:
^ un recipiente cilindrico di vetro borosilicato o di
Il saggio serve a determinare la velocita© di dissoluzione altro adatto materiale trasparente a fondo emisfe-
dei principi attivi di forme farmaceutiche solide (ad rico e della capacita© nominale di 1000 ml; un coper-
esempio compresse, capsule e supposte). chio fissato in modo tale da ritardare l'evapora-
zione. Il coperchio ha un foro centrale per l'inseri-
Se non e© diversamente giustificato e autorizzato pos- mento dell'albero dell'agitatore ed altri orifizi per
sono essere usati l'apparecchio ad agitatore a paletta o l'introduzione del termometro e di dispositivi per
quello a cestello rotante o in casi speciali l'apparecchio il prelievo del liquido,
a flusso continuo. Per ciascuna preparazione alla quale
si debba applicare il saggio di dissoluzione, devono ^ un agitatore costituito da un albero verticale alla
essere riportate nella monografia le seguenti indica- cui estremita© inferiore e© fissata una paletta avente
zioni: la forma di una sezione di cerchio sottesa a due
corde parallele; la paletta e© posizionata central-
^ l'apparecchio da usare, compresa l'indicazione del mente all'estremita© inferiore dell'albero; l'albero e©
tipo di cella a flusso, nei casi in cui sia prescritto posto in modo tale che l'asse si mantenga entro i
l'apparecchio a flusso continuo (Figure 2.9.3.-4/5/6), 2 mm dall'asse del recipiente e che la parte infe-
riore della paletta sia alla distanza di 25 2 mm
6

^ la composizione, il volume e la temperatura del dal fondo interno del recipiente; la parte superiore
mezzo di dissoluzione, dell'albero e© collegata ad un motore munito di un
^ la velocita© di rotazione o la velocita© di flusso del regolatore della velocita© ; l'agitatore ruota in modo
uniforme senza vibrazioni apprezzabili,
mezzo di dissoluzione,
^ il tempo, il metodo ed il volume relativi al campio- ^ un bagno maria che dovra© mantenere il mezzo di
dissoluzione a 37 0,5 ‘C.
namento della soluzione in esame o le condizioni
6

per il monitoraggio in continuo, Apparecchio a cestello L'apparecchio (vedi

rotante.

^ il metodo analitico, Figura 2.9.3.-2) e© costituito da:

^ la o le quantita© dei principi attivi che si devono ^ un recipiente identico a quello descritto per l'agita-
disciogliere nell'intervallo di tempo prescritto. tore a paletta,

260
 Saggio di dissoluzione per le forme farmaceutiche solide

inoizircserP
^ un agitatore costituito da un albero verticale alla

ilareneG
cui estremita© inferiore e© fissato un cestello cilin-
drico costituito da due parti: la parte superiore,
con un foro di 2 mm, e© saldata all'albero ed e©
munita di tre ganci a molla o di altri dispositivi ido-
nei che permettono di rimuovere la parte inferiore

isilanA id
idoteM
del cestello per poter introdurre la preparazione in
esame e che mantengono saldamente la parte infe-
riore del cestello concentrica con l'asse del reci-
piente durante la rotazione. La parte inferiore del
cestello e© costituita da una rete saldata a forma di

irotinetnoC
/ ilairetaM
cilindro orlato alle due estremita© da uno stretto
bordo metallico; se non diversamente prescritto, la
rete ha fili del diametro2 di 0,254 mm e apertura
delle maglie di 0,381 mm . Per i saggi da effettuare
in ambiente acido diluito si puo© utilizzare un
cestello con un rivestimento dorato dello spessore

ivittaeR
di 2,5 mm. Durante il saggio, la distanza fra la base
del cestello e il fondo interno del recipiente e© di
25 2 mm. La parte superiore dell'albero e© con-
6

nessa con un motore fornito di regolatore della

itnemogrA
velocita© che consente un'agitazione uniforme senza

ilareneG
apprezzabili vibrazioni;
^ un bagno maria che consente di mantenere il
mezzo di dissoluzione a 37 0,5 ‘C.

eifargonoM
6

ilareneG
Figura 2.9.3.-2
Apparecchio a cestello rotante
Dimensioni in millimetri
L'apparecchio (vedi

ehcituecamraF
Apparecchio a flusso continuo.

Figura 2.9.3.-3) e© costituito da:

emroF
^ un serbatoio per il mezzo di dissoluzione;
^ una pompa che spinge il mezzo di dissoluzione
verso l'alto attraverso la cella a flusso continuo;
^ una cella a flusso continuo (vedi Figure 2.9.3.-4/5/6)
di materiale trasparente, montata verticalmente e
eiretaM

emirP
dotata di un sistema filtrante per evitare fuoriuscita
di particelleindisciolte. inoizaraperP

ehcituecamraF

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI

Figura. 2.9.3.-1 - Apparecchio a paletta Figura 2.9.3.-3

Dimensioni in millimetri Apparecchio a flusso continuo

261
Saggio di dissoluzione per le forme farmaceutiche solide

Mezzo di dissoluzione. Se il mezzo di dissoluzione e©

tamponato, aggiustare il pH entro 0,05 unita© del
6

valore prescritto. Prima del saggio allontanare dal

mezzo di dissoluzione tutti i gas disciolti poichë pos-
sono essere causa della formazione di bolle che altere-
rebbero in modo significativo i risultati.
METODO
Apparecchio ad agitatore a paletta e a cestello rotante.

Porre nel recipiente il volume indicato del mezzo di dis-

soluzione, montare l'apparecchio, scaldare il mezzo di
dissoluzione a 37 0,5 ‘C e togliere il termometro.
6

Figura. 2.9.3.-4.- Cella a flusso continuo

Dimensioni in millimetri
La cella a flusso continuo in Figura 2.9.3.-6 e© parti-
colarmente indicata per le forme solide lipofile,
come supposte e capsule molli. Eé costituita da tre
parti trasparenti che si inseriscono una nell'altra.
La parte inferiore (1) e© composta da due camere
adiacenti connesse con un sistema di ``troppo-
pieno''.
Il mezzo di dissoluzione passa attraverso la camera
A ed e© sottoposto ad un flusso ascensionale. Nella
camera B il flusso e© discendente, diretto verso un
foro di uscita di piccole dimensioni, situato sopra
un sistema filtrante. La parte mediana della cella
(2) ha una cavita© per raccogliere gli eccipienti lipo-
fili che galleggiano sul mezzo di dissoluzione. Una
griglia metallica funge da filtro grossolano.
La parte superiore (3) porta una unita© filtrante per
filtri di carta, fibra di vetro o cellulosa;
^ un bagno maria che consente di mantenere il Figura 2.9.3.-5.- Cella a flusso continuo
mezzo di dissoluzione a 37 0,5 ‘C.
6 Dimensioni in millimetri

262
 Saggio di dissoluzione per le forme farmaceutiche solide

inoizircserP
Introdurre una unita© della preparazione in esame nel- CAMPIONAMENTO E VALUTAZIONE

ilareneG
l'apparecchio. Per l'apparecchio ad agitatore a paletta
porre la preparazione sul fondo del recipiente prima Nel caso degli apparecchi ad agitatore a paletta ed a
di iniziare la rotazione della paletta; le forme che cestello rotante, al tempo indicato, o ad intervalli fissati
potrebbero galleggiare sono tenute orizzontali sul o in continuo, si effettua il prelievo del o dei volumi sta-
biliti, in una zona intermedia fra la superficie del mezzo

isilanA id
fondo del recipiente con un dispositivo adatto, come

idoteM
una spirale di metallo o di vetro. di dissoluzione e la parte superiore della paletta o del
Per l'apparecchio a cestello rotante, porre la prepara- cestello rotante, a non meno di 10 mm dalla parete del
zione in un cestello asciutto e collocare in posizione recipiente. Nel caso dell'apparecchio a flusso continuo,
prima di iniziare la rotazione. i campioni sono sempre raccolti all'uscita della cella,

irotinetnoC
indipendentemente dal fatto che il circuito sia aperto o

/ ilairetaM
Bisogna avere cura di evitare la presenza di bolle d'aria chiuso.
sulla superficie della preparazione.
Iniziare subito la rotazione dell'apparecchio alla velo- Ad eccezione di quando si effettua la misura in conti-
cita© indicata ( 4 per cento). nuo con il metodo dell'agitatore a paletta o del cestello
6
rotante (il liquido prelevato ritorna nel recipiente) o di
quando si preleva una sola porzione di liquido, si deve

ivittaeR
compensare il volume prelevato, o per aggiunta di un
Apparecchio a flusso continuo.

Celle (vedi Figure 2.9.3.-4/5). Porre una sfera di 5 mm volume del mezzo di dissoluzione uguale al volume del
( 0,5 mm) di diametro alla base del cono per proteg-
6 liquido prelevato o per mezzo di calcoli.
gere l'entrata del fluido e quindi sfere di vetro di adatta
Filtrare il liquido prelevato con un filtro inerte di

itnemogrA
dimensione, preferibilmente di 1 mm ( 0,1 mm) di

ilareneG
adatta porosita© , che non adsorba in modo apprezzabile
6

diametro. Introdurre una unita© della preparazione nella

cella sopra o all'interno dello strato di sfere di vetro, il principio attivo dalla soluzione e che non contenga
per mezzo di un supporto. Sistemare il dispositivo di fil- sostanze estraibili dal mezzo di dissoluzione che
trazione. potrebbero interferire con il metodo analitico pre-
scritto. Procedere quindi all'analisi del filtrato come

eifargonoM

ilareneG
Scaldare il mezzo di dissoluzione a 37 0,5 ‘C. 6
prescritto.
Usando una pompa adatta, introdurre il mezzo di
dissoluzione attraverso la base della cella cos|© da otte-
nere un appropriato flusso continuo attraverso un cir-
cuito aperto o chiuso alla velocita© prescritta ( 5 per

ehcituecamraF
6

cento).

emroF
Cella (vedi Figura 2.9.3.-6). Porre una unita© della prepa-
razione in esame nella camera A. Chiudere la cella con
il sistema filtrante preparato. All'inizio del saggio si
deve eliminare l'aria dalla camera A attraverso un pic-
colo orifizio connesso con il dispositivo filtrante.
eiretaM

emirP
Scaldare il mezzo di dissoluzione ad una appropriata
temperatura, tenendo presente il punto di fusione della
preparazione. Usando una pompa adatta, introdurre il
mezzo di dissoluzione caldo dalla base della cella cos|©
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

da ottenere un appropriato flusso continuo attraverso

un circuito aperto o chiuso alla velocita© prescritta
( 5 per cento).
6

Quando il mezzo di dissoluzione raggiunge il ``troppo-

ehcitapoemO

pieno'', comincia a fuoriuscire aria attraverso il capil-

inoizaraperP

lare e la camera B si riempie con il mezzo di dissolu-

zione.
La preparazione si ripartisce nel mezzo di dissoluzione
secondo le sue proprieta© fisico-chimiche. In casi giusti-
ficati ed autorizzati, per supposte di grande volume, il
ecidnI

saggio puo© essere effettuato su un frammento rappre- Figura 2.9.3.-6.- Cella a flusso continuo
sentativo. Dimensioni in millimetri

263
Saggio di dissoluzione per i cerotti transdermici

La quantita© del principio attivo disciolto nel tempo pre-

scritto si esprime come percentuale del contenuto
dichiarato in etichetta.

2.9.4. SAGGIO DI DISSOLUZIONE PER I

CEROTTI TRANSDERMICI

Questo saggio e© utilizzato per determinare la velocita© di

dissoluzione dei principi attivi contenuti nei cerotti
transdermici.

1. METODO DELL'APPARECCHIO A DISCO

Apparecchiatura Utilizzare la paletta e il recipiente del- Figura 2.9.4.-2.- Paletta e disco

l'agitatore a paletta descritto nel saggio di dissoluzione Dimensioni in millimetri
per le forme farmaceutiche solide (2.9.3) con l'aggiunta
di un disco di acciaio inossidabile a rete con maglie di
apertura di 125 mm (vedi Figura 2.9.4.-1). Il disco man-
tiene il cerotto transdermico sul fondo del recipiente Procedimento

ed e© progettato in modo da rendere minimo lo spazio Introdurre nel recipiente il volume indicato del
morto tra il disco e il fondo del recipiente; il disco man- mezzo di dissoluzione e portarlo alla temperatura
tiene inoltre il cerotto disteso, con la superficie di rila- prescritta. Applicare il cerotto transdermico sul
scio rivolta verso l'alto e parallela al margine inferiore disco, avendo cura che la superficie di rilascio sia il
della paletta. Durante il saggio, la distanza tra il mar- piu© possibile piatta. Il cerotto puo© essere fissato sul
gine inferiore della paletta e la superficie del disco e© di disco con un adatto adesivo o con un nastro biade-
25 2 mm (vedi Figura 2.9.4.-2). La temperatura e©
6 sivo. L'adesivo o il nastro vengono previamente con-
mantenuta a 32 0,5 ‘C. Il recipiente puo© essere
6 trollati per l'assenza di interferenza con il saggio e
coperto durante il saggio per ridurre al minimo l'evapo- per l'adsorbimento del o dei principi attivi. Applicare
razione. per pressione, sulla faccia del disco resa adesiva, il
cerotto con la superficie di rilascio rivolta verso
l'alto. Una volta applicato, il cerotto non deve supe-
rare i bordi del disco. A tale scopo, a condizione che
la preparazione sia omogenea e uniformemente
distribuita sul supporto, una porzione adatta ed esat-
tamente misurata del cerotto puo© essere tagliata e uti-
lizzata per determinare la velocita© di dissoluzione.
Questa procedura puo© anche essere necessaria per
ottenere appropriate condizioni di stato stazionario,
ma non puo© essere seguita per cerotti del tipo a serba-
toio. Il campione montato sul disco viene posto sul
fondo del recipiente con la superficie di rilascio
rivolta verso l'alto. Azionare immediatamente la
paletta, per esempio a 100 giri al minuto. A intervalli
determinati, effettuare un prelievo nella zona inter-
media tra la superficie del mezzo di dissoluzione e il
Figura 2.9.4.-1.- Disco margine superiore della paletta, a non meno di 1 cm
Dimensioni in millimetri dalla parete del recipiente.

264
 Saggio di dissoluzione per i cerotti transdermici

inoizircserP
Effettuare la determinazione su ciascun campione

ilareneG
correggendo, se necessario, qualsiasi perdita di
volume. Ripetere il saggio con altri cerotti.

isilanA id
2. METODO DELLA CELLA

idoteM
Apparecchiatura.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Utilizzare la paletta e il recipiente dell'apparecchio a
paletta descritto al saggio di dissoluzione per le
forme farmaceutiche solide (2.9.3) con l'aggiunta
della cella di estrazione.
La cella di estrazione e© ottenuta da materiali

ivittaeR
chimicamente inerti; si compone di un supporto,
un coperchio e, se necessario, di una membrana
posta sul cerotto per isolarlo dal liquido che puo©
modificare o influenzare sfavorevolmente le sue

itnemogrA
ilareneG
proprieta© fisico-chimiche (vedi Figura 2.9.4.-3).
Supporto. La parte centrale del supporto presenta una
cavita© destinata a contenere il cerotto. La cavita© ha
una profondita© di 2,6 mm e un diametro adatto alle

eifargonoM

ilareneG
dimensioni del cerotto in esame. Possono
essere utilizzati i seguenti diametri: 27 mm, 38 mm, Figura 2.9.4.-3.- Cella di estrazione
45 mm, 52 mm, corrispondenti rispettivamente ai
volumi di 1,48 ml, 2,94 ml, 4,13 ml, 5,52 ml.

ehcituecamraF
Coperchio. Il coperchio presenta un'apertura centrale

emroF
di diametro scelto in funzione delle dimensioni del
cerotto in esame. In questo modo il cerotto puo©
essere esattamente centrato e la superficie di rilascio
limitata. Possono essere utilizzati i seguenti diametri:

eiretaM

emirP
20 mm; 32 mm; 40 mm; 50 mm corrispondenti
rispettivamente all'area di 3,14 cm2, 8,03 cm2,
12,56 cm2, 19,63 cm2. Il coperchio e© mantenuto in
sede da dadi avvitati su bulloni fissati al supporto.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

La tenuta e© assicurata da un anello di gomma posto

sul supporto.
La cella di estrazione mantiene il cerotto in esame Figura 2.9.4.-4.- Paletta sopra la cella di estrazione
piatto, con la superficie di rilascio rivolta verso
ehcitapoemO
inoizaraperP

l'alto e parallela al margine inferiore della paletta.

La distanza tra il margine inferiore della paletta Procedimento

Introdurre nel recipiente il volume indicato del mezzo di

e la superficie del cerotto e© mantenuta a 25 2 mm
6
dissoluzione e portarlo alla temperatura prescritta.
(vedi Figura 2.9.4.-4). La temperatura e© mante- Centrare esattamente il cerotto nella cella con la superfi-
nuta a 32 0,5 ‘C. Il recipiente puo© essere coperto
6
cie di rilascio rivolta verso l'alto. Chiudere la cella, appli-
durante il saggio per ridurre al minimo l'evapora-
ecidnI

cando, se necessario, sui bordi piatti una sostanza idro-

zione. foba (per esempio vaselina) per assicurare la tenuta e

265
Uniformita© di massa delle forme farmaceutiche a dose unica

garantire che il cerotto rimanga in sede. Introdurre la Procedimento

cella ponendola piatta sul fondo del recipiente, con il

coperchio rivolto verso l'alto. Immediatamente mettere Introdurre nel recipiente il volume indicato del mezzo
in moto la paletta, per esempio a 100 giri al minuto. di dissoluzione e portare alla temperatura prescritta.
A intervalli determinati, effettuare un prelievo del cam- Rimuovere il foglio protettivo dal cerotto e porre il lato
pione nella zona intermedia tra la superficie del mezzo adesivo su una membrana porosa inerte adatta, che sia
di dissoluzione e il margine superiore della paletta, a almeno 1 cm per lato piu© larga del cerotto. Porre il
non meno di 1 cm dalla parete del recipiente. cerotto su una superficie pulita in modo che la mem-
brana sia a contatto con la superficie stessa.
Effettuare la determinazione su ciascun campione cor- Per l'adesione al cilindro, si possono impiegare due
reggendo, se necessario, per perdite di volume. Ripetere sistemi:
il saggio su altri cerotti.
^ applicare un adatto adesivo sui bordi scoperti della
membrana e, se necessario, sul retro del cerotto,
3. METODO DEL CILINDRO ROTANTE ^ applicare un nastro biadesivo sulla parete esterna
del cilindro.
Con attenzione applicare per leggera pressione il lato
non adesivo del cerotto al cilindro in modo tale che la
Apparecchiatura
superficie di rilascio sia a contatto con il mezzo di dis-
Utilizzare l'apparecchio a paletta descritto al saggio di soluzione e che l'asse longitudinale del cerotto si trovi
dissoluzione per le forme farmaceutiche solide (2.9.3). intorno alla circonferenza del cilindro.
Sostituire la paletta e l'albero con un agitatore cilin- Il sistema di adesione utilizzato viene previamente con-
drico d'acciaio inossidabile (cilindro) (vedi Figura trollato per verificare l'assenza di interferenza con il
2.9.4.-5). Il cerotto viene posto sul cilindro all'inizio di saggio e per l'adsorbimento del o dei principi attivi.
ciascun saggio. La distanza tra il fondo interno del reci- Porre il cilindro nell' apparecchio, e immediatamente
piente e il cilindro e© mantenuta a 25 2 mm durante
6
mettere in moto il cilindro, per esempio a 100 giri al
la prova. La temperatura e© mantenuta a 32 0,5 ‘C.
6
minuto. A intervalli determinati effettuare un prelievo
Il recipiente viene coperto, durante il saggio, per ridurre da una zona intermedia tra la superficie del mezzo di
al minimo l'evaporazione. dissoluzione e il margine superiore del cilindro rotante,
a non meno di 1 cm dalla parete del recipiente.
Effettuare la determinazione su ciascun campione come
indicato nella singola monografia, correggendo se
necessario, per qualsiasi volume prelevato. Ripetere il
saggio su altri cerotti.

Interpretazione

Il cerotto transdermico soddisfa al saggio se la quantita©

del o dei principi attivi rilasciata dal cerotto, espressa
come quantita© per area e per unita© di tempo, e© com-
presa entro i limiti prescritti ai tempi di prelevamento
definiti.

2.9.5. UNIFORMITAé DI MASSA DELLE FORME

FARMACEUTICHE A DOSE UNICA

Pesare singolarmente venti unita© prelevate a caso da

uno stesso lotto o, per le preparazioni a dose unica alle-
stite in confezione singola, i contenuti di venti unita© e
Figura 2.9.4.-5.- Elementi del cilindro rotante determinare la massa media. Non piu© di due di tali
Dimensioni in centimetri masse individuali possono presentare uno scarto,

266
 Uniformita© di contenuto delle forme farmaceutiche a dose unica

inoizircserP
rispetto alla media, superiore alla percentuale riportata un essiccatore e pesare. La massa dei contenuti e© data

ilareneG
nella Tabella 2.9.5.-1 e nessuna unita© puo© presentare dalla differenza fra le pesate. Ripetere il procedimento
uno scarto maggiore del doppio di tale percentuale. con altri diciannove contenitori.
Tabella 2.9.5.-1

isilanA id
2.9.6. UNIFORMITAé DI CONTENUTO DELLE

idoteM
FORME FARMACEUTICHE A DOSE UNICA
Deviazione
Forma farmaceutica Massa media
percentuale
Il saggio si basa sulla determinazione dei contenuti
Compresse (non rivestite e 80 mg o meno 10
individuali di principio attivo in un numero di unita© a
dose unica, per verificare se sono compresi entro i limiti

irotinetnoC
/ ilairetaM
rivestite con film)
Piu© di 80 mg 7,5 stabiliti in rapporto al contenuto medio del campione.
e meno di 250 mg Il saggio non si applica ai preparati multivitaminici e
250 mg o piu© 5 alle preparazioni contenenti oligoelementi, e in altri
casi giustificati e autorizzati.
Capsule, granuli (non rive- Meno di 300 mg 10 Metodo. Prelevare a caso dieci unita© di dosaggio e

ivittaeR
stiti, a dose unica) e pol- determinare, con un metodo analitico idoneo, i conte-
veri (a dose unica) 300 mg o piu© 7,5 nuti individuali in principio attivo in ciascuna di esse.
Polveri per preparazioni Piu© di 40 mg 10 Applicare i criteri di valutazione dei saggi A, B o C
per uso parenterale (*) come specificato nella monografia per la forma farma-

itnemogrA
ilareneG
(a dose unica) ceutica considerata.
Supposte ed ovuli Qualsiasi massa 5
SAGGIO A
(*) Quando la massa media e© uguale o inferiore a 40 mg non si applica

eifargonoM
il saggio per l'uniformita© di massa, ma il saggio per l'uniformita© di Compresse, polveri per uso parenterale e sospensioni per

ilareneG
contenuto delle forme farmaceutiche a dose unica (2.9.6).
preparazioni iniettabili. La preparazione soddisfa al
saggio se ciascun contenuto individuale e© compreso tra
Per capsule e polveri per uso parenterale, procedere l'85 per cento e il 115 per cento del contenuto medio.
come di seguito indicato. La preparazione non soddisfa al saggio se piu© di un

ehcituecamraF
contenuto individuale e© fuori dei limiti suddetti, o se

emroF
CAPSULE uno solo di essi e© fuori dei limiti compresi tra il 75 per
cento e il 125 per cento del contenuto medio.
Pesare una capsula integra. Aprire la capsula senza per-
dere alcuna parte dell'involucro e prelevare il contenuto Se solo un contenuto individuale e© fuori dei limiti com-
il piu© quantitativamente possibile. Per capsule molli, presi tra l'85 per cento e il 115 per cento, ma e© compreso
entro i limiti tra il 75 per cento e il 125 per cento, deter-
eiretaM
lavare l'involucro con etere o altro adatto solvente e

emirP
lasciare a riposo finchë l'odore del solvente non e© piu© minare i contenuti individuali di altre venti unita© , prele-
percettibile. Pesare l'involucro. La massa dei contenuti vate a caso. La preparazione soddisfa al saggio se non
e© data dalla differenza fra le pesate. Ripetere il procedi- piu© di uno dei contenuti individuali, delle trenta unita© ,
ehcituecamraF

mento con altre diciannove capsule. e© fuori dei limiti compresi tra l'85 per cento e il 115 per
inoizaraperP

ehcificepS

cento del contenuto medio e nessuno e© fuori dei limiti

POLVERI PER USO PARENTERALE compresi tra il 75 per cento e il 125 per cento del conte-
nuto medio.
Togliere qualsiasi etichetta di carta da un contenitore e
ehcitapoemO
inoizaraperP

lavare ed asciugare la superficie esterna. Aprire il con- SAGGIO B

tenitore e velocemente pesarlo con il suo contenuto.
Vuotare il contenitore il piu© quantitativamente possi- Capsule, polveri non destinate all'uso parenterale, gra-
bile con leggeri colpetti, sciacquare, se necessario, con nuli, supposte e ovuli. La preparazione soddisfa al saggio
acqua R e alcool R e seccare a 100-105 ‘C per 1 h se non piu© di un contenuto individuale e© fuori dei limiti
oppure, se la natura del contenitore non consente di compresi tra l'85 per cento e il 115 per cento del conte-
ecidnI

raggiungere questa temperatura, seccare a temperatura nuto medio e nessuno e© fuori dei limiti compresi tra il
inferiore fino a massa costante. Lasciare raffreddare in 75 per cento e il 125 per cento del contenuto medio.

267
Friabilita© delle compresse non rivestite

La preparazione non soddisfa al saggio se piu© di tre minuto. Ne consegue che, ad ogni rotazione, le com-
contenuti individuali sono fuori dei limiti compresi tra presse rotolano o scivolano e cadono sulle pareti del
l'85 per cento e il 115 per cento del contenuto medio o tamburo o le une sulle altre.
se uno o piu© contenuti individuali sono fuori dei limiti
compresi tra il 75 per cento e il 125 per cento del conte-
nuto medio.
Se due o tre contenuti individuali sono fuori dei limiti
compresi tra l'85 per cento e il 115 per cento, ma sono
compresi entro i limiti tra il 75 per cento e il 125
per cento, determinare i contenuti individuali su altre
venti unita© di dosaggio, prelevate a caso. La prepara-
zione soddisfa al saggio se non piu© di tre contenuti
individuali, delle trenta unita© , sono fuori dei limiti
compresi tra l'85 per cento e il 115 per cento del
contenuto medio e nessuno e© fuori dei limiti compresi
tra il 75 per cento e il 125 per cento del contenuto
medio.
Figura 2.9.7.-1.- Apparecchio per la determinazione
SAGGIO C della friabilita©
Cerotti transdermici. La preparazione soddisfa al saggio
se il contenuto medio di dieci unita© di dosaggio e© com-
preso tra il 90 per cento e il 110 per cento del contenuto METODO
indicato in etichetta e se il contenuto individuale di cia-
scuna unita© di dosaggio e© compreso tra il 75 per cento Per compresse di massa unitaria fino a 0,65 g, operare
e il 125 per cento del contenuto medio. su un campione di venti compresse; per compresse di
massa unitaria superiore a 0,65 g operare su dieci com-
presse. Porre le compresse su un setaccio no. 1000 ed
2.9.7. FRIABILITAé DELLE COMPRESSE NON
eliminare la polvere libera con l'aiuto di aria compressa
RIVESTITE
o di un pennello morbido. Pesare accuratamente il cam-
Questo saggio si effettua per determinare, in condizioni pione di compresse e porlo nel tamburo. Far ruotare
definite, la friabilita© di compresse non rivestite, vale a per 100 volte il tamburo e rimuovere le compresse. Eli-
dire il fenomeno per il quale la superficie delle com- minare la polvere libera come indicato precedente-
presse viene danneggiata e/o presenta segni evidenti di mente. Se nessuna compressa e© incrinata, scheggiata o
abrasione o di rottura quando e© sottoposta ad urto rotta, pesare approssimando al milligrammo.
meccanico o ad attrito. Generalmente il saggio si effettua una sola volta.
Se i risultati sono dubbi o se la perdita di massa e© supe-
APPARECCHIATURA riore all'1 per cento, ripetere il saggio altre due volte e
determinare la media delle tre prove. Per la maggior
Utilizzare un tamburo rotante con un diametro parte dei prodotti, la perdita massima della massa con-
interno compreso tra 283 mm e 291 mm e di 36- siderata accettabile e© pari all'1 per cento della massa
40 mm di profondita© , costruito con un polimero sin- delle compresse in esame.
tetico trasparente, con superfici interne lisce e atto a
non produrre elettricita© statica (vedi Figura 2.9.7.-1). Per compresse di diametro maggiore o uguale a 13 mm,
Una delle facce del tamburo e© rimovibile. Le com- si possono presentare problemi di riproducibilita©
presse, ad ogni rotazione del tamburo, sono portate dovuti alla frequente irregolarita© della caduta.
verso l'alto da un deflettore curvo con un raggio In tali casi, regolare la posizione del tamburo in modo
interno compreso tra 75,5 mm e 85,5 mm che si che le compresse possano cadere liberamente e non
estende dal centro del tamburo alla parete esterna. aderiscano quando si trovano una vicina all'altra. Nor-
Il tamburo e© fissato all'asse orizzontale di un disposi- malmente e© sufficiente regolare il tamburo in modo tale
tivo che ruota approssimativamente a 25 giri al che l'asse formi un angolo di 10‘ con la base.

268
 Misura della consistenza per penetrometria

inoizircserP
ESPRESSIONE DEI RISULTATI APPARECCHIATURA

ilareneG
La friabilita© e© espressa come perdita di massa ed e© cal- L'apparecchio consiste in un penetrometro che com-
colata come percentuale della massa iniziale. prende un supporto e una parte mobile penetrante.
Indicare il numero di compresse utilizzate. Un apparecchio adatto e© mostrato in Figura 2.9.9.-1

isilanA id
idoteM
2.9.8. RESISTENZA ALLA ROTTURA DELLE

COMPRESSE

Questo saggio si effettua per determinare, in condizioni

irotinetnoC
/ ilairetaM
definite, la resistenza alla rottura delle compresse,
misurata dalla forza necessaria per provocarne la rot-
tura.

APPARECCHIATURA

ivittaeR
L'apparecchio e© costituito da due ganasce contrappo-
ste, una delle quali si muove verso l'altra. Le superfici
piane delle ganasce sono perpendicolari alla direzione
del movimento. Le superfici di rottura delle ganasce

itnemogrA
ilareneG
sono piane e piu© larghe della zona di contatto con la
compressa. Tarare l'apparecchio utilizzando un sistema
che abbia la precisione di 1 newton.

eifargonoM
PROCEDIMENTO

ilareneG
Porre la compressa tra le ganasce, tenendo conto,
quando possibile, della forma, della linea di frattura e
della scritta per incisione; per ogni determinazione

ehcituecamraF
orientare la compressa nello stesso modo rispetto alla

emroF
direzione di applicazione della forza. Effettuare la
misura su dieci compresse, avendo cura che tutti i fram-
menti delle compresse siano stati rimossi prima di ogni
determinazione. Figura. 2.9.9.-1.- Penetrometro
Questo procedimento non si applica quando si utilizza un
eiretaM

emirP
apparecchio interamente automatizzato. A. scala che indica la profondita© di penetrazione, gra-
duata in decimi di millimetro,
ESPRESSIONE DEI RISULTATI B. asta verticale per sostenere e guidare la parte
mobile penetrante,
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

I risultati si esprimono come valori medi, minimi e C. dispositivo per bloccare e rilasciare la parte mobile
massimi delle forze misurate, in newton. penetrante automaticamente e per una durata pro-
Indicare il tipo di apparecchio e, se del caso, l'orienta- grammata,
mento delle compresse.
ehcitapoemO

D. dispositivo che assicura la verticalita© della parte

inoizaraperP

mobile penetrante e l'orizzontalita© della base,

2.9.9. MISURA DELLA CONSISTENZA PER

PENETROMETRIA E. parte mobile penetrante (vedi Figure 2.9.9.-2 e 3),

Questo saggio si effettua per misurare, in determinate e F. recipiente,
convalidate condizioni, la penetrazione di un oggetto G. base orizzontale,
ecidnI

nel prodotto in esame contenuto in un recipiente di

forma e dimensioni definite. H. controllo della base orizzontale.

269
Misura della consistenza per penetrometria

Figura 2.9.9.-2.
Cono (m = 102,5 g), con recipiente (d = 102 mm o 75 mm, h 62 mm) e asta (l =162 mm; m = 47,5 g) idonei


Dimensioni in millimetri

Il supporto e© costituito da: priata per 5 min. Riempire con cura e completa-
^ un'asta verticale per sostenere e guidare la parte mente tre recipienti, senza che si formino bolle di
mobile penetrante, aria, e se necessario livellare la superficie in modo
^ una base orizzontale, da ottenere una superficie piana.
^ un dispositivo capace di assicurare la verticalita© C. Fondere tre campioni e riempire con cura e com-
della parte mobile penetrante, pletamente tre recipienti, senza che si formino
^ un dispositivo che permetta di verificare che la base bolle d'aria. Conservare i campioni, se non e© diver-
sia orizzontale, samente prescritto, a 25 0,5 ‘C per 24 h.
6

^ un dispositivo che blocchi e rilasci la parte mobile

penetrante, Determinazione della profondita© di penetrazione

^ una scala graduata in decimi di millimetro che indi- Collocare il campione in esame sulla base del penetro-
chi la profondita© della penetrazione. metro. Verificare che la sua superficie sia perpendico-
La parte mobile penetrante, costruita con un materiale lare all'asse verticale della parte mobile penetrante.
adatto, ha una superficie liscia ed e© caratterizzata dalla Portare la temperatura della parte mobile a
sua forma, dimensione e massa. 25 0,5 ‘C e poi aggiustare la sua posizione in modo
6

Adatte parti mobili penetranti sono mostrate nelle tale che la punta tocchi appena la superficie del cam-
Figure 2.9.9.-2 e 2.9.9.-3. pione. Rilasciare la parte mobile e mantenerla libera
per 5 s. Fissare nuovamente e misurare la profondita©
PROCEDIMENTO di penetrazione. Ripetere il saggio con i due recipienti
Preparare i campioni in esame in uno dei modi rimanenti.
seguenti:
A. Riempire con cura e completamente tre recipienti ESPRESSIONE DEI RISULTATI
senza che si formino bolle d'aria. Livellare, se La profondita© della penetrazione si esprime in decimi di
necessario, per ottenere una superficie piana. millimetro, come media aritmetica delle tre misure. Se
Conservare i campioni, se non e© diversamente pre- qualcuno dei risultati individuali differisce dalla media
scritto, a 25 0,5 ‘C per 24 h.
6 per piu© del 3 per cento, ripetere il saggio ed espri-
6

B. Conservare tre campioni a 25 0,5 ‘C per 24 h.

6 mere i risultati indicando la media delle sei determina-
Sottoporre i campioni ad una forza di taglio appro- zioni e la deviazione standard relativa.

270
 Contenuto di etanolo e tabelle alcoolimetriche

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
idoteM

irotinetnoC
/ ilairetaM
ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
Figura 2.9.9.-3.
Micro-cono (m = 7,0 g), con recipiente e asta idonei (l = 116 mm; m = 16,8 g)
L'apparecchio (vedi Figura 2.9.10.-1)

eifargonoM

ilareneG
2.9.10. CONTENUTO DI ETANOLO E TABELLE Apparecchiatura.

ALCOOLIMETRICHE consiste in un pallone a fondo tondo (A) collegato con

una testa di distillazione (B) provvista di una trappola
Questo metodo serve solo per esaminare preparazioni per il vapore e raccordata a sua volta con un refrige-
farmaceutiche liquide che contengono etanolo. Queste rante verticale (C) che termina all'estremita© inferiore

ehcituecamraF
preparazioni contengono anche sostanze disciolte che con un tubo (D) che porta il distillato al fondo di un

emroF
devono essere separate dall'etanolo che deve essere pallone tarato da 100 ml o da 250 ml. Il pallone tarato,
determinato per distillazione. Qualora con la distilla- durante la distillazione, e© immerso in una miscela di
zione si raccolgano sostanze volatili diverse da etanolo acqua e ghiaccio (E). Sotto il pallone (A) si pone un
e acqua, le opportune precauzioni da prendere vengono disco con un'apertura circolare del diametro di 6 cm,
fissate nella monografia. per ridurre il rischio di carbonizzazione di qualche
eiretaM

emirP
sostanza disciolta.
Il contenuto in etanolo di un liquido viene espresso Metodo

come il numero di volumi di etanolo contenuti in 100 Metodo picnometrico. Versare nel pallone di distil-
volumi di liquido, misurati a 20 0,1 ‘C. Questo
ehcituecamraF
inoizaraperP

lazione 25,0 ml della preparazione in esame, misurati a

ehcificepS

numero si definisce come ``percentuale in volume di eta- 20 0,1 ‘C; diluire con 100-150 ml di acqua distil-
nolo'' (per cento V/V). Il contenuto puo© essere espresso 6

lata R ed aggiungere alcuni pezzetti di pomice. Colle-

anche in grammi di etanolo per 100 g di liquido; questo gare la testa di distillazione e il refrigerante; distillare
e© noto come ``percentuale in massa di etanolo'' raccogliendo non meno di 90 ml di distillato in un
ehcitapoemO

(per cento m/m).

inoizaraperP

pallone tarato da 100 ml. Portare la temperatura

La relazione fra la densita© a 20 0,1 ‘C, la densita© a 20 0,1 ‘C e diluire a 100,0 ml con acqua distil-
6
6

relativa (corretta al vuoto) e il contenuto in etanolo lata R a 20 0,1 ‘C. Determinare la densita© relativa
6

di una miscela di acqua ed etanolo e© riportata a 20 0,1 ‘C con un picnometro.

6

nelle tabelle della Organizzazione Internazionale per I valori indicati in Tabella 2.9.10.-1, colonna 3, sono
moltiplicati per quattro per ottenere la percentuale di
ecidnI

la Metrologia Ufficiale (1972), Raccomandazione

Internazionale N. 22. etanolo in volume (V/V) contenuta nella preparazione.

271
Contenuto di etanolo e tabelle alcoolimetriche

Dopo aver calcolato il contenuto in etanolo usando la Tabella 2.9.10.-1. Relazione fra densita© , densita© relativa
-

tabella, arrotondare il risultato alla prima cifra deci- e contenuto in etanolo

male.  Densita© relativa del distillato Contenuto di Etanolo

Metodo densimetrico. Versare nel pallone di distilla-

20 misurata all'aria V/V per cento

d2020
-3
(kg m )

zione 50,0 ml della preparazione in esame, misurati a 968,0 0,9697 25,09

a 20 ‘C

20 0,1 ‘C, aggiungere 200 - 300 ml di acqua distillata R 968,5

6
0,9702 24,64
e distillare, come descritto prima, raccogliendo non 969,0 0,9707 24,19
meno di 180 ml in un pallone tarato. Portare la tempe- 969,5 0,9712 23,74
ratura a 20 0,1 ‘C e diluire a 250,0 ml con acqua 970,0
6
970,5
0,9717
0,9722
23,29
22,83
distillata R a 20 0,1 ‘C.
6
971,0 0,9727 22,37
971,5
Travasare il distillato in un cilindro il cui diametro e© di 972,0 0,9733 21,91
0,9738 21,45
almeno 6 mm piu© largo del bulbo dell'aerometro. Se il 972,5 0,9743 20,98
volume e© insufficiente, raddoppiare la quantita© del 973,0 0,9748 20,52
campione e diluire il distillato a 500,0 ml con acqua 974,0 973,5 0,9753 20,05
distillata R a 20 0,1 ‘C. 0,9758 19,59
6
974,5 0,9763 19,12
Moltiplicare per cinque in modo da tener conto della 975,5 975,0 0,9768 18,66
0,9773 18,19
diluizione effettuata durante la determinazione. Dopo 976,0 0,9778 17,73
aver calcolato il contenuto in etanolo usando la Tab. 976,5 0,9783 17,25
2.9.10.-1 arrotondare il risultato alla prima cifra deci- 977,0
977,5
0,9788
0,9793
16,80
16,34
male. 978,0 0,9798 15,88
978,5 0,9803 15,43
979,0 0,9808 14,97
979,5 0,9813 14,52
980,0 0,9818 14,07
980,5 0,9823 13,63
981,0 0,9828 13,18
981,5 0,9833 12,74
982,0 0,9838 12,31
982,5 0,9843 11,87
983,0 0,9848 11,44
983,5 0,9853 11,02
984,0 0,9858 10,60
984,5 0,9863 10,18
985,0 0,9868 9,76
985,5 0,9873 9,35
986,0 0,9878 8,94
986,5 0,9883 8,53
987,0 0,9888 8,13
987,5 0,9893 7,73
988,0 0,9898 7,34
988,5 0,9903 6,95
989,0 0,9908 6,56
989,5 0,9913 6,17
990,0 0,9918 5,79
990,5 0,9923 5,42
991,0 0,9928 5,04
991,5 0,9933 4,67
992,0 0,9938 4,30
992,5 0,9943 3,94
993,0 0,9948 3,58
993,5 0,9953 3,22
994,0 0,9958 2,86
994,5 0,9963 2,51
995,0 0,9968 2,16
995,5 0,9973 1,82
996,0 0,9978 1,47
996,5 0,9983 1,13
Figura 2.9.10.-1.- Apparecchio per la determinazione 997,0
997,5
0,9988
0,9993
0,80
0,46
del contenuto in etanolo 998,0 0,9998 0,13
Dimensioni in millimetri

272
 Saggio limite delle dimensioni delle particelle per microscopia

inoizircserP
Quando il grado di finezza delle polveri e© determinato

ilareneG
2.9.11. SAGGIO PER METANOLO E 2-PROPA-

NOLO per setacciatura, esso e© definito, in relazione al numero

o ai numeri del o dei setacci utilizzati, con uno dei ter-
Esaminare mediante gas cromatografia (2.2.28). mini sottoelencati o, quando tali termini non possono
Soluzione dello standard interno. Preparare una solu- essere usati, esprimendo la finezza della polvere come

isilanA id
percentuale (m/m) che passa attraverso il(i) setaccio(i)

idoteM
zione contenente 2,5 per cento V/V di propanolo R. utilizzato(i).
Soluzione in esame. Aggiungere, ad una aliquota del
distillato, 2,0 ml di standard interno; aggiustare il con- I seguenti termini sono utilizzati per la descrizione delle
tenuto di etanolo (2.9.10) a 10,0 per cento V/V per dilui- polveri:

irotinetnoC
/ ilairetaM
zione a 50 ml con acqua R o per aggiunta di etanolo R1
(90 per cento V/V). Polvere . Non meno del 95 per cento in
grossolana

massa della polvere passa attraverso il setaccio numero

Soluzione di riferimento. Preparare 50 ml di una solu- 1400 e non piu© del 40 per cento in massa della polvere
zione contenente 2,0 ml di standard interno, 10 per passa attraverso il setaccio numero 355.

ivittaeR
cento V/V di etanolo R1, 0,05 per cento V/V di 2-propa-
nolo R e metanolo anidro R in quantita© sufficiente . Non meno del 95 per cento
per dare un totale di 0,05 per cento V/V di meta- in massa della polvere passa
Polvere moderatamente fine

nolo, tenendo conto del contenuto in metanolo dell'eta- numero 355 e non piu© del 40 perattraverso
cento in
il setaccio
massa della
nolo R1.

itnemogrA
polvere passa attraverso il setaccio numero 180.

ilareneG
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
usando: . Non meno del 95 per cento in massa della
Polvere fine

polvere passa attraverso il setaccio numero 180 e non

^ una colonna di vetro lunga 2 m e con diametro piu© del 40 per cento in massa della polvere passa attra-

eifargonoM
interno di 2 mm, impaccata con etilvinilbenzene- verso il setaccio numero 125.

ilareneG
divinilbenzene copolimero R (da 125 mm a 150 mm),
^ azoto per cromatografia R come gas di trasporto ad della polvere passa. Non
Polvere molto fine meno del 95 per cento in massa
attraverso il setaccio numero 125 e
una velocita© di flusso di 30 ml per minuto,

ehcituecamraF
non piu© del 40 per cento in massa della polvere passa
attraverso il setaccio numero 90.

emroF
^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma.
Mantenere la temperatura della colonna a 130 ‘C, Se viene indicato il numero di un solo setaccio, salvo
quella della camera di iniezione a 200 ‘C e quella del indicazione contraria, non meno del 97 per cento della
rivelatore a 220 ‘C. polvere passa attraverso il setaccio di quel numero.

eiretaM

emirP
Iniettare separatamente 1 ml di ciascuna soluzione. Montare i setacci e operare in maniera adatta fino a
Il contenuto di metanolo e di 2-propanolo e© calcolato setacciatura praticamente completa. Pesare le frazioni
con riferimento al campione originale. separate della polvere.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

(Usando questo metodo puo© essere determinato meno

dello 0,025 per cento V/V di metanolo e di 2-propa- 2.9.13. SAGGIO LIMITE DELLE DIMENSIONI
nolo). DELLE PARTICELLE PER MICROSCOPIA
ehcitapoemO
inoizaraperP

2.9.12. CLASSIFICAZIONE GRANULOMETRICA Pesare una quantita© adeguata della polvere in esame
DELLE POLVERI MEDIANTE SETACCIA- (per esempio 10-100 mg) e sospenderla in 10,0 ml di un
TURA liquido adatto in cui la polvere non si sciolga, aggiun-
gendo, se necessario, un agente bagnante. Introdurre
Il grado di finezza di una polvere puo© essere espresso una porzione della sospensione omogenea in un'adatta
facendo riferimento a setacci conformi alle specifiche camera di conteggio ed esaminare al microscopio un'a-
ecidnI

dei setacci per operazioni non analitiche (2.1.4). rea corrispondente ad almeno 10 mg della polvere in

273
Area superficiale specifica per permeabilita© all'aria

esame. Contare tutte le particelle aventi una dimen-

sione massima maggiore di quella prescritta. Il limite
di dimensione e il numero permesso di particelle che
superano tale limite sono indicati nella monografia.

2.9.14. AREA SUPERFICIALE SPECIFICA PER

PERMEABILITAé ALL'ARIA

Il saggio si effettua per la determinazione dell'area

superficiale specifica di polveri secche, espressa in metri
quadrati per grammo, quando il campo di granulome-
tria e© inferiore alla piu© piccola apertura delle maglie di
un setaccio. L'effetto prodotto dal flusso molecolare,
che puo© essere importante quando si analizzano polveri
di granulometria inferiore a pochi micron, non e© preso
in considerazione nell'equazione usata per calcolare
l'area superficiale specifica.

APPARECCHIATURA
L'apparecchio e© costituito dalle parti seguenti:
(a) una cella di permeabilita© (vedi Figura 2.9.14.-1)
composta da un cilindro del diametro interno di
12,6 0,1 mm (A) di vetro o di metallo inalterabile.
6

La base della cella forma una connessione a tenuta Figura 2.9.14.-1.

d'aria (per esempio, attraverso un adattatore) con Cella di permeabilita©
il manometro (Figura 2.9.14.-2). Una espansione Dimensioni in millimetri
della larghezza di 0,5-1 mm e© situata a 50 15 mm
6

dalla sommita© della cella. Costituisce parte inte- (b) Un manometro ad U (E) (Fig. 2.9.14.-2) fatto con
grante della cella oppure e© fissata saldamente, cos|© tubo di vetro con pareti standard del diametro
da essere a tenuta d'aria. Sostiene un disco perfo- nominale esterno di 9 mm e interno di 7 mm.
rato (B), di metallo inalterabile, dello spessore di La parte superiore di un braccio del manometro
0,9 0,1 mm, perforato con 30-40 fori del diame-
6
forma una connessione stagna con la cella di per-
tro di 1 mm uniformemente distribuiti sulla sua meabilita© (F). Il braccio del manometro connesso
superficie.
con la cella di permeabilita© ha una linea incisa
Il pistone (C) e© fatto di metallo inalterabile ed entra intorno al tubo a 125-145 mm sotto l'estremita©
nella cella con una distanza dalla parete di non piu© superiore del lato di uscita e tre altre linee a
di 0,1 mm. La base del pistone ha bordi affilati qua- distanza di 15 mm, 70 mm e 110 mm sopra quella
drati, ad angolo retto rispetto all'asse principale. linea (G). L'uscita laterale, a 250-305 mm sopra la
Su un lato del pistone c'e© una fessura per l'aria base del manometro, e© usata per vuotare il braccio
lunga 3 mm e profonda 0,3 mm. La parte superiore del manometro connesso con la cella di permeabi-
del pistone ha un collare tale che, quando il pistone lita© . Sull'uscita laterale, a non piu© di 50 mm dal
e© collocato nella cella e il collare e© portato a con- braccio del manometro, c'e© un rubinetto.
tatto con la sommita© della cella stessa, la distanza
fra la base del pistone e la parte superiore del disco Il manometro e© montato saldamente, in modo tale
perforato (B) sia di 15 1 mm.
che i bracci siano verticali. Eé riempito fino al segno
6

I dischi di carta da filtro (D) hanno bordi lisci e lo piu© basso con dibutile ftalato R contenente un
stesso diametro dell'interno della cella. colorante lipofilo.

274
 Area superficiale specifica per permeabilita© all'aria

inoizircserP
non fosse possibile, diminuire la quantita© di polvere

ilareneG
usata. Se, al contrario, non ci fosse sufficiente resi-
stenza, aumentare la quantita© di polvere. In questo caso
calcolare nuovamente la porosita© . Dopo almeno 10 s,
rimuovere il pistone.

isilanA id
idoteM
Collegare la cella di permeabilita© al tubo del manome-
tro con un giunto a tenuta d'aria. Eliminare l'aria dal
manometro con una peretta di gomma finchë il livello
del liquido colorato e© al segno superiore. Chiudere il
rubinetto e controllare la tenuta dell'apparecchio chiu-

irotinetnoC
/ ilairetaM
dendo l'estremita© superiore della cella, per esempio
con un tappo di gomma. Togliere il tappo e, con un cro-
nometro, misurare il tempo necessario perchë il liquido
scenda dal secondo al terzo segno.
In base al tempo di flusso misurato, calcolare l'area

ivittaeR
superficiale specifica (S), espressa in metri quadrati
per grammo, dall'equazione seguente:
 
K "3 2 t
p p

itnemogrA
S 2

ilareneG
2
ˆ
2 1 ÿ "† 2 p †

t = tempo di flusso in secondi,

 = viscosita© dinamica dell'aria in millipascal secondi

eifargonoM

ilareneG
(vedi Tabella 2.9.14.-1).
Figura 2.9.14. - 2. Manometro K = costante dell'apparecchio, determinata con l'Eq. (4),
Dimensioni in millimetri
METODO  = densita© della sostanza in esame in grammi per

ehcituecamraF
millilitro,
Se prescritto, essiccare la polvere in esame e farla pas-

emroF
sare attraverso un setaccio adatto (per esempio, n. 125) " = porosita© del letto compattato di polvere.
per disperdere gli agglomerati. Calcolare la massa (M)
della polvere da usare mediante l'espressione:
M V  1 "
ˆ 2 2 ÿ † (1) TARATURA DELL'APPARECCHIO

eiretaM
V = volume totale del letto compattato di polvere,

emirP
 = densita© della sostanza in esame in grammi per Il volume complessivo del letto di polvere compattata

millilitro, viene determinato col metodo di spostamento del mer-

" = porosita© del letto compattato di polvere. curio come segue:
ehcituecamraF
inoizaraperP

Assumere dapprima una porosita© di 0,5 e introdurre mettere due dischi di carta da filtro nella cella di per-
ehcificepS

questo valore nell'Eq. (1) per calcolare la massa (M) meabilita© premendone i bordi con una bacchetta di dia-
della polvere in esame. metro leggermente piu© piccolo di quello della cella fin-
Porre un disco di carta da filtro sopra il disco metallico chë i dischi giacciono piatti sul disco metallico perfo-
perforato (B). Pesare la massa calcolata (M) della pol- rato; riempire la cella con mercurio, allontanando ogni
ehcitapoemO
inoizaraperP

vere in esame con l'approssimazione a 1 mg. Trasferire bolla d'aria che aderisse alle pareti della cella ed elimi-
con cura la polvere nella cella di permeabilita© pulita e nare l'eccesso fino ad ottenere una superficie piana di
tarata, battendo leggermente la cella stessa cos|© che la mercurio alla sommita© della cella. Se la cella e© fatta di
superficie del letto di polvere si livelli e coprirla con un materiale che puo© dare amalgama, rivestire prima la
secondo disco di carta da filtro. Compattare lenta- cella e il disco perforato di metallo con un sottile strato
mente la polvere per mezzo del pistone, evitando movi- di paraffina liquida. Versare il mercurio in un bicchiere
ecidnI

menti di rotazione. Mantenere la pressione finchë il tarato e determinare la massa (MA) e la temperatura
pistone e© completamente entrato nella cella. Se questo del mercurio.

275
Volume apparente

Con la polvere di riferimento fare un letto compattato e La densita© del mercurio e la viscosita© dell'aria ad alcune
di nuovo riempire la cella con mercurio con una super- temperature sono mostrate in Tabella 2.9.14.-1.
ficie piana nella parte superiore. Versare il mercurio in
un bicchiere tarato e di nuovo determinare la massa
(M B ) del mercurio. Calcolare il volume complessivo
(V) del letto di polvere compattata dall'espressione Tabella 2.9.14.-1.
seguente:
Viscosita©
Densita© del 
 
Temperatura p

MA MB
dell'aria ( )

V 3
(‘C) mercurio (g/ml)
ÿ (mPa1s)

Hg
ˆ †

16 13.56 0.01800 0.1342

M A - M B = differenza fra le masse di mercurio deter- 17 13.56 0.01805 0.1344
minate, in grammi, 18 13.55 0.01810 0.1345
19 13.55 0.01815 0.1347
Hg = densita© del mercurio ad una data tempe- 20 13.55 0.01819 0.1349
ratura, in grammi per millilitro.
21 13.54 0.01824 0.1351
Ripetere la procedura due volte, cambiando ogni volta 22 13.54 0.01829 0.1353
la polvere; il campo dei valori per il volume calcolato
(V) non deve essere maggiore a 0,01 ml. Per i calcoli, 23 13.54 0.01834 0.1354
usare il valore medio di tre determinazioni. 24 13.54 0.01839 0.1356
L costante K dell'apparecchio viene determinata usando
una polvere di riferimento, con area specifica e densita©
note, operando come segue: 2.9.15. VOLUME APPARENTE

calcolare la quantita© necessaria della polvere di riferi- Il saggio del volume apparente si effettua per determi-
mento da usare (Eq. 1) utilizzando la densita© dichiarata nare, in condizioni definite, i volumi apparenti prima e
e il volume determinato del letto di polvere compattata
(Eq. 3). dopo impaccamento, la capacita© di impaccarsi e le den-
sita© apparenti di solidi suddivisi (per esempio polveri,
Omogeneizzare e disperdere la polvere agitandola per granuli).
2 min in una bottiglia da 100 ml. Preparare un letto di
polvere compattata e misurare il tempo di flusso del-
l'aria, come descritto in precedenza. Calcolare la
costante dell'apparecchio (K) dall'espressione seguente:

K Ssp 1 
 " p

2 2

ÿ † 2
 4
t
p
"3
ˆ p †
2

Ssp = area superficiale specifica indicata della polvere

di riferimento,
 = densita© della sostanza in esame in grammi per
millilitro,
" = porosita© del letto di polvere compattato,
t = tempo di flusso in secondi,
 = viscosita© dinamica dell'aria in millipascal
secondi (vedi Tabella 2.9.14.-1). Figura 2.9.15.-1.

276
 Scorrimento

inoizircserP
APPARECCHIATURA

ilareneG
L'apparecchiatura (vedi Figura 2.9.15.-1) e© costituita da:
^ un apparecchio di impaccamento capace di gene-
rare in 1 min 250 15 colpi, mediante caduta da
6

un'altezza di 3 0,2 mm. Il supporto per il cilin-

isilanA id
6

dro graduato, compreso il dispositivo di bloccag-

idoteM
gio, ha una massa di 450 5 g;
6

^ un cilindro graduato da 250 ml (con divisioni ogni

2 ml) la cui massa e© di 220 40 g.
6

irotinetnoC
/ ilairetaM
METODO
Introdurre nel cilindro asciutto, senza impaccare,
100,0 g (m g) della sostanza in esame. Se questo non e©
possibile, scegliere una quantita© di campione in esame
che abbia un volume apparente compreso tra 50 e
250 ml e specificare la massa nell'espressione dei risul-

ivittaeR
tati. Fissare il cilindro sul suo supporto. Leggere il
volume apparente V0 non impaccato, approssimando
al piu© vicino millilitro. Mettere in azione l'apparecchio
generando 10, 500 e 1250 colpi e leggere i volumi corri-
spondenti V10, V500 e V1250 approssimando al piu© vicino

itnemogrA
ilareneG
millilitro. Se la differenza tra V500 e V1250 e© superiore a
2 ml, effettuare altri 1250 colpi. Figura 2.9.16.-1.- Imbuto di scorrimento e ugello
L'ugello e© fatto di acciaio inossidabile,
ESPRESSIONE DEI RISULTATI acidoresistente (V4A, CrNi)
a) Volumi apparenti: Dimensioni in millimetri

eifargonoM

ilareneG
^ volume apparente prima dell'impaccamento o
volume del campione come tale: V0 ml,
^ volume apparente dopo impaccamento o volume Diametro (d) dell'apertura di uscita

impaccato: V1250 ml o V2500 ml. Ugello

(millimetri)

b) Capacita© di impaccamento: differenza V10 ml ^ V500

ehcituecamraF
ml. 1 10 0,01

emroF
c) Densita© apparenti:
6

2 15 0,01
6

le densita© apparenti vengono espresse come segue: 3 25 0,01

6

^ densita© apparente prima dell'impaccamento o den-

sita© del campione come tale: m/V0 (espresso in

eiretaM
grammi per millilitro) (densita© al versamento).

emirP
^ densita© apparente dopo impaccamento o densita©
del prodotto impaccato: m/V1250 o m/V2500
(espresso in grammi per millilitro) (densita© com-
pattata).
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

2.9.16. SCORRIMENTO

Il saggio di scorrimento si effettua per determinare la

capacita© dei solidi suddivisi (per esempio polveri e gra-
ehcitapoemO
inoizaraperP

nuli) a scorrere verticalmente in condizioni definite.

Apparecchiatura. Secondo le caratteristiche di scorri-
mento del materiale da saggiare, usare imbuti con o
senza gambo, con differenti angoli e orifizi di diversi
diametri. Apparecchi tipici sono riportati nelle Figure
2.9.16.-1 e 2.9.16.-2. L'imbuto viene mantenuto verticale
ecidnI

con un opportuno dispositivo. L'insieme deve essere Figura 2.9.16.-2.

protetto da vibrazioni. Dimensioni in millimetri

277
Saggio per il volume estraibile delle preparazioni parenterali

METODO in rapporto al volume dichiarato, una quantita© di pre-

parazione che potrebbe rappresentare un rischio qua-
Introdurre in un imbuto asciutto, la cui apertura alla lora venisse somministrato l'intero contenuto.
base e© stata ostruita opportunamente, senza compat-
tare, un campione in esame pesato con l'accuratezza Le sospensioni e le emulsioni devono essere agitate
dello 0,5 per cento. La quantita© del campione dipende prima del prelevamento del contenuto e prima della
dal volume apparente e dall'apparecchio usato. Sbloc- determinazione della densita© . Le preparazioni oleose o
care l'apertura inferiore dell'imbuto e misurare il tempo viscose possono essere riscaldate, se necessario,
necessario perchë l'intero campione defluisca dall'im- secondo le istruzioni riportate sull'etichetta e agitate
buto. Effettuare tre determinazioni. energicamente immediatamente prima del preleva-
mento del contenuto. Questo viene poi raffreddato a
25 ‘C prima di misurare il volume.
ESPRESSIONE DEI RISULTATI
La capacita© di scorrimento viene espressa in secondi e CONTENITORI MONODOSE
decimi di secondo, riferita a 100 g di campione.
I risultati dipendono dalle condizioni di conservazione Scegliere un contenitore se il volume nominale e© di
del materiale in esame. 10 ml o piu© , tre contenitori se il volume nominale e© piu©
I risultati possono essere espressi: di 3 ml e meno di 10 ml o cinque contenitori se il
volume nominale e© di 3 ml o meno. Prelevare singolar-
a) come la media delle determinazioni, se nessuno dei mente il contenuto totale di ciascun contenitore scelto
singoli valori si scosta dalla media di piu© del 10 per con una siringa ipodermica asciutta di capacita© non
cento; superiore a tre volte il volume da misurare e munita di
un ago di calibro 21 e di lunghezza non inferiore a
b) come un intervallo di valori, se i singoli valori si sco- 2,5 cm. Espellere tutte le bolle d'aria dalla siringa e
stano dalla media di piu© del 10 per cento; dall'ago, poi travasare il contenuto della siringa, senza
vuotare l'ago, in un cilindro normalizzato asciutto (gra-
c) come un grafico della massa in funzione del tempo duato per contenere piuttosto che per rilasciare i
di flusso; volumi indicati) di dimensione tale che il volume da
misurare occupi almeno il 40 per cento del suo volume
d) come un tempo infinito, se l'intero campione non graduato. Il volume del contenuto in millilitri puo©
defluisce dall'apparecchio. anche essere calcolato come la massa in grammi divisa
per la densita© .
I contenuti di 2 o 3 contenitori con un volume nominale
2.9.17. SAGGIO PER IL VOLUME ESTRAIBILE

di 2 ml o meno possono essere riuniti per la misura pur-

DELLE PREPARAZIONI PARENTERALI

Le soluzioni iniettabili possono essere fornite in conte- chë per ciascun contenitore venga usata una singola
nitori monodose (come fiale, siringhe preriempite o car- siringa con ago. I contenuti di contenitori da 10 ml o
tucce) riempiti con un volume di soluzione iniettabile piu© si possono determinare aprendo i contenitori e vuo-
sufficiente a consentire la somministrazione del volume tando i contenuti direttamente nel cilindro graduato o
nominale dichiarato in etichetta. nel becher tarato.
La conformita© con le specifiche per il volume estraibile Il volume non e© inferiore al volume nominale nel caso
e© assicurata dal riempimento con un volume in lieve di contenitori esaminati singolarmente o, nel caso di
eccesso rispetto al volume che deve essere prelevato. contenitori con un volume nominale di 2 ml o meno,
L'eccesso di volume e© stabilito in base alle caratteristi- non e© inferiore alla somma dei volumi nominali dei
che del prodotto. Il recipiente monodose non contiene, contenitori considerati insieme.

278
 Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

inoizircserP
CONTENITORI MULTIDOSE APPARECCHIATURA A (Separatore ad urto in

ilareneG
vetro)
Per preparazioni iniettabili in contenitori multidose per
i quali l'etichetta stabilisca un dato numero di dosi di L'apparecchio e© rappresentato nella Figura 2.9.18.-1
un volume fissato, scegliere un contenitore e procedere (vedi anche la Tabella 2.9.18.-1).

isilanA id
idoteM
come indicato per contenitori monodose utilizzando
un numero di singole siringhe con ago corrispondente
al numero di dosi indicato.
Il volume e© tale che ciascuna siringa rilascia non meno

irotinetnoC
/ ilairetaM
della dose fissata.

CARTUCCE E SIRINGHE PRERIEMPITE

ivittaeR
Scegliere un contenitore se il volume nominale e© 10 ml
o piu© , tre contenitori se il volume nominale e© piu© di
3 ml e meno di 10 ml oppure cinque contenitori se il Figura 2.9.18.-1.- Apparecchiatura A per la valutazione
volume nominale e© di 3 ml o meno. Se necessario, aerodinamica delle particelle fini

itnemogrA
ilareneG
dotare i contenitori degli accessori necessari per il loro Dimensioni in millimetri
uso (ago, pistone, siringa) e trasferire l'intero contenuto (tolleranza 1 mm se non diversamente prescritto)
di ciascun contenitore, senza vuotare l'ago, in un becher
6

tarato asciutto premendo lentamente e regolarmente il Procedimento per nebulizzatori

pistone. Determinare il volume in millilitri, calcolato

eifargonoM
Introdurre nelle camere di separazione superiore ed infe-

ilareneG
dalla massa in grammi divisa per la densita© . riore, rispettivamente 7 ml e 30 ml di un solvente adatto.
Il volume misurato per ciascuno dei contenitori non e© Collegare tutte le parti componenti, verificare che
il sistema sia verticale e ben fissato e che la punta
inferiore al volume nominale. distanziatrice dell'ugello di uscita tocchi appena

ehcituecamraF
il fondo della camera inferiore di separazione. Colle-
gare una pompa adatta munita di filtro (di porosita©

emroF
INFUSIONI PARENTERALI adeguata) all'uscita dell'apparecchio e regolare a
60 5 litri al minuto il flusso dell'aria attraverso
6

l'apparecchio, misurandolo all'entrata della gola.

Scegliere un contenitore. Trasferire il contenuto in un Introdurre la preparazione liquida per inalazione nel
cilindro graduato asciutto di capacita© tale che il volume
eiretaM
serbatoio del nebulizzatore. Montare il boccaglio, col-

emirP
da misurare occupi almeno il 40 per cento del volume legandolo all'apparecchio per mezzo di un opportuno
nominale del cilindro. Misurare il volume trasferito. adattatore.
Il volume misurato non e© inferiore al volume nominale. Avviare la pompa e dopo 10 s il nebulizzatore.
Dopo 60 s, se non diversamente giustificato, disattivare il
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

nebulizzatore, attendere per circa 5 s, poi arrestare la

pompa. Smontare l'apparecchio, lavare la superficie
2.9.18. PREPARAZIONI PER INALAZIONE: VALU-
interna della camera di separazione superiore e riunire i
TAZIONE AERODINAMICA DELLE PARTI-
liquidi di lavaggio in un pallone tarato. Lavare la superfi-
cie interna della camera di separazione inferiore e riunire
ehcitapoemO

CELLE FINI
inoizaraperP

i liquidi di lavaggio in un secondo pallone tarato. Da

Questo saggio viene utilizzato per determinare le carat- ultimo, lavare il filtro che precede la pompa e i tubi di col-
teristiche delle particelle fini negli aerosol generati da legamento alla camera di separazione inferiore e unire i
preparazioni per inalazione. liquidi di lavaggio con quelli raccolti dalla camera di
separazione inferiore. Determinare la quantita© di princi-
Se non e© diversamente giustificato e autorizzato, utiliz- pio attivo in ciascuno dei due palloni. Esprimere i risultati
zare uno dei seguenti apparecchi e procedimenti di con-
ecidnI

per ciascuna delle due parti dell'apparecchio come per-

trollo. centuale della quantita© totale di principio attivo.

279
Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

Tabella 2.9.18.-1- Spedifiche dei componenti per la Figura 2.9.18.-1.

Codice Elemento Descrizione Dimensioni*

A Adattatore del boccaglio Raccordo in gomma, sagomato per il boccaglio dell'erogatore

B Gola Pallone in vetro a fondo tondo opportunamente modificato 50 ml

Entrata: giunto conico smerigliato femmina 29/32
Uscita: giunto conico smerigliato maschio 24/29

C Collo Adattatore modificato in vetro

Entrata: giunto conico smerigliato femmina 24/29
Uscita: giunto conico smerigliato maschio 24/29
Sezione inferiore di uscita del tubo in vetro calibrato
Diametro interno 14
Tubo in vetro a parete sottile e diametro definito
Diametro esterno 17

D Camera di separazione Pallone in vetro a fondo tondo opportunamente modificato 100ml

superiore Entrata: giunto conico smerigliato femmina 24/29
Uscita: giunto conico smerigliato maschio 24/29

E Tubo di collegamento Tubo in vetro di medio spessore

Giunto conico smerigliato maschio 14/23
Parte ricurva e parte verticale superiore
Diametro esterno 13
Parte verticale inferiore
Diametro esterno 8

F Collegamento laterale Tappo a vite in plastica 28/13

filettato Anello in gomma al silicone 28/11
Rondella in PTFE 28/11
Parte filettata in vetro
Dimensioni della filettatura 28
Uscita laterale alla pompa a vuoto
Diametro minimo interno 5

G Ugello di uscita Portafiltro modificato in polipropilene collegato alla sezione verticale inferiore del Vedi Figura
tubo di collegamento per mezzo di un tubo in PTFE 2.9.18.-1
Disco circolare in acetale con i centri dei quattro fori di uscita disposti su un cerchio 10
di diametro di 5,3 mm con uno spaziatore a punta
Diametro della punta 2
Sporgenza della punta 2

H Camera di separazione Beuta 250 ml

inferiore Giunto conico smerigliato femmina 24/29

* Dimensioni in millimetri, se non diversamente indicato.

280
 Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

inoizircserP
collegare una pompa adatta all'uscita dell'apparecchio

ilareneG
Procedimento per inalatori pressurizzati

e regolare il flusso dell'aria a 60 5 litri al minuto,

Applicare l'adattatore dell'erogatore all'estremita© della
6

misurandolo all'entrata della gola.

gola, in modo che il boccaglio dell'erogatore, quando Preparare l'inalatore per l'uso e collegare il boccaglio
inserito alla profondita© di circa 10 mm, sia allineato all'apparecchio per mezzo di un opportuno adattatore.
con l'asse orizzontale della gola e l'estremita© aperta del- Avviare la pompa per 5 s. Arrestare la pompa e rimuo-

isilanA id
idoteM
l'erogatore, che accoglie la bomboletta, sia orientata vere l'inalatore. Ripetere per altre nove erogazioni.
verso l'alto e sullo stesso piano verticale di tutto l'appa- Smontare l'apparecchio.
recchio. Lavare la superficie interna del tubo di collegamento
Introdurre nelle camere di separazione superiore e infe- con la camera di separazione inferiore e la sua superfi-

irotinetnoC
riore, rispettivamente, 7 ml e 30 ml di un solvente cie esterna, che si trova nella camera con un solvente

/ ilairetaM
adatto. adatto raccogliendo i liquidi di lavaggio nella stessa
Collegare tutte le parti dell'apparecchio e verificare che camera di separazione inferiore. Determinare il conte-
l'insieme sia verticale e ben fissato e che la punta nuto di principio attivo in questa soluzione. Calcolare
distanziatrice dell'ugello inferiore tocchi appena il la quantita© di principio attivo raccolta nella camera di
fondo della camera di separazione inferiore. Collegare separazione inferiore per ogni erogazione ed esprimere

ivittaeR
una pompa adatta all'uscita dell'apparecchio e regolare i risultati come percentuale della dose indicata in eti-
il flusso dell'aria a 60 5 litri al minuto, misurandolo
6
chetta.
all'entrata della gola. APPARECCHIATURA B (Separatore ad urto in
Attivare la valvola dosatrice, agitando l'inalatore per metallo)

itnemogrA
ilareneG
5 s ed erogando una volta a perdere; dopo non meno L'apparecchio e© riportato nelle Figure 2.9.18.-2/3.
di 5 s, agitare ed erogare di nuovo a perdere. Ripetere
questa operazione altre tre volte.
Agitare per circa 5 s, avviare la pompa, applicare il
boccaglio dell'erogatore all'adattatore e immediata-

eifargonoM

ilareneG
mente scaricare una volta. Rimuovere l'inalatore
assemblato dall'adattatore, agitare per non meno di
5 s, posizionare nuovamente il boccaglio dell'erogatore
nell'adattatore e scaricare di nuovo. Ripetere per altre

ehcituecamraF
otto volte, agitando ogni volta. Dopo la decima eroga-
zione, attendere per non meno di 5 s e poi arrestare la

emroF
pompa. Smontare l'apparecchio.
Lavare con un opportuno solvente la superficie interna
del tubo di collegamento con la camera di separazione
inferiore e la sua superficie esterna che si trova nella

eiretaM
camera, raccogliendo i liquidi di lavaggio nella stessa

emirP
camera. Determinare il contenuto di principio attivo in
questa soluzione. Calcolare la quantita© di principio
attivo raccolta nella camera di separazione inferiore
ehcituecamraF

per ogni erogazione, esprimendo i risultati come per- AB -- Bomboletta pressurizzata per inalazione
inoizaraperP

ehcificepS

centuale della dose indicata in etichetta. Erogatore

C - Adattatore
D - Gola
E - Ugello
F - Camera di separazione
G - Disco di vetro sinterizzato (BS porosita© n. 1)
ehcitapoemO
inoizaraperP

Procedimento per inalatori di polvere

H - Morsetto del filtro in acciaio inossidabile

Introdurre nella camera di separazione superiore ed J - Sistema filtrante in vetro
inferiore, rispettivamente, 7 ml e 30 ml di un solvente K - Pompa da vuoto
L - Coperchio in alluminio della camera di separazione
adatto. M - Guarnizione in gomma ad anello
Collegare tutte le parti dell'apparecchio e verificare che
il sistema sia verticale e ben fissato e che lo spaziatore Figura 2.9.18.-2.- Apparecchio B per la valutazione
ecidnI

dell'ugello di uscita tocchi appena il fondo della camera aerodinamica delle particelle fini.
di separazione inferiore. Prima di applicare l'inalatore, Dimensioni in millimetri

281
Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

Procedimento per inalatori pressurizzati

Applicare l'adattatore dell'erogatore all'estremita© della

gola, in modo tale che il boccaglio, quando inserito, si
allinei lungo l'asse orizzontale della gola e che la parte
finale aperta dell'erogatore, che accoglie il contenitore
pressurizzato, sia diretta verso l'alto e sullo stesso piano
verticale del resto dell'apparecchio.
In questo procedimento la camera di separazione e© uti-
lizzata a secco. Collegare tutte le parti dell'apparecchio
e verificare che la base del separatore sia posta su una
Figura 2.9.18.-3. superficie piana, orizzontale e sufficientemente stabile,
Apparecchio B per la valutazione aerodinamica in modo tale che la parte aperta dell'erogatore, che
delle particelle fini (visto dall'alto) accoglie il contenitore pressurizzato, sia posta in posi-
Dimensioni in millimetri zione verticale. Collegare una pompa adatta all'uscita
dell'apparecchio e regolare il flusso dell'aria a
Procedimento per nebulizzatori 60 5 litri al minuto, misurandolo all'entrata della
6

gola.
La deposizione delle gocce emesse e© determinata
utilizzando l'apparecchio separatore ad urto, colle- Attivare la valvola dosatrice, agitando l'inalatore per
gato al nebulizzatore carico, mediante l'adattatore. 5 s e scaricando una volta a perdere; dopo non meno
L'uscita dell'apparecchio, collegata alla pompa, e© di 5 s, agitare e scaricare nuovamente a perdere. Ripe-
munita di un filtro adatto (per esempio 0,25 mm di tere questa operazione per altre tre volte.
porosita© ).
Agitare per 5 s circa, avviare la pompa, mettere in posi-
In questo procedimento, la camera di separazione zione il boccaglio dell'erogatore nell'adattatore e imme-
e© utilizzata a secco. Unire tutte le parti componenti e diatamente scaricare una volta. Rimuovere dall'adatta-
verificare che la base del separatore sia posta su una tore l'inalatore, agitare per non meno di 5 s, porre nuo-
superficie piana, orizzontale e sufficientemente stabile.vamente il boccaglio nell'adattatore e scaricare di
Collegare una pompa adatta all'uscita dell'apparecchio nuovo.
e regolare il flusso dell'aria a 60 5 litri al minuto,
Ripetere la sequenza di scarica per altre otto volte, agi-
6

misurandolo all'entrata della gola.

tando ogni volta. Dopo la decima erogazione, attendere
Introdurre la preparazione liquida per inalazione nel per circa 5 s, poi arrestare la pompa. Smontare l'appa-
serbatoio di un adatto nebulizzatore. Montare il bocca- recchio.
glio, collegandolo all'apparecchio mediante l'adatta-
tore. Lavare il filtro, facendo passare un solvente adatto.
Determinare il contenuto di principio attivo in questa
Avviare la pompa e dopo 10 s il nebulizzatore. soluzione. Calcolare la quantita© di principio attivo rac-
Dopo 60 s, se non diversamente giustificato, disattivare colta sul filtro per ciascuna erogazione ed esprimere i
il nebulizzatore, attendere per circa 5 s e arrestare la risultati come percentuale della dose indicata in
pompa. Smontare l'apparecchio. Lavare la superficie etichetta.
interna della gola, la parte superiore ed inferiore della
camera, raccogliendo i liquidi di lavaggio in un pallone
tarato. Lavare il filtro con un solvente adatto e racco-
gliere i liquidi di lavaggio in un pallone tarato. Deter-Procedimento per inalatori di polvere

minare il contenuto di principio attivo in queste solu-

zioni. Esprimere i risultati per ciascuna delle due parti Introdurre nella camera di separazione 25 ml di un sol-
dell'apparecchio come percentuale della quantita© totale vente adatto, in modo tale da coprire il disco di vetro
di principio attivo. sinterizzato.

282
 Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

inoizircserP
Connettere tutte le parti dell'apparecchio e verificare trica fissata con una guarnizione ad anello in gomma

ilareneG
che la base del separatore ad urto sia posta su una (P) che la chiude ermeticamente contro il bordo di un
superficie piana, orizzontale e sufficientemente stabile. filtro posto nel portafiltro. Il portafiltro (R) e© costruito
Prima di applicare l'inalatore, collegare una pompa come una bacinella con una rientranza concentrica
adatta all'uscita dell'apparecchio e regolare il flusso nella quale e© inserito un supporto perforato per filtro

isilanA id
dell'aria a 60 5 litri al minuto, misurandolo all'en- (S). Il portafiltro ha dimensioni adatte per filtri di dia-

idoteM
6

trata della gola. metro di 76 mm. L'insieme degli stadi di separazione e©

Preparare l'inalatore per l'uso e collegare il boccaglio fissato al portafiltro con due chiusure a gancio (T). Col-
all'apparecchio mediante un adattatore. Avviare la legare un'apertura d'immissione costituita da un tubo
pompa per 5 s. Fermare la pompa e rimuovere l'inala- di metallo piegato ad angolo retto secondo la Figura

irotinetnoC
/ ilairetaM
tore. Ripetere per altre nove erogazioni. Smontare 2.9.18.-7 al tubo dell'ugello di entrata dello stadio 1 del
l'apparecchio. separatore. Un anello di gomma nell'ugello fornisce
una connessione a tenuta d'aria con l'apertura di
Lavare il filtro, facendo passare un solvente adatto. immissione. Dovrebbe essere usato un opportuno adat-
Determinare il contenuto di principio attivo in questa tatore del boccaglio per permettere una chiusura a
soluzione. Calcolare la quantita© di principio attivo rac- tenuta d'aria tra l'inalatore e l'apertura di immissione.

ivittaeR
colta sul filtro per ogni erogazione ed esprimere i risul- La parte frontale del boccaglio dell'inalatore deve
tati come percentuale della dose indicata in etichetta. essere a livello con il lato frontale dell'apertura di
immissione.

itnemogrA
ilareneG
QUANTITAé DI PARTICELLE FINI E DISTRIBUZIONE

DELLA DIMENSIONE PARTICELLARE

APPARECCHIATURA C (Separatore ad urto multi-

stadio liquido)

eifargonoM

ilareneG
L'apparecchio e© costituito dagli stadi di separazione 1
(pre-separatore), 2, 3, 4 e da un ulteriore stadio costi-
tuito di un filtro integrale (stadio 5), vedi Figure
2.9.18.-4/6. Uno stadio di separazione ad urto com-

ehcituecamraF
prende una piastra divisoria orizzontale superiore di
metallo (B), attraverso la quale sporge un ugello metal-

emroF
lico di entrata (A) con la sua piastra di separazione
(D), un cilindro di vetro (E), munito di un'apertura per
il campionamento (F), che forma la parete verticale
dello stadio, e una piastra divisoria orizzontale infe-

eiretaM
riore in metallo (G) attraverso la quale passa un ugello

emirP
(H) di collegamento con lo stadio inferiore. Il tubo
nello stadio 4 (U) finisce con un dispositivo multi-
ugello. La piastra di separazione (D) e© tenuta ferma da
ehcituecamraF

una struttura metallica (J), legata con due fili metallici

inoizaraperP

ehcificepS

(K) ad un manicotto (L) fissato all'ugello (C). Il piano

orizzontale delle piastre di raccolta e© perpendicolare
all'asse dell'ugello ed allineato al centro. La superficie
superiore della piastra di separazione e© leggermente
ehcitapoemO
inoizaraperP

sopraelevata rispetto al bordo della struttura metallica.

Una rientranza intorno al perimetro della piastra divi-
soria orizzontale guida la posizione del cilindro di
vetro. I cilindri di vetro sono sigillati contro le pareti
divisorie orizzontali con morsetti (M) e tenuti insieme
con sei bulloni (N). Le aperture per il campionamento
ecidnI

sono chiuse da tappi. La base della piastra inferiore di

separazione dello stadio 4 ha una sporgenza concen- Figura 2.9.18.-4. Separatore ad urto multistadio liquido.

283
Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

Tabella 2.9.18.-2. - Specifiche dei componenti per le figure 2.9.18.-4/6

Codice* Elemento Descrizione Dimensioni**

A, H Ugello Tubo metallico avvitato alla piastra divisoria, sigillato con una guarni- vedi Figura 2.9.18.-5
zione (C), a superficie interna levigata
B, G Piastra divisoria Piastra metallica circolare
- diametro 120
- spessore vedi Figura 2.9.18.-5
C Guarnizione per es. PTFE da adattare all'ugello
D Piastra di Disco in vetro sinterizzato con porosita© 0, diametro vedi Figura 2.9.18.-5
separazione
E Cilindro in vetro Tubo in vetro tagliato a superficie piana levigata
- altezza, incluse le guarnizioni 46
- diametro esterno 100
- spessore della parete 3,5
- diametro dell'apertura di campionamento (F) 18
- tappo dell'apertura di campionamento ISO 24-25
J Struttura in metallo Struttura circolare profilata ad L con fenditura
- diametro interno
da adattare alla
piastra di
separazione
- altezza 4
- spessore della sezione orizzontale 0,5
- spessore della sezione verticale 2
K Filo metallico Filo in acciaio che collega la struttura metallica e il manicotto (due per
ciascuna struttura)
- diametro 1
L Manicotto Manicotto metallico avvitato all'ugello
- diametro interno da adattare all'ugello
- altezza 6
- spessore 5
M Guarnizione per es. silicone da adattare al cilin-
dro in vetro
N Bullone Bullone metallico con dado (sei coppie)
- lunghezza 205
- diametro 4
P Guarnizione ad Anello in gomma diametro spessore
2 66,34 2,62
2

anello
Q Guarnizione ad Anello in gomma diametro spessore 2 29,1 1,6
2

anello
R Porta filtro Alloggiamento in metallo con supporto e uscita vedi Figura 2.9.18.-6
S Supporto del filtro Foglio metallico perforato
- diametro 65
- diametro dei fori 3
- distanza tra i fori (centro) 4
T Chiusure
U Multi-ugello Ugello (H) che termina in un dispositivo multi-ugello vedi dettagli nella
Figura 2.9.18.-5
* Riferito alla Figura 2.9.18.-4.
** Dimensioni in millimetri con tolleranza in accordo ISO 2768-m, se non diversamente indicato.

284
 Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
idoteM

irotinetnoC
/ ilairetaM
ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
Figura 2.9.18.-5. Dettagli dell'ugello e della piastra di separazione.
Gli inserti mostrano la fine del tubo multi-ugello ad U che porta allo stadio 4

eifargonoM

ilareneG
(lettere minuscole e numeri si riferiscono alla Tabella 2.9.18-3 e lettere maiuscole della Figura 2.9.18.-4).

ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

Figura 2.9.18.-6. Dettagli dello stadio di filtrazione (stadio 5).

ecidnI

I numeri si riferiscono alle dimensioni (Ò - diametro).

Le lettere maiuscole si riferiscono alla Tabella 2.9.18.2.

285
Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

Tabella 2.9.18.-3. - Dimensioni(1) dell'ugello con la piastra di separazione

(2) Filtro
Tipo Codice Stadio 1 Stadio 2 Stadio 3 Stadio 4
(stadio 5)

Distanza 1 9,5 (-0,0+0,5) 5,5 (-0,0+0,5) 4,0 (-0,0+0,5) 6,0 (-0,0+0,5) n.a.
Distanza 2 26 31 33 30,5 0
Distanza 3 8 5 5 5 5
Distanza 4 3 3 3 3 n.a.
Distanza 5 (3) 0 3 3 3 3
Distanza 6 20 25 25 25 25
Distanza 7 n.a. n.a. n.a. 8,5 n.a.
Diametro c 25 14 8,0 ( 0; 1) 21
6 14
Diametro d 50 30 20 30 n.a.
Diametro e 27,9 16,5 10,5 23,9 n.a.
Diametro f 31,75 (-0,0+0,5) 22 14 31 22
Diametro g 25,4 21 13 30 21
Diametro h n.a. n.a. n.a. 2,70 ( 0; 5) 6 n.a.
Diametro j n.a. n.a. n.a. 6,3 n.a.
Diametro k n.a. n.a. n.a. 12,6 n.a.
Raggio(4) r 16 22 27 28,5 0
Raggio s 46 46 46 46 n.a.
Raggio t n.a. 50 50 50 50
Angolo w 10‘ 53‘ 53‘ 53‘ 53‘
Angolo u n.a. n.a. n.a. 45‘ n.a.
Angolo v n.a. n.a. n.a. 60‘ n.a.
(1)Dimensioni in millimetri con tolleranze in accordo alla ISO 2768-m, se non diversamente indicato
(2)Riferito alla Figura 2.9.18.-5
(3)Guarnizione compresa
(4)Riferito all'asse centrale dello stadio considerato
n.a. = non applicabile

Nota
(1) Il materiale puo© essere alluminio o acciaio inossidabile.
(2) Apparecchio costituito da una barra da 38 mm (1,5'').
(3) Praticare un foro da 19 mm attraverso la barra.
(4) Tagliare il tubo a 45‘ esatti come mostrato.
(5) I diametri interni e i coni dovrebbero essere smussati (rifinitura della superfice circa 0,40 mm (16 mm)).
(6) Fresare le giunzioni per ottenere una chiusura ermetica a tenuta di liquido.
(7) Disporre una apparecchiatura di sostegno per allineare il foro interno di 19 mm e per forare e produrre filettature di M4 0,7 oppure 8-32.
2

Virtualmente non ci dovrebbero essere differenze dei diametri interni nel giunto ad angolo retto.
Figura 2.9.18.-7. Apertura di immissione
Dimensioni in millimetri salvo diversa indicazione

286
 Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

inoizircserP
non diversamente definito, condurre il saggio alla velocita©

ilareneG
Procedimento per preparazioni pressurizzate per inala-

zione con dosatore . Introdurre 20 ml di un solvente, di flusso Q usata nel saggio per l'uniformita© della dose
capace di disciogliere il principio attivo, in ciascuno degli rilasciata,estraendo 4litridiariaattraversol'apparecchio.
stadi da 1 a 4 e ricollocare i tappi. Inclinare l'apparecchio Collegare un misuratore di flusso, tarato per il flusso
per bagnare i tappi neutralizzando cos|© la carica elettro- volumetrico che lascia il misuratore, all'apertura di
statica. Porre un filtro adatto capace di raccogliere quan-

isilanA id
idoteM
titativamente il principio attivo nello stadio 5 e assem- immissione. Aggiustare la valvola di controllo del
blare l'apparecchio. Porre un appropriato adattatore del flusso per raggiungere un flusso costante attraverso il
boccaglio in posizione alla fine dell'apertura di immis- sistema alla velocita© richiesta Q ( 5 per cento).
6

sione, in modo che la parte finale del boccaglio dell'at- Chiudere il flusso.

irotinetnoC
tuatore, se inserito, si allinei lungo l'asse orizzontale del- Assicurare che il flusso critico si abbia nella valvola di

/ ilairetaM
l'apertura di immissione e l'inalatore sia posizionato controllo di flusso mediante la procedura seguente.
nello stesso orientamento previsto per l'uso. Collegare Con l'inalatore in luogo e stabilita la velocita© di flusso
una adatta pompa da vuoto all'uscita dell'apparecchio e del saggio, misurare la pressione assoluta su entrambi i
aggiustare il flusso di aria attraverso l'apparecchio, lati della valvola di controllo (letture della pressione ai
misurato all'entrata dell'apertura di immissione, a punti P2 e P3 nella Figura 2.9.18.-8). Un rapporto

ivittaeR
30 0,5 litri al minuto. Chiudere il flusso di aria.
6 P3/P2 0,5 indica il flusso critico. Attivare una pompa


Se non diversamente prescritto nelle istruzioni per il a maggior potenza e misurare di nuovo la velocita© di
paziente, agitare l'inalatore per 5 s e scaricare una dose flusso del saggio se non e© indicato il flusso critico.
a perdere. Attivare la pompa dell'apparecchio, collo- Introdurre 20 ml di un solvente capace di disciogliere il
care l'estremita© del boccaglio dell'attuatore nell'adatta-

itnemogrA
principio attivo in ciascuno dei quattro stadi superiori

ilareneG
tore e scaricare l'inalatore nell'apparecchio, premendo dell'apparecchio e richiudere. Inclinare l'apparecchio
la valvola per un tempo sufficiente per assicurare lo per bagnare i tappi neutralizzando cos|© la carica elettro-
scarico completo. Rimuovere l'inalatore dall'adatta- statica. Porre un opportuno adattatore del boccaglio
tore. Ripetere la procedura. Il numero degli scarichi alla fine dell'apertura di immissione.
dovrebbe essere minimizzato e non dovrebbe essere

eifargonoM

ilareneG
maggiore di dieci. Il numero degli scarichi dovrebbe Preparare l'inalatore a polvere secca per l'uso, secondo
essere sufficiente ad assicurare una determinazione le istruzioni per il paziente. Con la pompa in movi-
accurata e precisa della dose particellare fine. Dopo lo mento e la valvola a due vie chiusa collocare il bocca-
scarico finale, aspettare 5 s e poi spegnere la pompa. glio dell'inalatore nell'adattatore del boccaglio.

ehcituecamraF
Smontare lo stadio del filtro dell'apparecchio. Rimuo- Scaricare la polvere nell'apparecchio aprendo la valvola
per il tempo richiesto T ( 5 per cento). Ripetere la pro-

emroF
vere con attenzione il filtro ed estrarre il principio 6

cedura. Il numero degli scarichi dovrebbe essere mini-

attivo in un'aliquota del solvente. Rimuovere l'apertura mizzato e non dovrebbe essere maggiore di dieci.
di immissione e l'adattatore del boccaglio dal- Il numero degli scarichi dovrebbe essere sufficiente per
l'apparecchio ed estrarre il principio attivo in un'ali- assicurare una determinazione accurata e precisa della
quota del solvente. Se necessario, sciacquare l'interno dose particellare fine. Dopo lo scarico finale, aspettare
eiretaM

emirP
dell'ugello allo stadio 1 con il solvente lasciando che il 5 s e poi spegnere la pompa.
solvente scorra nello stadio. Estrarre il principio attivo
dalle pareti interne e dalla piastra di raccolta di cia- Smontare lo stadio del filtro dell'apparecchio. Rimuovere
scuno dei quattro stadi superiori dell'apparecchio nella accuratamente il filtro ed estrarre il principio attivo in
ehcituecamraF

soluzione nello stadio rispettivo mediante inclinazione un'aliquota del solvente. Rimuovere l'apertura di immis-
inoizaraperP

ehcificepS

e rotazione accurata dell'apparecchio, curando che non sione e l'adattatore del boccaglio dall'apparecchio ed
ci sia alcun trasferimento di liquido tra gli stadi. estrarre il principio attivo in un'aliquota del solvente. Se
Usando un metodo di analisi adatto, determinare la necessario, sciacquare l'interno dell'ugello allo stadio 1
quantita© di principio attivo contenuto in ciascuno dei con solvente, lasciando fluire il solvente nello stadio.
Estrarre il principio attivo dalle pareti interne e dalla pia-
ehcitapoemO
inoizaraperP

sei volumi di solvente. stra di raccolta di ciascuno dei quattro stadi superiori del-
Calcolare la dose particellare fine (vedi sotto). l'apparecchio nella soluzione nello stadio rispettivo incli-
. Porre un filtro nando e ruotando l'apparecchio, osservando che non ci
Procedimento per inalatori di polvere

adatto a bassa resistenza capace di raccogliere quantitati- sia trasferimento di liquido tra gli stadi.
vamente il farmaco nello stadio 5 e assemblare l'apparec- Usando un metodo di analisi adatto, determinare la
ecidnI

chio. Collegare l'apparecchio ad un sistema di flusso in quantita© di principio attivo contenuta in ciascuno dei
accordo allo schema specificato nella Figura 2.9.18.-8. Se sei volumi di solvente.

287
Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

Calcolare la dose di particelle fini (vedi sotto).

Figura 2.9.18.-8. Condizioni sperimentali per saggiare

le polveri per inalazione

Tabella 2.9.18.-4. Specifiche dei componenti per la Figura 2.9.18.-8

Codice Dati Descrizione

A Raccordo Ò int. 8 mm, per es. giunto corto di metallo, con braccio a basso diame-


tro, a P3
B Tubi da vuoto 8 0,5 mm Ò int. 50 10 cm di lunghezza, per es. tubi di silicone con
6 2 6

un Ò est. di 14 mm e un Ò int. di 8 mm
C Valvola solenoide a due vie Orifizio di resistenza minima al flusso d'aria avente un diametro interno
8 mm e un tempo di risposta massima di 100 millisecondi (per es. tipo


256-A08, Bu« rkert GmbH, D-74563 Ingelfingen) o equivalente

D Pompa da vuoto La pompa deve essere capace di ottenere la velocita© di flusso richiesta
attraverso l'apparecchio assemblato con l'inalatore di polvere secca nel-
'adattatore del boccaglio (per es. tipo di prodotto 1023, 1423 o 2565 Gast
Manufacturing Inc., Benton Harbor, MI 49022) o equivalente. Collegare
la pompa alla valvola solenoide usando tubi da vuoto corti e/o larghi
( 10 mm Ò int.) e raccordi per minimizzare i requisiti di capacita© della


pompa
E Timer Timer capace di guidare la valvola solenoide per la durata richiesta (per es.
tipo G814, RS Components International, Corby, NN17 9RS, UK) o equi-
valente
P2, P3 Misure della pressione Determinare la condizione di flusso all'equilibrio con un trasduttore di
pressione assoluta
F Valvola di controllo del Valvola di regolazione aggiustabile con massimo C 1, (per es. tipo 

flusso 8FV12LNSS, Parker Hannifin plc., Barnstaple, EX31 1NP, UK) o equiva-
lente.

288
 Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

inoizircserP
cita© di flusso attraverso il campionatore, il raccordo

ilareneG
filettato esterno, usato per collegare il campionatore al
sistema a vuoto, e© ingrandito fino ad avere un diametro
interno 8 mm.


. Assemblare il

isilanA id
idoteM
Procedimento per inalatori pressurizzati

campionatore ``Andersen'' con un filtro adatto in luogo

ed assicurare che il sistema sia a tenuta d'aria. Porre
un opportuno adattatore del boccaglio nella posizione
finale dell'apertura di immissione in modo che la fine
del boccaglio dell'erogatore, se inserito, si allinei lungo

irotinetnoC
/ ilairetaM
l'asse orizzontale dell'apertura di immissione e l'unita©
dell'inalatore sia posizionata nello stesso orientamento
previsto nell'uso. Collegare una pompa adatta al-
l'esterno dell'apparecchio e regolare il flusso d'aria
attraverso l'apparecchio, come misurato all'entrata del-

ivittaeR
l'apertura di immissione, a 28,3 1,5 litri al minuto.
6

Fermare il flusso di aria.

Se non diversamente prescritto nelle istruzioni al
paziente, agitare per 5 s e scaricare una dose a perdere.

itnemogrA
Accendere la pompa dell'apparecchio, collocare l'estre-

ilareneG
mita© del boccaglio dell'erogatore nell'adattatore e scari-
care l'inalatore invertito nell'apparecchio, premendo la
valvola per un tempo sufficiente ad assicurare l'eroga-
zione completa. Rimuovere l'inalatore dall'erogatore.

eifargonoM
Ripetere la procedura. Il numero di rilasci dovrebbe

ilareneG
essere minimizzato e non dovrebbe essere maggiore di
dieci. Il numero di rilasci dovrebbe essere sufficiente
per assicurare una determinazione accurata e precisa
Figura 2.9.18.-9. Campionatore di classificazione della dose particellare fine. Dopo l'ultima erogazione,

ehcituecamraF
granulometrica ``Andersen'' adattato per gli inalatori aspettare per 5 s e poi fermare la pompa.

emroF
pressurizzati
Smontare l'apparecchio. Rimuovere con attenzione il
filtro ed estrarre il farmaco in un'aliquota del solvente.
APPARECCHIATURA D (Campionatore di classifi- Rimuovere l'apertura di immissione e l'adattatore del
cazione granulometrica ``Andersen'') boccaglio dall'apparecchio ed estrarre il farmaco in

eiretaM

emirP
Il campionatore di classificazione granulometrica un'aliquota del solvente. Estrarre il farmaco dalle
``Andersen'' 1 ACFM consiste di 8 stadi in alluminio pareti interne e dalla piastra di raccolta di ciascuno
insieme con un filtro finale. Gli stadi sono fissati degli stadi dell'apparecchio in aliquote del solvente.
insieme e sigillati con guarnizioni ad anello. Nella con- Usando un metodo di analisi adatto, determinare la
ehcituecamraF
inoizaraperP

figurazione usata per gli inalatori pressurizzati, Figura

ehcificepS

quantita© di farmaco contenuta in ciascuno dei nove

2.9.18-9, il cono di entrata del campionatore e© collegato volumi di solvente.
ad un'apertura di immissione di metallo ad angolo retto
delineata nella Figura 2.9.18-7. Dovrebbe essere usato Calcolare la dose particellare fine (vedi sotto).
un adattatore del boccaglio che assicuri una perfetta
ehcitapoemO
inoizaraperP

tenuta d'aria fra l'inalatore e l'apertura di immissione. Procedimento per inalatori di polvere . Per valutare gli
La parte frontale del boccaglio dell'inalatore deve inalatori di polvere, il campionatore ``Andersen'' puo©
essere allineata con la parte frontale dell'apertura di essere usato a velocita© di flusso diversa da 28,3 litri al
immissione. Nella configurazione per gli inalatori di minuto. Comunque, nessun dato generale di taratura e©
polvere e© posto un pre-separatore sopra lo stadio supe- attualmente disponibile. In assenza di dati pubblicati,
riore per raccogliere masse grandi di polvere non respi- gli utilizzatori devono convalidare l'uso del campiona-
ecidnI

rabile. Esso e© collegato all'apertura di immissione come tore nelle condizioni scelte. Puo© essere adottata la
mostrato nella Figura 2.9.18-10. Per favorire alte velo- seguente procedura sperimentale.

289
Preparazioni per inalazione: valutazione aerodinamica delle particelle fini

Assemblare il campionatore ``Andersen'' con il pre- il tempo richiesto T ( 5 per cento). Ripetere la
6

separatore e un filtro adatto in luogo ed assicurare che sequenza di scarica. Il numero delle erogazioni
il sistema sia a tenuta d'aria. Per assicurare una cattura dovrebbe essere minimizzato e non dovrebbe essere
efficiente di particelle, rivestire ciascuna piastra con gli- maggiore di dieci. Il numero delle erogazioni dovrebbe
cerolo o liquidi simili ad elevata viscosita© depositati da essere sufficiente per assicurare una determinazione
un solvente volatile. Il pre-separatore dovrebbe essere accurata e precisa della dose particellare fine.
rivestito nello stesso modo o dovrebbe contenere 10 ml Dopo lo scarico finale, aspettare per 5 s e poi fermare
di un solvente adatto. Collegare l'apparecchio ad un la pompa.
sistema di flusso secondo lo schema specificato nella
Figura 2.9.18.-8. Smontare l'apparecchio. Rimuovere accuratamente il
filtro ed estrarre il principio attivo in un'aliquota del
solvente. Rimuovere il pre-separatore, l'apertura di
immissione e l'adattatore del boccaglio dall'apparec-
chio ed estrarre il farmaco in un'aliquota del solvente.
Estrarre il principio attivo dalle pareti interne e dalla
piastra di raccolta di ciascuno degli stadi dell'apparec-
chio in aliquote di solvente.
Usando un metodo di analisi adatto, determinare la
quantita© di principio attivo contenuto in ciascuno dei
nove volumi di solvente.
Calcolare la dose particellare fine (vedi sotto).

Calcoli

Dalle analisi delle soluzioni, calcolare la massa di prin-

cipio attivo depositata su ciascuno stadio per scarica e
la massa di principio attivo per scarica depositata nel-
l'apertura di immissione, nell'adattatore del boccaglio
e se usato nel pre-separatore. La massa totale del prin-
Figura 2.9.18.-10. Collegamento dell'apertura di immis- cipio attivo non e© inferiore al 75 per cento e non e© supe-
sione al pre-separatore del campionatore di classifica- riore al 125 per cento della dose media rilasciata deter-
zione granulometrica Andersen minata durante il saggio per l'Uniformita© della dose
Se non diversamente definito condurre il saggio alla rilasciata. Se la massa totale e© fuori da questo intervallo
velocita© di flusso usata nel saggio per l'Uniformita© della il saggio deve essere ripetuto.
dose rilasciata inserendo 4 litri di aria attraverso l'appa-
recchio. Ad alte velocita© di flusso puo© essere necessario Iniziando dal filtro, derivare una massa cumulativa
rimuovere gli stadi piu© bassi dal condotto. Collegare contro il diametro interno degli stadi rispettivi (vedi
un misuratore di flusso, tarato per il flusso volumetrico Tabella 2.9.18.-5 per l'apparecchio C o la Tabella
che lascia il misuratore, all'apertura di immissione. 2.9.18.-6 per l'apparecchio D). Calcolare mediante
Aggiustare la valvola di controllo del flusso per acqui- interpolazione la massa di principio attivo inferiore a
sire flussi fissi attraverso il sistema alla velocita© richie- 5 mm. Questa e© la Dose Particellare Fine (DPF).
sta Q ( 5 per cento). Assicurare che il flusso critico si
6

abbia nella valvola di controllo del flusso mediante la Se necessario e se appropriato, portare in diagramma la
procedura descritta per l'apparecchio C. Fermare il frazione cumulativa del principio attivo in funzione del
flusso d'aria. diametro interno (vedi Tabelle 2.9.18.-5/6) su carta di
Preparare l'inalatore di polvere secca per l'uso in probabilita© logaritmica, e usare questo tracciato per
accordo con le istruzioni per il paziente. Con la pompa determinare i valori per il Diametro di Massa Mediana
attivata e la valvola a due vie chiusa, collocare il bocca- Aerodinamica (DMMA) e per la Deviazione Standard
glio dell'inalatore nell'adattatore del boccaglio. Scari- Geometrica (DSG), se appropriato. Possono anche
care la polvere nell'apparecchio aprendo la valvola per essere usati metodi computazionali appropriati.

290
 Contaminazione particellare: particelle non visibili

inoizircserP
p
Tabella 2.9.18.-5. Calcoli per l'Apparecchiatura C. Usare q1 60=Q , dove Q e© la velocita©

ilareneG
ˆ †

di flusso in litri per minuto.

Frazione cumulativa
Diametro interno Massa di principio attivo Massa cumulativa di principio

(m m) depositato per erogazione attivo depositato per erogazione

di principio attivo

isilanA id
(per cento)

idoteM
d4 = 1,7 q1 1 massa dallo stadio 5, m5* c4 = m5 f4 = (c4/c) 100
1

d3 = 3,1 q1 1 massa dallo stadio 4, m4 c3 = c 4 + m4 f3 = (c3/c) 100

1

d2 = 6,8 q1 1 massa dallo stadio 3, m3 c2 = c 3 + m3 f2 = (c2/c) 100

1

massa dallo stadio 2, m2 c = c2 + m2 100

irotinetnoC
/ ilairetaM
*stadio 5 e© lo stadio del filtro

Tabella 2.9.18.-6. Calcoli per l'Apparecchiatura D quando e© usata a 28,3 litri al minuto
Diametro interno Massa di principio attivo Massa cumulativa di principio Frazione cumulativa di principio

m)

ivittaeR
(m depositato per erogazione attivo depositato per erogazione attivo (per cento)

d7 = 0,4 massa dallo stadio 8, m8 c7 = m8 f7 = (c7/c) 1 100

d6 = 0,7 massa dallo stadio 7, m7 c6 = c 7 + m7 f6 = (c6/c) 1 100
d5 = 1,1 massa dallo stadio 6, m6 c5 = c 6 + m6 f5 = (c5/c) 1 100
d4 = 2,1 massa dallo stadio 5, m5 c4 = c 5 + m5 f4 = (c4/c) 100

itnemogrA
ilareneG
1

d3 = 3,3 massa dallo stadio 4, m4 c3 = c 4 + m4 f3 = (c3/c) 1 100

d2 = 4,7 massa dallo stadio 3, m3 c2 = c 3 + m3 f2 = (c2/c) 1 100
d1 = 5,8 massa dallo stadio 2, m2 c1 = c2 + m2 f1 = (c1/c) 1 100
d0 = 9,0 massa dallo stadio 1, m1 c0 = c1 + m1 f0 = (c0/c) 1 100
massa dallo stadio 0, m0 c = c0 + m0 100

eifargonoM

ilareneG
2.9.19. CONTAMINAZIONE PARTICELLARE: PAR- sioni, le preparazioni colloidali e liposomiali. Simil-
mente, le preparazioni che danno origine a bolle d'aria

ehcituecamraF
TICELLE NON VISIBILI

o di gas quando vengono trasferite nel sensore possono

La contaminazione particellare delle preparazioni

emroF
richiedere il saggio della conta delle particelle al micro-
iniettabili e delle infusioni endovenose e© costituita da scopio. Se la viscosita© della preparazione da saggiare e©
particelle estranee, non disciolte e mobili, diverse dalle cos|© elevata da precludere il suo esame con entrambi i
bolle di gas, involontariamente presenti nelle soluzioni. metodi, si puo© fare una diluizione quantitativa con un
Per la determinazione della contaminazione particel- adatto diluente per diminuirne la viscosita© quanto

eiretaM
lare vengono qui di seguito specificati due metodi, il necessario per permettere di effettuare l'analisi.

emirP
Metodo 1 (Saggio della conta particellare per intercetta-
zione di un raggio luminoso) e il Metodo 2 (Saggio della I risultati ottenuti nell'esame per la contaminazione
conta particellare al microscopio). Quando si esaminano particellare di una singola unita© o di un gruppo di unita©
preparazioni iniettabili ed infusioni endovenose per la
ehcituecamraF

non possono essere estrapolati con certezza ad altre

inoizaraperP

ehcificepS

ricerca di particelle non visibili e© preferibile applicare unita© che rimangono non esaminate. Cos|©, si devono
il Metodo 1. Tuttavia puo© essere necessario saggiare sviluppare piani di campionamento statisticamente
alcune preparazioni con la conta delle particelle per validi se bisogna trarre dai dati osservati conclusioni
intercettazione di un raggio luminoso e poi con la conta certe per caratterizzare il livello di contaminazione par-
delle particelle al microscopio per arrivare alla conclu- ticellare in un grande gruppo di unita© .
ehcitapoemO
inoizaraperP

sione di conformita© alle specifiche.

Non tutte le preparazioni parenterali possono essere METODO 1. SAGGIO DELLA CONTA PARTICEL-
saggiate per la contaminazione da particelle non visibili LARE PER INTERCETTAZIONE DI UN RAGGIO
con uno o entrambi questi metodi. Quando il Metodo 1 LUMINOSO
non e© applicabile, per esempio nel caso di preparazioni
che hanno trasparenza ridotta o viscosita© elevata, il Utilizzare un apparecchio appropriato, basato sul prin-
ecidnI

saggio si effettua con il Metodo 2. Sono esempi le emul- cipio della intercettazione di un raggio luminoso, che

291
Contaminazione particellare: particelle non visibili

permette la determinazione automatica della grandezza Per parenterali di grande volume, si esaminano singole
delle particelle e del loro numero in funzione della unita© . Per parenterali di piccolo volume, inferiore a
dimensione. 25 ml, si uniscono i contenuti di 10 o piu© unita© in un
contenitore pulito per ottenere un volume di non meno
L'apparecchio viene tarato utilizzando dispersioni di di 25 ml; se giustificato ed autorizzato, la soluzione in
particelle sferiche SCR di grandezza nota, compresa esame puo© essere preparata mescolando i contenuti di
tra 10 mm e 25 mm. Effettuare una dispersione di tali un appropriato numero di fiale e diluendo a 25 ml con
particelle di riferimento in acqua esente da particelle R acqua esente da particelle R o con un adatto solvente
evitando che si formino aggregati di particelle durante senza contaminazione particellare quando l'acqua
la dispersione. esente da particelle R non sia disponibile. Parenterali di
piccolo volume con un volume di 25 ml o piu© possono
Precauzioni generali essere esaminati singolarmente.
Effettuare il saggio in condizioni da limitare la conta- Le polveri per uso parenterale vengono ricostituite con
minazione particellare, preferibilmente in una cappa a acqua esente da particelle R o con adatto solvente senza
flusso laminare. contaminazione particellare quando non sia disponibile
acqua esente da particelle R.
Lavare molto accuratamente la vetreria utilizzata e Il numero di campioni in esame deve essere sufficiente a
l'apparecchiatura usata per la filtrazione, eccetto le dare una valutazione statisticamente valida. Per paren-
membrane filtranti, con una soluzione detergente calda terali di grande volume o per parenterali di piccolo
e risciacquare abbondantemente con acqua per elimi- volume che abbiano un volume di 25 ml o piu© , si pos-
nare ogni traccia di detergente. Immediatamente prima sono esaminare meno di 10 unita© , in base ad un appro-
dell'uso, risciacquare l'apparecchio dall'alto al basso, priato programma di campionamento.
all'esterno e successivamente all'interno, con acqua
esente da particelle R. Prelevare quattro porzioni, ciascuna non inferiore a
5 ml, e contare il numero di particelle con grandezza
Evitare di introdurre bolle d'aria nella preparazione in uguale o superiore a 10 mm e a 25 mm. Calcolare il
esame, specialmente durante il trasferimento di frazioni numero medio di particelle nella preparazione in
della preparazione nel recipiente in cui viene effettuata esame, non tenendo conto del risultato relativo alla
la determinazione. prima porzione.
Al fine di verificare che l'ambiente sia adatto per il sag- Valutazione

gio, che i recipienti di vetro siano convenientemente Per preparazioni fornite in contenitori con un volume
puliti e che l'acqua da utilizzare sia esente da particelle, nominale maggiore di 100 ml, applicare i criteri del
viene effettuato il saggio seguente: determinare la con- saggio 1.A.
taminazione particellare su cinque campioni di acqua
esente da particelle R, ciascuno da 5 ml, seguendo il pro- Per preparazioni fornite in contenitori con un volume
cedimento di seguito descritto. Se il numero di parti- nominale inferiore a 100 ml, applicare i criteri del sag-
celle di dimensione uguale o superiore a 10 mm e© mag- gio 1.B.
giore di 25 per i 25 ml riuniti, le precauzioni prese per Per preparazioni fornite in contenitori con un volume
il saggio non sono sufficienti. Le fasi preparatorie nominale di 100 ml, applicare i criteri del saggio 1.B.
devono essere ripetute fino a che l'ambiente, la vetreria
e l'acqua siano idonei al saggio. Se il numero medio di particelle supera i limiti, esami-
nare la preparazione con il Saggio della conta particel-
Metodo lare al microscopio.
Mescolare il contenuto del recipiente capovolgendo Saggio 1.A.
lentamente lo stesso per 20 volte successive. Se necessa- Soluzioni per infusione endovenosa o soluzioni per prepa-
rio, rimuovere cautamente la chiusura ermetica. Lavare razioni iniettabili fornite in contenitori con un contenuto
le superfici esterne dell'apertura del recipiente utiliz- nominale maggiore di 100 ml.
zando un getto di acqua esente da particelle R e rimuo-
vere la chiusura, avendo cura di evitare la contamina- La preparazione soddisfa al saggio se il numero medio
zione del contenuto. Eliminare le bolle di gas in modo delle particelle presenti nelle unita© in esame non supera,
appropriato, come lasciando a riposo la soluzione per per millilitro, 25 di dimensione uguale o maggiore di
2 min o per sonicazione. 10 mm e 3 di dimensione uguale o maggiore di 25 mm.

292
 Contaminazione particellare: particelle non visibili

inoizircserP
Saggio 1.B.

ilareneG
Soluzioni per infusione endovenosa o soluzioni per prepa-
razioni iniettabili fornite in contenitori con un contenuto
nominale inferiore a 100 ml.

isilanA id
idoteM
La preparazione soddisfa al saggio se il numero medio
delle particelle presenti nelle unita© in esame non supera,
per contenitore, 6000 di dimensione uguale o maggiore
di 10 mm e 600 di dimensione uguale o maggiore di
25 mm.

irotinetnoC
/ ilairetaM
METODO 2. SAGGIO DELLA CONTA PARTI-
CELLARE AL MICROSCOPIO Figura 2.9.19.-1.- Reticolo circolare

ivittaeR
Utilizzare un adatto microscopio binoculare, un Precauzioni generali
sistema filtrante per trattenere le particelle contami-
nanti e una membrana filtrante per l'esame. Il saggio si effettua in condizioni che limitino la conta-
minazione particellare, preferibilmente in una cappa a
flusso laminare.

itnemogrA
Il microscopio e© fornito di un micrometro oculare

ilareneG
tarato con un obiettivo micrometrico, un portaoggetti Lavare molto accuratamente la vetreria utilizzata e
meccanico in grado di tenere ferma e di muovere tra- l'apparecchiatura usata per la filtrazione, eccetto la
sversalmente l'intera area di filtrazione della mem- membrana filtrante, con una soluzione detergente calda
brana filtrante, 2 fonti di luce adatte a fornire una illu- e risciacquare con abbondante acqua per eliminare ogni

eifargonoM
minazione episcopica oltre all'illuminazione obliqua, traccia di detergente. Immediatamente prima dell'uso,

ilareneG
regolato a 100 10 ingrandimenti.
6 risciacquare entrambi i lati della membrana filtrante e
l'apparecchio dall'alto al basso, all'esterno e poi all'in-
Il micrometro oculare e© un reticolo circolare (vedi terno con acqua esente da particelle R.
Figura 2.9.19. 1) e consiste di un largo cerchio diviso Al fine di verificare che l'ambiente sia adatto per il sag-

ehcituecamraF
da croci di collimazione in quadranti, di cerchi traspa- gio, che la vetreria e la membrana filtrante siano conve-
renti e neri del diametro di 10 mm e di 25 mm a 100

emroF
nientemente puliti e che l'acqua da utilizzare sia esente
ingrandimenti e di una scala lineare graduata in incre- da particelle, viene effettuato il saggio seguente: deter-
menti di 10 mm. Viene tarato per mezzo di un microme- minare la contaminazione particellare di un volume di
tro portaoggetti certificato da una istituzione o nazio- 50 ml di acqua esente da particelle R seguendo il proce-
nale o internazionale standard. E' ritenuto accettabile dimento descritto di seguito. Se piu© di 20 particelle della

eiretaM
un errore relativo della scala lineare del reticolo dimensione uguale o maggiore di 10 mm o se piu© di

emirP
entro 2 per cento. Il cerchio largo e© indicato come il
6
5 particelle della dimensione uguale o maggiore di
Campo Reticolare Visivo (CRV). 25 mm sono presenti entro l'area di filtrazione, le pre-
cauzioni adottate per il saggio non sono sufficienti.
Sono necessarie due fonti luminose. Una e© una sorgente
ehcituecamraF

Le fasi preparatorie devono essere ripetute finchë l'am-

inoizaraperP

ehcificepS

luminosa episcopica interna al miscroscopio, l'altra e© biente, la vetreria, la membrana filtrante e l'acqua siano
esterna ausiliaria che puo© essere messa a fuoco, regola- idonei al saggio.
bile a dare una illuminazione riflessa obliqua con un
angolo di 10-20‘. Metodo

Mescolare il contenuto del recipiente capovolgendo

ehcitapoemO
inoizaraperP

Il sistema filtrante che trattiene la contaminazione par- lentamente lo stesso per 20 volte successive. Se necessa-
ticellare e© costituito da un portafiltro fatto di vetro o rio, rimuovere cautamente la chiusura ermetica. Lavare
altro materiale adatto ed e© dotato di una presa per il le superfici esterne dell'apertura del recipiente utiliz-
vuoto e di una adatta membrana filtrante. zando un getto di acqua esente da particelle R e rimuo-
vere la chiusura, avendo cura di evitare la contamina-
La membrana filtrante e© di dimensione opportuna, nera zione del contenuto.
ecidnI

o grigio scura, non reticolata o reticolata, e con dimen- Per parenterali di grande volume, si esaminano singole
sione nominale dei pori di 1,0 mm o piu© fine. unita© . Per parenterali di piccolo volume, inferiore a

293
Contaminazione particellare: particelle visibili

25 ml, si uniscono i contenuti di 10 o piu© unita© in un Nell'effettuare il saggio della conta particellare al
contenitore pulito; se giustificato ed autorizzato, la microscopio non cercare di misurare o di contare mate-
soluzione in esame puo© essere preparata mescolando i riali amorfi, semi-liquidi o in altro modo a morfologia
contenuti di un appropriato numero di fiale e diluendo indistinta che appaiano come una macchia o una deco-
a 25 ml con acqua esente da particelle R o con un adatto lorazione sulla membrana filtrante. Questi materiali
solvente senza contaminazione particellare quando presentano superficie in rilievo piccola o assente e
l'acqua esente da particelle R non sia disponibile. Paren- hanno un aspetto gelatinoso o simile a una pellicola.
terali di piccolo volume con un volume di 25 ml o piu© In tali casi, l'interpretazione della enumerazione puo©
possono essere esaminati singolarmente. essere agevolata esaminando un campione della solu-
Le polveri per uso parenterale vengono ricostituite con zione con il saggio della conta per intercettazione di
acqua esente da particelle R o con adatto solvente senza un raggio luminoso.
contaminazione particellare quando non sia disponibile Valutazione

acqua esente da particelle R. Per preparazioni fornite in contenitori con un volume

Il numero di campioni in esame deve essere sufficiente a nominale maggiore di 100 ml, applicare i criteri del sag-
dare una valutazione statisticamente valida. Per paren- gio 2.A.
terali di grande volume o per parenterali di piccolo Per preparazioni fornite in contenitori con un volume
volume che abbiano un volume di 25 ml o piu© , si pos- nominale inferiore a 100 ml, applicare i criteri del sag-
sono esaminare meno di 10 unita© , in base ad appro- gio 2.B.
priato programma di campionamento. Per preparazioni fornite in contenitori con un volume
nominale di 100 ml, applicare i criteri del saggio 2.B.
Bagnare l'interno del portafiltro gia© provvisto della Saggio 2.A.
membrana filtrante con parecchi millilitri di acqua Soluzioni per infusione endovenosa o soluzioni per prepa-
esente da particelle R. Trasferire all'imbuto da filtra- razioni iniettabili fornite in contenitori con un contenuto
zione il volume totale di una soluzione riunita o di una nominale maggiore di 100 ml.
singola unita© e applicare il vuoto. Se necessario aggiun- La preparazione soddisfa al saggio se il numero medio
gere gradualmente una porzione della soluzione finchë delle particelle presenti nelle unita© in esame non supera,
sia filtrato l'intero volume. Dopo l'ultima aggiunta di per millilitro, 12 di dimensione uguale o maggiore di
soluzione, cominciare a risciacquare le pareti interne 10 mm e 2 di dimensione uguale o maggiore di 25 mm.
del porta-filtro utilizzando un getto di acqua esente da
particelle R. Mantenere il vuoto finchë la superficie Saggio 2.B.
della membrana filtrante e© asciutta. Porre il filtro in Soluzioni per infusione endovenosa o soluzioni per prepa-
una scatola Petri e lasciarlo asciugare all'aria con il razioni iniettabili fornite in contenitori con un contenuto
coperchio leggermente aperto. Dopo che il filtro e© sec- nominale inferiore a 100 ml.
cato, porre la scatola Petri sul tavolino portaoggetti La preparazione soddisfa al saggio se il numero medio
del microscopio, esaminare l'intera membrana filtrante delle particelle presenti nelle unita© in esame non
sotto la luce riflessa dal sistema illuminante e contare supera, per contenitore, 3000 di dimensione uguale
il numero di particelle che sono di dimensione uguale o o maggiore di 10 mm e 300 di dimensione uguale o
maggiore di 10 mm e il numero di particelle di dimen- maggiore di 25 mm.
sione uguale o maggiore di 25 mm. Oppure, e© consentita
una conta parziale sul filtro e la determinazione del
totale col calcolo. Calcolare il numero medio di parti-
2.9.20. CONTAMINAZIONE PARTICELLARE: PAR-

celle per la preparazione da esaminare.

TICELLE VISIBILI

Il procedimento di misura delle particelle con il reticolo La contaminazione particellare delle preparazioni
circolare viene realizzato trasformando mentalmente iniettabili e delle infusioni endovenose e© costituita da
l'immagine di ciascuna particella in un cerchio e quindi particelle estranee, non disciolte e mobili, diverse dalle
confrontandola con i cerchi di riferimento del reticolo bolle di gas, involontariamente presenti nelle soluzioni.
della dimensione di 10 mm e di 25 mm. Percio© le particelle Questo saggio si propone di offrire un metodo semplice
non vengono mosse dal loro posto iniziale nel campo per la valutazione visiva della qualita© delle soluzioni
visivo del reticolo e non sono sovrapposte ai cerchi di parenterali riguardo le particelle visibili. Possano essere
riferimento per il confronto. Il diametro interno dei cer- usati altri metodi convalidati.
chi di riferimento trasparenti viene utilizzato per misu- APPARECCHITURA
rare particelle bianche o trasparenti, mentre le particelle
scure sono misurate utilizzando il diametro esterno dei L'apparecchio (vedi Figura 2.9.20.-1) e© costituito da un
cerchi di riferimento neri e opachi del reticolo. dispositivo per l'ispezione visiva che prevede:

294
 Contaminazione particellare: metodo al microscopio

inoizircserP
- un pannello nero opaco di appropriata dimensione eccezione dei filtri a membrana, con una soluzione

ilareneG
posto in posizione verticale, detergente calda e sciacquare accuratamente con una
- un pannello bianco non abbagliante di dimensioni abbondante quantita© di acqua R per eliminare ogni
appropriate posto in posizione verticale di fianco al traccia di detergente. Immediatamente prima dell'uso,
pannello nero, sciacquare il materiale dall'alto in basso, all'esterno e
successivamente all'interno con acqua esente da parti-

isilanA id
- un portalampada orientabile provvisto di una

idoteM
sorgente di luce bianca schermata e di un adatto dif- celle R.
fusore (e© idoneo un portalampada contenente due
tubi fluorescenti, ciascuno da 13 W e di 525 mm di APPARECCHIATURA
lunghezza). L'intensita© dell'illuminazione nel punto Utilizzare un sistema di filtrazione in depressione in

irotinetnoC
di osservazione viene mantenuta tra 2000 lux e acciaio inossidabile o in vetro provvisto di un filtro a

/ ilairetaM
3750 lux, sebbene valori piu© alti siano da preferire membrana a maglia avente idonea porosita© e idoneo
per i contenitori colorati di vetro e di plastica. colore.
Puo© essere utilizzato un microscopio binoculare cos|©
METODO costituito:
Rimuovere qualsiasi etichetta dal contenitore e lavare e ^ un obiettivo acromatico con un potere di ingrandi-

ivittaeR
seccare la parte esterna. Agitare o capovolgere con pre- mento di 10,
cauzione ciascun contenitore, evitando di introdurre ^ lenti oculari con un potere di ingrandimento di 10,
bolle di aria, ed effettuare l'ispezione visiva per circa 5 delle quali almeno una fornita di un reticolo capace
s contro il pannello bianco. Ripetere il procedimento di effettuare misure accurate di particelle di dimen-
contro il pannello nero. Registrare la presenza di qual- sioni di 10 mm o maggiori,

itnemogrA
ilareneG
siasi particella. ^ un sistema di illuminazione per l'osservazione con
luce incidente o riflessa,
^ un micrometro per tarare il reticolo dell'oculare.
METODO

eifargonoM

ilareneG
Montaggio del filtro a membrana e dell'apparecchio per

la filtrazione. Sciacquare l'imbuto e il supporto del fil-

tro con acqua esente da particelle R; prelevare un filtro
a membrana con le pinze precedentemente lavate;

ehcituecamraF
sciacquare entrambi i lati del filtro con acqua esente da
particelle R tenendolo in posizione verticale, direzio-

emroF
nando il getto lentamente avanti e indietro e dall'alto
Figura 2.9.20.-1.- Apparecchio per le particelle visibili in basso in modo da eliminare tutte le particelle. Porre
il filtro sciacquato sulla base del portafiltro con il lato
reticolato verso l'alto, assicurandosi che il filtro sia ben
centrato sul supporto. Assemblare il sistema filtrante
eiretaM
2.9.21. CONTAMINAZIONE PARTICELLARE: ME-

emirP
evitando di far scivolare l'imbuto sul lato reticolato del
TODO AL MICROSCOPIO

La contaminazione particellare delle preparazioni filtro. Capovolgere il sistema e sciacquare l'interno del-
iniettabili e delle infusioni endovenose e© costituita da l'imbuto e la superficie del filtro con un getto di acqua
particelle estranee, non disciolte e mobili, diverse dalle esente da particelle R per almeno 15 s. Porre l'unita© di
ehcituecamraF
inoizaraperP

bolle di gas, involontariamente presenti nelle soluzioni. filtrazione sulla beuta da vuoto.
ehcificepS

Questo saggio offre un metodo qualitativo per identifi- Trasferire nell'apparecchio di

care e caratterizzare qualsiasi particella che possa Filtrazione del campione.

filtrazione 25 ml della preparazione in esame, previa-

essere presente in una soluzione, al fine di potere otte- mente resa omogenea. Lasciare a riposo per circa
nere utili indicazioni sulla possibile origine della conta- 1 min. Applicare il vuoto e filtrare. Rilasciare lenta-
ehcitapoemO
inoizaraperP

minazione. Sulla base di tali informazioni, il produttore mente il vuoto e sciacquare le pareti interne dell'imbuto
puo© attuare le misure idonee ad evitare la contamina- con un getto di acqua esente da particelle R. Evitare di
zione. dirigere il getto sulla superficie del filtro. Dopo cessa-
PRECAUZIONI GENERALI zione della turbolenza applicare il vuoto e filtrare le
Effettuare le manipolazioni in una cappa a flusso lami- acque di lavaggio. Mantenere ancora il vuoto per alcuni
nare. istanti per asciugare il filtro. Rilasciare il vuoto.
ecidnI

Preparazione dei materiali. Lavare molto accurata- Rimuovere l'imbuto con la dovuta cautela, sollevare il
mente la vetreria e il materiale di filtrazione scelto, ad filtro con le pinze in acciaio, previamente sciacquate

295
Determinazione del tempo di rammollimento di supposte lipofile

con un getto di acqua esente da particelle R e deporlo sul oppure separate (versione automatizzata). Il peso del-
fondo di una capsula di Petri pulita; ricoprire con il l'asta intera e© di 30 0,1 g. La parte superiore dell'asta
6

coperchio pulito, senza chiuderla completamente. porta un anello d'indicazione scorrevole. Quando l'asta
Porre la capsula in una cappa a flusso laminare per sec- viene introdotta nel tubo di vetro cos|© che tocchi la
care leggermente la membrana filtrante, evitando la base, l'anello viene fatto coincidere con il livello supe-
formazione di pieghe. Trasferire, infine, la capsula di riore del coperchio in plastica.
Petri sul piano del microscopio e contare le particelle Porre il tubo di vetro contenente 10 ml di
presenti sul filtro nel modo di seguito indicato. Metodo.

acqua nel b.m. e regolare a 36,5 0,5 ‘C. Fissare il

Preparazione del . Preparare un bianco nelle
bianco
6

tubo di vetro verticalmente e immergere a una profon-

stesse condizioni del campione. Il bianco e© costituito dita© di almeno 7 cm sotto la superficie, ma senza toc-
da 25 ml di acqua esente da particelle R passata diretta- care il fondo del b.m. Introdurre nel tubo di vetro una
mente attraverso l'imbuto del sistema di filtrazione supposta, la punta per prima, e poi l'asta, con il coper-
sotto vuoto. chio di plastica libero di scorrere, finchë l'ago metallico
Taratura al microscopio. Tarare il reticolo oculare del tocca l'estremita© piatta della supposta. Porre il coper-
microscopio utilizzando un micrometro. chio sul tubo e notare il tempo necessario perchë l'asta
Determinazione. Si puo© effettuare un esame visivo, scenda fino alla base del tubo di vetro e l'anello indica-
oppure utilizzare un apparecchio elettronico di regi- tore raggiunga il livello superiore del coperchio in
strazione. Esaminare l'intera superficie del filtro, illu- plastica.
minata con una luce incidente o con una luce riflessa,
ad un ingrandimento di 100. Contare e classificare
le particelle in funzione delle classi dimensionali prece-
dentemente scelte, 10 mm. Per ciascuna classe, sot-


trarre il bianco dai conteggi relativi ai campioni.

Se il bianco contiene piu© di cinque particelle di dimen-
sioni di 25 mm o maggiori, le condizioni operative sono
insoddisfacenti e il saggio deve essere ripetuto.
Interpretazione. Se possibile, identificare i tipi di parti-
celle rilevate e determinare le loro caratteristiche.
Se necessario il numero di particelle rivelate puo© anche
essere registrato.
2.9.22. DETERMINAZIONE DEL TEMPO DI RAM-

MOLLIMENTO DI SUPPOSTE LIPOFILE

Il saggio ha lo scopo di determinare, in condizioni sta-

bilite, il tempo che passa prima che una supposta man-
tenuta in acqua rammollisca al punto da non offrire
piu© a lungo resistenza quando venga applicato un peso Figura 2.9.22.-1 - Apparecchiatura A per la misura
definito. del tempo di rammollimento di supposto lipofile
APPARECCHIATURA A Dimensioni in millimetri
L'apparecchio (vedi Figura 2.9.22.-1) consiste di un
tubo di vetro, del diametro interno di 15,5 mm, con
fondo piatto e lungo circa 140 mm. Il tubo e© chiuso da APPARECCHIATURA B
un coperchio rimovibile in plastica con una apertura L'apparecchio (vedi Figura 2.9.22-2) e© costituito da un
del diametro di 5,2 mm. L'apparecchio comprende b.m. (B) in cui e© inserito e fissato con un tappo un tubo
un'asta del diametro di 5,0 mm che si allarga verso l'e- interno (A). Il tubo interno e© chiuso alla base da un
stremita© inferiore raggiungendo un diametro di 12 mm. tappo. L'apparecchio e© dotato di un termometro. Sono
Sulla superficie piana inferiore e© fissato un ago metal- disponibili due accessori:
lico lungo 2 mm e del diametro di 1 mm.
L'asta e© costitutita da due parti, una inferiore di mate- ^ una bacchetta di vetro (C1) costituita da un tubo sal-
riale plastico e una parte superiore di materiale plastico dato a entrambe le estremita© , portante alla sua
o di metallo, con un peso a disco. Le parti superiore e estremita© inferiore un bordo caricato con pallini di
inferiore sono fissate insieme (versione manuale) piombo che ha un peso di 30 0,1 g;
6

296
 Densita© picnometrica dei solidi

inoizircserP
^ un accessorio penetrante (C2) costituito da una bac- ^ un sistema capace di pressurizzare la cella da saggio

ilareneG
chetta (7,5 0,1 g) in un tubo che porta una espan-
6 con il gas usato nella misurazione fino a pressione
sione per la supposta, entrambi di acciaio inossida- definita (P) indicata da un manometro,
bile. ^ il sistema e© collegato ad una sorgente del gas usato
nella misurazione, che (1)e© preferibilmente elio, se

isilanA id
Versare 5 ml di acqua a 36,5 0,5 ‘C nel tubo

idoteM
Metodo. 6 non specificato altro gas .
interno, introdurre una supposta con la punta in basso
e su quella porre l'accessorio (C1 o C2). La misura del La temperatura del picnometro a gas e© compresa tra
tempo comincia in questo momento. La fusione o dis- 15 ‘C e 30 ‘C e non deve variare piu© di 2 ‘C durante il
soluzione si considera completa quando l'estremita© corso della misurazione.
inferiore col bordo della bacchetta di vetro (C1) o di

irotinetnoC
/ ilairetaM
acciaio (C2) raggiunge la parte ristretta del tubo di L'apparecchio e© tarato cioe© i volumi (Vc) e (Vr) sono
vetro interno. determinati, usando sfere d'acciaio pulite, tarate che
hanno volume totale noto (circa 6 cm 3) con l'appros-
simazione di 0,001 cm3. La procedura descritta sotto
e© realizzata in due tempi. Prima, con una cella da sag-

ivittaeR
gio vuota e poi con le sfere d'acciaio poste nella cella
da saggio. I volumi (Vc) e (Vr) sono calcolati usando
l'equazione per il volume del campione considerando
che il volume e© zero nel primo tempo.

itnemogrA
ilareneG
METODO
Pesare la cella da saggio del picnometro e registrare

eifargonoM
la massa. Riempire la cella da saggio con una data

ilareneG
massa di polvere della sostanza in esame. Sigillare la
cella da saggio nel picnometro. Rimuovere i contami-
nanti volatili nella polvere degassando la polvere con
una costante eliminazione di gas; occasionalmente,

ehcituecamraF
le polveri possono essere degassate inizialmente sotto

emroF
vuoto. Registrare la pressione di riferimento del
sistema (Pr) come indicato dal manometro mentre la
valvola che collega la cella di riferimento con la cella
Figura 2.9.22.2. Apparcchiatura B per la misura del da saggio e© aperta. Chiudere la valvola per separare
tempo di rammollimento di supposte lipofile. la cella di riferimento dalla cella da saggio. Pressuriz-

eiretaM
zare la cella da saggio con il gas alla pressione ini-

emirP
Dimensioni in millimetri.
ziale (Pi) e registrare il valore ottenuto. Aprire la val-
vola per collegare la cella di riferimento con la cella
é PICNOMETRICA DEI SOLIDI da saggio. Registrare la pressione finale (Pf). Ripetere
la sequenza di misurazione per la stessa polvere cam-
2.9.23. DENSITA
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Il saggio per la densita© picnometrica dei solidi e© uti- pione finchë misure consecutive del volume del cam-
lizzato per determinare il volume occupato da una pione (Vs) concordano entro lo 0,5 per cento.
massa nota di polvere misurando il volume di gas Il volume del campione e© espresso in cm3. Scaricare
spostato in condizioni definite. Da qui viene calcolata la cella da saggio e misurare la massa di polvere
la sua densita© picnometrica. finale (m) espressa in grammi.
ehcitapoemO
inoizaraperP

APPARECCHIATURA öööö
L'apparecchio (vedi Figura 2.9.23.-1) consiste di: (1)Sesono usati gas diversi dall'elio, non ci si deve sorprendere se si
^ una cella da saggio sigillata, con un volume di ottengono valori differenti da quelli ottenuti con l'elio, poichë la pene-
cella vuoto (Vc), collegato attraverso una valvola trazione del gas dipende dalla dimensione del poro cos|© come dall'a-
rea della sezione trasversale della molecola penetrante. Per esempio,
ecidnI

ad una cella di riferimento, con un volume di rife- la densita© picnometrica di materiali porosi sara© sovrastimata da una
rimento (Vr), misura fatta usando azoto in confronto con l'elio.

297
Resistenza alla rottura di supposte e ovuli

ESPRESSIONE DEI RISULTATI 2.9.24. RESISTENZA ALLA ROTTURA DI SUPPO-

STE E OVULI

Il volume del campione (Vs) e© dato dall'espressione:

Questo saggio determina, in condizioni definite, la
resistenza alla rottura di supposte e ovuli misurata
Vs Vc Pi VPrr
ˆ ÿ dalla massa necessaria per romperli per pressione.
Pf Pr 1
ÿ
ÿ
ÿ
Questo saggio si applica alle supposte e agli ovuli
fatti con eccipienti grassi. Non e© adatto alle supposte
La densita© () e© data dall'equazione: e agli ovuli fatti con eccipienti idrofili come una
miscela gelatina-glicerolo.

m
ˆ
Vs
Apparecchiatura. L'apparecchio (vedi Figure 2.9.24.-1/2)
consiste di:
^ una camera termostatata chiusa davanti con una
finestra di vetro e contenente un dispositivo che
serve per sostenere la supposta o l'ovulo,
^ due ganasce opposte, la ganascia superiore che
discende verticalmente verso quella inferiore.
Le superfici di contatto delle ganasce sono piatte,
perpendicolari alla direzione del movimento e piu©
grandi della zona di contatto con la supposta o
l'ovulo. Un portacampione di plastica e© fissato
nel centro delle ganasce (meta© sostegno su cia-
scuna ganascia). La ganascia superiore (blocco di
pressione superiore) e© collegata ad una sospen-
sione alla quale possono essere aggiunti dischi,
ciascuno dei quali pesa 200 g. La massa iniziale
del dispositivo e© di 600 g. La rottura del campione
viene effettuata aggiungendo successivamente
dischi di 200 g alla massa iniziale di 600 g.
Metodo. Controllare che l'apparecchio sia verticale.
Scaldare la camera termostatica a 25 ‘C.
La forma farmaceutica da esaminare deve essere
mantenuta per almeno 24 h alla temperatura di misu-
razione richiesta. Porre la supposta o l'ovulo vertical-
Vr = volume di riferimento mente tra le ganasce nel portacampione con la punta
in alto. Il blocco di pressione superiore della barra di
Vc = volume della cella caricamento in sospensione e© attentamente posizio-
nato e la camera da saggio e© chiusa con la sua fine-
Vs = volume del campione stra di vetro; per ciascuna determinazione, posizio-
nare la supposta o l'ovulo nello stesso modo rispetto
M = manometro alla direzione della forza applicata.
Aspettare per 1 min e aggiungere il primo disco di
200 g. Aspettare di nuovo per 1 min e aggiungere un
altro disco. Ripetere l'operazione fino a che la suppo-
Figura 2.9.23.-1. Schema di un Picnometro a gas sta o l'ovulo si frantuma.

298
 ilareneG isilanA id irotinetnoC ilareneG emirP ehcificepS ehcitapoemO
ilareneG ehcituecamraF
ivittaeR ehcituecamraF
ecidnI
inoizircserP idoteM / ilairetaM itnemogrA eifargonoM emroF eiretaM inoizaraperP
inoizaraperP

299
Resistenza alla rottura di supposte e ovuli

Figura 2.9.24.-1. Apparecchio per la determinazione della resistenza alla rottura di supposte e ovuli

Figura 2.9.24.-2. Ganasce inferiore e superiore

Area superficiale specifica mediante adsorbimento di gas

La massa richiesta per la rottura della supposta o del- masticare. Rimuovere tutto il tampone con una pipetta
l'ovulo e© calcolata dalla somma delle masse che pesano e sostituirlo con 20 ml di tampone nuovo. Il tampone
sulla supposta o sull'ovulo quando si frantuma (inclusa che e© stato rimosso e© analizzato come controllo per la
la massa iniziale del dispositivo) valutata come segue: procedura di pulizia. Pesare esattamente un pezzo di
^ se la supposta o l'ovulo si frantuma entro 20 s dal gomma da masticare, metterlo nella camera di mastica-
posizionamento dell'ultimo disco, non prendere in zione e avviare la macchina. Ad intervalli di tempo spe-
considerazione questa massa, cificati, rimuovere i campioni dal serbatoio per deter-
^ se la supposta o l'ovulo si frantuma tra 20 s e 40 s minare il rilascio di farmaco. La frequenza di mastica-
dal posizionamento dell'ultimo disco, usare solo zione e© usualmente fissata a 60 cicli al minuto.
meta© di questa massa nel calcolo, per es. 100 g, Qualche volta il residuo della masticazione e© preso e
^ se la supposta o l'ovulo rimane intatto per piu© di posto in una sacca per ulteriori analisi.
40 s dopo che l'ultimo disco sia stato posizionato,
usare tutta la massa nel calcolo.
Effettuare ciascuna misura su dieci supposte o dieci
ovuli, facendo attenzione che nessun residuo rimanga
prima di ciascuna determinazione.
2.9.25. RILASCIO DI FARMACO DA GOMME DA

MASTICARE MEDICATE

PRINCIPIO
Il rilascio di farmaco dalle gomme da masticare medi-
cate e© determinato dall'applicazione di una procedura
meccanica di impasto ad un pezzo di gomma posto in
una piccola camera di masticazione contenente un
volume noto di soluzione tampone.
APPARECCHIATURA
L'apparecchio di masticazione (vedi Figura 2.9.25.-1)
comprende una camera di masticazione di circa 40 ml Figura 2.9.25.-1. Apparecchiatura per la determinazione
nei quali la gomma e© artificialmente masticata da due del rilascio di farmaco dalle gomme da masticare
pistoni orizzontali; i pistoni operano insieme ad una medicate
velocita© costante. Alla fine di una masticazione, i
pistoni orizzontali possono ruotare intorno ai loro assi
in direzioni opposte l'una all'altra. In questo modo, la
gomma e© soggetta alla massima masticazione. Un terzo
2.9.26. AREA SUPERFICIALE SPECIFICA ME-

DIANTE ADSORBIMENTO DI GAS

pistone verticale (``lingua'') opera alternativamente

con i due pistoni orizzontali e fa s|© che la gomma
rimanga nel giusto posto durante la masticazione. I. INTRODUZIONE
I pistoni sono guidati da aria compressa e i loro movi-
menti reciproci sono controllati. Tutte le parti sono L'area superficiale specifica di una polvere e© determi-
costituite di acciaio inossidabile. nata dall'adsorbimento fisico di un gas sulla superficie
del solido e misurando la somma di gas adsorbito corri-
PROCEDIMENTO spondente ad uno strato monomolecolare sulla superfi-
cie. L'adsorbimento fisico e© dato da forze relativamente
Aggiustare la temperatura della camera di mastica- deboli (forze di van der Waals) tra le molecole di gas
zione (37 0,5 ‘C) e la velocita© dei pistoni. Aggiungere
6 adsorbito e la superficie adsorbente della polvere in
20 ml di tampone (generalmente vicino a pH 6) nella esame. La somma di gas adsorbito puo© essere misurata
camera di masticazione. Avviare la macchina e lasciarla con un procedimento gravimetrico, volumetrico o a
operare per 2 min con il tampone, ma senza gomma da flusso continuo.

300
 Area superficiale specifica mediante adsorbimento di gas

inoizircserP
II. TEORIA DI BRUNAUER, EMMETT E TELLER denza/intercetta) + 1. Dal valore di Vm2 cos| © determi-

ilareneG
(BET) E DETERMINAZIONE DELL'AREA SUPER- nato, l'area superficiale specifica S in m g-1, e© calcolata
FICIALE SPECIFICA con l'equazione:
II.1. MISURA A PUNTO MULTIPLO S m Vm22400Na ˆ 2 †

isilanA id
idoteM
2

I dati sono trattati in accordo con l'equazione dell'ad-

sorbimento isotermico di Brunauer, Emmett e Teller N = costante di Avogadro (6,023 10 mol ),
23 -1
(BET): a = area effettiva della sezione trasversale di una

irotinetnoC
molecola adsorbita, in metri quadri (0,162 nm2

/ ilairetaM
1 C 1 P 1 1 per l'azoto e 0,195 nm2 per il kripton),
ÿ
2 ÿP
Va Po 113 Vm C Po VmC
ÿ
ˆ 2 ‡ †

m = massa di polvere in esame, in grammi,

P = pressione parziale di vapore del gas adsorbito in 22400 = volume, in millilitri, occupato dal gas adsor-

ivittaeR
equilibrio con la superficie a - 196 ‘C, in pascal, bito alla temperatura e alla pressione stan-
Po = pressione satura del gas adsorbito, in pascal, dard tollerando lievi deviazioni dall'ideale.
Va = volume del gas adsorbito alla temperatura e alla

itnemogrA
pressione standard (STP) [273,15 K e pressione II.2. MISURA PUNTO SINGOLO

ilareneG
atmosferica (1,013 105 Pa)], in millilitri, Normalmente, almeno tre misurazioni di Va ciascuna a
differenti valori di P/Po sono richieste per la determina-
Vm = volume del gas adsorbito alla temperatura e alla zione dell'area superficiale
pressione standard per produrre un monostrato di adsorbimento del flussospecifica mediante la tecnica

eifargonoM
apparente sulla superficie del campione, in mil- o mediante adsorbimento volumetrico di gas(Metodo
di gas dinamico I)

ilareneG
lilitri, (Metodo
II). Comunque, in alcune circostanze descritte sotto,
C = costante relativa alla entalpia di adsorbimento puo© essere accettabile determinare l'area superficiale

ehcituecamraF
del gas adsorbito sul campione di polvere. specifica di una polvere da un valore singolo di Va
misurato ad un valore singolo di P/Po come 0,300 (cor-

emroF
Un valore di Va e© misurato in ciascuno di non meno di rispondente a 0,300 moli di azoto o ad una frazione
tre valori di P/Po. molare di Kripton pari a 0,001038), usando la seguente
equazione per il calcolo di Vm:
Poi il valore BET 
P 

eiretaM

emirP
Vm Va 1 P
ˆ ÿ 3 †

2 ÿP
1 o
Va Po 113
ÿ

L'area superficiale specifica e© calcolata dal valore di Vm

ehcituecamraF
inoizaraperP

mediante l'equazione (2) descritta sopra.

ehcificepS

e© portato in diagramma in funzione di P/Po secondo

l'equazione (1). Questo tracciato dovrebbe dare una Il metodo a punto singolo puo© essere impiegato diretta-
linea retta nell'intervallo di pressione relativa approssi- mente per una serie di campioni di polvere di un dato
mata da 0,05 a 0,3. I dati sono considerati accettabili materiale per il quale la costante C del materiale e© mag-
ehcitapoemO
inoizaraperP

se il coefficiente di correlazione r della regressione giore dell'unita© . Queste circostanze possono essere veri-
lineare non e© inferiore a 0,9975; cioe© r2 non e© inferiore ficate confrontando i valori dell'area superficiale speci-
a 0,995. Dal tracciato lineare risultante, la pendenza, fica determinati con il metodo a punto singolo con
che e© uguale a (C-1)/VmC, e l'intercetta, che e© uguale a quelli determinati con il metodo a punto multiplo per
1/VmC, sono valutate con l'analisi di regressione le serie di campioni di polvere. Una stretta somiglianza
lineare. Da questi valori Vm e© calcolato come 1/(pen- tra i valori del punto singolo e i valori del punto multi-
ecidnI

denza + intercetta), mentre C e© calcolato come (pen- plo suggerisce che 1/C si avvicina a zero.

301
Area superficiale specifica mediante adsorbimento di gas

Il metodo del punto singolo puo© essere impiegato indi-

mento di molte sostanze e© spesso ottenuto applicando
rettamente per una serie di campioni di polvere moltoun vuoto o purificando il campione in una corrente di
un gas inerte, secco. In altri casi sono applicate qualche
simili di un dato materiale per il quale la costante C
volta temperature elevate per aumentare la velocita©
non e© infinita ma puo© essere assunta come non varia-
con cui i contaminanti lasciano la superficie. Il degassa-
bile. In queste circostanze, l'errore associato con il
metodo del punto singolo puo© essere ridotto o elimi-mento mediante riscaldamento della polvere campione
nato usando il metodo del punto multiplo per valutarepuo© cambiare la natura della superficie e dovrebbe
C per uno dei campioni della serie del tracciato BET,essere evitato, se non indicato specificamente.
Se viene applicato il riscaldamento, la temperatura rac-
dal quale C e© calcolata come (1 + pendenza/intercetta).
comandata e il tempo di degassamento sono il piu© pos-
Poi Vm e© calcolato dal valore singolo di Va misurato ad
un valore singolo di P/Po con l'equazione: sibile bassi in modo da ottenere misure riproducibili
dell'area superficiale specifica entro uno spazio di

P o

1 C 1  
P tempo accettabile. Per il degassamento di campioni
Vm Va P 1 C C
ˆ ÿ ‡
ÿ
2
Po 4sensibili, possono essere impiegati altri metodi di
†

degassamento come il metodo ciclico dell'adsorbi-

L'area superficiale specifica e© calcolata da Vm con mento-desorbimento.
l'equazione (2) descritta sopra. III.1.2. Adsorbati

III. TECNICHE SPERIMENTALI La tecnica standard e© l'adsorbimento di azoto alla tem-

Questa sezione descrive i metodi da usare per la prepa- peratura dell'azoto liquido.
razione del campione, la tecnica del flusso di adsorbi- Per le 2 polveri di bassa area superficiale specifica
mento di gas dinamico (Metodo I) e la tecnica di adsor- (< 1 m .g-1) la proporzione adsorbita e© bassa, l'uso di
bimento di gas volumetrico (Metodo II). kripton alla temperatura dell'azoto liquido e© preferito
in tali casi perchë la bassa pressione di vapore esercitata
III.1. PREPARAZIONE DEL CAMPIONE da questo gas riduce molto l'errore.
Tutti i gas usati devono essere privi di umidita© .
III.1.1. Degassamento

Prima di poter determinare l'area superficiale specifica III.1.3. Quantita© di campione

del campione, e© necessario rimuovere i gas e i vapori Pesare accuratamente una quantita© della polvere in
che possono essere fisicamente adsorbiti sulla superfi- esame in modo che la superficie totale del campione
cie dopo la produzione e durante il trattamento, maneg- sia almeno 1 m2 quando l'adsorbito e© l'azoto e 0,5 m2
giamento e conservazione. Se non si ottiene il degassa- quando l'adsorbito e© il kripton.
mento, l'area superficiale specifica puo© essere ridotta o
puo© essere variabile perchë un'area intermedia della III.2. MISURE
superficie e© ricoperta con le molecole dei gas o dei
vapori previamente adsorbiti. Le condizioni di degassa- Poichë la quantita© di gas adsorbito ad una data pres-
mento sono critiche per ottenere la precisione e l'accu- sione tende ad aumentare con l'abbassarsi della tempe-
ratezza richieste delle misure dell'area superficiale spe- ratura, le misure di adsorbimento sono fatte usual-
cifica delle preparazioni farmaceutiche a causa della mente ad una temperatura bassa. La misurazione e© ese-
superficie dei materiali. guita a 196 ‘C, il punto di ebollizione dell'azoto
ÿ

liquido.
Condizioni. Si deve dimostrare che le condizioni di
degassamento danno tracciati BET riproducibili, un
peso costante della polvere in esame, e cambiamenti III.2.1. Metodo I: il metodo del flusso dinamico

fisici o chimici nella polvere in esame non rivelabili. III.2.1.1. Principio del metodo
Le condizioni di degassamento definite dalla tempera- Nel metodo del flusso dinamico (vedi Figura 2.9.26.-1),
tura, dalla pressione e dal tempo dovrebbero essere il gas adsorbito raccomandato e© azoto secco o kripton,
scelte in modo che la superficie originale del solido sia mentre l'elio e© impiegato come gas diluente, che non e©
riprodotta in modo il piu© possibile simile. Il degassa- adsorbito nelle condizioni raccomandate.

302
 Area superficiale specifica mediante adsorbimento di gas

inoizircserP
Un minimo di tre miscele del gas adsorbito appropriato adsorbito per unita© di area del picco (l'aria puo© essere

ilareneG
con l'elio sono richieste entro l'intervallo P/Po com- usata al posto dell'azoto poichë ha la stessa condutti-
preso tra 0,05 e 0,30. vita© termica).
Il rivelatore-integratore del gas dovrebbe produrre un Usare una miscela di azoto/elio per una determina-
segnale che e© approssimativamente proporzionale al zione a punto singolo e diverse di tali miscele o due cor-

isilanA id
idoteM
volume del gas che lo attraversa in condizioni definite renti premiscelate di gas per una determinazione a
di temperatura e pressione. Per questo scopo, un rivela- punto multiplo.
tore di conduttivita© termica con un integratore elettro- Il calcolo e© essenzialmente lo stesso come per il metodo
nico e© uno fra i vari tipi adatti. Deve essere determinato volumetrico.
un minimo di tre punti entro l'intervallo raccomandato

irotinetnoC
/ ilairetaM
compreso tra 0,05 e 0,30 per P/Po. III.2.2. Metodo II: il metodo volumetrico

III.2.2.1. Principio del metodo

Nel metodo volumetrico (vedi Figura 2.9.26.-2), il gas
adsorbito raccomandato e© l'azoto che e© immesso nello

ivittaeR
spazio evacuato sopra la polvere campione previa-
mente degassata per dare una pressione equilibrata
definita P del gas. L'uso di un gas diluente come l'elio,
non e© percio© necessario, benchë l'elio possa essere

itnemogrA
ilareneG
impiegato per altri scopi, come per misurare il volume
vuoto.
Poichë e© impiegato solo gas puro adsorbito, invece di
una miscela di gas, effetti interferenti di diffusione ter-
mica in questo metodo sono evitati.

eifargonoM

ilareneG
III.2.2.2. Procedimento
Immettere una piccola quantita© di azoto secco nel tubo

ehcituecamraF
Figura 2.9.26.-1. Schema dell'apparecchiatura del campione per prevenire la contaminazione della super-
metodo a flusso dinamico ficie pulita, rimuovere il tubo campione, inserire la

emroF
chiusura e pesarlo. Calcolare il peso del campione.
III.2.1.2. Procedimento Connettere il tubo campione con l'apparecchio volume-
trico. Evacuare cautamente il campione ad una pres-
Una miscela nota di gas, usualmente azoto ed elio, e© sione di 2,66 Pa o meno.
fatta passare attraverso una cella a conduttivita© ter-
eiretaM

emirP
mica, attraverso il campione e di nuovo attraverso la Se il principio di impiego dello strumento richiede la
cella a conduttivita© termica e poi ad un potenziometro determinazione del volume vuoto nel tubo campione,
di registrazione. per esempio, con l'immissione di un gas non adsorbito,
come l'elio, questa procedura e© effettuata a questo
ehcituecamraF

Immergere la cella campione nell'azoto liquido, quindi

inoizaraperP

punto, seguita dall'evacuazione del campione a 2,66 Pa

ehcificepS

il campione adsorbe azoto dalla fase mobile. Questo o meno. L'adsorbimento di azoto gassoso e© poi misu-
squilibra la cella a conduttivita© termica e si genera un rato come descritto sotto.
segnale su un registratore. Sollevare un recipiente Dewar contenente azoto liquido
Rimuovere dal liquido refrigerante; questo da© un picco a 196 ‘C fino ad un punto definito sulla cella cam-
ehcitapoemO
inoizaraperP

di desorbimento uguale nell'area e in direzione opposta pione. Immettere un volume sufficiente di azoto gas-
al picco di adsorbimento. Poichë questo e© definito soso per dare una pressione relativa P/Po uguale a
meglio del picco di adsorbimento, e© l'unico usato per 0,10 0,02. Misurare il volume adsorbito Va. Ripetere
6

la determinazione. la misura di Va ai valori P/Po di 0,20 0,02 6

Per effettuare la taratura, iniettare nel sistema aria suf- e 0,30 0,02.
6
ecidnI

ficiente per dare un picco di grandezza simile al picco E' richiesto un minimo di tre punti. Possono essere
di desorbimento e per ottenere la proporzione di gas effettuate misure aggiuntive specialmente in quelle rare

303
Saggio per la massa o il volume rilasciabile di preparazioni liquide e semi-solide

occasioni in cui si e© ottenuta una non-linearita© ad un 2.9.27. UNIFORMITAé DI MASSA DELLE DOSI

valore P/Po vicino a 0,3. Poichë la non-linearita© e© RILASCIATE DA CONTENITORI MULTI-

spesso ottenuta a P/Po o sotto lo 0,05, i valori in questa DOSE

regione non sono raccomandati. Il saggio per la linea- Il saggio seguente e© rivolto alle forme farmaceutiche orali
rita© , il trattamento dei dati e il calcolo dell'area superfi- come granuli, polveri per uso orale e liquidi per uso orale,
ciale specifica del campione sono descritti sopra. che sono forniti in contenitori multidose dotati di un
dispositivo di misurazione integrale.
IV. MATERIALI DI RIFERIMENTO Pesare individualmente venti dosi prese a caso da uno o
piu© contenitori con il dispositivo di misurazione inte-
Verificare periodicamente la funzionalita© dell'apparec- grale e determinare le masse individuali e medie. Non
chio usando materiali di riferimento appropriati di area piu© di due delle masse individuali deviano dalla massa
superficiale nota che dovrebbero avere un'area superfi- media di piu© del 10 per cento e nessuna devia di piu© del
ciale specifica simile a quella del campione da esami- 20 per cento.
nare.
2.9.28. SAGGIO PER LA MASSA O IL VOLUME

RILASCIABILE DI PREPARAZIONI

LIQUIDE E SEMI-SOLIDE

Il saggio si applica alle preparazioni liquide (soluzioni,

emulsioni e sospensioni) e semi-solide fornite in conteni-
tori a dose singola dove viene usata solo parte del
contenuto.
PREPARAZIONI LIQUIDE
Svuotare il piu© completamente possibile il contenuto di
un contenitore e determinare la massa o il volume del
contenuto come appropriato. Nel caso di emulsioni o
sospensioni, agitare il contenitore prima della determi-
nazione. La massa o il volume non e© inferiore alla
quantita© indicata sull'etichetta.
PREPARAZIONI SEMI-SOLIDE
Figura 2.9.26.-2. Diagramma schematico Svuotare il piu© completamente possibile il contenuto di
dell'apparecchiatura per il metodo volumetrico un contenitore. La massa del contenuto non e© inferiore
a quella che e© indicata sull'etichetta.

304
 3. Materiali usati nella

inoizircserP

ilareneG
fabbricazione di contenitori e
contenitori

isilanA id
idoteM

irotinetnoC
/ ilairetaM
3.1. Materiali usati nella fabbricazione di 3.2. Contenitori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 357
contenitori . . . . . . . . . . . . . . . . . . 309

ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 3.1. Materiali usati nella

inoizircserP

ilareneG
fabbricazione di contenitori

isilanA id
idoteM
3.1. Materiali usati nella fabbricazione di 3.1.8. Olio di silicone usato come lubrifi-
contenitori . . . . . . . . . . . . . . . . . . 309 cante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 335

irotinetnoC
/ ilairetaM
3.1.1. Materiali per contenitori per sangue 3.1.9. Silicone elastomero per chiusure e
umano e sue frazioni . . . . . . . . . . 309 tubolature . . . . . . . . . . . . . . . . . . 336
3.1.1.1. Materiali a base di polivinile cloruro 3.1.10. Materiali a base di polivinile cloruro
plastificato per contenitori per non plastificato per contenitori
sangue umano e sue frazioni . . . . 309 per soluzioni acquose non inietta-
3.1.1.2 Materiali a base di polivinile cloruro bili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 338

ivittaeR
plastificato per tubi usati per la 3.1.11. Materiali a base di polivinile cioruro
trasfusione di sangue e sue frazioni 314 non plastificato per contenitori
3.1.3. Poliolefine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 316 per forme farmaceutiche essiccate
3.1.4. Polietilene senza additivi per conteni- per somministrazione orale . . . . . 341

itnemogrA
tori per preparazioni parenterali 3.1.13. Additivi per plastica . . . . . . . . . . . . 344

ilareneG
ed oftalmiche . . . . . . . . . . . . . . . . 322 3.1.14. Materiali a base di polivinile cloruro
3.1.5. Polietilene con additivi per conteni- plastificato per contenitori per
tori per preparazioni parenterali ed soluzioni acquose per infusione
oftalmiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 323 endovenosa . . . . . . . . . . . . . . . . . 347

eifargonoM
3.1.6. Polipropilene per contenitori e chiu- 3.1.15. Polietilene tereftalato per contenitori

ilareneG
sure per preparazioni parenterali per preparazioni per uso non
ed oftalmiche . . . . . . . . . . . . . . . . 328 parenterale . . . . . . . . . . . . . . . . . . 351
3.1.7. Etilene-vinile acetato copolimero per
contenitori e tubolature per prepa-

ehcituecamraF
razioni destinate alla nutrizione

emroF
parenterale totale . . . . . . . . . . . . . 333

eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Materiali a base di polivinile cloruro plastificato per contenitori per sangue umano e sue frazioni

inoizircserP
PRODUZIONE

ilareneG
3.1. MATERIALI USATI NELLA FABBRI-

CAZIONE DI CONTENITORI
I materiali a base di polivinile cloruro plastificato sono
I materiali descritti in questo capitolo sono utilizzati prodotti con metodi di polimerizzazione che assicurano
per la produzione di contenitori per uso farmaceutico. un residuo di vinile cloruro inferiore a 1 ppm. Il metodo
utilizzato per la produzione e© validato per dimostrare

isilanA id
Possono anche essere usati per la produzione di stru-

idoteM
menti o parti di strumenti per uso medico-chirurgico. che il prodotto soddisfa al seguente saggio:
Materiali e polimeri diversi da quelli descritti in Farma- Vinile cloruro . Non piu© di 1 ppm, determinato con gas
copea possono essere utilizzati previa autorizzazione, cromatografia a spazio di testa (2.2.28), utilizzando
caso per caso, da parte dell'autorita© competente etere R come standard interno.

irotinetnoC
/ ilairetaM
responsabile dell'autorizzazione alla vendita della pre- Soluzione dello standard interno. Utilizzando una
parazione presente nel contenitore. microsiringa, iniettare 10 ml di etere R in 20,0 ml di
dimetilacetammide R, immergendo la punta dell'ago
nel solvente. Immediatamente prima dell'uso, diluire
3.1.1. MATERIALI PER CONTENITORI PER SAN- la soluzione a 1000 volte il suo volume con dimetilace-
tammide R.

ivittaeR
GUE UMANO E SUE FRAZIONI

NOTA: per materiali a base di polivinile cloruro plastifi- Soluzione in esame. Introdurre 1,000 g del materiale
cato utilizzati per contenitori per soluzioni acquose per in esame in un flaconcino da 50 ml ed aggiungere
infusione endovenosa, vedere paragrafo 3.1.14. 10,0 ml della soluzione dello standard interno.
Chiudere il flaconcino e fissare il tappo. Agitare, evi-

itnemogrA
ilareneG
I contenitori in plastica per la raccolta, conservazione e tando il contatto tra il tappo e il liquido. Porre il flacon-
somministrazione di sangue e delle sue frazioni pos- cino a b.m. a 60 1 ‘C per 2 h.
6

sono essere fabbricati con uno o piu© polimeri, se neces- Soluzione madre di vinile cloruro. Preparare sotto cappa
sario con alcuni additivi. ventilata. Introdurre 50,0 ml di dimetilacetammide R

eifargonoM
Se una parte o tutto il contenitore e© costituito da mate- in un flaconcino da 50 ml, chiudere, fissare il tappo e

ilareneG
riale riportato in Farmacopea, la qualita© del materiale pesare con la precisione di 0,1 mg. Riempire una
e© controllata con i metodi indicati in quel testo (Vedere siringa di polietilene o di polipropilene da 50 ml con
3.1.1.1. Materiali a base di polivinile cloruro plastificato vinile cloruro R gassoso, lasciare che il gas rimanga a
per contenitori per sangue umano e sue frazioni). contatto con la siringa per circa 3 min, vuotare

ehcituecamraF
In normali condizioni di uso i materiali e i contenitori la siringa e riempirla di nuovo con 50 ml di vinile cloru-
ro R gassoso. Applicare alla siringa un ago ipodermico

emroF
prodotti con i suddetti materiali non rilasciano mono- e ridurre il volume di gas nella siringa da 50 ml a
meri, o altre sostanze, in quantita© tale da costituire un 25 ml. Iniettare lentamente i rimanenti 25 ml di vinile
pericolo e non portano neppure a modificazioni anor- cloruro nel flaconcino, agitando leggermente ed evi-
mali del sangue e sue frazioni. tando il contatto fra il liquido e l'ago. Pesare di nuovo

eiretaM
il flaconcino; l'aumento di massa e© di circa 60 mg

emirP
(1 ml della soluzione cos|© ottenuta contiene circa 1,2 g l
3.1.1.1. MATERIALI A BASE DI POLIVINILE CLO-
di vinile cloruro). Lasciare a riposo per 2 h. Conservare
RURO PLASTIFICATO PER CONTENITORI

PER SANGUE UMANO E SUE FRAZIONI

la soluzione madre in frigorifero. ehcituecamraF

Vinile cloruro soluzione standard. Ad 1 volume della

inoizaraperP

ehcificepS

soluzione madre di vinile cloruro aggiungere 3 volumi

DEFINIZIONE di dimetilacetammide R.
I materiali a base di polivinile cloruro plastificato con- Soluzioni di riferimento. Introdurre 10,0 ml della solu-
zione dello standard interno in ciascuno di sei flacon-
ehcitapoemO

tengono non meno del 55 per cento di polivinile cloruro

inoizaraperP

e contengono vari additivi, oltre a polimeri ad elevata cini da 50 ml. Chiudere i flaconcini e fissare i tappi.
massa molecolare ottenuti per polimerizzazione del Iniettare in cinque flaconcini, rispettivamente, 1 ml,
cloruro di vinile. 2 ml, 3 ml, 5 ml e 10 ml della soluzione standard di vinile
cloruro. Le sei soluzioni cos|© ottenute contengono,
I materiali a base di polivinile cloruro plastificato per rispettivamente, 0 g, circa 0,3 g, 0,6 g, 0,9 g,
l l l l

contenitori per il sangue umano e sue frazioni sono 1,5 g e 3 g di vinile cloruro. Agitare, evitando il con-
l l
ecidnI

definiti secondo la natura e le proporzioni delle tatto tra il tappo e il liquido. Porre i flaconcini a b.m. a
sostanze utilizzate nella loro produzione. 60 1 ‘C per 2 h.
6

309
Materiali a base di polivinile cloruro plastificato per contenitori per sangue umano e sue frazioni

Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito Il produttore del materiale deve essere in grado di
usando: dimostrare che la composizione qualitativa e quantita-
^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 3 m e con tiva del campione sia soddisfacente per ogni lotto di
un diametro interno di 3 mm impaccata con terra produzione.
d'infusori silanizzata per gas cromatografia R
impregnata con il 5 per cento m/m di dimetilsteari-
lammide R e con il 5 per cento m/m di macro- CARATTERI
gol 400 R,
^ azoto per cromatografia R come gas di trasporto ad Polvere, palline, granuli o, dopo trasformazione,
una velocita© di 30 ml/min, lamine traslucide di spessore variabile o contenitori,
^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma. incolori o giallo pallido con un leggero odore. Per com-
bustione produce un fumo nero e denso.
Mantenere la temperatura della colonna a 45 ‘C, quella
della camera di iniezione a 100 ‘C e quella del rivelatore
a 150 ‘C. IDENTIFICAZIONE
Iniettare 1 ml dello spazio di testa di ciascun flacon-
cino. Calcolare il contenuto di vinile cloruro. Se necessario, prima dell'uso, tagliare i campioni del
. Un certo numero di additivi viene addizionato materiale da esaminare in pezzi della dimensione mas-
Additivi

ai polimeri per ottimizzare le loro caratteristiche chimi- sima su un lato non superiore a 1 cm.
che, fisiche e meccaniche e cos|© renderli piu© adatti A 2,0 g del materiale in esame aggiungere 200 ml
all'uso previsto. Tutti questi additivi sono scelti dalla di etere esente da perossidi R e scaldare a ricadere
lista seguente che specifica per ogni prodotto il quanti- per 8 h. Separare per filtrazione il residuo B e la solu-
tativo massimo permesso: zione A.
^ non piu© del 40 per cento di di(2-etilesil)ftalato
(additivo per plastica 01), Evaporare a secco la soluzione A a pressione ridotta su
^ non piu© dell'1 per cento di zinco ottanoato b.m. a 30 ‘C. Disciogliere il residuo in 10 ml di tolue-
(zinco 2-etilesanoato) (additivo per plastica 02), ne R (soluzione A1). Disciogliere il residuo B in 60 ml
^ non piu© dell'1 per cento di calcio stearato o di di dicloroetano R, scaldando a ricadere su b.m. Filtrare.
zinco stearato o dell'1 per cento di una miscela Aggiungere la soluzione, goccia a goccia e agitando
dei due, energicamente, a 600 ml di eptano R scaldato quasi
all'ebollizione. Separare il coagulo B1 dalla soluzione
^ non piu© dell'1 per cento di N,N'-diaciletilendiam- organica per filtrazione a caldo. Lasciare raffreddare
mine (additivo per plastica 03), quest'ultima; separare il precipitato B2 che si forma e
^ non piu© del 10 per cento di uno dei due oli epossi- filtrare attraverso un filtro di vetro poroso tarato (40).
dati seguenti o non piu© del 10 per cento di una loro A. Disciogliere il coagulo B1 in 30 ml di tetraidrofura-
miscela: no R e aggiungere, poco per volta e agitando,
^ olio di soia epossidato (additivo per pla- 40 ml di etanolo R. Separare per filtrazione il pre-
stica 04), il cui titolo in ossigeno ossiranico e© cipitato B3 e seccare sotto vuoto su anidride fosfo-
compreso tra il 6 per cento e l'8 per cento e il rica R a una temperatura non superiore a 50 ‘C.
cui indice di iodio non e© superiore a 6, Disciogliere pochi milligrammi di precipitato B3
^ olio di lino epossidato (additivo per pla- in 1 ml di tetraidrofurano R, mettere poche gocce
stica 05), il cui titolo in ossigeno ossiranico della soluzione ottenuta su una lamina di sodio
non e© superiore al 10 per cento e il cui indice cloruro ed evaporare a secco in stufa a 100-105 ‘C.
di iodio non supera il 7. Esaminare mediante spettrofotometria di assorbi-
Quantita© molto piccole di antiossidanti aggiunti al mento infrarosso (2.2.24), in confronto con lo spet-
monomero vinile cloruro possono essere presenti nel tro ottenuto con polivinile cloruro SCR.
polimero. B. Esaminare il residuo C ottenuto nel saggio degli
Nessun additivo antiossidante puo© essere aggiunto al additivi per plastica 01, 04 e 05 mediante spettro-
polimero. fotometria di assorbimento infrarosso (2.2.24), in
Il blu ultramarino e© l'unico colorante che puo© essere confronto con lo spettro ottenuto con l'additivo
aggiunto. per plastica 01 SCR.

310
 Materiali a base di polivinile cloruro plastificato per contenitori per sangue umano e sue frazioni

inoizircserP
SAGGI sodio nitrito R preparata di recente. Mescolare e

ilareneG
Se necessario, prima dell'uso, tagliare i campioni del lasciare a riposo per 1 min. Aggiungere 0,8 ml di
materiale da esaminare in pezzi della dimensione mas- una soluzione (25 g/l) di ammonio solfammato R.
sima su un lato non superiore a 1 cm. Lasciare a riposo per 1 min e aggiungere 2 ml di una
soluzione (5 g/l) di naftiletilendiammina dicloridrato R.
. Introdurre 5,0 g del materiale in esame in Dopo 30 min, l'eventuale colorazione della soluzione

isilanA id
idoteM
Soluzione S1

un matraccio da combustione. Aggiungere 30 ml di non e© piu© intensa di quella di una preparazione di riferi-
acido solforico R e scaldare fino ad ottenere una massa mento preparata contemporaneamente e nello stesso
sciropposa nera. Raffreddare ed aggiungere, con cau- modo utilizzando, al posto della fase acquosa, una
tela, 10 ml di idrogeno perossido soluzione concentra- miscela di 1 ml di una soluzione (0,01 g/l) di naftilam-
ta R. Scaldare leggermente. Lasciar raffreddare ed

irotinetnoC
mina R in acido cloridrico 0,1 M, 5 ml di acqua R e

/ ilairetaM
aggiungere 1 ml di idrogeno perossido soluzione concen- 4 ml di acido cloridrico 0,1 M (20 ppm).
trata R; ripetere alternando l'evaporazione e l'aggiunta . Esaminare mediante
di idrogeno perossido soluzione fino ad ottenere un Additivi per plastica 01, 04 e 05

cromatografia su strato sottile (2.2.27), usando una

liquido incolore. Concentrare fino a circa 10 ml, raf- lastra di gel di silice GF254 R, di 1 mm di spessore.
freddare e diluire a 50,0 ml con acqua R.

ivittaeR
Soluzione S2 . Introdurre 25 g del materiale in esame in Soluzioni di riferimento. Preparare soluzioni con
un pallone di vetro borosilicato. Aggiungere 500 ml di 0,1 mg/ml di additivo per plastica 01 SCR, additivo per
acqua per preparazioni iniettabili R e coprire il collo del plastica 04 SCR e additivo per plastica 05 SCR rispetti-
pallone con un recipiente di vetro borosilicato. Scaldare vamente, in toluene R.
in autoclave a 121 2 ‘C per 20 min. Lasciar raffred-

itnemogrA
ilareneG
6

dare e decantare la soluzione. Riportare il volume a Deporre sulla lastra, come una banda di 30 mm
500 ml. per 3 mm, 0,5 ml della soluzione A1, ottenuta durante
. La soluzione S2 e© limpida l'identificazione. Deporre sulla lastra 5 ml di ciascuna
soluzione di riferimento. Eluire per un percorso di
Aspetto della soluzione S 2

(2.2.1) ed incolore (Metodo II, 2.2.2). 15 cm usando toluene R. Seccare accuratamente la

eifargonoM
. A 100 ml di soluzione S2, aggiun-

ilareneG
Acidita© o alcalinita©

gere 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R. Non sono lastra. Esaminare alla luce ultravioletta a 254 nm e
necessari piu© di 1,5 ml di sodio idrossido soluzio- localizzare la zona corrispondente all'additivo per pla-
ne 0,01 M per far virare al blu l'indicatore. A 100 ml di stica 01 (Rf circa 0,4). Rimuovere l'area di gel di silice
soluzione S2 aggiungere 0,2 ml di metilarancio soluzio- corrispondente a questa zona e agitare con 40 ml di ete-
re R per 1 min. Filtrare, sciacquare con due porzioni,

ehcituecamraF
ne R. Perchë inizi il viraggio dell'indicatore da giallo ciascuna di 10 ml, di etere R, aggiungere i liquidi di

emroF
ad arancio non e© necessario piu© di 1,0 ml di acido clori- risciacquo al filtrato ed evaporare a secco. Il residuo C
drico 0,01 M. pesa non piu© di 40 mg.
Assorbanza (2.2.25). Evaporare a secco 100 ml di solu- Esporre la lastra ai vapori di iodio per 5 min. Esami-
zione S2. Disciogliere il residuo in 5,0 ml di esano R. nare il cromatogramma e localizzare la banda corri-
L'assorbanza, a lunghezza d'onda compresa tra spondente agli additivi per plastica 04 e 05 (Rf = 0).
eiretaM

emirP
250 nm e 310 nm, non e© superiore a 0,25. Prelevare l'area di gel di silice corrispondente a questa
Sostanze riducenti . Effettuare il saggio entro 4 h dalla banda. Allo stesso modo, prelevare un'area corrispon-
preparazione della soluzione S2. A 20,0 ml di soluzione dente di gel di silice come bianco. Agitare separata-
S2 aggiungere 1 ml di acido solforico diluito R e 20,0 ml mente entrambi i campioni per 15 min con 40 ml di
ehcituecamraF
inoizaraperP

di potassio permanganato 0,002 M. Bollire a ricadere

ehcificepS

per 3 min e raffreddare immediatamente. Aggiungere metanolo R. Filtrare, sciacquare con due porzioni, cia-
1 g di potassio ioduro R e titolare immediatamente con scuna di 10 ml, di metanolo R, aggiungere i liquidi di
sodio tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di amido solu- risciacquo al filtrato ed evaporare a secco. La diffe-
zione R, come indicatore. Effettuare una titolazione in renza fra le masse non e© superiore a 10 mg.
ehcitapoemO

. Lavare il precipitato B2 otte-

inoizaraperP

bianco usando 20 ml di acqua per preparazioni iniettabi- Additivo per plastica 03

li R. La differenza fra i volumi utilizzati nelle due tito- nuto durante l'identificazione e trattenuto sul filtro di
lazioni non e© superiore a 2,0 ml. vetro sinterizzato tarato (40) con etanolo R. Seccare a
. A 2,5 ml di soluzione A1, massa costante su anidride fosforica R e pesare il filtro.
Ammine aromatiche primarie

ottenuta durante l'identificazione, aggiungere 6 ml di Il precipitato pesa non piu© di 20 mg.

acqua R e 4 ml di acido cloridrico 0,1 M. Agitare energi- Esaminare il residuo mediante spettrofotometria di
ecidnI

camente ed eliminare la fase superiore. Alla fase assorbimento infrarosso (2.2.24), in confronto con lo
acquosa aggiungere 0,4 ml di una soluzione (10 g/l) di spettro ottenuto con l'additivo per plastica 03 SCR.

311
Materiali a base di polivinile cloruro plastificato per contenitori per sangue umano e sue frazioni

Bario . Non piu© di 5 ppm di Ba, determinato mediante Soluzione di riferimento. Introdurre 2 ml di una solu-
spettrometria di emissione atomica in plasma di argon zione standard di stagno (Sn 5 ppm) R in un pallone da
(Metodo I, 2.2.22). 50 ml contenente 5 ml di una soluzione al 20 per cento
Soluzione in esame. Calcinare 1,0 g di materiale in V/V di acido solforico R e diluire a 50 ml con acqua R
esame in un crogiolo di silice. Riprendere il residuo immediatamente prima dell'uso.
con 10 ml di acido cloridrico R ed evaporare a secco a Effettuare la determinazione usando l'emissione dello
b.m. Riprendere il residuo con 20 ml di acido cloridri- stagno a 189,99 nm, valutando il fondo spettrale a
co 0,1 M. 190,10 nm.
Soluzione di riferimento. E' una soluzione contenente Verificare l'assenza di stagno nell'acido solforico usato.
0,25 ppm di bario preparata per diluizione di una solu- . Non piu© dello 0,2 per cento di Zn, determinato
zione standard di bario (Ba 50 ppm) R con acido clori-
Zinco

mediante spettrometria di assorbimento atomico

drico 0,1 M. (Metodo I, 2.2.23).
Effettuare la determinazione usando l'emissione del Soluzione in esame. Diluire la soluzione S1 100 volte con
bario a 455,40 nm, valutando il fondo spettrale a acido cloridrico 0,1 M.
455,30 nm. Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
Verificare l'assenza di bario nell'acido cloridrico usato. mento utilizzando una soluzione standard di zinco
Cadmio . Non piu© di 0,6 ppm di Cd, determinato (Zn 100 ppm) R diluita con acido cloridrico 0,1 M.
mediante spettrometria di assorbimento atomico Misurare l'assorbanza a 213,9 nm usando come sor-
(Metodo I, 2.2.23). gente di radiazione una lampada a catodo cavo allo
Soluzione in esame. Evaporare a secco 10 ml della solu- zinco ed una fiamma aria-acetilene.
zione S1. Riprendere il residuo con 5 ml di una solu- Verificare l'assenza di zinco nell'acido cloridrico usato.
zione all'1 per cento V/V di acido cloridrico R, filtrare (2.4.8). A 10 ml della soluzione S1
e diluire il filtrato a 10,0 ml con lo stesso acido. Metalli pesanti

aggiungere 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R e poi

Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- sodio idrossido soluzione concentrata R fino a debole
mento utilizzando una soluzione standard di cadmio colorazione rosa. Diluire a 25 ml con acqua R. 12 ml
(Cd 0,1 per cento) R diluita con una soluzione all'1 per della soluzione soddisfano al saggio limite A per i
cento V/V di acido cloridrico R. metalli pesanti (50 ppm). Preparare la soluzione di rife-
Misurare l'assorbanza a 228,8 nm usando come sor- rimento usando una soluzione standard di piom-
gente di radiazione una lampada a catodo cavo al cad- bo (Pb 2 ppm) R.
mio ed una fiamma aria-acetilene. Sostanze estraibili in . Evaporare 50 ml della
acqua

Verificare l'assenza di cadmio nell'acido cloridrico soluzione S2 a secco su b.m. ed essiccare in stufa a
usato. 100-105 ‘C fino a massa costante. Effettuare un saggio
. Non piu© dello 0,07 per cento di Ca, determinato in bianco con 50,0 ml di acqua per preparazioni inietta-
bili R. Il residuo pesa non piu© di 7,5 mg (0,3 per cento)
Calcio

mediante spettrometria di emissione atomica in plasma

di argon (Metodo I, 2.2.22). considerando il saggio in bianco.
Soluzione in esame. Usare la soluzione in esame prepa-
rata per la determinazione del bario. DETERMINAZIONE QUANTITATIVA
Soluzione di riferimento. Preparare la soluzione di riferi- Eseguire il metodo della combustione in ossigeno
mento contenente 50,0 ppm di calcio per diluizione di (2.5.10) usando 50,0 mg. Far assorbire i prodotti di
una soluzione standard di calcio (Ca 400 ppm) R con combustione in 20 ml di sodio idrossido 1 M. Alla solu-
acido cloridrico 0,1 M.
zione ottenuta aggiungere 2,5 ml di acido nitrico R,
Effettuare la determinazione usando l'emissione del 10,0 ml di argento nitrato 0,1M, 5 ml di ferro(-ico)
calcio a 315,89 nm, valutando il fondo spettrale a ammonico solfato soluzione R2 ed 1 ml di dibutile ftala-
315,60 nm. to R. Titolare con ammonio tiocianato 0,05M fino a
Verificare l'assenza di calcio nell'acido cloridrico usato. colorazione giallo-rossastra. Effettuare una determina-
Stagno . Non piu© di 20 ppm di Sn, determinato zione in bianco.
mediante spettrometria di emissione atomica in plasma 1 ml di argento nitrato 0,1 M equivale a 6,25 mg di poli-
di argon. (Metodo I, 2.2.22). vinile cloruro.
Soluzione in esame. Diluire la soluzione S1 dieci volte In piu© , i saggi seguenti si eseguono su contenitori sterili e
con acqua R immediatamente prima dell'uso. vuoti.

312
 Materiali a base di polivinile cloruro plastificato per contenitori per sangue umano e sue frazioni

inoizircserP
. Se il contenitore in esame contiene una (2.2.25). Misurare l'assorbanza della solu-

ilareneG
Soluzione S3 Assorbanza

soluzione anticoagulante, vuotare il contenitore e zione S3 tra 230 nm e 360 nm, usando la soluzione di
lavare l'interno con 250 ml di acqua per preparazioni riferimento come liquido di compensazione. Alle lun-
iniettabili R a 20 1 ‘C e scartare l'acqua di lavaggio
6 ghezze d'onda tra 230 nm e 250 nm, l'assorbanza non
prima di preparare la soluzione S3. Introdurre nel e© superiore a 0,30. Alle lunghezze d'onda tra 251 nm e
contenitore un volume di acqua per preparazioni inietta- 360 nm, l'assorbanza non e© superiore a 0,10.

isilanA id
idoteM
bili R corrispondente al volume della soluzione. . Usare, come solvente
Chiudere il contenitore e scaldarlo in autoclave in Additivo per plastica 01 estraibile

di estrazione, etanolo R diluito con acqua R per otte-

modo tale che la temperatura del liquido si mantenga nere una densita© relativa (2.2.5) tra 0,9389 e 0,9395,
a 110 ‘C per 30 min. Dopo raffreddamento, riempire il misurata con un densimetro.

irotinetnoC
contenitore con acqua per preparazioni iniettabili R al

/ ilairetaM
suo volume nominale e omogeneizzare. Soluzione madre. Disciogliere 0,100 g di additivo per
Scaldare acqua per prepara- plastica 01 SCR nel solvente di estrazione e diluire a
Soluzione di riferimento.

zioni iniettabili R in un pallone di vetro borosilicato in 100,0 ml con lo stesso solvente.

autoclave a 110 ‘C per 30 min. Soluzioni standard:

ivittaeR
Sostanze riducenti . Immediatamente dopo la prepara- (a) Diluire 20,0 ml della soluzione madre a 100,0 ml
zione della soluzione S3, trasferire un volume corri- con il solvente di estrazione,
spondente all'8 per cento del volume nominale del con-
tenitore in un pallone di vetro borosilicato. Nello stesso (b) Diluire 10,0 ml della soluzione madre a 100,0 ml
tempo, preparare il bianco usando un uguale volume con il solvente di estrazione,

itnemogrA
di una soluzione di riferimento preparata di recente in

ilareneG
(c) Diluire 5,0 ml della soluzione madre a 100,0 ml con
un altro pallone di vetro borosilicato. Aggiungere, ad il solvente di estrazione,
ogni soluzione, 20,0 ml di potassio permangana- (d) Diluire 2,0 ml della soluzione madre a 100,0 ml
to 0,002 M e 1 ml di acido solforico diluito R. Lasciare con il solvente di estrazione,
a riposo proteggendo dalla luce per 15 min. A ciascuna

eifargonoM
soluzione aggiungere 0,1 g di potassio ioduro R. (e) Diluire 1,0 ml della soluzione madre a 100,0 ml con

ilareneG
Lasciare a riposo proteggendo dalla luce per 5 min e il solvente di estrazione.
titolare immediatamente con sodio tiosolfato 0,01 M, Misurare l'assorbanza (2.2.25) delle soluzioni standard
usando 0,25 ml di amido soluzione R, come indicatore. al massimo di assorbimento a 272 nm, usando il sol-
La differenza tra le due titolazioni non e© superiore

ehcituecamraF
a 2,0 ml. vente di estrazione come liquido di compensazione e
tracciare la curva dell'assorbanza in funzione della

emroF
Acidita© o alcalinita©. Ad un volume di soluzione S3, cor- concentrazione di additivo per plastica 01.
rispondente al 4 per cento della capacita© nominale del Procedimento di estrazione. Usando il deflussore e l'ago
contenitore, aggiungere 0,1 ml di fenolftaleina soluzio- o l'adattatore, riempire il contenitore vuoto con un
ne R. La soluzione rimane incolore. Aggiungere 0,4 ml volume uguale alla meta© del volume nominale con il
di sodio idrossido 0,01 M. La soluzione diventa rosa.
eiretaM
solvente di estrazione, precedentemente riscaldato a

emirP
Aggiungere 0,8 ml di acido cloridrico 0,01 M e 0,1 ml 37 ‘C in un pallone ben chiuso. Espellere completa-
di metilarancio soluzione R. La soluzione e© arancio- mente l'aria dal contenitore e chiudere ermeticamente
rossa o rossa. il deflussore. Immergere il contenitore riempito in posi-
(2.4.4). 15 ml di soluzione S3 soddisfano al sag- zione orizzontale in un b.m. mantenuto a 37 1 ‘C
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
Cloruri 6

gio limite dei cloruri (0,4 ppm). Preparare la soluzione per 60 1 min senza agitazione. Rimuovere il conteni-
6

standard usando una miscela di 1,2 ml di una soluzione tore dal b.m., invertirlo cautamente per dieci volte e
standard di cloruro (Cl 5 ppm) R e 13,8 ml di acqua R. trasferire il contenuto in un pallone di vetro. Misurare
(2.4.1). Diluire 5 ml di soluzione S3 a 14 ml immediatamente l'assorbanza al massimo di assorbi-
mento a 272 nm, usando il solvente di estrazione come
ehcitapoemO

Ammonio

con acqua R. La soluzione soddisfa al saggio limite A

inoizaraperP

per l'ammonio (2 ppm). liquido di compensazione.

. Evaporare 100 ml della Determinare la concentrazione dell'additivo per pla-
Sostanze estraibili in acqua

soluzione S3 a secco a b.m. Essiccare in stufa da stica 01 in milligrammi per 100 ml di estratto dalla
100 ‘C a 105 ‘C fino a massa costante. Effettuare un curva di taratura. La concentrazione non e© superiore a:
saggio in bianco con 100 ml della soluzione di riferi- ^ 10 mg per 100 ml per contenitori con un volume
ecidnI

mento. Il residuo della soluzione S3 pesa non piu© di nominale maggiore di 300 ml ma non superiore a
3 mg, considerando il saggio in bianco. 500 ml;

313
Materiali a base di polivinile cloruro plastif. per appar. per la trasfusione di sangue e sue frazioni

^ 13 mg per 100 ml per contenitori con un volume Soluzione madre di vinile cloruro. Preparare sotto cappa
nominale maggiore di 150 ml ma non superiore a ventilata. Introdurre 50,0 ml di dimetilacetammide R in
300 ml; un flaconcino da 50 ml, chiudere il flaconcino, fissare
^ 14 mg per 100 ml per contenitori con un volume il tappo e pesare con la precisione di 0,1 mg. Riempire
nominale fino a 150 ml. una siringa di polietilene o di polipropilene da 50 ml
Quando i contenitori contengono una soluzione anticoa- con vinile cloruro R gassoso, lasciare che il gas rimanga
gulante, la soluzione soddisfa alla monografia su Solu- a contatto con la siringa per circa 3 min, vuotare la
zioni anticoagulanti e conservanti per sangue umano siringa e riempirla di nuovo con 50 ml di vinile cloru-
(0209) e al seguente saggio addizionale. ro R gassoso. Applicare alla siringa un ago ipodermico
(2.2.25). Misurare l'assorbanza della solu- e ridurre il volume di gas nella siringa da 50 ml a
Assorbanza

zione anticoagulante del contenitore tra 250 nm e 25 ml. Iniettare lentamente i rimanenti 25 ml di vinile
350 nm, usando, come liquido di compensazione, una cloruro nel flaconcino, agitando leggermente ed
soluzione anticoagulante con la stessa composizione evitando il contatto fra il liquido e l'ago. Pesare di
ma che non sia venuta a contatto con un materiale pla- nuovo il flaconcino; l'aumento di massa e© di circa
stico. L'assorbanza al massimo di assorbimento a 60 mg (1 ml della soluzione cos|© ottenuta contiene circa
280 nm non e© superiore a 0,5. 1,2 g di vinile cloruro). Lasciare riposare per 2 h.
l

Conservare la soluzione madre in frigorifero.

Soluzione standard di vinile cloruro. Ad 1 volume della
3.1.1.2. MATERIALI A BASE DI POLIVINILE
soluzione madre di vinile cloruro aggiungere 3 volumi
CLORURO

USATI PER
PLASTIFICATO

LA TRASFUSIONE
PER

DI
TUBI

SAN-
di dimetilacetammide R.
GUE E SUE FRAZIONI Soluzioni di riferimento. Introdurre 10,0 ml della solu-
zione dello standard interno in ciascuno di sei flacon-
cini da 50 ml. Chiudere i flaconcini e fissare i tappi.
DEFINIZIONE Iniettare in cinque flaconcini, rispettivamente, 1 ml,
I materiali a base di polivinile cloruro plastificato per 2 ml, 3 ml, 5 ml e 10 ml della soluzione standard di vinile
apparati tubolari utilizzati per la trasfusione del sangue cloruro. Le sei soluzioni cos|© ottenute contengono,
e sue frazioni contengono non meno del 55 per cento rispettivamente, 0 g, circa 0,3 g, 0,6 g, 0,9 g,
l l l l

di polivinile cloruro plastificato con di(2-etilesil)ftalato 1,5 g e 3 g di vinile cloruro. Agitare, evitando il con-
l l

(additivo per plastica 01). tatto tra il tappo e il liquido. Porre i flaconcini a b.m. a
60 1 ‘C per 2 h.
6

Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito

PRODUZIONE usando:
I materiali a base di polivinile cloruro plastificato sono ^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 3 m e con
prodotti con metodi di polimerizzazione che assicurano un diametro interno di 3 mm impaccata con terra
un residuo di vinile cloruro inferiore a 1 ppm. Il metodo d'infusori silanizzata per gas cromatografia R
utilizzato per la produzione e© validato per dimostrare impregnata con il 5 per cento m/m di dimetilstearil-
che il prodotto soddisfa al seguente saggio: ammide R e con il 5 per cento m/m di macro-
Vinile cloruro . Non piu© di 1 ppm, determinato con gas gol 400 R,
cromatografia a spazio di testa (2.2.28), utilizzando ete- ^ azoto per cromatografia R come gas di trasporto ad
re R come standard interno. una velocita© di 30 ml/min,
Soluzione dello standard interno. Utilizzando una
microsiringa, iniettare 10 ml di etere R in 20,0 ml di ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma.
dimetilacetammide R, immergendo la punta dell'ago Mantenere la temperatura della colonna a 45 ‘C, quella
nel solvente. Immediatamente prima dell'uso, diluire la della camera di iniezione a 100 ‘C e quella del rivelatore
soluzione a 1000 volte il suo volume con dimetilacetam- a 150 ‘C.
mide R.
Soluzione in esame. Introdurre 1,000 g del materiale in Iniettare 1 ml dello spazio di testa di ciascun flaconcino.
esame in un flaconcino da 50 ml ed aggiungere 10,0 ml Calcolare il contenuto di vinile cloruro.
della soluzione dello standard interno. Chiudere il fla- Il produttore del materiale deve essere in grado di
concino e fissare il tappo. Agitare, evitando il contatto dimostrare che la composizione qualitativa e quantita-
tra il tappo e il liquido. Porre il flaconcino a b.m. a tiva del campione sia soddisfacente per ogni lotto di
60 1 ‘C per 2 h.
6 produzione.

314
 Materiali a base di polivinile cloruro plastif. per appar. per la trasfusione di sangue e sue frazioni

inoizircserP
CARATTERI di vetro borosilicato. Scaldare in autoclave a

ilareneG
121 2 ‘C per 20 min. Lasciar raffreddare e decantare
6
Materiale praticamente incolore o giallo pallido, che si la soluzione e riportare il volume a 500 ml.
presenta sotto forma di polvere, palline, granuli o, dopo . La soluzione S2 e© limpida
trasformazione, tubi con un leggero odore. Per combu- Aspetto della soluzione S 2

(2.2.1) ed incolore (Metodo II, 2.2.2).

stione produce un fumo nero e denso.

isilanA id
idoteM
Additivo per plastica 01 . Esaminare mediante cromato-
grafia su strato sottile (2.2.27), usando una lastra di gel
IDENTIFICAZIONE di silice G R.
Se necessario, prima dell'uso, tagliare i campioni del Soluzione in esame. A 2,0 g del materiale in esame

irotinetnoC
aggiungere 200 ml di etere esente da perossidi R e scal-

/ ilairetaM
materiale da esaminare in pezzi della dimensione mas- dare a ricadere per 8 h. Separare il residuo e la solu-
sima su un lato non superiore a 1 cm. zione mediante filtrazione ed evaporare la soluzione a
A. A 0,5 g aggiungere 30 ml di tetraidrofurano R. secco a pressione ridotta su b.m. a 30 ‘C. Disciogliere
Scaldare a b.m., agitando sotto cappa per 10 min. il residuo in 10 ml di toluene R.
Il materiale si scioglie completamente. Aggiungere, Soluzione di riferimento. Disciogliere 0,8 g di additivo

ivittaeR
agitando, metanolo R goccia a goccia. Si forma un per plastica 01 SCR in toluene R e diluire a 10 ml con
precipitato granulare. Filtrare ed essiccare il preci- lo stesso solvente.
pitato a 60 ‘C. Esaminare il precipitato mediante
spettrofotometria di assorbimento infrarosso Deporre, separatamente, sulla lastra come una banda
(2.2.24). Disciogliere 50 mg in 2 ml di tetraidrofu- di 30 mm per 3 mm, 0,5 ml della soluzione in esame e

itnemogrA
ilareneG
rano R e versare su un vetrino. Seccare in stufa a 5 l della soluzione di riferimento. Eluire per un per-
m

80 ‘C, staccare la pellicola e fissarla su un adatto corso di 15 cm usando toluene R. Seccare accurata-
supporto. Esaminare mediante spettrofotometria mente la lastra. Esaminare il cromatogramma ottenuto
di assorbimento infrarosso (2.2.24), in confronto alla luce ultravioletta a 254 nm e localizzare la zona
con lo spettro ottenuto con il polivinile cloru- corrispondente all'additivo per plastica 01. Rimuovere

eifargonoM
l'area di gel di silice corrispondente a questa zona e agi-

ilareneG
ro SCR.
tare con 40 ml di etere R. Filtrare senza perdite ed eva-
B. Esaminare il residuo ottenuto nel saggio ûAdditivo porare a secco. Il residuo non pesa piu© di 40 mg.
per plastica 01ý mediante spettrofotometria . Non piu© di 5 ppm di Ba, determinato mediante
di assorbimento infrarosso (2.2.24), in confronto Bario

ehcituecamraF
con lo spettro ottenuto con l'additivo per plasti- spettrometria atomica di emissione in plasma di argon
(Metodo I, 2.2.22).

emroF
ca 01 SCR.
Soluzione in esame. Calcinare 1,0 g di materiale in
esame in un crogiolo di silice. Riprendere il residuo
SAGGI con 10 ml di acido cloridrico R ed evaporare a secco su
b.m. Riprendere il residuo con 20 ml di acido clori-
Se necessario, prima dell'uso, tagliare i campioni del
eiretaM
drico 0,1 M.

emirP
materiale da esaminare in pezzi della dimensione mas- Soluzione di riferimento. Soluzione contenente
sima su un lato non superiore a 1 cm. 0,25 ppm di bario preparata per diluizione di una solu-
. Introdurre 5,0 g del materiale in esame in zione standard di bario (Ba 50 ppm) R con acido clori-
ehcituecamraF

Soluzione S1

un matraccio da combustione. Aggiungere 30 ml di drico 0,1 M

inoizaraperP

ehcificepS

acido solforico R e scaldare fino ad ottenere una massa Effettuare la determinazione usando l'emissione del
sciropposa nera. Raffreddare ed aggiungere, con bario a 455,40 nm, fissando il fondo spettrale a
cautela, 10 ml di idrogeno perossido soluzione concen- 455,30 nm.
trata R. Scaldare leggermente. Lasciar raffreddare ed
Verificare l'assenza di bario nell'acido cloridrico usato.
ehcitapoemO

aggiungere 1 ml di idrogeno perossido soluzione concen-

inoizaraperP

trata R; ripetere alternando l'evaporazione e l'aggiunta . Non piu© di 0,6 ppm di Cd, determinato
di idrogeno perossido soluzione fino ad ottenere un
Cadmio

mediante spettrometria di assorbimento atomico

liquido incolore. Concentrare fino a circa 10 ml. (Metodo I, 2.2.23).
Raffreddare e diluire a 50,0 ml con acqua R. Soluzione in esame. Evaporare a secco 10,0 ml della
Soluzione S2 . Introdurre 25 g del materiale in esame in soluzione S1. Riprendere il residuo con 5 ml di una
ecidnI

un pallone di vetro borosilicato. Aggiungere 500 ml di soluzione all'1 per cento V/V di acido cloridrico R,
acqua R e coprire il collo del pallone con un recipiente filtrare e diluire il filtrato a 10,0 ml con lo stesso acido.

315
Poliolefine

Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- termostatico che mantenga la temperatura del liquido
mento utilizzando una soluzione standard di cadmio del recipiente a 37 1 ‘C. Far circolare 250 ml di
6

(Cd 0,1 per cento) R diluita con una soluzione all'1 per acqua per preparazioni iniettabili R attraverso il sistema
cento V/V di acido cloridrico R. nella direzione usata per la trasfusione per 2 h alla velo-
Misurare l'assorbanza a 228,8 nm usando come sor- cita© di 1 litro all'ora (per esempio usando una pompa
gente di radiazione una lampada a catodo cavo al cad- peristaltica applicata mediante un tubo di gomma di
mio ed una fiamma aria-acetilene. silicone il piu© corto possibile). Raccogliere tutta la solu-
zione e lasciare raffreddare.
Verificare l'assenza di cadmio nell'acido cloridrico
usato. Aspetto della soluzione . La soluzione S3 e© limpida (2.2.1)
ed incolore (Metodo II, 2.2.2).
. Non piu© di 20 ppm di Sn, determinato
. A 25 ml di soluzione S3, aggiungere
Stagno

mediante spettrometria di emissione atomica in plasma Acidita© o alcalinita©

di argon (Metodo I, 2.2.22). 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R. Non sono neces-
Soluzione in esame. Diluire la soluzione S1 dieci volte sari piu© di 0,5 ml di sodio idrossido soluzione 0,01 M
con acqua R immediatamente prima dell'uso. per far virare al blu l'indicatore. A 25 ml di soluzione
S3 aggiungere 0,2 ml di metilarancio soluzione R. Non
Soluzione di riferimento. Introdurre 2 ml di una solu- sono necessari piu© di 0,5 ml di acido cloridrico 0,01 M
zione standard di stagno (Sn 5 ppm) R in un pallone perchë inizi il viraggio dell'indicatore da giallo ad
tarato da 50 ml contenente 5 ml di una soluzione al arancio.
20 per cento V/V di acido solforico R e portare a 50 ml (2.2.25). Misurata tra 230 nm e 250 nm,
con acqua R immediatamente prima dell'uso. Assorbanza

l'assorbanza della soluzione S3 non e© maggiore di 0,30.

Effettuare la determinazione usando l'emissione dello Misurata tra 251 nm e 360 nm, l'assorbanza della solu-
stagno a 189,99 nm, valutando il fondo spettrale a zione S3 non e© maggiore di 0,15.
190,10 nm. Sostanze riducenti . Effettuare il saggio entro 4 h dalla
Verificare l'assenza di stagno nell'acido solforico usato. preparazione della soluzione S3. A 20,0 ml della solu-
(2.4.8). A 10 ml di soluzione S1 aggiun- zione S3 aggiungere 1 ml di acido solforico diluito R e
20,0 ml di potassio permanganato 0,002 M. Far bollire
Metalli pesanti

gere 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R e poi sodio idros-

sido soluzione concentrata R fino a debole colorazione per 3 min e raffreddare immediatamente. Aggiungere
rosa. Diluire a 25 ml con acqua R. 12 ml della solu- 1 g di potassio ioduro R e titolare con sodio tiosolfa-
zione soddisfano al saggio limite A per i metalli pesanti to 0,01 M, usando 0,25 ml di amido soluzione R, come
(50 ppm). Preparare la soluzione standard usando una indicatore. Effettuare un saggio in bianco usando
soluzione standard di piombo (Pb 2 ppm) R. 20 ml di acqua per preparazioni iniettabili R. La diffe-
renza tra i volumi delle due titolazioni non e© superiore
a 2,0 ml.
DETERMINAZIONE QUANTITATIVA Sostanze estraibili in acqua . Evaporare 50,0 ml della
A 0,500 g aggiungere 30 ml di tetraidrofurano R e scal- soluzione S3 a secco a b.m. ed essiccare in stufa da
dare a b.m., agitando sotto cappa per 10 min. Il mate- 100 ‘C a 105 ‘C fino a massa costante. Effettuare un
riale si scioglie completamente. Aggiungere 60 ml di saggio in bianco con 50,0 ml di acqua per preparazioni
metanolo R goccia a goccia agitando. Si forma un preci- iniettabili R. Il residuo della soluzione S3 ottenuto pesa
pitato granuloso di polivinile cloruro. Lasciar riposare non piu© di 1,5 mg, tenendo conto del saggio in bianco.
per pochi minuti. Continuare ad aggiungere meta-
nolo R finchë non si osserva piu© ulteriore precipita-
zione. Trasferire su un filtro di vetro sinterizzato (40),
utilizzando tre piccole quantita© di metanolo R per aiu- 3.1.3. POLIOLEFINE

tare il trasferimento e per lavare il precipitato. Essic-

care il filtro e il precipitato a 60 ‘C fino a massa
costante e pesare. DEFINIZIONE
In aggiunta, eseguire i saggi che seguono sulle apparec- Le poliolefine si ottengono per polimerizzazione dell'e-
chiature sterilizzate. tilene o del propilene o per copolimerizzazione di que-
Soluzione S3 . Realizzare un sistema a circolazione ste sostanze con non piu© del 25 per cento di omologhi
chiusa con tre deflussori e un recipiente di vetro borosi- superiori (da C4 a C10) o di acidi carbossilici o di esteri.
licato da 300 ml. Applicare al recipiente un dispositivo Alcuni materiali possono essere miscele di poliolefine.

316
 Poliolefine

inoizircserP
PRODUZIONE ^ alchenammidi (non piu© dello 0,5 per cento),

ilareneG
Un certo numero di additivi sono addizionati al poli- ^ sodio silico-alluminato (non piu© dello 0,5 per cento),
mero per migliorare le sue caratteristiche chimiche, fisi- ^ silice (non piu© dello 0,5 per cento),
che e meccaniche e renderlo cos|© piu© adatto all'uso pre- ^ sodio benzoato (non piu© dello 0,5 per cento),
visto. Tutti questi additivi sono scelti dalla lista

isilanA id
^ esteriosalidiacidigrassi(nonpiu© dello0,5percento),

idoteM
seguente che specifica, per ciascun prodotto, il conte- ^ fosfato trisodico (non piu© dello 0,5 per cento),
nuto massimo consentito.
Le poliolefine possono contenere al massimo tre antios- ^ paraffina liquida (non piu© dello 0,5 per cento),
sidanti, uno o piu© lubrificanti o agenti antibloccanti ^ zinco ossido (non piu© dello 0,5 per cento),

irotinetnoC
come pure titanio diossido come agente opacizzante, ^ talco (non piu© dello 0,5 per cento),

/ ilairetaM
se il materiale deve proteggere dalla luce. ^ magnesio ossido (non piu© dello 0,5 per cento),
^ butilidrossitoluene (additivo per plastica 07) (non ^ calcio o zinco stearato o una miscela di entrambi
piu© dello 0,125 per cento), (non piu© dello 0,5 per cento),
^ pentaeritritile tetrakis[3-(3,5-di-tert-butil-4-idrossife- ^ titanio diossido (non piu© del 4 per cento).

ivittaeR
nil) propionato] (additivo per plastica 09) (non piu© Il produttore del materiale deve essere in grado di
dello 0,3 per cento), dimostrare che la composizione qualitativa e quantita-
^ 1,3,5-tris(3,5-di-tert-butil-4-idrossibenzil)-s-triazina- tiva del campione sia soddisfacente per ogni lotto di
2,4,6(1H,3H,5H)-trione (additivo per plastica 13) produzione.
(non piu© dello 0,3 per cento),

itnemogrA
ilareneG
^ ottadecile 3-(3,5-di-tert-butil-4-idrossifenil)propio-
nato (additivo per plastica 11) (non piu© dello CARATTERI
0,3 per cento), Polvere, palline, granuli o, dopo trasformazione,
^ etilene bis [3,3-bis[3-(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil] lamine di spessore variabile o contenitori. Materiale

eifargonoM
butanoato] (additivo per plastica 08) (non piu© dello praticamente insolubile in acqua, solubile a caldo negli

ilareneG
0,3 per cento), idrocarburi aromatici, praticamente insolubile in eta-
^ diottadecil disulfuro (additivo per plastica 15) (non nolo, in esano e in metanolo. Rammollisce a tempera-
piu© dello 0,3 per cento), ture comprese tra 65 ‘C e 165 ‘C. Brucia con una
fiamma blu.

ehcituecamraF
^ 2,2',2'',6,6',6''-esa-tert-butil-4,4',4''-[(2,4,6-trimetil-
1,3,5-benzenetriil)trismetilen]trifenolo (additivo

emroF
per plastica 10) (non piu© dello 0,3 per cento), IDENTIFICAZIONE
^ 2,2'-bis(ottadecilossi)-5,5'-spirobi(1,3,2-dioxafosfo- Se necessario, prima dell'uso, tagliare i campioni del
rinano) (additivo per plastica 14) (non piu© dello materiale da esaminare in pezzi della dimensione mas-
0,3 per cento),

eiretaM
sima su un lato non superiore a 1 cm.

emirP
^ didodecile-3,3'-tiodipropionato (additivo per pla- A. A0,25gaggiungere10 mlditoluene Rebollirearica-
stica 16) (non piu© dello 0,3 per cento), dere per circa 15 min. Deporre alcune gocce della
^ diottadecile-3,3'-tiodipropionato (additivo per pla- soluzione ottenuta su una finestra di sodio cloruro ed
stica 17) (non piu© dello 0,3 per cento),
ehcituecamraF

evaporare il solvente in stufa a 80 ‘C. Esaminare

inoizaraperP

ehcificepS

^ tris (2,4-di-tert-butilfenil)fosfito (additivo per pla- mediante spettrofotometria di assorbimento infra-

stica 12) (non piu© dello 0,3 per cento), rosso (2.2.24). Lo spettro del materiale in esame
^ P-EPQ (additivo per plastica 18) (non piu© dello mostra -1massimi di-1 assorbimento in particolare a
0,1 per cento), 2920 cm-1, 2850 cm-1 ,1475 cm-1-1,1465 cm1,1380 cm-1,
ehcitapoemO

1170 cm , 735 cm , 720 cm ; lo spettro ottenuto e©

inoizaraperP

^ copolimero del dimetil succinato e (4-idrossi-2,2,6,6- identicoaquelloottenutoconilmaterialeselezionato

tetrametilpiperidin-1-il)etanolo (additivo per pla- come campione tipo. Se la sostanza in esame si pre-
stica 22) (non piu© dello 0,3 per cento), sentasottoformadilamine,lospettropuo© essereotte-
Il totale degli additivi antiossidanti sopra elencati non nuto direttamente su un frammento di dimensione
supera lo 0,3 per cento. appropriata.
^ idrotalcite (non piu© dello 0,5 per cento),
ecidnI

B. Soddisfa ai saggi supplementari corrispondenti agli

^ alcanammidi (non piu© dello 0,5 per cento), additivi presenti.

317
Poliolefine

C. In un crogiolo di platino mescolare circa 20 mg Assorbanza (2.2.25). L'assorbanza della soluzione S1

con 1 g di potassio solfato acido R e scaldare fino a misurata a lunghezze d'onda tra 220 nm e 340 nm non
fusione completa. Lasciar raffreddare ed aggiun- e© maggiore di 0,2.
gere 20 ml di acido solforico diluito R. Scaldare leg- . A 20 ml della soluzione S1 aggiun-
germente e filtrare la soluzione ottenuta. Aggiun- Sostanze riducenti

gere 1 ml di acido solforico diluito R e 20 ml di potassio

gere al filtrato 1 ml di acido fosforico R e 1 ml di permanganato 0,002 M. Far bollire a ricadere per
idrogeno perossido soluzione concentrata R. Se la 3 min e raffreddare immediatamente. Aggiungere 1 g
sostanza e© opacizzata con titanio diossido, si svi- di potassio ioduro R e titolare immediatamente con
luppa una colorazione giallo-arancio. sodio tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di amido solu-
zione R, come indicatore. Effettuare una titolazione in
bianco. La differenza tra i volumi utilizzati nelle due
SAGGI titolazioni non e© superiore a 3,0 ml.
Se necessario, prima dell'uso, tagliare i campioni del Sostanze solubili in esano . Introdurre 10 g in una beuta
materiale da esaminare in pezzi della dimensione mas- di vetro borosilicato con collo a smeriglio da 250 ml.
sima su un lato non superiore a 1 cm. Aggiungere 100 ml di esano R e bollire a ricadere
per 4 h con agitazione costante. Raffreddare in acqua
Soluzione S1 . Utilizzare la soluzione S1 entro 4 h dalla ghiacciata e filtrare rapidamente (il tempo di filtrazione
preparazione. Introdurre 25 g in un pallone di vetro deve essere inferiore a 5 min; se necessario la filtrazione
borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 500 ml puo© essere accelerata esercitando una pressione sulla
di acqua per preparazioni iniettabili R e bollire a rica- soluzione) attraverso un filtro di vetro poroso (16)
dere per 5 h. Lasciar raffreddare e decantare. Conser- mantenendo la soluzione a circa 0 ‘C. Evaporare a
vare una porzione della soluzione per il saggio dell'a- b.m. 20 ml di filtrato in una capsula di vetro borosili-
spetto della soluzione S1 e filtrare la parte rimanente cato tarata. Essiccare il residuo in stufa tra 100 ‘C e
attraverso un filtro di vetro poroso (16). 105 ‘C per 1 h. La massa del residuo ottenuto non deve
. Introdurre 2,0 g in una beuta di vetro differire di piu© del 10 per cento da quella del residuo
Soluzione S2

borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 80 ml di ottenuto con il campione tipo e non deve superare il
toluene R e bollire a ricadere per 90 min agitando 5 per cento.
costantemente. Lasciar raffreddare a 60 ‘C e aggiun- Alluminio estraibile . Non piu© di 1 ppm di Al estraibile,
gere, continuando l'agitazione, 120 ml di metanolo R. determinato mediante spettrometria di emissione
Filtrare la soluzione attraverso un filtro di vetro atomica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22).
poroso (16). Lavare la beuta e il filtro con 25 ml di una Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.
miscela di 40 ml di toluene R e 60 ml di metanolo R, Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di
aggiungere i lavaggi al filtrato e diluire a 250 ml con la riferimento usando la soluzione standard di alluminio
stessa miscela di solventi. Preparare una soluzione (Al 200 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.
come bianco.
Effettuare la determinazione usando l'emissione del-
Soluzione S3 . Introdurre 100 g in una beuta di vetro l'alluminio a 396,15 nm, valutando il fondo spettrale a
borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 250 ml 396,25 nm.
di acido cloridrico 0,1 M e bollire a ricadere per 1 h agi-
tando costantemente. Lasciar raffreddare e decantare Verificare l'assenza di alluminio nell'acido cloridrico
la soluzione. usato.
. La soluzione S1 e© limpida Titanio estraibile . Non piu© di 1 ppm di Ti estraibile,
Aspetto della soluzione S1

(2.2.1) e incolore (Metodo II, 2.2.2). determinato mediante spettrometria di emissione ato-
mica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22).
Acidita© o alcalinita©. A 100 ml di soluzione S1, aggiun- Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.
gere 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R. Non sono Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di
necessari piu© di 1,5 ml di sodio idrossido soluzio- riferimento usando la soluzione standard di titanio
ne 0,01 M per far virare al blu l'indicatore. A 100 ml di (Ti 100 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.
soluzione S1 aggiungere 0,2 ml di metilarancio soluzio-
ne R. Perchë inizi il viraggio dell'indicatore da giallo Effettuare la determinazione usando l'emissione del
ad arancio non e© necessario piu© di 1 ml di acido clori- titanio a 336,12 nm, valutando il fondo spettrale a
drico 0,01 M. 336,16 nm.

318
 Poliolefine

inoizircserP
Verificare l'assenza di titanio nell'acido cloridrico ^ come rivelatore uno spettrofotometro regolato a

ilareneG
usato. 280 nm per le fasi mobili da 1 a 3, e regolato a
Zinco estraibile . Non piu© di 1 ppm di Zn estraibile, 270 nm per la fase mobile 4.
determinato mediante spettrometria di assorbimento Il sistema cromatografico deve assicurare:
atomico in plasma di argon (Metodo I, 2.2.23).
^ una risoluzione non inferiore a 8,0 tra i picchi cor-

isilanA id
idoteM
Soluzione in esame. Usare la soluzione S3. rispondenti all'additivo per plastica 07 e all'addi-
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di tivo per plastica 08, con la fase mobile 1,
riferimento usando la soluzione standard di zinco ^ una risoluzione non inferiore a 2,0 tra i picchi cor-
(Zn 10 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M. rispondenti all'additivo per plastica 09 e all'addi-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Misurare l'assorbanza a 213,9 nm usando come sor- tivo per plastica 10, con la fase mobile 2,
gente di radiazione una lampada a catodo cavo allo
zinco ed una fiamma aria-acetilene. ^ una risoluzione non inferiore a 2,0 tra i picchi cor-
Verificare l'assenza di zinco nell'acido cloridrico usato. rispondenti all'additivo per plastica 11 e all'addi-
Metalli pesanti estraibili (2.4.8). Evaporare a b.m. 50 ml tivo per plastica 12, con la fase mobile 3,
^ una risoluzione non inferiore a 6,0 tra i due picchi

ivittaeR
di soluzione S3 a circa 5 ml e diluire a 20,0 ml con
acqua R. 12 ml della soluzione soddisfano al saggio principali (tempo di ritenzione approssimato di
limite A per i metalli pesanti (2,5 ppm). Preparare lo 3,5 e 5,8) nel cromatogramma ottenuto con l'addi-
standard usando 2,5 ml della soluzione standard di tivo per plastica 18, con la fase mobile 4.
piombo (Pb 10 ppm) R. Soluzione in esame S21. Evaporare a secco, sotto vuoto a

itnemogrA
ilareneG
Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori all'1,0 per 45 ‘C, 50 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo
cento, determinate su 5,0 g. Questo limite non si applica in 5,0 ml di una miscela di volumi uguali di acetoni-
a materiale che e© stato opacizzato con titanio diossido. trile R e tetraidrofurano R. Preparare una soluzione in
bianco a partire dalla soluzione in bianco corrispon-
dente alla soluzione S2.

eifargonoM
SAGGI SUPPLEMENTARI

ilareneG
Soluzione in esame S22. Evaporare a secco, sotto vuoto a
Effettuare questi saggi, in tutto o in parte, soltanto se 45 ‘C, 50 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo
richiesto dalla composizione riportata o dall'uso previsto in 5,0 ml di diclorometano R. Preparare una soluzione
per il materiale. in bianco a partire dalla soluzione in bianco corrispon-

ehcituecamraF
. Esaminare mediante cromato- dente alla soluzione S2.

emroF
Antiossidanti fenolici

grafia liquida (2.2.29) Soluzione in esame S23. Evaporare a secco, sotto vuoto a
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito 45 ‘C, 50 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo
usando: in 5,0 ml di una miscela di volumi uguali di acetoni-
^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 0,25 m trile R e una soluzione (10 g/l) di tert-butilidroperossi-

eiretaM
e con diametro interno di 4,6 mm impaccata do R in tetraidrofurano R. Chiudere la beuta e lasciare

emirP
con gel di silice ottadecilsililato per cromatogra- a riposo per 1 h. Preparare una soluzione in bianco
fia R (5 mm), usando il bianco della soluzione S2.
^ come fase mobile una delle quattro miscele Delle seguenti soluzioni di riferimento, preparare solo
ehcituecamraF
inoizaraperP

seguenti: quelle che sono necessarie per l'analisi degli antiossidanti

ehcificepS

Fase mobile 1 ad una velocita© di flusso di 2 ml/min: fenolici riportati nella composizione della sostanza da
30 volumi di acqua R, 70 volumi di acetonitrile R, esaminare.
Fase mobile 2 ad unavelocita© di flusso di1,5 ml/min: Soluzione di riferimento (a). Disciogliere 25,0 mg di
10 volumi di acquaR,30 volumi ditetraidrofurano R, butilidrossitoluene SCR (additivo per plastica 07) e
ehcitapoemO
inoizaraperP

60 volumi di acetonitrile R, 60,0 mg di additivo per plastica 08 SCR in 10,0 ml di

Fase mobile 3 ad una velocita© di flusso di 1,5 ml/min: una miscela di volumi uguali di acetonitrile R e tetra-
5 volumi di acqua R, 45 volumi di 2-propanolo R, idrofurano R. Diluire 2,0 ml a 50,0 ml con una miscela
50 volumi di metanolo R, di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
Fase mobile 4 ad una velocita© di flusso di 1,5 ml/min: Soluzione di riferimento (b). Disciogliere 60,0 mg di
ecidnI

20 volumi di tetraidrofurano R, 80 volumi di acetoni- additivo per plastica 09 SCR e 60,0 mg di additivo per
trile R, plastica 10 SCR in 10,0 ml di una miscela di volumi

319
Poliolefine

uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. Diluire della soluzione di riferimento (a) e anche 20 ml delle
2,0 ml a 50,0 ml con una miscela di volumi uguali di soluzioni di riferimento (d) o (e) oppure 20 ml per cia-
acetonitrile R e tetraidrofurano R. scuna delle soluzioni di riferimento (d) ed (e) .
Soluzione di riferimento (c). Disciogliere 60,0 mg di Se la sostanza in esame contiene uno o piu© dei seguenti
additivo per plastica 11 SCR e 60,0 mg di additivo per antiossidanti:
plastica 12 SCR in 10,0 ml di diclorometano R. Diluire
2,0 ml a 50,0 ml con diclorometano R. ^ additivo per plastica 09,
Soluzione di riferimento (d). Disciogliere 25,0 mg di ^ additivo per plastica 10,
additivo per plastica 07 SCR in 10,0 ml di una miscela ^ additivo per plastica 11,
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
Diluire 2,0 ml a 50,0 ml con una miscela di volumi ^ additivo per plastica 12,
uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
Soluzione di riferimento (e). Disciogliere 60,0 mg di ^ additivo per plastica 13,
additivo per plastica 08 SCR in 10,0 ml di una miscela usare la fase mobile 2 e iniettare 20 l della soluzione in
m

di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. esame S21, 20 ml della corrispondente soluzione in

Diluire 2,0 ml a 50,0 ml con una miscela di volumi bianco, 20 ml della soluzione di riferimento (b) e 20 ml
uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. di ciascuna delle soluzioni di riferimento degli antiossi-
Soluzione di riferimento (f). Disciogliere 60,0 mg di danti dell'elenco precedente che sono riportati nella
additivo per plastica 13 SCR in 10,0 ml di una miscela composizione.
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. Se la sostanza in esame contiene l'additivo per plastica
Diluire 2,0 ml a 50,0 ml con una miscela di volumi 11 e/o l'additivo per plastica 12, usare la fase mobile 3
uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. e iniettare 20 l della soluzione in esame S22, 20 ml
m

Soluzione di riferimento (g). Disciogliere 60,0 mg di della corrispondente soluzione in bianco, 20 ml della
additivo per plastica 09 SCR in 10,0 ml di una miscela soluzione di riferimento (c) e 20 ml delle soluzioni di
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. riferimento (i) o (j) oppure 20 ml delle soluzioni di rife-
Diluire 2,0 ml a 50,0 ml con una miscela di volumi rimento (i) e (j).
uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. Se la sostanza in esame contiene l'additivo per plastica
Soluzione di riferimento (h). Disciogliere 60,0 mg di 18, usare la fase mobile 4 e iniettare 20 l della solu-
m
additivo per plastica 10 SCR in 10,0 ml di una miscela zione in esame S23, 20 ml della corrispondente soluzione
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. in bianco e 20 ml della soluzione di riferimento (k).
Diluire 2,0 ml a 50,0 ml con una miscela di volumi In tutti i casi, registrare il cromatogramma per 30 min;
uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. i cromatogrammi corrispondenti alle soluzioni in esa-
Soluzione di riferimento (i). Disciogliere 60,0 mg di me S21, S22 e S23 presentano solo picchi dovuti agli
additivo per plastica 11 SCR in 10,0 ml di diclorometa- antiossidanti contenuti nella composizione e picchi
no R. Diluire 2,0 ml a 50,0 ml con diclorometano R. minori presenti anche nei cromatogrammi corrispon-
Soluzione di riferimento (j). Disciogliere 60,0 mg di denti alle soluzioni in bianco. Le aree dei picchi delle
additivo per plastica 12 SCR in 10,0 ml di diclorome- soluzioni in esame S21, S22 e S23 sono minori delle aree
tano R. Diluire 2,0 ml a 50,0 ml con diclorometano R. dei picchi corrispondenti nei cromatogrammi ottenuti
Soluzione di riferimento (k). Disciogliere 20,0 mg di con le soluzioni di riferimento da (d) a (k).
additivo per plastica 18 SCR in 10,0 ml di una miscela . Esaminare mediante croma-
di volumi uguali di acetonitrile R e una soluzione
Antiossidanti non-fenolici

tografia su strato sottile (2.2.27), usando una lastra di

(10 g/l) di tert-butilidroperossido R in tetraidrofura- gel di silice GF254 R.
no R. Lasciare a riposo in un contenitore chiuso per
1 h. Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una Soluzione in esame S24. Evaporare a secco, sotto vuoto a
miscela di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofu- 45 ‘C, 100 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo
rano R. in 2 ml di diclorometano acidificato R.
Se la sostanza in esame contiene l'additivo per pla- Soluzione di riferimento (l). Disciogliere 60 mg di addi-
stica 07 e/o l'additivo per plastica 08, usare la fase tivo per plastica 14 SCR in 10 ml di diclorometano R.
mobile 1 e iniettare 20 ml della soluzione in esame S21, Diluire 2 ml della soluzione a 10 ml con diclorometano
20 ml della corrispondente soluzione di bianco, 20 ml acidificato R.

320
 Poliolefine

inoizircserP
Soluzione di riferimento (m). Disciogliere 60 mg di addi- in una miscela di 35 volumi di toluene R e 65 volumi di

ilareneG
tivo per plastica 15 SCR in 10 ml di diclorometano R. etanolo R. Bollire a ricadere per 3 h. Lasciar raffred-
Diluire 2 ml della soluzione a 10 ml con diclorometano dare e filtrare se necessario.
acidificato R. Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
Soluzione di riferimento (n). Disciogliere 60 mg di addi- usando:

isilanA id
tivo per plastica 16 SCR in 10 ml di diclorometano R.

idoteM
^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 0,25 m e
Diluire 2 ml della soluzione a 10 ml con diclorometano con diametro interno di 4,6 mm impaccata con gel
acidificato R. di silice amminopropilsililato per cromatografia R
Soluzione di riferimento (o). Disciogliere 60 mg di addi- (5 m),
m

irotinetnoC
tivo per plastica 17 SCR in 10 ml di diclorometano R. ^ come fase mobile una miscela di 11 volumi di eta-

/ ilairetaM
Diluire 2 ml della soluzione a 10 ml con diclorometano nolo R e 89 volumi di esano R ad una velocita© di
acidificato R. flusso di 2 ml/min,
Soluzione di riferimento (p). Disciogliere 60 mg di addi- ^ come rivelatore uno spettrofotometro regolato a
tivo per plastica 16 SCR e 60 mg di additivo per plasti- 227 nm.
ca 17 SCR in 10 ml di diclorometano R. Diluire 2 ml Iniettare 20 l di ciascuna soluzione. Registrare i cro-

ivittaeR
m
della soluzione a 10 ml con diclorometano acidificato R. matogrammi per 10 min. Quando i cromatogrammi
Deporre separatamente sulla lastra 20 ml della sono registrati nelle condizioni descritte, la risoluzione
soluzione in esame S24, 20 ml della soluzione di riferi- tra i picchi corrispondenti rispettivamente al ûdioloý e
mento (p) e 20 ml di ciascuna delle soluzioni di riferi- al diluente della soluzione di riferimento e© almeno 7.

itnemogrA
ilareneG
mento corrispondenti a tutti gli antiossidanti, fenolici Nel cromatogramma ottenuto con la soluzione in
e non-fenolici, dichiarati nella composizione tipo del esame, l'area del picco corrispondente al componente
materiale da esaminare. ``diolo'' dell'additivo per plastica 22 e© minore di quella
Eluire per un percorso di 18 cm usando esano R. del picco corrispondente nel cromatogramma ottenuto
con la soluzione di riferimento.

eifargonoM
Lasciar seccare la lastra. Eluire una seconda volta per

ilareneG
un percorso di 17 cm usando diclorometano R. Lasciar Ammidi e stearati . Esaminare mediante cromatografia
seccare la lastra ed esaminare alla luce ultravioletta a su strato sottile (2.2.27), usando due lastre del tipo
254 nm. Spruzzare con iodio soluzione alcoolica R lastra di gel di silice GF254 R.
ed esaminare alla luce ultravioletta a 254 nm dopo Soluzione in esame. Usare la soluzione S24 descritta nel

ehcituecamraF
10-15 min. Nessuna macchia del cromatogramma otte- saggio per gli antiossidanti non-fenolici.

emroF
nuto con la soluzione in esame S24 e© piu© intensa delle Soluzione di riferimento (q). Disciogliere 20 mg di
macchie, nelle posizioni corrispondenti, dei cromato- acido stearico (additivo per plastica 19 SCR) in 10 ml di
grammi ottenuti con le soluzioni di riferimento. diclorometano R.
Il saggio non e© valido se il cromatogramma ottenuto Soluzione di riferimento (r). Disciogliere 40 mg di
con la soluzione di riferimento (p) non presenta due oleammide (additivo per plastica 20 SCR) in 20 ml di
eiretaM
macchie nettamente separate.

emirP
diclorometano R.
Additivo per plastica 22 . Esaminare mediante cromato- Soluzione di riferimento (s). Disciogliere 40 mg di eru-
grafia liquida (2.2.29). cammide (additivo per plastica 21SCR) in 20 ml di diclo-
ehcituecamraF

Soluzione in esame. Evaporare a secco, sotto vuoto a rometano R.

inoizaraperP

ehcificepS

45 ‘C, 25 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo Deporre sulle due lastre 10 l della soluzione S24.
in 10 ml di toluene R e 10 ml di una soluzione (10 g/l)
m
Deporre 10 ml della soluzione di riferimento (q) sulla
di tetrabutilammonio idrossido R in una miscela di prima lastra e 10 ml di ciascuna delle soluzioni di riferi-
35 volumi di toluene R e 65 volumi di etanolo R. mento (r) ed (s) sulla seconda lastra.
Bollire a ricadere per 3 h. Lasciar raffreddare e filtrare
ehcitapoemO
inoizaraperP

se necessario. Eluire la prima lastra per un percorso di 10 cm usando

una miscela di 25 volumi di etanolo R e 75 volumi di
Soluzione di riferimento. Disciogliere 30 mg di additivo trimetilpentano R. Lasciar seccare la lastra all'aria.
per plastica 22 SCR in 50 ml di toluene R. Aggiungere Spruzzare con una soluzione (2 g/l) di diclorofenolindo-
1 ml di questa soluzione a 25 ml della soluzione in fenolo sale sodico R in etanolo R e scaldare in stufa a
bianco S2 ed evaporare a secco sotto vuoto a 45 ‘C. 120 ‘C per pochi minuti per intensificare le macchie.
Disciogliere il residuo in 10 ml di toluene R e 10 ml di
ecidnI

La macchia corrispondente all'additivo per plastica 19

una soluzione (10 g/l) di tetrabutilammonio idrossido R nel cromatogramma ottenuto con la soluzione S24 e©

321
Polietilene senza additivi per contenitori per preparazioni parenterali ed oftalmiche

identica per posizione (Rf circa 0,5) ma non piu© intensa B. La sostanza in esame soddisfa al saggio per gli
della macchia nel cromatogramma ottenuto con la additivi presenti (vedere Saggi).
soluzione di riferimento (q).
Eluire la seconda lastra per un percorso di 13 cm
usando esano R. Eluire una seconda volta per un per- SAGGI
corso di 10 cm usando una miscela di 5 volumi di meta-
nolo R e 95 volumi di diclorometano R. Lasciar seccare Se necessario tagliare il materiale da esaminare in pezzi
la lastra. Spruzzare con una soluzione di 40 g/l di acido della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm.
fosfomolibdico R in etanolo R. Scaldare in stufa a . Introdurre 25 g in un pallone di vetro
120 ‘C fino a comparsa delle macchie. Qualunque mac- Soluzione S1

borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 500 ml

chia corrispondente all'additivo per plastica 20 o all'ad- di acqua per preparazioni iniettabili R e bollire a rica-
ditivo per plastica 21 nel cromatogramma ottenuto dere per 5 h. Lasciar raffreddare e decantare. Conser-
con la soluzione in esame S24 e© identica per posizione vare una porzione della soluzione per il saggio dell'a-
(Rf circa 0,2) ma non e© piu© intensa della macchia corri- spetto della soluzione. Filtrare la parte rimanente attra-
spondente nei cromatogrammi ottenuti con le soluzioni verso un filtro di vetro poroso (16). Utilizzare la
di riferimento (r) ed (s). soluzione S1 entro 4 h dalla preparazione.
Soluzione S2 . Introdurre 2,0 g in una beuta di vetro
borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 80 ml di
3.1.4. POLIETILENE SENZA ADDITIVI PER CON-

toluene R e bollire a ricadere per 1 h 30 min agitando

TENITORI PER PREPARAZIONI PARENTE-
RALI ED OFTALMICHE

costantemente. Lasciar raffreddare a 60 ‘C e aggiun-

gere, continuando l'agitazione, 120 ml di metanolo R.
DEFINIZIONE Filtrare la soluzione attraverso un filtro di vetro
Il polietilene senza additivi si ottiene per polimerizza- poroso (16). Lavare la beuta e il filtro con 25 ml di una
zione dell'etilene sotto alta pressione in presenza di miscela di 40 ml di toluene R e 60 ml di metanolo R,
ossigeno o di iniziatori che formano radicali liberi, aggiungere i lavaggi al filtrato e diluire a 250 ml con la
come catalizzatore. stessa miscela di solventi. Preparare una soluzione
come bianco.
CARATTERI Soluzione S 3 . Introdurre 100 g in una beuta di vetro
Palline, granuli, polvere o, dopo trasformazione,
borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 250 ml
di acido cloridrico 0,1 M e bollire a ricadere per 1 h agi-
lamine traslucide di spessore variabile o contenitori, tando costantemente. Lasciar raffreddare e decantare
praticamente insolubili in acqua, solubili a caldo negli la soluzione.
idrocarburi aromatici, praticamente insolubili in eta-
nolo, in esano e in metanolo. Rammollisce a tempera- Aspetto della soluzione S1 . La soluzione S1 e© limpida
ture superiori a 65 ‘C. (2.2.1) ed incolore (Metodo II, 2.2.2).
La densita© relativa (2.2.5) del materiale e© 0,910-0,937. Acidita© o alcalinita©. A 100 ml di soluzione S1, aggiun-
gere 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R. Non sono
IDENTIFICAZIONE necessari piu© di 1,5 ml di sodio idrossido soluzio-
Se necessario tagliare il materiale da esaminare in pezzi ne 0,01 M per far virare al blu l'indicatore. A 100 ml
della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm. di soluzione S1 aggiungere 0,2 ml di metilarancio solu-
A. A 0,25 g aggiungere10 ml di tolueneRebollire a rica- zione R. Perchë inizi il viraggio dell'indicatore da giallo
dere per circa 15 min. Deporre alcune gocce della ad arancio non e© necessario piu© di 1,0 ml di acido clori-
soluzione ottenuta su una finestra di sodio cloruro drico 0,01 M.
ed evaporare il solvente in stufa a 80 ‘C. Esaminare (2.2.25). L'assorbanza della soluzione S1
mediante spettrofotometria di assorbimento infra-
Assorbanza

misurata a lunghezze d'onda tra 220 nm e 340 nm non

rosso (2.2.24). Lo spettro del materiale in esame e© maggiore di 0,2.
mostra massimi-1 di assorbimento in particolare a
2920 - 2850 cm , 1465 cm-1, 730 cm-1, 720 cm-1; lo Sostanze riducenti . A 20 ml della soluzione S1 aggiun-
spettro ottenuto e© identico a quello ottenuto con il gere 1 ml di acido solforico diluito R e 20 ml di potassio
materiale selezionato come campione tipo. Se la permanganato 0,002 M. Far bollire a ricadere per
sostanza in esame si presenta sotto forma di lamine, 3 min e raffreddare immediatamente. Aggiungere 1 g
lo spettro puo© essere ottenuto direttamente su un di potassio ioduro R e titolare immediatamente con
frammento di dimensione appropriata. sodio tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di amido solu-

322
 Polietilene senza additivi per contenitori per preparazioni parenterali ed oftalmiche

inoizircserP
zione R, come indicatore. Effettuare una titolazione in

ilareneG
3.1.5. POLIETILENE CON ADDITIVI PER CON-

bianco. La differenza tra i volumi utilizzati nelle due TENITORI PER PREPARAZIONI PARENTE-

titolazioni non e© superiore a 0,5 ml. RALI ED OFTALMICHE

Sostanze solubili in esano . Introdurre 10 g in una beuta

di vetro borosilicato con collo a smeriglio da 250 ml.
DEFINIZIONE

isilanA id
Aggiungere 100 ml di esano R e bollire a ricadere per

idoteM
4 h con agitazione costante. Raffreddare in acqua Il polietilene con additivi si ottiene per polimerizza-
ghiacciata e filtrare rapidamente attraverso un filtro di zione dell'etilene sotto pressione in presenza di un cata-
vetro poroso (16) mantenendo la soluzione a 0 ‘C lizzatore o per copolimerizzazione dell'etilene con non
(il tempo di filtrazione deve essere inferiore a 5 min; se piu© del 25 per cento di alcheni omologhi superiori

irotinetnoC
necessario la filtrazione puo© essere accelerata eserci-

/ ilairetaM
tando una pressione sulla soluzione). Evaporare a b.m. (da C3 a C10).
20 ml di filtrato in una capsula di vetro tarata.
Essiccare il residuo in stufa tra 100 ‘C e 105 ‘C per 1 h. PRODUZIONE
La massa del residuo ottenuto non deve differire di piu©
del 10 per cento da quella del residuo ottenuto con il Un certo numero di additivi sono addizionati al poli-

ivittaeR
campione tipo e non deve superare il 5 per cento. mero per migliorare le sue caratteristiche chimiche, fisi-
Additivi . Esaminare mediante cromatografia su strato che e meccaniche e renderlo cos|© piu© adatto all'uso pre-
sottile (2.2.27), usando una lastra di gel di silice G R. visto. Tutti questi additivi sono scelti dalla lista
Soluzione in esame. Evaporare a secco, sotto vuoto a seguente, che specifica per ciascun prodotto il conte-
nuto massimo consentito.

itnemogrA
45 ‘C, 50 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo

ilareneG
in 5 ml di diclorometano R. Preparare una soluzione in Possono contenere al massimo tre antiossidanti, uno o
bianco dalla soluzione in bianco corrispondente alla piu© lubrificanti o agenti antibloccanti come pure titanio
soluzione S2. diossido come agente opacizzante, se il materiale deve
Soluzione di riferimento. Disciogliere 20 mg di additivo proteggere dalla luce.

eifargonoM

ilareneG
per plastica 15 SCR e 20 mg di additivo per plasti- ^ butilidrossitoluene (additivo per plastica 07) (non
ca 08 SCR in diclorometano R e diluire a 10 ml con lo piu© dello 0,125 per cento),
stesso solvente.
Deporre sulla lastra 10 ml di ciascuna soluzione. Eluire ^ pentaeritritile tetrakis[3-(3,5-di-tert-butil-4-idrossife-
nil) propionato] (additivo per plastica 09) (non piu©

ehcituecamraF
per un percorso di 13 cm usando esano R. Lasciar sec- dello 0,3 per cento),
care la lastra all'aria. Eluire una seconda volta per un

emroF
percorso di 10 cm usando una miscela di 5 volumi di ^ 1,3,5-tris(3,5-di-tert-butil-4-idrossibenzil)-s-triazin-
metanolo R e 95 volumi di diclorometano R. Lasciar sec- 2,4,6(1H,3H,5H)-trione (additivo per plastica 13)
care la lastra all'aria, spruzzare con una soluzione (non piu© dello 0,3 per cento),
(40 g/l) di acido fosfomolibdico R in etanolo R e scaldare
in stufa a 120 ‘C fino a comparsa delle macchie nel cro- ^ ottadecile 3-(3,5-di(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil) pro-

eiretaM
pionato (additivo per plastica 11) (non piu© dello

emirP
matogramma ottenuto con la soluzione di riferimento.
Non compare alcuna macchia nel cromatogramma 0,3 per cento),
ottenuto con la soluzione in esame, ad eccezione di ^ etilenebis [3,3-bis[3-(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil]bu-
una macchia che puo© trovarsi sul fronte del solvente tanoato (additivo per plastica 08) (non piu© dello
ehcituecamraF

della prima eluizione e che corrisponde agli oligomeri.

inoizaraperP

0,3 per cento),

ehcificepS

Trascurare ogni macchia corrispondente a quelle del

cromatogramma ottenuto con la soluzione in bianco. ^ diottadecil disulfuro (additivo per plastica 15) (non
Il cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferi- piu© dello 0,3 per cento),
mento presenta due macchie distinte. ^ 2,2',2'',6,6',6''-esa-tert-butil-4,4',4''-[(2,4,6-trimetil-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Metalli pesanti estraibili (2.4.8). Evaporare a b.m. 50 ml 1,3,5-benzenetriil)trismetilen]trifenolo (additivo

di soluzione S3 a circa 5 ml e diluire a 20 ml con per plastica 10) (non piu© dello 0,3 per cento),
acqua R. 12 ml della soluzione soddisfano al saggio
limite A per i metalli pesanti (2,5 ppm). Preparare lo ^ 2,2'-di(ottadecilossi)-5,5'-spirobi(1,3,2-dioxafosfo-
standard usando 2,5 ml della soluzione standard di rinano) (additivo per plastica 14) (non piu© dello
piombo (Pb 10 ppm) R. 0,3 per cento),
ecidnI

Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,2 per cento, ^ didodecile-3,3'-tiodipropionato (additivo per pla-
determinate su 5,0 g. stica 16) (non piu© dello 0,3 per cento),

323
Polietilene senza additivi per contenitori per preparazioni parenterali ed oftalmiche

^ diottadecile-3,3'-tiodipropionato (additivo per pla- 1170 cm-1, 730 cm-1, 720 cm-1; lo spettro ottenuto e©
stica 17) (non piu© dello 0,3 per cento), identico a quello ottenuto con il materiale selezio-
^ tris (2,4-di-tert-butilfenil)fosfito (additivo per pla- nato come campione tipo. Se il materiale in esame
stica 12) (non piu© dello 0,3 per cento). si presenta sotto forma di lamine, lo spettro puo©
Il totale degli additivi antiossidanti sopra elencati non essere ottenuto direttamente su un frammento di
supera lo 0,3 per cento dimensione appropriata.
^ idrotalcite (non piu© dello 0,5 per cento), B. Soddisfa ai saggi supplementari corrispondenti agli
^ alcanammidi (non piu© dello 0,5 per cento), additivi presenti (vedere Saggi).
^ alchenammidi (non piu© dello 0,5 per cento), C. In un crogiolo di platino mescolare circa 20 mg con
^ sodio silico-alluminato (non piu© dello 0,5 per cento), 1 g di potassiosolfatoacidoRe scaldare finoafusione
^ silice (non piu© dello 0,5 per cento), completa. Lasciar raffreddare ed aggiungere 20 ml
^ sodio benzoato (non piu© dello 0,5 per cento), di acido solforico diluito R. Scaldare leggermente.
Filtrare la soluzione ottenuta. Aggiungere al filtrato
^ esteriosalidiacidigrassi(nonpiu© dello0,5 percento), 1 ml di acido fosforico R e 1 ml di idrogeno perossido
^ fosfato trisodico (non piu© dello 0,5 per cento), soluzione concentrata R. Se la sostanza e© opacizzata
^ paraffina liquida (non piu© dello 0,5 per cento), con titanio diossido, si sviluppa una colorazione
^ zinco ossido (non piu© dello 0,5 per cento), giallo-arancio.
^ magnesio ossido (non piu© dello 0,2 per cento),
^ calcio o zinco stearato o una miscela di entrambi SAGGI
(non piu© dello 0,5 per cento),
^ titanio diossido (non piu© del 4 per cento) solo per Se necessario tagliare il materiale da esaminare in pezzi
materiali per contenitori per uso oftalmico. della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm.
Il produttore del materiale deve essere in grado di . Introdurre 25 g in un pallone di vetro
dimostrare che la composizione qualitativa e quantita-
Soluzione S1

borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 500 ml

tiva del campione sia soddisfacente per ogni lotto di di acqua per preparazioni iniettabili R e bollire a
produzione. ricadere per 5 h. Lasciar raffreddare e decantare.
Conservare una porzione della soluzione per il saggio
CARATTERI dell'aspetto della soluzione e filtrare la parte rimanente
attraverso un filtro di vetro poroso (16). Utilizzare entro
Polvere, palline, granuli o, dopo trasformazione, 4 h dalla preparazione.
lamine traslucide di spessore variabile o contenitori. Introdurre 2,0 g in una beuta di vetro
E' praticamente insolubile in acqua, solubile a caldo Soluzione S2.

borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 80 ml di

negli idrocarburi aromatici, praticamente insolubile in toluene R e bollire a ricadere per 90 min agitando
etanolo, in esano e in metanolo. Rammollisce a tempe- costantemente. Lasciar raffreddare a 60 ‘C e aggiun-
rature comprese tra 70 ‘C e 140 ‘C. gere, continuando l'agitazione, 120 ml di metanolo R.
La densita© relativa (2.2.5) del materiale e© 0,890-0,965. Filtrare la soluzione attraverso un filtro di vetro
poroso (16). Lavare la beuta e il filtro con 25 ml di una
IDENTIFICAZIONE miscela di 40 ml di toluene R e 60 ml di metanolo R,
aggiungere i lavaggi al filtrato e diluire a 250,0 ml con
Se necessario tagliare il materiale da esaminare in pezzi la stessa miscela di solventi. Preparare una soluzione
della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm. come bianco.
A. A 0,25 g aggiungere 10 ml di toluene R e bollire a . Introdurre 100 g in una beuta di vetro
ricadere per circa 15 min. Deporre alcune gocce
Soluzione S 3

della soluzione ottenuta su una finestra di sodio

borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 250 ml
cloruro ed evaporare il solvente in stufa a 80 ‘C.
di acido cloridrico 0,1 M e bollire a ricadere per 1 h agi-
Esaminare mediante spettrofotometria di assorbi-
tando costantemente. Lasciar raffreddare e decantare
mento infrarosso (2.2.24). Lo spettro del materiale
la soluzione.
in esame mostra massimi -1di assorbimento in parti- Aspetto della soluzione. La soluzione S1 e© limpida (2.2.1)
colare a 2920 - 2850 cm , 1465 cm-1, 1375 cm-1, e incolore (Metodo II, 2.2.2).

324
 Polietilene senza additivi per contenitori per preparazioni parenterali ed oftalmiche

inoizircserP
A 100 ml di soluzione S1, aggiun- Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.

ilareneG
Acidita© o alcalinita©.

gere 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R. Non sono Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
necessari piu© di 1,5 ml di sodio idrossido soluzio- mento usando la soluzione standard di cromo
ne 0,01 M per far virare al blu l'indicatore. A 100 ml (Cr 100 ppm) R, diluita con una miscela di 2 volumi di
di soluzione S1 aggiungere 0,2 ml di metilarancio solu- acido cloridrico R e 8 volumi di acqua R.

isilanA id
zione R. Perchë inizi il viraggio dell'indicatore da giallo

idoteM
ad arancio non e© necessario piu© di 1,0 ml di acido clori- Effettuare la determinazione usando l'emissione del
drico 0,01 M. cromo a 205,55 nm, valutando il fondo spettrale a
205,50 nm.
Assorbanza (2.2.25). L'assorbanza della soluzione S1 Verificare l'assenza di cromo nell'acido cloridrico
misurata a lunghezze d'onda tra 220 nm e 340 nm non

irotinetnoC
usato.

/ ilairetaM
e© maggiore di 0,2.
. A 20 ml della soluzione S1 aggiun- Titanio estraibile . Non piu© di 1 ppm di Ti estraibile,
Sostanze riducenti

gere 1 ml di acido solforico diluito R e 20 ml di potassio determinato mediante spettrometria di emissione ato-
permanganato 0,002 M. Far bollire a ricadere per 3 min mica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22).
e raffreddare immediatamente. Aggiungere 1 g di Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.

ivittaeR
potassio ioduro R e titolare immediatamente con sodio Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di amido soluzione R, mento usando la soluzione standard di titanio
come indicatore. Effettuare una titolazione in bianco. (Ti 100 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.
La differenza tra i volumi utilizzati nelle due titolazioni Effettuare la determinazione usando l'emissione del
non e© superiore a 0,5 ml.

itnemogrA
titanio a 336,12 nm, valutando il fondo spettrale a

ilareneG
Sostanze solubili in esano . Introdurre 10 g in una beuta 336,16 nm.
di vetro borosilicato con collo a smeriglio da 250 ml. Verificare l'assenza di titanio nell'acido cloridrico
Aggiungere 100 ml di esano R e bollire a ricadere usato.
per 4 h con agitazione costante. Raffreddare in acqua . Non piu© di 0,1 ppm di V estraibile,

eifargonoM
ghiacciata e filtrare rapidamente attraverso un filtro di

ilareneG
Vanadio estraibile

vetro poroso (16) mantenendo la soluzione a 0 ‘C determinato mediante spettrometria di emissione

(il tempo di filtrazione deve essere inferiore a 5 min; se atomica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22).
necessario la filtrazione puo© essere accelerata eserci- Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.
tando una pressione sulla soluzione). Evaporare a b.m. Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di

ehcituecamraF
20 ml di filtrato in una capsula di vetro borosilicato riferimento usando la soluzione standard di vanadio

emroF
tarata. Essiccare il residuo in stufa tra 100 ‘C e 105 ‘C (V 1 g/l) R, diluita con una miscela di 2 volumi di acido
per 1 h. La massa del residuo ottenuto non deve diffe- cloridrico R e 8 volumi di acqua R.
rire di piu© del 10 per cento da quella del residuo otte- Effettuare la determinazione usando l'emissione del
nuto con il campione tipo e non deve superare il 5 per vanadio a 292,40 nm, valutando il fondo spettrale a
cento. 292,35 nm.
eiretaM

emirP
Alluminio estraibile . Non piu© di 1 ppm di Al estraibile, Verificare l'assenza di vanadio nell'acido cloridrico
determinato mediante spettrometria di emissione ato- usato.
mica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22). . Non piu© di 1 ppm di Zn estraibile,
ehcituecamraF

Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.

Zinco estraibile

determinato mediante spettrometria di assorbimento

inoizaraperP

ehcificepS

Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- atomico (Metodo I, 2.2.23).

mento usando la soluzione standard di alluminio Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.
(Al 200 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M. Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
Effettuare la determinazione usando l'emissione dell'al- mento usando la soluzione standard di zinco
ehcitapoemO
inoizaraperP

luminio a 396,15 nm, valutando il fondo spettrale a (Zn 10 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.
396,25 nm. Misurare l'assorbanza a 213,9 nm usando come sor-
Verificare l'assenza di alluminio nell'acido cloridrico gente di radiazione una lampada a catodo cavo allo
usato. zinco ed una fiamma aria-acetilene.
Cromo estraibile . Non piu© di 0,05 ppm di Cr estraibile, Zirconio estraibile . Non piu© di 0,1 ppm di Zr estraibile,
ecidnI

determinato mediante spettrometria di emissione ato- determinato mediante spettrometria di emissione ato-
mica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22). mica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22).

325
Polietilene senza additivi per contenitori per preparazioni parenterali ed oftalmiche

Soluzione in esame. Usare la soluzione S3. ^ una risoluzione non inferiore a 2,0 tra i picchi
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- corrispondenti all'additivo per plastica 11 e al-
mento usando la soluzione standard di zirconio l'additivo per plastica 12, con la fase mobile 3.
(Zr 1 g/l) R, diluita con una miscela di 2 volumi di Soluzione in esame S21. Evaporare a secco, sotto vuoto a
acido cloridrico R e 8 volumi di acqua R. 45 ‘C, 50 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo
Effettuare la determinazione usando l'emissione dello in 5,0 ml di una miscela di volumi uguali di acetonitri-
zirconio a 343,82 nm, valutando il fondo spettrale a le R e tetraidrofurano R. Preparare una soluzione in
343,92 nm. bianco a partire dalla soluzione in bianco corrispon-
Verificare l'assenza di zirconio nell'acido cloridrico dente alla soluzione S2.
usato. Soluzione in esame S22. Evaporare a secco, sotto vuoto a
(2.4.8). Evaporare a b.m. 50 ml 45 ‘C, 50 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo
Metalli pesanti estraibili

di soluzione S3 a circa 5 ml e diluire a 20,0 ml con in 5,0 ml di diclorometano R. Preparare una soluzione
acqua R. 12 ml della soluzione soddisfano al saggio in bianco a partire dalla soluzione in bianco corrispon-
limite A per i metalli pesanti (2,5 ppm). Preparare lo dente alla soluzione S2.
standard usando 2,5 ml della soluzione standard di Delle seguenti soluzioni di riferimento, preparare solo
piombo (Pb 10 ppm) R. quelle che sono necessarie per l'analisi degli antiossidanti
(2.4.14). Non superiori all'1,0 per fenolici riportati nella composizione della sostanza da
Ceneri solforiche

cento, determinate su 5,0 g. Questo limite non si esaminare.

applica a materiale che e© stato opacizzato con titanio Soluzione di riferimento (a). Disciogliere 25,0 mg di
diossido. butilidrossitoluene SCR (additivo per plastica 07) e
60,0 mg di additivo per plastica 08 SCR in 10,0 ml di
SAGGI SUPPLEMENTARI una miscela di volumi uguali di acetonitrile R e tetra-
idrofurano R. Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml
Effettuare questi saggi, in tutto o in parte, soltanto se con una miscela di volumi uguali di acetonitrile R e
richiesto dalla composizione riportata per il materiale. tetraidrofurano R.
Antiossidanti fenolici . Esaminare mediante cromato- Soluzione di riferimento (b). Disciogliere 60,0 mg di
grafia liquida (2.2.29) additivo per plastica 09 SCR e 60,0 mg di additivo per
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito plastica 10 SCR in 10,0 ml di una miscela di volumi
usando: uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. Diluire
2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela di
^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 0,25 m e volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
con diametro interno di 4,6 mm impaccata con gel Soluzione di riferimento (c). Disciogliere 60,0 mg di
di silice ottadecilsililato per cromatografia R (5 mm), additivo per plastica 11 SCR e 60,0 mg di additivo per
^ come fase mobile una delle tre miscele seguenti: plastica 12 SCR in 10,0 ml di diclorometano R.
Fase mobile 1 ad una velocita© di flusso di 2 ml/min: Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con dicloro-
30 volumi di acqua R, 70 volumi di acetonitrile R, metano R.
Fase mobile 2 ad una velocita© di flusso di Soluzione di riferimento (d). Disciogliere 25,0 mg di
1,5 ml/min: 10 volumi di acqua R, 30 volumi di butilidrossitoluene SCR (additivo per plastica 07) in
tetraidrofurano R, 60 volumi di acetonitrile R, 10,0 ml di una miscela di volumi uguali di acetonitri-
Fase mobile 3 ad una velocita© di flusso di le R e tetraidrofurano R. Diluire 2,0 ml della soluzione
1,5 ml/min: 5 volumi di acqua R, 45 volumi di a 50,0 ml con una miscela di volumi uguali di acetoni-
2-propanolo R, 50 volumi di metanolo R, trile R e tetraidrofurano R.
^ come rivelatore uno spettrofotometro regolato a Soluzione di riferimento (e). Disciogliere 60,0 mg di
280 nm. additivo per plastica 08 SCR in 10,0 ml di una miscela
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
Il sistema cromatografico deve assicurare: Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela
^ una risoluzione non inferiore a 8,0 tra i picchi di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
corrispondenti all'additivo per plastica 07 e al- Soluzione di riferimento (f). Disciogliere 60,0 mg di
l'additivo per plastica 08, con la fase mobile 1, additivo per plastica 13 SCR in 10,0 ml di una miscela
^ una risoluzione non inferiore a 2,0 tra i picchi di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
corrispondenti all'additivo per plastica 09 e al- Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela
l'additivo per plastica 10, con la fase mobile 2, di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.

326
 Polietilene senza additivi per contenitori per preparazioni parenterali ed oftalmiche

inoizircserP
Soluzione di riferimento (g). Disciogliere 60,0 mg di in esame S21 e S22 sono minori delle aree dei picchi cor-

ilareneG
additivo per plastica 09 SCR in 10,0 ml di una miscela rispondenti nei cromatogrammi ottenuti con le solu-
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. zioni di riferimento da (d) a (j).
Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela . Esaminare mediante croma-
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. Antiossidanti non-fenolici

tografia su strato sottile (2.2.27), usando una lastra di

isilanA id
Soluzione di riferimento (h). Disciogliere 60,0 mg di gel di silice GF254 R.

idoteM
additivo per plastica 10 SCR in 10,0 ml di una miscela Soluzione in esame S23. Evaporare a secco, sotto vuoto a
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. 45 ‘C, 100 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo
Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela in 2 ml di diclorometano acidificato R.
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
Soluzione di riferimento (k). Disciogliere 60 mg di addi-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Soluzione di riferimento (i). Disciogliere 60,0 mg di tivo per plastica 14 SCR in diclorometano R e diluire a
additivo per plastica 11 SCR in 10,0 ml di diclorome- 10 ml con lo stesso solvente. Diluire 2 ml della solu-
tano R. Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con zione a 10 ml con diclorometano acidificato R.
diclorometano R.
Soluzione di riferimento (j). Disciogliere 60,0 mg di Soluzione di riferimento (l). Disciogliere 60 mg di addi-
tivo per plastica 15 SCR in diclorometano R e diluire a

ivittaeR
additivo per plastica 12 SCR in 10,0 ml di diclorometa- 10 ml con lo stesso solvente. Diluire 2 ml della solu-
no R. Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con diclo- zione a 10 ml con diclorometano acidificato R.
rometano R.
Soluzione di riferimento (m). Disciogliere 60 mg di
Se la sostanza in esame contiene l'additivo per pla- additivo per plastica 16 SCR in diclorometano R e diluire
stica 07 e/o l'additivo per plastica 08, usare la fase a 10 ml con lo stesso solvente. Diluire 2 ml della solu-

itnemogrA
ilareneG
mobile 1 e iniettare 20 ml della soluzione in esame S21, zione a 10 ml con diclorometano acidificato R.
20 ml della corrispondente soluzione in bianco, 20 ml
della soluzione di riferimento (a) e anche 20 ml delle Soluzione di riferimento (n). Disciogliere 60 mg di addi-
soluzioni di riferimento (d) o (e) oppure 20 ml delle tivo per plastica 17 SCR in diclorometano R e diluire a
soluzioni di riferimento (d) ed (e). 10 ml con lo stesso solvente. Diluire 2 ml della solu-

eifargonoM
zione a 10 ml con diclorometano acidificato R.

ilareneG
Se la sostanza in esame contiene uno o piu© dei seguenti Soluzione di riferimento (o). Disciogliere 60 mg di addi-
antiossidanti: tivo per plastica 16 SCR e 60 mg di additivo per plasti-
^ additivo per plastica 09, ca 17 SCR in diclorometano R e diluire a 10 ml con lo
stesso solvente. Diluire 2 ml della soluzione a 10 ml

ehcituecamraF
^ additivo per plastica 10, con diclorometano acidificato R.

emroF
^ additivo per plastica 11, Deporre separatamente sulla lastra 20 ml della solu-
^ additivo per plastica 12, zione in esame S23, 20 ml della soluzione di riferimento
^ additivo per plastica 13, (o) e 20 ml delle soluzioni di riferimento corrispondenti
a tutti gli antiossidanti, fenolici e non-fenolici,
usare la fase mobile 2 e iniettare 20 ml della soluzione in dichiarati nella composizione tipo del materiale da
eiretaM

emirP
esame S21, 20 ml della corrispondente soluzione in esaminare.
bianco, 20 ml della soluzione di riferimento (b) e 20 ml Eluire per un percorso di 18 cm usando esano R.
delle soluzioni di riferimento degli antiossidanti dell'e- Lasciar seccare la lastra. Eluire una seconda volta per
lenco precedente che sono riportati nella composizione. un percorso di 17 cm usando diclorometano R.
ehcituecamraF
inoizaraperP

Se la sostanza in esame contiene l'additivo per pla-

ehcificepS

Lasciar seccare la lastra ed esaminare alla luce ultravio-

stica 11 e/o l'additivo per plastica 12, usare la fase letta a 254 nm. Spruzzare con iodio soluzione alcooli-
mobile 3 e iniettare 20 ml della soluzione in esame S22, ca R ed esaminare alla luce ultravioletta a 254 nm dopo
20 ml della corrispondente soluzione in bianco, 20 ml 10-15 min. Qualunque macchia del cromatogramma
della soluzione di riferimento (c) e 20 ml delle soluzioni ottenuto con la soluzione in esame S23 non e© piu© intensa
ehcitapoemO
inoizaraperP

di riferimento (i) o (j) oppure 20 ml delle soluzioni di delle macchie, nelle posizioni corrispondenti, dei cro-
riferimento (i) e (j). matogrammi ottenuti con le soluzioni di riferimento.
In tutti i casi, registrare i cromatogrammi per 30 min; Il saggio non e© valido se il cromatogramma ottenuto
i cromatogrammi corrispondenti alle soluzioni in con la soluzione di riferimento (o) non presenta due
esame S21 e S22 presentano solo picchi dovuti agli anti- macchie nettamente separate.
ossidanti contenuti nella composizione e picchi minori Ammidi e stearati . Esaminare mediante cromatografia
ecidnI

presenti anche nei cromatogrammi corrispondenti alle su strato sottile (2.2.27), usando due lastre del tipo
soluzioni in bianco. Le aree dei picchi delle soluzioni lastre di gel di silice GF254 R.

327
Polipropilene per contenitori e chiusure per preparazioni parenterali ed oftalmiche

Soluzione in esame. Usare la soluzione S23 descritta nel PRODUZIONE

saggio per gli antiossidanti non-fenolici. Un certo numero di additivi sono addizionati al poli-
Soluzione di riferimento (p). Disciogliere 20 mg di acido mero per migliorare le sue caratteristiche chimiche, fisi-
stearico SCR (additivo per plastica 19) in diclorometa- che e meccaniche e renderlo cos|© piu© adatto all'uso pre-
no R e diluire a 10 ml con lo stesso solvente. visto. Tutti questi additivi sono scelti dalla lista
seguente, che specifica per ciascun prodotto il conte-
Soluzione di riferimento (q). Disciogliere 40 mg di addi- nuto massimo consentito.
tivo per plastica 20 SCR in diclorometano R e diluire a Possono contenere al massimo tre antiossidanti, uno o
20 ml con lo stesso solvente. piu© lubrificanti o agenti antibloccanti come pure titanio
Soluzione di riferimento (r). Disciogliere 40 mg di addi- diossido come agente opacizzante, se il materiale deve
tivo per plastica 21 SCR in diclorometano R e diluire a proteggere dalla luce.
20 ml con lo stesso solvente. ^ butilidrossitoluene (additivo per plastica 07) (non
Deporre su ciascuna delle due lastre 10 l della solu- piu© dello 0,125 per cento),
^ pentaeritritile tetrakis[3-(3,5-di-tert-butil-4-idrossi-
m
zione in esame S23. Deporre 10 ml della soluzione di
riferimento (p) sulla prima lastra e 10 ml di ciascuna fenil) propionato] (additivo per plastica 09) (non piu©
delle soluzioni di riferimento (q) e (r) sulla seconda dello 0,3 per cento),
lastra. Eluire la prima lastra per un percorso di 10 cm ^ 1,3,5-tris[3,5-di-tert-butil-4-idrossibenzil]-s-tria-
usando una miscela di 25 volumi di etanolo R e zina-2,4,6(1H,3H,5H)-trione (additivo per plastica
75 volumi di trimetilpentano R. Lasciar seccare la 13) (non piu© dello 0,3 per cento),
lastra all'aria. Spruzzare con una soluzione (2 g/l) di ^ ottadecile 3-(3,5-di-tert-butil-4-idrossifenil) propionato
diclorofenolindofenolo sale sodico R in etanolo R e scal- (additivo per plastica 11) (non piu© dello 0,3 per cento),
dare in stufa a 120 ‘C per pochi minuti per intensificare ^ etilenebis[3,3-bis]3-(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil]
le macchie. Qualsiasi macchia corrispondente all'addi- butanoato] (additivo per plastica 08) (non piu© dello
tivo per plastica 19 nel cromatogramma ottenuto con 0,3 per cento),
la soluzione S23 e© identica per posizione (Rf circa 0,5)
ma non piu© intensa della macchia del cromatogramma ^ diottadecil disulfuro (additivo per plastica 15) (non
ottenuto con la soluzione di riferimento (p). piu© dello 0,3 per cento),
Eluire la seconda lastra per un percorso di 13 cm ^ 2,2',2'',6,6',6''-esa-tert-butil-4,4',4''-[(2,4,6-trimetil-
usando esano R. Lasciar seccare la lastra all'aria. 1,3,5-benzenetriil)trismetilen]trifenolo (additivo
Eluire una seconda volta per un percorso di 10 cm per plastica 10) (non piu© dello 0,3 per cento),
usando una miscela di 5 volumi di metanolo R e ^ 2,2'-bis(ottadecilossi)-5,5'-spirobi(1,3,2-dioxafosfo-
95 volumi di diclorometano R. Lasciar seccare la lastra. rinano) (additivo per plastica 14) (non piu© dello
Spruzzare con una soluzione (40 g/l) di acido fosfomo- 0,3 per cento),
libdico R in etanolo R. Scaldare in stufa a 120 ‘C fino a ^ didodecile-3,3'-tiodipropionato (additivo per pla-
comparsa delle macchie. Qualsiasi macchia corrispon- stica 16) (non piu© dello 0,3 per cento),
dente all'additivo per plastica 20 o all'additivo per pla- ^ diottadecile-3,3'-tiodipropionato (additivo per pla-
stica 21 nel cromatogramma ottenuto con la soluzione stica 17) (non piu© dello 0,3 per cento),
in esame S23 e© identica per posizione (Rf circa 0,2) ma
non piu© intensa della macchia corrispondente nel ^ tris (2,4-di^tert-butilfenil)fosfito (additivo per pla-
cromatogramma ottenuto con le soluzioni di riferi- stica 12) (non piu© dello 0,3 per cento),
mento (q) ed (r). Il totale degli additivi antiossidanti sopra elencati non
supera lo 0,3 per cento.
^ idrotalcite (non piu© dello 0,5 per cento),
3.1.6. POLIPROPILENE
CHIUSURE PER
PER CONTENITORI
PREPARAZIONI PAREN-
E
^ alcanammidi (non piu© dello 0,5 per cento),
TERALI ED OFTALMICHE ^ alchenammidi (non piu© dello 0,5 per cento),
^ sodio silico-alluminato (non piu© dello 0,5 per cento),
DEFINIZIONE ^ silice (non piu© dello 0,5 per cento),
Il polipropilene e© costituito dall'omopolimero del pro- ^ sodio benzoato (non piu© dello 0,5 per cento),
pilene o da un copolimero del propilene con non piu© ^ esteriosalidiacidigrassi(nonpiu© dello0,5 percento),
del 25 per cento di etilene o da una miscela (lega) di ^ fosfato trisodico (non piu© dello 0,5 per cento),
polipropilene con non piu© del 25 per cento di polieti-
lene. Puo© contenere additivi. ^ paraffina liquida (non piu© dello 0,5 per cento),

328
 Polipropilene per contenitori e chiusure per preparazioni parenterali ed oftalmiche

inoizircserP
^ zinco ossido (non piu© dello 0,5 per cento), SAGGI

ilareneG
^ talco (non piu© dello 0,5 per cento), Se necessario tagliare il materiale da esaminare in pezzi
^ magnesio ossido (non piu© dello 0,2 per cento), della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm.
^ calcio o zinco stearato o una miscela di entrambi Soluzione S1 . Utilizzare la soluzione S1 entro 4 h dalla
preparazione Introdurre 25 g in un pallone di vetro

isilanA id
idoteM
(non piu© dello 0,5 per cento), borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 500 ml
^ titanio diossido (non piu© del 4 per cento) solo per di acqua per preparazioni iniettabili R e bollire a
materiali per contenitori per uso oftalmico. ricadere per 5 h. Lasciar raffreddare e decantare.
Conservare una porzione della soluzione per il saggio
Il produttore del materiale deve essere in grado di dell'aspetto della soluzione e filtrare la parte rimanente

irotinetnoC
/ ilairetaM
dimostrare che la composizione qualitativa e quantita- attraverso un filtro di vetro poroso (16).
tiva del campione tipo sia soddisfacente per ogni lotto . Introdurre 2,0 g in una beuta di vetro
di produzione. Soluzione S2

borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 80 ml di

toluene R e bollire a ricadere per 1 h e 30 min agitando
CARATTERI costantemente. Lasciar raffreddare a 60 ‘C e aggiun-

ivittaeR
gere, continuando l'agitazione, 120 ml di metanolo R.
Polvere, palline, granuli o, dopo trasformazione, Filtrare la soluzione attraverso un filtro di vetro
lamine traslucide di spessore variabile o contenitori. poroso (16). Lavare la beuta e il filtro con 25 ml di una
E' praticamente insolubile in acqua, solubile a caldo miscela di 40 ml di toluene R e 60 ml di metanolo R,
negli idrocarburi aromatici, praticamente insolubile in aggiungere i lavaggi al filtrato e diluire a 250,0 ml con

itnemogrA
ilareneG
etanolo, in esano e in metanolo. Rammollisce a tempe- la stessa miscela di solventi. Preparare una soluzione
rature superiori a circa 120 ‘C. in bianco.
Soluzione S 3 . Introdurre 100 g in una beuta di vetro
IDENTIFICAZIONE borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 250 ml
di acido cloridrico 0,1 M e bollire a ricadere per 1 h agi-

eifargonoM

ilareneG
Se necessario tagliare il materiale da esaminare in pezzi tando costantemente. Lasciar raffreddare e decantare
della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm. la soluzione.
A. A 0,25 g aggiungere 10 ml di toluene R e bollire a Aspetto della soluzione . La soluzione S1 non e© piu© opa-
ricadere per circa 15 min. Deporre alcune gocce lescente della sospensione di riferimento II (2.2.1) ed e©

ehcituecamraF
della soluzione calda su un disco di sodio cloruro incolore (Metodo II, 2.2.2).

emroF
ed evaporare il solvente in stufa a 80 ‘C. Esaminare . A 100 ml di soluzione S1, aggiun-
Acidita© o alcalinita©

mediante spettrofotometria di assorbimento infra- gere 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R. Non sono
rosso (2.2.24). Lo spettro del materiale in esame necessari piu© di 1,5 ml di sodio idrossido soluzio-
presenta un certo numero di massimi, in partico- ne 0,01 M per far virare al blu l'indicatore. A 100 ml
lare a 1375 cm-1, 1170 cm-1, 995 cm-1, 970 cm-1. di soluzione S1 aggiungere 0,2 ml di metilarancio solu-

eiretaM
Lo spettro ottenuto e© identico a quello ottenuto zione R. Perchë inizi il viraggio dell'indicatore da giallo

emirP
con il materiale selezionato come campione tipo. ad arancio non e© necessario piu© di 1,0 ml di acido clori-
Se il materiale in esame si presenta sotto forma di drico 0,01 M.
lamine, l'identificazione puo© essere effettuata diret- (2.2.25). L'assorbanza della soluzione S1
tamente su un frammento di dimensione appro-
ehcituecamraF

Assorbanza

misurata a lunghezze d'onda tra 220 nm e 340 nm non

inoizaraperP

ehcificepS

priata. e© superiore a 0,2.

B. Soddisfa ai saggi supplementari corrispondenti agli . A 20 ml della soluzione S1 aggiun-
additivi presenti (vedere Saggi).
Sostanze riducenti

gere 1 ml di acido solforico diluito R e 20 ml di potassio

C. In un crogiolo di platino mescolare circa 20 mg con permanganato 0,002 M. Far bollire a ricadere per
ehcitapoemO
inoizaraperP

1 g di potassio solfato acido R e scaldare fino a 3 min e raffreddare immediatamente. Aggiungere 1 g

fusione completa. Lasciar raffreddare ed aggiun- di potassio ioduro R e titolare immediatamente con
gere 20 ml di acido solforico diluito R. Scaldare sodio tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di amido solu-
leggermente. Filtrare la soluzione ottenuta. zione R, come indicatore. Effettuare una titolazione in
Aggiungere al filtrato 1 ml di acido fosforico R e bianco. La differenza tra i volumi utilizzati nelle due
1 ml di idrogeno perossido soluzione concentrata R. titolazioni non e© superiore a 0,5 ml.
ecidnI

Se la sostanza e© opacizzata con titanio diossido, si Sostanze solubili in esano . Introdurre 10 g in una beuta
sviluppa una colorazione giallo-arancio. di vetro borosilicato con collo a smeriglio da 250 ml.

329
Polipropilene per contenitori e chiusure per preparazioni parenterali ed oftalmiche

Aggiungere 100 ml di esano R e bollire a ricadere per Vanadio estraibile . Non piu© di 0,1 ppm di V estraibile,
4 h con agitazione costante. Raffreddare in acqua determinato mediante spettrometria di emissione
ghiacciata e filtrare rapidamente attraverso un filtro di atomica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22).
vetro poroso (16) mantenendo la soluzione a 0 ‘C Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.
(il tempo di filtrazione deve essere inferiore a 5 min; se Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di
necessario, la filtrazione puo© essere accelerata eserci- riferimento usando la soluzione standard di vanadio
tando una pressione sulla soluzione). Evaporare a b.m. (V 1 g/l) R, diluita con una miscela di 2 volumi di acido
20 ml di filtrato in una capsula di vetro borosilicato cloridrico R e 8 volumi di acqua R.
tarata. Essiccare il residuo in stufa tra 100 ‘C e 105 ‘C
per 1 h. La massa del residuo ottenuto non deve diffe- Effettuare la determinazione usando l'emissione del
rire di piu© del 10 per cento da quella del residuo otte- vanadio a 292,40 nm, valutando il fondo spettrale a
nuto con il campione tipo e non deve superare il 5 per 292,35 nm.
cento. Verificare l'assenza di vanadio nell'acido cloridrico
Alluminio estraibile . Non piu© di 1 ppm di Al estraibile, usato.
determinato mediante spettrometria di emissione ato- . Non piu© di 1 ppm di Zn estraibile,
mica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22).
Zinco estraibile

determinato mediante spettrometria di assorbimento

Soluzione in esame. Usare la soluzione S3. atomico (Metodo I, 2.2.23).
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- Soluzione in esame. Usare la soluzione S3.
mento usando la soluzione standard di alluminio Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di
(Al 200 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M. riferimento usando la soluzione standard di zinco
Effettuare la determinazione usando l'emissione del- (Zn 10 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.
l'alluminio a 396,15 nm, valutando il fondo spettrale a Misurare l'assorbanza a 213,9 nm usando come sor-
396,25 nm. gente di radiazione una lampada a catodo cavo allo
Verificare l'assenza di alluminio nell'acido cloridrico zinco ed una fiamma aria-acetilene.
usato. Verificare l'assenza di zinco nell'acido cloridrico usato.
. Non piu© di 0,05 ppm di Cr estraibile, Metalli pesanti estraibili (2.4.8). Evaporare a b.m. 50 ml
Cromo estraibile

determinato mediante spettrometria di emissione ato- di soluzione S3 a circa 5 ml e diluire a 20,0 ml con
mica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22). acqua R. 12 ml della soluzione soddisfano al saggio
limite A per i metalli pesanti (2,5 ppm). Preparare lo
Soluzione in esame. Usare la soluzione S3. standard usando 2,5 ml della soluzione standard di
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di piombo (Pb 10 ppm) R.
riferimento usando la soluzione standard di cromo Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori all'1,0 per
(Cr 100 ppm) R, diluita con una miscela di 2 volumi di cento, determinate su 5,0 g. Questo limite non si applica
acido cloridrico R e 8 volumi di acqua R. a materiale che e© stato opacizzato con titanio diossido.
Effettuare la determinazione usando l'emissione del
cromo a 205,55 nm, valutando il fondo spettrale a SAGGI SUPPLEMENTARI
205,50 nm.
Effettuare questi saggi, in tutto o in parte, soltanto se
Verificare l'assenza di cromo nell'acido cloridrico richiesto dalla composizione riportata per il materiale.
usato. . Esaminare mediante cromato-
. Non piu© di 1 ppm di Ti estraibile,
Antiossidanti fenolici
Titanio estraibile grafia liquida (2.2.29).
determinato mediante spettrometria di emissione Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
atomica in plasma di argon (Metodo I, 2.2.22). usando:
Soluzione in esame. Usare la soluzione S3. ^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 0,25 m e
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di con diametro interno di 4,6 mm impaccata con gel
riferimento usando la soluzione standard di titanio di silice ottadecilsililato per cromatografia R (5 mm),
(Ti 100 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M. ^ come fase mobile una delle tre miscele seguenti:
Effettuare la determinazione usando l'emissione del Fase mobile 1 ad una velocita© di flusso di 2 ml/min:
titanio a 336,12 nm, valutando il fondo spettrale a 30 volumi di acqua R, 70 volumi di acetonitrile R,
336,16 nm. Fase mobile 2 ad una velocita© di flusso di1,5 ml/min:
Verificare l'assenza di titanio nell'acido cloridrico 10 volumi di acquaR,30 volumi di tetraidrofurano R,
usato. 60volumi di acetonitrileR,

330
 Polipropilene per contenitori e chiusure per preparazioni parenterali ed oftalmiche

inoizircserP
Fase mobile 3 ad una velocita© di flusso di1,5 ml/min: e tetraidrofurano R. Diluire 2,0 ml della soluzione

ilareneG
5 volumi di acqua R, 45 volumi di 2-propanolo R, a 50,0 ml con una miscela di volumi uguali di acetoni-
50 volumi dimetanoloR, trile R e tetraidrofurano R.
^ come rivelatore uno spettrofotometro regolato a Soluzione di riferimento (e). Disciogliere 60,0 mg di
280 nm. additivo per plastica 08 SCR in 10,0 ml di una miscela

isilanA id
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.

idoteM
Il sistema cromatografico deve assicurare: Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela
^ una risoluzione non inferiore a 8,0 tra i picchi cor- di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
rispondenti all'additivo per plastica 07 e all'addi- Soluzione di riferimento (f). Disciogliere 60,0 mg di
tivo per plastica 08, con la fase mobile 1, additivo per plastica 13 SCR in 10,0 ml di una miscela

irotinetnoC
/ ilairetaM
^ una risoluzione non inferiore a 2,0 tra i picchi cor- di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
rispondenti all'additivo per plastica 09 e all'addi- Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela
tivo per plastica 10, con la fase mobile 2, di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
^ una risoluzione non inferiore a 2,0 tra i picchi cor- Soluzione di riferimento (g). Disciogliere 60,0 mg di
rispondenti all'additivo per plastica 11 e all'addi- additivo per plastica 09 SCR in 10,0 ml di una miscela
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.

ivittaeR
tivo per plastica 12, con la fase mobile 3. Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela
Soluzione in esame S21. Evaporare a secco, sotto vuoto a di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
45 ‘C, 50 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo Soluzione di riferimento (h). Disciogliere 60,0 mg di
in 5,0 ml di una miscela di volumi uguali di acetonitri- additivo per plastica 10 SCR in 10,0 ml di una miscela
le R e tetraidrofurano R. Preparare una soluzione in

itnemogrA
di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.

ilareneG
bianco a partire dalla soluzione in bianco corrispon- Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela
dente alla soluzione S2. di volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
Soluzione in esame S22. Evaporare a secco, sotto vuoto a Soluzione di riferimento (i). Disciogliere 60,0 mg di
45 ‘C, 50 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo additivo per plastica 11 SCR in 10,0 ml di dicloro-

eifargonoM
in 5,0 ml di diclorometano R. Preparare una soluzione metano R. Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con

ilareneG
in bianco a partire dalla soluzione in bianco corrispon- diclorometano R.
dente alla soluzione S2. Soluzione di riferimento (j). Disciogliere 60,0 mg di
Delle seguenti soluzioni di riferimento, preparare solo additivo per plastica 12 SCR in 10,0 ml di dicloro-
quelle che sono necessarie per l'analisi degli antiossidanti

ehcituecamraF
metano R. Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con
fenolici riportati nella composizione della sostanza da diclorometano R.

emroF
esaminare. Se la sostanza in esame contiene l'additivo per pla-
Soluzione di riferimento (a). Disciogliere 25,0 mg di stica 07 e/o l'additivo per plastica 08, usare la fase
butilidrossitoluene SCR (additivo per plastica 07) e mobile 1 e iniettare 20 ml della soluzione in esame S21,
60,0 mg di additivo per plastica 08 SCR in 10,0 ml di 20 ml della corrispondente soluzione in bianco e 20 ml
una miscela di volumi uguali di acetonitrile R e tetra- della soluzione di riferimento (a) e 20 ml della soluzione
eiretaM

emirP
idrofurano R. Diluire 2,0 ml della soluzione a 50,0 ml di riferimento (d) od (e) oppure 20 ml delle soluzioni di
con una miscela di volumi uguali di acetonitrile R e riferimento (d) ed (e).
tetraidrofurano R. Se la sostanza in esame contiene uno o piu© dei seguenti
antiossidanti:
ehcituecamraF

Soluzione di riferimento (b). Disciogliere 60,0 mg di

inoizaraperP

ehcificepS

additivo per plastica 09 SCR e 60,0 mg di additivo per ^ additivo per plastica 09,
plastica 10 SCR in 10,0 ml di una miscela di volumi ^ additivo per plastica 10,
uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R. Diluire
2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con una miscela di ^ additivo per plastica 11,
volumi uguali di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
ehcitapoemO

^ additivo per plastica 12,

inoizaraperP

Soluzione di riferimento (c). Disciogliere 60,0 mg di ^ additivo per plastica 13,

additivo per plastica 11 SCR e 60,0 mg di additivo per usare la fase mobile 2 e iniettare 20 ml della soluzione in
plastica 12 SCR in 10,0 ml di diclorometano R. Diluire esame S21, 20 ml della corrispondente soluzione
2,0 ml della soluzione a 50,0 ml con diclorometano R. in bianco, 20 ml della soluzione di riferimento (b) e
Soluzione di riferimento (d). Disciogliere 25,0 mg di 20 ml delle soluzioni di riferimento degli antiossi-
ecidnI

butilidrossitoluene SCR (additivo per plastica 07) in danti dell'elenco precedente che sono riportati nella
10,0 ml di una miscela di volumi uguali di acetonitrile R composizione.

331
Polipropilene per contenitori e chiusure per preparazioni parenterali ed oftalmiche

Se la sostanza in esame contiene l'additivo per plastica letta a 254 nm. Spruzzare con iodio soluzione
11 e/o l'additivo per plastica 12, usare la fase mobile 3 alcoolica R ed esaminare alla luce ultravioletta a
e iniettare 20 ml della soluzione in esame S22, 20 ml della 254 nm dopo 10-15 min. Qualsiasi macchia nel croma-
corrispondente soluzione in bianco, 20 ml della solu- togramma ottenuto con la soluzione in esame S23 non
zione di riferimento (c) e 20 ml della soluzione di riferi- e© piu© intensa delle macchie, nelle posizioni corrispon-
mento (i) o (j) oppure 20 ml delle soluzioni di riferi- denti, dei cromatogrammi ottenuti con le soluzioni di
mento (i) e (j). riferimento. Il saggio non e© valido se il cromatogramma
In tutti i casi, registrare i cromatogrammi per 30 min; ottenuto con la soluzione di riferimento (o) non pre-
i cromatogrammi corrispondenti alle soluzioni in senta due macchie nettamente separate.
esame S21 ed S22 presentano solo picchi dovuti agli anti- . Esaminare mediante cromatografia
ossidanti contenuti nella composizione e picchi minori
Ammidi e stearati

su strato sottile (2.2.27), usando due lastre del tipo

presenti anche nei cromatogrammi corrispondenti alle lastra di gel di silice GF254 R.
soluzioni in bianco. Le aree dei picchi delle soluzioni
in esame S21 ed S22 sono minori delle aree dei picchi Soluzione in esame. Usare la soluzione S23 descritta nel
corrispondenti nei cromatogrammi ottenuti con le solu- saggio per gli antiossidanti non-fenolici.
zioni di riferimento da (d) a (j). Soluzione di riferimento (p). Disciogliere 20 mg di acido
Antiossidanti non-fenolici . Esaminare mediante croma- stearico SCR (additivo per plastica 19) in diclorometa-
tografia su strato sottile (2.2.27), usando una lastra di no R e diluire a 10 ml con lo stesso solvente.
gel di silice GF254 R. Soluzione di riferimento (q). Disciogliere 40 mg di addi-
Soluzione in esame S23. Evaporare a secco, sotto vuoto a tivo per plastica 20 SCR in diclorometano R e diluire a
45 ‘C, 100 ml della soluzione S2. Disciogliere il residuo 20 ml con lo stesso solvente.
in 2 ml di diclorometano acidificato R.
Soluzione di riferimento (r). Disciogliere 40 mg di addi-
Soluzione di riferimento (k). Disciogliere 60 mg di addi- tivo per plastica 21 SCR in diclorometano R e diluire a
tivo per plastica 14 SCR in diclorometano R e diluire a 20 ml con lo stesso solvente.
10 ml con lo stesso solvente. Diluire 2 ml della solu-
zione a 10 ml con diclorometano acidificato R. Deporre su ciascuna delle due lastre 10 ml della
Soluzione di riferimento (l). Disciogliere 60 mg di addi- soluzione S23. Deporre 10 ml della soluzione di riferi-
tivo per plastica 15 SCR in diclorometano R e diluire a mento (p) sulla prima lastra e 10 ml di ciascuna delle
10 ml con lo stesso solvente. Diluire 2 ml della solu- soluzioni di riferimento (q) ed (r) sulla seconda. Eluire
zione a 10 ml con diclorometano acidificato R. la prima lastra per un percorso di 10 cm usando una
miscela di 25 volumi di etanolo R e 75 volumi di trimetil-
Soluzione di riferimento (m). Disciogliere 60 mg di addi- pentano R. Lasciar seccare la lastra all'aria. Spruzzare
tivo per plastica 16 SCR in diclorometano R e diluire a con una soluzione (2 g/l) di diclorofenolindofenolo sale
10 ml con lo stesso solvente. Diluire 2 ml della solu- sodico R in etanolo R e scaldare in stufa a 120 ‘C per
zione a 10 ml con diclorometano acidificato R. pochi minuti per intensificare le macchie. Qualsiasi
Soluzione di riferimento (n). Disciogliere 60 mg di addi- macchia corrispondente all'additivo per plastica 19 nel
tivo per plastica 17 SCR in diclorometano R e diluire a cromatogramma ottenuto con la soluzione S23 e© iden-
10 ml con lo stesso solvente. Diluire 2 ml della solu- tica per posizione (Rf circa 0,5) ma non piu© intensa della
zione a 10 ml con diclorometano acidificato R. macchia corrispondente del cromatogramma ottenuto
con la soluzione di riferimento (p).
Soluzione di riferimento (o). Disciogliere 60 mg di addi- Eluire la seconda lastra per un percorso di 13 cm
tivo per plastica 16 SCR e 60 mg di additivo per plasti- usando esano R. Lasciar seccare la lastra all'aria.
ca 17 SCR in diclorometano R e diluire a 10 ml con lo Eluire una seconda volta per un percorso di 10 cm
stesso solvente. Diluire 2 ml della soluzione a 10 ml usando una miscela di 5 volumi di metanolo R e
con diclorometano acidificato R. 95 volumi di diclorometano R. Lasciar seccare la lastra.
Deporre separatamente sulla lastra 20 ml della solu- Spruzzare con una soluzione (40 g/l) di acido fosfomo-
zione in esame S23, 20 ml della soluzione di riferimento libdico R in etanolo R. Scaldare in stufa a 120 ‘C fino a
(o) e 20 ml delle soluzioni di riferimento corrispondenti comparsa delle macchie. Qualunque macchia corri-
a tutti gli antiossidanti, fenolici e non-fenolici, dichia- spondente all'additivo per plastica 20 o all'additivo
rati nella composizione tipo del materiale da esami- per plastica 21 nel cromatogramma ottenuto con
nare. Eluire per un percorso di 18 cm usando esano R. la soluzione in esame S23 e© identica per posizione
Lasciar seccare la lastra. Eluire una seconda volta per (Rf circa 0,2) ma non piu© intensa della macchia corri-
un percorso di 17 cm usando diclorometano R. spondente nel cromatogramma ottenuto con le solu-
Lasciar seccare la lastra ed esaminare alla luce ultravio- zioni di riferimento (q) ed (r).

332
 Etilene-vinile acetato copolimero per preparazioni destinate alla nutrizione parenterale totale

inoizircserP
^ calcio carbonato o potassio idrossido (non piu©

ilareneG
3.1.7. ETILENE-VINILE ACETATO COPOLIMERO

PER CONTENITORI E TUBOLATURE PER dello 0,5 per cento di ciascuno)

PREPARAZIONI DESTINATE ALLA NUTRI-
^ silice colloidale (non piu© dello 0,2 per cento).
Il produttore del materiale deve essere in grado di
ZIONE PARENTERALE TOTALE

dimostrare che la composizione qualitativa e quantita-

isilanA id
idoteM
DEFINIZIONE tiva del campione tipo sia soddisfacente per ogni lotto
di produzione.
L'etilene-vinile acetato copolimero, che soddisfi ai
requisiti riportati di seguito, e© adatto per la produzione CARATTERI
di contenitori e di apparati tubolari per preparazioni

irotinetnoC
/ ilairetaM
destinate alla nutrizione parenterale totale. Palline, granuli o, dopo trasformazione, lamine traslu-
L'etilene-vinile acetato copolimero si ottiene per copoli- cide o apparati tubolari di spessore variabile o cam-
merizzazione di miscele di etilene e di vinile acetato. pioni di oggetti finiti; praticamente insolubile in acqua,
Questo copolimero contiene una quantita© definita di solubile a caldo negli idrocarburi aromatici, pratica-
vinile acetato, di non piu© del 25 per cento per il mate- mente insolubile in etanolo, in metanolo e in esano che
discioglie, tuttavia, polimeri a bassa massa molecolare.

ivittaeR
riale da utilizzare per contenitori e di non piu© del Brucia con fiamma blu. La temperatura alla quale la
30 per cento per materiale da utilizzare per apparati sostanza rammollisce varia con il contenuto di vinile
tubolari. acetato; decresce da circa 100 ‘C per contenuti di
basse percentuali fino a circa 70 ‘C per contenuti del

itnemogrA
30 per cento.

ilareneG
PRODUZIONE
Un certo numero di additivi sono addizionati al poli- IDENTIFICAZIONE
mero per migliorare le sue caratteristiche chimiche, fisi-
che e meccaniche e renderlo cos|© piu© adatto all'uso pre- Se necessario, tagliare il materiale da esaminare in pezzi

eifargonoM
della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm.

ilareneG
visto. Tutti questi additivi sono scelti dalla lista
seguente, che specifica per ciascun prodotto il conte- A 0,25 g aggiungere 10 ml di toluene R e bollire a rica-
nuto massimo consentito. dere per circa 15 min. Deporre alcune gocce della solu-
Il polietilene-vinile acetato puo© contenere non piu© di tre zione ottenuta su un disco di sodio cloruro ed evapo-
rare il solvente in stufa a 80 ‘C. Esaminare mediante

ehcituecamraF
dei seguenti antiossidanti:
spettrofotometria di assorbimento infrarosso (2.2.24).

emroF
^ butilidrossitoluene (additivo per plastica 07) (non Lo spettro ottenuto mostra massimi di assorbimento
piu© dello 0,125 per cento), corrispondenti al vinile acetato-1nelle posizioni seguenti:
^ pentaeritritile tetrakis[3-(3,5-di-tert-butil-4-idrossife- 1740 cm , 1375 cm , 1240 cm , 1020 cm , 610 cm-1 e
-1 -1 -1
nil) propionato] (additivo per plastica 09) (non piu© massimi di assorbimento corrispondenti all'etilene
dello 0,2 per cento), nelle seguenti posizioni: da 2920 cm -1 a 2850 cm-1,

eiretaM

emirP
^ ottadecile 3-(3,5-di-tert-butil-4-idrossifenil) propio- 1470 cm-1, 1460 cm-1, 1375 cm-1, 730 cm-1, 720 cm-1.
nato (additivo per plastica 11) (non piu© dello 0,2 per Lo spettro ottenuto e© identico a quello ottenuto con il
cento), campione tipo fornito dal fabbricante. Se il materiale
in esame si presenta sotto forma di lamine, lo spettro
ehcituecamraF

^ tris (2,4-di^tert-butilfenil)fosfito (additivo per pla- puo© essere ottenuto direttamente su un frammento di
inoizaraperP

ehcificepS

stica 12) (non piu© dello 0,2 per cento), dimensione appropriata.
^ 2,2',2'',6,6',6''-esa-tert-butil-4,4',4''-[(2,4,6-trimetil-
1,3,5-benzenetriil)trismetilen]trifenolo (additivo SAGGI
per plastica 10) (non piu© dello 0,2 per cento),
ehcitapoemO
inoizaraperP

Puo© anche contenere: Se necessario, tagliare il materiale da esaminare in pezzi

^ oleammide (additivo per plastica 20) (non piu© dello della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm.
0,5 per cento), Soluzione S1 . Introdurre 2,0 g in un pallone di vetro
^ erucammide (additivo per plastica 21) (non piu© borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 80 ml di
dello 0,5 per cento), toluene R e bollire a ricadere per 90 min agitando conti-
nuamente. Lasciar raffreddare a 60 ‘C e aggiungere,
ecidnI

^ calcio o zinco stearato o una miscela di entrambi continuando l'agitazione, 120 ml di metanolo R.
(non piu© dello 0,5 per cento), Filtrare la soluzione attraverso un filtro di vetro

333
Etilene-vinile acetato copolimero per preparazioni destinate alla nutrizione parenterale totale

poroso (16). Lavare il pallone e il filtro con 25 ml di una metilpentano R. Lasciar seccare la lastra. Spruzzare
miscela di 40 ml di toluene R e 60 ml di metanolo R, con una soluzione (2 g/l) di diclorofenolindofenolo sale
aggiungere i lavaggi al filtrato e diluire a 250 ml con la sodico R in etanolo R e scaldare in stufa a 120 ‘C per
stessa miscela di solventi. pochi minuti per intensificare le macchie. Qualsiasi
. Utilizzare entro 4 h dalla preparazione. macchia corrispondente all'additivo per plastica 19 nel
cromatogramma ottenuto con la soluzione in esame
Soluzione S 2

Introdurre 25 g in un pallone di vetro borosilicato con

collo a smeriglio. Aggiungere 500 ml di acqua per pre- non e© piu© intensa della macchia del cromatogramma
parazioni iniettabili R e bollire a ricadere per 5 h. ottenuto con la soluzione di riferimento (a).
Lasciar raffreddare e decantare. Conservare una por- Eluire la seconda lastra per un percorso di 13 cm
zione della soluzione per il saggio dell'aspetto della usando esano R. Lasciar seccare la lastra. Eluire una
soluzione S2 e filtrare la parte rimanente attraverso un seconda volta per un percorso di 10 cm usando una
filtro di vetro poroso (16). miscela di 5 volumi di metanolo R e 95 volumi di diclo-
. La soluzione S2 e© limpida rometano R. Lasciar seccare la lastra. Spruzzare con
Aspetto della soluzione S 2

(2.2.1) ed incolore (Metodo II, 2.2.2). una soluzione (40 g/l) di acido fosfomolibdico R in eta-
. A 100 ml di soluzione S2, aggiun- nolo R. Scaldare in stufa a 120 ‘C fino a comparsa delle
Acidita© o alcalinita©

gere 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R. Non e© neces- macchie. Qualsiasi macchia corrispondente all'additivo
sario piu© di 1,0 ml di sodio idrossido 0,01 M per far per plastica 21 o all'additivo per plastica 20 nel
virare al blu l'indicatore. A 100 ml di soluzione S2 cromatogramma ottenuto con la soluzione in
aggiungere 0,2 ml di metilarancio soluzione R. Perchë esame non e© piu© intensa delle macchie corrispondenti
inizi il viraggio dell'indicatore da giallo ad arancio non dei cromatogrammi ottenuti con le soluzioni di riferi-
e© necessario piu© di 1,5 ml di acido cloridrico 0,01 M. mento (b) e (c) rispettivamente.
. Esaminare mediante cromato-
(2.2.25). L'assorbanza della soluzione S2
Antiossidanti fenolici
Assorbanza
grafia liquida (2.2.29).
misurata a lunghezze d'onda tra 220 nm e 340 nm non Soluzione in esame(a). Evaporare a secco, sotto vuoto a
e© superiore a 0,2. 45 ‘C, 50 ml della soluzione S1. Disciogliere il residuo
Sostanze riducenti . A 20 ml della soluzione S2 aggiun- in 5,0 ml di una miscela di volumi uguali di acetoni-
gere 1 ml di acido solforico diluito R e 20 ml di potassio trile R e tetraidrofurano R.
permanganato 0,002 M. Far bollire a ricadere per Soluzione in esame (b). Evaporare a secco, sotto vuoto
3 min e raffreddare immediatamente. Aggiungere 1 g a 45 ‘C, 50 ml della soluzione S1. Disciogliere il residuo
di potassio ioduro R e titolare immediatamente con in 5,0 ml di diclorometano R.
sodio tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di amido solu- Soluzione di riferimento (a). Disciogliere 25 mg di butili-
zione R, come indicatore. Effettuare una titolazione in drossitoluene SCR (additivo per plastica 07), 40 mg di
bianco. La differenza tra i volumi utilizzati nelle due additivo per plastica 10 SCR, 40 mg di additivo per pla-
titolazioni non e© superiore a 0,5 ml. stica 09 SCR e 40 mg di additivo per plastica 11 SCR
Ammidi e acido stearico . Esaminare mediante cromato- in 10 ml di una miscela di volumi uguali di
grafia su strato sottile (2.2.27), usando due lastre del acetonitrile R e tetraidrofurano R. Diluire 2 ml della
tipo lastra di gel di silice GF254 R. soluzione a 50,0 ml con una miscela di volumi uguali
Soluzione in esame. Evaporare a secco, sotto vuoto a di acetonitrile R e tetraidrofurano R.
45 ‘C, 100 ml della soluzione S1. Disciogliere il residuo Soluzione di riferimento (b). Disciogliere 40 mg di addi-
in 2 ml di diclorometano acidificato R. tivo per plastica 11 SCR e 40 mg di additivo per plasti-
Soluzione di riferimento (a). Disciogliere 20 mg di acido ca 12 SCR in 10 ml di diclorometano R. Diluire 2 ml
stearico SCR (additivo per plastica 19) in 10 ml di diclo- della soluzione a 50,0 ml con diclorometano R.
rometano R. Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
Soluzione di riferimento (b). Disciogliere 40 mg di addi- usando:
tivo per plastica 20 SCR in 10 ml di diclorometano R. ^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 0,25 m e
Diluire 1 ml della soluzione a 5 ml con diclorometano R. con diametro interno di 4,6 mm impaccata con gel
Soluzione di riferimento (c). Disciogliere 40 mg di addi- di silice ottadecilsililato per cromatografia R (5 mm),
tivo per plastica 21 SCR in 10 ml di diclorometano R. ^ come fase mobile ad una velocita© di flusso di
Diluire 1 ml della soluzione a 5 ml con diclorometano R 1,5 ml/min una delle due miscele seguenti:
Deporre separatamente 10 ml di ciascuna soluzione su Fase mobile 1: 10 volumi di acqua R, 30 volumi di
ciascuna delle due lastre. tetraidrofurano R, 60 volumi di acetonitrile R,
Eluire la prima lastra per un percorso di 10 cm usando Fase mobile 2: 5 volumi di acqua R, 45 volumi di
una miscela di 25 volumi di etanolo R e 75 volumi di tri- 2-propanolo R, 50 volumi di metanolo R,

334
 Etilene-vinile acetato copolimero per preparazioni destinate alla nutrizione parenterale totale

inoizircserP
^ come rivelatore uno spettrofotometro regolato a zione non deve superare i 5 min. Evaporare a secco

ilareneG
280 nm. su b.m. 20 ml della soluzione. Essiccare a 100 ‘C per
1 h. La massa del residuo non e© superiore a 40 mg
Usando la fase mobile 1, iniettare 20 ml della soluzione (2 per cento) per il copolimero da utilizzare per i conte-
in esame (a) e 20 ml della soluzione di riferimento (a). nitori e non e© superiore a 0,1 g (5 per cento) per il copo-
Il cromatogramma ottenuto con la soluzione in esame limero da utilizzare per gli apparati tubolari.

isilanA id
idoteM
(a) presenta solo i picchi principali corrispondenti ai (2.4.14). Non superiori all'1,2 per cento,
picchi del cromatogramma ottenuto con la soluzione
Ceneri solforiche

determinate su 5,0 g.
di riferimento (a) con un tempo di ritenzione superiore
a 2 min. DETERMINAZIONE QUANTITATIVA

irotinetnoC
Le aree dei picchi del cromatogramma ottenuto con la

/ ilairetaM
Introdurre da 0,250 g a 1,000 g della sostanza in esame,
soluzione in esame (a) non sono maggiori di quelle dei a seconda del contenuto di vinile acetato del copoli-
picchi corrispondenti del cromatogramma ottenuto mero in esame, in una beuta con collo a smeriglio da
con la soluzione di riferimento (a), ad eccezione del- 300 ml contenente un'ancoretta magnetica. Aggiungere
l'ultimo picco eluito nel cromatogramma ottenuto con 40 ml di xilene R. Bollire a ricadere e sotto agitazione
la soluzione di riferimento (a). per 4 h. Sotto continua agitazione, lasciar raffreddare

ivittaeR
Il saggio non e© valido se, con la fase mobile 1, il numero fino all'inizio della formazione di un precipitato prima
di piatti teorici calcolati per il picco corrispondente di aggiungere lentamente 25,0 ml di potassio idrossido
all'additivo per plastica 07 non e© almeno 2500 e la riso- soluzione alcolica R1. Bollire di nuovo a ricadere,
luzione tra i picchi corrispondenti all'additivo per pla- agitando, per 3 h. Lasciar raffreddare continuando ad
agitare, lavare il refrigerante con 50 ml di acqua R ed

itnemogrA
stica 09 e all'additivo per plastica 10 non e© almeno 2,0.

ilareneG
aggiungere 30,0 ml di acido solforico 0,05 M nella beuta.
Se il cromatogramma ottenuto con la soluzione in Trasferire il contenuto della beuta in un recipiente da
esame (a) presenta un picco con lo stesso tempo di 400 ml; lavare la beuta con due porzioni, ciascuna di
ritenzione dell'ultimo antiossidante eluito dalla solu- 50 ml, di una soluzione (200 g/l) di sodio solfato ani-
zione di riferimento (a), usare la fase mobile 2 nel modo dro R e con tre porzioni, ciascuna da 20 ml, di acqua R

eifargonoM
ed aggiungere tutti i liquidi di lavaggio al recipiente

ilareneG
seguente. contenente la soluzione iniziale. Titolare l'eccesso di
Iniettare 20 ml della soluzione in esame (b) e 20 ml della acido solforico con sodio idrossido 0,1 M determinando
soluzione di riferimento (b). Il cromatogramma otte- potenziometricamente (2.2.20) il punto finale della tito-
nuto con la soluzione in esame (b) presenta solo i picchi lazione. Effettuare una titolazione in bianco.

ehcituecamraF
principali corrispondenti ai picchi del cromatogramma 1 ml di acido solforico 0,05 M equivale a 8,609 mg di

emroF
ottenuto con la soluzione di riferimento (b) con un vinile acetato.
tempo di ritenzione superiore a 3 min.
Le aree dei picchi del cromatogramma ottenuto con la
soluzione in esame (b) non sono maggiori di quelle dei 3.1.8. OLIO DI SILICONE USATO COME LUBRI-

picchi corrispondenti del cromatogramma ottenuto

eiretaM
FICANTE

emirP
con la soluzione di riferimento (b).
Il saggio non e© valido se la risoluzione tra i picchi corri-
spondenti all'additivo per plastica 11 e all'additivo per
ehcituecamraF

plastica 12 non e© almeno 2,0.

inoizaraperP

ehcificepS

. Introdurre 5 g in un pallone
DEFINIZIONE
Sostanze solubili in esano

di vetro borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere

50 ml di esano R, collegare un refrigerante e bollire a L'olio di silicone usato come lubrificante e© un poli(di-
ricadere su b.m. per 4 h con agitazione costante. metilsilossano) ottenuto per idrolisi e per policondensa-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Raffreddare in acqua ghiacciata; si puo© formare un zione del diclorodimetilsilano e del clorotrimetilsilano.
gel. Adattare un manicotto di raffreddamento, riempito Esistono differenti gradi di polimerizzazione caratteriz-
con acqua ghiacciata, ad un filtro di vetro poroso (16) zati da un numero, posto dopo il nome, che indica la
collegato con un sistema che permette di esercitare viscosita© nominale.
pressione durante la filtrazione. Lasciare raffreddare il Gli oli di silicone usati come lubrificanti hanno un
filtro per 15 min. Filtrare la soluzione in esano appli- grado di polimerizzazione (n = 400 - 1200) tale che le
ecidnI

cando una pressione, controllata con un manometro, loro viscosita© cinematiche sono nominalmente com-
di 27 kPa e senza lavare il residuo; il tempo di filtra- prese tra 1000 mm2s-1 e 30000 mm2s-1.

335
Silicone elastomero per chiusure e tubolature

CARATTERI Metalli pesanti . Mescolare 1,0 g con diclorometano R e

diluire a 20 ml con lo stesso solvente. Aggiungere
Liquidi limpidi, incolori, con viscosita© diverse, pratica- 1,0 ml di una soluzione (0,02 g/l) di ditizone R in diclo-
mente insolubili in acqua e in metanolo, miscibili con rometano R, preparata di recente, 0,5 ml di acqua R e
etile acetato, con metiletilchetone e con toluene, molto 0,5 ml di una miscela di 1 volume di ammoniaca dilui-
poco solubili in etanolo. ta R2 e 9 volumi di una soluzione (2 g/l) di idrossilam-
mina cloridrato R. Contemporaneamente, preparare
una soluzione standard come segue: a 20 ml di dicloro-
IDENTIFICAZIONE metano R aggiungere 1,0 ml di una soluzione estempo-
ranea (0,02 g/l) di ditizone R in diclorometano R,
A. Identificare mediante la viscosita© cinematica a 0,5 ml di una soluzione standard di piombo
25 ‘C (vedere Saggi). (Pb 10 ppm) R e 0,5 ml di una miscela di 1 volume di
ammoniaca diluita R2 e 9 volumi di una soluzione
B. Esaminare mediante spettrofotometria di assorbi- (2 g/l) di idrossilammina cloridrato R. Agitare immedia-
mento infrarosso (2.2.24), confrontando con lo tamente ed energicamente ciascuna soluzione per
spettro ottenuto con l'olio di -1silicone SCR.-1 1 min. Una colorazione rossa della soluzione in esame
La regione dello spettro da 850 cm a 750 cm non e© piu© intensa di quella della soluzione standard
non si considera poichë puo© mostrare piccole diffe- (5 ppm).
renze dipendenti dal grado di polimerizzazione. Sostanze volatili . Non piu© del 2,0 per cento, determinate
C. Scaldare 0,5 g in una provetta su piccola fiamma su 2,00 g mediante riscaldamento in stufa a 150 ‘C
fino a comparsa di fumi bianchi. Capovolgere la per 24 h. Effettuare il saggio usando una capsula del
provetta su una seconda provetta contenente 1 ml diametro di 60 mm e profonda 10 mm.
di una soluzione (1 g/l) di acido cromotropico sale
sodico R in acido solforico R in modo che i fumi ETICHETTE
raggiungano la soluzione. Agitare la seconda pro- L'etichetta indica la viscosita© nominale con un numero
vetta per circa 10 s e scaldare a b.m. per 5 min. posto dopo il nome del prodotto. L'etichetta indica
La soluzione e© violetta inoltre che il contenuto deve essere usato come lubrifi-
D. In un crogiolo di platino, preparare le ceneri solfo- cante.
riche (2.4.14) usando 50 mg del materiale in esame.
Il residuo e© una polvere bianca che da© la reazione
caratteristica dei silicati (2.3.1).
3.1.9. SILICONE ELASTOMERO PER CHIUSURE
E TUBOLATURE

SAGGI DEFINIZIONE
. A 2,0 g aggiungere 25 ml di una miscela di Il silicone elastomero che soddisfa ai requisiti riportati
Acidita©

uguali volumi di etanolo R ed etere R, precedentemente di seguito e© idoneo per la produzione di chiusure e di
neutralizzata, 0,2 ml di blu bromotimolo soluzione R1 tubolature.
ed agitare. Non sono necessari piu© di 0,15 ml di sodio Il silicone elastomero si ottiene per reticolazione di un
idrossido 0,01 M per far virare al blu l'indicatore. polisilossano lineare costituito principalmente di unita©
dimetilsilossi con piccole quantita© di gruppi metilvinil-
(2.2.10). Determinare la viscosita© dinamica a silossi; le estremita© della catena sono bloccate da
gruppi trimetilsilossi o dimetilvinilsilossi.
Viscosita©

25 ‘C. Calcolare la viscosita© cinematica considerando

la densita© relativa uguale a 0,97. La viscosita© cinema- La formula generale del polisilossano e© :
tica non e© inferiore al 95 per cento e non e© superiore
al 105 per cento della viscosita© nominale indicata in
etichetta.
Oli minerali . Introdurre 2 ml in una provetta ed esami-
nare alla luce ultravioletta a 365 nm. La fluorescenza
non e© piu© intensa di quella di una soluzione contenente
0,1 ppm di chinina solfato R in acido solforico 0,005 M
esaminata nelle stesse condizioni.
Composti fenilati . L'indice di rifrazione (2.2.6) non e© La reticolazione e© ottenuta a caldo per mezzo di:
superiore a 1,410. ^ 2,4 - diclorobenzoile perossido per prodotti estrusi,

336
 Silicone elastomero per chiusure e tubolature

inoizircserP
^ 2,4 - diclorobenzoile perossido o dicumile perossido Per raggiungere l'inizio del viraggio dell'indicatore da

ilareneG
oppureOO-(1,1-dimetiletil) O-isopropilmonoperossi- giallo ad arancio non e© necessario piu© di 1,0 ml di acido
carbonato o 2,5-bis[(1,1-dimetiletil)diossi]-2,5-dimeti- cloridrico 0,01 M.
lesanoperprodottifusi. Densita© relativa (2.2.5). Da 1,05 a 1,25, determinata uti-
oppure: lizzando un picnometro, con etanolo R come liquido di

isilanA id
^ per idrosililazione per mezzo di polisilossano con immersione.

idoteM
gruppi-SiH, utilizzando platino come catalizza- Sostanze riducenti . A 20 ml della soluzione S aggiun-
tore. gere 1 ml di acido solforico diluito R e 20 ml di potassio
In tutti i casi, si utilizzano additivi appropriati come permanganato 0,002 M. Lasciare a riposo per 15 min.
silice e a volte piccole quantita© di additivi organosilicici Aggiungere 1 g di potassio ioduro R e titolare immedia-

irotinetnoC
/ ilairetaM
( , -diidrossipolidimetilsilossano). tamente con sodio tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di
amido soluzione R, come indicatore. Effettuare una tito-
a x

lazione in bianco usando 20 ml di acqua R al posto della

CARATTERI soluzione S. La differenza tra i volumi utilizzati nelle
Materiale trasparente o traslucido, praticamente inso- due titolazioni non e© superiore a 1,0 ml.

ivittaeR
lubile in solventi organici, alcuni dei quali, per esempio Sostanze solubili in esano. Evaporare 25 ml della
cicloesano, esano e diclorometano, causano un rigon- soluzione ottenuta nel saggio per i composti fenilati in
fiamento reversibile del materiale. una capsula di vetro su b.m. e seccare in stufa da
100 ‘C a 105 ‘C per 1 h. Il residuo pesa non piu© di
15 mg (3 per cento).

itnemogrA
IDENTIFICAZIONE

ilareneG
Sostanze volatili . Pesare 10,0 g della sostanza preceden-
A. Esaminare mediante spettrofotometria di assorbi- temente conservata per 48 h in essiccatore su calcio clo-
mento infrarosso registrando lo spettro con il ruro anidro R. Scaldare in stufa a 200 ‘C per 4 h, lasciar
metodo della riflessione multipla per solidi raffreddare in essiccatore e pesare nuovamente.
Per il silicone elastomero preparato usando i perossidi,

eifargonoM
(2.2.24), confrontando con lo spettro ottenuto con

ilareneG
silicone elastomero SCR. il contenuto di sostanza volatile non e© superiore allo
B. Scaldare 1,0 g in una provetta su piccola fiamma 0,5 per cento. Per il silicone elastomero preparato
fino a comparsa di fumi bianchi. Capovolgere la usando il platino, il contenuto di sostanza volatile non
provetta su una seconda provetta contenente 1 ml e© superiore al 2,0 per cento.

ehcituecamraF
di una soluzione (1 g/l) di acido cromotropico sale Oli minerali . Introdurre 2 g in una beuta da 100 ml con-
tenente 30 ml di una miscela di 5 volumi di ammonia-

emroF
sodico R in acido solforico R in modo che i fumi
raggiungano la soluzione. Agitare la seconda pro- ca R e 95 volumi di piridina R. Lasciare a riposo per
vetta per circa 10 s e scaldare a b.m. per 5 min. 2 h, agitando spesso. Decantare la soluzione in piridina
La soluzione e© violetta. ed esaminare alla luce ultravioletta a 365 nm.
C. 50 mg del residuo della combustione danno la rea- La fluorescenza non e© superiore a quella di una solu-
zione contenete 1 ppm di chinina solfato R in acido sol-
eiretaM

emirP
zione caratteristica dei silicati (2.3.1). forico 0,005 M esaminata nelle stesse condizioni.
Composti fenilati . Introdurre 2,0 g in un pallone di
SAGGI vetro borosilicato con collo a smeriglio ed aggiungere
ehcituecamraF

100 ml di esano R. Bollire a ricadere per 4 h.

inoizaraperP

ehcificepS

Se necessario tagliare il materiale da esaminare in pezzi Raffreddare, poi filtrare rapidamente attraverso un
della dimensione massima su un lato di non piu© di 1 cm. filtro di vetro poroso (16). Raccogliere il filtrato e
Soluzione S . Introdurre 25 g in un pallone di vetro chiudere il recipiente per evitare l'evaporazione.
borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere 500 ml L'assorbanza (2.2.25), misurata alle lunghezze d'onda
di acqua R e bollire a ricadere per 5 h. Lasciar raffred- tra 250 nm e 340 nm, non e© superiore a 0,4.
ehcitapoemO
inoizaraperP

dare e decantare. Il silicone elastomero preparato usando i perossidi soddi-

Aspetto della soluzione. La soluzione S e© limpida (2.2.1). sfa al saggio supplementare seguente:
Acidita© o alcalinita©. A 100 ml di soluzione S aggiun- Perossidi residui . Introdurre 5 g in un pallone di vetro
gere 0,15 ml di blu bromotimolo soluzione R1. Non sono borosilicato, aggiungere 150 ml di diclorometano R e
necessari piu© di 2,5 ml di sodio idrossido 0,01 M chiudere il pallone. Agitare con un agitatore meccanico
ecidnI

per far virare al blu l'indicatore. Ad altri 100 ml di solu- per 16 h. Filtrare rapidamente, raccogliendo il filtrato
zione S aggiungere 0,2 ml di metilarancio soluzione R. in un pallone con collo a smeriglio. Sostituire l'aria nel

337
Materiali a base di polivinile cloruro non-plastificato per soluzioni acquose non iniettabili

contenitore con azoto esente da ossigeno R, introdurre zioni solide per somministrazione orale e in alcuni casi,
1 ml di una soluzione (200 g/l) di sodio ioduro R in sottoposti a speciali studi di compatibilita© del conteni-
acido acetico anidro R, chiudere il pallone, agitare accu- tore con il suo contenuto, questi materiali sono idonei
ratamente e lasciare a riposo per 30 min al riparo dalla per la fabbricazione di contenitori per supposte. Sono
luce. Aggiungere 50 ml di acqua R e titolare immediata- costituiti da uno o piu© poli(vinile cloruro/vinile acetato)
mente con sodio tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di o da una miscela di polivinile cloruro e polivinile ace-
amido soluzione R come indicatore. Effettuare una tito- tato o da polivinile cloruro.
lazione in bianco. La differenza tra i volumi utilizzati Contengono non piu© di 1 ppm di vinile cloruro.
nelle due titolazioni non e© superiore a 2,0 ml (0,08 per
cento calcolato come diclorobenzoile perossido). Il contenuto di cloro espresso come polivinile cloruro
Il silicone elastomero preparato usando il platino soddisfa non e© inferiore all'80 per cento.
al saggio supplementare seguente: Possono contenere non piu© del 15 per cento di copoli-
. Calcinare, in un crogiolo di quarzo, 1,0 g di meri a base di acido acrilico e/o metacrilico e/o loro
esteri, e/o stirene e/o butadiene.
Platino

materiale in esame, aumentando la temperatura gra-

dualmente fino ad ottenere un residuo bianco. Trasfe-
rire il residuo in un crogiolo di grafite. Aggiungere, nel PRODUZIONE
crogiolo di quarzo, 10 ml di una miscela, preparata di
recente, di 1 volume di acido nitrico R e 3 volumi di I materiali a base di polivinile cloruro non-plastificato
acido cloridrico R, scaldare a b.m. per 1-2 min e trasfe- sono ottenuti mediante metodi di polimerizzazione che
rire nel crogiolo di grafite. Aggiungere 5 mg di potassio garantiscono un contenuto residuo di vinile cloruro
cloruro R e 5 ml di acido fluoridrico R ed evaporare a minore di 1 ppm. Il metodo di produzione utilizzato e©
secco a b.m. Aggiungere 5 ml di acido fluoridrico R ed validato per dimostrare che il prodotto soddisfa al sag-
evaporare nuovamente a secco; ripetere questa opera- gio seguente:
zione due volte. Disciogliere il residuo in 5 ml di acido
cloridrico 1 M, scaldando a b.m. Lasciare raffreddare Vinile cloruro . Non piu© di 1 ppm, determinato mediante
ed aggiungere la soluzione ad 1 ml di una soluzione gas cromatografia a spazio di testa (2.2.28), utilizzando
(250 g/l) di stagno(oso) cloruro R in acido clori- etere R come standard interno.
drico 1 M, lavare il crogiolo di grafite con pochi millili- Soluzione dello standard interno. Utilizzando una micro-
tri di acido cloridrico 1 M e diluire a 10,0 ml con lo siringa, iniettare 10 ml di etere R in 20,0 ml di dimetila-
stesso acido. Preparare contemporaneamente una solu- cetammide R, immergendo la punta dell'ago nel
zione di riferimento nel modo seguente: ad 1 ml di una solvente. Immediatamente prima dell'uso, diluire la
soluzione (250 g/l) di stagno(oso) cloruro R in acido clo- soluzione a 1000 volte il suo volume con dimetilace-
ridrico 1 M aggiungere 1,0 ml di una soluzione standard tammide R.
di platino (Pt 30 ppm) R e diluire a 10,0 ml con acido Soluzione in esame. Introdurre 1,000 g del materiale in
cloridrico 1 M. Il colore della soluzione in esame non e© esame in un flaconcino da 50 ml ed aggiungere 10,0 ml
piu© intenso di quello della soluzione standard (30 ppm). della soluzione dello standard interno. Chiudere il fla-
concino e fissare il tappo. Agitare, evitando il contatto
ETICHETTE tra il tappo e il liquido. Porre il flaconcino a b.m. a
L'etichetta indica se il materiale e© preparato usando i 60 1 ‘C per 2 h.
6

perossidi oppure il platino. Soluzione madre di vinile cloruro. Preparare sotto cappa
ventilata. Introdurre 50,0 ml di dimetilacetammide R in
un flaconcino da 50 ml, chiudere, fissare il tappo e
3.1.10. MATERIALI A BASE DI POLIVINILE CLO-
pesare con la precisione di 0,1 mg. Riempire una siringa
RURO NON-PLASTIFICATO PER CONTE-
di polietilene o di polipropilene da 50 ml con vinile clo-
NITORI PER SOLUZIONI ACQUOSE NON
ruro R gassoso, lasciare che il gas rimanga a contatto
INIETTABILI
con la siringa per circa 3 min, vuotare la siringa e riem-
pirla di nuovo con 50 ml di vinile cloruro R gassoso.
DEFINIZIONE Applicare alla siringa un ago ipodermico e ridurre il
volume di gas nella siringa da 50 ml a 25 ml. Iniettare
I materiali a base di polivinile cloruro non-plastificato lentamente questi 25 ml di vinile cloruro nel flaconcino,
che soddisfano ai requisiti seguenti sono idonei per la agitando leggermente ed evitando il contatto fra il
fabbricazione di contenitori per soluzioni acquose liquido e l'ago. Pesare di nuovo il flaconcino;
non-iniettabili. Possono anche essere usati per formula- l'aumento di massa e© di circa 60 mg (1 ml della soluzione

338
 Materiali a base di polivinile cloruro non-plastificato per soluzioni acquose non iniettabili

inoizircserP
cos|© ottenuta contiene circa 1,2 g di vinile cloruro). ^ non piu© dell'1 per cento di 2,4-dinonilfenile fosfito,

ilareneG
l

Lasciare a riposo per 2 h. Conservare la soluzione o di(4-nonilfenile)fosfito oppure tris(nonilfenile)

madre in frigorifero. fosfito.
Vinile cloruro soluzione standard. Ad 1 volume della Possono contenere uno dei seguenti gruppi di stabiliz-
soluzione madre di vinile cloruro aggiungere 3 volumi zanti:

isilanA id
di dimetilacetammide R.

idoteM
Soluzioni di riferimento. Introdurre 10,0 ml della solu- ^ non piu© dello 0,25 per cento di stagno come di(isoot-
zione dello standard interno in ciascuno di sei flacon- til) 2,2'-[(diottilstannilene)bis(tio)]diacetato conte-
cini da 50 ml. Chiudere i flaconcini e fissare il tappo. nente circa il 27 per cento di tri(isoottil) 2,2',2''-
Iniettare in cinque flaconcini, rispettivamente, 1 ml, [(monoottilstannilidene)tris(tio)]triacetato,

irotinetnoC
/ ilairetaM
2 ml, 3 ml, 5 ml e 10 ml della soluzione standard di vinile ^ non piu© dello 0,25 per cento di stagno come una
cloruro. Le sei soluzioni cos|© ottenute contengono, miscela contenente non piu© del 76 per cento di
rispettivamente, 0 g, circa 0,3 g, 0,6 g, 0,9 g,
l l l l di (isoottil) 2,2'-[(dimetilstannilene)bis(tio)]diace-
1,5 g e 3 g di vinile cloruro. Agitare, evitando il
l l tato e non piu© dell'85 per cento di tri(isoottil)
contatto tra il tappo e il liquido. Porre i flaconcini a 2,2',2''-[(monometilstannilidene)tris(tio)]triacetato;
b.m. a 60 1 ‘C per 2 h.

ivittaeR
6 (isoottil e© per esempio 2-etilesil),
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito ^ non piu© dell'1 per cento di 1-fenileicosano-1,3-
usando: dione(benzoilstearoilmetano) oppure 2-(4-dodecil-
^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 3 m e con fenil)indolo oppure didodecil 1,4-diidropiridina-
un diametro interno di 3 mm impaccata con terra

itnemogrA
2,6-dimetil-3,5-dicarbossilato o 1 per cento di una

ilareneG
d'infusori silanizzata per gas cromatografia R miscela di due di questi.
impregnata con il 5 per cento m/m di dimetilstearil-
ammide R e con il 5 per cento m/m di macrogol Possono contenere un colorante o un pigmento.
400 R, Possono essere opacizzati con titanio diossido.

eifargonoM
^ azoto per cromatografia R come gas di trasporto ad

ilareneG
una velocita© di 30 ml/min, Il produttore del materiale deve essere in grado di
^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma. dimostrare che la composizione qualitativa e quantita-
tiva del campione tipo sia soddisfacente per ogni lotto
Mantenere la temperatura della colonna a 45 ‘C, quella di produzione.

ehcituecamraF
della camera di iniezione a 100 ‘C e quella del rivelatore
a 150 ‘C.

emroF
Iniettare 1 ml dello spazio di testa di ciascun flaconcino. CARATTERI
Calcolare il contenuto di vinile cloruro. Polvere, palline, granuli, lamine di spessore variabile o
Per ottenere le caratteristiche meccaniche e di stabilita© campioni prelevati da oggetti finiti, insolubile in acqua,
richieste, i materiali a base di polivinile cloruro non- solubile in tetraidrofurano, scarsamente solubile in
eiretaM

emirP
plastificato possono contenere: diclorometano, insolubile in etanolo. Bruciano con
^ non piu© dell'8 per cento di olio di soia epossidato il una fiamma arancio-gialla orlata di verde, producendo
cui titolo in ossigeno ossiranico e© compreso tra il un fumo nero, denso.
6 per cento e l'8 per cento e il cui indice di iodio
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

non e© superiore a 6,
^ non piu© dell'1,5 per cento di sali di calcio o sali di IDENTIFICAZIONE
zinco di acidi grassi alifatici con piu© di sette atomi Disciogliere il residuo (A) (vedere Saggi: soluzione S2)
di carbonio o non piu© dell'1,5 per cento di una loro in 5 ml di tetraidrofurano R. Deporre alcune gocce della
miscela,
ehcitapoemO
inoizaraperP

^ non piu© dell'1,5 per cento di paraffina liquida,

soluzione su un disco di sodio cloruro ed evaporare a
secco in stufa a 100-105 ‘C. Esaminare mediante spet-
^ non piu© dell'1,5 per cento di cere, trofotometria di assorbimento infrarosso (2.2.24).
^ non piu© del 2 per cento di oli idrogenati o esteri di Lo spettro del materiale in-1 esame mostra massimi -1di
acidi grassi alifatici, assorbimento a 2975 cm , 2910 cm , 2865 cm ,
-1

^ non piu© dell'1,5 cento di esteri di macrogol, 1430 cm-1, 1330 cm-1 1255 cm-1, 690 cm-1, 615 cm-1.
ecidnI

Inoltre lo spettro ottenuto e© identico a quello ottenuto

^ non piu© dell'1,5 per cento di sorbitolo, con il materiale selezionato per il campione tipo.

339
Materiali a base di polivinile cloruro non-plastificato per soluzioni acquose non iniettabili

SAGGI Soluzione in esame. Soluzione S2

Se necessario, tagliare il materiale in pezzi della dimen- Soluzione di riferimento. Soluzione contenen-
sione massima su un lato non superiore a 1 cm. te 0,03 ppm di cadmio preparata per diluizione di una
. Introdurre 25 g in un pallone di vetro soluzione standard di cadmio (Cd 0,1 per cento) R con
acido cloridrico 0,1 M.
Soluzione S1

borosilicato. Aggiungere 500 ml di acqua R e coprire il

collo del pallone con un foglio di alluminio o con un Verificare l'assenza di cadmio nell'acido cloridrico
beaker di vetro borosilicato. Scaldare in autoclave a usato.
121 2 ‘C per 20 min. Lasciare raffreddare e lasciar
6
Esaminata a 228,8 nm, l'assorbanza della soluzione in
sedimentare i solidi. esame non e© superiore a quella della soluzione di riferi-
Soluzione S2 . Disciogliere 5,0 g in 80 ml di tetraidro- mento (0,6 ppm).
furano R e diluire a 100 ml con lo stesso solvente.
Se necessario filtrare (la soluzione puo© rimanere opale- Materiali stabilizzati con stagno . A 0,10 ml di soluzione
scente). Diluire 20 ml della soluzione e aggiungere goc- S2 aggiungere in una provetta 0,05 ml di acido cloridri-
cia a goccia 70 ml di etanolo R agitando con cautela. co 1 M, 0,5 ml di potassio ioduro soluzione R e 5 ml di
Raffreddare in ghiaccio per 1 h. Filtrare o centrifugare. etanolo R. Miscelare completamente e aspettare 5 min.
Lavare il residuo A con etanolo R e aggiungere i liquidi Aggiungere 9 ml di acqua R e 0,1 ml di una soluzione
di lavaggio al filtrato o al liquido centrifugato. (5 g/l) di sodio solfito R e miscelare completamente.
Diluire a 100 ml con etanolo R. Aggiungere 1,5 ml di ditizone soluzione R diluita al
. Introdurre 5 g in un pallone di vetro boro- momento cento volte con diclorometano R, agitare per
Soluzione S3

silicato con collo a smeriglio. Aggiungere 100 ml di 15 s e lasciare a riposo per 2 min. Preparare contempo-
acido cloridrico 0,1 M e bollire a ricadere per 1 h. raneamente una soluzione di riferimento nelle stesse
Lasciare raffreddare e lasciar sedimentare i solidi. condizioni utilizzando 0,1 ml di una soluzione standard
Aspetto della soluzione S1 . La soluzione S1 non e© piu© di stagno.
opalescente della sospensione di riferimento II (2.2.1) Qualsiasi colorazione violetta dello strato inferiore
ed e© incolore (Metodo II, 2.2.2). ottenuta con la soluzione S2 non e© piu© intensa di quella
(2.2.25). Evaporare a ottenuta con la soluzione di riferimento (0,25 per cento
di Sn). La colorazione grigio-blu della soluzione di diti-
Assorbanza della soluzione S1

secco 100 ml della soluzione S1. Disciogliere il residuo

in 5 ml di esano R. Filtrare se necessario attraverso zone vira al rosa in presenza di stagno.
un filtro precedentemente lavato con esano R. Soluzione madre di stagno. Diluire 81 mg di additivo per
L'assorbanza del filtrato, determinata a lunghezza plastica 23 SCR a 100 ml con tetraidrofurano R in un
d'onda tra 250 nm e 310 nm, non e© superiore a 0,25. pallone tarato da 100 ml.
Assorbanza della soluzione S 2 (2.2.25). Alle lunghezze Soluzione standard di stagno. Diluire 20 ml della solu-
d'onda tra 250 nm e 330 nm, l'assorbanza della solu- zione madre di stagno a 100 ml con etanolo R in un pal-
zione S2 non e© superiore a 0,2 per materiali stabilizzati lone tarato da 100 ml.
con stagno e a 0,4 per gli altri materiali.
. Determinare mediante spettro- Materiali non stabilizzati con stagno . A 5 ml di solu-
zione S2 aggiungere in una provetta 0,05 ml di acido clo-
Bario estraibile

metria di emissione atomica in plasma di argon

(Metodo I, 2.2.22). ridrico 1 M e 0,5 ml di potassio ioduro soluzione R.
Soluzione in esame. Soluzione S2. Miscelare completamente e attendere per 5 min.
Soluzione di riferimento. Soluzione contenente 0,1 ppm Aggiungere 9 ml di acqua R e 0,1 ml di una soluzione
di bario preparata per diluizione di una soluzione stan- (5 g/l) di sodio solfito R e miscelare completamente. Se
dard di bario (Ba 50 ppm) R con acido cloridrico 0,1 M. la soluzione ottenuta non e© incolore, aggiungere la
soluzione di sodio solfito in frazioni di 0,05 ml. Aggiun-
Effettuare la determinazione usando l'emissione del gere 1,5 ml di ditizone soluzione R diluita al momento
bario a 455,40 nm, valutando il fondo spettrale a cento volte con diclorometano R, agitare per 15 s e
455,30 nm. lasciare a riposo per 2 min. Preparare contemporanea-
Verificare l'assenza di bario nell'acido cloridrico usato. mente una soluzione di riferimento nelle stesse condi-
Esaminata a 455,40 nm, l'emissione della soluzione in zioni utilizzando 0,05 ml di una soluzione standard di
esame non e© superiore a quella della soluzione di riferi- stagno.
mento (2 ppm). Qualsiasi colorazione violetta dello strato inferiore
Cadmio estraibile . Determinare mediante spettrometria ottenuta con la soluzione S2 non e© piu© intensa di quella
di assorbimento atomico (Metodo I, 2.2.23). ottenuta con la soluzione di riferimento (25 ppm di Sn).

340
 Materiali a base di polivinile cloruro per forme farmaceutiche solide per somministrazione orale

inoizircserP
(2.4.8). 12 ml della soluzione S3 Il contenuto di cloro espresso come polivinile cloruro

ilareneG
Metalli pesanti estraibili

soddisfano al saggio limite A per i metalli pesanti non e© inferiore all'80 per cento.
(20 ppm). Preparare la soluzione standard usando Possono contenere non piu© del 15 per cento di copoli-
10 ml della soluzione standard di piombo (Pb 1 ppm) R. meri a base di acido acrilico e/o metacrilico e/o loro
. Determinare mediante spettrometria esteri, e/o stirene e/o butadiene.

isilanA id
Zinco estraibile

di assorbimento atomico (Metodo I, 2.2.23).

idoteM
Soluzione in esame. Soluzione S3 diluita dieci volte con PRODUZIONE
acqua R.
Soluzione di riferimento. Soluzione contenen- I materiali a base di polivinile cloruro non-plastificato
te 0,50 ppm di zinco preparata per diluizione di una sono ottenuti mediante metodi di polimerizzazione che

irotinetnoC
/ ilairetaM
soluzione standard di zinco (Zn 5 mg/ml) R con acido garantiscono un contenuto residuo di vinile cloruro
cloridrico 0,01 M. minore di 1 ppm. Il metodo di produzione utilizzato e©
validato per dimostrare che il prodotto soddisfa al sag-
Verificare l'assenza di zinco nell'acido cloridrico usato. gio seguente.
Esaminata a 214,0 nm, l'assorbanza della soluzione in . Non piu© di 1 ppm, determinato mediante
esame non e© superiore a quella della soluzione di riferi-
Vinile cloruro

gas cromatografia a spazio di testa (2.2.28), utilizzando

ivittaeR
mento (100 ppm). etere R come standard interno.
Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori all'1,0 per cento, Soluzione dello standard interno. Utilizzando una micro-
determinate su 1,0 g. Quando il materiale e© opacizzato siringa, iniettare 10 ml di etere R in 20.0 ml di dimetil-
con titanio diossido, la quantita© di ceneri solforiche non acetammide R, immergendo la punta dell'ago nel
eccede il 4,0 per cento.

itnemogrA
solvente. Immediatamente prima dell'uso, diluire la

ilareneG
soluzione a 1000 volte il suo volume con dimetilace-
DETERMINAZIONE QUANTITATIVA tammide R.
Soluzione in esame. Introdurre 1,000 g del materiale in
Eseguire il metodo della combustione in ossigeno esame in un flaconcino da 50 ml ed aggiungere 10,0 ml

eifargonoM
(2.5.10) usando 50,0 mg del materiale da esaminare. della soluzione dello standard interno. Chiudere il fla-

ilareneG
Assorbire i prodotti di combustione in 20 ml di sodio concino e fissare il tappo. Agitare, evitando il contatto
idrossido 1 M. Alla soluzione ottenuta aggiungere tra il tappo e il liquido. Porre il flaconcino a b.m. a
2,5 ml di acido nitrico R, 10,0 ml di argento nitrato 60 1 ‘C per 2 h.
6
0,1 M, 5 ml di ferro(-ico) ammonio solfato soluzione R2 Soluzione madre di vinile cloruro. Preparare sotto cappa

ehcituecamraF
ed 1 ml di dibutile ftalato R. Titolare con ammonio tio- ventilata. Introdurre 50,0 ml di dimetilacetammide R in

emroF
cianato 0,05 M fino a colorazione giallo-rossastra. un flaconcino da 50 ml, chiudere, fissare il tappo
Effettuare una determinazione in bianco. e pesare con la precisione di 0,1 mg. Riempire una
1 ml di argento nitrato 0,1 M equivale a 6,25 mg di poli- siringa di polietilene o di polipropilene da 50 ml con
vinile cloruro. vinile cloruro R gassoso, lasciare che il gas rimanga a
contatto con la siringa per circa 3 min, vuotare la
eiretaM

emirP
siringa e riempirla di nuovo con 50 ml di vinile cloruro R
3.1.11. MATERIALI A BASE DI POLIVINILE CLO-
gassoso. Applicare alla siringa un ago ipodermico e
RURO NON-PLASTIFICATO PER CONTE-
ridurre il volume di gas nella siringa da 50 ml a 25 ml.
Iniettare lentamente i rimanenti 25 ml di vinile cloruro
NITORI PER FORME FARMACEUTI-
ehcituecamraF
inoizaraperP

nel flaconcino, agitando leggermente ed evitando il

CHE ESSICCATE PER SOMMINISTRA-
ehcificepS

contatto fra il liquido e l'ago. Pesare di nuovo il flacon-

ZIONE ORALE

cino; l'aumento di massa e© di circa 60 mg (1 ml della

DEFINIZIONE soluzione cos|© ottenuta contiene circa 1,2 g di vinile
l

cloruro). Lasciare riposare per 2 h. Conservare la solu-

ehcitapoemO

I materiali a base di polivinile cloruro non-plastificato

inoizaraperP

zione madre in frigorifero.

per contenitori per forme farmaceutiche essiccate per Vinile cloruro soluzione standard. Ad 1 volume della
somministrazione orale sono idonei per la produzione soluzione madre di vinile cloruro aggiungere 3 volumi
di lamine o contenitori. di dimetilacetammide R.
Sono costituiti da uno o piu© poli(vinile cloruro/vinile Soluzioni di riferimento. Introdurre 10,0 ml della solu-
acetato) o da una miscela di polivinile cloruro e polivi- zione dello standard interno in ciascuno di sei flacon-
nile acetato o da polivinile cloruro.
ecidnI

cini da 50 ml. Chiudere i flaconcini e fissare il tappo.

Contengono non piu© di 1 ppm di vinile cloruro. Iniettare in cinque flaconcini, rispettivamente, 1 ml,

341
Materiali a base di polivinile cloruro per forme farmaceutiche solide per somministrazione orale

2 ml, 3 ml, 5 ml e 10 ml della soluzione standard di vinile ^ non piu© dell'1 per cento di silice.
cloruro. Le sei soluzioni cos|© ottenute contengono, Possono contenere uno dei seguenti gruppi di stabiliz-
rispettivamente, 0 g, circa 0,3 g, 0,6 g, 0,9 g,
l l l l
zanti:
1,5 g e 3 g di vinile cloruro. Agitare, evitando il con-
l l
^ non piu© dello 0,25 per cento di stagno come di(isoot-
tatto tra il tappo e il liquido. Porre i flaconcini su b.m. til)2,2'-[(diottilstannilene)bis(tio)]diacetato conte-
a 60 1 ‘C per 2 h.
6
nente circa il 27 per cento di tri(isoottil)2,2',2''-
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito [(monoottilstannilidene)tris(tio)]triacetato,
usando:
^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 3 m e con ^ non piu© dello 0,25 per cento di stagno come una
un diametro interno di 3 mm impaccata con terra miscela contenente non piu© del 76 per cento di di(i-
d'infusori silanizzata per gas cromatografia R soottil)2,2'-[(dimetilstannilene)bis(tio)]diacetato
impregnata con il 5 per cento m/m di dimetilstearil- e non piu© dell'85 per cento di tri(isoottil)2,2',2''-
ammide R e con il 5 per cento m/m di macro- [(monometilstannilidene)tris(tio)]triacetato;
gol 400 R, (isoottile e© per esempio 2-etilesil),
^ azoto per cromatografia R come gas di trasporto ad ^ non piu© dell'1 per cento di 1-fenileicosano-1,3-
una velocita© di 30 ml/min, dione(benzoilstearoilmetano).
^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma. Possono contenere un colorante o un pigmento.
Mantenere la temperatura della colonna a 45 ‘C, quella Possono essere opacizzati con titanio diossido.
della camera di iniezione a 100 ‘C e quella del rivelatore Il produttore del materiale deve essere in grado di
a 150 ‘C. dimostrare che la composizione qualitativa e quantita-
Iniettare 1 ml dello spazio di testa di ciascun flaconcino. tiva del campione tipo sia soddisfacente per ogni lotto
Calcolare il contenuto di vinile cloruro. di produzione.
Per ottenere le caratteristiche meccaniche e di stabilita©
richieste, i materiali a base di polivinile cloruro non- CARATTERI
plastificato possono contenere:
^ non piu© del 2 per cento di olio di soia epossidato il Polvere, palline, granuli, lamine di spessore variabile o
cui titolo in ossigeno ossiranico e© compreso tra il campioni prelevati da oggetti finiti; insolubile in acqua,
6 per cento e l'8 per cento e il cui indice di iodio solubile in tetraidrofurano, scarsamente solubile in
non e© superiore a 6 per materiali stabilizzati con diclorometano, insolubile in etanolo. Bruciano con
stagno, una fiamma arancio-gialla orlata di verde, producendo
^ non piu© del 3 per cento di olio di soia epossidato il un fumo nero, denso.
cui titolo in ossigeno ossiranico e© compreso tra il
6 per cento e l'8 per cento e il cui indice di iodio IDENTIFICAZIONE
non e© superiore a 6 per materiali non stabilizzati
con stagno, Disciogliere il residuo A (vedere Saggi: soluzione S2) in
^ non piu© dell'1,5 per cento di sali di calcio, di 5 ml di tetraidrofurano R. Deporre alcune gocce della
magnesio o di zinco di acidi grassi alifatici con piu© soluzione su un disco di sodio cloruro ed evaporare a
di sette atomi di carbonio o non piu© dell'1,5 per secco in stufa a 100-105 ‘C. Esaminare mediante spet-
cento di una loro miscela, trofotometria di assorbimento infrarosso (2.2.24).
^ non piu© del 4 per cento di cere, Lo spettro del materiale in-1 esame mostra massimi di
^ non piu© dell'1,5 per cento di paraffina liquida, assorbimento a 2975 cm , 2910 cm -1, 2865 cm-1,
1430 cm-1, 1330 cm-1 1255 cm-1, 690 cm-1, 615 cm-1.
^ non piu© del 2 per cento di oli idrogenati o esteri di Inoltre lo spettro ottenuto e© identico a quello ottenuto
acidi grassi alifatici, con il materiale selezionato per il campione tipo.
La somma percentuale dei tre lubrificanti sopra indicati
non e© superiore al 4 per cento.
^ non piu© dell'1,5 per cento di esteri di macrogol, SAGGI
^ non piu© dell'1,5 per cento di sorbitolo, Se necessario, tagliare il materiale in pezzi della dimen-
^ non piu© dell'1 per cento di 2,4-dinonilfenile fosfito, sione massima su un lato non superiore a 1 cm.
o di(4-nonilfenile)fosfito oppure tris(nonilfenile) . Introdurre 25 g in un pallone di vetro
fosfito.
Soluzione S1

borosilicato. Aggiungere 500 ml di acqua R e coprire il

^ non piu© dell'1 per cento di calcio carbonato, collo del pallone con un foglio di alluminio o con un

342
 Materiali a base di polivinile cloruro per forme farmaceutiche solide per somministrazione orale

inoizircserP
beaker di vetro borosilicato. Scaldare in autoclave a . A 5 ml di solu-

ilareneG
Materiali non stabilizzati con stagno

121 2 ‘C per 20 min. Lasciare raffreddare e lasciar

6 zione S2 aggiungere in una provetta 0,05 ml di acido clo-
decantare. ridrico 1 M e 0,5 ml di potassio ioduro soluzione R.
. Disciogliere 5,0 g in 80 ml di tetraidro- Miscelare completamente e attendere per 5 min.
Soluzione S2

furano R e diluire a 100 ml con lo stesso solvente. Se Aggiungere 9 ml di acqua R e 0,1 ml di una soluzione
(5 g/l) di sodio solfito R e miscelare completamente. Se

isilanA id
necessario filtrare (la soluzione puo© rimanere opale-

idoteM
scente). Diluire 20 ml della soluzione e aggiungere goc- la soluzione ottenuta non e© incolore, aggiungere la
cia a goccia 70 ml di etanolo R agitando con cautela. soluzione di sodio solfito in frazioni di 0,05 ml. Aggiun-
Raffreddare in ghiaccio per 1 h. Filtrare o centrifugare. gere 1,5 ml di ditizone soluzione R diluita cento volte al
Lavare il residuo A con etanolo R e aggiungere i liquidi momento con diclorometano R, agitare per 15 s e

irotinetnoC
lasciare a riposo per 2 min. Preparare contemporanea-

/ ilairetaM
di lavaggio al filtrato o al liquido centrifugato. mente una soluzione di riferimento nelle stesse condi-
Diluire a 100 ml con etanolo R. zioni utilizzando 0,05 ml di una soluzione standard di
Soluzione S3 . Introdurre 5 g in un pallone di vetro boro- stagno.
silicato con collo a smeriglio. Aggiungere 100 ml di Qualsiasi colorazione violetta dello strato inferiore
acido cloridrico 0,1 M e bollire a ricadere per 1 h. ottenuta con la soluzione S2 non e© piu© intensa di quella
Lasciare raffreddare e decantare.

ivittaeR
ottenuta con la soluzione di riferimento (Sn 25 ppm).
Aspetto della soluzione S1 . La soluzione S1 non e© piu© (2.4.8). 12 ml della soluzione S3
opalescente della sospensione di riferimento II (2.2.1) Metalli pesanti estraibili

soddisfano al saggio limite A per i metalli pesanti

ed e© incolore (Metodo II, 2.2.2). (20 ppm). Preparare la soluzione standard usando

itnemogrA
(2.2.25). Evaporare 10 ml della soluzione standard di piombo (Pb 1 ppm) R.

ilareneG
Assorbanza della soluzione S1

a secco 100 ml della soluzione S1. Disciogliere il residuo . Determinare mediante spettrometria
in 5 ml di esano R. Filtrare se necessario attraverso Zinco estraibile

di assorbimento atomico (Metodo I, 2.2.23).

un filtro precedentemente lavato con esano R.
L'assorbanza del filtrato, determinata a lunghezza Soluzione in esame. Soluzione S3 diluita dieci volte con
acqua R.

eifargonoM
d'onda tra 250 nm e 310 nm, non e© superiore a 0,3.

ilareneG
(2.2.25). Alle lunghezze Soluzione di riferimento. Soluzione contenente 0,50 ppm
di zinco preparata per diluizione di una soluzione
Assorbanza della soluzione S 2

d'onda tra 250 nm e 330 nm, l'assorbanza della solu-

zione S2 non e© superiore a 0,5. standard di zinco (Zn 5 mg/ml) R con acido clori-
drico 0,01 M.

ehcituecamraF
. A 0,10 ml di soluzione
Verificare l'assenza di zinco nell'acido cloridrico usato.
Materiali stabilizzati con stagno

S2 aggiungere in una provetta 0,05 ml di acido clori-

emroF
drico 1 M, 0,5 ml di potassio ioduro soluzione R e 5 ml Esaminata a 214,0 nm, l'assorbanza della soluzione in
di etanolo R. Miscelare completamente e aspettare esame non e© superiore a quella della soluzione di riferi-
5 min. Aggiungere 9 ml di acqua R e 0,1 ml di una solu- mento (100 ppm).
zione di 5 g/l di sodio solfito R e miscelare completa- (2.4.14). Non superiori all'1,0 per cento,
mente. Aggiungere 1,5 ml di ditizone soluzione R diluita Ceneri solforiche

eiretaM
determinate su 1,0 g. Quando il materiale e© opacizzato

emirP
cento volte al momento con diclorometano R, agitare con titanio diossido, la quantita© di ceneri solforiche non
per 15 s e lasciare a riposo per 2 min. Preparare con- supera il 4,0 per cento.
temporaneamente una soluzione di riferimento nelle
stesse condizioni utilizzando 0,1 ml di una soluzione
ehcituecamraF
inoizaraperP

standard di stagno. DETERMINAZIONE QUANTITATIVA

ehcificepS

Qualsiasi colorazione violetta dello strato inferiore Eseguire il metodo della combustione in ossigeno
ottenuta con la soluzione S2 non e© piu© intensa di quella (2.5.10) usando 50,0 mg del materiale da esaminare.
ottenuta con la soluzione di riferimento (0,25 per cento Assorbire i prodotti di combustione in 20 ml di sodio
di Sn). La colorazione grigio-blu della soluzione di diti-
ehcitapoemO
inoizaraperP

zone vira al rosa in presenza di stagno. idrossido 1 M. Alla soluzione ottenuta aggiungere
2,5 ml di acido nitrico R, 10,0 ml di argento nitra-
Soluzione madre di stagno. Diluire 81 mg di additivo per to 0,1 M, 5 ml di ferro(-ico) ammonio solfato soluzio-
plastica 23 SCR a 100 ml con tetraidrofurano R in un ne R2 ed 1 ml di dibutile ftalato R. Titolare con ammo-
pallone tarato da 100 ml. nio tiocianato 0,05 M fino a colorazione giallo-rossa-
Soluzione standard di stagno. Diluire 20 ml della solu- stra. Effettuare una determinazione in bianco.
ecidnI

zione madre di stagno a 100 ml con etanolo R in un pal- 1 ml di argento nitrato 0,1 M equivale a 6,25 mg di poli-
lone tarato da 100 ml. vinile cloruro.

343
Additivi per plastica

3.1.13. ADDITIVI PER PLASTICA add05 CAS RN 8016-11-3 PM RN 64240

olio di lino epossidato
NOTA: la prima nomenclatura data segue le regole CAS RN 57455-37-5 (TSCA)/101357-30-6
IUPAC. Il sinonimo in grassetto corrisponde al nome add06

(EINECS)/Pigmento blu 29 (CI 77007)

dato nei testi del Capitolo 3. E' anche indicato il sinonimo blu ultramarino
corrispondente alle regole dei testi del ``Chemical CAS RN 128-37-0 C15H24O PM RN 46640
Abstract''. add07

add01 CAS RN 117-81-7 C24H38O4 PM RN 74640

2,6-bis(1,1-dimetiletil)-4-metilfenolo
sinonimi
(2RS)-2-etilesil benzene-1,2-dicarbossilato - butilidrossitoluene,

sinonimi - 2,6-bis(1,1-dimetiletil)-4-metilfenolo,
- di(2-etilesil)ftalato,
- 2,6-di-tert-butil-4-metilfenolo.
- acido 1,2-benzenedicarbossilico,
bis(2-etilesil) estere. add08 CAS RN 32509-66-3 C50H66O8 PM RN 53670
add02 CAS RN 136-53-8 C16H30O4Zn PM RN 54120

zinco (2RS)-2-etilesanoato
sinonimi
- zinco ottanoato, etilene bis[3,3-bis[3-(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil]buta-
- acido 2-etilesanoico, sale di zinco (2:1), noato
- zinco 2-etilcaproato. sinonimi
- etilene bis[3,3-bis[3-(1,1-dimetiletil)-4-idrossife-
add03 CAS RN 05518-18-3/00110-30-5 PM RN 53440/ nil]butanoato,

53520 - acido butanoico, 3,3-bis[3-(1,1-dimetiletil)-4-idros-

sifenil]-, 1,2-etanediil estere,
- etilene bis[3,3-bis(3-tert-butil-4-idrossifenil)butir-
rato].
CAS RN 6683-19-8 C73H108O12 PM RN 71680
N,N'-etilendialcanammide (con n e m = 14 o 16)
add09

sinonimi
- N,N' -diaciletilendiammina,

- N,N'-diaciletilendiammina (in questo contesto

acile significa in particolare palmitoile e
stearoile).
add04 CAS RN 8013-07-8 PM RN 88640 metantetriltetrametil tetrakis[3-[3,5-bis(1,1-dimetiletil)-
olio di soia epossidato 4-idrossifenil]propanoato]

344
 Additivi per plastica

inoizircserP
sinonimi CAS RN 31570-04-4 C42H63O3P PM RN 74240

ilareneG
add12

- pentaeritritile tetrakis[3-(3,5-di- tert- butil-4-idros-

sifenil)propionato],

- 2,2-bis[[[3-[3,5-bis-(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil]-
propanoil]ossi]metil]propano-1,3-diil3-[3,5-bis-

isilanA id
(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil[propanoato,

idoteM
- acido benzenepropanoico, 3,5-bis(1,1-dimetiletil)-
4-idrossi-2,2-bis(idrossimetil)propano-1,3-diol
estere (4:1),

irotinetnoC
- 2,2-bis(idrossimetil)propano-1,3-dioltetrakis[3-(3,5-

/ ilairetaM
di-tert-butil-4-idrossifenil)propionato].
add10 CAS RN 1709-70-2 C54H78O3 PM RN 95200 tris[2,4-bis(1,1,-dimetiletil)fenil]fosfito
sinonimi

ivittaeR
- tert
tris(2,4-di- -butilfenil) fosfito,

- fenolo, 2,4-bis(1,1-dimetiletil)-, fosfito (3:1),

- 2,4-bis(1,1-dimetiletil)fenil, fosfito.

itnemogrA
ilareneG
add13 CAS RN 27676-62-6 C48H69N3O6 PM RN 95360
4,4',4''-[(2,4,6-trimetilbenzene-1,3,5-triil)tris(metilene)]-
tris[2,6-bis(1,1-dimetiletil)fenolo]

eifargonoM

ilareneG
sinonimi
- ', '', ', '' tert
2,2 2 6,6 6 -esa- -butil-4,4',4''-[(2,4,6-trime-

til-1,3,5-benzenetriil)trismetilene]trifenolo,

- 1,3,5-tris[3,5-di-tert-butil-4-idrossibenzil]-2,4,6-tri-

ehcituecamraF
metilbenzene, 1,3,5-tris[3,5-bis(1,1-dimetiletil)-4-idrossibenzil]-1,3,5-

emroF
- 4,4',4''-[(2,4,6-trimetil-1,3,5-benzenetriil)tris(meti- triazina-2,4,6(1H,3H,5H)-trione
lene)]tris[2,6-bis(1,1-dimetiletil)-fenolo].
sinonimi
CAS RN 2082-79-3 C35H62O3 PM RN 68320 - tert
1,3,5-tris(3,5-di- s
-butil-4-idrossibenzil)- -tria-

H H H
add11

,
eiretaM

emirP
zina-2,4,6(1 ,3 ,5 )-trione

- 1,3,5-triazina-2,4,6(1H,3H,5H)-trione, 1,3,5-tris[3,5-
bis(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil]metil]-. ehcituecamraF

CAS RN 3806-34-6 C41H82O6P2 PM RN 50080

inoizaraperP

ehcificepS

add14
ehcitapoemO
inoizaraperP

ottadecile 3-[3,5-bis(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil]propa-
noato
sinonimi 3,9-bis(ottadecilossi)-2,4,8,10-tetraossa-3,9-difosfaspi-
ro[5.5]undecano
- ottadecile 3-(3,5-di-tert -butil-4-idrossifenil)propio-

nato, sinonimi
ecidnI

- acido propanoico, 3-[3,5-bis(1,1-dimetiletil)- - '- 2,2 '

bis(ottadecilossi)-5,5 -spirobi[1,3,2-diossafo-

4-idrossifenil]-, ottadecil estere. . sfinano]

345
Additivi per plastica

- 2,4,8,10-tetraossa-3,9-difosfaspiro[5.5]undecano, 2,4-bis(1,1,dimetiletil)fenil difenil-4,4'-diildifosfonito

3,9-bis(ottadecilossi)-.
componente II
add15 CAS RN 2500-88-1 C36H74S2 PM RN 49840

1,1'-disulfanodiildiottadecano
sinonimi 2,4-bis(1,1,dimetiletil)fenil difenil-3,4'-diildifosfonito
- diottadecile disolfuro, componente III
- ottadecano, 1,1'-ditio-.
add16 CAS RN 123-28-4 C30H58O4S PM RN 93120

didodecil 3,3'-sulfanodiildipropanoato 2,4-bis(1,1,dimetiletil)fenil difenil-3,3'-diildifosfonito

sinonimi
- '-
didodecil 3,3 tiodipropionato, componente IV
- didodecil 3,3'-sulfanodiildipropanoato,
- acido propanoico, 3,3'-tiobis-, dodecil diestere,
- lauril tiodipropionato.
add17 CAS RN 693-36-7 C42H82O4S PM RN 93280
2,4-bis(1,1,dimetiletil)fenil difenil-4-ilfosfonito
componente V
diottadecil 3,3'-sulfandiildipropanoato
sinonimi
- '-
diottadecil 3,3 tiodipropionato,
2,4-bis(1,1,dimetiletil)fenil fosfito
- diottadecil 3,3'-sulfanodiildipropanoato,
- acido propanoico, 3,3'-tiobis-, ottadecil diestere, componente VI
- stearil tiodipropionato.
add18 CAS RN 119345-01-6 PM RN 92560
miscela di sette prodotti corrispondenti al prodotto di
reazione fra di-tert-butil fosfonito e tricloruro difosfo-
roso, ai prodotti di reazione con difenil e 2,4-bis(1,1- 2,4-bis(1,1,dimetiletil)fenil 4'-bis2,4-bis(1,1-diemetil-
dimetiletil)fenolo: etil)fenossifosfanildifenil-4-ilfosfonato

componente VII
R-OH: 2,4-bis(1,1-dimetiletil)fenolo
componente I
add19 CAS RN 57-11-4 C18H36O2 PM RN 24550

346
Materiali a base di polivinile cloruro plastif. per cont.ri per soluz. acquose per infus.ne endovenosa

inoizircserP
acido ottadecanoico I materiali a base di polivinile cloruro plastificato per

ilareneG
sinonimi contenitori per soluzioni acquose per infusione endove-
- nosa sono definiti dalla natura e dalle proporzioni delle
acido stearico,

- acido ottadecanoico. sostanze utilizzate nella loro produzione.

isilanA id
idoteM
CAS RN 301-02-0 C18H35NO PM RN 68960
PRODUZIONE
add20

I materiali a base di polivinile cloruro plastificato sono

prodotti con metodi di polimerizzazione che assicurano

irotinetnoC
/ ilairetaM
(Z)-ottadec-9-enammide un residuo di vinile cloruro inferiore a 1 ppm. Il metodo
sinonimi utilizzato per la produzione e© validato per dimostrare
-oleammide , che il prodotto soddisfa al seguente saggio:
- 9-ottadecenammide, (Z)-, . Non piu© di 1 ppm, determinato mediante
- 9-cis-oleammide. Vinile cloruro

ivittaeR
gas cromatografia a spazio di testa (2.2.28), utilizzando
add21 CAS RN 112-84-5 C22H43NO PM RN 52720 etere R come standard interno.
Soluzione dello standard interno. Utilizzando una
microsiringa, iniettare 10 ml di etere R in 20,0 ml di

itnemogrA
dimetilacetammide R, immergendo la punta dell'ago

ilareneG
(Z)-docos-13-enammide nel solvente. Immediatamente prima dell'uso, diluire la
soluzione a 1000 volte il suo volume con dimetilacetam-
sinonimi mide R.
- ,

eifargonoM
Soluzione in esame. Introdurre 1,000 g del materiale in
erucammide

- 13-docosenammide, (Z)-,

ilareneG
- 13-cis-docosenammide. esame in un flaconcino da 50 ml ed aggiungere 10,0 ml
della soluzione dello standard interno. Chiudere il fla-
add22 CAS RN 65447-77-0 PM RN 60800 concino e fissare il tappo. Agitare, evitando il contatto
tra il tappo e il liquido. Porre il flaconcino su b.m. a

ehcituecamraF
60 1 ‘C per 2 h.

emroF
6

Soluzione madre di vinile cloruro. Preparare sotto cappa

ventilata. Introdurre 50,0 ml di dimetilacetammide R in
un flaconcino da 50 ml, chiudere, fissare il tappo e
copolimero di dimetil butanedioato e 1-(2-idrossietil)- pesare con la precisione di 0,1 mg. Riempire una siringa

eiretaM

emirP
2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-olo di polietilene o di polipropilene da 50 ml con vinile clo-
sinonimi ruro R gassoso, lasciare che il gas rimanga a contatto
- con la siringa per circa 3 min, vuotare la siringa e
copolimero di dimetil succinato e (4-idrossi-2,2,6,6-
riempirla di nuovo con 50 ml di vinile cloruro R gassoso.
ehcituecamraF
inoizaraperP

tetrametilpiperidin-1-il)etanolo.
Applicare alla siringa un ago ipodermico e ridurre il
ehcificepS

volume di gas nella siringa da 50 ml a 25 ml. Iniettare

3.1.14. MATERIALI A BASE DI POLIVINILE CLO-
lentamente questi 25 ml di vinile cloruro nel flaconcino,
RURO PLASTIFICATO PER CONTENI-
agitando leggermente ed evitando il contatto fra il
liquido e l'ago. Pesare di nuovo il flaconcino; l'aumento
TORI PER SOLUZIONI ACQUOSE PER
ehcitapoemO
inoizaraperP

INFUSIONE ENDOVENOSA
di massa e© di circa 60 mg (1 ml della soluzione cos|© otte-
nuta contiene circa 1,2 g di vinile cloruro). Lasciare
DEFINIZIONE
l

riposare per 2 h. Conservare la soluzione madre in fri-

I materiali a base di polivinile cloruro plastificato con- gorifero.
tengono non meno del 55 per cento di polivinile cloruro
e contengono vari additivi, oltre a polimeri ad elevata Vinile cloruro soluzione standard. Ad 1 volume della
soluzione madre di vinile cloruro aggiungere 3 volumi
ecidnI

massa molecolare ottenuti per polimerizzazione del

cloruro di vinile. di dimetilacetammide R.

347
Materiali a base di polivinile cloruro plastif. per cont.ri per soluz. acquose per infus.ne endovenosa

Soluzioni di riferimento. Introdurre 10,0 ml della solu- ^ non piu© del 10 per cento di uno dei due oli epossi-
zione dello standard interno in ciascuno di sei flacon- dati seguenti o non piu© del 10 per cento di una loro
cini da 50 ml. Chiudere i flaconcini e fissare i tappi. miscela:
Iniettare in cinque flaconcini, rispettivamente, 1 ml,
2 ml, 3 ml, 5 ml e 10 ml della soluzione standard di vinile ^ olio di soia epossidato (additivo per plastica 04),
cloruro. Le sei soluzioni cos|© ottenute contengono, il cui titolo in ossigeno ossiranico e© compreso tra
rispettivamente, 0 g, circa 0,3 g, 0,6 g, 0,9 g, il 6 per cento e l'8 per cento e il cui indice di iodio
non e© superiore a 6,
l l l l

1,5 g e 3 g di vinile cloruro. Agitare, evitando il con-

l l

tatto tra il tappo e il liquido. Porre i flaconcini su b.m. ^ olio di lino epossidato (additivo per plastica 05), il
a 60 1 ‘C per 2 h.
6
cui titolo in ossigeno ossiranico non e© superiore al
Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito 10 per cento e il cui indice di iodio non supera il 7.
usando: Quando sono aggiunti coloranti, il blu ultramarino e©
^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 3 m e con l'unico colorante usato. Altri pigmenti inorganici pos-
un diametro interno di 3 mm impaccata con terra sono essere aggiunti, purchë la loro sicurezza sia dimo-
d'infusori silanizzata per gas cromatografia R strata con approvazione dell'autorita© competente.
impregnata con il 5 per cento m/m di dimetilstearil- Quantita© molto piccole di antiossidanti aggiunti al
ammide R e con il 5 per cento m/m di macro- monomero vinile cloruro possono essere presenti nel
gol 400 R, polimero.
^ azoto per cromatografia R come gas di trasporto ad Il produttore del materiale deve essere in grado di
una velocita© di 30 ml/min, dimostrare che la composizione qualitativa e quantita-
tiva del campione tipo sia soddisfacente per ogni lotto
^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma. di produzione.
Mantenere la temperatura della colonna a 45 ‘C, quella
della camera di iniezione a 100 ‘C e quella del rivelatore
a 150 ‘C. CARATTERI
Iniettare 1 ml dello spazio di testa di ciascun flaconcino. Materiale incolore o giallo pallido in forma di polvere,
Calcolare il contenuto di vinile cloruro. palline, granuli o, dopo trasformazione, lamine traslu-
cide di spessore variabile, con un leggero odore.
Per combustione produce un fumo nero e denso.
Additivi

Un certo numero di additivi viene addizionato ai poli- IDENTIFICAZIONE

meri per ottimizzare le loro caratteristiche chimiche,
fisiche e meccaniche e renderli cos|© piu© adatti all'uso Se necessario, prima dell'uso, tagliare i campioni del
previsto. Tutti questi additivi sono scelti dalla lista materiale da esaminare in pezzi della dimensione mas-
seguente che specifica per ogni prodotto il quantitativo sima su un lato non superiore a 1 cm.
massimo permesso:
A 2,0 g del materiale in esame aggiungere 200 ml di
^ non piu© del 40 per cento di di(2-etilesil)ftalato etere esente da perossidi R e scaldare a ricadere per 8 h.
(additivo per plastica 01), Separare per filtrazione il residuo B e la soluzione A.
^ non piu© dell'1 per cento di zinco ottanoato (zinco Evaporare a secco la soluzione A a pressione ridotta a
2-etilesanoato) (additivo per plastica 02), b.m. a 30 ‘C. Disciogliere il residuo in 10 ml di tolue-
^ non piu© dell'1 per cento di calcio stearato o di zinco ne R (soluzione A1). Disciogliere il residuo B in 60 ml
stearato o dell'1 per cento di una miscela dei due, di dicloroetano R, scaldando a ricadere su b.m.
Filtrare. Aggiungere la soluzione, goccia a goccia ed
^ non piu© dell'1 per cento di N,N'-diaciletilendiam- agitando energicamente, a 600 ml di eptano R scaldato
mina (additivo per plastica 03) quasi all'ebollizione. Separare il coagulo B1 dalla solu-

348
Materiali a base di polivinile cloruro plastif. per cont.ri per soluz. acquose per infus.ne endovenosa

inoizircserP
zione organica per filtrazione. Lasciare raffreddare A 100 ml di soluzione S2,

ilareneG
Acidita© o alcalinita© .

quest'ultima; separare il precipitato B2 che si forma e aggiungere 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R.
filtrare attraverso un filtro di vetro poroso tarato (40). Non sono necessari piu© di 1,5 ml di sodio idrossi-
do 0,01 M per far virare al blu l'indicatore. A 100 ml
A. Disciogliere il coagulo B1 in 30 ml di tetraidrofura- di soluzione S2 aggiungere 0,2 ml di metilarancio solu-

isilanA id
no R e aggiungere, poco per volta e agitando, zione R. Perchë inizi il viraggio dell'indicatore da giallo

idoteM
40 ml di etanolo R. Separare per filtrazione il preci- ad arancio non e© necessario piu© di 1,0 ml di acido clori-
pitato B3 ed essiccare sotto vuoto su anidride fosfo- drico 0,01 M.
rica R a una temperatura non superiore a 50 ‘C.
Disciogliere pochi milligrammi di precipitato B3 (2.2.25). Evaporare a secco 100,0 ml di solu-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Assorbanza

in 1 ml di tetraidrofurano R, mettere poche gocce zione S2. Disciogliere il residuo in 5,0 ml di esano R.
della soluzione ottenuta su una lamina di sodio L'assorbanza, a lunghezza d'onda compresa tra
cloruro ed evaporare a secco in stufa a 100-105 ‘C. 250 nm e 310 nm, non e© superiore a 0,25.
Esaminare mediante spettrofotometria di assorbi-
mento infrarosso (2.2.24), in confronto con lo spet- Sostanze riducenti . Effettuare il saggio entro 4 h dalla
preparazione della soluzione S2. A 20,0 ml di soluzione

ivittaeR
tro ottenuto con polivinile cloruro SCR.
S2 aggiungere 1 ml di acido solforico diluito R e 20,0 ml
B. Esaminare il residuo C ottenuto nel saggio degli di potassio permanganato 0,002 M. Bollire a ricadere
additivi per plastica 01, 04 e 05 mediante spettrofo- per 3 min e raffreddare immediatamente. Aggiungere
tometria di assorbimento infrarosso (2.2.24), in 1 g di potassio ioduro R e titolare immediatamente con

itnemogrA
ilareneG
confronto con lo spettro ottenuto con l'additivo sodio tiosolfato 0,01 M, usando 0,25 ml di amido soluzio-
per plastica 01 SCR. ne R, come indicatore. Effettuare una titolazione in
bianco usando 20 ml di acqua per preparazioni iniet-
tabili R. La differenza fra i volumi utilizzati nelle due
titolazioni non e© superiore a 2,0 ml.

eifargonoM
SAGGI

ilareneG
Ammine aromatiche primarie . A 2,5 ml di soluzione A1,
Se necessario, prima dell'uso, tagliare i campioni del ottenuta durante l'identificazione, aggiungere 6 ml di
materiale da esaminare in pezzi della dimensione mas- acqua R e 4 ml di acido cloridrico 0,1 M. Agitare energi-

ehcituecamraF
sima su un lato non superiore a 1 cm. camente ed eliminare la fase superiore. Alla fase
acquosa aggiungere 0,4 ml di una soluzione (10 g/l) di

emroF
Soluzione S1. Introdurre 5,0 g in un matraccio da sodio nitrito R preparata di recente. Mescolare e
combustione. Aggiungere 30 ml di acido solforico R e lasciare a riposo per 1 min. Aggiungere 0,8 ml di una
scaldare fino ad ottenere una massa sciropposa nera. soluzione (25 g/l) di ammonio solfammato R, lasciare a
Raffreddare ed aggiungere, con cautela, 10 ml di idro- riposo per 1 min e aggiungere 2 ml di una soluzione

eiretaM
geno perossido soluzione concentrata R. Scaldare legger- (5 g/l) di naftiletilendiammina dicloridrato R. Dopo

emirP
mente. Lasciar raffreddare ed aggiungere 1 ml di idro- 30 min, l'eventuale colorazione della soluzione non e©
geno perossido soluzione concentrata R; ripetere alter- piu© intensa di quella di una preparazione di riferimento
nando l'evaporazione e l'aggiunta di idrogeno preparata contemporaneamente nello stesso modo uti-
ehcituecamraF

perossido soluzione fino ad ottenere un liquido inco- lizzando una miscela di 1 ml di una soluzione (0,01 g/l)
inoizaraperP

ehcificepS

lore. Concentrare fino a circa 10 ml. Raffreddare e di naftilammina R in acido cloridrico 0,1 M, 5 ml di
diluire a 50,0 ml con acqua R. acqua R e 4 ml di acido cloridrico 0,1 M al posto della
fase acquosa (20 ppm).
. Introdurre 25 g in un pallone di vetro
ehcitapoemO

Soluzione S 2
inoizaraperP

borosilicato. Aggiungere 500 ml di acqua per prepara- Additivi per plastica 01, 04 e 05 . Esaminare mediante
zioni iniettabili R e coprire il collo del pallone con un cromatografia su strato sottile (2.2.27), usando una
foglio di alluminio o con un beaker di vetro borosili- lastra di gel di silice GF254 R, di 1 mm di spessore.
cato. Scaldare in autoclave a 121 2 ‘C per 20 min.
6

Lasciar raffreddare e decantare la soluzione. Soluzioni di riferimento. Preparare soluzioni con

0,1 mg/ml di additivo per plastica 01 SCR, additivo per
. La soluzione S2 e© limpida plastica 04 SCR e additivo per plastica 05 SCR rispetti-
ecidnI

Aspetto della soluzione S 2

(2.2.1) e incolore (Metodo II, 2.2.2). vamente, in toluene R.

349
Materiali a base di polivinile cloruro plastif. per cont.ri per soluz. acquose per infus.ne endovenosa

Deporre sulla lastra, come una banda di 30 mm per Effettuare la determinazione usando l'emissione del
3 mm, 0,5 ml della soluzione A1, ottenuta durante l'i- bario a 455,40 nm, valutando il fondo spettrale a
dentificazione. Deporre sulla lastra 5 ml di ciascuna 455,30 nm.
soluzione di riferimento. Eluire per un percorso di Verificare l'assenza di bario nell'acido cloridrico usato.
15 cm usando toluene R. Seccare accuratamente la
lastra. Esaminare alla luce ultravioletta a 254 nm e Cadmio . Non piu© di 0,6 ppm di Cd, determinato
localizzare la zona corrispondente all'additivo per pla- mediante spettrometria di assorbimento atomico
stica 01 (Rf circa 0,4). Rimuovere l'area di gel di silice (Metodo I, 2.2.23).
corrispondente a questa zona e agitare con 40 ml di
etere R per 1 min. Filtrare, sciacquare con due porzioni, Soluzione in esame. Evaporare a secco 10 ml della solu-
ciascuna di 10 ml di etere R, aggiungere i liquidi di zione S1. Riprendere il residuo con 5 ml di una solu-
risciacquo al filtrato ed evaporare a secco. Il residuo C zione all'1 per cento V/V di acido cloridrico R, filtrare
pesa non piu© di 40 mg. e diluire il filtrato a 10,0 ml con lo stesso acido.
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
Esporre la lastra a vapori di iodio per 5 min. Esaminare mento utilizzando una soluzione standard di cadmio (Cd
il cromatogramma e localizzare la banda corrispon- 0,1 per cento) R, diluita con una soluzione all'1 per cento
dente agli additivi per plastica 04 e 05 (Rf = 0). Prele- V/V di acido cloridrico R.
vare l'area di gel di silice corrispondente a questa
banda. Allo stesso modo, prelevare un'area corrispon- Misurare l'assorbanza a 228,8 nm usando come sor-
dente di gel di silice come bianco. Agitare separata- gente di radiazione una lampada a catodo cavo al cad-
mente entrambi i campioni per 15 min con 40 ml di mio ed una fiamma aria-acetilene.
metanolo R. Filtrare, sciacquare con due porzioni, cia- Verificare l'assenza di cadmio nell'acido cloridrico
scuna di 10 ml di metanolo R, aggiungere i liquidi di usato.
risciacquo al filtrato ed evaporare a secco. La diffe-
renza fra le masse non e© superiore a 10 mg. Calcio . Non piu© dello 0,07 per cento di Ca, determinato
mediante spettrometria di emissione atomica in plasma
Additivo per plastica 03 . Lavare il precipitato B2 otte- di argon (Metodo I, 2.2.22).
nuto durante l'identificazione e trattenuto sul filtro di Soluzione in esame. Usare la soluzione in esame prepa-
vetro sinterizzato tarato (40) con etanolo R. Seccare a rata per la determinazione del bario.
massa costante su anidride fosforica R e pesare il filtro.
Il precipitato pesa non piu© di 20 mg. Soluzione di riferimento. Preparare la soluzione di riferi-
mento contenente 50,0 ppm di calcio per diluizione di
Esaminare il residuo mediante spettrofotometria di una soluzione standard di calcio (Ca 400 ppm) R con
assorbimento infrarosso (2.2.24) in confronto con lo acido cloridrico 0,1 M.
spettro ottenuto con l'additivo per plastica 03 SCR. Effettuare la determinazione usando l'emissione del
calcio a 315,89 nm, valutando il fondo spettrale a
Bario . Non piu© di 5 ppm di Ba, determinato mediante 315,60 nm.
spettrometria di emissione atomica in plasma di argon
(Metodo I, 2.2.22). Verificare l'assenza di calcio nell'acido cloridrico usato.
Stagno . Non piu© di 20 ppm di Sn, determinato mediante
Soluzione in esame. Calcinare 1,0 g di materiale in spettrometria di emissione atomica in plasma di argon
esame in un crogiolo di silice. Riprendere il residuo (Metodo I, 2.2.22).
con 10 ml di acido cloridrico R ed evaporare a secco su Soluzione in esame. Diluire la soluzione S1 dieci volte
b.m. Riprendere il residuo con 20 ml di acido clori- con acqua R immediatamente prima dell'uso.
drico 0,1 M.
Soluzione di riferimento. Introdurre 2 ml di una solu-
Soluzione di riferimento. E' una soluzione contenente zione standard di stagno (Sn 5 ppm) R in un pallone da
0,25 ppm di bario preparata per diluizione di una solu- 50 ml contenente 5 ml di acido solforico soluzione al
zione standard di bario (Ba 50 ppm) R con acido clori- 20 per cento V/V R e diluire a 50 ml con acqua R imme-
drico 0,1 M. diatamente prima dell'uso.

350
 Polietilene tereftalato per contenitori per preparazioni per uso non parenterale

inoizircserP
Effettuare la determinazione usando l'emissione dello

ilareneG
3.1.15. POLIETILENE TEREFTALATO PER CON-

stagno a 189,99 nm, valutando il fondo spettrale a TENITORI PER PREPARAZIONI PER USO

190,10 nm. NON PARENTERALE

Verificare l'assenza di stagno nell'acido solforico usato.

isilanA id
idoteM
Zinco . Non piu© dello 0,2 per cento di Zn, determinato
mediante spettrometria di assorbimento atomico
(Metodo I, 2.2.23).
Soluzione in esame. Diluire la soluzione S1 100 volte con

irotinetnoC
/ ilairetaM
acido cloridrico 0,1 M.
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- DEFINIZIONE
mento utilizzando una soluzione standard di zinco
(Zn 100 ppm) R diluita con acido cloridrico 0,1 M.
Il polietilene tereftalato si ottiene mediante polimeriz-

ivittaeR
Misurare l'assorbanza a 213,9 nm usando come sor- zazione dell'acido tereftalico o dimetiltereftalato con
gente di radiazione una lampada a catodo cavo allo glicole etilenico. Nella polimerizzazione possono essere
zinco ed una fiamma aria-acetilene. usati l'acido isoftalico, dimetilisoftalato, 1,4-bis(idrossi-
Verificare l'assenza di zinco nell'acido cloridrico usato. metil)cicloesano (cicloesano-1,4-dimetanolo) o glicole

itnemogrA
dietilenico. Puo© contenere non piu© dello 0,5 per cento

ilareneG
Metalli pesanti (2.4.8). A 10 ml della soluzione S1 di silice o silicati e coloranti approvati dall'autorita©
aggiungere 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R e poi competente.
sodio idrossido soluzione concentrata R fino a debole
colorazione rosa. Diluire a 25 ml con acqua R. 12 ml

eifargonoM

ilareneG
della soluzione soddisfano al saggio limite A per i PRODUZIONE
metalli pesanti (50 ppm). Preparare la soluzione di rife-
rimento usando una soluzione standard di piombo
(Pb 2 ppm) R. Il processo di produzione e© validato per dimotrare che il

ehcituecamraF
contenuto residuo di acetaldeide non e© maggiore di
. Evaporare 50 ml della 10 ppm nei granuli.

emroF
Sostanze estraibili in acqua

soluzione S2 a secco a b.m. ed essiccare a 100-105 ‘C

fino a massa costante. Effettuare un saggio in bianco
con 50,0 ml di acqua per preparazioni iniettabili R.
Il residuo pesa non piu© di 7,5 mg (0,3 per cento) consi- CARATTERI
derando il saggio in bianco.
eiretaM

emirP
Aspetto: granuli trasparente ed opachi.
DETERMINAZIONE QUANTITATIVA Solubilita© : praticamente insolubile in acqua, in alcool e
in diclorometano. Eé idrolizzato da basi forti.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Eseguire il metodo della combustione in ossigeno

(2.5.10) usando 50,0 mg. Far assorbire i prodotti di
combustione in 20 ml di sodio idrossido 1 M. Alla solu- IDENTIFICAZIONE
zione ottenuta aggiungere 2,5 ml di acido nitrico R,
ehcitapoemO
inoizaraperP

10,0 ml di argento nitrato 0,1 M, 5 ml di ferro(-ico)

ammonico solfato soluzione R2 ed 1 ml di dibutile ftala- B. Introdurre 0,10 g di materiale in esame in un pallone
di vetro borosilicato con collo a smeriglio. Aggiun-
to R. Titolare con ammonio tiocianato 0,05 M fino a gere 25 ml di una soluzione (200 g/l) di potassioidros-
colorazione giallo-rossastra. Effettuare una determina- sido R in una soluzione al 50 per cento V/V di eta-
zione in bianco. nolo R. Bollire a ricadere per 30 min. Lasciare raf-
1 ml di argento nitrato 0,1 M equivale a 6,25 mg di poli- freddare e diluire a 100 ml con acqua R. Filtrare se
ecidnI

vinile cloruro. necessario. Diluire 1,0 ml del filtrato a 100 ml con

351
Polietilene tereftalato per contenitori per preparazioni per uso non parenterale

acqua R. Esaminata tra 210 nm e 330 nm (2.2.25), la a 50 ‘C per 5 h. Lasciare raffreddare e decantare.
soluzione presenta un massimo di assorbimento a Utilizzare la soluzione S4 entro 4 h dalla sua prepa-
240 nm. razione.
B. Disciogliere 0,05 g del materiale in esame in 2 ml di Aspetto della soluzione S1 . La soluzione S1 e© limpida
1,1,1,3,3,3-esafluoropropan-2-olo R. Deporre su una (2.2.1).
lastra di vetro a b.m. in una cappa diverse gocce
della soluzione fino ad ottenere una pellicola di Aspetto della soluzione S 2 . La soluzione S2 e© limpida
circa 15 mm per 15 mm. Lasciare evaporare il sol- (2.2.1) ed incolore (2.2.2, Metodo II).
vente e rimuovere la pellicola utilizzando una cor- . A 50 ml di soluzione S1, aggiun-
rente di acqua e un raschietto. Essiccare in stufa a
Acidita© o alcalinita©

100-105 ‘C per 1-2 h. Esaminare la pellicola gere 0,15 di BRP indicatore soluzione R. La soluzione
mediante spettrofotometria di assorbimento infra-
vira al giallo. Non sono necessari piu© di 0,5 ml di sodio
rosso (2.2.24). Lo spettro del materiale in esame idrossido 0,01 M per far virare al blu l'indicatore.
mostra massimi di assorbimento in particolare a
Ad altri 50 ml di soluzione S1 aggiungere 0,2 ml di metil-
1725 cm-1, 1410 cm-1, 1265 cm-1, 1120 cm-1, arancio soluzione R. La soluzione vira al giallo.
1100 cm-1, 1020 cm-1, 875 cm-1, 725 cm-1. Inoltre lo Non sono necessari piu© di 0,5 ml di acido cloridri-
spettro ottenuto e© identico a quello ottenuto con il co 0,01 M perchë inizi il viraggio dell'indicatore all'aran-
materiale selezionato come campione tipo. cio.
Assorbanza della soluzione S1 (2.2.25). Massimo 0,20 tra
220 nm e 340 nm. Inoltre, per polietilene tereftalato
SAGGI colorato: massimo 0,05 tra 400 nm e 800 nm.
Assorbanza della soluzione S 2 (2.2.25). Massimo 0,05 tra
Se necessario, tagliare i campioni per il saggio in pezzi 400 nm e 800 nm.
della dimensione massima per lato di 1 cm.
Sostanze riducenti . Aggiungere 2 ml di acido solfo-
Soluzione S1 . Introdurre 10,0 g del materiale in esame in rico 0,5 M e 20,0 ml di potassio permanganato 0,002 M
un pallone di vetro borosilicato con collo a smeriglio. a 20,0 ml di soluzione S1. Bollire per 3 min.
Aggiungere 200 ml di acqua R e scaldare a 50 ‘C Raffreddare immediatamente a temperatura ambiente.
per 5 h. Lasciare raffreddare e decantare la soluzione. Aggiungere 1 g di potassio ioduro R, 0,25 ml di amido
Utilizzare la soluzione S1 entro 4 h dalla sua prepara- soluzione R come indicatore e titolare immediatamente
zione. con sodio tiosolfato 0,01 M. Effettuare una titolazione
in bianco usando 20 ml di acqua R. La differenza fra i
Soluzione S2 . Introdurre 10 g del materiale in esame in volumi utilizzati nelle due titolazioni non e© superiore
un pallone di vetro borosilicato con collo a smeriglio. a 0,5 ml.
Aggiungere 100 ml di alcool R e scaldare a 50 ‘C
per 5 h. Lasciare raffreddare e decantare la soluzione. Sostanze solubili in diossano . Massimo 3 per cento.
Utilizzare la soluzione S2 entro 4 h dalla sua prepara- Introdurre 2 g del materiale in esame in un pallone di
zione. vetro borosilicato con collo a smeriglio. Aggiungere
. Introdurre 20 g del materiale in esame in 20 ml di diossano R e scaldare a ricadere per 2 h.
Soluzione S3

un pallone di vetro borosilicato con collo a smeriglio. Evaporare 10 ml della soluzione a secco su b.m. ed
Aggiungere 50 ml di acido cloridrico 0,1 M e scaldare a essiccare il residuo in stufa a 100-105 ‘C. Il residuo
50 ‘C per 5 h. Lasciare raffreddare e decantare la solu- non pesa piu© di 30 mg.
zione. Utilizzare la soluzione S3 entro 4 h dalla sua prepa- . Non piu© di 1 ppm.
razione.
Alluminio estraibile

Spettrometria di emissione atomica in plasma di argon

Soluzione S4 . Introdurre 20 g del materiale in esame in (Metodo I, 2.2.22).
un pallone di vetro borosilicato con collo a smeriglio.
Aggiungere 50 ml di sodio idrossido 0,01 M e scaldare Soluzione in esame. Soluzione S3.

352
 Polietilene tereftalato per contenitori per preparazioni per uso non parenterale

inoizircserP
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-

ilareneG
mento usando una soluzione standard di alluminio mento usando una soluzione standard di germanio
(Al 200 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M. (Ge 100 ppm) R, diluita con sodio idrossido 0,01 M.
Lunghezza d'onda. 396,15 nm, considerando il fondo Lunghezza d'onda. 206,87 nm o 265,12 nm, conside-
spettrale a 396,25 nm. rando il fondo spettrale a 206,75 nm.

isilanA id
idoteM
Antimonio estraibile . Non piu© di 1 ppm. Manganese estraibile . Non piu© di 1 ppm.
Spettrometria di emissione atomica in plasma di argon Spettrometria di emissione atomica in plasma di argon
(Metodo I, 2.2.22). (Metodo I, 2.2.22).

irotinetnoC
/ ilairetaM
Soluzione in esame. Soluzione S4. Soluzione in esame. Soluzione S3.
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
mento usando una soluzione standard di antimonio mento usando una soluzione standard di manganese
(Sb 100 ppm) R, diluita con sodio idrossido 0,01 M. (Mn 100 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.

ivittaeR
Lunghezza d'onda. 231,15 nm o 217,58 nm, conside- Lunghezza d'onda. 257,61 nm, considerando il fondo
rando il fondo spettrale a 231,05 nm. spettrale a 257,50 nm.
Bario estraibile . Non piu© di 1 ppm. Verificare l'assenza di manganese nell'acido clori-
drico 0,1 M usato.

itnemogrA
Spettrometria di emissione atomica in plasma di argon

ilareneG
(Metodo I, 2.2.22). Titanio estraibile . Non piu© di 1 ppm.
Soluzione in esame. Soluzione S3. Spettrometria di emissione atomica in plasma di argon
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- (Metodo I, 2.2.22).

eifargonoM
mento usando una soluzione standard di bario

ilareneG
Soluzione in esame. Soluzione S3.
(Ba 50 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
Lunghezza d'onda. 455,40 nm, considerando il fondo mento usando una soluzione standard di titanio
spettrale a 455,30 nm. (Ti 100 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.

ehcituecamraF
Verificare l'assenza di bario nell'acido cloridrico 0,1 M

emroF
Lunghezza d'onda. 323,45 nm o 334,94 nm, conside-
usato. rando il fondo spettrale a 323,35 nm.
Cobalto estraibile . Non piu© di 1 ppm. Verificare l'assenza di titanio nell'acido cloridrico 0,1 M
Spettrometria di emissione atomica in plasma di argon usato.

eiretaM
(Metodo I, 2.2.22).

emirP
Zinco estraibile . Non piu© di 1 ppm.
Soluzione in esame. Soluzione S3. Spettrometria di emissione atomica in plasma di argon
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- (Metodo I, 2.2.22).
ehcituecamraF

mento usando una soluzione standard di cobalto

inoizaraperP

ehcificepS

(Co 100 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M. Soluzione in esame. Soluzione S3.
Lunghezza d'onda. 228,62 nm, considerando il fondo Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di
spettrale a 228,50 nm. riferimento usando una soluzione standard di zinco
(Zn 100 ppm) R, diluita con acido cloridrico 0,1 M.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Verificare l'assenza di cobalto nell'acido cloridri- Lunghezza d'onda. 213,86 nm, considerando il fondo
co 0,1 M usato. spettrale a 213,75 nm.
Germanio estraibile . Non piu© di 1 ppm. Verificare l'assenza di zinco nell'acido cloridrico 0,1 M
Spettrometria di emissione atomica in plasma di argon usato.
(Metodo I, 2.2.22). (2.4.14). Non superiori allo 0,5 per cento,
ecidnI

Ceneri solforiche

Soluzione in esame. Soluzione S4. determinate su 1,0 g.

353
 3.2. Contenitori

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
3.2. Contenitori . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 357 3.2.5. Contenitori sterili in materiale a base

idoteM
3.2.1 Contenitori di vetro per uso farma- di polivinile cloruro plastificato
ceutico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 357 per sangue umano contenenti una
3.2.2. Contenitori e chiusure in plastica per soluzione anticoagulante . . . . . . . 368
uso farmaceutico . . . . . . . . . . . . . 362 3.2.6. Apparati tubolari per la trasfusione

irotinetnoC
/ ilairetaM
3.2.2.1. Contenitori in plastica per soluzioni di sangue e sue frazioni . . . . . . . . 369
acquose per infusione parenterale 363 3.2.8. Siringhe di plastica monouso sterili 371
3.2.3. Contenitori di plastica sterili per san- 3.2.9. Chiusure in materiale elastomero per
gue umano e sue frazioni . . . . . . . 364 contenitori per preparazioni
3.2.4. Contenitori vuoti sterili in materiale acquose ad uso parenterale, per
a base di polivinile cloruro plastifi- polveri e per polveri liofilizzate . . 373

ivittaeR
cato per sangue umano e sue fra-
zioni . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 367

itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Contenitori di vetro per uso farmaceutico

inoizircserP

ilareneG
3.2. CONTENITORI 3.2.1. CONTENITORI DI VETRO PER USO FAR-

MACEUTICO

Un contenitore (*) per uso farmaceutico e© un oggetto I contenitori di vetro per uso farmaceutico sono oggetti
che contiene o che e© destinato a contenere un prodotto in vetro destinati a venire in contatto diretto con prepa-
con il quale e© , o puo© essere, in contatto diretto. La chiu- razioni farmaceutiche.

isilanA id
sura fa parte del contenitore.

idoteM
Esistono svariati tipi di contenitori di vetro, quali:
Il contenitore (vedi 1.3. Capitoli Generali) e© costruito . Sono contenitori, di vetro a parete sottile, che,
cos|© da permettere che il contenuto possa esser prele-
Fiale

dopo riempimento, vengono saldati per fusione del

vato in modo appropriato all'uso previsto della prepa- vetro. Il contenuto e© prelevato, dopo rottura del vetro,

irotinetnoC
/ ilairetaM
razione. Assicura diversi gradi di protezione, in in una sola volta.
funzione della natura del prodotto e dei rischi dell'am-
biente e rende minima la perdita di costituenti. Il conte- Bottiglie, flaconi, siringhe e capsule . Sono contenitori a
nitore non interagisce fisicamente o chimicamente col parete piu© o meno spessa, con chiusura sia in vetro che
contenuto in modo da alterarne le qualita© oltre i limiti in altri materiali, per esempio materie plastiche o
tollerati dalle prescrizioni ufficiali. elastomeri. Il contenuto puo© esser prelevato in diverse

ivittaeR
quantita© in una o piu© volte.
Contenitore monodose. Un contenitore monodose con- . Sono con-
tiene una quantita© di preparazione destinata ad essere
Contenitori per sangue umano e sue frazioni

tenitori cilindrici a parete piu© o meno spessa, di capa-

usata in tutto od in parte in un'unica somministrazione. cita© variabile e costituiti da vetro neutro incolore e tra-

itnemogrA
sparente.

ilareneG
Contenitore multidose. Un contenitore multidose con-
tiene una quantita© di preparazione appropriata per due Qualita© del vetro .
o piu© somministrazioni. Vetro incolore. Il vetro incolore e© molto trasparente
nello spettro visibile.
Contenitore ben chiuso. Un contenitore ben chiuso pro-

eifargonoM
Vetro colorato. Si ottiene per aggiunta di piccole quan-

ilareneG
tegge il contenuto da contaminazioni con solidi e tita© di ossidi metallici scelti in funzione dell'assorbi-
liquidi estranei e da perdite di contenuto, in condizioni mento spettrale desiderato.
normali di manipolazione, conservazione e trasporto.
Vetro neutro. E' un vetro borosilicato contenente note-

ehcituecamraF
Contenitore ermeticamente chiuso. Un contenitore erme- voli quantita© di ossido di boro, di ossido di alluminio
ticamente chiuso e© impermeabile a solidi, liquidi e gas ed ossidi di metalli alcalino-terrosi. Data la sua compo-

emroF
in condizioni normali di manipolazione, conservazione sizione, il vetro neutro ha alta resistenza agli sbalzi ter-
e trasporto. Se e© previsto che il contenitore debba essere mici ed elevata resistenza idrolitica.
aperto per piu© di una occasione, esso deve essere realiz- Vetro silico-sodico-calcico. E' un vetro siliceo
zato in modo da restare ermetico dopo la richiusura. contenente ossidi di metalli alcalini, principalmente

eiretaM

emirP
Contenitore saldato. Un contenitore saldato e© un conte- ossido di sodio, ed ossidi di metalli alcalino-terrosi,
nitore chiuso per fusione del materiale che lo costi- specialmente ossido di calcio. Per la sua composi-
tuisce. zione, questo vetro ha una moderata resistenza
idrolitica.
ehcituecamraF
inoizaraperP

Contenitore con chiusura inviolabile. Un contenitore con

ehcificepS

La stabilita© chimica dei contenitori in vetro per uso

chiusura inviolabile e© un contenitore chiuso con un farmaceutico e© espressa dalla resistenza idrolitica, cioe©
dispositivo che rivela in modo irreversibile se il reci- dalla resistenza a cedere all'acqua sostanze minerali
piente e© stato aperto. solubili, in precise condizioni di contatto fra acqua e
superficie interna del contenitore o vetro polverizzato.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Contenitore a prova di bambino. E' un contenitore La resistenza idrolitica viene misurata per titolazione
dotato di una chiusura che impedisce l'apertura da degli alcali rilasciati.
parte di bambini.
Rispetto alla loro resistenza idrolitica i contenitori in
öööö vetro vengono classificati come segue:
^ Contenitori di vetro di Tipo I. Sono costituiti da
ecidnI

(*) Nei testi della Farmacopea in lingua italiana si usa spesso, in luogo vetro neutro ed hanno alta resistenza idrolitica
del termine ûContenitoreý, il sinonimo ûRecipienteý. dovuta alla composizione chimica del vetro stesso.

357
Contenitori di vetro per uso farmaceutico

^ Contenitori di vetro di Tipo II. Sono, di solito, costi- resistenza all'abrasione. Il trattamento esterno e© tale
tuiti da vetro silico-sodico-calcico ed hanno alta resi- da non contaminare la superficie interna del con-
stenza idrolitica, ottenuta per appropriato tratta- tenitore.
mento della superficie. Con l'eccezione del Tipo I, i contenitori di vetro per uso
^ Contenitori di vetro di Tipo III. Sono, di solito, di farmaceutico non devono essere riutilizzati. I conteni-
vetro silico-sodico-calcico ed hanno moderata resi- tori per il sangue umano e sue frazioni non devono
stenza idrolitica. mai essere riutilizzati.
^ Contenitori di vetro di Tipo IV. Sono, di solito, di I contenitori di vetro per uso farmaceutico soddisfano
vetro silico-sodico-calcico ed hanno una bassa resi- ai saggi specifici di resistenza idrolitica. Quando un
stenza idrolitica. recipiente di vetro ha componenti diversi dal vetro,
Le seguenti indicazioni, in carattere corsivo, costi- i saggi si applicano solo alla parte in vetro del con-
tuiscono raccomandazioni generali d'impiego per i tenitore.
vari Tipi di contenitori in vetro che possono essere
usati per differenti forme di preparazioni farma- SAGGI
ceutiche.
Il fabbricante di un prodotto farmaceutico ha la Per definire la qualita© dei contenitori di vetro in fun-
responsabilita© di assicurare l'idoneita© del contenitore zione del loro uso previsto, sono necessari uno o piu©
prescelto. dei seguenti saggi.
I contenitori di vetro di Tipo I sono, in generale, adatti per
tutte le preparazioni sia di uso parenterale che non paren- RESISTENZA IDROLITICA
terale, per il sangue umano e le sue frazioni.
I contenitori di vetro di Tipo II sono, in generale, Apparecchi e reattivi
adatti per preparazioni acquose acide o neutre per uso ^ Mortaio, pestello (vedi Figura.3.2.1.-1) e martello in
parenterale. acciaio temperato magnetico.
I contenitori di vetro di Tipo III sono adatti per prepara- ^ Una serie di 3 setacci, a maglie quadrate in acciaio
zioni non acquose per uso parenterale, per polveri inossidabile, montati su di un telaio dello stesso
per uso parenterale e per preparazioni per uso non paren- materiale, composta da:
terale. a) setaccio n.710
I contenitori di vetro di Tipo IV sono in generale adatti b) setaccio n.425
per preparazioni solide per uso non parenterale e per
alcune preparazioni liquide o semisolide per uso non c) setaccio n.250
parenterale. ^ Un magnete permanente.
In generale, si possono impiegare contenitori di vetro ^ Beute e coperchi, in vetro neutro, ûinvecchiatiý, cioe©
con resistenza idrolitica superiore a quella sopra racco- gia© usati per il saggio, oppure beute che siano state
mandata per un particolare tipo di preparazione. riempite con acqua R e tenute in autoclave a 121 ‘C
Per le preparazioni di uso non parenterale possono per almeno 1 h.
essere usati vetri sia incolori che colorati. Le prepara- ^ Fogli di un metallo inerte (per esempio, alluminio).
zioni per uso parenterale sono normalmente presen- ^ Un'autoclave in grado di mantenere una tempera-
tate in vetro incolore, ma possono essere usati vetri tura di 121 ‘C 1 ‘C, dotata di termometro,
colorati per sostanze sensibili alla luce. Si racco- 6

manometro, valvola di sfiato e rastrelliera, di

manda che tutti i contenitori di vetro per prepara- dimensioni sufficienti a sistemare sopra il livello
zioni liquide e per polveri per uso parenterale, per- dell'acqua il numero di contenitori necessario ad
mettano l'ispezione visiva del contenuto. effettuare il saggio.
La superficie interna dei contenitori di vetro puo© ^ Una stufa ad aria calda in grado di mantenere una
subire speciali trattamenti per migliorarne la resi- temperatura di 110 ‘C 5 ‘C.
stenza idrolitica, per renderla idrorepellente, ecc. 6

Anche la superficie esterna puo© esser trattata, ^ Una bilancia in grado di pesare fino a 500 g con una
per esempio, per ridurre l'attrito e aumentare la precisione di 0,005 g.

358
 Contenitori di vetro per uso farmaceutico

inoizircserP
^ Acqua esente da anidride carbonica R. Tabella 3.2.1.-1. Numero di contenitori e volume del

ilareneG
^ Rosso metile soluzione R. liquido da esaminare.
^ Acido cloridrico 0,01 M. Volume di
Numero di Volume del liquido

^ Acetone R.
riempimento in
contenitori da titolare in millilitri

isilanA id
millilitri

idoteM
^ Una miscela di 1 volume di acido fluoridrico R e 9 Fino a 3 Almeno 10 25,0
volumi di acido cloridrico R.
Oltre 3 e fino a 30 Almeno 5 50,0
Oltre 30 Almeno 3 100,0

irotinetnoC
/ ilairetaM
Metodo. Immediatamente prima del saggio, lavare
accuratamente ogni contenitore almeno tre volte con
acqua R, lasciar scolare e riempire i contenitori con il
volume prescritto di acqua R. Coprire le bottiglie ed i
flaconcini con cristallizzatori (o vetrini di orologio) di

ivittaeR
vetro neutro o con fogli di alluminio previamente lavati
con acqua R. Chiudere le fiale per fusione del vetro.
Porre i contenitori sulla rastrelliera e collocare il tutto
nell'autoclave contenente acqua R. Il livello dell'acqua

itnemogrA
nell'autoclave deve restare al disotto del piano della

ilareneG
rastrelliera. Chiudere l'autoclave ed operare come
segue:
^ riscaldare l'autoclave fino a 100 ‘C e lasciare sfiatare
il vapore dalla valvola per 10 min,

eifargonoM

ilareneG
^ aumentare la temperatura da 100 ‘C a 121 ‘C in
20 min,
^ mantenere la temperatura a 121 ‘C 1 ‘C per 6

ehcituecamraF
60 min,

emroF
^ abbassare la temperatura da 121 ‘C a 100 ‘C in
40 min, aprendo progressivamente la valvola di
sfiato per prevenire la formazione di vuoto.
Togliere i contenitori dall'autoclave con le normali pre-
cauzioni e raffreddarli in acqua corrente. Effettuare le
eiretaM

emirP
Figura 3.2.1.-1. Apparecchio per il metodo del vetro titolazioni entro 1 h dall'uscita dei contenitori dall'au-
polverizzato. toclave. Riunire i liquidi provenienti dai vari recipienti
Dimensioni in millimetri. e mescolare. Prelevarne il volume prescritto in
Tabella 3.2.1.-1 ed introdurlo in una beuta. Porre un
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Volume di riempimento. Il volume di riempimento e© il volume identico di acqua R, come bianco, in una
volume di acqua da introdurre nel contenitore per ese- seconda beuta uguale. Aggiungere ad ogni beuta
guire il saggio. Per le bottiglie ed i flaconcini il volume 0,05 ml di rosso metile soluzione R, per ogni 25 ml di
di riempimento e© il 90 per cento della loro capacita© a liquido. Titolare il bianco con acido cloridrico 0,01 M.
Titolare il liquido in esame con lo stesso acido fino ad
ehcitapoemO

bordo raso. Per le fiale e© il volume fino al livello della

inoizaraperP

spalla. ottenere un colore identico a quello del bianco.

Sottrarre il valore ottenuto dalla titolazione del bianco
A. Saggio della resistenza idrolitica di superficie
da quello della titolazione del liquido in esame ed espri-
La determinazione si effettua su contenitori nuovi. mere i risultati in millilitri di acido cloridrico 0,01 M
Il numero di contenitori da esaminare ed i volumi di per 100 ml.
ecidnI

liquido necessari per la determinazione finale sono Limiti. I risultati non sono superiori ai valori indicati
indicati nella Tabella 3.2.1.-1. nella Tabella 3.2.1.-2.

359
Contenitori di vetro per uso farmaceutico

Tabella 3.2.1.-2. Valori limite del saggio di resistenza con acqua R. Assicurarsi che la polvere sia sparsa uni-
idrolitica di superficie formemente sul fondo della beuta. Collocare le beute
in autoclave e mantenerle a 121 ‘C per 30 min, ese-
Volume di riempimento Volume in ml di HCl 0,01 M
guendo le operazioni descritte nel Saggio A per la resi-
in millilitri
stenza idrolitica di superficie. Dopo raffreddamento,
per 100 ml di liquido da esaminare

Contenitori in vetro togliere le chiusure, asciugare accuratamente l'esterno

Tipo I e II Tipo III dei recipienti e riportarli ciascuno alla massa originale
Fino ad 1 2,0 20,0 aggiungendo acqua R.
Oltre 1 e fino a 2 1,8 17,6 Titolazione. Trasferire 50,0 ml (corrispondenti a 10,0 g
ý 2 ý 5 1,3 13,2 di polvere di vetro) del liquido limpido sopranatante in
ý 5 ý 10 1,0 10,2 una beuta. Preparare un bianco in una beuta simile
ý 10 ý 20 0,80 8,1 usando 50 ml di acqua R. Aggiungere in ciascuna beuta
ý 20 ý 50 0,60 6,1 0,1 ml di rosso metile soluzione R e titolare con acido clo-
ý 50 ý 100 0,50 4,8 ridrico 0,01 M. Titolare il liquido in esame ed il bianco
con lo stesso acido fino ad uguale colore. Sottrarre il
ý 100 ý 200 0,40 3,8 valore del bianco da quello del liquido in esame ed
ý 200 ý 500 0,30 2,9 esprimere i risultati in millilitri di acido cloridrico
Oltre 500 0,20 2,2 0,01 M per 10,0 g di vetro.
Limiti. Il vetro derivante dai contenitori di vetro di Tipo
B. Saggio della resistenza idrolitica del vetro polveriz- I non richiede piu© di 2,0 ml, quello derivante dai conte-
zato nitori di Tipo II o di Tipo III non piu© di 17,0 ml e quello
Metodo. Lavare i contenitori da saggiare con acqua R e derivante
di acido
dai contenitori di Tipo IV non piu© di 30,0 ml
cloridrico 0,01 M.
asciugarli in stufa ad aria calda.
Rompere grossolanamente col martello circa 100 g di C. Saggio della resistenza idrolitica della superficie trat-

.
vetro proveniente da almeno tre contenitori, in modo Il numero dei contenitori
tata dei contenitori

che i frammenti piu© grandi non eccedano i 25 mm. volumi di riempimentonecessari sono
per il saggio ed i
indicati nella
Trasferire una parte del campione nel mortaio. Inserire Tabella 3.2.1.-1.
il pestello e colpirlo fortemente col martello una sola Metodo. Lavare due volte i contenitori con acqua R.
volta. Riempirli completamente con la miscela di acido fluori-
Trasferire il contenuto del mortaio nel setaccio a maglie drico R e di acido cloridrico R e lasciarli riposare per
piu© larghe (a). Ripetere l'operazione fino a che tutti i 10 min. Svuotarli e lavarli accuratamente 5 volte con
frammenti siano stati trasferiti nel setaccio. Agitare acqua R. Immediatamente prima del saggio, lavare i
rapidamente, togliere la porzione rimasta sui setacci contenitori ancora una volta con acqua R e sottoporli
(a) e (b) e sottoporla a frattura, ripetendo l'operazione allo stesso trattamento in autoclave e procedura di tito-
fino a quando sul setaccio (a) rimangono circa 20 g di lazione
tica di
descritte nel Saggio A per la resistenza idroli-
superficie.
vetro. Scartare questa porzione e quella che passa attra-
verso il setaccio (c). Agitare l'insieme dei setacci a Distinzione fra i contenitori di vetro di Tipo I e di Tipo II

mano o meccanicamente per 5 min. Conservare la parte Iconrisultati

quelli
ottenuti nel saggio C vengono confrontati
del Saggio A. Il significato del confronto e©
di granuli di vetro che passa attraverso il setaccio (b) e spiegato nella Tabella 3.2.1.-3.
che e© trattenuta dal setaccio (c). Togliere ogni eventuale
particella metallica mediante il magnete. Trasferire Tabella 3.2.1.-3. Distinzione fra i contenitori di vetro
circa 22 g di polvere di vetro in una beuta e lavare con di tipo I e di Tipo II
60 ml di acetone R. Agitare per sospendere i granuli e
decantare il liquido sopranatante. Ripetere l'opera- Tipo I Tipo II
zione 5 volte. Spargere la polvere di vetro su un cristal-
lizzatore. Lasciar evaporare l'acetone, seccare in stufa I valori sono molto I valori sono molto piu© ele-
a 110 ‘C per 20 min e lasciar raffreddare. simili a quelli trovati nel vati di quelli trovati nel
Saggio per la resistenza Saggio per la resistenza
Introdurre 20,00 g di polvere di vetro asciutta in una idrolitica di superficie idrolitica di superficie e
beuta da 250 ml. Aggiungere 100 ml di acqua R e per i contenitori di vetro sono simili, ma non supe-
pesare. In una seconda identica beuta porre 100 ml di di Tipo I riori, a quelli per i conteni-
acqua R, come bianco e pesare. Coprire le due beute tori di vetro di Tipo III
con capsule di vetro neutro o fogli di alluminio lavati

360
 Contenitori di vetro per uso farmaceutico

inoizircserP
bammato R in piridina anidra R. Aggiungere 3,0 g di

ilareneG
ARSENICO
Il saggio si applica solo ai contenitori in vetro desti- zinco R in granuli (710) alla miscela contenuta nel
nati a contenere preparazioni acquose per uso paren- generatore (A);. Collegare immediatamente quest'ul-
terale. timo al depuratore gia© montato e collocarlo in un
Apparecchio. L'apparecchio (vedi Figura 3.2.1.-2) consi- bagno d'acqua termostatato a 25 ‘C 3 ‘C. Lasciare
6

isilanA id
ste in un generatore di arsina (A) collegato ad un depu- che lo svolgimento dell'idrogeno e lo sviluppo del

idoteM
ratore (C) e ad un tubo di assorbimento (E) a mezzo di colore procedano per 45 min agitando dolcemente il
giunti smerigliati conici o sferici (B e D). Puo© essere generatore ogni 10 min. Scollegare il tubo di assorbi-
usato qualsiasi altro apparecchio basato sullo stesso mento dal generatore e trasferire la soluzione in una
principio di montaggio. provetta per saggi comparativi (2.1.5). Ogni eventuale

irotinetnoC
/ ilairetaM
colorazione rossa nella soluzione campione non e© piu©
intensa di quella sviluppata nella soluzione di riferi-
mento.
La valutazione puo© esser effettuata anche con uno
spettrofotometro o un colorimetro, misurando tra 535
e 540 nm e impiegando una cella da 1 cm, usando come

ivittaeR
bianco la soluzione di argento dietilditiocarbammato.
La soluzione in esame non contiene piu© di 0,1 ppm di
arsenico (As).

itnemogrA
ilareneG
TRAMISSIONE DELLA LUCE PER I CONTENITORI DI
VETRO COLORATO
Preparazione del campione. Rompere il contenitore di
vetro o tagliarlo con una sega circolare dotata di una
ruota abrasiva ad umido, come ad esempio una ruota

eifargonoM

ilareneG
diamantata o al carborundum. Scegliere sezioni rappre-
Figura 3.2.1.-2. Apparecchio per la determinazione sentative dello spessore della parete ed adattarle per
dell'arsenico esser montate in uno spettrofotometro. Se il campione
e© troppo piccolo per coprire l'apertura del porta-cam-

ehcituecamraF
Soluzione in esame. Introdurre nel generatore 35 ml del pioni, e purchë la sua lunghezza sia maggiore di quella
della fenditura ottica dello strumento, si puo© coprire la

emroF
liquido ottenuto, come indicato nel Saggio A per la resi-
stenza idrolitica di superficie, dal contenitore in vetro parte rimasta scoperta con schermature opache di carta
per preparazioni acquose parenterali. Per contenitori o di nastro. Prima del montaggio, lavare, asciugare e
piu© piccoli introdurre 35 ml di liquido ottenuto dalla pulire il campione e metterlo in posizione, fissandolo
mescolanza del contenuto di vari contenitori, sottopo- con cera od altro mezzo adatto, evitando di lasciarvi

eiretaM
impronte digitali od altri segni.

emirP
sti allo stesso trattamento.
Soluzione di riferimento. Diluire 3,5 ml di soluzione Procedimento. Porre il campione nello spettrofotometro
standard di arsenico (As 1 ppm) R a 35 ml con acqua R con il suo asse cilindrico parallelo alla fenditura, in
ed introdurla nel generatore. modo che il fascio di luce sia perpendicolare alla super-
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Procedimento. Trattare come segue, nelle stesse condi- ficie della sezione e che le perdite per riflessione siano
zioni, la soluzione in esame e quella di riferimento: ridotte al minimo. Misurare la trasmissione, rispetto
mescolare 20 ml di una soluzione (350 g/l) di acido sol- all'aria, nel campo spettrale fra 290 nm e 450 nm, in
forico R, 2 ml di potassio ioduro soluzione R, 0,5 ml di modo continuo o ad intervalli di 20 nm.
ehcitapoemO
inoizaraperP

stagno(-oso) cloruro soluzione R ed 1 ml di 2-propano- Limiti. Per i contenitori di vetro colorato destinati a
lo R. Lasciare a riposo per 30 min. Riempire il depura- contenere prodotti di impiego non parenterale ed indi-
tore (C) con due batuffoli di piombo acetato cotone R pendentemente dal tipo e dalla capacita© del contenitore
in modo da lasciare uno spazio di 2 mm fra i due stesso, la trasmissione della luce, osservata nel campo
batuffoli. Lubrificare i giunti (B e D) con un appro- spettrale fra 290-450 nm, non supera il 10 per cento.
priato grasso da rubinetti e collegare con il tubo di Per i recipienti di vetro colorati per preparazioni paren-
ecidnI

assorbimento (E). Introdurre nel tubo di assorbimento terali, la trasmissione non supera i limiti indicati nella
3,0 ml di una soluzione (5 g/l) di argento dietilditiocar- Tabella 3.2.1.-4.

361
Contenitori e chiusure in plastica per uso farmaceutico

Tabella 3.2.1.-4. Limiti di trasmissione della luce per 3.2.2. CONTENITORI E CHIUSURE IN PLASTICA

contenitori di vetro colorato di Tipo I, II e III PER USO FARMACEUTICO

Percentuale massima di trasmissione

Un contenitore in materiale plastico per uso farmaceu-
della luce ad ogni lunghezza d'onda
tico e© un oggetto in plastica che contiene o e© progettato
compresa fra 290 nm e 450 nm
per contenere un prodotto farmaceutico con il quale e© ,
Volume nominale Contenitori saldati Contenitori con
o puo© essere, a contatto diretto. La chiusura e© una parte
in millilitri alla fiamma chiusure
del contenitore.
Fino ad 1 50 25 I materiali utilizzati per contenitori e chiusure per uso
Oltre 1 e fino a 2 45 20 farmaceutico sono costituiti da polimeri nei quali pos-
ý 2 ý 5 40 15 sono essere incorporati degli additivi; questi materiali
ý 5 ý 10 35 13 non comprendono, nella loro composizione, sostanze
ý 10 ý 20 30 12 che possono essere estratte dai contenuti in quantita©
Oltre 20 15 10 tali da alterare l'efficacia o la stabilita© del prodotto o
da presentare rischio di tossicita© .
CONTENITORI PER SANGUE UMANO E SUE FRA- I polimeri piu© comunemente usati sono: polietilene
ZIONI (con o senza additivi), polipropilene, polivinilcloruro,
Resistenza allo sbalzo termico polietilentereftalato e copolimeri etilene-vinilacetato.
I contenitori non si rompono, scheggiano o fessurano La natura e la quantita© degli additivi sono determinate
quando sono: dal tipo di polimero, dal procedimento utilizzato per
a) collocati vuoti, in un'autoclave, e la temperatura trasformare la plastica in contenitore e dall'uso al quale
viene innalzata, in circa 30 min, a 140 ‘C e mantenuta il contenitore stesso e© destinato. Gli additivi possono
a questo valore per 30 min; essere antiossidanti, stabilizzanti, plastificanti, lubrifi-
canti, coloranti e modificatori di resistenza all'urto.
b) collocati, vuoti, in una stufa, e la temperatura viene Agenti antistatici e di sformatura possono essere utiliz-
innalzata, in circa 30 min, a 250 ‘C e mantenuta a que- zati solo per contenitori per preparazioni per uso orale
sto valore per 1 h; o per uso esterno, per i quali sono permessi. Gli additivi
c) riempiti, al 70 per cento della loro capacita© nominale, che si possono usare sono indicati nella specifica tipo
con una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R e gradual- per ogni materiale descritto in Farmacopea. Possono
mente raffreddati, all'aria, a -20 ‘C e mantenuti a que- essere utilizzati altri additivi purchë siano approvati di
sta temperatura per 24 h. Riportati a temperatura volta in volta dall'autorita© competente responsabile
ambiente, i contenitori soddisfano al saggio della resi- dell'autorizzazione alla vendita della preparazione.
stenza alla centrifugazione; Per la scelta di un adatto contenitore in plastica, e©
d) sottoposti ad un rapido raffreddamento ponendoli, necessario conoscere la formula completa di produ-
riempiti di acqua di rubinetto, successivamente in due zione della plastica, inclusi tutti i materiali aggiunti
b.m. aventi fra loro una differenza di temperatura di durante la fabbricazione del contenitore, in modo da
almeno 40 ‘C. poter valutare i rischi potenziali. Il contenitore in pla-
stica scelto per una particolare preparazione dovrebbe
Resistenza alla centrifugazione essere tale che:
Riempire il contenitore con acqua R fino alla sua mas- ^ i componenti della preparazione, a contatto con il
sima capacita© nominale e porlo in un'adatta centrifuga. materiale plastico, non vengano adsorbiti in modo
Bilanciare la centrifuga ed accelerarla a 2000 giri in un apprezzabile sulla sua superficie e non migrino
tempo di almeno 1 min. Il contenitore resiste a queste all'interno della plastica o attraverso la stessa in
condizioni per almeno 30 min. modo significativo,
^ il materiale plastico non ceda sostanze in quantita©
ETICHETTE sufficiente ad influenzare la stabilita© della prepara-
zione o a presentare rischio di tossicita© .
I contenitori per il sangue umano e frazioni sono eti- Utilizzando il/i materiali scelti che soddisfano a questi
chettati in conformita© alle specifiche legislazioni nazio- criteri, si preparano un certo numero di campioni tipo
nali ed accordi internazionali. identici del contenitore con un procedimento ben defi-

362
 Contenitori e chiusure in plastica per uso farmaceutico

inoizircserP
nito e si sottopongono a saggi pratici in condizioni che adatti per emulsioni. I polimeri piu© comunemente uti-

ilareneG
riproducono quelle dell'impiego al quale sono destinati lizzati sono polietilene, polipropilene e polivinile clo-
inclusa, se e© il caso, la sterilizzazione. Per confermare ruro. Le specificazioni qui riportate devono essere lette
la compatibilita© fra contenitori e contenuti e per garan- in accordo con la sezione 3.2.2. Contenitori e chiusure
tire che non si abbiano variazioni dannose per la qua- in plastica per uso farmaceutico.

isilanA id
lita© della preparazione, si effettuano diversi saggi quali

idoteM
la verifica dell'assenza di modificazioni delle caratteri- I contenitori possono essere sacche o bottiglie. Hanno
stiche fisiche, la valutazione delle possibili perdite o un sito adatto per l'attacco di un apparato tubolare per
incrementi dovuti a permeazione, il rilevamento di l'infusione disegnato in modo da garantire un collega-
variazioni di pH, la valutazione di modificazioni mento sicuro. Possono avere un sito che permetta di
fare una iniezione al momento dell'uso. Generalmente

irotinetnoC
/ ilairetaM
causate dalla luce, saggi chimici e, se del caso, saggi bio- hanno un dispositivo che consente di sospenderli e che
logici. dovra© sopportare la tensione che si verifica al momento
Il metodo di produzione e© tale da assicurare la riprodu- dell'uso. I contenitori devono resistere alle condizioni
cibilita© per la successiva fabbricazione in grande quan- di sterilizzazione alle quali saranno sottoposti.
tita© e si scelgono condizioni di lavorazione che esclu- La forma del contenitore e il metodo di sterilizzazione

ivittaeR
dano la possibilita© di contaminazione con altri mate- scelto sono tali che tutte le parti dei contenitori che pos-
riali plastici o loro componenti. Il produttore deve sono venire a contatto con la soluzione siano steriliz-
assicurare che i contenitori fabbricati in produzione zate. I contenitori, dopo la chiusura, sono impermeabili
siano simili sotto tutti i punti di vista ai campioni tipo. ai microrganismi. I contenitori sono tali che, dopo il
riempimento, resistono al danno derivato da un conge-

itnemogrA
Perchë i risultati dei saggi su campioni tipo rimangano

ilareneG
validi, e© importante che: lamento accidentale che potrebbe verificarsi durante il
^ non vi siano variazioni nella composizione del trasporto della preparazione finale. Se non diversa-
materiale cos|© come definita per i campioni tipo; mente giustificato e autorizzato, i contenitori sono e
rimangono sufficientemente trasparenti da permettere

eifargonoM
^ non vi siano variazioni nel metodo di produzione in ogni momento di esaminare l'aspetto dei contenuti.

ilareneG
come cos|© definito per i campioni tipo, special- I contenitori vuoti non presentano difetti che possono
mente riguardo alle temperature alle quali il mate- portare a rotture e il contenitore riempito e chiuso non
riale plastico e© sottoposto durante la conversione mostra alcuna perdita.
o durante procedimenti successivi come la steriliz-

ehcituecamraF
zazione; Per una conveniente conservazione di certe prepara-

emroF
^ non venga utilizzato materiale di scarto. zioni, il contenitore deve essere racchiuso in una busta
di protezione. In questo caso, la valutazione prelimi-
Dopo opportuna validazione, puo© essere consentito il nare delle condizioni di conservazione deve essere effet-
riciclaggio di materiale in eccesso di natura e propor- tuata utilizzando il contenitore chiuso nella busta.
zioni ben definite.

eiretaM

emirP
I materiali descritti nella Farmacopea sono riconosciuti
adatti per gli scopi specifici indicati, come sopra defi- SAGGI
nito, purchë soddisfino a prove di compatibilita© per cia-
scuna differente combinazione contenitore contenuto. . Utilizzare la soluzione S entro 4 h dalla pre-
ehcituecamraF
inoizaraperP

Soluzione S

parazione. Riempire un contenitore alla sua capacita©

ehcificepS

nominale con acqua R e chiuderlo, se possibile nelle

3.2.2.1. CONTENITORI IN PLASTICA PER SOLU-
condizioni usuali di chiusura, altrimenti utilizzando un
ZIONI ACQUOSE PER INFUSIONE
foglio di alluminio puro. Scaldare in autoclave in modo
da raggiungere in 20-30 min una temperatura di
PARENTERALE
ehcitapoemO
inoizaraperP

121 2 ‘C e mantenere a questa temperatura per

6

30 min. Se il riscaldamento a 121 ‘C provoca deteriora-

DEFINIZIONE mento del contenitore, scaldare a 100 ‘C per 2 h.
I contenitori in plastica per soluzioni acquose per infu- Bianco. Preparare un bianco riscaldando acqua R in
sione endovenosa sono fabbricati utilizzando uno o una beuta di vetro borosilicato, chiusa con un foglio di
ecidnI

piu© polimeri, se necessario con additivi. I contenitori alluminio puro, alla temperatura e per il tempo utiliz-
descritti in questa sezione non sono necessariamente zati per la preparazione della soluzione S.

363
Contenitori di plastica sterili per sangue umano e sue frazioni

Aspetto della soluzione S . La soluzione S e© limpida zioni di fabbricazione dei contenitori sono fissate dal-
(2.2.1) ed incolore (Metodo II, 2.2.2). l'autorita© competente secondo la pertinente legislazione
Acidita© o alcalinita©. Ad un volume di soluzione S corri- nazionale e gli accordi internazionali.
spondente al 4 per cento della capacita© nominale del Quando la composizione dei materiali delle differenti
contenitore aggiungere 0,1 ml di fenolftaleina soluzio- parti dei contenitori corrisponde alle relative specifiche,
ne R. La soluzione e© incolore. Aggiungere 0,4 ml di la loro qualita© viene controllata con i metodi indicati
sodio idrossido 0,01 M. La soluzione e© rosa. Aggiungere in quelle specifiche (Vedere il capitolo 3.1. Materiali
0,8 ml di acido cloridrico 0,01 M e 0,1 ml di rosso metile usati per la fabbricazione di contenitori e le sue sezioni).
soluzione R. La soluzione e© rosso-arancio o rossa.
Assorbanza (2.2.25). Misurare l'assorbanza della Materiali diversi da quelli descritti nella Farmacopea
soluzione S da 230 nm a 360 nm, utilizzando il bianco possono essere usati, purchë la loro composizione sia
(vedi soluzione S) come liquido di compensazione. autorizzata dalla competente autorita© e purchë i conte-
A queste lunghezze d'onda, l'assorbanza non e© supe- nitori fabbricati con quei materiali soddisfino alle spe-
riore a 0,20. cifiche prescritte per Contenitori di plastica sterili per
Sostanze riducenti . A 20,0 ml di soluzione S aggiungere sangue umano e sue frazioni.
1 ml di acido solforico diluito R e 20,0 ml di potassio per- In condizioni di uso normale, i materiali non rilasciano
manganato 0,002 M. Bollire per 3 min e raffreddare monomeri, o altre sostanze, in quantita© tali da poter
immediatamente. Aggiungere 1 g di potassio ioduro R e essere nocivi, në portano a modificazioni anomale del
titolare immediatamente con sodio tiosolfato 0,01 M sangue.
utilizzando 0,25 ml di amido soluzione R come indica-
tore. Effettuare una titolazione utilizzando 20,0 ml del I contenitori possono contenere soluzioni anticoagu-
bianco. La differenza fra i volumi usati nelle due titola- lanti, secondo l'uso previsto, e sono forniti sterili.
zioni non e© superiore a 1,5 ml.
. Riempire un contenitore utilizzato in pre- Ciascun contenitore e© provvisto di raccordi adatti
Trasparenza

cedenza per la preparazione della soluzione S con un all'uso previsto. Il contenitore puo© costituire una sin-
volume, uguale alla capacita© nominale, della sospen- gola unita© oppure il contenitore di raccolta puo© essere
sione opalescente primaria (2.2.1) diluita 1:200 per un connesso, mediante uno o piu© tubi, ad uno o piu© conte-
contenitore di polietilene o di polipropilene e 1:400 per nitori secondari per permettere la separazione dei com-
gli altri contenitori. La torbidita© della sospensione e© ponenti del sangue entro un sistema chiuso.
percettibile quando si guarda attraverso le pareti del I raccordi hanno forma e dimensione appropriate per
contenitore e si confronta con un contenitore simile consentire un adeguato collegamento del contenitore
riempito con acqua R. con l'apparato di trasfusione. Le coperture di prote-
zione sull'ago per il prelievo e sui raccordi devono
ETICHETTE essere tali da assicurare il mantenimento della sterilita© .
Devono essere facili da rimuovere ma devono essere
L'etichetta che accompagna un lotto di contenitori inviolabili.
vuoti comprende l'indicazione di: La capacita© dei contenitori e© in rapporto alla capacita©
^ nome e indirizzo del fabbricante, nominale fissata dall'autorita© nazionale e al volume
^ numero del lotto che consente di conoscere le necessario di soluzione anticoagulante. La capacita©
vicende del contenitore e del materiale plastico di nominale e© il volume di sangue da raccogliere nel conte-
cui e© costituito. nitore. I contenitori sono di forma tale che una volta
riempiti possano essere centrifugati.
3.2.3. CONTENITORI DI PLASTICA STERILI PER I contenitori sono muniti di un sistema adatto a sospen-
SANGUE UMANO E SUE FRAZIONI derli o fissarli, che non ostacola la raccolta, la conser-
vazione, il trattamento o la somministrazione del
I contenitori di plastica per la raccolta, la conserva- sangue.
zione, il trattamento e la somministrazione di sangue e
sue frazioni sono costituiti da uno o piu© polimeri, se I contenitori sono racchiusi in buste di protezione sigil-
necessario, con additivi. La composizione e le condi- late.

364
 Contenitori di plastica sterili per sangue umano e sue frazioni

inoizircserP
CARATTERI . Porre il contenitore, che e© stato sottoposto al

ilareneG
Perdite

saggio di resistenza alla trazione, fra due lastre rico-

Il contenitore e© sufficientemente trasparente da consen- perte di carta assorbente impregnata con blu bromofe-
tire un'opportuna ispezione visiva dei contenuti prima nolo soluzione R1 (diluita 1:5) o altro indicatore adatto
e dopo il prelievo del sangue e sufficientemente elastici e poi essiccata. Progressivamente applicare una forza
da offrire una resistenza minima durante il riempi-

isilanA id
alle lastre per comprimere il contenitore cos|© che la sua

idoteM
mento e lo svuotamento nelle normali condizioni d'uso. pressione interna (cioe© la differenza fra la pressione
Il contenitore contiene non piu© di 5 ml di aria. applicata e la pressione atmosferica) raggiunga i
67 kPa entro 1 min. Mantenere la pressione per
10 min. Nessun segno di perdita e© rivelabile sulla carta

irotinetnoC
SAGGI

/ ilairetaM
con l'indicatore o in corrispondenza di altri punti di
Soluzione S1 . Riempire il contenitore con 100 ml di una collegamento (saldature, giunti, ecc.).
soluzione sterile, apirogena, (9 g/l) di sodio cloruro R. . Per un contenitore che contenga
Chiudere il contenitore e scaldarlo in autoclave cos|©
Permeabilita© al vapore

una soluzione anticoagulante, riempirlo con un volume

che il contenuto sia mantenuto a 110 ‘C per 30 min. di una soluzione (9 g/l ) di sodio cloruro R uguale al

ivittaeR
Se il contenitore in esame contiene una soluzione anti- volume di sangue che dovrebbe contenere.
coagulante, vuotarlo e poi sciacquare con 250 ml di
acqua per preparazioni iniettabili R a 20 ‘C 1 ‘C e
6 Per un contenitore vuoto, riempirlo con la stessa
scartare i lavaggi. miscela di soluzione anticoagulante e sodio cloruro

itnemogrA
soluzione. Chiudere il contenitore, pesarlo e conser-

ilareneG
Soluzione S 2 . Introdurre nel contenitore un volume di varlo per 21 giorni a 5 1 ‘C in un'atmosfera con umi-
acqua per preparazioni iniettabili R corrispondente al 6

dita© relativa di 50 5 per cento. Dopo questo tempo,

volume richiesto di soluzione anticoagulante. Chiudere 6

la perdita in massa non supera l'uno per cento.

il contenitore e scaldarlo in autoclave cos|© che il conte-
nuto rimanga a 110 ‘C per 30 min. Dopo raffredda-

eifargonoM
. Riempire il contenitore

ilareneG
mento, aggiungere acqua per preparazioni iniettabili R
Svuotamento sotto pressione

con un volume di acqua R, a 5 1 ‘C, uguale alla capa-

fino a riempire il contenitore alla sua capacita© nomi-
6

cita© nominale. Connettere una tubolatura di trasfusione

nale. senza ago per endovena a uno dei raccordi. Compri-
Se il contenitore in esame contiene una soluzione anti- mere il contenitore in modo da mantenere, durante lo

ehcituecamraF
coagulante, prima vuotare e poi sciacquare come indi- svuotamento, una pressione interna (cioe© la differenza

emroF
cato sopra. fra la pressione applicata e la pressione atmosferica) di
Resistenza alla centrifugazione . Introdurre nel conteni- 40 kPa. Il contenitore si svuota in meno di 2 min.
tore un volume di acqua R, acidificata per aggiunta di . Collegare il contenitore, attra-
1 ml di acido cloridrico diluito R, sufficiente a riempirlo Velocita© di riempimento

verso il tubo di prelievo munito di ago, con un serbatoio

alla sua capacita© nominale. Avvolgere il contenitore
eiretaM

emirP
con carta assorbente impregnata con blu bromofenolo che contiene una soluzione adatta con una viscosita©
soluzione R1 (diluita 1:5) oppure con altro indicatore uguale a quella del sangue, come una soluzione
adatto e poi essiccata. Centrifugare a 5000 giri per (335 g/l) di saccarosio R a 37 ‘C. Mantenere la pres-
10 min. Non si deve avere alcuna fuga rivelata dalla sione interna del serbatoio (cioe© la differenza fra la
ehcituecamraF
inoizaraperP

pressione applicata e la pressione atmosferica) a

ehcificepS

carta indicatrice në alcuna distorsione permanente. 9,3 kPa con la base del serbatoio e la parte superiore
Resistenza alla trazione . Introdurre nel contenitore un del contenitore allo stesso livello. Il volume di liquido
volume di acqua R, acidificata per aggiunta di 1 ml di che fluisce nel contenitore in 8 min non e© inferiore alla
acido cloridrico diluito R, sufficiente a riempirlo alla sua capacita© nominale.
ehcitapoemO
inoizaraperP

sua capacita© nominale. Sospendere il contenitore, per

mezzo dell'apposito dispositivo, dalla parte opposta Resistenza a variazioni di temperatura . Porre il conteni-
rispetto al tubo per il prelievo, e applicare lungo l'asse tore in un ambiente adatto che abbia una temperatura
di questo tubo una forza istantanea di 20 N (2,05 chilo- iniziale da 20 ‘C a 23 ‘C. Raffreddarlo rapidamente in
grammo forza). Mantenere la trazione per 5 s. Ripetere un congelatore a -80 ‘C e mantenerlo a questa tempera-
il saggio applicando la forza a ciascuno dei raccordi tura per 24 h. Innalzare la temperatura a 50 ‘C e man-
ecidnI

per il riempimento e lo svuotamento. Non si devono tenerla per 12 h. Lasciar raffreddare a temperatura
verificare rotture o deterioramenti. ambiente. Il contenitore soddisfa ai saggi di resistenza

365
Contenitori di plastica sterili per sangue umano e sue frazioni

alla centrifugazione, resistenza alla trazione, perdite, Ai tubi I, II e III aggiungere, rispettivamente, 1,5 ml di
permeabilita© al vapore, svuotamento sotto pressione e soluzione A1, 1,5 ml di soluzione B1 e 1,5 ml di solu-
velocita© di riempimento prima descritti. zione C1. Contemporaneamente e nello stesso modo
. Riempire il contenitore vuoto con un preparare altri tre tubi, sostituendo la soluzione S2 con
Trasparenza

volume, uguale alla sua capacita© nominale, di sospen- acqua R. Centrifugare contemporaneamente i tubi in
sione primaria opalescente (2.2.1) diluita in modo da esame e quelli di controllo, esattamente a 2500 giri nella
avere un'assorbanza (2.2.25) a 640 nm da 0,37 a 0,43 stessa centrifuga orizzontale per 5 min. Dopo la centri-
(fattore di diluizione circa 1:16). La torbidita© della fugazione, misurare le assorbanze dei liquidi (2.2.25) a
sospensione deve essere percepibile quando viene osser- 540 nm usando la soluzione tampone madre come
vata attraverso la sacca, in confronto con un conteni- bianco e calcolare il valore emolitico in percentuale dal-
tore simile riempito con acqua R. l'espressione:
. I saggi vengono effettuati con moda- Aexp 100
Materie estraibili

lita© studiate per simulare, per quanto possibile, le con- A 100

2

dizioni di contatto, fra il contenitore e il contenuto,

che si verificano nelle condizioni di impiego. A100 = assorbanza del tubo III,
Le condizioni di contatto e i saggi da effettuare sugli Aexp = assorbanza del tubo I o II o dei corrispondenti
eluati sono stabiliti, in base alla natura dei materiali tubi di controllo.
costituenti, nelle prescrizioni particolari per ciascun La soluzione nel tubo I da© un valore emolitico non
tipo di contenitore. superiore al 10 per cento e il valore emolitico della solu-
Effetti emolitici in sistemi tamponati zione nel tubo II non differisce di piu© del 10 per cento
Soluzione tampone madre. Sciogliere 90,0 g di sodio clo- da quello del tubo di controllo corrispondente.
ruro R, 34,6 g di sodio fosfato dibasico R e 2,43 g di sodio Sterilita© (2.6.1). I contenitori soddisfano al saggio di ste-
fosfato monobasico R in acqua R e diluire a 1000 ml rilita© . Introdurre asetticamente nel contenitore 100 ml
con lo stesso solvente. di una soluzione sterile (9 g/l) di sodio cloruro e agitare
Soluzione tampone A0. A 30,0 ml di soluzione tampone il contenitore per garantire che le superfici interne
madre aggiungere 10,0 ml di acqua R. siano state completamente bagnate. Filtrare il conte-
Soluzione tampone B0. A 30,0 ml di soluzione tampone nuto del contenitore attraverso un filtro a membrana e
madre aggiungere 20,0 ml di acqua R. porre la membrana nell'appropriato terreno di coltura,
come prescritto nel saggio di sterilita© .
Soluzione tampone C0. A 15,0 ml di soluzione tampone (2.6.8). La soluzione S1 soddisfa al saggio per i
madre aggiungere 85,0 ml di acqua R. Pirogeni

pirogeni. Iniettare 10 ml della soluzione per chilo-

Introdurre 1,4 ml di soluzione S2 in ciascuno di tre tubi grammo di massa del coniglio.
da centrifuga. Al tubo I aggiungere 0,1 ml di soluzione (2.6.9). La soluzione S1 soddisfa al
tampone A0, al tubo II aggiungere 0,1 ml di soluzione Tossicita© anormale

saggio per la tossicita© anormale. Iniettare 0,5 ml della

tampone B0, al tubo III aggiungere 0,1 ml di soluzione soluzione in ciascun topo.
tampone C0. A ciascun tubo aggiungere 0,02 ml di san-
gue umano eparinizzato fresco, mescolare bene e scal-
dare a b.m. a 30 1 ‘C per 40 min. Usare sangue prele-
6
CONFEZIONAMENTO
vato meno di tre ore prima oppure sangue conservato
in una soluzione anticoagulante citrato-fosfato-gluco- I contenitori sono avvolti in buste di protezione.
sio (CPD) prelevato da meno di 24 h.
Preparare tre soluzioni contenenti, rispettivamente: Al momento della rimozione dalla busta di protezione
il contenitore non deve presentare perdite në alcuno
3,0 ml di soluzione tampone A0 e 12,0 ml di acqua R sviluppo di microrganismi. L'imballaggio protettivo e©
(soluzione A1), sufficientemente robusto da resistere ad una normale
4,0 ml di soluzione tampone B0 e 11,0 ml di acqua R manipolazione.
(soluzione B1), La busta protettiva e© sigillata in modo tale che non
4,75 ml di soluzione tampone C0 e 10,25 ml di acqua R possa essere aperta e nuovamente chiusa senza che
(soluzione C1). rimangano tracce visibili che la sigillatura e© stata rotta.

366
 Contenitori vuoti sterili di polivinile cloruro plastificato per sangue umano e sue frazioni

inoizircserP
ETICHETTE all'8 per cento della capacita© nominale del contenitore.

ilareneG
Contemporaneamente preparare un bianco utilizzando
L'etichetta e© conforme alla relativa legislazione nazio- un uguale volume di soluzione di riferimento, preparata
nale e agli accordi internazionali. Riporta: di recente, in un'altra beuta di vetro borosilicato.
^ il nome e l'indirizzo del produttore, Aggiungere a ciascuna soluzione 20,0 ml di potassio

isilanA id
permanganato 0,002 M e 1 ml di acido solforico dilui-

idoteM
^ un numero di lotto che consenta di risalire alle fasi di to R. Lasciar riposare, al riparo dalla luce, per 15 min.
produzione del contenitore e del materiale plastico di A ciascuna soluzione aggiungere 0,1 g di potassio iodu-
cui e© composto. ro R, lasciar riposare al riparo dalla luce per 5 min e
Una parte dell'etichetta e© riservata per: titolare immediatamente con sodio tiosolfato 0,01 M

irotinetnoC
/ ilairetaM
^ l'indicazione del gruppo sanguigno, il numero di rife- utilizzando 0,25 ml di amido soluzione R come indica-
rimento e tutte le altre indicazioni richieste dalla legi- tore. La differenza fra le due titolazioni non e© superiore
slazione nazionale o da accordi internazionali e uno a 2,0 ml.
spazio vuoto per inserire etichette supplementari. . Ad un volume di soluzione S2 corri-
Acidita© o alcalinita©

L'etichetta della busta di protezione o l'etichetta sul con- spondente al 4 per cento della capacita© nominale del

ivittaeR
tenitore, visibile attraverso la busta, indica: contenitore, aggiungere 0,1 ml di fenolftaleina soluzio-
^ la data di scadenza, ne R. La soluzione rimane incolore. Aggiungere 0,4 ml
di sodio idrossido 0,01 M. La soluzione e© rosa. Aggiun-
^ che, una volta tolto dall'imballaggio, il contenitore gere 0,8 ml di acido cloridrico 0,01 M e 0,1 ml di rosso
deve essere utilizzato entro 10 giorni. metile soluzione R. La soluzione e© rosso arancio o rossa.

itnemogrA
ilareneG
L'inchiostro o altre sostanze utilizzate per stampare le (2.4.4). 15 ml di soluzione S2 soddisfano al sag-
etichette o per scrivere, non devono diffondere nel
Cloruri

gio limite per i cloruri (0,4 ppm). Preparare la soluzione

materiale plastico del contenitore e devono rimanere di riferimento utilizzando una miscela di 1,2 ml della
leggibili fino al momento dell'uso. soluzione standard di cloruro (Cl 5 ppm) R e 13,8 ml di

eifargonoM

ilareneG
acqua R.
3.2.4. CONTENITORI VUOTI STERILI IN MATE-
Ammonio (2.4.1). Diluire 5 ml di soluzione S2 a 14 ml
RIALE A BASE DI POLIVINILE CLORURO
con acqua R. La soluzione soddisfa al saggio limite per
PLASTIFICATO PER SANGUE UMANO E
l'ammonio (2 ppm).

ehcituecamraF
SUE FRAZIONI.

. Evaporare a secco 100 ml di

emroF
Residuo all'evaporazione

A meno che sia diversamente autorizzato, come defi- soluzione S2 in un recipiente di vetro borosilicato di
nito in Contenitori di plastica sterili per sangue umano e appropriata capacita© , preventivamente riscaldato a
sue frazioni (3.2.3), la natura e la composizione del 105 ‘C. Evaporare a secco, nelle stesse condizioni,
materiale di cui i contenitori sono costituiti soddisfano 100 ml della soluzione di riferimento (saggio in bianco)
ai requisiti per Materiali a base di polivinile cloruro pla- ed essiccare a massa costante a 100-105 ‘C. Il residuo
eiretaM

emirP
stificato per contenitori per sangue umano e sue frazioni della soluzione S2 non pesa piu© di 3 mg, tenuto conto
e contenitori in plastica per soluzioni acquose per infu- del saggio in bianco.
sione endovenosa (3.1.1). Assorbanza (2.2.25). Misurare l'assorbanza della solu-
ehcituecamraF

zione S2 da 230 nm a 360 nm, utilizzando come bianco

inoizaraperP

ehcificepS

SAGGI la soluzione di riferimento. Alle lunghezze d'onda com-

prese fra 230 nm e 250 nm l'assorbanza non e© superiore
Soddisfano ai saggi prescritti per Contenitori di plastica a 0,30; alle lunghezze d'onda da 251 nm a 360 nm l'as-
sterili per sangue umano e sue frazioni (3.2.3) e ai sorbanza non e© superiore a 0,10.
ehcitapoemO
inoizaraperP

seguenti saggi per rilevare sostanze estraibili. Di(2-etilesil) ftalato estraibile. Usare come solvente di
Soluzione di riferimento . Riscaldare acqua per prepara- estrazione alcool R diluito con acqua R cos|© da avere
zioni iniettabili R in un matraccio di vetro borosilicato una densita© relativa (2.2.5) da 0,9389 a 0,9395 misurata
in autoclave a 110 ‘C per 30 min. con un picnometro.
Sostanze ossidabili . Immediatamente dopo la prepara- Soluzione madre. Disciogliere 0,100 g di di(2-etilesil)
zione della soluzione S2 (vedi 3.2.3), trasferirne in una
ecidnI

ftalato R nel solvente di estrazione e diluire a 100,0 ml

beuta di vetro borosilicato una quantita© corrispondente con lo stesso solvente.

367
Contenitori sterili di polivinile cloruro per sangue umano contenenti una soluzione anticoagulante

Soluzioni di riferimento ETICHETTA

(a) Diluire 20,0 ml di soluzione madre a 100,0 ml con il Vedere Contenitori di plastica sterili per sangue umano e
solvente di estrazione. sue frazioni (3.2.3).
(b) Diluire 10,0 ml di soluzione madre a 100,0 ml con il
solvente di estrazione. 3.2.5. CONTENITORI STERILI IN MATERIALE A

(c) Diluire 5,0 ml di soluzione madre a 100,0 ml con il BASE DI POLIVINILE CLORURO PLASTI-

solvente di estrazione. FICATO

NENTI
PER

UNA
SANGUE

SOLUZIONE
UMANO CONTE-

ANTICOAGU-

(d) Diluire 2,0 ml di soluzione madre a 100,0 ml con il LANTE

solvente di estrazione. I contenitori sterili in plastica contenenti una soluzione

(e) Diluire 1,0 ml di soluzione madre a 100,0 ml con il anticoagulante conforme alla monografia Soluzioni
solvente di estrazione. anticoagulanti e conservanti per sangue umano (0209)
vengono usati per il prelievo, la conservazione e la som-
Misurare le assorbanze (2.2.25) delle soluzioni di riferi- ministrazione del sangue. Prima del riempimento essi
mento al massimo di assorbimento a 272 nm utiliz- devono essere conformi con la descrizione e i caratteri
zando come bianco il solvente di estrazione e tracciare riportati in Contenitori vuoti sterili in materiale a base
una curva dell'assorbanza rispetto alla concentrazione di polivinile cloruro plastificato per sangue umano e sue
di di(2-etilesil) ftalato. frazioni (3.2.4).
Procedimento di estrazione. Attraverso il tubo di Se non e© autorizzato diversamente, come riportato in
efflusso, l'ago o l'adattatore, riempire il contenitore Contenitori di plastica sterili per sangue umano e sue fra-
vuoto con un volume, uguale alla meta© del volume zioni (3.2.3), la natura e la composizione del materiale
nominale, di solvente di estrazione, in precedenza di cui sono costituiti i contenitori soddisfano a quanto
riscaldato a 37 ‘C in una beuta ben chiusa. Far uscire prescritto per Materiali a base di polivinile cloruro plasti-
completamente l'aria dal contenitore e chiudere il tubo ficato per contenitori per sangue umano e sue frazioni e
di efflusso. Immergere il contenitore pieno, in posizione contenitori per soluzioni acquose per infusione endove-
orizzontale, in un b.m. mantenuto a 37 1 ‘C per
6 nosa (3.1.1).
60 1 min senza agitare. Rimuovere il contenitore dal
6

b.m., capovolgerlo delicatamente 10 volte e trasferire il

contenuto in una beuta di vetro. Misurare immediata- SAGGI
mente l'assorbanza al massimo a 272 nm, utilizzando
come bianco il solvente di estrazione. Soddisfano ai saggi prescritti per Contenitori di plastica
sterili per sangue umano e sue frazioni (3.2.3) e ai saggi
Determinare la concentrazione di di(2-etilesil) ftalato che seguono, per misurare il volume di soluzione anti-
in milligrammi per 100 ml di soluzione dalla curva di coagulante e per rilevare le sostanze estraibili.
taratura. La concentrazione non deve superare i: Volume di soluzione anticoagulante . Vuotare il conteni-
^ 10 mg per 100 ml per contenitori di volume nominale tore raccogliendo la soluzione anticoagulante in un
superiore a 300 ml ma inferiore a 500 ml; cilindro graduato. Il volume non differisce di piu©
del 10 per cento da quello indicato.
6
^ 13 mg per 100 ml per contenitori di volume nominale (2.2.25). Misurare l'assor-
superiore a 150 ml ma inferiore a 300 ml; Esame spettrofotometrico

banza della soluzione anticoagulante, tolta dal conteni-

^ 14 mg per 100 ml per contenitori di volume nominale tore, fra 250 nm e 350 nm utilizzando come bianco una
massimo di 150 ml. soluzione anticoagulante della stessa composizione,
che non sia stata a contatto con un materiale plastico.
L'assorbanza al massimo a 280 nm non e© superiore
CONFEZIONAMENTO a 0,5.
. Rimuovere con cura la
Di(2-etilesil) ftalato estraibile

Vedere Contenitori di plastica sterili per sangue umano e soluzione anticoagulante per mezzo del tubo flessibile
sue frazioni (3.2.3). per il prelievo. Utilizzando un imbuto collegato al tubo,

368
 Apparati tubolari per la trasfusione di sangue e sue frazioni

inoizircserP
riempire completamente il contenitore con acqua R, SAGGI

ilareneG
lasciare a contatto per 1 min premendo leggermente il
contenitore, quindi vuotarlo completamente. Ripetere Effettuare i saggi su apparati tubolari sterilizzati.
il lavaggio. Soluzione S. Preparare un sistema a circuito chiuso con
Il contenitore, cos|© vuotato e sciacquato, soddisfa al tre apparati tubolari e un recipiente di vetro borosili-

isilanA id
idoteM
saggio per il di(2-etilesil) ftalato estraibile riportato in cato da 300 ml. Collegare al recipiente un termostato
Contenitori vuoti sterili in materiale a base di polivinile che mantenga la temperatura del liquido nel recipiente
cloruro plastificato per sangue umano e sue frazioni a 37 1 ‘C. Far circolare 250 ml di acqua per prepara-
6

(3.2.4). zioni iniettabili R attraverso il sistema, nel senso utiliz-

zato per la trasfusione, per 2 h alla velocita© di un litro

irotinetnoC
/ ilairetaM
all'ora (per esempio utilizzando una pompa peristaltica
collegata per mezzo di una tubatura di silicone elasto-
CONFEZIONAMENTO ED ETICHETTE mero appropriata quanto piu© possibile corta). Racco-
gliere la totalita© della soluzione e lasciar raffreddare.
Vedere Contenitori di plastica sterili per sangue umano e . La soluzione S e© limpida

ivittaeR
sue frazioni (3.2.3). Aspetto della soluzione S

(2.2.1) ed incolore (Metodo II, 2.2.2).

Acidita© o alcalinita© . A 25 ml di soluzione S aggiungere
3.2.6. APPARATI TUBOLARI PER LA TRASFU- 0,15 ml di BRP indicatore soluzione R. Non sono neces-
sari piu© di 0,5 ml di sodio idrossido 0,01 M per far virare

itnemogrA
ilareneG
SIONE DI SANGUE E SUE FRAZIONI

il colore dell'indicatore al blu. A 25 ml di soluzione S

Gli apparati tubolari per la trasfusione del sangue e aggiungere 0,2 ml di metilarancio soluzione R. Non
delle sue frazioni (deflussori) sono costituiti principal- sono necessari piu© di 0,5 ml di acido cloridrico 0,01 M
mente da un tubo di plastica cui sono fissate le parti per arrivare all'inizio del viraggio dell'indicatore.

eifargonoM
necessarie per permettere all'insieme di essere utilizzato (2.2.25). Esaminata fra 230 nm e 250 nm, la

ilareneG
per la trasfusione in modo appropriato. Il sistema com- Assorbanza

soluzione S non mostra alcuna assorbanza superiore

prende un dispositivo per perforare le chiusure, un fil- a 0,30. Fra 251 nm e 360 nm, la soluzione S non mostra
tro da sangue, una camera di gocciolamento, un regola- alcuna assorbanza superiore a 0,15.
tore di flusso, un giunto Luer e, generalmente, un sito

ehcituecamraF
che consente di fare una iniezione al momento dell'uso. Ossido di etilene . Se l'etichetta indica che per la steriliz-

emroF
Quando gli apparati tubolari devono essere utilizzati zazione e© stato utilizzato ossido di etilene, il suo conte-
con contenitori che richiedono un filtro per l'aria, que- nuto, determinato con il metodo riportato di seguito,
sto puo© essere incorporato nel dispositivo per perforare non supera 10 ppm. Esaminare per gas cromatografia
le chiusure oppure si puo© utilizzare una presa d'aria (2.2.28).
separata. La camera che racchiude il filtro da sangue, Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
eiretaM

emirP
la camera di gocciolamento e il tubo principale sono utilizzando:
trasparenti. I materiali scelti e il disegno del sistema
sono tali da garantire l'assenza di effetti emolitici. ^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 1,5 m e con
Gli apparati tubolari soddisfano alle norme correnti diametro interno di 6,4 mm impaccata con terra d'in-
ehcituecamraF

fusori silanizzata per gas cromatografia R impregnata

inoizaraperP

per quanto riguarda dimensioni e funzionamento.

ehcificepS

con macrogol 1500 R (3 g per 10 g),

Tutte le parti che possono venire a contatto con il san- ^ elio per cromatografia R come gas di trasporto ad una
gue e sue frazioni sono sterili e apirogene. Ogni appa- velocita© di flusso di 20 ml per minuto,
rato e© confezionato in un imballaggio individuale che
ehcitapoemO
inoizaraperP

mantiene la sterilita© del contenuto. Gli apparati tubo- ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma.
lari non devono essere sterilizzati di nuovo o riutiliz- Mantenere la temperatura della colonna a 40 ‘C, quella
zati. dell'iniettore a 100 ‘C e quella del rivelatore a 150 ‘C.
Gli apparati per la trasfusione del sangue e delle sue Verificare l'assenza di picchi che interferiscono con
frazioni vengono fabbricati in conformita© con le norme quello dell'ossido di etilene effettuando il saggio con
ecidnI

di buona fabbricazione per i dispositivi medici e con un apparato tubolare non sterilizzato oppure utiliz-
ogni normativa nazionale pertinente. zando un sistema cromatografico diverso, come:

369
Apparati tubolari per la trasfusione di sangue e sue frazioni

^ una colonna di acciaio inossidabile lunga 3 m e con aggiungere 1 ml di acido solforico diluito R e 20,0 ml di
diametro interno di 3,2 mm impaccata con terra d'in- potassio permanganato 0,002 M. Bollire per 3 min e raf-
fusori silanizzata per gas cromatografia R impregnata freddare immediatamente. Aggiungere 1 g di potassio
con triscianoetossipropano R (2 g per 10 g), ioduro R e titolare con sodio tiosolfato 0,01 M utiliz-
^ elio per cromatografia R come gas di trasporto ad una zando 0,25 ml di amido soluzione R come indicatore.
velocita© di flusso di 20 ml per minuto, Effettuare una prova in bianco utilizzando 20 ml di
acqua per preparazioni iniettabili R. La differenza fra i
^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma. volumi delle due titolazioni non e© superiore a 2,0 ml.
Mantenere la temperatura della colonna a 60 ‘C, quella Particelle estranee . Riempire l'apparato tubolare attra-
dell'iniettore a 100 ‘C e quella del rivelatore a 150 ‘C. verso il normale orifizio d'entrata con una soluzione
Soluzione di ossido di etilene. Preparare sotto cappa ven- (0,1 g/l) di sodio laurilsolfato R precedentemente filtrata
tilata. Porre 50,0 ml di dimetilacetammide R in un fla- attraverso un filtro di vetro poroso (16) e riscaldata a
concino da 50 ml, chiudere, fissare il tappo e pesare 37 ‘C. Raccogliere il liquido attraverso l'uscita nor-
con la precisione di 0,1 mg. Riempire una siringa da male. Esaminato in condizioni idonee di visibilita© , il
50 ml di polietilene o di polipropilene con ossido di eti- liquido e© limpido e praticamente privo di particelle e di
lene R gassoso, lasciare che il gas rimanga a contatto filamenti visibili (si presuppone che siano visibili ad
con la siringa per circa 3 min, vuotare la siringa e riem- occhio nudo particelle e filamenti con diametro uguale
pirla di nuovo con 50 ml di ossido di etilene R gassoso. o superiore a 50 mm).
Applicare alla siringa un ago ipodermico e ridurre il Velocita© di . Passare attraverso un dispositivo
flusso

volume del gas nella siringa da 50 ml a 25 ml. Iniettare completo, con il regolatore di flusso completamente
questi 25 ml di ossido di etilene lentamente nel flacon- aperto, 50 ml di una soluzione avente una viscosita©
cino, agitando leggermente ed evitando il contatto fra di 3 mPa s (3 cP) (per esempio una soluzione (33 g/l)
1

l'ago e il liquido. Pesare di nuovo il flaconcino: l'au- di macrogol 4000 R a 20 ‘C) con un dislivello costante
mento di massa e© compreso fra 45 mg e 60 mg ed e© uti- di 1 m tra il tappo del recipiente e il tubo porta-ago
lizzato per calcolare la concentrazione esatta della solu- dell'apparato tubolare. Il tempo necessario per il pas-
zione (circa 1 g per litro). saggio di 50 ml della soluzione non e© superiore a
Saggio. Pesare l'apparato tubolare dopo averlo tolto 90 secondi.
dall'imballaggio, tagliarlo in pezzi della dimensione Resistenza alla pressione . Chiudere ermeticamente le
massima di 1 cm e introdurli in un recipiente da 250- estremita© dell'apparato tubolare e qualunque disposi-
500 ml contenente 150 ml di dimetilacetammide R. tivo di presa d'aria. Collegare il sistema con una sor-
Chiudere il recipiente con un tappo appropriato e assi- gente di aria compressa munita di un regolatore di pres-
curare la chiusura. Porre il recipiente in stufa a sione e immergerlo in una vaschetta d'acqua a 20-
70 1 ‘C per 16 h. Prelevare 1 ml del gas caldo dal
6 23 ‘C. Applicare progressivamente una sovrapressione
recipiente e iniettarlo nella colonna. Dalla curva di di aria di 100 kPa e mantenerla per 1 min. Non deve
taratura e dall'altezza del picco ottenuto, calcolare la fuoriuscire alcuna bolla d'aria dal deflussore.
massa di ossido di etilene contenuta nel recipiente. Trasparenza . Utilizzare come sospensione di riferi-
Curva di taratura. In una serie di sette recipienti dello mento la sospensione opalescente primaria (2.2.1)
stesso tipo di quello utilizzato nel saggio e contenenti diluita 1 a 8 per sistemi che hanno tubulature con dia-
ciascuno 150 ml di dimetilacetammide R, porre rispetti- metro esterno inferiore a 5 mm e diluita 1 a 16 per quelli
vamente 0 ml, 0,05 ml, 0,10 ml, 0,20 ml, 0,50 ml, che hanno tubulature con diametro esterno di 5 mm o
1,00 ml e 2,00 ml della soluzione di ossido di etilene, piu© . Far circolare la sospensione di riferimento attra-
cioe© circa 0 g, 50 g, 100 g, 200 g, 500 g, 1000 g
l l l l l l verso il sistema e confrontare con un apparato tubolare
e 2000 g di ossido di etilene. Chiudere i recipienti, fis-
l dello stesso lotto riempito con acqua R. L'opalescenza
sare i tappi e porre i recipienti in stufa a 70 1 ‘C per
6 e la presenza di bollicine sono rilevabili.
16 h. Iniettare 1 ml del gas caldo da ciascun recipiente . Evaporare 50,0 ml di solu-
nella colonna e tracciare una curva di taratura dalle Residuo all'evaporazione

zione S a secco su un b.m. ed essiccare a massa costante

altezze dei picchi e dalla massa di ossido di etilene pre- in stufa a 100-105 ‘C. Effettuare una prova in bianco
sente in ogni recipiente. utilizzando 50,0 ml di acqua per preparazioni iniettabili R.
Sostanze riducenti . Effettuare il saggio entro 4 h dalla La differenza fra le masse dei residui non e© superiore
preparazione della soluzione S. A 20,0 ml di soluzione S a 1,5 mg.

370
 Siringhe di plastica monouso sterili

inoizircserP
(2.6.1). Gli apparati tubolari soddisfano al sag- Le plastiche e i materiali elastomeri di cui sono fatti

ilareneG
Sterilita©

gio di sterilita© . Se e© stabilito che i dispositivi siano sterili corpo e stantuffo, soddisfano alla appropriata specifica
solo internamente, passare 50 ml di una soluzione di o ai requisiti fissati dall'autorita© competente.
sodio cloruro-peptone tamponata a pH 7,0 (2.6.12) I materiali piu© comunemente utilizzati sono il polipro-
attraverso l'apparato e utilizzarla per effettuare il sag- pilene e il polietilene. Le siringhe rispondono alle

isilanA id
gio con il metodo della filtrazione su membrana. norme usuali circa le dimensioni e l'utilizzazione.

idoteM
Se e© stabilito che i dispositivi siano sterili sia interna- Per facilitare il funzionamento della siringa si puo©
mente che esternamente, aprire l'imballaggio con le applicare sulle pareti interne del corpo olio di silicone
necessarie precauzioni asettiche e: (3.1.8) ma non deve rimanerne un eccesso in grado di
contaminare il contenuto al momento dell'uso.

irotinetnoC
/ ilairetaM
^ per il metodo dell'inoculazione diretta, porre il dispo-
sitivo o i suoi componenti in un recipiente adatto con- Inchiostri, gomme e adesivi utilizzati per marcare la
tenente una quantita© di terreno di coltura sufficiente siringa o l'imballaggio e, se necessario, l'insieme della
ad assicurare l'immersione completa; siringa e del suo imballaggio, non devono migrare
^ per il metodo della filtrazione su membrana porre il attraverso le pareti.

ivittaeR
dispositivo o i suoi componenti in un recipiente
adatto contenente una quantita© di una soluzione di SAGGI
sodio cloruro-peptone tamponata a pH 7,0 (2.6.12)
sufficiente a permettere un risciacquo totale per Soluzione S . Preparare la soluzione in modo da evitare
10 min. contaminazione da particelle estranee. Utilizzando un

itnemogrA
ilareneG
(2.6.8). Collegare insieme cinque apparati numero di siringhe sufficiente per ottenere 50 ml di
soluzione, riempire le siringhe al loro volume nominale
Pirogeni

tubolari e passare attraverso l'insieme, ad una velocita©

di flusso non superiore a 10 ml per minuto, 250 ml di con acqua per preparazioni iniettabili R e mantenere a
una soluzione (9 g/l) sterile, apirogena di sodio cloru- 37 ‘C per 24 h. Svuotare le siringhe e riunire i contenuti
in un adatto recipiente di vetro borosilicato.

eifargonoM
ro R. Raccogliere asetticamente la soluzione in un con-

ilareneG
tenitore esente da pirogeni. La soluzione soddisfa al Aspetto della soluzione . La soluzione S e© limpida (2.2.1)
saggio per i pirogeni. Iniettare 10 ml per chilogrammo ed incolore (Metodo II, 2.2.2) ed e© praticamente esente
di massa corporea del coniglio. da particelle solide.

ehcituecamraF
Acidita© o alcalinita©. A 20 ml di soluzione S aggiungere
0,1 ml di blu bromotimolo soluzione R1. Per il viraggio

emroF
ETICHETTE dell'indicatore non sono necessari piu© di 0,3 ml di sodio
L'etichetta indica, se del caso, che il dispositivo e© stato idrossido 0,01 M oppure di acido cloridrico 0,01 M.
sterilizzato utilizzando ossido di etilene. Assorbanza (2.2.25). Misurare l'assorbanza della solu-
zione S da 220 nm a 360 nm. L'assorbanza non e© supe-

eiretaM

emirP
3.2.8. SIRINGHE DI PLASTICA MONOUSO STE-
riore a 0,40.
RILI Ossido di etilene . Se l'etichetta indica che per la steriliz-
zazione e© stato utilizzato ossido di etilene, il suo conte-
Le siringhe di plastica monouso sterili sono dispositivi nuto, determinato con il metodo descritto piu© avanti,
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

medici destinati all'uso immediato per la somministra- non e© superiore a 10 ppm. Esaminare mediante gas cro-
zione di preparazioni iniettabili. Sono fornite sterili e matografia (2.2.28).
apirogene e non devono essere sterilizzate nuovamente Il procedimento cromatografico puo© essere eseguito
o riutilizzate. Sono costituite da un corpo cilindrico e utilizzando:
da uno stantuffo che puo© portare un anello di chiusura
ehcitapoemO
inoizaraperP

di elastomero; possono essere munite di un ago che ^ una colonna d'acciaio inossidabile lunga 1,5 m e con
puo© essere fisso. Ogni siringa e© fornita con una prote- diametro interno di 6,4 mm impaccata con terra d'in-
zione individuale per mantenere la sterilita© . fusori silanizzata per gas cromatografia R impregnata
con macrogol 1500 R (3 g per 10 g),
Il corpo cilindrico della siringa e© sufficientemente tra-
sparente per permettere di leggere senza difficolta© il ^ elio per cromatografia R come gas di trasporto ad una
velocita© di flusso di 20 ml per minuto,
ecidnI

volume del liquido da somministrare e di individuare

bolle d'aria e particelle estranee. ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma.

371
Siringhe di plastica monouso sterili

Mantenere la temperatura della colonna a 40 ‘C, quella piente con un tappo appropriato e assicurare la chiu-
dell'iniettore a 100 ‘C e quella del rivelatore a 150 ‘C. sura. Porre il recipiente in stufa a 70 1 ‘C per 16 h.
6

Verificare l'assenza di picchi che interferiscono con Prelevare 1 ml del gas caldo dal recipiente e iniettarlo
quello dell'etilene ossido effettuando il saggio con una nella colonna. Dalla curva di taratura e dall'altezza del
siringa non sterilizzata oppure utilizzando un sistema picco ottenuto, calcolare la massa di ossido di etilene
cromatografico diverso, come: contenuta nel recipiente.
^ una colonna d'acciaio inossidabile lunga 3 m e con Olio di silicone. Calcolare la superficie interna di una
diametro interno di 3,2 mm impaccata con terra siringa in centimetri quadrati utilizzando l'espressione:
d'infusori silanizzata per gas cromatografia R 
2 V p h
p

impregnata con triscianoetossipropano R (2 g per 1 1

10 g),
^ elio per cromatografia R come gas di trasporto ad V = volume nominale di una siringa in cm3,
una velocita© di flusso di 20 ml per minuto, h = altezza della graduazione in cm.
^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma. Prendere un numero di siringhe2sufficiente a dare una
Mantenere la temperatura della colonna a 60 ‘C, quella superficie interna di 100-200 cm . Aspirare in ciascuna
dell'iniettore a 100 ‘C e quella del rivelatore a 150 ‘C. siringa un volume di diclorometano R uguale alla meta©
del volume nominale e riempire fino al volume nomi-
Soluzione di ossido di etilene. Preparare sotto una cappa nale con aria. Sciacquare la superficie interna corri-
ventilata. Porre 50,0 ml di dimetilacetammide R in un spondente al volume nominale con il solvente capovol-
flaconcino da 50 ml, chiudere, fissare il tappo e pesare gendo la siringa dieci volte in successione tenendo l'ori-
con la precisione di 0,1 mg. Riempire una siringa da fizio al quale fissare l'ago otturato con un dito
50 ml di polietilene o di polipropilene con ossido di eti- ricoperto con una pellicola di plastica inerte al dicloro-
lene R gassoso, lasciare che il gas rimanga a contatto metano. Raccogliere i liquidi in una capsula tarata e
con la siringa per circa 3 minuti, vuotare la siringa e ripetere l'operazione. Evaporare a secco a b.m. i liquidi
riempirla di nuovo con 50 ml di ossido di etilene R gas- riuniti. Essiccare a 100-1052 ‘C per 1 h. Il residuo pesa
soso. Applicare alla siringa un ago ipodermico e ridurre non piu© di 0,25 mg per cm di superficie interna.
il volume del gas nella siringa da 50 ml a 25 ml.
Iniettare questi 25 ml di ossido di etilene lentamente Esaminare il residuo per spettrofotometria di assorbi-
nel flaconcino, agitando leggermente ed evitando il mento infrarosso (2.2.24). Lo spettro -1mostra bande
contatto fra l'ago e il liquido. Pesare di nuovo il flacon- tipiche dell'olio di-1 silicone a-1 805 cm , 1020 cm-1,
cino: l'aumento di massa e© compreso fra 45 mg e 1095 cm , 1260 cm e 2960 cm .
-1
60 mg ed e© utilizzato per calcolare la concentrazione . A 20,0 ml di soluzione S aggiungere
esatta della soluzione (circa 1 g per litro). Sostanze riducenti

2 ml di acido solforico R e 20,0 ml di potassio permanga-

Curva di taratura. In una serie di sette recipienti dello nato 0,002 M. Bollire per 3 minuti e raffreddare imme-
stesso tipo di quello utilizzato nel saggio e contenenti diatamente. Aggiungere 1 g di potassio ioduro R e tito-
ciascuno 150 ml di dimetilacetammide R, porre rispetti- lare immediatamente con sodio tiosolfato 0,01 M utiliz-
vamente 0 ml, 0,05 ml, 0,10 ml, 0,20 ml, 0,50 ml, zando 0,25 ml di amido soluzione R come indicatore.
1,00 ml e 2,00 ml della soluzione di ossido di etilene, Effettuare una titolazione in bianco utilizzando
cioe© circa 0 g, 50 g, 100 g, 200 g, 500 g, 1000 g
l l l l l l 20,0 ml di acqua per preparazioni iniettabili R. La diffe-
e 2000 g di ossido di etilene. Chiudere i recipienti, fis-
l renza fra i volumi usati nelle due titolazioni non e© supe-
sare i tappi e porre i recipienti in stufa a 70 1 ‘C per
6 riore a 3,0 ml.
16 h. Iniettare 1 ml del gas caldo da ciascun recipiente . Riempire una siringa con acqua R
nella colonna e tracciare una curva di taratura dalle Trasparenza

(bianco) e riempirne un'altra con una diluizione 1:10 di

altezze dei picchi e dalla massa di etilene ossido pre- sospensione primaria opalescente (2.2.1). Utilizzare
sente in ogni recipiente. una sospensione primaria opalescente che e© stata
Saggio. Pesare la siringa, dopo averla tolta dall'imbal- lasciata riposare a 20 2 ‘C per 24 h prima dell'uso.
6

laggio, tagliarla in pezzi della dimensione massima di Confrontare a occhio nudo in luce diffusa contro un
1 cm e introdurli in un recipiente da 250-500 ml conte- fondo nero. L'opalescenza della sospensione e© visibile
nente 150 ml di dimetilacetammide R. Chiudere il reci- per confronto con il bianco.

372
 Chiusure in materiale elastomero per contenitori per preparazioni acquose

inoizircserP
(2.6.1). Le siringhe dichiarate sterili soddisfano (elastomeri), con appropriati additivi. La specifica si

ilareneG
Sterilita©

al saggio di sterilita© effettuato come segue. Aprire l'im- applica anche a chiusure per contenitori per polveri
ballaggio in modo asettico, estrarre la siringa, separare o per prodotti liofilizzati da sciogliere in acqua imme-
i componenti e porli ciascuno in un adatto recipiente diatamente prima dell'uso. La specifica non si applica
contenente terreno di coltura sufficiente a coprire com- a chiusure di silicone elastomero (che sono trattate

isilanA id
pletamente il pezzo. Utilizzare entrambi i terreni di col- in 3.1.9. Silicone elastomero per chiusure e tubolature),

idoteM
tura raccomandati (2.6.1). a chiusure laminate o verniciate. Gli elastomeri si
Le siringhe dichiarate sterili solo internamente soddi- ottengono da sostanze naturali o sintetiche per poli-
sfano al saggio di sterilita© effettuato come segue. merizzazione, poliaddizione o policondensazione. La
Utilizzare 50 ml di terreno di coltura per ciascuna natura dei principali componenti e dei vari additivi

irotinetnoC
/ ilairetaM
siringa in esame. Togliere asetticamente la protezione (per esempio vulcanizzatori, acceleratori, stabiliz-
dell'ago ed immergere quest'ultimo nel terreno di col- zanti, pigmenti) dipende dalle proprieta© richieste per
tura. Lavare la siringa cinque volte sollevando lo stan- il prodotto finito.
tuffo al suo limite superiore. Le chiusure in gomma possono essere classificate
(2.6.8). Le siringhe con un volume nominale secondo due tipi: chiusure di tipo I sono quelle che sod-

ivittaeR
Pirogeni

uguale o superiore a 15 ml soddisfano al saggio per i disfano alle specifiche piu© rigorose e sono quelle da pre-
pirogeni. Riempire un minimo di tre siringhe al loro ferire; chiusure di tipo II sono quelle che, avendo pro-
volume nominale con una soluzione apirogena (9 g/l) prieta© meccaniche per usi speciali (per esempio, perfo-
di sodio cloruro R e mantenere ad una temperatura di razioni multiple) non possono, per la loro
37 ‘C per 2 h. Riunire asetticamente le soluzioni in un composizione chimica, soddisfare a specifiche rigorose

itnemogrA
ilareneG
contenitore apirogeno ed effettuare il saggio immedia- come quelle del primo tipo.
tamente utilizzando per ciascun coniglio 10 ml della Le chiusure scelte per essere usate con una particolare
soluzione per chilogrammo di massa corporea. preparazione sono tali che:
^ i componenti della preparazione a contatto con la

eifargonoM

ilareneG
ETICHETTE chiusura non sono assorbiti sulla superficie della
chiusura e non migrano in o attraverso la stessa in
L'etichetta sull'imballaggio indica: quantita© sufficiente da avere un effetto negativo
^ il numero di lotto, sulla preparazione,

ehcituecamraF
^ una descrizione della siringa, ^ la chiusura non cede alla preparazione sostanze in
quantita© sufficiente da influire sulla sua stabilita© o

emroF
^ che la siringa non e© riutilizzabile. da presentare un rischio di tossicita© .
L'etichetta sull'imballaggio esterno indica: Le chiusure sono compatibili con la preparazione per
^ il metodo di sterilizzazione, la quale sono utilizzate per tutto il suo periodo di
validita© .
eiretaM

emirP
^ che la siringa e© sterile, oppure che e© sterile solo inter-
namente, Il fabbricante della preparazione deve ottenere dal for-
^ il nome del produttore, nitore assicurazione che la composizione della chiusura
non cambia e che e© identica a quella della chiusura uti-
ehcituecamraF

^ che la siringa non deve essere usata se l'imballaggio e© lizzata durante le prove di compatibilita© . Quando il for-
inoizaraperP

ehcificepS

danneggiato oppure la protezione di sterilita© si e© nitore informa il fabbricante della preparazione di cam-
persa. biamenti nella composizione, le prove di compatibilita©
devono essere ripetute, totalmente o parzialmente,
secondo la natura dei cambiamenti.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Le chiusure vengono lavate e possono essere sterilizzate

3.2.9. CHIUSURE IN MATERIALE ELASTOMERO

prima dell'uso.
PER CONTENITORI PER PREPARAZIONI

ACQUOSE AD USO PARENTERALE, PER

POLVERI E PER POLVERI LIOFILIZZATE.

Le chiusure in materiale elastomero (gomma) per con- CARATTERI

tenitori per preparazioni acquose ad uso parenterale Le chiusure in materiale elastomero sono elastiche, tra-
ecidnI

sono fatte di materiali ottenuti per vulcanizzazione slucide od opache e non hanno colorazione caratteri-
(reticolazione) di sostanze organiche macromolecolari stica, dipendendo quest'ultima dagli additivi usati.

373
Chiusure in materiale elastomero per contenitori per preparazioni acquose

Sono praticamente insolubili in tetraidrofurano nel circa 100 cm2, in un idoneo recipiente di vetro,
quale, tuttavia, si puo© avere un notevole e reversibile coprire con acqua per preparazioni iniettabili R , bol-
rigonfiamento. Sono omogenee e praticamente prive di lire per 5 min e sciacquare cinque volte con acqua
rilievi casuali e di inclusioni accidentali (per esempio per preparazioni iniettabili R fredda. Porre le chiusure
fibre, particelle estranee, cascami di gomma). lavate in una beuta a collo largo (vetro tipo I, 3.2.1),
L'identificazione del tipo di materiale elastomero utiliz- aggiungere 200 ml di acqua per preparazioni iniettabi-
zato per le chiusure non rientra nello scopo di questa li R e pesare. Coprire l'apertura della beuta con un
specifica. Il saggio di identificazione riportato piu© recipiente di vetro borosilicato. Scaldare in un auto-
avanti distingue chiusure di elastomero e di non-elasto- clave in modo da raggiungere in 20-30 min la tempe-
mero ma non differenzia i vari tipi di gomma. Altri ratura di 121 2 ‘C e mantenere questa temperatura
6

saggi di identita© possono essere effettuati per rilevare, per 30 min. Raffreddare a temperatura ambiente in
in un lotto, differenze rispetto alle chiusure utilizzate 30 min circa. Riportare alla massa iniziale con acqua
per prove di compatibilita© . Per questo scopo si possono per preparazioni iniettabili R. Agitare e separare
utilizzare uno o piu© dei seguenti metodi analitici: deter- immediatamente la soluzione dalle chiusure per
minazione della densita© relativa, determinazione delle decantazione. Agitare la soluzione S prima di ogni
ceneri solforiche, determinazione del contenuto di zolfo, saggio.
cromatografia su strato sottile effettuata su un estratto, Bianco. Preparare un bianco nello stesso modo utiliz-
spettrofotometria di assorbimento nell'ultravioletto di zando 200 ml di acqua per preparazioni iniettabili R.
un estratto, spettrofotometria di assorbimento nell'in-
frarosso del prodotto di pirolisi. . La soluzione S non e© piu© opale-
Aspetto della soluzione

scente della sospensione di riferimento II per chiusure

IDENTIFICAZIONE di tipo I e non e© piu© opalescente della sospensione di
riferimento III per chiusure di tipo II (2.2.1). La solu-
A. L'elasticita© e© tale che una striscia di materiale con zione
di
S non e© piu© intensamente colorata della soluzione
riferimento GB5 (Metodo II, 2.2.2).
sezione da 1 mm2 a 5 mm2 puo© essere tirata a
mano ad una lunghezza almeno due volte quella . A 20 ml di soluzione S aggiungere
iniziale. Tenendola allungata a due volte la sua lun- 0,1 ml di blu bromotimolo
Acidita© o alcalinita©

soluzione R1. Per il viraggio

ghezza per 1 min, la striscia ritorna entro 30 s a dell'indicatore rispettivamente al blu o al giallo non
meno di 1,2 volte la sua lunghezza iniziale. sono necessari piu© di 0,3 ml di sodio idrossido 0,01 M o
B. Scaldare 1-2 g in un tubo da saggio resistente al 0,8 ml di acido cloridrico 0,01 M.
calore su fiamma aperta per seccare il campione e
continuare il riscaldamento finchë vapori di piroli- . Effettuare il saggio entro 5 h dalla prepa-
Assorbanza

sato condensano presso la sommita© della provetta. razione della soluzione S. Filtrare la soluzione S su
Depositare poche gocce di pirolisato su un disco una membrana filtrante avente pori di circa 0,45 mm
di potassio bromuro ed esaminare per spettrofoto- scartando i primi pochi millilitri di filtrato. Misurare
metria di assorbimento nell'infrarosso (2.2.24), in l'assorbanza (2.2.25) del filtrato a lunghezza d'onda
confronto con lo spettro ottenuto con il campione da 220 nm a 360 nm, utilizzando il bianco (vedi solu-
tipo. zione S) come liquido di compensazione. A queste
C. Le ceneri totali (2.4.16) sono entro 10 per cento lunghezze
6
d'onda, l'assorbanza non deve essere supe-
riore a 0,2 per chiusure di tipo I o a 4,0 per chiusure
del risultato ottenuto con il campione tipo. di tipo II. Se necessario, diluire il filtrato prima di
misurare l'assorbanza e correggere il risultato per la
SAGGI diluizione.

I campioni da analizzare possono esser lavati e sterilizzati Sostanze riducenti . Effettuare il saggio entro 4 h dalla
prima dell'uso. preparazione della soluzione S. A 20,0 ml di soluzione S
aggiungere 1 ml di acido solforico diluito R e 20,0 ml di
Soluzione S . Introdurre un numero di chiusure non potassio permanganato 0,002 M. Bollire per 3 min e raf-
tagliate, corrispondenti ad una superficie totale di freddare. Aggiungere 1 g di potassio ioduro R e titolare

374
 Chiusure in materiale elastomero per contenitori per preparazioni acquose

inoizircserP
immediatamente con sodio tiosolfato 0,01 M utiliz- collocare le chiusure da esaminare e assicurare con

ilareneG
zando 0,25 ml di amido soluzione R come indicatore. una capsula. Utilizzando per ciascuna un ago ipoder-(1)
Effettuare una titolazione utilizzando 20,0 ml del mico nuovo, lubrificato, con lunga smussatura
bianco. La differenza fra i volumi usati nelle due titola- (angolo di smussatura 12 2‘), con un diametro
6

zioni non e© superiore a 3,0 ml per chiusure di tipo I e a esterno di 0,8 mm perforare le chiusure tenendo l'ago

isilanA id
7,0 ml per chiusure di tipo II. perpendicolare alla superficie. La forza necessaria per

idoteM
(2.4.1): massimo 2 ppm. la perforazione, determinata con la precisione
Ammonio
di 0,25 N (25 grammi forza) non e© superiore a
6

Diluire 5 ml di soluzione S a 14 ml di acqua R. La solu- 10 N (1 kg forza) per ciascuna chiusura.

zione soddisfa al saggio limite A. . Per chiusure da perforare con un

irotinetnoC
/ ilairetaM
Cessione di frammenti

Zinco estraibile : non piu© di 5 g di Zn estraibile per

l ago ipodermico, effettuare il saggio seguente. Se le
millilitro di soluzione S, determinato per spettrometria chiusure devono essere utilizzate per preparazioni
di assorbimento atomico (Metodo I, 2.2.23). acquose, porre in 12 contenitori puliti un volume di
Soluzione in esame. Diluire 10,0 ml di soluzione S a acqua R corrispondente al volume nominale meno
100 ml con acido cloridrico 0,1 M. 4 ml, chiudere i contenitori con le chiusure in esame,

ivittaeR
fissare con una capsula e lasciar riposare per 16 h. Se
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di le chiusure devono essere utilizzate per preparazioni
riferimento utilizzando soluzione standard di zinco secche, chiudere 12 contenitori puliti con le chiusure in
(Zn 10 ppm) R diluite con acido cloridrico 0,1 M. esame. Utilizzando un ago ipodermico lubrificato con
lunga smussatura(1) (angolo di smussatura 12 2‘),

itnemogrA
Sorgente: lampada a catodo cavo allo zinco.

ilareneG
6

con diametro esterno di 0,8 mm adattato a una siringa

Lunghezza d'onda: 213,9 nm. pulita, introdurre nel contenitore 1 ml di acqua R ed
Fiamma: aria-acetilene. estrarre 1 ml di aria, effettuare questa operazione quat-
(2.4.8): massimo 2 ppm.
tro volte per ciascuna chiusura, perforando ogni volta
in un punto diverso. Utilizzare un ago nuovo per cia-

eifargonoM
Metalli pesanti estraibili

ilareneG
La soluzione S soddisfa al saggio limite A. Preparare scuna chiusura e verificare che l'ago non si sia spuntato
la soluzione di riferimento utilizzando la soluzione stan- durante il saggio. Passare il liquido dei contenitori
dard di piombo (Pb 2 ppm) R. attraverso un filtro con pori di circa 0,5 mm. Contare i
. Evaporare 50,0 ml di solu- frammenti di gomma visibili ad occhio nudo. Il numero

ehcituecamraF
Residuo all'evaporazione

zione S a secco a b.m. ed essiccare a 100-105 ‘C. totale di frammenti non e© superiore a cinque. Questo

emroF
Il residuo pesa non piu© di 2,0 mg per gomma di tipo I limite si basa sull'assunto che frammenti con diametro
e non piu© di 4,0 mg per quella di tipo II. uguale o superiore a 50 mm sono visibili a occhio nudo;
. Porre chiusure, tagliate se necessario, in caso di dubbio o controversia, i frammenti vengono
Solfuri volatili

con una superficie totale di 20 2 cm2 in una beuta esaminati al microscopio per verificare la loro natura e
6
dimensione.

eiretaM
da 100 ml e aggiungere 50 ml di una soluzione (20 g/l)

emirP
di acido citrico R. Porre un frammento di piombo ace- Saggi per l'auto-sigillatura . Per chiusure da utilizzare
tato cartina R sull'apertura della beuta e mantenerla in con contenitori multidose, effettuare il seguente saggio.
posizione ponendole sopra un pesafiltri rovesciato. Riempire dieci idonei contenitori al volume nominale
con acqua R, inserire le chiusure in esame e fissarle con
ehcituecamraF

Scaldare in autoclave a 121 2 ‘C per 30 min. Qualun-

inoizaraperP

ehcificepS

que macchia nera sulla carta non e© piu© intensa di quella una capsula. Utilizzando per ogni chiusura un ago ipo-
di una soluzione di riferimento preparata contempora- dermico nuovo con diametro esterno di 0,8 mm, perfo-
neamente nello stesso modo utilizzando 0,154 mg di rare ciascuna chiusura dieci volte, ogni volta in un
sodio solfuro R e 50 ml di una soluzione (20 g/l) di punto diverso. Immergere in contenitori in posizione
verticale in una soluzione (1 g/l) di blu metilene R e
ehcitapoemO
inoizaraperP

acido citrico R. ridurre la pressione esterna a 27 kPa per 10 min. Rista-

Per i saggi di perforabilita© , cessione di frammenti e auto- bilire la pressione atmosferica e lasciare i contenitori
sigillatura, utilizzare chiusure trattate come descritto per immersi per 30 min. Sciacquare esternamente i conteni-
la preparazione della soluzione S e lasciar seccare. tori. Nessuno contiene traccia di soluzione colorata.
Perforabilita© . Per chiusure che saranno perforate da un öööö
ago ipodermico, effettuare il saggio seguente. Riempire
ecidnI

10 contenitori adatti al volume nominale con acqua R, (1) Vedere ISO 7864 ``Aghi ipodermici sterili monouso''.

375
 4. Reattivi

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
4.1. Reattivi, soluzioni standard, solu- 4.1.3. Soluzioni tampone . . . . . . . . . . . . . . 510

idoteM
zioni tampone . . . . . . . . . . . . . . . 379 4.2. Analisi volumetriche . . . . . . . . . . . . 516
4.1.1. Reattivi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 379 4.2.1. Reattivi speciali per volumetria . . . . 516
4.1.2. Soluzioni standard per saggi limite . 505 4.2.2. Soluzioni titolare . . . . . . . . . . . . . . . 516

irotinetnoC
/ ilairetaM
ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Reattivi

inoizircserP
Liquido volatile limpido, incolore, miscibile con acqua

ilareneG
4.1. REATTIVI, SOLUZIONI STANDARD,

SOLUZIONI TAMPONE e con alcool.

d2020 : circa 0,824.
Il nome di una sostanza o di una soluzione seguito dalla n20D : circa 1,382.
lettera R (tutto in corsivo), indica che il reattivo e© incluso p.e.: circa 103 ‘C.

isilanA id
nella seguente lista. Le specifiche date per i reattivi non

idoteM
garantiscono che la loro qualita© sia idonea per l'uso nei Acetilacetammide . C4H7NO2. (Mr 101,1). 1102600.
medicinali. [5977-14-0]. 3-Ossobutanammide.
Nell'ambito della descrizione di ogni reattivo vi e© un p.f.: da 53 ‘C a 56 ‘C.
. C5H8O2. (Mr 100,1). 1000900. [123-54-6].

irotinetnoC
codice di riferimento a sette cifre in corsivo (per esempio,

/ ilairetaM
Acetilacetone

1002501). Questo numero, che rimarra© invariato per un 2,4-Pentandione.

dato reattivo durante le successive revisioni della lista, e© Liquido incolore o leggermente giallo, facilmente
usato per scopi identificativi e puo© tornare utile anche agli infiammabile, molto solubile in acqua, miscibile con
utilizzatori della Farmacopea, per esempio nella gestione acetone, con alcool, con etere e con acido acetico gla-
dei reattivi; i reattivi presenti nei testi FU sono caratteriz- ciale.

ivittaeR
zati dalla assenza di tale numero. La descrizione puo© n20D : da 1,452 a 1,453.
anche includere un numero CAS (Chemical Abstract Ser- p.e.: da 138 ‘C a 140 ‘C.
vice Registry Number) riconoscibile dal suo formato
tipico, per esempio [9002-93-1]. Acetilacetone reattivo R1 . 1000901.
A 100 ml di ammonio acetato soluzione R aggiun-

itnemogrA
Alcuni reattivi inclusi nella lista sono tossici e devono

ilareneG
essere maneggiati in conformita© con le norme di buona gere 0,2 ml di acetilacetone R.
pratica di laboratorio. N-Acetil-e-caprolattame . C8H13NO2. (Mr 155,2).
I reattivi in soluzione acquosa sono preparati utiliz- 1102700. [1888-91-1]. N-Acetilesano-6-lattame.
zando acqua R. Quando la soluzione di un reattivo e© Liquido incolore, miscibile con etanolo.

eifargonoM

ilareneG
descritta usando un'espressione tipo acido cloridrico d2020 : circa 1,100.
(HCl 10 g/l), la soluzione e© preparata mediante appro- n20D : circa 1,489.
priata diluizione con acqua R di una soluzione piu© con- p.e.: circa 135 ‘C.
centrata del reattivo specificato in questa sezione. Le

ehcituecamraF
soluzioni dei reattivi utilizzate nei saggi limite per il bario, Acetilcolina cloruro . C7H16ClNO2. (Mr 181,7). 1001000.
per il calcio e per i solfati sono preparate usando acqua [60-31-1].

emroF
distillata R. Quando non e© indicato il nome del solvente Polvere cristallina, solubilissima in acqua fredda e in
si intende una soluzione acquosa. alcool, praticamente insolubile in etere; si decompone
I reattivi e le soluzioni dei reattivi devono essere conser- in acqua calda e in alcali.
vate in recipienti ben chiusi. Le etichette devono essere Conservare a ^20 ‘C.

eiretaM

emirP
conformi alla legislazione nazionale e alle disposizioni . C2H3ClO. (Mr 78,5). 1000800. [75-36-5].
internazionali.
Acetile cloruro

Liquido infiammabile, incolore, limpido, si decompone

a contatto con acqua e con alcool, miscibile con diclo-
roetano.
ehcituecamraF

4.1.1. REATTIVI
inoizaraperP

ehcificepS

. C2H4O. (Mr 44,1). 1000200. [75-07-0]. Eta- d2020 : circa 1,10.

Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per
Acetaldeide

nale.
cento distilla tra 49 ‘C e 53 ‘C.
Liquido infiammabile, incolore, limpido, miscibile con . C12H14O3. (Mr 206,2). 1100700.
acqua e con alcool.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Acetileugenolo

[93-28-7]. 2-Metossi-4-(2-propenil)fenilacetato.
d2020 : circa 0,788. Liquido oleoso giallo, molto solubile in alcool e in
n20D : circa 1,332 etere, praticamente insolubile in acqua.
n20D : circa 1,521.
p.e.: circa 21‘ C. p.e.: da 281 ‘C a 282 ‘C.
ecidnI

Acetale . C6H14O2. (Mr 118,2). 1112300. [105-57-7]. Ace- L'acetileugenolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa
taldeide dietilacetale. 1,1-Dietossietano. all'ulteriore saggio seguente:

379
Reattivi

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas Acetonitrile . C2H3N. (Mr 41,05). 1000700. [75-05-8].
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- Metile cianuro. Etanonitrile.
fia Garofano essenza (1091) usando la sostanza in Liquido, limpido, incolore, miscibile con acqua, con
esame come soluzione in esame. acetone, con etere e con metanolo.
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per d2020 : circa 0,78.
cento dell'area totale dei picchi. n20D : circa 1,344.
N- Acetilglucosammina . C8H15NO6. (Mr 221,2). Una soluzione 100 g/l e© neutra al tornasole cartina.
1133600. [7512-17-6]. 2-(Acetilammino)-2-desossi-d- Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per
glucopiranosio. cento distilla tra 80 ‘C e 82 ‘C.
p.f.: circa 202 ‘C. L'acetonitrile utilizzato in spettrofotometria soddisfa
Acetiltirosina estere etilico . C13H17NO4.H2O. (Mr 269,3). all'ulteriore requisito seguente:
1001200. [36546-50-6]. N-Acetil-l-tirosina estere etilico Trasmittanza minima (2.2.25) 98 per cento da 255 nm a
monoidrato. Etile (S)-2-acetammido-3-(4-idrossifenil)- 420 nm, usando acqua R come bianco.
propionato monoidrato.
Polvere cristallina bianca idonea per il dosaggio della Acetonitrile R1 . 1000702.
chimotripsina. Soddisfa ai requisiti prescritti per l'acetonitrile R e
20 : da + 21 a + 25, determinato su una soluzione agli ulteriori requisiti seguenti:
‰ Š
D Contiene non meno del 99,9 per cento di C2H3N.
10 g/l in alcool R.
A1cm : da 60 a 68, determinata a 278 nm in alcool R.
1% Assorbanza (2.2.25). L'assorbanza a 200 nm,
. 1001201. usando acqua R come liquido di compensazione,
Acetiltirosina estere etilico 0,2 M
non e© superiore a 0,10.
Disciogliere 0,54 g di acetiltirosina estere etilico R . 1000701. Vedere
in alcool R e diluire a 10,0 ml con lo stesso solvente. Acetonitrile per

acetonitrile R.
cromatografia

N -Acetiltriptofano . C13H14N2O3. (Mr 246,3). 1102800. L'acetonitrile utilizzato in cromatografia soddisfa

[1218-34-4]. Acido 2-acetilammino-3-(indol-3-il)propa- agli ulteriori requisiti seguenti:
noico. Trasmittanza minima (2.2.25). 98 per cento a
Polvere bianca o quasi bianca o cristalli incolori, mode- 240 nm, usando acqua R come bianco.
ratamente solubile in acqua. Si scioglie nelle soluzioni Purezza minima (2.2.28). 99,8 per cento.
diluite di idrossidi alcalini.
p.f.: circa 205 ‘C. Acido acetico anidro . C2H4O2. (Mr 60,1). 1000300.
Determinazione quantitativa. Disciogliere 10,0 mg in [64-19-7].
una miscela di 10 volumi di acetonitrile R e 90 volumi Contiene non meno del 99,6 per cento m/m di C2H4O2.
di acqua R e diluire a 100,0 ml con la stessa miscela di Liquido incolore miscibile con acqua, o cristalli lamel-
solventi. Esaminare come prescritto nella monografia lari, lucenti, bianchi, solubilissimi in acqua, in alcool,
Triptofano (1272) nel paragrafo ``1,1'-Etilidenbis(trip- in etere, in glicerolo 85 per cento e nella maggior parte
tofano) e altre sostanze correlate''. L'area del picco degli oli grassi ed essenziali.
principale nel cromatogramma ottenuto non e© inferiore d2020 : da 1,052 a 1,053.
al 99,0 per cento delle aree di tutti i picchi. p.e.: da 117 ‘C a 119 ‘C.
Acetone . 1000600. [67-64-1]. Vedere la monografia Ace- Una soluzione 100 g/l e© fortemente acida (2.2.4).
tone (0872). Una soluzione 5 g/l neutralizzata con ammoniaca
Acetone deuterato . C322H6O. (Mr 64,1). 1024900. diluita R2 da© la reazione caratteristica (b) degli acetati
[666-52-4]. Acetone-d6. ( H6)-Acetone. (2.3.1).
Il grado di deuterazione non e© inferiore al 99,7 per Punto di solidificazione (2.2.18). Non inferiore a 15,8 ‘C.
cento. Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,4 per cento. Se il conte-
Liquido limpido, incolore, miscibile con acqua, con nuto di acqua e© superiore allo 0,4 per cento deve essere
dimetilformammide, con etanolo, con etere e con meta- compensato per aggiunta di una quantita© calcolata di
nolo. anidride acetica R.
d2020 : circa 0,87. Conservare al riparo dalla luce.
n20D : circa 1,357. . C22H4O2. (Mr 64,1). 1101100.
p.e.: circa 55 ‘C.
Acido acetico deuterato

[1186-52-3]. Acido tetradeuteroacetico. Acido-d ace-

Acqua e deuterio ossido: Non piu© dello 0,1 per cento. tico-d3.

380
 Reattivi

inoizircserP
Il grado di deuterazione non e© inferiore al 99,7 per . C16H32O5. (Mr 304,4). 1095700.

ilareneG
Acido aleuritico

cento. [533-87-9]. Acido (9RS,10SR)-9,10,16-triidrossiesadeca-

d2020 : circa 1,12. noico.
n20D : circa 1,368. Polvere bianca, untuosa al tatto, solubile in metanolo.
p.e.: circa 115 ‘C. p.f.: circa 101 ‘C.

isilanA id
idoteM
p.f.: circa 16 ‘C. Acido amminoacetico . Vedere la monografia Glicina
. C2H4O2. (Mr 60,1). 1000400. (0614).
. C7H7NO2. (Mr 137,1).
Acido acetico glaciale

[64-19-7]. Vedere la monografia Acido acetico glaciale Acido 2-amminobenzoico

(0590). 1003400. [118-92-3]. Acido antranilico, Acido o-ammi-

nobenzoico.

irotinetnoC
. 1000401.

/ ilairetaM
Polvere cristallina da bianco a giallo pallido, moderata-
Acido acetico

Contiene non meno di 290 g/l e non piu© di 310 g/l mente solubile in acqua fredda, molto solubile in acqua
di C2H4O2 (Mr 60,1). calda, in alcool, in etere e in glicerolo. Le soluzioni in
Diluire 30 g di acido acetico glaciale R a 100 ml con alcool o in etere e, soprattutto, in glicerolo, mostrano
acqua R. una fluorescenza violetta.
. 1000402.

ivittaeR
Acido acetico diluito
p.f.: circa 145 ‘C.
Contiene non meno di 115 g/l e non piu© di 125 g/l . C7H7NO2. (Mr 137,1).
di C2H4O2 (Mr 60,1). Acido 4-amminobenzoico

1003300. [150-13-0]. Acido p-amminobenzoico.

Diluire 12 g di acido acetico glaciale R a 100 ml con Polvere cristallina, bianca, poco solubile in acqua,
acqua R.

itnemogrA
molto solubile in alcool, praticamente insolubile in

ilareneG
Acido acetico e solforico reattivo . etere di petrolio.
A 50,0 ml di acido acetico glaciale R aggiungere, agi- p.f.: circa 187 ‘C.
tando e raffreddando, sotto acqua corrente ed ope- Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
rando con prudenza, 50,0 ml di acido solforico R. grafia Procaina cloridrato (0050); il cromatogramma

eifargonoM
Mescolare, agitare energicamente e lasciare a riposo presenta solo una macchia principale.

ilareneG
per 2 h. La soluzione pronta all'uso e© incolore ed e© con- Conservare al riparo dalla luce.
servabile in frigorifero per almeno 2 giorni. . 1003301. Acido
Acido N-acetilneuramminico . C11H19NO9. (Mr 309,3). Acido 4-amminobenzoico soluzione

p-amminobenzoico soluzione.
1001100. [131-48-6]. Acido O-sialico.

ehcituecamraF
Cristalli bianchi aghiformi solubili in acqua e in meta- Disciogliere 1 g di acido 4-amminobenzoico R in
una miscela di 18 ml di acido acetico anidro R,

emroF
nolo, poco solubili in etanolo, praticamente insolubili 20 ml di acqua R e 1 ml di acido fosforico R. Imme-
in acetone e in etere. diatamente prima dell'uso, mescolare 2 volumi
20 : circa ^36, determinato su una soluzione 10 g/l.
‰ Š
D della soluzione con 3 volumi di acetone R.
p.f. : circa 186 ‘C con decomposizione. . C4H9NO2. (Mr 103,1).
eiretaM
. C3H4O2. (Mr 72,1). 1133700. [79-10-7].

emirP
Acido 4-amminobutanoico
Acido acrilico

Acido 2-propenoico. Acido vinilformico. 1123200. [56-12-2]. Acido -amminobutirrico. GABA.

c

Contiene non meno del 99 per cento di C3H4O2. E' sta- Si ottiene sotto forma di lamine da metanolo e etere,
bilizzato con lo 0,02 per cento di idrochinone monome- aghi da acqua e alcool. Molto solubile in acqua, prati-
camente insolubile o poco solubile in altri solventi.
ehcituecamraF

tiletere.
inoizaraperP

ehcificepS

Liquido corrosivo, miscibile con acqua e alcool. Poli- p.f.: circa 202 ‘C (decresce con il riscaldamento rapido).
merizza rapidamente in presenza di ossigeno. Acido 6-amminoesanoico . C6H13NO2. (Mr 131,2).
d2020 : circa 1,05. 1103100. [60-32-2].
n20D : circa 1,421. Cristalli incolori, molto solubili in acqua, moderata-
mente solubili in metanolo, praticamente insolubili in
ehcitapoemO
inoizaraperP

p.e.: circa 141 ‘C. etanolo.

p.f.: da 12 ‘C a 15 ‘C. p.f.: circa 205 ‘C.
Acido adipico . C6H10O4. (Mr 146,1). 1095600. . C10H9NO4S.
[124-04-9].
Acido amminoidrossinaftalensolfonico

(Mr 239,3). 1112400. [116-63-2]. Acido 4-ammino-3-

Prismi, molto solubili in metanolo, solubili in acetone, idrossinaftalen-1-solfonico.
praticamente insolubili in etere di petrolio.
ecidnI

Aghi bianchi o grigi, che virano al rosa per esposizione

p.f.: circa 152 ‘C. alla luce, specialmente se e© umido, praticamente insolu-

381
Reattivi

bile in acqua, in alcool e in etere, solubile nelle solu- Acido amminometilalizarindiacetico soluzione .
zioni di idrossidi alcalini e in soluzioni calde di sodio 1003902.
metabisolfito. Disciogliere 0,192 g di acidoamminometilalizarindia-
Conservare al riparo dalla luce. cetico R in 6 ml di sodio idrossido 1 M preparato di
Acido amminoidrossinaftalensolfonico soluzione . recente. Aggiungere 750 ml di acqua R, 25 ml di tam-
1112401. ponesuccinatosoluzioneapH4,6R e, goccia a goccia,
Mescolare 5,0 g di sodio solfito anidro R con 94,3 g acido cloridrico 0,5 M, fino a viraggio dal rosso-vio-
di sodio idrogenosolfito R e 0,7 g di acido amminoi- letto al giallo (pH 4,5-5). Aggiungere 100 ml di ace-
drossinaftalensolfonico R. Disciogliere 1,5 g della tone R e diluire a 1000 ml con acqua R.
miscela ottenuta in acqua R e diluire a 10,0 ml con . C3H7NO2. (Mr 89,1).
lo stesso solvente. Preparare la soluzione in gior- Acido 3-amminopropionico

1004500. [107-95-9]. -Alanina.

nata. b

. C9H10N2O3. (Mr 194,2). Contiene non meno del 99 per cento di C3H7NO2.
Polvere cristallina, bianca, molto solubile in acqua,
Acido amminoippurico

1003700. [61-78-9]. Acido (4-amminobenzammido)

acetico. poco solubile in alcool, praticamente insolubile in ace-
Polvere bianca o quasi bianca, moderatamente solubile tone e in etere.
in acqua, solubile in alcool, molto poco solubile in p.f.: circa 200 ‘C con decomposizione.
etere. Acido ascorbico . 1008400. [50-81-7].Vedere la monogra-
p.f.: circa 200 ‘C. fia Acido ascorbico (0253).
Acido amminoippurico reattivo . 1003701. Acido ascorbico soluzione . 1008401.
Disciogliere 3 g di acido ftalico R e 0,3 g di acido Disciogliere 50 mg di acido ascorbico R in 0,5 ml di
amminoippurico R in alcool R e diluire a 100 ml acqua R e diluire a 50 ml con dimetilformammide R.
con lo stesso solvente. . 1134100. [56-84-8].Vedere la monogra-
. C19H15NO8.2H2O.
Acido aspartico
Acido amminometilalizarindiacetico fia Acido aspartico (0797).
(Mr 421,4). 1003900. [3952-78-1]. Acido 2,2'-[(3,4-di- . C4H4N2O3. (Mr 128,1). 1009100.
idrossiantrachinon-3-il)metilenenitrilo]diacetico diidrato. Acido barbiturico

[67-52-7]. 1H,3H,5H-Pirimidin-2,4,6-trione.
Polvere fine, da giallo brunastro pallido a bruno-aran- Polvere bianca o quasi bianca, poco solubile in acqua,
cione, praticamente insolubile in acqua, solubile nelle molto solubile in acqua bollente e negli acidi diluiti.
soluzioni di idrossidi alcalini. p.f.: circa 253 ‘C.
p.f.: circa 185 ‘C. . 1010100. [65-85-0]. Vedere la monogra-
Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore al Acido benzoico

fia Acido benzoico (0066).

10,0 per cento, determinata su 1,000 g.
. Acido borico . 1011800. [10043-35-3].Vedere la monogra-
Acido

1003901.
amminometilalizarindiacetico reattivo
fia Acido borico (0001).
Soluzione I. Disciogliere 0,36 g di cerio(-oso) Acido bromidrico 30 per cento . 1098700. [10035-10-6].
nitrato R in acqua R e diluire a 50 ml con lo stesso Acido bromidrico al 30 per cento in acido acetico gla-
solvente. ciale R.
Soluzione II. Sospendere 0,7 g di acido amminome- Degassare il contenuto con cautela prima dell'apertura.
tilalizarindiacetico R in 50 ml di acqua R. Discio- . 1098701.
gliere aggiungendo circa 0,25 ml di ammoniaca con-
Acido bromidrico diluito

Porre 5,0 ml di acido bromidrico 30 per cento R in

centrata R, aggiungere 0,25 ml di acido acetico gla- fialette ambrate dotate di chiusure in polietilene.
ciale R e diluire a 100 ml con acqua R. Sigillare sotto argon R e conservare al buio.
Soluzione III. Disciogliere 6 g di sodio acetato R in Aggiungere 5,0 ml di acido acetico glaciale R imme-
50 ml di acqua R, aggiungere 11,5 ml di acido ace- diatamente prima dell'uso. Agitare.
tico glaciale R e diluire a 100 ml con acqua R. Conservare al buio.
A 33 ml di acetone R aggiungere 6,8 ml della solu- . 1118900.
zione III, 1,0 ml della soluzione II e 1,0 ml della Acido bromidrico 47 per cento

Soluzione al 47 per cento m/m di acido bromidrico in

soluzione I e diluire a 50 ml con acqua R. acqua R.
Saggio di sensibilita© . A 1,0 ml della soluzione stan-
dard di fluoruro (F 10 ppm) R aggiungere 19,0 ml Acido bromidrico diluito R1 . 1118901.
di acqua R e 5,0 ml di acido amminometilalizarin- Contiene 7,9 g/l di HBr.
diacetico reattivo. Dopo 20 min, la soluzione Disciogliere 16,81 g di acido bromidrico 47 per cen-
assume una colorazione blu. to R in acqua R e diluire a 1000 ml con lo stesso
Usare la soluzione finale entro 5 giorni. solvente.

382
 Reattivi

inoizircserP
. C4H11BO2. (Mr 101,9). 1013700. . C3H3NO2. (Mr 85,1). 1097900.

ilareneG
Acido butilboronico Acido cianoacetico

[4426-47-5]. [372-09-8].
Contiene non meno del 98 per cento di C4H11BO2. Cristalli igroscopici da bianchi a bianco-giallastri, solu-
p.f.: da 90 ‘C a 92 ‘C. bilissimi in acqua.
. C4H8O2. (Mr 88,1). 1014000. [107-92-6].

isilanA id
Acido butirrico

Acido butanoico. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.

idoteM
Contiene non meno del 99,0 per cento di C4H8O2. Acido cicloesilendinitrilotetracetico . C14H22N2O8.H2O.
Liquido oleoso, miscibile in acqua e in alcool. (Mr 364,4). 1024100. Acido trans-cicloesilen-1,2-dini-
d2020 : circa 0,96. trilo-N,N,N'N'-tetracetico monoidrato.

irotinetnoC
/ ilairetaM
n20D : circa 1,398. Polvere cristallina bianca.
p.e.: circa 163 ‘C. p.f.: circa 204 ‘C.
Acido caffeico . C9H8O4. (Mr 180,2). 1014300. [331-39-5].
Acido (E)-3-(3,4-diidrossifenil)propenoico. Acido 3,4-dii- Acido 3-cicloesilpropionico . C9H16O2. (Mr 156,2).
drossicinnamico. 1119200. [701-97-3].

ivittaeR
Cristalli o lamine, bianchi o quasi bianchi, molto solu- Liquido limpido.
bili in acqua calda e in alcool, moderatamente solubili
in acqua fredda. d2020 : circa 0,998.
p.f.: circa 225 ‘C, con decomposizione. n20D : circa 1,4648.
Una soluzione preparata di recente a pH 7,6 mostra due

itnemogrA
ilareneG
massimi di assorbimento (2.2.25) a 293 nm e a 329 nm. p.e.: circa 130 ‘C.
Acido calconcarbossilico . C21H14N2O7S.3H2O. (Mr 492,5). . 1021000. [5949-29-1]. Vedere la monogra-
1015300. [3737-95-9]. Acido 2-idrossi-1-(2-idrossi-4-solfo-
Acido citrico

fia Acido citrico monoidrato (0456).

1-naftilazo)naftalen-3-carbossilico.
L'acido citrico utilizzato nel saggio limite per il ferro, sod-

eifargonoM
Polvere nero-brunastra, poco solubile in acqua, molto

ilareneG
poco solubile in acetone e in alcool, moderatamente disfa all'ulteriore requisito seguente:
solubile nelle soluzioni diluite di sodio idrossido. Disciogliere 0,5 g in 10 ml di acqua R, aggiungere 0,1 ml
Acido calconcarbossilico miscela composta . di acido tioglicolico R, mescolare e alcalinizzare con
1015301. ammoniaca R. Diluire a 20 ml con acqua R. Non com-

ehcituecamraF
Mescolare una parte di acido calconcarbossilico R pare alcuna colorazione rosa nella soluzione.

emroF
con 99 parti di sodio cloruro R . 1021200. [77-92-9]. Vedere la
Saggio di sensibilita© . Disciogliere 50 mg di acido Acido citrico anidro

monografia Acido citrico anidro (0455).

calconcarbossilico miscela composta in una
miscela di 2 ml di sodio idrossido soluzione concen- Acido citrico monoidrato . Vedere acido citrico R.
trata R e 100 ml di acqua R. La soluzione e© blu ma
eiretaM
. 1043500. [7647-01-0]. Vedere la mono-

emirP
diventa violetta per aggiunta di 1 ml di una solu- Acido cloridrico

grafia Acido cloridrico concentrato (0002).

zione (10 g/l) di magnesio solfato R e 0,1 ml di una
soluzione (1,5 g/l) di calcio cloruro R e vira ad . 1043501.
un'intensa colorazione blu per aggiunta di 0,15 ml
Acido cloridrico R1
ehcituecamraF

di sodio edetato 0,01 M. Contiene 250 g/l di HCl.

inoizaraperP

ehcificepS

S . C10H16O4S. (Mr 232,3). Diluire 70 g di acido cloridrico R a 100 ml con

acqua R.
Acido (1 )-(+)-10-canforsolfonico

1104100. [3144-16-9]. Acido (1S,4R)-(+)-2-oxo-10-bornen-

solfonico. Acido [(1S)-7,7-Dimetil-2-oxobiciclo[2.2.1]ep- . 1043507.
tan-1-il]-metansolfonico.AcidodiReychler. Acido cloridrico bromurato
ehcitapoemO
inoizaraperP

Cristalli prismatici, igroscopici, solubili in acqua. Ad 1 ml di bromo soluzione R aggiungere 100 ml di

Contiene non meno del 99,0 per cento di acido acido cloridrico R.
(1S)-(+)-10-canforsolfonico. . 1043503.
20 : +20 1 (soluzione 43 g/l in acqua R). Acido cloridrico diluito

D
Contiene 73 g/l di HCl.
‰ Š 6

p.f.: circa 194 ‘C, con decomposizione.

ecidnI

D A (2.2.41): 10,2 103 determinato a 290,5 nm su una

2 Diluire 20 g di acido cloridrico R a 100 ml con
soluzione 1,0 g/l. acqua R.

383
Reattivi

Acido cloridrico diluito R1 . 1043504. Acido clorogenico. C16H18O9. (Mr 354,3). 1104700.
Contiene 0,37 g/l di HCl. [327-97-9]. Acido (1S,3R,4R,5R)-3-[(3,4-diidrossicinna-
Diluire 1,0 ml di acido cloridrico diluito R a moil)oxi]-1,4,5-triidrossicicloesancarbossilico.
200,0 ml con acqua R. Polvere cristallina bianca o aghi bianchi, molto solubile
. 1043505. in acqua bollente, in acetone e in etanolo.
Acido cloridrico diluito R2
20 : circa ^35,2.
D
Diluire 30 ml di acido cloridrico 1 M a 1000 ml con
‰ Š

acqua R; portare il pH a 1,6 0,1.

6
p.f.: circa 208 ‘C.
. 1043508. Cromatografia. Esaminato nelle condizioni descritte
Acido cloridrico esente da piombo
nell'identificazione A della monografia Belladonna
Soddisfa ai requisiti prescritti per l'acido clori- foglia estratto secco titolato (1294), il cromatogramma
drico R e all'ulteriore saggio seguente: mostra solo una macchia principale.
Piombo. Non piu© di 20 ppm di Pb determinato Acido cloroplatinico. H2Cl6Pt.6H2O. (Mr 517,9).
mediante spettrometria di emissione atomica 1019000. [18497-13-7]. Idrogeno esacloroplatinato(IV)
(Metodo I, 2.2.22). esaidrato.
Soluzione in esame. In un crogiolo di quarzo evapo- Contiene non meno del 37,0 per cento m/m di platino
rare quasi fino a secco 200 g di acido da esaminare. (Ar 195,1).
Riprendere il residuo con 5 ml di acido nitrico pre- Cristalli rosso-brunastri o massa cristallina, solubilis-
parato mediante distillazione al di sotto del punto simi in acqua, solubili in alcool.
di ebollizione dell'acido nitrico R ed evaporare a
secco. Riprendere il residuo con 5 ml di acido Determinazione quantitativa. Calcinare 0,200 g a 900 ‘C
nitrico preparato mediante distillazione al di sotto fino a massa costante e pesare il residuo (platino).
del punto di ebollizione dell'acido nitrico R. Conservare al riparo dalla luce.
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di . C7H5ClO3. (Mr 172,6). 1019100.
riferimento usando la soluzione standard di piombo
Acido 5-clorosalicilico

[321-14-2].
(Pb 0,1 ppm) R diluita con acido nitrico preparato Polvere cristallina bianca o quasi bianca, solubile in
mediante distillazione al di sotto del punto di ebol- metanolo.
lizione dell'acido nitrico R. Misurare l'intensita© di
emissione a 220,35 nm. p.f.: circa 173 ‘C.
. 1043506. Acido cromotropico, sale sodico . C10H6Na2O8S2.2H2O.
(Mr 400,3). 1020300. [5808-22-0]. Schultz No. 1136.
Acido cloridrico soluzione etanolica

Diluire 5,0 ml di acido cloridrico 1M a 500,0 ml con Disodio 1,8-diidrossinaftalen-3,6-disolfonato diidrato.

alcool R. Disodio 4,5-diidrossinaftalen-2,7-disolfonato diidrato.
Acido cloridrico soluzione metanolica . 1053203. Polvere bianco-giallastra, solubile in acqua, pratica-
Diluire 1,0 ml di acido cloridrico R1 a 100,0 ml con mente insolubile in alcool.
metanolo R. Acido cromotropico sale sodico soluzione . 1020301.
. Vedere Acido cloridrico Disciogliere 0,60 g di acido cromotropico sale so-
dico R in circa 80 ml di acqua R e diluire a 100 ml
Acido cloridrico Pb R

esente da piombo R.
con lo stesso solvente. Usare la soluzione entro 24 h.
Acido cloroacetico. C2H3ClO2. (Mr 94,5). 1018200.
[79-11-8]. Acido monocloroacetico. Acido diazobenzensolfonico soluzione R1. 1026500.
Cristalli incolori o bianchi, deliquescenti, solubilissimi Acido solfanilico diazotato soluzione R1.
in acqua, solubili in alcool e in etere. Disciogliere 0,9 g di acido solfanilico R in una miscela di
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. 30 ml di acido cloridrico diluito R e 70 ml di acqua R. A
3 ml della soluzione aggiungere 3 ml di una soluzione
Acido 2-clorobenzoico . C7H5ClO2. (Mr 156,7). 1139300. (50 g/l) di sodio nitrito R. Raffreddare in un bagno di
[118-91-2]. ghiaccio per 5 min, aggiungere 12 ml della soluzione di
Solubile in acqua, poco solubile in etanolo. sodio nitrito e raffreddare di nuovo. Diluire a 100 ml
p.e.: circa 285 ‘C. con acqua R e porre il reattivo in un bagno di ghiaccio.
Preparare estemporaneamente ma lasciare a riposo per
p.f.: circa 140 ‘C. 15 min prima dell'uso.

384
 Reattivi

inoizircserP
. C2H2Cl2O2. (Mr 128,9). 1027000. . Scaldare a b.m., per 6 h, 3 g di

ilareneG
Acido dicloroacetico Acido fenoldisolfonico

[79-43-6]. fenolo R con 20 ml di acido solforico R. Conservare la

Liquido incolore, miscibile con acqua, con alcool e con soluzione in una bottiglia di vetro scuro con tappo a sme-
etere. riglio.
d2020 : circa 1,566. Sensibilita© ai nitrati. Evaporare a secco a b.m. una solu-

isilanA id
n20D : circa 1,466. zione contenente 0,1 mg di potassio nitrato R in un cro-

idoteM
p.e.: circa 193 ‘C. giolo di porcellana. Al residuo raffreddato aggiungere
. 1027001. 1 ml di acido fenoldisolfonico R e lasciare a riposo per
10 min. Aggiungere 10 ml di acqua R, raffreddare,
Acido dicloroacetico soluzione

Diluire 67 ml di acido dicloroacetico R a 300 ml con aggiungere altri 10 ml di ammoniaca diluita R1 e diluire
acqua R e neutralizzare al tornasole cartina blu R

irotinetnoC
/ ilairetaM
usando ammoniaca R. Raffreddare, aggiungere a 25 ml con acqua R: e© visibile una netta colorazione
33 ml di acido dicloroacetico R e diluire a 600 ml gialla in confronto ad una soluzione preparata nelle
con acqua R. stesse condizioni senza il nitrato di potassio.
. C7H4N2O6. (Mr 212,1). 1031300. Acido fenossiacetico . C8H8O3. (Mr 152,1). 1063800.
[122-59-8]. Acido 2-fenossietanoico.
Acido dinitrobenzoico

[99-34-3]. Acido 3,5-dinitrobenzoico.

ivittaeR
Cristalli quasi incolori, poco solubili in acqua, solubi- Cristalli quasi bianchi, moderatamente solubili in
lissimi in alcool. acqua, molto solubili in alcool, in etere e in acido ace-
p.f.: circa 206 ‘C. tico glaciale.
Acido dinitrobenzoico soluzione . 1031301. p.f.: circa 98 ‘C.
Soluzione 20 g/l in alcool R.

itnemogrA
ilareneG
Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
. C14H8N2O8S2. grafia Fenossimetilpenicillina (0148); il cromato-
gramma presenta solo una macchia principale.
Acido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico)

(Mr 396,4). 1097300. [69-78-3]. 3-Carbossi-4-nitrofenil-

disolfuro. Reattivo di Ellman. DTNB. Acido flufenamico . C14H10F3NO2. (Mr 281,2). 1106200.
Polvere gialla moderatamente solubile in alcool. [530-78-9]. Acido 2-[[(3-trifluorometil)fenil]ammino]-

eifargonoM

ilareneG
p.f.: circa 242 ‘C. benzoico.
Acido (etilendinitrilo)tetracetico. C10H16N2O8. (Mr 292,2). Polvere cristallina o aghi giallo pallidi, praticamente
1105800. [60-00-4]. N,N'-1,2-etandiilbis[N-(carbossime- insolubile in acqua, molto solubile in alcool.
til)glicina]. Acido edetico. p.f.: da 132 ‘C a 135 ‘C.

ehcituecamraF
Polvere cristallina bianca, molto poco solubile in
acqua. . HF. (Mr 20,01). 1043600. [7664-39-3].

emroF
Acido fluoridrico

p.f.: circa 250 ‘C, con decomposizione. Contiene non meno del 40,0 per cento m/m di HF.
Acido 2-etilesanoico . C8H16O2. (Mr 144,2). 1036600. Liquido incolore limpido.
[149-57-5]. Residuo alla calcinazione. Non superiore allo 0,05 per
Liquido incolore. cento m/m. Evaporare l'acido fluoridrico in un crogiolo
eiretaM

emirP
d2020 : circa 0,91. di platino e essiccare gradualmente il residuo a massa
n20D : circa 1,425. costante.
Sostanze correlate. Esaminare mediante gas cromato- Determinazione quantitativa. Pesare accuratamente una
grafia (2.2.28). Iniettare 1 l di una soluzione preparata beuta con tappo a smeriglio contenente 50,0 ml di sodio
ehcituecamraF
inoizaraperP

m
some segue: sospendere 0,2 g di acido 2-etilesanoico in
ehcificepS

5 ml di acqua R, aggiungere 3 ml di acido cloridrico idrossido 1 M. Introdurre 2 g dell'acido fluoridrico e

diluito R e 5 ml di esano R, agitare per 1 min, separare pesare di nuovo. Titolare la soluzione con acido solfo-
gli strati e usare lo strato superiore. Effettuare il proce- rico 0,5 M, usando 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R
dimento cromatografico come prescritto nel saggio per come indicatore.
ehcitapoemO

1 ml di sodio idrossido 1 M equivale a 20,01 mg di HF.

inoizaraperP

l'acido 2-etilesanoico nella monografia Amoxicillina

sodica (0577). La somma delle aree dei picchi, escluso Conservare in un recipiente di polietilene.
il picco principale e il picco dovuto al solvente, non e© . 1039000. [75708-92-8].Vedere la monogra-
maggiore del 2,5 per cento dell'area del picco princi- Acido folico

fia Acido folico (0067).

pale.
. C7H12O4. (Mr 160,2). Acido formico anidro . CH2O2. (Mr 46,03). 1039300.
[64-18-6].
Acido 2-etil-2-metilsuccinico

1036800. [631-31-2]. Acido 2-etil-2-metilbutandioico.

ecidnI

p.f.: da 104 ‘C a 107 ‘C. Contiene non meno del 98,0 per cento m/m di CH2O2.

385
Reattivi

Liquido incolore, corrosivo, miscibile con acqua e con Perde l'acqua di cristallizzazione a 120 ‘C e fonde a
alcool. circa 260 ‘C, con decomposizione.
d2020 : circa 1,22. Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
Determinazione quantitativa. Pesare accuratamente una grafia Uva ursina foglia (1054); il cromatogramma pre-
beuta contenente 10 ml di acqua R, aggiungere rapida- senta solo una macchia principale.
mente 1 ml circa dell'acido e pesare di nuovo. Aggiun- Acido glicirretico . C30H46O4. (Mr 470,7). 1040900.
gere 50 ml di acqua R e titolare con sodio idrossido [471-53-4]. Acido glicirretinico. Acido 12,13-dideidro-
1 M, usando 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R come 3 -idrossi-11-oxo-olean-30-oico.
b

indicatore. Miscela di acidi e glicirretici nei quali l'isomero e©

a b b
1 ml di sodio idrossido 1 M equivale a 46,03 mg di predominante.
CH2O2. Polvere bianca o bruno-giallastra, praticamente insolu-
Acido fosfomolibdico . 12MoO3.H3PO4.xH2O. 1064900. bile in acqua, solubile in etanolo e in acido acetico gla-
[51429-74-4]. ciale.
Cristalli fini giallo-arancioni, molto solubili in acqua, 20 : da +145 a +155, determinato su una soluzione
D
solubili in alcool e in etere.
‰ Š

10,0 g/l in etanolo R.

Acido fosfomolibdico soluzione . 1064901. Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su
Disciogliere 4 g di acido fosfomolibdico R in strato sottile (2.2.27) usando gel di silice GF254 R come
acqua R e diluire a 40 ml con lo stesso solvente. sostanza di rivestimento; preparare l'impasto usando
Aggiungere cautamente, raffreddando, 60 ml di una soluzione di acido fosforico R allo 0,25 per cento
acido solforico R. Preparare immediatamente V/V. Deporre sulla lastra 5 ml di una soluzione (5 g/l)
prima dell'uso. di acido glicirretico in una miscela di volumi uguali di
Acido fosfomolibdico soluzione R1 . Disciogliere 2 g cloroformio R e metanolo R. Eluire per un percorso di
di acido fosfomolibdico R in 10 ml di alcool R. 10 cm usando una miscela di 5 volumi di metanolo R e
. 1065100. [7664-38-2]. Vedere la mono- 95 volumi di cloroformio R. Esaminare il cromato-
Acido fosforico

grafia Acido fosforico concentrato (0004). gramma alla luce ultravioletta a 254 nm. Il cromato-
gramma presenta una macchia scura (Rf circa 0,3) cor-
Acido fosforico diluito . 1065101. Vedere la mono- rispondente all'acido -glicirretico e una macchia piu©
grafia Acido fosforico diluito (0005).
b

piccola (Rf circa 0,5) corrispondente all'acido -glicirre-

a

. H3PO3. (Mr 82,0). 1130600. tico. Spruzzare con aldeide anisica soluzione R e scal-
dare a 100-105 ‘C per 10 min. Entrambe le macchie
Acido fosforoso

[13598-36-2].
Massa cristallina, bianca, molto igroscopica e delique- hanno una colorazione viola-bluastra. Tra loro puo©
scente; si ossida lentamente con l'ossigeno (aria) a essere presente una macchia piu© piccola di colorazione
H3PO4. viola-bluastra.
Cristalli instabili, ortorombici, solubili in acqua, in Acido 18a-glicirretinico . C30H46O4. (Mr 470,7).
alcool e in una miscela di 3 volumi di etere e 1 volume 1127900. [1449-05-4]. Acido (20 )-3 -idrossi-11-oxo-
b b

di alcool. 18 -olean-12-en-29-oico.
a

d421 : circa 1,651. Polvere bianca o quasi bianca, praticamente insolubile

p.f.: circa 73 ‘C. in acqua, solubile in etanolo, moderatamente solubile
in diclorometano.
Acido fosfotungstico soluzione . 1065200. . C2H4O3. (Mr 76,0). 1040800. [79-14-1].
Scaldare a ricadere per 3 h, 10 g di sodio tungstato R con Acido glicolico

Acido 2-idrossiacetico.
8 ml di acido fosforico R e 75 ml di acqua R. Lasciar raf- Cristalli, solubili in acqua, in acetone, in alcool, in etere
freddare e diluire a 100 ml con acqua R. e in metanolo.
Acido ftalico . C8H6O4. (Mr 166,1). 1065600. [88-99-3]. p.f.: circa 80 ‘C.
Acido benzen-1,2-dicarbossilico.
Polvere bianca cristallina, solubile in acqua calda e in Acido D-glucuronico . C6H10O7. (Mr 194,1). 1119700.
alcool. [6556-12-3].
. C7H6O5.H2O. (Mr 188,1). 1039800. Contiene non meno del 96,0 per cento di C6H10O7, cal-
colato con riferimento alla sostanza essiccata sotto
Acido gallico

[5995-86-8]. Acido 3,4,5-triidrossibenzoico monoidrato.

Polvere cristallina o aghi lunghi, incolori o leggermente vuoto (2.2.32).
gialli, solubili in acqua, molto solubili in acqua calda, Solubile in acqua e in alcool.
in alcool e in glicerolo, poco solubili in etere. Mostra mutarotazione. a 24D: + 11,7 + 36,3.
‰ Š !

386
 Reattivi

inoizircserP
Determinazione quantitativa. Disciogliere 0,150 g in Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su

ilareneG
50 ml di metanolo anidro R agitando sotto azoto. Tito- strato sottile (2.2.27), usando cellulosa per cromatogra-
lare con tetrabutilammonio idrossido 0,1 M, proteg- fia F254 R come sostanza di rivestimento. Deporre sulla
gendo la soluzione dall'anidride carbonica atmosferica lastra 20 ml di una soluzione di acido 2-iodobenzoico,
durante la solubilizzazione e la titolazione. Determi- preparato disciogliendo 40 mg in 4 ml di sodio idrossido
nare potenziometricamente il punto di fine titolazione 0,1M e diluendo a 10 ml con acqua R. Eluire per un per-

isilanA id
idoteM
(2.2.20). corso di circa 12 cm usando come fase mobile lo strato
1 ml di tetrabutilammonio idrossido 0,1 M equivale a superiore ottenuto per agitazione di 20 volumi di
19,41 mg di C6H10O7. acqua R, 40 volumi di acido acetico glaciale R e
. 1040400. [56-86-0]. Vedere la mono- 40 volumi di toluene R. Lasciare asciugare la lastra

irotinetnoC
all'aria e esaminare a luce ultravioletta a 254 nm. Il cro-

/ ilairetaM
Acido glutammico

grafia Acido glutammico (0750). matogramma presenta solo una macchia principale.
Acido 4-idrossibenzoico . C7H6O3. (Mr 138,1). 1106700. . C9H8INO3.2H2O. (Mr 341,1).
[99-96-7]. Acido 2-iodoippurico

1046200. [147-58-0]. Acido 2-(2-iodobenzammido)ace-

Cristalli, poco solubili in acqua, solubilissimi in alcool, tico diidrato.
solubili in acetone e in etere. Polvere cristallina bianca o quasi bianca, moderata-

ivittaeR
p.f.: da 214 ‘C a 215 ‘C. mente solubile in acqua.
Acido 2-[4-(2-idrossietil)piperazin-1-il]etansolfonico . p.f.: circa 170 ‘C.
C8H18N2O4S. (Mr 238,3). 1106800. [7365-45-9]. HEPES. Acqua (2.5.12). Dal 9 per cento al 13 per cento, determi-
Polvere bianca. nata su 1,000 g.

itnemogrA
ilareneG
p.f.: circa 236 ‘C, con decomposizione. Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su
Acido 4-idrossiisoftalico . C8H6O5. (Mr 182,1). 1106900. strato sottile (2.2.27), usando cellulosa per cromatogra-
[636-46-4]. Acido 4-idrossibenzen-1,3-dicarbossilico. fia F254 R come sostanza di rivestimento. Deporre sulla
Aghi o pagliette, molto poco solubili in acqua, molto lastra 20 ml di una soluzione di acido 2-iodoippurico,
solubili in alcool e in etere. preparata disciogliendo 40 mg in 4 ml di sodio idrossido

eifargonoM

ilareneG
p.f.: circa 314 ‘C con decomposizione. 0,1M e diluendo a 10 ml con acqua R. Eluire per un per-
corso di circa 12 cm usando come fase mobile lo strato
Acido 12-idrossistearico . C18H36O3. (Mr 300,5). superiore ottenuto per agitazione di 20 volumi di
1099000. [106-14-9]. Acido 12-idrossiottadecanoico. acqua R, 40 volumi di acido acetico glaciale R e
Polvere bianca. 40 volumi di toluene R. Lasciar asciugare la lastra all'a-

ehcituecamraF
p.f.: da 71 ‘C a 74 ‘C. ria e esaminare a luce ultravioletta a 254 nm. Il croma-

emroF
. HI. (Mr 127,9). 1098900. [10034-85-2]. togramma presenta solo una macchia principale.
. 1047800. [50-21-5]. Vedere la monografia
Acido iodidrico

Preparare per distillazione di acido iodidrico su fosforo Acido lattico

Acido lattico (0458).

rosso, facendo passare anidride carbonica R o azoto R
nell'apparecchiatura durante la distillazione. Usare la Acido lattobionico . C12H22O12. (Mr 358,3). 1101600.
[96-82-2].
eiretaM
frazione incolore o quasi incolore, che distilla tra

emirP
126 ‘C e 127 ‘C (55-58 per cento di HI). Porre l'acido Polvere cristallina bianca, molto solubile in acqua, pra-
in una bottiglia piccola di vetro ambrato con tappo a ticamente insolubile in alcool.
smeriglio in cui e© stato fatto passare in precedenza un p.f.: circa 115 ‘C.
ehcituecamraF

flusso di anidride carbonica R o di azoto R e sigillare . 1050600. [110-16-7]. Acido Z-buten-

inoizaraperP

ehcificepS

con paraffina.
Acido maleico

dioico. Vedere la monografia Acido maleico (0365).

Conservare al buio. Acido metacrilico . C4H6O2. (Mr 86,1). 1101800.
Acido iodoacetico . C2H3IO2. (Mr 185,9). 1107000. [79-41-4]. Acido 2-metil-2-propenoico.
[64-69-7]. Liquido incolore.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Cristalli incolori o bianchi, solubili in acqua e in alcool. n20D : circa 1,431.

p.f.: da 82 ‘C a 83 ‘C. p.e.: circa 160 ‘C.
Acido 2-iodobenzoico . C7H5IO2. (Mr 248,0). 1046100. p.f.: circa 16 ‘C.
[88-67-5]. Acido metafosforico . (HPO3)x. 1053000. [37267-86-0].
Polvere cristallina bianca o leggermente gialla, poco Grumi o bastoncini di aspetto vitreo contenenti una
solubile in acqua, solubile in alcool.
ecidnI

certa proporzione di sodio metafosfato, igroscopici,

p.f.: circa 160 ‘C. solubilissimi in acqua.

387
Reattivi

Nitrati. Bollire 1,0 g con 10 ml di acqua R, raffreddare, Solfati (2.4.13). Evaporare a secco 10 g con 0,2 g di sodio
aggiungere 1 ml di carminio indaco soluzione R, 10 ml carbonato R. Disciogliere il residuo in 15 ml di acqua
di acido solforico esente da azoto R e scaldare fino all'e- distillata R. La soluzione soddisfa al saggio limite per i
bollizione. La colorazione blu non svanisce completa- solfati (2 ppm). Preparare la soluzione di riferimento
mente. usando una miscela di 2 ml di soluzione standard di sol-
Sostanze riducenti. Non piu© dello 0,01 per cento, fato (SO4 10 ppm) R e 13 ml di acqua distillata R.
calcolato come H3PO3. Disciogliere 35,0 g in 50 ml di Arsenico (2.4.2). Scaldare gradualmente 50 g con 0,5 ml
acqua R. Aggiungere 5 ml di una soluzione (200 g/l) di di acido solforico R fino a sviluppo di fumi bianchi.
acido solforico R, 50 mg di potassio bromuro R e 5,0 ml Aggiungere al residuo 1 ml di una soluzione (100 g/l)
di potassio bromato 0,02 M e scaldare a b.m. per di idrossilammina cloridrato R e diluire a 2 ml con
30 min. Lasciar raffreddare e aggiungere 0,5 g di potas- acqua R. La soluzione soddisfa al saggio limite A per
sio ioduro R. Titolare lo iodio liberatosi con sodio tiosol- l'arsenico (0,02 ppm). Preparare la soluzione di riferi-
fato 0,1 M, usando 1 ml di amido soluzione R come indi- mento utilizzando 1,0 ml di soluzione standard di arse-
catore. Effettuare una prova in bianco. nico (As 1 ppm) R.
1 ml di potassio bromato 0,02 M equivale a 4,10 mg di Metalli pesanti (2.4.8). Diluire 10 ml della soluzione pre-
H3PO3. parata per il saggio limite per il ferro a 20 ml con
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. acqua R. 12 ml della soluzione soddisfano al saggio
. CH4O3S. (Mr 96,1). 1053100. limite A per i metalli pesanti (2 ppm). Preparare la solu-
Acido metansolfonico

[75-75-2]. zione di riferimento usando la soluzione standard di

piombo (Pb 2 ppm) R.
Liquido incolore, limpido, che solidifica a circa 20 ‘C, Ferro (2.4.9). Disciogliere il residuo ottenuto nella
miscibile con acqua, poco solubile in toluene, pratica- determinazione delle ceneri solforiche in 1 ml di acido
mente insolubile in esano. cloridrico diluito R e diluire a 50 ml con acqua R. 5 ml
d2020 : circa 1,48. della soluzione, diluiti a 10 ml con acqua R, soddisfano
n20D : circa 1,430. al saggio limite per il ferro (1 ppm).
Acido metossifenilacetico . C9H10O3. (Mr 166,2). Ceneri solforiche. Evaporare a secco, con cautela, 100 g
1053600. [7021-09-2]. Acido (RS)-2-Metossi-2-feni- della sostanza in esame. Inumidire il residuo con qual-
lacetico. che goccia di acido solforico R e scaldare fino al rosso
Polvere bianca cristallina o cristalli bianchi o quasi scuro. Il residuo non supera lo 0,001 per cento.
bianchi, moderatamente solubili in acqua, molto solu- Determinazione quantitativa. A 1,50 g aggiungere circa
bili in alcool e in etere. 50 ml di acqua R e titolare con sodio idrossido 1 M,
p.f.: circa 70 ‘C. usando 0,1 ml di rosso metile soluzione R come indica-
Conservare in un luogo fresco. tore.
. HNO3. (Mr 63,0). 1058400. [7697-37-2]. 1 ml di sodio idrossido 1 M equivale a 63,0 mg di HNO3.
Conservare al riparo dalla luce.
Acido nitrico

Contiene non meno del 63,0 per cento m/m e non piu©
del 70,0 per cento m/m di HNO3. Acido nitrico diluito . 1058402.
Liquido incolore o quasi incolore, limpido, miscibile Contiene circa 125 g/l di HNO3 (Mr 63,0).
con acqua. Diluire 20 g di acido nitrico R a 100 ml con acqua R.
d2020 : da 1,384 a 1,416. Acido nitrico esente da cadmio e da .
piombo

Una soluzione 10 g/l e© fortemente acida e da© la reazione 1058401.

caratteristica dei nitrati (2.3.1). Soddisfa ai requisiti prescritti per l'acido nitrico R e
Aspetto. L'acido nitrico e© limpido (2.2.1) e non piu© agli ulteriori saggi seguenti:
intensamente colorato della soluzione di riferimento Soluzione in esame. A 100 g aggiungere 0,1 g di
G6 (Metodo II, 2.2.2). sodio carbonato anidro R e evaporare a secco.
Cloruri (2.4.4). A 5 g aggiungere 10 ml di acqua R e Disciogliere il residuo con acqua R scaldando leg-
0,3 ml di argento nitrato soluzione R2 e lasciare a riposo germente e diluire a 50,0 ml con lo stesso solvente.
per 2 min proteggendo dalla luce. Un'eventuale opale- Cadmio. Non piu© di 0,1 ppm di cadmio (Cd) deter-
scenza non e© piu© intensa di quella di una soluzione di minato mediante spettrometria di assorbimento
riferimento preparata nello stesso modo usando 13 ml atomico (Metodo II, 2.2.23) misurando l'assorbanza
di acqua R, 0,5 ml di acido nitrico R, 0,5 ml di soluzione a 228,8 nm, utilizzando una lampada a catodo cavo
standard di cloruro (Cl 5 ppm) R e 0,3 ml di argento al cadmio ed una fiamma aria-acetilene o aria-pro-
nitrato soluzione R2 (0,5 ppm). pano.

388
 Reattivi

inoizircserP
Piombo. Non piu© di 0,1 ppm di piombo (Pb) deter- . HClO4. (Mr 100,5). 1062900.

ilareneG
Acido perclorico

minato mediante spettrometria di assorbimento [7601-90-3].

atomico (Metodo II, 2.2.23) misurando l'assorbanza Contiene non meno del 70,0 per cento m/m e non piu©
a 283,3 nm o a 217,0 nm usando una lampada a del 73,0 per cento m/m di HClO4.
catodo cavo al piombo ed una fiamma aria-aceti- Liquido incolore, limpido, miscibile con acqua.
lene.

isilanA id
idoteM
d2020 : circa 1,7.
Acido nitrico esente da piombo . 1058403. Determinazione quantitativa. A 2,50 g aggiungere 50 ml
Soddisfa ai requisiti prescritti per l'acido nitrico R e di acqua R e titolare con sodio idrossido 1 M, usando
all'ulteriore saggio seguente: 0,1 ml di rosso metile soluzione R come indicatore.

irotinetnoC
1 ml di sodio idrossido 1 M equivale a 100,5 mg di

/ ilairetaM
A 100 g aggiungere 0,1 g di sodio carbonato HClO4.
anidro R e evaporare a secco. Disciogliere il residuo
in acqua R, scaldando leggermente, e diluire a Acido perclorico soluzione . 1062901.
50,0 ml con lo stesso solvente. Determinare il con- Diluire 8,5 ml di acido perclorico R a 100 ml con
tenuto di piombo mediante spettrometria di assor- acqua R.
bimento atomico (Metodo II, 2.2.23) misurando

ivittaeR
l'assorbanza a 283,3 nm o a 217,0 nm usando una Acido periodico . H5IO6 (Mr 227,9). 1108900.
lampada a catodo cavo al piombo ed una fiamma [10450-60-9].
aria-acetilene. Contiene non piu© di 0,1 ppm di Cristalli molto solubili in acqua e solubili in alcool.
piombo (Pb). p.f.: circa 122 ‘C

itnemogrA
. 1063000.

ilareneG
Acido periodico soluzione acetica

Acido nitrico Pb R . Vedere: Acido nitrico esente da Disciogliere 0,446 g di sodio periodato R in 2,5 ml di una
piombo R. soluzione al 25 per cento V/V di acido solforico R.
Acido nitrico fumante . 1058500. [52583-42-3]. Diluire a 100,0 ml con acido acetico glaciale R.
Liquido leggermente giallastro, limpido, fumante a . C6H3N3O7. (Mr 229,1). 1065800. [88-89-1].

eifargonoM
Acido picrico

ilareneG
contatto con l'aria. 2,4,6-Trinitrofenolo.
d2020 : circa 1,5. Prismi o pagliette gialle, solubili in acqua e in alcool.
. C6H9NO6. (Mr 191,1). 1137400. Conservare inumidito con acqua R.
Acido nitrilotriacetico

[139-13-9]. . 1065801. Trinitrofenolo

ehcituecamraF
Acido picrico soluzione

soluzione.
Polvere cristallina bianca, insolubile in acqua e in molti

emroF
solventi organici. Soluzione 10 g/l.
. 1065802.
p.f.: circa 240 ‘C, con decomposizione.
Acido picrico soluzione R1

Preparare 100 ml di una soluzione satura di acido

Acido ossalico . C2H2O4.2H2O. (Mr 126,1). 1061400. picrico R e aggiungere 0,25 ml di sodio idrossido
[6153-56-6]. Acido etandioico diidrato. soluzione concentrata R.
eiretaM

emirP
Cristalli bianchi, solubili in acqua, molto solubili in .
alcool. Acido picrico in litio carbonato soluzione alcalina

Disciogliere 0,25 g di litio carbonato R e 0,5 g di acido

. 1061401. picrico R in 80 ml di acqua R calda. Raffreddare e
ehcituecamraF

Acido ossalico soluzione solforica

diluire a 100 ml con acqua R.

inoizaraperP

Soluzione 50 g/l di acido ossalico R in una miscela

ehcificepS

raffreddata di uguali volumi di acido solforico R e Acido piruvico . C3H4O3. (Mr 88,1). 1109300. [127-17-3].
di acqua R. Acido 2-ossopropanoico.
Liquido giallastro, miscibile con acqua, con etanolo e
. C16H32O2. (Mr 256,4). 1061600. con etere.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Acido palmitico

[57-10-3]. Acido esadecanoico. d2020 : circa 1,267.

Scaglie cristalline, bianche, praticamente insolubili in n20D : circa 1,413.
acqua, molto solubili in alcool caldo ed in etere. p.e.: circa 165 ‘C.
p.f.: circa 63 ‘C. Acido propionico . C3H6O2. (Mr 74,1). 1072400.
Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono- [79-09-4].
ecidnI

grafia Cloramfenicolo palmitato (0473); il cromato- Liquido oleoso, solubile in alcool e in etere, miscibile
gramma presenta solo una macchia principale. con acqua.

389
Reattivi

d2020 : circa 0,993. nitrito R. Lasciare a riposo a 0 ‘C per 15 min (se

n20D : circa 1,387. conservato a questa temperatura, la soluzione e©
p.e.: circa 141 ‘C. stabile per 3 giorni) e immediatamente prima del-
p.f.: circa ^21 ‘C. l'uso aggiungere 20 ml di una soluzione al 10 per
cento m/V di sodio carbonato R.
Acido ricinoleico . C18H34O3. (Mr 298,5). 1100100. . Vedere
[141-22-0]. Acido 12-idrossioleico. Acido solfanilico diazotato soluzione

acido diazobenzensolfonico soluzione R1.

R1

Liquido viscoso giallo o bruno-giallastro costituito da

una miscela di acidi grassi ottenuta per idrolisi dell'olio Acido solfidrico. H2S. (Mr 34,08). 1044000. [7783-06-4].
di ricino, praticamente insolubile in acqua, solubilis- Gas, poco solubile in acqua.
simo in etanolo, solubile in etere. Acido solfidrico R1 . H2S. (Mr 34,08). 1106600.
d2020 : circa 0,942. Contiene non meno del 99,7 per cento V/V di H2S.
n20D : circa 1,472.
p.f.: circa 285 ‘C, con decomposizione. Acido solfidrico soluzione . Idrogeno solfuro solu-
Acido rosmarinico . C18H16O8. (Mr 360,3). 1138300. zione, acqua solfidrica.
[20283-92-5]. Soluzione, preparata di recente, di idrogenosolfuro R
p.f.: da 170 ‘C a 174 ‘C. in acqua R. Contiene lo 0,4-0,5 per cento di H2S.
Acido salicilico . 1075600. [69-72-7]. Vedere la monogra- . H2SO4. (Mr 98,1). 1086800. [7664-93-9].
fia Acido salicilico (0366).
Acido solforico

Contiene non meno del 95,0 per cento m/m e non piu©
Acido selenioso . H2SeO3. (Mr 129,0). 1100200. del 97,0 per cento m/m di H2SO4.
[7783-00-8]. Liquido caustico di consistenza oleosa, incolore, molto
Cristalli deliquescenti, molto solubili in acqua. igroscopico, miscibile con acqua e con alcool con svi-
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. luppo di intenso calore.
Acido sialico . 1001100. [131-48-6].Vedere acido N-acetil- d2020 : da 1,834 a 1,837.
neuramminico R. Una soluzione 10 g/l e© fortemente acida e da© le reazioni
Acido silicotungstico . H4SiW12O40.xH2O. 1078000. caratteristiche dei solfati (2.3.1).
[11130-20-4]. Aspetto. E' limpido (2.2.1) ed incolore (Metodo II, 2.2.2).
Cristalli bianchi o bianco-giallastri, deliquescenti, solu- Sostanze ossidabili. Versare cautamente 20 g, raffred-
bilissimi in acqua e in alcool. dando, in 40 ml di acqua R. Aggiungere 0,5 ml di potas-
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. sio permanganato 0,002 M. La colorazione violetta per-
Acido solfammico . H3NO3S. (Mr 97,1). 1085900. siste per almeno 5 min.
[5329-14-6]. Cloruri. Versare 10 g, cautamente e raffreddando, in
Polvere cristallina o cristalli bianchi, molto solubili in 10 ml di acqua R e dopo aver raffreddato diluire a
acqua, moderatamente solubili in acetone, in alcool e 20 ml con lo stesso solvente. Aggiungere 0,5 ml di
in metanolo, praticamente insolubili in etere. argento nitrato soluzione R2. Lasciare a riposo per
p.f.: circa 205 ‘C, con decomposizione 2 min al riparo dalla luce viva. La soluzione non e© piu©
. C6H7NO3S. (Mr 173,2). 1086200. [121- opalescente di una soluzione di riferimento preparata
Acido solfanilico

57-3]. Acido 4-amminobenzensolfonico. contemporaneamente usando una miscela di 1 ml di

Cristalli incolori, moderatamente solubili in acqua, soluzione standard di cloruro (Cl 5 ppm) R, 19 ml di
praticamente insolubili in alcool. acqua R e 0,5 ml di argento nitrato soluzione R2
(0,5 ppm).
Acido solfanilico soluzione R1 . 1086201. Nitrati. Versare 50 g o 27,2 ml, cautamente e raffred-
Disciogliere 0,5 g di acido solfanilico R in una dando, in 15 ml di acqua R. Aggiungere 0,2 ml di una
miscela di 75 ml di acido acetico diluito R e 75 ml soluzione (50 g/l) di brucina R in acido acetico glaciale
di acqua R. R, preparata di recente . Dopo 5 min un'eventuale colo-
Acido solfanilico diazotato soluzione . 1086202. razione non e© piu© intensa di quella di una miscela di
Disciogliere, scaldando, 0,9 g di acido solfanilico R riferimento preparata nello stesso modo e contenente
in 9 ml di acido cloridrico R e diluire a 100 ml con 12,5 ml di acqua R, 50 g di acido solforico esente
acqua R. Raffreddare 10 ml di questa soluzione in da azoto R, 2,5 ml di soluzione standard di nitrato
acqua ghiacciata ed aggiungere 10 ml di una solu- (NO3 10 ppm) R e 0,2 ml di una soluzione (50 g/l) di
zione ghiacciata al 4,5 per cento m/V di sodio brucina R in acido acetico glaciale R (0,5 ppm).

390
 Reattivi

inoizircserP
Ammonio. Versare cautamente 2,5 g in acqua R, raf- di etanolo R. Lasciare raffreddare e diluire a

ilareneG
freddando, e diluire a 20 ml con lo stesso solvente. Raf- 100 ml con etanolo R. Preparare immediatamente
freddare e aggiungere goccia a goccia 10 ml di una prima dell'uso.
soluzione (200 g/l) di sodio idrossido R, seguiti da 1 ml . 1086804.
di potassio tetraiodomercurato soluzione alcalina R. La
Acido solforico diluito

colorazione della soluzione non e© piu© intensa di quella Contiene 98 g/l di H2SO4.

isilanA id
idoteM
di una miscela di 5 ml della soluzione standard di ammo- Aggiungere 5,5 ml di acido solforico R a 60 ml di
nio (NH4 1 ppm) R, 15 ml di acqua R, 10 ml di una solu- acqua R, lasciare raffreddare e diluire a 100 ml
zione (200 g/l) di sodio idrossido R e 1 ml di potassio con lo stesso solvente.
tetraiodomercurato soluzione alcalina R (2 ppm). Determinazione quantitativa. In una beuta con
tappo a smeriglio contenente 30 ml di acqua R,

irotinetnoC
/ ilairetaM
Arsenico (2.4.2). A 50 g aggiungere 3 ml di acido nitrico R introdurre 10,0 ml dell'acido solforico diluito. Tito-
e evaporare cautamente finchë il volume si riduce a circa lare con sodio idrossido 1 M, usando 0,1 ml di rosso
10 ml. Lasciar raffreddare, aggiungere al residuo 20 ml metile soluzione R come indicatore.
di acqua R e concentrare a 5 ml. La soluzione soddisfa al
saggio limite A per l'arsenico (0,02 ppm). Preparare la 1 ml di sodio idrossido 1 M equivale a 49,04 mg di
soluzione di riferimento usando 1,0 ml di soluzione stan- H2SO4.

ivittaeR
dard di arsenico (As1ppm) R. Acido solforico e formaldeide reattivo . 1086805.
Metalli pesanti (2.4.8). Diluire 10 ml della soluzione Mescolare 2 ml di formaldeide soluzione R con
ottenuta con il saggio per il ferro a 20 ml con acqua R. 100 ml di acido solforico R.
12 ml della soluzione soddisfano al saggio limite A per . 1086806.

itnemogrA
Acido solforico esente da azoto

ilareneG
i metalli pesanti (2 ppm). Preparare la soluzione di rife- Soddisfa ai requisiti prescritti per l'acido solfo-
rimento utilizzando la soluzione standard di piombo rico R e all'ulteriore saggio seguente:
(Pb 2 ppm) R. Nitrati. A 5 ml di acqua R aggiungere cautamente
Ferro (2.4.9). Disciogliere il residuo ottenuto dalla calci- 45 ml dell'acido solforico, lasciare raffreddare a
nazione, scaldando leggermente, in 1 ml di acido clori- 40 ‘C e aggiungere 8 mg di difenilbenzidina R. La

eifargonoM

ilareneG
drico diluito R e diluire a 50,0 ml con acqua R. 5 ml della soluzione e© debolmente rosata o blu molto chiaro.
soluzione, diluiti a 10 ml con acqua R, soddisfano al . 1086803.
saggio limite per il ferro (1 ppm).
Acido solforico soluzione alcoolica

Aggiungere, cautamente agitando e raffreddando

Residuo alla calcinazione. Non superiore allo 0,001 per costantemente, 20 ml di acido solforico R in 60 ml

ehcituecamraF
cento, determinato su 100 g per cauta evaporazione in di alcool R. Lasciar raffreddare e diluire a 100 ml

emroF
un piccolo crogiolo, su fiamma diretta e calcinazione con alcool R. Preparare immediatamente prima
al rosso del residuo. dell'uso.
Determinazione quantitativa. Pesare accuratamente una . SO2 (Mr 64,1).
beuta con tappo a smeriglio contenente 30 ml di
Acido solforoso soluzione

acqua R, introdurre 0,8 ml dell'acido solforico, raffred- Soluzione acquosa contenente il 5 per cento di SO2.

eiretaM
d2020 : circa 1,03.

emirP
dare e pesare di nuovo. Titolare con sodio idrossido
1 M, usando 0,1 ml di rosso metile soluzione R come Usare una soluzione preparata di recente e conservare
indicatore. in un luogo fresco.
1 ml di sodio idrossido 1 M equivale a 49,04 mg di . C7H6O6S.2H2O. (Mr 254,2).
ehcituecamraF

Acido solfosalicilico
inoizaraperP

1086600. [5965-83-3]. Acido 2-idrossi-5-solfobenzoico

ehcificepS

H2SO4. diidrato.
Conservare in un recipiente con tappo a smeriglio di Polvere cristallina o cristalli, bianchi, solubilissimi in
vetro o di altro materiale inerte. acqua e in alcool, solubili in etere.
p.f.: circa 109 ‘C.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Acido solforico alcoolico 0,25 M . 1086802. Acido stearico . C18H36O. (Mr 284,5). 1085200. [57-11-4].
Diluire 10 ml di acido solforico alcoolico 2,5 M R a Acido ottadecanoico.
100 ml con etanolo R. Preparare immediatamente Polvere bianca o fiocchi, untuosi al tatto, praticamente
prima dell'uso. insolubili in acqua, solubili in alcool caldo e in etere.
Acido solforico alcoolico 2,5 M . 1086801. p.f.: circa 70 ‘C.
ecidnI

Aggiungere, cautamente agitando e raffreddando Acido succinico . C4H6O4. (Mr 118,1). 1085600. [110-15-6].
costantemente, 14 ml di acido solforico R in 60 ml Acidobutandioico.

391
Reattivi

Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, solubili in Acido 2,4,6-trinitrobenzensolfonico . C6H3N3O9S.3H2O.

acqua e in alcool. (Mr 347,2). 1117500. [2508-19-2].
p.f.: da 184 ‘C a 187 ‘C. Polvere cristallina bianca, solubile in acqua.
Acido tannico . 1087100. [1401-55-4]. p.f.: da 190 ‘C a 195 ‘C.
Scaglie lucenti da giallastre a marrone chiaro o polvere . C15H22O2. (Mr 234,3). Acido (E)-3-
amorfa, solubilissime in acqua, molto solubili in alcool, Acido valerenico

(4S,7R,7aR)-3,7-dimetil-2,4,5,6,7,7a-esaidro-1H-inden-
solubili in acetone, praticamente insolubili in etere. 4-il-2-metil-2-propenoico.
Conservare al riparo dalla luce.
. 1087200. [87-69-4]. Vedere la monogra- Polvere bianca o beige, praticamente insolubile in
Acido tartarico

fia Acido tartarico (0460). acqua, solubile in alcool, in diclorometano e in etere.

Acido 2-(2-tienil)acetico . C6H6O2S. (Mr 142,1). 1089500. p.f.: da 135 ‘C a 139 ‘C (misurato in un tubo capillare).
[1918-77-0]. Assorbanza. (2.2.25). La soluzione in alcool R presenta
Polvere bruna. un massimo di assorbimento a 214 nm. Determinata a
p.f.: circa 65 ‘C. questo massimo, l'assorbanza specifica e© circa 14900.
. C4H4N2O2S. (Mr 144,2). 1111200. Acido valeriaco . C5H10O2. (Mr 102,1).1095200. [109-52-4].
Acido pentanoico. Acido valerico.
Acido tiobarbiturico

[504-17-6]. 4,6-Diidrossi-2-sulfanilpirimidina.
Acido tioglicolico . C2H4O2S. (Mr 92,1). 1089700. Liquido incolore, solubile in acqua, molto solubile in
[68-11-1]. Acido 2-mercaptoacetico. alcool e in etere.
Liquido incolore, miscibile con acqua, solubile in d2020 : circa 0,94.
alcool. n20D : circa 1,409.
. C7H8O3S.H2O. (Mr 190,2).
p.e.: circa 186 ‘C.
Acido toluensolfonico

1091600. [6192-52-5]. Acido p-toluensolfonico, Acido

4-metilbenzensolfonico monoidrato. Acqua . 1095500. [7732-18-5]. Vedere la monografia
Contiene non meno dell'87,0 per cento di C7H8O3S. Acqua depurata (0008).
Polvere cristallina o cristalli, bianchi, molto solubili in
acqua, solubili in alcool e in etere. Acqua distillata . 1095504. [7732-18-5].
Acido toluensolfonico 0,005 M . Disciogliere 0,951 g di Acqua R preparata per distillazione.
acido toluensolfonico R in diossano R contenente 10 g/l
di fenolo R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. Acqua esente da ammonio . 1095501. [7732-18-5].
Acido tricloroacetico . C2HCl3O2. (Mr 163,4). 1092500. A 100 ml di acqua R aggiungere 0,1 ml di acido sol-
[76-03-9]. forico R. Distillare usando l'apparecchiatura
Cristalli incolori o massa cristallina, molto delique- descritta per la determinazione dell'intervallo di
scenti, solubilissimi in acqua e in alcool. distillazione (2.2.11). Scartare i primi 10 ml e racco-
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. gliere i successivi 50 ml.
. 1092501. Acqua esente da anidride carbonica. 1095502.
[7732-18-5].
Acido tricloroacetico soluzione

Disciogliere 40,0 di acido tricloroacetico R in

acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. Acqua R bollita per qualche minuto e protetta dal-
Verificare la concentrazione mediante titolazione l'atmosfera durante il raffreddamento e la conser-
con sodio idrossido 0,1 M e correggere se necessario vazione.
a 40 1 g/l.
6
Acqua esente da nitrato . 1095506. [7732-18-5].
Acido trifluoroacetico . C2HF3O2. (Mr 114,0). 1093200. A 100 ml di acqua R aggiungere qualche milli-
[76-05-1]. grammo di potassiopermanganatoR e di barioidros-
Contiene non meno del 99 per cento di C2HF3O2. sidoR. Distillare usando l'apparecchiatura descritta
Liquido, miscibile con acetone, con alcool e con etere. per la determinazione dell'intervallo di distillazione
d2020 : circa 1,53. (2.2.11). Scartare i primi 10 ml e raccogliere i succes-
p.e.: circa 72 ‘C. sivi 50 ml.
Usare una qualita© idonea per la determinazione della Acqua esente da particelle . 1095507. [7732-18-5]
sequenza nelle proteine. Filtrare acqua R su una membrana con porosita© di
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. 0,22 mm.

392
 Reattivi

inoizircserP
. 1095503. [7732-18-5]. proteine con masse molecolari relative comprese tra

ilareneG
Acqua per cromatografia

Acqua R deionizzata con una resistivita© non infe- 6 104 e 20 106 e di polisaccaridi
2 2 con masse molecolari
riore a 0,18 Mohm m.1
relative comprese tra 3 103 e 5 106.
2 2

. 1095505. Agarosio-DEAE per cromatografia a scambio ionico .

1002100. [57407-08-6].
Acqua per preparazioni iniettabili

[7732-18-5].Vedere la monografia Acqua per prepa-

isilanA id
razioni iniettabili (0169). Agarosio reticolato sostituito con gruppi dietilammi-

idoteM
. Vedere bario idrossido soluzione R. noetilici; si presenta sotto forma di granuli.
Acqua di barite

. 1012402. Agarosio per elettroforesi . 1002000. [9012-36-6].

Acqua di bromo

Agitare 3 ml di bromo R con 100 ml di acqua R fino a Polisaccaride lineare, neutro, il cui componente princi-

irotinetnoC
pale e© derivato dall'agar.

/ ilairetaM
saturazione. Polvere bianca o quasi bianca, praticamente insolubile
Conservare sopra un eccesso di bromo R, al riparo dalla in acqua fredda, molto poco solubile in acqua calda.
luce. Agarosio-poliacrilammide reticolato . 1002200.
. 1012403. Agarosio incluso entro una struttura poliacrilammidica

ivittaeR
Acqua di bromo R1

Agitare 0,5 ml di bromo R con 100 ml di acqua R. reticolata; e© utilizzato per la separazione di proteine
globulari4 con masse molecolari relative comprese
Conservare al riparo dalla luce non piu© a lungo di tra 2 10 e 35 104.
2 2
una settimana. Agarosio reticolato per . 1001900.
cromatografia

. Vedere calcio idrossido soluzione R. [61970-08-9].

itnemogrA
ilareneG
Acqua di calce

. Vedere idrogeno perossido R. Preparato dall'agarosio per reazione con 2,3-dibromo-

propanolo in condizioni fortemente alcaline.
Acqua ossigenata

. C3H5NO. (Mr 71,1). 1001500. [79-06-1].

Costituito da sfere rigonfie con diametro di 60-140 mm,
Acrilammide

Propenammide.
Fiocchi incolori o bianchi o polvere cristallina bianca o si presenta come una sospensione al 4 per cento in

eifargonoM
acqua R. E' utilizzato in cromatografia per esclusione

ilareneG
quasi bianca, solubilissimi in acqua e in metanolo, per la separazione di proteine con masse molecolari
molto solubili in etanolo. relative comprese tra 6 104 e 20 106 e di polisaccaridi
p.f.: circa 84 ‘C.
2 2

con masse molecolari relative comprese tra 3 103 e

2

5 10 .6

ehcituecamraF
Acrilammide 30 per cento/bisacrilammide (29:1) 2

soluzione . 1001501. . 1001901.

emroF
Agarosio reticolato per cromatografia R1

Preparare una soluzione contenente 290 g di acri- [65099-79-8].

lammide R e 10 g di metilenbisacrilammide R per Preparato dall'agarosio per reazione con 2,3-dibro-
litro di acqua R. Filtrare. mopropanolo in condizioni fortemente alcaline.
Costituito da sfere rigonfie con diametro di
60-140 mm, si presenta come una sospensione al
eiretaM

emirP
Acrilammide 30 per cento/bisacrilammide (36,5:1)

soluzione . 1001502. 4 per cento in acqua R. Utilizzato in cromatografia

Preparare una soluzione contenente 292 g di acri- per esclusione per la separazione di proteine con
lammide R e 8 g di metilenbisacrilammide R per masse 6molecolari relative comprese tra 7 104 e 2

litro di acqua R. Filtrare. 40 10 e di polisaccaridi5 con masse molecolari

ehcituecamraF
inoizaraperP

2
ehcificepS

relative comprese tra 1 10 e 2 107.

. C10H13N5O4. (Mr 267,2). 1001600. [58-61-7].
2 2
Adenosina

6-Ammino-9- -d-ribofuranosil-9H-purina.
b Alanina . 1102900. [56-41-7]. Vedere la monografia Ala-
Polvere cristallina bianca, poco solubile in acqua, prati- nina (0752).
camente insolubile in acetone, in alcool e in etere. Si . 1004500. [107-95-9]. Vedere acido 3-ammino-
ehcitapoemO
inoizaraperP

b-Alanina

scioglie nelle soluzioni diluite di acidi. propionico R.

p.f.: circa 234 ‘C. Albumina bovina . 1002300. [9048-46-8].
Agar .Vedere la monografia Agar (0310). Albumina sierica bovina contenente il 96 per cento
Agarosio per cromatografia . 1001800. [9012-36-6]. circa della proteina.
Granuli rigonfi con diametro di 60-140 mm, disponibili Polvere da bianca a bruno-giallastra chiara.
ecidnI

come sospensione al 4 per cento in acqua R. Utilizzato Acqua (2.5.12). Non piu© del 3,0 per cento, determinata
in cromatografia per esclusione per la separazione di su 0,800 g.

393
Reattivi

L'albumina bovina utilizzata nel dosaggio biologico del Alcool isopropilico R1 .Vedere 2-propanolo R1.
Tetracosactide e© esente da pirogeni ed esente da attivita© . C12H26O. (Mr 186,3). 1119900.
proteolitica, quando esaminata mediante metodi idonei,
Alcool laurilico

[112-53-8]. 1-Dodecanolo.
per esempio usando un substrato cromogenico, ed esente d2020 : circa 0,820.
da attivita© corticosteroide determinata mediante misura- p.f.: da 24 ‘C a 27 ‘C.
zione della fluorescenza come descritto nel dosaggio bio-
logico del Tetracosactide (0644). Alcool metilico . Vedere metanolo R.
. 1133800. Alcool metilico anidro . Vedere metanolo anidro R.
. C14H30O. (Mr 214,4). 1121300.
Albumina umana

Albumina sierica umana contenente non meno del 96 Alcool miristilico

[112-72-1]. 1-Tetradecanolo.
per cento di albumina.
. 1002400. [9048-46-8]. d2020 : circa 0,823.
p.f.: da 38 ‘C a 40 ‘C.
Albumina umana soluzione

Vedere la monografia Albumina umana soluzione

(0255). Alcool propilico normale . Vedere propanolo R.
Albumina umana soluzione R1 . 1002401. Alcool tert
-pentilico . C5H12O. (Mr 88,1). 1062700.
Diluire l'albumina umana soluzione R con una solu- [75-85-4]. Alcool tert-amilico. 2-Metil-2-butanolo. Ami-
zione (9 g/l) di sodio cloruro R in modo da ottenere lene idrato.
una concentrazione di 1 g/l della proteina. Portare Liquido infiammabile, volatile, molto solubile in acqua,
il pH a 3,5-4,5 con acido acetico glaciale R. miscibile con alcool, con etere e con glicerolo.
. C2H6O. (Mr 46,07). 1002500. [64-17-5].Vedere la d2020 : circa 0,81.
Alcool

monografia Etanolo 96 per cento (1317). Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per
x V/V. 1002502. cento distilla tra 100 ‘C e 104 ‘C.
Alcool a per cento

Mescolare volumi appropriati di acqua R e di Conservare al riparo dalla luce.

alcool R, tenendo conto degli effetti del riscalda- Aldeide anisica . C8H8O2. (Mr 136,1). 1007300. [123-11-5].
mento e di contrazione del volume inerenti alla 4-Metossibenzaldeide. Anisaldeide.
preparazione di una tale miscela, per ottenere una Liquido oleoso, molto poco solubile in acqua, miscibile
soluzione il cui contenuto finale di alcool corri- con alcool e con etere.
sponda al valore di x. p.e.: circa 248 ‘C.
. 1002501. L'aldeide anisica utilizzata in gas cromatografia soddisfa
Alcool esente da aldeide

Mescolare 1200 ml di alcool R con 5 ml di una solu- all'ulteriore saggio seguente:

zione (400 g/l) di argento nitrato R e 10 ml di una Determinazione quantitativa. Utilizzare la sostanza in
soluzione (500 g/l) raffreddata di potassio idros- esame come soluzione in esame mediante gas cromato-
sido R. Agitare, lasciare a riposo per qualche grafia (2.2.28) nelle condizioni descritte nella monogra-
giorno e filtrare. Distillare il filtrato immediata- fia Anice essenza (0804).
mente prima dell'uso. L'area del picco principale non e© inferiore al 99,0 per
cento dell'area totale dei picchi.
Alcool amilico terziario . Vedere alcool tert-pentilico R. Aldeide anisica soluzione . 1007301.
Alcool benzilico . 1010700. [100-51-6]. Vedere la mono- Mescolare, nell'ordine, 0,5 ml di aldeide anisica R,
grafia Alcool benzilico (0256). 10 ml di acido acetico glaciale R, 85 ml di meta-
Alcool butilico normale . Vedere butanolo R. nolo R e 5 ml di acido solforico R.
Alcool butilico secondario . Vedere 2-butanolo R1. Aldeide anisica soluzione R1 . 1007302.
Alcool butilico terziario . Vedere 2-metil-2-propanolo R. A 10 ml di aldeide anisica R aggiungere 90 ml di
. 1024700. Vedere decanolo R. alcool R, mescolare, aggiungere 10 ml di acido sol-
forico R e mescolare di nuovo.
Alcool caprico

Alcool cetostearilico . 1017500. [67762-27-0]. Vedere la

monografia Alcool cetostearilico (0702). Aldeide cinnamica . C9H8O. (Mr 132,1). 1020700.
Alcool isoamilico . C5H12O. (Mr 88,1). 1046900. [104-55-2]. 3-Fenilpropenale.
[123-51-3]. 3-Metil-1-butanolo. Liquido oleoso da giallastro a giallo-verdastro, poco
Liquido incolore, poco solubile in acqua, miscibile con solubile in acqua, solubilissimo in alcool e in etere.
alcool e con etere. d2020 : da 1,048 a 1,051.
p.e.: circa 130 ‘C. n20D : circa 1,620.
Alcool isobutilico . Vedere 2-metilpropanoloR. Conservare al riparo dalla luce, in un luogo fresco.

394
 Reattivi

inoizircserP
trans . C9H8O. (Mr 132,2). 1124600. p.e.: circa 49 ‘C.

ilareneG
Aldeide -cinnamica

[14371-10-9]. (E)-3-Fenil-2-propenale. p.f.: circa ^81 ‘C.

L'aldeide trans-cinnamica utilizzata in gas cromatografia . Vedere salicilaldeide R.
soddisfa all'ulteriore saggio seguente:
Aldeide salicilica

. C12H8Cl6. (Mr 364,9). 1123100. [309-00-2].

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Aldrin

p.e.: circa 145 ‘C.

isilanA id
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-

idoteM
fia Cannella di Cina essenza (1496). p.f.: circa 104 ‘C.
Il contenuto non e© inferiore al 99,0 per cento, calcolato Puo© essere usata una idonea e certificata soluzione di
mediante la procedura di normalizzazione. riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
. 1103000. Enzima ottenuto dal lie- . C14H7NaO7S.H2O. (Mr 360,3). 1002600.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Alizarina S

[130-22-3]. Schultz no. 1145. Colour Index No. 58005.

Aldeide deidrogenasi

vito utilizzato nei panifici, che ossida l'acetaldeide ad

acido acetico in presenza di nicotinammide-adenina Sodio 1,2-diidrossiantrachinon-3-solfonato. Sodio
dinucleotide, sali di potassio e tioli, a pH 8,0. 9,10-diidro-3,4-diidrossi-9,10-dioxoantracen-2-solfo-
nato monoidrato. Sodio alizarinsolfonato.
. 1103001. Discio- Polvere giallo-arancione, molto solubile in acqua e in

ivittaeR
Aldeide deidrogenasi soluzione

gliere in acqua R una quantita© di aldeide deidroge- alcool.

nasi R equivalente a 70 unita© e diluire a 10 ml con . 1002601. Sodio alizarinsolfo-
lo stesso solvente. La soluzione e© stabile per 8 h a
Alizarina S soluzione

nato soluzione.
4 ‘C. Soluzione 1 g/l.

itnemogrA
. Vedere 4-dimeti- Saggio di sensibilita© . Il reattivo mostra una colora-

ilareneG
Aldeide 4-dimetilamminocinnamica

lamminocinnamaldeide R. zione che vira dal giallo al rosso-arancione quando

. Vedere formaldeide R. viene esaminato come indicato per la standardizza-
zione del bario perclorato 0,05 M (4.2.2).
Aldeide formica

Aldeide ftalica . C8H6O2. (Mr 134,1). 1065300. [643-79-8].

Benzen-1,2-dicarbossaldeide. Viraggio. Da pH 3,7 (giallo) a pH 5,2 (violetto).

eifargonoM

ilareneG
Polvere gialla cristallina. Alizarina sodio solfonato .Vedere alizarina S R.
p.f.: circa 55 ‘C. Allume . Vedere alluminio e potassio solfato R.
Conservare al riparo dalla luce e dall'aria. Allume cromico . CrK(SO4)2.12H2O. (Mr 499,4).
. 1065301. 1019800. [7788-99-0]. Potassio cromico solfato.

ehcituecamraF
Aldeide ftalica reattivo

Disciogliere 2,47 g di acido borico R in 75 ml di Cristalli da rosso-violetti a neri, grandi, molto solubili

emroF
acqua R, portare a pH 10,4 usando una soluzione in acqua, praticamente insolubili in alcool.
(450 g/l) di potassio idrossido R e diluire a 100 ml Allume ferrico (ammonico) . Vedere ferro(-ico) ammo-
con acqua R. Disciogliere 1,0 g di aldeide ftalica R nico solfato R.
in 5 ml di metanolo R, aggiungere 95 ml della solu- . Al. (Ar 26,98). 1118200. [7429-90-5].
zione di acido borico e 2 ml di acido tioglicolico R
Alluminio

eiretaM
Metallo bluastro, bianco, malleabile, flessibile, disponi-

emirP
e portare a pH 10,4 con una soluzione (450 g/l) di bile come barre, lamine, polvere, strisce o fili. In
potassio idrossido R. ambiente umido forma una pellicola di ossido che pro-
Conservare al riparo dalla luce e usare entro tegge il metallo dalla corrosione.
3 giorni.
ehcituecamraF

Grado analitico.
inoizaraperP

ehcificepS

Aldeide glutarica . C5H8O2. (Mr 100,1). 1098300. . AlCl3.6H2O. (Mr 241,4). 1002700.
[111-30-8]. Glutaraldeide.
Alluminio cloruro

[7784-13-6]. Alluminio cloruro esaidrato.

Liquido oleoso, solubile in acqua. Contiene non meno del 98,0 per cento di AlCl3.6H2O.
n25D : circa 1,434. Polvere cristallina da bianca a leggermente giallastra,
ehcitapoemO
inoizaraperP

p.e.: circa 188 ‘C. igroscopica, molto solubile in acqua e in alcool, solu-
Aldeide propionica . C3H6O. (Mr 58,1). 1072300. bile in etere.
[123-38-6]. Propanale. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
Liquido molto solubile in acqua, miscibile con alcool e . 1002702.
con etere.
Alluminio cloruro reattivo

Disciogliere 2,0 g di alluminio cloruro R in 100 ml di

dD20 : circa 0,81.
ecidnI

una soluzione al 5 per cento V/V di acido acetico

n20D : circa 1,365. glaciale R in metanolo R.

395
Reattivi

Alluminio cloruro soluzione . 1002701. Effettuare il saggio di sensibilita© ogni volta che si
Disciogliere 65,0 g di alluminio cloruro R in usa il reattivo.
acqua R e diluire a 100 ml con lo stesso solvente. Saggio di sensibilita© . Una miscela di 1 ml di amido
Aggiungere 0,5 g di carbone attivato R, agitare per soluzione, 20 ml di acqua R, circa 50 mg di potassio
10 min, filtrare e aggiungere al filtrato, agitando ioduro R e 0,05 ml di iodio soluzione R1 e© blu.
in continuazione, una quantita© di una soluzione Amido soluzione R1 . 1085105.
(10 g/l) di sodio idrossido R sufficiente a portare il Mescolare 1 g di amido solubile R e una piccola
pH a circa 1,5 (circa 60 ml). quantita© di acqua R fredda. Aggiungere questa
. 1003000. [7784-24-9]. miscela, agitando, a 200 ml di acqua R bollente.
Aggiungere 250 mg di acido salicilico R e bollire
Alluminio e potassio solfato

Vedere la monografia Allume (0006).

. Al(NO3)3.9H2O. (Mr 375,1). 1002800. per 3 min. Rimuovere immediatamente dal calore
Alluminio nitrato

[7784-27-2]. Alluminio nitrato nonaidrato. e raffreddare.

Cristalli, deliquescenti, solubilissimi in acqua e alcool, Se e© richiesta una lunga conservazione, la soluzione
molto poco solubili in acetone. dovrebbere essere conservata ad una temperatura
compresa tra 4 ‘C e 10 ‘C. Dovrebbe essere prepa-
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. rata di recente una soluzione di amido se il punto
Alluminio ossido anidro . 1002900. [1344-28-1]. di fine titolazione dal blu all'incolore non e© netto.
Alluminio ossido, costituito da -Al2O3, deidratato e Se conservata in un frigorifero, la soluzione di
amido e© stabile per circa 2-3 settimane.
c

attivato per riscaldamento. La dimensione delle parti-

celle e© di 75-150 mm. Saggio di sensibilita© . Una miscela di 2 ml di amido
. 1118300. soluzione R1, 20 ml di acqua R, circa 50 mg di
potassio ioduro R e 0,05 ml di iodio soluzione R1 e©
Alluminio ossido basico

Una forma basica di alluminio ossido anidro R adatto blu.

per cromatografia su colonna.
pH (2.2.3). Agitare per 5 min 1 g con 10 ml di acqua a-Amilasi . 1100800. 1,4- -d-glucano-glucanoidrolasi
a

esente da anidride carbonica R. Il pH della sospensione (EC 3.2.1.1).

e© compreso tra 9 e 10. Polvere da bianca a marrone chiaro.
Alluminio ossido neutro . Al2O3. (Mr 102,0). 1118400. a-Amilasi soluzione . 1100801.
Vedere la monografia Alluminio ossido idrato (0311). Soluzione di -amilasi R con un'attivita© di
a

Aloina . Vedere barbaloina R. 800 FAU/g.

Amido e potassio iodato cartina . Vedere amido iodata Amile nitrito . Miscela di isomeri contenente non meno
cartina R. del 97,0 per cento e non piu© del 100,0 per cento di
Amido solubile . 1085100. [9005-84-9]. C5H11NO2. E' costituito principalmente da isoamile
Polvere bianca. nitrito [(CH3)2CHCH2CH2ONO], ma possono essere
Preparare una soluzione 20 g/l in acqua R calda. La presenti anche altri isomeri.
soluzione e© al massimo leggermente opalescente e Amilene idrato .Vedere alcool tert-pentilico R.
rimane fluida per raffreddamento. Amminoantipirina .Vedere amminopirazolone R.
. 1085104. Amminoazobenzene . C12H11N3. (Mr 197,2). 1003200.
[60-09-3]. Colour Index No. 11000. Azobenzen-4-am-
Amido esente da ioduro soluzione

Preparare la soluzione come prescritto per l'amido mina. 4-(Fenilazo)anilina.

soluzione R omettendo il mercurio(-ico) ioduro.
Preparare immediatamente prima dell'uso. Aghi giallo-brunastri con una sfumatura bluastra, poco
. 1085101. solubili in acqua, molto solubili in alcool e in etere.
Amido iodata cartina

Immergere le strisce di carta da filtro in 100 ml di p.f.: circa 128 ‘C.

amido esente da ioduro soluzione R contenente Amminobutanolo . C4H11NO. (Mr 89,1). 1003500.
0,1 g di potassio iodato R. Eliminare la soluzione e [5856-63-3]. 2-Amminobutanolo.
lasciar essiccare proteggendo dalla luce. Liquido oleoso, miscibile con acqua, solubile in alcool.
Amido soluzione . 1085103. Salda d'amido. d2020 : circa 0,94.
Triturare 1,0 g di amido solubile R con 5 ml di n20D : circa 1,453.
acqua R e, continuando ad agitare, versare la p.e.: circa 180 ‘C.
miscela in 100 ml di acqua R bollente contenente Amminoclorobenzofenone . C13H10ClNO. (Mr 231,7).
10 mg di mercurio(-ico) ioduro R. 1003600. [719-59-5]. 2-Ammino-5-clorobenzofenone.

396
 Reattivi

inoizircserP
Polvere gialla cristallina, praticamente insolubile in Polvere o aghi giallo chiaro, moderatamente solubili in

ilareneG
acqua, molto solubile in acetone, solubile in alcool. acqua, molto solubili in alcool, poco solubili in etere.
p.f.: circa 97 ‘C. p.f.: circa 108 ‘C.
Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono- Amminopirazolone soluzione . 1004601.
grafia Clordiazepossido cloridrato (0474) deponendo Soluzione 1 g/l in tampone soluzione a pH 9,0 R.

isilanA id
idoteM
5 ml di una soluzione 0,5 g/l in metanolo R; il cromato- . C18H36N2O6. (Mr 376,5). 1112500.
gramma presenta solo una macchia principale con un Amminopolietere

[23978-09-8]. 4,7,13,16,21,24-esaossa-1,10-diazabici-
Rf di circa 0,9. clo[8.8.8]esacosano.
Conservare al riparo dalla luce. p.f.: da 70 ‘C a 73 C

irotinetnoC
. C14H16BNO. (Mr 225,1).

/ ilairetaM
Amminoetile difenilborato

1032400. [524-95-8]. 2-(Difenilborilossi)etilammina. 3-Amminopropanolo . C3H9NO. (Mr 75,1). 1004400.

Reattivo di Neu. [156-87-6]. 3-Ammino-1-propanolo.
Liquido viscoso, incolore, limpido.
Polvere cristallina bianca o leggermente gialla, pratica- d2020 : circa 0,99.
mente insolubile in acqua, solubile in alcool.
p.f.: circa 193 ‘C. n20D : circa 1,461.

ivittaeR
. C13H17N3O. (Mr 231,3). 1133900. p.f.: circa 11 ‘C.
Amminofenazone

[58-15-1]. 4-(Dietilammino)-1,5-dimetil-2-fenil-1,2-dii- Ammoniaca concentrata . 1004700. Vedere la monogra-

dro-3H-pirazol-3-one. fia Ammoniaca soluzione concentrata (0877).
Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, solubili in . 1004800.

itnemogrA
Ammoniaca concentrata R1

ilareneG
acqua, molto solubili in alcool. Contiene non meno del 32,0 per cento m/m di NH3
p.f.: circa 108 ‘C. (Mr 17,03).
Liquido incolore limpido.
3-Amminofenolo . C6H7NO. (Mr 109,1). m-Amminofe- d2020 : da 0,883 a 0,889.
nolo.

eifargonoM
Determinazione quantitativa. Pesare accuratamente

ilareneG
Polvere cristallina bianca o leggermente giallastra, una beuta con tappo a smeriglio contenente
solubile in acqua e in alcool. 50,0 ml di acido cloridrico 1 M. Introdurre 2 ml di
p.f.: circa 122 ‘C. ammoniaca concentrata e pesare di nuovo. Titolare
. la soluzione con sodio idrossido 1 M, usando

ehcituecamraF
0,5 ml di rosso metile indicatore misto R come indi-
3-Amminofenolo soluzione

Disciogliere 7,5 mg di 3-amminofenolo R in 20 ml di

emroF
alcool R e diluire a 500 ml con acqua R. catore.
Conservare al riparo dalla luce. 1 ml di acido cloridrico 1 M equivale a 17,03 mg di
NH3.
4-Amminofenolo . C6H7NO. (Mr 109,1). 1004300. Conservare al riparo dall'anidride carbonica atmo-
[123-30-8]. sferica, ad una temperatura inferiore a 20 ‘C.
eiretaM

emirP
Polvere cristallina, bianca o leggermente colorata, si Ammoniaca . 1004701.
colora per esposizione all'aria e alla luce, moderata- Contiene non meno di 170 g/l e non piu© di 180 g/l
mente solubile in acqua, solubile in etanolo. di NH3 (Mr 17,03).
Diluire 67 g di ammoniaca concentrata R a 100 ml
ehcituecamraF

p.f.: circa 186 ‘C, con decomposizione.

inoizaraperP

ehcificepS

Conservare al riparo dalla luce. con acqua R.

. C13H10N2O3. (Mr 242,2). d2020 : da 0,931 a 0,934.
Se utilizzata nel saggio limite per il ferro, l'ammo-
Amminonitrobenzofenone

1004000. [1775-95-7]. 2-Ammino-5-nitrobenzofenone.

Polvere gialla cristallina, praticamente insolubile in niaca R soddisfa agli ulteriori requisiti seguenti:
ehcitapoemO
inoizaraperP

acqua, solubile in tetraidrofurano, poco solubile in Evaporare 5 ml di ammoniaca a secco a b.m.,

metanolo. aggiungere 10 ml di acqua R, 2 ml di una soluzione
p.f.: circa 160 ‘C. (200 g/l) di acido citrico R e 0,1 ml di acido tioglico-
lico R. Alcalinizzare mediante aggiunta di ammo-
A11cm
%
: da 690 a 720 determinata a 233 nm utilizzando niaca R e diluire a 20 ml con acqua R. Non si svi-
una soluzione 0,01 g/l in metanolo R. luppa una colorazione rosa.
ecidnI

Amminopirazolone . C11H13N3O. (Mr 203,2). 1004600. Conservare al riparo dall'anidride carbonica atmo-
[83-07-8]. 4-Ammino-2,3-dimetil-1-fenil-5-pirazolone. sferica, ad una temperatura inferiore a 20 ‘C.

397
Reattivi

Ammoniaca diluita R1. 1004702. Ammonio carbonato . 1005200. [506-87-6]. Miscela di

Contiene non meno di 100 g/l e non piu© di 104 g/l proporzioni variabili di ammonio bicarbonato
di NH3 (Mr 17,03). (NH4HCO3, Mr 79,1) e ammonio carbammato
(NH2COONH4, Mr 78,1).
Diluire 41 g di ammoniaca concentrata R a 100 ml Massa bianca traslucida, lentamente solubile in circa
con acqua R. 4 parti di acqua. Si decompone in acqua bollente. L'am-
Ammoniaca diluita R2. 1004703. monio carbonato libera non meno del 30 per cento
Contiene non meno di 33 g/l e non piu© di 35 g/l di m/m di NH3 (Mr 17,03).
NH3 (Mr 17,03). Determinazione quantitativa. Disciogliere 2,00 g in
Diluire 14 g di ammoniaca concentrata R a 100 ml 25 ml di acqua R. Aggiungere lentamente 50,0 ml di
con acqua R. acido cloridrico 1 M, titolare con sodio idrossido 1 M,
. 1004704. usando 0,1 ml di metilarancio soluzione R come indi-
Ammoniaca diluita R3
catore.
Contiene non meno di 1,6 g/l e non piu© di 1,8 g/l di 1 ml di acido cloridrico 1 M equivale a 17,03 mg di NH3.
NH3 (Mr 17,03). Conservare ad una temperatura inferiore a 20 ‘C.
Diluire 0,7 g di ammoniaca concentrata R a 100 ml . 1005201.
con acqua R. Ammonio carbonato soluzione

Ammoniaca Pb R . Vedere Ammoniaca esente da Soluzione 158 g/l.

piombo R. Ammonio e cerio . Vedere cerio e ammonio
nitrato

Ammoniaca esente da piombo . 1004705. nitrato R.

Soddisfa ai requisiti prescritti per ammoniaca Ammonio e cerio . Vedere cerio e ammonio
solfato

diluita R1 e all'ulteriore saggio: a 20 ml di ammo- solfato R.

niaca esente da piombo aggiungere 1 ml di potassio . C6H14N2O7. (Mr 226,2). 1103300.
cianuro soluzione esente da piombo R, diluire a
Ammonio citrato

[3012-65-5]. Diammonio idrogeno citrato.

50 ml con acqua R e aggiungere 0,10 ml di sodio sol- Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, molto
furo soluzione R. La soluzione non e© piu© intensa- solubile in acqua, poco solubile in alcool.
mente colorata di una soluzione di riferimento pre-
parata senza sodio solfuro. pH (2.2.3). Il pH della soluzione contenente 22,6 g/l e©
circa 4,3.
Ammonio . C2H7NO2. (Mr 77,1). 1004900.
acetato
. 1005300. [12125-02-9]. Vedere la
[631-61-8].
Ammonio cloruro

monografia Ammonio cloruro (0007).

Cristalli incolori, molto deliquescenti, solubilissimi in
acqua e in alcool. Ammonio cloruro soluzione . 1005301.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Soluzione 107 g/l.
. 1004901. Ammonio diidrogenofosfato . (NH4)H2PO4. (Mr 115,0).
Ammonio acetato soluzione
1005400. [7722-76-1]. Ammonio fosfato monobasico.
Disciogliere 150 g di ammonio acetato R in acqua R. Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, molto
Aggiungere 3 ml di acido acetico glaciale R e diluire solubili in acqua.
a 1000 ml con acqua R.
Usare entro una settimana. pH (2.2.3). Una soluzione 23 g/l ha un pH di circa 4,2.
Ammonio esafluorogermanato (IV). (NH4)2GeF6.
Ammonio bicarbonato . NH4HCO3. (Mr 79,1). 1005500. (Mr 222,7). 1134000. [16962-47-3].
[1066-33-7]. Cristalli bianchi, molto solubili in acqua.
Contiene non meno del 99 per cento di NH4HCO3. Ammonio formato . CH5NO2. (Mr 63,1). 1112600.
(1R )-(^)-Ammonio . C10H19NO4S.
10-canforsolfonato [540-69-2].
(Mr 249,3). 1103200. Cristalli o granuli deliquescenti, solubilissimi in acqua,
Contiene non meno del 97,0 per cento di (1R)-(^)- solubili in alcool.
ammonio 10-canforsolfonato. p.f.: da 119 ‘C a 121 ‘C.
20 : 18 2 (soluzione 50 g/l in acqua R). Conservare in un contenitore ermeticamente chiuso.
‰
D Š 6

398
 Reattivi

inoizircserP
. (NH4)2HPO4. (Mr 132,1). . 1005706.

ilareneG
Ammonio fosfato dibasico Ammonio molibdato soluzione R5

1006100. [7783-28-0]. Diammonio idrogeno fosfato. Disciogliere 1,0 g di ammonio molibdato R in

Ammonio fosfato. 40,0 ml di una soluzione al 15 per cento V/V di
Cristalli o granuli, bianchi, igroscopici, solubilissimi in acido solforico R. Preparare la soluzione quotidia-
acqua, praticamente insolubili in alcool. namente.

isilanA id
Il pH di una soluzione 200 g/l e© circa 8.

idoteM
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Ammonio nitrato . NH4NO3. (Mr 80,0). 1005800.
Ammonio fosfato monobasico . Vedere ammonio diidro- [6484-52-2].
genofosfato R. Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, igrosco-
. (NH4)6Mo7O24.4H2O. (Mr 1236). pici, solubilissimi in acqua, molto solubili in metanolo,

irotinetnoC
/ ilairetaM
solubili in alcool.
Ammonio molibdato

1005700. [12054-85-2].
Cristalli incolori o leggermente gialli o verdastri, solu- Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
bili in acqua, praticamente insolubili in alcool.
Ammonio molibdato reattivo . 1005701. Ammonio nitrato R1 . 1005801. [6484-52-2].
Mescolare, nell'ordine indicato, 1 volume di una Soddisfa ai requisiti prescritti per l'ammonio

ivittaeR
soluzione (25 g/l) di ammonio molibdato R, nitrato R e agli ulteriori requisiti seguenti:
1 volume di una soluzione (100 g/l) di acido ascor- Acidita© . La soluzione della sostanza e© debolmente
bico R e 1 volume di acido solforico R (294,5 g/l acida (2.2.4).
H2SO4). Aggiungere 2 volumi di acqua R.

itnemogrA
Usare entro un giorno. Cloruri (2.4.4). 0,50 g soddisfano al saggio limite

ilareneG
Ammonio molibdato reattivo R1 . 1005706. per i cloruri (100 ppm).
Mescolare 10 ml di una soluzione (60 g/l) di sodio Solfati (2.4.13). 1,0 g soddisfa al saggio limite per i
arseniato dibasico R, 50 ml di ammonio molibdato solfati (150 ppm).
soluzione R, 90 ml di acido solforico diluito R e Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo

eifargonoM

ilareneG
diluire a 200 ml in acqua R. 0,05 per cento, determinate su 1,0 g.
Condizionare la miscela a 37 ‘C per 24 h, e conser-
vare in una beuta ambrata. Ammonio ossalato . C2H8N2O4.H2O. (Mr 142,1).
. 1005702. 1005900. [6009-70-7].

ehcituecamraF
Ammonio molibdato soluzione

Soluzione 100 g/l. Cristalli incolori, solubili in acqua.

emroF
Ammonio molibdato soluzione R2 . 1005703. Ammonio ossalato soluzione . 1005901.
Disciogliere 5,0 g di ammonio molibdato R, riscal- Soluzione 40 g/l.
dando, in 30 ml di acqua R. Raffreddare, portare a
pH 7,0 con ammoniaca diluita R2 e diluire a 50 ml Ammonio persolfato . (NH4)2S2O8. (Mr 228,2). 1006000.
con acqua R. [7727-54-0].
eiretaM

emirP
Ammonio molibdato soluzione R3 . 1005704. Polvere cristallina bianca o cristalli granulari, molto
Soluzione I. Disciogliere 5 g di ammonio molib- solubili in acqua.
dato R in 20 ml di acqua R riscaldando. . C5H12N2S2.
Soluzione II. Mescolare 150 ml di alcool R
ehcituecamraF

Ammonio pirrolidinditiocarbammato

(Mr 164,3). 1006200. [5108-96-3]. Ammonio 1-pirrolidi-

inoizaraperP

ehcificepS

con 150 ml di acqua R. Aggiungere raffreddando nilditioformiato.

100 ml di acido solforico R. Polvere cristallina da bianco a gialla pallida, moderata-
Immediatamente prima dell'uso aggiungere 80 vo- mente solubile in acqua, molto poco solubile in alcool.
lumi della soluzione II a 20 volumi della solu-
zione I. Conservare in una bottiglia contenente un frammento
ehcitapoemO
inoizaraperP

Ammonio molibdato soluzione R4 . 1005705. di ammonio carbonato in un sacchetto di mussola.

Disciogliere 1,0 g di ammonio molibdato R in Ammonio reineckato . NH4[Cr(NCS)4(NH3)2].H2O.
acqua R e diluire a 40 ml con lo stesso solvente. (Mr 354,4). 1006300. [13573-16-5]. Ammonio diammin-
Aggiungere 3 ml di acido cloridrico R e 5 ml di tetrakis(isotiocianato)cromato(III) monoidrato. Sale
acido perclorico R e diluire a 100 ml con acetone R. di Reinecke.
ecidnI

Conservare al riparo dalla luce e usare entro Polvere o cristalli rossi, moderatamente solubili in
1 mese. acqua fredda, solubili in acqua calda e in alcool.

399
Reattivi

Ammonio reineckato soluzione . 1006301. L'anetolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
Soluzione 10 g/l. teriore saggio seguente:
Preparare immediatamente prima dell'uso. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
cromatografia (2.2.28) nelle condizioni descritte nella
Ammonio solfammato . NH2SO3NH4. (Mr 114,1).1006400. monografia Anice essenza (0804) usando la sostanza
[7773-06-0]. in esame come soluzione in esame.
Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, igrosco- L'area del picco principale, corrispondente al trans-
pici, solubilissimi in acqua, poco solubili in alcool. anetolo, con un tempo di ritenzione di circa 41 min,
p.f.: circa 130 ‘C. non e© inferiore al 99,0 per cento dell'area totale dei pic-
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. chi.
cis- . C10H12O. (Mr 148,2). 1007000. (Z)-1-
. (NH4)2SO4. (Mr 132,1). 1006500.
Anetolo
Ammonio solfato
Metossi-4-(1-propenil)benzene.
[7783-20-2]. Massa bianca cristallina sino a 20-21 ‘C, liquida al di
Cristalli incolori o granuli bianchi, solubilissimi in sopra di 23 ‘C, praticamente insolubile in acqua, molto
acqua, praticamente insolubili in acetone e in alcool. solubile in etanolo, solubile in etile acetato e in etere di
pH (2.2.3). Il pH di una soluzione 50 g/l in acqua esente petrolio.
da anidride carbonica R e© compreso tra 4,5 e 6,0. n25D : circa 1,56.
Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,1 per p.e.: circa 230 ‘C.
cento. Il cis-anetolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa
Ammonio solfuro soluzione . 1123300. all'ulteriore saggio seguente:
Saturare 120 ml di ammoniaca diluita R1 con idrogeno Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
solfuro R ed aggiungere 80 ml di ammoniaca diluita R1. cromatografia (2.2.28) nelle condizioni descritte nella
Preparare immediatamente prima dell'uso. monografia Anice essenza (0804) usando la sostanza
. NH4SCN. (Mr 76,1). 1006700. in esame come soluzione in esame.
Ammonio tiocianato

[1762-95-4]. Ammonio solfocianato. L'area del picco principale non e© inferiore al 92,0 per
cento dell'area totale dei picchi.
Cristalli incolori, deliquescenti, solubilissimi in acqua, . C4H6O3. (Mr 102,1). 1000500.
solubili in alcool. Anidride

[108-24-7].
acetica

Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Contiene non meno del 97,0 per cento m/m di C4H6O3.
Liquido incolore limpido.
Ammonio tiocianato soluzione . 1006701. p.e.: da 136 ‘C a 142 ‘C.
Soluzione 76 g/l. Determinazione quantitativa. Disciogliere 2,00 g in
. NH4VO3. (Mr 117,0). 1006800. 50,0 ml di sodio idrossido 1 M in una beuta con tappo a
Ammonio vanadato

[7803-55-6]. Ammonio trioxovanadato(V). smeriglio e bollire a ricadere per 1 h. Titolare con acido
cloridrico 1 M, usando 0,5 ml di fenolftaleina solu-
Polvere cristallina da bianca a leggermente gial- zione R come indicatore. Calcolare il numero di millili-
lastra, poco solubile in acqua, solubile in ammoniaca tri di sodio idrossido 1 M necessari per 1 g (n1). Discio-
diluita R1. gliere 2,00 g in 20 ml di cicloesano R in una beuta con
Ammonio vanadato soluzione . 1006801. tappo a smeriglio, raffreddare in ghiaccio e aggiungere
Disciogliere 1,2 g di ammonio vanadato R in 95 ml una miscela fredda di 10 ml di anilina R e 20 ml di
di acqua R e diluire a 100 ml con acido solforico R. cicloesano R. Bollire la miscela a ricadere per 1 h,
aggiungere 50,0 ml di sodio idrossido 1 M e agitare vigo-
Amoxicillina triidrata . 1103400. Vedere la monografia rosamente. Titolare con acido cloridrico 1 M, usando
Amoxicillina triidrata (0260). 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R come indicatore. Cal-
. C10H12O. (Mr 148,2). 1006900. [4180-23-8]. colare il numero di millilitri di sodio idrossido 1 M
necessari per 1 g (n2). Calcolare la percentuale di
Anetolo

1-Metossi-4-(1-propenil)benzene.
Massa bianca cristallina sino a 20-21 ‘C, liquido al di C4H6O3 dall'espressione:
sopra di 23 ‘C, praticamente insolubile in acqua, molto 10,2(n1 ^ n2)
solubile in etanolo, solubile in etile acetato e in etere di . 1000501.
petrolio.
Anidride acetica soluzione R1

Disciogliere 25,0 ml di anidride acetica R in piridina

n25D : circa 1,56. anidra R e diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente.
p.e.: circa 230 ‘C. Conservare al riparo dalla luce e dall'aria.

400
 Reattivi

inoizircserP
. 1000502. Stabilita© al riscaldamento. Disciogliere 2 g, previamente

ilareneG
Anidride acetica-acido solforico soluzione

Mescolare cautamente 5 ml di anidride acetica R essiccati per 1 h a 200 ‘C, in 50 ml di acqua R. La solu-
con 5 ml di acido solforico R. Aggiungere goccia a zione e© incolore.
goccia raffreddando a 50 ml di etanolo R. Prepa- Determinazione quantitativa. Disciogliere 0,100 g in
rare immediatamente prima dell'uso. 50 ml di acqua R, aggiungere 3 g di potassio ioduro R e

isilanA id
10 ml di acido cloridrico diluito R. Titolare lo iodio libe-

idoteM
Anidride arseniosa . As2O3. (Mr 197,8). 1008300. [1327- rato con sodio tiosolfato 0,1 M, utilizzando 1 ml di
53-3]. Diarsenico triossido. amido soluzione R come indicatore.
Polvere cristallina o massa bianca, poco solubile in 1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M equivale a 2,782 mg di
acqua, solubile in acqua bollente. I2O5.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Anidride carbonica . 1015600. [124-38-9]. Vedere la Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al
monografia Carbonio diossido (0375). riparo dalla luce.
Anidride carbonica R1 . CO2. (Mr 44,01). 1015700. Con- Anidride maleica . C4H2O3. (Mr 98,1). 1050700.
tiene non meno del 99,995 per cento V/V di CO2. [108-31-6]. 2,5-Furandione. Anidride butendioica.
Carbonio monossido: meno di 5 ppm. Cristalli bianchi, solubili in acqua formando acido

ivittaeR
Ossigeno: meno di 25 ppm. maleico, solubilissimi in acetone e in etile acetato,
Ossido nitrico: meno di 1 ppm. molto solubili in toluene, solubili in alcool con forma-
zione dell'estere, molto poco solubili in etere di
Anidride carbonica R2 . CO2. (Mr 44,01). 1134500. petrolio.
Contiene non meno del 99 per cento V/V di CO2. p.f.: circa 52 ‘C.

itnemogrA
ilareneG
Anidride cromica . Vedere cromo triossido R. Un eventuale residuo insolubile in toluene non supera il
Anidride fosforica . P2O5. (Mr 141,9). 1032900. [1314-56-3]. 5 per cento (acido maleico).
Difosforo pentossido. Anidride maleica soluzione . 1050701.
Polvere bianca, amorfa, deliquescente. Si idrata in Disciogliere 5 g di anidride maleica R in toluene R e

eifargonoM
acqua con sviluppo di calore. diluire a 100 ml con lo stesso solvente. Utilizzare

ilareneG
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. entro un mese. Se la soluzione diventa torbida, fil-
Anidride ftalica . C8H4O3. (Mr 148,1). 1065700. trare.
[85-44-9]. Isobenzofuran-1,3-dione. Anidride propionica . C6H10O3. (Mr 130,1). 1072500.
[123-62-6].

ehcituecamraF
Contiene non meno del 99,0 per cento di C8H4O3.
Liquido incolore limpido, solubile in alcool e in etere.

emroF
Fiocchi bianchi.
p.f.: da 130 ‘C a 132 ‘C. d2020 : circa 1,01.
Determinazione quantitativa. Disciogliere 2,000 g in p.e.: circa 167 ‘C.
100 ml di acqua R e bollire a ricadere per 30 min. Raf- Anidride propionica reattivo . 1072501.
freddare e titolare con sodio idrossido 1 M, usando Disciogliere 1 g di acido toluensolfonico R in 30 ml
eiretaM

emirP
fenolftaleina soluzione R come indicatore. di acido acetico glaciale R. Aggiungere 5 ml di ani-
1 ml di sodio idrossido 1 M equivale a 74,05 mg di dride propionica R e lasciare a riposo per almeno
C8H4O3. 15 min prima dell'uso.
Usare entro 24 h dalla preparazione.
ehcituecamraF

. 1065701.
inoizaraperP

ehcificepS

Anidride ftalica soluzione

Disciogliere 42 g di anidride ftalica R in 300 ml di Anidride solforosa . SO2. (Mr 64,1). 1086700.
piridina anidra R. Lasciare a riposo per 16 h. [7446-09-5]. Zolfo diossido.
Conservare al riparo dalla luce e usare entro una Gas incolore. Quando e© compresso e© un liquido inco-
settimana. lore.
ehcitapoemO
inoizaraperP

. SO2. (Mr 64,1). 1110900.

. I2O5. (Mr 333,8).
Anidride solforosa R1
Anidride iodica ricristallizzata

1046000. [12029-98-0]. Diiodio pentossido. Anidride Contiene non meno del 99,9 per cento V/V di SO2.
iodica. Anidride trifluoroacetica . C4F6O3. (Mr 210,0). 1093300.
Contiene non meno del 99,5 per cento di I2O5. [407-25-0].
Polvere cristallina bianca o granuli bianchi o bianco- Liquido incolore.
d2020 : circa 1,5.
ecidnI

grigiastri, igroscopici, solubilissimi in acqua con forma-

zione di HIO3. Anidride vanadica . Vedere divanadio pentossido R.

401
Reattivi

Anilina . C6H7N. (Mr 93,1). 1007100. [62-53-3]. Benze- un filtro di vetro sinterizzato (40). Diluire a 500,0
nammina. ml con dicloroetano R e mescolare. L'assorbanza
Liquido incolore o leggermente giallastro, solubile in (2.2.25) della soluzione, determinata a 500 nm in
acqua, miscibile con alcool e con etere. una cella di 2 cm, non e© maggiore di 0,07.
d2020 : circa 1,02. Soluzione II. Sotto cappa, mescolare 100 ml di ace-
p.e.: da 183 ‘C a 186 ‘C. tile cloruro R distillato di recente e 400 ml di diclo-
Conservare al riparo dalla luce. roetano R e conservare in un luogo fresco.
. Vedere aldeide anisica R. Mescolare 90 ml della soluzione I e 10 ml della
Anisaldeide
soluzione II.
p-Anisidina . C7H9NO. (Mr 123,2). 1103500. [104-94-9]. Conservare in una bottiglia scura con tappo a sme-
4-Metossianilina. riglio e usare entro 7 giorni; eliminare il reattivo
Cristalli bianchi, moderatamente solubili in acqua, nel quale si sviluppi una colorazione.
solubili in etanolo.
Contiene non meno del 97,0 per cento di C7H9NO. Antitrombina III . 1007800. [90170-80-2].
Attenzione: irritante per la pelle, sensibilizzante. L'antitrombina III e© ottenuta dal plasma umano e puri-
Conservare al riparo dalla luce ad una temperatura ficata mediante cromatografia su eparina agarosio e
compresa tra 0 ‘C e 4 ‘C. deve avere un'attivita© specifica di almeno 6 U.I. per mil-
ligrammo.
Durante la conservazione, la p-anisidina tende a scu- . 1007801.
rirsi in seguito a ossidazione. Un reattivo di colore ano- Antitrombina III soluzione R1

Ricostituire l'antitrombina III R seguendo le diret-

malo puo© essere ridotto e decolorato nel seguente tive del produttore e diluire a 1 U.I. per millili-
modo: disciogliere 20 g di p-anisidina R in 500 ml di tro con tampone tris(idrossimetil) amminometano-
acqua R a 75 ‘C. Aggiungere 1 g di sodio solfito R e sodio cloruro soluzione a pH 7,4 R.
10 g di carbone attivato R e agitare per 5 min. Filtrare,
raffreddare il filtrato a circa 0 ‘C e lasciare a riposo a Antitrombina III soluzione R2 . 1007802.
questa temperatura per almeno 4 h. Filtrare, lavare i cri- Ricostituire l'antitrombina III R seguendo le diret-
stalli con una piccola quantita© di acqua R a circa 0 ‘C e tive del produttore e diluire a 0,5 U.I. per millili-
asciugare i cristalli sotto vuoto su anidride fosforica R. tro con tampone tris(idrossimetil) amminometano-
Anolita per focalizzazione isoelettrica a pH da 3 a 5 . sodio cloruro soluzione a pH 7,4 R.
1112800. Acido glutammico 1 M, acido fosforico 0,5 M. . C14H10. (Mr 178,2). 1007400. [120-12-7].
Disciogliere 14,71 g di acido glutammico R in acqua R.
Antracene

Aggiungere 33 ml di acido fosforico R e diluire a Polvere cristallina bianca, praticamente insolubile in

1000 ml con acqua R. acqua, poco solubile in cloroformio.
. SbCl3. (Mr 228,1). 1007700. p.f.: circa 218 ‘C.
Antimonio

[10025-91-9].
tricloruro
Antrone . C14H10O. (Mr 194,2). 1007500. [90-44-8].
Cristalli incolori o massa cristallina trasparente, igro- Antracen-9(10H)-one.
scopici, molto solubili in etanolo. L'antimonio triclo- Polvere cristallina giallo pallida.
ruro si idrolizza in acqua. p.f.: circa 155 ‘C.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al Apigenina . C15H10O5. (Mr 270,2). 1095800. [520-36-5].
riparo dall'umidita© . 4',5,7-Triidrossiflavone.
Antimonio tricloruro soluzione . 1007701. Polvere giallastra chiara; praticamente insolubile in
Lavare rapidamente 30 g di antimonio tricloruro R acqua, moderatamente solubile in alcool.
con due porzioni, da 15 ml ciascuna, di cloroformio p.f.: circa 310 ‘C (con decomposizione).
esente da etanolo R, eliminare i lavaggi e discio- Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
gliere immediatamente i cristalli lavati in 100 ml grafia Camomilla romana fiore (0380), deponendo
di cloroformio esente da etanolo R, riscaldando leg- 10 ml di una soluzione 0,25 g/l in metanolo R. Il croma-
germente. togramma presenta nel terzo superiore una banda prin-
Conservare la soluzione su qualche grammo di cipale con fluorescenza giallo-verde.
sodio solfato anidro R.
. 1007702. Apigenina-7-glucoside . C21H20O10. (Mr 432,6). 1095900.
Polvere giallastra chiara; praticamente insolubile in
Antimonio tricloruro soluzione R1

Soluzione I. Disciogliere 110 g di antimonio triclo-

ruro R in 400 ml di dicloroteano R. Aggiungere 2 g acqua, moderatamente solubile in alcool.
di alluminio ossido anidro R, mescolare e filtrare su p.f.: da 198 ‘C a 201 ‘C.

402
 Reattivi

inoizircserP
Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono- 100 ml di acqua R. Raffreddare le due soluzioni a

ilareneG
grafia Camomilla romana fiore (0380), deponendo 10 ‘C, mescolare e, agitando, raccogliere il precipitato
10 ml di una soluzione 0,25 g/l in metanolo R. Il croma- giallo su un filtro di vetro sinterizzato. Lavare il preci-
togramma presenta nel terzo mediano una banda prin- pitato con 200 ml di acqua R fredda e poi essiccarlo
cipale con fluorescenza giallastra. nel vuoto per 2-3 h.

isilanA id
. C23H22O11. (Mr 474,43). L'argento dietilditiocarbammato puo© essere utilizzato

idoteM
Apigenina-7-(6-acetil)glucoside

4H-1-Benzopiran-4-one. 7-(6-O-acetil)-[( -d-glucopira-

b solo fintanto che non abbia cambiato aspetto e non
nosil)ossi]-5-idrossi-2-(4-idrossifenil).5055. svolga odore forte.
Polvere gialla pallida. Argento nitrato . 1078300. [7761-88-8]. Vedere la mono-
p.f: da 247 ‘C a 249 ‘C. grafia Argento nitrato (0009).

irotinetnoC
/ ilairetaM
Aprotinina . 1007900. [9087-70-1]. Vedere la monografia Argento nitrato soluzione R1 . 1078301.
Aprotinina (0580). Soluzione 42,5 g/l.
Arabinosio . C5H10O5. (Mr 150,1). 1008000. [87-72-9]. Conservare al riparo dalla luce.
l -(+)-Arabinosio.
Argento nitrato soluzione R2 . 1078302.
Polvere cristallina bianca, molto solubile in acqua. Soluzione 17 g/l.

ivittaeR
20 : da + 103 a + 105, determinato su una soluzione
‰
D
Š

50 g/l in acqua R contenente circa lo 0,05 per Conservare al riparo dalla luce.
cento di NH3. Argento nitrato soluzione ammoniacale . 1078303.
. C16H12N2O. (Mr 248,3). 1110700. Disciogliere 2,5 g di argento nitrato R in 80 ml di
Arancio Sudan
acqua R e aggiungere ammoniaca diluita R1 goccia

itnemogrA
[842-07-9]. Colour Index No. 12055. 1-(Fenilazo)nafta-

ilareneG
len-2-olo. Sudan I. a goccia fino al discioglimento del precipitato.
Polvere rosso-arancione, praticamente insolubile in Diluire a 100 ml con acqua R. Preparare immedia-
acqua, solubile in diclorometano. tamente prima dell'uso.
p.f.: circa 131 ‘C. Argento nitrato soluzione in piridina . 1078304.

eifargonoM
Soluzione 85 g/l in piridina R.

ilareneG
Arbutina . C12H16O7. (Mr 272,3). 1008100. [497-76-7]. Conservare al riparo dalla luce.
Arbutoside. 4-Idrossifenil- -d-glucopiranoside.
. 1078305.
b

Aghi brillanti, bianchi, sottili, molto solubili in acqua, Argento nitrato reattivo

solubilissimi in acqua calda, solubili in alcool. Ad una miscela di 3 ml di ammoniaca concentrata R

ehcituecamraF
20 : circa ^64, determinato su una soluzione 20 g/l.
D
e 40 ml di sodio idrossido 1 M, aggiungere 8 ml di
‰ Š
una soluzione (200 g/l) di argento nitrato R, goccia

emroF
p.f.: circa 200 ‘C. a goccia, agitando. Diluire a 200 ml con acqua R.
Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su
strato sottile (2.2.27) come prescritto nella monografia Argento ossido . Ag2O. (Mr 231,7). 1078400.
Uva ursina foglia (1054); il cromatogramma presenta [20667-12-3]. Diargento ossido.
solo una macchia principale. Polvere nero-brunastra, praticamente insolubile in
eiretaM

emirP
L'arbutina utilizzata nella determinazione quantitativa acqua e in alcool, molto solubile in acido nitrico diluito
dell'arbutina nella monografia Uva ursina foglia (1054) e in ammoniaca.
soddisfa all'ulteriore saggio seguente: Conservare al riparo dalla luce.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro- . 1103600. [74-79-3]. Vedere la monografia
ehcituecamraF
inoizaraperP

Arginina
ehcificepS

matografia liquida (2.2.29) come prescritto nella mono- Arginina (0806).

grafia Uva ursina foglia (1054). Argon . Ar. (Ar 39,95). 1008200. [7440-37-1].
Il contenuto di arbutina non e© inferiore al 95 per cento, Contiene non meno del 99,995 per cento V/V di Ar.
calcolato con la procedura di normalizzazione. Carbonio monossido. Se utilizzato come descritto nel
. Vedere arbutina R.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Arbutoside
saggio Monossido di carbonio nei gas (Metodo I, 2.5.25),
Argento dietilditiocarbammato . C5H10AgNS2. (Mr 256,1). dopo il passaggio di 10 litri di argon R ad una velocita©
1110400. [1470-61-7]. di flusso di 4 litri per ora, non sono necessari piu© di
Polvere da giallo pallido a grigio-giallastro, pratica- 0,05 ml di sodio tiosolfato 0,002 M per la titolazione
mente insolubile in acqua, solubile in piridina. (0,6 ppm V/V).
Il reattivo puo© essere preparato come segue: discio- Aromadendrene . C15H24 (Mr 204,4). 1139100. [489-39-4].
ecidnI

gliere 1,7 g di argento nitrato R in 100 ml di acqua R e, (1R,2S,4R,8R,11R)-3,3,11-Trimetil-7-metilenetriciclo-

a parte, 2,3 g di sodio dietilditiocarbammato R in [6.3.0.02,4]undecano.

403
Reattivi

Liquido limpido, quasi incolore. Azometina H soluzione . 1008701.

d420 : circa 0,911. Disciogliere 0,45 g di azometina H R e 1 g di acido
n20D : circa 1,497. ascorbico R riscaldando leggermente in acqua R e
‰
20
a D : circa + 12.
Š
diluire a 100 ml con lo stesso solvente.
p.e.: circa 263 ‘C. Azoto . N2. (Mr 28,01). 1059300. [7727-37-9].
L'aromadendrene usato in gas cromatografia soddisfa Azoto lavato ed essiccato.
all'ulteriore saggio seguente: . 1059400.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas Azoto R1

cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- Contiene non meno del 99,999 per cento V/V di N2.
fia Melaleuca essenza (1837). Carbonio monossido: meno di 5 ppm.
Il contenuto non e© inferiore al 92 per cento, calcolato Ossigeno: meno di 5 ppm.
con la procedura di normalizzazione.
. C24H30O11. (Mr 494,5). 1098600. Azoto esente da ossigeno . 1059600.
Azoto R privato dell'ossigeno mediante passaggio attra-
Arpagoside

Polvere cristallina bianca, molto igroscopica, solubile verso pirogallolo soluzione alcalina R.
in acqua e in alcool.
p.f.: da 117 ‘C a 121 ‘C. Azoto gas miscela . 1136900.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Azoto R contenente l'1 per cento V/V di ciascuno
. 1008301. dei seguenti gas: anidride carbonica R2, carbonio monos-
Arsenito soluzione

Disciogliere 0,50 g di anidride arseniosa R in 5 ml di sido R1 e ossigeno R1.

sodio idrossido soluzione diluita R, aggiungere 2,0 g di Azoto monossido . NO. (Mr 30,01). 1108300.
sodio bicarbonato R e diluire a 100,0 ml con acqua R. Contiene non meno del 98,0 per cento V/V di NO.
Asiaticoside . C48H78O19. (Mr 959). 1123500. Azoto per cromatografia . 1059500.
[16830-15-2]. O-6-Desossi- -l-mannopiranosil-(1 4)-
a !
Contiene non meno del 99,95 per cento V/V di N2.
O- -d-glucopiranosil-(1 6)- -d-glucopiranosil-2 ,3 ,
b ! b a b
. N2O. (Mr 44,01). 1108500.
23-triidrossi-4 -urs-12-en-28-oato.
a
Azoto protossido

Polvere bianca, igroscopica, solubile in metanolo, poco Contiene non meno del 99,99 per cento V/V di N2O.
solubile in etanolo, insolubile in acetonitrile. Azoto monossido: meno di 1 ppm.
p.f.: circa 232 ‘C con decomposizione. Carbonio monossido: meno di 1 ppm.
Acqua (2.5.12): 6,0 per cento. Azzurro .... Vedere blu...R.
Conservare al riparo dall'umidita© . Barbaloina . C21H22O9.H2O. (Mr 436,4). 1008800.
L'asiaticoside utilizzato in cromatografia liquida soddisfa [1415-73-2]. Aloina. 1,8-Diidrossi-3-idrossimetil-10- - b

all'ulteriore saggio seguente: d -glucopiranosil-10H-antracen-9-one monoidrato.

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro- Polvere cristallina da giallo a giallo scuro, o aghi gialli,
matografia liquida (2.2.29) come prescritto nella mono- che imbruniscono per esposizione all'aria e alla luce,
grafia Centella (1498). moderatamente solubili in acqua e in alcool, solubili in
Il contenuto non e© inferiore al 97,0 per cento calcolato acetone, in ammoniaca e nelle soluzioni di idrossidi
mediante la procedura di normalizzazione. alcalini, molto poco solubili in etere.
l- Aspartil-l- . C13H16N2O5. (Mr 280,3).
fenilalanina A11cm
%
: circa 192 a 269 nm , circa 226 a 296,5 nm, circa
1008500. [13433-09-5]. Acido (S)-3-ammino-N-[(S)-1- 259 a 354 nm, determinata su una soluzione in meta-
carbossi-2-feniletil]succinammico. nolo R e calcolata con riferimento alla sostanza anidra.
Polvere bianca. Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
p.f.: circa 210 ‘C, con decomposizione. grafia Frangola corteccia (0025); il cromatogramma
Azo-violetto . C12H9N3O4. (Mr 259,22). 4-(p-Nitrofenila- presenta solo una macchia principale.
zo)resorcinolo. Barbital . 1008900. [57-44-3]. Vedere monografia Barbi-
Polvere rossa. tal (0170).
p.f.: 193 ‘C circa, con decomposizione. Barbital sodico . C8H11N2NaO3. (Mr 206,2). 1009000.
Azometina H . C17H12NNaO8S2. (Mr 445,4). 1008700. [144-02-5].
[5941-07-1]. Sodio idrogeno 4-idrossi-5-(2-idrossibenzi- Contiene non meno del 98,0 per cento del derivato
lidenammino)-2,7-naftalendisolfonato. sodico del 5,5-dietil-1H,3H,5H-pirimidin-2,4,6-trione.

404
 Reattivi

inoizircserP
Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, molto Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-

ilareneG
solubili in acqua, poco solubili in alcool, praticamente grafia Balsamo del Peru© (0754) deponendo 20 ml di una
insolubili in etere. soluzione allo 0,3 per cento in etile acetato R. Dopo
Bario carbonato . BaCO3. (Mr 197,3). 1009200. aver spruzzato e riscaldato, il cromatogramma presenta
[513-77-9]. una macchia principale con un Rf di circa 0,8.

isilanA id
Polvere bianca o masse friabili, praticamente insolubili . C16H14O2. (Mr 238,3). 1010900.

idoteM
Benzile cinnamato

in acqua. [103-41-3]. Benzile 3-fenil-2-propenoato.

Bario cloruro . BaCl2.2H2O. (Mr 244,3). 1009300. Cristalli incolori o giallastri, praticamente insolubili in
[10326-27-9]. Bario dicloruro. acqua, solubili in alcool e in etere.
Cristalli incolori, molto solubili in acqua, poco solubili p.f.: circa 39 ‘C.

irotinetnoC
/ ilairetaM
in alcool. Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
Bario cloruro soluzione R1 . 1009301. grafia Balsamo del Peru© (0754) deponendo 20 ml di una
Soluzione 61 g/l. soluzione (3 g/l) in etile acetato R. Dopo aver spruzzato
Bario cloruro soluzione R2 . 1009302. e riscaldato, il cromatogramma presenta una macchia
Soluzione 36,5 g/l. principale con un Rf di circa 0,6.

ivittaeR
. Ba(OH)2.8H2O. (Mr 315,5). 1009400. Benzilpenicillina sodica . 1011000. [69-57-8]. Vedere la
monografia Benzilpenicillina sodica (0114).
Bario idrossido

[12230-71-6]. Bario diidrossido ottaidrato.

Cristalli incolori, solubili in acqua. 2-Benzilpiridina . C12H11N. (Mr 169,2). 1112900.
Bario idrossido soluzione . 1009401. Acqua di barite. [101-82-6].
Soluzione 47,3 g/l. Contiene non meno del 98,0 per cento di C12H11N.

itnemogrA
ilareneG
. 1009500. [7727-43-7]. Vedere la monogra- Liquido giallo.
p.f.: da 13 ‘C a 16 ‘C.
Bario solfato

fia Bario solfato (0010).

. Vedere la monografia Benzalconio Benzocaina . 1123600. [94-09-7]. Vedere la monografia
Benzocaina (0011).
Benzalconio cloruro

cloruro (0372).

eifargonoM
. C6H4O2. (Mr 108,1). 1118500. [106-

ilareneG
Benzaldeide . C7H6O. (Mr 106,1). 1009600. [100-52-7]. 1,4-Benzochinone

Liquido incolore o leggermente giallo, poco solubile in 51-4]. Cicloesa-2,5-dien-1,4-dione.

acqua, miscibile con alcool e con etere. Contiene non meno del 98,0 per cento di C6H4O2.
d2020 : circa 1,05. Benzofenone . C13H10O. (Mr 182,2). 1010300. [119-61-9].

ehcituecamraF
n20D : circa 1,545. Difenilmetanone.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per Cristalli prismatici, praticamente insolubili in acqua,

emroF
cento distilla tra 177 ‘C e 180 ‘C. molto solubili in alcool e in etere.
Conservare al riparo dalla luce. p.f.: circa 48 ‘C.
Benzene . C6H6. (Mr 78,1). 1009800. [71-43-2]. Benzolo. . C15H23ClN4O3.
Liquido infiammabile, incolore, limpido, praticamente
Benzoilarginina estere etilico cloridrato

(Mr 342,8). 1010500. [2645-08-1]. N-Benzoil- l- arginina

eiretaM
insolubile in acqua, miscibile con alcool e con etere. estere etilico cloridrato. Etile (S)-2-benzammido-5-gua-

emirP
p.e.: circa 80 ‘C. nidinovalerato cloridrato. BAEE.
Benzetonio cloruro . C27H42ClNO2.H2O. (Mr 466,1). Polvere cristallina bianca, solubilissima in acqua e in
1009900. [121-54-0]. Benzildimetil[2-[2-[4-(1,1,3,3-tetra- etanolo, praticamente insolubile in etere.
ehcituecamraF

metilbutil)fenossi]etossi]etil]ammonio cloruro monoi-

inoizaraperP

20 : da ^15 a ^18, determinato su una soluzione 10 g/l.

ehcificepS

drato. ‰
DŠ

p.f.: circa 129 ‘C.

Polvere bianca fine o cristalli incolori, solubili in acqua A11cm : da 310 a 340, determinata a 227 nm utilizzando
e in alcool, poco solubili in etere. %

una soluzione 0,01 g/l.

p.f.: circa 163 ‘C.
N
ehcitapoemO
inoizaraperP

Conservare al riparo dalla luce. -Benzoil-L-prolil-L-fenilalanil- L-arginina 4-nitroanilide

. C35H42N8O8. (Mr 703). 1010600.

. C14H10O2. (Mr 210,2). 1117800. [134-81-6]. acetato

. C7H5ClO. (Mr 140,6).1010400.

Benzile

Difeniletandione. Benzoile cloruro

Polvere cristallina gialla, insolubile in acqua, solubile in [98-88-4].

alcool, in etile acetato e in toluene. Liquido incolore, lacrimogeno, solubile in etere, si
p.f.: 95 ‘C decompone in acqua e in alcool.
d2020 : circa 1,21.
ecidnI

Benzile benzoato . 1010800. [120-51-4]. Vedere la mono-

grafia Benzile benzoato (0705). p.e.: circa 197 ‘C.

405
Reattivi

2-Benzoilpiridina . C12H9NO. (Mr 183,2). 1134300. Bismuto sottonitrato R1 . 1011501.

[91-02-1]. Fenil(2-piridinil)metanone. Contiene non meno del 71,5 per cento e non piu© del
Cristalli incolori, solubili in alcool. 74,0 per cento di bismuto (Bi), e non meno del 14,5
p.f.: circa 43 ‘C. per cento e non piu© del 16,5 per cento di nitrato,
calcolato come pentossido di azoto (N2O5).
Benzoino . C14H12O2. (Mr 212,3). 1010200. [579-44-2].
2-Idrossi-1,2-difeniletanone. Bismuto sottonitrato soluzione . 1011502.
Cristalli leggermente giallastri, molto poco solubili in Disciogliere 5 g di bismuto sottonitrato R1 in
acqua, molto solubili in acetone, solubili in alcool una miscela di 8,4 ml di acido nitrico R e 50 ml di
caldo, moderatamente solubili in etere. acqua R e diluire a 250 ml con acqua R. Filtrare se
p.f.: circa 137 ‘C. necessario.
Acidita© . A 10 ml aggiungere 0,05 ml di metilarancio
Berberina emisolfato . C20H19NO8S. (Mr 384,4). Berbe- soluzione R. Sono necessari 5,0-6,25 ml di sodio
rina solfato neutro. idrossido 1 M per far virare l'indicatore.
Bergaptene . C12H8O4. (Mr 216,2). 1103700. [484-20-8]. . C2H5N3O2. (Mr 103,1). 1011600. [108-19-0].
5-Metossipsoralene.
Biureto

Cristalli bianchi, igroscopici, solubili in acqua, modera-

Cristalli incolori, praticamente insolubili in acqua, tamente solubili in alcool, molto poco solubili in etere.
moderatamente solubili in alcool e poco solubili in p.f.: da 188 ‘C a 190 ‘C, con decomposizione.
acido acetico glaciale. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
p.f.: circa 188 ‘C.
. C30H50O2. (Mr 442,7). 1011100. [473-98-3]. Biureto reattivo . 1011601.
Betulina

Lup-20(39)-en-3 ,28-diolo. Disciogliere 1,5 g di rame(-ico) solfato R e 6,0 g di

b
potassio e sodio tartrato R in 500 ml di acqua R.
Polvere bianca cristallina. Aggiungere 300 ml di una soluzione (100 g/l) di
p.f.: da 248 ‘C a 251 ‘C. sodio idrossido R esente da carbonato, diluire a
Bicinconinato disodico . C20H10N2Na2O4. (Mr 388,3). 1000 ml con la stessa soluzione e mescolare.
1126600. [979-88-4]. 2,2'-Bichinolin-4-4'-dicarbossilato Blu acido 83. C45H44N3NaO7S2. (Mr 826). 1012200.
disodico. [6104-59-2]. Colour Index No. 42660. Blu brillante R.
. C25H27Cl3N6O.5H2O. (Mr 624). Blu brillante di Coomassie R 250.
Bisbenzimmide

1103800. [23491-44-3]. 4-[5-[5-(4-metilpiperazi-1-il)ben- Polvere marrone insolubile in acqua fredda, poco solu-
zimidazol-2-il]benzimidazol-2-il]fenolo tricloridrato bile in acqua bollente e in etanolo, solubile in acido sol-
pentaidrato. forico, in acido acetico glaciale e nelle soluzioni diluite
di idrossidi alcalini.
Bisbenzimmide soluzione madre . 1103801. Blu acido 90. C47H48N3NaO7S2. (Mr 854). 1001300.
Disciogliere 5 mg di bisbenzimmide R in acqua R e [6104-58-1]. Colour Index No. 42655. Sodio [4-[[4-
diluire a 100 ml con lo stesso solvente. [(4-etossifenil)ammino]fenil][[4-(etil)(3-solfonatobenzil)-
Conservare al buio. ammino]fenil]metilen]cicloesa-2,5-dien-1-iliden](etil)-
(3-solfonatobenzil)ammonio.
Bisbenzimmide soluzione di lavoro . 1103802. Polvere marrone scuro, di lucentezza violetta, con
Immediatamente prima dell'uso diluire 100 l di m alcune particelle di lucentezza metallica, solubile in
bisbenzimmide soluzione madre R a 100 ml con tam- acqua e in etanolo.
pone fosfato soluzione salina a pH 7,4 R. A11cm
%
: maggiore di 500, determinata a 577 nm usando
una soluzione 0,01 g/l in una soluzione tampone a pH
2,2'-Bis(idrossimetil)propan-1,3-diolo tetrakis[3-[3,5-bis 7,0 e calcolata con riferimento alla sostanza essiccata.
(1,1-dimetiletil) 4-idrossifenil] propionato] . Vedere pen- Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore al 5,0
taeritritile tetrakis[3-[3,5-di(1,1-dimetiletil)-4-idrossife- per cento, determinata su 0,500 g per essiccamento in
nil]] propionato R. stufa a 100-105 ‘C.
. Vedere metilfenilossazo- Blu acido 92 . C26H16N3Na3O10S3. (Mr 696). 1001400.
Bis(metilfenilossazolil)benzene

lilbenzene R. [3861-73-2]. Colour Index No. 13390. Blu di Coomassie.

Sodio anazolene. Trisodio 8-idrossi-4'-(fenilammino)-
Bismuto sottonitrato . azonaftalen-3,5',6-trisolfonato.
[4BiNO3(OH)2.BiO(OH)].(Mr 1462). 1011500. [1304-85-4]. Cristalli blu scuro poco solubili in alcool, solubili in
Polvere bianca, praticamente insolubile in acqua. acqua, in acetone e in glicole etilenico monoetiletere.

406
 Reattivi

inoizircserP
. 1001401. Polvere da rosa-rossastra a brunastra, praticamente

ilareneG
Blu acido 92 soluzione

Disciogliere 0,5 g di blu acido 92 R in una miscela di insolubile in acqua, solubile in alcool e nelle soluzioni
10 ml di acido acetico glaciale R, 45 ml di alcool R diluite di idrossidi alcalini.
e 45 ml di acqua R.
. 1012901.
. C37H27N3Na2O9S3. (Mr 800). 1134200.
Blu bromotimolo soluzione R1

isilanA id
Disciogliere 50 mg di blu bromotimolo R in una

idoteM
Blu acido 93

[28983-56-4]. Colour Index No. 42780. Blu metile. Blu miscela di 4 ml di sodio idrossido 0,02 M e 20 ml di
di Poirrier. alcool R e diluire a 100 ml con acqua R.
Una miscela di trifenilrosanilina di- e trisolfonato e di Saggio di sensibilita© . A 0,3 ml della blu bromotimolo
trifenilpararosanilina. soluzione R1 aggiungere 100 ml di acqua esente

irotinetnoC
/ ilairetaM
Polvere blu scura. da anidride carbonica R. La soluzione e© gialla.
Viraggio. Da pH 9,4 a pH 14,0. Non sono necessari piu© di 0,1 ml di sodio idros-
Blu acido 93 soluzione . 1134201. sido 0,02 M per far virare la colorazione al blu.
Disciogliere 0,2 g di blu acido 93 R in acqua R e Viraggio. Da pH 5,8 (giallo) a pH 7,4 (blu).
diluire a 100 ml con lo stesso solvente. Blu bromotimolo soluzione R2 . 1012902.

ivittaeR
. 1012200. [6104-59-2]. Vedere blu acido Soluzione 10 g/l in dimetilformammide R.
Blu

83 R.
brillante
Blu bromotimolo soluzione R3 . 1012903.
. C19H10Br4O5S. (Mr 670). 1012800. Riscaldare 0,1 g di blu bromotimolo R con 3,2 ml
Blu bromofenolo

[115-39-9]. 3',3'',5',5''-Tetrabromofenolsolfonftaleina. di sodio idrossido 0,05 M e 5 ml di alcool al 90

per cento V/V R. Dopo solubilizzazione, diluire a

itnemogrA
ilareneG
4,4'-(3H-2,1-Benzossatiol-3-iliden)bis[2,6-dibromofe- 250 ml con alcool al 90 per cento V/V R.
nolo] S,S-diossido. Azzurro di bromofenolo.
Polvere giallo-arancione chiaro, molto poco solubile in Blu destrano 2000 . 1011700. [9049-32-5].
acqua, poco solubile in alcool, molto solubile nelle Preparato dal destrano con una massa molecolare rela-
soluzioni di idrossidi alcalini. tiva media di 2 106 introducendo un cromoforo polici-

eifargonoM

ilareneG
2

. 1012801. clico che colora la sostanza in blu. Il grado di sostitu-

Blu bromofenolo soluzione

Disciogliere 0,1 g di blu bromofenolo R in 1,5 ml di zione e© 0,017. E' liofilizzato ed e© rapidamente e comple-
sodio idrossido 0,1 M e 20 ml di alcool R e diluire a tamente solubile in acqua e nelle soluzioni saline
100 ml con acqua R. acquose.

ehcituecamraF
Saggio di sensibilita© . A 0,05 ml della soluzione Una soluzione 1 g/l in tampone fosfato soluzione a
pH 7,0 R presenta un massimo di assorbimento (2.2.25)

emroF
di blu bromofenolo aggiungere 20 ml di acqua a 280 nm.
esente da anidride carbonica R e 0,05 ml di acido clo- . 1001400. [3861-73-2].Vedere blu acido
ridrico 0,1 M. La soluzione e© gialla. Non sono Blu di Coomassie

92 R.
necessari piu© di 0,1 ml di sodio idrossido 0,1 M per
far virare la colorazione al violetto-bluastro. . 1001401.Vedere blu acido 92
eiretaM

emirP
Blu di Coomassie soluzione

Viraggio. Da pH 2,8 (giallo) a pH 4,4 (violetto- soluzione R.

bluastro). Blu di fibrina . Vedere fibrina blu R.
Blu di disulfina . C27H31N2NaO6S2. (Mr 566,6). 1086000.
. 1012802. [129-17-9]. Schultz No. 769. Colour Index No. 42045.
ehcituecamraF
inoizaraperP

Blu bromofenolo soluzione R1

Blu acido 1. Blu VS. Blu sulfan. Sodio [[[4-dietilammi-

ehcificepS

Disciogliere 50 mg di blu bromofenolo R, riscal-

dando leggermente, in 3,73 ml di sodio idrossido nofenil](2,4-disolfonatofenil)metilen]cicloesa-2,5-dien-
0,02 M e diluire a 100 ml con acqua R. 1-iliden]dietilammonio.
. 1012803. Polvere violetta, solubile in acqua. Le soluzioni diluite
Blu bromofenolo soluzione R2
sono blu e virano al giallo per aggiunta di acido clori-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Disciogliere, riscaldando, 0,2 g di blu bromofe- drico concentrato.

nolo R in 3 ml di sodio idrossido 0,1 M e 10 ml di . Vedere blu acido 93 R.
alcool R. Dopo aver preparato la soluzione, Blu di Poirrier

lasciare raffreddare e diluire a 100 ml con alcool R. Blu di Poirrier soluzione . Vedere blu acido 93 solu-
Blu bromotimolo . C27H28Br2O5S. (Mr 624). 1012900. zione R.
[76-59-5]. 3',3''-Dibromotimolsolfonftaleina. 4,4'-(3H- Blu idrossinaftolo, sale sodico . C20H11N2Na3O11S3.
ecidnI

2,1-Benzossatiol-3-iliden)bis[2-bromo-6-isopropil-3-me- (Mr 620). 1044500. [63451-35-4]. Trisodio 2,2'-diidrossi-

tilfenolo] S,S-diossido. Bromotimolo azzurro. 1,1'-azonaftalen-3',4,6'-trisolfonato.

407
Reattivi

Blu metilene . C16H18ClN3S.xH2O. (Mr 319,9 per la Cristalli gialli, poco solubili in acqua, molto solubili in
sostanza anidra). 1055800. [7220-79-3]. Schultz No. alcool e in metanolo, praticamente insolubili in acetone
1038. Colour Index No. 52015. 3,7-Bis(dimetilam- e in etere.
mino)-5-fenotiazinio cloruro. Si presenta in diverse p.f.: circa 245 ‘C, con decomposizione.
forme idratate e puo© contenere fino al 22 per cento di .
acqua. Blu tetrazolio soluzione alcalina

Ad 1 volume di una soluzione (2 g/l) di blu tetra-

Polvere cristallina, verde scuro o bronzo, molto solubile zolio R aggiungere 3 volumi di una soluzione
in acqua, solubile in alcool. (120 g/l) di sodio idrossido R in metanolo R.
Blu Nilo . C20H21N3O5S. (Mr 415,5). 1058200.
A Preparare al momento dell'uso.
[3625-57-8]. Schultz No. 1029. Colour Index No. 51180. . C27H30O5S. (Mr 466,6). 1090600. [76-61-9].
5-Ammino-9-dietilamminobenzo[a]fenossazinio idro- Blu timolo

Timolsolfonftaleina. 4,4'-(3H-2,1-benzossatiol-3-ili-
geno solfato. Nilo blu A. den)bis[2-isopropil-5-metilfenolo] S,S-diossido.
Polvere cristallina verde con una lucentezza bronzea, Polvere cristallina da verde-brunastra a blu-verdastra,
moderatamente solubile in alcool, in acido acetico gla- poco solubile in acqua, solubile in alcool e nelle solu-
ciale e in piridina. zioni diluite di idrossidi alcalini.
Una soluzione 0,005 g/l in alcool al 50 per cento V/V R . 1090601.
presenta un'assorbanza massima (2.2.25) a 640 nm.
Blu timolo soluzione

Disciogliere 0,1 g di blu timolo R in una miscela di

Blu Nilo A soluzione . 1058201. Nilo blu A solu- 2,15 ml di sodio idrossido 0,1 M e 20 ml di alcool R
zione. e diluire a 100 ml con acqua R.
Soluzione 10 g/l in acido acetico anidro R. Saggio di sensibilita© . A 0,1 ml della blu timolo solu-
Saggio di sensibilita© . A 50 ml di acido acetico zione aggiungere 100 ml di acqua esente da anidride
anidro R aggiungere 0,25 ml di Blu Nilo A solu- carbonica R e 0,2 ml di sodio idrossido 0,02 M. La
zione. La soluzione e© blu. Per aggiunta di 0,1 ml di soluzione e© blu. Non sono necessari piu© di 0,15 ml
acido perclorico 0,1 M, la colorazione vira al di acido cloridrico 0,02 M per far virare la colora-
verde-bluastro. zione al giallo.
Viraggio. Da pH 9,0 (blu) a pH 13,0 (rosso). Viraggio. Da pH 1,2 (rosso) a pH 2,8 (giallo); da
pH 8,0 (verde-oliva) a pH 9,6 (blu).
Blu nitrotetrazolio . C40H30Cl2N10O6. (Mr 818). . C15H16ClN3S. (Mr 305,8). 1091900.
1060000. [298-83-9]. 3,3'-(3,3'-Dimetossi-4,4'-difeni-
Blu toluidina

[92-31-9]. Schultz No. 1041. Colour Index No. 52040.

len)bis[2-(4-nitrofenil)-5-fenil-2H-tetrazolio] dicloruro. Blu toluidina O. 3-Ammino-7-dimetilammino-2-metil-
Blu p-nitrotetrazolio. 5-fenotiazinio cloruro.
Cristalli, solubili in metanolo dando luogo ad una solu- Polvere verde scuro, solubile in acqua, poco solubile in
zione gialla limpida. alcool.
p.f.: circa 189 ‘C, con decomposizione. Boldina . C19H21NO4. (Mr 327,4). 1118800. [476-70-0].
Blu oracet 2R . C20H14N2O2. (Mr 314,3). 1061100. 1,10-Dimetossi-6a -aporfina-2,9-diolo.
a

[4395-65-7]. Colour Index No. 61110. 1-Ammino-4- Polvere bianca cristallina, poco solubile in acqua, solu-
(fenilammino)antracen-9,10-dione. bile in alcool e nelle soluzioni diluite di acidi.
20 : circa + 127, determinato su una soluzione (1 g/l)
p.f.: circa 194 ‘C. ‰
DŠ

. C14H12Cl2N4O2. (Mr 339,2). 1037400. in etanolo R.

Blu solido B sale

[84633-94-3]- Schultz No. 490. Colour Index. No. p.f.: circa 163 ‘C.
37235. 3,3'-Dimetossidifenil-4,4'bisdiazonio dicloruro. Cromatografia. Esaminato come prescritto nella mono-
Polvere verde scuro, solubile in acqua. E' stabilizzata grafia Boldo foglia (1396), il cromatogramma presenta
per aggiunta di zinco cloruro. un'unica macchia principale.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro-
Conservare in recipiente ermeticamente chiuso, a una matografia liquida (2.2.29) nelle condizioni prescritte
temperatura compresa tra 2 ‘C e 8 ‘C. nella monografia Boldo foglia (1396) usando la
Blu sulfan .Vedere blu di disulfina R. sostanza in esame come soluzione in esame.
. C40H32Cl2N8O2. (Mr 728). 1089000. L'area del picco principale non e© inferiore al 99,0 per
cento dell'area totale dei picchi.
Blu tetrazolio

[1871-22-3]. 3,3'-(3,3'-Dimetossi[1,1'-difenil]-4,4'-diil)-
bis[2,5-difenil-2H-tetrazolio] dicloruro. Borace . Vedere la monografia Borace (0013).

408
 Reattivi

inoizircserP
. C10H18O. (Mr 154,3). 1011900. [507-70-0]. . 1012301.

ilareneG
Borneolo Bromelina soluzione

endo-1,7,7-Trimetilbiciclo[2.2.1]eptan-2-olo. Soluzione 10 g/l di bromelina R in una miscela di

Cristalli incolori, sublimano facilmente, praticamente 1 volume di tampone fosfato soluzione a pH 5,5 R e
insolubili in acqua, molto solubili in alcool, in etere e 9 volumi di una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R.
in etere di petrolio.
. Br2. (Mr 159,8). 1012400. [7726-95-6].

isilanA id
p.f.: circa 208 ‘C.

idoteM
Bromo

Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su Liquido fumante rosso-brunastro, poco solubile in

strato sottile (2.2.27), usando gel di silice G R come acqua, solubile in alcool e in etere.
sostanza di rivestimento. Deporre sulla lastra 10 l di m d2020 : circa 3,1.
una soluzione 1 g/l in toluene R. Eluire per un percorso . Vedere acqua di bromo R.

irotinetnoC
/ ilairetaM
di 10 cm usando cloroformio R. Lasciare asciugare la Bromo (acqua di)

. 1012401.
lastra all'aria, spruzzare con anisaldeide soluzione R, Bromo soluzione

usando 10 ml per una lastra di 200 mm 200 mm, e

2 Disciogliere 30 g di bromo R e 30 g di potassio bro-
scaldare a 100-105 ‘C per 10 min. Il cromatogramma muro R in acqua R e diluire a 100 ml con lo stesso
ottenuto presenta solo una macchia principale. solvente.
. C12H20O2. (Mr 196,3). 1012000. . C9H11BrN2O5. (Mr 307,1).

ivittaeR
Bornile acetato

[5655-61-8]. endo-1,7,7-Trimetilbiciclo[2.2.1]ept-2-il ace- 5-Bromo-2'-desossiuridina

1012500. [59-14-3]. 5-Bromo-1-(2-desossi- -d-eritro-

tato. pentofuranosil)-1H,3H-pirimidin-2,4-dione.
b

Cristalli incolori o liquido incolore, molto poco solu-

bile in acqua, solubile in alcool e in etere. p.f.: circa 194 ‘C.
p.f.: circa 28 ‘C. Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-

itnemogrA
ilareneG
Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su grafia Idoxuridina (0669), deponendo 5 ml di una solu-
strato sottile (2.2.27), usando gel di silice G R come zione 0,25 g/l. Il cromatogramma ottenuto presenta
sostanza di rivestimento. Deporre sulla lastra 10 l di m solo una macchia principale.
una soluzione 2 g/l in toluene R. Eluire per un percorso . C21H16Br2O5S. (Mr 540,2).
di 10 cm usando cloroformio R. Lasciare asciugare la
Bromocresolo porpora

eifargonoM
1012700. [115-40-2]. 3',3''-Dibromo-o-cresolsolfonfta-

ilareneG
lastra all'aria, spruzzare con anisaldeide soluzione R, leina. 4,4'-(3H-2,1-Benzossatiol-3-iliden)bis[2-bromo-
usando 10 ml per una lastra di 200 mm 200 mm, e
2 6-metilfenolo]-S,S-diossido. Rosso bromocresolo.
scaldare a 100-105 ‘C per 10 min. Il cromatogramma Polvere rosata, praticamente insolubile in acqua, solu-
ottenuto presenta solo una macchia principale. bile in alcool e nelle soluzioni diluite di idrossidi

ehcituecamraF
Boro tricloruro . BCl3. (Mr 117,2). 1112000. [10294-34-5]. alcalini.
Gas incolore. Reagisce violentemente con acqua.

emroF
Disponibile sotto forma di soluzioni in adatti solventi Bromocresolo porpora soluzione . 1012701.
(2-cloroetanolo, diclorometano, esano, eptano, meta- Disciogliere 50 mg di bromocresolo porpora R in
nolo). 0,92 ml di sodio idrossido 0,1 M e 20 ml di alcool R
n20D : circa 1,420. e diluire a 100 ml con acqua R.
Saggio per la sensibilita© . A 0,2 ml della soluzione di
eiretaM
p.e.: circa 12,6 ‘C.

emirP
Attenzione: tossico, corrosivo. bromocresolo porpora aggiungere 100 ml di acqua
. 1112001. Una solu- esente da anidride carbonica R e 0,05 ml di sodio
idrossido 0,02 M. La soluzione e© blu-violetta. Non
Boro tricloruro-metanolo soluzione

zione contenente 120 g/l di BCl3 in metanolo R.

sono necessari piu© di 0,2 ml di acido cloridrico
ehcituecamraF

Conservare al riparo dalla luce a ^20 ‘C, preferibil-

inoizaraperP

ehcificepS

mente in tubi sigillati. 0,02 M per far virare il colore al giallo.

Boro trifluoruro . BF3. (Mr 67,8). 1012100. [7637-07-2]. Viraggio. Da pH 5,2 (giallo) a pH 6,8 (blu-violetto).
Gas incolore. .Vedere verde bromocresolo R.
. 1012101. Bromocresolo verde

. C8H8BrCl2O3PS. (Mr 366,0). 1123700.

ehcitapoemO

Boro trifluoruro-metanolo soluzione

inoizaraperP

Una soluzione contenente 140 g/l di boro trifluoruro R Bromofos

[2104-96-3].
in metanolo R.
. 1012300. [37189-34-7]. Puo© essere utilizzata una adatta e certificata soluzione
di riferimento (10 ng/ml in iso-ottano).
Bromelina

Concentrato di enzimi proteolitici ottenuto da Ananas

comosus Merr. Bromofos-etile . C10H12BrCl2O3PS. (Mr 394,0). 1123800.
Polvere giallo opaca. [4824-78-6].
ecidnI

Attivita© : 1 g libera in 20 min circa 1,2 g di azoto ammi- Puo© essere utilizzata una adatta e certificata soluzione
nico da una soluzione di gelatina R a 45 ‘C e a pH 4,5. di riferimento (10 ng/ml in iso-ottano).

409
Reattivi

BRP indicatore soluzione . 1013000. Butile acetato R1 . 1013401.

Disciogliere 0,1 g di blu bromotimolo R, 20 mg di rosso Liquido incolore, limpido, infiammabile, poco
metile R e 0,2 g di fenolftaleina R in alcool R e diluire a solubile in acqua, miscibile con alcool e con etere.
100 ml con lo stesso solvente. Filtrare.
Brucina . C23H26N2O4.2H2O. (Mr 430,5). 1013100. d2020 : circa 0,883.
[357-57-3]. 10,11-Dimetossistricnina. n20D : circa 1,395.
Cristalli incolori, poco solubili in acqua, molto solubili Butanolo. Non piu© dello 0,2 per cento, determinato
in alcool e in etere. mediante gas cromatografia.
p.f.: circa 178 ‘C.
. C4H8O. (Mr 72,1). 1134400. [123-72-8]. Butir- n-Butile formiato. Non piu© dello 0,1 per cento,
determinato mediante gas cromatografia
Butanale

raldeide.
d2020 : circa 0,806. n-Butile propionato. Non piu© dello 0,1 per cento,
n20D : circa 1,380 determinato mediante gas cromatografia.
p.e.: circa 75 ‘C. Acqua. Non piu© dello 0,1 per cento.
Butanolo . C4H10O. (Mr 74,1). 1013200. [71-36-3]. Determinazione quantitativa. Non meno del 99,5
n-Butanolo. 1-Butanolo. Alcool butilico. per cento di C6H12O2, determinato mediante gas
Liquido incolore, limpido, miscibile con alcool. cromatografia.
d2020 : circa 0,81.
p.e.: 116-119 ‘C. Butile paraidrossibenzoato . 1103900. [94-26-8]. Vedere
2-Butanolo R1 . C4H10O. (Mr 74,1). 1013301. [78-92-2]. la monografia Butile paraidrossibenzoato (0881).
Alcool sec-butilico. tert- . C4H10O2. (Mr 90,1). 1118000.
Contiene non meno del 99,0 per cento di C4H10O.
Butilidroperossido

[75-91-2]. 1,1-Dimetiletilidroperossido.
Liquido incolore, limpido, solubile in acqua, miscibile Liquido infiammabile, solubile nei solventi organici.
con alcool e con etere.
d2020 : circa 0,81. d2020 : 0,898.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per n20D : 1,401.
cento distilla tra 99 ‘C e 100 ‘C.
Determinazione quantitativa. Mediante gas cromatogra- p.e.: 35 ‘C.
fia come descritto nella cromatografia Alcool isopropi- Butilidrossitoluene . 1013800. [128-37-0]. 2,6-Di-tert-
lico (0970). butil-4-metilfenolo. Idrossitoluene butilato. Vedere la
Butilammina . C4H11N. (Mr 73,1). 1013600. [109-73-9]. monografia Butilidrossitoluene (0581).
1-Butanammina. tert . 1013900. [1634-04-4]. Vedere
Distillare e usare entro un mese.
-Butilmetiletere

(1,1-dimetiletil)metiletere R.
Liquido incolore, miscibile con acqua, con alcool e . C4H6O2. (Mr 86,1). 1104000. [96-48-0].
con etere. Butirrolattone

Diidro-2(3H)-furanone. -Butirrolattone.
n20D : circa 1,401.
c

p.e.: circa 78 ‘C. Liquido oleoso, miscibile con acqua, solubile in meta-
nolo ed in etere.
tert-Butilammina . 1100900. [75-64-9]. Vedere (1,1-dime-
til)etilammina R. n25D : circa 1,435.
Butile acetato . C6H12O2. (Mr 116,2). 1013400. p.e.: circa 204 ‘C.
[123-86-4].
Liquido infiammabile, incolore, limpido, poco solubile Cadmio . Cd. (Mr 112,4). 1014100. [10108-64-2].
in acqua, miscibile con alcool e con etere. Metallo bianco-argenteo brillante, praticamente inso-
d2020 : circa 0,88. lubile in acqua, molto solubile in acido nitrico e in
n20D : circa 1,395. acido cloridrico caldo.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per Caffeina . 1014400. [58-08-2].Vedere la monografia Caf-
cento distilla tra 123 ‘C e 126 ‘C. feina (0267).

410
 Reattivi

inoizircserP
. C4H6CaO4. (Mr 158,2). . CaSO4.ÃÙÄH2O. (Mr 145,1). 1015200.

ilareneG
Calcio acetato anidro Calcio solfato

Polvere bianca, solubile in acqua dando una soluzione [10034-76-1]. Calcio solfato emiidrato.
leggermente opalescente che diventa limpida per Polvere bianca, solubile in circa 1500 parti di acqua,
riscaldamento o per aggiunta di alcune gocce di acido praticamente insolubile in alcool. Se mescolata con del-
acetico R. Contiene non meno del 95 per cento di calcio l'acqua pari alla meta© della sua massa, solidifica rapi-

isilanA id
acetato anidro R che si determina mediante il saggio damente formando una massa dura e porosa.

idoteM
Ceneri solforiche (2.4.14). Calcio solfato soluzione . 1015201.
1 g di ceneri equivale a 1,162 g di C4H6CaO4. Agitare 5 g di calcio solfato R con 100 ml di acqua R
Calcio carbonato . 1014500. [471-34-1]. Vedere la mono- per 1 h e filtrare.
grafia Calcio carbonato (0014).

irotinetnoC
/ ilairetaM
. 1014501. Calcone - acido carbossilico . Vedere acido calconcarbos-
Calcio carbonato R1

Soddisfa ai requisiti del calcio carbonato R e all'ul- silico R.

teriore requisito seguente: . C10H16. (Mr 136,2). 1139200. [79-92-5].
Cloruri (2.4.4). Non piu© di 50 ppm.
Camfene

2,2-Dimetil-3-metilenbiciclo[2.2.1]eptano.
Il camfene utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-

ivittaeR
Calcio cloruro . 1014600. [10035-04-8]. Vedere la mono-
grafia Calcio cloruro (0015). teriore saggio seguente:
Calcio cloruro soluzione . 1014601. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Soluzione 73,5 g/l. cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
. 1014602. fia Rosmarino essenza (1846).

itnemogrA
ilareneG
Il contenuto non e© inferiore al 90 per cento calcolato
Calcio cloruro soluzione 0,01 M

Disciogliere 0,147 g di calcio cloruro R in acqua R e mediante la procedura di normalizzazione.

diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente.
. 1014603. Canfora . 1113000. [76-22-2].Vedere la monografia Can-
Calcio cloruro soluzione 0,02 M

Disciogliere 2,94 g di calcio cloruro R in 900 ml di fora racemica (0655).

eifargonoM
La canfora usata in gas cromatografia soddisfa all'ulte-

ilareneG
acqua R, portare a pH 6,0-6,2 e diluire a 1000,0 ml
con acqua R. riore saggio seguente:
Conservare a 2-8 ‘C. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
. CaCl2.4H2O. (Mr 183,1). 1014700. fia Lavanda essenza (1338).

ehcituecamraF
Calcio cloruro R1

Calcio cloruro tetraidrato. Soluzione in esame. Una soluzione 10 g/l della sostanza

emroF
Contiene non piu© di 0,05 ppm di Fe. in esame in esano R.
Calcio cloruro anidro . CaCl2. (Mr 111,0). 1014800. L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per
[10043-52-4]. cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte-
Contiene non meno del 98,0 per cento di CaCl2, calco- nuto. Trascurare i picchi dovuti al solvente.
lato con riferimento alla sostanza essiccata.
eiretaM
. 1047400. [1332-58-7].

emirP
Caolino leggero

Granuli bianchi, deliquescenti, solubilissimi in acqua, Silicato di alluminio idrato naturale purificato. Con-
molto solubili in alcool e in metanolo. tiene un idoneo agente disperdente.
Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore al Polvere bianca, impalpabile, esente da particelle sab-
ehcituecamraF

5,0 per cento, determinata per essiccamento in stufa a

inoizaraperP

biose, untuosa al tatto, praticamente insolubile in

ehcificepS

200 ‘C. acqua e negli acidi minerali.

Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al Particelle grossolane. Introdurre 5,0 g in un cilindro con
riparo dall'umidita© . tappo a smeriglio lungo circa 160 mm e con diametro
. Ca(OH)2. (Mr 74,1). 1015000. [1305- di 35 mm ed aggiungere 60 ml di una soluzione (10 g/l)
ehcitapoemO
inoizaraperP

Calcio idrossido

62-0]. Calcio diidrossido. di sodio pirofosfato R. Agitare energicamente e lasciare

Polvere bianca, quasi completamente solubile in 600 a riposo per 5 min. Usando una pipetta, prelevare
parti di acqua. 50 ml del liquido da un punto posto a circa 5 cm sotto
. 1015001. la superficie. Al liquido rimanente aggiungere 50 ml di
acqua R, agitare, lasciare a riposo per 5 min e prelevare
Calcio idrossido soluzione

Soluzione satura preparata di recente. 50 ml come descritto prima. Ripetere le operazioni fin-
ecidnI

Calcio lattato . 1015100. [41372-22-9]. Vedere la mono- chë sia stato prelevato un totale di 400 ml. Trasferire la
grafia Calcio lattato pentaidrato (0468). sospensione rimanente in una capsula per evaporazione.

411
Reattivi

Evaporare a secco a b.m. ed essiccare il residuo fino a Carbone grafitato per cromatografia . 1015900.
massa costante ad una temperatura di 100-105 ‘C. Il resi- Catene di carbonio lunghe piu© di C9 con una dimen-
duo pesa non piu© di 25 mg (0,5 per cento). sione delle particelle di 400-850 mm.
Particelle fini. Disperdere 5,0 g in 250 ml di acqua R agi- Densita© : 0,72
tando vigorosamente per 2 min. Versare immediata- Area superficiale: 10 m2/g.
mente in un cilindro di vetro con diametro di 50 mm e, Non usare ad una temperatura superiore a 400 ‘C.
usando una pipetta, trasferire 20 ml in una capsula di . Vedere anidride carbonica R.
vetro, evaporare a secco a b.m. ed essiccare fino a
Carbonio diossido

. Vedere Carbonio solfuro R.

massa costante a 100-105 ‘C. Lasciare la sospensione
Carbonio disolfuro

rimanente a riposo a 20 ‘C per 4 h e, ponendo la punta Carbonio monossido . CO. (Mr 28,01).1016000. [630-08-0].
di una pipetta esattamente a 5 cm sotto la superficie Monossido di carbonio.
del liquido, aspirare altri 20 ml senza smuovere il Contiene non meno del 99,97 per cento V/V di CO.
sedimento, porre in una capsula di vetro, evaporare a Carbonio monossido R1 . CO. (Mr 28,01). 1134600.
secco fino a massa costante ad una temperatura di [630-08-0].
100-105 ‘C. La massa del secondo residuo non e© infe- Contiene non meno del 99 per cento V/V di CO.
riore al 70 per cento di quella del primo residuo. Carbonio solfuro . CS2. (Mr 76,1). 1015800. [75-15-0].
. C6H11NO. (Mr 113,2). 1104200. Liquido infiammabile, incolore o giallastro, pratica-
e-Caprolattame

[105-60-2]. Esano-6-lattame. mente insolubile in acqua, miscibile con etanolo e con

etere.
Lamine igroscopiche, molto solubili in acqua, in eta- d2020 : circa 1,26.
nolo e in metanolo. p.e.: da 46 ‘C a 47 ‘C.
p.f.: circa 70 ‘C. Carbonio tetracloruro . CCl4. (Mr 153,8). 1016100.
Capsaicina . C18H27NO3. (Mr 305,4). [56-23-5]. Tetraclorometano.
Cristalli incolori, praticamente insolubili in acqua, Liquido incolore, limpido, praticamente insolubile in
solubili in alcool, in benzene e in cloroformio. acqua, miscibile con alcool.
d2020 : da 1,595 a 1,598.
p.f.: da 64 ‘C a 65 ‘C. p.e.: da 76 ‘C a 77 ‘C.
Carbazolo . C12H9N. (Mr 167,2). 1015400. [86-74-8]. . C10H16. (Mr 136,2). 1124000. [498-15-7]. 3,7,7-
Dibenzopirrolo.
3-Carene

Trimetilbiciclo[4.1.0]ept-3-ene. 4,7,7-Trimetil-3-norca-
Cristalli, praticamente insolubili in acqua, molto solu- rene.
bili in acetone, poco solubili in etanolo. Liquido con odore pungente, moderatamente solubile
p.f.: circa 245 ‘C. in acqua, solubile in solventi organici.
d2020 : circa 0,864.
Carbofenotion . C11H16ClO2PS3. (Mr 342,9). 1016200. n20D : da 1,473 a 1,474.
[786-19-6]. O,O-dietileS-[[(4-clorofenil)tio]metil]fosforo 20 : da +15 a +17.
ditioato. ‰ Š
D
p.e.: da 170 ‘C a 172 ‘C.
Liquido giallastro, praticamente insolubile in acqua, Il 3-carene utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
miscibile con i solventi organici. teriore saggio seguente:
d425 : circa 1,27. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Per la monografia Lanolina (0134) puo© essere usata cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
una opportuna soluzione di riferimento certificata fia Noce moscata essenza (1552).
(10 ng/ml in isottano). Il contenuto non e© inferiore al 95,0 per cento, calcolato
. 1015500. [9007-20-9]. mediante la procedura di normalizzazione.
Carbomero
. C15H24. (Mr 204,4). 1101000. [87-44-5].
Polimero reticolato dell'acido acrilico; contiene una
b-Cariofillene

(E)-(1R,9S)-4,11,11-Trimetil-8-metilenbiciclo[7.2.0]un-
grande proporzione (dal 56 per cento al 68 per cento) dec-4-ene.
di gruppi carbossilici (CO2H), calcolati con riferimento Liquido oleoso, praticamente insolubile in acqua,
alla sostanza essiccata a 80 ‘C per 1 h.6 La massa mole- miscibile con alcool e con etere.
colare relativa media e© di circa 3 10 .
2
d417 : 0,905 circa.
pH (2.2.3). Il pH di una sospensione 10 g/l e© circa 3. n20D : 1,492 circa.
15 : ^5,2 circa.
Carbone attivato . 1017800. [64365-11-3]. Vedere la ‰ Š
D
monografia Carbone attivato (0313). p.e.14: da 129 ‘C a 130 ‘C.

412
 Reattivi

inoizircserP
Il -cariofillene utilizzato in gas cromatografia soddi- . Vedere tornasole cartina

ilareneG
Cartina azzurra al tornasole

sfa all'ulteriore saggio seguente: blu R.

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas Cartina rossa al tornasole . Vedere tornasole cartina
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- rossa R.
fia Garofano chiodi (1091) usando la sostanza in esame . C10H14O. (Mr 150,2). 1016400. [499-75-2].

isilanA id
Carvacrolo

come soluzione in esame. 5-Isopropil-2-metilfenolo.

idoteM
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,5 per Liquido brunastro, praticamente insolubile in acqua,
cento dell'area totale dei picchi. solubilissimo in alcool e in etere.
Carminio indaco . C16H8N2Na2O8S2. (Mr 466,3). d2020 : circa 0,975.
1045600. [860-22-0]. Schultz No. 1309. Colour Index n20D : circa 1,523.

irotinetnoC
/ ilairetaM
No. 73015. Disodio 3,3'-dioxo-2,2'-bisindoliliden-5,5'- p.e.: circa 237 ‘C.
disolfonato. E 132. Il carvacrolo usato in gas cromatografia soddisfa all'ulte-
Generalmente contiene sodio cloruro. riore saggio seguente:
Polvere blu o blu-violetta o granuli blu con lucentezza Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
color rame, moderatamente solubili in acqua, pratica- cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-

ivittaeR
mente insolubili in alcool. E' precipitato da una solu- fia Menta essenza (0405).
zione acquosa per aggiunta di sodio cloruro. Soluzione in esame. Disciogliere 0,1 g in circa 10 ml di
Carminio indaco soluzione . 1045601. acetone R.
Ad una miscela di 10 ml di acido cloridrico R e L'area del picco principale non e© inferiore al 95,0 per

itnemogrA
ilareneG
990 ml di acido solforico esente da azoto R cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte-
(200 g/l) aggiungere 0,2 g di carminio indaco R. nuto. Trascurare i picchi dovuti all'acetone.
La soluzione soddisfa al saggio seguente: Carvone . C10H14O. (Mr 150,2). 1016500. [2244-16-8].
Aggiungere 10 ml a una soluzione di 1,0 mg di (S)-p-Menta-6,8-dien-2-one. (+)-2-Metil-5-(1-metilete-
potassio nitrato R in 10 ml di acqua R, aggiungere nil)-2-cicloesesen-1-one.

eifargonoM

ilareneG
rapidamente 20 ml di acido solforico esente da Liquido praticamente insolubile in acqua, miscibile con
azoto R e scaldare fino all'ebollizione. La colora- alcool.
zione blu scompare entro 1 min. d2020 : circa 0,965.
n20D : circa 1,500.

ehcituecamraF
Carminio indaco soluzione R1 . 1045602. 20 : circa + 61.
Disciogliere 4 g di carminio indaco R in circa 900 ml di D

emroF
‰ Š

acqua R aggiunti in diverse porzioni. Aggiungere 2 ml p.e.: circa 230 ‘C.

di acido solforico R e diluire a 1000 ml con acqua R. Il carvone utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
Determinazione del titolo. Porre in una beuta a collo teriore saggio seguente:
largo da 100 ml, 10,0 ml di soluzione standard di nitrato Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
eiretaM
(NO3 100 ppm) R, 10 ml di acqua R, 0,05 ml della carmi-

emirP
nio indaco soluzione R1 e in una sola aggiunta, ma con fia Menta essenza (0405) usando la sostanza in esame
cautela, 30 ml di acido solforico R. Titolare la soluzione come soluzione in esame.
immediatamente, usando la carminio indaco solu- L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per
cento dell'area totale dei picchi.
ehcituecamraF

zione R1, fino ad ottenere una colorazione blu stabile.

inoizaraperP

ehcificepS

Il numero di millilitri usati, n, equivale a 1 mg di NO3. Caseina . 1016600. [9000-71-9].

Carrubo gomma, semi di . 1104500. Miscela di fosfoproteine correlate ottenute dal latte.
Endosperma macinato delle nocelle del frutto di Cera- Polvere amorfa o granuli bianchi, molto poco solubili
tonia siliqua L. Taub. in acqua e nei solventi organici non polari. E' solubile
ehcitapoemO
inoizaraperP

Polvere bianca contenente dal 70 per cento all'80 per in acido cloridrico concentrato dando luogo ad una
cento di una gomma solubile in acqua consistente prin- soluzione violetto pallido. Forma sali con acidi e basi.
cipalmente di galattomannoglicone. Il suo punto isoelettrico e© a pH 4,7 circa. Le soluzioni
alcaline sono levogire.
Carta al, alla, cartina al, alla. Vedere al nome del reat- . C15H14O6.xH2O. (Mr 290,3 per la sostanza
tivo di cui e© impregnata.
Catechina

anidra). 1119000. [154-23-4]. (+)-(2R,3S)-2-(3,4-Di-

ecidnI

Cartina all'argento-manganese . Vedere manganese- idrossifenil)-3,4-diidro-2H-cromen-3,5,7-triolo. Cate-

argento cartina R. colo. Cianidanolo. Cianidolo.

413
Reattivi

Catolita per focalizzazione isoelettrica pH da 3 a 5 . Preparazione di uno strato sottile. Sospendere 25 g in

1113100. -Alanina 0,1 M. 100 ml di acqua R e omogenizzare usando un miscela-
Disciogliere 8,9 g di -alanina R in acqua R e diluire a tore elettrico per 60 s. Rivestire le lastre, accuratamente
1000 ml con lo stesso solvente. pulite, con uno strato di 0,1 mm di spessore, usando un
. 1017200. dispositivo appropriato. Lasciar seccare all'aria.
Cefalina

A 0,5-1 g di cervello bovino essiccato con acetone, Cerio e ammonio nitrato . (NH4)2Ce(NO3)6. (Mr 548,2).
polvere R aggiungere 20 ml di acetone R e lasciare a 1005000. [16774-21-3].
riposo per 2 h. Centrifugare a 500 g per 2 min e decan- Polvere cristallina giallo-arancione o cristalli traspa-
tare il liquido sopranatante. Essiccare il residuo a pres- renti arancioni, solubili in acqua.
sione ridotta; al materiale essiccato aggiungere 20 ml Cerio e ammonio solfato. (NH4)4Ce(SO4)4.2H2O.
di cloroformio R e lasciare a riposo per 2 h, agitando (Mr 633). 1005100. [10378-47-9].
frequentemente. Rimuovere il materiale solido per fil- Polvere cristallina o cristalli giallo-arancione, solubili
trazione o centrifugazione ed evaporare il cloroformio lentamente in acqua.
a pressione ridotta. Sospendere il residuo in 5-10 ml di Cerio(-ico) solfato. Ce(SO4)2.4H2O. (Mr 404,3).
una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R. 1017300. [123333-60-8]. Cerio(IV) solfato; solfato
I solventi usati per preparare il reattivo dovrebbero conte- cerico.
nere un idoneo antiossidante, per esempio, 0,02 g/l di Polvere cristallina o cristalli, giallo o giallo-arancione,
butilidrossianisolo. molto poco solubili in acqua, lentamente solubili negli
Conservare congelato o liofilizzato ed usare entro acidi diluiti.
3 mesi. Cerio(-oso) nitrato. Ce(NO3)3.6H2O. (Mr 434,3).
. C28H40Cl2N2O4.7H2O. (Mr 666). 1017400. [10294-41-4]. Cerio trinitrato esaidrato.
Polvere cristallina, incolore o giallo pallido, molto solu-
Cefelina dicloridrato

1017100. [5884-43-5]. (R)-1-[(2S,3R,11bS)-3-Etil-

1,3,4,6,7,11b-esaidro-9,10-dimetossi-2H-benzo[a]chino- bile in acqua e in alcool.
lizin-2-ilmetil]-1,2,3,4-tetraidro-7-metossiisochinolin-6- Cervello bovino essiccato con acetone, polvere . 1061300.
olo cloridrato eptaidrato. Tagliare in piccoli pezzi un cervello bovino fresco dopo
Polvere cristallina da bianca a giallastra, molto solubile averlo privato del tessuto connettivo e vascolare. Porre
in acqua, solubile in acetone e in alcool. in acetone R per una deidratazione preliminare. Com-
20 : circa + 25, determinato su una soluzione 20 g/l. pletare la deidratazione mescolando in un mortaio
‰
D
Š
30 g di questo materiale con porzioni successive, cia-
Cellulosa per cromatografia . 1016800. [9004-34-6]. scuna da 75 ml, di acetone R fino ad ottenere una pol-
Polvere omogenea, bianca, fine, con una dimensione vere secca dopo la filtrazione. Essiccare a 37 ‘C per 2 h
media delle particelle inferiore a 30 mm. o fino a scomparsa dell'odore di acetone.
Preparazione di uno strato sottile. Sospendere 15 g in Cesio cloruro . CsCl. (Mr 168,4). 1014200. [7647-17-8].
100 ml di acqua R e omogenizzare in un miscelatore Polvere bianca, solubilissima in acqua, molto solubile
elettrico per 60 s. Rivestire le lastre, accuratamente in metanolo, praticamente insolubile in acetone.
pulite, con uno strato di 0,1 mm di spessore, usando un . C19H42BrN. (Mr 364,5).
dispositivo appropriato. Lasciar seccare all'aria.
Cetiltrimetilammonio bromuro

1017700. [57-09-0]. Cetrimmonio bromuro. N-Esadecil-

Cellulosa per cromatografia R1 . 1016900. N,N,N-trimetilammonio bromuro.
Cellulosa microcristallina. Polvere omogenea, bianca, Polvere cristallina bianca, solubile in acqua, molto
fine, con una dimensione media delle particelle infe- solubile in alcool.
riore a 30 mm. p.f.: circa 240 ‘C.
Preparazione di uno strato sottile. Sospendere 25 g in Cetostearile sodico solfato .Vedere sodio cetostearile sol-
90 ml di acqua R e omogenizzare in un miscelatore elet- fato R.
trico per 60 s. Rivestire le lastre, accuratamente pulite, . 1017600. [8044-71-1]. Vedere la monografia
con uno strato di 0,1 mm di spessore, usando un dispo-
Cetrimide

Cetrimide (0378).
sitivo appropriato. Lasciar seccare all'aria. Chinidina . C20H24N2O2. (Mr 324,4). 1074000. [56-54-2].
Cellulosa per cromatografia F 254 . 1017000. (S)-(6-Metossichinol-4-il)[(2R,4S,5R)-5-vinilchinucli-
Cellulosa F254 microcristallina. Polvere omogenea, din-2-il]metanolo.
bianca, fine, con una dimensione media delle particelle Cristalli bianchi, molto poco solubili in acqua, modera-
inferiore a 30 mm, contenente un indicatore di fluore- tamente solubili in alcool, poco solubili in etere e in
scenza avente un'intensita© ottimale a 254 nm. metanolo.

414
 Reattivi

inoizircserP
20 :
circa + 260, determinato su una soluzione 10 g/l Liquido infiammabile, incolore, limpido, praticamente

ilareneG
‰ Š
D
in etanolo R. insolubile in acqua, miscibile con solventi organici.
p.f.: circa 172 ‘C. d2020 : circa 0,78.
Conservare al riparo dalla luce. p.e.: circa 80,5 ‘C.
. 1109500.Vedere la monografia Chini- Il cicloesano utilizzato in spettrofotometria soddisfa agli

isilanA id
idoteM
ulteriori requisiti seguenti:
Chinidina solfato

dina solfato (0017).

. C12H10O4. (Mr 218,2). 1073900. [106-34-3]. Trasmittanza minima (2.2.25) determinata usando acqua
Chinidrone

Composto equimolare di 1,4-benzochinone e idrochi- R come bianco:

none. 45 per cento a 220 nm,

irotinetnoC
70 per cento a 235 nm,

/ ilairetaM
Cristalli lucenti o polvere cristallina, verde scuro, poco
solubili in acqua, moderatamente solubili in acqua 90 per cento a 240 nm,
calda, solubili in alcool, in ammoniaca concentrata e 98 per cento a 250 nm.
in etere. Cicloesano R1 . 1023901.
p.f.: circa 170 ‘C. Soddisfa ai requisiti prescritti per il cicloesano R e

ivittaeR
Chinina . C20H24N2O2. (Mr 324,4). 1074100. [130-95-0]. all'ulteriore requisito seguente:
(R)-(6-Metossichinol-4-il)[(2S,4S,5R)-5-vinilchinucli- La fluorescenza, misurata a 460 nm, per illumina-
din-2-il]metanolo. zione con un fascio di luce eccitante a 365 nm, non
Polvere microcristallina, bianca, molto poco solubile in e© piu© intensa di quella di una soluzione contenente
acqua, poco solubile in acqua bollente, solubilissima in 0,002 ppm di chinina R in acido solforico 0,05 M.

itnemogrA
ilareneG
etanolo, solubile in etere. Cicloesilammina . C6H13N. (Mr 99,2). 1024000.
20 : circa ^167, determinato su una soluzione 10 g/l in
‰
DŠ [108-91-8]. Liquido incolore, solubile in acqua, misci-
etanolo R. bile con i comuni solventi organici.
p.f.: circa 175 ‘C. n20D : circa 1,460.

eifargonoM
Conservare al riparo dalla luce. p.e.: da 134 ‘C a 135 ‘C.

ilareneG
. 1074200. [6119-47-7]. Vedere la Cicloesilmetanolo . C7H14O. (Mr 114,2). 1135200.
[100-49-2]. Cicloesilcarbinolo.
Chinina cloridrato

monografia Chinina cloridrato (0018).

. 1074300. [6119-70-6]. Vedere la mono- Liquido con un leggero odore di canfora, solubile in

ehcituecamraF
alcool.
Chinina solfato

grafia Chinina solfato (0019).

n25D : 1,464.

emroF
Cialotrina . C23H19ClF3NO3. (Mr 449,9). 1125000.
[91465-08-6]. p.e.: circa 185 ‘C.
p.e.: da 187 ‘C a 190 ‘C. p-Cimene . C10H14. (Mr 134,2). 1113400. [99-87-6].
p.f.: circa 49 ‘C. 1-Isopropil-4-metilbenzene.
Liquido incolore, praticamente insolubile in acqua,

eiretaM
Puo© essere utilizzata un'idonea soluzione di riferimento

emirP
certificata (10 ng/ml in cicloesano). solubile in alcool e in etere.
. 1023600. [68-19-9]. Vedere la mono- d2020 : circa 0,858.
Cianocobalamina

grafia Cianocobalamina (0547). n20D : circa 1,4895.

p.e.: da 175 ‘C a 178 ‘C.
ehcituecamraF
inoizaraperP

. 1023700. [506-68-3].
ehcificepS

Cianogeno bromuro soluzione

Aggiungere goccia a goccia, raffreddando, ammonio Il p-cimene utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
tiocianato 0,1 M ad acqua di bromo R fino alla scom- teriore saggio seguente:
parsa della colorazione gialla. Preparare immediata- Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
mente prima dell'uso. cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
fia Menta essenza (0405).
ehcitapoemO
inoizaraperP

Cianoguanidina . C2H4N4. (Mr 84,1). 1023800. Soluzione in esame. La sostanza in esame.

[461-58-5]. Diciandiammide. 1-Cianoguanidina. L'area del picco principale non e© inferiore al 96,0 per
Polvere cristallina, bianca, moderatamente solubile in cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte-
acqua e in alcool, praticamente insolubile in etere e in nuto.
diclorometano. . C19H22N2O. (Mr 294,4). 1020400.
p.f.: circa 210 ‘C.
Cinconidina
ecidnI

[485-71-2]. (R)-(Chinol-4-il)[(2S,4S,5R)-5-vinilchinucli-
Cicloesano . C6H12. (Mr 84,2). 1023900. [110-82-7]. din-2-il]metanolo.

415
Reattivi

Polvere bianca, cristallina, molto poco solubile in Il cinnamile acetato utilizzato in gas cromatografia sod-
acqua e in etere di petrolio, solubile in alcool, poco disfa all'ulteriore saggio seguente:
solubile in etere. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
‰ Š
20 : da 105 a 110, determinato su una soluzione
D ÿ ÿ cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
50 g/l in alcool R. fia Cannella di Cina essenza (1496).
p.f.: circa 208 ‘C con decomposizione. Il contenuto non e© inferiore al 99,0 per cento, calcolato
Conservare al riparo dalla luce. mediante la procedura di normalizzazione.
. C19H22N2O. (Mr 294,4). 1020500. [118-10-5]. Cipermetrina . C22H19Cl2NO3. (Mr 416,3). 1125100.
Cinconina

(S)-(Chinol-4-il)[(2R,4S,5R)-5-vinilchinuclidin-2-il]me- [52315-07-8].
tanolo. p.e.: da 170 ‘C a 195 ‘C.
Polvere cristallina bianca, molto poco solubile in p.f.: da 60 ‘C a 80 ‘C.
acqua, moderatamente solubile in alcool e in metanolo, Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
poco solubile in etere. riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
20 : da + 225 a + 230, determinato su una soluzione L -Cisteina . C3H7NO2S. (Mr 121,1). 1024200. [52-90-4].
‰ Š
D
50 g/l in alcool R. Polvere, molto solubile in acqua, in alcool e in acido
p.f.: circa 263 ‘C. acetico, praticamente insolubile in acetone.
. 1024300. [7048-04-6]. Vedere la
Conservare al riparo dalla luce.
Cisteina cloridrato

monografia Cisteina cloridrato monoidrato (0895).

Cineolo . C10H18O. (Mr 154,3). 1020600. [470-82-6]. l- . C6H12N2O4S2. (Mr 240,3). 1024400.
1,8-Cineolo. Eucaliptolo. 1,8-Epossi-p-mentano.
Cistina

[56-89-3].
Liquido incolore, praticamente insolubile in acqua, Polvere cristallina, bianca, praticamente insolubile in
miscibile con etanolo e con etere. acqua e in alcool. E' solubile nelle soluzioni diluite di
d2020 : da 0,922 a 0,927. idrossidi alcalini. Si decompone a 250 ‘C.
20 : da ^218 a ^224, determinato in acido cloridrico
n20D : da 1,456 a 1,459. ‰ Š
D
Punto di solidificazione (2.2.18). Da 0 ‘C a 1 ‘C. 1 M.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Da 174 ‘C a 177 ‘C. Citrale . C10H16O. (Mr 152,2). 1020800. [5392-40-5].
Fenolo. Agitare 1 g con 20 ml di acqua R. Lasciare sepa- Miscela di (2E)- e (2Z)-3,7-Dimetilotta-2,6-dienale.
rare e aggiungere a 10 ml dello strato acquoso 0,1 ml Liquido giallo chiaro, praticamente insolubile in acqua,
di ferro(-ico) cloruro soluzione R1. Non compare alcuna miscibile con alcool, con etere e con glicerolo.
colorazione violetta. Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su
Olio di trementina. Disciogliere 1 g in 5 ml di alcool al 90 strato sottile (2.2.27), usando gel di silice GF254 R come
per cento V/V R. Aggiungere goccia a goccia acqua di sostanza di rivestimento. Deporre sulla lastra 10 ml di
bromo R preparata di recente. Non sono necessari piu© una soluzione 1 g/l in toluene R.
di 0,5 ml per far virare la colorazione al giallo persi- Eluire per un percorso di 15 cm usando una miscela di
stente per 30 min. 15 volumi di etile acetato R e 85 volumi di toluene R.
Lasciare asciugare la lastra all'aria ed esaminare alla
Residuo all'evaporazione. Non superiore allo 0,05 per luce ultravioletta a 254 nm. Il cromatogramma otte-
cento. A 10,0 ml aggiungere 25 ml di acqua R, evapo- nuto presenta solo una macchia principale.
rare a b.m. ed essiccare il residuo fino a massa costante Il citrale usato in gas cromatografia soddisfa all'ulteriore
a 100-105 ‘C. saggio seguente:
Il cineolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ulte- Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
riore saggio seguente: cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas fia Citronella essenza (1609).
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- Il contenuto di citrale (nerale + geraniale) non e© infe-
fia Menta essenza (0405) usando la sostanza in esame riore al 95,0 per cento calcolato mediante la procedura
come soluzione in esame. di normalizzazione.
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per Citronellale . C10H18O. (Mr 154,3). 1113300. [106-23-0].
cento dell'area totale dei picchi. 3,7-Dimetil-6-ottenale.
Cinnamile acetato . C11H12O2. (Mr 176,2). 1124700. Molto poco solubile in acqua, solubile in alcool.
[103-54-8]. 3-Fenil-2-propen-1-ile acetato. d2020 : da 0,848 a 0,856.
n20D : circa 1,542. n20D : circa 1,446.
p.e.: circa 262 ‘C. 20 : circa + 11,50.
‰ Š
D

416
 Reattivi

inoizircserP
Il citronellale usato in gas cromatografia soddisfa all'ul- . C25H32ClFO5. (Mr 467,0).

ilareneG
Clobetasolo propionato

teriore saggio seguente: 1097700. [25122-46-7]. 21-Cloro-9-fluoro-11 ,17-dii-

b

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas drossi-16 -metilpregna-1,4-dien-3,20-dione 17-propio-

b

cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- nato.

fia Citronella essenza (1609). Polvere cristallina bianca, insolubile in acqua, solubile

isilanA id
Il contenuto non e© inferiore al 95,0 per cento calcolato in alcool e in acetone.

idoteM
mediante la procedura di normalizzazione. ‰ Š
20 : circa + 104 (in diossano).
D
Citronellile acetato . C12H22O2. (Mr 198,3). 1135000. p.f.: circa 196 ‘C.
[150-84-5]. 3,7-Dimetil-6-otten-1-il acetato. . Vedere la monografia Clofenotano.
d2020 : circa 0,890.
Clofenotano

. 1017900. [302-17-0].Vedere la monogra-

irotinetnoC
/ ilairetaM
n20D : circa 1,443.
Cloralio idrato

fia Cloralio idrato (0265).

p.e.: circa 229 ‘C. Cloralio idrato soluzione . 1017901.
Il citronellile acetato usato in gas cromatografia soddisfa Disciogliere 80 g di cloralio idrato R in 20 ml di
all'ulteriore saggio seguente: acqua R.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas

ivittaeR
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- Cloramina . 1018000. [7080-50-4]. Vedere la monografia
fia Citronella essenza (1609). Cloramina (0381).
Il contenuto non e© inferiore al 97,0 per cento calcolato Cloramina soluzione . 1018001.
con la procedura di normalizzazione. Soluzione 20 g/l. Preparare immediatamente
prima dell'uso.

itnemogrA
Conservare in contenitore ermeticamente chiuso, al

ilareneG
riparo dalla luce. Cloramina soluzione R1 . 1018002.
Citronellolo . C10H20O. (Mr 156,3). 1134900. [106-22-9]. Soluzione 0,1 g/l di cloramina R. Preparare imme-
3,6-Dimetilott-6-en-1-olo. diatamente prima dell'uso.
Liquido limpido, incolore, praticamente insolubile in . 1018003.

eifargonoM
Cloramina soluzione R2

acqua, miscibile con alcool.

ilareneG
Soluzione 0,2 g/l. Preparare immediatamente
d2020 : circa 0,857. prima dell'uso.
n20D : circa 1,456. . C10H6Cl8. (Mr 409,8). 1124100. [12789-03-6].
p.e.: da 220 ‘C a 222 ‘C. Clordano

p.e.: circa 175 ‘C.

ehcituecamraF
Il citronellolo usato in gas cromatografia soddisfa all'ul- p.f.: circa 106 ‘C.
teriore saggio seguente:

emroF
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- riferimento di grado tecnico (10 ng/ l in iso-ottano).
m

fia Citronella essenza (1609). Clordiazepossido . 1113200. [58-25-3]. Vedere la mono-

Il contenuto non e© inferiore al 95 per cento calcolato grafia Clordiazepossido (0656).

eiretaM
con la procedura di normalizzazione. . C12H14Cl3O4P. (Mr 359.6). 1124200.

emirP
Clorfenvinfos

Conservare in contenitore ermeticamente chiuso, al [470-90-6].

riparo dalla luce. Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
. C11H10O4. (Mr 206,2). 1021300. [487-06-9]. riferimento (10 ng/ l in cicloesano).
m
ehcituecamraF

Citroptene

. C6H11ClO5. (Mr 198,6).

inoizaraperP

Limettina. 5,7-Dimetossi-2H-1-benzopiran-2-one.
ehcificepS

2-Cloro-2-desossi- D-glucosio

Aghi praticamente insolubili in acqua, in etere e in etere 1134700. [14685-79-1].

di petrolio, molto solubili in acetone e in alcool. Polvere cristallina bianca, molto igroscopica, solubile
p.f.: 145 ‘C circa. in acqua e in dimetilsolfossido, insolubile in alcool.
Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su . C7H8ClN. (Mr 141,6). 1139400.
ehcitapoemO
inoizaraperP

3-Cloro-2-metilanilina

strato sottile (2.2.27), usando gel di silice GF254 R come [87-60-5]. 6-Cloro-2-toluidina.
sostanza di rivestimento. Deporre sulla lastra 10 ml di Non miscibile con acqua, leggermente solubile in eta-
una soluzione 1 g/l in toluene R. Eluire per un percorso nolo.
di 15 cm usando una miscela di 15 volumi di etile ace- d2020 : circa 1,171.
tato R e 85 volumi di toluene R. Lasciare asciugare n20D : circa 1,587.
la lastra all'aria e esaminare alla luce ultravioletta a
p.e.: circa 115 ‘C.
ecidnI

254 nm. Il cromatogramma ottenuto presenta solo una

macchia principale. p.f.: circa 2 ‘C.

417
Reattivi

Cloroacetanilide . C8H8ClNO. (Mr 169,6). 1018100. Cloroformio . CHCl3. (Mr 119,4). 1018600. [67-66-3]. Tri-
[539-03-7]. 4'-Cloroacetanilide. clorometano.
Polvere cristallina, praticamente insolubile in acqua, Liquido incolore, limpido, poco solubile in acqua,
solubile in alcool. miscibile con alcool.
p.f.: circa 178 ‘C. d2020 : da 1,475 a 1,481.
Cloroanilina . C6H6ClN. (Mr 127,6). 1018300. [106-47-8]. p.e.: circa 60 ‘C.
4-Cloroanilina. Il cloroformio contiene lo 0,4-1,0 per cento m/m di eta-
Cristalli solubili in acqua calda, molto solubili in alcool nolo.
e in etere. Etanolo. Introdurre 1,00 g (m g) in una beuta con tappo
p.f.: circa 71 ‘C. a smeriglio. Aggiungere 15,0 ml di nitrocromico reat-
2-Cloro-4-nitroanilina . C6H5ClN2O2. (Mr 172,6). tivo R, chiudere la beuta, agitare energicamente per
1018800. [121-87-9]. 2 min e lasciare a riposo per 15 min. Aggiungere
Polvere cristallina gialla, molto solubile in metanolo. 100 ml di acqua R e 5 ml di una soluzione (200 g/l) di
p.f.: circa 107 ‘C. potassio ioduro R. Dopo 2 min titolare con sodio tiosol-
fato 0,1 M, utilizzando 1 ml di amido soluzione R come
Conservare al riparo dalla luce. indicatore, fino ad ottenere un colorazione verde chiaro
4-Clorobenzensolfonammide . C6H6ClNO2S. (Mr 191,6). (n1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M). Effettuare una prova
1097400. [98-64-6]. in bianco (n2 ml di sodio tiosolfato 0,1 M). Calcolare la
Polvere bianca. percentuale di etanolo utilizzando l'espressione:
p.f.: circa 145 ‘C. n2 n1 0; 115
. 1018400. [57-15-8].Vedere la monografia
ÿ †
Clorobutanolo

Clorobutanolo anidro (0382). m

2-Cloroetanolo . C2H5ClO. (Mr 80,5). 1097500. Cloroformio acidificato . 1018601.
[107-07-3]. A 100 ml di cloroformio R aggiungere 10 ml di acido
Liquido incolore, solubile in alcool. cloridrico R. Agitare, lasciare a riposo e separare i
d2020 : circa 1,197. due strati.
n20D : circa 1,442. Cloroformio esente da etanolo . 1018602.
p.e.: circa 130 ‘C. Agitare 200 ml di cloroformio R con quattro por-
p.f.: circa ^89 ‘C. zioni, da 100 ml ciascuna, di acqua R. Essiccare su
. 1097501. 20 g di sodio solfato anidro R per 24 h. Distillare il
2-Cloroetanolo soluzione
filtrato su 10 g di sodio solfato anidro R. Eliminare
Disciogliere 125 mg di 2-cloroetanolo R in 2-propa- i primi 20 ml di distillato. Preparare immediata-
nolo R e diluire a 50 ml con lo stesso solvente. mente prima dell'uso.
Diluire 5 ml della soluzione a 50 ml con 2-propa-
nolo R. Cloroformio deuterato . C2HCl3. (Mr 120,4). 1025000.
. C6H15Cl2N. [865-49-6]. ( H)-Cloroformio. Cloroformio-d.
2
(2-Cloroetil)dietilammina

(Mr 172,1). 1018500. [869-24-9].

cloridrato
Il grado di deuterazione non e© inferiore al 99,7 per
Polvere cristallina bianca, solubilissima in acqua e in cento.
metanolo, molto solubile in diclorometano, pratica- Liquido incolore, limpido, praticamente insolubile in
mente insolubile in esano. acqua, miscibile con acetone, con alcool e con etere.
p.f.: circa 211 ‘C. Puo© essere stabilizzato da una lamina d'argento.
. C2H7Cl2N. (Mr 116,0). d2020 : circa 1,51.
n20D : circa 1,445.
Cloroetilammina cloridrato

1124300. [870-24-6]. 2-Cloroetanammina cloridrato.

p.f.: circa 145 ‘C. p.e.: circa 60 ‘C.
Clorofenolo . C6H5ClO. (Mr 128,6). 1018900. [106-48-9]. Acqua e deuterio ossido: Non piu© dello 0,05 per cento.
4-Clorofenolo. Cloroformio stabilizzato con amilene . CHCl3. (Mr 119,4).
Cristalli incolori o quasi incolori, poco solubili in 1018700.
acqua, solubilissimi in alcool, in etere e nelle soluzioni Liquido incolore, limpido, poco solubile in acqua,
di idrossidi alcalini. miscibile con alcool.
p.f.: circa 42 ‘C. Acqua. Non piu© dello 0,05 per cento.

418
 Reattivi

inoizircserP
Residuo all'evaporazione. Non superiore allo 0,001 per . C5H14ClNO. (Mr 139,6). 1019500.

ilareneG
Colina cloruro

cento. [67-48-1]. (2-Idrossietil)trimetilammonio cloruro.

Trasmittanza minima (2.2.25), determinata usando Cristalli deliquescenti, solubilissimi in acqua e in
acqua R come bianco: alcool.
non inferiore al 50 per cento a 255 nm, Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-

isilanA id
idoteM
non inferiore all'80 per cento a 260 nm, grafia Suxametonio cloruro (0248), deponendo 5 l di m

non inferiore al 98 per cento a 300 nm. una soluzione 0,2 g/l in metanolo R. Il cromatogramma
Determinazione quantitativa. Non meno del 99,8 per presenta solo una macchia principale.
cento di CHCl3, determinato mediante gas cromatogra- Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.

irotinetnoC
fia.

/ ilairetaM
Colonna concentrica per gas cromatografia . 1135100.
3-Cloropropan-1,2-diolo . C3H7ClO2. (Mr 110,5). Sistema disponibile in commercio, costituito da due
1097600. [96-24-2]. tubi concentrici. Il tubo esterno e© impaccato con setacci
Liquido incolore, solubile in acqua, in alcool e in etere. molecolari, il tubo interno, invece, e© impaccato con
d2020 : circa 1,322. una miscela di un polimero poroso. La principale appli-
cazione di questo sistema consiste nella separazione di

ivittaeR
n20D : circa 1,480.
p.e.: circa 213 ‘C. sostanze allo stato gassoso.
Clorotiazide . 1112100. [58-94-6]. Vedere la monografia Colza, olio . Vedere olio di colza R.
Clorotiazide (0385). Coniugato fluorescente di sierimmune rabico .Vedere sie-
rimmune rabico coniugato fluorescente R.

itnemogrA
. C3H9ClSi. (Mr 108,6). 1019300.

ilareneG
Clorotrimetilsilano

[75-77-4]. Cortisone acetato . 1097800. [50-04-4]. Vedere la mono-

Liquido incolore, limpido, fumante all'aria. grafia Cortisone acetato (0321).
d2020 : circa 0,86. Coumafos . C14H16ClO5PS. (Mr 362,8).1124800. [56-72-4].
n20D : circa 1,388. p.f.: da 91 ‘C a 92 ‘C.

eifargonoM

ilareneG
p.e.: circa 57 ‘C. Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
Clorpirifos . C9H11Cl3NO3PS. (Mr 350,6). 1124400. riferimento (10 ng/ l in iso-ottano).
m
[2921-88-2]. . C7H8O. (Mr 108,1). 1022700. [95-48-7].
p.e.: circa 200 ‘C.
Cresolo

o-Cresolo. 2-Metilfenolo.

ehcituecamraF
p.f.: da 42 ‘C a 44 ‘C. Cristalli o liquido super-raffreddato che diventa scuro

emroF
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di per esposizione alla luce e all'aria, miscibile con etanolo
riferimento (10 ng/ml in cicloesano). e con etere, solubile in circa 50 parti di acqua e solubile
Clorpirifos-metile . C7H7Cl3NO3PS. (Mr 322,5). 1124500. nelle soluzioni di idrossidi alcalini.
[5598-13-0]. d2020 : circa 1,05.

eiretaM
p.f.: da 45 ‘C a 47 ‘C.

emirP
n20D : da 1,540 a 1,550.
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di p.e.: circa 190 ‘C.
riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
. CoCl2.6H2O. (Mr 237,9). 1021600. Punto di congelamento (2.2.18). Non inferiore a 30,5 ‘C.
ehcituecamraF

Cobalto cloruro
inoizaraperP

[7791-13-1]. Residuo all'evaporazione. Non piu© dello 0,1 per cento

ehcificepS

Polvere cristallina rossa o cristalli rosso scuro, solubi- m/m, determinato mediante evaporazione a b.m. e
lissimi in acqua, solubili in alcool. essiccamento in stufa a 100-105 ‘C.
Cobalto nitrato . Co(NO3)2.6H2O. (Mr 291,0). 1021700. Distillare prima dell'uso.
[10026-22-9]. Conservare al riparo dalla luce, dall'umidita© e dall'ossi-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Cristalli piccoli rosso granato, solubilissimi in acqua. geno e distillare prima dell'uso.
Codeina . 1021800. [6059-47-8]. Vedere la monografia Crisantamina . C21H21ClO11. (Mr 485,5). 1134800.
Codeina (0076). [7084-24-4]. Curomanina cloruro. 2-(3,4-Diidrossife-
. 1021900. [52-28-8].Vedere la monogra- nil)-3-( -d-glucopiranosil)ossi-5,7-diidrossi-1-benzopi-
b

rilio cloruro.
Codeina fosfato

fia Codeina fosfato emiidrato (0074).

ecidnI

Colesterolo . 1019400. [57-88-5]. Vedere la monografia Polvere cristallina bruno-rossastra, solubile in acqua e
Colesterolo (0993). in alcool.

419
Reattivi

Assorbanza (2.2.25). Una soluzione 0,01 g/l in una Cromotropo II B soluzione . 1020201.
miscela di 1 volume di acido cloridrico R e 999 volumi Soluzione 0,05 g/l in acido solforico R.
di metanolo R mostra un massimo di assorbimento a
528 nm. Cumarina . C9H6O2. (Mr 146,1). 1124900. [91-64-5].
2H-Cromen-2-one. 2H-1-Benzopiran-2-one.
Cristal . C25H30ClN3. (Mr 408,0). 1022900.
violetto
Polvere incolore cristallina o cristalli ortorombici o ret-
[548-62-9]. Schultz No. 78. Colour Index No. 42555. tangolari, solubilissimi in acqua bollente, solubili in
Esametilpararosanilinio cloruro, Violetto di genziana. alcool. Si scioglie nelle soluzioni di idrossidi alcalini.
Polvere cristalli verde scuro, solubili in acqua e in p.f.: da 68 ‘C a 70 ‘C.
alcool. La cumarina utilizzata in gas cromatografia soddisfa
. 1022901. Violetto di gen- all'ulteriore saggio seguente:
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Cristal violetto soluzione

ziana soluzione.
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
Disciogliere 0,5 g di cristal violetto R in acido ace- fia Cannella di Cina essenza (1496).
tico anidro R e diluire a 100 ml con lo stesso sol- Il contenuto non e© inferiore al 98,0 per cento, calcolato
vente. mediante la procedura di normalizzazione.
Saggio di sensibilita© . A 50 ml di acido acetico Cupri-citrica soluzione . 1023100.
anidro R aggiungere 0,1 ml di cristal violetto solu- Disciogliere 25 g di rame(-ico) solfato R, 50 g di acido
zione. Per aggiunta di 0,1 ml di acido perclorico citrico R e 144 g di sodio carbonato anidro R in acqua R
0,1 M la soluzione, di colore porpora-bluastro, vira e diluire a 1000 ml con lo stesso solvente.
al verde-bluastro. Cupri-citrica soluzione R1 . 1023200.
Disciogliere 25 g di rame(-ico) solfato R, 50 g di acido
Cromazurolo S . C23H13Cl2Na3O9S. (Mr 605). 1019600. citrico R e 144 g di sodio carbonato anidro R in acqua R
[1667-99-8]. Schultz No. 841. Colour Index No. 43825. e diluire a 1000 ml con lo stesso solvente.
Trisodio 5-[(3-carbossilato-5-metil-4-oxocicloesa-2,5- Apportare delle modifiche alla soluzione cos|© da soddi-
dien-1-ilidene)(2,6-dicloro-3-solfonatofenil)metil]-2- sfare agli ulteriori requisiti seguenti:
idrossi-3-metilbenzoato. a) A 25,0 ml aggiungere 3 g di potassio ioduro R.
Polvere nero-brunastra, solubile in acqua, poco solu- Aggiungere con cautela e in piccole quantita© 25 ml di
bile in alcool. una soluzione al 25 per cento m/m di acido solforico R.
. [Cr(H2O)4Cl2]Cl.2H2O. Titolare con sodio tiosolfato 0,1 M usando 0,5 ml di
Cromo(ico) tricloruro esaidrato

(Mr 266,5) 1104800. [10060-12-5]. amido soluzione R come indicatore, aggiunto alla fine
della titolazione.
Polvere cristallina verde scuro, igroscopica, molto Nella titolazione sono utilizzati 24,5-25,5 ml di sodio
tossica. tiosolfato 0,1 M.
Conservare al riparo dall'umidita© e da agenti ossidanti. b) Diluire 10,0 ml a 100,0 ml con acqua R e mescolare.
A 10,0 ml della soluzione, aggiungere 25,0 ml di acido
Cromo triossido . CrO3. (Mr 100,0). 1019900. [1333-82-0]. cloridrico 0,1 M R e scaldare per 1 h a b.m. Raffreddare,
Aghi rosso-brunastri scuro o granuli, deliquescenti, portare al volume iniziale con acqua R e titolare con
solubilissimi in acqua. sodio idrossido 0,1 M, usando 0,1 ml di fenolftaleina
soluzione R1 come indicatore.
Conservare in un recipiente di vetro ermeticamente Nella titolazione sono utilizzati 5,7-6,3 ml di sodio
chiuso. idrossido 0,1 M.
.Vedere allume cromico R. c) Diluire 10,0 ml a 100,0 ml con acqua R e mescolare.
Cromo(-ico) e potassio solfato
Titolare 10,0 ml della soluzione con acido cloridrico
Cromotropo II . C16H9N3Na2O10S2. (Mr 513,4).
B 0,1 M, usando 0,1 ml di fenolftaleina soluzione R1 come
1020200. [548-80-1]. Schultz No. 67. Colour Index No. indicatore.
16575. Disodio 4,5-diidrossi-3-(4-nitrofenilazo)nafta- Nella titolazione sono utilizzati 6,0-7,5 ml di acido clori-
len-2,7-disolfonato. drico 0,1 M.
Polvere marrone-rossiccia, solubile in acqua dando Cupri-citrico reattivo . Vedere cupri-citrica soluzione R.
luogo ad una colorazione rosso-giallastra, pratica- Cupri-tartarica soluzione . 1023300. Potassio cupritar-
mente insolubile in alcool. trato soluzione, Reattivo di Fehling.

420
 Reattivi

inoizircserP
Soluzione I. Disciogliere 34,6 g di rame(-ico) solfato R grafia Valeriana radice (0453) alla stessa concentra-

ilareneG
in acqua R e diluire a 500 ml con lo stesso solvente. zione della soluzione di riferimento. Il contenuto del
Soluzione II. Disciogliere 173 g di sodio e potassio tar- dantrone non e© inferiore al 95 per cento calcolato con
trato R e 50 g di sodio idrossido R in 400 ml di acqua R. la procedura di normalizzazione.
Scaldare all'ebollizione, lasciare raffreddare e diluire a o,p' . C14H10Cl4. (Mr 320,0). 1125200. [53-19-0].

isilanA id
-DDD

500 ml con acqua esente da anidride carbonica R. 1-(2-Clorofenil)-1-(4-clorofenil)-2,2-dicloroetano.

idoteM
Mescolare volumi uguali delle due soluzioni immedia- Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
tamente prima dell'uso. riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
Cupri-tartarica soluzione R2 . 1023302. Potassio o,p' . C14H8Cl4. (Mr 318,0). 1125400. [3424-82-6].
-DDE

cupritartrato soluzione R2. 1-(2-Clorofenil)-1-(4-clorofenil)-2,2-dicloroetilene.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Mescolare 1 ml di una soluzione contenente 5 g/l di Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
rame(-ico) solfato R e 10 g/l di potassio tartrato R riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
con 50 ml di sodio carbonato soluzione R1. Prepa- o,p' . C14H9Cl5. (Mr 354,5). 1125600. [789-02-6].
rare immediatamente prima dell'uso.
-DDT

1-(2-Clorofenil)-1-(4-clorofenil)-2,2,2-tricloroetano.
. 1023303. Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di

ivittaeR
Cupri-tartarica soluzione R3

Mescolare uguali volumi di una soluzione (10 g/l) riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
di rame(-ico) solfato R e una soluzione (20 g/l) di p,p' . C14H10Cl4. (Mr 320,0). 1125300. [72-54-8].
sodio tartrato R. A 1,0 ml della miscela aggiungere
-DDD

1,1-Bis(4-clorofenil)-2,2-dicloroetano.
50 ml di sodio carbonato soluzione R2. Preparare p.e.: circa 193 ‘C.
immediatamente prima dell'uso.

itnemogrA
ilareneG
. 1023304. p.f.: circa 109 ‘C.
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
Cupri-tartarica soluzione R4

Soluzione I. Rame solfato R 150 g/l. riferimento (10 ng/ml in cicloesano).

Soluzione II. Disciogliere 2,5 g di sodio carbonato p,p' . C14H8Cl4. (Mr 318,0). 1125500. [72-55-9].
anidro R, 2,5 g di sodio potassio tartrato R, 2,0 g -DDE

1,1-Bis(4-clorofenil)-2,2-dicloroetilene.

eifargonoM
di sodio bicarbonato R e 20,0 g di sodio solfato

ilareneG
anidro R in acqua R e diluire a 100 ml con lo stesso p.e.: da 316 ‘C a 317 ‘C.
solvente. p.f.: da 88 ‘C a 89 ‘C.
Mescolare 1 volume della soluzione I con 25 vo- Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
lumi della soluzione II immediatamente prima riferimento (10 ng/ml in cicloesano).

ehcituecamraF
dell'uso. p,p' . C14H9Cl5. (Mr 354,5). 1125700. [50-29-3].

emroF
-DDT

. C21H20O6. (Mr 368,4). 1023500. [458-37-7]. 1,1-Bis(4-clorofenil)-2,2,2-tricloroetano.

p.e.: circa 260 ‘C.
Curcumina

1,7-Bis(4-idrossi-3-metossifenil)epta-1,6-dien-3,5-dione.
Polvere cristallina, bruno-arancione, praticamente p.f.: da 108 ‘C a 109 ‘C.
insolubile in acqua, solubile in acido acetico glaciale, Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
eiretaM

emirP
praticamente insolubile in etere. riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
p.f.: circa 183 ‘C. Decano . C10H22. (Mr 142,3). 1024600. [124-18-5].
Dantrone . C14H8O4. (Mr 240,2). 1024500. [117-10-2]. Liquido incolore, praticamente insolubile in acqua.
1,8-Diidrossiantrachinone. 1,8-Diidrossiantracen-9,10- n20D : circa 1,411.
ehcituecamraF
inoizaraperP

dione.
ehcificepS

p.e.: circa 174 ‘C.

Polvere cristallina arancione, praticamente insolubile . C10H22O. (Mr 158,3). 1024700. [112-30-1].
in acqua, poco solubile in alcool, solubile nelle solu- Decanolo

Alcool n-decilico.
zioni di idrossidi alcalini.
p.f.: 195 ‘C circa. Liquido viscoso, che solidifica a 6 ‘C circa, pratica-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Il dantrone usato nella determinazione degli acidi sesqui- mente insolubile in acqua, solubile in alcool e in etere.
terpenici nella monografia Valeriana radice (0453) sod- n20D : circa 1,436.
disfa agli ulteriori requisiti seguenti: p.e.: circa 230 ‘C.
A11cm
%
: da 355 a 375, determinata a 500 nm in potassio Deltametrina . C22H19Br2NO3. (Mr 505,2). 1125800.
idrossido 1 M. [52918-63-5].
p.e.: circa 300 ‘C.
ecidnI

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro-

matografia liquida (2.2.29) come prescritto nella mono- p.f.: circa 98 ‘C.

421
Reattivi

Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di Polvere bianca cristallina, praticamente insolubile in
riferimento (10 ng/ml in cicloesano). acqua, solubilissima in diclorometano, molto solubile
2'-Desossiuridina . C9H12N2O5. (Mr 228,2). 1024800. in acetone, solubile in alcool.
[951-78-0]. 1-(2-Desossi- -d-eritro-pentofuranosil)-
b p.f.: da 50 ‘C a 53 ‘C.
1H,3H-pirimidin-2,4-dione. Dibutilammina . C8H19N. (Mr 129,3). 1126000.
p.f.: circa 165 ‘C. [111-92-2]. N-Butil-1-butanammina.
Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono- Liquido incolore.
grafia Idoxuridina (0669), deponendo 5 ml di una solu- n20D : circa 1,417.
zione 0,25 g/l. Il cromatogramma ottenuto presenta p.e.: circa 159 ‘C.
solo una macchia principale. . C16H22O4. (Mr 278,3). 1026800.
. 1025500.
Dibutile ftalato
Destrano reticolato per cromatografia R2 [84-74-2]. Dibutile benzen-1,2-dicarbossilato.
Destrano in granuli reticolato con un intervallo di fra- Liquido oleoso incolore o debolmente colorato, lim-
zionamento idoneo per la separazione dei peptidi e pido, molto poco solubile in acqua, miscibile con ace-
delle proteine con2 una massa3 molecolare relativa com- tone, con alcool e con etere.
presa tra 15 10 e 30 10 . I granuli, allo stato secco,
2 2
d2020 : da 1,043 a 1,048.
hanno un diametro di 20-80 mm. n20D : da 1,490 a 1,495.
Destrano reticolato per cromatografia R3 . 1025600. . C20H26Cl2N2O6. (Mr 461,3).
Destrano in granuli reticolato con un intervallo di fra-
Dicarbossidina cloridrato

1026900. [56455-90-4]. Acido 4,4'-[(4,4'-diamminodife-

zionamento idoneo per la separazione dei peptidi e nil-3,3'-diil)diossi]dibutanoico dicloridrato
delle proteine con3 una massa molecolare relativa com- . C12H23N. (Mr 181,3). 1027500.
presa tra 4 10 e 15 104. I granuli, allo stato secco,
2 2
Dicicloesilammina

[101-83-7]. N,N-Dicicloesilammina.
hanno un diametro di 40-120 mm. Liquido incolore, moderatamente solubile in acqua,
Destrosio . 1025700. [50-99-7].Vedere glucosio R. miscibile con i comuni solventi organici.
Deuterio ossido . 2H2O. (Mr 20,03). 1025300. [7789-20-0]. n20D : circa 1,484
Acqua deuterata. p.e.: circa 256 ‘C.
Il grado di deuterazione non e© inferiore al 99,7 Punto di solidificazione (2.2.18). Da 0 ‘C a 1 ‘C.
per cento. . C12H22. (Mr 166,3). 1135300. [92-51-3].
d2020 : circa 1,11.
Dicicloesile

Bicicloesile.
n20D : circa 1,328. d2020 : circa 0,864.
p.e.: circa 101 ‘C. p.e.: circa 227 ‘C.
Devarda lega . E' costituita da 50 parti di rame R, p.f.: circa 4 ‘C.
45 parti di alluminio R e 5 parti di zinco R. Dicicloesilurea . C13H24N2O. (Mr 224,4). 1027600.
Polvere grigia, insolubile in acqua, parzialmente solu- [2387-23-7]. 1,3-Dicicloesilurea.
bile in acido cloridrico e in sodio idrossido soluzione, Polvere cristallina bianca.
solubile in acido nitrico. p.f.: circa 232 ‘C
3,3'-Diamminobenzidina tetracloridrato . C12H18Cl4N4. . C10H13Cl2O3PS. (Mr 315,2). 1126100.
2H2O.(Mr 396,1). 1098000. [7411-49-6]. 3,3',4,4'-Dife- Diclofention

[97-17-6].
nil-tetrammina tetracloridrato diidrato. Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
Polvere quasi bianca o leggermente rosata, solubile in riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
acqua. . C6H4Cl2. (Mr 147,0). 1027100.
p.f.: circa 280 ‘C con decomposizione.
Diclorobenzene

[95-50-1]. 1,2-Diclorobenzene.
Diazinone . C12H21N2O3PS. (Mr 304,3). 1125900. Liquido oleoso incolore, praticamente insolubile in
[333-41-5]. acqua, solubile in etanolo e in etere.
p.e.: circa 306 ‘C. d2020 : circa 1,31.
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di p.e.: circa 180 ‘C.
riferimento (10 ng/ml in iso-ottano). Diclorochinonclorimmide . C6H2Cl3NO. (Mr 210,4).
Dibenzile . C14H14. (Mr 182,3). 1011200. [103-29-7]. 1027400. [101-38-2]. 2,6-Dicloro-N-cloro-1,4-benzochi-
1,2-Difeniletano. none monoimmina.

422
 Reattivi

inoizircserP
Polvere cristallina da giallo pallida a giallo-verdastra, Il diclorometano utilizzato in fluorimetria soddisfa all'ul-

ilareneG
praticamente insolubile in acqua, solubile in alcool e teriore requisito seguente:
nelle soluzioni alcaline diluite. Fluorescenza. Per irraggiamento a 365 nm, la fluore-
p.f.: circa 66 ‘C. scenza (2.2.21) misurata a 460 nm in una cella da 1 cm
. C2H4Cl2. (Mr 99,0). 1036000. non e© piu© intensa di quella di una soluzione contenente

isilanA id
0,002 ppm di chinina R in acido solforico 0,5 M, misu-
Dicloroetano

idoteM
[107-06-2]. 1,2-Dicloroetano. Etilene cloruro.
Liquido incolore, limpido, solubile in circa 120 parti di rata nelle stesse condizioni.
acqua e in 2 parti di alcool, miscibile con etere. Diclorometano acidificato . 1055901.
d2020 : circa 1,25. A 100 ml di diclorometano R aggiungere 10 ml di acido

irotinetnoC
cloridrico R, agitare, lasciare a riposo e separare i due

/ ilairetaM
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per strati. Usare lo strato inferiore.
cento distilla tra 82 ‘C e 84 ‘C.
. Diclorvos . C4H7Cl2O4P. (Mr 221). 1101200. [62-73-7].
Diclorofenolindofenolo sale sodico

C12H6Cl2NNaO2.2H2O. (Mr 326,1), 1027300. 2,2,-Diclorovinil dimetil fosfato.

[620-45-1]. Sodio derivato del 2,6-dicloro-N-(4-idrossi- Liquido da incolore a giallo brunastro, solubile in

ivittaeR
fenil)-1,4-benzochinone mo-noimmina diidrato. acqua, miscibile con la maggior parte dei solventi orga-
Polvere verde scuro, molto solubile in acqua e in eta- nici.
nolo. La soluzione acquosa e© blu scuro; per acidifica- n25D : circa 1,452.
zione diventa rosa. Didodecile 3,3'-tiodipropionato . C30H58O4S. (Mr 514,8).
. 1027700. [123-28-4]. Dilauril-tio-dipropionato.

itnemogrA
ilareneG
Diclorofenoloindofenolo soluzione standard

1027301. Polvere cristallina bianca, praticamente insolubile in

Disciogliere 50,0 mg di diclorofenoloindofenolo sale acqua, molto solubile in acetone e in etere di petrolio,
sodico R in 100,0 ml di acqua R e filtrare. poco solubile in alcool.
Determinazione del titolo. Disciogliere 20,0 mg p.f.: circa 39 ‘C.

eifargonoM

ilareneG
di acido ascorbico R in 10 ml di una soluzione . C12H8Cl6O. (Mr 380,9). 1126200. [60-57-1].
(200 g/l) di acido metafosforico R, preparata di Dieldrin

recente, e diluire a 250,0 ml con acqua R. Titolare p.e.: circa 385 ‘C.
rapidamente 5,0 ml con la diclorofenoloindofenolo p.f.: circa 176 ‘C.
soluzione standard, aggiunta da una microburetta

ehcituecamraF
graduata in 0,01 ml, finchë la colorazione rosa per- Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di

emroF
siste per 10 secondi; la titolazione non deve durare riferimento (10 ng/ml in cicloesano).
piu© di 2 min. Diluire la diclorofenoloindofenolo Dietanolammina . C4H11NO2. (Mr 105,1). 1027800.
soluzione con acqua R in modo che 1 ml della solu- [111-42-2]. 2,2'-Imminobisetanolo.
zione equivalga a 0,1 mg di acido ascorbico Liquido viscoso, limpido, leggermente giallo, o cristalli
(C6H8O6). deliquescenti che fondono a circa 28 ‘C, solubilissimi
eiretaM

emirP
Usare entro tre giorni dalla preparazione. Standar- in acqua, in acetone e in metanolo.
dizzare immediatamente prima dell'uso. d2020 : circa 1,09.
. C20H10Cl2O5. (Mr 401,2). 1027200. pH (2.2.3). Da 10,0 a 11,5, determinato su una soluzione
ehcituecamraF

50 g/l.
Diclorofluoresceina
inoizaraperP

[76-54-0]. 2,7-Diclorofluoresceina. Acido 2-(2,7-di-

ehcificepS

cloro-6-idrossi-3-oxo-3H-xanten-9-il)benzoico. La dietanolammina utilizzata nel saggio della fosfatasi

Polvere da marrone giallastra ad arancione-gialla, poco alcalina soddisfa all'ulteriore saggio seguente:
solubile in acqua, molto solubile in alcool e nelle solu- Etanolammina. Non piu© dell'1,0 per cento. Esaminare
zioni diluite di idrossidi alcalini dando una soluzione mediante gas cromatografia (2.2.28), usando propano-
ehcitapoemO
inoizaraperP

che mostra una fluorescenza verde-giallastra; pratica- lammina R come standard interno.
mente insolubile in etere. Soluzione dello standard interno. Disciogliere 1,00 g di
Diclorometano . CH2Cl2. (Mr 84,9). 1055900. [75-09-2]. propanolammina R in acetone R e diluire a 10,0 ml con
Metilene cloruro. lo stesso solvente.
Liquido incolore, moderatamente solubile in acqua, Soluzione in esame (a). Disciogliere 5,00 g della
miscibile con alcool e con etere.
ecidnI

sostanza in esame in acetone R e diluire a 10,0 ml con

p.e.: da 39 ‘C a 42 ‘C. lo stesso solvente.

423
Reattivi

Soluzione in esame (b). Disciogliere 5,00 g della Liquido oleoso, incolore, praticamente insolubile in
sostanza in esame in acetone R, aggiungere 1,0 ml della acqua, solubile nei solventi organici.
soluzione dello standard interno e diluire a 10,0 ml con d2020 : circa 0,98.
lo stesso solvente. n20D : circa 1,486.
Soluzioni di riferimento. Disciogliere 0,50 g di etanolam- Viscosita© (2.2.9). Circa 80 mPas.
mina R in acetone R e diluire a 10,0 ml con lo stesso sol- N,N . 1028500. [100-36-7].
vente. A 0,5 ml, 1,0 ml e 2,0 ml di questa soluzione, -Dietiletan-1,2-diammina

Vedere N,N-dietiletilendiammina R.
aggiungere 1,0 ml della soluzione dello standard N,N . C6H16N2. (Mr 116,2).
interno e diluire a 10,0 ml con acetone R. -Dietiletilendiammina

1028500. [100-36-7].
Il procedimento cromatografico puo© essere effettuato Contiene non meno del 98,0 per cento di C6H16N2.
usando:
ö una colonna lunga 1 m e con diametro interno di Liquido leggermente oleoso, incolore o leggermente
4 mm, impaccata con difenilfenilene ossido poli- giallo, con forte odore di ammoniaca, irritante per la
mero R (180-250 mm), pelle, gli occhi e le mucose.
ö azoto per cromatografia R come gas di trasporto ad d2020 : circa 0,827.
una velocita© di flusso di 40 ml per minuto, p.e.: da 145 ‘C a 147 ‘C.
ö un rivelatore a ionizzazione di fiamma. Acqua (2.5.12). Non piu© dell'1,0 per cento, determinata
su 0,500 g.
Mantenere la temperatura della colonna a 125 ‘C per . C10H18N2O4S. (Mr 262,3).
3 min e poi aumentarla fino a 300 ‘C ad una velocita©
Dietilfenilendiammina solfato

1028600. [6283-63-2]. N,N'-Dietil-p-fenilendiammina sol-

di 12 ‘C per minuto. Mantenere la temperatura della fato.N,N'-Dietilbenzen-1,4-diammina solfato.
camera di iniezione a 250 ‘C e quella del rivelatore a Polvere bianca o leggermente gialla, solubile in acqua.
280 ‘C. Iniettare 1,0 ml di ciascuna soluzione in esame p.f.: circa 185 ‘C, con decomposizione.
e 1,0 ml di ciascuna soluzione di riferimento.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Conservare al riparo dalla luce.
Dietilammina . C4H11N. (Mr 73,1). 1028000. [109-89-7]. . 1028601.
Liquido infiammabile, incolore, limpido, fortemente
Dietilfenilendiammina solfato soluzione

alcalino, miscibile con acqua e con alcool. A 250 ml di acqua R aggiungere 2 ml di acido solfo-
rico R e 25 ml di sodio edetato 0,02 M. Disciogliere
d2020 : circa 0,71. in questa soluzione 1,1 g di dietilfenilendiammina
p.e.: circa 55 ‘C. solfato R e diluire a 1000 ml con acqua R.
Dietilamminoetildestrano . 1028200. Non usare se la soluzione non e© incolore.
Resina a scambio anionico disponibile come cloridrato. Conservare al riparo dalla luce e dal calore ed
Polvere che forma un gel con acqua. usare entro 1 mese.
N,N- Dietilanilina . C10H15N. (Mr 149,2). 1028400. Dietossitetraidrofurano . C8H16O3. (Mr 160,2). 1027900.
[91-66-7]. [3320-90-9]. 2,5-Dietossitetraidrofurano. Miscela di iso-
d2020 : circa 0,938. meri cis e trans.
p.e.: circa 217 ‘C. Liquido infiammabile, limpido, incolore o leggermente
giallastro, praticamente insolubile in acqua, solubile
p.f.: circa ^38 ‘C. in alcool, in etere e nella maggior parte dei solventi
Dietilenglicole . C4H10O3. (Mr 106,1). 1028300. [111-46-6]. organici.
2,2'-Ossidietanolo. d2020 : circa 0,98.
Contiene non meno del 99,5 per cento m/m di C4H10O3. n20D : circa 1,418.
Liquido incolore, limpido, igroscopico, miscibile con Difenilammina . C12H11N. (Mr 169,2). 1032100.
acqua, con acetone e con alcool. [122-39-4].
d2020 : circa 1,118. Cristalli bianchi, poco solubili in acqua, solubili in
alcool.
n20D : circa 1,447. p.f.: circa 55 ‘C.
p.e.: da 244 ‘C a 246 ‘C. Conservare al riparo dalla luce.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Difenilammina soluzione . 1032101.
Di(2-etilesil)ftalato . C24H38O4. (Mr 390,5). 1028100. Soluzione 1 g/l in acido solforico R.
Di(2-etilesil)benzen-1,2-dicarbossilato. Conservare al riparo dalla luce.

424
 Reattivi

inoizircserP
. 1032102. Soluzione II. Disciogliere 1 g di mercurio(-ico) clo-

ilareneG
Difenilammina soluzione R1

Soluzione 10 g/l in acido solforico R. La soluzione e© ruro R in etanolo R e diluire a 50 ml con lo stesso
incolore. solvente.
Difenilammina soluzione R2 . 1032103. Mescolare volumi uguali delle due soluzioni.
Disciogliere 1 g di difenilammina R in 100 ml di .

isilanA id
Difenilcarbazone soluzione

idoteM
acido acetico glaciale R e aggiungere 2,75 ml di Disciogliere 1 g di difenilcarbazone R in 75 ml di
acido solforico R. Usare immediatamente. alcool R e diluire a 100 ml con lo stesso solvente.
Conservare al riparo dalla luce.
Difenilantracene . C26H18. (Mr 330,4). 1032200.
[1499-10-1]. 9,10-Difenilantracene. . 1032800. 2,6-Difenil-p-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Difenilfenilene ossido polimero

Polvere cristallina, da giallastra a gialla, praticamente fenilene ossido polimero.

insolubile in acqua, molto solubile in etere. Granuli porosi, bianchi o quasi bianchi. La grandezza
p.f.: circa 248 ‘C. dei granuli e© specificata dopo il nome del reattivo nei
saggi dove e© utilizzato.
Difenilbenzidina . C24H20N2. (Mr 336,4). 1032300. . C15H11NO. (Mr 221,3).1032700. [92-71-7].
[531-91-9]. N,N'-Difenilbenzidina. N,N'-Difenilbifenil- Difenilossazolo

ivittaeR
4,4'-diammina. 2,5-Difenilossazolo.
Polvere cristallina, bianca o debolmente grigia, pratica- Polvere bianca, praticamente insolubile in acqua, solu-
mente insolubile in acqua, poco solubile in acetone e bile in metanolo, moderatamente solubile in diossano
in alcool. e in acido acetico glaciale.
p.f.: circa 70 ‘C.

itnemogrA
ilareneG
p.f.: circa 248 ‘C. A11cm
%
: circa 1260 determinata a 305 nm in metanolo R.
Nitrati. Disciogliere 8 mg in una miscela raffreddata Il difenilossazolo utilizzato per la scintillazione liquida e©
di 5 ml di acqua R e 45 ml di acido solforico esente da di una qualita© analitica adatta.
azoto R. La soluzione e© incolore o blu molto chiaro.
Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,1 per . C12H10O. (Mr 170,2). 1011300. [90-43-7].

eifargonoM
Difenil-4-olo

4-Fenilfenolo.

ilareneG
cento. Polvere cristallina bianca, praticamente insolubile in
Conservare al riparo dalla luce. acqua.
Difenilcarbazide . C13H14N4O. (Mr 242,3). 1032500. p.f.: da 164 ‘C a 167 ‘C.
[140-22-7]. 1,5-Difenilcarbonidrazide.

ehcituecamraF
. Vedere anidride fosforica R.
Polvere cristallina, bianca che gradualmente diventa
Difosforo pentossido

emroF
rosa per esposizione all'aria, molto poco solubile in Digitonina . C56H92O29. (Mr 1229). 1028700. [11024-24-1].
acqua, solubile in acetone, in alcool e in acido acetico 3 -[O- -d -Glucopiranosil-(1 3)-O- -d-galattopirano-
b b ! b

glaciale. sil-(1 2)-O-[ -d -xilopiranosil-(1 3)]-O- -d-galattopi-

! b ! b

ranosil-(1 4)-O- -d-galattopiranosilossi]-(25R)-5 -spi-

p.f.: circa 170 ‘C.
! b a

rostan- ,15 -diolo.

eiretaM
2a b

Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,1 per

emirP
Cristalli, praticamente insolubili in acqua, moderata-
cento. mente solubili in etanolo, poco solubili in alcool, prati-
Conservare al riparo dalla luce. camente insolubili in etere.
. 1032501. . 1028800. [71-63-6]. Vedere la monografia
ehcituecamraF

Digitossina
inoizaraperP

Digitossina (0078).
Difenilcarbazide soluzione
ehcificepS

Disciogliere 0,2 g di difenilcarbazide R in 10 ml di

acido acetico glaciale R e diluire a 100 ml con eta- 10,11-Diidrocarbamazepina . C15H14N2O. (Mr 238,3).
nolo R. Preparare immediatamente prima dell'uso. 1028900. [3564-73-6]. 10,11-Diidro-5H-dibenz[b,f]aze-
pina-5-carbossammide.
. C13H12N4O. (Mr 240,3). 1032600. p.f.: da 205 ‘C a 210 ‘C.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Difenilcarbazone

[538-62-5]. 1,5-Difenilcarbazone. . 1029000. [132-86-5]. Vedere

Polvere cristallina, gialla-arancione, praticamente inso-
Diidrossinaftalene

1,3-diidrossinaftalene R.
lubile in acqua, molto solubile in alcool. 1,3-Diidrossinaftalene . C10H8O2. (Mr 160,2). 1029000.
p.f.: circa 157 ‘C, con decomposizione. [132-86-5]. 1,3-Naftalendiolo.
Difenilcarbazone-mercurio(-ico) reattivo . 1032601. Polvere cristallina, generalmente viola-brunastra,
molto solubile in acqua e in alcool.
ecidnI

Soluzione I. Disciogliere 0,1 g di difenilcarbazone R

in etanolo R e diluire a 50 ml con lo stesso solvente. p.f.: circa 125 ‘C.

425
Reattivi

2,7-Diidrossinaftalene . C10H8O2. (Mr 160,2). 1029100. Dimetilamminobenzaldeide soluzione R6 . 1029803.

[582-17-2]. 2,7-Naftalendiolo. Disciogliere 0,125 g di dimetilamminobenzaldeide R
Aghi, solubili in acqua, in alcool e in etere. in una miscela raffreddata di 35 ml di acqua R e
p.f.: circa 190 ‘C. 65 ml di acido solforico R. Aggiungere 0,1 ml di
una soluzione (50 g/l) di ferro(-ico) cloruro R.
. 1029101. Prima dell'uso lasciare a riposo per 24 h, al riparo
2,7-Diidrossinaftalene soluzione

Disciogliere 10 mg di 2,7-diidrossinaftalene R in dalla luce.

100 ml di acido solforico R e lasciare a riposo fino Se conservata a temperatura ambiente deve essere
a decolorazione. utilizzata entro una settimana; se mantenuta in fri-
Usare entro 2 giorni. gorifero, puo© essere conservata per diversi mesi.
Dimetilamminobenzaldeide soluzione R7 . 1029804.
Diisobutilchetone . C9H18O. (Mr 142,2). 1029200. Disciogliere 1,0 g di dimetilamminobenzaldeide R
[108-83-8]. in 50 ml di acido cloridrico R e aggiungere 50 ml di
Liquido incolore, limpido, poco solubile in acqua, alcool R.
miscibile con la maggior parte dei solventi organici. Conservare al riparo dalla luce e usare entro 4 set-
n20D : circa 1,414. timane.
p.e.: circa 168 ‘C. Dimetilamminobenzaldeide soluzione R8 . 1029805.
. 1043300. Disciogliere 0,25 g di dimetilamminobenzaldeide R
in una miscela di 5 g di acido fosforico R, 45 g di
Diluente per ialuronidasi

Mescolare 100 ml di tampone fosfato soluzione a pH acqua R e 50 g di acido acetico anidro R. Preparare
6,4 R con 100 ml di acqua R. Disciogliere 0,140 g di immediatamente prima dell'uso.
gelatina idrolizzata R nella soluzione a 37 ‘C.
Usare la soluzione entro 2 h. 4-Dimetilamminocinnamaldeide . C11H13NO. (Mr 175,2).
. 1105400. [9006-65-9].Vedere la monografia 1029900. [6203-18-5]. 3-(4-Dimetilamminofenil) prop-
2-enale.
Dimeticone

Dimeticone (0138).
. C4H9NO. (Mr 87,1). 1029700. Cristalli o polvere da arancione a bruno-arancione.
Sensibile alla luce.
Dimetilacetammide

[127-19-5]. N,N-Dimetilacetammide.
Contiene non meno del 99,5 per cento di C4H9NO. p.f.: circa 138 ‘C.
Liquido incolore, miscibile con acqua e con molti sol- 4-Dimetilamminocinnamaldeide soluzione . 1029901.
venti organici. Disciogliere 2 g di 4-dimetilamminocinnamaldeide R
d2020 : circa 0,94. in una miscela di 100 ml di acido cloridrico R1 e
n20D : circa 1,437. 100 ml di etanolo R. Conservare in un luogo fresco.
Diluire la soluzione a quattro volte il suo volume
p.e.: circa 165 ‘C. con etanolo R immediatamente prima dell'uso.
Dimetilamminobenzaldeide . C9H11NO. (Mr 149,2). Conservare in un luogo fresco.
1029800. [100-10-7]. 4-Dimetilamminobenzaldeide.
Cristalli bianchi o bianco-giallastri, solubile in alcool e Dimetilamminonaftalensolfonile cloruro . C12H12ClNO2S.
negli acidi diluiti. (Mr 269,8). 1030000. [605-65-2]. 5-Dimetilammino-1-na-
p.f.: circa 74 ‘C. ftalensolfonile cloruro.
Polvere cristallina, gialla, poco solubile in acqua, solu-
Dimetilamminobenzaldeide soluzione R1 . 1029801. bile in metanolo.
Disciogliere 0,2 g di dimetilamminobenzaldeide R p.f.: circa 70 ‘C.
in 20 ml di alcool R e aggiungere 0,5 ml di acido Conservare in un luogo fresco.
cloridrico R. Agitare la soluzione con carbone atti- . C8H11N. (Mr 121,2). 1030100. [121-69-7].
vato R e filtrare. La colorazione del reattivo e© meno Dimetilanilina

N,N-dimetilanilina.
intensa di quella della iodio soluzione R3.
Preparare immediatamente prima dell'uso. Liquido oleoso limpido, quasi incolore se distillato di
recente, durante la conservazione si scurisce fino al
Dimetilamminobenzaldeide soluzione R2 . 1029802. rosso-brunastro, praticamente insolubile in acqua,
Disciogliere 0,2 g di dimetilamminobenzaldeide R, molto solubile in alcool e in etere.
senza riscaldare, in una miscela di 4,5 ml di n20D : circa 1,558.
acqua R e 5,5 ml di acido cloridrico R. Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per
Preparare immediatamente prima dell'uso. cento distilla tra 192 ‘C e 194 ‘C.

426
 Reattivi

inoizircserP
. C8H11N. (Mr 121,2). 1105300. . C8H10O. (Mr 122,2). 1030600.

ilareneG
2,3-Dimetilanilina 2,6-Dimetilfenolo

[87-59-2]. 2,3-Xilidina. [576-26-1].

Liquido giallastro, moderatamente solubile in acqua, Aghi incolori, poco solubili in acqua, solubilissimi in
solubile in alcool. alcool e in etere.
d2020 : da 0,993 a 0,995. p.e.: circa 203 ‘C.

isilanA id
idoteM
n20D : circa 1,569. p.f.: da 46 ‘C a 48 ‘C.
p.e.: circa 224 ‘C. 3,4-Dimetilfenolo . C8H10O. (Mr 122,2).1098100. [95-65-8].
. C8H11N. (Mr 121,2). 1030200. Cristalli bianchi o quasi bianchi, poco solubili in acqua,
2,6-Dimetilanilina

[87-62-7]. 2,6-Xilidina. molto solubili in alcool.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Liquido incolore, moderatamente solubile in acqua, p.e.: circa 226 ‘C.
solubile in alcool. p.f.: da 25 ‘C a 27 ‘C.
d2020 : circa 0,98. Dimetilformammide . C3H7NO. (Mr 73,1). 1030300.
N,N . 1030100. [121-69-7]. Vedere dimeti- [68-12-2].
-Dimetilanilina

lanilina R. Liquido neutro, incolore, limpido, miscibile con acqua

ivittaeR
. C3H6O3. (Mr 90,1). 1119300. e con alcool.
Dimetilcarbonato

[616-38-6]. Acido carbonico dimetilestere. d2020 : da 0,949 a 0,952.

Liquido, insolubile in acqua, miscibile con alcool. p.e.: circa 153 ‘C.
d417 : circa 1,065. Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,1 per cento.

itnemogrA
. C7H17NO2. (Mr 147,2).

ilareneG
n20D : circa 1,368. Dimetilformammide dietilacetale

1113600. [1188-33-6].
p.e.: circa 90 ‘C. N,N-dimetilformammide dietilacetale.
Dimetildecilammina . C12H27N. (Mr 185,4). 1113500. n20D : circa 1,40.
[1120-24-7]. N,N-dimetildecilammina. p.e.: da 128 ‘C a 130 ‘C.

eifargonoM

ilareneG
Contiene non meno del 98,0 per cento m/m di C12H27N. Dimetilgliossima . C4H8N2O2. (Mr 116,1). 1030400.
p.e.: circa 234 ‘C. [95-45-4]. 2,3-Butandione diossima.
1,1-Dimetiletilammina . C4H11N. (Mr 73,1). 1100900. Polvere cristallina, bianca o cristalli incolori, pratica-
[75-64-9]. 2-Ammino-2-metilpropano. tert-Butilam- mente insolubili in acqua fredda, molto poco solubili

ehcituecamraF
mina. in acqua bollente, solubile in alcool e in etere.

emroF
Liquido, miscibile con alcool. p.f.: circa 240 ‘C, con decomposizione.
d2020 : circa 0,694. Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,05 per
cento.
n20D : circa 1,378. 1,3-Dimetil-2-imidazolidinone . C5H10N2O. (Mr 114,2).
p.e.: circa 46 ‘C. 1135400. [80-73-9]. N,N'-Dimetiletilenurea.
eiretaM

emirP
(1,1-Dimetiletil)metiletere . C5H12O. (Mr 88,1). 1013900. n20D : circa 1,4720.
[1634-04-4]. tert-Butilmetiletere. p.e.: circa 224 ‘C.
Liquido infiammabile, limpido, incolore. 2,4-Dimetil-6-tert-butilfenolo . C12H18O. (Mr 178,3).
1126500. [1879-09-0].
ehcituecamraF

n20D : circa 1,376.

inoizaraperP

N,N
ehcificepS

. C10H23N. (Mr 157,3).

Trasmittanza minima (2.2.25), determinata usando
-Dimetilottilammina

1030500. [7378-99-6]. Ottildimetilammina.

acqua R come bianco: Liquido incolore.
non inferiore al 50 per cento a 240 nm, d2020 : circa 0,765.
non inferiore all'80 per cento a 255 nm, n20D : circa 1,424.
ehcitapoemO
inoizaraperP

non inferiore al 98 per cento a 280 nm. p.e.: circa 195 ‘C.
. 1126400. Dimetilpiperazina . C6H14N2. (Mr 114,2). 1030700.
[106-58-1]. 1,4-Dimetilpiperazina.
(1,1-Dimetiletil)metiletere R1

Contiene non meno del 99,5 per cento di C5H12O. Liquido incolore, miscibile con acqua e con alcool.
d2020 : circa 0,741. d2020 : circa 0,85.
n20D : circa 1,369. n20D : circa 1,446.
ecidnI

p.e.: circa 55 ‘C. p.e.: circa 131 ‘C.

427
Reattivi

Dimetilsolfone . C2H6O2S. (Mr 94,1). 1030900. [67-71-0]. Liquido incolore o leggermente giallo, limpido o quasi
Polvere cristallina, bianca, molto solubile in acqua, limpido, praticamente insolubile in acqua, miscibile
solubile in acetone e in alcool. con acetone, con alcool e con metanolo.
p.f.: da 108 ‘C a 110 ‘C. d2020 : circa 0,80.
Dimetilsolfossido . C2H6OS. (Mr 78,1). 1029500. p.e.: circa 260 ‘C.
[67-68-5]. Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,3 per cento m/m.
Liquido oleoso, incolore, limpido, igroscopico, misci- Determinazione quantitativa. Disciogliere 0,200 g in
bile con acqua e con alcool. 10 ml di alcool R. Usando 0,1 ml di rosso metile solu-
d2020 : circa 1,10. zione R come indicatore, titolare con acido cloridrico
p.e.: circa 189 ‘C. 0,1 M fino ad ottenere una colorazione rossa.
Acqua (2.5.12). Non piu© di 10 g/l. 1 ml di acido cloridrico 0,1 M equivale a 24,15 mg di
C16H35N.
Il dimetilsolfossido utilizzato in spettrofotometria soddi- . C15H14O3. (Mr 242,3).
sfa ai requisiti prescritti per il dimetilsolfossido R con il 4,4'-Dimetossibenzofenone

1126300. [90-96-0]. Bis(4-metossifenil)metanone.

contenuto di acqua modificato come riportato di seguito Polvere bianca, praticamente insolubile in acqua e leg-
e all'ulteriore saggio seguente: germente solubile in alcool.
Trasmittanza minima (2.2.25) determinata usando p.f.: circa 142 ‘C.
acqua R come bianco:
10 per cento a 262 nm, Dimetossipropano . C5H12O2. (Mr 104,1). 1105200.
35 per cento a 270 nm,
[77-76-9]. 2,2-Dimetossipropano.
Liquido incolore, si decompone per esposizione all'aria
70 per cento a 290 nm, umida o all'acqua.
98 per cento a 340 nm e a lunghezze d'onda piu© elevate. d2020 : circa 0,847.
Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,2 per cento m/m. n20D : circa 1,378.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. p.e.: circa 83 ‘C.
. C 2 H6OS. (Mr 84,2).
2
Dimetilsolfossido deuterato
. C20H18BrN3. (Mr 380,3). 1031100.
1025100. [2206-27-1]. (2H6)-Dimetilsolfossido. Dimetil-
Dimidio bromuro

[518-67-2]. 3,8-Diammino-5-metil-6-fenilfenantridinio
solfossido-d6. bromuro.
Il grado di deuterazione non e© inferiore al 99,8 per Cristalli rosso scuri, poco solubili in acqua a 20 ‘C,
cento. moderatamente solubili in acqua a 60 ‘C e in alcool,
Liquido molto igroscopico, praticamente incolore, praticamente insolubili in etere.
viscoso, solubile in acqua, in acetone, in etanolo e in . Vedere
etere.
Dimidio bromuro-blu sulfan indicatore misto

dimidio bromuro-blu di disulfina indicatore misto R.

d2020 : circa 1,18. Dimidio bromuro-blu di disulfina indicatore .
misto

p.f.: circa 20 ‘C. 1031101.

Acqua e deuterio ossido. Non piu© dello 0,1 per cento. Disciogliere separatamente 0,5 g di dimidio bromuro R e
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. 0,25 g di blu sulfan R in 30 ml di una miscela calda di 1
. C20H41NO. (Mr 311,6). 1030800. volume di etanolo R e 9 volumi di acqua R, agitare,
Dimetilstearammide

N,N-Dimetilstearammide. mescolare le due soluzioni e diluire a 250 ml con la

stessa miscela di solventi. Mescolare 20 ml di questa
Massa solida bianca o quasi bianca, solubile in molti soluzione con 20 ml di una soluzione al 14,0 per cento
solventi organici, compreso l'acetone. V/V di acido solforico R, precedentemente diluita con
p.f.: circa 51 ‘C. circa 250 ml di acqua R e diluire a 500 ml con acqua R.
Dimetilstearilammide . 1030800. Vedere dimetistearam- Conservare al riparo dalla luce.
mide R. Dinitrobenzene . C6H4N2O4. (Mr 168,1). 1031200.
Dimetiltetradecilammina . C16H35N. (Mr 241,5). [528-29-0]. 1,3-Dinitrobenzene.
1031000. N,N-Dimetiltetradecilammina. Polvere cristallina o cristalli giallastri, praticamente
Contiene non meno del 98,0 per cento m/m e non piu© insolubili in acqua, poco solubili in alcool.
dell'equivalente del 101,0 per cento m/m di C16H35N. p.f.: circa 90 ‘C.

428
 Reattivi

inoizircserP
. 1031201. Non distillare se il diossano non soddisfa al saggio dei

ilareneG
Dinitrobenzene soluzione

Soluzione 10 g/l in alcool R. perossidi.

. C7H3ClN2O5. (Mr 230,6). Perossidi. Porre 8 ml di potassio ioduro e amido solu-
Dinitrobenzoile cloruro

1031400. [99-33-2]. 3,5-Dinitrobenzoile cloruro. zione R in un cilindro con tappo a smeriglio da 12 ml

con diametro di circa 1,5 cm. Riempire completamente

isilanA id
Polvere cristallina giallo pallido o cristalli incolori. con la sostanza in esame, agitare energicamente e

idoteM
p.f.: circa 68 ‘C. lasciare a riposo al buio per 30 min. Non si sviluppa
Dinitrofenilidrazina . C6H6N4O4. (Mr 198,1). 1031500. alcuna colorazione.
[119-26-6]. 2,4-Dinitrofenilidrazina. Il diossano utilizzato per la scintillazione liquida e© di qua-
Cristalli arancione-rossastri, molto poco solubili in lita© analitica idonea.

irotinetnoC
/ ilairetaM
acqua, poco solubili in alcool. Diossano soluzione madre . 1032001.
p.f.: circa 203 ‘C (metodo istantaneo). Disciogliere 1,00 g di diossano R in acqua R e
Dinitrofenilidrazina soluzione aceto-cloridrica . diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. Diluire
1031501. 5,0 ml di questa soluzione a 50,0 ml con acqua R
Disciogliere 0,2 g di dinitrofenilidrazina R in 20 ml di (1,0 mg/ml).

ivittaeR
metanolo R e aggiungere 80 ml di una miscela di Diossano soluzione . 1032002.
uguali volumi di acido acetico R e acido cloridrico R1. Diluire 50,0 ml di diossano soluzione madre R a
Preparare immediatamente prima dell'uso. 100,0 ml con acqua R (0,5 mg/ml di diossano).
.

itnemogrA
Dinitrofenilidrazina soluzione alcoolica

ilareneG
A 0,5 g di dinitrofenilidrazina R aggiungere 5 ml di Diossano soluzione R1 . 1032003.
acido cloridrico R, agitare bene e aggiungere 100 ml Diluire 10,0 ml di diossano soluzione R a 50,0 ml
di alcool R, scaldando a b.m. fino a dissoluzione con acqua R (0,1 mg/ml di diossano).
completa. Aggiungere 1 ml di acido cloridrico R,
mescolare e lasciare a riposo al buio per circa 12 h. . C36H74S2. (Mr 571,1). 1031700.

eifargonoM
Diottadecile disolfuro

ilareneG
Filtrare. [1844-09-3].
Polvere bianca, praticamente insolubile in acqua.
Dinitrofenilidrazina soluzione solforica 1029901. p.f.: da 53 ‘C a 58 ‘C.
Disciogliere 1,5 g di dinitrofenilidrazina R in 50 ml . C42H82O4S. (Mr 683).

ehcituecamraF
di una soluzione al 20 per cento V/V di acido solfo-
'
Diottadecile 3,3 -tiodipropionato

rico R. Preparare immediatamente prima dell'uso. 1031900. [693-36-7]. Disteariltio-dipropionato.

emroF
Polvere cristallina, bianca, praticamente insolubile in
Dinonile ftalato . C26H42O4. (Mr 418,6). 1031600. acqua, molto solubile in diclorometano, moderata-
[28553-12-0]. mente solubile in acetone, in alcool e in etere di petro-
Liquido viscoso da incolore a giallo pallido. lio.

eiretaM
d2020 : da 0,97 a 0,98. p.f.: da 58 ‘C a 67 ‘C.

emirP
n20D : da 1,482 a 1,489. 2,2'-Di(ottadecilossi)-5,5'-spirobi(1,3,2-diossafosfori-

Acidita© . Agitare 5,0 g con 25 ml di acqua R per 1 min. nano) . C41H82O6P2. (Mr 733). 1031800.
Lasciare a riposo, filtrare lo strato acquoso dopo averlo Solido ceroso, bianco, praticamente insolubile in
ehcituecamraF

separato e aggiungere 0,1 ml di fenolftaleina soluzione R.

inoizaraperP

acqua, solubile in idrocarburi.

ehcificepS

Non sono necessari piu© di 0,3 ml di sodio idrossido 0,1 M p.f.: da 40 ‘C a 70 ‘C.
per far virare la colorazione della soluzione (0,05 per
cento, calcolato come acido ftalico). Disodio arseniato . Na2HASO4.7H2O. (Mr 312,0).
Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,1 per cento. 1102500. [10048-95-0]. Disodio idrogeno arseniato
eptaidrato. Sodio arseniato dibasico.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Diossano . C4H8O2. (Mr 88,1). 1032000. [123-91-1]. Cristalli, efflorescenti in aria calda, molto solubili in
1,4-Diossano. acqua, solubili in glicerolo, poco solubili in alcool. La
Liquido incolore, limpido, miscibile con acqua e con la soluzione acquosa e© alcalina al tornasole.
maggior parte dei solventi organici. d2020 : circa 1,87
d2020 : circa 1,03. p.f.: circa 57 ‘C, se scaldato rapidamente.
Punto di solidificazione (2.2.18). Da 9 ‘C a 11 ‘C.
ecidnI

Disodio tetraborato . 1033600. [1303-96-4]. Vedere sodio

Acqua (2.5.12). Non superiore allo 0,5 per cento. tetraborato R.

429
Reattivi

Ditalimfos . C12H14NO4PS. (Mr 299,3). 1126700. soluzione dall'espressione 20/V, dove V e© il volume
[5131-24-8]. O,O-Dietil(1,3-diidro-1,3-diosso-2H-isoin- in millilitri di ditizone soluzione usato nella titola-
dol-2-il)fosfonotioato. zione.
Molto poco solubile in acqua, in etile acetato e in eta-
nolo. Ditizone R1 . C13H12N4S. (Mr 256,3). 1105500. [60-10-6].
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di 1,5-Difeniltiocarbazone.
riferimento. Contiene non meno del 98,0 per cento di C13H12N4S.
Ditiolo . C7H8S2. (Mr 156,3). 1033800. [496-74-2]. Polvere nera-bluastra, nera-brunastra o nera, pratica-
3,4-Toluenditiolo. 4-Metilbenzen-1,2-ditiolo. mente insolubile in acqua, solubile in alcool.
Cristalli bianchi, igroscopici, solubili in metanolo e Conservare al riparo dalla luce.
nelle soluzioni di idrossidi alcalini.
p.f.: circa 30 ‘C. Divanadio pentossido . V2O5. (Mr 181,9). 1034000.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. [1314-62-1]. Anidride vanadica.
Ditiolo reattivo . 1033801. Contiene non meno del 98,5 per cento di V2O5.
A 1 g di ditiolo R aggiungere 2 ml di acido tioglico- Polvere da bruno-giallastra a bruno-ruggine, poco solu-
lico R e diluire a 250 ml con una soluzione (20 g/l) bile in acqua, solubile negli acidi minerali forti e nelle
di sodio idrossido R. Preparare immediatamente soluzioni di idrossidi alcalini con formazione di sali.
prima dell'uso. Aspetto della soluzione. Scaldare 1 g con 10 ml di acido
Ditiotreitolo . C4H10O2S2. (Mr 154,2). 1098200. solforico R per 30 min. Lasciar raffreddare e diluire a
[27565-41-9]. treo-1,4-Dimercapto-2,3-butandiolo. 10 ml con lo stesso acido. La soluzione e© limpida (2.2.1).
Aghi leggermente igroscopici, molto solubili in acqua, Sensibilita© all'idrogeno perossido. Diluire cautamente
in acetone e in etanolo. 1,0 ml della soluzione preparata per il saggio dell'a-
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. spetto della soluzione a 50,0 ml con acqua R. A 0,5 ml
Ditizone . C13H12N4S. (Mr 256,3). 1033900. [60-10-6]. della soluzione aggiungere 0,1 ml di una soluzione di
1,5-Difeniltiocarbazone. idrogeno perossido (H2O2 0,1 g/l). La soluzione ha una
Polvere nero bluastra, nero brunastra o nera, pratica- netta colorazione arancione in confronto ad un bianco
mente insolubile in acqua, solubile in alcool. preparato da 0,5 ml della soluzione in esame e 0,1 ml
Conservare al riparo dalla luce. di acqua R. Dopo l'aggiunta di 0,4 ml di una soluzione
Ditizone soluzione . 1033901. di idrogeno perossido (H2O2 0,1 g/l), la soluzione aran-
Soluzione 0,5 g/l in cloroformio R. cione diventa giallo-arancione.
Preparare immediatamente prima dell'uso. Perdita alla calcinazione. Non superiore all'1,0 per
Ditizone soluzione R2 . 1033903. cento, determinata su 1,00 g a 700 ‘C.
Disciogliere 40,0 mg di ditizone R in cloroformio R Determinazione quantitativa. Disciogliere, scaldando,
e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. Diluire 0,200 g in 20 ml di una soluzione al 70 per cento m/m
30,0 ml della soluzione a 100,0 ml con cloro-
formio R. di acido solforico R. Aggiungere 100 ml di acqua R e
Determizazione del titolo. Disciogliere una quantita© potassio permanganato 0,02 M fino ad ottenere una
di mercurio(-ico) cloruro R equivalente a 0,1354 g colorazione rossastra. Decolorare l'eccesso di potassio
di HgCl2 in una miscela di uguali volumi di acido permanganato per aggiunta di una soluzione (30 g/l)
solforico diluito R e acqua R e diluire a 100,0 ml di sodio nitrito R. Aggiungere 5 g di urea R e 80 ml di
con la stessa miscela di solventi. Diluire 2,0 ml di una soluzione al 70 per cento m/m di acido solforico R.
questa soluzione a 100,0 ml con una miscela di Raffreddare. Titolare immediatamente la soluzione
uguali volumi di acido solforico diluito R e con ferro(-oso) solfato 0,1 M usando 0,1 ml di fer-
acqua R. (Questa soluzione contiene 20 ppm di roina R come indicatore, fino ad ottenere una colora-
Hg). Trasferire 1,0 ml della soluzione in un imbuto zione rosso-verdastra.
separatore e aggiungere 50 ml di acido solforico 1 ml di ferro(-oso) solfato 0,1 M equivale a 9,095 mg di
diluito R, 140 ml di acqua R e 10 ml di una solu- V2O5.
zione (200 g/l) di idrossilammina cloridrato R. Tito-
lare con ditizone soluzione; dopo ogni aggiunta, Divanadio pentossido soluzione solforica . 1034001.
agitare la miscela venti volte e verso la fine della Disciogliere 0,2 g di divanadio pentossido R in 4 ml
titolazione lasciar separare ed eliminare lo strato di acido solforico R e diluire a 100 ml con acqua R.
di cloroformio. Titolare fino ad ottenere una colo-
razione verde-bluastra. Calcolare l'equivalente in Docusato sodico . 1034100. [577-11-7]. Vedere la mono-
milligrammi di mercurio per millilitro di ditizone grafia Docusato sodico (1418).

430
 Reattivi

inoizircserP
.C15H34BrN.(Mr 308,4). . C9H6Cl6O3S. (Mr 406,9). 1126800.

ilareneG
Dodeciltrimetilammonio bromuro a-Endosulfan

1135500. [1119-94-4]. N,N,N-Trimetildodecan-1-ammino [959-98-8].

bromuro. p.e.: circa 200 ‘C.
Cristalli bianchi. p.f.: circa 108 ‘C.
p.f.: circa 246 ‘C. Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di

isilanA id
. C32H66. (Mr 450,9). 1034200. [544-85-4].

idoteM
Dotriacontano riferimento (10 ng/ l in cicloesano).
m
n-Dotriacontano. . C9H6Cl6O3S. (Mr 406,9). 1126900.
Lastre bianche, praticamente insolubili in acqua,
b-Endosulfan

[33213-65-9].
moderatamente solubili in esano, poco solubili in etere. p.e.: circa 390 ‘C.
p.f.: circa 69 ‘C.

irotinetnoC
/ ilairetaM
p.f.: circa 207 ‘C.
Impurezze. Non piu© dello 0,1 per cento di impurezze con Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
lo stesso valore di tR dell' -tocoferolo acetato, determi-
a
riferimento (10 ng/ l in cicloesano).
nato mediante il metodo gas cromatografico prescritto m

. C12H8Cl6O. (Mr 380,9). 1127000. [72-20-8].

nella monografia -Tocoferolo acetato (0439). Endrin

Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di

ivittaeR
riferimento (10 ng/ l in cicloesano).
Elettrolita reattivo per la determinazione semimicro

dell'acqua . 1113700. m

Reattivo anidro o una combinazione di reattivi anidri Eparina . 1041900. [9041-08-1]. Vedere la monografia
disponibili in commercio per la titolazione coulombo- Eparina sodica (0333).
metrica dell'acqua, contenente basi organiche idonee, Eptacloro . C10H5Cl7. (Mr 373,3). 1128000. [76-44-8].
diossido di zolfo e iodio disciolti in un solvente adatto.

itnemogrA
p.e.: circa 135 ‘C.

ilareneG
Elio per cromatografia . He. (Ar 4,003). 1041800. p.f.: circa 95 ‘C.
[7440-59-7]. Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
Contiene non meno del 99,995 per cento V/V di He. riferimento (10 ng/ l in cicloesano).
m
. 1034300. [316-42-7]. Vedere la . C10H5Cl7O. (Mr 389,3). 1128100.

eifargonoM
Emetina dicloridrato

monografia Emetina cloridrato pentaidrato (0081).

ilareneG
Eptacloro epossido

[1024-57-3].
Emodina . C15H10O5. (Mr 270,2). 1034400. [518-82-1]. p.e.: circa 200 ‘C.
1,3,8-Triidrossi-6-metilantrachinone. p.f.: circa 160 ‘C.
Aghi rosso-arancione, praticamente insolubili in acqua, Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di

ehcituecamraF
poco solubili in etere, solubili in alcool e nelle soluzioni riferimento (10 ng/ l in cicloesano).
di idrossidi alcalini.

emroF
m

Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono- Eptafluoro- N-metil-N -(trimetilsilil)butanammide.

grafia Rabarbaro (0291); il cromatogramma presenta C8H12F7NOSi. (Mr 299,3). 1139500. [53296-64-3].
solo una macchia principale. 2,2,3,3,4,4,4-Eptafluoro-N-metil-N-(trimetilsilil)buti-
. 1041700. [9008-02-0]. rammide.
Liquido chiaro, incolore, infiammabile.
Emoglobina

eiretaM

emirP
Azoto. Dal 15 per cento al 16 per cento.
Ferro. Dallo 0,2 per cento allo 0,3 per cento. n20D : circa 1,351.
Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore al 2 per p.e.: circa 148 ‘C.
cento.
ehcituecamraF

. C7H16. (Mr 100,2). 1042000. [142-82-5].

inoizaraperP

Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori all'1,5 per

ehcificepS

Eptano

cento. Liquido infiammabile, incolore, praticamente insolu-

Emoglobina soluzione . 1041701. bile in acqua, miscibile con etanolo e con etere.
Trasferire 2 g di emoglobina R in un recipiente d2020 : da 0,683 a 0,686.
da 250 ml e aggiungere 75 ml di acido cloridrico n20D : da 1,387 a 1,388.
ehcitapoemO
inoizaraperP

diluito R2. Agitare fino a dissoluzione completa. Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per
Portare il pH a 1,6 0,1 (2.2.3) usando acido clori-
6
cento distilla tra 97 ‘C e 98 ‘C.
drico 1 M. Trasferire in un recipiente da 100 ml . C4H10O4. (Mr 122,1). 1113800. [149-32-6].
con l'ausilio di acido cloridrico R2. Aggiungere Eritritolo

(R*,S*)-Butan-1,2,3,4-tetrolo. meso-Eritritolo.
25 mg di tiomersale R. Preparare giornalmente,
conservare ad una temperatura di 5 3 ‘C e ripor- Prismi tetragonali, solubilissimi in acqua, solubili in
piridina, poco solubili in alcool.
6

tare il pH a 1,6 prima dell'uso.

ecidnI

Conservare a 2-8 ‘C. p.f.: circa 121,5 ‘C.

431
Reattivi

Eritrociti di coniglio sospensione . 1074500. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.

Preparare una sospensione all'1,6 per cento V/V di eri- 1,1,1,3,3,3-Esafluoropropan-2-olo . C3H2F6O. (Mr 168,0).
trociti di coniglio come segue: defibrinare 15 ml di san- 1136000. [920-66-1].
gue di coniglio prelevato di recente agitando con palline Contiene non meno del 99,0 per cento di C3H2F6O,
di vetro, centrifugare a 2000 g per 10 min e lavare gli determinato mediante gas cromatografia.
eritrociti con tre porzioni, da 30 ml ciascuna, di una Liquido limpido, incolore, miscibile con acqua e con
soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R. Diluire 1,6 ml della etanolo.
sospensione di eritrociti a 100 ml con una miscela di
1 volume di tampone fosfato soluzione a pH 7,2 R e d2020 : circa 1,596.
9 volumi di una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R. p.e.: circa 59 ‘C.
Erucammide . C22H43NO. (Mr 337,6). 1034500. . C6H19NSi2. (Mr 161,4). 1042400.
[112-84-5]. (Z)-Docos-13-enammide. Esametildisilazano

[999-97-3].
Polvere bianca o giallastra o granuli, praticamente Liquido incolore, limpido.
insolubili in acqua, solubilissimi in diclorometano,
solubili in etanolo. d2020 : circa 0,78.
p.f.: circa 70 ‘C. n20D : circa 1,408.
Esaclorobenzene . C6Cl6. (Mr 284,8). 1128200. [118-74-1]. p.e.: circa 125 ‘C.
p.e.: circa 332 ‘C. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
p.f.: circa 230 ‘C. Esametilentetrammina . C6H12N4. (Mr 140,2). 1042500.
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di [100-97-0]. Esammina. 1,3,5,7-Tetra-azatriciclo
riferimento (10 ng/ml in cicloesano). [3.3.1.13,7]decano.
a-Esaclorocicloesano . C6H6Cl6. (Mr 290,8). 1128300. Polvere cristallina, incolore, solubilissima in acqua.
[319-84-6]. Esano . C6H14. (Mr 86,2). 1042600. [110-54-3].
p.e.: circa 288 ‘C. Liquido incolore, infiammabile, praticamente insolu-
p.f.: circa 158 ‘C. bile in acqua, miscibile con etanolo e con etere.
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di d2020 : da 0,659 a 0,663.
riferimento (10 ng/ml in cicloesano). n20D : da 1,375 a 1,376.
. C6H6Cl6. (Mr 290,8). 1128400.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per
b-Esaclorocicloesano

[319-85-7].
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di cento distilla tra 67 ‘C e 69 ‘C.
riferimento (10 ng/ml in cicloesano). L'esano utilizzato in spettrofotometria soddisfa all'ulte-
d-Esaclorocicloesano . C6H6Cl6. (Mr 290,8). 1128500. riore saggio seguente:
[319-86-8]. Trasmittanza minima (2.2.25) determinata usando
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di acqua R come bianco: 97 per cento da 260 nm a 420 nm.
riferimento (10 ng/ml in cicloesano). Escina . 1001700. [11072-93-8].
Esacosano . C26H54. (Mr 366,7). 1042200. [630-01-3]. Miscela di saponine correlate ottenute dai semi di
Fiocchi bianchi o incolori. Aesculus hippocastanum L.
p.f.: circa 57 ‘C. Polvere amorfa, quasi bianca o leggermente rossastra o
,
2,2',2'' 6,6'6''-Esa(1,1-dimetiletil)-4,4',4''-[(2,4,6-trime- giallastra, fine.
til-1,3,5-benzentriil)trismetilen]trifenolo. C54H78O3. Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
(Mr 775). 1042100. 2,2',2'',6,6',6''-Esa-tert-butil-4,4',4''- grafia Poligala radice (0202), con l'eccezione di deporre
[(2,4,6-trimetil-1,3,5-benzetriil)trismetilen]trifenolo. 20 l della soluzione. Dopo aver spruzzato con aldeide
Polvere cristallina, praticamente insolubile in acqua, anisica soluzione R e scaldato, il cromatogramma pre-
solubile in acetone, poco solubile in alcool. senta una macchia principale con Rf di circa 0,4.
p.f.: circa 244 ‘C. Esculina . C15H16O9.1ÃÙÄH2O. (Mr 367,3). 1119400.
Esadimetrina bromuro . (C13H30Br2N2)n. 1042300. [531-75-9]. 6-( -d-Glucopiranosilossi)-7-idrossi-2H-cro-
b

[28728-55-4]. 1,5-Dimetil-1,5-diazaundecametilenepoli- men-2-one.

metobromuro. Poli(1,1,5,5-tetrametil-1,5-azonia-unde- Polvere da bianca a quasi bianca o cristalli incolori,
cametilene dibromuro). moderatamente solubile in acqua e in alcool, molto
Polvere amorfa, bianca, igroscopica, solubile in acqua. solubile in acqua calda e in alcool caldo.

432
 Reattivi

inoizircserP
Cromatografia (2.2.27). Esaminare come prescritto . C2H6O. (Mr 46,07). 1034800. [64-17-5]. Vedere

ilareneG
Etanolo

nella monografia Eleuterococco (1419). Il cromato- la monografia Etanolo anidro (1318).

gramma mostra solo una macchia principale. Etanolo R1 . 1034801.
Esilammina . C6H15N. (Mr 101,2). 1042700. [111-26-2]. Soddisfa ai requisiti prescritti nella monografia
Esanammina. Etanolo anidro (1318) e agli ulteriori requisiti

isilanA id
Liquido incolore, poco solubile in acqua, solubile in seguenti:

idoteM
alcool e in etere. Metanolo. Non piu© dello 0,005 per cento V/V,
d2020 : circa 0,766. determinato mediante gas cromatografia (2.2.28).
n20D : circa 1,418. Soluzione in esame. Usare la sostanza in esame.
p.e.: da 127 ‘C a 131 ‘C.

irotinetnoC
Soluzione di riferimento. Diluire 0,50 ml di meta-

/ ilairetaM
Esperidina . C28H34O15. (Mr 611). 1139000. [520-26-3]. nolo anidro R a 100,0 ml con la sostanza in esame.
(S)-7-[[6-O-(6-Desossi- -l-mannopiranosil)- -d-gluco-
a b Diluire 1,0 ml di questa soluzione a 100,0 ml con
piranosil]ossi]-5-idrossi-2-(3-idrossi-4-metossifenil)-2,3- la sostanza in esame.
diidro-4H-1-benzopiran-4-one. Il procedimento cromatografico puo© essere effet-
Polvere igroscopica, poco solubile in acqua e in meta- tuato utilizzando:

ivittaeR
nolo. ^ una colonna di vetro lunga 2 m e con diametro
p.f.: da 258 ‘C a 262 ‘C. interno di 2 mm, impaccata con etilvinilbenzene-
Estradiolo . C18H24O2. (Mr 272,4). 1135600. [50-28-2]. divinilbenzene copolimero R (75-100 m),
m

Estra-1,3,5(10)-trien-3,17 -diolo. -estradiolo. ^ azoto per cromatografia R come gas di trasporto

itnemogrA
b b

ad una velocita© di flusso di 30 ml per minuto,

ilareneG
Prismi stabili all'aria, praticamente insolubili in acqua,
molto solubili in alcool, solubili in acetone e in dios- ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma.
sano, moderatamente solubili negli oli vegetali. Mantenere la temperatura della colonna a 130 ‘C,
p.f.: da 173 ‘C a 179 ‘C. quella della camera di iniezione a 150 ‘C e quella
. C18H24O2. (Mr 272,4). 1034600. del rivelatore a 200 ‘C. Iniettare tre volte, alternati-

eifargonoM

ilareneG
vamente 1 l della soluzione in esame e della solu-
17a-Estradiolo

[57-91-0]. m

Polvere cristallina, bianca o quasi bianca, o cristalli zione di riferimento. Dopo ciascuna cromatogra-
incolori. fia, scaldare la colonna a 230 ‘C per 8 min. Inte-
p.f.: da 220 ‘C a 223 ‘C. grare il picco del metanolo. Calcolare il contenuto
percentuale di metanolo dall'espressione:

ehcituecamraF
. C10H12O. (Mr 148,2). 1034700. [140-67-0]. a b

emroF
Estragolo

1-Metossi-4-(2-propenil)benzene. 2

Liquido, miscibile con alcool. c b

ÿ

n20D : circa 1,52. a = percentuale V/V di metanolo contenuta nella

p.e.: circa 216 ‘C. soluzione di riferimento,

eiretaM
L'estragolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa b = area del picco del metanolo nel cromato-

emirP
all'ulteriore saggio seguente: gramma ottenuto con la soluzione in esame,
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas c = area del picco del metanolo nel cromato-
cromatografia (2.2.28) nelle condizioni descritte nella gramma ottenuto con la soluzione di riferi-
ehcituecamraF

monografia Anice essenza (0804) utilizzando la mento.

inoizaraperP

ehcificepS

sostanza in esame come soluzione in esame. Etanolo 96 per cento . 1002500. [64-17-5].
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per Vedere alcool R.
cento dell'area totale dei picchi. . 1034800. [64-17-5].
. C2H7NO. (Mr 61,1). 1034900. [141-43-5].
Etanolo anidro

Vedere etanolo R.
ehcitapoemO

Etanolammina
inoizaraperP

2-Amminoetanolo.
Liquido limpido, incolore, viscoso, igroscopico, misci- Etere . C4H10O. (Mr 74,1). 1035000. [60-29-7].
bile con acqua e con metanolo, moderatamente solubile Dietiletere.
in etere. Liquido volatile e molto mobile, incolore, limpido,
d2020 : circa 1,04. molto infiammabile, igroscopico, solubile in acqua,
n20D : circa 1,454. miscibile con alcool.
p.f.: circa 11 ‘C. d2020 : da 0,713 a 0,715.
ecidnI

Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. p.e.: da 34 ‘C a 35 ‘C.

433
Reattivi

Non distillare se l'etere non soddisfa al saggio dei Etere di petrolio R3 . 1063103.
perossidi. Soddisfa ai requisiti prescritti per etere di petrolio R,
Perossidi. Porre 8 ml di potassio ioduro e amido solu- con le modifiche seguenti:
zione R in un cilindro con tappo a smeriglio da 12 ml e d2020 : da 0,659 a 0,671.
con diametro di circa 1,5 cm. Riempire completamente Intervallo di distillazione (2.2.11). Da 40 ‘C a 80 ‘C.
con la sostanza in esame, agitare vigorosamente e
lasciare a riposo al buio per 30 min. Non si sviluppa . C6H14O. (Mr 102,2). 1029300.
alcuna colorazione.
Etere isopropilico

[108-20-3].
Il nome e la concentrazione degli eventuali stabilizzanti Liquido incolore, limpido, molto poco solubile in
aggiunti sono indicati in etichetta. acqua, miscibile con alcool e con etere.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al d2020 : da 0,723 a 0,728.
riparo dalla luce, ad una temperatura non superiore a p.e.: da 67 ‘C a 69 ‘C.
15 ‘C. Non distillare se l'etere isopropilico non soddisfa al saggio
Etere esente da perossidi . 1035100. Vedere la monogra- dei perossidi.
fia Etere per anestesia (0367). Perossidi. Porre 8 ml di potassio ioduro e amido solu-
Etere dibutilico . C8H18O. (Mr 130,2). 1026700. [142-96-1]. zione R in un cilindro con tappo a smeriglio da 12 ml
Dibutiletere. con diametro di circa 1,5 cm. Riempire completamente
Liquido infiammabile, incolore, praticamente insolu- con la sostanza in esame, agitare vigorosamente e
bile in acqua, miscibile con etanolo e con etere. lasciare a riposo al riparo dalla luce per 30 min. Non si
d2020 : circa 0,77. sviluppa alcuna colorazione.
n20D : circa 1,399. Il nome e la concentrazione degli eventuali stabilizzanti
Non distillare se l'etere dibutilico non soddisfa al saggio aggiunti sono indicati in etichetta.
dei perossidi. Conservare al riparo dalla luce.
Perossidi. Porre 8 ml di potassio ioduro e amido solu- 4-[(Etilammino)metil]piridina . C8H12N2. (Mr 136,2).
zione R in un cilindro con tappo a smeriglio di 12 ml 1101300. [33403-97-3].
con diametro di circa 1,5 cm. Riempire completamente Liquido giallo pallido.
con la sostanza in esame, agitare vigorosamente e d2020 : circa 0,98.
lasciare a riposo al riparo dalla luce per 30 min. Non si n20D : circa 1,516.
sviluppa alcuna colorazione. p.e.: circa 98 ‘C.
Il nome e la concentrazione degli eventuali stabilizzanti . C8H10. (Mr 106,2). 1035800. [100-41-4].
aggiunti sono indicati in etichetta.
Etilbenzene

Contiene non meno del 99,5 per cento m/m di C8H10,

Etere diisopropilico . Vedere etere isopropilico R. determinato mediante gas cromatografia.
Etere di petrolio . 1063100. [8032-32-4]. Petroleina. Liquido incolore, limpido, praticamente insolubile in
Liquido infiammabile, non fluorescente, incolore, lim- acqua, solubile in acetone e in alcool.
pido, praticamente insolubile in acqua, miscibile con d2020 : circa 0,87.
alcool. n20D : circa 1,496.
d2020 : da 0,661 a 0,664. p.e.: circa 135 ‘C.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Da 50 ‘C a 70 ‘C. Etile acetato . C4H8O2. (Mr 88,1). 1035300. [141-78-6].
Etere di petrolio R1 . 1063101. Etere acetico.
Soddisfa ai requisiti prescritti per etere di pe- Liquido incolore, limpido, solubile in acqua, miscibile
trolio R, con le modifiche seguenti: con alcool.
d2020 : da 0,630 a 0,656. d2020 : da 0,901 a 0,904.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Da 40 ‘C a 60 ‘C. p.e.: da 76 ‘C a 78 ‘C.
Non si intorbidisce a 0 ‘C. . 1035301.
. 1063102.
Etile acetato trattato
Etere di petrolio R2
Disperdere 200 g di acido solfammico R in etile ace-
Soddisfa ai requisiti prescritti per etere di pe- tato R e portare a 1000 ml con lo stesso solvente.
trolio R, con le modifiche seguenti: Porre sotto agitazione per tre giorni la sospensione
d2020 : da 0,620 a 0,630. ottenuta e filtrare attraverso la carta da filtro.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Da 30 ‘C a 40 ‘C. La soluzione deve essere usata entro un mese dalla
Non si intorbidisce a 0 ‘C. sua preparazione.

434
 Reattivi

inoizircserP
. C5H8O2. (Mr 100,1). 1035400. [140-88-5]. . C8H18O2. (Mr 146,2). 1105900.

ilareneG
Etile acrilato 2-Etil-1,3-esandiolo

Etile 2-propenoato. [94-96-2].

Liquido incolore. Liquido leggermente oleoso, solubile in etanolo, 2-pro-
d2020 : circa 0,924. panolo, glicole propilenico ed olio di ricino.
n20D : circa 1,406. d2020 : circa 0,942.

isilanA id
n20D : circa 1,451.

idoteM
p.e.: circa 99 ‘C. p.e.: circa 244 ‘C.
p.f.: circa ^71 ‘C. Etilenglicole . Vedere glicole etilenico R.
Etile benzoato . C9H10O2. (Mr 150,2). 1135700. [93-89-0]. Etilenglicole etere monoetilico . Vedere glicole etilenico
Liquido limpido, incolore, rifrangente, praticamente monoetiletere R.

irotinetnoC
/ ilairetaM
insolubile in acqua, miscibile con alcool e con etere di Etilenglicole etere monometilico . Vedere glicole etilenico
petrolio. monometiletere R.
d425 : circa 1,050. 1,1'-Etilidenbis(triptofano) . C24H26N4O4. (Mr 434,5).
n20D : circa 1,506. 1106000. [132685-02-0]. Acido [etilidenbis(1H-indol-
1,3'-diil)]-3,3'-bis[(2S)-2-amminopropanoico].
p.e.: da 211 ‘C a 213 ‘C.

ivittaeR
Contiene non meno del 98,0 per cento di C24H26N4O4.
Etile cianoacetato . C5H7NO2. (Mr 113,1). 1035500. Polvere cristallina bianca o quasi bianca, poco solubile
[105-56-6]. in acqua, molto poco solubile in alcool, praticamente
Liquido da incolore a giallo pallido, poco solubile in insolubile in etere.
acqua, miscibile con alcool e con etere. p.f.: circa 223 ‘C, con decomposizione.

itnemogrA
ilareneG
p.e.: da 205 ‘C a 209 ‘C, con decomposizione. Determinazione quantitativa. Procedere come prescritto
. C3H6O2. (Mr 74,1). 1035600. [109-94-4]. nella monografia Triptofano (1272) nel paragrafo
Etile formiato

Etile metanoato. ``1,1'-Etilidenbis(triptofano) e altre sostanze correlate''.

L'area del picco principale nel cromatogramma otte-
Liquido infiammabile, incolore, limpido, molto solu- nuto con la soluzione di riferimento (a) non e© inferiore

eifargonoM
bile in acqua, miscibile con alcool e con etere.

ilareneG
al 98,0 per cento delle aree di tutti i picchi.
d2020 : circa 0,919. N -Etilmaleimmide . C6H7NO2. (Mr 125,1). 1036700.
n20D : circa 1,36 . [128-53-0]. 1-Etil-1H-pirrol-2,5 dione.
p.e.: circa 54 ‘C. Cristalli incolori, moderatamente solubili in acqua,

ehcituecamraF
. 1035700. [120-47-8].Vedere la molto solubili in alcool.
p.f.: da 41 ‘C a 45 ‘C.

emroF
Etile paraidrossibenzoato

monografia Etile paraidrossibenzoato (0900). Conservare ad una temperatura di 2-8 ‘C.

Etile ioduro .Vedere iodoetano R. .Vedere metiletilchetone R.
. C2H8N2. (Mr 60,1). 1036500. [107-15-3].
Etilmetilchetone
Etilendiammina

1,2-Diamminoetano. Etan-1,2-diammina. 2-Etilpiridina . C7H9N. (Mr 107,2) 1133400. [100-71-0].

Liquido incolore o brunastro.

eiretaM
Liquido fumante, incolore, limpido, fortemente alca-

emirP
d2020 : circa 0,939.
lino, miscibile con acqua e con alcool, poco solubile in n20D : circa 1,496.
etere. p.e.: circa 149 ‘C.
p.e.: circa 116 ‘C. . 1036900.
ehcituecamraF
inoizaraperP

Etilvinilbenzene-divinilbenzene copolimero

Granuli polimerici rigidi, porosi, reticolati. Sono dispo-

ehcificepS

Etilene bis[3,3-di(3-(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil)butir-

rato]. C50H66O8. (Mr 795). 1035900. [32509-66-3]. Eti- nibili molte qualita© con diverse dimensioni dei granuli.
lene bis[3,3-di(3-tert-butil-4-idrossifenil)butirrato]. L'intervallo della dimensione dei granuli e© specificato
Polvere cristallina, praticamente insolubile in acqua e dopo il nome del reattivo nei saggi dove e© utilizzato.
in etere di petrolio, solubilissima in acetone, in etere e .
ehcitapoemO
inoizaraperP

Etilvinilbenzene-divinilbenzene copolimero R1

in metanolo. 1036901.
p.f.: circa 165 ‘C. Granuli polimerici reticolati, rigidi, porosi,
tert . con un'area superficiale specifica nominale di
Etilene bis[3,3-di(3- -butil-4-idrossifenil)butirrato]

1035900. [32509-66-3]. Vedere etilene bis[3,3-di(3-(1,1- 500-600 m2/g e aventi pori con un diametro medio
dimetiletil)-4-idrossifenil)butirrato] R. di 7,5 nm. Sono disponibili molte qualita© di granuli
di diverse dimensioni. L'intervallo della dimen-
. Vedere dicloroetano R.
ecidnI

Etilene cloruro
sione delle sfere e© specificato dopo il nome del reat-
Etilene ossido . Vedere ossido di etilene R. tivo nei saggi dove e© utilizzato.

435
Reattivi

Etion . C9H22O4P2S4. (Mr 384,5). 1127100. [563-12-2]. Lasciare sedimentare a 4 ‘C per 10-15 h. Rimuovere la
p.f.: da ^ 24 ‘C a ^ 25 ‘C. soluzione sopranatante limpida con un sifone. Racco-
Puo© essere utilizzata una idonea e certificata soluzione gliere il precipitato mediante centrifugazione a 4 ‘C.
di riferimento (10 ng/ml in cicloesano). Sospendere il precipitato mediante dispersione mecca-
. C14H17ClN4O. (Mr 292,8). nica in 500 ml di acqua distillata R a 4 ‘C, agitare per
Etossicrisoidina cloridrato

1035200. [2313-87-3]. 2,4-Diammino-4'-etossiazoben- 5 min e raccogliere il precipitato centrifugando a 4 ‘C.

zene cloridrato. 4-[(4-Etossifenil)diazenil]fenilen-1,3- Disperdere il precipitato meccanicamente in 60 ml di
diammina cloridrato. una soluzione contenente (9 g/l) di sodio cloruro R e
(0,9 g/l) di sodio citrato R e portare il pH a 7,2-7,4 per
Polvere rossastra, solubile in alcool. aggiunta di una soluzione (10 g/l) di sodio idrossido R.
Etossicrisoidina soluzione . 1035201. Filtrare su un filtro di vetro sinterizzato; per facilitare la
Soluzione 1 g/l in alcool R. dissoluzione del precipitato triturare le particelle del pre-
Saggio di sensibilita© . Ad una miscela di 5 ml di cipitato con uno strumento adatto. Lavare il filtro e lo
acido cloridrico diluito R e 0,05 ml di etossicrisoi- strumento con 40 ml della soluzione cloruro-citrato
dina soluzione aggiungere 0,05 ml di bromuro bro- descritta in precedenza e diluire a 100 ml con la stessa
mato 0,0167 M. La colorazione vira dal rosso al soluzione. Liofilizzare la soluzione. Le rese sono general-
giallo chiaro entro 2 min. mente di 6-8 g di euglobuline per litro di plasma bovino.
Saggio di idoneita© . Per questo saggio, preparare le solu-
Eugenolo . C10H12O2. (Mr 164,2). 1037000. [97-53-0]. zioni usando tampone fosfato soluzione a pH 7,4 R con-
4-(2-Propenil)-2-metossifenolo. tenente 30 g/l di albumina bovina R.
Liquido oleoso, incolore o giallo pallido, che imbruni- In una provetta con diametro di 8 mm posta a b.m. a
sce e diventa piu© viscoso per esposizione all'aria e alla 37 ‘C introdurre 0,2 ml di una soluzione di una prepara-
luce, praticamente insolubile in acqua, miscibile con zione di riferimento di urochinasi contenente 100 U.I.
alcool, con etere e con gli oli grassi ed essenziali. per millilitro e 0,1 ml di una soluzione di trombina
d2020 : circa 1,07. umana R contenente 20 U.I. per millilitro. Aggiungere
p.e.: circa 250 ‘C. rapidamente 0,5 ml di una soluzione contenente 10 mg
L'eugenolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul- di euglobuline bovine per millilitro. Si forma un coa-
teriore saggio seguente: gulo solido in meno di 10 s. Annotare il tempo che
intercorre tra l'aggiunta della soluzione di euglobuline
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas bovine e la lisi del coagulo. Il tempo di lisi non e© supe-
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- riore a 15 min.
fia Garofano essenza (1091) usando la sostanza in Conservare al riparo dall'umidita© a 4 ‘C ed usare entro
esame come soluzione in esame. 1 anno.
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per . 1037200.
cento dell'area totale dei picchi. Euglobuline umane

Per la preparazione usare sangue umano fresco rac-

Conservare al riparo dalla luce. colto in una soluzione anticoagulante (per esempio
Euglobuline bovine . 1037100. sodio citrato soluzione) o sangue umano per trasfu-
Usare sangue bovino fresco raccolto in una soluzione sioni, raccolto in sacche di plastica per il sangue, che
anticoagulante (per esempio, sodio citrato soluzione). abbiano appena raggiunto la data di scadenza. Scartare
Eliminare tutto il sangue emolizzato. Centrifugare a l'eventuale sangue emolizzato. Centrifugare a 1500-
1500-1800 g ad una temperatura di 15-20 ‘C per otte- 1800 g a 15 ‘C fino ad ottenere un plasma sopranatante
nere un plasma sopranatante povero in piastrine. povero in piastrine. Si possono mescolare gruppi equi-
Ad 1 litro di plasma bovino aggiungere 75 g di bario sol- valenti.
fato R e agitare per 30 min. Centrifugare a non meno di Ad 1 litro di plasma aggiungere 75 g di bario solfato R
1500-1800 g ad una temperatura di 15-20 ‘C e raccogliere e agitare per 30 min. Centrifugare a non meno di
il liquido sopranatante limpido. Aggiungere 10 ml di 15000 g a 15 ‘C e aspirare il liquido sopranatante lim-
una soluzione di aprotinina R contenente 0,2 mg/ml e pido. Aggiungere 10 ml di una soluzione di aprotinina R
agitare per garantire il mescolamento. In una camera contenente 0,2 mg/ml e agitare per garantire il
a 4 ‘C, introdurre 25 litri di acqua distillata R a 4 ‘C in mescolamento. In un recipiente della capacita© di
un recipiente con una capacita© minima di almeno 30 litri, almeno 30 litri in una camera a 4 ‘C, introdurre 25 litri
e aggiungere circa 500 g di ghiaccio secco. Aggiungere di acqua distillata R a 4 ‘C e aggiungere circa 500 g di
immediatamente, agitando, il liquido sopranatante otte- ghiaccio secco. Aggiungere immediatamente agitando
nuto dal plasma. Si forma un precipitato bianco. il liquido sopranatante ottenuto dal plasma. Si forma

436
 Reattivi

inoizircserP
un precipitato bianco. Lasciar sedimentare a 4 ‘C per volumi e in 20 volumi della soluzione tampone. Sag-

ilareneG
10-15 h. Rimuovere la soluzione sopranatante limpida giare ogni diluizione come segue: mescolare 0,1 ml di
con un sifone. Raccogliere il precipitato centrifugando plasma substrato privo di fattore V R, 0,1 ml della solu-
a 4 ‘C. Sospendere il precipitato mediante dispersione zione in esame, 0,1 ml di tromboplastina reattivo R e
meccanica in 500 ml di acqua distillata R a 4 ‘C, agitare 0,1 ml di una soluzione (3,5 g/l) di calcio cloruro R e
per 5 min e raccogliere il precipitato mediante centrifu- misurare il tempo di coagulazione, cioe© l'intervallo tra

isilanA id
idoteM
gazione a 4 ‘C. Disperdere il precipitato meccanica- il momento in cui si aggiunge la soluzione di calcio clo-
mente in 60 ml di una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R ruro e il primo accenno di formazione di fibrina, che
e (0,9 g/l) di sodio citrato R, e portare il pH a 7,2-7,4 con puo© essere osservato visivamente o mediante un appa-
l'aggiunta di una soluzione (10 g/l) di sodio idrossido R. recchio adatto.

irotinetnoC
Filtrare su un filtro di vetro sinterizzato; per facilitare la

/ ilairetaM
Nello stesso modo, determinare il tempo di coagula-
dissoluzione del precipitato triturare le particelle con zione (in duplicato) di quattro diluizioni di plasma
uno strumento adatto. Lavare il filtro e lo strumento umano normale in tampone imidazolo soluzione a pH
con 40 ml della soluzione cloruro-citrato descritta sopra 7,3 R, contenente rispettivamente, 1 volume in 10 (equi-
e diluire a 100 ml con la stessa soluzione. Liofilizzare la valente al 100 per cento di fattore V), 1 volume in 50
soluzione. Le rese sono generalmente di 6-8 g di euglobu- (20 per cento), 1 volume in 100 (10 per cento) e 1 volume

ivittaeR
line per litro di plasma umano. in 1000 (1 per cento). Riportare su carta logaritmica la
Saggio di idoneita© . Per questo saggio, preparare le solu- media dei tempi di coagulazione per ciascuna diluizione
zioni usando tampone fosfato soluzione a pH 7,2 R con- del plasma umano rispetto alla percentuale equivalente
tenente 30 g/l di albumina bovina R. In una provetta del fattore V e ricavare, per estrapolazione, la percen-
con un diametro di 8 mm, posta a b.m. a 37 ‘C intro- tuale del fattore V per le due diluizioni della soluzione

itnemogrA
ilareneG
durre 0,1 ml di una soluzione di una preparazione di del fattore V. La media dei due risultati da© la percen-
riferimento di streptochinasi contenente 10 U.I. di atti- tuale del fattore V nella soluzione in esame.
vita© streptochinasica per millilitro e 0,1 ml di una solu- Conservare la soluzione congelata ad una temperatura
zione di trombina umana R contenente 20 U.I. per milli- non superiore a ^ 20 ‘C.
litro. Aggiungere rapidamente 1 ml di una soluzione

eifargonoM
. 1037300.

ilareneG
contenente 10 mg di euglobuline umane per millilitro. Fattore Xa bovino di coagulazione del sangue

[9002-05-5].
Si forma un coagulo solido in meno di 10 s. Annotare
il tempo che intercorre tra l'aggiunta della soluzione di Enzima che converte la protrombina in trombina. La
euglobuline umane e la lisi del coagulo. Il tempo di lisi preparazione semi-purificata e© ottenuta dal plasma
liquido bovino e puo© essere preparata mediante attiva-

ehcituecamraF
non supera i 15 min.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso a zione dello zimogeno del fattore X con un attivatore

emroF
4 ‘C e usare entro 1 anno. adatto come il veleno della vipera di Russell.
. 1021400. Conservare la preparazione liofilizzata a ^20 ‘C e la
Fattore V di coagulazione del sangue soluzione
soluzione congelata ad una temperatura inferiore a
La soluzione del fattore V di coagulazione del sangue 20 ‘C.
puo© essere preparata con il metodo seguente o
ÿ

. 1037301.
eiretaM

emirP
mediante qualunque altro metodo che escluda il fattore Fattore Xa bovino soluzione

VIII. Ricostituire come indicato dal produttore e diluire

Preparare il reattivo del fattore V dal plasma bovino con tampone tris(idrossimetil) amminometano-
fresco trattato con ossalato, mediante frazionamento a sodio cloruro soluzione a pH 7,4 R.
ehcituecamraF

Un'eventuale variazione nell'assorbanza della solu-

inoizaraperP

4 ‘C con una soluzione satura di ammonio solfato R pre-

ehcificepS

parata a 4 ‘C. Separare la frazione che precipita tra il zione, misurata a 405 nm (2.2.25) rispetto al tam-
38 per cento e il 50 per cento di saturazione, che con- pone tris(idrossimetil)amminometano-sodio cloruro
tiene il fattore V senza contaminazione significativa soluzione a pH 7,4 R usato come bianco non e© supe-
con il fattore VIII. Rimuovere l'ammonio solfato per riore a 0,15-0,20 per minuto.
ehcitapoemO
inoizaraperP

dialisi e diluire la soluzione con una soluzione (9 g/l) . C10H16. (Mr 136,2). 1130400. [4221-98-1].
di sodio cloruro R per ottenere una soluzione conte-
a-Fellandrene

nente tra il 10 per cento e il 20 per cento della quantita©

(R)-5-Isopropil-2-metil-cicloesa-1,3-diene. (^)-p-Menta-
di fattore V presente nel plasma umano normale fresco.
1,5-diene.
Determinazione del contenuto del fattore V. Preparare d2020 : circa 0,839.
due diluizioni della preparazione del fattore V in tam- n20D : circa 1,471.
22 : circa ^217.
ecidnI

pone imidazolo soluzione a pH 7,3 R contenente 1 ‰ Š

D
volume della preparazione, rispettivamente in 10 p.e.: da 171 ‘C a 174 ‘C.

437
Reattivi

L' -Fellandrene utilizzato in gas cromatografia soddisfa p-Fenilendiammina dicloridrato . C6H10Cl2N2. (Mr 181,1).
all'ulteriore saggio seguente: 1064200. [615-28-1]. 1,4-Diamminobenzene dicloridrato.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas Polvere cristallina o cristalli bianchi o leggermente
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- colorati, che diventano rossastri per esposizione all'a-
fia Eucalipto essenza (0390) usando la sostanza da esa- ria, molto solubili in acqua, poco solubili in alcool e in
minare come soluzione in esame. etere.
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per . C8H9NO2. (Mr 151,2). 1064300.
cento dell'area totale dei picchi. a-Fenilglicina

[2835-06-5]. Acido (RS)-2-ammino-2-fenilacetico.

. C14H10. (Mr 178,2). 1063200. [85-01-8].
. C6H9ClN2. (Mr 144,6).
Fenantrene

Cristalli bianchi, praticamente insolubili in acqua, Fenilidrazina cloridrato

1064500. [59-88-1].
molto solubili in etere, moderatamente solubili in
alcool. Polvere cristallina bianca o quasi bianca, che imbruni-
p.f.: circa 100 ‘C. sce per esposizione all'aria, solubile in acqua e in
Fenantrolina cloridrato . C12H9ClN2.H2O. (Mr 234,7). alcool.
1063300. [3829-86-5]. 1,10-Fenantrolina cloridrato p.f.: circa 245 ‘C, con decomposizione.
monoidrato. Conservare al riparo dalla luce.
Polvere bianca o quasi bianca, molto solubile in acqua, . 1064501.
solubile in alcool. Fenilidrazina cloridrato soluzione

p.f.: circa 215 ‘C, con decomposizione. Disciogliere 0,9 g di fenilidrazina cloridrato R in
. 1063400. [60-80-0]. Vedere la monografia 50 ml di acqua R. Decolorare con carbone attivato R
Fenazone

Fenazone (0421). e filtrare. Al filtrato aggiungere 30 ml di acido clori-

Fenclorfos . C8H8Cl3O3PS. (Mr 321,5). 1127200. drico R e diluire a 250 ml con acqua R.
[299-84-3]. Fenilidrazina cloridrato soluzione solforica .
p.f.: circa 35 ‘C 1064502.
Puo© essere utilizzata una idonea e certificata soluzione Disciogliere 65 mg di fenilidrazina cloridrato R,
di riferimento (10 ng/ml in cicloesano). precedentemente ricristallizzata da alcool all'85
. C10H16O. (Mr 152,2). 1037600. [7787-20-4]. per cento V/V R, in una miscela di 80 volumi di
acqua R e 170 volumi di acido solforico R e diluire
Fencone

1,3,3-Trimetilbiciclo[2.2.1]eptan-2-one.
Liquido oleoso, miscibile con alcool e con etere, prati- a 100 ml con la stessa miscela di solventi. Preparare
camente insolubile in acqua. immediatamente prima dell'uso.
n20D : circa 1,46. . C10H14N2. (Mr 162,2). 1130500.
p.e.15mm: circa 66 ‘C.
1-Fenilpiperazina

[92-54-6].
Il fencone utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul- Liquido giallo leggermente viscoso, non miscibile con
teriore saggio seguente: acqua.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediane gas
cromatografia (2.2.28) nelle condizioni descritte nella d420 : circa 1,07.
monografia Finocchio amaro (0824) usando la sostanza n20D : circa 1,588.
in esame come soluzione in esame. . C20H14O4. (Mr 318,3). 1063700. [77-09-8].
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per Fenolftaleina

3,3-Bis(4-idrossifenil)-3H-isobenzofuran-1-one.
cento dell'area totale dei picchi.
. 1064100. [63-91-2]. Vedere la monografia Polvere bianca o bianco-giallastra, praticamente inso-
Fenilalanina

Fenilalanina (0782). lubile in acqua, solubile in alcool.

Fenile isotiocianato . C7H5NS. (Mr 135,2). 1121500. Fenolftaleina soluzione . 1063702.
[103-72-0]. Disciogliere 0,1 g di fenolftaleina R in 80 ml di
Liquido, insolubile in acqua, solubile in alcool. alcool R e diluire a 100 ml con acqua R.
d2020 : circa 1,13. Saggio di sensibilita© . A 0,1 ml della soluzione di
n20D : circa 1,65. fenolftaleina aggiungere 100 ml di acqua esente da
p.e.: circa 221 ‘C. anidride carbonica R. La soluzione e© incolore. Non
p.f.: circa ^ 21 ‘C. sono necessari piu© di 0,2 ml di sodio idrossido 0,02 M
Usare un grado di purezza adatto per la sequenza per far virare la colorazione al rosa.
proteica. Viraggio. Da pH 8,2 (incolore) a pH 10,0 (rosso).

438
 Reattivi

inoizircserP
. 1063703. . FeNH4(SO4)2.12H2O.

ilareneG
Fenolftaleina soluzione R1 Ferro(-ico) ammonico solfato

Soluzione 10 g/l in alcool R. (Mr 482,2). 1037700. [7783-83-7]. Ferro ammonio disol-
Fenolftaleina cartina. 1063704. Immergere strisce fato dodecaidrato.
di carta da filtro per alcuni minuti in fenolftaleina Cristalli violetto pallido, efflorescenti, solubilissimi in
soluzione R. Lasciare asciugare. acqua, praticamente insolubili in alcool.

isilanA id
idoteM
Fenolo . 1063500. [108-95-2]. Vedere la monografia Ferro(-ico) ammonico solfato soluzione R1 .
Fenolo (0631). Disciogliere 0,2g di ferro(-ico)ammonicosolfatoR in
. C18H23Cl2NO. (Mr 340,3). 50 ml di acqua R, aggiungere 5 ml di acido nitrico R
e diluire a 100 ml con acqua R.
Fenossibenzammina cloridrato

1063900. N-(2-Cloroetil)-N-(1-metil-2-fenossietil)-benzi-

irotinetnoC
lammina cloridrato.

/ ilairetaM
Ferro(-ico) ammonico solfato soluzione R2 .
Contiene non meno del 97,0 per cento e non piu© dell'e- 1037702.
quivalente del 103,0 per cento di C18H23Cl2NO, calco- Soluzione 100 g/l. Se necessario filtrare prima del-
lato con riferimento alla sostanza essiccata. l'uso.
Polvere cristallina bianca o quasi bianca, moderata- .
mente solubile in acqua, molto solubile in alcool.
Ferro(-ico) ammonico solfato soluzione R4

ivittaeR
p.f.: circa 138 ‘C. Disciogliere 5 g di ferro(-ico) ammonico solfato R
in acqua R. Aggiungere, raffreddando, 11 ml di
Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore allo acido solforico R e diluire a 100 ml con acqua R.
0,5 per cento, determinata mediante essiccamento su .
anidride fosforica R ad una pressione non superiore a Ferro(-ico) ammonico solfato soluzione R5

itnemogrA
1037704.

ilareneG
670 Pa per 24 h.
Determinazione quantitativa. Disciogliere 0,500 g in Agitare 30,0 g di ferro(-ico) ammonico solfato R
50,0 ml di cloroformio esente da etanolo R e estrarre con 40 ml di acido nitrico R e diluire a 100 ml con
con tre porzioni, ciascuna da 20 ml, di acido clori- acqua R. Se la soluzione e© torbida, centrifugarla o
drico 0,01 M. Scartare gli estratti acidi, filtrare lo strato filtrarla.

eifargonoM

ilareneG
di cloroformio su cotone e diluire 5,0 ml del filtrato a Conservare al riparo dalla luce.
500,0 ml con cloroformio esente da etanolo R. Misurare .
l'assorbanza della soluzione ottenuta in una cella
Ferro(-ico) ammonico solfato soluzione R6

1037705.
chiusa al massimo di assorbimento a 272 nm. Disciogliere 20 g di ferro(-ico) ammonico solfato R

ehcituecamraF
Calcolare il contenuto di C18H23Cl2NO, considerando in 75 ml di acqua R, aggiungere 10 ml di una solu-
che il valore dell'assorbanza specifica e© di 56,3.

emroF
zione al 2,8 per cento V/V di acido solforico R e
Conservare al riparo dalla luce. diluire a 100 ml con acqua R.
. C8H10O2. (Mr 138,2). 1064000.
. Vedere ferro(-ico) ammo-
Fenossietanolo

[122-99-6]. 2-Fenossietanolo. Ferro(-ico) ammonio solfato

Liquido oleoso, incolore, limpido, poco solubile in nico solfato R.

eiretaM

emirP
acqua, molto solubile in alcool e in etere. Ferro(-ico) cloruro . FeCl3.6H2O. (Mr 270,3). 1037800.
d2020 : circa 1,11. [10025-77-1]. Ferro tricloruro esaidrato.
n20D : circa 1,537. Masse cristalline arancione-giallastre o brunastre, deli-
quescenti, solubilissime in acqua, solubili in alcool e in
ehcituecamraF

Punto di solidificazione (2.2.18). Non inferiore a 12 ‘C.

inoizaraperP

etere. Per esposizione alla luce, il ferro(-ico) cloruro e

ehcificepS

Fenvalerate . C25H22ClNO3. (Mr 419,9). 1127300. le sue soluzioni sono parzialmente ridotte.
[51630-58-1].
p.e.: circa 300 ‘C. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
Puo© essere utilizzata una idonea e certificata soluzione
. 1037801.
ehcitapoemO

di riferimento (10 ng/ml in cicloesano).

inoizaraperP

Ferro(-ico) cloruro soluzione R1

Ferro . Fe. (Ar 55,85). 1046600. [7439-89-6]. Soluzione 105 g/l.

Polvere o fili grigi, solubili negli acidi minerali diluiti. . 1037802.
. C26H16FeN6. (Mr 468,3). 1038000.
Ferro(-ico) cloruro soluzione R2
Ferrocifene

[14768-11-7]. Dicianobis(1,10-fenantrolina)ferro(II). Soluzione 13 g/l.

Polvere cristallina, bronzo-violetta, praticamente inso- Ferro(-ico) cloruro soluzione R3 . 1037803.
lubile in acqua e in alcool.
ecidnI

Disciogliere 2,0 g di ferro(-ico) cloruro R in

Conservare al riparo dalla luce e dall'umidita© . etanolo R e diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente.

439
Reattivi

Ferro(-ico) cloruro-acido solfammico reattivo . 10 ml di acido acetico diluito R, 80 ml di una soluzione

1037804. (136 g/l) di sodio acetato R e diluire a 500 ml con acqua R.
Soluzione contenente 10 g/l di ferro(-ico) cloruro R Utilizzare una soluzione preparata di recente.
e 16 g/l di acido solfammico R. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al
Ferro(-ico) cloruro in acido acetico . riparo dalla luce.
Disciogliere, agitando, 75 mg di ferro(-ico) cloruro R Fibrina blu . 1101400.
in 50 ml di acido acetico anidro R. Dopo raffredda- Mescolare 1,5 g di fibrina con 30 ml di una soluzione
mento aggiungere 50 ml di acido solforico R. Prepa- (5 g/l) di carminio indaco R in acido cloridrico diluito R
rare immediatamente prima dell'uso. all'1 per cento V/V. Scaldare la miscela a 80 ‘C e mante-
. Fe(NO3)3.9H2O. (Mr 404). 1106100. nere sotto agitazione a questa temperatura per 30 min
circa. Lasciar raffreddare. Filtrare. Lavare accuratamente
Ferro(-ico) nitrato

[7782-61-8].
Contiene non meno del 99,0 per cento m/m di mediante risospensione in acido cloridrico diluito R
Fe(NO3)3.9H2O. all'1 per cento V/V e mescolare per 30 min circa; filtrare.
Cristalli porpora chiaro o massa cristallina, solubilis- Ripetere l'operazione di lavaggio tre volte. Essiccare a
simi in acqua. 50 ‘C. Triturare.
Acido libero: non piu© dello 0,3 per cento (come HNO3). Fibrina rosso Congo . 1038400.
Ferro(-ico) solfato . Fe2(SO4)3.xH2O. 1037900. Prelevare 1,5 g di fibrina e lasciarla durante la notte in
[10028-22-5]. Ferro(III) trisolfato idratato. 50 ml di una soluzione (20 g/l) di rosso Congo R in
Polvere bianco-giallastra, molto igroscopica, si decom- alcool al 90 per cento V/V R. Filtrare, sciacquare la
pone all'aria, poco solubile in acqua e in alcool. fibrina con acqua R e conservare in etere R.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al Fibrinogeno . 1038500. [9001-32-5]. Vedere la monogra-
riparo dalla luce. fia Fibrinogeno umano liofilizzato (0024).
Ferro(-oso) ammonico solfato . Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O. . C6H6O3.2H2O. (Mr 162,1). 1064600.
(Mr 392,2). 1038200. [7783-85-9]. Ferro diammonio
Floroglucina

[6099-90-7]. Benzen-1,3,5-triolo diidrato.

disolfato esaidrato. Cristalli bianchi o giallastri, poco solubili in acqua,
Cristalli o granuli verde-bluastro pallido, molto solubili solubili in alcool.
in acqua, praticamente insolubili in alcool. p.f.: circa 223 ‘C (metodo istantaneo).
Conservare al riparo dalla luce.
. Vedere ferro(-oso) ammo- Floroglucina soluzione . 1064601.
Ad 1 ml di una soluzione (100 g/l) di floroglucina R
Ferro(-oso) ammonio solfato

nico solfato R
Ferro(-oso) solfato . 1038300. [7782-63-0]. Vedere la in alcool R, aggiungere 9 ml di acido cloridrico R.
monografia Ferroso solfato (0083). Conservare al riparo dalla luce.
Ferro(-oso) solfato soluzione R2 . 1038301. . C16H10. (Mr 202,3). 1038600. [206-44-0].
Disciogliere 0,45 g di ferro(-oso) solfato R in 50 ml Fluorantene

1,2-(1,8-Naftilen)benzene. 1,2-Benzacenaftene.
di acido cloridrico 0,1 M e diluire a 100 ml con
acqua esente da anidride carbonica R. Preparare Cristalli da giallo a marrone-giallastro chiaro.
immediatamente prima dell'uso. p.e.: circa 384 ‘C.
Ferroina . 1038100. [14634-91-4]. p.f.: da 109 ‘C a 110 ‘C.
Disciogliere 0,7 g di ferro(-oso) solfato R e 1,76 g di Fluorene . C13H10. (Mr 166,2). 1127400. [86-73-7].
fenantrolina cloridrato R in 70 ml di acqua R e diluire a Difenilenmetano.
100 ml con lo stesso solvente. Cristalli bianchi, molto solubili in acido acetico anidro,
Saggio di sensibilita© . A 50 ml di acido solforico diluito R solubili in alcool caldo.
aggiungere 0,15 ml di osmio tetrossido soluzione R e p.f.: da 113 ‘C a 115 ‘C.
0,1 ml di ferroina. Dopo l'aggiunta di 0,1 ml di ammonio . C17H10O4. (Mr 278,3) 1135800.
e cerio nitrato 0,1 M la colorazione vira dal rosso al blu Fluorescamina

[38183-12-9]. 4-Fenilspiro[furan-2(3H), 1'(3'H)-isoben-

chiaro. zofuran]-3,3'-dione.
. 1046700.
p.f.: da 154 ‘C a 155 ‘C.
Ferro salicilato soluzione

Disciogliere 0,1 g di ferro(-ico) ammonico solfato R in

una miscela di 2 ml di acido solforico diluito R e 48 ml Fluoresceina . C20H12O5. (Mr 332,3). 1106300. [2321-07-5].
di acqua R e diluire a 100 ml con acqua R. Aggiungere 3',6' - Diidrossispiro [isobenzofurano - 1 (3H),9'- [9H]xan-
50 ml di una soluzione (11,5 g/l) di sodio salicilato R, ten]-3-one.

440
 Reattivi

inoizircserP
Polvere rosso-arancione, praticamente insolubile in . Vedere la monografia Sodio

ilareneG
Fosfato disodico diidrato

acqua, solubile in alcool caldo, praticamente insolubile fosfato dibasico diidrato (0602).
in etere, solubile in soluzioni alcaline. In soluzione, la . Vedere potassio fosfato monoba-
fluoresceina mostra una fluorescenza verde.
Fosfato monopotassico

sico R.
p.f.: circa 315 ‘C. . Vedere sodio fosfato mono-

isilanA id
Fosfato monosodico anidro
. Vedere sodio fluoresceinato R.

idoteM
Fluoresceina sodica basico anidro R.
Fluorodinitrobenzene . C6H3FN2O4. (Mr 186,1). . Vedere sodio fosfato tri-
1038800. [70-34-8]. 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene.
Fosfato trisodico dodecaidrato

basico dodecaidrato R.
Cristalli giallo pallido, solubili in etere e in glicole pro- . 1064800.
pilenico.

irotinetnoC
Fosfolipidi

/ ilairetaM
Lavare una quantita© di cervello umano o bovino, ben
p.f.: circa 29 ‘C. separato dalle meningi e dai vasi sanguigni e omogei-
1-Fluoro-2-nitro-4-(trifluorometil)benzene . nizzarlo in un apparecchio adatto. Pesare 1000-1300 g
C7H3F4NO2. (Mr 209,1). 1038900. [367-86-2]. della sostanza omogeinizzata e misurare il volume
p.f.: circa 197 ‘C. (V ml). Estrarre con tre porzioni, ciascuna da 4V ml, di
acetone R, filtrare a pressione ridotta e essiccare il resi-

ivittaeR
2-Fluoro-2-desossi- D-glucosio . C6H11FO5. (Mr 182,2). duo a 37 ‘C per 18 h. Estrarre il residuo con due por-
1113900. [86783-82-6]. zioni, ciascuna da 2V ml, di una miscela di 2 volumi di
Polvere cristallina bianca. etere di petrolio R2 e 3 volumi di etere di petrolio R1, fil-
p.f.: da 174 ‘C a 176 ‘C. trando ciascun estratto su carta da filtro precedente-

itnemogrA
. 1039100. [50-00-0]. Vedere la monografia mente umidificata con la miscela dei solventi. Riunire

ilareneG
gli estratti e evaporare a secco a 45 ‘C ad una pressione
Formaldeide

Formaldeide soluzione 35 per cento (0826).

. 1039101. Vedere la mono- non superiore a 670 Pa. Disciogliere il residuo in
Formaldeide soluzione

grafia Formaldeide soluzione 35 per cento (0826). 0,2V ml di etere R e lasciare a riposo a 4 ‘C fino a for-
mazione di deposito. Centrifugare e evaporare il liquido

eifargonoM
. CH3NO. (Mr 45,0). 1039200. [75-12-7]. sopranatante limpido sotto bassa pressione fino al

ilareneG
Formammide

Liquido oleoso, incolore, limpido, igroscopico, misci- volume di 100 ml per chilogrammo della sostanza omo-
bile con acqua e con alcool. Si idrolizza in acqua. geinizzata e pesare. Lasciare a riposo a 4 ‘C fino a for-
p.e.: circa 103 ‘C, determinato ad una pressione di mazione di un precipitato (per 12-24 h) e centrifugare.
2 kPa. Aggiungere al liquido sopranatante limpido un volume

ehcituecamraF
di acetone R pari a cinque volte il suo volume, centrifu-
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. gare ed eliminare il liquido sopranatante. Essiccare il

emroF
Formammide R1 . 1039202. precipitato.
Soddisfa ai requisiti prescritti per la formammide R Conservare in un essiccatore sotto vuoto al riparo dalla
e all'ulteriore saggio seguente: luce.
Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,1 per cento determi- . 1065000.
eiretaM

emirP
Fosfomolibdotungstico reattivo
nato con un volume uguale di metanolo anidro R. Disciogliere 100 g di sodio tungstato R e 25 g di sodio
Formammide trattata . 1039201. molibdato R in 700 ml di acqua R. Aggiungere 100 ml
Disperdere 1,0 g di acido solfammico R in 20,0 ml di acido cloridrico R e 50 ml di acido fosforico R. Scal-
di formammide R contenente il 5 per cento (V/V) dare a ricadere la miscela in un apparecchiatura di
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

di acqua R. vetro per 10 h. Aggiungere 150 g di litio solfato R,

50 ml di acqua R e qualche goccia di bromo R. Bollire
Fosalone . C12H15ClNO4PS2. (Mr 367,8). 1130200. fino a rimuovere l'eccesso di bromo (15 min), raffred-
[2310-17-0]. dare, diluire a 1000 ml con acqua R e filtrare. Il reattivo
p.f.: da 45 ‘C a 48 ‘C. dovrebbe essere giallo. Se assume una colorazione ver-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di dastra, e© inadeguato per l'uso ma puo© essere rigenerato
riferimento (10 ng/ml in iso-ottano). per ebollizione con alcune gocce di bromo R. Eliminare
Fosfato dipotassico . Vedere potassio fosfato dibasico R. ogni eccesso di bromo per ebollizione.
Fosfato disodico . Vedere la monografia Sodio fosfato Conservare a 2-8 ‘C.
dibasico dodecaidrato (0118). Fosfomolibdotungstico reattivo diluito . 1065001.
ecidnI

Fosfato disodico anidro . Vedere sodio fosfato dibasico Ad 1 volume di fosfomolibdotungstico reattivo R
anidro R. aggiungere 2 volumi di acqua R.

441
Reattivi

Fosforo pentossido .Vedere anidride fosforica R. Cristalli con lucentezza bronzeo-verdastra, solubili in
. 1106400. [57-48-7]. Vedere la monografia acqua e in alcool.
Conservare al riparo dalla luce.
Fruttosio

Fruttosio (0188).
. Vedere aldeide ftalica R. Fucsina decolorata soluzione . 1039401.
Disciogliere 0,1 g di fucsina basica R in 60 ml di
Ftalaldeide

Ftalazina . C8H6N2. (Mr 130,1). 1065400. [253-52-1]. acqua R. Aggiungere una soluzione contenente 1 g
Cristalli giallo pallido molto solubili in acqua, solubili di sodio solfito anidro R o 2 g di sodio solfito R in
in etanolo, in etile acetato e in metanolo, moderata- 10 ml di acqua R. Aggiungere lentamente 2 ml di
mente solubili in etere. acido cloridrico R, agitando di continuo. Diluire a
p.f.: da 89 ‘C a 92 ‘C. 100 ml con acqua R. Lasciare a riposo al riparo
dalla luce per almeno 12 h, decolorare con carbone
Ftaleina porpora . C32H32N2O12.xH2O. (Mr 637, attivato R e filtrare. Se la soluzione diventa torbida,
sostanza anidra). 1065500. [2411-89-4]. Metalftaleina. filtrare prima dell'uso. Se la soluzione diventa vio-
Porpora ftaleina. Acido (1,3-diidro-3-oxo-isobenzofu- letta con il passare del tempo, decolorare di nuovo
ran-1-iliden)bis[(6-idrossi-5-metil-3,1-fenilen)bis(meti- mediante aggiunta di carbone attivato R.
lenimmino)diacetico]. Acido 2,2',2'',2'''-[o-cresolfta- Saggio di sensibilita© . A 1,0 ml aggiungere 1,0 ml di
lein-3',3''-bis(metilenenitrilo)]tetracetico. acqua R e 0,1 ml di alcool esente da aldeide R.
Polvere da bianco-giallastra a brunastra, praticamente Aggiungere 0,2 ml di una soluzione contenente
insolubile in acqua, solubile in alcool. Il prodotto si 0,1 g/l di formaldeide (CH2O, Mr 30,0). Si sviluppa
puo© trovare in commercio sotto forma di sale sodico: una colorazione rosa pallido entro 5 min.
polvere da bianco-giallastra a rosa, solubile in acqua, Conservare al riparo dalla luce.
praticamente insolubile in alcool. Fucsina decolorata soluzione R1 . 1039402.
Saggio di sensibilita© . Disciogliere 10 mg in 1 ml di ammo- A 1 g di fucsina basica R aggiungere 100 ml di
niaca concentrata R e diluire a 100 ml con acqua R. A acqua R. Scaldare a 50 ‘C e lasciare raffreddare
5 ml della soluzione aggiungere 95 ml di acqua R, 4 ml di agitando di tanto in tanto. Lasciare a riposo per
ammoniaca concentrata R, 50 ml di alcool R e 0,1 ml di 48 h, agitare e filtrare. A 4 ml del filtrato aggiun-
bario cloruro 0,1 M. La soluzione e© violetta-blu. Aggiun- gere 6 ml di acido cloridrico R, mescolare e diluire
gere 0,15 ml di sodio edetato 0,1 M. La soluzione diventa a 100 ml con acqua R. Lasciare a riposo per almeno
incolore. 1 h prima dell'uso.
Fucosio . C6H12O5. (Mr 164,2). 1039500. [6696-41-9]. . C5H4O2. (Mr 96,1). 1039600. [98-01-1].
6-Desossi-l-galattosio. Furfurolo

2-Furaldeide. 2-Furancarbaldeide. Furfurale.

Polvere bianca, solubile in acqua e in alcool. Liquido oleoso, limpido, da incolore a giallo-brunastro,
20 : circa 76, determinato su una soluzione (90 g/l)
D
miscibile in 11 parti di acqua, miscibile con alcool e
con etere.
‰ Š ÿ

24 h dopo dissoluzione.
p.f.: circa 140 ‘C. d2020 : da 1,155 a 1,161.
. 1039400. [632-99-5]. Miscela di rosani- Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per
Fucsina basica

lina cloridrato (C20H20ClN3; Mr 337,9; Colour Index cento distilla tra 159 ‘C e 163 ‘C.
No. 42510; Schultz No. 780) e pararosanilina cloridrato Conservare al buio.
(C19H18ClN3; Mr 323,8; Colour Index No. 42500; Galattosio . C6H12O6. (Mr 180,2). 1039700. [59-23-4].
d -(+)-Galattosio.
Schultz No. 779).
Se necessario, purificare nel seguente modo. Discio- Polvere cristallina, bianca, molto solubile in acqua.
20 : da + 79 a + 81, determinato su una soluzione
gliere 1 g in 250 ml di acido cloridrico diluito R. Lasciare ‰ Š
D
(100 g/l) in acqua R contenente circa 0,05 per
a riposo per 2 h a temperatura ambiente, filtrare e neu- cento di NH3.
tralizzare con sodio idrossido soluzione diluita R e
aggiungerne 1-2 ml in eccesso. Filtrare il precipitato Gel di silice amminoesadecilsililato per cromatografia .
attraverso un filtro di vetro sinterizzato (40) e lavare 1138400.
con acqua R. Disciogliere il precipitato in 70 ml di Gel di silice suddiviso molto finemente (da 3 mm a
metanolo R, precedentemente riscaldato fino ad ebolli- 10 mm), chimicamente modificato in superficie
zione, ed aggiungere 300 ml di acqua R a 80 ‘C. mediante legame con gruppi amminoesadecilsililici. La
Lasciare raffreddare a temperatura ambiente, filtrare dimensione delle particelle e© indicata dopo il nome del
ed essiccare i cristalli sotto vuoto. reattivo nel saggio in cui viene utilizzato.

442
 Reattivi

inoizircserP
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-

ilareneG
Gel di silice derivatizzato con amilosio per cromatogra-

bile in acqua e in alcool. fia . 1109800.

Gel di silice amminopropilmetilsililato per cromatogra- Gel di silice molto finemente suddiviso (10 mm), modifi-
fia . 1102400. cato chimicamente in superficie mediante legame con
Gel di silice con una dimensione particellare molto fine un derivato dell'amilosio. La dimensione delle parti-

isilanA id
(tra 3 mm e 10 mm), chimicamente modificato in superfi- celle e© indicata dopo il nome del reattivo nel saggio in

idoteM
cie mediante legame con gruppi amminopropilmetilsili- cui viene utilizzato.
lici. La dimensione delle particelle e© indicata dopo il Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
nome del reattivo nei saggi dove e© utilizzato. bile in acqua e in alcool.
Polvere omogenea, fine, bianca, praticamente insolu-

irotinetnoC
.

/ ilairetaM
bile in acqua e in alcool. Gel di silice diisobutilottadecilsililato per cromatografia

Gel di silice amminopropilsililato per .

cromatografia
1140000.
1077000. Gel di silice molto finemente suddiviso, modificato chi-
Gel di silice con una dimensione particellare fine (tra micamente in superficie mediante legame con gruppi
3 mm e 10 mm), chimicamente modificato in superficie diisobutilottadecilsililici. La dimensione delle particelle
mediante legame con gruppi amminopropilsilile. La e© indicata dopo il nome del reattivo nei saggi in cui

ivittaeR
dimensione delle particelle e© indicata dopo il nome del viene utilizzato.
reattivo nei saggi dove e© utilizzato. Gel di silice dimetilottadecilsililato per cromatografia .
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- 1115100.
bile in acqua e in alcool. Gel di silice molto finemente suddiviso (3 mm - 10 mm),

itnemogrA
ilareneG
Gel di silice anidro. 1076100. [112926-00-8]. chimicamente modificato in superficie mediante
Acido silicico amorfo, polimerizzato, parzialmente dei- legame con gruppi dimetilottadecilsililici. La dimen-
dratato; a 20 ‘C assorbe acqua pari a circa il 30 per sione delle particelle e© indicata dopo il nome del reat-
cento della sua massa. Contiene cobalto cloruro come tivo nei saggi in cui viene utilizzato.
indicatore. Praticamente insolubile in acqua, parzial- Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-

eifargonoM
mente solubile in soluzioni di sodio idrossido.

ilareneG
. 1076200. bile in acqua e in alcool. Dimensione delle particelle
Gel di silice butilsililato per cromatografia
non uniforme.
Gel di silice finemente suddiviso (3-10 mm) chimica- Area della superficie specifica: 300 m2/g.
mente modificato in superficie mediante legame con
gruppi butilsilile. La dimensione delle particelle e© indi- . 1110000.

ehcituecamraF
Gel di silice diolato per cromatografia

cata dopo il nome del reattivo nei saggi dove e© utiliz- Particelle sferiche di silice alle quali sono legati gruppi

emroF
zato. diidrossipropilici. Dimensione dei pori 10 nm.
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- . 1077100.
bile in acqua e in alcool. Gel di silice esilsililato per cromatografia

Silice sferoidale: 30 nm. Gel di silice finemente suddiviso (3-10 mm), chimica-
Volume dei pori: 0,6 cm3 per grammo. mente modificato in superficie mediante l'introduzione
eiretaM

emirP
Area superficiale specifica: 80 m2 per grammo. di gruppi esilsilile. La dimensione delle particelle e© indi-
cata dopo il nome del reattivo nei saggi dove e© utiliz-
Gel di silice cianosililato per cromatografia . 1109900. zato.
Gel di silice finemente suddiviso, modificato chimica- Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
ehcituecamraF

mente in superficie mediante legame con gruppi ciano-

inoizaraperP

ehcificepS

sililici. La dimensione delle particelle e© indicata dopo il bile in acqua e in alcool.

nome del reattivo nei saggi in cui viene utilizzato. Gel di silice fenilato . 1075700.
Polvere omogenea, fine, bianca, praticamente insolu- Gel di silice finemente suddiviso (5 mm), chimicamente
bile in acqua e in alcool. modificato in superficie mediante legame con gruppi
ehcitapoemO
inoizaraperP

Gel di silice derivatizzato con albumina umana per cro- fenilici. La dimensione delle particelle e© indicata dopo
matografia . 1138500. il nome del reattivo nei saggi dove e© utilizzato.
Gel di silice suddiviso molto finemente (da 3 mm a Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
10 mm), chimicamente modificato in superficie bile in acqua, in alcool e in diclorometano.
mediante legame con albumina umana. La dimensione Silice sferoidale: 8 nm.
delle particelle e© indicata dopo il nome del reattivo nel
saggio in cui viene utilizzato. Area superficiale specifica: 180 m2 per grammo.
ecidnI

Polvere omogenea, bianca, fine. Carbonio totale: 5,5 per cento.

443
Reattivi

Gel di silice fenilsililato per cromatografia. 1110200. pH (2.2.3). Soddisfa al saggio prescritto per il gel di
Gel di silice molto finemente suddiviso (5-10 mm), chi- silice G R.
micamente modificato in superficie mediante legame Fluorescenza. Preparare una lastra usando gel di silice
con gruppi fenilici. GR (2.2.27). Deporre separatamente sulla lastra, su
. 1075700. dieci punti, volumi crescenti da 1 ml a 10 ml di una solu-
zione (1 g/l) di acido benzoico R in una miscela di 10
Gel di silice fenilsililato per cromatografia R1

Gel di silice molto finemente suddiviso (5 mm), chimica- volumi di acido formico anidro R e 90 volumi di 2-propa-
mente modificato in superficie mediante legame con nolo R. Eluire per un percorso di 10 cm con la stessa
gruppi fenilici. La dimensione delle particelle e© indicata miscela di solventi. Dopo l'evaporazione dei solventi
dopo il nome del reattivo nel saggio dove e© utilizzato. esaminare il cromatogramma alla luce ultravioletta a
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- 254 nm. L'acido benzoico produce macchie scure su
bile in acqua, in alcool e in diclorometano. sfondo fluorescente nel terzo superiore del cromato-
Silice sferoidale: 8 nm. gramma per quantita© uguali e superiori a 2 g. l

Area della superficie specifica: 180 m2/g. Gel di silice H . 1076500. [112926-00-8].
Carico di carbonio: 5,5 per cento. Polvere omogenea, bianca, fine con una dimensione
Gel di silice G. 1076300. [112926-00-8]. delle particelle di circa 15 mm.
Contiene circa il 13 per cento di calcio solfato emii- pH (2.2.3). Soddisfa al saggio prescritto per il gel di
drato. silice G R.
Polvere omogenea, bianca, fine, con una dimensione Gel di silice H silanizzato . 1076600.
delle particelle di circa 15 mm. Preparazione di uno strato sottile. Vedere gel di silice
Contenuto di calcio solfato. Deporre 0,25 g in una beuta HF254 silanizzato R.
con tappo a smeriglio, aggiungere 3 ml di acido clori- Polvere omogenea bianca, fine, che, dopo essere stata
drico diluito R e 100 ml di acqua R e agitare vigorosa- agitata con acqua, galleggia in superficie per le sue pro-
mente per 30 min. Filtrare attraverso un filtro di vetro prieta© idrorepellenti.
sinterizzato e lavare il residuo. Effettuare la determina- Separazione cromatografica. Soddisfa al saggio pre-
zione complessometrica del calcio (2.5.11) sui filtrati e i scritto per il gel di silice HF254 silanizzato R.
lavaggi riuniti. . 1076700.
1 ml di sodio edetato 0,1 M equivale a 14,51 mg di
Gel di silice HF254

CaSO4.ÃÙÄH2O. Contiene circa l'1,5 per cento di un indicatore fluore-

scente avente un'intensita© ottimale a 254 nm.
pH (2.2.3). Agitare 1 g per 5 min con 10 ml di acqua Polvere omogenea, bianca, fine con una dimensione
esente da anidride carbonica R. Il pH della sospensione delle particelle di circa 15 mm.
e© circa 7. pH (2.3.3). Soddisfa al saggio prescritto per il gel di
Gel di silice 60 . Polvere omogenea bianca. Porosita© silice G R.
media 6 nm. Fluorescenza. Soddisfa al saggio prescritto per il gel di
pH (2.2.3). Soddisfa al saggio prescritto per il gel di silice GF254 R.
silice G R. . 1076800.
Gel di silice 60 F254. Polvere omogenea, bianca, fine con Gel di silice HF254 silanizzato

Contiene circa l'1,5 per cento di un indicatore fluore-

una dimensione media delle particelle compresa tra scente avente un'intensita© ottimale a 254 nm.
60 mm e 200 mm.
pH (2.2.3). Soddisfa al saggio prescritto per il gel di Polvere omogenea, bianca, fine che, dopo agitazione
silice G R. con acqua, galleggia in superficie per le sue proprieta©
Fluorescenza. Soddisfa al saggio prescritto per il gel di idrorepellenti.
silice GF254 R. Preparazione di uno strato sottile. Agitare vigorosa-
. 1076400. [112926-00-8]. mente 30 g con 60 ml di una miscela di 1 volume di
Gel di silice GF 254
metanolo R e 2 volumi di acqua R per 2 min. Rivestire
Contiene circa il 13 per cento di calcio solfato emiidrato le lastre accuratamente pulite, con uno strato di
e circa l'1,5 per cento di un indicatore fluorescente 0,25 mm di spessore usando un dispositivo appropriato.
avente un'intensita© ottimale a 254 nm. Lasciare asciugare all'aria le lastre rivestite e poi essic-
Polvere omogenea, bianca, fine con una dimensione carle in stufa a 100-105 ‘C per 30 min.
delle particelle di circa 15 mm. Separazione cromatografica. Introdurre, rispettiva-
Contenuto di calcio solfato. Determinare mediante il mente, 0,1 g di metile laurato R, metile miristato R,
metodo prescritto per il gel di silice G R. metile palmitato R e metile stearato R in una beuta da

444
 Reattivi

inoizircserP
250 ml. Aggiungere 40 ml di potassio idrossido soluzione . 1110300.

ilareneG
Gel di silice OD per separazioni chirali

alcoolica R e scaldare a ricadere a b.m. per 1 h. Lasciare Gel di silice per cromatografia molto finemente suddi-
raffreddare, trasferire la soluzione in un imbuto separa- viso (5 mm) ricoperto con il seguente derivato:
tore con 100 ml di acqua R, acidificare (pH 2-3) con
acido cloridrico diluito R e agitare con tre porzioni, cia-
scuna da 10 ml, di cloroformio R. Essiccare gli estratti

isilanA id
idoteM
di cloroformio riuniti su sodio solfato anidro R, filtrare
ed evaporare a secco a b.m. Disciogliere il residuo in
50 ml di cloroformio R. Esaminare mediante cromato-
grafia su strato sottile (2.2.27), usando gel di silice

irotinetnoC
HF254 silanizzato come sostanza di rivestimento.

/ ilairetaM
Deporre sulla lastra, su tre punti separati, 10 ml della Gel di silice ottadecanoilamminopropilsililato per cro-

soluzione cloroformica. Eluire per un percorso di matografia . 1115200.

14 cm con una miscela di 10 volumi di acido acetico Gel di silice molto finemente suddiviso (da 3 mm a 10
glaciale R, 25 volumi di acqua R e 65 volumi di dios- mm), chimicamente modificato in superficie mediante
sano R. Essiccare la lastra a 120 ‘C per 30 min. Lasciar legame con gruppi amminopropilsililici i quali sono

ivittaeR
raffreddare, spruzzare con una soluzione (35 g/l) di acilati con gruppi ottadecanoilici. La dimensione delle
acido fosfomolibdico R in 2-propanolo R e scaldare a particelle e© indicata dopo il nome del reattivo nei saggi
150 ‘C fino a che le macchie diventino visibili. Esporre in cui viene utilizzato.
la lastra a vapori di ammoniaca fino a che lo sfondo Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
diventi bianco. I cromatogrammi presentano quattro bile in acqua e in alcool.

itnemogrA
ilareneG
macchie ben definite, nettamente separate. . 1077500.
. 1077200.
Gel di silice ottadecilsililato per cromatografia
Gel di silice idrofilo per cromatografia
Gel di silice molto finemente suddiviso (da 3 mm a 10
Gel di silice molto finemente suddiviso (3-10 mm) con mm), chimicamente modificato in superficie mediante
una superficie modificata allo scopo di conferire carat- legame con gruppi ottadecilsililici. La dimensione delle
teristiche idrofile. La dimensione delle particelle puo©

eifargonoM
particelle e© indicata dopo il nome del reattivo nei saggi

ilareneG
essere indicata dopo il nome del reattivo nei saggi dove in cui viene utilizzato.
e© utilizzato. Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- bile in acqua e in alcool.
bile in acqua e in alcool. .

ehcituecamraF
. 1077300.
Gel di silice ottadecilsililato per cromatografia R1

1110100.

emroF
Gel di silice nitrilato per cromatografia

Gel di silice molto finemente suddiviso, modificato in Gel di silice ultrapuro chimicamente modificato in
superficie mediante l'introduzione di gruppi cianopro- superficie mediante legame di gruppi ottadecilsililici.
pilsililici. La dimensione delle particelle e© indicata dopo La dimensione delle particelle e dei pori e il carico di
il nome del reattivo nel saggio dove e© utilizzato. carbonio sono indicati dopo il nome dei reattivi, nei
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- saggi in cui viene utilizzato. Contiene meno di 20 ppm
eiretaM

emirP
bile in acqua, in alcool e in etere. di metalli.
Gel di silice nitrilato per cromatografia R1 . 1077400. Gel di silice ottadecilsililato per .
cromatografia R2

Gel di silice molto finemente suddiviso, costituito da 1115300.

particelle sferiche, porose, con gruppi nitrilici legati chi-
ehcituecamraF

Gel di silice purissimo, molto finemente suddiviso

inoizaraperP

ehcificepS

micamente. La dimensione delle particelle e© indicata (dimensione dei pori 15 nm), chimicamente modificato
dopo il nome del reattivo nel saggio dove e© utilizzato. in superficie mediante legame con gruppi ottadecilsili-
Polvere omogenea, bianca, fine praticamente insolubile lici (20 per cento di carico di carbonio), ottimizzato
in acqua, in alcool e in etere. per l'analisi di idrocarburi aromatici policiclici. La
dimensione delle particelle e© indicata dopo il nome del
ehcitapoemO
inoizaraperP

. 1119500.
reattivo nei saggi in cui viene utilizzato.
Gel di silice nitrilato per cromatografia R2

Gel di silice purissimo, chimicamente modificato in

superficie mediante l'introduzione di gruppi cianopro- Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
pilsililici. Meno di 20 ppm di metalli. La dimensione bile in acqua e in alcool.
delle particelle e© indicata dopo il nome del reattivo nei Gel di silice ottadecilsililato per cromatografia post-

saggi in cui viene utilizzato. modificato (end-capped). 1115400.

ecidnI

Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- Gel di silice molto finemente suddiviso (da 3 mm a
bile in acqua e in alcool. 10 mm), chimicamente modificato in superficie

445
Reattivi

mediante legame con gruppi ottadecilsililici. Per mini- in superficie mediante legame con gruppi ottilsililici
mizzare ogni interazione con i componenti basici e© ulte- (19 per cento di carico di carbonio). Meno di 20 ppm
riormente derivatizzato per bloccare la maggior parte di metalli.
dei gruppi silanolici rimanenti. La dimensione delle .
particelle e© indicata dopo il nome del reattivo nei saggi Gel di silice ottilsililato per cromatografia disattivato

1131600.
in cui viene utilizzato.
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- Gel di silice molto finemente suddiviso (da 3 mm a
bile in acqua e in alcool. 10 mm), trattato, prima dell'introduzione dei gruppi
ottilsililici, mediante accurato lavaggio e idrolisi della
Gel di silice ottadecilsililato per cromatografia disatti-
maggior parte dei ponti silossanici superficiali per
vato . 1077600. minimizzare l'interazione con i componenti basici. La
Gel di silice molto finemente suddiviso (3-10 mm), pre- dimensione delle particelle e© indicata dopo il nome del
trattato, prima dell'introduzione di gruppi ottadecilsili- reattivo nei saggi in cui viene utilizzato.
lati, mediante accurato lavaggio e idrolisi della maggior Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
parte dei ponti superficiali silossanici per minimizzare bile in acqua e in alcool.
l'interazione con i componenti basici. La dimensione
delle particelle e© indicata dopo il nome del reattivo nei Gel di silice ottilsililato per cromatografia post-modifi-

saggi dove e© utilizzato. cato (end-capped) . 1119600.

Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- Gel di silice molto finemente suddiviso (da 3 mm a
bile in acqua e in alcool. 10 mm), chimicamente modificato in superficie
mediante legame con gruppi ottilsililici. Per minimiz-
Gel di silice ottadecilsililato per cromatografia disatti-

. 1108600. zare ogni interazione con i componenti basici e© ulterior-

Gel di silice molto finemente suddiviso (3-10 mm), trat- mente derivatizzato per bloccare la maggior parte dei
vato post-modificato (end-capped)

tato, prima dell'introduzione di gruppi ottadecilsililati, gruppi

celle e©
silanolici rimanenti. La dimensione delle parti-
indicata dopo il nome del reattivo nei saggi in
mediante lavaggio e idrolisi della maggior parte dei cui viene utilizzato.
ponti silossanici superficiali. Per minimizzare ulterior-
mente ogni interazione con i componenti basici e© bloc- Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
cato con cura alle estremita© per proteggere la maggior bile in acqua e in alcool.
parte dei gruppi silanoli rimanenti. La dimensione delle . 1076900.
particelle e© indicata dopo il nome del reattivo nel saggio Gel di silice finemente suddiviso (3-10 mm). La dimen-
Gel di silice per cromatografia

dove e© utilizzato. sione delle particelle e© indicata dopo il nome del reat-
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- tivo nei saggi dove e© utilizzato.
bile in acqua e in alcool. Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu-
Gel di silice ottilsililato per cromatografia. 1077700. bile in acqua e in alcool.
Gel di silice molto finemente suddiviso (3-10 mm), chi-
micamente modificato in superficie mediante l'introdu- Gel di silice per cromatografia modificato con gruppi

.Vedere gel di silice nitrilato per croma-

zione di gruppi ottilsililici. La dimensione delle parti- tografia R.
cianopropilsililici

celle e© indicata dopo il nome del reattivo nei saggi dove

e© utilizzato. Gel di silice per cromatografia modificato con gruppi

Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- . Vedere gel di silice nitrilato per cromato-
nitrilici

bile in acqua e in alcool. grafia R1.

Gel di silice ottilsililato per cromatografia R1 . 1077701. Gel di silice per cromatografia per esclusione . 1077900.
Gel di silice molto finemente suddiviso (da 3 mm a Gel di silice suddiviso molto finemente (10 mm) con una
10 mm), chimicamente modificato in superficie mediante superficie molto idrofilica. Il diametro medio dei pori
legame con gruppi ottilsililici e metilici (doppiamente e© circa 30 nm. E' compatibile con soluzioni acquose tra
legata). La dimensione delle particelle e© indicata dopo pH 2 e pH 8 e con solventi organici. E' adatto per la
il nome del reattivo nel saggio dove e© utilizzato. separazione di proteine con masse molecolari relative
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- di 1 103 e 3 105.
2 2

bile in acqua e in alcool. Gel di silice a scambio anionico forte per cromatografia .
Gel di silice ottilsililato per cromatografia R2 . 1077702. 1077800.
Gel di silice purissimo, molto finemente suddiviso Gel di silice molto finemente suddiviso (tra 3 mm e
(dimensione dei pori 10 nm), chimicamente modificato 10 mm), chimicamente modificato in superficie

446
 Reattivi

inoizircserP
mediante l'introduzione di gruppi ammonici quater- Il geraniolo usato in gas cromatografia soddisfa all'ulte-

ilareneG
nari. La dimensione delle particelle e© indicata dopo il riore saggio seguente:
nome del reattivo nei saggi dove e© utilizzato. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
bile in acqua ed in alcool. fia Citronella essenza (1609).

isilanA id
Il contenuto non e© inferiore al 98,5 per cento calcolato

idoteM
Limiti del pH di utilizzo: da 2 a 8.
. 1115500. con la procedura di normalizzazione.
Gel di silice trimetilsililato per cromatografia
Conservare in recipiente ermeticamente chiuso, al
Gel di silice molto finemente suddiviso (da 3 mm a riparo dalla luce.
10 mm), chimicamente modificato in superficie . C18H14N3NaO3. (Mr 375,4). 1052900.

irotinetnoC
/ ilairetaM
mediante legame con gruppi trimetilsililici. La dimen- Giallo metanile

[587-98-4]. Schultz No. 169. Colour Index No. 13065.

sione delle particelle e© indicata dopo il nome del reat- Sodio 3-[4-(fenilammino)fenilazo]benzensolfonato.
tivo nel saggio dove e© utilizzato. Polvere giallo-brunastra, solubile in acqua e in alcool,
Polvere omogenea, bianca, fine, praticamente insolu- molto poco solubile in etere.
bile in acqua e in alcool. Giallo metanile soluzione . 1052901.

ivittaeR
Gel polietere idrossilato per cromatografia . 1067000. Soluzione 1 g/l in metanolo R.
Gel con particelle di piccole dimensioni avente una Saggio di sensibilita© . A 50 ml di acido acetico
superficie idrofila dotata di gruppi ossidrilici. Ha un anidro R aggiungere 0,1 ml di giallo metanile solu-
limite di esclusione per il destrano6 di massa molecolare zione. Aggiungere 0,05 ml di acido perclorico
relativa pari a 2 105 e 2,5 10 . 0,1 M; la colorazione vira dal rosso-rosato al

itnemogrA
ilareneG
2 2
violetto.
Gelatina . 1040000. [9000-70-8]. Vedere la monografia Viraggio. Da pH 1,2 (rosso) a pH 2,3 (giallo-aran-
Gelatina (0330). cione).
Gelatina idrolizzata . 1040100. Giallo naftolo. C10H5N2NaO5. (Mr 256,2). 1136600.
Disciogliere 50 g di gelatina R in 1000 ml di acqua R. Sale monosodico dell'acido 2,4-dinitro-1-naftolo.

eifargonoM

ilareneG
Porre in autoclave con vapore saturo a 121 ‘C per Polvere o cristalli giallo-aranciati, molto solubile in
90 min e liofilizzare. acqua, poco solubile in etanolo.
Geranile acetato . C12H20O2. (Mr 196,3). 1106500. Giallo titanio . C28H19N5Na2O6S4. (Mr 696). 1090900.
[105-87-3]. (E)-3,7-Dimetilotta-2,6-dien-1-il-acetato. [1829-00-1]. Schultz No. 280. Colour Index No. 19540.

ehcituecamraF
Liquido incolore o leggermente giallo, con un debole Giallo tiazolo. Disodio 2,2'-[(1-triazen-1,3-diil)di-4,1-

emroF
odore di rosa e lavanda. fenilene]bis-[6-metilbenzotiazol-7-solfonato].
d2525 : da 0,896 a 0,913. Polvere giallo-brunastra, molto solubile in acqua e in
alcool.
n15D : circa 1,463. Giallo titanio cartina . 1090901.
p.e.25: circa 138 ‘C. Immergere strisce di carta da filtro in giallo titanio

eiretaM

emirP
Il geranile acetato usato in gas cromatografia soddisfa soluzione R e lasciarvele per alcuni minuti. Lasciare
all'ulteriore saggio seguente: essiccare a temperatura ambiente.
. 1090902.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Giallo titanio soluzione

Soluzione 0,5 g/l.

ehcituecamraF

cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-

inoizaraperP

Saggio di sensibilita© . A 0,1 ml di giallo titanio solu-

ehcificepS

fia Arancio amaro fiore essenza (1175), usando la zione aggiungere 10 ml di acqua R, 0,2 ml di solu-
sostanza in esame come soluzione in esame. L'area del zione standard di magnesio (Mg 10 ppm) R e 1,0 ml
picco principale non e© inferiore al 99,0 per cento dell'a- di sodio idrossido 1 M. E' visibile una netta colora-
rea totale dei picchi. zione rosa per confronto con una soluzione di rife-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Geraniolo . C10H18O. (Mr 154,2) 1135900. [106-24-1]. rimento preparata in una maniera simile omet-
(E)-3,7-Dimetilotta-2,6-dien-1-olo. tendo il magnesio.
Liquido oleoso, con leggero odore di rosa, pratica- Ginsenoside Rb1 . C54H92O23.3H2O. (Mr 1163). 1127500.
mente insolubile in acqua, miscibile con alcool. [41753-43-9]. (20S)-3 -di-d-Glucopiranosil-20-di-d-
b

d2020 : circa 0,890. glucopiranosilprotopanaxadiolo. (20S)-3 -[(2-O- -d-

b b

n20D : circa 1,477. Glucopiranosil- -d-glucopiranosil)ossi]-20-[(6-O- -d-

b b
ecidnI

glucopiranosil- -d-glucopiranosil)ossi]-5 -dammar-

b a

p.e.: da 229 ‘C a 230 ‘C. 24-en-12 -olo. (20S)-3 -[(2-O- -d -Glucopirano-

b b b

447
Reattivi

sil- - d -glucopiranosil)ossi]-20-[(6-O- - d -glucopi-

b b Polvere cristallina, bianca, praticamente insolubile in
ranosil- -d-glucopiranosil)ossi]-4,4,8,14-tetrametil-1-
b acqua e nella maggior parte dei comuni solventi orga-
8-nor-5 -colest-24-en-12 -olo.
a b nici, solubile in piridina.
Solido incolore, solubile in acqua, in etanolo e in meta- 20 : da + 20 a + 24, determinato su una soluzione
‰ Š
D
nolo. 5 g/l in una miscela di volumi uguali di clorofor-
‰
20 : + 11,3 determinato su una soluzione (10 g/l) in
D
Š
mio R e metanolo R.
metanolo R. Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
p.f.: circa 199 ‘C. grafia Digitale foglia (0117); il cromatogramma pre-
Acqua (2.5.12). Non piu© del 6,8 per cento. senta solo una macchia principale.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro- Glicerina . Vedere la monografia Glicerolo 85 per cento
matografia liquida (2.2.29) come prescritto nella mono- (0497).
grafia Ginseng (1523). Glicerolo . 1040500. [56-81-5].Vedere la monografia Gli-
cerolo (0496).
Soluzione in esame. Disciogliere 3,0 mg, esattamente . 1040600. Vedere la monografia
pesati, di ginsenoside Rb1 R in 10 ml di metanolo R. Glicerolo 85 per cento

Glicerolo 85 per cento (0497).

Il contenuto non e© inferiore al 95,0 per cento calcolato . C3H6O2. (Mr 74,1). 1127800. [556-52-5].
mediante la procedura di normalizzazione. Glicidolo

. C42H72O14.2H2O. (Mr 837). 1127700. Liquido leggermente viscoso, miscibile con acqua.
d420 : circa 1,115.
Ginsenoside Rf

[52286-58-5]. (20S)-6-O-[ -d-Glucopiranosil-(1 2)- -

b ! b

d -glicopiranoside]-dammar-24-ene-3 ,6 ,12 ,20-tetrolo.

b a b n20D : circa 1,432.
Solido incolore, solubile in acqua, in etanolo e in meta- Glicina . 1040700. [56-40-6]. Glicocolla.Vedere la mono-
nolo. grafia Glicina (0614).
20 : + 12,8 determinato su una soluzione (10 g/l) in
D Glicole etilenico . C2H6O2. (Mr 62,1). 1036100. [107-21-1].
Etan-1,2-diolo. Etilenglicole.
‰ Š

metanolo R.
p.f.: circa 198 ‘C. Liquido leggermente viscoso, incolore, igroscopico,
. C42H72O14.2H2O. (Mr 837). 1127600. miscibile con acqua e con alcool, poco solubile in etere.
d2020 : da 1,113 a 1,115.
Ginsenoside Rg1

[22427-39-0]. (20S)-6 -d-Glucopiranosil-d-glucopira-

b

nosilprotopanaxatriolo. (20S)-6 ,20-Bis( -d-glucopira-

a b n20D : circa 1,432.
nosilossi)-5 -dammar-24-ene-3 ,12 -diolo.
a b b (20S)- p.e.: circa 198 ‘C.
6 ,20-Bis( -d-glucopiranosilossi)-4,4,8,14-tetrametil-1-
a b
p.f.: circa ^12 ‘C.
8-nor-5 -colest-24-ene-3 ,12 -diolo.
a b b
Acidita© . A 10 ml aggiungere 20 ml di acqua R e 1 ml di
Solido incolore, solubile in acqua, in etanolo e in meta- fenolftaleina soluzione R. Non sono necessari piu© di
nolo. 0,15 ml di sodio idrossido 0,02 M per far virare la colora-
20 : + 31,2 determinato su una soluzione (10 g/l) in
‰
D
Š zione al rosa.
metanolo R. Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,2 per cento.
p.f.: da 188 ‘C a 191 ‘C. Glicole etilenico monoetiletere . C4H10O2. (Mr 90,1).
Acqua (2.5.12). Non piu© del 4,8 per cento. 1036200. [110-80-5]. Cellosolve. 2-Etossietanolo.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro- Liquido incolore, limpido, miscibile con acqua, con
matografia liquida (2.2.29) come prescritto nella mono- acetone, con alcool e con etere.
grafia Ginseng (1523). d2020 : circa 0,93.
Soluzione in esame. Disciogliere 3,0 mg, esattamente n20D : circa 1,406.
pesati, di ginsenoside Rg1 R in 10 ml di metanolo R. p.e.: circa 135 ‘C.
Il contenuto non e© inferiore al 95,0 per cento calcolato . C3H8O2. (Mr 76,1).
mediante la procedura di normalizzazione. Glicole etilenico monometiletere

1036300. [109-86-4]. 2-Metossietanolo. Metossietanolo.

Gitossina . C41H64O14. (Mr 781). 1040200. [4562-36-1]. Liquido incolore, limpido, miscibile con acqua, con
Glicoside di Digitalis purpurea L. 3 -(O-2,6-Dide- b
acetone, con alcool e con etere.
sossi- - d -ribo-esopiranosil-(1 4)-O-2,6-didesossi-
b !
d2020 : circa 0,97.
-d -ribo-esopiranosil-(14)-2,6-didesossi- - d -ribo-
n20D : circa 1,403.
b b

esopiranosilossi)-14,16 -diidrossi-5 ,14 -card-

b b b

20(22)-enolide. p.e.: circa 125 ‘C.

448
 Reattivi

inoizircserP
. 1072900. [57-55-6]. Vedere la mono- Resina ottenuta dal cuore del legno di Guaiacum offici-

ilareneG
Glicole propilenico

grafia Glicole propilenico (0430). nale L. e Guaiacum sanctum L.

Glicole tiodietilenico . C4H10O2S. (Mr 122,2). 1122900. Frammenti vetrosi duri, bruno-rossastri o bruno-verda-
[111-48-8]. Di(2-idrossietil) solfuro. stri; fratture lucenti.
Liquido viscoso incolore o giallo. Contiene almeno il . C15H18. (Mr 198,3). 1041500. [489-84-9].

isilanA id
Guaiazulene

99,0 per cento di C4H10O2S. 1,4-Dimetil-7-isopropilazulene.

idoteM
d2020 : circa 1,18. Cristalli blu scuri o liquido blu, molto poco solubili in
. 1098400. [107-22-2]. acqua, miscibili con oli grassi ed essenziali e con paraf-
fina liquida, moderatamente solubili in alcool, solubili
Gliossale soluzione

Contiene circa il 40 per cento m/m di gliossale. in acido solforico (500 g/l) e in acido fosforico all'80

irotinetnoC
/ ilairetaM
Determinazione quantitativa. In una beuta con tappo a per cento m/m, dando luogo ad una soluzione incolore.
smeriglio porre 1,000 g di gliossale soluzione, 20 ml di p.f.: circa 30 ‘C.
una soluzione (70 g/l) di idrossilammina cloridrato R e
50 ml di acqua R. Lasciare a riposo per 30 min e Conservare al riparo dalla luce e dall'aria.
aggiungere 1 ml di rosso metile indicatore misto R e tito- Guanidina cloridrato . CH5N3HCl. (Mr 95,5). 1098500.
lare con sodio idrossido 1 M fino al viraggio della colo- [50-01-1].

ivittaeR
razione dal rosso al verde. Effettuare una titolazione in Polvere cristallina, molto solubile in acqua e in alcool.
bianco. . C5H5N5O. (Mr 151,1). 1041600. [73-40-5].
1 ml di sodio idrossido 1 M equivale a 29,02 mg di glios-
Guanina

2-Ammino-1,7-diidro-6H-purin-6-one.
sale (C2H2O2). Polvere bianca, amorfa, praticamente insolubile in

itnemogrA
ilareneG
Gliossalidrossianile . C14H12N2O2. (Mr 240,3). 1041000. acqua, poco solubile in alcool. E' solubile in ammo-
[1149-16-2]. Gliossale bis(2-idrossianile). niaca e nelle soluzioni diluite di idrossidi alcalini.
Cristalli bianchi, solubili in alcool caldo. Ialuronidasi diluente . Vedere diluente per ialuronidasi R.
p.f.: circa 200 ‘C. . C21H21NO6. (Mr 383,4). Alcaloide princi-

eifargonoM
b-Idrastina

. C6H14ClNO5. (Mr 215,6). pale dell'Hydrastis canadensis L.

ilareneG
Glucosammina cloridrato

1040300. [66-84-2]. d-Glucosammina cloridrato. Prismi ortorombici, incolori; insolubile in acqua, poco
Cristalli, solubili in acqua, praticamente insolubili in solubile in alcool e in etere, molto solubile in clorofor-
etere. mio.

ehcituecamraF
20 : + 100, diminuisce fino a + 47,5 dopo 30 min, 20 : ^ 50 determinato su una soluzione (3 g/l) in eta-
‰ Š
D ‰
D
Š

determinato su una soluzione 100 g/l in acqua R. nolo.

emroF
Glucosio . 1025700. [50-99-7].Vedere la monografia Glu- p.f.: circa 132 ‘C.
cosio anidro (0177). Idrazina . H4N2. (Mr 32,05). 1136300. [302-01-2]. Dia-
Gomma adragante . 1092300. [9000-65-1]. Vedere la zano.
monografia Gomma adragante (0532). Liquido leggermente oleoso, incolore con un forte
eiretaM

emirP
Gomma arabica . 1000100. Vedere la monografia odore di ammoniaca, miscibile con acqua. In commer-
Gomma arabica (0307). cio sono reperibili soluzioni diluite in acqua.
Gomma arabica soluzione . 1000101. Attenzione: tossica e corrosiva. ehcituecamraF

Disciogliere 100 g di gomma arabica R in 1000 ml di n20D : circa 1,470.

inoizaraperP

ehcificepS

acqua R. Agitare con un agitatore meccanico per p.e.: circa 113 ‘C.
2 h. Centrifugare a circa 2000 g per 30 min fino ad p.f.: circa 1,5 ‘C.
ottenere una soluzione limpida.
Conservare in recipienti di polietilene da circa 250 Idrazina solfato . H6N2O4S. (Mr 130,1). 1043400.
[10034-93-2]. Idrazinio solfato.
ehcitapoemO

ml tra 0 ‘C e 20 ‘C.
inoizaraperP

Cristalli incolori, moderatamente solubili in acqua

Gomma metilsilicone . Vedere poli(dimetil)silossano R. fredda, solubili in acqua calda (50 ‘C) e molto solubili
Gonadotropina corionica . 1041100. [9002-61-3]. Vedere in acqua bollente, praticamente insolubili in alcool.
la monografia Gonadotropina corionica (0498). Arsenico (2.4.2). 1,0 g soddisfa al saggio limite A per
Gonadotropina sierica . 1041200. Vedere la monografia l'arsenico (1 ppm).
Gonadotropina sierica equina per uso veterinario (0719).
ecidnI

Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,1 per

Guaiaco resina . 1041400. cento.

449
Reattivi

Idrocarburi a bassa tensione di vapore (tipo L) . 1049400. Idrossilammina soluzione alcalina R1 . 1044303.
Massa untuosa, solubile in benzene e in toluene. Soluzione A. Disciogliere 12,5 g di idrossilammina
. C6H6O2. (Mr 110,1). 1044100. [123-31-9]. cloridrato R in metanolo R e diluire a 100 ml con lo
Idrochinone

1,4-Benzendiolo. stesso solvente.

Aghi bianchi o incolori, fini, che imbruniscono per Soluzione B. Disciogliere 12,5 g di sodio idrossido R
esposizione alla luce e all'aria, solubili in acqua, in in metanolo R e diluire a 100 ml con lo stesso sol-
alcool e in etere. vente.
Mescolare volumi uguali di soluzione A e di solu-
p.f.: circa 173 ‘C. zione B immediatamente prima dell'uso.
Conservare al riparo dalla luce e dall'aria. Idrossilammina soluzione alcoolica . 1044301.
Idrocortisone acetato . 1098800. [50-03-3]. Vedere la Disciogliere 3,5 g di idrossilammina cloridrato R in
monografia Idrocortisone acetato (0334). 95 ml di alcool al 60 per cento V/V R, aggiungere
. H2. (Mr 2,016). 1043700. 0,5 ml di una soluzione (2 g/l) di metilarancio R in
Idrogeno per cromatografia

[1333-74-0]. alcool al 60 per cento V/V R e potassio idrossido

0,5 M in alcool al 60 per cento V/V R in quantita©
Contiene non meno del 99,95 per cento V/V di H2. sufficiente a dare una netta colorazione gialla.
Idrogeno perossido soluzione concentrata . 1043900. Diluire a 100 ml con alcool al 60 per cento V/V R.
[7722-84-1]. Vedere la monografia Idrogeno perossido . C6H6O3. (Mr 126,1). 1044400.
soluzione 30 per cento (0396). Idrossimetilfurfurale

[67-47-0]. 5-Idrossimetilfurfurale.
Idrogeno perossido soluzione diluita .1043800. [7722-84-1]. Cristalli aghiformi, molto solubili in acqua, in acetone
Vedere la monografia Idrogeno perossido soluzione 3 per e in alcool, solubili in etere.
cento (0395). p.f.: circa 32 ‘C.
Idrogeno solfuro . Vedere acido solfidrico R. Idrossipropil-b-ciclodestrina . [C6H10-xO5.(C3H7O)x]7
Vedere acido solfidrico solu- dove x corrisponde al grado di sostituzione molecolare
(Mr 1371-1432, in funzione del grado di sostituzione
Idrogeno solfuro soluzione.

zione R.
. Vedere acido solfidrico R1. molare). 1128600. [94035-02-6].
Idrogeno solfuro R1
Polvere da bianca a quasi bianca.
Idrossichinolina . C9H7NO. (Mr 145,2). 1044600. pH (2.2.3): 5,0-7,5 (soluzione 20 g/l).
[148-24-3]. 8-Chinolinolo. 8-Idrossichinolina. Idrossitoluene butilato . 1013800. [128-37-0].Vedere buti-
Polvere cristallina, bianca o leggermente giallastra, lidrossitoluene R.
poco solubile in acqua, molto solubile in acetone, in 5-Idrossiuracile . C4H4N2O3. (Mr 128,1). 1044700.
alcool e negli acidi minerali diluiti. [496-76-4]. Acido isobarbiturico. Pirimidin-2,4,5-triolo.
p.f.: circa 75 ‘C. Polvere cristallina, bianca.
Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,05 per p.f.: circa 310 ‘C, con decomposizione.
cento. Cromatografia. Esaminato come prescritto nella mono-
. NH4ClO. (Mr 69,5). grafia Fluorouracile (0611), il cromatogramma pre-
Idrossilammina cloridrato

1044300. [5470-11-1]. Idrossilammonio cloruro. senta una macchia principale con un Rf di circa 0,3.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
Polvere cristallina, bianca, solubilissima in acqua, solu- . C3H4N2. (Mr 68,1). 1045400. [288-32-4].
bile in alcool. Imidazolo

Polvere cristallina, bianca, solubile in acqua e in alcool.

Idrossilammina cloridrato soluzione R2 . 1044304. p.f.: circa 90 ‘C.
Disciogliere 2,5 g di idrossilammina cloridrato R in .C14H13N.(Mr 195,3).1045500.[494-19-9].
4,5 ml di acqua R calda e aggiungere 40 ml di alcool R
Imminodibenzile

10,11-Diidrodibenz[b,f]azepina.
e 0,4 ml di blu bromofenolo soluzione R2. Aggiun- Polvere cristallina, gialla pallida, praticamente insolu-
gere potassio idrossido soluzione alcoolica 0,5 M. bile in acqua, molto solubile in acetone.
fino al viraggio ad una colorazione giallo-verda- p.f.: circa 106 ‘C.
stra. Diluire a 50,0 ml con alcool R. . C8H7N. (Mr 117,1).
. 1044302.
Indolo
Idrossilammina soluzione alcalina
Scagliette lucide, di intenso odore fecale, gradevole in
Immediatamente prima dell'uso, mescolare volumi soluzione molto diluita; poco solubile in acqua calda,
uguali di una soluzione (139 g/l) di idrossilammina solubile in alcool, molto solubile in etere; volatile in
cloridrato R e di una soluzione (150 g/l) di sodio corrente di vapore.
idrossido R. p.f.: circa 52 ‘C.

450
 Reattivi

inoizircserP
. 1101500. [53-86-1]. Vedere la monografia . C2H5I. (Mr 155,9). 1099100. 75-03-6.

ilareneG
Indometacina Iodoetano

Indometacina (0092). Liquido incolore o leggermente giallo, che scurisce

Iodio . 1045800. [7553-56-2]. Vedere la monografia Iodio all'aria e alla luce, miscibile in alcool e nella maggior
(0031). parte dei solventi organici.
. 1045801. d2020 : circa 1,95.

isilanA id
Iodio soluzione R1

idoteM
A 10,0 ml di iodio 0,05 M aggiungere 0,6 g di potas- n20D : circa 1,513.
sio ioduro R e diluire a 100,0 ml con acqua R. Pre- p.e.: circa 72 ‘C.
parare immediatamente prima dell'uso. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
Iodio soluzione R2 . 1045802. Iodoplatinato reattivo . Vedere iodoplatinico reattivo R.

irotinetnoC
A 10,0 ml di iodio 0,05 M aggiungere 0,6 g di potas-

/ ilairetaM
. 1046300. Acido iodoplatinico
sio ioduro R e diluire a 1000,0 ml con acqua R. Pre-
Iodoplatinico reattivo

soluzione.
parare immediatamente prima dell'uso. A 3 ml di una soluzione (100 g/l) di acido cloroplatinico R
Iodio soluzione R3 . 1045803. aggiungere 97 ml di acqua R e 100 ml di una soluzione
Diluire 2,0 ml di iodio soluzione R1 a 100,0 ml con (60 g/l) di potassio ioduro R.
acqua R. Preparare immediatamente prima del- Conservare al riparo dalla luce.

ivittaeR
l'uso. . 1046400.
. 1045806.
Iodosolforoso reattivo
Iodio soluzione R4
L'apparecchio, che deve essere mantenuto chiuso e
Disciogliere 14 g di iodio R in 100 ml di una solu- asciutto durante la preparazione, e© costituito da un
zione (400 g/l) di potassio ioduro R, aggiungere recipiente a fondo tondo da 3000-4000 ml, provvisto di

itnemogrA
1 ml di acido cloridrico diluito R e diluire a 1000 ml

ilareneG
con acqua R. tubolature per un agitatore e un termometro, e di un
tubo per l'essiccamento. A 700 ml di piridina anidra R
Conservare al riparo dalla luce. e 700 ml di glicole etilenico monometiletere R aggiun-
Iodio soluzione alcoolica . 1045804. gere, agitando costantemente, 220 g di iodio R fine-
Soluzione 10 g/l in alcool R. mente polverizzato, precedentemente essiccato su ani-

eifargonoM
dride fosforica R. Continuare ad agitare fino a dissolu-

ilareneG
Conservare al riparo dalla luce.
. 1045805. zione completa dello iodio (30 min circa). Raffreddare
Iodio soluzione cloroformica

Soluzione 5 g/l in cloroformio R. a 10 ‘C ed aggiungere rapidamente, continuando ad

agitare, 190 g di anidride solforosa R. Non lasciare che
Conservare al riparo dalla luce. la temperatura superi 30 ‘C. Raffreddare.

ehcituecamraF
. IBr. (Mr 206,8). 1045900. [7789-33-5]. Determinazione del titolo. Porre 20 ml circa di metanolo

emroF
Iodio bromuro

Cristalli nero-bluastri o nero-brunastri, molto solubili anidro R in una beuta da titolazione e titolare al punto
in acqua, in alcool, in etere e in acido acetico glaciale. di equivalenza con lo iodosolforoso reattivo (determi-
p.e.: circa 116 ‘C. nazione dell'acqua, 2.5.12). Introdurre in modo appro-
p.f.: circa 40 ‘C. priato una idonea quantita© di acqua R, accuratamente
pesata e ripetere la determinazione dell'acqua. Calco-
eiretaM

emirP
Conservare al riparo dalla luce, in un luogo fresco. lare l'equivalente dell'acqua in milligrammi per millili-
Iodio bromuro soluzione . 1045901. tro di iodosolforoso reattivo.
Disciogliere 20 g di iodio bromuro R in acido L'equivalente minimo dell'acqua e© 3,5 mg di acqua per
acetico glaciale R e diluire a 1000 ml con lo stesso millilitro di reattivo.
ehcituecamraF
inoizaraperP

solvente.
ehcificepS

Lavorare al riparo dall'umidita© . Determinare il titolo

Conservare al riparo dalla luce. immediatamente prima dell'uso.
Iodio-iodurata soluzione . Vedere potassio ioduro e iodio Conservare in un recipiente asciutto.
soluzione R. 5-Iodouracile . C4H3IN2O2. (Mr 238,0). 1046500.
[696-07-1]. 5-Iodo-1H,3H-pirimidin-2,4-dione.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Iodobismutico reattivo . Reattivo di Dragendorf. Vedere

potassio iodobismutato soluzione R. p.f.: circa 276 ‘C, con decomposizione.
Iodobismutico reattivo R1 . Vedere potassio iodo- Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
bismutato soluzione R1. grafia Idoxuridina (0669), deponendo 5 ml di una solu-
Iodobismutico reattivo R2 . Vedere potassio iodo- zione 0,25 g/l. Il cromatogramma ottenuto presenta
bismutato soluzione R2. solo una macchia principale.
ecidnI

Iodobismutico reattivo diluito .Vedere potassio iodo- Iosciamina solfato . 1044900. [620-61-1].Vedere la mono-
bismutato soluzione diluita R. grafia Iosciamina solfato (0501).

451
Reattivi

Ioscina . 1044800. [6533-68-2]. Vedere la

bromidrato D A (2.2.41): 14,24 103, determinato a 304 nm su una
2

monografia Scopolamina bromidrato (0106). soluzione 1,25 g/l.

Iperoside . C21H20O12. (Mr 464,4). 1045000. Isobutilmetilchetone . C6H12O. (Mr 100,2). 1054300.
2-(3,4-Diidrossifenil)-3- - d-galattopiranosilossi-5,7-
b [108-10-1]. 4-Metil-2-pentanone. Isopropilacetone.
diidrossicromen-4-one. Metilisobutilchetone.
Aghi giallo pallido, solubili in metanolo. Liquido incolore, limpido, poco solubile in acqua,
‰
20 : 8,3, determinato su una soluzione 2 g/l in
DŠ ÿ miscibile con la maggior parte dei solventi organici.
piridina R. d2020 : circa 0,80.
p.f.: circa 240 ‘C, con decomposizione. p.e.: circa 115 ‘C.
Una soluzione in metanolo R presenta due massimi di Intervallo di distillazione (2.2.11). Distillare 100 ml. L'in-
assorbimento (2.2.25), a 259 nm e a 364 nm. tervallo della temperatura di distillazione da 1 ml a
Ipofosforoso reattivo . 1045200. 95 ml di distillato non e© superiore a 4,0 ‘C.
Disciogliere con l'aiuto di un leggero riscaldamento, Residuo all'evaporazione. Non superiore allo 0,01 per
10 g di sodio ipofosfito R in 20 ml di acqua R e diluire a cento, determinato per evaporazione a b.m. ed essicca-
100 ml con acido cloridrico R. Lasciare depositare e mento a 100-105 ‘C.
decantare o filtrare su lana di vetro.
Ipoxantina . C5H4N4O. (Mr 136,1). 1045300. [68-94-0]. Isobutilmetilchetone R1 . 1054301.
1H-Purin-6-one. Agitare 50 ml di isobutilmetilchetone R distillato di
Polvere cristallina, bianca, molto poco solubile in recente con 0,5 ml di acido cloridrico R1 per 1 min.
acqua, moderatamente solubile in acqua bollente, solu- Lasciare separare le fasi e scartare la fase inferiore.
bile negli acidi diluiti e nelle soluzioni diluite di idros- Preparare immediatamente prima dell'uso.
sidi alcalini, si decompone senza fusione a circa . C12H8Cl6. (Mr 364,9). 1128700. [465-73-6].
150 ‘C.
Isodrin

1,2,3,4,10,10-Esacloro-1,4,4a,5,8,8a-esaidro-endo,endo-
Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono- 1,4:5,8-dimetanonaftalene.
grafia Mercaptopurina (0096); il cromatogramma pre- Praticamente insolubile in acqua, solubile nei comuni
senta solo una macchia principale. solventi organici come l'acetone.
Isatina . C8H5NO2. (Mr 147,1). 1046800. [91-56-5]. Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
2,3-Indolindione. riferimento.
Cristalli rosso-giallastri, piccoli, poco solubili in acqua, . C10H20O. (Mr 156,3). 1047000. [23283-97-8].
solubili in acqua calda, in alcool e in etere, solubili nelle
Isomentolo

(+)-Isomentolo: (1S,2R,5R)-2-Isopropil-5-metilcicloesa-
soluzioni di idrossidi alcalini dando una colorazione nolo. ( )-Isomentolo: Miscela di parti uguali di
violetta che diventa gialla lasciando a riposo.
6

(1S,2R,5R)- e (1R,2S,5S)-2-Isopropil-5-metilcicloesa-
p.f.: circa 200 ‘C, con parziale sublimazione. nolo.
Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,2 per Cristalli incolori, praticamente insolubili in acqua,
cento. solubilissimi in alcool e in etere.
. 1046801.
Isatina reattivo ‰ Š
20 : (+)-Isomentolo: circa + 24, determinato su una
D
Disciogliere 6 mg di ferro(-ico) solfato R in 8 ml di soluzione 100 g/l in alcool R.
acqua R e aggiungere cautamente 50 ml di acido p.e.: (+)-Isomentolo: circa 218 ‘C. ( )-Isomentolo: circa
6

solforico R. Aggiungere 6 mg di isatina R e agitare 218 ‘C.

fino a dissoluzione. p.f.: (+)-Isomentolo: circa 80 ‘C. ( )-Isomentolo: circa
6

Il reattivo deve essere giallo pallido, e comunque 53 ‘C.

non arancione o rosso. (+)-Isomentone . C10H18O. (Mr 154,2). 1047100. (1R)-cis-
. C19H30O2. (Mr 290,4). 1107100. p-Mentan-3-one. (1R)-cis-2-Isopropil-5-metilcicloesa-
Isoandrosterone

[481-29-8]. Epiandrosterone. 3 -Idrossi-5 -androstan- none.

Contiene quantita© variabili di mentone.
b a

17-one.
Polvere bianca, praticamente insolubile in acqua, solu- Liquido incolore, molto poco solubile in acqua, solu-
bile in solventi organici. bile in alcool e in etere.
‰
20 : + 88, determinato su una soluzione (20 g/l) in
DŠ d2020 : circa 0,904.
metanolo R. n20D : circa 1,453.
p.f.: da 172 ‘C a 174 ‘C. 20 : circa + 93,2.
‰ Š
D

452
 Reattivi

inoizircserP
L'isomentone utilizzato in gas cromatografia soddisfa . C6H10ClN3O2.H2O. (Mr 209,6).

ilareneG
Istidina monocloridrato

all'ulteriore saggio seguente: 1043000. [123333-71-1]. Acido (RS)-2-ammino-3-(imida-

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas zol-4-il)propionico cloridrato monoidrato.
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- Cristalli incolori o polvere cristallina, solubili in acqua.
fia Menta essenza (0405) usando la sostanza in esame p.f.: circa 250 ‘C, con decomposizione.

isilanA id
come soluzione in esame.

idoteM
L'area del picco principale non e© inferiore all'80,0 per Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
cento dell'area totale dei picchi. grafia Istamina dicloridrato (0143); il cromatogramma
presenta solo una macchia principale.
Isopropanolo . Vedere 2-propanolo R. . 1047600.
. C3H9N. (Mr 59,1). 1119800. [75-31-0].
Kieselguhr G

irotinetnoC
/ ilairetaM
Isopropilammina

2-Propanammina. E' costituito da kieselguhr trattato con acido cloridrico

e calcinato, al quale si aggiunge il 15 per cento circa di
Liquido incolore, altamente volatile, infiammabile. calcio solfato emiidrato.
n20D : circa 1,374. Polvere fine bianca-grigiastra; la colorazione grigia
p.e.: da 32 ‘C a 34 ‘C. diventa piu© pronunciata triturando con acqua. La
dimensione particellare media e© compresa tra 10 m e

ivittaeR
. 1047200. [110-27-0]. Vedere la m
40 m.
Isopropile miristato

monografia Isopropile miristato (0725). m

. C9H12O. (Mr 136,2). 1047300. Contenuto di calcio solfato. Determinare mediante il

metodo prescritto per il gel di silice G R.
4-Isopropilfenolo

[99-89-8].
Contiene non meno del 98 per cento di C9H12O. pH (2.2.3). Agitare 1 g con 10 ml di acqua esente da ani-

itnemogrA
ilareneG
p.e.: circa 212 ‘C. dride carbonica R per 5 min. Il pH della sospensione e©
p.f.: da 59 ‘C a 61 ‘C. compreso tra 7 e 8.
. C10H18O. (Mr 154,2). 1139600. [89-79-2]. Separazione cromatografica. Esaminare mediante cro-
Isopulegolo

(^)-Isopulegolo. (1R,2S,5R)-2-Isopropenil-5-metilci- matografia su strato sottile (2.2.27). Preparare le lastre

eifargonoM
usando un impasto di kieselguhr G con una soluzione

ilareneG
cloesanolo. (2,7 g/l) di sodio acetato R. Deporre 5 l di una solu-
m
d420 : circa 0,911. zione contenente 0,1 g/l rispettivamente di lattosio, sac-
n20D : circa 1,472. carosio, glucosio e fruttosio in piridina R. Eluire per un
p.e.: circa 91 ‘C. percorso di 14 cm usando una miscela di 12 volumi di

ehcituecamraF
L'isopulegolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa acqua R, 23 volumi di 2-propanolo R e 65 volumi di etile
acetato R. Il tempo di migrazione del solvente e© di

emroF
all'ulteriore saggio seguente: 40 min circa. Essiccare, spruzzare sulla lastra 10 ml
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas circa di aldeide anisica soluzione R e scaldare per 5-10
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- min a 100-105 ‘C. Il cromatogramma presenta quattro
fia Menta essenza, parzialmente dementolizzata (1838). macchie ben definite senza code e ben separate l'una

eiretaM
Il contenuto non e© inferiore al 99 per cento, calcolato dall'altra.

emirP
mediante la procedura di normalizzazione. Kieselguhr per cromatografia . 1047500.
Isoquercitroside . C21H20O12. (Mr 464,4). 1136500. Polvere fine, bianca o bianco-giallastra, praticamente
[21637-25-2]. Isoquercitrina. 2-(3,4-Diidrofenil)-3- insolubile in acqua, negli acidi diluiti e nei solventi
ehcituecamraF

( -d-glucofuranosilossi)-5,7-didrossi-4H-1-benzopiran-
inoizaraperP

organici.
ehcificepS

4-one. 3,3',4',5,7-Pentaidrossiflavone-3-glucoside. Velocita© di filtrazione. Usare un colonna cromatogra-

Istamina dicloridrato. 1042800. [56-92-8]. Vedere la fica lunga 0,25 m con diametro interno di 10 mm e una
monografia Istamina dicloridrato (0143). lastra di vetro sinterizzato (100) sulla quale vi siano
. 1042900. [23297-93-0]. Istamina due marcature a 0,10 m e a 0,20 m. Porre in colonna
ehcitapoemO
inoizaraperP

Istamina fosfato

fosfato acido. Vedere la monografia Istamina fosfato una quantita© di sostanza in esame sufficiente a raggiun-
(0144). gere la prima marcatura e riempire fino alla seconda
Istamina soluzione . 1042901. marcatura con acqua R. Quando le prime gocce ini-
Soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R contenente ziano a fluire dalla colonna, riempire nuovamente fino
0,1 g per millilitro di istamina base (sotto forma alla seconda marcatura con acqua R e misurare il
l

di fosfato o dicloridrato). tempo necessario affinchë i primi 5 ml fluiscano attra-

ecidnI

verso la colonna. La velocita© di scorrimento non e© infe-

l-Istidina .Vedere la monografia Istidina (0911). riore ad 1 ml per minuto.

453
Reattivi

Aspetto dell'eluato. L'eluato ottenuto nel saggio per la Separazione cromatografica. Deporre sulla lastra un
velocita© di filtrazione e© incolore (Metodo I, 2.2.2). appropriato volume (10 ml per una lastra normale per
Acidita© o alcalinita© . A1,00 g aggiungere10 ml di acqua R, cromatografia su strato sottile e da 1 ml a 2 ml per una
agitare vigorosamente e lasciare a riposo per 5 min. lastra con dimensione fine delle particelle) di soluzione
Filtrare la sospensione su un filtro precedentemente per il saggio di risoluzione della cromatografia su strato
lavato con acqua R calda fino a che i lavaggi siano neutri. sottile R. Eluire per un percorso pari a due terzi dell'al-
A 2,0 ml del filtrato aggiungere 0,05 ml di rosso metile tezza della lastra, usando una miscela di 20 volumi di
soluzione R; la soluzione e© gialla. A 2,0 ml del filtrato metanolo R e 80 volumi di toluene R. La lastra e© soddi-
aggiungere 0,05 ml di fenolftaleina soluzione R1; la solu- sfacente se il cromatogramma presenta quattro mac-
zione e© al massimo leggermente rosata. chie nettamente separate, la macchia del verde bromo-
Sostanze solubili in acqua. Porre 10,0 g in una colonna cresolo con un Rf minore di 0,15, la macchia del metil-
cromatografica lunga 0,25 m e con diametro interno di arancio con un Rf che rientra nell'intervallo tra 0,1 e
10 mm e eluire con acqua R. Raccogliere i primi 20 ml 0,25, la macchia del rosso metile con un Rf che rientra
dell'eluato, evaporare a secco e essiccare il residuo a nell'intervallo tra 0,35 e 0,55 e la macchia del rosso
100-105 ‘C. Il residuo pesa non piu© di 10 mg. Sudan G con un Rf che rientra nell'intervallo tra 0,75 e
Ferro (2.4.9). A 0,50 g aggiungere 10 ml di una miscela 0,98.
di volumi uguali di acido cloridrico R1 e acqua R, agi-
tare vigorosamente, lasciare a riposo per 5 min e fil-
Lastra di gel di silice F 254 per cromatografia su strato

trare. 1,0 ml del filtrato soddisfa al saggio limite per il

sottile. 1116800.
ferro (200 ppm). Soddisfa ai requisiti definiti per la lastra di gel di silice
Perdita alla calcinazione. Non superiore allo 0,5 per per cromatografia su strato sottile R con le seguenti
cento. Durante il riscaldamento al rosso (600 ‘C) la modifiche:
sostanza non imbrunisce në annerisce.
. 1114001. Contiene un indicatore di fluorescenza avente un'assor-
banza massima a 254 nm.
Lantanio cloruro soluzione

A 58,65 g di lantanio triossido R aggiungere lentamente

100 ml di acido cloridrico R. Scaldare a ebollizione. Attenuazione della fluorescenza. Deporre separatamente
Lasciar raffreddare e diluire a 1000,0 ml con acqua R. sulla lastra, in cinque punti, aumentando i volumi (da
Lantanio nitrato . La(NO3)3.6H2O. (Mr 433,0). 1048000. 1 l a 10 l per lastre normali per cromatografia su
[10277-43-7]. Lantanio trinitrato esaidrato.
m m
strato sottile e da 0,2 l a 2 l per lastre con dimensione
m m
Cristalli incolori, deliquescenti, molto solubili in acqua. fine delle particelle) di una soluzione (1 g/l) di acido
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. benzoico R in una miscela di 15 volumi di etanolo R e
. 1048001. 85 volumi di cicloesano R. Eluire per un percorso pari
Lantanio nitrato soluzione

Soluzione 50 g/l. a meta© dell'altezza della lastra con la stessa miscela di

solventi. Dopo l'evaporazione dei solventi esaminare il
Lantanio triossido . La2O3. (Mr 325,8). 1114000. cromatogramma alla luce ultravioletta a 254 nm. Per le
[1312-81-8]. lastre normali per cromatografia su strato sottile l'acido
Polvere amorfa quasi bianca, praticamente insolubile in benzoico appare come macchie scure su uno sfondo
acqua R. Si scioglie nelle soluzioni diluite di acidi mine- fluorescente approssimativamente nel centro del cro-
rali e assorbe anidride carbonica atmosferica. matogramma per quantita© uguali o superiori a 2 g. l

Calcio. Non piu© di 5 ppm. Per lastra con dimensione fine delle particelle l'acido
. benzoico appare come macchie scure su uno sfondo
fluorescente approssimativamente nel centro del cro-
Lastra di gel di silice per cromatografia su strato sottile

1116700.
Supporto di vetro, di metallo o di plastica, ricoperto matogramma per quantita© uguali o superiori a 0,2 g. l

con uno strato di gel di silice di spessore e dimensione

delle particelle adatti (generalmente da 2 mm a 10 mm Lastra di gel di silice F 254 silanizzato per cromatografia

. 1117200.
per lastre con dimensione fine delle particelle (Croma- su strato sottile

tografia su strato sottile ad alta risoluzione, HPTLC) e Soddisfa ai requisiti prescritti per lastra di gel di silice
da 5 mm a 40 mm per lastre normali per cromatografia silanizzato per cromatografia su strato sottile R con la
su strato sottile). Se necessario, la dimensione delle par- seguente modifica:
ticelle e© indicata dopo il nome del reattivo nel saggio
dove e© usata. Contiene un indicatore di fluorescenza avente un'assor-
La lastra puo© contenere un legante organico. banza massima a 254 nm.

454
 Reattivi

inoizircserP
della soluzione di diclorometano in ciascuno di tre punti

ilareneG
Lastra di gel di silice G per cromatografia su strato

. 1116900.
sottile separati. Eluire per un percorso pari a due terzi dell'al-
Soddisfa ai requisiti prescritti per la lastra di gel di silice tezza della lastra con una miscela di 10 volumi di acido
per cromatografia su strato sottile R con le seguenti acetico glaciale R, 25 volumi di acqua R e 65 volumi di
modifiche: diossano R. Essiccare la lastra a 120 ‘C per 30 min.
Lasciar raffreddare, spruzzare con una soluzione

isilanA id
Contiene calcio solfato emiidrato come legante.

idoteM
(35 g/l) di acido fosfomolibdico R in 2-propanolo R e scal-
Lastra di gel di silice GF 254 per cromatografia su strato

. 1117000. dare a 150 ‘C fino a che le macchie diventano visibili.

sottile
Trattare la lastra con vapori di ammoniaca fino a che lo
Soddisfa ai requisiti prescritti per la lastra di gel di silice sfondo diventa bianco. Il cromatogramma mostra quat-
per cromatografia su strato sottile R con le seguenti tro macchie nettamente separate e ben definite.

irotinetnoC
/ ilairetaM
modifiche:
Contiene calcio solfato emiidrato come legante e un Lastra di gel di silice F 254 silanizzato per cromatografia

. 1117200.
indicatore fluorescente avente un'assorbanza massima su strato sottile

a 254 nm. Soddisfa ai requisiti prescritti per la lastra di gel di silice

Attenuazione della fluorescenza. Soddisfa al saggio pre- silanizzato
seguenti
per cromatografia su strato sottile R con le
modifiche:

ivittaeR
scritto per la lastra di gel di silice F254 per cromatografia
su strato sottile R. Contiene un indicatore di fluorescenza avente un'assor-
Lastra di gel di silice ottadecilsililato per separazioni
banza massima a 254 nm.
chirali per cromatografia su strato sottile . 1137700. Lattico reattivo. 1047801.

itnemogrA
Supporto di vetro, metallo o plastica, ricoperto con uno Soluzione A. A 60 ml di acido lattico R aggiungere 45 ml

ilareneG
strato di2+gel di silice ottadecilsililato impregnato con di acido lattico R previamente filtrato saturato senza
ioni Cu ed idrossiprolina enantiomericamente pura. riscaldamento con rosso Sudan G R; e© sempre necessa-
La lastra puo© contenere un legame organico. rio un eccesso di colorante poichë l'acido lattico satura
lentamente senza riscaldamento.

eifargonoM
Lastra di gel di silice silanizzato per cromatografia su

. 1117100.

ilareneG
strato sottile
Soluzione B. Preparare 10 ml di una soluzione satura di
Supporto di vetro, metallo o plastica, ricoperto con uno anilina R. Filtrare.
strato di gel di silice silanizzato di spessore e dimen- Soluzione C. Disciogliere 75 mg di potassio ioduro R in
sione delle particelle adatti (generalmente da 2 mm a
10 mm per lastre con dimensione fine delle particelle acqua R e diluire a 70 ml con lo stesso solvente. Aggiun-

ehcituecamraF
(Cromatografia su strato sottile ad alta risoluzione, gere 10 ml di alcool R e 0,1 g di iodio R. Agitare.

emroF
HPTLC) e da 5 mm a 40 mm per lastre normali per cro- Mescolare le soluzioni A e B. Aggiungere la solu-
matografia su strato sottile). Se necessario, la dimen- zione C.
sione delle particelle e© indicata dopo il nome del reat- . 1047900. [5989-81-1]. Vedere la monografia
tivo nel saggio dove e© usata.
Lattosio

Lattosio (0187).
La lastra puo© contenere un legante organico.
eiretaM
. C12H20O2. (Mr 196,3). 1114200.

emirP
Separazione cromatografica. Introdurre 0,1 g ciascuno di [50373-59-6]. 2-Isopropenil-5-metil-4-esen-1-ile
Lavandulile acetato

acetato.
metile laurato R, metile miristato R, metile palmitato R Liquido incolore con un odore caratteristico.
e metile stearato R in un pallone di 250 ml. Aggiungere 20
40 ml di potassioidrossidosoluzionealcoolicaR e scaldare d20 : circa 0,911.
ehcituecamraF
inoizaraperP

sotto un condensatore a riflusso a b.m. per 1 h. n20D : circa 1,454.

ehcificepS

Lasciar raffreddare, trasferire la soluzione in un imbuto p.e. : da 106 ‘C a 107 ‘C.

separatore mediante 100 ml di acqua R, acidificare 13
(da pH 2 a 3) con acido cloridrico diluito R e agitare con Il lavandulile acetato utilizzato in gas cromatografia sod-
tre porzioni da 10 ml ciascuna di diclorometano R. Essic- disfa all'ulteriore saggio seguente:
ehcitapoemO
inoizaraperP

care gli estratti riuniti di diclorometano su sodio solfato Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
anidro R, filtrare ed evaporare a secco su un b.m. Discio- cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
gliere il residuo in 50 ml di diclorometano R. Esaminare fia Lavanda essenza (1338).
mediante cromatografia su strato sottile (2.2.27), usando Soluzione in esame. La sostanza in esame.
lastra di gel di silicesilanizzato percromatografia su strato
sottile R. Deporre un'appropriata quantita© (circa 10 ml L'area del picco principale non e© inferiore al 93,0 per
ecidnI

per lastre normali per cromatografia su strato sottile e cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte-
1 ml a 2 ml per lastre con dimensione fine delle particelle) nuto.

455
Reattivi

Lavandulolo . C10H18O. (Mr 154,2). 1114100. [498-16-8]. Limone essenza . 1101700.Vedere la monografia Limone
(R)-5-metil-2-(1-metiletenil)-4-esen-1-olo. essenza (0620).
Liquido oleoso con un odore caratteristico. Limonene . C10H16. (Mr 136,2). 1048600. [5989-27-5].
d2020 : circa 0,875. d -Limonene. (+)-p-Menta-1,8-diene. (R)-4-Isopropenil-

n20D : circa 1,407. 1-metilcicloes-1-ene.

20 : circa 10,2.
D
Liquido incolore, praticamente insolubile in acqua,
‰ Š ÿ

p.e.13: circa 94 ‘C. solubile in alcool.

Il lavandulolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa d2020 : circa 0,84.
all'ulteriore saggio seguente: n20D : da 1,471 a 1,474.
20 : da + 96 a + 106.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas ‰ Š
D
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- p.e.: da 175 ‘C a 177 ‘C.
fia Lavanda essenza (1338). Il limonene utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
Soluzione in esame. La sostanza in esame. teriore saggio seguente:
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte- cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
nuto. fia Menta essenza (0405) usando la sostanza in esame
Lega nichel-alluminio . 1058100. Lega di Raney. come soluzione in esame.
Contiene dal 48 per cento al 52 per cento di alluminio L'area del picco principale non e© inferiore al 99,0 per
(Al, Ar 26,98) e dal 48 per cento al 52 per cento di nichel cento dell'area totale dei picchi.
(Ni, Ar 58,70). Linalile acetato . C12H20O2. (Mr 196,3). 1107200.
Prima dell'uso, ridurre a polvere fine (180). [115-95-7]. (RS)-1,5-Dimetil-1-viniles-4-enil acetato.
E' praticamente insolubile in acqua e solubile negli Liquido incolore o leggermente giallo con un forte
acidi minerali. odore di bergamotto e di lavanda.
Lega nichel-alluminio (esente da alogeno) . 1118100. d2525 : da 0,895 a 0,912.
Contiene dal 48 per cento al 52 per cento di alluminio n20D : da 1,448 a 1,451.
(Al, Ar 26,98) e dal 48 per cento al 52 per cento di nichel p.e.: circa 215 ‘C.
(Ni, Ar 58,71). Il linanile acetato utilizzato in gas cromatografia soddisfa
Polvere grigia fine, praticamente insolubile in acqua, all'ulteriore saggio seguente:
solubile in acidi minerali con formazione di sali. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Cloruri. Non piu© di 10 ppm. Disciogliere 2,00 g in 40 ml cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
di acido nitrico R. Evaporare la soluzione quasi fino a fia Arancio amaro fiore essenza (1175), usando la
secchezza, disciogliere il residuo in acqua R e diluire a sostanza in esame come soluzione in esame. L'area del
20,0 ml con lo stesso solvente. Ad una aliquota pari a picco principale non e© inferiore al 95,0 per cento dell'a-
meta© della soluzione, aggiungere 1,0 ml di argento rea totale dei picchi.
nitrato 0,1 M. Filtrare dopo 15 min e aggiungere al fil-
trato 0,25 ml di sodio cloruro soluzione (contenente . C10H18O. (Mr 154,2). 1048700. [78-70-6].
40 g di cloruri per millilitro). Dopo 5 min la soluzione
l
Linalolo

(RS)-3,7-Dimetilotta-1,6-dien-3-olo.
e© piu© opalescente di una miscela, ottenuta con l'altra Miscela di due stereoisomeri (licareolo e coriandrolo).
meta© della soluzione e 1,0 ml di argento nitrato 0,1 M.
. 1048500. [61-90-5]. Vedere la monografia Leu- Liquido, praticamente insolubile in acqua, solubile in
Leucina

cina (0771). etere.

. C15H26O. (Mr 222,4). 1128800. [23089-26-1]. d2020 : circa 0,860.
n20D : circa 1,462.
Levomenolo

(^)-(2S)-6-Metil-2-[(1S)-4-metilcicloesen-3-enil]-5-epten-
2-olo. (^)- -Bisabololo.
a p.e.: circa 200 ‘C.
Liquido viscoso incolore con un leggero odore caratte- Il linalolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
ristico; praticamente insolubile in acqua, molto solubile teriore saggio seguente:
in alcool, in metanolo, in toluene, in oli grassi e in oli Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
essenziali. cromatografia (2.2.28) nelle condizioni descritte nella
d2020 : da 0,925 a 0,935. monografia Anice essenza (0804) usando la sostanza
n20D : da 1,493 a 1,500. in esame come soluzione in esame.
20 : da 54,5 a ^ 58,0, determinato su una soluzione L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per
‰ Š
D ÿ

50 mg/ml in alcool R. cento dell'area totale dei picchi.

456
 Reattivi

inoizircserP
. C6H6Cl6. (Mr 290,8). 1128900. [58-89-9]. . 1099200. [25322-68-3]. Polietilenglicole

ilareneG
Lindano Macrogol 200

c -Esaclorocicloesano. Vedere la monografia Lindano 200.

(0772). Liquido viscoso incolore o quasi incolore, limpido,
Per la monografia Lanolina (0134), puo© essere utiliz- solubilissimo in acetone e in etanolo, praticamente
zata un'idonea e certificata soluzione di riferimento insolubile in etere e negli oli grassi.

isilanA id
(10 ng/ l in cicloesano).

idoteM
m
d2020 : circa 1,127.
Litio . Li. (Ar 6,94). 1048800. [7439-93-2]. n20D : circa 1,450.
Metallo morbido la cui superficie tagliata di recente e© . 1099201.
grigio-argentea. Annerisce rapidamente a contatto con Macrogol 200 R1

l'aria. Reagisce violentemente con acqua, liberando Introdurre 500 ml di macrogol 200 R in un pallone

irotinetnoC
/ ilairetaM
idrogeno e dando luogo a una soluzione di litio idros- a fondo tondo da 1000 ml. Usando un evaporatore
sido; solubile in metanolo, libera idrogeno e da luogo a rotante rimuovere gli eventuali componenti volatili
una soluzione di litio metossido; praticamente insolu- mantenendo per 6 h una temperatura di 60 ‘C, e
bile in etere e in etere di petrolio. sotto vuoto ad una pressione di 1,5-2,5 kPa.
Conservare in etere di petrolio o in paraffina liquida. . 1067100. [25322-68-3]. Polietilenglicole

ivittaeR
. Li2CO3. (Mr 73,9). 1048900. [554-13-2].
Macrogol 300
Litio carbonato 300. Vedere la monografia Macrogoli (1444).
Dilitio carbonato. . 1067200. [25322-68-3]. Polietilenglicole
Polvere impalpabile, bianca, moderatamente solubile in
Macrogol 400

acqua, molto poco solubile in alcool. Una soluzione 400. Vedere la monografia Macrogoli (1444).
satura a 20 ‘C contiene circa 13 g/l di Li2CO3. . 1067300. [25322-68-3]. Polietilenglicole

itnemogrA
Macrogol 1000

1000. Vedere la monografia Macrogoli (1444).

ilareneG
. LiCl. (Mr 42,39). 1049000. [7447-41-8].
. 1067400. [25322-68-3]. Polietilenglicole
Litio cloruro

Polvere cristallina o granuli o cristalli cubici, delique- Macrogol 1500

1500. Vedere la monografia Macrogoli (1444).

scenti, molto solubili in acqua, solubili in acetone e in
alcool. Le soluzioni acquose sono neutre o leggermente Macrogol 20000 . 1067600. Polietilenglicole 20000.
alcaline. Vedere la monografia Macrogoli (1444).

eifargonoM

ilareneG
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Macrogol 20000 2-nitrotereftalato . 1067601. Polie-
Litio idrossido . LiOH.H2O. (Mr 41,96). 1049100. tilenglicole 20000 2-nitrotereftalato.
[1310-66-3]. Litio idrossido monoidrato. Macrogol 20000 R modificato mediante tratta-
Polvere granulare, bianca, fortemente alcalina, assorbe mento con acido 2-nitrotereftalato.

ehcituecamraF
rapidamente acqua e anidride carbonica, solubile in Solido ceroso, bianco o quasi bianco, duro, solubile

emroF
acqua, moderatamente solubile in alcool. in acetone.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
. LiBO2. (Mr 49,75). 1120000. Macrogol 23 laurile etere . 1129000.
Soddisfa alla monografia Macrogol laurile etere (1124),
Litio metaborato anidro

[13453-69-5].
. Li2SO4.H2O. (Mr 128,0). 1049200. poichë il valore nominale della quantita© di ossido di eti-

eiretaM

emirP
Litio solfato

[10102-25-7]. Dilitio solfato monoidrato. lene che ha reagito con l'alcool laurilico e© 23.
Cristalli incolori, molto solubili in acqua, praticamente Magnesio . Mg. (Ar 24,30). 1049500. [7439-95-4].
insolubili in alcool. Nastro bianco-argento, volute o fili, o polvere grigia.
. C17H26O10. (Mr 390,4). 1136700. [18524-94-2].
ehcituecamraF

. C4H6MgO4.4H2O. (Mr 214,5).

inoizaraperP

ehcificepS
Loganina

Metil (1S,4aS,6S,7R,7aS)-1-( -d-glucopiranosilossi)-6-

Magnesio acetato
b 1049600. [16674-78-5]. Magnesio diacetato tetraidrato.
idrossi-7-metil-1,4a,5,6,7,7a-esaidrociclopenta[c]piran-4- Cristalli incolori, deliquescenti, molto solubili in acqua
carbossilato. e in alcool.
p.f.: da 220 ‘C a 221 ‘C. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
ehcitapoemO

. C21H20O11. (Mr 448). Cinaro-

inoizaraperP

Luteololo-7-glucoside

side. 2-(3,4-Diidrossifenil)-7-[( -d-glucopiranosil)ossi] - Magnesio cloruro . 1049700. [7791-18-6]. Vedere la

5-idrossi-4H-cromen-4-one.
b
monografia Magnesio cloruro esaidrato (0402).
Polvere gialla, poco solubile in etanolo e in metanolo. Magnesio nitrato . Mg(NO3)2.6H2O. (Mr 256,4).
p.f.: circa 253 ‘C. 1049800. [13446-18-9]. Magnesio nitrato esaidrato.
Assorbanza (2.2.25). Una soluzione (0,04 g/l) in meta- Cristalli trasparenti, incolori, deliquescenti, solubilis-
simi in acqua, molto solubili in alcool.
ecidnI

nolo R presenta due massimi di assorbimento (2.2.25)

rispettivamente a 255 e a 352 nm. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.

457
Reattivi

Magnesio nitrato soluzione . 1049801. Manganese solfato . MnSO4.H2O. (Mr 169,0). 1050900.
Disciogliere 17,3 g di magnesio nitrato R in 5 ml di [10034-96-5]. Manganese solfato monoidrato.
acqua R riscaldando gradualmente e aggiungere Polvere cristallina o cristalli rosa pallido, molto solubili
80 ml di alcool R. Raffreddare e diluire a 100,0 ml in acqua, praticamente insolubili in alcool.
con lo stesso solvente. Perdita alla calcinazione. Dal 10,0 per cento al 12,0 per
. 1049900. [1309-48-4].Vedere la mono- cento, determinata su 1,000 g a 500 ‘C.
. 1051000. [69-65-8]. Vedere la monografia
Magnesio ossido

grafia Magnesio ossido leggero (0040). Mannitolo

. 1049901. Mannitolo (0559).

. C6H12O6. (Mr 180,2). 1051100. [3458-28-4].
Magnesio ossido R1

Soddisfa ai requisiti prescritti per il magnesio Mannosio

d -(+)-Mannosio.
ossido R con le modifiche seguenti:
Arsenico (2.4.2). Disciogliere 0,5 g in una miscela di Polvere cristallina bianca o cristalli bianchi, piccoli,
5 ml di acqua R e 5 ml di acido cloridrico R1. La solubilissimi in acqua, poco solubili in etanolo.
20 : da + 13,7 a + 14,7, determinato su una soluzione
soluzione soddisfa al saggio limite A per l'arsenico ‰ Š
D
(2 ppm). 200 g/l in acqua R contenente circa lo 0,05 per
Metallipesanti(2.4.8).Disciogliere1,0ginunamiscela cento di NH3.
di3mldiacquaRe7mldiacidocloridricoR1.Aggiun- p.f.: circa 132 ‘C, con decomposizione.
gere 0,05 ml di fenolftaleina soluzione R e ammoniaca Meclozina cloridrato . 1051200. [1104-22-9]. Vedere la
concentrata R fino al viraggio colorazione rosa. Neu- monografia Meclozina cloridrato (0622).
tralizzare l'eccesso di ammoniaca per aggiunta di . C3H6N6. (Mr 126,1). 1051300. [108-78-1].
acido acetico glaciale R. Aggiungere un eccesso di
Melammina

1,3,5-Triazin-2,4,6-triammina.
0,5ml dello stesso acidoe diluirea 20 ml con acquaR. Polvere amorfa, bianca, molto poco solubile in acqua e
Filtrare, se necessario. 12 ml della soluzione soddi- in alcool.
sfano al saggio limite A per i metalli pesanti
(10 ppm). Preparare la soluzione di riferimento Menadione . 1051400. [58-27-5]. Vedere la monografia
usando una miscela di 5 ml della soluzionestandarddi Menadione (0507).
piombo(Pb1ppm)Re5ml di acquaR. Mentile acetato . C12H22O2. (Mr 198,3). 1051800.
Ferro (2.4.9). Disciogliere 0,2 g in 6 ml di acido clo- [16409-45-3]. 2-Isopropil-5-metilcicloesile acetato.
ridrico diluito R e diluire a 10 ml con acqua R. Liquido incolore, poco solubile in acqua, miscibile con
La soluzione soddisfa al saggio limite per il ferro alcool e con etere.
(50 ppm). d2020 : circa 0,92.
Magnesio ossido pesante . 1050000. [1309-48-4]. Vedere n20D : circa 1,447.
la monografia Magnesio ossido pesante (0041). p.e.: circa 225 ‘C.
Magnesio silicato per l'analisi di residui di pesticidi . Il mentile acetato utilizzato in gas cromatografia soddisfa
1129100. [1343-88-0]. all'ulteriore saggio seguente:
Magnesio silicato per cromatografia (60-100 mesh). Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
. 1050200. [10034-99-8]. Vedere la cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
fia Menta essenza (0405) usando la sostanza in esame
Magnesio solfato

monografia Magnesio solfato (0044).

. C10H19O6PS2. (Mr 330,3). 1129200. [121-75-5]. come soluzione in esame.
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per
Malation

p.e.: circa 156 ‘C. cento dell'area totale dei picchi.

Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di . C10H14O. (Mr 150,2).1051500. [17957-94-7].
riferimento (10 ng/ml in iso-ottano). Mentofurano

3,9-Epossi-p-menta-3,8-diene. 3,6-Dimetil-4,5,6,7-tetra-
Maltitolo . 1136800. [585-88-6]. Vedere la monografia idrobenzofurano.
Maltitolo (1235). Liquido leggermente bluastro, molto poco solubile in
Manganese argento cartina . 1078200. acqua, solubile in alcool.
Immergere strisce di carta da filtro lenta in una d1520 : circa 0,965.
soluzione contenente 8,5 g/l di manganese solfato R e n20D : circa 1,480.
8,5 g/l di argento nitrato R. Mantenerle per alcuni 20 : circa + 93.
minuti e lasciar seccare su anidride fosforica R al riparo ‰ Š
D
da vapori acidi e alcalini. p.e.: circa 196 ‘C.

458
 Reattivi

inoizircserP
Il mentofurano utilizzato in gas cromatografia soddisfa . 1052801.

ilareneG
Mercurio soluzione nitrica

all'ulteriore saggio seguente: Disciogliere cautamente 3 ml di mercurio R in

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas 27 ml di acido nitrico fumante R. Diluire la solu-
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- zione con un volume uguale di acqua R.
fia Menta essenza (0405) usando la sostanza in esame Conservare al riparo dalla luce e usare entro

isilanA id
come soluzione in esame.

idoteM
2 mesi.
L'area del picco principale non e© inferiore al 97,0 per
cento dell'area totale dei picchi. Mercurio(-ico) acetato . C4H6HgO4. (Mr 318,7).
. 1051600. [2216-51-5]. Vedere le monografie 1052000. [1600-27-7]. Mercurio diacetato.
Cristalli bianchi, molto solubili in acqua, solubili in
Mentolo

Levomentolo (0619) e Mentolo racemico (0623).

irotinetnoC
/ ilairetaM
Il mentolo utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul- alcool.
teriore saggio seguente: Mercurio(-ico) acetato soluzione . 1052001.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas Disciogliere 3,19 g di mercurio(-ico) acetato R in
cromatografia (2.2.28) come prescritto nel saggio acido acetico anidro R e diluire a 100 ml con lo
``Sostanze correlate'' della monografia Mentolo race- stesso acido. Se necessario, neutralizzare la solu-

ivittaeR
mico (0623). zione con acido perclorico 0,1 M usando 0,05 ml di
L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per cristal violetto soluzione R come indicatore.
cento dell'area totale dei picchi, trascurando ogni picco Mercurio(-ico) bromuro . HgBr2. (Mr 360,4). 1052100.
dovuto al solvente. [7789-47-1]. Mercurio dibromuro.

itnemogrA
ilareneG
Mentone . C10H18O. (Mr 154,2). 1051700. [14073-97-3]. Cristalli bianchi o debolmente gialli o polvere cristal-
(^)-trans-p-Mentan-3-one. (2S,5R)-2-Isopropil-5-metil- lina, poco solubili in acqua, solubili in alcool.
cicloesanone. Mercurio(-ico) bromuro cartina . 1052101.
Contiene quantita© variabili di isomentone. In una bacinella rettangolare porre una soluzione

eifargonoM
Liquido incolore, molto poco solubile in acqua, solubi- (50 g/l) di mercurio(-ico) bromuro R in etanolo R e

ilareneG
lissimo in alcool e in etere. immergervi pezzi di carta da filtro bianca del
d2020 : circa 0,897. peso di 80 g per metro quadrato (velocita© di filtra-
n20D : circa 1,450. zione = tempo di filtrazione espresso in secondi
per 100 ml di acqua a 20 ‘C su una superficie fil-

ehcituecamraF
Il mentone utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul- trante di 10 cm e pressione costante di 6,7 kPa: da
2
teriore saggio seguente:

emroF
40 s a 60 s), ciascuno di 1,5 cm per 20 cm e piegato
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas in due. Lasciare sgocciolare il liquido in eccesso e
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- lasciar asciugare la carta, proteggendo dalla luce,
fia Menta essenza (0405) usando la sostanza in esame sospesa su un filo non-metallico. Eliminare dalle
come soluzione in esame. estremita© di ciascuna striscia 1 cm e tagliare il

eiretaM
rimanente in quadrati di 1,5 cm di lato o dischi di

emirP
L'area del picco principale non e© inferiore al 90,0 per
cento dell'area totale dei picchi. 1,5 cm di diametro.
. 1051900. [6112-76-1]. Vedere la mono- Conservare in un recipiente con tappo a smeriglio
avvolto in una carta nera.
Mercaptopurina

grafia Mercaptopurina (0096).

ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

2-Mercaptoetanolo . C2H6OS. (Mr 78,1). 1099300. . 1052200. [7487-94-7]. Vedere la

[60-24-2].
Mercurio(-ico) cloruro

monografia Mercurio dicloruro (0120).

Liquido, miscibile con acqua. Mercurio(-ico) cloruro soluzione . 1052201.
d2020 : circa 1,116. Soluzione 54 g/l.
ehcitapoemO
inoizaraperP

p.e.: circa 157 ‘C. . HgI2. (Mr 454,4). 1052300.

. Hg. (Ar 200,6). 1052800. [7439-97-6].
Mercurio(-ico) ioduro
Mercurio
[7774-29-0]. Mercurio di-ioduro.
Liquido bianco-argento, si frantuma in globuli sferici Polvere cristallina, scarlatta, densa, poco solubile in
che non lasciano tracce metalliche per strofinamento acqua, moderatamente solubile in acetone, in alcool e
su carta. in etere, solubile in un eccesso di potassio ioduro solu-
d2020 : circa 13,5. zione R.
ecidnI

p.e.: circa 357 ‘C. Conservare al riparo dalla luce.

459
Reattivi

Mercurio(-ico) nitrato . Hg(NO3)2.H2O. (Mr 342,6). Metanolo R1 . 1053201.

1052400. [7782-86-7]. Mercurio dinitrato monoidrato. Soddisfa ai requisiti prescritti per il metanolo R e
Cristalli incolori o leggermente colorati, igroscopici, all'ulteriore requisito seguente:
solubili in acqua in presenza di una piccola quantita© di Trasmittanza minima (2.2.25) determinata usando
acido nitrico. acqua R come bianco:
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al 20 per cento a 210 nm,
riparo dalla luce.
. HgO. (Mr 216,6). 1052500. 50 per cento a 220 nm,
75 per cento a 230 nm,
Mercurio(-ico) ossido

[21908-53-2]. Mercurio ossido giallo. Mercurio ossido.

Polvere da giallo a giallo-arancione, praticamente inso- 95 per cento a 250 nm,
lubile in acqua e in alcool. 98 per cento a 260 nm e a lunghezze d'onda piu© ele-
Conservare al riparo dalla luce. vate.
Mercurio(-ico) solfato soluzione . 1052600. [7783-35-9]. . 1053202.
Reattivo di Denige© s.
Metanolo R2

Il metanolo R2 usato nella cromatografia liquida

Disciogliere 1 g di mercurio(-ico) ossido R in una soddisfa agli ulteriori requisiti seguenti:
miscela di 20 ml di acqua R e 4 ml di acido solforico R. Contiene non meno del 99,8 per cento di CH4O
Mercurio(-ico) tiocianato . Hg(SCN)2. (Mr 316,7). (Mr 32,04).
1052700. [592-85-8]. Mercurio di(tiocianato). Assorbanza (2.2.25). L'assorbanza a 225 nm usando
Polvere cristallina, bianca, molto poco solubile in acqua R come bianco non e© superiore a 0,17.
acqua, poco solubile in alcool e in etere, solubile in
soluzioni di sodio cloruro. Metanolo cloridrico . 1053203. [134-20-3].
. 1052701. Diluire 1,0 ml di acido cloridrico R1 a 100,0 ml con
metanolo R.
Mercurio(-ico) tiocianato soluzione

Disciogliere 0,3 g di mercurio(-ico) tiocianato R in

etanolo R e diluire a 100 ml con lo stesso solvente. . 1053400. [67-56-1].
Usare entro una settimana.
Metanolo anidro

Trattare 1000 ml di metanolo R con 5 g di magnesio R.

Mercurio(-oso) cloruro . Cl2Hg2. Calomelano, mercurio Se necessario innescare la reazione per aggiunta di
monocloruro. 0,1 ml di mercurio(-ico) cloruro soluzione R. Quando lo
Polvere pesante, bianca; si decompone lentamente alla sviluppo di gas e© cessato, distillare il liquido e racco-
luce del sole in mercurio dicloruro e mercurio metal- gliere il distillato in un recipiente asciutto al riparo dal-
lico; sublima a 400-500 ‘C senza fondere. Praticamente l'umidita© .
insolubile in acqua; l'acido cloridrico e i cloruri dei Acqua (2.5.12). Non piu© di 0,3 g/l.
metalli alcalini ed alcalini-terrosi aumentano la solubi- . 1053300.
lita© in acqua; insolubile in alcool ed in etere. Metanolo esente da aldeide

. Reattivo di Mil- Disciogliere 25 g di iodio R in 1 litro di metanolo R e ver-

Mercurio(-oso e -ico) nitrato soluzione

lon. sare la soluzione, sotto continua agitazione, in 400 ml

Disciogliere 3 ml di mercurio R in 27 ml di acido nitrico di sodio idrossido 1 M. Aggiungere 150 ml di acqua R e
fumante R e diluire la soluzione con un volume uguale lasciare a riposo per 16 h. Filtrare. Bollire a ricadere
di acqua R. fino a scomparsa dell'odore di iodoformio. Effettuare
Puo© essere conservato per non piu© di 2 mesi al riparo dalla una distillazione frazionata.
luce. Contiene non piu© dello 0,001 per cento di aldeidi e che-
Mesitile ossido . C6H10O. (Mr 98,1). 1120100. [141-79-7]. toni.
4-Metil-3-penten-2-one. Metanolo deuterato . C2H4O. (Mr 36,1). 1025200.
Liquido oleoso incolore, solubile in 30 parti di acqua, [811-98-3]. ( H)-Metanolo. Metanolo-d.
2
miscibile con la maggior parte dei solventi organici. Il grado di deuterazione non e© inferiore al 99,8 per
d2020 : circa 0,858. cento.
p.e.: da 129 ‘C a 130 ‘C. Liquido incolore, limpido, miscibile con acqua, con
Metanolo . CH4O. (Mr 32,04). 1053200. [67-56-1]. alcool e con diclorometano.
Liquido infiammabile, incolore, limpido, miscibile con d2020 : circa 0,888.
acqua e con alcool.
d2020 : da 0,791 a 0,793. n20D : circa 1,326.
p.e.: da 64 ‘C a 65 ‘C. p.e.: circa 65,4 ‘C.

460
 Reattivi

inoizircserP
. C12H15N. omettendo la soluzione di aldeide propionica. Aggiun-

ilareneG
1-Metil-4-fenil-1,2,3,6-tetraidropiridina

(Mr 173,3) 1137100. [28289-54-5]. MPTP. gere 25,0 ml di una soluzione (2 g/l) di ferro(-ico) clo-
Polvere cristallina bianca o quasi bianca, poco solubile ruro R alla soluzione in esame e al bianco, diluire a
in acqua. 100,0 ml con acetone R e mescolare. L'assorbanza
p.f.: circa 41 ‘C. (2.2.25) della soluzione in esame, misurata a 660 nm
usando il bianco preparato in precedenza, non e© infe-

isilanA id
. C4H5N3O2. (Mr 127,1).

idoteM
2-Metil-5-nitroimidazolo

1056100. [88054-22-2]. riore a 0,62.

Polvere da bianca a leggermente gialla. 2-Metilbut-2-ene . C5H10. (Mr 70,1). 1055400. [513-35-9].
p.f.: da 252 ‘C a 254 ‘C. Liquido molto infiammabile, praticamente insolubile in
acqua, miscibile con alcool e con etere.

irotinetnoC
. C14H20N2O6S. (Mr 344,4).

/ ilairetaM
4-Metilamminofenolo solfato

1053800. [55-55-0]. p.e.: da 37,5 ‘C a 38,5 ‘C.

Cristalli incolori, solubilissimi in acqua, poco solubili . C5H12. (Mr 72,2). 1099500. [78-78-4].
in alcool, praticamente insolubili in etere.
2-Metilbutano

Isopentano.
p.f.: circa 260 ‘C. Contiene non meno del 99,5 per cento di C5H12.
. C14H14N3NaO3S. (Mr 327,3). 1054800.

ivittaeR
Metilarancio

[547-58-0]. Schultz No. 176. Colour Index No. 13025. Liquido incolore molto infiammabile.
Sodio 4'-dimetilamminoazobenzen-4-solfonato. Elian- d2020 : circa 0,621.
tina. n20D : circa 1,354.
Polvere cristallina, giallo-arancione, poco solubile in p.e.: circa 29 ‘C.

itnemogrA
acqua, praticamente insolubile in alcool.

ilareneG
Metilarancio indicatore misto . 1054801. Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,02 per cento.
Disciogliere 20 mg di metilarancio R e 0,1 g di verde Residuo all'evaporazione. Non superiore allo 0,0003 per
bromocresolo R in 1 ml di sodio idrossido 0,2 M e cento.
diluire a 100 ml con acqua R. Trasmittanza minima (2.2.25): determinata usando

eifargonoM

ilareneG
Viraggio. Da pH 3,0 (arancione) a pH 4,4 (verde- acqua R come bianco:
oliva). 50 per cento a 210 nm,
Metilarancio soluzione . 1054802. 85 per cento a 220 nm,
Disciogliere 0,1 g di metilarancio R in 80 ml di

ehcituecamraF
acqua R e diluire a 100 ml con alcool R. 98 per cento a 240 nm e a lunghezze d'onda piu© elevate.

emroF
Saggio di sensibilita© . Una miscela di 0,1 ml di metil- 2-Metil-2-butanolo .Vedere alcool tert-pentilico R.
arancio soluzione e 100 ml di acqua esente da ani- Metilcellulosa 450 . 1055500. [9004-67-5]. Vedere la
dride carbonica R e© gialla. Non sono necessari piu© monografia Metilcellulosa (0345).
di 0,1 ml di acido cloridrico 1 M per far virare la La viscosita© nominale e© 450 mPas.
colorazione al rosso.

eiretaM
O . C9H14ClNO2. (Mr 203,7).

emirP
Viraggio. Da pH 3,0 (rosso) a pH 4,4 (giallo). 3- -Metildopamina cloridrato

1055600. [1477-68-5]. 4-(2-Amminoetil)-2-metossifenolo

Metilarancio-xilene cianolo FF soluzione . cloridrato.
Disciogliere 0,1 g di metilarancio R e 0,26 g di xilene p.f.: da 213 ‘C a 215 ‘C.
ehcituecamraF

cianolo R in 50 ml di alcool R e diluire a 100 ml con

inoizaraperP

Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-

ehcificepS

acqua R. grafia Dopamina cloridrato (0664), deponendo 10 ml di

Metilbenzotiazolone idrazone cloridrato .C8H10ClN3S.H2O. una soluzione (0,075 g/l) in metanolo R. Il cromato-
(Mr 233,7). 1055300. [38894-11-0]. 3-Metilbenzotia- gramma ottenuto presenta solo una macchia principale.
zol-2(3H)-oneidrazonecloridratomonoidrato.
O . C9H14ClNO2. (Mr 203,7).
ehcitapoemO
inoizaraperP

Polvere cristallina, quasi bianca o giallastra. 4- -Metildopamina cloridrato

1055700. [645-33-0]. 5-(2-Amminoetil)-2-metossifenolo

p.f.: circa 270 ‘C. cloridrato.
Idoneita© per la determinazione delle aldeidi. A 2 ml di p.f.: da 207 ‘C a 208 ‘C.
metanolo esente da aldeide R aggiungere 60 l di unam
soluzione (1 g/l) di aldeide propionica R in metanolo Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
esente da aldeide R e 5 ml di una soluzione (4 g/l) di grafia Dopamina cloridrato (0664), deponendo 10 ml di
ecidnI

metilbenzotiazolone idrazone cloridrato. Mescolare. una soluzione (0,075 g/l) in metanolo R. Il cromato-
Lasciare a riposo per 30 min. Preparare un bianco gramma ottenuto presenta solo una macchia principale.

461
Reattivi

Metile acetato . C3H6O2. (Mr 74,1). 1053700. [79-20-9]. Metile decanoato . C11H22O2. (Mr 186,3). 1054000.
Liquido incolore, limpido, solubile in acqua, miscibile [110-42-9]. Metile n-decanoato.
con alcool. Contiene non meno del 99,0 per cento di C11H22O2.
d2020 : circa 0,933. Liquido incolore o giallo, limpido, solubile in etere di
n20D : circa 1,361. petrolio.
p.e.: da 56 ‘C a 58 ‘C. d2020 : da 0,871 a 0,876.
Metile antranilato . C8H9NO2. (Mr 151,2). 1107300. n20D : da 1,425 a 1,426.
[134-20-3]. Metil 2-amminobenzoato. Sostanze estranee. Esaminare mediante gas cromato-
Cristalli incolori o liquido incolore o giallastro, solubili grafia (2.2.28), iniettando uguali volumi di ciascuna
in acqua, molto solubili in alcool e in etere. delle seguenti soluzioni: (I) soluzione (0,02 g/l) della
p.f.: da 24 ‘C a 25 ‘C. sostanza in esame in carbonio solfuro R, (II) soluzione
p.e.: da 134 ‘C a 136 ‘C. (2 g/l) della sostanza in esame in carbonio solfuro R e
(III) carbonio solfuro R. Effettuare il procedimento cro-
Il metile antranilato utilizzato in gas cromatografia sod- matografico nelle condizioni del saggio per il butil-
disfa all'ulteriore saggio seguente: idrossitoluene prescritto nella monografia Lanolina
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas (0134). Nel cromatogramma ottenuto con la soluzione
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- (II) l'area totale dei picchi, ad eccezione del picco del
fia Arancio amaro fiore essenza (1175), usando la solvente e del picco principale, e© inferiore all'area del
sostanza in esame come soluzione in esame. L'area del picco principale del cromatogramma ottenuto con la
picco principale non e© inferiore al 95,0 per cento dell'a- soluzione (I).
rea totale dei picchi. Metile eicosenoato . C21H40O2. (Mr 324,5). 1120500.
Metile arachidato . C21H42O2. (Mr 326,6). 1053900. [2390-09-2]. Metile (11Z)-eicos-11-enoato.
[1120-28-1]. Metile eicosanoato. Metile laurato . C13H26O2. (Mr 214,4).1054400. [111-82-0].
Contiene non meno del 98,0 per cento di C21H42O2, Metiledodecanoato.
determinato mediante gas cromatografia (2.4.22). Contiene non meno del 98,0 per cento di C13H26O2,
Massa cristallina, bianca o gialla, solubile in alcool e in determinato mediante gas cromatografia (2.4.22).
etere di petrolio. Liquido incolore o giallo, solubile in alcool e in etere di
p.f.: circa 46 ‘C. petrolio.
Metile beenato .C23H46O2.(Mr 354,6).1107500.[929-77-1]. d2020 : circa 0,87.
Metiledocosanoato. n20D : circa 1,431.
p.f.: da 54 ‘C a 55 ‘C. p.f.: circa 5 ‘C.
Metile caprato . 1054000. Vedere metile decanoato R. Metile lignocerato . C25H50O2. (Mr 382,7). 1120600.
Metile caprilato .C9H18O2.(Mr 158,2).1120400.[111-11-5]. [2442-49-1]. Metile tetracosanoato.
Metileottanoato. Lamine.
d2020 : circa 0,876. p.f.: circa 58 ‘C.
n20D : circa 1,417. Metile linoleato . C19H34O2. (Mr 294,5). 1120700.
p.e.: da 193 ‘C a 194 ‘C. [112-63-0]. Metile (9Z,12Z)-ottadeca-9,12-dienoato.
Metile caproato .C7H14O2.(Mr 130,2).1120300.[106-70-7]. d2020 : circa 0,888.
Metileesanoato. n20D : circa 1,466.
d2020 : circa 0,885. p.e.: da 207 ‘C a 208 ‘C.
n20D : circa 1,405. Metile linolenato . C19H32O2. (Mr 292,5). 1120800.
p.e.: da 150 ‘C a 151 ‘C. [301-00-8]. Metile (9Z,12Z,15Z)-ottadeca-9,12,15-trie-
Metile cinnamato . C10H10O2. (Mr 162,2). 1099400. noato.
[103-26-4]. d2020 : circa 0,901.
Cristalli incolori praticamente insolubili in acqua, solu- n20D : circa 1,471.
bili in alcool e in etere. p.e.: circa 207 ‘C.
n20D : circa 1,56. Metile margarato . C18H36O2. (Mr 284,5). 1120900.
p.e.: circa 260 ‘C. [1731-92-6]. Metile eptadecanoato.
p.f.: da 34 ‘C a 36 ‘C. p.f.: da 32 ‘C a 34 ‘C.

462
 Reattivi

inoizircserP
. C5H8O2. (Mr 100,1). 1054500. . C14H28O2. (Mr 228,4). 1121100.

ilareneG
Metile metacrilato Metile tridecanoato

[80-62-6]. Metile 2-metil-2-propenoato. [1731-88-0].

Liquido incolore. Liquido incolore o leggermente giallo, solubile in alcool
n20D : circa 1,414. e in etere di petrolio.
p.e.: circa 100 ‘C. d2020 : circa 0,86.

isilanA id
idoteM
p.f.: circa ^48 ‘C. n20D : circa 1,441.
Contiene un idoneo stabilizzante. p.f.: circa 6 ‘C.
. C15H30O2. (Mr 242,4). 1054600. Metilenbisacrilammide . C7H10N2O2. (Mr 154,2).
1056000. [110-26-9]. N,N'-Metilenbispropenammide.
Metile miristato

[124-10-7]. Metile tetradecanoato.

irotinetnoC
Polvere bianca o quasi bianca, fine, poco solubile in

/ ilairetaM
Contiene non meno del 98,0 per cento di C15H30O2,
determinato mediante gas cromatografia (2.4.22). acqua, solubile in alcool.
Liquido incolore o leggermente giallo, solubile in alcool p.f.: fonde con decomposizione ad una temperatura
e in etere di petrolio. superiore a 300 ‘C.
d2020 : circa 0,87. Metilene cloruro . Vedere diclorometano R.
O . C19H24O2. (Mr 284,4). 1137000.

ivittaeR
n20D : circa 1,437. 3- -Metilestrone

p.f.: circa 20 ‘C. [1624-62-0]. 3-Metossi-1,3,5(10)-estratrien-17-one.

Metile oleato . C19H36O2. (Mr 296,4). 1054700. [112-62-9]. Polvere bianca o bianco-giallastra.
20 : circa +157.
Metile(Z)-ottadec-9-enoato. ‰
D
Š

Contiene non meno del 98,0 per cento di C19H36O2, p.f.: circa 173 ‘C.

itnemogrA
ilareneG
determinato mediante gas cromatografia (2.4.22). Metiletilchetone . C4H8O. (Mr 72,1). 1054100. [78-93-3].
Liquido incolore o leggermente giallo, solubile in alcool Etilmetilchetone. 2-Butanone.
e in etere di petrolio. Liquido infiammabile, incolore, limpido, solubilissimo
d2020 : circa 0,88. in acqua, miscibile con alcool e con etere.

eifargonoM
d2020 : circa 0,81.

ilareneG
n20D : circa 1,452.
Metile palmitato . C17H34O2. (Mr 270,5). 1054900. p.e.: da 79 ‘C a 80 ‘C.
[112-39-0]. Metile esadecanoato. Metilfenilossazolilbenzene . C26H20N2O2. (Mr 392,5).
Contiene non meno del 98,0 per cento di C17H34O2, 1056200. [3073-87-8]. 1,4-Bis[2-(4-metil-5-fenil)ossazo-

ehcituecamraF
determinato mediante gas cromatografia (2.4.22). lil]benzene.
Massa cristallina, bianca o gialla, solubile in alcool e in Polvere giallo-verdastra con una fluorescenza blu, fine,

emroF
etere di petrolio. o piccoli cristalli, solubili in alcool, moderatamente
p.f.: circa 30 ‘C. solubili in xilene.
Metile palmitoleato . C17H32O2. (Mr 268,4). 1121000. p.f.: circa 233 ‘C.
[1120-25-8]. Metile (9Z)-esadec-9-enoato. Il metilfenilossazolilbenzene utilizzato per scintillazione

eiretaM
d2020 : circa 0,876.

emirP
liquida e© di idonea qualita© analitica.
n20D : circa 1,451. . C4H6N2. (Mr 82,1).1139700. [616-47-7].
. 1055000. [99-76-3]. Vedere
1-Metilimidazolo
Metile paraidrossibenzoato
1-Metil-1H-imidazolo.
la monografia Metile paraidrossibenzoato (0409). Liquido incolore o leggermente giallastro.
ehcituecamraF

. C19H38O2. (Mr 298,5). 1055200.

inoizaraperP

ehcificepS

Metile stearato

[112-61-8]. Metile ottadecanoato. n20D : circa 1,495.

Contiene non meno del 98,0 per cento di C19H38O2, p.e.: da 195 ‘C a 197 ‘C.
determinato mediante gas cromatografia (2.4.22). Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al
Massa cristallina, bianca o gialla, solubile in alcool e in riparo dalla luce.
ehcitapoemO
inoizaraperP

etere di petrolio. Metilisobutilchetone . Vedere isobutilmetilchetone R.

p.f.: circa 38 ‘C. Metilisobutilchetone R1 .Vedere isobutilmetilchetone R1.
Metile tricosanoato . C24H48O2. (Mr 368,6). 1111500. . C4H5N3O2. (Mr 127,1).
[2433-97-8]. Acido tricosanoico metil estere. 2-Metil-5-nitroimidazolo

1056100. [88054-22-2].
Contiene non meno del 99,0 per cento di C24H48O2.
Cristalli bianchi, praticamente insolubili in acqua, solu- Polvere da bianca a gialla chiara.
bili in esano. p.f.: da 252 ‘C a 254 ‘C.
ecidnI

p.f.: da 55 ‘C a 56 ‘C. Contiene non meno del 98,0 per cento di C4H5N3O2.

463
Reattivi

4-Metilpentan-2-olo . C6H14O. (Mr 102,2). 1114300. trans-2-Metossicinnamaldeide . C10H10O2. (Mr 162,2).

[108-11-2]. 1129500. [60125-24-8].
Liquido volatile, limpido, incolore. p.f.: da 44 ‘C a 46 ‘C.
d2020 : circa 0,802. La trans-2-Metossicinnamaldeide utilizzata in gas cro-
matografia soddisfa all'ulteriore saggio seguente:
n20D : circa 1,411. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
p.e.: circa 132 ‘C. cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
. C5H12N2. (Mr 100,2). 1056300. fia Cannella di Cina essenza (1496).
Il contenuto non e© inferiore al 96,0 per cento, calcolato
Metilpiperazina

[74879-18-8]. 1-Metilpiperazina.
Liquido incolore, miscibile con acqua e con alcool. mediante la procedura di normalizzazione.
Metossicloro . C16H15Cl3O2. (Mr 345,7). 1129300.
d2020 : circa 0,90. [72-43-5]. 1,1-(2,2,2-Tricloroetiliden)-bis(4-metossiben-
n20D : circa 1,466. zene).
p.e.: circa 138 ‘C. Praticamente insolubile in acqua, molto solubile nella
maggior parte dei solventi organici.
4-(4-Metilpiperidino)piridina . C11H16N2. (Mr 176,3). p.e.: circa 346 ‘C.
1114400. [80965-30-6]. p.f.: da 78 ‘C a 86 ‘C.
Liquido limpido. Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
n20D : circa 1,565. riferimento (10 ng/ l in iso-ottano).
m

. C4H10O. (Mr 74,1). 1056400. [78-83-1]. Metossietanolo . Vedere glicole etilenico monometile-
2-Metilpropanolo

Alcoolisobutilico.2-Metilpropan-1-olo tere R.
Metossifenilacetico reattivo . 1053601.
Liquido incolore limpido, solubile in acqua, miscibile Disciogliere 2,7 g di acido metossifenilacetico R in 6 ml
con alcool e con etere. di tetrametilammonio idrossido soluzione R e aggiun-
d2020 : circa 0,80. gere 20 ml di etanolo R.
n15D : da 1,397 a 1,399. Conservare in un recipiente di polietilene.
(RS) . 1120200. [60388-53-6]. Acido (RS)-
p.e.: circa 107 ‘C.
-Metotrexato

2-[4-[[(2,4-diamminopteridin-6-il)metil]metilammino]-
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 96 per benzoilammino]pentandioico.
cento distilla tra 107 ‘C e 109 ‘C. Contiene non meno del 96,0 per cento di C20H22N8O5.
. C4H10O. (Mr 74,1). 1056500. p.f.: circa 195 ‘C.
. C9H10N2. (Mr 146,2). 1121200. [532-12-7].
2-Metil-2-propanolo

[75-65-0]. Alcool 1,1-dimetiletilico. Alcool tert-butilico. Miosmina

Tert-Butanolo. 3-(4,5-Diidro-3H-pirrol-2-il)piridina.
Liquido incolore, limpido o massa cristallina, solubili Cristalli incolori.
in acqua, miscibili con alcool e con etere. p.f.: circa 45 ‘C.
Punto di solidificazione (2.2.18). Circa 25 ‘C. b-Mircene . C10H16. (Mr 136,2). 1114500. [123-35-3].
7-Metil-3-metilenotta-1,6-diene.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per Liquido oleoso con un odore piacevole, praticamente
cento distilla tra 81 ‘C e 83 ‘C. insolubile in acqua, miscibile con alcool, solubile in
. etere e in acido acetico glaciale. Si scioglie nelle solu-
Metiltoluen-4-solfonato
zioni di idrossidi alcalini.
Massa solida, colorata, cristallina. d420 : circa 0,794.
N-Metiltrimetilsilil-trifluoroacetammide . n20D : circa 1,470.
C6H12F3NOSi. (Mr 199,3). 1129600. [24589-78-4]. Il -mircene usato in gas cromatografia soddisfa all'ulte-
2,2,2-Trifluoro-N-metil-N-(trimetilsilil)acetammide. riore saggio seguente:
n20D : circa 1,380. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
p.e.: da 130 ‘C a 132 ‘C. cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
fia Menta essenza (0405).
dl -Metionina . 1129400. [59-51-8].Vedere la monografia Soluzione in esame. La sostanza in esame.
dl -Metionina (0624). L'area del picco principale non e© inferiore al 90,0 per
l -Metionina . 1053500. [63-68-3]. Vedere la monografia cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma
Metionina (1027). ottenuto.

464
 Reattivi

inoizircserP
. C11H12O3. (Mr 192,2). 1099600. [607-91-0]. . 1057001.

ilareneG
Miristicina Morfolina per cromatografia

5-Allil-1-metossi-2,3-metilendiossibenzene. 4-Metossi- Soddisfa ai requisiti della morfolina R e all'ulte-

6-(2-propenil)-1,3-benzodiossolo. riore saggio seguente:
Liquido incolore oleoso, praticamente insolubile in
acqua, poco solubile in etanolo, solubile in etere, misci- Contiene non meno del 99,5 per cento di C4H9NO.

isilanA id
bile con toluene e con xilene.

idoteM
d2020 : circa 1,144. Muresside . C8H8N6O6.H2O. (Mr 302,2). 1137200. Sale
n20D : circa 1,540. 5,5'-Nitrilobis(pirimidin-2,4,6(1H,3H,5H)-trione)mo-
noammonico.
p.e.: da 276 ‘C a 277 ‘C. Polvere cristallina rosso-brunastra, moderatamente
p.f.: circa 173 ‘C.

irotinetnoC
/ ilairetaM
solubile in acqua fredda, solubile in acqua calda, prati-
Cromatografia. Esaminato come prescritto nella mono- camente insolubile in alcool, solubile in soluzioni di
grafia Anice stellato (1153), il cromatogramma otte- potassio idrossido o sodio idrossido in cui sviluppa
nuto presenta solo una macchia principale. una colorazione blu.
Il contenuto non e© inferiore al 95,0 per cento, calcolato . C10H8. (Mr 128,2). 1057100. [91-20-3].
mediante la procedura di normalizzazione. Naftalene

ivittaeR
Conservare in un luogo fresco, al riparo dalla luce. Cristalli bianchi, praticamente insolubili in acqua,
Mirtillo nero estratto secco idroalcoolico ad alto titolo.
molto solubili in etere, solubili in alcool.
Polvere di colore viola-rossastro scuro. p.f.: circa 80 ‘C.
Assorbanza (2.2.25). La soluzione contenente il 2 per Il naftalene utilizzato per la scintillazione liquida e© di

itnemogrA
ilareneG
cento V/Vdi acido cloridrico concentrato R in metanolo R un'idonea qualita© analitica.
presenta due massimi di assorbimento rispettivamente a
280 nm e a 535 nm. Naftarsone . C16H11AsN2Na2O10S2. (Mr 576,3). 1121400.
. 1074700. [132-33-2]. Torin. Disodio 4-[(2-arsonofenil)azo]-3-
Miscela riducente

Polverizzare le sostanze aggiunte nel seguente ordine

idrossinaftalen-2,7-disolfonato.

eifargonoM

ilareneG
fino ad ottenere una miscela omogenea: 20 mg di potas- Polvere rossa, solubile in acqua.
sio bromuro R, 0,5 g di idrazina solfato R e 5 g di sodio . 1121401.
cloruro R.
Naftarsone soluzione

. 1019700. Soluzione 0,58 g/l.

ehcituecamraF
Miscela solfocromica

Soluzione satura di cromo triossido R in acido solfo- Saggio per la sensibilita© . A 50 ml di alcool R,
aggiungere 20 ml di acqua R, 1 ml di acido solforico

emroF
rico R.
. 1056700. 0,05 M e 1 ml di naftarsone soluzione. Titolare con
Molibdovanadico reattivo
bario perclorato 0,025 M; il colore vira dal giallo-
In un bicchiere da 150 ml, mescolare 4 g di ammonio arancione al rosa-arancione.
molibdato R finemente polverizzato e 0,1 g di ammonio
vanadato R finemente polverizzato. Aggiungere 70 ml Conservare al riparo dalla luce e usare entro una

eiretaM
settimana.

emirP
di acqua R e triturare le particelle usando una bacchetta
di vetro. Si ottiene una soluzione limpida in pochi
minuti. Aggiungere 20 ml di acido nitrico R e diluire a Naftilammina . C10H9N. (Mr 143,2). 1057700. [134-32-7].
100 ml con acqua R. 1-Naftilammina.
ehcituecamraF

. Vedere nero mordente 11 R.

inoizaraperP

Polvere cristallina, bianca, che vira al rosa per esposi-

ehcificepS

Mordente nero 11

Mordente nero 11 miscela composta . Vedere nero mor- zione alla luce e all'aria, poco solubile in acqua, molto
dente 11 miscela composta R. solubile in alcool e in etere.
Morfina cloridrato . 1056900. Vedere la monografia p.f.: circa 51 ‘C.
Morfina cloridrato (0097).
ehcitapoemO
inoizaraperP

Morfolina . C4H9NO. (Mr 87,1). 1057000. [110-91-8]. Conservare al riparo dalla luce.
Tetraidro-1,4-ossazina. . C12H16Cl2N2.
Liquido igroscopico, incolore, infiammabile, solubile in
Naftiletilendiammina dicloridrato

acqua e in alcool. (Mr 259,2). 1057800. [1465-25-4]. N-(1-Naftil)etilen-

diammina dicloridrato.
d2020 : circa 1,01.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per Puo© contenere metanolo di cristallizzazione.
cento distilla tra 126 ‘C e 130 ‘C.
ecidnI

Polvere da bianca a bianco-giallastra, solubile in acqua,

Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. poco solubile in alcool.

465
Reattivi

Naftolbenzeina . C27H20O3. (Mr 392,5). 1057600. Assorbanza (2.2.25). La naringina disciolta in una solu-
[6948-88-5]. -Naftolbenzeina. Fenilbis(4-idrossi-1-naf-
a zione di dimetilformammide R (5 g/l) in metanolo R
til)metanolo. mostra un massimo di assorbimento a 283 nm.
Polvere rosso-brunastra o cristalli nero-brunastri, Nerile acetato . C12H20O2. (Mr 196,3). 1108000. [141-12-8].
lucenti, praticamente insolubili in acqua, solubili in (Z)-3,7-Dimetilotta-2,6-dienil acetato.
alcool e in acido acetico glaciale. Liquido oleoso incolore.
Naftolbenzeina soluzione . 1057601. d2020 : circa 0,907.
Soluzione 2 g/l in acido acetico anidro R.
Saggio di sensibilita© . A 50 ml di acido acetico gla- n20D : circa 1,460.
ciale R aggiungere 0,25 ml di naftolbenzeina solu- p.e.25: circa 134 ‘C.
zione. La soluzione e© giallo-brunastra. Non sono Il nerile acetato utilizzato in gas cromatografia soddisfa
necessari piu© di 0,05 ml di acido perclorico 0,1 M all'ulteriore saggio seguente:
per far virare la colorazione al verde.
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
a-Naftolo . C10H8O. (Mr 144,2). 1057300. [90-15-3]. cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
1-Naftolo. fia Arancio amaro fiore essenza (1175), usando la
Polvere cristallina bianca o cristalli bianchi o incolori, sostanza da esaminare come soluzione in esame. L'area
che imbruniscono per esposizione alla luce, poco solu- del picco principale non e© inferiore al 93,0 per cento
bili in acqua, molto solubili in alcool e in etere. dell'area totale dei picchi.
p.f.: circa 95 ‘C. Nero amido 10 B . C22H14N6Na2O9S2. (Mr 617).
Conservare al riparo dalla luce. 1003100. [1064-48-8]. Schultz No. 299. Colour Index
No. 20470. Disodio 5-ammino-4-idrossi-6-[(4-nitrofe-
a-Naftolo soluzione . 1057301. nil)azo]-3-(fenilazo)naftalene-2,7-disolfonato.
Disciogliere 0,10 g di -naftolo R in 3 ml di una Polvere nera o marrone scura, moderatamente solubile
soluzione (150 g/l) di sodio idrossido R e diluire a in acqua, solubile in alcool.
100 ml con acqua R. Preparare immediatamente
prima dell'uso. Nero amido 10 B soluzione . 1003101.
. C10H8O. (Mr 144,2). 1057400. [135-19-3]. Soluzione 5 g/l di nero amido 10 B R in una miscela
b-Naftolo

2-Naftolo. di 10 volumi di acido acetico R e 90 volumi di meta-

nolo R.
Lamine bianche o leggermente rosate o cristalli, molto
poco solubili in acqua, solubilissimi in alcool. Nero eriocromo . Vedere nero mordente 11 R.
p.f.: circa 122 ‘C. Nero mordente 11 . C20H12N3NaO7S. (Mr 461,4).
Conservare al riparo dalla luce. 1056800. [1787-61-7]. Schultz No. 241. Colour Index
. 1057401. No. 14645. Sodio 2-idrossi-1-1[(1-idrossi-2-naftil)azo]-
6-nitronaftalen-4-solfonato. Nero eriocromo.
b-Naftolo soluzione

Disciogliere 5 g di -naftolo R ricristallizzato

di recente in 40 ml di sodio idrossido soluzione Polvere nero-brunastra, solubile in acqua e in alcool.
diluita R e diluire a 100 ml con acqua R. Preparare Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al
immediatamente prima dell'uso. riparo dalla luce.
b-Naftolo soluzione R1 . 1057402. Nero mordente 11 miscela composta . 1056801.
Disciogliere 3,0 mg di -naftolo R in 50 ml di acido Mescolare 1 g di nero mordente 11 R con 99 g di
solforico R e diluire a 100,0 ml con lo stesso acido. sodio cloruro R.
Usare una soluzione preparata di recente.
Saggio di sensibilita© . Disciogliere 50 mg in 100 ml
Naringina .C27H32O14.(Mr 580,5).1137300. di acqua R. La soluzione e© violetto-brunastra. Per
[10236-47-2]. 7-[[2-O-(6-desossi- -l-mannopiranosil)-
a aggiunta di 0,3 ml di ammoniaca diluita R1 la solu-
b -d-glucopiranosil]ossi]-5-idrossi-2-(4-idrossifenil)-2,3- zione vira al blu. Per aggiunta successiva di 0,1 ml
diidro-4H-cromen-4-one. di una soluzione (10 g/l) di magnesio solfato R, la
Polvere cristallina bianca o quasi bianca, poco solubile soluzione vira al violetto.
in acqua, solubile in metanolo e in dimetilformammide. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso,
p.f.: circa 171 ‘C. al riparo dalla luce.

466
 Reattivi

inoizircserP
trans . C15H26O. (Mr 222,4). 1107900. . 1058305.

ilareneG
-Nerolidolo Ninidrina soluzione R2

[40716-66-3]. 3,7,11-Trimetildodeca-1,6,10-trien-3-olo. Disciogliere 3 g di ninidrina R in 100 ml di una

Liquido leggermente giallo, con leggero odore di giglio soluzione (45,5 g/l) di sodio metabisolfito R.
e giglio della valle, praticamente insolubile in acqua e . 1058306.
in glicerolo, miscibile con alcool.
Ninidrina soluzione R3

Soluzione 4 g/l in una miscela di 5 volumi di acido

isilanA id
idoteM
d2020 : circa 0,876. acetico anidro R e 95 volumi di butanolo R.
n20D : circa 1,479. Ninidrina e stagno(-oso) cloruro reattivo . 1058301.
p.e.12: da 145 ‘C a 146 ‘C. Disciogliere 0,2 g di ninidrina R in 4 ml di acqua R
Il trans-nerolidolo utilizzato in gas cromatografia soddi- calda, aggiungere 5 ml di una soluzione (1,6 g/l)

irotinetnoC
di stagno(-oso) cloruro R, lasciare a riposo per

/ ilairetaM
sfa all'ulteriore saggio seguente:
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas 30 min, poi filtrare e conservare ad una tempera-
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- tura di 2-8 ‘C. Immediatamente prima dell'uso
fia Arancio amaro fiore essenza (1175), usando la diluire 2,5 ml della soluzione con 5 ml di acqua R
sostanza da esaminare come soluzione in esame. L'area e 45 ml di 2-propanolo R.
del picco principale non e© inferiore al 90,0 per cento .

ivittaeR
Ninidrina e stagno(-oso) cloruro reattivo R1

dell'area totale dei picchi. 1058302.

. Vedere lega nichel-alluminio R. Disciogliere 4 g di ninidrina R in100 ml di glicole eti-
lenico monometiletere R. Agitare leggermente con
Nichel alluminio lega

Nichel cloruro . NiCl2. (Mr 129,6). 1057900. [7718-54-9]. 1 g di resina a scambio cationico R (300-840 mm)
Nichel cloruro, anidro.

itnemogrA
e filtrare (soluzione a). Disciogliere 0,16 g di sta-

ilareneG
Polvere cristallina, gialla, solubilissima in acqua, solu- gno(-oso) cloruro R in 100 ml di tampone soluzione
bile in alcool. Sublima in assenza di aria e assorbe velo- a pH 5,5 R (soluzione b). Immediatamente prima
cemente ammoniaca. La soluzione acquosa e© acida. dell'uso, mescolare volumi uguali di ciascuna solu-
. NiSO4.7H2O. (Mr 280,9). 1058000. zione.

eifargonoM
Nichel solfato

[10101-98-1]. Nichel solfato eptaidrato.

ilareneG
. C6H6N2O2. (Mr 138,1). 1058600. [100-01-6].
Polvere cristallina o cristalli verdi, molto solubili in
Nitroanilina

4-Nitroanilina.
acqua, poco solubili in alcool. Polvere cristallina, giallo brillante, molto poco solubile
Nicotinamide-adenina dinucleotide . C21H27N7O14P2. in acqua, moderatamente solubile in acqua bollente,

ehcituecamraF
(Mr 663). 1108100. [53-84-9]. NAD+. solubile in alcool e in etere, forma sali solubili in acqua
Polvere bianca, molto igroscopica, molto solubile in con acidi minerali forti.

emroF
acqua. p.f.: circa 147 ‘C.
Nicotinamide-adenina dinucleotide soluzione . .
1108101.
Nitroanilina diazotata soluzione

Disciogliere 0,4 g di nitroanilina R in 60 ml di acido clo-

Disciogliere 40 mg di nicotinamide-adenina dinu- ridrico 1 M; raffreddare a 15 ‘C e aggiungere una solu-
eiretaM

emirP
cleotide R in acqua R e diluire a 10 ml con lo stesso zione (100 g/l) di sodio nitrito R finchë una goccia della
solvente. Preparare immediatamente prima del- miscela colori in azzurro l'amido iodata cartina R. Pre-
l'uso. parare la soluzione di recente.
. C7H5NO3. (Mr 151,1). 1058700.
ehcituecamraF

. C9H4O3.H2O. (Mr 178,1). 1058300. [485-47-2].

inoizaraperP

Nitrobenzaldeide
ehcificepS

Ninidrina

1,2,3-Indantrione monoidrato. [552-89-6]. 2-Nitrobenzaldeide.

Polvere cristallina, bianca o giallo molto pallido, solu- Aghi gialli, poco solubili in acqua, molto solubili in
bile in acqua e in alcool, poco solubile in etere. alcool, solubili in etere, volatili in corrente di vapore.
Conservare al riparo dalla luce. p.f.: circa 42 ‘C.
ehcitapoemO
inoizaraperP

. 1058303. Nitrobenzaldeide cartina . 1058701.

Disciogliere 0,2 g di nitrobenzaldeide R in 10 ml di
Ninidrina soluzione

Soluzione 2 g/l di ninidrina R in una miscela di una soluzione (200 g/l) di sodio idrossido R. Usare
5 volumi di acido acetico diluito R e 95 volumi di la soluzione entro 1 h. Immergere la meta© inferiore
butanolo R. di una striscia di carta da filtro lenta lunga 10 cm
Ninidrina soluzione R1 . 1058304. e larga 0,8-1 cm. Lasciare assorbire il reattivo in
ecidnI

Disciogliere 1,0 g di ninidrina R in 50 ml di alcool R eccesso tra due fogli di carta da filtro. Usare entro
e aggiungere 10 ml di acido acetico glaciale R. pochi minuti dalla preparazione.

467
Reattivi

Nitrobenzaldeide soluzione . 1058702. Nitro-vanadomolibdico reattivo . 1060100.

Aggiungere 0,12 g di nitrobenzaldeide R polveriz- Soluzione I. Disciogliere 10 g di ammonio molibdato R
zata a 10 ml di sodio idrossido soluzione diluita R; in acqua R, aggiungere 1 ml di ammoniaca R e diluire a
lasciare a riposo per 10 min agitando di frequente 100 ml con acqua R.
e filtrare. Preparare immediatamente prima del-
l'uso. Soluzione II. Disciogliere 2,5 g di ammonio vanadato R
in acqua R calda, aggiungere 14 ml di acido nitrico R e
Nitrobenzene . C6H5NO2. (Mr 123,1). 1058800. [98-95-3]. diluire a 500 ml con acqua R.
Liquido incolore o lievemente giallo, praticamente A 96 ml di acido nitrico R aggiungere 100 ml della solu-
insolubile in acqua, miscibile con alcool e con etere. zione I e 100 ml della soluzione II e diluire a 500 ml
p.e.: circa 211 ‘C. con acqua R.
Dinitrobenzene. A 0,1 ml aggiungere 5 ml di acetone R, N . C4H10N2O3. (Mr 134,1).
5 ml di acqua R e 5 ml di sodio idrossido soluzione con- -Nitrosodietanolammina

1129800. [1116-54-7]. 2,2'-(Nitrosoimino)dietanolo.

centrata R. Agitare e lasciare a riposo. Lo strato supe-
riore e© quasi incolore. Liquido giallo, miscibile con etanolo.
Nitrobenzile cloruro . C7H6ClNO2. (Mr 171,6). 1059000. n20D : circa 1,485.
[100-14-1]. 4-Nitrobenzile cloruro.
Cristalli gialli pallidi, lacrimogeni, praticamente inso- p.e.: circa 125 ‘C.
lubili in acqua, solubilissimi in alcool e in etere. Nitrosodipropilammina . C6H14N2O. (Mr 130,2). 1099900.
Nitrobenzoile cloruro . C7H4ClNO3. (Mr 185,6). [621-64-7].Dipropilnitrosammina.
1058900. [122-04-3]. 4-Nitrobenzoile cloruro. Liquido, solubile in etanolo, in etere e negli acidi forti.
Cristalli gialli o massa cristallina, che si decompongono d2020 : circa 0,915.
in aria umida, completamente solubili nelle soluzioni
di sodio idrossido dando luogo ad una colorazione p.e.: circa 78 ‘C.
arancione-giallastra. Reattivo di qualita© idonea per la determinazione della
p.f.: circa 72 ‘C. chemiluminescenza.
. C12H10N2O2. (Mr 214,2).
. 1099901.
4-(4-Nitrobenzil)piridina

1101900. [1083-48-3]. Nitrosodipropilammina soluzione

Polvere gialla. Iniettare 78,62 g di etanolo R attraverso il setto di

p.f.: circa 70 ‘C. una fiala contenente nitrosodipropilammina R.
Nitrocromico reattivo . 1059100. Diluire 1 a 100 con etanolo R e porre aliquote da
Disciogliere 0,7 g di potassio dicromato R in acido 0,5 ml in fiale sigillate per compressione.
nitrico R e diluire a 100 ml con lo stesso acido. Conservare al buio a 5 ‘C.
Nitroetano . C2H5NO2. (Mr 75,1). 1059200. [79-24-3].
Liquido incolore, oleoso, limpido. . C9H21N. (Mr 143,3). 1139800. [120-20-9].
p.e.: circa 114 ‘C.
Nonilammina

1-Amminononano.
Nitrofurantoina . 1099700. [67-20-9].Vedere la monogra- Liquido chiaro, incolore, corrosivo.
fia Nitrofurantoina (0101).
Nitrofurfuraldiacetato . Vedere (5-nitro-2-furil)metilene d2020 : circa 0,788.
diacetato R. n20D : circa 1,433.
(5-Nitro-2-furil)metilene diacetato . C9H9NO7. (Mr 243,2).
1099800. [92-55-7]. Nitrofurfurale diacetato. 5-Nitrofur- Nordazepam . C15H11ClN2O. (Mr 270,7). 1060200.
furilidene diacetato. [340-57-8]. 7-Cloro-2,3-diidro-5-fenil-1H-1,4-benzodia-
Cristalli gialli. zepin-2-one.
p.f.: circa 90 ‘C. Polvere cristallina bianca o giallo pallido, praticamente
Nitrometano . CH3NO2. (Mr 61,0). 1059700. [75-52-5]. insolubile in acqua, poco solubile in alcool.
Liquido oleoso, incolore, limpido, poco solubile in p.f.: circa 216 ‘C.
acqua, miscibile con alcool e con etere.
d2020 : da 1,132 a 1,134. DL-Norleucina . C6H13NO2. (Mr 131,2). 1060300.
n20D : da 1,381 a 1,383. [616-06-8]. Acido (RS)-2-Amminoesanoico.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per Cristalli lucenti, moderatamente solubili in acqua e in
cento distilla tra 100 ‘C e 103 ‘C. alcool, solubili negli acidi.

468
 Reattivi

inoizircserP
. 1060500. [912-60-7]. Vedere la . C2H4O. (Mr 44,05). 1036400. [75-21-8].

ilareneG
Noscapina cloridrato Ossido di etilene

monografia Noscapina cloridrato (0515). Ossirano.

Oleammide . C18H35NO. (Mr 281,5). 1060900. Gas infiammabile, incolore, solubilissimo in acqua e in
(Z)-Ottadec-9-enoammide. etanolo.
Polvere o granuli giallastri o bianchi, praticamente Punto di liquefazione: circa 12 ‘C.

isilanA id
insolubili in acqua, solubilissimi in diclorometano,

idoteM
. 1036401.
solubili in etanolo.
Ossido di etilene soluzione madre

p.f.: circa 80 ‘C. Tutte le operazioni necessarie per la preparazione di

. 1074600. Vedere la monografia Olio di queste soluzioni devono essere effettuate sotto cappa.
Olio di colza

colza, raffinato (1369). L'operatore deve proteggersi le mani e il viso indos-

sando guanti protettivi di polietilene ed un'idonea

irotinetnoC
/ ilairetaM
Olio di girasole . 1086900. Vedere la monografia Olio di maschera. Conservare le soluzioni in un recipiente
girasole, raffinato (1371). ermeticamente chiuso in frigorifero a 4-8 ‘C. Effet-
Olio di mais . 1050400. Vedere la monografia Olio di tuare tutte le determinazioni tre volte.
mais, raffinato (1342). In una provetta pulita e asciutta, raffreddata in una
Olio di oliva . 1061000. [8001-25-0]. Vedere la monogra- miscela di 1 parte di sodio cloruro R e 3 parti di
fia Olio di oliva vergine (0518).

ivittaeR
. 1068200. ghiaccio frantumato, introdurre un basso flusso di
Olio di ricino poliossietilato

Liquido giallo chiaro. Diventa limpido al di sopra dei ossido di etilene R gas, lasciando che si formi una
26 ‘C. condensazione sulla parete interna della provetta.
. 1062000. [8042-47-5]. Vedere la mono- Usando una siringa di vetro, precedentemente raf-
Olio di vaselina

grafia Paraffina liquida (0239). freddata a ^10 ‘C, iniettare circa 300 l (corrispon-

itnemogrA
m

ilareneG
. Ho2O3. (Mr 377,9). 1043100. [12055-62-8]. denti a circa 0,25 g) di ossido di etilene R liquido in
Olmio ossido

Diolmio triossido. 50 ml di macrogol 200 R1. Determinare la quantita©

Polvere giallastra, praticamente insolubile in acqua. di ossido di etilene assorbita pesando prima e dopo
. 1043101. l'assorbimento (Meo). Diluire a 100,0 ml con macro-
Olmio perclorato soluzione
gol 200 R1. Mescolare bene prima dell'uso.

eifargonoM
Soluzione (40 g/l) di olmio ossido R in una solu-

ilareneG
zione di acido perclorico R contenente 141 g/l di Determinazione quantitativa. In un recipiente
HClO4. adatto, a 10 ml di una sospensione (500 g/l)
C5H11NO2S. (Mr 135,2). 1136100. [454- di magnesio cloruro R in etanolo R aggiungere
DL-Omocisteina.

29-5]. Acido (2RS)-2-ammino-4-sulfanilbutanoico. 20,0 ml di acido cloridrico alcoolico 0,1M. Chiudere

ed agitare fino ad ottenere una soluzione satura e

ehcituecamraF
Polvere cristallina, bianca. lasciare a riposo durante la notte per raggiungere

emroF
p.f.: circa 232 ‘C. l'equilibrio. Pesare 5,00 g di ossido di etilene solu-
L-Omocisteina tiolattone cloridrato . C4H8ClNOS. zione madre R (2,5 g/l) nel recipiente e lasciare a
(Mr 153,6). 1136200. [6038-19-3]. (3S)-3-amminodiidro- riposo per 30 min. Titolare con potassio idrossido
tiofen-2(3H)-one cloridrato. soluzione alcoolica 0,1 M determinando il punto di
Polvere cristallina, bianca. fine titolazione potenziometricamente (2.2.20).
eiretaM
p.f.: circa 202 ‘C.

emirP
. C7H8O2.H2O. (Mr 142,2). 1108700. [6153-39-5]. Effettuare una titolazione del bianco, sostituendo
Orcinolo

5-Metilbenzen-1,3-diolomonoidrato. la sostanza in esame con la stessa quantita© di

Polvere cristallina, sensibile alla luce. macrogol 200 R1.
Il contenuto di ossido di etilene in milligrammi per
ehcituecamraF

p.e.: circa 290 ‘C.

inoizaraperP

ehcificepS

p.f.: da 58 ‘C a 61 ‘C. grammo e© dato da:

Oro cloruro . HAuCl4.3H2O (Mr 393,8). Idrogenotetra-
cloroaurato. V0 V1 f 4; 404
ÿ † 2 2

Cristalli gialli, igroscopici, solubilissimo in acqua, solu- m

ehcitapoemO
inoizaraperP

bile in alcool e in etere.

. OsO4. (Mr 254,2).1061200.[20816-12-0]. dove V0 e V1 sono i volumi di potassio idrossido
soluzione alcoolica usati rispettivamente per la
Osmio tetrossido

Aghi giallo chiaro o massa cristallina gialla, igrosco-

pici, sensibili alla luce, solubili in acqua, in alcool titolazione in bianco e per la determinazione quan-
ed in etere. titativa,
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. f = fattore di molarita© del potassio idrossido solu-
Osmio tetrossido soluzione. 1061201. zione alcoolica,
ecidnI

Soluzione 2,5 g/l in acido solforico 0,05 M. m = massa del campione prelevata (g).

469
Reattivi

Ossido di etilene soluzione. 1036402. Polvere cristallina bianca o leggermente giallastra, pra-
Pesare una quantita© di ossido di etilene soluzione ticamente insolubile in acqua, solubilissima in acetone
madre R raffreddata equivalente a 2,5 mg di ossido ed in esano, poco solubile in metanolo.
di etilene in un recipiente freddo e diluire a 50,0 g p.f.: da 49 ‘C a 55 ‘C.
con macrogol 200 R1. Mescolare bene e diluire . C8H18O. (Mr 130,2). 1060700. [111-87-5].
Ottanolo

2,5 g di questa soluzione a 25,0 ml con macrogol 1-Ottanolo. Alcool caprilico.

200 R1 (5 g di ossido di etilene per grammo
l
Liquido incolore, insolubile in acqua, miscibile con
di soluzione). Preparare immediatamente prima alcool e con etere.
dell'uso. d2020 : circa 0,828.
Ossido di etilene soluzione R1 . 1036403. p.e.: circa 195 ‘C.
Diluire 1,0 ml di ossido di etilene soluzione madre R . C8H16O. (Mr 128,2). 1114600. [106-68-3].
raffreddata (controllare il volume esatto per
3-Ottanone

Etilpentilchetone.
pesata) a 50,0 ml con macrogol 200 R1. Mescolare Liquido incolore con odore caratteristico.
bene e diluire 2,5 g di questa soluzione a 25,0 ml d2020 : circa 0,822.
con macrogol 200 R1. Calcolare la quantita© esatta
di ossido di etilene in ppm dal volume determinato n20D : circa 1,415.
per pesata e considerando che la densita© del macro- p.e.: circa 167 ‘C.
gol 200 R1 e© 1,127. Preparare immediatamente Il 3-ottanone utilizzato in gas cromatografia soddisfa
prima dell'uso. all'ulteriore saggio seguente:
Ossido di etilene soluzione R2 . 1036404. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Pesare 1,00 g di ossido di etilene soluzione madre R cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
fredda (equivalente a 2,5 mg di ossido di etilene) fia Lavanda essenza (1338).
in una beuta fredda contenente 40,0 g di macrogol Soluzione in esame. La sostanza da esaminare.
200 R1 freddo. Mescolare e determinare la massa L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per
esatta e diluire ad una massa calcolata per ottenere cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte-
una soluzione contenente 50 g di ossido di etilene
l nuto.
per grammo di soluzione. Pesare 10,00 g in una . C34H62O11 (media). (Mr 647). 1060800.
beuta contenente circa 30 ml di acqua R, mescolare
Ottoxinolo 10

e diluire a 50,0 ml con acqua R (10 g/ml di ossido

[9002-93-1]. -[4-(1,1,3,3-Tetrametilbutil)fenil]- -idros-
a x
l

di etilene). Preparare immediatamente prima del-

sipoli-(ossietilene).
l'uso. Liquido viscoso, limpido, giallo pallido, miscibile con
acqua, con acetone e con alcool, solubile in toluene.
Ossido di etilene soluzione R3 . 1036405. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
Diluire 10,0 ml di ossido di etilene soluzione R2 a . Pd. (Ar 106,4). 1114700. [7440-05-3].
50,0 ml con acqua R (2 g/ml di ossido di etilene).
Palladio
l

Preparare immediatamente prima dell'uso. Metallo bianco grigio, solubile in acido cloridrico.
. PdCl2. (Mr 177,3). 1061500. [7647-10-1].
Palladio cloruro

Ossido di magnesio pesante. 1050000. [1309-48-4]. Cristalli rossi.

Vedere monografia Magnesio ossido pesante (0041). p.f.: da 678 ‘C a 680 ‘C.
Ossido di propilene . C3H6O. (Mr 58,1). 1121800. [75-56-9]. Palladio cloruro soluzione. 1061501.
Liquido incolore, miscibile con alcool. Disciogliere 1 g di palladio cloruro R in 10 ml di
. O2. (Mr 32,00). 1108800. Contiene non meno acido cloridrico R caldo. Diluire la soluzione a
250 ml con una miscela di volumi uguali di acido
Ossigeno

del 99 per cento V/V di O2.

Azoto e argon. Meno di 100 ppm. cloridrico diluito R e acqua R. Immediata-
mente prima dell'uso diluire questa soluzione con
Carbonio diossido. Meno di 10 ppm. 2 volumi di acqua R.
Carbonio monossido. Meno di 5 ppm. . 1061700. Vedere la monografia Pan-
. O2. (Mr 32,00). 1137600.
Pancreas polvere
Ossigeno R1 creas polvere (0350).
Contiene non meno del 99 per cento V/V di O2. Papaverina . 1061800. [61-25-6]. Vedere la
cloridrato

Ottadecile monografia Papaverina cloridrato (0102).

3-[3,5-di-(1,1-dimetiletil)-4-idrossifenil]pro-

. C35H62O3. (Mr 530,9) 1060600. [2082-79-3].

pionato Paracetamolo. 1061900. [103-90-2]. Vedere la monogra-
Ottadecile 3-(3,5-di-tert-butil-4-idrossifenil)propionato. fia Paracetamolo (0049).

470
 Reattivi

inoizircserP
. 1061901. Polvere cristallina bianca, molto poco solubile in

ilareneG
Paracetamolo esente da 4-amminofenolo

Ricristallizzare il paracetamolo R da acqua R e sec- acqua, solubilissima in diclorometano, solubile in

care sotto vuoto a 70 ‘C; ripetere il procedimento metanolo.
22 : 71,4, determinato su una soluzione 2,2 g/l in
finchë il prodotto soddisfa al saggio seguente: ‰
D
Š ÿ

disciogliere 5 g di sostanza essiccata in una miscela diclorometano R.

isilanA id
idoteM
di volumi uguali di metanolo R e di acqua R e p.f.: da 115 ‘C a 116 ‘C.
diluire a 100 ml con la stessa miscela di solventi.
Aggiungere 1 ml di una soluzione, preparata di Assorbanza (2.2.25). Una soluzione 0,01 g/l in alcool R
recente, contenente 10 g/l di sodio nitroprussiato R mostra un massimo di assorbimento a 214 nm.
e 10 g/l di sodio carbonato anidro R, mescolare e Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro-

irotinetnoC
/ ilairetaM
lasciare a riposo per 30 min proteggendo dalla matografia liquida (2.2.29), come prescritto nella
luce. Non si sviluppa alcuna colorazione blu o monografia Tanaceto (1516), alla concentrazione della
verde. soluzione di riferimento. Il contenuto di partenolide
non e© inferiore al 90 per cento calcolato mediante la
Paraffina liquida . 1062000. [8042-47-5].Vedere la mono- procedura di normalizzazione.

ivittaeR
grafia Paraffina liquida (0239). Penicillasi soluzione . 1062300.
Paraffina bianca molle . 1062100. Disciogliere 10 g di caseina idrolizzata, 2,72 g di potas-
Miscela semiliquida di idrocarburi ottenuta dal petro- sio fosfato monobasico R e 5,88 g di sodio citrato R in
lio e sbiancata, praticamente insolubile in acqua ed in 200 ml di acqua R, portare il pH a 7,2 con una soluzione

itnemogrA
(200 g/l) di sodio idrossido R e diluire a 1000 ml con

ilareneG
alcool, solubile in etere ed in etere di petrolio R1, le cui
soluzioni presentano a volte una leggera opalescenza. acqua R. Disciogliere 0,41 g di magnesio solfato R in
5 ml di acqua R e aggiungere 1 ml di una soluzione
Pararosanilina cloridrato . C19H18ClN3. (Mr 323,8). (1,6 g/l) di ferro(-oso) ammonico solfato R e acqua R
1062200. [569-61-9]. Schultz No. 779. Colour Index No. fino a 10 ml. Sterilizzare entrambe le soluzioni per
42500. 4-[Di(4-amminofenil)metilen]cicloesa-2,5-dien-

eifargonoM
riscaldamento in autoclave, raffreddare, mescolare,

ilareneG
imminio cloruro. distribuirle in strati sottili in beute ed inoculare con
Polvere cristallina rosso-bluastra, poco solubile in Bacillus cereus (NCTC 9946). Lasciare a riposo le beute
acqua, solubile in etanolo, praticamente insolubile in tra 18 ‘C e 37 ‘C finchë la crescita risulti evidente e poi
etere. Le soluzioni in acqua e in etanolo sono rosso mantenere a 35-37 ‘C per 16 h, agitando costantemente

ehcituecamraF
scuro; le soluzioni in acido solforico ed in acido clori- per assicurare la massima areazione. Centrifugare e ste-

emroF
drico sono gialle. rilizzare il liquido sopranatante per filtrazione su un fil-
tro a membrana. 1,0 ml di penicillasi soluzione contiene
p.f.: circa 270 ‘C, con decomposizione. non meno di 0,4 microkatal (corrispondenti all'idrolisi
. 1062201. di non meno di 500 mg di benzilpenicillina ad acido
Pararosanilina soluzione decolorata
benzilpenicilloico per ora) a 30 ‘C e a pH 7, purchë

eiretaM
In una beuta con tappo a smeriglio, a 0,1 g di la concentrazione di benzilpenicillina non scenda

emirP
pararosanilina cloridrato R aggiungere 60 ml di al di sotto del livello necessario per la saturazione
acqua R e una soluzione di 1,0 g di sodio solfito ani- enzimatica.
dro R o 2,0 g di sodio solfito R o 0,75 g di sodio La costante di Michaelis per la benzilpenicillina della
metabisolfito R in 10 ml di acqua R. Aggiungere
ehcituecamraF
inoizaraperP

penicillasi nella penicillasi soluzione e© approssimativa-

ehcificepS

lentamente, sotto agitazione, 6 ml di acido clori- mente 12 g per millilitro.

drico diluito R, chiudere la beuta e continuare
ad agitare fino a dissoluzione completa. Diluire a Sterilita© (2.6.1). Soddisfa al saggio di sterilita© .
100 ml con acqua R. Lasciare a riposo per 12 h Conservare a una temperatura compresa tra 0 ‘C e 2 ‘C
prima dell'uso.
ehcitapoemO

ed utilizzare entro 2-3 giorni. Se liofilizzata e mante-

inoizaraperP

Conservare al riparo dalla luce. nuta in fiale sigillate, si conserva per diversi mesi.
Pentaeritritile tetrakis[3-3,5-di(1,1-dimetiletil)-4-idros-

Partenolide. C15H20O3. (Mr 248,3).1129900. [20554-84-1]. sifenil]propionato. C73H108O12. (Mr 1178). 1062400.
(4E)-(1aR,7aS,10aS,10bS)-1a,5-Dimetil-8-metilen-2,3,6, [6683-19-8]. Pentaeritritile tetrakis[3-(3,5-di-tert-butil-
7,7a,8,10a,10b-ottaidro-ossireno[9,10]ciclodeca[1,2-b] 4-idrossifenil)propionato]. 2,2'-bis (Idrossimetil) pro-
ecidnI

furan-9(1aH)-one. (E)-(5S,6S)-4,5-Epossigermacra-1 (10), pan-1,3-diol tetrakis [3-[3,5-di (1,1-dimetiletil)-4-idros-

11(13)-dieno-12(6)-lattone. sifenil]]propionato.

471
Reattivi

Polvere cristallina da bianca a giallo chiaro, pratica- Piastrinico sostituto . Vedere sostituto piastrinico R.
mente insolubile in acqua, solubilissima in acetone, . C14H18O7. (Mr 298,3). 1130700. [530-14-3].
solubile in metanolo, poco solubile in esano.
Piceina

1-[4-( -d-Glucopiranosilossi)fenil]etanone.
b

p.f.: da 110 ‘C a 125 ‘C. p-(Acetilfenil)- -d-glucopiranoside.

b

p.f.: da 194 ‘C a 195 ‘C.

Forma : da 120 ‘C a 125 ‘C.
a
a-Pinene . C10H16. (Mr 136,2). 1130800. [7785-70-8].
Forma : da 110 ‘C a 115 ‘C.
b (1R,5R)-2,6,6-Trimetilbiciclo[3.1.1]ept-2-ene.
. C5H12. (Mr 72,2). 1062500. [109-66-0]. Liquido immiscibile con acqua.
Pentano
d2020 : circa 0,859.
Liquido infiammabile, limpido, incolore, molto poco n20D : circa 1,466.
solubile in acqua, miscibile con acetone, con etanolo e p.e.: da 154 ‘C a 156 ‘C.
con etere. L'a-pinene utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
d2020 : circa 0,63. teriore saggio seguente.
n20D : circa 1,359. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
p.e.: circa 36 ‘C. fia Arancio amaro fiore essenza (1175) usando la
Il pentano utilizzato in spettrofotometria soddisfa all'ul- sostanza da esaminare come soluzione in esame. L'area
teriore requisito seguente: del picco principale non e© inferiore al 99,0 per cento
dell'area totale dei picchi.
Trasmittanza minima (2.2.25), determinata usando b-Pinene . C10H16. (Mr 136,2). 1109000. [19902-08-0].
acqua R come bianco: 6,6-Dimetil-2-metilenbiciclo[3.1.1]eptano.
20 per cento a 200 nm, Liquido oleoso incolore, con un odore simile alla tre-
mentina, praticamente insolubile in acqua, miscibile
50 per cento a 210 nm, con alcool e con etere.
85 per cento a 220 nm, d2020 : circa 0,867.
n20D : circa 1,474.
93 per cento a 230 nm, p.e.: da 164 ‘C a 166 ‘C.
98 per cento a 240 nm. Il -pinene utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
. C5H12O. (Mr 88,1). 1062600. [71-41-0]. teriore saggio seguente:
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Pentanolo

1-Pentanolo. Alcool amilico normale.

cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
Liquido incolore, moderatamente solubile in acqua, fia Arancio amaro fiore essenza (1175), usando la
miscibile con alcool e con etere. sostanza da esaminare come soluzione in esame. L'area
n20D : circa 1,410. del picco principale non e© inferiore al 99,0 per cento
dell'area totale dei picchi.
p.e.: circa 137 ‘C. Piombo acetato . C4H6O4Pb.3H2O. (Mr 379,3). 1048100.
. 1062800. [9001-75-6]. Vedere la mono- [6080-56-4]. Piombo diacetato triidrato.
Cristalli incolori, efflorescenti, molto solubili in acqua,
Pepsina polvere

grafia Pepsina polvere (0682).

solubili in alcool.
Perilene . C20H12. (Mr 252,3). 1130100. [198-55-0]. . 1048102.
Dibenzo-(de,kl)antracene. Piombo acetato cartina

Immergere la carta da filtro, del peso di circa 80 g

Polvere arancione. per metro quadrato, in una miscela di 1 volume di
p.f.: circa 279 ‘C. acido acetico diluito R e 10 volumi di piombo ace-
tato soluzione R. Dopo aver asciugato la carta,
Permetrina . C21H20Cl2O3. (Mr 391,3). 1130000. tagliarla in strisce di 15 mm 40 mm.
2

[52645-53-1].
p.f.: da 34 ‘C a 35 ‘C. Piombo acetato cotone . 1048101.
Immergere il cotone assorbente in una miscela di
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di 1 volume di acido acetico diluito R e 10 volumi di
riferimento (10 ng/ml in cicloesano). piombo acetato soluzione R. Eliminare l'eccesso di

472
 Reattivi

inoizircserP
liquido, senza strizzare il cotone, ponendolo su . C15H11N3O. (Mr 249,3). 1073500.

ilareneG
Piridilazonaftolo

parecchi strati di carta da filtro. Lasciar asciugare [85-85-8]. 1-(2-Piridilazo)-2-naftolo.

all'aria. Polvere rosso mattone, praticamente insolubile in
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. acqua, solubile in alcool, in metanolo e nelle soluzioni
. 1048103. alcaline diluite calde.

isilanA id
p.f.: circa 138 ‘C.

idoteM
Piombo acetato soluzione

Soluzione 95 g/l in acqua esente da anidride carbo- Piridilazonaftolo soluzione . 1073501.

nica R. Soluzione 1 g/l in etanolo R.
. PbO2. (Mr 239,2). 1048200. [1309-60-0]. Saggio di sensibilita© . A 50 ml di acqua R aggiungere

irotinetnoC
Piombo diossido

10 ml di tampone acetato soluzione a pH 4,4 R,

/ ilairetaM
Polvere marrone scuro, che sviluppa ossigeno se riscal- 0,10 ml di sodio edetato 0,02 M e 0,25 ml di piridila-
data, praticamente insolubile in acqua, solubile in zonaftolo soluzione. Dopo aggiunta di 0,15 ml di
acido cloridrico con sviluppo di cloro, solubile in acido una soluzione (5 g/l) di rame(-ico) solfato R, la
nitrico diluito in presenza di idrogeno perossido, di colorazione vira dal giallo chiaro al violetto.
acido ossalico o di altri agenti riducenti, solubile nelle
soluzioni concentrate calde di idrossidi alcalini.

ivittaeR
4-(2-Piridilazo)resorcinolo sale monosodico .
Piombo nitrato . Pb(NO3)2. (Mr 331,2). 1048300. C11H8N3NaO2.H2O. (Mr 255,2). 1131500. [16593-81-0].
[10099-74-8]. Piombo dinitrato. Polvere cristallina arancione.
Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, molto Piridina . C5H5N. (Mr 79,1). 1073200. [110-86-1].
solubili in acqua.

itnemogrA
Liquido incolore, limpido, igroscopico, miscibile con

ilareneG
Piombo nitrato soluzione . 1048301. acqua e con alcool.
Soluzione 33 g/l. p.e.: circa 115 ‘C.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
. 1048400. [1335-32-6]. . 1073300. [110-86-1].

eifargonoM
Piombo sottoacetato soluzione

ilareneG
Piridina anidra

Contiene non meno del 16,7 per cento m/m e non piu© Seccare la piridina R su sodio carbonato anidro R. Fil-
del 17,4 per cento m/m di Pb (Ar 207,2) in una forma trare e distillare.
corrispondente approssimativamente alla formula Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,01 per cento m/m.
C8H14O10Pb3. . C13H24N3O3PS. (Mr 333,4). 1130300.

ehcituecamraF
Pirimifos-etile

Disciogliere 40,0 g di piombo acetato R in 90 ml di [23505-41-1].

emroF
acqua esente da anidride carbonica R. Portare il pH a p.f.: da 15 ‘C a 18 ‘C.
7,5 con sodio idrossido soluzione concentrata R. Centri- Puo© essere utilizzazione un'idonea e certificata solu-
fugare ed usare la soluzione sopranatante limpida e zione di riferimento (10 ng/ l in cicloesano).
incolore. m

. Vedere pirocatecolo R.
La soluzione rimane limpida se conservata in un reci-
Pirocatechina

eiretaM
. C6H6O2. (Mr 110,1). 1073600. [120-80-9].

emirP
piente ben chiuso. Pirocatecolo

Benzen-1,2-diolo.
Piperazina idrata . 1065900. [142-63-2]. Vedere la mono- Cristalli incolori o leggermente gialli, solubili in acqua,
grafia Piperazina idrata (0425). in acetone, in alcool ed in etere.
ehcituecamraF

. C5H11N. (Mr 85,2). 1066000. [110-89-4].

inoizaraperP

p.f.: circa 102 ‘C.

ehcificepS

Piperidina

Esaidropiridina. Conservare al riparo dalla luce.

Liquido alcalino da incolore a leggermente giallo, . C6H6O3. (Mr 126,1). 1073700. [87-66-1].
miscibile con acqua, con alcool, con etere e con etere
Pirogallolo

Benzen-1,2,3-triolo.
di petrolio.
ehcitapoemO

Cristalli bianchi che diventano brunastri per esposi-

inoizaraperP

p.e.: circa 106 ‘C. zione all'aria e alla luce, solubilissimi in acqua, in
. C5H6N2. (Mr 94,1). 1073400. [504-29-0]. alcool ed in etere, poco solubili in carbonio solfuro. Le
soluzioni acquose, e piu© rapidamente le soluzioni alca-
2-Piridilammina

2-Amminopiridina.
line, per esposizione all'aria diventano brune a causa
Cristalli grandi solubili in acqua, in alcool ed in etere. dell'assorbimento di ossigeno.
p.e. : circa 210 ‘C. p.f.: circa 131 ‘C.
ecidnI

p.f.: circa 58 ‘C. Conservare al riparo dalla luce.

473
Reattivi

Pirogallolo soluzione alcalina . 1073701. ago attaccato ad un'appropriata cannula abba-

Disciogliere 0,5 g di pirogallolo R in 2 ml di acqua stanza lunga da raggiungere il fondo del recipiente
esente da anidride carbonica R. Disciogliere 12 g di di raccolta. Scartando i primi millilitri e racco-
potassio idrossido R in 8 ml di acqua esente da ani- gliendo solo il sangue che fluisce liberamente, rac-
dride carbonica R. Mescolare le due soluzioni cogliere il sangue in una quantita© di soluzione anti-
immediatamente prima dell'uso. coagulante contenente 8,7 g/l di sodio citrato R e
4 mg di aprotinina R per 100 ml di acqua R, suffi-
2-Pirrolidone . C4H7NO. (Mr 85,1). 1138000. [616-45-5]. ciente a far si che il rapporto finale tra il sangue e
2-Pirrolidinone. Tetrametilendiammina. la soluzione anticoagulante sia di 19 a 1. Durante
Liquido a temperatura superiore a 25 ‘C, miscibile con e immediatamente dopo la raccolta far ruotare leg-
acqua, con etanolo e con etile acetato. germente il recipiente per assicurare il mescola-
d425 : circa 1,116. mento ma non far schiumeggiare. Quando la rac-
. 1020900. colta e© completa chiudere il recipiente e raffreddare
a 10-15 ‘C. A raffreddamento avvenuto riunire il
Plasma di coniglio citratato

Prelevare il sangue con un'iniezione intracardica da un

coniglio lasciato a digiuno per 12 h, utilizzando una contenuto di tutti i recipienti, ad eccezione di quelli
siringa di plastica con un ago No. 1 contenente un ido- che dovessero mostrare un'evidente emolisi o dei
neo volume di una soluzione (38 g/l) di sodio citrato R coaguli, e mantenere il sangue, riunito, a 10-15 ‘C.
in modo che il rapporto tra il volume finale della solu- Centrifugare, al piu© presto possibile ed entro 4 h
zione citrica e del sangue sia 1 : 9. Separare il plasma dalla raccolta, il sangue riunito a 1000-2000 g a
per centrifugazione a 1500-1800 g, a 15-20 ‘C, per 10-15 ‘C per 30 min. Separare il liquido soprana-
30 min. tante e centrifugare a 5000 g per 30 min. (Una cen-
Conservare a 0-6 ‘C. trifugazione piu© rapida, per esempio a 20000 g per
Utilizzare entro 4 h dalla raccolta. 30 min, potrebbe essere necessaria per chiarificare
. 1066100. il plasma, ma non devono essere usate procedure
Plasma povero in piastrine

Aspirare 45 ml di sangue umano in una siringa di pla- di filtrazione). Separare il liquido sopranatante e,
stica da 50 ml contenente 5 ml di una soluzione sterile subito dopo, mescolare bene e distribuire il plasma
(38 g/l) di sodio citrato R. Centrifugare subito a 1500 g substrato in piccoli contenitori muniti di tappo, in
a 4 ‘C per 30 min. Eliminare i due terzi superiori del porzioni sufficienti ad effettuare il saggio per l'epa-
plasma sopranatante utilizzando una siringa di plastica rina (per esempio 10-30 ml). Subito dopo raffred-
e centrifugare subito a 3500 g a 4 ‘C per 30 min. Elimi- dare rapidamente a una temperatura inferiore a
nare i due terzi superiori del liquido e congelare rapida- ^70 ‘C (per esempio immergendo i contenitori in
mente, in quantita© idonee, in tubi di plastica a una tem- azoto liquido) e conservare a una temperatura infe-
peratura pari o inferiore a ^40 ‘C. Utilizzare apparec- riore a ^30 ‘C.
chiature in materiale plastico o trattate con silicone. Il plasma e© idoneo per essere usato come plasma
. 1066200. substrato nel saggio dell'eparina se, nelle condi-
Plasma substrato

Separare il plasma dal sangue umano o bovino racco- zioni del saggio, da© un tempo di coagulazione
gliendolo in una soluzione (38 g/l) di sodio citrato R appropriato al metodo di rivelazione usato e se for-
pari a un nono del suo volume, o in una soluzione conte- nisce ripide curve logaritmiche dose-effetto ripro-
nente 20 g/l di sodio citrato acido R e 25 g/l di glucosio R ducibili.
pari a due settimi del suo volume. Nel primo caso prepa- Quando richiesto per l'uso, scongelare una por-
rare il substrato il giorno della raccolta del sangue, nel zione del plasma substrato in un b.m. a 37 ‘C, ruo-
secondo, prepararlo entro due giorni dalla raccolta del tando leggermente fino a scongelamento completo;
sangue. una volta scongelato dovrebbe essere mantenuto a
Conservare a ^20 ‘C. 10-20 ‘C e usato immediatamente. Il plasma scon-
. 1066201. gelato puo© essere blandamente centrifugato, se
Plasma substrato R1

Utilizzare attrezzature idrorepellenti (fatte di mate- necessario; non devono essere usate procedure di
riali come plastiche idonee o di vetro appropriata- filtrazione.
mente trattato con silicone) per prelevare e maneg- Plasma substrato R2 . 1066202.
giare il sangue. Preparare da sangue umano contenente meno
Raccogliere un volume idoneo di sangue da almeno dell'1 per cento del normale tasso di fattore IX.
cinque pecore; 285 ml di sangue raccolti in 15 ml Raccogliere il sangue in una soluzione (38 g/l) di
di soluzione anticoagulante rappresentano un sodio citrato R in quantita© pari a un nono del suo
volume idoneo, ma possono essere raccolti volumi volume.
inferiori prelevando il sangue sia da animali vivi Conservare in piccoli quantitativi in tubi di pla-
che al momento della macellazione, utilizzando un stica a una temperatura di ^30 ‘C o inferiore.

474
 Reattivi

inoizircserP
. 1066300. . 1066800.

ilareneG
Plasma substrato privo di fattore V Polidimetilsilossano

Utilizzare preferibilmente plasma che ne e© privo conge- Colla gommosa siliconica (metile). Polimero organosi-
nitamente, o prepararlo come segue: separare il plasma liconico con l'aspetto di una gomma incolore, semili-
dal sangue umano raccolto in una soluzione (13,4 g/l) quida.
di sodio ossalato R pari a un decimo del suo volume. La viscosita© intrinseca, determinata come segue e© circa

isilanA id
Incubare a 37 ‘C per 24-36 h. Il tempo di coagulazione 115 ml g-1. Pesare, approssimando al decimo di mg,

idoteM
determinato con il metodo descritto per il fattore V di
1

1,5 g, 1 g e 0,3 g della sostanza in esame, in palloni

coagulazione del sangue soluzione R dovrebbe essere tarati da 100 ml. Aggiungere 40-50 ml di toluene R, agi-
70-100 s. Se il tempo di coagulazione e© inferiore a 70 s, tare fino a completa dissoluzione della sostanza e
incubare nuovamente per 12-24 h. diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. Determinare

irotinetnoC
/ ilairetaM
Conservare in piccole porzioni a una temperatura di la viscosita© (2.2.9) di ciascuna soluzione. Determinare
^20 ‘C o inferiore. la viscosita© del toluene R nelle stesse condizioni.
. 1109100. [9001-91-6]. Ridurre la concentrazione di ciascuna soluzione a meta©
diluendo con toluene R. Determinare la viscosita© di
Plasminogeno umano

Una sostanza presente nel sangue che puo© essere atti- queste soluzioni.
vata dalla plasmina, un enzima che provoca l'idrolisi

ivittaeR
della fibrina nei coaguli di sangue. c = concentrazione in grammi per 100 ml,
Poli[(cianopropil)(fenil)][dimetil]silossano . 1114800. t1 = tempo di scorrimento della soluzione in esame,
Fase stazionaria per gas cromatografia. Contiene il t2 = tempo si scorrimento del toluene,
6 per cento di gruppi (cianopropil)(fenil) e il 94 per 1 = viscosita© della soluzione in esame in millipa-
cento di gruppi dimetilici.

itnemogrA
scal secondi,

ilareneG
Poli(cianopropil)(fenilmetil)silossano . 1066600. 2 = viscosita© del toluene in millipascal secondi,
Contiene il 90 per cento di gruppi cianopropilici e il
10 per cento di gruppi fenilmetilici. d1 = densita© relativa della soluzione in esame,
Fase stazionaria per gas cromatografia. d2 = densita© relativa del toluene.

eifargonoM
. Per ottenere le densita© relative usare i seguenti dati:

ilareneG
Poli[(cianopropil)(metil)][(fenil)(metil)]silossano

1066500.
Contiene il 25 per cento di gruppi cianopropilici, il
25 per cento di gruppi fenilici e il 50 per cento di gruppi Concentrazione
Densita© relativa (d1)
metilici. (La massa molecolare relativa media e© 8000). (grammi per 100 ml)

ehcituecamraF
Liquido molto viscoso (viscosita© di circa 9000 mPa s). 0-0,5 1,000

emroF
1

d2525 : circa 1,10. 0,5-1,25 1,001

n25D : circa 1,502. 1,25-2,20 1,002
Poli[(cianopropil)metilfenil]metilsilossano Vedere po- 2,20-2,75 1,003
li[(cianopropil)(metil)][(fenil)(metil)]silossano R. 2,75-3,20 1,004
. 3,20-3,75 1,005

eiretaM

emirP
Poli(cianopropil)(7)(fenil)(7)(metil)(86)silossano

1109200. 3,75-4,50 1,006

Polisilossano sostituito con il 7 per cento di gruppi cia-
nopropilici, il 7 per cento di gruppi fenilici e l'86 per La viscosita© specifica si ottiene dall'equazione:
cento di gruppi dimetilici.
ehcituecamraF

  td
inoizaraperP

sp 1 2 1 1 1
ehcificepS

Fase stazionaria per gas cromatografia. ˆ


ÿ

td
ˆ
2 2
ÿ

Poli(cianopropil)silossano . 1066700 2
Polisilossano sostituito con il 100 per cento di gruppi e la viscosita© ridotta da:
cianopropilici. 
. 1100000.
ehcitapoemO

red ˆ sp
inoizaraperP

c
Poli(dimetil)(difenil)(divinil)silossano

Contiene il 94 per cento di gruppi metilici, il 5 per cento

di gruppi fenilici e l'1 per cento di gruppi vinilici. SE54. La viscosita© intrinseca () e© ottenuta per estrapolazione
Fase stazionaria per gas cromatografia. dall'equazione precedente a c = 0. Cio© si fa disegnando
Poli(dimetil)(difenil)silossano . 1066900. la curva di sp/c o log sp/c in funzione di c. L'estrapola-
Contiene il 95 per cento di gruppi metilici e il 5 per zione a c = 0 da© . La viscosita© intrinseca e© espressa in
g
cento di gruppi fenilici, DB-5, SE52.
ecidnI

millilitri per grammo; il valore ottenuto deve percio©

Fase stazionaria per gas cromatografia. essere moltiplicato per 100.

475
Reattivi

Esaminare mediante spettofotometria di assorbimento Porpora m-cresolo soluzione . 1121701.

infrarosso (2.2.24). Deporre la sostanza, dispersa, se Disciogliere 0,1 g di porpora m-cresolo R in 13 ml di
necessario, in qualche goccia di carbonio tetraclo- sodio idrossido 0,01 M, diluire a 100 ml con acqua R e
ruro R, su una lamina di sodio cloruro. Lo spettro otte- mescolare.
nuto non presenta l'assorbimento a 3053 cm corri- -1
Viraggio. Da pH 1,2 (rosso) a pH 2,8 (giallo); da pH 7,4
spondente ai gruppi vinilici. (giallo) a pH 9,0 (porpora).
Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore al 2,0 . C4H4KO7Sb.ÃÙÄH2O.
per cento, determinata su 1,000 g per essiccamento Potassio-antimonio tartrato

(Mr 333,9) 1007600. Potassio [tartrato(4-) O1,O2,O3]an-

sotto vuoto a 350 ‘C per 15 min. Non superiore allo timoniato(III) emiidrato.
0,8 per cento, determinata su 2,000 g per essiccamento Polvere granulare bianca o incolore, o cristalli traspa-
a 200 ‘C per 2 h. renti, solubili in acqua e in glicerolo, molto solubili in
Polietilenglicole . Vedere macrogol R. acqua bollente, praticamente insolubili in alcool. La
Polietilenglicole adipato . (C8H12O4)n. (Mr (172,2)n). soluzione acquosa e© leggermente acida.
1067700. Potassio bicarbonato . KHCO3. (Mr 100,1). 1069900.
Massa cerosa bianca, praticamente insolubile in acqua, [298-14-6]. Potassio idrogeno carbonato.
solubile in cloroformio. Cristalli incolori, trasparenti, molto solubili in acqua,
p.f.: circa 43 ‘C. praticamente insolubili in alcool.
Polietilenglicole succinato . (C6H8O4)n. (Mr (144,1)n). Potassio bicarbonato soluzione metanolica satura .
1067800. 1069901.
Polvere cristallina bianca, praticamente insolubile in Disciogliere 0,1 g di potassio bicarbonato R in
acqua, solubile in cloroformio. 0,4 ml di acqua R, scaldando a b.m. Aggiungere
p.f.: circa 102 ‘C. 25 ml di metanolo R e agitare, mantenendo la solu-
. 1067900. zione a b.m. fino a dissoluzione completa. Usare
Polimetilfenilsilossano

Contiene il 50 per cento di gruppi metilici e il 50 per una soluzione preparata di recente.
cento di gruppi fenilici. (Massa molecolare relativa Potassio bromato . KBrO3. (Mr 167,0). 1068700.
media pari a 4000). [7758-01-2].
Liquido molto viscoso (viscosita© di circa 1300 mPa s). 1 Polvere granulare bianca o cristalli, solubili in acqua,
Fase stazionaria per gas cromatografia. poco solubili in alcool.
d2525 : circa 1,09. Potassio bromuro . 1068800. [7758-02-3]. Vedere la
n25D : circa 1,540. monografia Potassio bromuro (0184).
. 1068000.Vedere poli(di- Il potassio bromuro usato per spettrofotometria di assor-
Poli[metil(95)fenil(5)]silossano

metil)(difenil)silossano R. bimento infrarosso (2.2.24) soddisfa anche all'ulteriore

. 1068100. Vedere requisito seguente:
Poli[metil(94)fenil(5)vinil(1)]silossano

poli(dimetil)(difenil)(divinil)silossano R. Una pasticca, dello spessore di 2 mm, preparata con la

. 1068300. [9005-64-5]. Vedere la mono- sostanza precedentemente essiccata a 250 ‘C per 1 h,
Polisorbato 20

grafia Polisorbato 20 (0426). ha una linea di base sostanzialmente piatta nell'inter-

vallo compreso tra 4000 cm-1 e 620 cm-1. Non presenta
Polisorbato 80 . 1068400. [9005-65-6]. Vedere la mono- massimi con un'assorbanza superiore a 0,02 al di sopra
grafia Polisorbato 80 (0428). della linea-1di base, ad eccezione dei massimi dell'acqua
Polistirene 900-1000 . 1112200. [9003-53-6]. a 3440 cm e a 1630 cm-1.
Standard organico usato per la taratura in gas croma- Potassio carbonato . K2CO3. (Mr 138,2). 1068900.
tografia. [584-08-7]. Dipotassio carbonato.
Mw: circa 950. Polvere granulare bianca, igroscopica, solubilissima in
Mw/Mn: circa 1,10. acqua, praticamente insolubile in etanolo.
.Vedere pancreas polvere R. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
. KCN. (Mr 65,1) 1069400. [151-50-8].
Polvere di pancreas

m . C21H18O5S. (Mr 382,44). 1121700. Potassio cianuro

Polvere cristallina bianca o masse bianche o granuli,

Porpora -cresolo

[2303-01-7]. m-Cresolsolfonftaleina.
Polvere cristallina verde oliva, leggermente solubile in molto solubili in acqua, poco solubili in alcool.
acqua, solubile in alcool, in acido acetico glaciale e in Potassio cianuro soluzione . 1069401.
metanolo. Soluzione 100 g/l.

476
 Reattivi

inoizircserP
. 1069402. luce per 5 min. Titolare con sodio tiosolfato 0,1 M, uti-

ilareneG
Potassio cianuro soluzione esente da piombo

Disciogliere 10 g di potassio cianuro R in 90 ml di lizzando come indicatore 1 ml di amido esente da ioduro

acqua R, aggiungere 2 ml di idrogeno perossido solu- soluzione R.
zione concentrata R diluita 1 a 5. Lasciare a riposo per 1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M equivale a 4,903 mg di
24 h, diluire a 100 ml con acqua R e filtrare. K2Cr2O7.

isilanA id
La soluzione soddisfa al seguente saggio: prelevare . 1069501.

idoteM
Potassio dicromato soluzione

10 ml di soluzione, aggiungere 10 ml di acqua R e Soluzione 106 g/l.

10 ml di idrogeno solfuro soluzione R. Non si sviluppa . 1069502.
alcuna colorazione anche dopo l'aggiunta di 5 ml di
Potassio dicromato soluzione R1

acido cloridrico diluito R. Soluzione 5 g/l.

irotinetnoC
/ ilairetaM
. 1069300. [6100-05-6]. Vedere la mono- Potassio ferricianuro . K3[Fe(CN)6]. (Mr 329,3).
1069700. [13746-66-2]. Potassio esacianoferrato (III).
Potassio citrato

grafia Potassio citrato (0400).

Potassio clorato . KClO3. (Mr 122,6).1069000. [3811-04-9]. Cristalli rossi, molto solubili in acqua.
Polvere bianca, granuli o cristalli, solubili in acqua. Potassio ferricianuro soluzione . 1069701.
. 1069100. [7447-40-7]. Vedere la mono- Lavare 5 g di potassio ferricianuro R con un po© di

ivittaeR
Potassio cloruro

grafia Potassio cloruro (0185). acqua R, disciogliere e diluire a 100 ml con acqua R.
Il potassio cloruro usato per spettrofotometria di assorbi- Preparare immediatamente prima dell'uso.
mento infrarosso (2.2.24) soddisfa anche all'ulteriore Potassio ferriperiodato soluzione . Vedere potassio perio-
requisito seguente: dato R.

itnemogrA
ilareneG
Una pasticca, dello spessore di 2 mm, preparata con la Potassio ferrocianuro . K4[Fe(CN)6].3H2O. (Mr 422,4).
sostanza precedentemente essiccata a 250 ‘C per 1 h, 1069800. [14459-95-1]. Potassio esacianoferrato (II).
ha una linea di base sostanzialmente piatta nell'inter- Cristalli gialli trasparenti, molto solubili in acqua, pra-
vallo compreso tra 4000 cm e 620 cm . Non presenta
-1 -1 ticamente insolubili in alcool.
massimi con un'assorbanza superiore a 0,02 al di sopra . 1069801.

eifargonoM

ilareneG
della linea-1di base, ad eccezione dei massimi dell'acqua
Potassio ferrocianuro soluzione

a 3440 cm e a 1630 cm-1. Soluzione 53 g/l.

Potassio cloruro soluzione 0,1 M . 1069101. Potassio fluoruro . KF. (Mr 58,1). 1137800. [7789-23-3].
Soluzione di potassio cloruro R contenente l'equiva- Cristalli incolori o polvere cristallina bianca, delique-

ehcituecamraF
lente di 7,46 g di KCl in 1000,0 ml. scente, solubile in acqua, praticamente insolubile in
alcool.

emroF
Potassio cromato K2CrO4. (Mr 194,2). 1069200. : Vedere potassio fosfato diba-
[7789-00-6]. Dipotassio cromato.
Potassio fosfato bibasico

sico R.
Cristalli gialli , molto solubili in acqua. Potassio fosfato dibasico . K2HPO4. (Mr 174,2). 1033000.
. 1069201. [7758-11-4].

eiretaM
Potassio cromato soluzione

emirP
Soluzione 50 g/l. Polvere cristallina bianca, igroscopica, solubilissima in
acqua, poco solubile in alcool.
Potassio dicromato . K2Cr2O7. (Mr 294,2). 1069500. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
[7778-50-9]. Dipotassio dicromato. . 1069600. [7778-77-0].
ehcituecamraF

Il potassio dicromato utilizzato per la calibrazione

inoizaraperP

Potassio fosfato monobasico

Vedere la monografia Potassio fosfato monobasico

ehcificepS

degli spettrofotometri (2.2.25) contiene non meno del (0920).

99,9 per cento di K2Cr2O7, calcolato con riferimento .
alla sostanza essiccata a 130 ‘C. Potassio

1069601.
fosfato monobasico soluzione 0,2 M

Cristalli rosso-arancione, solubili in acqua, pratica- Soluzione di potassio fosfato monobasico R

ehcitapoemO
inoizaraperP

mente insolubili in alcool. contenente l'equivalente di 27,22 g di KH2PO4

Determinazione quantitativa. Disciogliere 1,000 g in in 1000,0 ml.
acqua R e diluire a 250,0 ml con lo stesso solvente.
Aggiungere 50,0 ml di questa soluzione a una solu- Potassio ftalato acido . C8H5KO4. (Mr 204,2). 1070000.
zione, preparata di recente, di 4 g di potassio ioduro R, [877-24-7]. Potassio idrogeno benzen-1,2-dicarbossi-
2 g di sodio bicarbonato R e 6 ml di acido cloridrico R lato.
ecidnI

in 100 ml di acqua R, in un recipiente da 500 ml. Chiu- Cristalli bianchi, solubili in acqua, poco solubili in
dere il recipiente e lasciare a riposo proteggendo dalla alcool.

477
Reattivi

Potassio ftalato acido soluzione 0,2 M . 1070001. acqua R. Alla sospensione aggiungere 40 ml di
Soluzione di potassio ftalato acido R contenente l'e- una soluzione (400 g/l) di potassio ioduro R e agi-
quivalente di 40,84 g di C8H5KO4 in 1000,0 ml. tare per 1 h. Filtrare. La soluzione puo© essere con-
servata per alcuni giorni in bottiglie scure.
Potassio idrogeno carbonato. Vedere Potassio bicarbo- Soluzione per spruzzare. Mescolare immediata-
nato R. mente prima dell'uso 5 ml della soluzione madre
Potassio idrogeno solfato . KHSO4. (Mr 136,2). 1070100. con 15 ml di acqua R.
[7646-93-7]. Potassio bisolfato. . 1070604.
Cristalli igroscopici, trasparenti, incolori, molto solu- Potassio iodobismutato soluzione R3

bili in acqua dando luogo ad una soluzione fortemente Disciogliere 0,17 g di bismuto sottonitrato R in una
acida. miscela di 2 ml di acido acetico glaciale R e 18 ml
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. di acqua R. Aggiungere 4 g di potassio ioduro R,
Vedere Potassio tartrato 1 g di iodio R e diluire a 100 ml con acido solforico
Potassio

acido R.
idrogeno tartrato.
diluito R.
. 1070300. [1310-58-3]. Vedere la Potassio iodobismutato soluzione R4 . 1070605.
Disciogliere1,7 g di bismutosottonitrato R in 20 ml di
Potassio idrossido

monografia Potassio idrossido (0840).

V/V. acido acetico glaciale R. Aggiungere 80 ml di acqua
Potassio idrossido 0,5 M in alcool al 10 per cento

1070302. distillata R, 100 ml di una soluzione 400 g/l di potas-

Disciogliere 28 g di potassio idrossido R in 100 ml di sio ioduro R, 200 ml di acido acetico glaciale R e
alcool R e diluire a 1000 ml con acqua R. diluire a 1000 ml con acqua distillata R. Mescolare
2 volumi di questa soluzione con 1 volume di una
Potassio idrossido soluzione alcoolica . 1070303. soluzione (200 g/l) di bario cloruro R.
Disciogliere 3 g di potassio idrossido R in 5 ml di . 1070603.
acqua R e diluire a 100 ml con alcool esente da Potassio iodobismutato soluzione diluita

Disciogliere 100 g di acido tartarico R in 500 ml di

aldeide R. Decantare la soluzione limpida. La solu- acqua R ed aggiungere 50 ml di potassio iodobismu-
zione dovrebbe essere quasi incolore. tato soluzione R1.
. 1070304.
Conservare al riparo dalla luce.
Potassio idrossido soluzione alcoolica R1

Disciogliere 6,6 g di potassio idrossido R in 50 ml di

acqua R e diluire a 1000 ml con etanolo R. Potassio iodomercurato soluzione . Reattivo di Mayer,
Potassio idrossido soluzione alcoolica 2 M . 1070301. Mercurio e potassio ioduro soluzione neutra. Vedere
Disciogliere 12 g di potassio idrossido R in 10 ml di potassio tetraiodomercurato soluzione R.
acqua R e diluire a 100 ml con alcool R. Potassio iodomercurato soluzione alcalina . Reattivo di
Potassio idrossido soluzione metanolica R . Nessler, Mercurio potassico ioduro soluzione alcalina.
Soluzione (30 g/l) di potassio idrossido R in meta- Vedere potassio tetraiodomercurato soluzione alcalina R.
nolo R. Potassio ioduro . 1070500. [7681-11-0]. Vedere la mono-
. KIO3. (Mr 214,0). 1070400. [7758-05-6]. grafia Potassio ioduro (0186).
. 1070502.
Potassio iodato

Polvere cristallina bianca, solubile in acqua. Potassio ioduro soluzione

Potassio iodobismutato soluzione . 1070600. Soluzione 166 g/l.

A 0,85 g di bismuto sottonitrato R aggiungere 40 ml di Potassio ioduro e amido soluzione . 1070501.
acqua R, 10 ml di acido acetico glaciale R e 20 ml di Disciogliere 0,75 g di potassio ioduro R in 100 ml di
una soluzione (400 g/l) di potassio ioduro R. acqua R. Scaldare all'ebollizione ed aggiungere
Potassio iodobismutato soluzione R1 . 1070601. sotto agitazione una soluzione di 0,5 g di amido
Disciogliere 100 g di acido tartarico R in 400 ml solubile R in 35 ml di acqua R. Bollire per 2 min e
di acqua R e aggiungere 8,5 g di bismuto sottoni- lasciar raffreddare.
trato R. Agitare per 1 h, aggiungere 200 ml di una Saggio di sensibilita© . Una miscela di 15 ml di potas-
soluzione (400 g/l) di potassio ioduro R ed agitare sio ioduro e amido soluzione, 0,05 ml di acido ace-
bene. Lasciare a riposo per 24 h e filtrare. tico glaciale R e 0,3 ml di iodio soluzione R2 e© blu.
Conservare al riparo dalla luce. Potassio ioduro e iodio soluzione . 1070503.
Potassio iodobismutato soluzione R2 . 1070602. Disciogliere 2 g di iodio R e 4 g di potassio ioduro R
Soluzione madre. Sospendere 1,7 g di bismuto sotto- in 10 ml di acqua R. Quando la solubilizzazione e©
nitrato R e 20 g di acido tartarico R in 40 ml di completa diluire a 100 ml con acqua R.

478
 Reattivi

inoizircserP
. 1070504. Cristalli incolori o polvere cristallina bianca, modera-

ilareneG
Potassio ioduro soluzione satura

Soluzione satura di potassio ioduro R in acqua tamente solubili in acqua, praticamente insolubili in
esente da anidride carbonica R. Assicurarsi che la alcool. Le soluzioni acquose si decompongono a tempe-
soluzione rimanga satura come indicato dalla pre- ratura ambiente e, piu© rapidamente, con il calore.
senza di cristalli non disciolti. Conservare in un luogo fresco.

isilanA id
. 1071200.

idoteM
Verificare il reattivo aggiungendo a 0,5 ml della Potassio piombito soluzione

soluzione satura di potassio ioduro 30 ml di una Disciogliere 1,7 g di piombo acetato R, 3,4 g di potassio
miscela di 2 volumi di cloroformio R e 3 volumi di citrato R e 50 g di potassio idrossido R in acqua R e
acido acetico R e poi 0,1 ml di amido soluzione R. diluire a 100 ml con lo stesso solvente.
Una colorazione blu, eventualmente formatasi,

irotinetnoC
. KSb(OH)6. (Mr 262,9).

/ ilairetaM
scompare per aggiunta di 0,05 ml di sodio tiosolfato Potassio piroantimoniato

1071300. [12208-13-8]. Potassio esaidrossoantimoniato.

0,1 M.
Conservare al riparo dalla luce. Cristalli bianchi o polvere cristallina bianca, moderata-
mente solubili in acqua.
Potassio ioduro e sodio bicarbonato soluzione . Potassio piroantimoniato soluzione . 1071301.
Disciogliere 75 g di potassio ioduro R e 50 g di sodio

ivittaeR
Disciogliere 2 g di potassio piroantimoniato R in
bicarbonato R in acqua R e diluire a 1000 ml. 95 ml di acqua R calda. Raffreddare velocemente
. KNO3. (Mr 101,1). 1070700. [7757-79-1]. ed aggiungere una soluzione contenente 2,5 g di
Potassio nitrato
potassio idrossido R in 50 ml di acqua R e 1 ml di
Cristalli incolori, solubilissimi in acqua. sodio idrossido soluzione diluita R. Lasciare a riposo

itnemogrA
ilareneG
Potassio periodato . KIO4. (Mr 230,0). 1070800. per 24 h, filtrare e diluire a 150 ml con acqua R.
[7790-21-8]. Potassio metaperiodato. . K2SO4. (Mr 174,3). 1033100. [7778-80-5].
Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, solubili in Potassio solfato

Cristalli incolori, solubili in acqua.

acqua.
. 1070801. . C4H4K2O6.ÃÙÄH2O. (Mr 235,3).

eifargonoM
Potassio tartrato

ilareneG
Potassio ferriperiodato soluzione
1071400. [921-53-9]. Dipotassio (2R,3R)-2,3-diidrossi-
Disciogliere 1 g di potassio periodato R in 5 ml di butan-1,4-dioato emiidrato.
una soluzione (120 g/l) di potassio idrossido R pre- Polvere granulare o cristalli bianchi, solubilissimi in
parata di recente. Aggiungere 20 ml di acqua R e acqua, molto poco solubili in alcool.
1,5 ml di ferro(-ico) cloruro soluzione R1. Diluire a

ehcituecamraF
50 ml con una soluzione (120 g/l) di potassio idros- Potassio tartrato acido . C4H5KO6. (Mr 188,2). 1070200.
[868-14-4]. Potassio idrogeno (2R,3R)-2,3-diidrossibu-

emroF
sido R, preparata di recente.
tan-1,4-dioato.
Potassio permanganato . 1070900. [7722-64-7]. Vedere la Polvere cristallina bianca o cristalli leggermente opa-
monografia Potassio permanganato (0121). chi, incolori, poco solubili in acqua, solubili in acqua
. 1070902. bollente, molto poco solubili in alcool.

eiretaM
Potassio permanganato soluzione

emirP
Soluzione 30 g/l. Potassio tetraiodomercurato soluzione . 1071500.
Potassio permanganato soluzione fosforica . Disciogliere 1,35 g di mercurio(-ico) cloruro R in 50 ml
1070901. di acqua R. Aggiungere 5 g di potassio ioduro R e diluire
a 100 ml con acqua R.
ehcituecamraF

Disciogliere 3 g di potassio permanganato R in una

inoizaraperP

ehcificepS

miscela di 15 ml di acido fosforico R e 70 ml di Potassio tetraiodomercurato soluzione alcalina .

acqua R. Diluire a 100 ml con acqua R. 1071600.
. Discio- Disciogliere 11 g di potassio ioduro R e 15 g di mercu-
rio(-ico) ioduro R in acqua R e diluire a 100 ml con lo
Potassio permanganato soluzione alcalina

gliere 0,5 g di potassio permanganato R in 100 ml

ehcitapoemO

stesso solvente. Immediatamente prima dell'uso,

inoizaraperP

di sodio idrossido 1,0 M.

mescolare 1 volume di questa soluzione con un volume
Potassio perrenato . KReO4. (Mr 289,3). 1071000. uguale di una soluzione (250 g/l) di sodio idrossido R.
[10466-65-6]. Potassio tetraossalato . C4H3KO8.2H2O. (Mr 254,2).
Polvere cristallina bianca, solubile in acqua, poco solu- 1071700. [6100-20-5].
bile in alcool, in metanolo e in propilenglicole. Polvere cristallina bianca, moderatamente solubile in
ecidnI

Potassio persolfato . K2S2O8. (Mr 270,3). 1071100. acqua, solubile in acqua bollente, poco solubile in
[7727-21-1]. Dipotassio perossodisolfato. alcool.

479
Reattivi

Potassio tiocianato . KSCN. (Mr 97,2).1071800. [333-20-0]. Propetamfos . C10H20NO4PS. (Mr 281,3). 1130900.
Potassio solfocianato. [31218-83-4].
Cristalli incolori, deliquescenti, solubilissimi in acqua e Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
in alcool. riferimento (10 ng/ l in cicloesano).
m

Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Propile acetato . C5H10O2. (Mr 102,1).1072600. [109-60-4].
Potassio tiocianato soluzione . 1071801. d20 : circa 0,888.
20
Soluzione 97 g/l. p.e.: circa 102 ‘C.
. 1068500. [9003-39-8]. Vedere la monografia p.f.: circa ^95 ‘C.
. 1072700. [94-13-3]. Vedere
Povidone

Povidone (0685). Propile paraidrossibenzoato

.1109400.Vedere la monografia Pro- la monografia Propile paraidrossibenzoato (0431).

. C3H6O. (Mr 58,1). 1121800. [75-56-9].
Procaina cloridrato

caina cloridrato (0050). Propilene ossido

d -Prolil-l -fenilalanil-l -arginina 4-nitroanilide diclori-

Liquido incolore, miscibile con alcool
drato . C26H36Cl2N8O5. (Mr 612). 1072800. Propilenglicole . 1072900. [57-55-6]. Vedere glicole propi-
Propanolammina .C3H9NO.(Mr 75,1).1072200.[156-87-6]. lenico R.
3-Ammino-1-propanolo. Propionaldeide . Vedere aldeide propionica R.
Liquido viscoso, incolore, limpido. Protamina solfato . 1073000. [53597-25-4 (salmina)
d2020 : circa 0,99. 9007-31-2 (clupeina)]. Vedere la monografia Protamina
n20D : circa 1,461. solfato (0569).
. C10H16O. (Mr 152,2). 1073100. [89-82-7].
p.f.: circa 11 ‘C.
Pulegone

(R)-2-Isopropiliden-5-metilcicloesanone. (+)-p-Ment-4-
Propanolo . C3H8O. (Mr 60,1). 1072000. [71-23-8]. en-3-one.
1-Propanolo. Liquido incolore, oleoso, praticamente insolubile in
Liquido incolore limpido, miscibile con acqua e con acqua, miscibile con alcool e con etere.
alcool. d1520 : circa 0,936.
d2020 : da 0,802 a 0,806. n20D : da 1,485 a 1,489.
p.e.: circa 97,2 ‘C. ‰ Š
20 : da + 19,5 a + 22,5.
D
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per p.e.: da 222 ‘C a 224 ‘C.
cento distilla tra 96 ‘C e 99 ‘C. Il pulegone utilizzato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
2-Propanolo . C3H8O. (Mr 60,1). 1072100. [67-63-0]. teriore saggio seguente:
Alcool isopropilico. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Liquido infiammabile, incolore, limpido, miscibile con cromatografia (2.2.28) nelle condizioni descritte nella
acqua e con alcool. monografia Menta essenza (0405) usando la sostanza
d2020 : circa 0,785. in esame come soluzione in esame.
p.e.: da 81 ‘C a 83 ‘C. L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per
2-Propanolo R1 . 1072101. cento dell'area totale dei picchi.
Soddisfa ai requisiti prescritti per il 2-propanolo R e Putrescina . C4H12N2. (Mr 88,15). 1137900. [110-60-1].
agli ulteriori requisiti seguenti: 1,4-Butandiammina. Tetrametilendiammina.
n20D : circa 1,378. Liquido oleoso incolore, solubilissimo in acqua. Odore
Acqua (2.5.12). Non piu© dello 0,05 per cento, deter- forte simile a quello della piperidina.
minata su 10 g. p.e.: circa 159 ‘C.
Trasmittanza minima (2.2.25), determinata utiliz- p.f.: circa 23 ‘C.
zando acqua R come bianco: Quercetina diidrata . C15H10O7.2H2O. (Mr 338,2).
25 per cento a 210 nm, 1138100. 2-(3,4-Diidrossifenil)-3,5,7-triidrossi-4H-1-
benzopiran-4-one.
55 per cento a 220 nm, Cristalli gialli o polvere giallastra, praticamente insolu-
75 per cento a 230 nm, bile in acqua, solubile in acetone e in metanolo.
95 per cento a 250 nm, Acqua (2.5.12): non piu© del 12,0 per cento, determinata
98 per cento a 260 nm. su 0,100 g.

480
 Reattivi

inoizircserP
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro- . CuCl. (Mr 99,0). Cloruro rameoso.

ilareneG
Rame(-oso) cloruro

matografia liquida (2.2.29) come prescritto nella mono- Polvere cristallina bianca o quasi bianca che diventa
grafia Ginkgo foglia (1828). verdastra per esposizione all'aria e nerastra per esposi-
Il contenuto non e© inferiore al 90 per cento (sostanza zione alla luce; praticamente insolubile in acqua e in
anidra) calcolato con la procedura di normalizzazione. alcool, solubile in acido cloridrico, in ammoniaca

isilanA id
. C21H20O11. (Mr 448,4). 1138200. [522-12-3]. diluita e nelle soluzioni di ammonio cloruro.

idoteM
Quercitrina

Quercetina 3-l-ramnopiranoside. 3-[(6-Desossi- -l- a Conservare al riparo dalla luce.

mannopiranosil)ossi]-2-(3,4-diidrossifenil)-5,7-diidrossi- . Disciogliere 1,25 g di
4H-1-benzopiran-4-one. Quercitroside.
Rame(-oso) cloruro soluzione

rame(-oso) cloruro R e 10 g di ammonio cloruro R

Cristalli gialli, praticamente insolubili in acqua calda, in acqua R contenente 3 ml di una soluzione

irotinetnoC
/ ilairetaM
solubili in alcool. (275 g/l) di sodio metabisolfito R e diluire a 100 ml
p.f.: da 176 ‘C a 179 ‘C. con acqua R. Dopo alcuni minuti la soluzione e©
Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono- limpida, incolore o appena giallastra.
grafia Verga d'oro (1892) deponendo 20 ml di soluzione. Conservare in un recipiente pieno.
Dopo vaporizzazione il cromatogramma presenta una . 1022600.

ivittaeR
zona fluorescente bruna-giallastra con un Rf di circa Rame tetrammina soluzione ammoniacale

Disciogliere 34,5 g di rame(-ico) solfato R in 100 ml di

0,6. acqua R e, agitando, aggiungere goccia a goccia ammo-
Conservare ad una temperatura compresa tra 2 ‘C niaca concentrata R finchë il precipitato che si forma
e 8 ‘C. sia completamente disciolto. Mantenendo la tempera-
. Cu. (Mr 63,55). 1022100. [7440-50-8].

itnemogrA
tura al di sotto dei 20 ‘C, aggiungere goccia a goccia,

ilareneG
Rame

Lamine levigate, spire, limatura fili o polvere del

, continuando ad agitare, 30 ml di sodio idrossido solu-
metallo puro di qualita© elettrolitica. zione concentrata R. Filtrare su un filtro di vetro sinte-
Rame(-ico) acetato . C4H6CuO4.H2O. (Mr 199,7) rizzato (40), lavare con acqua R finchë il filtrato e© lim-
1022200. [142-71-2]. pido e riprendere il precipitato con 200 ml di ammo-

eifargonoM
Cristalli o polvere verde-blu, molto solubili in acqua niaca concentrata R. Filtrare su un filtro di vetro

ilareneG
bollente, solubili in acqua ed in alcool, poco solubili in sinterizzato e ripetere la filtrazione per ridurre al
etere e in glicerolo 85 per cento. minimo il residuo.
. CuCl2.2H2O. (Mr 170,5). 1023000. Ramnosio . C6H12O5.H2O. (Mr 182,2). 1074900.
[6155-35-7]. l-(+)-Ramnosio. 6-Desossi-l-mannosio.
Rame(-ico) cloruro

[10125-13-0].

ehcituecamraF
Polvere blu-verdastra o cristalli, deliquescenti in aria Polvere cristallina bianca, molto solubile in acqua.

emroF
umida, efflorescenti in aria secca, molto solubili in 20 : da + 7,8 a + 8,3, determinato su una soluzione
‰
DŠ

acqua, in alcool e in metanolo, moderatamente solubili (50 g/l) di acqua R contenente circa lo 0,05 per
in acetone, poco solubili in etere. cento di NH3.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Raponticina . C21H24O9. (Mr 420,4). 1075000. [155-58-8].
3-Idrossi-5-[2-(3-idrossi-4-metossifenil)etenil]fenil -d-
eiretaM
. 1022300.

emirP
b

glucopiranoside.
Rame(-ico) edetato soluzione

A 2 ml di una soluzione (20 g/l) di rame(-ico) acetato R

aggiungere 2 ml di sodio edetato 0,1 M e diluire a 50 ml Polvere cristallina grigio-giallastra, solubile in alcool e
con acqua R. in metanolo.
ehcituecamraF

. Cu(NO3)2.3H2O. (Mr 241,6). Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-

inoizaraperP

ehcificepS

Rame(-ico) nitrato

1022400. [10031-43-3]. Rame dinitrato triidrato. grafia Rabarbaro (0291); il cromatogramma presenta
Cristalli blu scuro, igroscopici, solubilissimi in acqua solo una macchia principale.
con reazione fortemente acida, molto solubili in alcool Reattivo .., Reattivo al , Reattivo di .. vedere al nome
ed in acido nitrico diluito. delle sostanze che lo compongono
ehcitapoemO
inoizaraperP

Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. . Vedere cupri-citrica soluzione R.

. CuSO4.5H2O. (Mr 249,7). 1022500.
Reattivo cupro-citrico
Rame(-ico) solfato

[7758-99-8]. Resina cationica debole . 1096000.

Polvere blu o cristalli blu scuro, lentamente efflore- Resina polimetacrilica, leggermente acida, con gruppi
scenti, solubilissimi in acqua, poco solubili in alcool. carbossilici presenti in forma protonata.
Dimensione delle particelle: da 75 mm a 160 mm.
. 1022501. Limiti del pH di utilizzo: da 5 a 14.
ecidnI

Rame(-ico) solfato soluzione

Soluzione 125 g/l. Massima temperatura di utilizzo: 120 ‘C.

481
Reattivi

Resina a scambio anionico . 1007200. Resina a scambio ionico fortemente acida . 1085400.
Resina in forma clorurata contenente gruppi ammonici Resina in forma protonata dotata di gruppi acidi solfo-
quaternari [CH2N+(CH3)3] legati ad un reticolo poli- nici legati ad un reticolo polimerico costituito da poli-
merico costituito da polistirene reticolato con il 2 per stirene reticolato con l'8 per cento di divinilbenzene. E'
cento di divinilbenzene. E' disponibile in granuli e la disponibile in granuli sferici; se non diversamente pre-
dimensione delle particelle e© specificata nella monogra- scritto la dimensione delle particelle varia da 0,3 mm a
fia. 1,2 mm.
Lavare la resina con sodio idrossido 1 M su un filtro di Capacita© . Da 4,5 mmol a 5 mmol per grammo, con un
vetro sinterizzato finchë i lavaggi risultino esenti da clo- contenuto di acqua del 50-60 per cento.
ruri, poi lavare con acqua R fino a lavaggi neutri. Preparazione della colonna. Se non diversamente pre-
Sospendere in acqua esente da ammonio R, preparata scritto utilizzare un tubo, munito di un setto di vetro
di recente, e proteggere dall'anidride carbonica atmo- sinterizzato, avente una lunghezza di 400 mm, un dia-
sferica. metro interno di 20 mm ed un'altezza di riempimento
Resina a scambio anionico R1 . 1123400. di circa 200 mm. Introdurre la resina, mescolandola
Resina +contenente gruppi ammonici quaternari con acqua R e versare l'impasto nel tubo, assicurandosi
[CH2N (CH3)3] legati ad un substrato di meta- che non restino intrappolate delle bolle d'aria tra le par-
crilato. ticelle. Durante l'utilizzo non lasciare che il liquido
Resina a scambio anionico fortemente basica . 1026600. scenda al di sotto della superficie della resina.
Resina di tipo gelatinoso in forma ossidrilica contenente Se la resina e© in forma protonata, lavare con acqua R
gruppi ammonici quaternari [CH2N+(CH3)3, tipo 1] finchë per la neutralizzazione di 50 ml non siano neces-
legati ad un reticolo polimerico costituito da polistirene sari piu© di 0,05 ml di sodio idrossido 0,1M, usando come
reticolato con l'8 per cento di divinilbenzene. indicatore 0,1 ml di metilarancio soluzione R.
Granuli trasparenti marroni. Se la resina e© in forma sodica o necessita di una rigene-
Dimensione delle particelle: da 0,2 mm ad 1,0 mm. razione, passare lentamente in colonna 100 ml di una
Contenuto di umidita© : circa il 50 per cento. miscela di volumi uguali di acido cloridrico R1 ed
acqua R e lavare poi con acqua R come descritto in
Capacita© di scambio totale: almeno 1,2 mEq/ml. precedenza.
Resina a scambio anionico fortemente basica per croma-
. 1131000.
. 1112700.
Resina ad esclusione ionica per cromatografia
tografia

Resina con gruppi ammonici quaternari legati ad un Resina con gruppi solfonici legati ad un substrato poli-
substrato reticolato con divinilbenzene. merico costituito da polistirene reticolato con divinil-
benzene.
Resina a scambio cationico . 1016700. .
Resina in forma protonata dotata di gruppi solfonici Resina

1131100.
per la cromatografia ionica a fase inversa

legati ad un reticolo polimerico costituito da polistirene

reticolato con l'8 per cento di divinilbenzene. E' dispo- Resina a carattere non-polare, neutra, macroporosa,
nibile in granuli e la dimensione delle particelle e© speci- con una area superficiale specifica alta, costituita da
ficata dopo il nome del reattivo nei saggi dove viene uti- un substrato polimerico di polistirene reticolato con
lizzato. divinilbenzene.
Resina a scambio cationico R1 . 1121900. Resina scambiatrice . Vedere resina a scambio R.
Resina in forma protonata dotata di gruppi solfo- Resorcina .Vedere resorcinolo R.
nici legati ad un substrato polimerico costituito da .Vedere resorcinolo reattivo R.
polistirene reticolato con il 4 per cento di divinil-
Resorcina reattivo

benzene. E' disponibile in granuli e la dimensione Resorcinolo . 1,3-Benzendiolo. 1074800. [108-46-3].

delle particelle e© specificata dopo il nome del reat- Vedere la monografia Resorcinolo (0290).
tivo nei saggi dove viene utilizzato. Resorcinolo reattivo . 1074801.
. 1104600. A 80 ml di acido cloridrico R1 aggiungere 10 ml di
Resina a scambio cationico (forma calcica)

Resina in forma calcica dotata di gruppi acidi solfonici una soluzione (20 g/l) di resorcinolo R e 0,25 ml di
legati ad un reticolo polimerico costituito da polistirene una soluzione (25 g/l) di rame(-ico) solfato R e
reticolato con l'8 per cento di divinilbenzene. La dimen- diluire a 100,0 ml con acqua R. Preparare la solu-
sione delle particelle e© specificata dopo il nome del reat- zione almeno 4 h prima dell'uso.
tivo nei saggi dove viene utilizzato. Conservare a 2-8 ‘C ed usare entro 1 settimana.

482
 Reattivi

inoizircserP
. C5H10O5. (Mr 150,1). 1109600. [50-69-1]. . 1022801. Cresolo rosso

ilareneG
Ribosio Rosso cresolo soluzione

d -Ribosio. soluzione.
Solubile in acqua, leggermente solubile in alcool. Disciogliere 0,1 g di rosso cresolo R in una miscela
p.f.: da 88 ‘C a 92 ‘C. di 2,65 ml di sodio idrossido 0,1 M e 20 ml di
. C28H31ClN2O3. (Mr 479,0). 1075100. alcool R e diluire a 100 ml con acqua R.

isilanA id
idoteM
Rodamina B

[81-88-9]. Schultz No. 864. Colour Index No. 45170. Saggio di sensibilita© . Una miscela di 0,1 ml di rosso
[9-(2-Carbossifenil)-6-dietilammino-3H-xanten-3-iliden]- cresolo soluzione e 100 ml di acqua esente da ani-
dietilammonio cloruro. dride carbonica R, alla quale sono stati aggiunti
Cristalli verdi o polvere viola-rossastra, solubilissimi in 0,15 ml di sodio idrossido 0,02 M e© rosso-porpora.
Non sono necessari piu© di 0,15 ml di acido clori-

irotinetnoC
/ ilairetaM
acqua ed in alcool. drico 0,02 M per far virare la colorazione al giallo.
. C21H23IN2. (Mr 430,3). 1073800.
Viraggio. Da pH 7,0 (giallo) a pH 8,6 (rosso).
Rosso chinaldina

[117-92-0]. 2-[2-[4-(Dimetilammino)fenil]etenil]-1-etilchi-
nolinio ioduro.
. 1063600. [143-74-8].Vedere la monografia
Polvere scura nero-bluastra, moderatamente solubile in Fenolsolfonftaleina
Rosso fenolo

(0242).

ivittaeR
acqua, molto solubile in alcool.
. 1073801.
. 1063601.
Rosso chinaldina soluzione

Disciogliere 0,1 g di rosso chinaldina R in meta- Rosso fenolo soluzione

nolo R e diluire a 100 ml con lo stesso solvente. Disciogliere 0,1 g di rosso fenolo R in una miscela di

itnemogrA
2,82 ml di sodio idrossido 0,1 M e 20 ml di alcool R

ilareneG
Viraggio. Da pH 1,4 (incolore) a pH 3,2 (rosso). e diluire a 100 ml con acqua R.
Rosso Congo . C32H22N6Na2O6S2. (Mr 697). 1022000. Saggio di sensibilita© . Aggiungere 0,1 ml di rosso
[573-58-0]. Schultz No.360. Colour Index No. 22120. fenolo soluzione a 100 ml di acqua esente da ani-
Disodio 2,2'-(difenil-4,4'-diilbis(azo)bis(1-amminonaf- dride carbonica R. La soluzione e© gialla. Non sono

eifargonoM
talen-4-solfonato).

ilareneG
necessari piu© di 0,1 ml di sodio idrossido 0,02 M
Polvere rosso-brunastra, solubile in acqua. per far virare l'indicatore al violetto-rossastro.
Viraggio. Da pH 6,8 (giallo) a pH 8,4 (violetto-ros-
. 1022002. sastro).

ehcituecamraF
Rosso Congo cartina

Immergere strisce di carta da filtro per alcuni . 1063603.

emroF
Rosso fenolo soluzione R2
minuti in rosso Congo soluzione R. Lasciare asciu- Soluzione I. Disciogliere 33 mg di rosso fenolo R in
gare. 1,5 ml di sodio idrossido soluzione diluita R e diluire
Rosso Congo soluzione . 1022001. a 100 ml con acqua R.
Disciogliere 0,1 g di rosso Congo R in una miscela Soluzione II. Disciogliere 25 mg di ammonio
eiretaM
di 20 ml di alcool R e acqua R e diluire a 100 ml

emirP
con acqua R. solfato R in 235 ml di acqua R; aggiungere 105 ml
di sodio idrossido soluzione diluita R e 135 ml di
Saggio per la sensibilita© . A 0,2 ml della soluzione di acido acetico diluito R.
rosso Congo aggiungere 100 ml di acqua esente da Aggiungere 25 ml della soluzione I alla soluzione
ehcituecamraF

anidride carbonica R e 0,3 ml di acido cloridrico

inoizaraperP

ehcificepS

0,1 M. La soluzione e© blu. Non sono necessari piu© II. Se necessario, portare il pH della miscela a 4,7.
di 0,3 ml di sodio idrossido 0,1 M per far virare il Rosso fenolo soluzione R3 . 1063604.
colore al rosa. Soluzione I. Disciogliere 33 mg di rosso fenolo R in
Viraggio: pH 3,0 (blu) a pH 5,0 (rosa). 1,5 ml di sodio idrossido soluzione diluita R e diluire
ehcitapoemO
inoizaraperP

. C21H18O5S. (Mr 382,4). 1022800. a 50 ml con acqua R.

Soluzione II. Disciogliere 50 mg di ammonio
Rosso cresolo

[1733-12-6]. Cresolo rosso. Cresolsolfonftaleina.

4,4'-(3H-2,1-Benzossatiol-3-iliden)bis-(2-metilfenolo) solfato R in 235 ml di acqua R; aggiungere 105 ml
S,S-diossido. di sodio idrossido soluzione diluita R e 135 ml di
Polvere cristallina bruno-rossastra, poco solubile in acido acetico diluito R.
ecidnI

acqua, solubile in alcool e nelle soluzioni diluite di idros- Aggiungere 25 ml della soluzione I alla soluzione
sidi alcalini. II; se necessario, portare il pH della miscela a 4,7.

483
Reattivi

Rosso metile. C15H15N3O2. (Mr 269,3). 1055100. Polvere bruno-rossastra, praticamente insolubile in
[493-52-7]. Schultz No. 250. Colour Index No. 13020. acqua.
Acido 2-(4-dimetilamminofenilazo)benzoico. Cromatografia. Esaminare mediante cromatografia su
Polvere rosso scuro o cristalli violetti, praticamente strato sottile (2.2.27) utilizzando gel di silice G R come
insolubili in acqua, solubili in alcool. sostanza di rivestimento. Deporre 10 ml di una solu-
zione (0,1 g/l) in diclorometano R ed eluire per un per-
. 1055101. corso di 10 cm con lo stesso solvente. Il cromato-
gramma presenta solo una macchia principale.
Rosso metile indicatore misto

Disciogliere 0,1 g di rosso metile R e 50 mg di blu . C27H30O16.3H2O. (Mr 665). 1075300. [153-18-4].
metilene R in 100 ml di alcool R. Rutina

Rutoside. 3-(O-6-Desossi- -l-mannopiranosil-(1 6)-

Viraggio. Da pH 5,2 (violetto-rosso) a pH 5,6 a !

-d -glucopiranosilossi)-2-(3,4-diidrossifenil)-5,7-di-
(verde). b

idrossi-4H-cromen-4-one.
Rosso metile soluzione . 1055102. Polvere cristallina gialla che imbrunisce alla luce, molto
Disciogliere 50 mg di rosso metile R in una miscela poco solubile in acqua, solubile in circa 400 parti di
di 1,86 ml di sodio idrossido 0,1 M e 50 ml di acqua bollente, poco solubile in alcool, praticamente
alcool R e diluire a 100 ml con acqua R. insolubile in etere, solubile nelle soluzioni di idrossidi
Saggio di sensibilita© . A 0,1 ml di rosso metile solu- alcalini ed in ammoniaca.
zione aggiungere 100 ml di acqua esente da anidride p.f.: circa 210 ‘C, con decomposizione.
carbonica R e 0,05 ml di acido cloridrico 0,02 M. Una soluzione in alcool R mostra due massimi di assor-
La soluzione e© rossa. Non sono necessari piu© di bimento (2.2.25), a 259 nm e a 362 nm.
0,1 ml di sodio idrossido 0,02 M per far virare l'indi- Conservare al riparo dalla luce.
catore al giallo. . Vedere rutina R.
Viraggio. Da pH 4,4 (rosso) a pH 6,0 (giallo). Rutoside

Sabbia 1075800.
Rosso neutro . C15H17ClN4. (Mr 288,8). [553-24-2]. Granuli di silice bianchi o leggermente grigiastri avente
Rosso basico 5. N8,N8,3-Trimetil-2,8-fenossindiammina una dimensione delle particelle compresa tra 150 mm e
monocloridrato. 300 mm.
Polvere verde scura, solubile in acqua ed alcool con Sabinene . C10H16. (Mr 136,2). 1109700. [2009-00-9].
colorazione rossa. Produce una colorazione rossa con 4(10)-Tuiene. 4-Metilen-1-isopropilbiciclo[3.1.0]esano.
acidi e una colorazione arancione con alcali. Liquido oleoso, incolore.
Rosso neutro soluzione . d2525 : circa 0,843.
Soluzione allo 0,1 per cento m/V di rosso neutro R n20D : circa 1,468.
in etanolo al 50 per cento V/V R (intervallo di p.e.: da 163 ‘C a 165 ‘C.
pH 6,8-8,0). Il sabinene usato in gas cromatografia soddisfa all'ulte-
Rosso rutenio . [(NH3)5RuORu(NH3)4ORu(NH3)5]Cl6. riore saggio seguente:
4H2O.(Mr 858). 1075200. [11103-72-3]. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
Polvere rosso-brunastra, solubile in acqua. cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
. 1075201. fia Arancio amaro fiore essenza (1175), usando la
Rosso rutenio soluzione

Soluzione 0,8 g/l in piombo acetato soluzione R. sostanza da esaminare come soluzione in esame.
L'area del picco principale non e© inferiore al 99,0 per
Rosso solido B . C17H13N3O9S2. (Mr 467,4).
sale cento dell'area totale dei picchi.
1037500. [56315-29-8]. Schultz No. 155. Colour Index . 1131400. [128-44-9]. Vedere la mono-
No. 37125. Sale di rosso solido B. 2-Metossi-4-nitroben-
Saccarina sodica

grafia Saccarina sodica (0787).

zendiazonio idrogeno naftalen-1,5-disolfonato. Saccarosio. 1085700. 57-50-11. Vedere la monografia
Polvere giallo-arancione, solubile in acqua, poco solu- Saccarosio (0204).
bile in alcool. Quando il saccarosio e© usato per il controllo del polari-
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al metro, deve essere mantenuto asciutto in un'ampolla
riparo dalla luce, a 2-8 ‘C. sigillata.
Rosso Sudan G. C17H14N2O2. (Mr 278,3). 1085800. Safrolo . C10H10O2. (Mr 162,2). 1131200. [94-59-7].
Schultz No.149. Colour Index No. 12150. Rosso sol- 5-(Prop-2-enil)-1,3-benzodiossolo. 4-Allil-1,2-(metilen-
vente 1. Sudan 3. 1-[(2-Metossifenil)azo]-2-naftalenolo. diossi)benzene.

484
 Reattivi

inoizircserP
Liquido oleoso, incolore o leggermente giallo, con . C15H18O3. (Mr 246,3). 1122000. [481-06-1].

ilareneG
Santonina

odore di sassafrasso, insolubile in acqua, solubilissimo (^)- -Santonina. 3,5a,9-Trimetil-3a,5,5a,9b-tetraidro-

a

in alcool, miscibile con esano. 3H,4H-nafto[1,2]furan-2,8-dione.

d2020 : da 1,095 a 1,096. Cristalli lucidi incolori che si colorano di giallo alla
n20D : da 1,537 a 1,538. luce, molto poco solubili in acqua, molto solubili in eta-

isilanA id
nolo caldo, moderatamente solubili in etanolo.

idoteM
p.e.: da 232 ‘C a 234 ‘C. 18 : ^173 in etanolo.
Punto di congelamento: circa 11 ‘C. ‰
D
Š

Il safrolo usato in gas cromatografia soddisfa all'ulteriore p.f.: da 174 ‘C a 176 ‘C.
saggio seguente: Cromatografia. Esaminare come prescritto nel saggio di

irotinetnoC
/ ilairetaM
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas identificazione C nella monografia Arnica fiore (1391),
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- il cromatogramma ottenuto con 10 l della soluzione
m

fia Cannella di Ceylon corteccia essenza (1501). presenta una zona di estinzione con un Rf di circa 0,5.
Il contenuto non e© inferiore al 96,0 per cento, calcolato Spruzzare con aldeide anisica soluzione R e esaminare
mediante la procedura di normalizzazione. mentre si scalda a 105 ‘C per 5-10 min. Alla luce del
giorno la zona di attenuazione della fluorescenza e© dap-

ivittaeR
Salicilaldeide . C7H6O2. (Mr 122,1). 1075400. [90-02-8]. prima gialla ma vira rapidamente al rosso-violetto.
2-Idrossibenzaldeide. Aldeide salicilica. . C20H36O2. (Mr 308,5). 1139900. [515-03-7].
Liquido oleoso, limpido, incolore.
Sclareolo

(1R,2R,4aS,8aS)-1-[(3R)-3-Idrossi-3-metilpent-4-enil]-
d2020 : circa 1,167. 2,5,5,8a-tetrametildecaidronaftalen-2-olo.

itnemogrA
ilareneG
n20D : circa 1,574. Cristalli inodori.
p.e.: circa 196 ‘C. 20 : 6,7, in soluzione in etanolo.
‰
D
Š

p.f.: circa 7 ‘C.

ÿ p.e.19 mm: da 218 ‘C a 220 ‘C.
. C14H12N2O2. (Mr 240,3). 1075500. p.f.: da 96 ‘C a 98 ‘C.

eifargonoM

ilareneG
Salicilaldeide-azina

2,2'-Azinodimetildifenolo. Lo sclareolo utilizzato nel procedimento cromatografico

Disciogliere 0,30 g di idrazina solfato R in 5 ml di nella monografia Salvia essenza (1850) soddisfa all'ulte-
acqua R, aggiungere 1 ml di acido acetico glaciale R e riore saggio seguente:
2 ml di una soluzione, preparata di recente, di salicilal- Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas

ehcituecamraF
deide R al 20 per cento V/V in 2-propanolo R. Mesco- cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
lare, lasciare a riposo fino al formarsi di un precipitato

emroF
giallo. Agitare con due porzioni, da 15 ml ciascuna, di fia Salvia essenza (1850).
diclorometano R. Riunire gli strati organici e seccare su Il contenuto di sclareolo non e© inferiore al 97 per cento,
sodio solfato anidro R. Decantare o filtrare la soluzione calcolato mediante la procedura di normalizzazione.
ed evaporare a secco. Ricristallizzare per raffredda- . 1044800. [6533-68-2]. Vedere

eiretaM
mento, da una miscela di 40 volumi di metanolo R e
Scopolamina bromidrato

emirP
la monografia Scopolamina bromidrato (0106).
60 volumi di toluene R. Essiccare i cristalli sotto vuoto.
p.f.: circa 213 ‘C. SDS-PAGE tampone per elettroforesi . 1114900.
Cromatografia. Esaminare come prescritto nel saggio Disciogliere 151,4 g di tris(idrossimetil)ammino-
metano R, 721,0 g di glicina R e 50,0 g di sodio laurilsol-
ehcituecamraF
inoizaraperP

per l'idrazina nella monografia Povidone (0685); il cro-

ehcificepS

matogramma presenta solo una macchia principale. fato R in acqua R e diluire a 5000 ml con lo stesso
solvente. Immediatamente prima dell'uso, diluire a
Salicina . C13H18O7. (Mr 286,3). 1131300. [138-52-3]. 10 volte il suo volume con acqua R e mescolare. Misu-
2-(Idrossimetil)fenil- -d-glucopiranoside. Salicoside.
b rare il pH (2.2.3) della soluzione diluita. Il pH e© com-
20 : ^62,5 2. preso tra 8,1 e 8,8.
ehcitapoemO
inoizaraperP

‰ Š
D 6

p.f.: da 199 ‘C a 201 ‘C. SDS-PAGE tampone di dissoluzione del campione (con-

Determinazione quantitativa. Esaminare mediante cro- centrato) . 1115000.

matografia liquida (2.2.29) come prescritto nella mono- Disciogliere 1,89 g di tris(idrossimetil)amminometano R,
grafia Salice corteccia (1583) alla concentrazione della 5,0 g di sodio laurilsolfato R e 50 mg di blu bromofenolo R
soluzione di riferimento. Il contenuto non e© inferiore al in acqua R. Aggiungere 25,0 ml di glicerolo R e diluire a
ecidnI

99,0 per cento calcolato mediante la procedura di nor- 100 ml con acquaR. Aggiustare il pH a 6,8 con acidoclori-
malizzazione. drico R e diluire a 125 ml con acqua R.

485
Reattivi

SDS-PAGE tampone del campione per condizioni ridu- grafia Te© di Giava (1229). Il contenuto non e© inferiore
centi (concentrato) . 1122100. al 95,0 per cento calcolato mediante la procedura di
Disciogliere 3,78 g di tris(idrossimetil)amminometano R, normalizzazione.
10,0 g di sodio dodecilsolfato R e 100 mg di blu bromo- Sitostanolo . C29H52O. (Mr 416,7). 1140100. [19466-47-8].
fenolo R in acqua R. Aggiungere 50,0 ml di glicerolo R e Contiene non meno del 95,0 per cento di C29H52O.
diluire a 200 ml con acqua R. Aggiungere 25,0 ml
di 2-mercaptoetanolo R. Aggiustare il pH a 6,8 (2.2.3) con b-Sitosterolo . C29H50O. (Mr 414,7). 1140200. [83-46-5].
acido cloridrico R e diluire a 250,0 ml con acqua R. Stigmast-5-en-3 -olo.
b

Alternativamente, il ditiotreitolo puo© essere usato come Polvere bianca, praticamente insolubile in acqua,
agente riducente invece del 2-mercaptoetanolo. In que- moderatamente solubile in tetraidrofurano.
sto caso preparare il tampone campione come segue: Contiene non meno del 75,0 per cento m/m di C29H50O,
disciogliere 3,78 g di tris(idrossimetil)ammino- calcolato con riferimento alla sostanza essiccata.
metano R, 10,0 g di sodio dodecilsolfato R e 100 mg di Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
blu bromofenolo R in acqua R. Aggiungere 50,0 ml di cromatografia (2.2.28), come prescritto nella monogra-
glicerolo R e diluire a 200 ml con acqua R. Aggiustare fia Fitosterolo (1911).
il pH a 6,8 (2.2.3) con acido cloridrico R, e diluire a Soluzione in esame. Disciogliere 0,100 g della sostanza
250,0 ml con acqua R. Immediatamente prima dell'uso, in esame in tetraidrofurano R e diluire a 10,0 ml con lo
aggiungere ditiotreitolo R fino ad una concentrazione stesso solvente. Introdurre 100 ml di questa soluzione
finale di 100 mM. in un pallone adatto da 3 ml ed evaporare a secchezza
Selenio . Se. (Ar 79,0). 1075900. [7782-49-2]. sotto azoto R. Al residuo aggiungere 100 ml di una
Polvere da rosso-bruna a nera o granuli, praticamente mescela preparata di recente di 50 ml di 1-metilimida-
insolubili in acqua e in alcool, solubili in acido nitrico. zolo R e 1,0 ml di eptafluoro-N-metil-N-(trimetilsilil)bu-
p.f.: circa 220 ‘C tanammide R. Chiudere il pallone e scaldare a 100 ‘C
. 1076000. [56-45-1].Vedere la monografia Serina per 15 min. Lasciar raffreddare. Iniettare 1 ml della
Serina

(0788). soluzione in esame.

Setaccio molecolare . 1056600. Sodio . Na. (Ar 22,99). 1078500. [7440-23-5].
Setaccio molecolare costituito da sodio alluminosili- Metallo la cui superficie tagliata di recente e© grigio-
cato. E' disponibile in granuli aventi una dimensione argentea brillante. A contatto con l'aria si annerisce
dei pori di 0,4 nm ed un diametro di 2 mm. rapidamente ed e© completamente ossidato a sodio
. 1129700. idrossido e convertito in sodio carbonato. Reagisce vio-
Setaccio molecolare per cromatografia
lentemente con l'acqua, producendo idrogeno ed una
Setaccio molecolare costituito da sodio alluminosili- soluzione di sodio idrossido; e© solubile in metanolo ani-
cato. La dimensione dei pori e© indicata dopo il nome dro, producendo idrogeno ed una soluzione di sodio
del reattivo nei saggi dove e© utilizzato. Se necessario e© metossido; praticamente insolubile in etere ed in etere
indicata anche la dimensione delle particelle. di petrolio.
Sierimmune rabico coniugato fluorescente . 1038700. Conservare in etere di petrolio o in paraffina liquida.
Frazione di immunoglobulina con un elevato titolo . 1078600. [6131-90-4].Vedere la monogra-
anticorpale rabico, preparata dal siero di animali idonei Sodio acetato

fia Sodio acetato (0411).

che sono stati immunizzati con virus rabico inattivato;
l'immunoglobulina e© coniugata con fluoresceina isotio- Sodio acetato anidro . C2H3NaO2. (Mr 82,0). 1078700.
cianato. [127-09-3].
. C20H20O7. (Mr 372,4). 1110500. Cristalli incolori o granuli, solubilissimi in acqua,
moderatamente solubili in alcool.
Sinensetina

[2306-27-6]. 3',4',5,6,7-Pentametossiflavone.
Polvere cristallina bianca, praticamente insolubile in Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore al 2,0
acqua, solubile in alcool. per cento, determinata per essiccamento in stufa a
p.f.: circa 177 ‘C. 100-105 ‘C.
Assorbanza (2.2.25): una soluzione in metanolo R Sodio arseniato dibasico . Vedere disodio arseniato R.
mostra tre massimi di assorbimento a 243 nm, Sodio ascorbato soluzione . 1078800. [134-03-2].
a 268 nm e a 330 nm. Disciogliere 3,5 g di acido ascorbico R in 20 ml di sodio
Determinazione quantitativa: Esaminare mediante cro- idrossido 1 M. Preparare immediatamente prima del-
matografia liquida (2.2.29) come prescritto nella mono- l'uso.

486
 Reattivi

inoizircserP
. NaN3. (Mr 65,0). 1078900. [26628-22-8]. . 1079600. [6132-04-3]. Vedere la monogra-

ilareneG
Sodio azide Sodio citrato

Polvere cristallina o cristalli bianchi, molto solubili in fia Sodio citrato (0412).
acqua, poco solubili in alcool, praticamente insolubili Sodio citrato acido. C6H6Na2O7.1ÃÙÄH2O. (Mr 263,1).
in etere. 1033200. [144-33-2]. Disodio idrogeno 2-idrossipropan-
. 1081300. [144-55-8].Vedere la mono- 1,2,3-tricarbossilato sesquidrato.

isilanA id
Sodio bicarbonato

grafia Sodio bicarbonato (0195). Polvere bianca, solubile in meno di 2 parti di acqua,

idoteM
Sodio bicarbonato soluzione . 1081301. praticamente insolubile in alcool.
Soluzione 42 g/l. Sodio cloruro . 1079500. [7647-14-5].Vedere la monogra-
Sodio bismutato . NaBiO3. (Mr 280,0). 1079000. fia Sodio cloruro (0193).
[12232-99-4].

irotinetnoC
. 1079502.

/ ilairetaM
Sodio cloruro soluzione

Contiene non meno dell'85,0 per cento di NaBiO3. Soluzione al 20 per cento m/m.
Polvere gialla o bruno-giallastra che si decompone len- . 1079503.
tamente con l'umidita© o ad alta temperatura, pratica-
Sodio cloruro soluzione satura

mente insolubile in acqua fredda. Mescolare 1 parte di sodio cloruro R con 2 parti di
acqua R, agitare di volta in volta e lasciare a riposo.
Determinazione quantitativa. Sospendere 0,200 g in Prima dell'uso, decantare la soluzione da ogni even-

ivittaeR
10 ml di una soluzione (200 g/l) di potassio ioduro R e tuale sostanza indisciolta e filtrare se necessario.
aggiungere 20 ml di acido solforico diluito R. Utiliz-
zando come indicatore 1 ml di amido soluzione R, tito- Sodio cobaltinitrito . Na3[Co(NO2)6]. (Mr 403,9)
lare con sodio tiosolfato 0,1 M fino al viraggio a colora- 1079700. [13600-98-1]. Trisodio esanitrocobaltato (III).

itnemogrA
zione arancione. Polvere giallo-arancione, molto solubile in acqua, poco

ilareneG
1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M equivale a 14,00 mg di solubile in alcool.
NaBiO3. Sodio cobaltinitrito soluzione . 1079701.
Sodio bisolfito . Vedere Sodio idrogeno solfito R. Soluzione 100 g/l. Preparare immediatamente
.Vedere sodio tetraborato R. prima dell'uso.

eifargonoM
Sodio borato

ilareneG
Sodio butansolfonato . C4H9NaO3S. (Mr 160,2). . C10H21NaO3S. (Mr 244,3).
1115600. [2386-54-1].
Sodio decansolfonato

1079800. [13419-61-9].
Polvere cristallina bianca, solubile in acqua. Polvere cristallina o fiocchi, bianchi o quasi bianchi,
p.f.: maggiore di 300 ‘C. molto solubili in acqua, solubili in metanolo.

ehcituecamraF
. 1079200. [6132-02-1]. Vedere la mono- . C10H21NaO4S. (Mr 260,3). 1138600.

emroF
Sodio carbonato Sodio decilsolfato

grafia Sodio carbonato decaidrato (0191). [142-87-0].

Sodio carbonato anidro . Na2CO3. (Mr 106,0). 1079300. Contiene non meno del 95,0 per cento di C10H21NaO4S.
[497-19-8]. Polvere bianca o quasi bianca, molto solubile in acqua.
Polvere bianca, igroscopica, molto solubile in acqua. Sodio desossicolato . C24H39NaO4. (Mr 414,6). 1131800.
Quando e© riscaldata a 300 ‘C perde non piu© dell'1 per [302-95-4]. Sodio 3 ,12 -diidrossi-5 -colan-24-oato.
eiretaM

emirP
a a b

cento della sua massa. Sodio desossiribonucleato . (Circa l'85 per cento ha una
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. massa molecolare relativa di 2 107 o maggiore).
2

Sodio carbonato soluzione . 1079301. 1079900. [73049-39-5].

ehcituecamraF

Soluzione (106 g/l) di sodio carbonato anidro R. Preparazione fibrosa bianca ottenuta dal timo di
inoizaraperP

ehcificepS

Sodio carbonato soluzione R1 . 1079302. vitello.

Soluzione (20 g/l) di sodio carbonato anidro R in Saggio di idoneita© . Disciogliere 10 mg in tampone imida-
sodio idrossido 0,1 M. zolo soluzione a pH 6,5 R e diluire a 10,0 ml con la stessa
. 1079303. soluzione tampone (soluzione a). Diluire 2,0 ml della
ehcitapoemO
inoizaraperP

Sodio carbonato soluzione R2

Soluzione (40 g/l) di sodio carbonato anidro R in soluzione (a) a 50,0 ml con tampone imidazolo soluzione
sodio idrossido 0,2 M. a pH 6,5 R. L'assorbanza (2.2.25) della soluzione, misu-
rata a 260 nm, e© compresa tra 0,4 e 0,8.
Sodio carbonato monoidrato . Na2CO3.H2O. 1131700. A 0,5 ml della soluzione (a) aggiungere 0,5 ml di tam-
[5968-11-6]. Vedere la monografia Sodio carbonato pone imidazolo soluzione a pH 6,5 R e 3 ml di acido per-
monoidrato (0192). clorico (HClO4 25 g/l). Si forma un precipitato. Centri-
ecidnI

Sodio cetostearilsolfato . 1079400. Vedere la monografia fugare. L'assorbanza del liquido sopranatante, misu-
Sodio cetostearilsolfato (0847). rata a 260 nm utilizzando una miscela di 1 ml di

487
Reattivi

tampone imidazolo soluzione a pH 6,5 R e 3 ml di acido Determinazione quantitativa. Disciogliere 0,150 g in

perclorico (HClO4 25 g/l) come bianco, non e© superiore 50 ml di acido acetico anidro R. Titolare con acido per-
a 0,3. clorico 0,1 M, determinando potenziometricamente
In ognuna di due provette porre 0,5 ml della soluzione (2.2.20) il punto di fine titolazione.
(a) e 0,5 ml di una soluzione di una preparazione di rife- 1 ml di acido perclorico 0,1 M equivale a 20,22 mg di
rimento di streptodornasi contenente 10 U.I. per millili- C7H15NaO3S.
tro in tampone imidazolo soluzione a pH 6,5 R. Ad una . C6H13NaO3S. (Mr 188,2). 1081200.
provetta aggiungere immediatamente 3 ml di acido per-
Sodio esansolfonato

[2832-45-3].
clorico (HClO4 25 g/l). Si forma un precipitato. Centri- Polvere bianca o quasi bianca, molto solubile in acqua.
fugare e raccogliere il liquido sopranatante (a). Scal-
dare l'altra provetta a 37 ‘C per 15 min ed aggiungere Sodio fluoresceinato . C20H10Na2O5. (Mr 376,3).
3 ml di acido perclorico (HClO4 25 g/l). Centrifugare e 1080700. [518-47-8]. Schultz No. 880. Colour Index No.
raccogliere il liquido sopranatante (b). L'assorbanza 45350. Fluoresceina sodica. Disodio 2-(6-ossido-3-oxo-
del liquido sopranatante (b), misurata a 260 nm in con- 3H-xanten-9-il)benzoato.
fronto a quella del liquido sopranatante (a) non e© infe- Polvere rosso-arancione, molto solubile in acqua. Le
riore a 0,15. soluzioni acquose mostrano un'intensa fluorescenza
Sodio dietilditiocarbammato . C5H10NNaS2.3H2O. verde-giallastra.
(Mr 225,3). 1080000. [20624-25-3]. Sodio fluoruro . 1080800. [7681-49-4]. Vedere la mono-
Cristalli incolori o bianchi, molto solubili in acqua, grafia Sodio fluoruro (0514).
solubili in alcool. La soluzione acquosa e© incolore. Sodio formiato . CHNaO2. (Mr 68,0). 1122200. [141-53-7].
Sodio ditionito . Na2S2O4. (Mr 174,1).1080400. [7775-14-6]. Sodio metanoato.
Sodio idrosolfito. Polvere cristallina bianca o granuli deliquescenti, solu-
Polvere cristallina bianca o bianco-grigiastra, che si bile in acqua e in glicerolo, leggermente solubile in
ossida all'aria, solubilissima in acqua, poco solubile in alcool.
alcool. p.f.: circa 253 ‘C.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. . 1033300. [10039-32-4]. Vedere la
. 1034100. [577-11-7]. Diottile sodio sol-
Sodio fosfato dibasico
Sodio docusato monografia Sodio fosfato dibasico dodecaidrato (0118).
fosuccinato. Vedere la monografia Docusato sodico . 1033301.
(1418). Sodio fosfato dibasico soluzione

Sodio dodecilsolfato . 1080500. [151-21-3]. Vedere la Soluzione 90 g/l.

monografia Sodio laurilsolfato (0098) ad eccezione del . Na2HPO4. (Mr 142,0).
contenuto che non dovrebbe essere inferiore al 99,0 per
Sodio fosfato dibasico anidro

1033400. [7558-79-4].
cento. . 1033500. [10028-24-7].
. C4H4KNaO6.4H2O. (Mr 282,2).
Sodio fosfato dibasico diidrato
Sodio e potassio tartrato
Vedere la monografia Sodio fosfato dibasico diidrato
1083500. [6381-59-5]. Potassio e sodio tartrato. (0602).
Cristalli prismatici incolori, solubilissimi in acqua. Sodio fosfato monobasico . 1080100. [13472-35-0].Vedere
Sodio edetato . 1080600. [6381-92-6].Vedere la monogra- la monografia Sodio fosfato monobasico diidrato (0194).
fia Sodio edetato (0232). . NaH2PO4. (Mr 120,0).
. C7H15NaO3S. (Mr 202,3).
Sodio fosfato monobasico anidro
Sodio eptansolfonato 1080200. [7558-80-7].
1081000. [22767-50-6]. Polvere bianca, igroscopica.
Massa cristallina bianca o quasi bianca, molto solubile Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
in acqua, solubile in metanolo.
. C7H15NaO3S.H2O. Sodio fosfato monobasico monoidrato . NaH2PO4.H2O.
Sodio eptansolfonato

(Mr 220,3). 1081100.

monoidrato
(Mr 138,0). 1080300. [10049-21-5].
Contiene non meno del 96 per cento di C7H15NaO3S, Cristalli leggermente deliquescenti o granuli, bianchi,
calcolato con riferimento alla sostanza anidra. molto solubili in acqua, praticamente insolubili in
Polvere cristallina bianca, solubile in acqua, molto alcool.
poco solubile in etanolo, praticamente insolubile in Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
etere. Sodio fosfato tribasico dodecaidrato . Na3PO4.12H2O.
Acqua (2.5.12). Non piu© dell'8 per cento, determinata su (Mr 380,1). 1094300. [10101-89-0].
0,300 g. Cristalli incolori o bianchi, molto solubili in acqua.

488
 Reattivi

inoizircserP
. Na2HPO3.5H2O. (Mr 216,0). acqua R, aggiungere 5 ml di bromo soluzione R e porre

ilareneG
Sodio fosfito pentaidrato

1132200. [13517-23-2]. sotto leggera agitazione fino a completa dissoluzione.

Polvere cristallina bianca, igroscopica, molto solubile Preparare immediatamente prima dell'uso.
in acqua. Sodio ipoclorito soluzione concentrata . 1081600.
Conservare in un contenitore ermeticamente chiuso. Contiene non meno di 25 g/l e non piu© di 30 g/l di cloro

isilanA id
idoteM
Sodio glucuronato . C6H9NaO7.H2O. (Mr 234,1). attivo.
1080900. Sodio d-glucuronato monoidrato. Liquido giallastro che da© reazione alcalina.
20 : circa + 21,5, determinato su una soluzione 20 g/l.
‰
DŠ
Determinazione quantitativa. Introdurre in un reci-
Sodio idrogeno solfato . NaHSO4. (Mr 120,1). 1131900. piente, consecutivamente, 50 ml di acqua R, 1 g di

irotinetnoC
[7681-38-1]. Sodio bisolfato.

/ ilairetaM
potassio ioduro R e 12,5 ml di acido acetico diluito R.
Molto solubile in acqua, solubilissimo in acqua bol- Diluire 10,0 ml della sostanza in esame a 100,0 ml con
lente. Si decompone in alcool, nel sodio solfato e in acqua R. Introdurre 10,0 ml di questa soluzione nel reci-
acido solforico libero. piente e titolare con sodio tiosolfato 0,1 M, usando 1 ml
p.f.: circa 315 ‘C. di amido soluzione R come indicatore.
. NaHO3S. (Mr 104,1). 1115700.

ivittaeR
Sodio idrogenosolfito 1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M equivale a 3,546 mg di
[7631-90-5]. cloro attivo.
Polvere cristallina bianca, molto solubile in acqua, Conservare al riparo dalla luce.
moderatamente solubile in alcool.
Per esposizione all'aria si perde una parte dello zolfo . NaH2PO2.H2O. (Mr 106,0). 1081700.

itnemogrA
Sodio ipofosfito

[10039-56-2]. Sodio fosfinato monoidrato.

ilareneG
diossido e la sostanza e© gradualmente ossidata a sol-
fato. Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, igrosco-
Sodio idrossido . 1081400. [1310-73-2]. Vedere la mono- pici, molto solubili in acqua, solubili in alcool.
grafia Sodio idrossido (0677). Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.

eifargonoM
. 1081401. .Vedere sodio tiosolfato R.

ilareneG
Sodio idrossido soluzione
Sodio iposolfito

Disciogliere 20,0 g di sodio idrossido R in acqua R e . 1081900. [151-21-3].Vedere la mono-

diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. Verificare Sodio laurilsolfato

grafia Sodio laurilsolfato (0098).

la concentrazione per titolazione con acido clori-
drico 1 M, usando metilarancio soluzione R come . C12H25NaO3S.

ehcituecamraF
Sodio laurilsolfonato per cromatografia

indicatore, e aggiustare ad una concentrazione di (Mr 272,4). 1132000. [2386-53-0].

emroF
200 g/l, se necessario. Polvere o cristalli bianchi o quasi bianchi, molto solu-
Sodio idrossido soluzione concentrata . 1081404. bile in acqua.
Disciogliere 42 g di sodio idrossido R in acqua R e Assorbanza (2.2.25):
diluire a 100 ml con lo stesso solvente. A51cm
%
: circa 0,05 a 210 nm,
. 1081402.
eiretaM

emirP
Sodio idrossido soluzione diluita

Disciogliere 8,5 g di sodio idrossido R in acqua R e A1cm : circa 0,03 a 220 nm,
5 %

diluire a 100 ml con lo stesso solvente. A51cm

%
: circa 0,02 a 230 nm,
Sodio idrossido soluzione metanolica . 1081403. A51cm
%
: circa 0,02 a 500 nm,
ehcituecamraF

Disciogliere 40 mg di sodio idrossido R in 50 ml di

inoizaraperP

determinata in acqua R.
ehcificepS

acqua R. Raffreddare ed aggiungere 50 ml di meta- . 1082000. [7681-57-4]. Vedere la

nolo R. Sodio metabisolfito

monografia Sodio metabisolfito (0849).

. 1081405.
. CH3SO3Na. (Mr 118,1). 1082100.
Sodio idrossido soluzione metanolica R1

Disciogliere 200 mg di sodio idrossido R in 50 ml di Sodio metansolfonato

ehcitapoemO

[2386-57-4].
inoizaraperP

acqua R. Raffreddare e aggiungere 50 ml di meta-

nolo R. Polvere cristallina bianca, igroscopica.
Sodio ioduro . 1081800. [7681-82-5]. Vedere la monogra- Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
fia Sodio ioduro (0196). Sodio molibdato . Na2MoO4.2H2O. (Mr 242,0). 1082200.
Sodio ipobromito soluzione . 1081500. [10102-40-6]. Disodio molibdato diidrato.
ecidnI

In un bagno di acqua ghiacciata mescolare 20 ml di Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, molto
sodio idrossido soluzione concentrata R e 500 ml di solubili in acqua.

489
Reattivi

Sodio molibdofosfotungstato soluzione . Reattivo di Sodio ottilsolfato . C8H17NaO4S. (Mr 232,3) 1082800.
Folin-Dënis. [142-31-4].
Bollire a ricadere, per 2 h, una miscela di 350 ml di Polvere cristallina o fiocchi, bianchi o quasi bianchi,
acqua R, 50 g di sodio tungstato R, 12 g di acido fosfomo- molto solubili in acqua, solubili in metanolo.
libdico R e 25 ml di acido fosforico R. Raffreddare e . C5H11NaO3S. (Mr 174,2)
diluire a 500 ml con acqua R.
Sodio pentansolfonato

1083000. [22767-49-3].
Sodio naftochinonsolfonato . C10H5NaO5S. (Mr 260,2). Solido cristallino bianco, solubile in acqua.
1082300. [521-24-4]. Sodio 1,2-naftochinon-4-solfonato. . C5H11NaO3S.H2O.
Polvere cristallina da gialla a gialla arancione, molto
Sodio pentansolfonato monoidrato

(Mr 192,2). 1132100.

solubile in acqua, praticamente insolubile in alcool. Solido cristallino bianco, solubile in acqua.
Sodio naftochinonsolfonato soluzione . Soluzione . NaClO4.H2O. (Mr 140,5) 1083100.
acquosa (5 g/l) di sodio naftochinonsolfonato R. Prepa- Sodio perclorato

[7791-07-3].
rare immediatamente prima dell'uso.
. C10H6Na2O7S2. (Mr 348,3). Contiene non meno del 99,0 per cento di NaClO4.H2O.
Sodio naftol-disolfonato

Sale R, 2-naftol-3,6-disolfonato di sodio. Cristalli deliquescenti bianchi, solubilissimi in acqua.

Cristalli o granuli bianchi o grigiastri, solubili in acqua, Conservare in un recipiente ben chiuso.
insolubili in alcool. La soluzione acquosa e© neutra al Sodio periodato . NaIO4. (Mr 213,9). 1083200. [7790-28-5].
tornasole. Sodio metaperiodato.
Sodio nitrato . NaNO3. (Mr 85,0). 1082400. [7631-99-4]. Contiene non meno del 99,0 per cento di NaIO4.
Polvere bianca granuli o cristalli trasparenti , incolori, Polvere cristallina bianca o cristalli bianchi, solubili in
deliquescenti in aria umida, molto solubili in acqua, acqua e negli acidi minerali.
poco solubili in alcool. Sodio periodato soluzione . 1083201.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Disciogliere 1,07 g di sodio periodato R in acqua R,
. NaNO2. (Mr 69,0). 1082500. [7632-00-0]. aggiungere 5 ml di acido solforico diluito R e diluire
a 100,0 ml con acqua R. Usare una soluzione pre-
Sodio nitrito

Contiene non meno del 97,0 per cento di NaNO2. parata di recente.
Polvere granulare bianca o polvere cristallina legger-
mente gialla, molto solubile in acqua. Sodio picrato soluzione alcalina . 1083300.
Mescolare 20 ml di acido picrico soluzione R e 10 ml di
. 1082501. una soluzione (50 g/l) di sodio idrossido R e diluire a
100 ml con acqua R.
Sodio nitrito soluzione

Soluzione 100 g/l. Preparare immediatamente

prima dell'uso. Usare entro 2 giorni dalla preparazione.
. Na4P2O7.10H2O. (Mr 446,1) 1083600.
. Na2[Fe(CN)5(NO)].2H2O.
Sodio pirofosfato
Sodio nitroprussiato
[13472-36-1]. Tetrasodio difosfato decaidrato.
(Mr 298,0). 1082600. [13755-38-9]. Sodio pentacianoni- Cristalli leggermente efflorescenti, incolori, molto solu-
trosilferrato(III) diidrato. bili in acqua.
Polvere bruno-rossastra o cristalli, molto solubili in . Vedere sodio metabisolfito R.
acqua, poco solubili in alcool. Sodio pirosolfito

. C2Na2O4. (Mr 134,0). 1082900. [62-76-0]. Sodio potassio tartrato. Vedere sodio e potassio tar-
Sodio ossalato
trato R.
Polvere cristallina bianca, solubile in acqua, pratica- . C6Na2O6. (Mr 214,0). 1122300.
mente insolubile in alcool e in etere. Sodio rodizonato

[523-21-7]. [(3,4,5,6-tetraossocicloes-1-en-1,2-ilen)dios-
Sodio ottansolfonato . C8H17NaO3S. (Mr 216,3) 1082700. si]disodio.
[5324-84-5]. Cristalli violetti, solubili in acqua con un colore giallo-
Contiene non meno del 98,0 per cento di C8H17NaO3S. arancione. Le soluzioni sono instabili e devono essere
Polvere cristallina o fiocchi, bianchi o quasi bianchi, preparate il giorno stesso dell'utilizzo.
molto solubili in acqua, solubili in metanolo. Sodio salicilato . 1083700. [54-21-7]. Vedere la monogra-
Assorbanza. L'assorbanza (2.2.25) di una soluzione fia Sodio salicilato (0413).
54 g/l misurata a 200 nm non e© superiore a 0,10 e quella Sodio solfato .Vedere la monografia Sodio solfato decai-
misurata a 250 nm non e© superiore a 0,01. drato (0100).

490
 Reattivi

inoizircserP
. 1083800. [7757-82-6]. . C2H3NaO2S. (Mr 114,1). 1084500.

ilareneG
Sodio solfato anidro Sodio tioglicolato

Calcinare a 600-700 ‘C il sodio solfato anidro che sod- [367-51-1]. Sodio mercaptoacetato.
disfa ai requisiti prescritti nella monografia Sodio sol- Povere granulare o cristalli bianchi, igroscopici, molto
fato anidro (0099). solubili in acqua e in metanolo, poco solubili in alcool.
Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore allo Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.

isilanA id
0,5 per cento, determinata per essiccamento in stufa a

idoteM
. 1084600. [10102-17-7].Vedere la mono-
130 ‘C.
Sodio tiosolfato

grafia Sodio tiosolfato (0414).

Sodio solfato decaidrato . Na2SO4.10H2O. (Mr 322,2). . Na2WO4.2H2O. (Mr 329,9). 1084700.
1132300. [7727-73-3]. Vedere la monografia Sodio sol-
Sodio tungstato

[10213-10-2]. Disodio tungstato diidrato.

fato decaidrato (0100).

irotinetnoC
Polvere cristallina bianca o cristalli incolori, molto

/ ilairetaM
Sodio solfito . 1084000. [10102-15-5].Vedere la monogra- solubili in acqua dando luogo ad una soluzione lim-
fia Sodio solfito eptaidrato (0776). pida, praticamente insolubile in alcool.
Sodio solfito anidro. 1084100. [7757-83-7]. Vedere la . Vedere potassio solfato R.
monografia Sodio solfito anidro (0775).
Solfato dipotassico

. Vedere potassio idrogenosol-

. Na2S.9H2O. (Mr 240,2). 1083900.
Solfato monopotassico

fato R.

ivittaeR
Sodio solfuro

[1313-84-4]. Disodio solfuro nonaidrato. . Vedere anidride solforosa R.

Cristalli incolori che ingialliscono rapidamente, deli-
Solfo diossido

quescenti, solubilissimi in acqua. Solfocromica miscela . Vedere miscela solfocromica R.

Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. Solfomolibdico reattivo R2 . 1086400.
Disciogliere circa 50 mg di ammonio molibdato R in

itnemogrA
ilareneG
Sodio solfuro soluzione . 1083901. 10 ml di acido solforico R.
Disciogliere, scaldando, 12 g di sodio solfuro R in . 1086500.
45 ml di una miscela di 10 volumi di acqua R e Solfomolibdico reattivo R3

Disciogliere, scaldando, 2,5 g di ammonio molibdato R

29 volumi di glicerolo 85 per cento R, lasciar raf- in 20 ml di acqua R. Diluire 28 ml di acido solforico R
freddare e diluire a 100 ml con la stessa miscela di

eifargonoM
in 50 ml di acqua R, poi raffreddare. Mescolare le due

ilareneG
solventi. soluzioni e diluire a 100 ml con acqua R.
La soluzione deve essere incolore. Conservare in un recipiente di polietilene.
Sodio tartrato . C4H4Na2O6.2H2O. (Mr 230,1) 1084200. . 1122400. Una soluzione 10 per
[6106-24-7]. Disodio (2R,3R)-2,3-diidrossibutandioato
Soluzione bloccante

cento V/V di acido acetico R.

ehcituecamraF
diidrato. . 1033601. Borato soluzione.

emroF
Cristalli o granuli bianchi, solubilissimi in acqua, prati-
Soluzione borica

camente insolubili in alcool. Disciogliere 9,55 g di sodio tetraborato R in acido solfo-

rico R, scaldando a b.m., e diluire a 1 litro con lo stesso
Sodio tetraborato . 1033600. [1303-96-4]. Vedere la acido.
monografia Borace (0013). . 1012201.
.
Soluzione colorante di Coomassie

eiretaM
Una soluzione (1,25 g/l) di blu acido 83 R in una miscela

emirP
Sodio tetradeuteriodimetilsilapentanoato

C6H92H4NaO2Si. (Mr 172,3). 1084300. TSP. Sodio consistente di 1 volume di acido acetico glaciale R,
(2,2,3,3-tetradeuterio)-4,4-dimetil-4-silapentanoato. 4 volumi di metanolo R e 5 volumi di acqua R. Filtrare.
Il grado di deuterazione non e© inferiore al 99 per cento. . Vedere cupri-citrica soluzione R
ehcituecamraF

Polvere cristallina bianca, molto solubile in acqua, in

Soluzione cupri-citrica
inoizaraperP

. Vedere cupri-tartarica solu-

ehcificepS

etanolo e in metanolo. Soluzione cupri-tartarica

zione R
p.f.: circa 300 ‘C. . vedere soluzione cupri-
Acqua e deuterio ossido. Non piu© dello 0,5 per cento.
Soluzione cupro-

. 1012202.
. NaB(C6H5)4. (Mr 342,2).
Soluzione di decolorazione

Una miscela consistente di 1 volume di acido acetico

ehcitapoemO
inoizaraperP

Sodio tetrafenilborato

1084400. [143-66-8]. glaciale R, 4 volumi di metanolo R e 5 volumi di

Polvere consistente, bianca o leggermente giallastra, acqua R.
molto solubile in acqua e in acetone. . 1122500.
. 1084401.
Soluzione di sviluppo
Sodio tetrafenilborato soluzione
Diluire 2,5 ml di una soluzione (20 g/l) di acido citrico R
Filtrare prima dell'uso, se necessario. e 0,27 ml di formaldeide R a 500,0 ml con acqua R.
Soluzione 10 g/l.
ecidnI

Soluzione diluente per ialuronidasi . Vedere diluente per

Usare entro 1 settimana. ialuronidasi R.

491
Reattivi

Soluzione elementare standard per la spettrometria ato- lare con 20 ml di cloroformio R ed agitare per 2 h. Fil-
mica 1,000 g/l . 5004000. trare sotto vuoto e sospendere il residuo ottenuto in
Questa soluzione e© preparata, generalmente in condi- 5-10 ml di una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R.
zioni acide, dall'elemento o da un sale dell'elemento Per l'uso nel dosaggio del fattore IX, preparare una
che ha un contenuto minimo non inferiore al 99,0 per diluizione in una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R in
cento. La quantita© per litro della soluzione e© maggiore modo tale che tra diluizioni consecutive della prepara-
di 0,995 g durante il periodo di garanzia, durante il zione di riferimento vi siano differenze di tempi di coa-
quale il flacone non e© stato aperto. Il materiale di par- gulazione di circa 10 s.
tenza (elemento o sale) e le caratteristiche del solvente Conservare le sospensioni diluite a ^30 ‘C ed usare
finale (natura e acidita© , ecc.) sono indicate nell'eti- entro 6 settimane.
chetta.
. Vedere Solu- Squalano . C30H62. (Mr 422,8). 1084900. [111-01-3].
Soluzione fisiologica tamponata a pH 7,2

zioni tampone (4.1.3). 2,6,10,15,19,23-Esametiltetracosano.

. 1122600. Liquido oleoso, incolore, molto solubile in etere e negli
Soluzione fissante

A 250 ml di metanolo R aggiungere 0,27 ml di formal- oli grassi, poco solubile in acetone, in alcool, in acido
deide R e diluire a 500,0 ml con acqua R. acetico glaciale ed in metanolo.
d2020 : da 0,811 a 0,813.
n20D : da 1,451 a 1,453.
Soluzione fissante per focalizzazione isoelettrica in gel di

poliacrilammide. 1138700.
Soluzione contenente 35 g di acido solfosalicilico R e Staccio molecolare . Vedere setaccio molecolare R.
100 g di acido tricloroacetico R per litro di acqua R. Stagno . Sn. (Ar 118,7). 1090800. [7440-31-5].
Soluzione per il saggio di risoluzione della cromatografia

. 1116600. Granuli bianco-argentei, solubili in acido cloridrico

su strato sottile
con rilascio di idrogeno.
Preparare una miscela di 1,0 ml di ciascuna delle Arsenico (2.4.2). 0,1 g soddisfano al saggio limite A per
seguenti soluzioni e diluire a 10,0 ml con acetone R: l'arsenico (10 ppm).
una soluzione (0,5 g/l) di rosso Sudan G R in toluene R,
una soluzione (0,5 g/l) di metilarancio R in etanolo R Stagno(-oso) cloruro . SnCl2.2H2O. (Mr 225,6). 1085000.
preparata immediatamente prima dell'uso, una solu- [10025-69-1]. Stagno dicloruro diidrato.
zione (0,5 g/l) di verde bromocresolo R in acetone R e Contiene non meno del 97,0 per cento di SnCl2.2H2O.
una soluzione (0,25 g/l) di rosso metile R in acetone R.
... Vedere Soluzioni tampone Cristalli incolori, solubilissimi in acqua, molto solubili
Soluzione salina tamponata

(4.1.3). in alcool, in acido acetico glaciale e in acido cloridrico

diluito e concentrato.
Soluzione standard per la microdeterminazione dell'ac-

. 5003700. Determinazione quantitativa. Disciogliere 0,500 g in

qua
15 ml di acido cloridrico R in una beuta con tappo a
Soluzione standard, disponibile in commercio, per la smeriglio. Aggiungere 10 ml di acqua R e 5 ml di cloro-
titolazione coulombometrica dell'acqua, con un conte- formio R. Titolare rapidamente con potassio iodato
nuto certificato di acqua in un solvente idoneo. 0,05 M finchë lo strato cloroformico sia incolore.
Soluzione tamponata di acetone . Vedere Soluzioni tam- 1 ml di potassio iodato 0,05 M equivale a 22,56 mg di
pone (4.1.3), ``acetone soluzione tamponata R''. SnCl2.2H2O.
Soluzione tampone per l'aggiustamento della

. Vedere Soluzioni tampone

forza
Stagno(-oso) cloruro soluzione . 1085001.
Scaldare 20 g di stagno R con 85 ml di acido clori-
ionica totale pH 5,0-5,5

(4.1.3). ``tampone per l'aggiustamento della forza ionica

totale pH 5,0-5,5 R''. drico R finchë non sia piu© rilasciato idrogeno.
. 1084800. [50-70-4]. Vedere la monografia Lasciar raffreddare.
Conservare la soluzione su un eccesso di stagno R,
Sorbitolo

Sorbitolo (0435).
Sostituto piastrinico . 1066400. al riparo dall'aria.
A 0,5-1 g di fosfolipidi R aggiungere 20 ml di acetone R e Stagno(-oso) cloruro soluzione R1 . 1085002.
lasciare a riposo per 2 h agitando di frequente. Centri- Immediatamente prima dell'uso, diluire 1 volume
fugare per 2 min e scartare il liquido sopranatante. Sec- di stagno(-oso) cloruro soluzione R con 10 volumi
care il residuo utilizzando una pompa a vuoto, mesco- di acido cloridrico diluito R.

492
 Reattivi

inoizircserP
. 1085003. . 1020100.

ilareneG
Stagno(-oso) cloruro soluzione R2 Substrato cromoforo R2

A 8 g di stagno(-oso) cloruro R aggiungere 100 ml Disciogliere d-fenilalanil-piperazina-arginina p-nitro-

di una soluzione di acido cloridrico R al 20 per anilide dicloridrato in acqua R per ottenere una solu-
cento V/V. Agitare fino a dissoluzione, scaldando, zione 0,003 M. Diluire prima dell'uso in tampone tris
se necessario, a b.m. a 50 ‘C. Far passare una cor- (idrossimetil)amminometano-EDTA-soluzione a pH 8,4

isilanA id
rente di azoto R per 15 min. Preparare immediata- R fino ad avere una soluzione 0,0005 M.

idoteM
mente prima dell'uso. Substrato di plasma . Vedere plasma substrato R.
Staphylococcus aureus ceppo V8 proteasi .
Tipo XVII-B . . 1039900.
1115800. [66676-43-5].
Succo gastrico artificiale

Disciogliere 2,0 g di sodio cloruro R e 3,2 g di pepsina

irotinetnoC
/ ilairetaM
Enzima proteolitico microbico extracellulare. Polvere polvere R in acqua R. Aggiungere 80 ml di acido clori-
liofilizzata contenente da 500 unita© a 1000 unita© per drico 1 M e diluire a 1000 ml con acqua R.
milligrammo di solido.
. 1085500. Sulfanilammide . C6H8N2O2S. (Mr 172,2). 1086100.
Stirene-divinilbenzene copolimero

Globuli di polimero reticolato incrociati, rigidi, porosi. [63-74-1]. 4-Amminobenzensolfonammide.

Polvere bianca, poco solubile in acqua, molto solubile

ivittaeR
Sono disponibili numerose qualita© con differente
dimensione delle particelle. La dimensione delle parti- in acqua bollente, in acetone, negli acidi diluiti e nelle
celle e© specificata dopo il nome del reattivo nel saggio soluzioni di idrossidi alcalini, moderatamente solubile
in cui viene usato. in alcool, in etere e in etere di petrolio.
. 1085300. [3810-74-0]. Vedere la p.f.: circa 165 ‘C.

itnemogrA
ilareneG
Streptomicina solfato

monografia Streptomicina solfato (0053). Sulfatiazolo . C9H9N3O2S2. (Mr 255,3). 1086300.

Stronzio carbonato . SrCO3. (Mr 147,6). 1122700. [72-14-0]. 4-Ammino-N-(tiazol-2-il)benzensolfonam-
[1633-05-2]. mide.
Polvere cristallina bianca. Polvere o cristalli bianchi o bianco-giallastri, molto

eifargonoM

ilareneG
Contiene non meno del 99,5 per cento di SrCO3. poco solubili in acqua, solubili in acetone, poco solubili
Sr(OH)2. 8H2O. (Mr 265.8). in alcool. Si scioglie negli acidi minerali diluiti e nelle
soluzioni di idrossidi e carbonati alcalini.
Stronzio idrossido.

Polvere bianca, cristallina scorrevole - Moderatamente

solubile in acqua. Assorbe anidride carbonica dall'aria. p.f.: circa 200 ‘C.

ehcituecamraF
Deve contenere non meno del 95,0 per cento di stronzio . C6H12O6. (Mr 180,16). 1111000. [87-81-0].

emroF
Tagatosio

idrossido (Sr(HO)2.8H2O) e non piu© del 3,0 per cento d -lixo-Essulosio.

di stronzio carbonato (SrCO3). Polvere bianca.
Determinazione quantitativa. In una benta con tappo a 20 : 2,3 (soluzione 21,9 g/l in acqua R).
smeriglio, disciogliere 5,0 g circa, esattamente pesati, ‰
D
Š ÿ

in 200 ml di acqua esente da anidride carbonica R. p.f.: da 134 ‘C a 135 ‘C.

eiretaM

emirP
Titolare con acido cloridrico 1 M in presenza di fenolfta- . 1087000. [14807-96-6]. Vedere la monografia
leina soluzione R.
Talco

Talco (0438).
Aggiungere quindi metilarancio soluzione R e titolare . Tl2SO4. (Mr 504,8). 1089100.
ehcituecamraF

con acido cloridrico 1 M. Ogni ml di acido cloridrico Tallio(-oso) solfato

inoizaraperP

[7446-18-6]. Ditallio solfato.

ehcificepS

1 M richiesto nella titolazione in presenza di fenolfta-

leina soluzione R corrisponde a 132,9 mg di Prismi romboidali bianchi, poco solubili in acqua, pra-
Sr (OH)2.8H2O e ogni ml di acido cloridrico 1 M richie- ticamente insolubili in alcool.
sto nell'ulteriore titolazione in presenza di metilarancio . Vedere acido tannico R.
soluzione R corrispondente a 73,8 mg di SrCO3.
ehcitapoemO

Tannino
inoizaraperP

. 1020000. Tebaina . C19H21NO3. (Mr 311,4). 1089200. [115-37-7].

Substrato cromoforo R1
(5R,9R,13S)-4,5-Epossi-3,6-dimetossi-9a-metilmorfin-
Disciogliere N- -benzilossicarbonil-d-arginil-l-glicil-
a 6,8-diene.
l -arginina p-nitroanilide dicloridrato in acqua R per
ottenere una soluzione 0,003 M. Diluire prima dell'uso Polvere cristallina bianca o giallo pallido, molto poco
in tampone tris(idrossimetil)amminometano-EDTA solubile in acqua, solubile in etanolo caldo e in toluene,
poco solubile in etere.
ecidnI

soluzione a pH 8,4 R fino ad avere una soluzione

0,0005 M. p.f.: circa 193 ‘C.

493
Reattivi

Cromatografia (2.2.27). Esaminare come prescritto nel Il 4-terpinenolo usato in gas cromatografia soddisfa
saggio di identificazione B nella monografia Oppio all'ulteriore saggio seguente:
(0777), deponendo sulla lastra in forma di bande Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
(20 mm 3 mm) 20 ml di una soluzione 0,5 g/l. Il cro-
2
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
matogramma ottenuto presenta una macchia principale fia Lavanda essenza (1338).
di colore rosso-arancione o rosso con un Rf di circa 0,5. Soluzione in esame. La sostanza da esaminare.
Tecnazene . C6HCl4NO2. (Mr 260,9). 1132400. L'area del picco principale non e© inferiore al 98,0 per
[117-18-0]. cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte-
p.f.: da 99 ‘C a 100 ‘C. nuto.
p.e.: circa 304 ‘C. . C10H18O. (Mr 154,2).1087300. [98-55-5].
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di
a-Terpineolo

(RS)-2-(4-Metil-3-cicloesenil)-2-propanolo.
riferimento (10 ng/ml in cicloesano). Cristalli incolori, praticamente insolubili in acqua,
Teobromina . 1138800. [83-67-0]. Vedere la monografia solubili in alcool ed in etere.
Teobromina (0298). d2020 : circa 0,935
Teofillina . 1089300. [58-55-9]. Vedere la monografia n20D : circa 1,483
Teofillina (0229). 20 : circa 92,5
. C10H16. (Mr 136,2). 1140300. [99-86-5]. ‰ Š
D
p.f.: circa 35 ‘C.
a-Terpinene

1-Isopropil-4-metilcicloesa-1,3-diene.
Liquido chiaro, quasi incolore. Puo© contenere dall'1 per cento al 3 per cento di -terpi-
b

d420 : circa 0,837. neolo.

n20D : circa 1,478. L' -terpineolo usato in gas cromatografia soddisfa all'ul-
p.e.: circa 174 ‘C. teriore saggio seguente:
L' -terpinene utilizzato in gas cromatografia soddisfa Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
all'ulteriore saggio seguente: cromatografia (2.2.28) nelle condizioni descritte nella
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas monografia Anice essenza (0804).
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- Soluzione in esame. Soluzione 100 g/l in esano R.
fia Melaleuca essenza (1837). L'area del picco principale non e© inferiore al 97,0 per
Il contenuto non e© inferiore al 95 per cento, calcolato cento dell'area totale dei picchi. Trascurare il picco
mediante la procedura di normalizzazione. dovuto all'esano.
. C10H16. (Mr 136,2). 1115900. [99-85-4]. Terpinolene . C10H16. (Mr 136,2). 1140400. [586-62-9].
p-Menta-1,4(8)-diene. 4-Isopropiliden-1-metilciclo-
c-Terpinene

1-Isopropil-4-metilcicloesa-1,4-diene.
Liquido oleoso. esene.
d415 : circa 0,850. Liquido chiaro, quasi incolore.
n15D : da 1,474 a 1,475. d420 : circa 0,863.
p.e.: da 183 ‘C a 186 ‘C. n20D : circa 1,488.
Il -terpinene usato in gas cromatografia soddisfa all'ul- p.e.: circa 184 ‘C.
teriore saggio seguente: Il terpinolene utilizzato in gas cromatografia soddisfa
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas all'ulteriore saggio seguente:
cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra- Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
fia Menta essenza (0405). cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
Soluzione in esame. La sostanza da esaminare. fia Melaleuca essenza (1837).
L'area del picco principale non e© inferiore al 93,0 per Il contenuto non e© inferiore al 90 per cento, calcolato
cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte- mediante la procedura di normalizzazione.
nuto. . 1025900. [91053-39-3].
. C10H18O. (Mr 154,2). 1116000. [562-74-3].
Terra d'infusori
4-Terpinenolo

4-Metil-1-(1-metiletil)cicloes-3-en-1-olo. p-Ment-1-en-4- Polvere granulare fine bianca o quasi bianca, costituita

olo. da frustoli silicei di diatomee fossili o da frammenti di
diatomee fossili, praticamente insolubile in acqua, in
Liquido incolore oleoso. alcool ed in etere. La sostanza puo© essere identificata
d2020 : circa 0,934. mediante esame microscopico con un ingrandimento
n20D : circa 1,477. di 500 volte.
p.e.: da 209 ‘C a 212 ‘C. Terra d'infusori per gas cromatografia . 1026000.

494
 Reattivi

inoizircserP
Polvere granulare fine bianca o quasi bianca, costituita . 1087400. [57-85-2]. Vedere la

ilareneG
Testosterone propionato

da frustoli silicei di diatomee fossili o da frammenti di monografia Testosterone propionato (0297).

diatomee fossili, praticamente insolubile in acqua, in . C16H36BrN. (Mr 322,4).
alcool ed in etere. La sostanza puo© essere identificata
Tetrabutilammonio bromuro

1087500. [1643-19-2].
mediante esame microscopico con un ingrandimento Cristalli bianchi o quasi bianchi.
di 500 volte. La sostanza e© purificata per trattamento

isilanA id
idoteM
con acido cloridrico R e lavaggio con acqua R. p.f.: da 102 ‘C a 104 ‘C.
Dimensione delle particelle. Non piu© del 5 per cento e© Tetrabutilammonio diidrogeno fosfato. C16H38NO4P.
trattenuto su un setaccio No. 180. Non piu© del 10 per (Mr 339,5). 1087600. [5574-97-0].
cento passa attraverso un setaccio No. 125. Polvere bianca, igroscopica.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Terra d'infusori per gas cromatografia R1 . 1026100. pH (2.2.3). Una soluzione 170 g/l ha un pH di circa 7,5.
Polvere granulare fine bianca o quasi bianca, costi- Assorbanza (2.2.25). L'assorbanza di una soluzione
tuita da frustoli silicei di diatomee fossili o da 170 g/l, determinata a 210 nm e© di circa 0,10.
frammenti di diatomee fossili, praticamente insolu- Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
bile in acqua, in alcool ed in etere. La sostanza . C16H37NO4S.

ivittaeR
puo© essere identificata mediante esame microsco- Tetrabutilammonio idrogeno

(Mr 339,5). 1087700. [32503-27-8].

solfato

pico con un ingrandimento di 500 volte. La Polvere cristallina o cristalli incolori, molto solubili in
sostanza e© purificata per trattamento con acido clo- acqua ed in metanolo.
ridrico R e lavaggio con acqua R.
Dimensione delle particelle. Non piu© del 5 per p.f.: da 169 ‘C a 173 ‘C.

itnemogrA
ilareneG
cento e© trattenuto su un setaccio No. 250. Non piu© Assorbanza (2.2.25). L'assorbanza di una soluzione
del 10 per cento passa attraverso un setaccio 50 g/l, ad una lunghezza d'onda compresa tra 240 nm
No. 180. e 300 nm, non e© superiore a 0,05.
. 1026200. Tetrabutilammonio idrossido . C16H37NO.30H2O.
(Mr 800). 1087800. [2052-49-5].
Terra d'infusori per gas cromatografia R2

eifargonoM
Polvere granulare fine bianca o quasi bianca 2con

ilareneG
una area superficiale specifica di circa 0,5 m /g, Contiene non meno del 98,0 per cento di
costituita da frustoli silicei di diatomee fossili o da C16H37NO.30H2O.
frammenti di diatomee fossili, praticamente insolu- Cristalli bianchi o quasi bianchi, solubili in acqua.
bile in acqua, in alcool ed in etere. La sostanza Determinazione quantitativa. Disciogliere 1,000 g in

ehcituecamraF
puo© essere identificata mediante esame microsco- 100 ml di acqua R. Titolare immediatamente con acido

emroF
pico con un ingrandimento di 500 volte. La cloridrico 0,1 M determinando potenziometricamente
sostanza e© purificata per trattamento con acido clo- (2.2.20) il punto di fine titolazione. Effettuare una tito-
ridrico R e lavaggio con acqua R. lazione in bianco.
Dimensione delle particelle. Non piu© del 5 per 1 ml di acido cloridrico 0,1 M equivale a 80,0 mg di
cento e© trattenuto su un setaccio No. 180. Non piu© C16H37NO.30H2O.
eiretaM

emirP
del 10 per cento passa attraverso un setaccio .
No. 125. Tetrabutilammonio idrossido

1087802. [2052-49-5].
soluzione (400 g/l)

Terra d'infusori silanizzata per gas .

cromatografia Soluzione contenente 400 g/l di C16H37NO
ehcituecamraF

1026300. (Mr 259,5), preparata per diluizione di un reattivo

inoizaraperP

ehcificepS

Terra d'infusori per gas cromatografia R silanizzata con di qualita© idonea.

dimetildiclorosilano o altri agenti silanizzanti idonei. Tetrabutilammonio idrossido soluzione (104 .
g/l)

1087801.
Soluzione contenente 104 g/l di C16H37NO
Terra d'infusori silanizzata per gas cromatografia

. 1026400.
ehcitapoemO
inoizaraperP

(Mr 259,5), preparata per diluizione di un reattivo

R1

Preparata da mattoni refrattari rosa triturati e di qualita© idonea.

silanizzata con dimetildiclorosilano o altri agenti
silanizzanti idonei. La sostanza e© purificata per . C16H36IN. (Mr 369,4).
trattamento con acido cloridrico R e lavaggio con
Tetrabutilammonio ioduro

1087900. [311-28-4].
acqua R. Contiene non meno del 98,0 per cento di C16H36IN.
ecidnI

Testosterone . 1116100. [58-22-0]. Vedere la monografia Polvere cristallina o cristalli bianchi o leggermente
Testosterone (1373). colorati, solubili in alcool.

495
Reattivi

Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,02 per Tetraetilammonio idrogenosolfato . C8H21NO4S. (Mr 227,3).
cento. 1116200. [16873-13-5].
Determinazione quantitativa. Disciogliere 1,200 g in Polvere igroscopica.
30 ml di acqua R. Aggiungere 50,0 ml di argento p.f.: 245 ‘C circa.
nitrato 0,1 M e 5 ml di acido nitrico diluito R. Titolate . C8H21NO.
l'eccesso di argento nitrato con ammonio tiocianato
Tetraetilammonio idrossido soluzione

(Mr 147,3). 1100300. [77-98-5].

0,1 M, usando 2 ml di ferro(-ico) ammonico solfato solu- La soluzione 200 g/l e© un liquido incolore, fortemente
zione R2 come indicatore. alcalino.
1 ml di argento nitrato 0,1 M equivale a 36,94 mg di d2020 : circa 1,01.
C16H36IN. n20D : circa 1,372.
Tetracloroetano . C2H2Cl4. (Mr 167,9). 1088000. [79-34-5]. Qualita© HPLC.
1,1,2,2-Tetracloroetano. . C8H23N5. (Mr 189,3).
Liquido incolore limpido, poco solubile in acqua, Tetraetilene pentammina

1102000. [112-57-2]. 3,6,9-Triazaundecan-1,11-diam-

miscibile con alcool e con etere. mina.
d2020 : circa 1,59. Liquido incolore, solubile in acetone.
n20D : circa 1,495. n20D : circa 1,506.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per Conservare al riparo dall'umidita© e dal calore.
cento distilla tra 145 ‘C e 147 ‘C. Tetraidrofurano . C4H8O. (Mr 72,1). 1088500. [109-99-9].
Tetraclorvinfos . C10H9Cl4O4P. (Mr 366,0). 1132500. Tetrametilene ossido.
[22248-79-9]. Liquido infiammabile incolore, limpido, miscibile con
p.f.: circa 95 ‘C. acqua, con alcool e con etere.
Puo© essere utilizzata un'idonea e certificata soluzione di d2020 : circa 0,89.
riferimento (10 ng/ml in iso-ottano). Non distillare se il tetraidrofurano non soddisfa al saggio
. C14H30. (Mr 198,4). 1088200. [629-59-4]. dei perossidi.
Perossidi. Porre 8 ml di potassio ioduro e amido solu-
Tetradecano

n-Tetradecano.
Contiene non meno del 99,5 per cento m/m di C14H30. zione R in un cilindro con tappo a smeriglio da 12 ml,
del diametro di circa 1,5 cm. Riempire completamente
Liquido incolore. con la sostanza in esame, agitare vigorosamente e
d2020 : circa 0,76. lasciare a riposo proteggendo dalla luce per 30 min.
n20D : circa 1,429. Non appare alcuna colorazione.
p.e.: circa 252 ‘C. Il tetraidrofurano utilizzato in spettrofotometria soddisfa
p.f.: circa ^5 ‘C. all'ulteriore requisito seguente:
Trasmittanza minima (2.2.25) determinata usando
Tetradecilammonio bromuro . C40H84BrN. (Mr 659). acqua R come bianco:
1088300. [14937-42-9]. Tetrakis(decil)ammonio bro- 20 per cento a 255 nm,
muro. 80 per cento a 270 nm,
Polvere cristallina o cristalli bianchi o leggermente 98 per cento a 310 nm.
colorati.
p.f.: da 88 ‘C a 89 ‘C. Tetrametilammonio cloruro. C4H12ClN. (Mr 109,6).
1100400. 75-57-0.
Tetraeptilammonio bromuro . C28H60BrN. (Mr 490,7). Cristalli incolori, solubili in acqua e in alcool.
1088400. [4368-51-8]. p.f.: circa 300 ‘C, con decomposizione.
Polvere cristallina o cristalli, bianchi o leggermente . C4H13NO4S.
colorati. Tetrametilammonio idrogenosolfato

(Mr 171,2). 1116400. [80526-82-5].

p.f.: da 89 ‘C a 91 ‘C. Polvere igroscopica.
Tetraesilammonio idrogenosolfato . C24H53NO4S. p.f.: circa 295 ‘C.
(Mr 451,8). 1116300. [32503-34-7]. N,N,N-Triesilesan-1- . C4H13NO.5H2O.
amminio idrogenosolfato. Tetrametilammonio idrossido

(Mr 181,2). 1122800. [10424-65-4]. Tetrametilammonio

Cristalli bianchi. idrossido pentaidrato.
p.f.: da 100 ‘C a 102 ‘C. Qualita© adatta per HPLC.

496
 Reattivi

inoizircserP
. 1088600. . C4H12Si. (Mr 88,2). 1088900. [75-76-3].

ilareneG
Tetrametilammonio idrossido soluzione Tetrametilsilano

[75-59-2]. TMS.
Contiene non meno del 10,0 per cento m/m di Liquido incolore limpido, molto poco solubile in
C4H13NO (Mr 91,2). acqua, solubile in acetone ed in alcool.
Liquido incolore o giallo molto pallido, limpido, misci- d2020 : circa 0,64.

isilanA id
idoteM
bile con acqua e con alcool. n20D : circa 1,358.
Determinazione quantitativa. A 1,000 g aggiungere p.e.: circa 26 ‘C.
50 ml di acqua R e titolare con acido solforico 0,05 M, Il tetrametilsilano usato in spettrometria di risonanza
utilizzando 0,1 ml di rosso metile soluzione R come indi- magnetica nucleare soddisfa all'ulteriore requisito
catore.

irotinetnoC
seguente:

/ ilairetaM
1 ml di acido solforico 0,05 M equivale a 9,12 mg di Nello spettro di risonanza magnetica nucleare di una
C4H13NO. soluzione approssimativamente al 10 per cento V/V di
. tetrametilsilano in cloroformio deuterato R, l'intensita©
di un eventuale segnale estraneo, esclusi quelli dovuti
Tetrametilammonio idrossido soluzione diluita

1088601.
alle bande laterali di rotazione e al cloroformio, non e©

ivittaeR
Diluire 10 ml di tetrametilammonio idrossido solu- maggiore dell'intensita© dei segnali satelliti del C-13, col-
zione R a 100 ml con alcool esente da aldeide R. locati ad una distanza di 59,1 Hz su ciascun lato del
Preparare immediatamente prima dell'uso. segnale principale del tetrametilsilano.
Tetrametilbenzidina . C16H20N2. (Mr 240,3). 1132600. Tiamazolo . C4H6N2S. (Mr 114,2). 1089400. [60-56-0].
Metimazolo. 1-Metil-1H-imidazol-2-tiolo.

itnemogrA
[54827-17-7]. 3,3',5,5'-Tetrametilbifenil-4,4'-diammina.

ilareneG
Polvere praticamente insolubile in acqua, solubilissima Polvere cristallina bianca o quasi bianca, molto solubile
in metanolo. in acqua, solubile in alcool ed in diclorometano, mode-
p.f.: circa 169 ‘C. ratamente solubile in etere.
. C17H22N2. (Mr 254,4). p.f.: circa 145 ‘C.

eifargonoM

ilareneG
Tetrametildiamminodifenilmetano

1088700. [101-61-1]. 4,4'-Metilenbis-(N,N-dimetilanilina). Timina . C5H6N2O2. (Mr 126,1). 1090400. [65-71-4].

Cristalli o lamelle da bianco a bianco-bluastro, pratica-
5-Metilpirimidin-2,4(1H,3H)-dione.
mente insolubili in acqua, poco solubili in alcool, solu- Lamine o aghi corti, poco solubili in acqua fredda,
bili negli acidi minerali, molto solubili in etere. solubili in acqua calda. Si scioglie nelle soluzioni diluite

ehcituecamraF
di idrossidi alcalini.
p.f.: circa 90 ‘C. . C28H30O4. (Mr 430,5).1090700. [125-20-2].

emroF
Timolftaleina
Tetrametildiamminodifenilmetano reattivo . 1088701. 3,3-Bis(4-idrossi-5-isopropil-2-metilfenil)-3H-isobenzo-
Soluzione A. Disciogliere 2,5 g di tetrametildiam- furan-1-one.
minodifenilmetano R in 10 ml di acido acetico Polvere bianca o bianco-giallastra, praticamente inso-
glaciale R e aggiungere 50 ml di acqua R. lubile in acqua, solubile in alcool, si scioglie nelle solu-

eiretaM
zioni diluite di idrossidi alcalini.

emirP
Soluzione B. Disciogliere 5 g di potassio ioduro R in
100 ml di acqua R. Timolftaleina soluzione . 1090701.
Soluzione C. Disciogliere 0,30 g di ninidrina R in Soluzione 1 g/l in alcool R.
10 ml di acido acetico glaciale R e aggiungere Saggio di sensibilita© . A 0,2 ml della timolftaleina
ehcituecamraF
inoizaraperP

90 ml di acqua R. soluzione aggiungere 100 ml di acqua esente da ani-

ehcificepS

Mescolare la soluzione A, la soluzione B e 1,5 ml dride carbonica R. La soluzione e© incolore. Non

della soluzione C. sono necessari piu© di 0,05 ml di sodio idrossido
0,1 M per far virare la colorazione al blu.
. C6H16N2. (Mr 116,2). Viraggio. Da pH 9,3 (incolore) a pH 10,5 (blu).
ehcitapoemO
inoizaraperP

Tetrametiletilendiammina

1088800. [110-18-9]. N,N,N',N'-Tetrametiletilendiam-

mina. Timolo . 1090500. [89-83-8]. Vedere la monografia
Liquido incolore, miscibile con acqua, con alcool e con Timolo (0791).
etere. Il timolo usato in gas cromatografia soddisfa all'ulteriore
d2020 : circa 0,78. saggio seguente:
Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
n20D : circa 1,418.
ecidnI

cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-

p.e.: circa 121 ‘C. fia Menta essenza (0405).

497
Reattivi

Soluzione in esame. Disciogliere 0,1 g in circa 10 ml di Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono-
acetone R. grafia Levodopa (0038); il cromatogramma presenta
L'area del picco principale non e© inferiore al 95,0 per solo una macchia principale.
cento dell'area di tutti i picchi nel cromatogramma otte- Titanio . Ti. (Ar 47,88). 1091000. [7440-32-6].
nuto (trascurare il picco dovuto all'acetone). Contiene non meno del 99 per cento di Ti.
Tioacetammide . C2H5NS. (Mr 75,1). 1089600. [62-55-5]. Polvere metallica, fili sottili (diametro non superiore a
Polvere cristallina o cristalli incolori, molto solubili in 0,5 mm), in spugna.
acqua ed in alcool. p.f.: circa 1668 ‘C.
p.f.: circa 113 ‘C. Densita© : circa 4,507 g/cm3.
Tioacetammide reattivo . 1089601. Titanio diossido . 1117900. [13463-67-7].Vedere la mono-
A 0,2 ml di tioacetammide soluzione R aggiungere grafia Titanio diossido (0150).
1 ml di una miscela di 5 ml di acqua R, 15 ml di Titanio tricloruro . TiCl3. (Mr 154,3). 1091200. [7705-07-9].
sodio idrossido 1 M e 20 ml di glicerolo 85 per cen- Titanio(III) cloruro.
to R. Scaldare a b.m. per 20 s. Preparare immedia- Cristalli viola-rossastri, deliquescenti, solubili in acqua
tamente prima dell'uso. ed in alcool, praticamente insolubili in etere.
Tioacetammide soluzione . 1089602. p.f.: circa 440 ‘C.
Soluzione 40 g/l. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
Tiodietilenglicole . C4H10O2S. (Mr 122,2). 1122900. Titanio tricloruro soluzione . 1091201.
[111-48-8]. Di(2-idrossietil)solfuro. d20 : circa 1,19.
20
Liquido viscoso, incolore o giallo. Soluzione 150 g/l in acido cloridrico (100 g/l di
Contiene non meno del 99,0 per cento di C4H10O2S. HCl).
d2020 : circa 1,18. Titanio tricloruro-acido solforico reattivo . 1091202.
Tiomersale . C9H9HgNaO2S. (Mr 404,8). 1089800. Mescolare con cautela 20 ml di titanio tricloruro
[54-64-8]. Sodio mercuriotiolato. Sodio 2-[(etilmercu- soluzione R con 13 ml di acido solforico R. Aggiun-
rio)tio]benzoato. Sodio etilmercurio tiosalicilato. gere idrogeno perossido soluzione concentrata R in
Polvere cristallina impalpabile, bianco-giallastra, solu- quantita© sufficiente a dare un colore giallo. Scal-
bilissima in acqua, molto solubile in alcool, pratica- dare fino a sviluppo di fumi bianchi. Lasciar raf-
mente insolubile in etere. freddare. Diluire con acqua R e ripetere il riscalda-
. C12H10N3SCl. (Mr 263,8). 3,7-Diamminofeno- mento e l'aggiunta di acqua R fino ad ottenere una
Tionina

tiaz-5-inio cloruro. Schultz No. 1036. Colour Index soluzione incolore. Diluire a 100 ml con acqua R.
No 52000. o-Tolidina . C14H16N2. (Mr 212,3). 1123000. [119-93-7].
Tionina soluzione. Disciogliere 1 g di tionina R 3,3'-Dimetilbenzidina.
in 50 ml di acqua R. Contiene non meno del 97,0 per cento di C14H16N2.
. CH4N2S. (Mr 76,1). 1089900. [62-56-6]. Polvere cristallina brunastra chiara.
p.f.: circa 130 ‘C.
Tiourea

Polvere cristallina o cristalli, bianchi, solubili in acqua o . 1123001.

ed in alcool. -Tolidina soluzione

p.f.: circa 178 ‘C. Disciogliere 0,16 g di o-tolidina R in 30,0 ml di

. C8H11NO. (Mr 137,2). 1117600. [51-67-2]. acido acetico glaciale R, aggiungere 1,0 g di potas-
Tiramina

4-(2-Amminoetil)fenolo. sio ioduro R e diluire a 500,0 ml con acqua R.

Cristalli, moderatamente solubili in acqua, solubili in Toluene . C7H8. (Mr 92,1). 1091300. [108-88-3].
etanolo bollente. Metilbenzene.
p.f.: da 164 ‘C a 165 ‘C. Liquido infiammabile incolore, limpido, molto poco
. C9H11NO3. (Mr 181,2). 1094800. [60-18-4]. solubile in acqua, miscibile con alcool.
Tirosina

Acido 2-ammino-3-(4-idrossifenil)propionico. d2020 : da 0,865 a 0,870.

Polvere cristallina bianca o cristalli incolori o bianchi, p.e.: circa 110 ‘C.
poco solubili in acqua, praticamente insolubili in ace- Toluene esente da zolfo . 1091301.
tone, in etanolo ed in etere. Si scioglie in acido clori- Soddisfa ai requisiti prescritti per il toluene R e agli
drico diluito e nelle soluzioni di idrossidi alcalini. ulteriori requisiti seguenti:

498
 Reattivi

inoizircserP
Composti solforati. A 10 ml aggiungere 1 ml di eta- . 1049300. [1393-92-6]. Schultz No. 1386.

ilareneG
Tornasole

nolo R e 3 ml di potassio piombito soluzione R e bol- Frammenti blu-indaco preparati da varie specie di
lire a ricadere per 15 min. Lasciare a riposo per Rocella, Lecanora o altri licheni, solubili in acqua, pra-
5 min. Nello strato acquoso non appare alcun ticamente insolubili in alcool.
imbrunimento. Viraggio. Da pH 5 (rosso) a pH 8 (blu).

isilanA id
Sostanze correlate al tiofene. Agitare 2 ml con 5 ml

idoteM
di isatina reattivo R per 5 min e lasciare a riposo . 1049301.
Tornasole cartina blu

per 15 min. Nello strato inferiore non appare Bollire per 1 h 10 parti di tornasole R grossolana-
alcuna colorazione blu. mente polverizzato con 100 parti di alcool R.
Decantare l'alcool ed aggiungere al residuo

irotinetnoC
. C7H9NO2S. (Mr 171,2). 1091500.

/ ilairetaM
Toluensolfonammide
una miscela di 45 parti di alcool R e 55 parti di
[70-55-3]. 4-Metilbenzensolfonammide. p-Toluensolfo- acqua R. Dopo due giorni decantare il liquido lim-
nammide. pido. Impregnare delle strisce di carta da filtro
Polvere cristallina bianca, poco solubile in acqua ed in con la soluzione e lasciar asciugare.
etere, solubile in alcool e nelle soluzioni acquose di Saggio di sensibilita© . Immergere una striscia di
idrossidi alcalini. 10 mm 60 mm in una miscela di 10 ml di acido

ivittaeR
2

p.f.: circa 136 ‘C. cloridrico 0,02 M e 90 ml di acqua R. Per agitazione,

Cromatografia. Esaminare come prescritto nella mono- la carta vira al rosso entro 45 s.
grafia Tolbutamide (0304); il cromatogramma presenta . 1049302.
Tornasole cartina rossa

solo una macchia principale. All'estratto di tornasole blu aggiungere acido clori-

itnemogrA
ilareneG
o-Toluensolfonammide . C7H9NO2S. (Mr 171,2). drico diluito R goccia a goccia finchë il colore blu
1091400. [88-19-7]. 2-Metilbenzensolfonammide. vira al rosso. Impregnare delle strisce di carta da
Polvere cristallina bianca, poco solubile in acqua ed in filtro con la soluzione e lasciar asciugare.
etere, solubile in alcool e nelle soluzioni di idrossidi
alcalini.

eifargonoM
Saggio di sensibilita© . Immergere una striscia di

ilareneG
p.f.: circa 156 ‘C. 10 mm 60 mm in una miscela di 10 ml di sodio
2

p . 1091500. [70-55-3]. Vedere idrossido 0,02 M e 90 ml di acqua R. Per agitazione,

-Toluensolfonammide

toluensolfonammide R. la carta vira al blu entro 45 s.

ehcituecamraF
o-Toluidina . C7H9N. (Mr 107,2). 1091700. [95-53-4]. Tosilarginina cloridrato estere metilico .
2-Metilanilina. C14H23ClN4O4S. (Mr 378,9). 1092000. [1784-03-8].

emroF
Liquido giallo pallido che diventa bruno-rossastro per N-Tosil-l-arginina metilestere cloridrato. Etile (S)-5-
esposizione all'aria e alla luce, poco solubile in acqua, guanidino-2-(4-metilbenzensolfonammido)valerato
solubile in alcool e negli acidi diluiti. cloridrato.
20 : da 12 a 16, determinato su una soluzione
d2020 : circa 1,01. D

eiretaM
‰ Š ÿ ÿ

40 g/l.

emirP
n20D : circa 1,569.
p.e.: circa 200 ‘C. p.f.: circa 145 ‘C.
Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, al Tosilarginina cloridrato estere metilico soluzione.
1092001.
ehcituecamraF

riparo dalla luce.

inoizaraperP

ehcificepS

o . C7H10ClN. (Mr 143,6). 1117300. A 98,5 mg di tosilargininacloridratoesteremetilico R

-Toluidina cloridrato

[636-21-5]. 2-Metilanilina cloridrato. 2-Metilbenzenam- aggiungere 5 ml di tampone tris(idrossimetil)ammi-

mina cloridrato. Contiene non meno del 98,0 per cento nometano soluzione a pH 8,1 R ed agitare fino a dis-
di C7H10ClN. soluzione. Aggiungere 2,5 ml di rosso metile indica-
tore misto R e diluire a 25,0 ml con acqua R.
ehcitapoemO
inoizaraperP

p.f.: da 215 ‘C a 217 ‘C.

p-Toluidina . C7H9N. (Mr 107,2). 1091800. [106-49-0]. Tosil-fenilalanil-clorometano . C17H18ClNO3S. (Mr 351,9).
4-Metilanilina. 1092200. [402-71-1]. N-Tosil-l-fenilalanilclorometano.
Lamine o fiocchi lucenti, poco solubili in acqua, molto 20 : da 85 a 89, determinato su una soluzione
‰
D
Š ÿ ÿ

solubili in acetone ed in alcool, solubili in etere. 10 g/l in alcool R.

p.f.: circa 44 ‘C. A1cm : da 290 a 320, determinata a 228,5 nm in alcool R.
1
ecidnI

Toluolo . Vedere toluene R. p.f.: circa 105 ‘C.

499
Reattivi

Tosil-lisil-clorometano cloridrato . C14H22Cl2N2O3S. Triclorotrifluoroetano . C2Cl3F3. (Mr 187,4). 1092700.

(Mr 369,3). 1092100. [4238-41-9]. N-Tosil-l-lisil-cloro- [76-13-1]. 1,1,2-Tricloro-1,2,2-trifluoroetano.
metano cloridrato. (3S)-7-Ammino-1-cloro-3-(4-metil- Liquido volatile, incolore, praticamente insolubile in
benzensofonammido)eptan-2-one cloridrato. acqua, miscibile con acetone e con etere.
20 : da 7 a 9, determinato su una soluzione
‰ Š
D ÿ ÿ d2020 : circa 1,58.
20 g/l. Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 98 per
A11cm
%
: da 310 a 340 determinata a 230 nm utilizzando cento distilla tra 47 ‘C e 48 ‘C.
una soluzione in acqua R. . C23H48. (Mr 324,6). 1092800. [638-67-5].
p.f.: circa 155 ‘C, con decomposizione.
Tricosano

Cristalli bianchi, praticamente insolubili in acqua, solu-

Toxafene . 1132800. [8001-35-2]. bili in etere ed in esano.
Miscela di policloroderivati. n20D : circa 1,447.
p.f.: da 65 ‘C a 90 ‘C. p.f.: circa 48 ‘C.
Puo© essere usata un'idonea e certificata soluzione di Trietanolammina . 1092900. [102-71-6]. Vedere la mono-
riferimento (10 ng/ l in iso-ottano).
m grafia Trolamina (1577).
Treonina . 1090000. [72-19-5]. Vedere la monografia Trietilammina . C6H15N. (Mr 101,2). 1093000. [121-44-8].
Treonina (1049). N,N-Dietiletanammina.
Triacetina . C9H14O6. (Mr 218,2). 1092400. [102-76-1]. Liquido incolore, poco solubile in acqua a temperatura
Propan-1,2,3-triil triacetato. inferiore a 18,7 ‘C, miscibile con alcool e con etere.
Liquido da incolore a giallastro, quasi limpido, solubile d2020 : circa 0,727.
in acqua, miscibile con alcool e con etere. n20D : circa 1,401.
d2020 : circa 1,16. p.e.: circa 90 ‘C.
n20D : circa 1,43. Trietile fosfonoformiato . C7H15O5P. (Mr 210,2).
p.e.: circa 260 ‘C. 1132900. [1474-78-8]. Etile (dietossifosforil)formiato.
Triamcinolone . C21H27FO6. (Mr 394,4). 1111300. Liquido incolore.
[124-94-7]. 9-Fluoro-11 ,16 ,17,21-tetraidrossipregna-
b a
p.e.12 mm: circa 135 ‘C.
1,4-diene-3,20-dione. . C6H12N2. (Mr 112,2). 1093100.
Polvere cristallina.
Trietilendiammina

1,4-Diazabiciclo[2.2.2]ottano.
p.f.: da 262 ‘C a 263 ‘C. Cristalli molto igroscopici, che sublimano rapidamente
Triamcinolone acetonide . 1133100. [76-25-5]. Vedere la a temperatura ambiente, molto solubili in acqua, in
monografia Triamcinolone acetonide (0533). acetone e in etanolo.
Tricina . C6H13NO5. (Mr 179,2). 1138900. [5704-04-1]. p.e.: circa 174 ‘C.
N-[2-idrossi-1,1-bis(idrossimetil)etil]glicina. p.f.: circa 158 ‘C.
Usare reattivi per elettroforesi.
. Vedere tricloroetilene R. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
. C19H16O. (Mr 260,3).1093700. [76-84-6].
Tricloretilene

. Clo- Trifenilmetanolo

Trifenilcarbinolo.
1,1,1-Tricloro-2,2-bis-(4-clorofenil)etano soluzione

fenotano soluzione.
Soluzione satura di clofenotano R in etanolo R a tempe- Cristalli incolori, praticamente insolubili in acqua,
ratura compresa tra 17,5 ‘C e 18,5 ‘C. molto solubili in alcool.
1,1,1-Tricloroetano . C2H3Cl3. (Mr 133,4). 1092600. Trifeniltetrazolio cloruro . C19H15ClN4. (Mr 334,8).
[71-55-6]. Metilcloroformio. 1093800. [298-96-4]. 2,3,5-Trifenil-2H-tetrazolio clo-
Liquido non infiammabile, praticamente insolubile in ruro.
acqua, solubile in acetone, in etere e in metanolo. Contiene non meno del 98,0 per cento di C19H15ClN4.
d2020 : circa 1,34. Polvere gialla pallida o gialla scura, solubile in acqua,
n20D : circa 1,438. in acetone ed in alcool, praticamente insolubile in etere.
p.e.: circa 74 ‘C. p.f.: circa 240 ‘C, con decomposizione.
Tricloroetilene . C2HCl3. (Mr 131,4) 1102100. [79-01-6]. Determinazione quantitativa. Disciogliere 1,000 g in una
Liquido incolore, praticamente insolubile in acqua, miscela di 5 ml acido nitrico diluito R e 45 ml di
miscibile con alcool e con etere. acqua R. Aggiungere 50,0 ml di argento nitrato 0,1 M e
d2020 : circa 1,46. scaldare all'ebollizione. Lasciar raffreddare, aggiungere
n20D : circa 1,477. 3 ml di dibutile ftalato R, agitare vigorosamente e

500
 Reattivi

inoizircserP
titolare con ammonio tiocianato 0,1 M, usando 2 ml N,O .

ilareneG
-bis(Trimetilsilil)trifluoroacetamide

di ferro(-ico) ammonico solfato soluzione R2 come C8H18F3NOSi2. (Mr 257,4). 1133200. [25561-30-2].
indicatore. BSTFA.
1 ml di argento nitrato 0,1 M equivale a 33,48 mg di Liquido incolore.
C19H15ClN4. d2020 : circa 0,97.

isilanA id
idoteM
Conservare al riparo dalla luce. n20D : circa 1,38.
Trifeniltetrazolio cloruro soluzione . 1093801. p.e.12mm: 40 ‘C circa.
Soluzione 5 g/l in alcool esente da aldeide R. Tripsina . 1094500. [9002-07-7].
Conservare al riparo dalla luce. Enzima proteolitico ottenuto per attivazione del tripsi-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Trigonellina cloridrato . C7H8ClNO2. (Mr 173,6). nogeno estratto dal pancreas del bue (Bos taurus L.).
1117400. [6138-41-6]. 3-Carbossi-1-metilpiridinio clo- Polvere cristallina o amorfa bianca, moderatamente
ruro. Acido nicotinico N-metilbetaina cloridrato. solubile in acqua.
Polvere cristallina, solubilissima in acqua, solubile in Tripsina per mappa peptidica . 1094600. [9002-07-7].
alcool, praticamente insolubile in etere. Tripsina di elevata purezza trattata allo scopo di elimi-

ivittaeR
p.f.: circa 258 ‘C. nare l'attivita© chimotriptica.
Trimetilclorosilano . C3H9ClSi. (Mr 108,7). 1133000. Triptofano . C11H12N2O2. (Mr 204,2). 1094700. [73-22-3].
[75-77-4]. Polvere cristallina bianca o bianco-giallastra o cristalli
p.e.: 57 ‘C circa. incolori, poco solubili in acqua, molto poco solubili in

itnemogrA
alcool, praticamente insolubili in etere.

ilareneG
Trimetilpentano . C8H18. (Mr 114,2). 1093400. [540-84-1]. 20 : circa 30, determinato su una soluzione 10 g/l.
Iso-ottano. 2,2,4-Trimetilpentano. ‰ Š
D ÿ

Liquido infiammabile, incolore, praticamente insolu- Triscianoetossipropano . C12H7N3O3. (Mr 251,3). 1093900.
bile in acqua, solubile in etanolo. 1,2,3-Tris(2-cianoetossi)propano.

eifargonoM
d2020 : da 0,691 a 0,696. Liquido viscoso, giallo bruno, solubile in metanolo.

ilareneG
n20D : da 1,391 a 1,393. Usato come fase stazionaria in gas cromatografia.
Intervallo di distillazione (2.2.11). Non meno del 95 per d2020 : circa 1,11
cento distilla tra 98 ‘C e 100 ‘C. Viscosita© (2.2.9). circa 172 mPa s. 1

ehcituecamraF
Il trimetilpentano usato in spettrofotometria soddisfa Tris(idrossimetil)amminometano . 1094200. [77-86-1].
Vedere la monografia Trometamolo (1053).

emroF
all'ulteriore requisito seguente:
Trasmittanza minima (2.2.25). Determinata usando . 1094201.
acqua R come bianco: 98 per cento da 250 nm a 420 nm. Tris(idrossimetil)amminometano soluzione

. 1093401. Soddisfa ai requisiti Soluzione contenente l'equivalente di 24,22 g di

Trimetilpentano R1

prescritti per il trimetilpentano R con le seguenti C4H11NO3 in 1000,0 ml.

eiretaM

emirP
modifiche: Tris(idrossimetil)amminometano .
soluzione R1

Assorbanza (2.2.25). Non piu© dello 0,07 da 220 nm 1094202.

a 360 nm, determinato usando acqua R come Disciogliere 60,6 mg di tris(idrossimetil)ammino-
liquido di compensazione. metano R e 0,234 g di sodio cloruro R in acqua R e
ehcituecamraF
inoizaraperP

diluire a 100 ml con lo stesso solvente.

ehcificepS

N,O- bis(Trimetilsilil)acetammide .C8H21NOSi2.(Mr 203,4). Conservare a 2-8 ‘C e usare entro 3 giorni.

1093600.[10416-59-8].
Liquido incolore. Tris . C42H63O3P.
[2,4-di(1,1-dimetiletil)fenil]fosfito

(Mr 647). 1094100. [31570-04-4].

ehcitapoemO

d2020 : circa 0,83.

inoizaraperP

Polvere bianca.
N-Trimetilsililimidazolo . C6H12N2Si. (Mr 140,3).1100500. p.f.: da 182 ‘C a 186 ‘C.
[18156-74-6]. 1-Trimetilsililimidazolo.
Liquido igroscopico, incolore. 1,3,5-Tris[3,5-di(1,1-dimetiletil)-4-idrossibenzil]-1,3,5-

H H H
triazin-2,4,6-(1 ,3 ,5 . C48H69O6N3. (Mr 784,1).
) trione

d2020 : circa 0,96. 1094000.[27676-62-6].

n20D : circa 1,48. Polvere cristallina bianca.
ecidnI

Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso. p.f.: da 218 ‘C a 222 ‘C.

501
Reattivi

Trombina bovina . 1090200. [9002-04-4]. Vanillina . 1095300. [121-33-5]. Vedere la monografia

Preparazione dell'enzima, ottenuto dal plasma bovino, Vanillina (0747).
che converte il fibrinogeno in fibrina. Vanillina reattivo . 1095301.
Polvere bianco-giallastra. Aggiungere con cautela, goccia a goccia, 2 ml di
Conservare a temperatura inferiore a 0 ‘C. acido solforico R a 100 ml di una soluzione (10 g/l)
Trombina umana . 1090100. [9002-04-4]. di vanillina R in alcool R.
Trombina umana essiccata. Preparazione dell'enzima Usare entro 48 h dalla preparazione.
che converte il fibrinogeno umano in fibrina. E' otte- Vanillina soluzione fosforica . 1095302.
nuta dal plasma umano liquido e puo© essere preparata Disciogliere 1,0 g di vanillina R in 25 ml di alcool R.
per precipitazione con sali idonei e appropriati solventi Aggiungere 25 ml di acqua R e 35 ml di acido fosfo-
organici in condizioni controllate di pH, forza ionica e rico R.
temperatura. .
Polvere bianco-giallastra, molto solubile in una solu-
Vanillina soluzione solforica

zione (9 g/l) di sodio cloruro dando luogo ad una solu- Soluzione 10 g/l di vanillina R in acido solforico R.
zione giallo pallido, opaca. Vaselina bianca molle . Vedere paraffina bianca molle R.
Conservare in un recipiente sterile sotto azoto, sigillato, Vaselina, olio . 1062000. [8042-47-5].Vedere la monogra-
al riparo dalla luce, a temperatura inferiore a 25 ‘C. fia Paraffina liquida (0239).
Trombina umana soluzione . 1090101. Verbenone . C10H14O. (Mr 150,2). 1140500. [1196-01-6].
Ricostituire la trombina umana R come indicato dal (1S,5S)-4,6,6-Trimetilbiciclo[3.1.1]ept-3-en-2-one.
produttore e diluire a 5 U.I. per millilitro con tam- Olio con odore caratteristico, praticamente insolubile
pone tris(idrossimetil)amminometano-sodio cloruro in acqua, miscibile in solventi organici.
apH7,4R. d2020 : circa 0,978.
Tromboplastina . 1090300. n18D : circa 1,49.
Estrarre 1,5 g di cervello bovino essiccato con acetone 18 : circa + 249,6.
‰ Š
D
polvere R con 60 ml di acqua R a 50 ‘C per 10-15 min, p.e.: da 227 ‘C a 228 ‘C.
centrifugare a 1500 giri/min per 2 min e decantare il p.f.: circa 6,5 ‘C.
liquido sopranatante. L'estratto mantiene la sua attivita© Il verbenone utilizzato in gas cromatografia soddisfa
per diversi giorni se conservato in frigorifero. Puo© con- all'ulteriore saggio seguente:
tenere 3 g/l di cresolo R come conservante antimicro-
bico. Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
. C10H16O. (Mr 152,2). 1116500. [546-80-5]. cromatografia (2.2.28) come prescritto nella monogra-
Tuione

4-Metil-1-(1-metiletil)biciclo[3.1.0]esan-3-one. fia Rosmarino essenza (1846).

Liquido incolore o quasi incolore; praticamente insolu- Il contenuto non e© inferiore al 99 per cento, calcolato
bile in acqua, solubile in alcool e in molti altri solventi mediante la procedura di normalizzazione.
organici. Verde bromocresolo . C21H14Br4O5S. (Mr 698). 1012600.
d2020 : circa 0,925. [76-60-8]. Bromocresolo verde. 3',3'',5',5''-Tetrabromo-
n20D : circa 1,455. m-cresolsulfonftaleina. 4,4'-(3H-2,1-Benzossatiol-3-ili-
‰ Š
20 : circa 15.
D ÿ
den)bis[2,6-dibromo-3-metilfenolo] S,S-diossido.
p.e.: 200 ‘C circa. Polvere bianco-brunastra, poco solubile in acqua,
. C9H6O3. (Mr 162,1). 1137500. [93-35-6]. solubile in alcool e nelle soluzioni diluite di idrossidi
alcalini.
Umbelliferone

7-Idrossicumarina. 7-Idrossi-2-H-1-benzopiran-2-one.
Si ottiene dall'acqua sotto forma di aghi. Verde bromocresolo soluzione . 1012601. Bromocre-
p.f.: da 225 ‘C a 228 ‘C. solo verde soluzione.
Urea . 1095000. [57-13-6]. Vedere la monografia Urea Disciogliere 50 mg di verde bromocresolo R in
(0743). 0,72 ml di sodio idrossido 0,1 M e 20 ml di alcool R
Uridina . C9H12N2O6. (Mr 244,2). 1095100. [58-96-8]. e diluire a 100 ml con acqua R.
1- -d-Ribofuranosiluracile.
b Saggio di sensibilita© . A 0,2 ml di verde bromocre-
Polvere cristallina bianca o quasi bianca, solubile in solo soluzione aggiungere 100 ml di acqua esente
acqua. da anidride carbonica R. La soluzione e© blu. Non
p.f.: circa 165 ‘C. sono necessari piu© di 0,2 ml di acido cloridrico
Vanadio pentossido . Vedere divanadio pentossido R. 0,02 M per far virare la colorazione al giallo.

502
 Reattivi

inoizircserP
Viraggio. Da pH 3,6 (giallo) a pH 5,2 (blu). . C6H9NO. (Mr 111,1). 1111900.

ilareneG
1-Vinilpirrolidin-2-one

Verde bromocresolo-rosso metile .

soluzione [88-12-0]. 1-Etenilpirrolidin-2-one.
1012602. Contiene non meno del 99,0 per cento di C6H9NO.
Disciogliere 0,15 g di verde bromocresolo R e 0,1 g Liquido limpido incolore.
di rosso metile R in 180 ml di etanolo R e diluire a Acqua (2.5.12, determinazione semimicro). Non piu© dello

isilanA id
200 ml con acqua R.

idoteM
0,1 per cento, determinato su 2,5 g. Usare come sol-
Verde malachite. C23H25ClN2. (Mr 364,9). 1050500. vente, una miscela di 50 ml di metanolo anidro R e
[123333-61-9]. Schultz No. 754. Colour Index 10 ml di butirrolattone R.
No. 42000. [4-[[4-(Dimetilammino)fenil]fenilmetilen] Determinazione quantitativa. Esaminare mediante gas
cicloesa-2,5-dien-1-iliden]dimetilammonio cloruro.

irotinetnoC
/ ilairetaM
cromatografia (2.2.28).
Cristalli verdi dalla lucentezza metallica, solubilissimi La cromatografia puo© essere eseguita usando:
in acqua dando luogo ad una soluzione verde-bluastra,
solubili in alcool ed in metanolo. ^ una colonna di silice fusa lunga 30 m e con diame-
Una soluzione 0,01 g/l in alcool R presenta un massimo tro interno di 0,5 mm con la parete interna rico-
di assorbimento (2.2.25) a 617 nm. perta con uno strato di 1,0 m di macrogol 20000 R,
m

ivittaeR
Verde malachite soluzione . 1050501. ^ elio per cromatografia R come gas di trasporto,
Soluzione 5 g/l in acido acetico anidro R. ^ un rivelatore a ionizzazione di fiamma.
Verde metile. C26H33Cl2N3. (Mr 458,5). 1054200. Mantere la temperatura della camera di iniezione a
[7114-03-6]. Schultz No. 788. Colour Index No. 42585. 190 ‘C e programmare la temperatura della colonna

itnemogrA
ilareneG
4-[[4-(Dimetilammino)fenil][4-(dimetilimminio)cicloesa- come segue: mantenere la temperatura a 80 ‘C per
2,5-dieniliden]-metilfenil]trimetilammonio dicloruro. 1 min e poi aumentarla a 190 ‘C ad una velocita© di
Polvere verde, solubile in acqua, solubile in acido solfo- 10 ‘C al minuto. Mantenere a 190 ‘C per 15 min. Iniet-
rico dando luogo ad una soluzione gialla che vira al tare 0,3 l della sostanza in esame e aggiustare il flusso
m

verde per diluizione con acqua. del gas di trasporto in modo che il tempo di ritenzione

eifargonoM
del picco corrispondente all'1-vinilpirrolidin-2-one sia

ilareneG
. 1054201. di circa 17 min. Determinare il contenuto di C6H9NO
Verde metile iodomercurato cartina
mediante normalizzazione interna.
Immergere sottili strisce di un'idonea carta da fil- .Vedere cristal violetto R.
tro in una soluzione (40 g/l) di verde metile R e Violetto di genziana

ehcituecamraF
lasciar asciugare all'aria. Immergere le strisce per Violetto di genziana soluzione . Vedere cristal violetto
soluzione R.

emroF
1 h in una soluzione contenente 140 g/l di potassio
ioduro R e (200 g/l) di mercurio(-ico) ioduro R. Vitexina . C21H20O11. (Mr 448,4). 1133300. [3681-93-4].
Lavare con acqua distillata R finchë i lavaggi siano Apigenin-8-C-glucoside.
praticamente incolori e lasciar asciugare all'aria. Polvere gialla.
Conservare al riparo dalla luce ed usare entro 48 h. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso al
eiretaM

emirP
Vinile acetato . C4H6O2. (Mr 86,10). 1111800. [108-05-4]. riparo dalla luce.
Etenile acetato. Xantidrolo . C13H10O2. (Mr 198,2). 1096100. [90-46-0].
d2020 : circa 0,930. 9-Xantenolo.
ehcituecamraF

p.e.: circa 72 ‘C.

inoizaraperP

Contiene non meno del 90,0 per cento di C13H10O2.

ehcificepS

Vinile cloruro . C2H3Cl. (Mr 62,5). 1095400. [75-01-4]. Polvere da bianco a giallo pallido, molto poco solubile
Gas incolore, poco solubile nei solventi organici. in acqua, solubile in alcool, in etere ed in acido acetico
Vinile polimero ottadecilsililato per cromatografia. glaciale.
1121600. E' anche disponibile come soluzione metanolica conte-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Particelle sferiche (5 mm) di un copolimero di alcool nente 90-110 g/l di xantidrolo.

vinilico legato con un ottadecilsilano. Contenuto in car- p.f.: circa 123 ‘C.
bonio del 17 per cento.
. C7H7N. (Mr 105,1). 1102200. [100-69-6]. Determinazione quantitativa. In un recipiente da 250 ml
2-Vinilpiridina

Liquido giallo, miscibile con acqua. disciogliere 0,300 g in 3 ml di metanolo R o usare

3,0 ml di soluzione. Aggiungere 50 ml di acido acetico
d2020 : circa 0,97.
ecidnI

glaciale R e goccia a goccia, agitando, 25 ml di una

n20D : circa 1,549. soluzione (20 g/l) di urea R. Lasciare a riposo per 12 h,

503
Reattivi

raccogliere il precipitato su un filtro di vetro sinteriz- Xilenolarancio miscela composta . 1096301.

zato (16), lavare con 20 ml di alcool R, essiccare in stufa Triturare 1 parte di xilenolarancio R con 99 parti di
a 100-105 ‘C e pesare. potassio nitrato R.
1 g di precipitato equivale a 0,9429 g di xantidrolo. Saggio di sensibilita© . A 50 ml di acqua R aggiungere
Conservare al riparo dalla luce. Se si usa una soluzione 1 ml di acido acetico diluito R, 50 mg di xilenolaran-
metanolica, conservare in piccoli flaconcini sigillati e cio miscela composta e 0,05 ml di piombo nitrato
filtrare prima dell'uso, se necessario. soluzione R. Aggiungere esametilentetrammina R
Xantidrolo R1 . 1096101. finchë la colorazione viri dal giallo al rosso vio-
Soddisfa ai requisiti prescritti per lo xantidrolo R e letto. Dopo l'aggiunta di 0,1 ml di sodio edetato 0,1
all'ulteriore requisito seguente: M la colorazione vira al giallo.
Contiene non meno del 98,0 per cento di C13H10O2.
Xantidrolo soluzione . 1096102. Xilolo . Vedere xilene R.
A 0,1 ml di una soluzione (100 g/l) di xantidrolo R in Xilosio . 1096400. [58-86-6]. Vedere la monografia Xilo-
metanolo R aggiungere 100 ml di acido acetico ani- sio (1278).
dro R ed 1 ml di acido cloridrico R. Lasciare a riposo . Zn. (Ar 65,4). 1096500. [7440-66-6].
per 24 h prima dell'uso.
Zinco

Contiene non meno del 99,5 per cento di Zn.

Xilene . C8H10. (Mr 106,2). 1096200. [1330-20-7]. Cilindri bianco-argento, granuli, palline o limatura
Miscela di isomeri. Liquido infiammabile, incolore, dalla lucentezza blu.
limpido, praticamente insolubile in acqua, miscibile Arsenico (2.4.2). 5,0 g soddisfano al saggio limite A per
con alcool e con etere. l'arsenico (0,2 ppm). Disciogliere in una miscela di
d2020 : circa 0,867. 15 ml di acido cloridrico R e di 25 ml di acqua R, come
n20D : circa 1,497. prescritto.
p.e.: circa 138 ‘C. . 1096501.
m . C8H10. (Mr 106,2). 1117700. [108-38-3].
Zinco attivato
-Xilene

1,3-Dimetilbenzene. Porre le palline o i cilindri di zinco da attivare in

una beuta ed aggiungere una quantita© di soluzione
Liquido infiammabile limpido ed incolore, pratica- di acido cloroplatinico R a 50 ppm sufficiente a rico-
mente insolubile in acqua, miscibile con alcool e con prire il metallo. Lasciare il metallo in contatto con
etere. la soluzione per 10 min, eliminare la soluzione,
d2020 : circa 0,884. lavare e asciugare immediatamente.
n20D : circa 1,497. Arsenico. A 5 g di zinco attivato aggiungere 15 ml
p.e.: circa 139 ‘C. di acido cloridrico R, 25 ml di acqua R, 0,1 ml di sta-
p.f.: circa ^47 ‘C. gno(-oso) cloruro soluzione R e 5 ml di potassio
o . C8H10. (Mr 106,2). 1100600. [95-47-6]. ioduro soluzione R. Trattare come descritto nel sag-
-Xilene

1,2-Dimetilbenzene. gio limite A per l'arsenico (2.4.2). Nessuna macchia

Liquido infiammabile, incolore, limpido, praticamente appare sulla mercurio(-ico) bromuro cartina R.
insolubile in acqua, miscibile con alcool e con etere. Attivita© . Ripetere il saggio per l'arsenico utiliz-
d2020 : circa 0,881. zando gli stessi reattivi ed aggiungendo una solu-
n20D : circa 1,505. zione contenente 1 mg di arsenico. Una macchia
apprezzabile appare sulla mercurio(-ico) bromuro
p.e.: circa 144 ‘C. cartina R.
p.f.: circa 25 ‘C.
. C25H27N2O6S2Na (Mr 538,6). Zinco acetato . (C2H3O2)2Zn.2H2O. (Mr 219,5).
1102300. [5970-45-6]. Zinco acetato diidrato.
Xilene cianolo FF

[2650-17-1]. Blu acido 147. Colorante blu solubile in

alcool. Cristalli bianchi lucenti, leggermente efflorescenti,
Xilenolarancio . C31H28N2Na4O13S. (Mr 761). 1096300. molto solubili in acqua, solubili in alcool.
[3618-43-7]. Arancio xilenolo. Tetrasodio 3,3'-(3H-2,1- Perde l'acqua di cristallizzazione a 100 ‘C.
benzossatiolo-3-iliden)bis[(6-idrossi-5-metil-3,1-fenilen)
metilenimminobisacetato] S,S-diossido. d2020 : circa 1,735.
Polvere cristallina bruno-rossastra, solubile in acqua. p.f.: circa 237 ‘C.

504
 Soluzioni standard per saggi limite

inoizircserP
. 1102301. dibutile ftalato R ed agitare. Utilizzando 2 ml di ferro

ilareneG
Zinco acetato soluzione

Mescolare 600 ml di acqua R con 150 ml di acido (-ico) ammonico solfato soluzione R2 come indicatore,
acetico glaciale R, 54,9 g di zinco acetato R e porre titolare con ammonio tiocianato 0,1 M fino al viraggio
sotto agitazione per disciogliere. Continuare ad agi- al giallo-rossastro.
tare aggiungendo 150 ml di ammoniaca concentrata 1 ml di argento nitrato 0,1 M equivale a 16,11 mg di

isilanA id
R. Raffreddare a temperatura ambiente e portare a ZrCl2O.8H2O.

idoteM
pH 6,4 con ammoniaca R. Diluire la miscela a 1 litro . Sale basico corrispondente approssi-
con acqua R. Zirconile nitrato

mativamente alla formula ZrO(NO3)2.2H2O. 1097200.

Zinco cloruro . 1096600. [7646-85-7].Vedere la monogra- [14985-18-3].
fia Zinco cloruro (0110).

irotinetnoC
Polvere bianca o cristalli, igroscopici, solubili in acqua.

/ ilairetaM
Zinco cloruro in acido formico soluzione . 1096601. La soluzione acquosa e© un liquido limpido o al mas-
Disciogliere 20 g di zinco cloruro R in 80 g di una simo leggermente opalescente.
soluzione (850 g/l) di acido formico anidro R. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
Zinco cloruro e iodio soluzione . 1096602. . 1097201.
Disciogliere 20 g di zinco cloruro R e 6,5 g di potas- Zirconile nitrato soluzione

ivittaeR
sio ioduro R in 10,5 ml di acqua R. Aggiungere Soluzione 1 g/l in una miscela di 40 ml di acqua R e
0,5 g di iodio R ed agitare per 15 min. Filtrare se 60 ml di acido cloridrico R.
necessario. . 1110800. Vedere la monografia Zolfo per uso
Conservare al riparo dalla luce. Zolfo

esterno (0953).

itnemogrA
ilareneG
Zinco ioduro e amido soluzione . 1096502.
Ad una soluzione di 2 g di zinco cloruro R in 10 ml di
acqua R aggiungere 0,4 g di amido solubile R e scaldare
4.1.2. SOLUZIONI STANDARD PER SAGGI

fino a che l'amido si scioglie. Dopo il raffreddamento a

LIMITE

temperatura ambiente aggiungere 1,0 ml di una solu-

eifargonoM
.

ilareneG
Soluzione standard di acetaldeide (C 2H4O 100 ppm)

zione incolore contenente 0,10 g di zinco R come lima- 5000100. Disciogliere 1,0 g di acetaldeide R in 2-propa-
tura e 0,2 g di iodio R in acqua R. Diluire la soluzione nolo R e diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. Diluire
a 100 ml con acqua R e filtrare. Conservare al riparo 5,0 ml della soluzione a 500,0 ml con 2-propanolo R.
dalla luce. Preparare immediatamente prima dell'uso.

ehcituecamraF
Saggio di sensibilita© . Diluire 0,05 ml di sodio nitrito solu- .

emroF
zione R a 50 ml con acqua R. A 5 ml di questa soluzione
Soluzione standard di acetaldeide (C 2H4O 100 ppm) R1

5000101. Disciogliere 1,0 g di acetaldeide R in acqua R

aggiungere 0,1 ml di acido solforico diluito R e 0,05 ml e diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. Diluire
della soluzione di zinco ioduro e amido e mescolare. 5,0 ml della soluzione a 500,0 ml con acqua R. Prepa-
La soluzione diventa blu. rare immediatamente prima dell'uso.
. 1096700. [1314-13-2]. Vedere la monogra- . 5000203.
eiretaM
Zinco ossido

emirP
fia Zinco ossido (0252). Soluzione standard di alluminio (Al 100 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R

Zinco polvere . Zn. (Ar 65,4). 1096800. [7440-66-6]. a 10 volte il suo volume una soluzione contenente
Contiene non meno del 90,0 per cento di Zn (Ar 65,4). 8,947 g di alluminio cloruro R in 1000,0 ml di acqua R.
Polvere grigia, molto fine, solubile in acido cloridrico . 5000200.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

diluito R.
Soluzione standard di alluminio (Al 200 ppm)

Disciogliere in acqua R una quantita© di alluminio

Zinco solfato . 1097000. [7446-20-0].Vedere la monogra- e potassio solfato R, corrispondente a 0,352 g di
fia Zinco solfato (0111). AlK(SO4)2.12H2O. Aggiungere 10 ml di acido solforico
Zirconile cloruro . Sale basico corrispondente approssi- diluito R e diluire a 100,0 ml con acqua R.
mativamente alla formula ZrCl2O.8H2O. 1097100.
ehcitapoemO
inoizaraperP

. 5000201.
[15461-27-5].
Soluzione standard di alluminio (Al 10 ppm)

Immediatamente prima dell'uso diluire con acqua R a

Contiene non meno del 96,0 per cento di ZrCl2O.8H2O. 100 volte il suo volume una soluzione contenente una
Polvere cristallina o cristalli, bianchi o quasi bianchi, quantita© di alluminio nitrato R, corrispondente a 1,39 g
molto solubili in acqua ed in alcool. di Al(NO3)3.9H2O in 100,0 ml.
Determinazione quantitativa. Disciogliere 0,600 g in una Soluzione standard di alluminio (Al 2 ppm) . 5000202.
ecidnI

miscela di 5 ml di acido nitrico R e 50 ml di acqua R. Immediatamente prima dell'uso diluire con acqua R a
Aggiungere 50,0 ml di argento nitrato 0,1 M e 3 ml di 100 volte il suo volume una soluzione contenente una

505
Soluzioni standard per saggi limite

quantita© di alluminio e potassio solfato R, corrispon- Soluzione standard di bario (Ba 50. 5000600.
ppm)

dente a 0,352 g di AlK(SO4)2.12H2O e a 10 ml di acido Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua
solforico diluito R in 100,0 ml. distillata R a 20 volte il suo volume una soluzione in
. acqua distillata R contenente una quantita© di bario clo-
Soluzione standard di ammonio (NH 4

5000300. Immediatamente prima dell'uso diluire a

100 ppm)
ruro R corrispondente a 0,178 g di BaCl2.2H2O in
25 ml con acqua R 10 ml di una soluzione contenente 100,0 ml.
una quantita© di ammonio cloruro R corrispondente a .
0,741 g di NH4Cl in 1000 ml.
Soluzione standard di cadmio (Cd 0,1 per cento)

5000700. Disciogliere una quantita© di cadmio R corri-

Soluzione standard di ammonio (NH 4 2,5 ppm) . spondente a 0,100 g di Cd nella minima quantita©
5000301. Immediatamente prima dell'uso diluire con necessaria di una miscela di volumi uguali di acido clo-
acqua R a 100 volte il suo volume una soluzione conte- ridrico R e acqua R e diluire a 100,0 ml con una solu-
nente una quantita© di ammonio cloruro R corrispon- zione di acido cloridrico R all'1 per cento V/V.
dente a 0,741 g di NH4Cl in 1000,0 ml. . 5000701.
. 5000302.
Soluzione standard di cadmio (Cd 10 ppm)
Soluzione standard di ammonio (NH 4 1 ppm)
Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione
Immediatamente prima dell'uso diluire la soluzione standard di cadmio (Cd 0,1 per cento) R a 100 volte il
standard di ammonio (NH4 2,5 ppm) R a 2,5 volte il suo suo volume con una soluzione di acido cloridrico R
volume con acqua R. all'1 per cento V/V.
Soluzione standard di antimonio (Sb 1 ppm) . 5000400. . 5000800.
Disciogliere una quantita© di potassio-antimonio tartrato R Soluzione standard di calcio (Ca 400 ppm)

Immediatamente prima dell'uso diluire la soluzione a

corrispondente a 0,274 g di C4H4KO7Sb.ÃÙÄH2O in 10 volte il suo volume con acqua distillata R contenente
20 ml di acido cloridrico R1 e diluire la soluzione lim- calcio carbonato R corrispondente a 1,000 g di CaCO3
pida a 100,0 ml con acqua R. A 10,0 ml di questa solu- e 23 ml di acido cloridrico 1 M.
zione aggiungere 200 ml di acido cloridrico R1 e diluire
a 1000,0 ml con acqua R. A 100,0 ml di questa soluzione . 5000801.
aggiungere 300 ml di acido cloridrico R1 e diluire a
Soluzione standard di calcio (Ca 100 ppm)

Immediatamente prima dell'uso diluire la soluzione a

1000,0 ml con acqua R. Preparare le soluzioni diluite 10 volte il suo volume con acqua distillata R contenente
immediatamente prima dell'uso. calcio carbonato R corrispondente a 0,624 g di CaCO3
Soluzione standard di antimonio (Sb 100 ppm) . 5000401. e 3 ml di acido acetico R in 250 ml.
Disciogliere una quantita© di potassio-antimonio tartrato R . 5000804.
equivalente a 0,274 g di C4H4KO7Sb.ÃÙÄH2O in 500 ml Soluzione standard di calcio (Ca 100 ppm) R1

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a

di acido cloridrico 1 M e diluire la soluzione limpida a 10 volte il suo volume una soluzione contenente calcio
1000 ml con acqua R. cloruro anidro R corrispondente a 2,769 g di CaCl2 in
Soluzione standard di argento (Ag 5 ppm) . 5002600. 1000,0 ml di acido cloridrico diluito R.
Immediatamente prima dell'uso diluire con acqua R a
100 volte il suo volume una soluzione contenente una Soluzione standard alcoolica di calcio (Ca 100 ppm) .
quantita© di argento nitrato R corrispondente a 0,790 g 5000802. Immediatamente prima dell'uso diluire a
di AgNO3 in 1000,0 ml. 10 volte il suo volume con alcool R una soluzione in
. 5000500. acqua distillata R contenente calcio carbonato R corri-
Soluzione standard di arsenico (As 10 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a spondente a 2,50 g di CaCO3 e 12 ml di acido acetico R
100 volte il suo volume una soluzione preparata discio- in 1000,0 ml.
gliendo una quantita© di anidride arseniosa R corrispon- Soluzione standard di calcio (Ca 10 . 5000803.
ppm)

dente a 0,330 g di As2O3 in 5 ml di sodio idrossido solu- Immediatamente prima dell'uso diluire con acqua
zione diluita R e diluendo poi a 250,0 ml con acqua R. distillata R a 100 volte il suo volume una soluzione in
. 5000501. acqua distillata R contenente calcio carbonato R corri-
spondente a 0,624 g di CaCO3 e diluire 3 ml di acido
Soluzione standard di arsenico (As 1 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione

standard di arsenico (As 10 ppm) R a 10 volte il suo acetico R in 250,0 ml.
volume con acqua R. Soluzione standard di cloruro (Cl 8. 5000900.
ppm)

Soluzione standard di arsenico (As 0,1 ppm) . 5000502. Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a
Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione 100 volte il suo volume una soluzione contenente una
standard di arsenico (As 1 ppm) R a 10 volte il suo quantita© di sodio cloruro R corrispondente a 1,32 g di
volume con acqua R. NaCl in 1000,0 ml.

506
 Soluzioni standard per saggi limite

inoizircserP
. 5000901. . 5001602. Imme-

ilareneG
Soluzione standard di cloruro (Cl 5 ppm) Soluzione standard di ferro (Fe 8 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a diatamente prima dell'uso diluire a 10 volte il suo
100 volte il suo volume una soluzione contenente una volume con acqua R una soluzione contenente 80 mg
quantita© di sodio cloruro R corrispondente a 0,824 g di di ferro R e 50 ml di acido cloridrico R (HCl 220 g/l) in
NaCl in 1000,0 ml. 1000,0 ml.

isilanA id
. 5004100. . 5001603. Imme-

idoteM
Soluzione standard di cloruro (Cl 50 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a

Soluzione standard di ferro (Fe 2 ppm)

diatamente prima dell'uso, diluire la soluzione standard

10 volte il suo volume una soluzione contenente sodio di ferro (Fe 20 ppm) R a 10 volte il suo volume con
cloruro R equivalente a 0,824 g di NaCl in 1000,0 ml. acqua R.
. 5004300. . 5001604. Imme-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Soluzione standard di cobalto (Co 100 ppm)

Disciogliere una quantita© di cobalto nitrato R equiva- Soluzione standard di ferro (Fe 1 ppm)

diatamente prima dell'uso, diluire la soluzione standard

lente a 0,494 g di CO(NO3)2.6H2O in 500 ml di acido di ferro (Fe 20 ppm) R a 20 volte il suo volume con
nitrico 1 M e diluire la soluzione limpida a 1000 ml con acqua R.
acqua R.
. 5001000. Soluzione standard di ferrocianuro (Fe(CN) 6 100 ppm) .
5001200. Immediatamente prima dell'uso, diluire con
Soluzione standard di cromo (Cr 100 ppm)

Disciogliere in acqua R, una quantita© di potassio dicro-

ivittaeR
mato R corrispondente a 0,283 g di K2Cr2O7 e diluire a acqua R a 10 volte il suo volume una soluzione conte-
1000,0 ml con lo stesso solvente. nente una quantita© di potassio ferrocianuro R corrispon-
Soluzione standard di cromo (Cr 0,1 ppm) . 5001001. dente a 0,20 g di K4Fe(CN)6.3H2O in 100,0 ml.
Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione . 5001400.

itnemogrA
ilareneG
Soluzione standard di fluoruro (F 10 ppm)

standard di cromo (Cr 100 ppm) R a 1000 volte il suo Disciogliere in acqua R una quantita© di sodio fluo-
volume con acqua R. ruro R precedentemente essiccato a 300 ‘C per 12 h,
. 5001002. corrispondente a 0,422 g di NaF, e diluire a 1000,0 ml
con lo stesso solvente (1 ml = 0,2 mg di F). Conservare
Soluzione standard di cromo (Cr 0,1 per cento)

Disciogliere in acqua R il potassio dicromato R corri-

spondente a 2,83 g di K2Cr2O7 e diluire a 1000,0 ml in un recipiente di polietilene. Immediatamente prima

eifargonoM
dell'uso, diluire la soluzione a 20 volte il suo volume

ilareneG
con lo stesso solvente.
Soluzione standard di ferricianuro (Fe(CN) 6 50 ppm) . con acqua R.
5001300. Immediatamente prima dell'uso, diluire con Soluzione standard di fluoruro (F 1 . 5001401.
ppm)

acqua R a 100 volte il suo volume una soluzione conte- Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione

ehcituecamraF
nente una quantita© di potassio ferricianuro R corrispon- standard di fluoruro (F 10 ppm) R a 10 volte il suo
dente a 0,78 g di K3Fe(CN)6 in 100,0 ml. volume con acqua R.

emroF
Soluzione standard di ferro (Fe 0,1 per cento) . 5001605. .
Disciogliere 0,100 g di Fe nella quantita© minima
Soluzione standard di formaldeide (CH 2O 5 ppm)

5001500. Immediatamente prima dell'uso, diluire con

necessaria di una miscela di volumi uguali di acido clo- acqua R a 200 volte il suo volume una soluzione conte-
ridrico R e acqua R e diluire a 100,0 ml con acqua R. nente 1,0 g di CH2O per litro preparata da formaldeide
eiretaM

emirP
Soluzione standard di ferro (Fe 250 . 5001606.
ppm) soluzione R.
Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R . 5002200.
a 40 volte il suo volume una soluzione contenente Soluzione standard di fosfato (PO 4 5 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a

4,840 g di ferro(-ico) cloruro R in una soluzione 100 volte il suo volume una soluzione contenente una
ehcituecamraF

(150 g/l) di acido cloridrico R diluito a 100,0 ml.

inoizaraperP

ehcificepS

quantita© di potassio fosfato monobasico R corrispon-

Soluzione standard di ferro (Fe 20 ppm) . 5001600. Im- dente a 0,716 g di KH2PO4 in 1000,0 ml.
mediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a
10 volte il suo volume una soluzione contenente una Soluzione standard di fosfato (PO 4 200 ppm) . 5004200.
quantita© di ferro(-ico) ammonico solfato R corrispon- Disciogliere in acqua R, il potassio fosfato mono-
ehcitapoemO

basico R equivalente a 0,286 g di KH2PO4 e diluire a

inoizaraperP

dente a 0,863 g di FeNH4(SO4)2.12H2O e 25 ml di acido

solforico diluito R in 500,0 ml. 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Soluzione standard di ferro (Fe 10 ppm) . 5001601. Imme- Soluzione standard di germanio (Ge 100 ppm) . 5004400.
diatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a 100 Disciogliere una quantita© di ammonio esafluorogerma-
volte il suo volume una soluzione contenente una quan- nato (IV) R equivalente a 0,307 g di (NH4)2GeF6 in
tita© di ferro(-oso) ammonico solfato R corrispondente a una soluzione allo 0,01 per cento V/V di acido fluori-
ecidnI

7,022 g di Fe(NH4)(SO4)2.6H2O e 25 ml di acido solfo- drico R. Diluire la soluzione limpida a 1000 ml con
rico diluito R in 1000,0 ml. acqua R.

507
Soluzioni standard per saggi limite

Soluzione standard di gliossale (C 2H2O2 .

20 ppm) Soluzione standard di nitrato (NO 3 100 ppm) . 5002100.
5003700. In un pallone tarato da 100 ml pesare Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a
una quantita© di gliossale soluzione R corrispondente a 10 volte il suo volume una soluzione contenente una
0,200 g di C2H2O2 e portare a volume con etanolo R. quantita© di potassio nitrato R corrispondente a 0,815 g
Immediatamente prima dell'uso diluire la soluzione a di KNO3 in 500,0 ml.
100 volte il suo volume con lo stesso solvente. Soluzione standard di nitrato (NO 3 10 ppm) . 5002101.
Soluzione standard di ioduro (I 10 ppm) . 5003800. Imme- Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione
diatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a 100 standard di nitrato (NO3 100 ppm) R a 10 volte il suo
volte il suo volume una soluzione contenente una quan- volume con acqua R.
tita© di potassio ioduro R corrispondente a 0,131 g di KI . 5002102.
in 100,0 ml.
Soluzione standard di nitrato (NO 3 2 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione

Soluzione standard di magnesio (Mg 100 ppm) . 5001800. standard di nitrato (NO3 10 ppm) R a 5 volte il suo
Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a volume con acqua R.
10 volte il suo volume una soluzione contenente una . 5003600.
quantita© di magnesio solfato R corrispondente a 1,010 g
Soluzione standard di palladio (Pd 500 ppm)

Disciogliere 50,0 mg di palladio R in 9 ml di acido clori-

di MgSO4.7H2O in 100,0 ml. drico R e diluire a 100,0 ml con acqua R.
Soluzione standard di magnesio (Mg 10 ppm) . 5001801. . 5003602.
Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione
Soluzione standard di palladio (Pd 20 ppm)

Disciogliere 0,333 g di palladio cloruro R in 2 ml di

standard di magnesio (Mg 100 ppm) R a 10 volte il suo acido cloridrico R riscaldato. Diluire la soluzione a
volume con acqua R. 1000,0 ml con una miscela di volumi uguali di acido clo-
Soluzione standard di magnesio (Mg 10 .
ppm) R1 ridrico diluito R e acqua R. Immediatamente prima del-
5001802. Immediatamente prima dell'uso, diluire con l'uso diluire a 10 volte il suo volume con acqua R.
acqua R a 100 volte il suo volume una soluzione conte- Soluzione standard di palladio (Pd 0,5 ppm) . 5003601.
nente 8,365 g di magnesio cloruro R in 1000,0 ml di Diluire la soluzione standard di palladio (Pd 500
acido cloridrico diluito R. ppm) R con una miscela di 0,3 volumi di acido
Soluzione standard di manganese (Mn .
100 ppm) nitrico R e 99,7 volumi di acqua R.
5004500. Disciogliere una quantita© di manganese Soluzione standard di piombo (Pb 0,1 per . cento)

solfato R equivalente a 0,308 g MnSO4.H2O in 500 ml 5001700. Disciogliere in acqua R una quantita© di
di acido nitrico 1 M e diluire la soluzione limpida a piombo nitrato R corrispondente a 0,400 g di Pb(NO3)2
1000 ml con acqua R. e diluire a 250,0 ml con lo stesso solvente.
Soluzione standard di mercurio (Hg 1000 ppm) . 5001900. Soluzione standard di piombo (Pb 100 ppm) . 5001701.
Disciogliere una quantita© di mercurio(-ico) cloruro R Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione
corrispondente a 1,354 g di HgCl2 in 50 ml di acido standard di piombo (Pb 0,1 per cento) R a 10 volte il
nitrico diluito R e diluire a 1000,0 ml con acqua R. suo volume con acqua R.
Soluzione standard di mercurio (Hg 10 ppm) . 5001901. Soluzione standard di piombo (Pb 10 ppm) . 5001702.
Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione
100 volte il suo volume una soluzione contenente mer- standard di piombo (Pb 100 ppm) R a 10 volte il suo
curio(-ico) cloruro R, corrispondente a 0,338 g di volume con acqua R.
HgCl2, in 250,0 ml. Soluzione standard di piombo (Pb 10 ppm) R1 . 5001706.
Soluzione standard di nichel (Ni 10 . 5002000.
ppm) Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R
Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a a 10 volte il suo volume una soluzione contenente
100 volte il suo volume una soluzione contenente una 0,160 g di piombo nitrato R in 100 ml di acqua R
quantita© di nichel solfato R corrispondente a 4,78 g di alla quale e© aggiunto 1 ml di acido nitrico esente da
NiSO4.7H2O in 1000,0 ml. piombo R, e diluire a 1000,0 ml.
Soluzione standard di nichel (Ni 0,2 . 5002002.
ppm) Soluzione standard di piombo (Pb 2 . 5001703.
ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione
standard di nichel (Ni 10 ppm) R a 50 volte il suo volume standard di piombo (Pb 10 ppm) R a 5 volte il suo
con acqua R. volume con acqua R.
Soluzione standard di nichel (Ni . 5002001.
0,1 ppm) Soluzione standard di piombo (Pb . 5001704.
1 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione
standard di nichel (Ni 10 ppm) R a 100 volte il suo standard di piombo (Pb 10 ppm) R a 10 volte il suo
volume con acqua R volume con acqua R.

508
 Soluzioni standard per saggi limite

inoizircserP
. 5001705. distillata R a 10 volte il suo volume una soluzione in

ilareneG
Soluzione standard di piombo (Pb 0,1 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione acqua distillata R contenente potassio solfato R equiva-
standard di piombo (Pb 1 ppm) R a 10 volte il suo lente a 0,181 g di K2SO4 in 100,0 ml.
volume con acqua R. . 5002800.
. 5002300. Soluzione standard di solfato (SO 4 10 ppm)

Immediatamente prima dell'uso diluire con acqua

isilanA id
Soluzione standard di platino (Pt 30 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acido clori-

idoteM
drico 1 M a 10 volte il suo volume una soluzione conte- distillata R a 100 volte il suo volume una soluzione in
nente 80 mg di acido cloroplatinico R in 100,0 ml di acqua distillata R contenente una quantita© di potassio
acido cloridrico 1 M. solfato R corrispondente a 0,181 g di K2SO4 in 100,0 ml.
. 5002400. .

irotinetnoC
Soluzione standard di solfato (SO 4 10 ppm) R1

/ ilairetaM
5002801. Immediatamente prima dell'uso diluire con
Soluzione standard di potassio (K 100 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a

20 volte il suo volume una soluzione contenente una alcool al 30 per cento V/V R a 100 volte il suo volume
quantita© di potassio solfato R corrispondente a 0,446 g una soluzione contenente una quantita© di potassio sol-
di K2SO4 in 100,0 ml. fato R corrispondente a 0,181 g di K2SO4 in 100,0 ml di
. 5002401. alcool al 30 per cento V/V R.

ivittaeR
Soluzione standard di potassio (K 20 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione Soluzione standard di solfito (SO 2 1,5 ppm) . 5002900.
standard di potassio (K 100 ppm) R a 5 volte il suo Disciogliere in acqua R una quantita© di sodio metabisol-
volume con acqua R. fito R corrispondente a 0,152 g di Na2S2O5 e diluire a
. 5001100. 100,0 ml con lo stesso solvente. Diluire 5,0 ml di questa
soluzione a 100,0 ml con acqua R. A 3,0 ml della solu-
Soluzione standard di rame (Cu 0,1 per cento)

Disciogliere in acqua R una quantita© di rame(-ico) sol-

itnemogrA
ilareneG
fato R corrispondente a 0,393 g di CuSO4.5H2O e zione risultante aggiungere 4,0 ml di sodio idrossido
diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. 0,1 M e diluire a 100,0 ml con acqua R.
Soluzione standard di rame (Cu 10 . 5001101.
ppm) . 5003100.
Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione
Soluzione standard di stagno (Sn 5 ppm)

Disciogliere una quantita© di stagno R corrispondente a

eifargonoM
standard di rame (Cu 0,1 per cento) R a 100 volte il suo 0,500 g di Sn in una miscela di 5 ml di acqua R e 25 ml

ilareneG
volume con acqua R. di acido cloridrico R e diluire a 1000,0 ml con acqua R.
. 5001102. Immediatamente prima dell'uso diluire la soluzione a
100 volte il suo volume con una soluzione di acido clori-
Soluzione standard di rame (Cu 0,1 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire la soluzione

standard di rame (Cu 10 ppm) R a 100 volte il suo drico R al 2,5 per cento V/V.

ehcituecamraF
volume con acqua R. . 5003101.

emroF
. 5002500.
Soluzione standard di stagno (Sn 0,1 ppm)
Soluzione standard di selenio (Se 100 ppm) Immediatamente prima dell'uso diluire la soluzione
Disciogliere 0,100 g di selenio R in 2 ml di acido standard di stagno (Sn 5 ppm) R a 50 volte il suo volume
nitrico R. Evaporare a secco. Riprendere il residuo a con acqua R.
3 riprese con 2 ml di acqua R evaporando a secco ogni
volta. Disciogliere il residuo in 50 ml di acido cloridrico .
eiretaM

emirP
Soluzione standard di stronzio (Sr 1,0 per cento)

diluito R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso acido. 5003900. Coprire con acqua R lo stronzio carbonato R
. 5002501. equivalente a 1,6849 g di SrCO3. Aggiungere con cau-
Soluzione standard di selenio (Se 1 ppm)

Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a tela acido cloridrico R fino a dissoluzione di tutto il
40 volte il suo volume una soluzione contenente una solido e a mancanza di ulteriore effervescenza. Diluire
ehcituecamraF

a 100,0 ml con acqua R.

inoizaraperP

ehcificepS

quantita© di acido selenioso R corrispondente a 6,54 mg

di H2SeO3 in 100,0 ml. Soluzione standard di tallio (Tl 10 . 5003000.
ppm)

Soluzione standard di sodio (Na 200 ppm) . 5002700. Disciogliere una quantita© di tallio(-oso) solfato R corri-
Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua R a spondente a 0,1235 g di Tl2SO4 in una soluzione (9 g/l)
10 volte il suo volume una soluzione contenente una di sodio cloruro R e diluire a 1000,0 ml con la stessa
ehcitapoemO
inoizaraperP

quantita© di sodio cloruro R corrispondente a 0,509 g di soluzione. Diluire 10,0 ml della soluzione a 100,0 ml
NaCl in 100,0 ml. con una soluzione (9 g/l) di sodio cloruro R.
Soluzione standard di sodio (Na 50 ppm) . 5002701. . 5003200.
Diluire la soluzione standard di sodio (Na 200 ppm) R a
Soluzione standard di titanio (Ti 100 ppm)

Disciogliere 100,0 mg di titanio R in 100 ml di acido clo-

quattro volte il suo volume con acqua R. ridrico R diluiti a 150 ml con acqua R, scaldando se
ecidnI

Soluzione standard di solfato (SO 4 100 ppm) . 5002802. necessario. Lasciar raffreddare e diluire a 1000 ml con
Immediatamente prima dell'uso, diluire con acqua acqua R.

509
Soluzioni tampone

Soluzione standard di vanadio (V 1g/l) . 5003300. Discio- potassio fosfato monobasico R in acqua R e diluire a
gliere in acqua R una quantita© di ammonio vanadato R 1000,0 ml con lo stesso solvente. Se necessario correg-
corrispondente a 0,230 g di NH4VO3 e diluire a gere il pH (2.2.3) con acido fosforico R.
100,0 ml con lo stesso solvente. . 4008900. Discio-
. 5003400.
Tampone solfato soluzione a pH 2,0
Soluzione standard di zinco (Zn 5 mg/ml)
gliere 132,1 g di ammonio solfato R in acqua R e diluire
Disciogliere 3,15 g di zinco ossido R in 15 ml di acido a 500,0 ml con lo stesso solvente (Soluzione I). Versare
cloridrico R e diluire a 500,0 ml con acqua R. sotto agitazione con cautela e con costante raffredda-
Soluzione standard di zinco (Zn 100 . 5003401.
ppm) mento 14 ml di acido solforico R in circa 400 ml di
Immediatamente prima dell'uso diluire con acqua R a acqua R; lasciare raffreddare e diluire a 500,0 ml con
10 volte il suo volume una soluzione contenente una acqua R (Soluzione II). Mescolare volumi uguali delle
quantita© di zinco solfato R corrispondente a 0,440 g di soluzioni I e II. Aggiustare il pH (2.2.3) se necessario.
ZnSO4.7H2O e 1 ml di acido acetico R in 100,0 ml. . 4000200. Disciogliere
. 5003402.
Tampone soluzione a pH 2,0
Soluzione standard di zinco (Zn 10 ppm)
6,57 g di potassio cloruro R in acqua R e aggiungere
Immediatamente prima dell'uso diluire la soluzione 119,0 ml di acido cloridrico 0,1 M. Diluire a 1000,0 ml
standard di zinco (Zn 100 ppm) R a 10 volte il suo con acqua R.
volume con acqua R.
. 5003403. Imme- Tampone soluzione a pH 2,2 . 4010500. Mescolare 6,7 ml
Soluzione standard di zinco (Zn 5 ppm)

diatamente prima dell'uso diluire la soluzione standard di acido fosforico R con 50,0 ml di una soluzione al
di zinco (Zn 100 ppm) R a 20 volte il suo volume con 4 per cento di sodio idrossido soluzione diluita R e diluire
acqua R. a 1000,0 ml con acqua R.
Soluzione standard di zirconio (Zr 0,1 .
per cento)
Tampone soluzione a pH 2,2 .
5003500. Disciogliere una quantita© di zirconile Sodio citrato R 9,8 g
nitrato R corrispondente a 0,293 g di ZrO(NO3)2.2H2O 2,2'-Tiodietanolo R 20,0 ml
in una miscela di 2 volumi di acido cloridrico R e 8
volumi di acqua R e diluire a 100,0 ml con la stessa Fenolo R 85 per cento 1,0 ml
miscela di solventi. Acido cloridrico R 37 per cento 7,5 ml
Sodio cloruro R 20,0 g
Disciogliere tutti i reattivi in circa 900 ml di acqua R,
4.1.3. SOLUZIONI TAMPONE

Acetone soluzione . 4000100. Disciogliere

tamponata aggiungere poi acido cloridrico R 37 per cento in modo
8,15 g di sodio acetato R e 42 g di sodio cloruro R in da ottenere il pH richiesto e diluire a 1000,0 ml con
acqua R, aggiungere 68 ml di acido cloridrico 0,1 M e acqua R. Filtrare accuratamente con filtro da 0,2 . l

150 ml di acetone R e diluire a 500 ml con acqua R. Tampone citrato-fosfato soluzione a pH . Discio-
2,4
Tampone per l'aggiustamento della forza ionica totale
gliere 16,8 g di acido citrico monoidrato R e 2,8 g di sodio
R1 . 4008800. fosfato dibasico diidrato R in 100 ml di acqua R.
Soluzione (a). Disciogliere 210 g di acido citrico R . 4000300. Disciogliere
in 400 ml di acqua distillata R. Aggiustare il pH a Tampone soluzione a pH 2,5

100 g di potassio fosfato monobasico R in 800 ml

7,0 (2.2.3) con ammoniaca concentrata R. Diluire a di acqua R; portare il pH a 2,5 (2.2.3) con acido clori-
1000,0 ml con acqua distillata R. drico R e diluire a 1000,0 ml con acqua R.
Soluzione (b). Disciogliere 132 g di ammonio fosfato R
in acqua distillata R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso Tampone soluzione a pH 2,5 R1 . 4000400. A 4,9 g di
solvente. acido fosforico diluito R aggiungere 250 ml di acqua R.
Soluzione (c). Ad una sospensione di 292 g di acido eti- Portare il pH a 2,5 (2.2.3) con sodio idrossido soluzione
lendinitrilotetracetico R in circa 500 ml di acqua distil- diluita R e diluire a 500,0 ml con acqua R.
lata R, aggiungere circa 200 ml di ammoniaca concen- Tampone fosfato soluzione a pH 2,5 R2 . Soluzione di
trata R fino a dissoluzione. Aggiustare il pH da 6 a 7 potassio fosfato monobasico contenente l'equivalente
(2.2.3) con ammoniaca concentrata R. Diluire a 1000,0 di 3,4 g di KH2PO4 in 1000,0 ml; portare il pH a circa
ml con acqua distillata R. 2,5 con acido fosforico R.
Mescolare volumi uguali di soluzione (a), (b) e (c) e . 4010600. Discio-
aggiustare il pH a 7,5 con ammoniaca concentrata R.
Tampone fosfato soluzione a pH 2,8

gliere 7,8 g di sodio fosfato monobasico R in 900 ml

Tampone fosfato soluzione a pH 2,0 . 4007900. Discio- di acqua R, portare il pH a 2,8 (2.2.3) con acido fosfo-
gliere 8,95 g di sodio fosfato dibasico R e 3,40 g di rico R e diluire a 1000 ml con lo stesso solvente.

510
 Soluzioni tampone

inoizircserP
. 4000500. Mesco- .

ilareneG
Tampone fosfato soluzione a pH 3,0 Soluzione rame(-ico) solfato tamponata a pH 4,0

lare 0,7 ml di acido fosforico R con 100 ml di acqua R. 4001000. Disciogliere 0,25 g di rame solfato R e 4,5 g di
Diluire a 900 ml con lo stesso solvente. Portare il pH a ammonio acetato R in acido acetico diluito R e diluire a
3,0 (2.2.3) con sodio idrossido soluzione concentrata R e 100,0 ml con lo stesso solvente.
diluire a 1000 ml con acqua R. .

isilanA id
Tampone soluzione a pH 4,1

. 4010000.

idoteM
Tampone fosfato soluzione a pH 3,0 R1

Disciogliere 3,40 g di potassio fosfato monobasico R in Sodio citrato R 19,61 g

900 ml di acqua R. Aggiustare il pH a 3,0 (2.2.3) con 2,2'-Tiodietanolo R 1,00 ml
acido fosforico R e diluire a 1000,0 ml con acqua R. Fenolo R 85 per cento 1,00 ml
. 4008000. Disciogliere Acido cloridrico R 37 per cento 9,00 ml

irotinetnoC
/ ilairetaM
Tampone soluzione a pH 3,0

21,0 g di acido citrico R in 200 ml di sodio idrossido Disciogliere tutti i reattivi in circa 900 ml di acqua R,
1 M e diluire a 1000 ml con acqua R. Diluire 40,3 ml di aggiungere poi acido cloridrico R 37 per cento in modo
questa soluzione a 100,0 ml con acido cloridrico 0,1 M. da ottenere il pH richiesto e diluire a 1000,0 ml con
Tampone fosfato soluzione a pH 3,2 . 4008100. A 900 ml acqua R. Filtrare accuratamente con filtro da 0,2 .
di una soluzione (4 g/l) di sodio fosfato monobasico R
l

. 4001100. Discio-

ivittaeR
aggiungere 100 ml di una soluzione (2,5 g/l) di acido Tampone acetato soluzione a pH 4,4

gliere 136 g di sodio acetato R e 77 g di ammonio

fosforico R. Correggere il pH (2.2.3) se necessario. acetato R in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo
Tampone fosfato soluzione a pH 3,2 . 4008500.
R1
stesso solvente; aggiungere 250,0 ml di acido acetico
Aggiustare il pH di una soluzione (35,8 g/l) di sodio glaciale R e mescolare.
fosfato dibasico R a pH 3,2 (2.2.3) con acido fosforico

itnemogrA
ilareneG
diluito R. Diluire 100,0 ml della soluzione a 2000,0 ml Tampone ftalato soluzione a pH 4,4 . 4001200. Discio-
con acqua R. gliere 2,042 g di potassio ftalato acido R in 50 ml di
. acqua R, aggiungere 7,5 ml di sodio idrossido 0,2 M e
Tampone soluzione a pH 3,3
diluire a 200,0 ml con acqua R.
Sodio citrato R 14,71 g . Disciogliere 13,61 g

eifargonoM

ilareneG
Alcool 95 per cento V/V R 20,00 ml
Tampone fosfato soluzione a pH 4,5

di potassio fosfato monobasico R in 750 ml di acqua R,

2,2'-Tiodietanolo R 2,00 ml aggiustare il pH, se necessario, con sodio idrossido
Fenolo R 85 per cento 1,00 ml 0,1 M o con acido cloridrico 0,1 M e diluire a 1000,0 ml
con acqua R (0,1 M).
Acido cloridrico R 37 per cento 8,00 ml

ehcituecamraF
Disciogliere tutti i reattivi in circa 900 ml di acqua R, Tampone fosfato soluzione a pH 4,5 R1 . Diluire 1 ml di

emroF
aggiungere poi acido cloridrico R 37 per cento in modo tampone fosfato soluzione a pH 4,5 R a 10,0 ml con
da ottenere il pH richiesto e diluire a 1000,0 ml con acqua R (0,01 M).
acqua R. Filtrare accuratamente con filtro da 0,2 . Tampone fosfato soluzione a pH 4,5 R2 . Diluire 25 ml di
tampone fosfato soluzione a pH 4,5 R a 100,0 ml con
l

Tampone fosfato soluzione a pH 3,5 . 4000700. Discio- acqua R (0,025 M).

gliere 68,0 g di potassio fosfato monobasico R in
eiretaM

emirP
acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. Tampone fosfato 0,05 M soluzione a pH 4,5 . 4009000.
Correggere il pH (2.2.3) con acido fosforico R. Disciogliere 6,80 g di potassio fosfato monobasico R in
Tampone soluzione a pH . 4000600. Disciogliere
3,5
1000,0 ml di acqua R. Il pH (2.2.3) della soluzione e© 4,5. ehcituecamraF

25,0 g di ammonio acetato R in 25 ml di acqua R e . 4010100.

inoizaraperP

ehcificepS

Tampone sodio acetato soluzione a pH 4,5

aggiungere 38,0 ml di acido cloridrico R1. Correggere il Disciogliere 63 g di sodio acetato anidro R in acqua R,
pH (2.2.3), se necessario, con acido cloridrico diluito R aggiungere 90 ml di acido acetico R, aggiustare il pH a
o con ammoniaca diluita R. Diluire a 100,0 ml con 4,5 e diluire a 1000 ml con acqua R.
acqua R. . 4001400. Discio-
ehcitapoemO

Tampone acetato soluzione a pH 4,6

inoizaraperP

Tampone soluzione a pH 3,6 . 4000800. A 250,0 ml di gliere 5,4 g di sodio acetato R in 50 ml di acqua R,
potassio ftalato acido soluzione 0,2 M R aggiungere aggiungere 2,4 g di acido acetico glaciale R e diluire a
11,94 ml di acido cloridrico 0,2 M. Diluire a 1000,0 ml 100,0 ml con acqua R. Correggere il pH (2.2.3) se neces-
con acqua R. sario.
Tampone soluzione a pH 3,7 . 4000900. A 15,0 ml di Tampone succinato soluzione a pH 4,6 . 4001500. Discio-
acido acetico R aggiungere 60 ml di alcool R e 20 ml di gliere 11,8 g di acido succinico R in una miscela di
ecidnI

acqua R. Portare il pH a 3,7 (2.2.3) con ammoniaca R. 600 ml di acqua R e 82 ml di sodio idrossido 1M e diluire
Diluire a 100,0 ml con acqua R. a 1000,0 ml con acqua R.

511
Soluzioni tampone

Tampone acetato soluzione a pH 4,7 . 4001600. Discio- Tampone fosfato soluzione a pH 5,6 . 4011200.
gliere 136,1 g di sodio acetato R in 500 ml di acqua R. Soluzione I. Disciogliere 0,908 g di potassio fosfato
Mescolare 250 ml di questa soluzione con 250 ml di monobasico R in acqua R e diluire a 100,0 ml con lo
acido acetico diluito R. Agitare due volte con una stesso solvente.
soluzione (0,1 g/l) filtrata, preparata di recente, di diti-
zone R in cloroformio R. Agitare con carbonio tetraclo- Soluzione II. Disciogliere 1,161 g di potassio fosfato
ruro R finchë l'estratto e© incolore. Filtrare lo strato dibasico R in acqua R e diluire a 100,0 ml con lo stesso
acquoso per rimuovere le tracce di carbonio tetra- solvente.
cloruro.
. 4009100. A 120 ml Mescolare 94,4 ml della soluzione I e 5,6 ml della solu-
Tampone acetato soluzione a pH 5,0

di una soluzione (6 g/l) di acido acetico glaciale R zione II. Se necessario, aggiustare il pH a 5,6 (2.2.3)
aggiungere 100 ml di potassio idrossido 0,1 M e circa usando la soluzione I o la soluzione II.
250 ml di acqua R. Mescolare. Aggiustare il pH a 5,0 Tampone fosfato soluzione a pH 5,8 . 4002100. Discio-
con una soluzione (6 g/l) di acido acetico R o con potas- gliere 1,19 g di sodio fosfato dibasico diidrato R e 8,25 g
sio idrossido 0,1 M e diluire a 1000,0 ml con acqua R. di potassio fosfato monobasico R in acqua R e diluire a
Tampone citrato soluzione a pH 5,0 4010700. Preparare 1000,0 ml con lo stesso solvente.
una soluzione contenente 20,1 g/l di acido citrico R e . 4002200. Discio-
8,0 g/l di sodio idrossido R. Correggere il pH con acido Tampone acetato soluzione a pH 6,0

gliere 100 g di ammonio acetato R in 300 ml di acqua R,

cloridrico diluito R. aggiungere 4,1 ml di acido acetico glaciale R, correggere
Tampone soluzione a pH 5,2 . 4001700. Disciogliere il pH (2.2.3), se necessario, utilizzando ammoniaca R o
1,02 g di potassio ftalato acido R in 30,0 ml di sodio acido acetico R e diluire a 500,0 ml con acqua R.
idrossido 0,1 M. Diluire a 100,0 ml con acqua R.
Tampone dietilammonio fosfato soluzione a .
pH 6,0
Tampone per l'aggiustamento della forza ionica totale

. 4007700. Disciogliere 58,5 g 4002300. Diluire 68 ml di acido fosforico R a 500 ml

soluzione a pH 5,0-5,5

di sodio cloruro R, 57,0 ml di acido acetico glaciale R, con acqua R. A 25 ml di questa soluzione aggiungere
61,5 g di sodio acetato R e 5,0 g di acido cicloesilendini- 450 ml di acqua R e 6 ml di dietilammina R, portare il
trilotetracetico R in acqua R e diluire a 500,0 ml con lo pH (2.2.3) a 6 0,05, se necessario, usando dietilammina
6

stesso solvente. Portare il pH a 5,0-5,5 con una solu- R o acido fosforico R e diluire a 500,0 ml con acqua R.
zione (335 g/l) di sodio idrossido R e diluire a 1000,0 ml . 4002400. Mesco-
con acqua distillata R.
Tampone fosfato soluzione a pH 6,0

lare 63,2 ml di una soluzione (71,5 g/l) di sodio fosfato

Tampone soluzione a pH . 4001800. Disciogliere
5,5 dibasico R e 36,8 ml di una soluzione (21 g/l) di acido
54,4 g di sodio acetato R in 50 ml di acqua R, scaldando citrico R.
a 35 ‘C se necessario. Dopo raffreddamento aggiungere . 4002500.
lentamente 10 ml di acido acetico anidro R. Agitare e Tampone fosfato soluzione a pH 6,0 R1

Disciogliere 6,8 g di sodiofosfato monobasico R in acquaR

diluire a 100,0 ml con acqua R. e diluire a 1000,0 ml con acqua R. Correggere il
Tampone acetato-edetato soluzione a pH 5,5 . 4001900. pH(2.2.3)consodioidrossidosoluzioneconcentrataR.
Disciogliere 250 g di ammonio acetato R e 15 g di sodio
edetato R in 400 ml di acqua R e aggiungere 125 ml di Tampone fosfato soluzione a pH 6,0 . 4002600.
R2

acido acetico glaciale R. A 250,0 ml di potassio fosfato monobasico 0,2 M R

. 4008700. aggiungere 28,5 ml di sodio idrossido 0,2 M e diluire a
1000,0 ml con acqua R.
Tampone fosfato-citrato soluzione a pH 5,5

Mescolare 56,85 ml di una soluzione (28,4 g/l) di sodio

fosfato dibasico anidro R e 43,15 ml di una soluzione . 4002800. Discio-
(21 g/l) di acido citrico R.
Tampone fosfato soluzione a pH 6,4

gliere 2,5 g di sodio fosfato dibasico R, 2,5 di sodio

Tampone fosfato soluzione a pH 5,5 . 4002000. fosfato monobasico R e 8,2 g di sodio cloruro R in
Soluzione I. Disciogliere 13,61 g di potassio fosfato 950 ml di acqua R. Portare il pH (2.2.3) della soluzione
monobasico R in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo a 6,4 con sodio idrossido 1 M o con acido cloridrico
stesso solvente. 1 M, se necessario. Diluire a 1000,0 ml con acqua R.
Soluzione II. Disciogliere 35,81 g di sodio fosfato diba- . 4009200.
sico R in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso sol-
Tampone ftalato 0,5 M soluzione a pH 6,4

Disciogliere 100 g di potassio idrogeno ftalato R in

vente. acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Mescolare 96,4 ml della soluzione I con 3,6 ml della Aggiustare il pH (2.2.3) se necessario, usando sodio
soluzione II. idrossido soluzione concentrata R.

512
 Soluzioni tampone

inoizircserP
. 4010800. acqua R e diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. Cor-

ilareneG
Tampone fosfato soluzione a pH 6,5 (0,1 M)

Disciogliere 13,80 g di sodio fosfato monobasico monoi- reggere il pH (2.2.3) usando una soluzione (35 g/l) di
drato R in 900 ml di acqua distillata R. Correggere il sodio fosfato dibasico R.
pH (2.2.3) usando una soluzione 400 g/l di sodio . 4003900.
idrossido R. Diluire a 1000 ml con acqua distillata R. Tampone fosfato soluzione a pH 7,0 R1

Mescolare 250,0 ml di potassio fosfato monobasico solu-

isilanA id
. 4003000. Discio- zione 0,2 M R e 148,2 ml di una soluzione (8 g/l) di sodio

idoteM
Tampone imidazolo soluzione a pH 6,5

gliere 6,81 g di imidazolo R e 1,23 g di magnesio solfato R idrossido R, correggere il pH (2.2.3) se necessario.
in 752 ml di acido cloridrico 0,1 M. Correggere il pH Diluire a 1000,0 ml con acqua R.
(2.2.3), se necessario, e diluire a 1000,0 ml con acqua R. . 4004000.
. 4002900. Disciogliere
Tampone fosfato soluzione a pH 7,0 R2

Mescolare 50,0 ml di una soluzione (136 g/l) di potassio

irotinetnoC
/ ilairetaM
Tampone soluzione a pH 6,5

60,5 g di sodio fosfato dibasico R e 46 g di potassio fosfato monobasico R con 29,5 ml di sodio idrossido 1 M
fosfato monobasico R in acqua R. Aggiungere 100 ml e diluire a 100,0 ml con acqua R. Portare il pH (2.2.3) a
di sodio edetato 0,02 M e 20 mg di mercurio(-ico) 7 0,1.
cloruro R e diluire a 1000,0 ml con acqua R.
6

. 4003100. A 250,0 ml Tampone fosfato soluzione a pH 7,0 . 4008600.

R3
Tampone soluzione a pH 6,6
Disciogliere 5 g di potassio fosfato monobasico R e 11 g

ivittaeR
di potassio fosfato monobasico soluzione 0,2 M R, di potassio fosfato dibasico R in 900 ml di acqua R.
aggiungere 89,0 ml di sodio idrossido 0,2 M. Diluire a Aggiustare il pH (2.2.3) a 7,0 con acido fosforico diluito
1000,0 ml con acqua R. R o sodio idrossido soluzione diluita R. Diluire a 1000
Tampone fosfato soluzione a pH 6,8 . 4003300. Mesco- ml con acqua R e mescolare.
lare 77,3 ml di una soluzione (71,5 g/l) di sodio fosfato

itnemogrA
. 4010200.

ilareneG
dibasico R con 22,7 ml di una soluzione (21 g/l) di acido Tampone fosfato soluzione a pH 7,0 R4

Disciogliere 28,4 g di sodio fosfato dibasico anidro R e

citrico R. 18,2 g di potassio fosfato monobasico R in acqua R e
Tampone fosfato soluzione a pH 6,8 R1 . 4003400. A diluire a 500 ml con lo stesso solvente.
51,0 ml di una soluzione (27,2 g/l) di potassio fosfato . 4009400.
monobasico R aggiungere 49,0 ml di una soluzione

eifargonoM
Tampone fosfato 0,025 M soluzione a pH 7,0

Mescolare 1 volume di tampone fosfato 0,063 M solu-

ilareneG
(71,6 g/l) di sodio fosfato dibasico R. Correggere il pH zione a pH 7,0 R con 1,5 volumi di acqua R.
(2.2.3) se necessario. Conservare a 2-8 ‘C.
. 4003200. Tampone fosfato 0,03 M soluzione a pH 7,0 . 4010300.
Tampone fosfato soluzione salina a pH 6,8

Disciogliere 1,0 g di potassio fosfato monobasico R, Disciogliere 5,2 g di potassio fosfato dibasico R in

ehcituecamraF
2,0 g di potassio fosfato dibasico R e 8,5 g di sodio clo- 900 ml di acqua per cromatografia R. Aggiustare la
soluzione a pH 7,0 0,1 usando acido fosforico R e

emroF
ruro R in 900 ml di acqua R, correggere il pH (2.2.3) se 6

diluire a 1000 ml con acqua per cromatografia R.

necessario, e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
. Tampone fosfato 0,063 M soluzione a pH 7,0 . 4009500.
Disciogliere 5,18 g di sodio fosfato dibasico anidro R e
Tampone tris-cloridrato 1 M soluzione a pH 6,8

4009300. Disciogliere 60,6 g di tris(idrossimetil)ammi-

nometano R in 400 ml di acqua R. Aggiustare il pH 3,65 g di sodio fosfato monobasico monoidrato R in

eiretaM
950 ml di acqua R e aggiustare il pH (2.2.3) con acido

emirP
(2.2.3) con acido cloridrico R e diluire a 500,0 ml con
acqua R. fosforico R; diluire a 1000,0 ml con acqua R.
Tampone fosfato soluzione a pH 7,0 . 4003700. Mesco- Tampone maleato soluzione a pH 7,0 . 4003600. Discio-
lare 82,4 ml di una soluzione (71,5 g/l) di sodio fosfato gliere 10,0 g di sodio cloruro R, 6,06 g di tris(idrossime-
ehcituecamraF

til)amminometano R e 4,90 mg di anidride maleica R in

inoizaraperP

dibasico R con 17,6 ml di una soluzione (21 g/l) di acido

ehcificepS

citrico R. 900 ml di acqua R. Correggere il pH (2.2.3) usando una

. 4003800. soluzione (170 g/l) di sodio idrossido R. Diluire a
Tampone fosfato soluzione a pH 7,0 (0,067 M)

Soluzione I. Disciogliere 0,908 g di potassio fosfato 1000,0 ml con acqua R. Conservare a 2-8 ‘C ed usare
monobasico R in acqua R e diluire a 100,0 ml con lo entro 3 giorni.
ehcitapoemO
inoizaraperP

stesso solvente. Tampone soluzione a pH 7,0 . 4003500. A 1000 ml di una

SoluzioneII.Disciogliere 2,38 g di sodiofosfatodibasicoR soluzione contenente 18 g/l di sodio fosfato dibasico R e
in acqua R e diluire a 100,0 ml con lo stesso solvente. 23 g/l di sodio cloruro R aggiungere la quantita© di una
soluzione contenente 7,8 g/l di sodio fosfato mono-
Mescolare 38,9 ml della soluzione I con 61,1 ml della basico R e 23 g/l di sodio cloruro R, sufficiente (circa
soluzione II. Correggere il pH (2.2.3) se necessario. 280 ml) a correggere il pH (2.2.3). Disciogliere nella
ecidnI

Tampone fosfato soluzione a pH 7,0 (0,1 M) . 4008200. soluzione una quantita© di sodio azide R sufficiente a
Disciogliere 1,361 g di potassio fosfato monobasico R in dare una soluzione 0,2 g/l.

513
Soluzioni tampone

Tampone tetrabutilammonio soluzione a pH .7,0 Tampone tris(idrossimetil)amminometano-sodio cloruro

4010900. Disciogliere 6,16 g di ammonio acetato R in soluzione a pH . 4004900. Disciogliere 6,08 g di

7,4

una miscela di 15 ml di una soluzione 400 g/l di tetrabu- tris(idrossimetil)amminometano R, 8,77 g di sodio
tilammonio idrossido R e 185 ml di acqua R. Correggere cloruro R in 500 ml di acqua distillata R. Aggiungere
il pH (2.2.3) con acido nitrico R. 10,0 g di albumina bovina R. Correggere il pH (2.2.3)
. 4004300. Discio- usando acido cloridrico R. Diluire a 1000,0 ml con
acqua distillata R.
Soluzione salina tamponata a pH 7,2

gliere in acqua R 8,0 g di sodio cloruro R, 0,2 g di potas-

sio cloruro R, 0,1 g di calcio cloruro anidro R, 0,1 g di Tampone soluzione a pH 7,4 . 4004600. Disciogliere 0,6 g
magnesio cloruro R, 3,18 g di sodio fosfato dibasico R e di potassio fosfato monobasico R, 6,4 g di sodio fosfato
0,2 g di potassio fosfato monobasico R e diluire a 1000,0 dibasico R e 5,85 g di sodio cloruro R in acqua R, e
con acqua R. diluire a 1000,0 con lo stesso solvente. Correggere il
Soluzione salina tamponata fosfato-albumina a pH 7,2 . pH (2.2.3) se necessario.
4004400. Disciogliere 10,75 g di sodio fosfato diba- Tampone borato soluzione a pH 7,5 . 4005200. Discio-
sico R, 7,6 g di sodio cloruro R e 10 g di albumina gliere 2,5 g di sodio cloruro R, 2,85 g di sodio tetrabo-
bovina R in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso rato R e 10,5 g di acido borico R in acqua R e diluire a
solvente. Immediatamente prima dell'uso correggere il 1000,0 ml con lo stesso solvente. Correggere il
pH (2.2.3) usando sodio idrossido soluzione diluita R o pH (2.2.3) se necessario. Conservare a 2-8 ‘C.
acido fosforico diluito R. Tampone fosfato soluzione a pH 7,5 (0,2 M) . 4005400.
Soluzione salina tamponata fosfato-albumina a pH 7,2 Disciogliere 27,22 g di potassio fosfato monobasico R in
R1 . 4009600. Disciogliere 10,75 g di sodio fosfato 930 ml di acqua R, portare il pH a 7,5 (2.2.3) con una
dibasico R, 7,6 g di sodio cloruro R e 1 g di albumina soluzione (300 g/l) di potassio idrossido R e diluire a
bovina R in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso 1000,0 ml con acqua R.
solvente. Immediatamente prima dell'uso aggiustare il Tampone fosfato soluzione a pH 7,5 (0,33 M) . 4005300.
pH (2.2.3) usando sodio idrossido soluzione diluita R o Soluzione I. Disciogliere 119,31 g di sodio fosfato diba-
acido fosforico diluito R. sico R in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso sol-
Tampone fosfato soluzione a pH 7,2 . 4004200. Mesco- vente.
lare 87,0 ml di una soluzione (71,5 g/l) di sodio fosfato Soluzione II. Disciogliere 45,36 g di potassio fosfato
dibasico R con 13,0 ml di una soluzione (21 g/l) di acido monobasico R in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo
citrico R. stesso solvente.
Tampone soluzione a pH . 4004100. A 250,0 ml
7,2 Mescolare 85 ml della soluzione I con 15 ml della solu-
di potassio fosfato monobasico 0,2 M R aggiungere zione II. Correggere il pH (2.2.3) se necessario.
175,0 ml di sodio idrossido 0,2 M. Diluire a 1000,0 ml . 4009700. Discio-
con acqua R. Correggere il pH (2.2.3) se necessario. Tampone (HEPES) soluzione a pH 7,5

gliere 2,38 g di acido 2-[4-(2-idrossietil)piperazin-1-il]

Tampone imidazolo soluzione a pH 7,3 . 4004500. Discio- etansolfonico R in circa 90 ml di acqua R. Aggiustare
gliere 3,4 g di imidazolo R e 5,8 g di sodio cloruro R in il pH a 7,5 con sodio idrossido soluzione R. Diluire a
acqua R, aggiungere 18,6 ml di acido cloridrico 1 M e 100 ml con acqua R.
diluire a 1000,0 ml con acqua R. Correggere il pH .
(2.2.3) se necessario. Tampone tris(idrossimetil)amminometano a pH

4005500. Disciogliere 7,27 g di tris(idrossimetil)ammi-

7,5

Tampone barbital soluzione a pH 7,4 . 4004700. Mesco- nometano R e 5,27 g di sodio cloruro R in acqua R, e cor-
lare 50 ml di una soluzione in acqua R contenente reggere il pH (2.2.3) se necessario. Diluire a 1000,0 ml
19,44 g/l di sodio acetato R e 29,46 g/l di barbital con acqua R.
sodico R con 50,5 ml di acido cloridrico 0,1 M, aggiun- .
gere 20 ml di una soluzione (85 g/l) di sodio cloruro R e
Tampone tris(idrossimetil)amminometano a pH 7,5 R1

4005600. Disciogliere 6,057 g di tris(idrossimetil)ammi-

diluire a 250 ml con acqua R. nometano R in acqua R, e correggere il pH (2.2.3) con
Tampone fosfato soluzione a pH 7,4 . 4004800. Aggiun- acido cloridrico R se necessario. Diluire a 1000,0 ml
gere 250,0 ml di potassio fosfato monobasico 0,2 M R a con acqua R.
393,4 ml di sodio idrossido 0,1 M. Tampone sodio citrato soluzione a pH 7,8 (sodio citrato

Tampone fosfato soluzione salina a pH 7,4 . 4005000. 0,034 M, sodio cloruro 0,101 M). 4009800. Disciogliere
Disciogliere 2,38 g di sodio fosfato dibasico R, 0,19 g di 10,0 g di sodio citrato R e 5,90 g di sodio cloruro R in
potassio fosfato monobasico R e 8,0 g di sodio cloruro R 900 ml di acqua R. Aggiustare il pH (2.2.3) mediante
in acqua R. Diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. aggiunta di acido cloridrico R e diluire a 1000 ml con
Correggere il pH (2.2.3) se necessario. acqua R.

514
 Soluzioni tampone

inoizircserP
. (idrossimetil)amminometano R in acqua R. Correggere

ilareneG
Tampone borato soluzione a pH 8,0 (0,0015 M)

4006000. Disciogliere 0,572 g di sodio tetraborato R e il pH (2.2.3) con acido acetico R. Diluire a 1000,0 ml
2,94 g di calcio cloruro R in 800 ml di acqua R. Correg- con acqua R.
gere il pH (2.2.3) con acido cloridrico 1 M. Diluire a . 4006900.
1000,0 ml con acqua R.
Tampone barbital soluzione a pH 8,6 R1

Disciogliere 1,38 g di barbital R, 8,76 g di barbital

isilanA id
. 4007800. sodico R e 0,38 g di calcio lattato R in acqua R e diluire

idoteM
Tampone fosfato soluzione a pH 8,0 (1 M)

Disciogliere 136,1 g di potassio fosfato monobasico R in a 1000,0 ml con lo stesso solvente.

acqua R, correggere il pH (2.2.3) con sodio idrossido .
1 M. Diluire a 1000,0 ml con acqua R. Tampone tris-cloridrato 1,5 M soluzione

4009900. Disciogliere 90,8 g di tris(idrossimetil)ammi-

a pH 8,8

. 4006100. nometano R in 400 ml di acqua R. Aggiustare il pH

irotinetnoC
/ ilairetaM
Tampone fosfato soluzione a pH 8,0 (0,02 M)

A 50,0 ml di potassio fosfato monobasico 0,2 M R (2.2.3) con acido cloridrico R e diluire a 500,0 ml con
aggiungere 46,8 ml di sodio idrossido 0,2 M. Diluire a acqua R.
500,0 ml con acqua R. . 4008300. Discio-
. 4008400.
Tampone fosfato soluzione a pH 9,0
Tampone fosfato 0,1 M soluzione a pH 8,0
gliere 1,74 g di potassio fosfato monobasico R in 80 ml
Disciogliere 0,523 g di potassio fosfato monobasico R e di acqua R, aggiustare il pH (2.2.3) con potassio idros-
16,73 g di potassio fosfato dibasico R in acqua R e diluire

ivittaeR
sido 1 M e diluire a 100,0 ml con acqua R.
a 1000,0 ml con lo stesso solvente. . 4007000.
Tampone soluzione a pH . 4005900. A 50,0 ml
8,0
Tampone soluzione a pH 9,0

Soluzione I. Disciogliere 6,18 g di acido borico R in

di potassio fosfato monobasico 0,2 M R aggiungere potassio cloruro soluzione 0,1 M R e diluire a 1000,0 con
46,8 ml di sodio idrossido 0,2 M. Diluire a 200,0 ml con

itnemogrA
lo stesso solvente.

ilareneG
acqua R.
Tampone soluzione a pH 8,0 R1 . 4010400. Disciogliere Soluzione II. Sodio idrossido 0,1 M.
20 g di potassio fosfato dibasico R in 900 ml di acqua R. Mescolare 1000,0 ml della soluzione I con 420,0 ml
Aggiustare il pH (2.2.3) con acido fosforico R. Diluire a della soluzione II.
1000 ml con acqua R. . 4007100. Disciogliere

eifargonoM

ilareneG
Tampone soluzione a pH 9,0 R1

Tampone tris(idrossimetil)amminometano soluzione a 6,20 g di acido borico R in 500 ml di acqua R e cor-

pH 8,1 . 4006200. Disciogliere 0,294 g di calcio reggere il pH (2.2.3) con sodio idrossido 1 M (circa
cloruro R in 40 ml di tris(idrossimetil)amminometano 41,5 ml). Diluire a 1000,0 ml con acqua R.
soluzione R e correggere il pH (2.2.3) con acido clori- .Vedere tampone

ehcituecamraF
drico 1 M. Diluire a 100,0 ml con acqua R. Tampone borato soluzione a pH 9,0 R2

soluzione a pH 9,0 R1.

. 4006300. Disciogliere

emroF
Tampone tris-glicina a pH 8,3

6,0 g di tris(idrossimetil)amminometano R e 28,8 g di Tampone ammonio cloruro soluzione a pH 9,5 . 4007200.

glicina R in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso Disciogliere 33,5 g di ammonio cloruro R in 150 ml di
solvente. Diluire 1 volume a 10 volumi con acqua R acqua R, aggiungere 42,0 ml di ammoniaca concen-
immediatamente prima dell'uso. trata R e diluire a 250,0 ml con acqua R.
Conservare in un recipiente di polietilene.
eiretaM
. 4006400. Discio-

emirP
Tampone barbital soluzione a pH 8,4

gliere 8,25 g di barbital sodico R in acqua R e diluire a Tampone soluzione a pH 10,0 .

1000,0 ml con lo stesso solvente. Borace R 19,07 g
. 4006500. Acido cloridrico R 37 per cento 1,40 ml
ehcituecamraF

Tampone tris-EDTA ASB soluzione a pH 8,4

Disciogliere 6,1 g di tris(idrossimetil)amminometano R,

inoizaraperP

ehcificepS

2,8 g di sodio edetato R, 10,2 g di sodio cloruro R e 10 g Sodio idrossido R gocce 4,00 g
di albumina bovina R in acqua R, portare il pH a 8,4 Disciogliere tutti i reattivi in acqua R e diluire a
(2.2.3) usando acido cloridrico 1 M e diluire a 1000,0 ml 1000,0 ml con acqua R. Aggiustare , se necessario, il
con acqua R. pH. Filtrare accuratamente con filtro da 0,2 . l
ehcitapoemO
inoizaraperP

Tampone tris(idrossimetil)amminometano-EDTA solu- Tampone ammonio cloruro soluzione a .

pH 10,0

zione a pH 8,4 . 4006600. Disciogliere 5,12 g di sodio clo- 4007300. Disciogliere 5,4 g di ammonio cloruro R in
ruro R, 3,03 g di tris(idrossimetil)amminometano R e 20 ml di acqua R, aggiungere 35,0 ml di ammoniaca R e
1,40 g di sodio edetato R in 250 ml di acqua distillata R. diluire a 100,0 ml con acqua R.
Portare il pH a 8,4 (2.2.3) usando acido cloridrico R. . Disciogliere
Diluire a 500,0 ml con acqua distillata R.
Tampone borato soluzione a pH 10,0

0,620 g di acido borico R e 0,75 g di potassio cloruro R

ecidnI

Tampone tris-acetato soluzione a pH . 4006700.

8,5 in 100,0 ml di acqua R. Aggiungere 87,8 ml di sodio
Disciogliere 0,294 g di calcio cloruro R e 12,11 g di tris idrossido 0,1 M.

515
Soluzioni titolate

Tampone dietanolammina soluzione a pH 10,0 . 4007500. Filtrare a temperatura ambiente una soluzione satura
Disciogliere 96,4 g di dietanolammina R in acqua R e di sodio carbonato R. Insufflare lentamente nel filtrato
diluire a 400 ml con lo stesso solvente. Aggiungere una corrente di anidride carbonica R, raffreddando ed
0,5 ml di una soluzione (186 g/l) di magnesio cloruro R agitando costantemente. Dopo circa 2 h, raccogliere il
e correggere il pH (2.2.3) con acido cloridrico 1 M. precipitato su un filtro di vetro sinterizzato. Lavare il
Diluire a 500,0 ml con acqua R. filtrato con acqua R ghiacciata contenente anidride car-
. bonica. Dopo essiccamento a 100-105 ‘C, essiccare fino
a massa costante a 270-300 ‘C, agitando di tanto in
Tampone ammonio cloruro soluzione a pH 10,4

4011000.
Disciogliere 70 g di ammonio cloruro R in 200 ml di tanto.
acqua distillata R, aggiungere 330 ml di ammoniaca con- Sodio cloruro . NaCl. (Mr 58,44). 2000600. [7647-14-5].
centrata R e diluire a 1000 ml con acqua R. Se necessa- A 1 volume di una soluzione satura di sodio cloruro R
rio correggere il pH a 10,4 con ammoniaca R. aggiungere 2 volumi di acido cloridrico R. Raccogliere
. 4011100. i cristalli formati e lavarli con acido cloridrico R1.
Tampone borato soluzione a pH 10,4
Rimuovere l'acido cloridrico scaldando a b.m. ed essic-
Disciogliere 24,64 g di acido borico R in 900 ml di acqua care i cristalli fino a massa costante a 300 ‘C.
distillata R. Correggere il pH (2.2.3) usando una solu- . Zn. (Mr 65,4). 2000800. [7440-66-6].
zione (400 g/l) di sodio idrossido R. Diluire a 1000 ml Zinco

con acqua distillata R. Usare una qualita© contenente non meno del 99,9 per
Tampone soluzione a pH 10,9 . 4007600. Disciogliere cento di Zn.
6,75 di ammonio cloruro R in ammoniaca R e diluire a
100,0 ml con lo stesso solvente. 4.2.2. SOLUZIONI TITOLATE

Tampone glicina soluzione a pH 11,3 . Mescolare una Le soluzioni titolate sono preparate secondo i metodi
soluzione contenente 7,5 g/l di glicina R e 5,8 g/l di analitici classici. L'apparecchiatura utilizzata e© verifi-
sodio cloruro R con un volume uguale di sodio idrossido cata in modo da garantire i limiti di esattezza richiesti.
0,1 M; aggiustare il pH della miscela, se necessario. La concentrazione delle soluzioni titolate e© indicata in
termini di molarita© . La molarita© esprime la quantita© di
sostanza, in numero di moli, disciolta in 1 litro di solu-
4.2. ANALISI VOLUMETRICHE
zione. Una soluzione che contiene x moli di sostanza
per litro e© chiamata x M.
4.2.1. REATTIVI SPECIALI PER VOLUMETRIA
Le soluzioni titolate non differiscono dal titolo pre-
I reattivi speciali per soluzioni volumetriche sono desi- scritto di piu© del 10 per cento. La molarita© delle solu-
gnati con le lettere RV e sono preparati secondo le indi- zioni titolate e© determinata con una precisione dello
cazioni seguenti. 0,2 per cento.
. C7H6O2. (Mr 122,1). 2000200. [65-85-0]. L'acqua utilizzata nelle analisi volumetriche soddisfa ai
Acido benzoico
requisiti della monografia Acqua depurata (0008).
Sublimare acido benzoico R con un apparecchio idoneo. Il titolo delle soluzioni titolate e© determinato con i
Acido solfanilico . C6H7NO3S. (Mr 173,2). 2000700. metodi di seguito descritti. Quando una soluzione tito-
[121-57-3]. lata viene usata in un saggio in cui il punto di fine tito-
Ricristallizzare acido solfanilico R da acqua R bollente. lazione e© determinato mediante un processo elettrochi-
Filtrare ed essiccare fino a massa costante a 100-105 ‘C. mico (per esempio, amperometria o potenziometria) il
. KBrO3. (Mr 167,0). 2000300. titolo viene determinato con lo stesso metodo. La com-
posizione del mezzo in cui si effettua la determinazione
Potassio bromato

[7758-01-2]. del titolo dovrebbe essere la stessa di quello nel quale

Ricristallizzare potassio bromato R da acqua R bollente. viene usata.
Raccogliere i cristalli ed essiccare fino a massa costante Le soluzioni piu© diluite di quelle descritte sono ottenute
a 180 ‘C. per diluizione di queste ultime con acqua esente da ani-
Potassio ftalato acido . C8H5KO4. (Mr 204,2). 2000400. dride carbonica R. I fattori di correzione di queste solu-
[877-24-7]. zioni sono gli stessi di quelli delle soluzioni titolate da
Ricristallizzare potassio ftalato acido R da acqua R bol- cui sono state preparate le diluizioni. Soluzioni di mola-
lente, raccogliere i cristalli a una temperatura superiore rita© inferiore a 0,1 M sono preparate al momento del-
ai 35 ‘C ed essiccare fino a massa costante a 110 ‘C. l'uso.
Sodio carbonato . Na2CO3. (Mr 106,0). 2000500. [497-19-8]. Acido acetico 0,1 M . 3008900.

516
 Soluzioni titolate

inoizircserP
Diluire 6,0 g di acido acetico glaciale R a 1000,0 ml con metilarancio soluzione R e titolare con l'acido nitrico

ilareneG
acqua R. fino alla comparsa di una colorazione giallo-rossastra;
Determinazione del titolo. A 25,0 ml della soluzione di bollire per 2 min. La soluzione torna gialla. Raffred-
acido acetico aggiungere 0,5 ml di fenolftaleina solu- dare e continuare la titolazione fino al viraggio al
zione R e titolare con sodio idrossido 0,1 M. giallo-rossastro.

isilanA id
. 3001500. 1 ml di acido nitrico 1M equivale a 53,00 mg di Na2CO3.

idoteM
Acido cloridrico 6 M

Diluire 618,0 g di acido cloridrico R a 1000,0 ml con Acido perclorico 0,1 M . 3003900.
acqua R Porre 8,5 ml di acido perclorico R in un pallone tarato
Acido cloridrico 3 M . 3001600. contenente circa 900 ml di acido acetico glaciale R e
Diluire 309,0 g di acido cloridrico R a 1000,0 ml con mescolare. Aggiungere 30 ml di anidride acetica R,

irotinetnoC
/ ilairetaM
acqua R. diluire a 1000,0 ml con acido acetico glaciale R, mesco-
. 3001700. lare e lasciare a riposo per 24 h. Determinare il conte-
nuto di acqua (2.5.12) senza l'aggiunta di metanolo e,
Acido cloridrico 2 M

Diluire 206,0 g di acido cloridrico R a 1000,0 ml con se necessario, portare il contenuto di acqua tra lo 0,1
acqua R. e lo 0,2 per cento aggiungendo anidride acetica R o
. 3001800.

ivittaeR
Acido cloridrico 1 M
acqua R. Lasciare a riposo per 24 h.
Diluire 103,0 g di acido cloridrico R a 1000,0 ml con Determinazione del titolo. Disciogliere 0,350 g di potas-
acqua R. sio ftalato acido RV in 50 ml di acido acetico anidro R,
Determinazione del titolo. Disciogliere 1,000 g di sodio scaldando leggermente se necessario. Lasciar raffred-
carbonato RV in 50 ml di acqua R, aggiungere 0,1 ml di dare proteggendo dall'aria e titolare con la soluzione

itnemogrA
ilareneG
metilarancio soluzione R e titolare con l'acido cloridrico di acido perclorico, usando 0,05 ml di cristal violetto
fino alla comparsa di una colorazione giallo-rossastra. soluzione R come indicatore. Prendere nota della tem-
Bollire per 2 min. La soluzione torna gialla. Raffred- peratura della soluzione di acido perclorico al
dare e continuare la titolazione fino al viraggio al momento della titolazione. Se la temperatura alla quale
giallo-rossastro. e© condotta la determinazione e© differente da quella alla

eifargonoM

ilareneG
1 ml di acido cloridrico 1 M equivale a 53,00 mg di quale l'acido perclorico e© stato standardizzato, il
Na2CO3. volume usato nella determinazione diventa:
Acido cloridrico 0,1 M . 3002100.
Diluire 100,0 ml di acido cloridrico 1 M a 1000,0 ml con Vc = V [1 + (t1 ^ t2)0,0011]

ehcituecamraF
acqua R.
dove t1 e© la temperatura durante la standardizzazione e

emroF
Determinazione del titolo. Effettuare la titolazione pre- t2 e© la temperatura durante la determinazione, Vc e© il
scritta per acido cloridrico 1 M usando 0,100 g di sodio volume corretto e V il volume osservato.
carbonato RV disciolti in 20 ml di acqua R.
1 ml di acido cloridrico 0,1 M equivale a 5,30 mg di 1 ml di acido perclorico 0,1 M equivale a 20,42 mg di
Na2CO3. C8H5KO4.

eiretaM

emirP
Acido cloridrico alcoolico 0,1 M . 3008800. Acido perclorico 0,05 M . 3004000.
Diluire 9,0 ml di acido cloridrico R a 1000,0 ml con Diluire 50,0 ml di acido perclorico 0,1 M a 100,0 ml con
alcool esente da aldeide R. acido acetico anidro R.
. Diluire 500,0 ml di acido clori- . Diluire 5,6 ml di acido solforico R a
ehcituecamraF
inoizaraperP

Acido cloridrico 0,5 M Acido solforico 1 M

ehcificepS

drico 1 M a 1000,0 ml con acqua R. 100,0 ml con acqua R.

Determinazione del titolo. Procedere come descritto Determinazione del titolo. Disciogliere 2,000 g di sodio
per l'acido cloridrico 1 M usando 0,500 g di sodio carbo- bicarbonato RV in 50 ml di acqua R ed aggiungere
nato RV disciolti in 20 ml di acqua R. 0,1 ml di metilarancio soluzione R. Titolare con la solu-
. Diluire 100,0 ml di acido clori- zione di acido solforico fino ad inizio del viraggio
ehcitapoemO
inoizaraperP

Acido cloridrico 0,01 M

drico 0,1 M a 1000,0 ml con acqua R. Preparare al al rosso-giallastro. Scaldare all'ebollizione per circa
momento dell'uso. 2 min. La soluzione diventa di nuovo gialla. Raf-
. 3003600. freddare e titolare di nuovo fino a colorazione giallo-
rossastra.
Acido nitrico 1 M

Diluire 96,6 g di acido nitrico R a 1000,0 ml con

acqua R. Acido solforico 0,5 M . 3007800.
ecidnI

Determinazione del titolo. Disciogliere 1,000 g di sodio Disciogliere 28 ml di acido solforico in acqua R e diluire
carbonato RV in 50 ml di acqua R, aggiungere 0,1 ml di a 1000,0 ml con lo stesso solvente.

517
Soluzioni titolate

Determinazione del titolo. Disciogliere 1,000 g di sodio 150 ml di acqua R. Titolare immediatamente con sodio
carbonato RV in 50 ml di acqua R, aggiungere 0,1 ml di tiosolfato 0,1 M usando come indicatore 1 ml di amido
metilarancio soluzione R, e titolare con acido solforico soluzione R.
fino alla comparsa di una colorazione giallo-rossastra. 1 ml di ammonio e cerio solfato 0,1 M equivale a
Bollire per circa 2 min. Il colore della soluzione torna 4,946 mg di As2O3.
giallo. Raffreddare e titolare fino a ricomparsa della
colorazione giallo-rossastra. Ammonio e cerio solfato 0,01 M . 3000400.
1 ml di acido solforico 0,5 M equivale a 53,00 mg di A 100,0 ml di ammonio e cerio solfato 0,1 M aggiungere,
Na2CO3. raffreddando, 30 ml di acido solforico R e diluire a
. Diluire 200,0 ml di acido solfo- 1000,0 ml con acqua R.
. 3000500.
Acido solforico 0,01 M

rico 0,05 M a 1000,0 ml con acqua R. Preparare al Ammonio tiocianato 0,1 M

momento dell'uso. Disciogliere 7,612 g di ammonio tiocianato R in acqua R

Acido solforico 0,005 M . Diluire 100,0 ml di acido solfo- e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
rico 0,05 M a 1000,0 ml con acqua R. Preparare al Determinazione del titolo. A 20,0 ml di argento nitrato
momento dell'uso. 0,1 M aggiungere 25 ml di acqua R, 2 ml di acido nitrico
. 3008000. diluito R e 2 ml di ferro(-ico) ammonico solfato solu-
zione R2. Titolare con la soluzione di ammonio tiocia-
Acido solforico 0,05 M

Diluire 100,0 ml di acido solforico 0,5 M a 1000,0 ml con nato fino al viraggio al giallo-rossastro.
acqua R.
Standardizzazione. Effettuare la titolazione descritta Ammonio tiocianato 0,02 M . Diluire 20,0 ml di ammo-
per acido solforico 0,5 M usando 0,100 g di sodio carbo- nio tiocianato 0,1 M a 100,0 ml con acqua R. Preparare
nato RV, disciolti in 20 ml di acqua R. al momento dell'uso.
1 ml di acido solforico 0,05 M equivale a 5,30 mg di Anidride arseniosa 0,05 M . Disciogliere 2,473 g di
Na2CO3. anidride arseniosa RV, precedentemente seccata in
acqua R, aggiungere 7,5 g di sodio idrossido R e 100 ml
Ammonio e cerio nitrato 0,1 M . 3000100. di acqua R. Agitare fino a completa dissoluzione e
Agitare per 2 min una miscela di 56 ml di acido solfori- diluire a 1000,0 ml con acqua R.
co R e 54,82 g di ammonio e cerio nitrato R. Aggiungere . 3005600.
cinque porzioni consecutive, ciascuna da 100 ml, di Argento nitrato 0,1 M

acqua R, agitando dopo ogni aggiunta. Diluire la solu- Disciogliere 17,0 g di argento nitrato R in acqua R e
zione limpida a 1000,0 ml con acqua R. Standardizzare diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
la soluzione dopo 10 giorni. Determinazione del titolo. Disciogliere 0,100 g di sodio
Determinazione del titolo. A 25 ml di ammonio e cerio cloruro RV in 30 ml di acqua R. Titolare con la solu-
nitrato soluzione aggiungere 2 g di potassio ioduro R e zione di argento nitrato, determinando potenziometri-
150 ml di acqua l. Titolare immediatamente con sodio camente (2.2.20) il punto di fine titolazione.
tiosolfato 0,1 M usando come indicatore 1 ml di amido 1 ml di argento nitrato 0,1 M equivale a 5,844 mg di
soluzione R. NaCl.
1 ml di ammonio e cerio nitrato 0,1 M equivale a Conservare al riparo dalla luce.
4,946 mg di As2O3. . 3009300.
Conservare al riparo dalla luce.
Argento nitrato 0,001 M

Diluire 5,0 ml di argento nitrato 0,1 M a 500,0 ml con

Ammonio e cerio nitrato 0,01 M . 3000200. acqua R.
A 100,0 ml di ammonio e cerio nitrato 0,1 M aggiungere, . 3000600.
raffreddando, 30 ml di acido solforico R e diluire a
Bario cloruro 0,1 M

1000,0 con acqua R. Disciogliere 24,4 g di bario cloruro R in acqua R e

diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Ammonio e cerio solfato 0,1 M . 3000300. Determinazione del titolo. A 10,0 ml della soluzione di
Disciogliere 65,0 g di ammonio e cerio solfato R in bario cloruro aggiungere 60 ml di acqua R, 3 ml di
una miscela a di 500 ml di acqua R e 30 ml di acido sol- ammoniaca concentrata R e 0,5-1 mg di ftaleina
forico R. Lasciar raffreddare e diluire a 1000,0 ml con porpora R. Titolare con sodio edetato 0,1 M. Quando la
acqua R. soluzione comincia a decolorarsi, aggiungere 50 ml di
Determinazione del titolo. A 25 ml di ammonio e cerio alcool R e continuare la titolazione fino a scomparsa
solfato soluzione aggiungere 2 g di potassio ioduro R e della colorazione violetto-blu.

518
 Soluzioni titolate

inoizircserP
. 3009600. Determinazione del titolo. A 25,0 ml della soluzione di

ilareneG
Bario perclorato 0,025 M

Diluire 500,0 ml di bario perclorato 0,05 M a 1000,0 ml ferro(-ico) ammonico solfato aggiungere 3 ml di acido
con tampone soluzione a pH 3,7 R. cloridrico R e 2 g di potassio ioduro R. Lasciare a riposo
. 3000700. per 10 min. Titolare con sodio tiosolfato 0,1 M, usando
Bario perclorato 0,05 M
1 ml di amido soluzione R come indicatore.
Disciogliere 15,8 g di bario idrossido R in una miscela di

isilanA id
1 ml di sodio tiosolfato 0,1 M equivale a 48,22 mg di

idoteM
75 ml di acqua R e 7,5 ml di acido perclorico R, portare FeNH4(SO4)2.12H2O.
la soluzione a pH 3 aggiungendo acido perclorico R e fil- . Disciogliere 20 g
trare se necessario. Aggiungere 150 ml di alcool R e Ferro(-oso) ammonico solfato 0,05 M

di ferro(-oso) ammonico solfato R in acqua esente da

diluire a 250 ml con acqua R. Diluire a 1000,0 ml con anidride carbonica R e diluire a 1000,0 ml.
la tampone soluzione a pH 3,7 R.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Determinazione del titolo. A 5,0 ml di acido solforico Determinazione del titolo. A 256 ml aggiungere 10 ml di
0,05 M aggiungere 5 ml di acqua R, 50 ml di tampone acido solforico 1 M e 1 ml di acido fosforico R e titolare
soluzione a pH 3,7 R e 0,5 ml di alizarina S soluzione R. con potassio permanganato 0,004 M.
Titolare con la soluzione di bario perclorato fino al 1 ml di potassio permanganato 0,004 M equivale a
viraggio a una colorazione rosso-arancio. Determinare 39,21 mg di Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O.

ivittaeR
il titolo immediatamente prima dell'uso. Ferro(-oso) solfato 0,1 M . 3001400.
Benzetonio cloruro 0,004 M . 3000900. Disciogliere 27,80 g di ferro(-oso) solfato R in 500 ml
Disciogliere in acqua R 1,792 g di benzetonio clo- di acido solforico diluito R e diluire a 1000,0 ml con
ruro R, precedentemente essiccato a massa costante a acqua R.

itnemogrA
100-105 ‘C e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. Determinazione del titolo. A 25,0 ml della soluzione di

ilareneG
Determinazione del titolo. Calcolare la molarita© della ferro(-oso) solfato aggiungere 3 ml di acido fosforico R
soluzione dal contenuto di C27H42ClNO2 nel benzeto- e titolare immediatamente con potassio permanganato
nio cloruro essiccato, determinato come segue. Discio- 0,02 M. Determinare il titolo immediatamente prima
gliere 0,350 g di sostanza essiccata in 30 ml di acido ace- dell'uso.

eifargonoM
tico anidro R e aggiungere 6 ml di mercurio(-ico) acetato . 3002700.

ilareneG
Iodio 0,05 M

soluzione R. Titolare con acido perclorico 0,1 M usando Disciogliere 12,7 g di iodio R e 20 g di potassio ioduro R
0,05 ml di cristal violetto soluzione R come indicatore. in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Effettuare una titolazione in bianco. Determinazione del titolo. A 20 ml di iodio soluzione
aggiungere 1 ml di acido acetico diluito R e 30 ml di

ehcituecamraF
1 ml di acido perclorico 0,1 M equivale a 44,81 mg di
C27H42ClNO2. acqua R. Titolare con sodio solfato 0,1 M usando amido

emroF
. Disciogliere 2,7835 g di soluzione R come indicatore.
1 ml di iodio 0,05 M equivale a 4,946 mg di As2O3.
Bromuro-bromato 0,1 M

potassio bromato RV e 13,0 g di potassio bromuro R in

acqua R e diluire a 1000,0 ml. Conservare al riparo dalla luce.
. 3001000. . 3002900.

eiretaM
Bromuro-bromato 0,0167 M Iodio 0,01 M

emirP
Disciogliere 2,7835 g di potassio bromato RV e 13 g di Aggiungere 0,3 g di potassio ioduro R a 20,0 ml di iodio
potassio bromuro R in acqua R e diluire a 1000,0 ml 0,05 M e diluire a 100,0 con acqua R.
con lo stesso solvente. Iodio 0,5 M . 3009400.
. 3001100. Disciogliere 127 g di iodio R e 200 g di potassio ioduro R
ehcituecamraF
inoizaraperP

Cerio solfato 0,1 M

in acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.

ehcificepS

Disciogliere 40,4 g di cerio solfato R una miscela di

500 ml di acqua R e 50 ml di acido solforico R. Lasciar Standardizzazione. A 2,0 ml della soluzione di iodio
raffreddare e diluire a 1000,0 ml con acqua R. aggiungere 1 ml di acido acetico diluito R e 50 ml di
Determinazione del titolo. A 25,0 ml della soluzione di acqua R. Titolare con sodio tiosolfato 0,1 M usando
cerio solfato, aggiungere 2,0 g di potassio ioduro R, come indicatore amido soluzione R.
ehcitapoemO
inoizaraperP

150 ml di acqua R e 1 ml di amido soluzione R Conservare al riparo dalla luce.

come indicatore. Titolare immediatamente con sodio Litio metossido 0,1 M . 3003300.
tiosolfato 0,1 M. Disciogliere 0,694 g di litio R in 150 ml di metanolo ani-
Ferro(-ico) ammonico solfato 0,1 M . 3001300. dro R e diluire a 1000,0 ml con toluene R.
Disciogliere 50,0 g di ferro(-ico) ammonico solfato R in Determinazione del titolo. A 10 ml di dimetilformam-
ecidnI

una miscela di 6 ml di acido solforico R e 300 ml di mide R aggiungere 0,05 ml di una soluzione (3 g/l) di
acqua R e diluire a 1000,0 ml con acqua R. blu timolo R in metanolo R e titolare con la soluzione

519
Soluzioni titolate

di litio metossido fino al viraggio ad una netta colora- Potassio ftalato acido 0,1 M . 3004700.
zione blu. Immediatamente aggiungere 0,200 g di acido In una beuta contenente circa 800 ml di acido acetico
benzoico RV. Agitare fino a dissoluzione e titolare con anidro R, disciogliere 20,42 g di potassio idrogeno
la soluzione di litio metossido fino ad ottenere nuova- ftalato RV. Scaldare a b.m. fino a completa dissolu-
mente il viraggio ad una netta colorazione blu. Proteg- zione, proteggendo dall'umidita© . Raffreddare a 20 ‘C e
gere la soluzione dall'anidride carbonica atmosferica diluire a 1000,0 ml con acido acetico anidro R.
durante tutta la titolazione. Dal volume di titolante . 3009100.
usato nella seconda titolazione ricavare il titolo esatto Potassio idrossido 1 M

Disciogliere 60 g di potassio idrossido R in acqua esente

della soluzione di litio metossido. Determinare il titolo da anidride carbonica R e diluire a 1000,0 ml con lo
immediatamente prima dell'uso. stesso solvente.
1 ml di litio metossido 0,1 M equivale a 12,21 mg di Determinazione del titolo. Titolare 20,0 ml della solu-
C7H6O2. zione di potassio idrossido con acido cloridrico 1 M,
Magnesio cloruro 0,1 M . 3003400. usando 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R come indica-
Disciogliere 20,33 g di magnesio cloruro R in acqua R e tore.
diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. Potassio idrossido 0,1 M . 3004800.
Determinazione del titolo. Effettuare la determinazione Disciogliere 6 g di potassio idrossido R in acqua esente
del magnesio mediante complessometria (2.5.11). da anidride carbonica R e diluire a 1000,0 ml con lo
Piombo nitrato 0,05 M . 3009700. stesso solvente.
Diluire 50,0 ml di piombo nitrato 0,1 M a 100 ml con Determinazione del titolo. Titolare 20,0 ml della solu-
acqua R. zione di potassio idrossido con acido cloridrico 0,1 M,
. 3003100. usando 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R come indica-
Piombo nitrato 0,1 M
tore.
Disciogliere 33 g di piombo nitrato R in acqua R e . 3005000.
diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Potassio idrossido soluzione alcoolica 0,5 M

Disciogliere 3 g di potassio idrossido R in 5 ml di acqua R

Determinazione del titolo. A 20,0 ml della soluzione di e diluire a 100,0 ml con alcool esente da aldeide R.
piombo nitrato aggiungere 300 ml di acqua R ed effet- Determinazione del titolo. Titolare 20,0 ml della solu-
tuare la determinazione del piombo mediante comples- zione alcolica di potassio idrossido con acido cloridrico
sometria (2.5.11). 0,5 M, usando 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R come
Potassio bromato 0,1 M . Disciogliere 2,7835 g di potas- indicatore.
sio bromato RV in acqua R e diluire a 1000,0 ml. Potassio idrossido soluzione alcoolica 0,1 M . 3005100.
Potassio bromato 0,033 M . 3004200. Diluire 20 ml di potassio idrossido soluzione alcoolica
Disciogliere 5,5670 g di potassio bromato RV in acqua R 0,5 M a 100,0 ml con alcool esente da aldeide R.
e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. Potassio idrossido soluzione alcoolica 0,01 M . 3009000.
Potassio bromato 0,02 M . 3004300. Diluire 2,0 ml di potassio idrossido soluzione alcoolica
Disciogliere 3,340 g di potassio bromato RV in acqua R 0,5 M a 100,0 ml con alcool esente da aldeide R.
diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. Potassio idrossido soluzione 0,5 M in alcool al 60 per

Potassio bromato 0,0167 M . 3004400. cento V/V. 3004900.

Preparare per diluizione del potassio bromato 0,033 M. Disciogliere 3 g di potassio idrossido R in alcool esente
. 3004500. da aldeide R al 60 per cento V/V e diluire a 100,0 ml
Potassio bromato 0,0083 M
con lo stesso solvente.
Preparare per diluizione del potassio bromato 0,033 M. Determinazione del titolo. Titolare 20,0 ml della solu-
Potassio dicromato 0,0167 M . 3004600. zione alcoolica di potassio idrossido con acido clori-
Disciogliere 4,90 g di potassio dicromato R in acqua R e drico 0,5 M usando 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R
diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. come indicatore.
Determinazione del titolo. A 20,0 ml della soluzione di Potassio iodato 0,05 M . 3005200.
potassio dicromato aggiungere 1 g di potassio ioduro R Disciogliere 10,70 g di potassio iodato R in acqua R e
e 7 ml di acido cloridrico diluito R. Aggiungere 250 ml diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
di acqua R e titolare con sodio tiosolfato 0,1 M, usando Determinazione del titolo. Diluire 25,0 ml della solu-
3 ml di amido soluzione R come indicatore, fino al virag- zione di potassio iodato a 100,0 ml con acqua R. A
gio dal blu al verde chiaro. 20,0 ml di questa soluzione aggiungere 2 g di potassio

520
 Soluzioni titolate

inoizircserP
ioduro R e 10 ml di acido solforico diluito R. Titolare con Determinazione del titolo. Disciogliere 0,120 g di zinco

ilareneG
sodio tiosolfato 0,1 M, usando come indicatore RV in 4 ml di acido cloridrico R1 e aggiungere 0,1 ml
1 ml di amido soluzione R, aggiunto verso la fine della di acqua di bromo R. Eliminare l'eccesso di bromo
titolazione. per ebollizione, aggiungere sodio idrossido soluzione
. 3009002. diluita R fino a che la soluzione sia debolmente acida o
neutra ed effettuare la determinazione dello zinco

isilanA id
Potassio ioduro 0,001 M

Diluire 10,0 ml di potassio ioduro soluzione R (166 g/l) a

idoteM
100,0 ml con acqua R. Diluire 5 ml di questa soluzione mediante complessometria (2.5.11).
a 500,0 ml con acqua R. 1 ml di sodio edetato 0,1 M equivale a 6,54 mg di Zn.
Potassio permanganato 0,02 M . 3005300. Conservare in un recipiente di polietilene.
Disciogliere 3,2 g di potassio permanganato R in . Diluire 500,0 ml di sodio edetato

irotinetnoC
/ ilairetaM
Sodio edetato 0,05 M

acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente. 0,1 M a 1000,0 ml con acqua R. Preparare al momento
Scaldare la soluzione a b.m. per 1 h, lasciar raffreddare dell'uso.
e filtrare su un filtro di vetro sinterizzato. Sodio edetato 0,02 M . 3006000.
Determinazione del titolo. A 20,0 ml della soluzione di Disciogliere 7,444 g di sodio edetato R in acqua R e
potassio permanganato aggiungere 2 g di potassio diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.

ivittaeR
ioduro R e 10 ml di acido solforico diluito R. Titolare Determinazione del titolo. Disciogliere 0,100 g di
con sodio tiosolfato 0,1 M, usando come indicatore 1 ml zinco RV in 4 ml di acido cloridrico R1 e aggiungere
di amido soluzione R, aggiunto verso la fine della titola- 0,1 ml di acqua di bromo R. Eliminare l'eccesso di
zione. bromo per ebollizione. Trasferire la soluzione in un pal-
lone tarato e diluire a 100,0 ml con acqua R. Trasferire

itnemogrA
Determinare il titolo immediatamente prima dell'uso.

ilareneG
Conservare al riparo dalla luce. 25,0 ml della soluzione in una beuta da 500 ml e diluire
. Diluire 100,0 ml di a 200 ml con acqua R. Aggiungere circa 50 mg di xile-
Potassio permanganato 0,002 M

potassio permanganato 0,02 M a 1000 ml con acqua R. nolarancio miscela composta R e esametilentetrammi-
na R finchë la soluzione diventi rosa-violetto. Aggiun-
. Diluire 200,0 ml di gere 2 g di esametilentetrammina R in eccesso. Titolare

eifargonoM

ilareneG
Potassio permanganato 0,004 M

potassio permanganato 0,02 M a 1000 ml con acqua R. con la soluzione di sodio edetato fino al viraggio dal
Rame solfato 0,02 M . 3001200. rosa-violetto al giallo.
Disciogliere 5,0 g di rame solfato R in acqua R e diluire a 1 ml di sodio edetato 0,02 M equivale a 1,308 mg di Zn.
1000,0 ml con lo stesso solvente. . Diluire 100,0 ml di sodio edetato

ehcituecamraF
Sodio edetato 0,01 M

Determinazione del titolo. A 20,0 ml della soluzione di 0,1 M a 1000,0 ml con acqua R. Preparare al momento

emroF
rame solfato aggiungere 2 g di sodio acetato R e 0,1 ml dell'uso.
di piridilazonaftolo soluzione R. Titolare con sodio ede- . 3009800.
tato 0,02 M fino al viraggio dal blu-violetto al verde
Sodio idrossido 2 M

brillante. Titolare lentamente verso la fine della titola- Disciogliere 84 g di sodio idrossido R in acqua esente da
zione. anidride carbonica R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso
solvente.
eiretaM

emirP
Rame etilendiammina idrossido soluzione 1 M . 3008700. . 3006300.
Il rapporto molare tra etilendiammina e rame e©
Sodio idrossido 1 M

2,00 0,04. Questa soluzione e© commercialmente Disciogliere 42 g di sodio idrossido R in acqua esente da
6

disponibile. anidride carbonica R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso

ehcituecamraF

solvente.
inoizaraperP

ehcificepS

Sodio arsenito 0,1 M . 3005800. Determinazione del titolo. Titolare 20,0 ml della solu-
Disciogliere una quantita© di anidride arseniosa RV cor- zione di sodio idrossido con acido cloridrico 1 M usando
rispondente a 4,946 g di As2O3 in una miscela di 20 ml l'indicatore prescritto nel saggio in cui viene usato sodio
di sodio idrossido soluzione concentrata R e 20 ml di idrossido 1 M.
ehcitapoemO

acqua R, diluire a 400 ml con acqua R e aggiungere

inoizaraperP

acido cloridrico diluito R fino a soluzione neutra alla tor- Se e© prescritto sodio idrossido esente da carbonato, pre-
nasole cartina R. Disciogliere 2 g di sodio bicarbonato R parare come segue. Disciogliere sodio idrossido R
nella soluzione e diluire a 500,0 ml con acqua R. in acqua R in modo da avere una concentrazione di
400-600 g/l e lasciare a riposo. Decantare il liquido sur-
Sodio edetato 0,1 M . 3005900. natante limpido, prendendo delle precauzioni per evi-
Disciogliere 37,5 g di sodio edetato R in 500 ml di tare di introdurre anidride carbonica, e diluire con
ecidnI

acqua R, aggiungere 100 ml di sodio idrossido 1 M e acqua esente da anidride carbonica R fino alla normalita©
diluire a 1000,0 ml con acqua R. richiesta. La soluzione soddisfa al seguente saggio.

521
Soluzioni titolate

Titolare 20,0 ml di acido cloridrico con la stessa mola- blu timolo R in metanolo R, e titolare con la soluzione
rita© della soluzione di sodio idrossido usando come di sodio metossido fino al viraggio ad una netta colora-
indicatore 0,5 ml di fenolftaleina soluzione R. Al punto zione blu. Aggiungere immediatamente 0,200 g di acido
di fine titolazione aggiungere una quantita© di acido suf- benzoico RV. Agitare fino a dissoluzione e titolare con
ficiente a far svanire la colorazione rosa, e concentrare la soluzione di sodio metossido fino ad ottenere nuova-
la soluzione a 20 ml per ebollizione. Durante l'ebolli- mente il viraggio ad una netta colorazione blu. Proteg-
zione aggiungere acido sufficiente a far svanire la colo- gere la soluzione dall'anidride carbonica esterna
razione rosa, che non deve riapparire durante un'ebolli- durante tutta la titolazione. Dal volume di titolante uti-
zione prolungata. Il volume di acido utilizzato non lizzato nella seconda titolazione ricavare il titolo della
supera 0,1 ml. soluzione di sodio metossido. Determinare il titolo
Sodio idrossido 0,1 M . 3006600. immediatamente prima dell'uso.
Diluire 100,0 ml di sodio idrossido 1 M a 1000,0 ml con 1 ml di sodio metossido 0,1 M equivale a 12,21 mg di
acqua esente da anidride carbonica R. C7H6O2.
Determinazione del titolo. Titolare 20,0 ml della solu- Sodio nitrito 0,1 M . 3007200.
zione di sodio idrossido con acido cloridrico 0,1 M, Disciogliere 7,5 g di sodio nitrito R in acqua R e diluire a
usando il punto di fine titolazione prescritto per la 1000,0 ml con lo stesso solvente.
determinazione quantitativa nel quale viene usato il Determinazione del titolo. Disciogliere 0,300 g di acido
sodio idrossido 0,1 M solfanilico RV in 50 ml di acido cloridrico diluito R ed
Determinazione del titolo (per l'uso nella determinazione effettuare la determinazione dell'azoto amminico pri-
quantitativa dei sali alogenati di basi organiche). Discio- mario aromatico (2.5.8), usando la soluzione di sodio
gliere 0,100 g di acido benzoico RV in una miscela di nitrito e determinando il punto di fine titolazione elet-
5 ml di acido cloridrico 0,01 M e 50 ml di alcool R. Effet- trometricamente. Determinare il titolo immediata-
tuare la titolazione (2.2.20), usando la soluzione di mente prima dell'uso.
sodio idrossido. Misurare il volume aggiunto tra i due 1 ml di sodio nitrito 0,1 M equivale a 17,32 mg di
punti di flesso. C6H7NO3S.
Sodio idrossido soluzione etanolica 0,1 M . 3007000. Sodio periodato 0,1 M . 3009500.
A 250 ml di etanolo R aggiungere 3,3 g di sodio idrossido Disciogliere 21,4 g di sodio periodato R in circa 500 ml
soluzione concentrata R. di acqua R e diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Determinazione del titolo. Disciogliere 0,100 g di acido Standardizzazione. In un pallone chiuso, introdurre
benzoico RV in 10 ml di alcool R e 2 ml di acqua R.Tito- 20,0 ml della soluzione di sodio periodato e aggiungere
lare con la soluzione etanolica sodio idrossido usando 5 ml di acido perclorico R. Chiudere il pallone e agitare.
come indicatore 0,2 ml di timolftaleina soluzione R. Aggiustare la soluzione a pH 6,4 (2.2.3) usando una
Standardizzare immediatamente prima dell'uso. soluzione satura di sodio bicarbonato R. Aggiungere
1 ml di sodio idrossido soluzione etanolica 0,1 M equivale 10 ml di potassio ioduro soluzione R, chiudere, agitare e
a 12,21 mg di C7H6O2. lasciare a riposo per 2 min. Titolare con sodio arsenito
Sodio idrossido 0,05 M . Diluire 50,0 ml di sodio idros- 0,025 M fino a che il colore giallo scompaia quasi del
sido 1 M a 1000,0 ml con acqua R. tutto. Aggiungere 2 ml di amido soluzione R e titolare
Determinazione del titolo. Procedere come descritto per lentamente fino a scomparsa completa del colore.
il sodio idrossido 1 M usando acido cloridrico 0,05 M. Sodio periodato 0,05 M. Diliure 50,0 ml di sodio perio-
. Diluire 100,0 ml di sodio idros- dato 0,1 M a 100,0 ml con acqua R. Preparare al
momento dell'uso.
Sodio idrossido 0,01 M

sido 0,1 M a 1000,0 ml con acqua esente da anidride car-

bonica R. 1,1,1-Tricloro-2,2- bis (4-clorofenil)etano soluzione.

Determinazione del titolo. Procedere come descritto per Clofenotano soluzione.

il sodio idrossido 1 M usando acido cloridrico 0,01 M. Soluzione satura di clofenotano R in etanolo R a tempe-
Sodio metossido 0,1 M . 3007100. ratura compresa tra 17,5 ‘C e 18,5 ‘C.
Raffreddare 175 ml di metanolo anidro R in acqua R Sodio tiosolfato 0,1 M. 3007300.
ghiacciata e aggiungere, in piccole porzioni, circa 2,5 g Disciogliere 25 g di sodio tiosolfato R e 0,2 g di sodio
di sodio R tagliato di recente. Quando il metallo si e© carbonato R in acqua esente da anidride carbonica R e
disciolto, diluire a 1000,0 ml con toluene R. diluire a 1000,0 ml con lo stesso solvente.
Determinazione del titolo. A 10 ml di dimetilformam- Determinazione del titolo. A 10,0 ml di potassio bromato
mide R aggiungere 0,05 ml di una soluzione (3 g/l) di 0,033 M aggiungere 40 ml di acqua R, 10 ml di potassio

522
 Soluzioni titolate

inoizircserP
ioduro soluzione R e 5 ml di acido cloridrico R1. Titolare lazione. Dal volume di titolante usato nella seconda

ilareneG
con la soluzione di sodio tiosolfato, usando come indi- titolazione ricavare il titolo esatto della soluzione di
catore 1 ml di amido soluzione R, aggiunto verso la fine tetrabutilammonio idrossido. Determinare il titolo
della titolazione. immediatamente prima dell'uso.
Tetrabutilammonio idrossido 0,1 M . 3008300. 1 ml di tetrabutilammonio idrossido 0,1 M equivale a

isilanA id
Disciogliere 40 g di tetrabutilammonio ioduro R in 90 ml 12,21 mg di C7H6O2.

idoteM
di metanolo anidro R, aggiungere 20 g di argento Tetrabutilammonio idrossido 0,1 M in .
2-propanolo

ossido R finemente polverizzato ed agitare vigorosa- 3008400.

mente per 1 h. Centrifugare pochi millilitri della miscela Preparare come descritto per tetrabutilammonio
ed effettuare il saggio per gli ioduri sul liquido surna- idrossido 0,1 M usando 2-propanolo R invece del

irotinetnoC
/ ilairetaM
tante. Se si ottiene una reazione positiva, aggiungere toluene R e standardizzare come descritto.
altri 2 g di argento ossido R ed agitare per altri 30 min. . 3008500.
Ripetere questo procedimento finchë il liquido risulti Zinco cloruro 0,05 M

Disciogliere 6,82 g di zinco cloruro R, pesato con appro-

esente da ioduri, filtrare la miscela su un filtro di vetro priate precauzioni, in acqua R. Se necessario aggiun-
sinterizzato, lavare il recipiente di reazione con tre por- gere goccia a goccia acido cloridrico diluito R fino a
zioni di toluene R, da 50 ml ciascuna e filtrare. Aggiun-

ivittaeR
gere i lavaggi al filtrato e diluire a 1000,0 ml con scomparsa dell'opalescenza. Diluire a 1000,0 ml con
toluene R. Insufflare azoto secco esente da anidride car- acqua R.
bonica nella soluzione per 5 min. Determinazione il titolo. A 20,0 ml della soluzione di
Determinazione del titolo. A 10 ml di dimetilformam- zinco cloruro aggiungere 5 ml di acido acetico diluito R
ed effettuare la determinazione dello zinco mediante

itnemogrA
mide R aggiungere 0,05 ml di una soluzione (3 g/l) di

ilareneG
blu timolo in metanolo R e titolare con la soluzione di complessometria (2.5.11).
tetrabutilammonio idrossido fino al viraggio ad una Zinco solfato 0,1 M . 3008600.
netta colorazione blu. Immediatamente aggiungere Disciogliere 29 g di zinco solfato R in acqua R e diluire a
0,200 g di acido benzoico RV. Agitare fino a dissolu- 1000,0 ml con lo stesso solvente.

eifargonoM
zione e titolare con la soluzione di tetrabutilammonio Determinazione del titolo. A 20,0 ml della soluzione di

ilareneG
idrossido fino ad ottenere nuovamente il viraggio ad zinco solfato aggiungere 5 ml di acido acetico diluito R
una netta colorazione blu. Proteggere la soluzione dal- ed effettuare la determinazione dello zinco mediante
l'anidride carbonica atmosferica durante tutta la tito- complessometria (2.5.11).

ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI

523
 5. Argomenti generali

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
5.1. Argomenti generali sulla sterilita© . . 529 5.7. Tabella delle caratteristiche fisiche

idoteM
5.2. Argomenti generali sui vaccini . . . . 539 dei radionuclidi menzionati nella
5.4. Solventi residui . . . . . . . . . . . . . . . . 563 Farmacopea Europea . . . . . . . . . . . 597
5.5. Tabelle alcoolimetriche . . . . . . . . . . 577 5.8. Armonizzazione delle farmacopee . . 607
5.6. Dosaggio degli interferoni . . . . . . . . 591

irotinetnoC
/ ilairetaM
ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 5.1. Argomenti generali

inoizircserP

ilareneG
sulla sterilita©

isilanA id
idoteM
5.1. Argomenti generali sulla sterilita© . . 529 5.1.4. Requisiti microbiologici delle prepa-
5.1.1 Metodi di preparazione di prodotti razioni farmaceutiche . . . . . . . . . 535

irotinetnoC
/ ilairetaM
sterili . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 529 5.1.5. Applicazione del concetto F0 alla ste-
5.1.2. Indicatori biologici di sterilizzazione 532 rilizzazione mediante vapore delle
5.1.3. Efficacia della conservazione antimi- preparazioni acquose . . . . . . . . . . 536
crobica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 533

ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI
 Metodi di preparazione di prodotti sterili

inoizircserP
il processo e© in grado di eliminare o inattivare i contami-

ilareneG
5.1. ARGOMENTI GENERALI SULLA

STERILITAé nanti virali potenziali. Una guida in proposito e© fornita,

ad esempio, nelle appropriate European Community
5.1.1. METODI DI PREPARAZIONE DI PRO-
Notes for Guidance.
DOTTI STERILI

isilanA id
Dove possibile, si sceglie un processo in cui il prodotto

idoteM
Per sterilita© si intende l'assenza di microrganismi vivi. e© sterilizzato nel suo contenitore finale (sterilizzazione
La sterilita© di un prodotto non puo© essere garantita solo terminale). Quando viene usato un metodo completa-
dai saggi; essa deve essere assicurata dall'applicazione mente convalidato di sterilizzazione terminale
di un processo di produzione opportunamente convali- mediante vapore, calore secco o mediante radiazioni
dato. Eé di fondamentale importanza che l'effetto sul

irotinetnoC
ionizzanti, puo© essere consentito un rilascio parame-

/ ilairetaM
prodotto (compreso il suo contenitore o la sua confe- trico, cioe© il rilascio di un lotto di prodotti sterilizzati
zione) della procedura di sterilizzazione prescelta venga basato sui dati di processo piuttosto che sulla base di
sperimentato in modo da assicurarne l'efficacia ed il un saggio di sterilita© su un campione, previa approva-
mantenimento dell'integrita© del prodotto stesso e che zione dell'autorita© competente.
la procedura sia convalidata prima di essere messa in

ivittaeR
pratica. Si raccomanda di scegliere un contenitore che Se non e© possibile effettuare la sterilizzazione termi-
sia compatibile con l'impiego del metodo ottimale di nale, e© usato un processo di filtrazione attraverso un fil-
sterilizzazione. L'incapacita© di seguire scrupolosamente tro che trattiene i batteri o un trattamento asettico;
un processo convalidato di sterilizzazione aumenta il quando possibile si effettua un appropriato addizionale
rischio di ottenere un prodotto non sterile o un pro- trattamento del prodotto (ad esempio il riscaldamento)

itnemogrA
ilareneG
dotto deteriorato. La riconvalida e© effettuata tutte le nel suo contenitore finale. In ogni caso si richiedono
volte in cui si effettuano cambiamenti sostanziali nella un contenitore e una chiusura in grado di mantenere la
procedura di sterilizzazione, comprese le modifiche di sterilita© del prodotto durante tutta la sua durata di con-
carico del materiale da sterilizzare. Eé necessario che servazione.
vengano osservati i principi delle buone pratiche di fab-

eifargonoM
bricazione (come descritti, ad esempio, nella linea

ilareneG
guida della Comunita© Europea alle GMP) nella messa LIVELLO DI ASSICURAZIONE DI STERILITAé
a punto del processo di sterilizzazione, includendo, in (LAS)
particolare, l'uso di:
^ personale qualificato con addestramento specifico,

ehcituecamraF
Dove appropriato, nell'ambito dei metodi di seguito
^ locali adeguati, descritti, si fa riferimento al ``livello di assicurazione di

emroF
^ attrezzature di produzione appropriate, facili da sterilita© '' o ``LAS''. L'assicurazione di sterilita© all'in-
pulire e da sterilizzare, terno di ciascuna unita© compresa in un complesso di
^ precauzioni adeguate per minimizzare il rischio di elementi soggetti ad un processo di sterilizzazione non
sovraccarico microbico prima della sterilizzazione, puo© essere garantita në dimostrata. L'inattivazione di
microrganismi mediante mezzi fisici o chimici segue
eiretaM

emirP
^ procedure convalidate per tutte le fasi di produ- una legge esponenziale; pertanto sussiste sempre una
zione critiche, probabilita© statistica quantunque piccola che un
^ monitoraggio ambientale e controlli in corso di microrganismo possa sopravvivere al processo di steri-
produzione. lizzazione. Per un dato processo, la probabilita© di
ehcituecamraF
inoizaraperP

Le precauzioni necessarie per minimizzare il carico sopravvivenza viene determinata dal numero, il tipo e
ehcificepS

microbico di pre-sterilizzazione includono l'uso di com- la resistenza dei microrganismi presenti e dall'ambiente
ponenti con un livello accettabilmente basso di conta- in cui essi vivono durante il trattamento. Il livello di
minazione microbica. Eé consigliabile stabilire un con- assicurazione di sterilita© di un processo sterilizzante e©
trollo microbiologico e la definizione di limiti d'uso il grado di sicurezza con il quale il processo in questione
ehcitapoemO
inoizaraperP

appropriati per gli ingredienti che sono passibili di con- rende sterili un complesso di elementi. Il LAS di un
taminazione per la loro origine, natura o metodo di dato processo viene espresso come probabilita© di persi-
preparazione. stenza di un elemento non sterile in questo complesso.
I metodi qui descritti si applicano principalmente all'inat- Un LAS di 10-6, ad esempio, indica una probabilita© di
tivazione o alla rimozione di batteri, lieviti e muffe. Per i non piu© di un microrganismo vivo in 1 10 unita© steri-
2
6
prodotti biologici di origine animale o umana o nei casi lizzate del prodotto finale. Il LAS di un processo per
ecidnI

in cui tale materiale e© stato usato nel processo di produ- un dato prodotto viene stabilito da appropriati studi di
zione, e© necessario dimostrare, durante la convalida, che convalida.

529
Metodi di preparazione di prodotti sterili

METODI E CONDIZIONI DI STERILIZZAZIONE Si devono conoscere i parametri fisici (pressione e

La sterilizzazione puo© essere effettuata con uno dei temperatura) raggiunti dentro l'autoclave durante il
metodi descritti di seguito. Possono essere usate modifi- processo di sterilizzazione. La temperatura viene di
che o combinazioni di questi metodi purchë la proce- solito misurata per mezzo di termosensori inseriti nei
dura prescelta venga convalidata, sia rispetto alla sua contenitori insieme ad altri elementi posizionati nella
efficacia, sia rispetto all'integrita© del prodotto, com- parte meno calda, precedentemente stabilita, della
preso il suo contenitore o la sua confezione. camera di carico. I parametri di ogni ciclo vengono
opportunamente registrati, ad esempio, attraverso il
Per tutti i metodi di sterilizzazione, i parametri critici grafico temperatura/tempo o attraverso qualsiasi altro
del processo sono controllati in modo tale da confer- mezzo idoneo.
mare che le condizioni richieste, precedentemente
determinate, si raggiungano nel lotto durante l'intero Quando viene effettuata una valutazione biologica,
processo di sterilizzazione. Questo si applica in tutti i questa si ottiene usando un indicatore biologico appro-
casi, inclusi quelli in cui vengono usate condizioni di priato (5.1.2).
riferimento. Sterilizzazione mediante calore secco. Per questo
metodo di sterilizzazione terminale le condizioni di rife-
STERILIZZAZIONE TERMINALE rimento sono un minimo di 160 ‘C per almeno 2 h. Pos-
Per la sterilizzazione terminale e© di fondamentale sono essere usate altre combinazioni di tempo e di tem-
importanza considerare la non uniformita© delle condi- peratura purchë sia stato dimostrato in maniera soddi-
zioni fisiche e, ove rilevante, di quelle chimiche all'in- sfacente che il procedimento scelto dia un livello di
terno della camera di sterilizzazione. Il luogo all'in- letalita© adeguato e riproducibile quando viene praticato
terno della camera di sterilizzazione che e© meno acces- di routine entro le soglie stabilite di tolleranza. Le pro-
sibile all'agente sterilizzante (per esempio, il luogo cedure e le precauzioni impiegate sono tali da conferire
meno caldo nell'autoclave) viene determinato in base a un LAS di 10-6 o migliore.
ciascuna configurazione di carico e di ogni tipo e La sterilizzazione al calore secco si effettua in stufe a
dimensione del contenitore o della confezione. Si deter- ventilazione forzata di aria o in altre simili apparec-
mina anche il grado minimo di letalita© prodotto da un chiature progettate per questo scopo. L'apparato steri-
ciclo di sterilizzazione e la riproducibilita© del ciclo per lizzante viene caricato in modo tale che sia raggiunta
assicurare che tutti i carichi ricevano il trattamento spe- una temperatura uniforme in tutto il carico. La tempe-
cificato. ratura raggiunta all'interno dello sterilizzatore durante
Avendo stabilito un processo di sterilizzazione termi- il processo di sterilizzazione viene misurata di solito
nale, la conoscenza della sua resa nell'uso di routine mediante termosensori inseriti in contenitori rappre-
viene acquisita, ove possibile, con il controllo e la regi- sentativi insieme ad altri elementi nella parte meno
strazione adeguata delle condizioni fisiche e, ove rile- calda, precedentemente stabilita, dello sterilizzatore.
vante, delle condizioni chimiche raggiunte all'interno Per tutta la durata di ogni ciclo viene registrata appro-
del carico, nella camera di sterilizzazione, durante ogni priatamente la temperatura.
ciclo di sterilizzazione. Quando viene effettuata una valutazione biologica,
Sterilizzazione mediante vapore (riscaldamento in auto- questa si ottiene usando un indicatore biologico appro-
clave). Si preferisce la sterilizzazione mediante vapore priato (5.1.2).
saturo sotto pressione, ove applicabile, specialmente Il calore secco a temperatura superiore a 220 ‘C viene
per le preparazioni acquose. Le condizioni di riferi- usato spesso per la sterilizzazione e la depirogenazione
mento per le preparazioni acquose in questo metodo di della vetreria. In questo caso, l'indicatore biologico
sterilizzazione terminale sono il riscaldamento ad una (5.1.2) puo© essere sostituito dalla dimostrazione di una
temperatura minima di 121 ‘C per 15 min. Si possono riduzione di 3 log della quantita© di endotossine termo-
adottare altre combinazioni di tempo e di temperatura resistenti.
purchë sia stato dimostrato in maniera soddisfacente
che il procedimento scelto dia un livello di letalita© ade- Sterilizzazione mediante radiazioni ionizzanti. La steri-
guato e riproducibile nelle operazioni di routine entro lizzazione con questo metodo viene effettuata mediante
le soglie stabilite di tolleranza. Le procedure e le pre- esposizione del prodotto a radiazioni ionizzanti in
cauzioni impiegate sono tali da conferire un LAS di forma di radiazione gamma emanata da una appro-
10-6 o migliore. Le direttive concernenti la convalida priata sorgente radioisotopica (come il cobalto 60) o
sulla base del concetto F0 vengono fornite di seguito da un fascio di elettroni energizzati da un appropriato
(5.1.5). acceleratore elettronico.

530
 Metodi di preparazione di prodotti sterili

inoizircserP
In alcuni Paesi esistono norme che regolano l'uso di radia- toposti ad una procedura di filtrazione attraverso un fil-

ilareneG
zioni ionizzanti ai fini della sterilizzazione, come ad tro la cui efficacia sia stata dimostrata mediante un sag-
esempio le European Community Notes for Guidance. gio di infezione microbica di prova effettuato con un
Per questo metodo di sterilizzazione terminale la dose idoneo microrganismo da saggio. Una sospensione di
di riferimento (dose assorbita) e© di 25 kGy. Possono Pseudomonas diminuta (ATCC 19146, NCIMB 11091 o
CIP 103020)7 puo© essere idonea. Si raccomanda di usare

isilanA id
essere usate altre dosi purchë sia stato dimostrato in

idoteM
maniera soddisfacente che la dose scelta permetta di almeno 10 UFC per cm2 di superficie filtrante attiva,
ottenere un livello di letalita© adeguato e riproducibile di preparare la sospensione in brodo di soia-triptone e,
quando il processo e© applicato di routine, entro le soglie dopo passaggio attraverso il filtro, di raccoglierla aset-
stabilite di tolleranza. Le procedure e le precauzioni ticamente ed incubarla in condizioni aerobiche a

irotinetnoC
32 ‘C. Questi prodotti necessitano di speciali precau-

/ ilairetaM
impiegate devono essere tali da garantire un LAS
di 10-6 o migliore. zioni. Il processo di produzione e l'ambiente sono scelti
Durante il processo di sterilizzazione la radiazione in modo da minimizzare la contaminazione microbica
assorbita dal prodotto viene regolarmente controllata e sono regolarmente soggetti a procedure idonee di con-
mediante procedure dosimetriche definite che permet- trollo. L'attrezzatura, i contenitori e le chiusure e, ove
tono una misura reale della dose ricevuta dal prodotto, possibile, gli ingredienti vanno sottoposti ad un appro-

ivittaeR
indipendentemente dal tasso di radiazione impartita. I priato processo di sterilizzazione. Si raccomanda di
dosimetri sono tarati rispetto ad una sorgente standard effettuare la filtrazione il piu© presto possibile dopo il
di un impianto di irraggiamento di riferimento, sia al riempimento. Le operazioni successive alla filtrazione
momento in cui si ricevono dal fornitore, sia ad inter- sono effettuate in condizioni asettiche.
Le soluzioni vengono filtrate attraverso membrane che

itnemogrA
valli appropriati non piu© lunghi di un anno.

ilareneG
Se viene effettuata una valutazione biologica, questa si trattengono i batteri aventi pori con un diametro nomi-
ottiene usando un indicatore biologico appropriato nale di 0,22 mm o inferiore, o attraverso qualsiasi altro
(5.1.2). filtro avente le stesse proprieta© di trattenere i batteri.
Si prendono misure appropriate per evitare perdite di
Questo metodo di steriliz- soluto per assorbimento sul filtro e per evitare il rilascio

eifargonoM
Sterilizzazione mediante gas.

ilareneG
zazione e© usato solo se non ci sono alternative appro- di contaminanti da quest'ultimo. Eé necessario tener
priate. Eé di fondamentale importanza che venga assicu- conto della contaminazione microbica prima della fil-
rata la penetrazione del gas e dell'umidita© nel materiale trazione, della capacita© del filtro, della dimensione del
da sterilizzare e che sia seguita da un processo di elimi- lotto e della durata della filtrazione. Il filtro non deve
nazione del gas in condizioni che sono state precedente-

ehcituecamraF
essere usato per periodi piu© lunghi di quelli approvati
mente stabilite per assicurare che ogni residuo di gas o in seguito a convalida combinata del filtro stesso e del

emroF
i suoi prodotti di trasformazione nel prodotto steriliz- prodotto da filtrare.
zato siano al di sotto della concentrazione potenzial- L'integrita© di un filtro sterilizzante assemblato viene
mente tossica durante l'uso nel prodotto. Le norme verificata prima dell'uso e confermata dopo l'uso per
circa questo aspetto e relative all'uso dell'ossido di eti- mezzo di saggi appropriati al tipo di filtro usato ed allo
lene vengono fornite, per esempio, nelle appropriate
eiretaM
stadio del saggio in cui si effettua la verifica quali, ad

emirP
European Community Notes for Guidance. esempio, il punto di gorgogliamento, la tenuta della
Ove possibile, la concentrazione del gas, l'umidita© rela- pressione o i saggi sul tasso di diffusione.
tiva, la temperatura e la durata del processo vengono A causa di altri potenziali inconvenienti dovuti al
misurate e registrate. Le misurazioni vengono fatte
ehcituecamraF

metodo della filtrazione in confronto con altri processi

inoizaraperP

dove sia meno probabile che si raggiungano le condi-

ehcificepS

zioni di sterilizzazione, come determinato al momento di sterilizzazione, e© consigliabile effettuare una prefil-
della convalida. trazione attraverso un filtro che trattiene i batteri, nel
caso in cui non si possa garantire con altri processi un
L'efficacia del processo applicato ad ogni carico di ste- basso biocarico.
rilizzazione viene verificata usando un indicatore biolo-
ehcitapoemO
inoizaraperP

gico appropriato (5.1.2). PREPARAZIONE ASETTICA

Un campione appropriato di ogni lotto e© saggiato per la L'obiettivo di un processo in asepsi e© quello di mante-
sterilita© (2.6.1) prima che il lotto venga rilasciato. nere la sterilita© di un prodotto che e© costituito da diversi
FILTRAZIONE componenti, ciascuno dei quali e© stato sterilizzato con
uno dei metodi precedentemente descritti. Cio© viene
ecidnI

Certi principi attivi e certi prodotti che non possono ottenuto usando condizioni ed attrezzature destinate a
essere sterilizzati in modo terminale possono essere sot- prevenire la contaminazione microbica. Il processo

531
Indicatori biologici di sterilizzazione

asettico puo© comprendere il riempimento in asepsi di Un indicatore biologico e© caratterizzato dal nome della
prodotti in sistemi contenitori a chiusura, la miscela- specie del batterio usato come microrganismo di riferi-
zione in asepsi dei componenti di formulazioni ed mento, dal numero del ceppo della collezione originale,
il loro successivo riempimento in asepsi e confezione dal numero di spore vive per supporto e dal valore D.
in asepsi. Il valore D e© il valore di un parametro di sterilizzazione
Inoltre per mantenere la sterilita© dei componenti e del (tempo o dose assorbita) richiesto per ridurre il numero
prodotto durante il processo di fabbricazione, e© neces- di organismi vivi al dieci per cento del numero origi-
sario controllare attentamente: nale. Il valore D e© significativo solo in condizioni speri-
^ l'ambiente, mentali definite precisamente. Solo i microrganismi
dichiarati sono presenti. Possono essere usati indicatori
^ il personale, biologici costituiti da piu© di una specie di batteri sullo
^ le superfici critiche, stesso supporto. Vengono fornite informazioni sul ter-
^ la sterilizzazione del contenitore e della chiusura, e reno di cultura e sulle condizioni di incubazione.
le operazioni di trasferimento, Si raccomanda che gli organismi indicatori vengano
^ il periodo di conservazione massimo del prodotto posti in punti considerati meno accessibili all'agente
prima del riempimento nel contenitore finale. sterilizzante, ove possibile, individuati in precedenza
come tali mediante misure fisiche adeguate. Dopo l'e-
La convalida del processo include controlli appropriati sposizione all'agente sterilizzante, viene usata una tec-
su tutto quanto sopra indicato e controlli sul processo nica asettica per trasferire i supporti delle spore nei ter-
stesso sono regolarmente effettuati attraverso saggi di reni di coltura, in modo tale che non si verifichi alcuna
simulazione che usano terreni di coltura per microrga- contaminazione al momento dell'esame. Possono essere
nismi che vengono poi incubati ed esaminati per evi- usati indicatori biologici che includono una fiala del
denziare la contaminazione (saggi su terreni di coltura terreno di coltura introdotto direttamente nella confe-
inoculati). Inoltre, un campione appropriato di ogni zione che protegge il supporto inoculato.
lotto di prodotto sterilizzato mediante filtrazione e/o Un organismo indicatore viene scelto in base ai
mediante un processo in asepsi e© saggiato per la sterilita© seguenti criteri:
(2.6.1) prima che il lotto sia rilasciato.
(a) la resistenza del ceppo considerato al particolare
metodo di sterilizzazione deve essere elevata
rispetto alla resistenza di tutti i microrganismi
5.1.2. INDICATORI BIOLOGICI DI STERILIZ-
patogeni e a quella dei microrganismi che poten-
ZAZIONE
zialmente contaminano il prodotto,
Gli indicatori biologici sono preparazioni standardiz- (b) il ceppo considerato non deve essere patogeno,
zate di microrganismi selezionati usati per valutare l'ef- (c) il ceppo considerato deve essere facile da coltivare.
ficacia di una procedura di sterilizzazione. Sono costi- Dopo l'incubazione, la crescita del microrganismo di
tuiti di solito da una popolazione di spore batteriche riferimento sottoposto alla procedura di sterilizzazione
su un supporto inerte, ad esempio, una striscia di carta dimostra che questa procedura non e© soddisfacente.
da filtro, un vetrino o una provetta di plastica. Il sup-
porto inoculato e© coperto in modo tale da essere pro-
tetto da qualsiasi deterioramento o contaminazione, Sterilizzazione mediante vapore . Si raccomanda l'uso di
permettendo allo stesso tempo all'agente sterilizzante indicatori biologici nella sterilizzazione mediante
di entrare in contatto con i microrganismi. Le sospen- vapore per la convalida dei cicli di sterilizzazione.
sioni di spore possono essere anche contenute in fiale Allo scopo si raccomandano spore di Bacillus stearo-
sigillate. Gli indicatori biologici sono preparati in thermophilus (per esempio, ATCC 7953, NCTC 10007,
NCIMB 8157 o CIP 52.81). Il numero di
modo tale che possono essere conservati in condizioni spore vive e© superiore a 5 105 per supporto. Il va-
ben definite; viene anche stabilita una data di scadenza.
2

lore D a 121 ‘C e© superiore a 1,5 min. Deve essere verifi-

Microrganismi della stessa specie batterica di quella dei cato che l'esposizione degli indicatori biologici al
batteri usati per la produzione degli indicatori biologici vapore a 121 1 ‘C per 6 min lasci spore rivitalizzabili
6

possono essere inoculati direttamente in un prodotto e che non vi sia crescita dei microrganismi di riferi-
liquido da sterilizzare o in un prodotto liquido simile a mento dopo che gli indicatori biologici sono stati espo-
quello da sterilizzare. In questo caso, si deve dimostrare sti al vapore a 121 1 ‘C per 15 min.
6

che il prodotto liquido non abbia alcun effetto inibito- Sterilizzazione mediante calore secco . Si raccomanda
rio sulle spore usate, specialmente per quanto riguarda l'uso di spore di Bacillus subtilis (per esempio, var. niger
la loro germinazione. ATCC 9372, NCIMB 8058 o CIP 77.18) per la prepara-

532
 Efficacia della conservazione antimicrobica

inoizircserP
zione degli indicatori biologici. Il numero di spore vive

ilareneG
5.1.3. EFFICACIA DELLA CONSERVAZIONE

e© superiore a 1 105 per supporto e il valore D a 160 ‘C

2 ANTIMICROBICA

e© approssimativamente di 5-10 min. Il calore secco a

temperature superiori a 220 ‘C viene usato frequente- Se una preparazione farmaceutica non ha come tale
mente per la sterilizzazione e la depirogenazione della una adeguata attivita© antimicrobica, ad essa, ed in par-
ticolare se si tratta di preparazioni acquose, possono

isilanA id
vetreria. In questo caso, la dimostrazione di una ridu-

idoteM
zione di 3 log della quantita© di endotossine batteriche essere aggiunti dei conservanti antimicrobici per preve-
termoresistenti puo© essere usata in sostituzione degli nire la proliferazione o limitare la contaminazione
indicatori biologici. microbica che, durante le normali condizioni di conser-
vazione e di uso, specie per i contenitori multidose,
puo© verificarsi in un prodotto e rappresentare un

irotinetnoC
/ ilairetaM
Sterilizzazione mediante radiazione ionizzante. Gli indi- rischio di infezione per il paziente e di alterazione per
catori biologici possono essere usati per controllare le la preparazione. I conservanti antimicrobici non
operazioni di routine, come un'ulteriore possibilita© di devono essere usati in sostituzione delle pratiche di
valutare l'efficacia di una dose stabilita di energia buona fabbricazione.
radiante, specialmente nel caso della sterilizzazione L'efficacia di un conservante antimicrobico puo© essere
ottenuta con elettroni accelerati. Si raccomanda l'uso

ivittaeR
di Bacillus pumilus (per esempio: ATCC 27.142, NCTC aumentata o diminuita dal costituente attivo della pre-
10327, NCIMB 10692 o CIP777.25). Il numero di spore parazione o dalla formulazione nella quale e© incorpo-
rato o dal contenitore e dal sistema di chiusura utiliz-
vive supera il valore di 1 10 per supporto. Il valore D
2
zato. L'attivita© antimicrobica della preparazione nel
supera 1,9 kGy. Deve essere verificato che non vi sia suo contenitore finale viene determinata per il periodo

itnemogrA
ilareneG
alcuna crescita dei microrganismi di riferimento dopo di validita© , per assicurare che tale attivita© non sia modi-
che gli indicatori biologici sono stati esposti a 25 kGy ficata durante la conservazione. Questa valutazione
(dose assorbita minima). puo© essere effettuata su campioni prelevati dal conteni-
tore finale immediatamente prima del saggio.
L'uso degli indicatori bio-

eifargonoM
Durante la fase di sviluppo di una preparazione farma-

ilareneG
Sterilizzazione mediante gas.

logici e© necessario per tutte le procedure di sterilizza- ceutica, si deve dimostrare che l'attivita© antimicrobica
zione mediante gas, sia per la convalida dei cicli di steri- della preparazione come tale o, se necessario, con l'ag-
lizzazione sia per le operazioni di routine. Il numero di giunta di uno o piu© conservanti fornisce una protezione
spore vive e© superiore a 5 105 per supporto. Si racco- appropriata dagli effetti nocivi che possono derivare

ehcituecamraF
2

manda l'uso di spore di Bacillus stearothermophilus dalla contaminazione o dalla proliferazione microbica
(per esempio ATCC 7953, NCTC 10007, NCIMB 8157 durante la conservazione e l'uso della preparazione.

emroF
o CIP 52.81) per la sterilizzazione con acqua ossigenata L'efficacia dell'attivita© antimicrobica puo© essere dimo-
e acido peracetico, di spore di Bacillus subtilis (per strata mediante il saggio descritto di seguito. Il saggio
esempio var. niger ATCC 9372, NCIMB 8058 o CIP non e© destinato ad essere usato come controllo di rou-
77.18) per l'ossido di etilene e la formaldeide. I parame- tine.

eiretaM
tri di resistenza per le procedure usate sono noti: per

emirP
esempio, per l'ossido di etilene il valore D e© superiore
a 2,5 min per un saggio che impiega 600 mg/l di ossido SAGGIO PER L'EFFICACIA DELLA CONSERVAZIONE
di etilene, a 54 ‘C e al 60 per cento di umidita© relativa. ANTIMICROBICA ehcituecamraF

Deve essere verificato che non vi sia alcuna crescita dei Il saggio consiste nel contaminare artificialmente la
inoizaraperP

ehcificepS

microrganismi di riferimento dopo che gli indicatori preparazione, se possibile nel suo contenitore finale,
biologici sono stati esposti al saggio sopra descritto con un inoculo prescritto di un appropriato microrgani-
per 60 min e che esponendo gli indicatori ad un ciclo a smo, nel conservare la preparazione inoculata alla tem-
temperatura ridotta (600 mg/l a 30 ‘C e il 60 per cento peratura prescritta, nel prelevare campioni dal conteni-
ehcitapoemO
inoizaraperP

di umidita© relativa) per 15 min le spore risultino rivita- tore ad intervalli di tempo specificati e nella conta dei
lizzabili. Eé di fondamentale importanza che l'indicatore microrganismi nei campioni prelevati.
biologico sia in grado di rivelare un'umidificazione Le proprieta© conservanti della preparazione sono
insufficiente, nello sterilizzatore e nel prodotto, per appropriate se, nelle condizioni del saggio, si verifica
assicurare che i microrganismi disidratati vengano inat- una significativa diminuzione o un mancato aumento a
tivati. L'esposizione degli indicatori a 600 mg/l di seconda del caso, del numero di microrganismi nella
ossido di etilene a 54 ‘C per 60 min senza umidifica-
ecidnI

preparazione inoculata nei tempi ed alla temperatura

zione deve lasciare spore rivitalizzabili. indicati. I criteri di accettazione, in termini di diminu-

533
Efficacia della conservazione antimicrobica

zione del numero di microrganismi nel tempo, variano METODO

per i differenti tipi di preparazione secondo il grado di Per contare i microrganismi vivi nei prodotti inoculati,
protezione previsto (vedi Tabelle 5.1.3.-1/2/3). usare il terreno agarizzato impiegato per la coltura ini-
Microrganismi per il saggio ziale del microrganismo corrispondente.
Inoculare una serie di recipienti del prodotto da esami-
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027; NCIMB 8626; nare, ciascuno con una sospensione di uno dei micror-
CIP 82.118. ganismi in esame in modo da ottenere un inoculo di
Staphylococcus aureus ATCC 6538; NCTC 10788; 105-106 microrganismi per millilitro o per grammo di
NCIMB 9518; CIP 4.83. preparazione. Il volume della sospensione dell'inoculo
Candida albicans ATCC 10231; NCPF 3179; non deve essere superiore all'1 per cento del volume
IP 48.72. del prodotto. Mescolare accuratamente per assicurare
Aspergillus niger ATCC 16404; IMI 149007; una distribuzione omogenea.
IP 1431.83. Mantenere il prodotto inoculato a 20-25 ‘C, protetto
dalla luce. Prelevare un campione appropriato da cia-
Per il saggio vengono usati ceppi singoli. In aggiunta ai scun recipiente, generalmente 1 millilitro o 1 grammo
microrganismi elencati possono essere saggiati altri al tempo zero e ad appropriati intervalli di tempo a
ceppi o specie che possono rappresentare probabili con- seconda del tipo di prodotto e determinare il numero
taminanti della preparazione. Si raccomanda, per di microrganismi vivi mediante conta su piastra o filtra-
esempio, di usare Escherichia coli (ATCC 8739; zione su membrana (2.6.12). Assicurarsi che qualsiasi
NCIMB 8545; CIP 53.126) solo per le preparazioni attivita© antimicrobica residua del prodotto sia elimi-
orali e Zygosaccharomyces rouxii (NCYC 381; IP nata mediante diluizione, filtrazione o mediante l'uso
2021.92) per le preparazioni orali contenenti una con- di un agente neutralizzante specifico. Quando si usano
centrazione elevata di zucchero. procedure di diluizione occorre tener conto della
Preparazione dell'inoculo. Prima del saggio, seminare in ridotta sensibilita© nel mettere in evidenza piccole quan-
superficie il terreno agarizzato B (2.6.12) per i batteri o tita© di microrganismi vivi. Quando si usa un agente
il terreno agarizzato C senza l'aggiunta di antibiotici inattivante specifico, la capacita© del sistema di promuo-
(2.6.12) per i funghi, con colture madri, preparate di vere la crescita del microrganismo in esame deve essere
recente, di ciascuno dei microrganismi specificati. Incu- confermata mediante controlli appropriati.
bare le colture batteriche a 30-35 ‘C per 18-24 h, la col- La procedura deve essere convalidata per verificare la
tura di C. albicans a 20-25 ‘C per 48 h e la coltura di sua capacita© di dimostrare la riduzione richiesta nella
A. niger a 20-25 ‘C per una settimana o fino a che si conta dei microrganismi vivi.
ottiene una buona sporulazione. Puo© essere necessario
allestire delle sottocolture dopo rivitalizzazione prima CRITERI DI ACCETTAZIONE
che il microrganismo raggiunga il suo stato ottimale,
ma si raccomanda di mantenere al minimo il numero I criteri per la valutazione dell'attivita© antimicrobica
di passaggi. sono riportati nelle tabelle 5.1.3.-1/2/3 in termini di
Per raccogliere, sospendere e trasferire in un conteni- log della riduzione del numero di microrganismi vivi
tore appropriato le colture batteriche e di C. albicans, rispetto al valore ottenuto per l'inoculo.
usare un mezzo liquido sterile, contenente 9 g/l di sodio
cloruro e 1 g/l di peptone. Aggiungere abbastanza Tabella 5.1.3.-1.- Preparazioni parenterali ed oftalmiche
liquido di8 sospensione da ridurre la conta microbica a
circa 10 microrganismi per millilitro. Per raccogliere Riduzione logaritmica

la coltura di A. niger usare un mezzo liquido sterile con-

tenente 9 g/l di sodio cloruro R e 0,5 g/l di polisorbato 6 h 24 h 7 d 14 d 28 d

80 R ed aggiustare la conta delle spore a circa 108 per Batteri A 2 3 ö ö NR*

millilitro aggiungendo la stessa soluzione. B ö 1 3 ö NI**
Prelevare immediatamente un campione appropriato Funghi A ö ö 2 ö NI
da ciascuna sospensione e determinare il numero di B ö ö ö 1 NI
unita© formanti colonia per millilitro in ciascuna sospen- * NR: nessun recupero
sione mediante conta su piastra o filtrazione su mem- ** NI: nessun incremento
brana (2.6.12). Questo valore serve per determinare l'i-
noculo e la linea di base da usare nel saggio. Le sospen- I criteri A rappresentano l'efficacia raccomandata che
sioni devono essere usate immediatamente. si deve conseguire. In casi giustificati in cui i criteri A

534
 Requisiti microbiologici delle preparazioni farmaceutiche

inoizircserP
non possono essere rispettati, per esempio a causa di un

ilareneG
Categoria 2

aumento del rischio di reazioni indesiderate, devono Preparazioni per uso topico e per uso nel tratto respirato-
essere soddisfatti i criteri B. rio eccetto quelle obbligatoriamente sterili ed i cerotti
transdermici.
Tabella 5.1.3.-2.- Preparazioni per uso topico

isilanA id
idoteM
^ Conta totale dei microrganismi aerobi vivi (2.6.12).
Riduzione logaritmica
Non piu© di 102 microrganismi (batteri aerobi e fun-
ghi) per grammo o per millilitro o per cerotto
2 d 7 d 14 d 28 d
(incluso lo strato adesivo ed il supporto).
^ Cerotti transdermici: assenza di enterobatteri e di

irotinetnoC
/ ilairetaM
Batteri A 2 3 ö NI
B ö ö 3 NI altri batteri gram-negativi determinati su un
cerotto (incluso lo strato adesivo 1ed il supporto).
Funghi A ö ö 2 NI Altre preparazioni: non piu© di 10 enterobatteri e
B ö ö 1 NI di altri batteri gram-negativi per grammo o per
millilitro (2.6.13).

ivittaeR
^ Assenza di Pseudomonas aeruginosa determinata
I criteri A rappresentano l'efficacia raccomandata che su l g, l ml o su un cerotto (incluso lo strato adesivo
si deve conseguire. In casi giustificati in cui i criteri A ed il supporto) (2.6.13).
non possono essere rispettati, per esempio a causa di ^ Assenza di Staphylococcus aureus determinata su
un aumento del rischio di reazioni indesiderate, devono l g, l ml o su un cerotto (incluso lo strato adesivo

itnemogrA
essere soddisfatti i criteri B.

ilareneG
ed il supporto) (2.6.13).
Tabella 5.1.3.-3.- Preparazioni per uso orale Categoria 3

A. Preparazioni per somministrazione orale o rettale

eifargonoM
Riduzione logaritmica

ilareneG
^ Conta totale dei microrganismi aerobi vivi (2.6.12).
14 d 28 d
Non piu© di 103 batteri aerobi e non piu© di 102 funghi
Batteri 3 NI per grammo o per millilitro.
^ Assenza di Escherichia coli (1 g o l ml) (2.6.13).

ehcituecamraF
Funghi 1 NI
B. Preparazioni per somministrazione orale contenenti

emroF
I criteri sopra riportati rappresentano l'efficacia racco- materiali grezzi di origine naturale (animale, vege-
mandata che si deve conseguire. tale o minerale) per le quali non e© possibile un pre-
trattamento antimicrobico e per le quali l `autorita©
competente ammette una contaminazione microbica
del materiale grezzo superiore a 103 microrganismi
eiretaM

emirP
5.1.4. REQUISITI MICROBIOLOGICI DELLE

PREPARAZIONI FARMACEUTICHE vivi per grammo o per millilitro. Sono esclusi i medi-
Questo capitolo e© pubblicato solo come informazione.
cinali a base di piante descritti nella categoria 4.
Nella produzione, confezionamento, conservazione e ^ Conta totale dei microrganismi aerobi vivi (2.6.12).
ehcituecamraF

Non piu© di 104 batteri e non piu© di 102 funghi per

inoizaraperP

ehcificepS

distribuzione delle preparazioni farmaceutiche, si grammo o per millilitro.

devono prendere opportuni provvedimenti per assicu-
rare la loro qualita© microbiologica. Le preparazioni ^ Non piu© di 102 enterobatteri e altri batteri gram-
farmaceutiche devono soddisfare ai criteri di seguito negativi per grammo o per millilitro (2.6.13).
riportati. ^ Assenza di Salmonella (10 g o 10 ml) (2.6.13).
ehcitapoemO
inoizaraperP

^ Assenza di Escherichia coli (1 g o l ml) (2.6.13).

Categoria 1 ^ Assenza di Staphylococcus aureus (1 g o 1 ml)
Preparazioni obbligatoriamente sterili come richiesto (2.6.13).
dalla pertinente monografia sulla forma farmaceutica ed
altre preparazioni dichiarate sterili. Categoria 4
ecidnI

Medicinali a base di piante costituiti esclusivamente da

^ Sterilita© (2.6.1). una o piu© droghe vegetali (intere, ridotte o polverizzate).

535
Applicazione del concetto F0 alla sterilizzazione mediante vapore delle preparazioni acquose

A. Medicinali a base di piante ai quali viene aggiunta controllo microbiologico continuo e rigoroso durante
acqua bollente prima dell `uso: la produzione di routine per dimostrare che i parametri
^ Conta totale dei microrganismi aerobi vivi (2.6.12). microbiologici sono compresi nei livelli di tolleranza
Non piu© di 107 batteri e non piu© di 105 funghi per definiti in modo da dare un LAS (Livello di Assicura-
grammo o per millilitro. zione di Sterilita© ) di 10 o superiore.
-6

^ Non piu© di 102 Escherichia coli per grammo o per Nell'ambito della sterilizzazione mediante vapore, il
millilitro (2.6.13, usando diluizioni appropriate). valore Z rappresenta la resistenza al calore di un
microrganismo in relazione ai cambiamenti di tempera-
B. Medicinali a base di piante ai quali non viene tura. Il valore Z e© il cambiamento di temperatura
aggiunta acqua bollente prima dell'uso: richiesto per alterare il valore D di un fattore 10.
^ Conta totale dei microrganismi aerobi vivi (2.6.12). Il valore D (o valore di riduzione decimale) e© il valore di
Non piu© di 105 batteri e non piu© di 104 funghi per un parametro di sterilizzazione (durata o dose assor-
grammo o per mullilitro. bita) richiesto per ridurre il numero di microrganismi
^ Non piu© di 103 enterobatteri e certi batteri gram- vivi al 10 per cento del numero originale. Esso ha signi-
negativi per grammo o per millilitro (2.6.13). ficato soltanto in condizioni sperimentali definite in
^ Assenza di Escherichia coli (1 g o 1 ml) (2.6.13). modo preciso.
^ Assenza di Salmonella (10 g o 10 ml) (2.6.13). Applicare le seguenti relazioni matematiche:
F0 = D121(logN0 - logN) =D121logIF
5.1.5. APPLICAZIONE DEL CONCETTO F 0 ALLA
D121 = valore D delle spore di riferimento (5.1.2)
a 121 ‘C,
STERILIZZAZIONE MEDIANTE VAPORE

DELLE PREPARAZIONI ACQUOSE

Questo paragrafo e© pubblicato a titolo di informazione. N0 = numero iniziale di microrganismi vivi,

Il valore F0 del processo di sterilizzazione mediante N = numero finale di microrganismi vivi,
vapore saturo esprime la letalita© , in termini di tempo IF = fattore di inattivazione.
(in minuti) ad una temperatura di 121 ‘C, conseguita Z logDT2 TlogD
ÿ 1
con il processo sul prodotto nel suo contenitore finale ˆ
1 2
con riferimento a microrganismi che hanno un valore
ÿ

Z di 10. D1 = valore D del microrganismo alla temperatura

Il valore F0 totale del processo considera le fasi di T1,
riscaldamento e di raffreddamento del ciclo e puo© D2 = valore D del microrganismo alla temperatura
essere calcolato mediante integrazione dei tassi di leta- T2.
lita© rispetto al tempo ad intervalli discreti di tempera-
tura. IF N0 N 10tD
ˆ ÿ ˆ

Quando un ciclo di sterilizzazione mediante vapore

viene scelto sulla base del concetto F0 si deve assicurare
che esso permetta di ottenere in maniera costante un'a- t = tempo di esposizione,
deguata sicurezza di sterilita© . Oltre alla convalida del D = valore D del microrganismo nelle condizioni di
processo, puo© essere anche necessario effettuare un esposizione.

536
 5.2. Argomenti generali

inoizircserP

ilareneG
sui vaccini

isilanA id
idoteM
5.2. Argomenti generali sui vaccini . . . . 539 5.2.5. Sostanze di origine animale per la
5.2.1 Terminologia usata nelle monografie produzione di vaccini per uso vete-

irotinetnoC
/ ilairetaM
dei vaccini . . . . . . . . . . . . . . . . . . 539 rinario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 550
5.2.2. Allevamenti di polli esenti da pato- 5.2.6 Valutazione dell'innocuita© dei vaccini
geni specificati per la produzione e per uso veterinario . . . . . . . . . . . . 552
il controllo di qualita© dei vaccini 540 5.2.7 Valutazione dell'efficacia dei vaccini
5.2.3 Substrati cellulari per la produzione per uso veterinario . . . . . . . . . . . . 554
5.2.8. Minimizzazione del rischio di tra-

ivittaeR
di vaccini per uso umano . . . . . . . 542 smettere gli agenti delle encefalo-
5.2.4. Colture cellulari per la produzione di patie spongiformi animali tramite
vaccini per uso veterinario . . . . . . 546 prodotti medicinali . . . . . . . . . . . 554

itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI
 Terminologia usata nelle monografie dei vaccini

inoizircserP
zione delle colture cellulari da utilizzare per la produ-

ilareneG
5.2. ARGOMENTI GENERALI SUI VAC-

CINI zione. La banca cellulare di lavoro (semenza cellulare

di lavoro) viene ripartita in contenitori, lavorata e con-
5.2.1. TERMINOLOGIA USATA NELLE MONO-
servata come descritto per la banca cellulare primaria.
. Sono colture cellulari otte-

isilanA id
GRAFIE DEI VACCINI Colture di cellule primarie

nute mediante trattamento di tessuti o di organi appro-

idoteM
Per alcune espressioni vengono riportati tra parentesi priati con tripsina. Le cellule sono essenzialmente iden-
termini alternativi di uso comune nella terminologia tiche a quelle del tessuto di origine e non devono aver
dei vaccini veterinari. subito piu© di 5 passaggi in vitro dalla preparazione ini-
. Eé un sistema secondo il ziale derivata dal tessuto animale.

irotinetnoC
Sistema di lotto di semenza

quale i lotti successivi di un prodotto derivano dallo

/ ilairetaM
stesso lotto di semenza primario. Per la produzione di Linee cellulari . Sono colture cellulari che hanno un'ele-
routine, puo© essere preparato un lotto di semenza di vata capacita© di replicazione in vitro. Nelle linee cellu-
lavoro dal lotto di semenza primario. Si deve registrare lari diploidi, le cellule hanno essenzialmente le stesse
l'origine e la cronologia dei passaggi del lotto di caratteristiche di quelle del tessuto di origine. Nelle
semenza primario e del lotto di semenza di lavoro. linee cellulari continue, le cellule sono in grado di repli-
carsi all'infinito in coltura e possono essere ottenute

ivittaeR
Lotto di semenza primario . Eé una coltura di un micror- da tessuti sani o tumorali. Alcune linee cellulari conti-
ganismo distribuita in contenitori da un'unica partita e nue, in determinate condizioni, hanno un potenziale
lavorata nel corso di un'unica operazione, in modo tale oncogenico.
da assicurare uniformita© e stabilita© e da prevenire qual- . Eé una
siasi contaminazione. Un lotto di semenza primario in

itnemogrA
Coltura cellulare da utilizzare per la produzione

ilareneG
forma liquida viene conservato, generalmente, ad una coltura di cellule destinata ad essere utilizzata per la
temperatura uguale o inferiore a -70 ‘C. Un lotto di produzione; puo© derivare da uno o piu© contenitori della
semenza primario liofilizzato viene conservato ad una banca cellulare di lavoro (semenza cellulare di lavoro)
temperatura in grado di assicurarne la stabilita© . oppure puo© essere una coltura di cellule primarie.
. Sono rappresentate da una quantita©

eifargonoM
. Eé una coltura di un micror-

ilareneG
Cellule di controllo
Lotto di semenza di lavoro

ganismo derivata dal lotto di semenza primario e desti- di cellule tenute separate, al momento della inocula-
nata ad essere utilizzata nella produzione. I lotti di zione del virus, come colture cellulari non infettate. Le
semenza di lavoro vengono ripartiti in contenitori e colture cellulari non infettate sono incubate nelle stesse
conservati come descritto precedentemente per il lotto condizioni di quelle utilizzate per le colture cellulari da

ehcituecamraF
di semenza primario. utilizzare per la produzione.
. Eé il materiale prodotto, in una o piu©

emroF
Raccolta singola
Sistema di banca cellulare (Sistema di semenza cellu-

). Eé un sistema secondo il quale i successivi lotti riprese, da una singola coltura cellulare da utilizzare
lare

finali (lotti) di un prodotto vengono ottenuti mediante per la produzione inoculata con lo stesso lotto di
coltivazione su cellule derivate dalla stessa banca cellu- semenza di lavoro o con una sospensione derivata dal
lare primaria (semenza cellulare primaria). Un certo lotto di semenza di lavoro, incubata e raccolta in un sin-
golo ciclo di produzione.
eiretaM

emirP
numero di contenitori della banca cellulare primaria
(semenza cellulare primaria) e© usato per preparare una Miscela monovalente di raccolta . Eé una miscela di mate-
banca cellulare di lavoro (semenza cellulare di lavoro). riale contenente un singolo ceppo o tipo di microrgani-
Il sistema della banca cellulare (sistema di semenza cel- smo o di antigene e derivata da un certo numero di
ehcituecamraF

lulare) e© convalidato al piu© alto livello di passaggio rag- uova, contenitori di colture cellulari ecc., che sono lavo-
inoizaraperP

ehcificepS

giunto durante gli abituali processi di produzione. rati contemporaneamente.

Banca cellulare primaria (Semenza cellulare primaria ). Sospensione madre finale di vaccino . Eé il materiale che
Eé una coltura di cellule ripartita in contenitori nel corso ha sub|©to tutte le fasi di produzione eccetto quella di
di un'unica operazione, lavorata contemporaneamente riempimento finale. Eé formato da una o piu© miscele
ehcitapoemO
inoizaraperP

e conservata in modo tale da assicurare uniformita© , sta- monovalenti di raccolte derivate da colture di una o
bilita© e da prevenire qualsiasi contaminazione. La piu© specie o tipi di microrganismi dopo chiarificazione,
banca cellulare primaria (semenza cellulare primaria) diluizione o aggiunta di qualsiasi adiuvante o altra
viene conservata, generalmente, ad una temperatura sostanza ausiliaria. Viene trattato in modo tale da assi-
uguale o inferiore a -70 ‘C. curare la sua omogeneita© e viene utilizzato per riempire
Banca cellulare di lavoro (Semenza cellulare di lavoro ). i contenitori di uno o piu© lotti finali (lotti).
ecidnI

Eé una coltura di cellule derivata dalla banca cellulare Lotto finale (lotto ). Eé un insieme di contenitori finali o
primaria e destinata ad essere utilizzata nella prepara- di altre unita© di dosaggio finali chiuse che sono conside-

539
Allevamenti di polli esenti da patogeni specificati e controllo di qualita© dei vaccini

rare omogenee ed equivalenti rispetto al rischio di con- rita© competente, possono essere introdotti embrioni
taminazione durante il riempimento o la preparazione EOPS ottenuti da un allevamento EOPS controllato e
del prodotto finale. Le unita© di dosaggio vengono riem- localizzato in un altro capannone dello stesso impianto.
pite, o preparate in altri modi, dalla stessa sospensione A partire dall'eta© di 8 settimane, i volatili cos|© sostituiti
madre finale di vaccino, liofilizzate contemporanea- sono considerati appartenenti all'allevamento e con-
mente (se possibile) e sigillate nel corso di un'unica ses- trollati mensilmente secondo i requisiti indicati al para-
sione di lavoro. Sono contraddistinte da un numero o grafo ``Saggi successivi''. Al momento dell'ovodeposi-
da un codice che identifica il lotto finale (lotto). Nel zione tutti i volatili sostituiti vengono controllati rispet-
caso in cui la sospensione madre finale di vaccino venga tando i requisiti indicati al paragrafo ``Saggio iniziale''.
ripartita in contenitori e/o liofilizzata nel corso di L'allevamento deve trovarsi in condizioni atte a ridurre
alcune sessioni di lavoro separate, si ottiene una serie le possibilita© di contaminazione. Non deve essere
di lotti finali (lotti) correlati che, generalmente, sono situato in prossimita© di allevamenti di volatili non
identificati mediante l'uso di una parte comune del EOPS e deve essere posizionato all'interno di un
numero o del codice di identificazione; questi lotti finali ambiente che garantisce l'isolamento o in un pollaio in
correlati sono talvolta definiti come sotto-lotti o lotti cui circola aria filtrata a pressione positiva. Si devono
di riempimento. prendere misure appropriate per impedire l'accesso di
Vaccino associato . Eé una preparazione polivalente for- roditori, uccelli selvatici, insetti e personale non auto-
mulata in modo tale da consentire la somministrazione rizzato.
contemporanea di diversi antigeni. Le differenti com-
ponenti antigeniche sono destinate a conferire prote- Il personale autorizzato a entrare non deve avere con-
zione nei confronti dei diversi ceppi o tipi dello stesso tatti con altri volatili o con agenti che possono infettare
microrganismo e/o di microrganismi diversi. Un vac- l'allevamento. Si consiglia al personale di fare la doccia
cino associato puo© essere fornito dal produttore sia e di cambiare i vestiti o di indossare indumenti di prote-
sotto forma di una singola preparazione liquida o liofi- zione prima di entrare nel pollaio.
lizzata che sotto forma di diversi costituenti con precise Gli oggetti introdotti nell'allevamento devono essere
indicazioni per la loro associazione prima dell'uso. sterilizzati. Gli alimenti sono opportunamente trattati
in modo da evitare l'introduzione di microrganismi
indesiderati e l'acqua deve provenire da una fonte sotto-
posta a clorazione. Non deve essere somministrato
5.2.2. ALLEVAMENTI DI POLLI ESENTI DA

alcun farmaco che possa interferire con l'identifica-

PATOGENI SPECIFICATI PER LA PRO-
é

zione di una malattia nell'allevamento.

DUZIONE E IL CONTROLLO DI QUALITA

DEI VACCINI

INTRODUZIONE Si deve tenere un registro permanente al fine di control-

lare lo stato di salute generale dell'allevamento e qual-
Quando indicato in una monografia, i polli, gli siasi anomalia evidenziata deve essere sottoposta ad
embrioni o le colture cellulari utilizzate per la produ- indagine. I fattori da controllare comprendono la mor-
zione o il controllo di qualita© dei vaccini derivano da bilita© , la mortalita© , le condizioni fisiche generali, il con-
uova prodotte in allevamenti di polli esenti da micror- sumo di alimenti, la produzione giornaliera e la qualita©
ganismi patogeni specificati (EOPS). La qualifica delle uova, la fertilita© e la schiusa delle uova. Le uova
EOPS di un allevamento e© assicurata per mezzo del rinvenute sporche devono essere eliminate; quelle pulite
sistema di seguito descritto. La lista dei microrganismi possono essere disinfettate in superficie quando sono
indicati si basa sulle conoscenze attuali e viene aggior- ancora calde.
nata quando necessario.
L'allevamento deve provenire da polli che si sono dimo-
PRINCIPI GENERALI E PROCEDURE strati esenti da agenti trasmessi per via verticale. In par-
ticolare, ciascun pollo utilizzato per allestire l'alleva-
Un allevamento e© definito come un gruppo di volatili mento viene controllato ripetutamente per accertare
che vivono nello stesso ambiente e sono accuditi da pro- l'assenza dei virus della leucosi e dei relativi anticorpi.
pri addetti che non hanno alcun contatto con alleva- Inoltre, per stabilire la qualifica EOPS di un alleva-
menti non EOPS. Una volta definito l'allevamento, mento, esso deve essere mantenuto in condizioni EOPS
non e© consentita l'introduzione di alcun volatile che per un periodo di controllo non inferiore a 4 mesi.
non sia EOPS. Dopo 6 settimane e alla fine del periodo di controllo,
Per allevamenti EOPS allestiti a rotazione, tutte le ciascun volatile dell'allevamento deve essersi dimo-
sostituzioni devono derivare da covate allevate in con- strato esente da infezioni provocate dagli agenti elen-
dizioni ambientali controllate. In accordo con l'Auto- cati di seguito al paragrafo ``Saggio iniziale''.

540
 Allevamenti di polli esenti da patogeni specificati e controllo di qualita© dei vaccini

inoizircserP
Per ogni nuova generazione di un determinato alleva- colare agente che ha dato un risultato positivo nel corso

ilareneG
mento, tutti i volatili devono essere sottoposti, al piu© dei controlli. I volatili risultati infetti e la loro progenie
tardi all'eta© di 20 settimane, ai saggi prescritti di seguito sono allontanati dall'allevamento. La qualifica EOPS
al paragrafo ``Saggi successivi''. Dopo il saggio iniziale, viene riacquistata dopo che 2 controlli successivi hanno
con cadenza mensile, devono essere effettuati i saggi portato a risultati completamente negativi.
descritti al paragrafo ``Saggi successivi'' su un cam-

isilanA id
Un risultato positivo nei confronti dell'agente della

idoteM
pione rappresentativo di animali corrispondente al anemia infettiva aviaria (CAA) non vieta necessaria-
5 per cento del numero effettivo di animali (ma non mente l'uso di materiali derivati dall'allevamento, ma i
inferiore a 10 në superiore a 200 volatili), e con un sag- vaccini vivi da utilizzare in volatili di eta© inferiore a 7
gio finale da effettuarsi 4 settimane dopo l'ultima rac- giorni devono essere prodotti utilizzando materiali pro-
colta delle uova.

irotinetnoC
venienti da allevamenti riconosciuti negativi nei con-

/ ilairetaM
Per tutti i saggi si prelevano campioni di sangue da un fronti dell'agente della anemia infettiva aviaria (CAA).
numero appropriato di volatili e a tempi determinati. I I vaccini inattivati da utilizzare per volatili di eta© infe-
relativi campioni di siero si esaminano per ricercare la riore a 7 giorni possono essere prodotti utilizzando
presenza di anticorpi nei confronti dei principali agenti. materiale proveniente da allevamenti per i quali non e©
I saggi di sieroneutralizzazione si effettuano su miscele stata dimostrata l'assenza dell'agente della anemia
di non piu© di 5 sieri. Tutti gli altri saggi vengono effet-

ivittaeR
tuati sui singoli sieri. Si utilizzano controlli positivi e infettiva aviaria (CAA), a condizione che sia stata
negativi in tutti i saggi. I reattivi utilizzati nei saggi dimostrata la capacita© del processo di inattivazione e©
sono standardizzati rispetto ai reattivi standard inter- in grado di inattivare l'agente della anemia infettiva
nazionali o europei, nel caso siano disponibili. Nel caso aviaria (CAA).
del virus della leucosi aviaria, oltre ai saggi per eviden- Occorre tenere un registro permanente della mortalita© e

itnemogrA
ilareneG
ziare gli anticorpi effettuati sui campioni di siero, si pre- dei risultati dei saggi effettuati sull'allevamento per un
levano campioni idonei per evidenziare la presenza del periodo minimo di 5 anni. I dettagli di qualsiasi altera-
virus . zione nell'ovodeposizione o nella schiusa, ad eccezione
Oltre ai saggi sierologici, per evidenziare la presenza di delle cause accidentali accertate come non conseguenti
anticorpi si effettua un esame clinico almeno una volta a processi infettivi e di qualsiasi risultato dei saggi che

eifargonoM

ilareneG
alla settimana per verificare che i volatili siano esenti sia indicativo di infezione da parte di un agente specifi-
da vaiolo aviario e da segni di altre infezioni. In caso cato sono immediatamente resi noti a chi utilizza le
di morte devono essere effettuati esami necroscopici e, uova.
se necessario per confermare la diagnosi, esami istopa-
tologici, al fine di accertare l'assenza di infezione. L'as-

ehcituecamraF
senza di Salmonella spp. viene determinata mediante SAGGIO INIZIALE

emroF
l'esame di colture di campioni di feci almeno una volta Si possono utilizzare altri tipi di saggio purchë abbiano
ogni 4 settimane; per i saggi puo© essere utilizzata una almeno la stessa sensibilita© di quelli indicati di seguito e
miscela di non piu© di 10 campioni. di specificita© appropriata, previo accordo con l'Autorita©
In caso di un risultato positivo in qualsiasi saggio effet- competente.
tuato per stabilire la qualifica EOPS di un allevamento,
eiretaM

emirP
quest'ultimo non puo© essere definito come allevamento Microrganismo Tipo di saggio

EOPS. In caso di risultato positivo in qualsiasi saggio Adenovirus aviari Saggio immunoenzimatico (ELISA)
effettuato in un allevamento gia© definito EOPS, l'alleva- Adenovirus emoagglutinante Inibizione dell'emoagglutinazione
mento perde la qualifica EOPS. Nel caso dell'agente aviario (Sindrome della
ehcituecamraF

della anemia infettiva aviaria (CAA) si applicano parti-

inoizaraperP

caduta dell'ovodeposizione
ehcificepS

colari condizioni, come descritto di seguito. I polli, gli 76-Virus-EDS 76).

embrioni o le colture cellulari prelevati dal saggio pre- Agente dell'anemia infettiva Immunofluorescenza
cedente che ha dato esito non favorevole non possono aviaria
essere ulilizzati e tutti i prodotti derivati da questi Reovirus aviari Saggio immunoenzimatico (ELISA)
devono essere eliminati e qualsiasi saggio di controllo Virus della borsite infet- Sieroneutralizzazione nei confronti
ehcitapoemO
inoizaraperP

di qualita© effettuato con questi prodotti non e© ritenuto tiva aviaria (malattia di
Gumboro)
di ciascun sierotipo presente nel
paese di origine
valido e deve essere ripetuto. Virus della bronchite infet- Saggio immunoenzimatico (ELISA)
Per ottenere di nuovo la qualifica EOPS, l'allevamento tiva aviaria
deve essere mantenuto nelle condizioni EOPS e devono Virus dell'encefalomielite Saggio immunoenzimatico (ELISA)
essere effettuati i consueti saggi mensili su un numero aviaria
di volatili corrispondente al 5 per cento del numero Virus della influenza, tipo A Saggio immunoenzimatico (ELISA)
ecidnI

effettivo, a meno che ciascun volatile dell'intero alleva- Virus della laringotracheite Sieroneutralizzazione
mento sia controllato ogni mese per evidenziare il parti- aviaria

541
Substrati cellulari per la produzione di vaccini per uso umano

Microrganismo Tipo di saggio Microrganismo Tipo di saggio

Virus della leucosi aviaria Saggio immunoenzimatico (ELISA) Virus della nefrite aviaria Immunofluorescenza
per il virus e sieroneutralizzazione Virus della reticoloendote- Immunofluorescenza
per gli anticorpi liosi aviaria
Virus della malattia di Saggio immunoenzimatico (ELISA) Virus della rinotracheite del Saggio immunoenzimatico (ELISA)
Marek tacchino
Virus della malattia di New- Inibizione dell'emoagglutinazione Mycoplasma gallisepticum Agglutinazione e, per la conferma
castle di un saggio positivo, inibizione
dell'emoagglutinazione
Virus della nefrite aviaria Immunofluorescenza Mycoplasma synoviae Agglutinazione e, per la conferma
Virus della reticoloendote- Immunofluorescenza di un saggio positivo, inibizione
liosi aviaria dell'emoagglutinazione
Virus della rinotracheite del Saggio immunoenzimatico (ELISA) Salmonella pullorum Agglutinazione
tacchino
Mycoplasma gallisepticum Agglutinazione e, per la conferma di
un saggio positivo, inibizione dell'e-
moagglutinazione 5.2.3. SUBSTRATI CELLULARI PER LA PRODU-

Mycoplasma synoviae Agglutinazione e, per la conferma ZIONE DI VACCINI PER USO UMANO

di un saggio positivo, inibizione Questo capitolo generale tratta delle linee di cellule
dell'emoagglutinazione
Salmonella pullorum Agglutinazione diploidi e di linee cellulari continue utilizzate per la
produzione di vaccini per uso umano; alcuni punti spe-
cifici relativi ai vaccini preparati con la tecnica del
SAGGI SUCCESSIVI DNA ricombinante sono trattati nella monografia Pro-
dotti ottenuti con la tecnologia del DNA ricombinante
Si possono utilizzare altri tipi di saggio purchë abbiano (0784). Nella tabella 5.2.3.-1 e© riportata la lista dei
almeno la stessa sensibilita© di quelli indicati di seguito e saggi da effettuare ai diversi stadi (semenza cellulare,
di specificita© appropriata, previo accordo con l'Autorita© banca cellulare primaria, banca cellulare di lavoro, cel-
competente. lule ad un livello di raddoppiamento della popolazione
uguale o superiore al livello usato per la produzione).
Microrganismo Tipo di saggio
Le disposizioni generali relative all'uso delle linee cellu-
Adenovirus aviari Saggio immunoenzimatico (ELISA) lari e i metodi di saggio sono riportati di seguito.
Adenovirus emoagglutinante Inibizione dell'emoagglutinazione
Quando per la produzione di un vaccino si usano cellule
aviario primarie o cellule che hanno sub|©to alcuni passaggi
senza la costituzione di una banca cellulare, i requisiti
Agente dell'anemia infettiva Immunofluorescenza sono riportati nella specifica monografia del vaccino
aviaria in questione.
Reovirus aviari Immunofluorescenza Linee cellulari diploidi . Una linea cellulare diploide pos-
Virus della borsite infet- Immunodiffusione nei confronti di siede una capacita© di moltiplicazione in vitro alta ma
tiva aviaria (malattia di
Gumboro)
ciascun sierotipo presente nel paese
di origine
definita.
Linee cellulari continue . Una linea cellulare continua
Virus della bronchite infet- Saggio immunoenzimatico (ELISA) possiede una capacita© illimitata di moltiplicazione in
tiva aviaria vitro; le cellule hanno spesso delle differenze di cario-
Virus dell'encefalomielite
aviaria
Saggio immunoenzimatico (ELISA) tipo rispetto alle cellule di origine; esse possono essere
ottenute da tessuti sani o tumorali.
Virus della influenza, tipo A Saggio immunoenzimatico (ELISA) Nel caso di vaccini per uso iniettabile prodotti in linee
Virus della laringotracheite Sieroneutralizzazione cellulari continue, il processo di purificazione e© convali-
aviaria dato per dimostrare la riduzione del DNA proveniente
Virus della leucosi aviaria Saggio immunoenzimatico (ELISA) dal substrato cellulare ad un livello equivalente a non
per gli anticorpi piu© di 10 ng per dose umana singola, salvo indicazione
Virus della malattia di Saggio immunoenzimatico (ELISA) contraria.
Marek Sistema di banca cellulare . La produzione di vaccini in
Virus della malattia di New- Inibizione dell'emoagglutinazione cellule diploidi ed in linee cellulari continue e© basata su
castle un sistema di banca cellulare. L'eta© in vitro delle cellule

542
 Substrati cellulari per la produzione di vaccini per uso umano

inoizircserP
e© contata a partire dalla banca cellulare primaria. Pre- lule possono non essere disponibili, come per esempio

ilareneG
parare ciascuna banca cellulare di lavoro usando uno o la provenienza delle sostanze di origine animale; nei
piu© recipienti della banca cellulare primaria. L'uso, l'i- casi autorizzati e giustificati, per la produzione del vac-
dentita© e il controllo d'inventario dei contenitori sono cino possono essere usate le banche cellulari gia© alle-
documentati accuratamente. stite usando tali terreni.

isilanA id
Caratterizzazione della semenza cellulare. Sono caratte-

idoteM
Terreni di coltura e sostanze di origine animale ed

umana . La composizione dei terreni usati per l'isola- rizzate le seguenti proprieta© :
mento e tutte le colture successive sono registrate in 1) l'identita© delle cellule (per esempio isoenzimi, siero-
dettaglio e se si utilizzano sostanze di origine animale logia, fingerprinting);
esse devono essere esenti da agenti estranei. Se si uti-

irotinetnoC
2) le caratteristiche della crescita delle cellule e le loro

/ ilairetaM
lizza l'albumina umana, essa soddisfa alla monografia proprieta© morfologiche (microscopio ottico ed elet-
Albumina umana soluzione (0255). tronico);
Il siero bovino usato per la preparazione e il manteni- 3) il cariotipo per le linee cellulari diploidi;
mento delle colture cellulari e© sottoposto a saggio e
deve dimostrare di essere sterile ed esente da virus di 4) la durata della vita in vitro in termini di livelli di rad-

ivittaeR
origine bovina, in particolare del virus della diarrea doppiamento della popolazione, per le linee cellulari
dei bovini e dai micoplasmi. diploidi.
La tripsina usata per la preparazione delle colture cellu- Stabilita© del substrato cellulare . Si deve dimostrare che
lari e© esaminata con metodi appropriati e deve dimo- la linea cellulare ha una idonea vitalita© nelle condizioni
di conservazione previste. Per un dato prodotto che

itnemogrA
strare di essere sterile ed esente da micoplasmi e virus,

ilareneG
in particolare pestivirus e parvovirus. deve essere preparato nella linea cellulare, e© necessario
. I dati sulla base dei quali si valuta dimostrare che si puo© ottenere una produzione riprodu-
Semenza cellulare

l'idoneita© di una semenza cellulare comprendono l'in- cibile con le cellule appartenenti ai livelli di passaggio
formazione, se disponibile, sull'origine, la sua storia e situati sia all'inizio che alla fine della durata prevista

eifargonoM
per l'uso.

ilareneG
la sua caratterizzazione.
Origine della semenza cellulare. Per le linee cellulari di Agenti infettivi estranei . Le linee cellulari utilizzate per
origine umana si registrano le seguenti informazioni la produzione del vaccino devono essere esenti da
relative al donatore: origine etnica e geografica, eta© , agenti infettivi estranei. I saggi per gli agenti estranei
sono effettuati come indicato nella Tabella 5.2.3.-1.

ehcituecamraF
sesso, condizione fisiologica generale, tessuto o organo
utilizzato e i risultati di tutti i saggi per la ricerca di In funzione dell'origine e della storia della linea cellu-

emroF
patogeni. lare, puo© essere necessario effettuare dei saggi per sele-
Per le linee cellulari di origine animale si registrano le zionati e specifici contaminanti potenziali, in partico-
seguenti informazioni relative all'origine delle cellule: lare per quelli che risultano infettare in maniera latente
specie, ceppo, condizioni di allevamento, origine geo- le specie di origine, per esempio il virus 40 della scim-
mia per il reso Macaca mulatta. Per le linee cellulari
eiretaM

emirP
grafica, eta© , sesso, condizioni fisiologiche generali del- provenienti da roditori, i saggi per la produzione degli
l'animale, tessuto o organo usato, risultato di tutti i anticorpi sono effettuati sui topi, i ratti e i criceti per
saggi per la ricerca di patogeni. rivelare i virus specifici per la specie.
Le cellule di origine neuronale, come neuroblastomi e
ehcituecamraF

Le linee cellulari sono esaminate per evidenziare la pre-

inoizaraperP

ehcificepS

linee cellulari P12, possono contenere sostanze che senza di retrovirus come descritto di seguito. Le linee
accumulano gli agenti delle encefalopatie spongiformi cellulari in cui si evidenzia la presenza di retrovirus in
e pertanto queste cellule non si usano per la produzione grado di replicarsi non sono accettabili per la produ-
del vaccino. zione del vaccino.
ehcitapoemO

Storia della semenza cellulare. Si registrano le seguenti

inoizaraperP

informazioni: il metodo usato per isolare la semenza Tumorigenicita© . Per la preparazione di vaccini vivi la
cellulare, i metodi di coltura e qualsiasi altra procedura linea cellulare non deve essere tumorigena a qualsiasi
usata per allestire la banca cellulare primaria, in parti- livello di raddoppiamento della popolazione usato per
colare quelle che possono implicare una esposizione la produzione del vaccino. Quando per la produzione
delle cellule ad agenti estranei. di altri tipi di vaccino e© usata una linea cellulare tumo-
rigena, il processo di purificazione deve essere convali-
ecidnI

Le informazioni complete degli ingredienti dei terreni dato per dimostrare che il DNA residuo proveniente
di coltura usati nel passato per la coltivazione delle cel- dal substrato cellulare e© ridotto a meno di 10 ng per

543
Substrati cellulari per la produzione di vaccini per uso umano

dose umana singola di vaccino, se non diversamente al saggio di sterilita© (2.6.1) effettuato usando, per cia-
prescritto, e che le proteine derivate dal substrato cellu- scun terreno di coltura, 10 ml di fluido sopranatante
lare sono ridotte ad un livello accettabile. proveniente dalla colture cellulari. Effettuare il saggio
Una linea cellulare che possiede un potenziale tumori- sull'1 per cento dei recipienti, con un minimo di due
geno riconosciuto non deve essere sottoposta ad un recipienti.
ulteriore saggio. Se non si conosce il potenziale tumori- (2.6.7). La banca cellulare primaria e cia-
geno della linea cellulare, essa e© considerata come
Micoplasmi

scuna banca cellulare di lavoro soddisfa il saggio per i

tumorigena ed e© sottoposta al saggio di tumorigenicita© micoplasmi effettuato con il metodo di coltura e il
usando un saggio in vitro come descritto di seguito; se metodo della coltura cellulare indicatrice. Per il saggio
il risultato del saggio in vitro e© negativo o non e© chiara- usare uno o piu© recipienti.
mente positivo, si effettua un saggio in vivo come
descritto di seguito. I saggi sono effettuati usando cel- Saggio degli agenti estranei in colture cellulari . Le cel-
lule ad un livello di raddoppiamento della popolazione lule soddisfano al saggio per i virus emoadsorbenti e ai
uguale o superiore a quello usato per la produzione del saggi in colture cellulari per gli altri agenti estranei
vaccino. riportati nel capitolo 2.6.16 nella sezione Colture cellu-
Le linee cellulari MRC-5,WI-38 e FRhL-2 sono ricono- lari per la produzione: cellule di controllo. Se le cellule
sciute come non tumorigene e non e© necessario sotto- derivano dalla scimmia, sono inoculate anche in colture
porle ad ulteriori saggi. cellulari di rene di coniglio per il saggio dell'herpes
virus B (herpes virus 1 di cercopiteco).
. Le linee cellulari
. Co-coltivare separatamente cellule
Caratterizzazione cromosomica

diploidi dovranno dimostrare di essere diploidi. Se non Co-coltivazione

e© stata convalidata l'eliminazione delle cellule intatte intatte e cellule lisate con altri sistemi cellulari com-
durante il processo successivo alla raccolta, e© richiesta prese le cellule umane e le cellule di scimmia. Effettuare
una caratterizzazione piu© estensiva della linea cellulare delle ricerche per evidenziare possibili cambiamenti
diploide mediante l'analisi del cariotipo. Esaminare dei morfologici. Effettuare i saggi sui fluidi delle colture
campioni provenienti da quattro livelli di passaggio cellulari per evidenziare i virus emoagglutinanti. Le cel-
distribuiti uniformemente lungo la durata di vita della lule soddisfano al saggio se non si riscontra la presenza
linea cellulare. Esaminare almeno 200 cellule in meta- di agenti estranei.
fase per la conta esatta dei cromosomi, per verificare . Ricercare la presenza di retrovirus
la frequenza di casi di iperploidia, ipoploidia, poliploi-
Retrovirus

mediante:
dia e per verificare la frequenza di rotture ed anorma-
lita© strutturali. 1) dosaggi di infettivita© ,
Le linee cellulari MRC-5,WI-38 e FRhL-2 sono ricono- 2) microscopia elettronica di emissione,
sciute come diploidi e ben caratterizzate. Non e© richie- 3) se i saggi 1) e 2) hanno dato risultati negativi, effet-
sta una ulteriore caratterizzazione se esse non sono tuare i dosaggi della transcriptasi inversa su sedi-
state modificate geneticamente. menti ottenuti mediante centrifugazione ad alta
METODI DI SAGGIO PER LE COLTURE CELLU- velocita© .
LARI Saggi su animali . Iniettare per via intramuscolare (o per
via sottocutanea nel caso di topi 7lattanti) a ciascuno
Identificazione . L'identita© delle cellule e© stabilita sulla dei seguenti gruppi di animali, 10 cellule vive, divise
base dell'analisi del fingerprinting e di una selezione ugualmente tra gli animali di ciascun gruppo:
appropriata degli aspetti seguenti:
1) caratteristiche biochimiche (analisi degli isoenzimi), 1) due nidiate di topi lattanti di eta© inferiore a 24 h, cia-
scuna costituita da almeno 10 animali,
2) caratteristiche immunologiche (antigeni di istocom-
patibilita© ), 2) dieci topi adulti.
3) marcatori citogenetici. Iniettare 106 cellule vive, per via intracerebrale, a cia-
. L'analisi del fingerprinting effet- scuno di dieci topi adulti al fine di evidenziare la possi-
bile presenza del virus della coriomeningite linfocitaria.
Cellule contaminanti

tuata per l'identificazione serve anche per dimostrare

l'assenza di cellule contaminanti. Osservare gli animali per almeno 4 settimane. Esami-
Contaminazione batterica e fungina . La banca cellulare nare gli animali che si ammalano o mostrano qual-
primaria e ciascuna banca cellulare di lavoro soddisfa siasi anormalita© per stabilire la causa della malattia.

544
 Substrati cellulari per la produzione di vaccini per uso umano

inoizircserP
Le cellule soddisfano al saggio se non si riscontra la Indipendentemente dal sistema animale selezionato,

ilareneG
presenza di agenti estranei. Il saggio e© valido solo se la linea cellulare e le cellule di riferimento sono iniet-
almeno l'80 per cento degli animali di ciascun gruppo tate in gruppi separati ciascuno di 10 animali. In
rimane sano e sopravvive alla fine del periodo di osser- entrambi i casi, l'inoculo per ciascun animale e© di
vazione. 107 cellule sospese in un volume di 0,2 ml e l'iniezione

isilanA id
puo© essere effettuata sia per via intramuscolare che

idoteM
Per le cellule ottenute da specie di roditori (per esem- per via sottocutanea. Gli animali neonati sono trat-
pio, cellule ovariche di criceto cinese o cellule di rene tati con 0,1 ml di siero o di globulina antitimociti i
di piccoli di criceti), i saggi per gli anticorpi nei con- giorni 0, 2, 7 e 14 a partire dalla nascita.
fronti dei probabili contaminanti virali delle specie inte-
ressate sono effettuati su animali ai quali sono state Un siero o una globulina sono considerati potenti se

irotinetnoC
/ ilairetaM
iniettate le cellule. sopprimono il meccanismo immunitario di crescita
degli animali ad un livello tale che il successivo ino-
Saggi su uova . Usare un inoculo di 106 cellule vitali per culo di 107 cellule di riferimento positive produce
uovo; iniettare le cellule nella cavita© allantoidea di dieci regolarmente dei tumori e delle metastasi. Gli animali
uova embrionate di gallina EOPS (5.2.2), dell'eta© di 9- malati gravemente che presentano evidenti tumori
11 giorni e nel sacco del tuorlo di dieci uova embrionate

ivittaeR
con crescita progressiva sono sacrificati prima della
di gallina EOPS, dell'eta© di 5-6 giorni. Incubare per fine del saggio per evitare sofferenze inutili.
almeno 5 giorni. Sottoporre a saggio i fluidi allantoidei
per evidenziare la presenza di emoagglutinina usando Alla fine del periodo di osservazione tutti gli animali,
globuli rossi di origine umana ed aviaria; effettuare il compresi i gruppi di riferimento, sono sacrificati ed

itnemogrA
saggio a temperature di 5 3 ‘C e 20-25 ‘C e leggere i esaminati nel sito di iniezione ed in altri organi (per

ilareneG
6

risultati dopo 30 min e 60 min. esempio linfonodi, polmoni, reni e fegato) per ricer-
care i segni macroscopici e microscopici della prolife-
Le cellule soddisfano al saggio se non si riscontra la razione delle cellule inoculate.
presenza di qualsiasi agente estraneo.
In tutti i sistemi di saggio, gli animali sono osservati e

eifargonoM

ilareneG
Il saggio e© valido solo se almeno l'80 per cento degli palpati ad intervalli regolari per evidenziare la forma-
embrioni e© sano e sopravvive fino alla fine del periodo zione di noduli nei siti di iniezione. Misurare ogni
di osservazione. nodulo che si forma in due direzioni perpendicolari e
in vitro. Puo© essere usato il registrare regolarmente le misurazioni per determi-

ehcituecamraF
Saggio per la tumorigenicita©

sistema seguente: nare se c'e© una crescita progressiva del nodulo. Gli
animali che presentano noduli che iniziano a regre-

emroF
1) formazione di colonie in gel molle di agar, dire durante il periodo di osservazione sono sacrifi-
cati prima che i noduli non siano piu© palpabili e sono
2) produzione di una crescita cellulare invasiva dopo sottoposti ad esame istologico. Gli animali con
inoculazione nelle colture di organi, noduli progressivamente crescenti sono tenuti in
osservazione per 1-2 settimane; mentre una meta© di
eiretaM

emirP
3) studio della trasformazione dell'attivita© usando, per quelli che non presentano la formazione di noduli
esempio, il sistema di dosaggio 3T3 per gli oncogeni sono tenuti in osservazione per 3 settimane e l'altra
attivi. meta© per 12 settimane prima di essere sacrificati e
in vivo. Il saggio consiste sottoposti ad esame istologico. Effettuare l'autopsia
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
Saggio per la tumorigenicita©

nello stabilire un confronto tra la linea cellulare e l'ap- su ciascun animale e ricercare i segni macroscopici
propriato controllo positivo (per esempio, cellule HeLa della formazione di tumori nel sito di iniezione e in
o Hep2). altri organi come linfonodi, polmoni, cervello, milza,
reni e fegato. Effettuare l'esame istologico di tutte le
I sistemi animali che hanno dimostrato di essere appro- probabili lesioni tumorali e del sito di iniezione. Inol-
ehcitapoemO
inoizaraperP

priati per questo saggio comprendono: tre poichë alcune linee cellulari possono provocare
1) topi atimici (genotipo Nu/Nu), metastasi senza segni di crescita tumorale locale,
effettuare l'esame istologico dei linfonodi regionali
2) topi, ratti o criceti neonati che sono stati trattati con rivelabile e dei polmoni di tutti gli animali.
un siero o una globulina antitimociti, Il saggio e© valido solo se nove dei dieci animali ai quali
ecidnI

3) topi timoctomizzati ed irradiati che sono stati rico- sono state iniettate le cellule di riferimento positive pre-
stituiti (T-,B+) mediante il midollo osseo di topi sani. sentano tumori con crescita progressiva.

545
Colture cellulari per la produzione di vaccini per uso veterinario

Tabella 5.2.3.-1. Saggi da effettuare sulle linee cellulari

Saggi Semenza Banca cellulare Banca cellulare Cellule ad un livello

cellulare primaria (BCP) di lavoro (BCL) di raddoppiamento

della popolazione

uguale o superiore

a quello usato

per la produzione

1. IDENTITA' E PUREZZA
Morfologia + + + +
Selezione principale dei saggi seguenti: + + + +
biochimici (per es. isoenzimi), immu-
nologici (per es. istocompatibilita© ),
marcatori citogenetici, impronta
genomica.
Cariotipo (cellule diploidi) + + +(1) +(1)
Durata della vita (linee cellulari ^ + + ^
diploidi)
2. AGENTI ESTRANEI
Contaminazione batterica e fungina ^ + + ^
Micoplasmi ^ + + ^
Saggi in colture cellulari ^ ^ + ^
Co^coltivazione ^ ^ +(2) +(2)
Saggi in animali e in uova ^ ^ +(2) +(2)
Saggi specifici per contaminanti possi- ^ ^ +(2) +(2)
bili che dipendono dall'origine delle
cellule (vedere sopra in Agenti infet-
tivi estranei)
Retrovirus ^ +(3) ^ +(3)
3. TUMORIGENICITAé
Tumorigenicita© ^ ^ ^ +(4)
(1) Il carattere diploide di ciascuna banca cellulare di lavoro e© stabilito ad un livello massimo di raddoppiamento della popolazione uguale o superiore a quello
usato per la produzione
(2) I saggi sono effettuati per ciascuna banca cellulare di lavoro, ma usando cellule ad un livello massimo di raddoppiamento della popolazione uguale o superiore a
quello usato per la produzione
(3) I saggi sono effettuati per ciascuna banca cellulare primaria ma usando cellule ad un livello massimo di raddoppiamento della popolazione uguale o superiore a
quello usato per la produzione
(4) Le linee cellulari MRC5, WI-38 e FRhL-2 sono riconosciute come non tumorigene e non sono sottoposte a saggi ulteriori. I saggi non si effettuano su linee cel-
lulari conosciute o considerate tumorigene.

5.2.4. COLTURE CELLULARI PER LA PRODU- dei vaccini per uso veterinario devono soddisfare ad
ZIONE DI VACCINI PER USO VETERINA- una parte o a tutti i requisiti indicati.
RIO
Per la maggior parte dei virus dei mammiferi, e© possi-
bile la propagazione in linee cellulari e pertanto l'im-
Le colture cellulari utilizzate per la produzione di vac- piego di cellule primarie non e© accettabile.
cini per uso veterinario devono soddisfare ai requisiti
riportati nel presente capitolo. Puo© anche essere neces- Le colture cellulari persistentemente infette usate per
sario che le colture cellulari utilizzate per il controllo la produzione di vaccini veterinari soddisfano ai requi-

546
 Colture cellulari per la produzione di vaccini per uso veterinario

inoizircserP
siti appropriati descritti di seguito. Si deve dimostrare Tabella 5.2.4.-1. - Stadi di sviluppo delle colture cellulari

ilareneG
che le cellule risultano infette esclusivamente con ai quali devono essere effettuati i saggi.
l'agente indicato.
Cellule derivate

dalla semenza

isilanA id
Semenza Semenza

idoteM
cellulare di
cellulare cellulare

LINEE CELLULARI
lavoro al piu©
primaria di lavoro
alto livello

di passaggio

Le linee cellulari sono generalmente manipolate Microscopia ge- + + +

secondo un sistema di semenza cellulare. Ad ogni

irotinetnoC
/ ilairetaM
nerale
semenza cellulare primaria viene assegnato un Batteri e funghi + + -
codice specifico per l'identificazione. La semenza Micoplasmi + + -
cellulare primaria viene conservata in aliquote Virus + + -
ad una temperatura uguale o inferiore a -70 ‘C. Identificazione + - +
Generalmente, la produzione del vaccino non viene della specie

ivittaeR
effettuata su cellule che hanno subito piu© di 20 pas- Cariotipo + - +
saggi dalla semenza cellulare primaria. Nel caso in Tumorigenicita© + - -
cui siano utilizzate colture in sospensione, viene
considerato equivalente ad un passaggio un
aumento del numero delle cellule corrispondente . Deve essere descritto l'a-

itnemogrA
ilareneG
Caratteristiche della coltura

a circa tre volte un raddoppiamento della popola- spetto dei monostrati cellulari, prima e dopo la colora-
zione. Se per la produzione devono essere utilizzate zione istologica. Fornire informazioni, se possibile dati
cellule a un livello di passaggi superiore a venti, si numerici, in particolare sulla velocita© e il grado di cre-
deve dimostrare, mediante convalida o ulteriori saggi, scita. Analogamente specificare la presenza o l'assenza

eifargonoM
che le colture cellulari per la produzione sono essen- di inibizione da contatto, di cellule polinucleate e di

ilareneG
zialmente simili alla semenza cellulare primaria per ogni altra anomalia cellulare.
quanto riguarda le loro caratteristiche biologiche e la . Deve essere effettuato un esame del cromo-
purezza e che l'impiego di tali cellule non ha un Cariotipo

soma di almeno 50 cellule in mitosi sulla semenza cellu-

effetto deleterio sulla produzione del vaccino.

ehcituecamraF
lare primaria e ad un livello di passaggio elevato

emroF
La cronologia della linea cellulare (per esempio origine, almeno quanto quello utilizzato nella produzione.
numero di passaggi e terreni di coltura utilizzati per la Qualsiasi marcatore cromosomiale presente nella
moltiplicazione e le condizioni di conservazione) deve semenza cellulare primaria deve essere ritrovato anche
essere nota e registrata in dettaglio. nelle cellule al piu© alto livello di passaggio e il valore
modale dei cromosomi in queste cellule non deve essere

eiretaM

emirP
Il metodo di conservazione e di impiego delle cellule, superiore del 15 per cento di quello delle cellule della
compresi i dettagli riguardanti le garanzie relative al semenza cellulare primaria. I cariotipi devono essere
mancato superamento del limite massimo di passaggi identici. Se il valore modale supera il livello indicato,
consentito durante la produzione deve essere registato. se i marcatori cromosomiali non vengono ritrovati nella
ehcituecamraF
inoizaraperP

semenza cellulare di lavoro al piu© alto livello di passag-

ehcificepS

Una sufficiente quantita© della semenza cellulare prima- gio utilizzato per la produzione o se il cariotipo differi-
ria e di ciascuna semenza cellulare di lavoro deve essere sce, la linea cellulare non deve essere utilizzata per la
conservata per fini analitici . produzione.
ehcitapoemO

I saggi descritti di seguito (come prescritto nella . Deve essere dimostrato,

inoizaraperP

Identificazione della specie

Tabella 5.2.4.-1) sono effettuati su una coltura mediante un metodo convalidato, che la semenza cellu-
della semenza cellulare primaria e sulla semenza lare primaria e le cellule derivate dalla semenza cellu-
cellulare di lavoro o sulle colture cellulari derivate lare di lavoro al piu© alto livello di passaggio utilizzato
dalla semenza cellulare di lavoro al piu© alto livello per la produzione derivano dalla specie di origine speci-
di passaggio utilizzato per la produzione e derivato ficata. Quando si effettua un saggio di fluorescenza e si
da un campione omogeneo dimostratosi rappre- utilizza il corrispondente siero nei confronti della specie
ecidnI

sentativo. di origine delle cellule e si dimostra che tutte le cellule

547
Colture cellulari per la produzione di vaccini per uso veterinario

sottoposte a saggio sono fluorescenti, non e© necessario di globuli rossi sufficiente a coprire, in maniera uni-
effettuare altri saggi con reattivi in grado di evidenziare forme, la superficie del monostrato. Esaminare le cel-
la contaminazione da parte di cellule di altre specie. lule a diversi tempi di incubazione per evidenziare la
Contaminazione batterica e fungina . Le cellule soddi- presenza di emoadsorbimento.
sfano al saggio di sterilita© (2.6.1). Il campione di cellule Determinazione di virus specificati . Effettuare dei saggi
da esaminare e© costituito almeno dal numero di cellule per escludere la presenza di contaminanti specifici nei
presenti in un monostrato avente una superficie di confronti della specie di origine della linea cellulare e
70 cm2 o, nel caso di cellule in sospensione, da un della specie cui e© destinato il prodotto. Preparare una
numero di cellule approssimativamente corrispon- quantita© sufficiente di cellule su idonei supporti per
dente. Le cellule sono mantenute in coltura per almeno effettuare i saggi per la ricerca di agenti specificati.
15 giorni senza antibiotici prima di effettuare il saggio. Includere idonei controlli positivi in ciascun saggio. Le
2.6.7). Le cellule soddisfano al saggio dei cellule sono sottoposte a saggi appropriati ad esempio
utilizzando anticorpi coniugati con fluoresceina o reat-
Micoplasmi (

micoplasmi. Le cellule sono mantenute in coltura per

almeno 15 giorni senza antibiotici prima di effettuare il tivi simili.
saggio. Saggi su altre colture cellulari . Sono richiesti mono-
. Le cellule non devono strati aventi una superficie totale di almeno 140 cm2.
Congelare e scongelare le cellule almeno tre volte
Assenza di virus contaminanti

essere contaminate da virus; effettuare saggi opportu-

namente sensibili, compresi quelli prescritti di seguito. e quindi centrifugare per rimuovere i detriti cellu-
lari. Inoculare aliquote di cellule nelle cellule di
I monostrati sottoposti a saggio devono avere una seguito riportate in qualunque momento prima del
superficie di almeno 70 cm2 e devono essere preparati raggiungimento di una confluenza corrispondente al
e mantenuti usando un terreno di coltura ed additivi, e 70 per cento:
fatti sviluppare nelle stesse condizioni di quelle utiliz-
zate per la preparazione del vaccino. I monostrati sono ^ cellule primarie della specie di origine;
mantenuti in coltura per un totale di almeno 28 giorni. ^ cellule sensibili ai virus patogeni per le specie cui e©
Allestire delle sottocolture ad intervalli di 7 giorni; nel destinato il vaccino;
caso in cui le cellule non sopravvivano per periodi cos|©
lunghi, le sottocolture devono essere allestite il piu© tardi ^ cellule sensibili ai pestivirus.
possibile. Cellule in quantita© sufficienti, in contenitori Mantenere in coltura le cellule inoculate per almeno
idonei, vengono prodotte per la sottocoltura finale sulla 7 giorni; preparare quindi degli estratti per congela-
quale si effettuano i saggi specificati di seguito. mento e scongelamento nel modo precedentemente
Esaminare i monostrati regolarmente durante il descritto ed inocularli in un numero sufficiente di col-
periodo di incubazione per evidenziare la eventuale ture allestite di recente dello stesso tipo di cellule in
presenza di effetti citopatici e, alla fine del periodo di modo da permettere di effettuare i saggi descritti di
osservazione degli effetti citopatici, di virus emoadsor- seguito. Le cellule vengono incubate per almeno altri 7
benti e di altri virus specifici mediante immunofluore- giorni. Le colture sono esaminate regolarmente per evi-
scenza o altri saggi idonei come indicato di seguito. denziare qualsiasi effetto citopatico indicativo della
Determinazione di virus citopatici . Colorare due mono- presenza di microrganismi vivi.
strati di almeno 6 cm ciascuno con un appropriato
2
Alla fine di questo periodo di 14 giorni, sottoporre le
colorante per cellule. L'intera superficie di ciascun cellule inoculate ai seguenti controlli:
monostrato colorato viene esaminata per evidenziare
la presenza di corpi inclusi, di un numero anormale di ^ assenza di microrganismi citopatici ed emoadsor-
cellule giganti o di altre lesioni indicative di un'anoma- benti, utilizzando i metodi specificati ai paragrafi
lia cellulare che potrebbe essere attribuibile ad un con- principali precedentemente riportati;
taminante. ^ assenza di pestivirus e di altri specifici contami-
Determinazione di virus emoadsorbenti . Lavare alcune nanti, mediante immunofluorescenza o altri
volte, con un'appropiata soluzione tampone, mono- metodi convalidati come indicato al paragrafo pre-
strati aventi una superficie totale di almeno 70 cm2 e cedentemente riportato sulla Determinazione di
aggiungere un volume di un'appropriata sospensione virus specificati.

548
 Colture cellulari per la produzione di vaccini per uso veterinario

inoizircserP
.Valutare il rischio di una linea cellulare Tabella 5.2.4.-2. - Stadi di sviluppo della coltura cellulare

ilareneG
Tumorigenicita©

nei confronti della specie bersaglio e, se necessario, ai quali devono essere effettuati i saggi.
effettuare saggi appropriati.
Semenza Semenza
Piu© alto livello
cellulare cellulare

isilanA id
di passaggio

idoteM
primaria di lavoro

CELLULE PRIMARIE
Microscopia ge- + + +
Per la maggior parte dei vaccini destinati ai mammiferi, nerale
l'impiego di cellule primarie per la produzione di vac- Batteri e funghi + + -

irotinetnoC
/ ilairetaM
cini non e© accettabile in quanto possono essere utiliz- Micoplasmi + + -
zate linee cellulari. Se non vi sono alternative all'uso di Virus + + -
cellule primarie, le cellule devono essere ottenute da Identificazione + - -
animali provenienti da allevamenti esenti da microrga- della specie
nismi patogeni specificati, dotati di sistemi di prote-
zione totale nei confronti dell'introduzione di malattie

ivittaeR
(per esempio barriere, filtri per l'aria in entrata, ade- Caratteristiche della coltura . Descrivere l'aspetto dei
guata quarantena prima dell'introduzione degli ani- monostrati cellulari, prima e dopo la colorazione isto-
mali). Gli allevamenti di polli soddisfano ai requisiti logica. Fornire informazioni, se possibile dati numerici,
prescritti nel capitolo Allevamenti di polli esenti da in particolare sulla velocita© e il grado di crescita. Ana-

itnemogrA
logamente specificare la presenza o l'assenza di inibi-

ilareneG
patogeni specificati per la produzione e il controllo di zione da contatto, di cellule polinucleate e di ogni altra
qualita© dei vaccini (5.2.2). Per tutte le altre specie deve anomalia cellulare.
essere dimostrata, sia nei confronti degli animali che
nei confronti degli allevamenti di origine, l'assenza dei Identificazione della . Si deve dimostrare
specie

principali patogeni specificati. Tutti i riproduttori degli mediante un saggio convalidato, che la semenza cellu-

eifargonoM

ilareneG
allevamenti destinati ad essere utilizzati per la produ- lare primaria deriva dalla specie di origine specificata.
zione di cellule primarie per la produzione del vaccino Quando si effettua un saggio di fluorescenza utiliz-
sono sottoposti a procedure di monitoraggio idonee zando il corrispondente siero nei confronti della specie
che comprendono regolari controlli sierologici effet- di origine delle cellule e si dimostra che tutte le cellule

ehcituecamraF
tuati almeno due volte all'anno e due controlli sierolo- sottoposte a saggio sono fluorescenti, non e© necessario

emroF
gici supplementari effettuati sul 15 per cento dei ripro- effettuare altri saggi con reattivi in grado di evidenziare
duttori nell'intervallo di tempo compreso tra i due pre- la contaminazione da parte di cellule di altre specie.
cedenti controlli.
. Le cellule soddi-
Se possibile, in particolare per le cellule di mammiferi,
Contaminazione batterica e fungina

sfano al saggio di sterilita© (2.6.1). Il campione di cellule

eiretaM
usare un sistema di lotto di semenza, per esempio, una

emirP
da esaminare e© costituito almeno dal numero di cellule
semenza cellulare primaria allestita dopo meno di 5 presenti in un monostrato avente una superficie di
passaggi, una semenza cellulare di lavoro allestita con 70 cm2 o, nel caso di cellule in sospensione, da un
cellule che hanno subito non piu© di 5 passaggi dalla pre- numero di cellule approssimativamente corrispondente.
ehcituecamraF

parazione iniziale della sospensione di cellule derivata

inoizaraperP

Le cellule sono mantenute in coltura per almeno 15

ehcificepS

dai tessuti dell'animale. giorni senza antibiotici prima di effettuare il saggio.

Ciascuna semenza cellulare primaria, semenza cellulare Micoplasmi ( 2.6.7). Le cellule soddisfano al saggio dei
di lavoro e le cellule al piu© alto livello di passaggio delle micoplasmi. Le cellule sono mantenute in coltura per
ehcitapoemO

cellule primarie sono controllate secondo lo schema

inoizaraperP

almeno 15 giorni senza antibiotici prima di effettuare

riportato alla Tabella 5.2.4.-2 e la procedura descritta il saggio.
di seguito. Il campione sottoposto a saggio deve com- . Le cellule non devono
prendere tutte le fonti di cellule utilizzate per la produ- Assenza di virus contaminanti

essere contaminate da virus; effettuare saggi opportu-

zione del lotto. Non puo© essere rilasciato nessun lotto namente sensibili, compresi quelli prescritti di seguito.
di vaccino prodotto utilizzando cellule per le quali non
siano stati ottenuti risultati soddisfacenti in tutti i con- I monostrati sottoposti a saggio devono avere una
ecidnI

trolli effettuati. superficie di almeno 70 cm2 e devono essere preparati

549
Sostanze di origine animale per la produzione di vaccini per uso veterinario

e mantenuti usando un terreno di coltura ed additivi e cellulari. Inoculare aliquote di cellule nelle cellule di
fatti sviluppare nelle stesse condizioni di quelle utiliz- seguito riportate, in qualunque momento prima del
zate per la preparazione del vaccino. raggiungimento di una confluenza corrispondente al
I monostrati sono mantenuti in coltura per un totale di
70 per cento:
almeno 28 giorni o per il periodo piu© lungo possibile se ^ cellule primarie della specie di origine;
il mantenimento in coltura per 28 giorni e© impossibile. ^ cellule sensibili ai virus patogeni per le specie cui e©
Allestire delle sottocolture a intervalli di 7 giorni; nel destinato il vaccino;
caso in cui le cellule non sopravvivano per periodi cos|©
lunghi, le sottocolture devono essere allestite il piu© tardi ^ cellule sensibili ai pestivirus.
possibile. Produrre cellule in quantita© sufficiente, in Mantenere in coltura le cellule inoculate per almeno
contenitori idonei, per la sottocoltura finale sulla quale 7 giorni; preparare quindi degli estratti per congela-
si effettuano i saggi specificati di seguito. mento e scongelamento nel modo precedentemente
Esaminare i monostrati regolarmente durante il descritto ed inocularli in un numero sufficiente di col-
periodo di incubazione per evidenziare l'eventuale pre- ture recenti dello stesso tipo di cellule in modo da per-
senza di effetti citopatici e, alla fine del periodo di mettere di effettuare i saggi descritti di seguito. Le cel-
osservazione degli effetti citopatici, di virus emoadsor- lule vengono incubate per almeno altri 7 giorni. Tutte
le colture vengono esaminate regolarmente per eviden-
benti e di altri virus specifici mediante immunofluore- ziare qualsiasi effetto citopatico indicativo della pre-
scenza o altri saggi idonei come indicato di seguito. senza di microrganismi vivi.
Determinazione di virus citopatici . Colorare due mono- Alla fine di questo periodo di 14 giorni, sottoporre le
strati di almeno 6 cm ciascuno con un appropriato
2
cellule inoculate ai seguenti controlli:
colorante per cellule. L'intera superficie di ciascun ^ dimostrare l'assenza di microrganismi citopatici ed
monostrato colorato viene esaminata per evidenziare emoadsorbenti usando i metodi specificati ai para-
la presenza di corpi inclusi, di in numero anormale grafi principali precedentemente descritti;
di cellule giganti o di altre lesioni indicative di un'ano-
malia cellulare che puo© essere attribuibile ad un con- ^ i substrati principali sono sottoposti a saggio per
taminante. verificare l'assenza di pestivirus e di altri specifici
. Lavare alcune contaminanti mediante immunofluorescenza o
Determinazione di virus emoadsorbenti

volte, con un'appropriata soluzione tampone, mono- altri metodi convalidati come indicato al paragrafo
precedentemente riportato Determinazione di
strati aventi una superficie totale di almeno 70 cm2 e virus specificati.
aggiungere un volume di un'appropriata sospensione
di globuli rossi sufficiente a coprire, in maniera uni-
forme, la superficie del monostrato. Esaminare le cel- 5.2.5. SOSTANZE DI ORIGINE ANIMALE PER LA

lule a diversi tempi di incubazione per evidenziare la PRODUZIONE DI VACCINI PER USO VETE-

presenza l'emoadsorbimento. RINARIO

Determinazione di virus specificati . Effettuare dei saggi Le sostanze di origine animale (ad esempio siero, tri-
per escludere la presenza di contaminanti specifici nei psina e albumina sierica) possono essere utilizzate nel
confronti della specie di origine della linea cellulare e corso della produzione di prodotti immunologici per
della specie cui e© destinato il prodotto. Preparare una uso veterinario, come componenti dei terreni di coltura
quantita© sufficiente di cellule su idonei supporti per ecc., o come costituenti aggiunti dei vaccini o come
effettuare i saggi per la ricerca di agenti specificati. diluenti. Ove possibile, si raccomanda di ridurre l'uso
Includere idonei controlli positivi in ciascun saggio. Le di queste sostanze.
cellule sono sottoposte a saggi appropriati, per esem- Sono previste alcune restrizioni all'uso di queste
pio, utilizzando anticorpi coniugati con fluoresceina o sostanze per minimizzare il rischio associato ai pato-
reattivi simili. geni che possono essere presenti nelle sostanze di ori-
Saggi su altre colture cellulari . Sono richiesti mono- gine animale.
strati aventi una superficie totale di almeno 140 cm2. ^ L'uso di sostanze di origine animale come costi-
Le cellule vengono congelate e scongelate almeno tuenti di vaccini o come diluenti non e© general-
tre volte e quindi centrifugate per rimuovere i detriti mente accettabile, ad eccezione dei casi in cui tali

550
 Sostanze di origine animale per la produzione di vaccini per uso veterinario

inoizircserP
sostanze siano sterilizzate mediante un appropriato . Dimostrare che la procedura di inattiva-

ilareneG
Inattivazione

metodo convalidato. Nei casi in cui l'impiego di tali zione prescelta e© in grado di ridurre il titolo di alcuni
sostanze si e© dimostrato essenziale e non e© possibile potenziali contaminanti presenti6 nella sostanza in
effettuare la sterilizzazione, applicare i criteri descritti questione almeno di un fattore 10 . Qualora non fosse
alla sezione Requisiti. possibile dimostrare sperimentalmente questa diminu-
zione del titolo, si devono effettuare, con risultati

isilanA id
idoteM
^ Le sostanze di origine animale utilizzate nel corso soddisfacenti, studi sulla cinetica della procedura di
della produzione vengono sottoposte ad una proce- inattivazione, considerando il possibile livello di
dura di sterilizzazione o di inattivazione convali- contaminazione.
data appropriata o sono sottoposte a saggio per La lista dei potenziali microrganismi contaminanti per

irotinetnoC
verificare l'assenza di microrganismi estranei in

/ ilairetaM
conformita© con i Requisiti indicati di seguito. Per i i quali deve essere dimostrata la capacita© della proce-
vaccini inattivati, il metodo utilizzato per l'inatti- dura di inattivazione utilizzata, deve essere appropriata
alla particolare specie di origine della sostanza. La
vazione del ceppo vaccinale puo© essere anche con- prova dell'efficacia della procedura, che deve essere
validato nei confronti dell'inattivazione di possibili riferita alle specifiche condizioni di applicazione, puo©
contaminanti derivati da sostanze di origine ani- essere rappresentata sia da dati pubblicati che da dati

ivittaeR
male. sperimentali elaborati e forniti dal produttore.
Oltre alle restrizioni descritte di seguito, i produttori Saggi . Per il controllo dell'assenza di agenti contami-
devono, nei locali di produzione dei vaccini, conside- nanti nella sostanza, le sostanze solide vengono
rare le restrizioni relative alla manipolazione di disciolte o sospese in un terreno di coltura appropriato

itnemogrA
ilareneG
sostanze di origine animale. in modo tale da ottenere una soluzione o una sospen-
Le restrizioni imposte da queste sezioni possono essere sione contenente almeno 300 g/l della sostanza da esa-
minare. Se la sostanza non e© solubile o nel caso in cui
modificate in funzione della diversa incidenza della si verificano reazioni citotossiche, utilizzare una con-
malattia nel Paese di origine e in Europa. centrazione inferiore.

eifargonoM

ilareneG
Ogni lotto di sostanza risultata contaminata da micror-
REQUISITI ganismi vivi di qualsiasi tipo viene reputato non soddi-
sfacente ed e© eliminato o sottoposto ad un ulteriore
Le sostanze di origine animale soddisfano ai requisiti processo di inattivazione e deve risultare soddisfacente.

ehcituecamraF
della Farmacopea (quando esiste una monografia perti- Assenza di virus estranei. La soluzione o la sospensione

emroF
nente). della sostanza solida o la sostanza liquida non diluita
Origine . Valutare attentamente il rischio correlato alle vengono sottoposte a saggio per escludere la presenza
malattie animali che si verificano nel Paese di origine di contaminanti mediante metodi opportunamente sen-
della sostanza e alle potenziali malattie infettive pro- sibili. Questi metodi comprendono saggi su colture cel-
prie della specie di origine, in relazione alle specie ani- lulari opportunamente sensibili, comprese le cellule pri-
eiretaM

emirP
mali cui la sostanza e© destinata. Si devono applicare marie provenienti dalla stessa specie di origine della
criteri di selezione il piu© possibile severi, in particolare sostanza in esame. Una parte delle colture cellulari e©
per sostanze da usare per allestire prodotti destinati alle sottoposta ad almeno due passaggi. ehcituecamraF

stesse specie animali da cui la sostanza deriva e per le Osservare le cellule regolarmente per 21 giorni per evi-
inoizaraperP

ehcificepS

sostanze di origine bovina, caprina, ovina e suina. denziare gli effetti citopatici. Ogni 7 giorni, una parte
. Le sostanze di origine animale devono delle colture cellulari di partenza viene fissata, colorata
Preparazione

essere preparate da un lotto omogeneo individuato da ed esaminata per evidenziare la comparsa di effetti cito-
un numero. Un lotto puo© contenere sostanze derivanti patici; una parte e© saggiata per evidenziare la presenza
di agenti emoadsorbenti ed un'altra parte e© saggiata
ehcitapoemO
inoizaraperP

da diversi animali, ma una volta che esso e© stato defi- per evidenziare agenti specifici mediante appropriati
nito e ad esso e© stato attribuito un numero di lotto, saggi siero-diagnostici.
non deve essere aggiunto null'altro o non deve essere
contaminato in alcun modo. Contaminazione batterica e fungina. Prima dell'uso le
sostanze sono sottoposte al saggio di sterilita© (2.6.1), di
Tutti i lotti di sostanze devono essere esenti da contami- assenza di micoplasmi (2.6.7) o sterilizzate per inatti-
nanti come descritto di seguito e/o sono sottoposti a
ecidnI

vare qualsiasi contaminante batterico, fungino o mico-

procedure di inattivazione convalidate. plasmico.

551
Valutazione dell'innocuita© dei vaccini per uso veterinario

5.2.6. VALUTAZIONE DELL'INNOCUITAé DEI scono che il materiale di partenza da cui il prodotto
VACCINI PER USO VETERINARIO deriva puo© rappresentare un fattore di rischio. Nei casi
Nel corso dello sviluppo del vaccino effettuare saggi di prescritti in una monografia vengono studiati la fun-
innocuita© sulla specie bersaglio allo scopo di mettere zione riproduttiva nei maschi, nelle femmine gravide e
in evidenza i rischi derivanti dall'uso del vaccino. I vac- non, gli effetti dannosi sulla progenie, compresi quelli
cini vivi devono essere preparati solo da ceppi di teratogeni e abortigeni.
microrganismi dei quali e© stata dimostrata l'innocuita© . Innocuita© della somministrazione di una dose in eccesso .
Nei saggi, il termine ``dose'' indica la quantita© di pro- Somministrare una dose in eccesso del prodotto, attra-
dotto raccomandata per l'uso e contenente il titolo verso ciascuna via di somministrazione raccomandata,
massimo o l'attivita© biologica che si presume sia conte- ad animali appartenenti alle categorie piu© sensibili delle
nuta nei lotti di produzione. Nel caso dei vaccini vivi, specie bersaglio, compresi gli animali dell'eta© minima e
utilizzare per i saggi un lotto o piu© lotti di vaccino pre- gli animali gravidi, se del caso. La dose in eccesso con-
parati dal passaggio meno attenuato che viene utiliz- siste, generalmente, di 10 dosi di vaccino vivo o di 2
zato per la produzione. dosi di un prodotto inattivato. Gli animali vengono
Dimostrare l'innocuita© di ciascuna delle componenti tenuti in osservazione ed esaminati per evidenziare i
dei vaccini associati e l'innocuita© dei prodotti associati. segni di reazioni locali o generali. Si registrano altri cri-
Nel caso dei vaccini inattivati, i saggi di innocuita© effet- teri obiettivi, come la temperatura rettale (per i mam-
tuati sul vaccino associato possono essere considerati miferi) e le prestazioni funzionali. Gli animali vengono
sufficienti a dimostrare l'innocuita© delle singole compo- tenuti in osservazione ed esaminati per almeno 14
nenti. giorni dopo la somministrazione.
I saggi descritti di seguito, modificati o integrati da Innocuita© della somministrazione ripetuta di una dose

. Puo© essere richiesta la somministrazione ripe-

saggi descritti alla sezione Produzione di una specifica singola

tuta di una dose singola allo scopo di individuare gli

monografia, possono essere effettuati come parte dei effetti collaterali provocati da una tale somministra-
saggi necessari, nel corso dello sviluppo, per dimostrare zione. Effettuare questi saggi sulle categorie di animali
l'innocuita© di un vaccino. piu© sensibili delle specie bersaglio, attraverso la via di
A. SAGGI DI LABORATORIO somministrazione raccomandata. Gli animali vengono
tenuti in osservazione per almeno 14 giorni dopo l'ul-
Innocuita© della somministrazione di una dose singola . tima somministrazione per evidenziare i segni di rea-
Somministrare una dose di vaccino, attraverso ciascuna zioni locali o generali. Si registrano altri criteri obiettivi
via di somministrazione raccomandata, ad animali di valutazione come la temperatura rettale (per i mam-
recettivi di ciascuna specie e categoria per le quali si miferi) e le prestazioni funzionali.
raccomanda l'uso del vaccino. Il saggio deve compren- . Generalmente non e© necessario intraprendere
dere animali dell'eta© minima raccomandata ed animali
Residui

uno studio relativo ai residui. Comunque, nel caso ven-

gravidi, se del caso. Gli animali sono mantenuti in gano utilizzati adiuvanti e/o conservanti nella produ-
osservazione ed esaminati per evidenziare i segni di rea- zione dei vaccini veterinari, si deve considerare la possi-
zioni anormali locali o sistemiche. Se del caso, questi bilita© che rimangano residui di questi componenti nei
studi comprendono dettagliati esami post-mortem prodotti alimentari che si ricavano dagli animali trat-
macroscopici e microscopici del punto di inoculazione; tati. Se necessario, studiare gli effetti di tali residui.
questi esami non sono generalmente necessari per gli Inoltre, nel caso di vaccini vivi per malattie zoonotiche
animali da cui non si ricavano alimenti destinati ben conosciute, puo© essere richiesta la determinazione
all'uomo. Si registrano altri criteri obiettivi, come la dei microrganismi vaccinali residui nel punto di inocu-
temperatura rettale (per i mammiferi) e le prestazioni lazione oltre agli studi di disseminazione descritti di
funzionali. La temperatura rettale viene registrata seguito.
almeno il giorno prima della vaccinazione, al momento
della vaccinazione, 4 ore dopo la vaccinazione e nei 4 Effetti collaterali sulle funzioni immunitarie . Effettuare
giorni successivi a questa. Gli animali vengono tenuti saggi idonei sulle funzioni immunitarie nel caso in
in osservazione ed esaminati fino a quando si puo© cui il vaccino possa avere effetti indesiderati sulla rispo-
escludere la comparsa di reazioni, ma in tutti i casi, il sta immunitaria dell'animale vaccinato o sulla sua
periodo di osservazione e di controllo si protrae per progenie.
almeno 14 giorni dopo la somministrazione. . I seguenti saggi di
Requisiti particolari per i vaccini vivi

Considerare come parte di questi studi anche l'esame laboratorio devono essere effettuati nel caso di vaccini
della funzione riproduttiva nel caso in cui i dati suggeri- vivi.

552
 Valutazione dell'innocuita© dei vaccini per uso veterinario

inoizircserP
(a) Diffusione del ceppo vaccinale. La diffusione del numero di animali. Almeno per il passaggio finale uti-

ilareneG
ceppo vaccinale dagli animali vaccinati agli animali lizzare gli animali piu© idonei alla dimostrazione del
delle specie bersaglio non vaccinati viene studiata uti- potenziale rischio da valutare.
lizzando la via di somministrazione riconosciuta piu© (d) Proprieta© biologiche del ceppo vaccinale. Possono
idonea per la possibilita© di diffusione del ceppo vacci- essere necessari altri saggi per determinare nel modo
nale. Inoltre, puo© essere necessario studiare l'innocuita©

isilanA id
idoteM
della diffusione del ceppo vaccinale in specie non bersa- piu© preciso possibile le proprieta© biologiche intrinseche
glio che possono essere altamente recettive al ceppo del ceppo vaccinale (per esempio, il neurotropismo).
vaccinale vivo. Fornire una valutazione del numero di Per i vaccini a base di vettori, viene valutato il rischio
passaggi che possono verificarsi tra animale ed animale di un eventuale cambiamento del tropismo o della viru-
lenza del ceppo e, se necessario, si effettuano saggi spe-

irotinetnoC
nelle condizioni normali e delle possibili conseguenze.

/ ilairetaM
cifici. Questi saggi sono effettuati sistematicamente nel
(b) Disseminazione nell'animale vaccinato. Effettuare caso in cui il prodotto di un gene estraneo e© incorporato
saggi su feci, urina, latte, uova, secrezioni orali, nasali in un ceppo sotto forma di proteina strutturale.
ed altre secrezioni per verificare l'eventuale presenza (e) Ricombinazione o riassortimento genomico del ceppo.
del microrganismo vaccinale. Inoltre, possono essere Considerare la probabilita© di ricombinazione o di rias-

ivittaeR
richiesti studi relativi alla disseminazione del ceppo sortimento genomico tra il ceppo vaccinale ed il ceppo
vaccinale nell'organismo, con particolare attenzione ai di campo o altri ceppi.
principali siti di replicazione del microrganismo. Questi
studi sono obbligatori nel caso di vaccini vivi per malat-
tie zoonotiche ben conosciute destinati ad animali da

itnemogrA
ilareneG
cui si ricavano alimenti. B. STUDI SUL CAMPO
(c) Recupero o aumento della virulenza. Per i vaccini Generalmente, i risultati dei saggi di laboratorio sono
attenuati, usare il materiale proveniente dal passaggio integrati con dati di supporto derivati dagli studi con-
meno attenuato per le specie bersaglio compreso tra il dotti sul campo.

eifargonoM

ilareneG
lotto di semenza primario ed il prodotto finale. Per altri In caso di mammiferi da cui si ricavano alimenti, gli
vaccini vivi usare il materiale proveniente dal passaggio studi comprendono la misurazione della temperatura
che, verosimilmente, ha la massima virulenza per la rettale di un numero sufficiente di animali, prima e
specie bersaglio. La prima vaccinazione e© effettuata dopo la vaccinazione; per altri mammiferi, tali misura-

ehcituecamraF
attraverso la via di somministrazione raccomandata zioni sono effettuate nel caso in cui i saggi di laborato-
che con maggiore probabilita© puo© portare ad un recu- rio abbiano indicato la possibilita© di eventuali pro-

emroF
pero della virulenza. Dopo il primo passaggio, si effet- blemi. Si registra la dimensione e la persistenza di qual-
tuano almeno altri 5 passaggi seriali negli animali delle siasi reazione locale e la percentuale di animali in cui
specie bersaglio. Nel caso in cui questo non sia tecnica- si sono verificate reazioni locali o generali. Se del caso,
mente possibile poichë il microrganismo vaccinale non effettuare misurazioni delle prestazioni funzionali degli
e© in grado di replicarsi in maniera adeguata, il saggio animali.
eiretaM

emirP
viene ripetuto effettuando il maggior numero di pas-
saggi possibili nelle specie bersaglio. Se necessario, puo©
essere effettuata una propagazione in vitro del micror-
ganismo tra due passaggi in vivo. I passaggi sono effet- C. ECOTOSSICITAé
ehcituecamraF
inoizaraperP

tuati attraverso la via di somministrazione che con

ehcificepS

maggiori probabilita© puo© portare al recupero della viru- Effettuare una valutazione dei potenziali effetti nocivi
lenza. Per ciascun passaggio sono utilizzati almeno 2 del vaccino sull'ambiente ed identificare tutte le precau-
animali recettivi. Ad ogni passaggio viene dimostrata zioni necessarie a limitare tali rischi. Valutare il proba-
la presenza di microrganismi vivi derivanti dal vaccino bile grado di esposizione dell'ambiente al vaccino con-
ehcitapoemO
inoizaraperP

nel materiale utilizzato per il passaggio. Confrontare siderando: le specie bersaglio e le modalita© di sommini-
l'innocuita© del materiale proveniente dal passaggio piu© strazione; l'eliminazione del prodotto dall'organismo;
elevato effettuato con successo con quella del materiale lo smaltimento del vaccino non utilizzato. Nel caso in
che non ha subito alcun passaggio. cui tali fattori indicano che esiste un significativo grado
di esposizione dell'ambiente al prodotto, valutare la
Per particolari virus, nel caso in cui i dati disponibili ne potenziale ecotossicita© considerando le caratteristiche
ecidnI

dimostrino l'importanza, una monografia puo© preve- del vaccino determinate, ad esempio, nei saggi descritti
dere un numero maggiore di passaggi in un maggior in questo paragrafo.

553
Minimizzazione del rischio di trasmettere le encefalopatie spongiformi animali

5.2.7. VALUTAZIONE DELL'EFFICACIA DEI VAC- SAGGI DI LABORATORIO

In linea di principio, procedere alla dimostrazione del-
CINI PER USO VETERINARIO

Nel corso dello sviluppo di un vaccino, sono effettuati l'efficacia in condizioni di laboratorio ben controllate,
dei saggi allo scopo di dimostrare che il vaccino e© effi- mediante infezione sperimentale successiva alla sommi-
cace attraverso tutte le vie di somministrazione racco- nistrazione del prodotto all'animale della specie bersa-
mandate e secondo i metodi di vaccinazione e lo glio nelle condizioni d'uso raccomandate. Effettuare
schema di vaccinazione raccomandato per gli animali l'infezione sperimentale utilizzando un ceppo diverso
di ciascuna specie e categoria cui il vaccino e© raccoman- da quello utilizzato nella produzione del vaccino. Nei
dato. Le modalita© di determinazione dell'efficacia limiti del possibile, le condizioni di esecuzione dell'infe-
variano in maniera considerevole a seconda del partico- zione sperimentale devono riprodurre le condizioni
lare tipo di vaccino. naturali dell'infezione, ad esempio, per cio© che concerne
Come parte o in aggiunta ai saggi effettuati durante le la quantita© e la via di somministrazione del microrgani-
fasi di sviluppo per stabilire l'efficacia, possono essere smo infettante.
effettuati i saggi descritti alla sezione Produzione di Se possibile, determinare il meccanismo immunitario
una specifica monografia; i saggi riportati di seguito che viene innescato in seguito alla somministrazione
devono essere presi in considerazione. del vaccino agli animali bersaglio (immunita© cellulo-
La dose da utilizzare corrisponde alla quantita© di pro- mediata/umorale, locale/generale, classi di immuno-
dotto che viene raccomandata per l'uso e che contiene globuline prodotte).
il titolo minimo o l'attivita© biologica presunti alla fine
del periodo di validita© . SPERIMENTAZIONI SUL CAMPO
Per i vaccini vivi, utilizzare un vaccino preparato dal Generalmente, i risultati dei saggi di laboratorio sono
passaggio piu© attenuato utilizzato per la produzione. integrati con i dati derivanti da sperimentazioni sul
Fornire prove dell'efficacia a supporto di tutte le indica- campo effettuate con animali di controllo non trattati.
zioni del prodotto. Ad esempio, le indicazioni circa il Nel caso in cui i saggi di laboratorio non siano in grado
conferimento di protezione nei confronti di malattie di fornire indicazioni a sostegno dell'efficacia del vac-
respiratorie devono essere supportate almeno dalla cino, puo© essere considerata accettabile esclusivamente
dimostrazione della protezione nei confronti della sin- l'esecuzione delle sperimentazioni sul campo.
tomatologia clinica dovuta a malattie respiratorie. Nel
caso in cui viene dichiarato il conferimento di prote-
zione nei confronti di un'infezione, questo aspetto deve 5.2.8. MINIMIZZAZIONE DEL RISCHIO DI TRA-

essere dimostrato mediante tecniche di reisolamento SMETTERE GLI AGENTI DELLE ENCEFA-

dell'agente responsabile dell'infezione. In caso di piu© LOPATIE SPONGIFORMI ANIMALI TRA-

indicazioni del vaccino, sono richieste prove di efficacia MITE PRODOTTI MEDICINALI

per ciascuna indicazione.

Valutare adeguatamente l'influenza, sull'efficacia del 1. OSSERVAZIONI GENERALI
vaccino, degli anticorpi derivanti da immunita© passiva
e di origine materna. Tutte le indicazioni, dichiarate o 2. SCOPO DEL CAPITOLO GENERALE
implicite, riguardanti l'instaurarsi e la durata della pro-
tezione devono essere supportate da dati sperimentali. 3. PRODUZIONE (COMPRESA LA RACCOLTA
L'efficacia di ciascun componente di prodotti poliva- DEI MATERIALI DI PARTENZA)
lenti ed associati viene dimostrata utilizzando il vaccino 3.1. Animali usati come fonte di materie di partenza
associato.
Effettuare studi relativi alla compatibilita© immunolo- 3.2. Parti del corpo di animali, fluidi corporei e secre-
gica nei casi in cui viene raccomandata la somministra- zioni usati come materie di partenza
zione contemporanea o nel caso in cui un determinato 3.3. Convalida del processo
vaccino rappresenti una parte di un usuale schema vac-
cinale. Quando un prodotto e© raccomandato come 3.4. Eta© degli animali
parte di uno schema vaccinale si deve dimostrare l'ef-
fetto primario o di richiamo del vaccino o il contributo 3.5. Prodotti specifici
del prodotto all'efficacia dell'intero schema di vaccina-
zione. 4. CONCLUSIONI

554
 Minimizzazione del rischio di trasmettere le encefalopatie spongiformi animali

inoizircserP
1. OSSERVAZIONI GENERALI e di singoli allevamenti. E' chiaro che la BSE e© un'infe-

ilareneG
Le encefalopatie spongiformi trasmissibili (TSE) com- zione trasmessa con l'alimentazione. Casi di BSE si
prendono lo scrapie della pecora e della capra, la malat- sono verificati anche in altri Paesi sia in animali impor-
tia cronica devastante di cervi ed alci, l'encefalopatia tati al Regno Unito che in animali del luogo. Poichë le
spongiforme bovina (BSE) ed anche il kuru e la malat- proprieta© biologiche dell'agente della BSE differiscono
da quelle dello scrapie, e© plausibile che differiscano

isilanA id
idoteM
tia di Creutzfeldt-Jakob (MCJ) dell'uomo. Gli agenti anche le barriere tra le specie.
che causano queste malattie si replicano nei soggetti Vi sono dati convincenti che dimostrano che la nuova
infetti generalmente senza che l'infezione sia rivelabile variante della MCJ e© causata dall'agente responsabile
con saggi diagnostici applicabili in vivo. Dopo periodi della BSE nei bovini. La comparsa di questa nuova
di incubazione che possono arrivare a svariati anni,

irotinetnoC
forma di MCJ nell'uomo ha rafforzato la preoccupa-

/ ilairetaM
questi agenti causano la malattia ed infine la morte. zione che l'agente della BSE possa essere trasmesso
Non si conosce alcun mezzo terapeutico. all'uomo. Quindi la prudenza deve essere sempre pre-
La diagnosi si basa sui segni clinici con conferma post sente quando per la produzione di prodotti medicinali
mortem mediante osservazione istopatologica delle sono usati i materiali biologici derivati da specie affette
lesioni cerebrali caratteristiche o mediante rivelazione da queste malattie (eccetto che per infezione sperimen-

ivittaeR
delle proteine fibrillari specifiche delle encefalopatie tale), in particolare le specie bovine.
spongiformi. La dimostrazione dell'infettivita© , me- Le raccomandazioni riportate di seguito devono essere
diante inoculazione del tessuto sospetto in specie bersa- seguite per minimizzare il rischio di contaminazione.
glio o in animali di laboratorio, puo© essere usata per la Nonostante questo capitolo generale, si deve sottoli-
conferma ma il periodo di incubazione e© di mesi o anni. neare che i rischi potenziali associati ad un dato pro-

itnemogrA
ilareneG
Sono stati segnalati casi di trasmissione iatrogena delle dotto medicinale dovranno essere considerati singolar-
encefalopatie spongiformi. Nella pecora, lo scrapie e© mente alla luce delle circostanze specifiche e delle cono-
stato trasmesso accidentalmente in seguito all'uso di scenze correnti.
un vaccino contro il virus Louping Ill preparato da
una miscela di cervelli e milze di ovini trattati con for- 2. SCOPO DEL CAPITOLO GENERALE

eifargonoM
maldeide, nella quale era stato inavvertitamente incor-

ilareneG
porato del tessuto proveniente da una pecora infetta Questo capitolo generale considera le implicazioni che
da scrapie. Nell'uomo sono stati descritti casi di tra- le TSE hanno per i prodotti medicinali per uso umano
smissione della MCJ dovuti alla somministrazione e veterinario e le misure per ridurre al minimo il rischio
parenterale ripetuta dell'ormone della crescita e di di trasmissione attraverso il loro uso. Questo capitolo

ehcituecamraF
gonadotropine derivate dall'ipofisi di cadaveri umani. si applica quindi a materiali di origine animale in parti-
colare a quelli ottenuti da ruminanti, che sono usati

emroF
Casi di MCJ sono stati anche attribuiti all'uso di stru- per la preparazione di:
menti contaminati in chirurgia cerebrale e al trapianto ^ sostanze attive,
di meningi e cornea umane.
Le informazioni sulle caratteristiche di questi agenti ^ eccipienti,
sono limitate. Essi sono estremamente resistenti alla ^ materie prime o di partenza e reattivi usati nella pro-

eiretaM

emirP
maggior parte dei trattamenti fisici o chimici che inatti- duzione (per es. albumina sierica bovina, enzimi, ter-
vano i virus convenzionali. Essi non inducono una reni di coltura compresi quelli per preparare banche
risposta immunitaria rilevabile. Esistono barriere natu- cellulari di lavoro o nuove banche cellulari primarie).
rali che limitano la diffusione delle infezioni tra le spe- Questo capitolo generale si applica anche ai materiali
ehcituecamraF

che entrano in contatto diretto con l'apparecchiatura

inoizaraperP

cie, ma esse possono essere superate in circostanze

ehcificepS

appropriate che dipendono generalmente dal ceppo usata nella produzione (e quindi potenziali contami-
infettante, dalla dose di infettivita© , dalla via di esposi- nanti), per esempio, nei terreni di saggio usati nella con-
zione e dalle dimensioni della barriera tra le specie. valida degli impianti e della apparecchiatura.
Studi su animali di laboratorio hanno dimostrato che Questo capitolo generale si riferisce al materiale che
ehcitapoemO
inoizaraperP

l'inoculazione intracerebrale e© la via piu© efficace. deriva da tutti i ruminanti. Le misure proposte si appli-
L'uomo e© esposto naturalmente all'agente infettivo cano in particolare a materiali di origine bovina e puo©
dello scrapie della pecora da almeno 200 anni ma nes- essere necessario adattarle per i materiali che derivano
suno degli estesi studi epidemiologici effettuati ha per- dalle pecore, dalle capre e da altre specie note per essere
messo di svelare segni di trasmissione dello scrapie nel- suscettibili alla TSE ad eccezione di quegli animali che
l'uomo. L'encefalopatia spongiforme bovina e© stata sono suscettibili solo per via sperimentale.
ecidnI

riscontrata per la prima volta nel Regno Unito nel Alla luce dell'attuale conoscenza scientifica e a prescin-
1986. Sono stati infettati un grande numero di mucche dere dall'origine geografica, il latte non presenta proba-

555
Minimizzazione del rischio di trasmettere le encefalopatie spongiformi animali

bilmente alcun rischio di contaminazione TSE. Percio© il ^ l'origine degli animali,

latte ed i prodotti derivati esclusivamente dal latte non ^ la natura del tessuto animale usato nella produzione,
rientrano nel campo di applicazione di questo capitolo ^ il/i processo/i di produzione.
generale, a condizione che il latte provenga da animali
sani e soddisfi alle stesse condizioni del latte raccolto Nessun singolo approccio puo© garantire con certezza la
per il consumo umano*. sicurezza di un prodotto e quindi puo© essere necessario
I derivati del latte dei ruminanti preparati con l'uso di ricorrere ai tre approcci in modo complementare per
altri materiali sempre provenienti da ruminanti (come minimizzare il rischio di contaminazione.
ad esempio gli enzimi pancreatici) non sono esclusi
dallo scopo di questo capitolo generale proprio a 3.1. ANIMALI USATI COME FONTE DI MATERIE DI
seguito della utilizzazione di questi ultimi materiali. PARTENZA
I derivati della lana e del pelo dei ruminanti cos|© come L'accurata selezione delle materie di partenza e© il crite-
la lanolina, gli alcooli di lanolina, gli aminoacidi sono rio piu© importante per la sicurezza dei prodotti medici-
esclusi dall'applicazione di questo capitolo generale a nali.
condizione che la lana e i peli siano prelevati da animali 3.1.1. I materiali di partenza piu© soddisfacenti proven-
vivi. I derivati della lana e del pelo preparati a partire gono da Paesi in cui non sono stati riportati casi di
da altri materiali ottenuti da ruminanti (per esempio BSE e che hanno:
gli enzimi pancreatici) non sono esclusi dall'applica-
zione di questo capitolo a causa dell'uso di questi altri ^ una notifica obbligatoria e
materiali ottenuti dai ruminanti. ^ la verifica clinica e di laboratorio obbligatoria per i
Questo capitolo generale deve essere considerato casi sospetti.
insieme alle diverse Decisioni della Commissione del- La certificazione ufficiale dell'origine deve essere dispo-
l'Unione Europea progressivamente emanate dal 1991. nibile. Inoltre, si deve assicurare che un rischio di infe-
zione da BSE non sia introdotto dai seguenti fattori:
öööö ^ l'importazione di bovini da Paesi in cui si e© verificata
*Per la valutazione e la minimizzazione del rischio associato all'uso di un'alta incidenza di BSE,
medicinali veterinari destinati ai ruminanti, si devono considerare fat- ^ l'importazione della progenie di femmine infette,
tori addizionali applicabili specificatamente a queste specie.
^ l'uso nei mangimi per i ruminanti di farine di carne e
3. PRODUZIONE (COMPRESA LA RACCOLTA di ossa contenenti qualsiasi proteina di ruminanti
DEI MATERIALI DI PARTENZA) che provengono da Paesi con una alta o bassa inci-
Quando i produttori di medicinali possono scegliere tra denza di BSE o dei quali non si conosce lo stato epi-
l'uso di materiali ottenuti da ruminanti o da non-rumi- demiologico per la BSE.
nanti, si deve preferire l'uso di materiale che non pro- 3.1.2. I materiali possono anche provenire da Paesi in
viene dai ruminanti. La sostituzione di materiali di par- cui si e© verificato un numero basso di casi indigeni, se
tenza derivanti dai ruminanti con prodotti ottenuti da oltre ai fattori del paragrafo 3.1.1:
altre specie che possono essere affette da TSE o pos- ^ vengono distrutte le carcasse di tutti gli animali
sono essere infettate sperimentalmente per via orale, infetti,
non e© generalmente accettabile. ^ non sia usata la progenie delle femmine infette,
Nella richiesta di autorizzazione all'immissione in com- ^ siano proibite le proteine derivanti da mammiferi nei
mercio il richiedente deve fornire tutti i dettagli sull'ori- mangimi per i ruminanti.
gine dei materiali (compresa l'origine geografica dell'a-
nimale) e le misure adottate per ridurre al minimo il Gli animali dai quali derivano i materiali dovrebbero
rischio di trasmissione degli agenti della TSE. Il produt- essere nati dopo l'introduzione del divieto di usare
tore di medicinali deve controllare i fornitori di questi farine di carne ed ossa. Se non e© nota la data di nascita,
materiali al fine di assicurare che questi materiali siano si deve considerare sia la data di entrata in vigore di tale
raccolti e manipolati in conformita© con questo capitolo divieto che il periodo di incubazione della TSE per
generale e con gli appropriati sistemi di controllo di valutare la sicurezza dell'origine.
qualita© . Gli allevamenti con casi di BSE non devono essere uti-
Il rischio di trasmissione degli agenti infettivi puo© lizzati.
essere ridotto in modo significativo attraverso il con- 3.1.3. Non devono essere utilizzate le materie di par-
trollo di un certo numero di parametri. Questi parame- tenza provenienti da Paesi con un'alta incidenza di
tri comprendono: BSE.

556
 Minimizzazione del rischio di trasmettere le encefalopatie spongiformi animali

inoizircserP
Parallelamente a queste misure, i richiedenti l'autoriz- ^ in alcune situazioni si potrebbe avere una contamina-

ilareneG
zazione all'immissione in commercio di medicinali zione crociata tra tessuti appartenenti a differenti
devono giustificare la loro strategia di approvvigiona- categorie di infettivita© . Il rischio potenziale sara©
mento in relazione alla categoria di animali, alla quan- influenzato dalle circostanze nelle quali i tessuti sono
tita© della materia di partenza e all'uso previsto nel- prelevati, in particolare dal contatto tra i prodotti di
l'uomo per il prodotto medicinale finito. Nei Paesi for- un gruppo a basso rischio con quelli di un gruppo

isilanA id
idoteM
nitori di materie di partenza, la provenienza di queste ad alto rischio. Quindi l'infettivita© di alcuni tessuti
ultime da allevamenti ben monitorati, costituisce un puo© aumentare se gli animali infetti sono abbattuti
ulteriore margine di sicurezza. mediante proiettile captivo del cervello o se il cer-
vello e il midollo spinale sono tagliati con la sega. Il

irotinetnoC
rischio di contaminazione crociata sara© ridotto se i

/ ilairetaM
3.2. PARTI DEL CORPO DI ANIMALI, FLUIDI CORPO- fluidi corporei sono raccolti con la minima lesione
REI E SECREZIONI USATI COME MATERIE DI PAR-
TENZA dei tessuti e i componenti cellulari sono eliminati e
se il sangue fetale e© raccolto senza contaminazione
In un animale infettato da TSE, i diversi organi e le con altri tessuti della madre o con tessuti fetali come
diverse secrezioni hanno livelli di infettivita© differenti. la placenta e i fluidi amniotico ed allantoideo,

ivittaeR
Sulla base dei dati dello scrapie naturale, gli organi, i
tessuti e i fluidi sono stati classificati in quattro gruppi ^ il rischio dovuto alla contaminazione crociata
principali aventi un diverso rischio potenziale, come dipendera© da alcuni fattori complementari com-
mostrato nella tabella 5.2.8.-1. Benchë sia noto che la prendenti:
distribuzione dell'infettivita© nei bovini affetti da BSE ^ le precauzioni adottate per evitare la contamina-

itnemogrA
ilareneG
sia piu© ristretta, la classificazione dei tessuti e dei fluidi zione durante il prelievo dei tessuti (vedere sopra),
corporei come riportata nella tabella deve continuare
ad essere considerata per la selezione dei materiali di ^ i livelli di contaminazione (quantita© del tessuto
partenza. Le categorie nella tabella sono solo indicative contaminante),
ed e© importante sottolineare i punti seguenti:

eifargonoM
^ la classificazione dei tessuti riportata nella tabella ^ la quantita© del materiale che deve essere usato,

ilareneG
5.2.8.-1 si basa sulla determinazione dell'infettivita©
nei topi per via intracerebrale. Nei modelli sperimen- ^ ildurante trattamento al quale il materiale sara© sottoposto
il processo di produzione.
tali che utilizzano ceppi adattati agli animali di labo-
ratorio, si possono osservare titoli piu© alti ed una I produttori di medicinali devono presentare una valu-

ehcituecamraF
classificazione dei tessuti leggermente diversa, tazione del rischio.

emroF
Tabella 5.2.8.-1. Titoli infettivi relativi della scrapie nei tessuti e nei liquidi(1)corporei
di pecore e capre infettate naturalmente e presentanti scrapie clinica
ö
eiretaM

emirP
Categoria I Alta infettivita©

Cervello, midollo spinale, (occhio)

Categoria II ö Media infettivita©

ileo, linfonodi, colon prossimale, milza, tonsille, (dura madre, epifisi, placenta), fluido cerebro-
spinale, ipofisi, ghiandole surrenali
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Categoria III ö Bassa infettivita©

colon distale, mucosa nasale, nervi periferici, midollo osseo, fegato, polmone, pancreas, timo
Categoria IV ö (2)
Infettivita© non rilevabile

Coagulo sanguigno, feci, cuore, rene, ghiandole mammarie, latte, ovaie, saliva, ghiandole sali-
ehcitapoemO
inoizaraperP

vari,(3)vescicole seminali, siero, muscolo scheletrico, testicoli, tiroide, utero, tessuto fetale, (bile,
osso , tessuto cartilagineo, tessuto connettivo, pelo, pelle, urina)

(1) I tessuti riportati tra parentesi non sono stati titolati negli studi iniziali ma la loro infettivita© relativa e© indicata da altri dati sulle encefalopa-
tie spongiformi. I materiali non riportati possono essere classificati per analogia con quelli elencati sulla base della loro composizione.
ecidnI

(2) L'infezione non e© stata trasmessa ai roditori in seguito all'inoculazione per via intracerebrale di una quantita© fino a 5 mg.
(3) Per il cranio e le vertebre vedere anche il punto 3.2. relativo alla contaminazione crociata.

557
Minimizzazione del rischio di trasmettere le encefalopatie spongiformi animali

3.3. CONVALIDA DEL PROCESSO 3.5. PRODOTTI SPECIFICI

Ilcontrollodell'approvvigionamentoe© ilcriteriopiu© impor- ^ Ilzionesego usato come materiale di partenzaperla produ-
di derivati del sego deve essere prodotto con un
tante per ottenere una sicurezza accettabile del prodotto, metodo robusto e rigoroso quanto quelli previsti dai
a causa della documentata resistenza degli agenti delle regolamentiinternazionali. Iderivati del sego, come il
TSE alla maggior parte delle procedure di inattivazione. glicerolo e gli acidi grassi, che sono prodotti dal sego
Gli studi di convalida delle procedure di rimozione/ mediante processi rigorosi sono stati oggetto di consi-
inattivazione sono difficili da interpretare perchë e© derazioni specifiche e si ritiene poco probabile che
necessario considerare la natura del materiale contami- sianoinfettanti.Esempidiprocessirigorosisono:
nato intenzionalmente e la sua pertinenza rispetto alla ^ transesterificazione o idrolisi sotto pressione a
situazione in natura; il progetto dello studio (compresa temperatura non inferiore a 200 ‘C per almeno
la riduzione di scala dei processi) e il metodo di rileva- 20 min (produzione di glicerolo, acidi grassi e
zione dell'agente (dosaggio in vitro o in vivo) dopo la esteri di acidi grassi),
contaminazione intenzionale e dopo il trattamento. ^ saponificazione con NaOH 12 M (produzione di
Sono necessarie ulteriori ricerche per pervenire ad un glicerolo e sapone):
accordo relativo alla metodologia piu© appropriata per ^ produzione del lotto: almeno a 95 ‘C per
gli studi di convalida. Comunque attualmente gli studi almeno 3 h,
di convalida non sono generalmente richiesti. Tuttavia
se vi sono dichiarazioni circa la capacita© dei processi di ^ processo in continuo: almeno a 140 ‘C, ad una
produzione di rimuovere o inattivare gli agenti delle pressione di 2 bar (2000 hPa), per almeno
TSE, esse dovranno essere dimostrate mediante appro- 8 min, o l'equivalente.
priati studi di convalida. Gli studi di convalida devono ^ Gelatina:
essere specifici per ogni processo. ^ Per la gelatina prodotta dalle ossa dei bovini(4)
Al di la© delle limitazioni particolari che si applicano tutti i parametri riportati di seguito contribui-
agli studi di convalida per le TSE e alla loro interpreta- scono alla sicurezza di questo prodotto:
zione, la difficolta© principale e© l'identificazione delle ^ l'origine geografica degli animali,
fasi che effettivamente elimineranno o inattiveranno ^ i crani e il midollo spinale devono essere elimi-
gli agenti delle TSE durante la produzione di prodotti nati dai materiali di origine(5),
medicinali di origine biologica. I produttori devono ^ si raccomanda di eliminare anche le vertebre,
essere incoraggiati nel continuare la ricerca dei metodi in particolare in relazione all'origine geogra-
di rimozione e di inattivazione per identificare le fasi o fica degli animali,
i processi che favorirebbero la rimozione o l'inattiva- ^ il processo di produzione attualmente prefe-
zione degli agenti delle TSE. rito e© l'idrolisi alcalina,
In ogni caso, un processo di produzione se possibile, ^ devono essere attuati sistemi come la certifica-
dovrebbe essere progettato considerando le informa- zione ISO 9000 e la certificazione HACCP
zioni disponibili sui metodi che si presume inattivino o (Hazard Analysis and Critical Control Point) per
rimuovano gli agenti delle TSE. il monitoraggio del processo di produzione e per
Alcune procedure possono contribuire considerevol- la definizione del lotto (per es. definizione di
mente alla riduzione del rischio di contaminazione da lotto,separazionedeilotti,lavaggitrailotti,ecc.),
TSE, per esempio le procedure usate per la produzione ^ devono essere attuate procedure che permet-
del sego e dei suoi derivati (vedere di seguito). tano di poter risalire e verificare i fornitori
delle materie di partenza.
3.4. ETAé DEGLI ANIMALI
^ Per la gelatina prodotta a partire dalla pelle dei
bovini:
Poichë l'accumulazione dell'infettivita© delle TSE si veri- ^ deve essere evitata la contaminazione crociata
fica in un periodo di alcuni anni, puo© essere prudente con possibili materiali infettanti.
l'approvvigionamento di materie di partenza ottenute I produttori di medicinali devono presentare una valu-
da animali giovani. tazione del rischio.
(4) Sono considerate ``materiali di partenza'' le ossa prima dello sgrassaggio.
(5) Non puo© essere prevista la futura distribuzione geografica della BSE/TSE. Qualsiasi modifica della distribuzione geografica della BSE/TSE potrebbe
provocare, nel peggiore dei casi, il ritiro dei prodotti farmaceutici contenenti gelatina. A causa del grande numero di prodotti medicinali che conten-
gono la gelatina come eccipiente e della lunga vita della gelatina, dalla sua produzione fino alla data di scadenza dei prodotti farmaceutici, qualsiasi
ritiro provocherebbe delle conseguenze drammatiche in termini di approvvigionamento di prodotti medicinali essenziali. Dunque il cranio e il
midollo spinale devono essere eliminati dai materiali che derivano dalle ossa di bovini dai quali si ottiene la gelatina, qualunque sia l'origine geogra-
fica degli animali usati.

558
 Minimizzazione del rischio di trasmettere le encefalopatie spongiformi animali

inoizircserP
4. CONCLUSIONI ^ la quantita© di tessuto usato nei prodotti medicinali,

ilareneG
La valutazione del rischio associato alle TSE necessita ^ il dosaggio terapeutico massimo (dose giornaliera e
dell'attenta considerazione di tutti i parametri citati, e durata del trattamento),
l'opzione prioritaria deve essere quella di evitare, nei ^ l'uso previsto del prodotto.
prodotti fabbricati dall'industria farmaceutica, l'uso di

isilanA id
materiali ottenuti da animali che sono noti per essere I fabbricanti di prodotti medicinali di origine animale

idoteM
suscettibili alle TSE (ad eccezione di quegli animali che sono responsabili della selezione e della giustificazione
sono suscettibili solo per via sperimentale). L'accettabi- di misure adeguate. Si deve considerare lo stato cor-
lita© di un particolare prodotto medicinale che contiene rente della scienza e della tecnologia.
questi materiali, o che puo© contenerli in seguito al pro- Nonostante questo capitolo generale, si deve sottoli-

irotinetnoC
/ ilairetaM
cesso di produzione, sara© influenzata da un certo neare che i rischi potenziali associati con un dato pro-
numero di fattori compresi: dotto medicinale dovranno essere considerati singolar-
^ i documenti e le registrazioni che attestano l'origine mente alla luce delle specifiche circostanze e delle cono-
degli animali, scenze correnti.
^ la natura dei tessuti animali usati nella produzione, Queste linee guida devono essere usate anche nella

ivittaeR
^ il/i processo/i di produzione, valutazione del rapporto rischio/beneficio di un singolo
^ la via di somministrazione, prodotto.

itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI

559
 ecidnI
ilareneG isilanA id irotinetnoC ilareneG emirP ehcificepS ehcitapoemO
ilareneG ehcituecamraF
ivittaeR ehcituecamraF
inoizircserP idoteM / ilairetaM itnemogrA eifargonoM emroF eiretaM inoizaraperP
inoizaraperP
5.4. Solventi residui
563
Solventi residui . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.4.
 Solventi residui

inoizircserP
essere informata dei solventi utilizzati e, come per la

ilareneG
5.4. SOLVENTI RESIDUI
Classe 2, questa informazione e© menzionata nel certifi-
LIMITI DEI SOLVENTI RESIDUI NELLE cato di conformita© .
Nel caso siano utilizzati solventi residui di Classe 1 o di
SOSTANZE ATTIVE, NEGLI ECCIPIENTI E

NEI PRODOTTI MEDICINALI

Classe 2 (o solventi residui di Classe 3 in quantita© supe-

isilanA id
idoteM
La Conferenza Internazionale per l'Armonizzazione riore allo 0,5 per cento) deve essere applicata, dove pos-
dei Requisiti Tecnici per la Registrazione dei prodotti sibile, la metodologia descritta nel metodo generale
Farmaceutici per Uso Umano (ICH - International (2.4.24). In caso contrario deve essere utilizzato un
Conference on Harmonisation of Technical Requirements appropriato metodo convalidato.

irotinetnoC
for Registration of Pharmaceuticals for Human Use) ha

/ ilairetaM
adottato la Linea Guida delle Impurezze per i Solventi
Residui che prescrive i limiti per il contenuto dei sol- IMPUREZZE: LINEE GUIDA PER I SOLVENTI

venti che possono rimanere nelle sostanze attive, negli RESIDUI (CPMP/ICH/283/95)

eccipienti e nei prodotti medicinali dopo la fabbrica-

zione. Questa linea guida, il cui testo e© riportato di

ivittaeR
seguito, esclude i prodotti esistenti in commercio. 1. INTRODUZIONE
La Farmacopea, comunque, applica gli stessi principi 2. SCOPO DELLA LINEA GUIDA
enunciati nella linea guida alle sostanze attive esistenti,
agli eccipienti e ai prodotti medicinali, siano essi 3. PRINCIPI GENERALI

itnemogrA
ilareneG
oggetto o meno di una monografia di Farmacopea. 3.1. CLASSIFICAZIONE DEI SOLVENTI RESI-
Tutte le sostanze e i prodotti devono essere esaminati DUI IN FUNZIONE DELLA VALUTA-
per evidenziare l'eventuale presenza di solventi che pro- ZIONE DEL RISCHIO
babilmente possono essere presenti in una sostanza o
in un prodotto. 3.2. METODI PER STABILIRE I LIMITI DI

eifargonoM

ilareneG
ESPOSIZIONE
Se e© stato giustificato e autorizzato l'uso di un sol-
vente di Classe 1, i limiti del suo contenuto devono 3.3. OPZIONI PER STABILIRE I LIMITI DEI
essere indicati nella sezione ``Saggi'' della specifica SOLVENTI DI CLASSE 2

ehcituecamraF
monografia. 3.4. PROCEDURE ANALITICHE

emroF
In generale, le monografie della Farmacopea non pre- 3.5. DICHIARAZIONE DI CONFORMITAé DEI
vedono saggi limite per i singoli solventi appartenenti LIMITI DEI SOLVENTI RESIDUI
alla Classe 2, poichë i solventi utilizzati possono variare
da un produttore all'altro. L'autorita© competente deve 4. LIMITI DEI SOLVENTI RESIDUI
essere percio© informata dei solventi impiegati durante
eiretaM

emirP
il processo di produzione. Questa informazione e© ripor- 4.1. SOLVENTI DA EVITARE
tata anche nel dossier che deve essere presentato per 4.2. SOLVENTI DA LIMITARE
ottenere un certificato di adeguatezza (certificate of sui- 4.3. SOLVENTI CON POTENZIALE TOSSICO
ehcituecamraF

tability) delle monografie di Farmacopea Europea ed e©

inoizaraperP

BASSO
ehcificepS

menzionata sul certificato stesso.

Se nel processo di produzione sono usati solo dei sol- 4.4. SOLVENTI PER I QUALI NON SONO STATI
venti di Classe 3 puo© essere effettuato un saggio per la TROVATI DATI TOSSICOLOGICI ADE-
perdita all'essiccamento e tale saggio e© descritto nella GUATI
ehcitapoemO
inoizaraperP

singola monografia. Se un solvente di Classe 3 ha un GLOSSARIO

limite, giustificato e autorizzato, superiore allo 0,5 per
cento, e© richiesta una determinazione specifica del sol- APPENDICE 1. LISTA DEI SOLVENTI INCLUSI
vente in questione. In questo caso il limite deve essere NELLA LINEA GUIDA
riportato nella monografia specifica, perchë, nella defi-
nizione, si fa riferimento alla sostanza esente da acqua APPENDICE 2. INFORMAZIONI SUPPLEMEN-
ecidnI

e da solventi. In tutti i casi, l'autorita© competente deve TARI

563
Solventi residui

A2.1: LEGISLAZIONE AMBIENTALE DEI L'uso di alcuni solventi con tossicita© meno severa
SOLVENTI ORGANICI VOLATILI (Classe 2, Tabella 2) deve essere limitato per proteggere
i pazienti da potenziali effetti collaterali. Idealmente,
devono essere usati i solventi meno tossici (Classe 3,
A2.2: SOLVENTI RESIDUI NEI PRODOTTI Tabella 3), quando possibile. La lista completa dei sol-
FARMACEUTICI venti presenti in questa linea guida e© riportata nel-
l'Appendice 1.
APPENDICE 3. METODI PER LA DEFINIZIONE Le liste presenti in questo documento non sono esau-
DEI LIMITI DI ESPOSIZIONE stive e si possono usare altri solventi che vengono, in
seguito, aggiunti alle liste. I limiti raccomandati per i
solventi della Classe 1 e 2 o la classificazione dei sol-
venti possono variare in funzione di nuovi dati di
1. INTRODUZIONE sicurezza disponibili. I dati di sicurezza, forniti in
una richiesta di autorizzazione all'immissione in com-
mercio di un nuovo prodotto medicinale contenente
L'obiettivo di questa linea guida e© quello di raccoman- un nuovo solvente, possono essere basati sui concetti
dare le quantita© di solventi residui considerate accetta- di questa linea guida o sul concetto di qualificazione
bili, nei prodotti farmaceutici, per la sicurezza del delle impurezze, come espresso nella linea guida per
paziente. La linea guida raccomanda l'uso di solventi le sostanze attive (Q3A, Impurezze nelle Nuove
meno tossici e indica, per alcuni solventi residui, i livelli Sostanze Attive) o per il prodotto medicinale (Q3B,
che sono considerati tossicologicamente accettabili. Impurezze nei Nuovi Prodotti Medicinali) o in tutte
e tre le linee guida.
I solventi residui nei prodotti farmaceutici sono definiti
in questo contesto, come composti chimici, organici
volatili utilizzati o prodotti nella fabbricazione di 2. SCOPO DELLA LINEA GUIDA
sostanze attive o di eccipienti, o impiegati nella prepa-
razione dei prodotti medicinali. Le tecniche di fabbrica-
zione attuali non consentono di rimuovere completa- I solventi residui nelle sostanze attive, negli eccipienti e
mente i solventi. Una scelta appropriata del solvente nei prodotti medicinali rientrano nello scopo di questa
per la sintesi della sostanza attiva puo© aumentarne la linea guida. Quindi, si deve effettuare il saggio per i sol-
resa o determinare caratteristiche come la forma cri- venti residui ogni volta che e© noto che il processo di
stallina, la purezza e la solubilita© . Quindi, in alcuni produzione o di purificazione comporta la presenza di
casi, il solvente puo© essere un parametro critico nel pro- tali solventi. E' necessario eseguire la ricerca solamente
cesso di sintesi. Questa linea guida non riguarda i sol- per i solventi che sono usati o prodotti nel corso del
processo di fabbricazione o purificazione delle sostanze
venti deliberatamente usati come eccipienti o i solvati. attive, degli eccipienti o dei prodotti medicinali.
Comunque il contenuto dei solventi in tali prodotti Anche se i produttori possono scegliere di sottoporre a
dovrebbe essere valutato e giustificato. saggio il prodotto medicinale, si puo© utilizzare un
Poichë i solventi residui non presentano benefici tera- metodo cumulativo che permette di calcolare i livelli di
peutici, tutti i solventi residui dovrebbero essere rimossi solvente
livelli
residuo nel prodotto medicinale a partire dai
presenti negli ingredienti usati per produrre il
il piu© possibile per soddisfare le specifiche del prodotto, prodotto medicinale stesso. Se il calcolo da© un risultato
le Norme di Buona Fabbricazione, o altri requisiti di inferiore o uguale al livello raccomandato in questa
qualita© . I prodotti medicinali non devono contenere linea guida, non e© richiesto alcun saggio per i solventi
livelli di solventi residui piu© alti di quelli supportati da residui sul prodotto medicinale. Se invece il livello cal-
dati di sicurezza. Alcuni solventi a causa della loro tos- colato e© superiore a quello raccomandato, il prodotto
sicita© inaccettabile (Classe 1, Tabella 1) non devono medicinale deve essere sottoposto a saggio per accer-
essere utilizzati nella produzione delle sostanze attive, tare che il processo di formulazione abbia ridotto il
degli eccipienti, o dei prodotti medicinali a meno che il livello del solvente a valori accettabili. Il prodotto
loro uso possa essere giustificato in modo soddisfacente medicinale deve essere sottoposto a saggio quando
in una valutazione del rapporto rischio-beneficio. durante la sua produzione si utilizza un solvente.

564
 Solventi residui

inoizircserP
Questa linea guida non si applica alle potenziali nuove Cancerogeni non-genotossici per gli animali o possi-

ilareneG
sostanze attive, agli eccipienti o ai prodotti medicinali bili agenti causali di altri effetti tossici irreversibili
usati durante le fasi di ricerca clinica nel corso dello svi- come neurotossicita© o teratogenicita© .
luppo del prodotto, e non si applica ai prodotti medici-
nali gia© in commercio. Solventi sospetti di essere all'origine di altri effetti
tossici importanti ma reversibili.

isilanA id
idoteM
La linea guida si applica a tutte le forme farmaceutiche Solventi di Classe 3: Solventi con bassa tossicita© po-
e a tutte le vie di somministrazione. In alcuni casi pos- tenziale
sono essere accettabili livelli piu© elevati di solventi resi-
dui come, per esempio, nei trattamenti a breve termine Solventi con bassa tossicita© potenziale per l'uomo;

irotinetnoC
/ ilairetaM
(30 giorni o meno) o per l'applicazione topica. Questi non sono necessari limiti di esposizione. I solventi di
livelli devono essere giustificati caso per caso. Classe 3 hanno un valore di EGP uguale o superiore
a 50 mg.
Vedere l'Appendice 2 per le ulteriori informazioni rela-
tive ai solventi residui. 3.2. METODI PER STABILIRE I LIMITI DI ESPO-

ivittaeR
SIZIONE
3. PRINCIPI GENERALI Il metodo usato per stabilire l'esposizione giornaliera
permessa per i solventi residui e© riportato nell'Appen-
dice 3. I sommari dei dati di tossicita© che sono stati

itnemogrA
ilareneG
3.1. CLASSIFICAZIONE DEI SOLVENTI RESIDUI usati per stabilire i limiti sono stati pubblicati in
IN FUNZIONE DELLA VALUTAZIONE DEL Pharmeuropa, Vol. 9, No. 1, Supplemento, Aprile 1997.
RISCHIO
3.3. OPZIONI PER DESCRIVERE I LIMITI DEI

eifargonoM
SOLVENTI DI CLASSE 2

ilareneG
L'International Program on Chemical Safety (IPCS)
utilizza l'espressione ``dose giornaliera tollerabile Sono disponibili due opzioni che permettono di definire
(DGT; ``TDI = tollerable daily intake'') per descrivere
i limiti di esposizione ai prodotti chimici tossici. Per i limiti per i solventi di Classe 2.

ehcituecamraF
lo stesso concetto l'Organizzazione Mondiale della : si possono usare i limiti di concentrazione,
Sanita© , ed altre Autorita© sanitarie ed istituti (nazio- in ppm, indicati nella Tabella 2. Questi limiti sono stati
Opzione 1

emroF
nali ed internazionali), utilizzano l'espressione ``dose calcolati usando l'equazione (1) riportata di seguito,
giornaliera accettabile'' (DGA; ``ADI = acceptable considerando una massa di prodotto di 10 g sommini-
daily intake'') In questa linea guida e© definita la strata giornalmente.
nuova espressione ``esposizione giornaliera permessa''
(EGP; ``PDE = permitted daily exposure'') che fa rife- Concentrazione ppm 1000 EGP
eiretaM

emirP
dose
2
1
rimento alla dose di solvente residuo accettabile dal
† ˆ †

punto di vista dell'uso farmaceutico, per evitare ogni

confusione tra i differenti valori di DGA per una In questo caso il valore di EGP e© riportato in termini di
ehcituecamraF

stessa sostanza. mg/giorno e la dose e© indicata in g/giorno.

inoizaraperP

ehcificepS

I solventi residui valutati in questa linea guida sono Questi limiti sono considerati accettabili per tutte le
riportati nell'Appendice 1 con i nomi comuni e la strut- sostanze, gli eccipienti o i prodotti medicinali.
tura. Essi sono valutati per il loro possibile rischio per Questa opzione puo© essere, quindi, applicata se la dose
ehcitapoemO

la salute umana e inseriti in una delle tre seguenti classi: giornaliera non e© nota o definita. Se tutti gli eccipienti
inoizaraperP

e le sostanze attive di una formulazione soddisfano i

Solventi di Classe 1: Solventi che devono essere evitati limiti dell'Opzione 1, questi componenti possono essere
usati in ogni proporzione. Non sono necessari ulteriori
Agenti cancerogeni noti o fortemente sospetti di calcoli purchë la dose giornaliera non superi i 10 g.
esserlo per l'uomo e agenti dannosi per l'ambiente. I prodotti che sono somministrati in dosi superiori a
10 g per giorno devono essere considerati nell'Op-
ecidnI

Solventi di Classe 2: Solventi che devono essere limitati zione 2.

565
Solventi residui

Opzione 2 : per ciascun componente del prodotto medi- Si consideri un altro esempio in cui e© presente l'acetoni-
cinale non e© considerato necessario soddisfare ai limiti trile come solvente residuo. La quantita© giornaliera
indicati nell'Opzione 1. Il valore di EGP, in termini di massima somministrata di un prodotto medicinale e©
mg/giorno come indicato nella Tabella 2, puo© essere 5,0 g ed il prodotto medicinale contiene due eccipienti.
impiegato, assieme alla dose massima giornaliera nota La composizione del prodotto medicinale ed il conte-
e all'equazione (1) menzionata precedentemente, per nuto massimo calcolato per l'acetonitrile residuo e©
determinare la concentrazione di solvente residuo auto- riportato nella tabella seguente:
rizzata in un prodotto medicinale. Questi limiti sono
considerati accettabili purchë sia stato dimostrato che Quantita© nella Contenuto di Esposizione
il solvente residuo e© stato ridotto al minimo possibile. Componente formulazione acetonitrile giornaliera
I limiti devono essere realistici, in relazione alla preci-
sione analitica, alla idoneita© della produzione, a varia- Sostanza attiva 0,3 g 800 ppm 0,24 mg
zioni ragionevoli nel processo di produzione ed i limiti
dovrebbero riflettere i reali standard di produzione.
Eccipiente 1 0,9 g 2000 ppm 1,80 mg
L'Opzione 2 puo© essere applicata sommando le quan-
tita© di un solvente residuo presente in ciascuno dei com- Eccipiente 2 3,8 g 800 ppm 3,04 mg
ponenti del prodotto medicinale. La somma delle quan-
tita© del solvente per giorno deve essere inferiore a Prodotto medicinale 5,0 g 1016 ppm 5,08 mg
quella indicata per l'EGP.
A titolo di esempio si consideri l'applicazione del-
l'Opzione 1 e dell'Opzione 2 all'acetonitrile contenuto In questo esempio, dalla somma del contenuto di cia-
in un prodotto medicinale. L'esposizione giornaliera scun costituente risulta che il prodotto non soddisfa në
permessa per l'acetonitrile e© di 4,1 mg per giorno; di il limite dell'Opzione 1, në il limite dell'Opzione 2.
conseguenza il limite previsto dall'Opzione 1 e© di 410 Il produttore potrebbe esaminare il prodotto medici-
ppm. La quantita© giornaliera massima somministrata nale per determinare se il processo di produzione ha
di un prodotto medicinale e© di 5,0 g, e questo prodotto ridotto il livello di acetonitrile. Se il livello di acetoni-
medicinale contiene due eccipienti. La composizione trile non e© stato ridotto nel corso della fabbricazione al
del prodotto medicinale e il calcolo del contenuto mas- limite permesso, il fabbricante del prodotto medicinale
simo di acetonitrile residuo sono riportati nella tabella dovra© prendere in considerazione altre misure per
seguente: ridurre il livello di acetonitrile contenuto nel prodotto
medicinale. Se tutte queste operazioni non consentono
di ridurre il livello del solvente residuo, in casi eccezio-
Componente Quantita© nella
formulazione
Contenuto
di acetonitrile
Esposizione
giornaliera nali il produttore puo© fornire un sommario delle misure
prese per ridurre il livello del solvente fino al valore
previsto dalla linea guida e fornire un'analisi del rap-
Sostanza attiva 0,3 g 800 ppm 0,24 mg porto rischio-beneficio per supportare l'utilizzazione
del prodotto medicinale con un contenuto di solvente
Eccipiente 1 0,9 g 400 ppm 0,36 mg residuo piu© alto del limite autorizzato.
Eccipiente 2 3,8 g 800 ppm 3,04 mg 3.4. PROCEDURE ANALITICHE
Il contenuto di solventi residui e© generalmente determi-
Prodotto medicinale 5,0 g 728 ppm 3,64 mg nato usando tecniche cromatografiche come la gas cro-
matografia. Per determinare il contenuto dei solventi
residui dovrebbero essere usate, se possibile, le proce-
L'eccipiente 1 soddisfa il limite dell'Opzione 1, ma la dure armonizzate descritte nelle farmacopee. Se questo
sostanza attiva, l'eccipiente 2 e il prodotto medicinale non e© possibile, i produttori sono liberi di selezionare
non soddisfano il limite dell'Opzione 1. Tuttavia, il pro- la procedura analitica convalidata piu© appropriata per
dotto soddisfa il limite dell'Opzione 2 (4,1 mg per la particolare applicazione. Se sono presenti solo i sol-
giorno) e, quindi, soddisfa alle raccomandazioni ripor- venti di Classe 3, si puo© usare un metodo non specifico
tate in questa linea guida. come quello della perdita all'essiccamento.

566
 Solventi residui

inoizircserP
La convalida del metodo utilizzato per la determina- Tabella 1. - Solventi di classe 1 nei prodotti farmaceutici

ilareneG
zione del contenuto dei solventi residui deve essere (solventi da evitare)
conforme alle linee della guida ICH ûText on Validation
of Analytical Proceduresý e ûExtension of the ICH text Solvente
Limite
di concentrazione Rischio
on Validation of Analytical Proceduresý. (ppm)

isilanA id
3.5. DICHIARAZIONE DI CONFORMITAé DEI

idoteM
Benzene 2 Cancerogeno
LIVELLI DEI SOLVENTI RESIDUI Carbonio 4 Tossico e dannoso
I fabbricanti di prodotti farmaceutici hanno la neces- tetracloruro per l'ambiente
sita© di avere alcune informazioni riguardo il contenuto 1,2-Dicloroetano 5 Tossico
dei solventi residui negli eccipienti o nelle sostanze

irotinetnoC
/ ilairetaM
1,1-Dicloroetene 8 Tossico
attive al fine di soddisfare i criteri di questa linea guida. 1,1,1-Tricloroetano 1500 Dannoso per l'ambiente
Si riportano di seguito, a titolo di esempio, le informa-
zioni che un fabbricante di eccipienti, o di principi
attivi, puo© fornire ad un fabbricante di prodotti farma- 4.2. SOLVENTI DA LIMITARE
ceutici. A seconda dei casi si puo© scegliere una delle La presenza di solventi della Tabella 2 deve essere limi-
seguenti dichiarazioni: tata nei prodotti farmaceutici a causa della loro intrin-

ivittaeR
^ Possono essere presenti solo solventi della Classe 3. seca tossicita© . I valori della EGP e delle concentrazioni
Perdita all'essiccamento inferiore allo 0,5 per cento sono indicati il piu© possibile prossimi, rispettivamente,
^ Possono essere presenti solo i solventi X, Y, della a 0,1 mg/giorno ed a 10 ppm. I valori indicati non riflet-
Classe 2. I contenuti sono tutti inferiori al limite tono necessariamente la precisione analitica della loro
previsto dall'Opzione 1 (Se del caso il fornitore indi- determinazione. La precisione deve essere determinata

itnemogrA
ilareneG
chera© il nome dei solventi di Classe 2 rappresentati come parte della convalida del metodo.
da X, Y, ...).
^ Possono essere presenti solo i solventi X, Y, ... della Tabella 2. - Solventi di classe 2 nei prodotti farmaceutici
Classe 2 e solventi della Classe 3. Il contenuto dei sol-
venti residui della Classe 2 e© inferiore al limite previ- Limite

eifargonoM
Solvente PDE (mg/giorno) di concentrazione

ilareneG
(ppm)
sto dall'Opzione 1 e i solventi residui della Classe 3
sono inferiori allo 0,5 per cento.
Se sono presenti solventi della Classe 1, essi devono Acetonitrile 4,1 410
Clorobenzene 3,6 360
essere identificati e quantificati. Il termine ûpossono Cloroformio 0,6 60

ehcituecamraF
essere presentiý si riferisce al solvente usato nella fase Cicloesano 38,8 3880
finale di produzione ed ai solventi che sono usati nelle

emroF
1,2-Dicloroetene 18,7 1870
prime fasi della produzione e che non sono stati Diclorometano 6,0 600
eliminati sistematicamente mediante un processo con- 1,2-Dimetossietano 1,0 100
validato. N,N-Dimetilacetammide 10,9 1090
Se sono presenti solventi della Classe 2 o della Classe 3 N,N-Dimetilformammide 8,8 880
con un contenuto superiore al limite previsto dal- 1,4-Diossano 3,8 380

eiretaM

emirP
l'Opzione 1 o allo 0,5 per cento, rispettivamente, essi 2-Etossietanolo 1,6 160
devono essere identificati e quantificati. Etilenglicole 6,2 620
Formammide 2,2 220
Esano 2,9 290
4. LIMITI DEI SOLVENTI RESIDUI Metanolo 30,0 3000
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

2-Metossietanolo 0,5 50
4.1. SOLVENTI DA EVITARE Metilbutilchetone 0,5 50
I solventi nella Classe 1 non devono essere utilizzati Metilcicloesano 11,8 1180
nella produzione di sostanze attive, di eccipienti, e di N-Metilpirrolidone 48,4 4840
prodotti medicinali a causa della loro inaccettabile Nitrometano 0,5 50
ehcitapoemO

tossicita© o del loro effetto dannoso per l'ambiente. Piridina 2,0 200
inoizaraperP

Comunque, se il loro uso e© inevitabile per produrre un Sulfolano 1,6 160

prodotto medicinale con una innovativita© terapeutica Tetralina 1,0 100
significativa, il loro contenuto deve essere limitato Toluene 8,9 890
come riportato nella Tabella 1, se non diversamente 1,1,2-Tricloroetene 0,8 80
giustificato. L'1,1,1-Tricloroetano e© compreso nella Xilene* 21,7 2170
Tabella 1 perchë dannoso per l'ambiente. Il limite indi- * generalmente il 60 per cento m-xilene, il 14 per cento
ecidnI

cato di 1500 ppm e© basato sulla valutazione dei dati di p-xilene, il 9 per cento o-xilene con il 17 per cento di
sicurezza. etilbenzene.

567
Solventi residui

4.3. SOLVENTI CON BASSA TOSSICITAé Tabella 4. - Solventi per i quali non sono
POTENZIALE disponibili sufficienti dati tossicologici
I solventi della Classe 3 (riportati nella Tabella 3) pos- 1,1-Dietossipropano Metilisopropilchetone
sono essere considerati come meno tossici e con minore
rischio per la salute umana. La Classe 3 comprende sol- 1,1-Dimetossimetano Metiltetraidrofurano
venti che si considerano non a rischio per la salute
umana quando presenti ai livelli normalmente accettati 2,2-Dimetossipropano Etere di petrolio
per i prodotti farmaceutici. Tuttavia, non esistono studi Isoottano Acido tricloroacetico
di tossicita© a lungo termine o di cancerogenicita© per
molti dei solventi della Classe 3. I dati disponibili indi- Isopropiletere Acido trifluoroacetico
cano che essi sono meno tossici negli studi acuti o a
breve termine e che gli studi di genotossicita© sono nega-
tivi. Il limite ammesso, senza ulteriori giustificazioni,
per i solventi di questa classe e© inferiore o uguale a GLOSSARIO
50 mg/giorno (corrispondente a 5000 ppm o allo Cancerogeni genotossici: cancerogeni che provocano il
0,5 per cento nell'Opzione 1). Possono essere tollerate cancro alternando i geni o i cromosomi.
anche quantita© superiori purchë siano realistiche in
rapporto alla idoneita© della produzione e alle norme di LOEL: abbreviazione di ûlowest-observed effect levelý.
buona fabbricazione. ûLowest-observed effect levelý: la dose piu© bassa della
sostanza che, in uno studio o in un gruppo di studi, pro-
Tabella 3. - Solventi della classe 3 che devono essere limi- duce aumenti significativi, dal punto di vista biologico,
tati per le Norme di Buona Fabbricazione o per altri della frequenza o della gravita© di un qualunque effetto
requisiti basati sulla qualita© nell'uomo o nell'animale.
Acido acetico Eptano Fattore di modificazione: un fattore determinato
Acetone Isobutile acetato mediante la valutazione professionale di un tossicologo
e applicato ai dati di un dosaggio biologico al fine di
Anisolo Isopropile acetato correlare, in condizioni di sicurezza, i dati nell'uomo.
1-Butanolo Metile acetato Neurotossicita© : la capacita© di una sostanza di causare
2-Butanolo 3-Metil-1-butanolo
effetti indesiderati sul sistema nervoso.
Butile acetato Metiletilchetone NOEL: abbreviazione di ûno-observed-effect levelý.
tert-Butil-metiletere Isobutilmetilchetone ûNo-observed-effect levelý: la dose piu© alta della
sostanza per la quale non si constata aumento significa-
Cumene 2-Metil-1-propanolo tivo, dal punto di vista biologico, della frequenza o
Dimetilsolfossido Pentano della gravita© di un qualunque effetto nell'uomo o nell'a-
nimale.
Etanolo 1-Pentanolo
PDE: abbreviazione di ûpermitted daily exposureý.
Etile acetato 1-Propanolo
ûPermitted daily exposureý: la quantita© massima per-
Etere 2-Propanolo messa per giorno di solvente residuo nei prodotti far-
Etile formiato Propile acetato maceutici.
Acido formico Tetraidrofurano Tossicita© reversibile: scomparsa, dopo la sospensione
della somministrazione, degli effetti nocivi che sono
stati causati, inizialmente, da una sostanza.
4.4. SOLVENTI PER I QUALI NON SONO DISPO- Cancerogeno fortemente sospetto per l'uomo: una
NIBILI DATI TOSSICOLOGICI SUFFICIENTI sostanza per la quale non c'e© evidenza epidemiologica
Anche i seguenti solventi (Tabella 4) possono essere di di cancerogenesi ma esistono dati positivi di genotossi-
interesse per i produttori di eccipienti, di sostanze cita© e chiara evidenza di cancerogenesi nei roditori.
attive, o di prodotti medicinali. Tuttavia, non sono
disponibili sufficienti dati tossicologici su cui basare Teratogenicita© : la comparsa di malformazioni struttu-
la EGP. I produttori devono giustificare i livelli residui rali durante lo sviluppo fetale quando una sostanza e©
di questi solventi nei prodotti farmaceutici. somministrata durante la gravidanza.

568
 Solventi residui

inoizircserP
APPENDICE 1. LISTA DEI SOLVENTI INCLUSI NELLA LINEA GUIDA

ilareneG
Solvente Altri nomi Struttura Classe

Acido acetico

isilanA id
Acido etanoico CH3COOH Classe 3

idoteM
Acetone 2-Propanone CH3COCH3 Classe 3
Propan-2-one
Acetonitrile CH3CN Classe 2

irotinetnoC
/ ilairetaM
Anisolo Metossibenzene Classe 3

Benzene Benzolo Classe 1

ivittaeR
1-Butanolo Alcool n-Butilico CH3(CH2)3OH Classe 3
Butan-1-olo
2-Butanolo Alcool sec-Butilico CH3CH2CH(OH)CH3 Classe 3

itnemogrA
ilareneG
Butan-2-olo
Butile acetato Estere butilico CH3COO(CH2)3CH3 Classe 3
dell'acido acetico
tert-Butilmetiletere 2-Metossi-2-metilpropano (CH3)3COCH3 Classe 3
Carbonio tetracloruro Tetraclorometano CCl4 Classe 1

eifargonoM

ilareneG
Clorobenzene Classe 2

ehcituecamraF
Cloroformio Triclorometano CHCl3 Classe 2

emroF
Cumene Isopropilbenzene Classe 3
(1-Metiletil)benzene

eiretaM

emirP
Cicloesano Esametilene Classe 2 ehcituecamraF

1,2-Dicloroetano sym-Dicloroetano CH2ClCH2Cl Classe 1

inoizaraperP

ehcificepS

Etilene dicloruro
Etilene cloruro
1,1-Dicloroetene 1,1-Dicloroetilene H2C=CCl2 Classe 1
Vinilidene cloruro
ehcitapoemO
inoizaraperP

1,2-Dicloroetene 1,2-Dicloroetilene ClHC=CHCl Classe 2

Acetilene dicloruro
Diclorometano Metilene cloruro CH2Cl2 Classe 2
1,2-Dimetossietano Etilenglicole dimetil etere H3COCH2CH2OCH3 Classe 2
Monoglima
Dimetil cellosolve
N,N-Dimetilacetammide DMA CH3CON(CH3)2 Classe 2
ecidnI

N,N-Dimetilformammide DMF HCON(CH3)2 Classe 2

569
Solventi residui

Solvente Altri nomi Struttura Classe

Dimetilsolfossido Metilsolfinilmetano (CH3)2SO Classe 3

Metilsolfossido
DMSO
1,4-Diossano p-Diossano Classe 2
[1,4]Diossano
Etanolo Alcool etilico CH3CH2OH Classe 3
2-Etossietanolo Cellosolve CH3CH2OCH2CH2OH Classe 2
Etile acetato Estere etilico CH3COOCH2CH3 Classe 3
dell'acido acetico
Etilenglicole 1,2-Diidrossietano HOCH2CH2OH Classe 2
1,2-Etandiolo
Etiletere Dietiletere CH3CH2OCH2CH3 Classe 3
Etossietano
1,1'-Ossibisetano
Etile formiato Estere etilico HCOOCH2CH3 Classe 3
dell'acido formico
Formammide Metanammide HCONH2 Classe 2
Acido formico HCOOH Classe 3
Eptano n-Eptano CH3(CH2)5CH3 Classe 3
Esano n-Esano CH3(CH2)4CH3 Classe 2
Isobutile acetato Estere isobutilico CH3COOCH2CH(CH3)2 Classe 3
dell'acido acetico
Isopropile acetato Estere isopropilico CH3COOCH(CH3)2 Classe 3
dell'acido acetico
Metanolo Alcool metilico CH3OH Classe 2
2-Metossietanolo Metile cellosolve CH3OCH2CH2OH Classe 2
Metile acetato Estere metilico CH3COOCH3 Classe 3
dell'acido acetico
3-Metil-1-butanolo Alcool isoamilico (CH3)2CHCH2CH2OH Classe 3
Alcool isopentilico
3-Metilbutan-1-olo
Metilbutilchetone 2-Esanone CH3(CH2)3COCH3 Classe 2
Esan-2-one
Metilcicloesano Cicloesilmetano Classe 2

Metiletilchetone 2-Butanone CH3CH2COCH3 Classe 3

MEK
Butan-2-one
Metilisobutilchetone 4-Metilpentan-2-one CH3COCH2CH(CH3)2 Classe 3
4-Metil-2-pentanone
MIBK
2-Metil-1-propanolo Alcool isobutilico (CH3)2CHCH2OH Classe 3
2-Metilpropan-1-olo

570
 Solventi residui

inoizircserP

ilareneG
Solvente Altri nomi Struttura Classe

isilanA id
N-Metilpirrolidone 1-Metilpirrolidin-2-one Classe 2

idoteM
1-Metil-2-pirrolidinone

Nitrometano CH3NO2 Classe 2

irotinetnoC
/ ilairetaM
Pentano n-Pentano CH3(CH2)3CH3 Classe 3
1-Pentanolo Alcool amilico CH3(CH2)3CH2OH Classe 3
Pentan-1-olo
Alcool pentilico
1-Propanolo Propan-1-olo CH3CH2CH2OH Classe 3

ivittaeR
Alcool propilico
2-Propanolo Propan-2-olo (CH3)2CHOH Classe 3
Alcool isopropilico
Propil acetato Estere propilico CH3COOCH2CH2CH3 Classe 3

itnemogrA
ilareneG
dell'acido acetico

Piridina Classe 2

eifargonoM

ilareneG
Sulfonano Tetraidrotiofene Classe 2
1,1-diossido

ehcituecamraF
emroF
Tetraidrofurano Tetrametilene ossido Classe 3
Oxaciclopentano

eiretaM

emirP
Tetralina 1,2,3,4-Tetraidronaftalene Classe 2
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Toluene Metilbenzene Classe 2

1,1,1-Tricloroetano Metilcloroformio CH3CCl3 Classe 1

ehcitapoemO
inoizaraperP

1,1,2-Tricloroetene Tricloroetene HClC=CCl2 Classe 2

Xilene* Dimetilbenzene Classe 2

Xilolo

* generalmente il 60 per cento di m-xilene, il 14 per cento di p-xilene, il 9 per cento di o-xilene con il 17 per cento di
ecidnI

etil benzene

571
Solventi residui

APPENDICE 2. INFORMAZIONI SUPPLEMEN- 5) I risultati degli studi tossicologici utilizzati per deter-
TARI minare i livelli accettabili per i solventi residui devono
A2.1. LEGISLAZIONE AMBIENTALE DEI SOL- essere ottenuti da protocolli sperimentali adatti, come
VENTI ORGANICI VOLATILI quelli descritti, per esempio, dall'OECD e dal ``Red
Book'' della FDA.
Alcuni dei solventi residui frequentemente usati nella APPENDICE 3. METODI PER STABILIRE I
produzione dei prodotti farmaceutici sono considerati LIMITI DI ESPOSIZIONE
come sostanze tossiche nelle monografie dei Environ-
mental Health Criteria (EHC) e nel Integrated Risk Il metodo Gaylor-Kodell per la valutazione del rischio
Information System (IRIS). Gli obiettivi di organismi (Gaylor, D. W. e Kodell, R. L. Linear Interpolation
come l'International Program on Chemical Safety algorithm for low dose assessment of toxic substance,
(IPCS), l'United States Environmental Protection J. Environ. Pathology, 4, 305, 1980) e© adatto per i solventi
Agency (USEPA) e l'United States Food and Drug Admi- cancerogeni della Classe 1. Nella definizione dei limiti di
nistration (USFDA) prevedono la determinazione dei esposizione, solo dati affidabili di cancerogenicita© pos-
livelli di esposizione accettabile. L'obiettivo e© quello di sono giustificare un'estrapolazione mediante l'applica-
proteggere la salute pubblica e di preservare l'ambiente zione di modelli matematici. I limiti di esposizione per i
da possibili effetti nocivi derivanti da una sua esposi- solventi della Classe 1 possono essere determinati
zione, per tempi lunghi, a queste sostanze. I metodi usando un fattore di sicurezza ampio (per es. da 10000 a
coinvolti nella valutazione dei limiti di esposizione mas- 100000) e i dati di no-observed effect level (NOEL).
sima senza effetti nocivi sono generalmente basati su La rivelazione e la determinazione quantitativa di questi
studi a lungo termine. Se i dati degli studi a lungo ter- solventi deve rispondere agli ultimi sviluppi in materia
mine non sono disponibili, si possono usare dati otte- di tecniche analitiche.
nuti da studi a breve termine purchë vengano modifi- I livelli di esposizione accettabili riportati in questa
cati alcuni parametri, come per esempio l'uso di fattori linea guida per i solventi della Classe 2, sono stati
di sicurezza piu© grandi. L'approccio descritto di seguito stabiliti mediante il calcolo dei valori EGP usando le
si basa soprattutto su una esposizione a lungo termine procedure che permettono di definire i limiti di esposi-
o esposizione della popolazione durante l'arco della vita zione applicabili ai prodotti farmaceutici (Pharmaco-
nell'ambiente circostante, cioe© all'aria, al cibo, all'ac- poeial Forum, Nov-Dic 1989), e il metodo adottato dal-
qua potabile e ad altro. l'IPCS per la valutazione del rischio correlato alle
A2.2. SOLVENTI RESIDUI NEI FARMACI sostanze chimiche (Assessing Human Health Risk of
Chemicals - Environmental Health Criteria 170, WHO,
I limiti di esposizione riportati in questa linea guida 1994). Questi metodi sono simili a quelli usati dal-
sono stati stabiliti facendo riferimento alle metodologie l'USEPA (IRIS), dall'USFDA (Red Book) e altri orga-
e ai dati tossicologici descritti nelle monografie EHC e nismi. Il metodo e© qui riportato per una migliore com-
IRIS. Comunque, nella definizione dei limiti di esposi- prensione dell'origine dei valori di EGP. Non e© necessa-
zione, devono essere considerate alcune assunzioni spe- rio eseguire questi calcoli per usare i valori EGP ripor-
cifiche riguardanti i solventi residui da usare nelle sin- tati nella Sezione 4 di questo documento.
tesi e nella formulazione dei prodotti farmaceutici. L'EGP e© calcolato a partire dal no-observed effect level
Esse sono: (NOEL) o dal lowest-observed effect level (LOEL), otte-
1) I pazienti (non la popolazione in senso generale) nuti nello studio piu© pertinente effettuato sugli animali
usano farmaci allo scopo di curare malattie o per la mediante la seguente espressione:
profilassi di infezioni o malattie.
2) Per la maggior parte dei prodotti farmaceutici il EGP NOEL
ˆ
2
2 Correzione del peso (1)
F1 F2 F3 F4 F5
2 2 2

principio di una esposizione a vita del paziente non e©

necessaria, ma puo© essere appropriata, come ipotesi di L'EGP deriva, preferibilmente, dal LOEL. Se il NOEL
lavoro, per ridurre il rischio per la salute umana. non puo© essere ottenuto si puo© utilizzare il valore di
3) I solventi residui sono componenti inevitabili nella LOEL. I fattori di modificazione proposti di seguito,
fabbricazione di un prodotto farmaceutico e sono che permettono di applicare i dati all'uomo, rappresen-
spesso parte integrante dei prodotti medicinali. tano i ûfattori di incertezzaý usati nell'EHC
(Environmental Health Criteria, 170, WHO, Ginevra,
4) Il contenuto dei solventi residui non deve superare i 1994), e i ýfattori di modificazioneý o ûfattori di sicu-
livelli raccomandati, ad eccezione di casi particolari. rezzaý riportati in Pharmacopoeial Forum. L'ipotesi di

572
 Solventi residui

inoizircserP
una esposizione sistemica del 100 per cento e© usata in sica, neurotossicita© o teratogenicita© . Negli studi

ilareneG
tutti i calcoli senza distinzione tra le diverse vie di som- di tossicita© sulla riproduzione, si utilizzano i fat-
ministrazione. tori riportati di seguito:
I fattori di modificazione sono i seguenti: F4 = 1 per la tossicita© per il feto associata con la
F1 = un fattore che permette l'estrapolazione tra le tossicita© per la madre

isilanA id
specie

idoteM
F4 = 5 per la tossicita© per il feto senza tossicita©
F1 = 2 per l'estrapolazione dai cani all'uomo per la madre
F1 = 2,5 per l'estrapolazione dai conigli all'uomo F4 = 5 per un effetto teratogeno con tossicita© per
F1 = 3 per l'estrapolazione dalle scimmie la madre
all'uomo

irotinetnoC
/ ilairetaM
F1 = 5 per l'estrapolazione dai ratti all'uomo F4 = 10 per un effetto teratogeno senza tossicita©
F1 = 10 per l'estrapolazione da altri animali per la madre
all'uomo F5 = un fattore variabile che puo© essere applicato se
F1 = 12 per l'estrapolazione dai gatti all'uomo non e© stata stabilita la ûdose di non effettoý
F1 tiene conto del rapporto comparativo superficie:- (no-effect level).

ivittaeR
massa corporea per le specie interessate e per Se e© disponibile un solo valore di LOEL, puo© essere
l'uomo. L'area superficiale (S) e© calcolata come: usato un fattore fino a 10, in funzione della severita©
della tossicita© .
S kM 0;67
ˆ 2
†
La correzione del peso considera arbitrariamente e

itnemogrA
ilareneG
dove M corrisponde alla massa corporea e k e© una indipendentemente dal sesso, come peso corporeo di
costante il cui valore e© stato fissato uguale a 10. un adulto quello di 50 kg. Questo peso, relativamente
basso, fornisce un ulteriore margine di sicurezza
I pesi corporei usati nell'equazione sono quelli riportati rispetto ai pesi standard di 60 o 70 kg che sono spesso
nella Tabella A3.1. usati in questo tipo di calcolo. Si ritiene che l'utilizzo

eifargonoM
F2 = un fattore 10 che tiene conto della variabilita© tra cumulativo dei fattori di sicurezza nella determinazione

ilareneG
gli individui. Un fattore di 10 e© generalmente del valore di EGP permetta di proteggere la categoria
dato per tutti i solventi organici, ed e© usato siste- dei pazienti adulti con peso corporeo inferiore a 50 kg.
maticamente in questa linea guida. Se il solvente e© presente in una formulazione specifica-
F3 = un fattore variabile che tiene conto degli studi di mente destinata ad un uso pediatrico, si deve effettuare

ehcituecamraF
tossicita© relativi ad un'esposizione a breve ter- una correzione ad un peso corporeo piu© basso.

emroF
mine. Un esempio dell'applicazione di questa equazione
F3 = 1 per gli studi che hanno una durata pari e© lo studio di tossicita© dell'acetonitrile nei topi riportato
a meta© della vita (1 anno per i roditori o in Pharmeuropa, Vol. 9, No. 1, Supplemento, Aprile
i conigli; 7 anni per i gatti, i cani e le 1997, pag. -1S24. Il -1NOEL e© calcolato come pari a
scimmie). 50,7 mg kg giorno . Il valore di EGP per l'acetonitrile
eiretaM

emirP
F3 = 1 per studi relativi alla riproduzione la cui e© calcolato, in questo studio, come segue:
durata e© pari all'intero periodo di orga-
nogenesi. EGP 50:7 mg kg 1 giorno 1 50 kg 4; 22 mg giorno
ÿ ÿ
2 1
12 10 5 1 1
ÿ

F3 = 2 per uno studio di sei mesi per i roditori o

ehcituecamraF

ˆ ˆ
inoizaraperP

2 2 2 2 2
ehcificepS

uno studio della durata di 3,5 anni per i

non roditori. In questo esempio,
F3 = 5 per uno studio di 3 mesi per i roditori o F1 = 12 per considerare l'estrapolazione dal topo
uno studio della durata di 2 anni per i non all'uomo
roditori.
ehcitapoemO
inoizaraperP

F2 = 10 per considerare le differenze tra gli individui

F3 = 10 per gli studi di durata piu© breve. F3 = 5 perchë la durata dello studio e© di sole 13 setti-
In tutti i casi, il fattore piu© alto e© stato usato per gli mane
studi la cui durata si colloca tra l'inizio e la fine di un
determinato periodo, per es. un fattore di 2 per uno stu- F4 = 1 perchë non e© stata rilevata alcuna tossicita©
dio di 9 mesi per i roditori. grave
ecidnI

F4 = un fattore che puo© essere applicato in casi di tos- F5 = 1 perchë e© stata determinata la ûdose di non
sicita© grave, per es. cancerogenicita© non genotos- effettoý (no-effect level)

573
Solventi residui

Tabella A3.1. - Valori utilizzati nei calcoli riportati Consumo di acqua del ratto 30 ml/giorno
in questo documento Consumo di cibo del ratto 30 g/giorno
Peso corporeo del ratto 425 g
Peso corporeo del ratto femmina gravida 330 g Negli studi di inalazione, per convertire le 3concentra-
Peso corporeo del topo 28 g zioni dei gas usati da ppm in mg/l o mg/m si utilizza
Peso corporeo del topo femmina gravida 30 g l'equazione dei gas ideali, PV = nRT. A titolo di esem-
Peso corporeo della cavia 500 g pio, si considera lo studio di tossicita© sulla riproduzione
Peso corporeo della scimmia Rhesus 2,5 kg del ratto per inalazione di carbonio tetracloruro
Peso corporeo del coniglio (gravido o no) 4 kg (peso molecolare 153,84) riportato in Pharmeuropa,
Peso corporeo del cane beagle 11,5 kg Vol. 9, No. 1, Supplemento, Aprile 1997, pag. S9.
Volume respiratorio del ratto 290 l/giorno
Volume respiratorio del topo 43 l/giorno n P
Volume respiratorio del coniglio 1440 l/giorno V RT
ˆ ˆ

Volume respiratorio della cavia 430 l/giorno 300 10 6 atm 153; 840 mg mol
ÿ ÿ 1 46; 15 mg 1; 89 mg=1
Volume respiratorio dell'uomo 28800 l/giorno
2 2
ˆ
0; 0821 atm K 1 mol 1 298 K
ÿ ÿ
ˆ
24; 451ˆ

Volume respiratorio del cane 9000 l/giorno

2

Volume respiratorio della scimmia 1150 l/giorno Per convertire il risultato in mg/m3 si utilizza la rela-
Consumo di acqua del topo 5 ml/giorno zione 1000 litri = 1 m .
3

574
 ecidnI
ilareneG isilanA id irotinetnoC ilareneG emirP ehcificepS ehcitapoemO
ilareneG ehcituecamraF
ivittaeR ehcituecamraF
inoizircserP idoteM / ilairetaM itnemogrA eifargonoM emroF eiretaM inoizaraperP
inoizaraperP
5.5. Tabelle alcoolimetriche
577
Tabelle alcoolimetriche . . . . . . . . . . .
5.5.
 Tabelle alcoolimetriche

inoizircserP

ilareneG
5.5. TABELLE ALCOOLIMETRICHE
% V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

La formula generale concordata dal Consiglio della 4,0 3,18 992,41

Comunita© Europea nella Direttiva del 27 luglio 1976 4,1 3,26 992,28
sull'alcoolimetria e© stata utilizzata come base per defi- 4,2 3,34 992,14
nire le seguenti tabelle.

isilanA id
4,3 3,42 992,00

idoteM
% V/V % m/m 4,4 3,50 991,87
4,5 3,58 991,73
3
q20 (kg/m )

0,0 0,00 998,20 4,6 3,66 991,59

0,1 0,08 998,05 4,7 3,74 991,46

irotinetnoC
/ ilairetaM
0,2 0,16 997,90 4,8 3,82 991,32
0,3 0,24 997,75 4,9 3,90 991,19
0,4 0,32 997,59
0,5 0,40 997,44 5,0 3,98 991,06
0,6 0,47 997,29 5,1 4,06 990,92
5,2 4,14 990,79

ivittaeR
0,7 0,55 997,14
0,8 0,63 996,99 5,3 4,22 990,65
0,9 0,71 996,85 5,4 4,30 990,52
5,5 4,38 990,39
1,0 0,79 996,70 5,6 4,46 990,26

itnemogrA
ilareneG
1,1 0,87 996,55 5,7 4,54 990,12
1,2 0,95 996,40 5,8 4,62 989,99
1,3 1,03 996,25 5,9 4,70 989,86
1,4 1,11 996,11
1,5 1,19 995,96 6,0 4,78 989,73

eifargonoM

ilareneG
1,6 1,27 995,81 6,1 4,86 989,60
1,7 1,35 995,67 6,2 4,95 989,47
1,8 1,43 995,52 6,3 5,03 989,34
1,9 1,51 995,38 6,4 5,11 989,21

ehcituecamraF
6,5 5,19 989,08
6,6 5,27 988,95

emroF
2,0 1,59 995,23 6,7 5,35 988,82
2,1 1,67 995,09 6,8 5,43 988,69
2,2 1,75 994,94 6,9 5,51 988,56
2,3 1,82 994,80
2,4 1,90 994,66
eiretaM
7,0 5,59 988,43

emirP
2,5 1,98 994,51 7,1 5,67 988,30
2,6 2,06 994,37 7,2 5,75 988,18
2,7 2,14 994,23 7,3 5,83 988,05
2,8 2,22 994,09
ehcituecamraF

7,4 5,91 987,92

inoizaraperP

ehcificepS

2,9 2,30 993,95 7,5 5,99 987,79

7,6 6,07 987,67
3,0 2,38 993,81 7,7 6,15 987,54
3,1 2,46 993,66 7,8 6,23 987,42
3,2 2,54 993,52
ehcitapoemO
inoizaraperP

7,9 6,32 987,29

3,3 2,62 993,38
3,4 2,70 993,24 8,0 6,40 987,16
3,5 2,78 993,11 8,1 6,48 987,04
3,6 2,86 992,97 8,2 6,56 986,91
3,7 2,94 992,83 8,3 6,64 986,79
3,8 3,02 992,69 8,4 6,72 986,66
ecidnI

3,9 3,10 992,55 8,5 6,80 986,54

577
Tabelle alcoolimetriche

% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

8,6 6,88 986,42 13,2 10,62 980,98

8,7 6,96 986,29 13,3 10,70 980,87
8,8 7,04 986,17 13,4 10,78 980,76
8,9 7,12 986,05 13,5 10,87 980,64
9,0 7,20 985,92 13,6 10,95 980,53
9,1 7,29 985,80 13,7 11,03 980,42
9,2 7,37 985,68 13,8 11,11 980,31
9,3 7,45 985,56 13,9 11,19 980,19
9,4 7,53 985,44
9,5 7,61 985,31 14,0 11,27 980,08
9,6 7,69 985,19 14,1 11,36 979,97
9,7 7,77 985,07 14,2 11,44 979,86
9,8 7,85 984,95 14,3 11,52 979,75
9,9 7,93 984,83 14,4 11,60 979,64
14,5 11,68 979,52
10,0 8,01 984,71 14,6 11,77 979,41
10,1 8,10 984,59 14,7 11,85 979,30
10,2 8,18 984,47 14,8 11,93 979,19
10,3 8,26 984,35 14,9 12,01 979,08
10,4 8,34 984,23
10,5 8,42 984,11 15,0 12,09 978,97
10,6 8,50 983,99 15,1 12,17 978,86
10,7 8,58 983,88 15,2 12,26 978,75
10,8 8,66 983,76 15,3 12,34 978,64
10,9 8,75 983,64 15,4 12,42 978,53
15,5 12,50 978,42
11,0 8,83 983,52 15,6 12,59 978,31
11,1 8,91 983,40 15,7 12,67 978,20
11,2 8,99 983,29 15,8 12,75 978,09
11,3 9,07 983,17 15,9 12,83 977,98
11,4 9,15 983,05
11,5 9,23 982,94 16,0 12,91 977,87
11,6 9,32 982,82 16,1 13,00 977,76
11,7 9,40 982,70 16,2 13,08 977,65
11,8 9,48 982,59 16,3 13,16 977,55
11,9 9,56 982,47 16,4 13,24 977,44
16,5 13,32 977,33
12,0 9,64 982,35 16,6 13,41 977,22
12,1 9,72 982,24 16,7 13,49 977,11
12,2 9,80 982,12 16,8 13,57 977,00
12,3 9,89 982,01 16,9 13,65 976,89
12,4 9,97 981,89
12,5 10,05 981,78 17,0 13,74 976,79
12,6 10,13 981,67 17,1 13,82 976,68
12,7 10,21 981,55 17,2 13,90 976,57
12,8 10,29 981,44 17,3 13,98 976,46
12,9 10,37 981,32 17,4 14,07 976,35
17,5 14,15 976,25
13,0 10,46 981,21 17,6 14,23 976,14
13,1 10,54 981,10 17,7 14,31 976,03

578
 Tabelle alcoolimetriche

inoizircserP

ilareneG
% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

17,8 14,40 975,92 22,3 18,12 971,08

17,9 14,48 975,81 22,4 18,21 970,97
22,5 18,29 970,86

isilanA id
18,0 14,56 975,71 22,6 18,37 970,75

idoteM
18,1 14,64 975,60 22,7 18,46 970,64
18,2 14,73 975,49 22,8 18,54 970,53
18,3 14,81 975,38 22,9 18,62 970,42
18,4 14,89 975,28

irotinetnoC
/ ilairetaM
18,5 14,97 975,17 23,0 18,71 970,31
18,6 15,06 975,06 23,1 18,79 970,20
18,7 15,14 974,95 23,2 18,87 970,09
18,8 15,22 974,85 23,3 18,96 969,98
18,9 15,30 974,74 23,4 19,04 969,87
23,5 19,13 969,76

ivittaeR
19,0 15,39 974,63 23,6 19,21 969,65
19,1 15,47 974,52 23,7 19,29 969,54
19,2 15,55 974,42 23,8 19,38 969,43
19,3 15,63 974,31 23,9 19,46 969,32

itnemogrA
ilareneG
19,4 15,72 974,20
19,5 15,80 974,09 24,0 19,54 969,21
19,6 15,88 973,99 24,1 19,63 969,10
19,7 15,97 973,88 24,2 19,71 968,99
19,8 16,05 973,77 24,3 19,79 968,88

eifargonoM

ilareneG
19,9 16,13 973,66 24,4 19,88 968,77
24,5 19,96 968,66
20,0 16,21 973,56 24,6 20,05 968,55
20,1 16,30 973,45 24,7 20,13 968,43

ehcituecamraF
20,2 16,38 973,34 24,8 20,21 968,32
20,3 16,46 973,24 24,9 20,30 968,21

emroF
20,4 16,55 973,13
20,5 16,63 973,02 25,0 20,38 968,10
20,6 16,71 972,91 25,1 20,47 967,99
20,7 16,79 972,80 25,2 20,55 967,87

eiretaM
20,8 16,88 972,70 25,3 20,63 967,76

emirP
20,9 16,96 972,59 25,4 20,72 967,65
25,5 20,80 967,53
21,0 17,04 972,48 25,6 20,88 967,42
ehcituecamraF

21,1 17,13 972,37 25,7 20,97 967,31

inoizaraperP

ehcificepS

21,2 17,21 972,27 25,8 21,05 967,19

21,3 17,29 972,16 25,9 21,14 967,08
21,4 17,38 972,05
21,5 17,46 971,94 26,0 21,22 966,97
ehcitapoemO
inoizaraperP

21,6 17,54 971,83 26,1 21,31 966,85

21,7 17,62 971,73 26,2 21,39 966,74
21,8 17,71 971,62 26,3 21,47 966,62
21,9 17,79 971,51 26,4 21,56 966,51
26,5 21,64 966,39
22,0 17,87 971,40 26,6 21,73 966,28
22,1 17,96 971,29 26,7 21,81 966,16
ecidnI

22,2 18,04 971,18 26,8 21,90 966,05

579
Tabelle alcoolimetriche

% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

26,9 21,98 965,93 31,4 25,80 960,44

31,5 25,89 960,31
27,0 22,06 965,81 31,6 25,97 960,18
27,1 22,15 965,70 31,7 26,06 960,05
27,2 22,23 965,58 31,8 26,15 959,92
27,3 22,32 965,46 31,9 26,23 959,79
27,4 22,40 965,35
27,5 22,49 965,23 32,0 26,32 959,66
27,6 22,57 965,11 32,1 26,40 959,53
27,7 22,65 964,99 32,2 26,49 959,40
27,8 22,74 964,88 32,3 26,57 959,27
27,9 22,82 964,76 32,4 26,66 959,14
32,5 26,75 959,01
28,0 22,91 964,64 32,6 26,83 958,87
28,1 22,99 964,52 32,7 26,92 958,74
28,2 23,08 964,40 32,8 27,00 958,61
28,3 23,16 964,28 32,9 27,09 958,47
28,4 23,25 964,16
28,5 23,33 964,04 33,0 27,18 958,34
28,6 23,42 963,92 33,1 27,26 958,20
28,7 23,50 963,80 33,2 27,35 958,07
28,8 23,59 963,68 33,3 27,44 957,94
28,9 23,67 963,56 33,4 27,52 957,80
33,5 27,61 957,66
29,0 23,76 963,44 33,6 27,69 957,53
29,1 23,84 963,32 33,7 27,78 957,39
29,2 23,93 963,20 33,8 27,87 957,26
29,3 24,01 963,07 33,9 27,95 957,12
29,4 24,10 962,95
29,5 24,18 962,83 34,0 28,04 956,98
29,6 24,27 962,71 34,1 28,13 956,84
29,7 24,35 962,58 34,2 28,21 956,70
29,8 24,44 962,46 34,3 28,30 956,57
29,9 24,52 962,33 34,4 28,39 956,43
34,5 28,47 956,29
30,0 24,61 962,21 34,6 28,56 956,15
30,1 24,69 962,09 34,7 28,65 956,01
30,2 24,78 961,96 34,8 28,73 955,87
30,3 24,86 961,84 34,9 28,82 955,73
30,4 24,95 961,71
30,5 25,03 961,59 35,0 28,91 955,59
30,6 25,12 961,46 35,1 28,99 955,45
30,7 25,20 961,33 35,2 29,08 955,30
30,8 25,29 961,21 35,3 29,17 955,16
30,9 25,38 961,08 35,4 29,26 955,02
35,5 29,34 954,88
31,0 25,46 960,95 35,6 29,43 954,73
31,1 25,55 960,82 35,7 29,52 954,59
31,2 25,63 960,70 35,8 29,60 954,44
31,3 25,72 960,57 35,9 29,69 954,30

580
 Tabelle alcoolimetriche

inoizircserP

ilareneG
% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

36,0 29,78 954,15 40,6 33,83 947,08

36,1 29,87 954,01 40,7 33,92 946,91
36,2 29,95 953,86 40,8 34,01 946,75

isilanA id
36,3 30,04 953,72 40,9 34,10 946,58

idoteM
36,4 30,13 953,57
36,5 30,21 953,42 41,0 34,19 946,42
36,6 30,30 953,28 41,1 34,28 946,26
36,7 30,39 953,13 41,2 34,37 946,09

irotinetnoC
/ ilairetaM
36,8 30,48 952,98 41,3 34,46 945,93
36,9 30,56 952,83 41,4 34,55 945,76
41,5 34,64 945,59
37,0 30,65 952,69 41,6 34,73 945,43
37,1 30,74 952,54 41,7 34,82 945,26
37,2 30,83 952,39 41,8 34,91 945,09

ivittaeR
37,3 30,92 952,24 41,9 35,00 944,93
37,4 31,00 952,09
37,5 31,09 951,94 42,0 35,09 944,76
37,6 31,18 951,79 42,1 35,18 944,59

itnemogrA
ilareneG
37,7 31,27 951,63 42,2 35,27 944,42
37,8 31,35 951,48 42,3 35,36 944,25
37,9 31,44 951,33 42,4 35,45 944,08
42,5 35,54 943,91
38,0 31,53 951,18 42,6 35,63 943,74

eifargonoM

ilareneG
38,1 31,62 951,02 42,7 35,72 943,57
38,2 31,71 950,87 42,8 35,81 943,40
38,3 31,79 950,72 42,9 35,90 943,23
38,4 31,88 950,56

ehcituecamraF
38,5 31,97 950,41 43,0 35,99 943,06
38,6 32,06 950,25 43,1 36,08 942,88

emroF
38,7 32,15 950,10 43,2 36,17 942,71
38,8 32,24 949,94 43,3 36,26 942,54
38,9 32,32 949,79 43,4 36,35 942,37
43,5 36,44 942,19

eiretaM
39,0 32,41 949,63 43,6 36,53 942,02

emirP
39,1 32,50 949,47 43,7 36,62 941,84
39,2 32,59 949,32 43,8 36,71 941,67
39,3 32,68 949,16 43,9 36,80 941,49
ehcituecamraF

39,4 32,77 949,00

inoizaraperP

ehcificepS

39,5 32,86 948,84 44,0 36,89 941,32

39,6 32,94 948,68 44,1 36,98 941,14
39,7 33,03 948,52 44,2 37,07 940,97
39,8 33,12 948,37 44,3 37,16 940,79
ehcitapoemO
inoizaraperP

39,9 33,21 948,21 44,4 37,25 940,61

44,5 37,35 940,43
40,0 33,30 948,05 44,6 37,44 940,26
40,1 33,39 947,88 44,7 37,53 940,08
40,2 33,48 947,72 44,8 37,62 939,90
40,3 33,57 947,56 44,9 37,71 939,72
40,4 33,66 947,40 45,0 37,80 939,54
ecidnI

40,5 33,74 947,24 45,1 37,89 939,36

581
Tabelle alcoolimetriche

% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

45,2 37,98 939,18 49,8 42,24 930,53

45,3 38,08 939,00 49,9 42,33 930,34
45,4 38,17 938,82
45,5 38,26 938,64 50,0 42,43 930,14
45,6 38,35 938,46 50,1 42,52 929,95
45,7 38,44 938,28 50,2 42,61 929,75
45,8 38,53 938,10 50,3 42,71 929,55
45,9 38,62 937,91 50,4 42,80 929,35
50,5 42,90 929,16
46,0 38,72 937,73 50,6 42,99 928,96
46,1 38,81 937,55 50,7 43,08 928,76
46,2 38,90 937,36 50,8 43,18 928,56
46,3 38,99 937,18 50,9 43,27 928,36
46,4 39,08 937,00
46,5 39,18 936,81 51,0 43,37 928,16
46,6 39,27 936,63 51,1 43,46 927,96
46,7 39,36 936,44 51,2 43,56 927,77
46,8 39,45 936,26 51,3 43,65 927,57
46,9 39,54 936,07 51,4 43,74 927,36
51,5 43,84 927,16
47,0 39,64 935,88 51,6 43,93 926,96
47,1 39,73 935,70 51,7 44,03 926,76
47,2 39,82 935,51 51,8 44,12 926,56
47,3 39,91 935,32 51,9 44,22 926,36
47,4 40,00 935,14
47,5 40,10 934,95 52,0 44,31 926,16
47,6 40,19 934,76 52,1 44,41 925,95
47,7 40,28 934,57 52,2 44,50 925,75
47,8 40,37 934,38 52,3 44,60 925,55
47,9 40,47 934,19 52,4 44,69 925,35
52,5 44,79 925,14
48,0 40,56 934,00 52,6 44,88 924,94
48,1 40,65 933,81 52,7 44,98 924,73
48,2 40,75 933,62 52,8 45,07 924,53
48,3 40,84 933,43 52,9 45,17 924,32
48,4 40,93 933,24
48,5 41,02 933,05 53,0 45,26 924,12
48,6 41,12 932,86 53,1 45,36 923,91
48,7 41,21 932,67 53,2 45,46 923,71
48,8 41,30 932,47 53,3 45,55 923,50
48,9 41,40 932,28 53,4 45,65 923,30
53,5 45,74 923,09
49,0 41,49 932,09 53,6 45,84 922,88
49,1 41,58 931,90 53,7 45,93 922,68
49,2 41,68 931,70 53,8 46,03 922,47
49,3 41,77 931,51 53,9 46,13 922,26
49,4 41,86 931,31
49,5 41,96 931,12 54,0 46,22 922,06
49,6 42,05 930,92 54,1 46,32 921,85
49,7 42,14 930,73 54,2 46,41 921,64

582
 Tabelle alcoolimetriche

inoizircserP

ilareneG
% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

54,3 46,51 921,43 58,9 51,00 911,55

54,4 46,61 921,22
54,5 46,70 921,01 59,0 51,10 911,33

isilanA id
54,6 46,80 920,80 59,1 51,19 911,11

idoteM
54,7 46,90 920,59 59,2 51,29 910,89
54,8 46,99 920,38 59,3 51,39 910,67
54,9 47,09 920,17 59,4 51,49 910,45
59,5 51,59 910,23

irotinetnoC
/ ilairetaM
55,0 47,18 919,96 59,6 51,69 910,01
55,1 47,28 919,75 59,7 51,79 909,78
55,2 47,38 919,54 59,8 51,89 909,56
55,3 47,47 919,33 59,9 51,99 909,34
55,4 47,57 919,12
55,5 47,67 918,91 60,0 52,09 909,11

ivittaeR
55,6 47,77 918,69 60,1 52,19 908,89
55,7 47,86 918,48 60,2 52,29 908,67
55,8 47,96 918,27 60,3 52,39 908,44
55,9 48,06 918,06 60,4 52,49 908,22

itnemogrA
ilareneG
60,5 52,59 908,00
56,0 48,15 917,84 60,6 52,69 907,77
56,1 48,25 917,63 60,7 52,79 907,55
56,2 48,35 917,42 60,8 52,89 907,32
56,3 48,45 917,20 60,9 52,99 907,10

eifargonoM

ilareneG
56,4 48,54 916,99
56,5 48,64 916,77 61,0 53,09 906,87
56,6 48,74 916,56 61,1 53,19 906,64
56,7 48,84 916,35 61,2 53,29 906,42

ehcituecamraF
56,8 48,93 916,13 61,3 53,39 906,19
56,9 49,03 915,91 61,4 53,49 905,97

emroF
61,5 53,59 905,74
57,0 49,13 915,70 61,6 53,69 905,51
57,1 49,23 915,48 61,7 53,79 905,29
57,2 49,32 915,27 61,8 53,89 905,06

eiretaM
57,3 49,42 915,05 61,9 53,99 904,83

emirP
57,4 49,52 914,83
57,5 49,62 914,62 62,0 54,09 904,60
57,6 49,72 914,40 62,1 54,19 904,37
ehcituecamraF

57,7 49,81 914,18 62,2 54,30 904,15

inoizaraperP

ehcificepS

57,8 49,91 913,97 62,3 54,40 903,92

57,9 50,01 913,75 62,4 54,50 903,69
62,5 54,60 903,46
58,0 50,11 913,53 62,6 54,70 903,23
ehcitapoemO
inoizaraperP

58,1 50,21 913,31 62,7 54,80 903,00

58,2 50,31 913,09 62,8 54,90 902,77
58,3 50,40 912,87 62,9 55,00 902,54
58,4 50,50 912,65
58,5 50,60 912,43 63,0 55,11 902,31
58,6 50,70 912,22 63,1 55,21 902,08
58,7 50,80 912,00 63,2 55,31 901,85
ecidnI

58,8 50,90 911,78 63,3 55,41 901,62

583
Tabelle alcoolimetriche

% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

63,4 55,51 901,39 68,1 60,37 890,23

63,5 55,61 901,15 68,2 60,48 889,99
63,6 55,72 900,92 68,3 60,58 889,75
63,7 55,82 900,69 68,4 60,69 889,50
63,8 55,92 900,46 68,5 60,80 889,26
63,9 56,02 900,23 68,6 60,90 889,01
64,0 56,12 899,99 68,7 61,01 888,77
64,1 56,23 899,76 68,8 61,11 888,52
64,2 56,33 899,53 68,9 61,22 888,28
64,3 56,43 899,29
64,4 56,53 899,06 69,0 61,32 888,03
64,5 56,64 898,83 69,1 61,43 887,79
64,6 56,74 898,59 69,2 61,54 887,54
64,7 56,84 898,36 69,3 61,64 887,29
64,8 56,94 898,12 69,4 61,75 887,05
64,9 57,05 897,89 69,5 61,85 886,80
69,6 61,96 886,55
65,0 57,15 897,65 69,7 62,07 886,31
65,1 57,25 897,42 69,8 62,17 886,06
65,2 57,36 897,18 69,9 62,28 885,81
65,3 57,46 896,94
65,4 57,56 896,71 70,0 62,39 885,56
65,5 57,67 896,47 70,1 62,49 885,31
65,6 57,77 896,23 70,2 62,60 885,06
65,7 57,87 896,00 70,3 62,71 884,82
65,8 57,98 895,76 70,4 62,81 884,57
65,9 58,08 895,52 70,5 62,92 884,32
66,0 58,18 895,28 70,6 63,03 884,07
66,1 58,29 895,05 70,7 63,13 883,82
66,2 58,39 894,81 70,8 63,24 883,57
66,3 58,49 894,57 70,9 63,35 883,32
66,4 58,60 894,33
66,5 58,70 894,09 71,0 63,46 883,06
66,6 58,81 893,85 71,1 63,56 882,81
66,7 58,91 893,61 71,2 63,67 882,56
66,8 59,01 893,37 71,3 63,78 882,31
66,9 59,12 893,13 71,4 63,89 882,06
71,5 63,99 881,81
67,0 59,22 892,89 71,6 64,10 881,55
67,1 59,33 892,65 71,7 64,21 881,30
67,2 59,43 892,41 71,8 64,32 881,05
67,3 59,54 892,17 71,9 64,43 880,79
67,4 59,64 891,93
67,5 59,74 891,69 72,0 64,53 880,54
67,6 59,85 891,45 72,1 64,64 880,29
67,7 59,95 891,20 72,2 64,75 880,03
67,8 60,06 890,96 72,3 64,86 879,78
67,9 60,16 890,72 72,4 64,97 879,52
72,5 65,08 879,27
68,0 60,27 890,48 72,6 65,19 879,01

584
 Tabelle alcoolimetriche

inoizircserP

ilareneG
% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

72,7 65,29 878,75 77,3 70,39 866,67

72,8 65,40 878,50 77,4 70,51 866,40
72,9 65,51 878,24 77,5 70,62 866,13

isilanA id
73,0 65,62 877,99 77,6 70,73 865,86

idoteM
73,1 65,73 877,73 77,7 70,85 865,59
73,2 65,84 877,47 77,8 70,96 865,32
73,3 65,95 877,21 77,9 71,07 865,05
73,4 66,06 876,96

irotinetnoC
/ ilairetaM
73,5 66,17 876,70 78,0 71,19 864,78
73,6 66,28 876,44 78,1 71,30 864,50
73,7 66,39 876,18 78,2 71,41 864,23
73,8 66,50 875,92 78,3 71,53 863,96
73,9 66,61 875,66 78,4 71,64 863,69
78,5 71,76 863,41

ivittaeR
74,0 66,72 875,40 78,6 71,87 863,14
74,1 66,83 875,14 78,7 71,98 862,86
74,2 66,94 874,88 78,8 72,10 862,59
74,3 67,05 874,62 78,9 72,21 862,31

itnemogrA
ilareneG
74,4 67,16 874,36
74,5 67,27 874,10 79,0 72,33 862,04
74,6 67,38 873,84 79,1 72,44 861,76
74,7 67,49 873,58 79,2 72,56 861,49
74,8 67,60 873,32 79,3 72,67 861,21

eifargonoM

ilareneG
74,9 67,71 873,06 79,4 72,79 860,94
79,5 72,90 860,66
75,0 67,82 872,79 79,6 73,02 860,38
75,1 67,93 872,53 79,7 73,13 860,10

ehcituecamraF
75,2 68,04 872,27 79,8 73,25 859,83
75,3 68,15 872,00 79,9 73,36 859,55

emroF
75,4 68,26 871,74
75,5 68,38 871,48 80,0 73,48 859,27
75,6 68,49 871,21 80,1 73,60 858,99
75,7 68,60 870,95 80,2 73,71 858,71

eiretaM
75,8 68,71 870,68 80,3 73,83 858,43

emirP
75,9 68,82 870,42 80,4 73,94 858,15
80,5 74,06 857,87
76,0 68,93 870,15 80,6 74,18 857,59
ehcituecamraF

76,1 69,04 869,89 80,7 74,29 857,31

inoizaraperP

ehcificepS

76,2 69,16 869,62 80,8 74,41 857,03

76,3 69,27 869,35 80,9 74,53 856,75
76,4 69,38 869,09
76,5 69,49 868,82 81,0 74,64 856,46
ehcitapoemO
inoizaraperP

76,6 69,61 868,55 81,1 74,76 856,18

76,7 69,72 868,28 81,2 74,88 855,90
76,8 69,83 868,02 81,3 74,99 855,62
76,9 69,94 867,75 81,4 75,11 855,33
81,5 75,23 855,05
77,0 70,06 867,48 81,6 75,34 854,76
77,1 70,17 867,21 81,7 75,46 854,48
ecidnI

77,2 70,28 866,94 81,8 75,58 854,19

585
Tabelle alcoolimetriche

% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

81,9 75,70 853,91 86,5 81,24 840,31

86,6 81,37 840,00
82,0 75,82 853,62 86,7 81,49 839,70
82,1 75,93 853,34 86,8 81,61 839,39
82,2 76,05 853,05 86,9 81,74 839,08
82,3 76,17 852,76
82,4 76,29 852,48 87,0 81,86 838,77
82,5 76,41 852,19 87,1 81,99 838,46
82,6 76,52 851,90 87,2 82,11 838,15
82,7 76,64 851,61 87,3 82,24 837,84
82,8 76,76 851,32 87,4 82,36 837,52
82,9 76,88 851,03 87,5 82,49 837,21
87,6 82,61 836,90
83,0 77,00 850,74 87,7 82,74 836,59
83,1 77,12 850,45 87,8 82,86 836,27
83,2 77,24 850,16 87,9 82,99 835,96
83,3 77,36 849,87
83,4 77,48 849,58 88,0 83,11 835,64
83,5 77,60 849,29 88,1 83,24 835,32
83,6 77,72 848,99 88,2 83,37 835,01
83,7 77,84 848,70 88,3 83,49 834,69
83,8 77,96 848,41 88,4 83,62 834,37
83,9 78,08 848,11 88,5 83,74 834,05
84,0 78,20 847,82 88,6 83,87 833,73
84,1 78,32 847,53 88,7 84,00 833,41
84,2 78,44 847,23 88,8 84,13 833,09
84,3 78,56 846,93 88,9 84,25 832,77
84,4 78,68 846,64 89,0 84,38 832,45
84,5 78,80 846,34 89,1 84,51 832,12
84,6 78,92 846,05 89,2 84,64 831,80
84,7 79,04 845,75
84,8 79,16 845,45 89,3 84,76 831,48
84,9 79,28 845,15 89,4 84,89 831,15
85,0 79,40 844,85 89,5 85,02 830,82
85,1 79,53 844,55 89,6 85,15 830,50
85,2 79,65 844,25 89,7 85,28 830,17
85,3 79,77 843,95 89,8 85,41 829,84
85,4 79,89 843,65 89,9 85,54 829,51
85,5 80,01 843,35
85,6 80,14 843,05 90,0 85,66 829,18
85,7 80,26 842,75 90,1 85,79 828,85
85,8 80,38 842,44 90,2 85,92 828,52
85,9 80,50 842,14 90,3 86,05 828,19
90,4 86,18 827,85
86,0 80,63 841,84 90,5 86,31 827,52
86,1 80,75 841,53 90,6 86,44 827,18
86,2 80,87 841,23 90,7 86,57 826,85
86,3 81,00 840,92 90,8 86,71 826,51
86,4 81,12 840,62 90,9 86,84 826,17

586
 Tabelle alcoolimetriche

inoizircserP

ilareneG
% V/V % m/m 3
q20 (kg/m ) % V/V % m/m 3
q20 (kg/m )

91,0 86,97 825,83 95,6 93,26 809,02

91,1 87,10 825,49 95,7 93,41 808,63
91,2 87,23 825,15 95,8 93,55 808,23

isilanA id
91,3 87,36 824,81 95,9 93,69 807,82

idoteM
91,4 87,49 824,47
91,5 87,63 824,13 96,0 93,84 807,42
91,6 87,76 823,78 96,1 93,98 807,01
91,7 87,89 823,44 96,2 94,13 806,61

irotinetnoC
/ ilairetaM
91,8 88,02 823,09 96,3 94,27 806,20
91,9 88,16 822,74 96,4 94,42 805,78
96,5 94,57 805,37
92,0 88,29 822,39 96,6 94,71 804,96
92,1 88,42 822,04 96,7 94,86 804,54
92,2 88,56 821,69 96,8 95,01 804,12

ivittaeR
92,3 88,69 821,34 96,9 95,16 803,70
92,4 88,83 820,99
92,5 88,96 820,63 97,0 95,31 803,27
92,6 89,10 820,28 97,1 95,45 802,85

itnemogrA
ilareneG
92,7 89,23 819,92 97,2 95,60 802,42
92,8 89,37 819,57 97,3 95,75 801,99
92,9 89,50 819,21 97,4 95,90 801,55
97,5 96,05 801,12
93,0 89,64 818,85 97,6 96,21 800,68

eifargonoM

ilareneG
93,1 89,77 818,49 97,7 96,36 800,24
93,2 89,91 818,12 97,8 96,51 799,80
93,3 90,05 817,76 97,9 96,66 799,35
93,4 90,18 817,40

ehcituecamraF
93,5 90,32 817,03 98,0 96,81 798,90
93,6 90,46 816,66 98,1 96,97 798,45

emroF
93,7 90,59 816,30 98,2 97,12 798,00
93,8 90,73 815,93 98,3 97,28 797,54
93,9 90,87 815,55 98,4 97,43 797,08
98,5 97,59 796,62

eiretaM
94,0 91,01 815,18 98,6 97,74 796,15

emirP
94,1 91,15 814,81 98,7 97,90 795,68
94,2 91,29 814,43 98,8 98,06 795,21
94,3 91,43 814,06 98,9 98,22 794,73
ehcituecamraF

94,4 91,56 813,68

inoizaraperP

ehcificepS

94,5 91,70 813,30 99,0 98,38 794,25

94,6 91,84 812,92 99,1 98,53 793,77
94,7 91,98 812,54 99,2 98,69 793,28
94,8 92,13 812,15 99,3 98,86 792,79
ehcitapoemO
inoizaraperP

94,9 92,27 811,77 99,4 99,02 792,30

99,5 99,18 791,80
95,0 92,41 811,38 99,6 99,34 791,29
95,1 92,55 810,99 99,7 99,50 790,79
95,2 92,69 810,60 99,8 99,67 790,28
95,3 92,83 810,21 99,9 99,83 789,76
95,4 92,98 809,82
ecidnI

95,5 93,12 809,42 100,0 100,0 789,24

587
 ecidnI
ilareneG isilanA id irotinetnoC ilareneG emirP ehcificepS ehcitapoemO
ilareneG ehcituecamraF
ivittaeR ehcituecamraF
inoizircserP idoteM / ilairetaM itnemogrA eifargonoM emroF eiretaM inoizaraperP
inoizaraperP
5.6. Dosaggio degli interferoni
591
Dosaggio degli interferoni . . . . . . . . .
5.6.
 Dosaggio degli interferoni

inoizircserP
Per le colture di cellule di origine umana tutte le proce-

ilareneG
5.6. DOSAGGIO DEGLI INTERFERONI
dure che si utilizzano sono quelle operative standard
La sezione seguente si riporta come informazione. per il mantenimento in coltura di tali linee cellulari. I
volumi dei reattivi sono indicati per colture cellulari
1. INTRODUZIONE effettuate in flaconi da 75 cm . Si possono usare altri
2
tipi di contenitori (bottiglie o piastre) ma i volumi

isilanA id
Le monografie sugli interferoni di origine umana gene-

idoteM
ralmente descrivono un dosaggio biologico basato sul- devono essere conseguentemente adattati.
l'attivita© inibitoria esercitata dall'interferone sull'azione
citopatica di un virus in una linea cellulare in coltura. 3.1 LULE
MANTENIMENTO E PREPARAZIONE DELLE CEL-
HEP2C
Nella maggior parte dei casi, tuttavia, non sono specifi-

irotinetnoC
/ ilairetaM
cati il virus, la linea cellulare ed i dettagli del dosaggio, Le cellule Hep2c sono mantenute e passate nel terreno
in particolare per consentire l'appropriata flessibilita© di coltura A. Le cellule sono conservate in aliquote con-
laddove la monografia si riferisce a piu© di una sotto- gelate usando procedure operative standard. Le cellule
classe di interferoni. in crescita possono essere mantenute in coltura fino ad
Questo testo e© destinato a fornire un'informazione un numero massimo di 30 passaggi, dopo il quale
schematica all'analista su come progettare, ottimizzare devono essere allestite nuove colture a partire dalle ali-

ivittaeR
e convalidare un dosaggio una volta che e© stata identifi- quote congelate.
cata un'appropriata combinazione della linea cellulare All'inizio della procedura di dosaggio, raccogliere le
e del virus citopatico. La procedura dettagliata per un cellule dai flaconi che presentano il 90 per cento di con-
dosaggio antivirale basato sull'analisi dell'effetto cito- fluenza del monostrato, usando la procedura che pre-

itnemogrA
patico viene descritta riportandola come esempio di un vede il trattamento con tripsina descritto di seguito.

ilareneG
saggio adeguato, insieme all'informazione su altre com- ^ Rimuovere il terreno di coltura dai flaconi.
binazioni di linee cellulari e virus, e come linea guida
su come adattare e convalidare la procedura per queste ^ A ciascun flacone aggiungere 5 ml di una soluzione
altre combinazioni. di tripsina scaldata a 37 ‘C (la soluzione madre di tri-
psina contiene 4 mg/ml di tripsina R e 4 mg/ml di

eifargonoM

ilareneG
2. DOSAGGI ANTIVIRALI (RIDUZIONE DEL- sodio edetato R; usare immediatamente prima del-
L'EFFETTO CITOPATICO) l'uso diluendo 50 volte con la soluzione salina tam-
Il dosaggio antivirale degli interferoni di origine umana lavare il monostrato Ruotare
ponata con fosfato). il flacone chiuso per
cellulare. Rimuovere l'eccesso
e© basato sull'induzione di una risposta che previene o della soluzione di tripsina.

ehcituecamraF
riduce l'effetto citopatico di un virus in cellule umane. ^ Incubare i flaconi per 5-10 min a 37 ‘C. Osservare al

emroF
L'attivita© biologica dell'interferone e© valutata confron- microscopio o ad occhio nudo le cellule per eviden-
tando il suo effetto protettivo verso l'effetto citopatico ziare i segni di distaccamento. Quando sono osser-
virale rispetto allo stesso effetto indotto dall'appro- vate al microscopio le cellule appaiono arrotondate
priata preparazione di riferimento titolata in Unita© o distaccate e galleggianti. Agitare il flacone energi-
Internazionali.
eiretaM
camente per distaccare tutte le cellule, ed aggiungere

emirP
3. DOSAGGIO DELL'INTERFERONE USANDO circa mente
5 ml di terreno di coltura A. Agitare energica-
in modo da ottenere una sospensione di sin-
LE CELLULE Hep2c E IL VIRUS DELL'ENCEFA- gole cellule.
LOMIOCARDITE INFETTIVA
ehcituecamraF

Il dosaggio antivirale degli interferoni di origine umana ^ Per preparare la sospensione cellulare per la titola-
inoizaraperP

ehcificepS

descritto si basa sulla riduzione dell'effetto citopatico. cellule dell'interferone,

zione disperdere accuratamente le
Si utilizzano cellule umane Hep2c infettate con il virus aggregatimediante cellulari.
pipettamento per eliminare gli
Contare le cellule e sospenderle
dell'encefalomiocardite (EMCV) per misurare l'attivita© di nuovo ad una concentrazione di 6 105 cellule/
biologica di differenti preparazioni di interferoni di ori- ml. 2
ehcitapoemO
inoizaraperP

gine umana. Il dosaggio e© stato usato in tre studi inter-

nazionali collaborativi dell'Organizzazione Mondiale 3.2 PROPAGAZIONE DEL VIRUS DELL'ENCEFALO-
della Sanita© (OMS) di Standard Internazionali proposti MIOCARDITE
per l'interferone alfa, l'interferone beta e l'interferone
gamma di origine umana ed ha dimostrato ripetuta- Il virus dell'encefalomiocardite e© propagato nelle cellule
mente di essere sensibile, realizzabile e riproducibile di topo L-929 in modo da ottenere una sospensione
ecidnI

per la valutazione dell'attivita© biologica di differenti tipi madre di virus. Le cellule L-929 sono mantenute in col-
di interferone. tura mediante trattamento con tripsina e passaggio

591
Dosaggio degli interferoni

come descritto per le cellule Hep2c (NOTA: nel caso di a 96 pozzetti. Aggiungere a ciascun pozzetto 100 ml di
una crescita scarsa puo© essere necessario sostituire il siero terreno di coltura A. Aggiungere circa 100 ml di cia-
di vitello neonato con il siero fetale bovino). scuna diluizione della preparazione di riferimento a cia-
Prendere alcuni flaconi contenenti colture confluenti di scun pozzetto ad eccezione di quelli destinati al con-
cellule L-929.Prelevare il terreno contenuto nei flaconi. trollo virale ed al controllo cellule. Mescolare il conte-
Introdurre in ciascun flacone 2 ml della sospensione nuto dei pozzetti usando una pipetta multicanale
del virus dell'encefalomiocardite appropriatamente regolata a 100 ml.
diluito nel terreno di coltura B in modo che quest'ul-
timo contenga circa 2,5 108 unita formanti colonie
2 Ripartizione della sospensione cellulare
(UFC) per millilitro. Ciascun flacone conterra© Versare la sospensione cellulare di cellule Hep2c,
4-6 107 cellule L-929 e quindi la molteplicita© dell'infe-
2
precedentemente portata alla concentrazione di circa
zione sara© circa 10 UFC/cellula. Distribuire, con pre- 6 105 cellule per ml in terreno di coltura A, su una
cauzione ed agitando circolarmente, la sospensione 2

piastra di Petri. Distribuire 100 l di questa sospensione

virale sull'intero monostrato cellulare; riporre i flaconi l

cellulare in ciascun pozzetto delle piastre da microtito-

in un incubatore per circa 1 h. Mantenere il terreno a lazione usando una pipetta multicanale.
pH 7,4-7,8. Incubare le piastre per circa 24 h in un incubatore a
Dopo l'adsorbimento del virus EMCV, aggiungere a 37 ‘C e con il 5 per cento di CO2.
ciascun flacone circa 40 ml di terreno di coltura B e
riporre i flaconi in un incubatore a 37 ‘C per circa Infezione virale
30 h. Mantenere il terreno a pH 7,4-7,8 in modo da
ottenere una resa virale massima. Prelevare il superna- A questo punto, usando un microscopio rovesciato,
tante della coltura e conservarlo a circa 40 ‘C. verificare che i monostrati di cellule Hep2c siano con-
Porre i flaconi a -20 ‘C per congelare il monostrato cel- fluenti, che presentino una distribuzione relativamente
lulare, poi scongelarli a temperatura ambiente. Aggiun- uniforme, che abbiano una corretta morfologia e che
gere circa 5 ml di terreno di coltura ed agitare il flacone siano vitali.
per rompere la membrana cellulare. Trasferire il conte- Eliminare la maggior parte di terreno di coltura dai
nuto di ciascun flacone nel contenitore in cui era stato pozzetti rovesciando la piastra, scuotendola ed asciu-
raccolto il supernatante della coltura. Trasferire il gandola con della carta assorbente (procedere nello
supernatante della coltura contenete il virus dell'ence- stesso modo quando si eliminano i fluidi dalle piastre
falomiocardite in provette di plastica da centrifuga da di microtitolazione come descritto piu© avanti). Diluire
50 ml e centrifugare a circa 500 g per circa 10 min per la sospensione madre di virus dell'encefalomiocardite
eliminare i detriti cellulari. Ripartire il supernatante di con il terreno di coltura A preparato di recente in modo
coltura chiarificato in contenitori di vetro con tappo a da ottenere un titolo di circa 3 107 UFC per ml
2

vite, in quantita© di 20 ml, 10 ml, 5 ml, 1 ml, 0,5 ml o (NOTA: sono necessari circa 20 ml di virus diluito per cia-
0,2 ml a seconda del caso. Conservare a -70 ‘C. Volumi scuna piastra, piu© il 5-10 per cento di volume in eccesso).
piu© grandi possono essere scongelati, ripartiti in quan- Distribuire 200 ml di sospensione virale precedente-
tita© piu© piccole e congelati di nuovo se necessario. La mente diluita, mediante una pipetta multicanale, da
sospensione madre di virus dell'encefalomiocardite una piastra di Petri sterile in tutti i pozzetti compresi
rimarra© al suo titolo iniziale se conservata costante- quelli dei controlli del virus escludendo quelli destinati
mente a circa -70 ‘C; cicli ripetuti di congelamento e per i controlli delle cellule. Aggiungere circa 200 l di
l

scongelamento o la conservazione a temperature piu© terreno di coltura A privo di virus a ciascuno dei poz-
elevate, per es. -20 ‘C, provoca una perdita progressiva zetti delle cellule di controllo.
del titolo. Riporre le piastre in incubatore a 37 ‘C e con il 5 per
3.3 PROCEDURA DI DOSAGGIO
cento di CO2 per circa 24 h.
3.3.1. Determinazione dell'intervallo dose-risposta.
Colorazione
Preparazione delle soluzioni Esaminare le piastre al microscopio per verificare che il
Diluire l'appropriato standard dell'interferone (per es. virus dell'encefalomiocardite abbia provocato un
uno standard OMS specifico per il sotto-tipo di interfe- effetto citopatico nei pozzetti di controllo contenenti
rone) nel terreno di coltura A in modo da ottenere una virus. Il tempo necessario per ottenere un effetto cito-
serie di diluizioni in ragione di 10 che comprende l'in- patico massimo puo© variare da un saggio all'altro a
tervallo di dosi 1000-0,001 U.I./ml. Effettuare la proce- causa della variabilita© intrinseca delle cellule Hep2c
dura di dosaggio utilizzando piastre di microtitolazione all'infezione virale che si puo© avere durante un determi-

592
 Dosaggio degli interferoni

inoizircserP
nato periodo di coltivazione continua. Rimuovere la

ilareneG
3.3.3. Analisi dei dati

maggior parte del terreno di coltura dai pozzetti elimi- I risultati del dosaggio di riduzione dell'effetto citopa-
nandola in una appropriata soluzione di decontamina- tico seguono generalmente una curva dose-risposta di
zione (il sodio ipoclorito e© adatto). Distribuire tampone tipo sigmoidale quando si riporta la concentrazione
fosfato soluzione salina a pH 7,4 R in ciascun pozzetto. dell'interferone (il log del reciproco della diluizione di
Eliminare il tampone fosfato soluzione salina a pH 7,4 R

isilanA id
idoteM
nella soluzione di decontaminazione. Ripartire in cia- interferone) in funzione dell'assorbanza.
scun pozzetto 150 ml di soluzione colorante e colorare Riportare su grafico la concentrazione dell'interferone
le cellule per circa 30 min a temperatura ambiente. Eli- (il log del reciproco della diluizione) in funzione dell'as-
minare la soluzione colorante in una soluzione di sorbanza della preparazione di riferimento dell'interfe-
rone e le soluzioni in esame dell'interferone. Usare la

irotinetnoC
decontaminazione. Distribuire in ciascun pozzetto

/ ilairetaM
150 ml circa di fissazione e lasciare agire per 10 min a parte lineare della curva e calcolare la concentrazione
temperatura ambiente. Eliminare la soluzione di fissa- dell'interferone nel campione confrontando i valori
zione nella soluzione di decontaminazione e lavare i della soluzione in esame e delle soluzioni di riferimento
monostrati cellulari immergendo le piastre da titola- usando i metodi statistici usuali per un dosaggio a linee
zione in un recipiente di plastica contenente acqua parallele.

ivittaeR
corrente. Eliminare l'acqua ed asciugare la superficie
delle piastre con carta assorbente. Asciugare le piastre 4. CONVALIDA DELLE ALTRE PROCEDURE
a 20-37 ‘C fino ad evaporazione completa dell'umidita© .
4.1. SCELTA DELLA LINEA CELLULARE E DEL VIRUS
Aggiungere a ciascun pozzetto 150 ml di sodio idrossi-

itnemogrA
do 0,1 M. Eluire il colorante agitando dolcemente le Diverse combinazioni di linee cellulari e virus possono

ilareneG
piastre o battendole sul palmo della mano. Fare atten- essere utilizzate nei dosaggi antivirali degli interferoni.
zione che il colorante sia distribuito uniformemente Per esempio il virus dell'encefalomiocardite e© stato
in tutti i pozzetti prima di effettuare le letture spettrofo- usato in combinazione con la linea cellulare A549 del
tometriche. carcinoma epiteliale del polmone; il virus della foresta

eifargonoM
di Semliki o il virus Sindbis sono stati usati con fibro-

ilareneG
Leggere l'assorbanza a 610-620 nm mediante un lettore blasti umani; il virus della stomatite vescicolare e© stato
di piastre da microtitolazione usando come bianco un usato con fibroblasti diploidi di origine umana, con la
pozzetto o una colonna di pozzetti che non contengono linea cellulare amniotica umana WISH e con la linea
cellule ma circa 150 ml di sodio idrossido 0,1 M. di cellule renali di origine bovina di Madin-Darby. In

ehcituecamraF
Valutare le concentrazioni dello standard di interferone ogni caso la scelta della combinazione linea cellulare-
virus e© effettuata generalmente sulla base di quella che

emroF
che danno la massima riduzione e la minima riduzione fornisce la risposta piu© sensibile per la preparazione di
dell'effetto citopatico. Queste concentrazioni corri- interferone da dosare e che permette di ottenere rispo-
spondono all'intervallo di lavoro del dosaggio. ste parallele quando si confrontano la preparazione in
esame e lo standard di interferone.

eiretaM

emirP
3.3.2. Procedura di dosaggio 4.2. SCELTA DELLA TECNICA DI COLORAZIONE
Effettuare il dosaggio come descritto precedentemente La tecnica di colorazione descritta precedentemente
misura le cellule vitali. Sono state utilizzate anche altre
ehcituecamraF
inoizaraperP

usando:
ehcificepS

tecniche, tra cui la colorazione con violetto di metile e

^ come soluzioni in esame, la sostanza che deve essere con cristal violetto o la procedura di conversione all'az-
titolata, diluita in ragione di due con il terreno di col- zurro di tiazolile. In ogni caso il metodo e© selezionato
tura A in modo da ottenere concentrazioni nominali sulla base della produzione di un'appropriata relazione
che comprendono l'intervallo di lavoro del dosaggio, lineare e sensibile tra la colorazione e la conta delle cel-
ehcitapoemO
inoizaraperP

lule vitali.
^ come soluzioni di riferimento, una serie di diluizioni
in ragione di due dell'appropriato standard per l'in- 4.3. CONVALIDA STATISTICA
terferone (per es. uno standard OMS specifico per
un sotto-tipo di interferone) diluito con il terreno di Come in tutti i dosaggi biologici effettuati secondo il
coltura A in modo da ottenere concentrazioni nomi- modello a linee parallele, il dosaggio dell'attivita© antivi-
ecidnI

nali che comprendono l'intervallo di lavoro del rale deve soddisfare i criteri statistici solidi di linearita©
dosaggio. della risposta, del parallelismo e della varianza.

593
Dosaggio degli interferoni

4.4. CONVALIDA DELLO SCHEMA DI DOSAGGIO Terreno di coltura B (siero fetale bovino: 2 per cento)
Come per tutti i dosaggi su piastre di microtitolazione e© Terreno di coltura RPMI 1640 se necessario
necessaria una validazione dello schema di dosaggio addizionato di antibiotici (penicillina
utilizzato. In particolare devono essere rivelati gli errori 10000 U.I./ml; streptomicina 10ng/ml) 490 ml
dovuti ad un ordine di mescolamento non casuale dei l- Glutammina, 200 mM, sterile 5 ml
pozzetti o agli effetti dei bordi della piastra e devono Siero di vitello neonato 10 ml
essere valutati ed eliminati mediante randomizzazione
dello schema di dosaggio o evitando di utilizzare i poz- Soluzione di colorazione
zetti ai bordi della piastra.
Naftalene nero 0,5 g
REATTIVI E TERRENI DI COLTURA Acido acetico glaciale 90 ml
Sodio acetato anidro 8,2 g
Terreno di coltura A (siero di vitello neonato: 10 per Acqua in modo da ottenere 1000 ml
cento)
Terreno di coltura RPMI 1640 se necessario Soluzione per la fissazione
addizionato di antibiotici (penicillina Formaldeide 40 per cento 100 ml
10000 U.I./ml; streptomicina 10ng/ml) 450 ml Acido acetico glaciale 90 ml
l- Glutammina, 200 mM, sterile 5 ml Sodio acetato anidro 8,2 g
Siero di vitello neonato 50 ml Acqua in modo da ottenere 1000 ml

594
 5.7. Tabella

inoizircserP

ilareneG
delle caratteristiche fisiche
dei radionuclidi menzionati

isilanA id
idoteM
nella Farmacopea Europea

irotinetnoC
/ ilairetaM
5.7. Tabella delle caratteristiche fisiche dei

ivittaeR
radionuclidi menzionati nella Farma-
copea Europea . . . . . . . . . . . . . . . . . . 597

itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI
 Tabella delle caratteristiche fisiche dei radionuclidi menzionati nella Farmacopea Europea

inoizircserP
** PTB (Physikalisch-Technische Bundesanstalt,

ilareneG
5.7. TABELLA DELLE CARATTERISTI-

CHE FISICHE DEI RADIONUCLIDI Braunschweig, Germany),

MENZIONATI NELLA FARMACOPEA *** NPL (National Physical Laboratory, Teddington,
EUROPEA Middlesex, UK).
La tabella seguente completa la monografia generale L'incertezza nei valori numerici dei periodi di dimezza-

isilanA id
mento e© mostrata in parentesi. In linea di principio le

idoteM
Preparazioni radiofarmaceutiche (0125). cifre tra parentesi sono l'incertezza standard delle cor-
I valori sono ottenuti dall'archivio dati del National rispondenti ultime cifre del valore numerico indicato
Nuclear Data Center (NNDC) del Brookhaven Natio- in ``Guide to the Expression of Uncertainty in measure-
nal Laboratory, Upton. N.Y., USA, accessibile diretta- ment'', International Organisation for Standardisation

irotinetnoC
mente via Internet all'indirizzo: ``http://

/ ilairetaM
((ISO), 1993, ISBN 92-67-10188-9).
www.nndc.bnl.gov/nndc/nudat/radform.html''. Sono usate le abbreviazioni seguenti:
Nel caso siano state preferite altre sorgenti di informa- eA = elettroni Auger
zione (valori piu© recenti), tali sorgenti sono esplicita- ce = elettroni di conversione
mente menzionate. ^ = elettroni
Altre risorse di dati:

ivittaeR
b
+ = positroni
* DAMRI (Dëpartment des Applications et de la b

Mëtrologie des Rayonnements Ionisants, CEA c = raggi gamma

Gif-sur-Yvette, France), X = raggi X

itnemogrA
ilareneG
Emissione elettronica Emissione fotonica

Probabilita©
Periodo di
Radionuclide Probabilita© di di emissione
dimezzamento

eifargonoM
Tipo Energia (MeV) emissione (per 100 Tipo Energia (MeV) (per 100

ilareneG
disintegrazioni) disintegra-

zioni)

Tritio (3H) *12,33 (6) anni * b

^ *0,006(I) (max: 0,019) *100
Carbonio-11 (11C) 20,385 (20) min b
+ 0,386(I) (max: 0,960 99,8 c 0,511 199,5(II)

ehcituecamraF
Azoto-13 (13N) 9,965 (4) min b
+ 0,492(I) (max: 1,198) 99,8 c 0,511 199,6(II)

emroF
Ossigeno-15 (15O) 122,24 (16) s b
+ 0,735(I) (max: 1,732) 99,9 c 0,511 199,8(II)
Fluoro-18 (18F) 109,77 (5) min b
+ 0,250(I) (max: 0,633) 96,7 c 0,511 193,5(II)
Fosforo-32 (32P) 14,26 (4) giorni b
- 0,695(I) (max: 1,71) 100
Fosforo-33 (33P) 25,34 (12) giorni - 0,076(I) (max: 0,249) 100

eiretaM

emirP
b

Zolfo-35 (35S) 87,51 (12) giorni b

- 0,049(I) (max: 0,167) 100
Cromo-51 (51Cr) 27,7025(24) giorni eA 0,004 67 X 0,005 22,3
0,320 9,9
ehcituecamraF

c
inoizaraperP

ehcificepS

77,27 (3) giorni eA 0,006 47 X 0,006-0,007 25

b
+ 0,179(I) 0,9 c 0,511 38,0(II)
0,631(I) 18,1 0,847 100,0
1,038 14,1
1,175 2,2
Cobalto-56 (56Co) 1,238 66,1
ehcitapoemO
inoizaraperP

1,360 4,3
1,771 15,5
2,015 3,0
2,035 7,8
2,598 17,0
3,202 3,1
3,253 7,6
(I) Energia media dello spettro
ecidnI

(II) Massima probabilita© di emissione corrispondente ad un'annichilazione totale della sorgente per 100 disintegrazioni

597
Tabella delle caratteristiche fisiche dei radionuclidi menzionati nella Farmacopea Europea

Emissione elettronica Emissione fotonica

Probabilita©
Periodo di
Radionuclide Probabilita© di di emissione
dimezzamento
Tipo Energia (MeV) emissione (per 100 Tipo Energia (MeV) (per 100

disintegrazioni) disintegra-

zioni)

271,79 (9) giorni eA + ce 0,006-0,007 177,4 X 0,006-0,007 57

Cobalto-57 (57Co) ce 0,014 7,4 c
0,014 9,2
0,115 1,8 0,122 85,6
0,129 1,3 0,136 10,7
0,692 0,15
70,86 (7) giorni eA 0,006 49,4 X 0,006-0,007 26,3
+
Cobalto-58 (58Co) b 0,201(I) 14,9 c
0,511 29,9(II)
0,811 99,4
0,864 0,7
1,675 0,5
Cobalto-60 (60Co) 5,2714 (5) anni b
- 0,096(I) 99,9 c 1,173 100,0
(max: 0,318) 1,333 100,0
9,49 (7) ore eA 0,008 21 X 0,009-0,010 19,1
+
b 0,157(I) 1 c
0,511 112(II)
0,331(I) 0,7 0,834 5,9
0,397(I) 3,8 1,039 37
0,782(I) 0,3 1,333 1,2
Gallio-66 (66Ga) 1,90(I) 50 1,919 2,1
2,190 5,6
2,423 1,9
2,752 23,4
3,229 1,5
3,381 1,5
3,792 1,1
4,086 1,3
4,295 4,1
4,807 1,8
3,2612 (6) giorni eA 0,008 62 X 0,008-0,010 57
ce 0,082-0,084 30,4 c 0,091-0,093 42,4
Gallio-67 (67Ga) 0,090-0,092 3,6 0,185 21,2
0,175 0,3 0,209 2,4
0,300 16,8
0,394 4,7
0,888 0,15
Germanio-68 (68Ge) in 270,82 (27) giorni eA 0,008 42,4 X 0,009-0,010 44,1
equilibrio con +
0,353(I) 1,2 0,511 178,3
Gallio-68 (68Ga) b c

(68Ga: 67,629 (24) min) 0,836(I) 88,0 1,077 3,0

67,629 (24) min eA 0,008 5,1 X 0,009-0,010 4,7
Gallio-68 (68Ga) b
+
0,353(I) 1,2 c 0,511 178,3
0,836(I) 88,0 1,077 3,0
Kripton-81m (81mKr) 13,10 (3) s ce 0,176 26,4 X 0,012-0,014 17,0
0,189 4,6 c 0,190 67,6
(I) Energia media dello spettro b
(II) Massima probabilita© di emissione corrispondente ad un'annichilazione totale della sorgente per 100 disintegrazioni

598
 Tabella delle caratteristiche fisiche dei radionuclidi menzionati nella Farmacopea Europea

inoizircserP

ilareneG
Emissione elettronica Emissione fotonica

Probabilita©
Periodo di
Radionuclide
Probabilita© di di emissione
dimezzamento
Tipo Energia (MeV) emissione (per 100 Tipo Energia (MeV) (per 100

isilanA id
disintegrazioni) disintegra-

idoteM
zioni)

4,576 (5) ore eA 0,011 31,3 X 0,013-0,014 57,2

Rubidio-81 (81Rb) in equilibrio ce 0,176 25,0 0,190 64
con Kripton-81m (81mKr) c

0,188 4,3 0,446 23,2

irotinetnoC
0,457 3,0

/ ilairetaM
b
+ 0,253(I) 1,8 0,510 5,3
(81mKr: 13,10 (3) s) 0,447(I) 25,0 0,511 54,2
0,538 2,2
Stronzio-89 (89Sr) in equilibrio 50,53 (7) giorni b
- 0,583(I) 99,99 c 0,909 0,01
con Ittrio-89 (89Y) (max: 1,492)

ivittaeR
(89mY: 16,06(4) s)
Stronzio-90 (90Sr) in equilibrio 28,74 (4) anni b
- 0,196(I) 100
con Ittrio-90 (90Y) (max: 0,546)
(90Y: 64,10(8) ore)

itnemogrA
Ittrio-90 (90Y) 64,10 (8) ore 0,934(I) 100

ilareneG
b
-
(max: 2,280)
65,94 (1) ore b
- 0,133(I) 16,4 X 0,018-0,021 3,6
Molibdeno-99 (99Mo) in 0,290(I) 1,1
equilibrio con
Tecnezio-99m (99mTc) 0,443(I) 82,4 0,041 1,1

eifargonoM
c

ilareneG
0,141 4,5
(99mTc: 6,01(1) ore) 0,181 6
0,366 1,2
0,740 12,1

ehcituecamraF
0,778 4,3

emroF
6,01 (1) ore ce 0,002 74 X 0,018-0,021 7,3
Tecnezio-99m (99mTc) eA 0,015 2,1 c 1,141 89,1
ce 0,120 9,4
0,137-0,140 1,3

eiretaM

emirP
Tecnezio-99 (99Tc) 2,11x105 anni b
- 0,085(I) 100
(max: 0,294)
Rutenio-103 (103Ru) in eA + ce 0,017 12 X 0,020-0,023 9,0
equilibrio con 39,26 (2) giorni ce 0,030-0,039 88,3 0,497 91
ehcituecamraF

Rodio-103m (103mRh)
inoizaraperP

c
ehcificepS

0,610 5,8
b
^ 0,031(I) 6,6
(103mRh: 0,064(I) 92,2
56,114 (20) min
4,9 (1) ore eA 0,019 13,4 X 0,023-0,026 70,5
ehcitapoemO
inoizaraperP

Indio-110 (110In) c 0,642 25,9

0,658 98,3
0,885 92,9
0,938 68,4
0,997 10,5
Energia media dello spettro
ecidnI

(I) b

(II) Massima probabilita© di emissione corrispondente ad un'annichilazione totale della sorgente per 100 disintegrazioni

599
Tabella delle caratteristiche fisiche dei radionuclidi menzionati nella Farmacopea Europea

Emissione elettronica Emissione fotonica

Probabilita©
Periodo di
Radionuclide Probabilita© di di emissione
dimezzamento
Tipo Energia (MeV) emissione (per 100 Tipo Energia (MeV) (per 100

disintegrazioni) disintegra-

zioni)

69,1 (5) min eA 0,019 5,3 X 0,023-0,026 27,8

Indio-110m (110mIn) b
+ 1,015(I) 61 c 0,511 123,4(II)
0,658 97,8
2,129 2,1
Indio-111 (111In) 2,8047 (5) giorni eA 0,019 15,6 X 0,003 6,9
0,023-0,026 82,3
ce 0,145 7,8
0,167-0,171 1,3 c 0,171 90,2
0,219 4,9 0,245 94,0
0,241-0,245 1,0
Indio-114m (114mIn) in 49,51 (1) giorni ce 0,162 40 X 0,023-0,027 36,3
equilibrio con 0,186-0,190 40
Indio-114 (114In)
c 0,190 15,6
* b
^
0,777(I) 95 0,558 3,2
(114In: 71,9 (1) s) (max: 1,985) 0,725 3,2
Tellurio-121m (121mTe) in equili- 154,0 (7) giorni eA 0,003 88,0 X 0,026-0,031 50,5
brio con Tellurio-121 (121Te) 0,022-0,023 7,4
ce c 0,212 81,4
(121Te: 19,16 (5) giorni) 0,050 33,2 1,102 2,5
0,077 40,0
0,180 6,1
**19,16 (5) giorni eA 0,022 11,6 X 0,026-0,030 75,6
Tellurio-121 (121Te) c 0,470 1,4
0,508 17,7
0,573 80,3
13,27 (8) ore eA 0,023 12,3 X 0,004 9,3
0,027-0,031 86,6
ce 0,127 13,6
Iodio-123 (123I) 0,154 1,8 c 0,159 83,3
0,158 0,4 0,346 0,1
0,440 0,4
0,505 0,3
0,529 1,4
0,538 0,4
59,402 (14) giorni eA+ce 0,0044 80 X 0,004 15,5
Iodio-125 (125I) 0,023-0,035 33 0,027 114
0,031 26

c 0,035 6,7
(I) Energia media dello spettro b

(II) Massima probabilita© di emissione corrispondente ad un'annichilazione totale della sorgente per 100 disintegrazioni

600
 Tabella delle caratteristiche fisiche dei radionuclidi menzionati nella Farmacopea Europea

inoizircserP

ilareneG
Emissione elettronica Emissione fotonica

Probabilita©
Periodo di
Radionuclide Probabilita© di di emissione
dimezzamento
Tipo Energia (MeV) emissione (per 100 Tipo Energia (MeV) (per 100

disintegrazioni) disintegra-

isilanA id
idoteM
zioni)

13,11 (5) giorni eA 0,023 6 X 0,027-0,031 42,2

ce 0,354 0,5 c 0,388 34
Iodio-126 (126I) 0,634 0,1 0,491 2,9
0,511 2,3(II)

irotinetnoC
0,109(I) 3,6 0,666 33

/ ilairetaM
b
^
0,290(I) 32,1 0,754 4,2
0,459(I) 8,0 0,880 0,8
1,420 0,3
b
+ 0,530(I) 1
8,02070 (11) giorni ce 0,46 3,5 X 0,029-0,030 3,9

ivittaeR
0,330 1,6
Iodio-131 (131I) c 0,080 2,6
b
- 0,069(I) 2,1 0,284 6,1
0,097(I) 7,3 0,365 81,7
0,192(I) 89,9 0,637 7,2

itnemogrA
ilareneG
0,723 1,8
11,84 (7) giorni eA 0,025 6,8 X 0,004 8,3
Xenon-131m (131mXe) 0,030 44,0
ce 0,129 61 0,034 10,2

eifargonoM
0,159 28,5

ilareneG
0,163 8,3 c 0,164 2,0
Iodio-133 (133I) 20,8 (1) ore b
^ 0,140(I) 3,8 c 0,530 87
(decade in 0,162(I) 3,2 0,875 4,5
Xenon-133
radioattivo) 0,299(I) 4,2 1,298 2,4

ehcituecamraF
0,441(I) 83

emroF
5,243 (1) giorni eA 0,026 5,8 X 0,004 6,3
Xenon-133 (133Xe) 0,031 40,3
ce 0,045 55,1 0,035 9,4
0,075-0,080 9,9
0,080 38,3

eiretaM
c

emirP
b
^ 0,101(I) 99,0
Xenon-133m (133mXe) 2,19 (1) giorni eA 0,025 7 X 0,004 7,8
(decade in 0,030 45,9
Xenon-133
radioattivo) ce 0,199 64,0 0,034 10,6
ehcituecamraF
inoizaraperP

0,228 20,7
ehcificepS

0,232 4,6 c 0,233 10,0

6,57 (2) ore b
^ 0,140(I) 7,4 c *0,527 13,8
0,237(I) 8 0,547 7,2
Iodio-135 (135I) 6,7
(decade in 0,307(I) 8,8 0,837 8,0
ehcitapoemO
inoizaraperP

Xenon-135 0,352(I) 21,9 1,039 22,7

radioattivo) 0,399(I) 8 1,132 28,9
8,7
0,444(I) 7,5 1,260 9,6
0,529(I) 23,8 1,458 7,8
1,678
1,791
ecidnI

(I) Energia media dello spettro b

(II) Massima probabilita© di emissione corrispondente ad un'annichilazione totale della sorgente per 100 disintegrazioni

601
Tabella delle caratteristiche fisiche dei radionuclidi menzionati nella Farmacopea Europea

Emissione elettronica Emissione fotonica

Probabilita©
Periodo di
Radionuclide Probabilita© di di emissione
dimezzamento
Tipo Energia (MeV) emissione (per 100 Tipo Energia (MeV) (per 100

disintegrazioni) disintegra-

zioni)

Xenon-135 (135Xe) 9,14 (2) ore ce 0,214 5,5 X 0,031-0,035 5,0

b
^ 0,171 3,1 c 0,250 90,2
0,308 96,0 0,608 2,9
30,04 (3) ore eA 0,026 0,8 X 0,005 1
Cesio-137 (137Cs) in equilibrio
con 0,032-0,036 7
Bario-137m (137mBa) ce 0,624 8,0
0,656 1,4 c 0,662 85,1

(137mBa: b
^ 0,174(I) 94,4
2,552 (1) min) 0,416(I) 5,6
26,1 (1) ore ce 0,285 3,4 X 0,010 32,0
0,353 1,4 0,069-0,071 63,3
0,08 17,5
+
b
0,495(I) 0,3
Tallio-200 (200Tl)
c 0,368 87,2
0,579 13,8
0,828 10,8
1,206 29,9
1,226 3,4
1,274 3,3
1,363 3,4
1,515 4,0
9,33 (3) ore eA 0,055 3 X 0,070-0,073 69
0,083 19
ce 0,246 8,5
Piombo-201 (201Pb) (decade 0,276 2 0,331 79
in Tallio-201
c

radioattivo) 0,316 2,3 0,361 9,9

0,406 2,0
0,585 3,6
0,692 4,3
0,767 3,2
0,826 2,4
0,908 5,7
0,946 7,9
1,099 1,8
1,277 1,6
72,912 (17) ore ce 0,016-0,017 17,7 X 0,010 46,0
0,027-0,029 4,1 0,069-0,071 73,7
Tallio-201 (201Tl)
0,052 7,2 0,080 20,4
0,084 15,4
0,153 2,6 c 0,135 2,6
0,167 10,0
(I) Energia media dello spettro b

(II) Massima probabilita© di emissione corrispondente ad un'annichilazione totale della sorgente per 100 disintegrazioni

602
 Tabella delle caratteristiche fisiche dei radionuclidi menzionati nella Farmacopea Europea

inoizircserP

ilareneG
Emissione elettronica Emissione fotonica

Probabilita©
Periodo di
Radionuclide Probabilita© di di emissione
dimezzamento
Tipo Energia (MeV) emissione (per 100 Tipo Energia (MeV) (per 100

disintegrazioni) disintegra-

isilanA id
zioni)

idoteM
12,23 (2) giorni eA 0,054 2,8 X 0,010 31,0
0,069-0,071 61,6
Tallio-202 (202Tl)
ce 0,357 2,4 0,080 17,1

0,440 91,4

irotinetnoC
/ ilairetaM
c

Piombo-203 (203Pb) 51,873 (9) ore eA 0,055 3,0 X 0,010 37,0

0,071-0,073 69,6
ce 0,194 13,3 0,083 19,4

c 0,279 80,8

ivittaeR
0,401 3,4
(I) Energia media dello spettro b
(II) Massima probabilita© di emissione corrispondente ad un'annichilazione totale della sorgente per 100 disintegrazioni

itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI

603
 ecidnI
ilareneG isilanA id irotinetnoC ilareneG emirP ehcificepS ehcitapoemO
ilareneG ehcituecamraF
ivittaeR ehcituecamraF
inoizircserP idoteM / ilairetaM itnemogrA eifargonoM emroF eiretaM inoizaraperP
inoizaraperP
5.8. Armonizzazione
delle Farmacopee
607
Armonizzazione delle Farmacopee . .
5.8.
 Armonizzazione delle Farmacopee

inoizircserP
Le informazioni relative agli argomenti che sono stati

ilareneG
5.8. ARMONIZZAZIONE DELLE FARMA-

COPEE trattati dal PDG saranno riportate nelle future versioni

revisionate di questo capitolo generale.
Questo capitolo generale e© incluso per informazione agli Quando viene fatta l'armonizzazione dei capitoli gene-
utilizzatori della Farmacopea. Esso fornisce delle indica- rali, l'obiettivo e© quello di arrivare a metodi o requisiti
zioni sul grado di armonizzazione e, di conseguenza, sul-

isilanA id
intercambiabili, in modo tale che la dimostrazione della

idoteM
l'intercambiabilita© dei diversi capitoli generali e delle conformita© ottenuta facendo riferimento ad un capitolo
monografie della Farmacopea Europea, con quelli della generale di una delle tre farmacopee implica che lo
Farmacopea Giapponese e della Farmacopea degli Stati stesso risultato sarebbe stato ottenuto facendo riferi-
Uniti. Questo capitolo non influenza in nessun modo il mento al capitolo generale di ciascuna delle altre due
carattere delle monografie e dei capitoli generali, riferi-

irotinetnoC
/ ilairetaM
menti ufficiali in caso di dubbio o di disputa laddove e© farmacopee. Nel caso in cui dovessero essere presenti
richiesta la conformita© alla Farmacopea Europea. alcune differenze nei capitoli generali armonizzati, le
La Commissione di Farmacopea Europea riconosce informazioni a questo riguardo saranno riportate nelle
l'utilita© di una cooperazione con le altre organizzazione future versioni di questo capitolo generale.
di farmacopea per elaborare monografie e capitoli Quando viene fatta l'armonizzazione delle monografie,

ivittaeR
generali armonizzati. Questa armonizzazione e© total- l'obiettivo e© quello di arrivare a requisiti identici per
mente compatibile con gli obiettivi della Commissione tutte le caratteristiche del prodotto. Per alcuni prodotti
e da© luogo a ricadute positive di diverso tipo, in partico- puo© essere estremamente difficoltoso realizzare un'ar-
lare la semplificazione e la razionalizzazione dei metodi monizzazione completa, per esempio a causa delle dif-
di controllo della qualita© e delle procedure di registra- ferenze del carattere legale e dell'interpretazione.

itnemogrA
ilareneG
zione. Questa armonizzazione potenzia anche i benefici Il PDG a questo riguardo ha ritenuto utile approvare e
dei lavori dell'International Conference on Harmonisa- pubblicare le monografie nelle quali e© stata armoniz-
tion (ICH) e della Veterinary International Co-operation zata la maggior parte delle caratteristiche. Le informa-
on Harmonisation (VICH) poichë alcune linee guida ela- zioni relative alle caratteristiche non armonizzate
borate in questi ambiti dipendono per la loro applica- saranno riportate nelle future versioni di questo capi-

eifargonoM
tolo generale.

ilareneG
zione dai Capitoli generali della farmacopea.
Il lavoro di armonizzazione e© realizzato mediante una Le tre Farmacopee hanno deciso di non procedere a
procedura ben definita ma informale nell'ambito del cambiamenti unilaterali nel caso di monografie e di
Gruppo di Discussione delle Farmacopee (ûPharmaco- capitoli generali armonizzati, ma piuttosto di applicare

ehcituecamraF
poeial Discussion Groupý, PDG) costituito da rappre- la concordata procedura di revisione in base alla quale
sentanti della Farmacopea Europea, della Farmacopea le tre Farmacopee adottano simultaneamente una revi-

emroF
Giapponese e della Farmacopea degli Stati Uniti. sione.

eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI

607
 ecidnI
ilareneG isilanA id irotinetnoC ilareneG emirP ehcificepS ehcitapoemO
ilareneG ehcituecamraF
ivittaeR ehcituecamraF
inoizircserP idoteM / ilairetaM itnemogrA eifargonoM emroF eiretaM inoizaraperP
inoizaraperP
MONOGRAFIE
 Monografie generali

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
Droghe vegetali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 613 Prodotti allergenici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 629

idoteM
Estratti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 614 Prodotti di fermentazione . . . . . . . . . . . . . . . . 631
Infusi e decotti . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 616 Prodotti ottenuti con la tecnologia del DNA
Oli grassi vegetali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 616 ricombinante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 633
Piante per tisane . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 618 Sierimmuni per uso umano . . . . . . . . . . . . . . . 637

irotinetnoC
/ ilairetaM
Preparazioni a base di droghe vegetali . . . . . . 619 Sierimmuni per uso veterinario . . . . . . . . . . . . 638
Preparazioni radiofarmaceutiche . . . . . . . . . . . 619 Sostanze per uso farmaceutico . . . . . . . . . . . . 639
Prodotti aventi il rischio di trasmettere gli Tinture . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 642
agenti delle encefalopatie spongiformi ani- Vaccini per uso umano . . . . . . . . . . . . . . . . . . 643
mali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 628 Vaccini per uso veterinario . . . . . . . . . . . . . . . 645

ivittaeR
itnemogrA
ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP

ecidnI
 Droghe vegetali

inoizircserP
Per le droghe vegetali che possono essere adulterate si

ilareneG
1433
applica un adeguato saggio specifico.
Nei casi appropriati, le droghe vegetali soddisfano ad
altri saggi, per esempio, ceneri totali (2.4.16), ceneri
insolubili in acido cloridrico (2.8.1), sostanze estraibili,

isilanA id
DROGHE VEGETALI

idoteM
Plantae medicinales indice di rigonfiamento (2.8.4), indice di amarezza
(2.8.15).
DEFINIZIONE Se non diversamente prescritto nelle singole monogra-
fie, sulle droghe vegetali si effettua il saggio per la per-

irotinetnoC
/ ilairetaM
Le droghe vegetali sono essenzialmente piante intere, dita all'essiccamento (2.2.32). Per le droghe vegetali
frammentate o tagliate, parti di piante, alghe, funghi, con un alto contenuto di essenza si effettua la determi-
licheni in uno stato non trattato, generalmente in forma nazione dell'acqua (2.2.13).
essiccata, ma talvolta fresche. Sono anche considerati Le droghe vegetali soddisfano ai requisiti per i residui
droghe vegetali alcuni essudati che non sono stati sotto- di pesticidi (2.8.13). I requisiti tengono in considera-

ivittaeR
posti ad uno specifico trattamento. Le droghe vegetali zione la natura della pianta, quando necessario la pre-
vengono definite con precisione dal nome scientifico parazione nella quale la pianta potrebbe essere utiliz-
botanico secondo il sistema binomiale (genere, specie, zata e, se disponibile, la conoscenza della completa
varieta© e autore). documentazione del trattamento del lotto della pianta.

itnemogrA
ilareneG
Il contenuto di residui di pesticidi puo© essere determi-
PRODUZIONE nato con il metodo descritto nell'allegato al metodo
generale.
Le droghe vegetali si ottengono da piante coltivate o Deve essere considerato il rischio di contaminazione

eifargonoM
selvatiche. La qualita© delle droghe vegetali viene garan- delle droghe vegetali da metalli pesanti. Se una singola

ilareneG
tita da adeguate procedure di campionamento, coltiva- monografia non prescrive limiti per metalli pesanti o
zione, raccolta, essiccamento, frammentazione e condi- elementi chimici specifici, tali limiti, se giustificato,
zioni di conservazione. possono essere richiesti.
Le droghe vegetali sono, per quanto possibile, esenti da

ehcituecamraF
impurezze come terra, polvere, sporcizia e altri conta- Raccomandazioni sulla qualita© microbiologica dei

emroF
minanti come funghi, insetti e altre contaminazioni ani- prodotti che sono costituiti solamente da una o da
mali. Non devono essere in decomposizione. piu© droghe vegetali sono riportate nel testo Qualita©
microbiologica delle preparazioni farmaceutiche
Se e© stato usato un trattamento di decontaminazione e© (5.1.4. - Categoria 4).
necessario dimostrare che i costituenti della pianta non Quando necessario, possono essere richiesti i limiti per
eiretaM

emirP
siano stati influenzati da tale trattamento e che non le aflatossine.
siano rimasti residui nocivi. Per la decontaminazione
delle droghe vegetali e© proibito l'uso di ossido di etilene. In alcune circostanze specifiche si deve considerare il
rischio della contaminazione radioattiva.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

IDENTIFICAZIONE
Le droghe vegetali vengono identificate mediante le DETERMINAZIONE QUANTITATIVA
loro descrizioni macroscopiche, microscopiche e con La determinazione quantitativa delle droghe vegetali
ehcitapoemO
inoizaraperP

qualunque altro saggio che possa essere richiesto (per viene effettuata, salvo eccezioni giustificate ed autoriz-
esempio, cromatografia su strato sottile). zate, mediante un metodo appropriato.
SAGGI
CONSERVAZIONE
ecidnI

Se non diversamente prescritto nelle singole monogra-

fie si effettua il saggio per gli elementi estranei (2.8.2). Conservare al riparo dalla luce.

613
Estratti

0765
Estratti fluidi
DEFINIZIONE
Gli estratti fluidi sono preparazioni liquide nelle quali,
ESTRATTI
in generale, una parte in massa o in volume e© equiva-
Extracta lente ad una parte in massa di materiale originario
essiccato. Queste preparazioni vengono aggiustate, se
necessario, in modo da renderle rispondenti alle esi-
DEFINIZIONE genze relative al contenuto in solventi o in costituenti
o in residuo secco.
Gli estratti sono preparazioni concentrate, liquide,
solide o di consistenza intermedia, ottenute general- Gli estratti fluidi possono essere preparati con i metodi
mente da materie prime vegetali o animali essiccate. In sopra descritti utilizzando solo etanolo di appropriata
alcuni casi le materie da estrarre possono essere sotto- concentrazione oppure acqua od anche disciogliendo
poste ad un trattamento preliminare, come ad esempio un estratto secco o molle in uno di questi stessi solventi,
l'inattivazione degli enzimi, la triturazione o la sgrassa- filtrando poi se necessario; qualunque sia il metodo di
tura. Gli estratti si preparano per macerazione, per per- preparazione impiegato, gli estratti ottenuti devono
colazione o per mezzo di altri adatti e convalidati pro- avere una composizione comparabile. Lasciati a riposo,
cedimenti utilizzando etanolo o un altro solvente ido- gli estratti fluidi possono formare un leggero deposito;
neo. Se necessario, dopo l'estrazione, le sostanze cio© e© accettabile a condizione che la composizione del-
indesiderate vengono eliminate. l'estratto non venga modificata in maniera significa-
tiva.
PRODUZIONE Gli estratti fluidi possono contenere appropriati con-
servanti antimicrobici.
Produzione per percolazione . Ridurre, se necessario, le
materie da estrarre in pezzi di grandezza appropriata.
Mescolare uniformemente con una parte del solvente SAGGI
di estrazione prescritto e lasciare a riposo per un tempo
appropriato. Trasferire il tutto in un percolatore e Densita© relativa (2.2.5). Se del caso, gli estratti fluidi
lasciare che il percolato fluisca lentamente assicuran- soddisfano ai limiti prescritti nella monografia.
dosi che il materiale da estrarre sia sempre coperto dal (2.9.10). Per gli estratti fluidi
restante solvente di estrazione. Il residuo puo© essere Contenuto di etanolo

alcoolici, effettuare la determinazione del contenuto di

pressato ed il liquido ottenuto riunito al percolato. etanolo. Il contenuto di etanolo soddisfa al valore pre-
Produzione per macerazione . Salvo indicazione contra- scritto.
ria, ridurre le materie da estrarre in pezzi di grandezza (2.9.11). Salvo diversa indica-
appropriata, mescolare uniformemente con il solvente Metanolo e 2-propanolo

zione, gli estratti fluidi alcoolici non contengono piu©

di estrazione prescritto e lasciare a riposo, in un reci- dello 0,05 per cento V/V di metanolo e non piu© dello
piente chiuso, per un tempo appropriato. Il residuo 0,05 per cento V/V di 2-propanolo.
viene separato dal solvente di estrazione e, se necessa-
rio, pressato. In questo caso i due liquidi vengono riu- . Se del caso, gli estratti fluidi soddisfano
niti.
Residuo secco

ai limiti prescritti nella monografia. Introdurre rapida-

La concentrazione alla consistenza voluta, viene realiz- mente 2,00 g o 2,0 ml dell'estratto in esame entro una
zata mediante procedimenti appropriati, generalmente capsula a fondo piatto, di circa 50 mm di diametro e
a pressione ridotta e ad una temperatura alla quale l'al- 30 mm di altezza. Evaporare a secco a b.m. ed essiccare
terazione dei costituenti e© minima. Il residuo di solventi in stufa a 100-105 ‘C per 3 h. Lasciar raffreddare in
nell'estratto non deve superare i limiti prescritti. essiccatore su anidride fosforica R e pesare. Calcolare il
risultato in per cento m/m o in grammi per litro.
Il contenuto in costituenti degli estratti titolati viene
portato al valore prescritto per mezzo di sostanze inerti
appropriate o per mezzo di un altro estratto ottenuto a CONSERVAZIONE
partire dalla materia prima vegetale od animale utiliz-
zata per la preparazione. Conservare al riparo dalla luce.

614
 Estratti

inoizircserP
ETICHETTE ^ il contenuto in principio attivo e/o il rapporto tra il

ilareneG
materiale di partenza e l'estratto molle finale,
L'etichetta indica: ^ il nome e la concentrazione di ogni antimicrobico
^ la materia prima vegetale o animale utilizzata, aggiunto.
^ se del caso, che e© stata impiegata materia prima vege- Estratti secchi

isilanA id
tale od animale fresca,

idoteM
^ il nome e il contenuto in etanolo in per cento V/V del DEFINIZIONE
solvente utilizzato per la preparazione,
^ se del caso, il contenuto in etanolo in per cento V/V Gli estratti secchi sono preparazioni solide, ottenute
per evaporazione del solvente usato per la loro prepara-

irotinetnoC
nell'estratto finale,

/ ilairetaM
zione. Essi hanno in generale un residuo secco non infe-
^ il contenuto in principio attivo e/o il rapporto tra il riore al 95 per cento in massa. Possono essere aggiunte
materiale di partenza e l'estratto fluido finale, sostanze inerti appropriate.
^ il nome e la concentrazione di ogni conservante anti- Il contenuto dei costituenti degli estratti secchi titolati
microbico aggiunto. puo© essere aggiustato al valore prescritto per mezzo di

ivittaeR
sostanze inerti appropriate o per mezzo di un altro
Estratti molli estratto secco ottenuto da materia prima vegetale od
animale utilizzata per la loro preparazione.
DEFINIZIONE Se del caso, la monografia prescrive un saggio limite

itnemogrA
Gli estratti molli sono preparazioni di consistenza per il solvente impiegato nella estrazione.

ilareneG
intermedia tra gli estratti fluidi e gli estratti secchi. Si
ottengono per evaporazione parziale del solvente usato SAGGI
per la loro preparazione. Si impiegano solo etanolo di
appropriata concentrazione od acqua. Gli estratti molli (2.2.32). Se del caso, soddi-

eifargonoM
hanno generalmente un residuo secco non inferiore al sfano ai limiti prescritti nella monografia. Pesare rapi-

ilareneG
Perdita all'essiccamento

70 per cento m/m. Possono contenere appropriati con- damente 0,50 g dell'estratto in esame, finemente polve-
servanti antimicrobici. rizzato, in una capsula a fondo piatto, di circa 50 mm
di diametro e 30 mm di altezza. Essiccare in stufa a
100-105 ‘C per 3 h. Lasciar raffreddare in essiccatore

ehcituecamraF
SAGGI su anidride fosforica R e pesare. Calcolare il risultato

emroF
Residuo secco . Se del caso, soddisfano ai limiti prescritti in per cento m/m.
nella monografia. Pesare rapidamente 2,00 g dell'e-
stratto in esame entro una capsula a fondo piatto di
circa 50 mm di diametro e 30 mm di altezza. Evaporare CONSERVAZIONE
a secco a b.m. ed essiccare in stufa a 100-105 ‘C per 3 Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso, pro-
eiretaM

emirP
h. Lasciar raffreddare in essiccatore su anidride fosfo- tetto dalla luce.
rica R e pesare. Calcolare il risultato in per cento m/m.
ETICHETTE
ehcituecamraF
inoizaraperP

CONSERVAZIONE
ehcificepS

Conservare al riparo dalla luce. L'etichetta indica:

^ il nome e la quantita© di sostanza inerte eventual-
mente aggiunta,
ETICHETTE
ehcitapoemO
inoizaraperP

^ la materia prima vegetale od animale utilizzata,

L'etichetta indica: ^ se del caso, che e© stata impiegata materia prima vege-
^ la materia prima vegetale o animale utilizzata, tale od animale fresca,
^ se del caso, che e© stata impiegata materia prima vege- ^ il nome e il contenuto di etanolo in per cento V/V del
tale o animale fresca, solvente utilizzato nella preparazione,
ecidnI

^ il nome e il contenuto di etanolo in per cento V/V del ^ il contenuto in principio attivo e/o il rapporto tra il
solvente utilizzato per la preparazione, materiale di partenza e l'estratto secco finito.

615
Oli grassi vegetali

INFUSI E DECOTTI Olio vergine: un olio ottenuto dalle materie prime di

qualita© speciale mediante procedure meccaniche (per
Infusa et decocta esempio mediante spremitura a freddo o centrifuga-
zione).
Gli infusi sono preparazioni liquide ottenute, estempo- Olio raffinato: un olio ottenuto mediante spremitura e/o
raneamente, versando sulle droghe, ridotte ad un grado estrazione con solventi e successiva raffinazione con
conveniente di suddivisione e dalle quali si vogliono alcali (seguita dalla decolorazione e dalla deodorazione)
estrarre i principi attivi, acqua R alla temperatura di o raffinazione fisica.
ebollizione e lasciando poi a contatto con l'acqua stessa Olio idrogenato: un olio ottenuto mediante spremitura
per un tempo piu© o meno lungo. Dopo raffreddamento e/o estrazione con solventi e successiva raffinazione
completo, filtrare attraverso ovatta o attraverso garza, con alcali o raffinazione fisica, con eventuale decolora-
senza comprimere; portare il filtrato alla massa pre- zione, seguita dall'essiccamento, l'idrogenazione e poi
scritta con acqua R calda con la quale si lava il residuo ancora decolorazione e deodorazione.
e il filtro. In qualche caso puo© essere necessaria l'ag- Nella preparazione di forme farmaceutiche per uso
giunta di piccole quantita© di sostanze acide o alcaline parenterale sono usati solo oli raffinati con acido fosfo-
al fine di facilitare l'estrazione dei principi attivi dalla rico ed alcali.
droga. Generalmente si impiegano da 1 a 10 parti di
droga per la preparazione di 100 parti di infuso.
PRODUZIONE
I decotti sono preparazioni liquide ottenute estempora-
neamente facendo bollire in acqua le droghe opportu- OLIO GREZZO
namente polverizzate, dalle quali si vogliono estrarre i Se la pianta ha un alto contenuto di olio, questo e© gene-
principi attivi. L'operazione corrispondente si chiama ralmente ottenuto mediante spremitura a caldo seguita
decozione ed essa non si applica mai a droghe conte- da un'estrazione; se la pianta ha un basso contenuto di
nenti principi attivi volatili. Solitamente si impiegano olio, questo e© generalmente ottenuto mediante estra-
cinque parti di droga per preparare 100 parti di decotto; zione diretta.
nel caso di droghe contenenti alcaloidi, l'acqua viene
addizionata, per favorire l'estrazione, di una quantita© Procedure meccaniche

di acido citrico R o acido cloridrico diluito R approssi- A. Spremitura.

mativamente corrispondente alla quantita© totale di
alcaloidi contenuti nella droga. Spremitura mediante pressa a vite ad alta pressione. Que-
sta procedura consiste di alcune o di tutte le fasi
seguenti: lavaggio, essiccamento, eliminazione del
guscio o decorticamento, macinazione, cottura e ridu-
zione in fiocchi.
1579
Durante il lavaggio vengono eliminate le sostanze estra-
nee. L'essiccamento puo© essere necessario se il conte-
nuto di umidita© dei semi e© piu© alto di quello desiderabile
per il processo successivo. Il decorticamento e© utile per
OLI GRASSI VEGETALI ottenere una farina con un'alta quantita© di proteine
mediante la riduzione delle fibre e per ridurre le impu-
Olea herbaria rezze presenti nell'olio. La cottura serve per diversi
scopi: permette di realizzare la completa rottura delle
DEFINIZIONE cellule oleose, di abbassare la viscosita© dell'olio, di steri-
lizzare i semi, di detossificare i costituenti indesiderabili
Gli oli grassi vegetali sono principalmente dei triglice- dei semi (per es. il gossipol dei semi del cotone) e di fis-
ridi di acidi grassi in fase solida o liquida. Possono con- sare alcuni fosfatidi nella tavoletta di materiale com-
tenere piccole quantita© di altri lipidi come cere, acidi presso per diminuire cos|© le perdite causate dalla raffi-
grassi liberi, gliceridi parziali o sostanze insaponifica- nazione. L'efficacia del processo di spremitura e© tale
bili. Gli oli grassi vegetali sono ottenuti dai semi, dal che nel panello rimane solo il 3-6 per cento dell'olio.
frutto o dal nocciolo/drupa/nucleo di varie piante Spremitura umida mediante una pressa a vite. In questa
mediante spremitura e/o estrazione con solventi, poi spremitura vi sono delle gabbie nelle quali sono caricati
eventualmente sono raffinati e idrogenati. Se necessa- i grappoli (nel caso dei frutti della palma); queste gab-
rio, puo© essere aggiunto un adatto antiossidante. bie sono poi inviate verso uno sterilizzatore orizzontale

616
 Oli grassi vegetali

inoizircserP
in presenza di vapore vivo e di riscaldamento. Questa ^ acidi grassi liberi che possono deteriorare l'olio per

ilareneG
fase permette di inattivare gli enzimi, di separare i frutti ossidazione, possono causare un sapore di fumo
dai grappoli, la coagulazione delle proteine ecc.. quando l'olio e© scaldato e un aroma piccante
Dopo riscaldamento in un autoclave, la polpa e© inviata (mediante raffinazione alcalina),
sulla pressa a vite. L'olio e© separato dall'acqua e dalle ^ acqua che favorisce reazioni di idrolisi enzimatica

isilanA id
impurezze mediante centrifugazione e essiccamento (mediante raffinazione con alcali, essiccamento),

idoteM
sotto vuoto. ^ gliceridi parziali che possono generare una emul-
Pre-spremitura seguita da estrazione mediante solvente. sione ed un sapore amaro (mediante neutralizza-
Le fasi di questo procedimento di spremitura sono le zione, lavaggio),
stesse di quelle descritte precedentemente. La funzione ^ fosfatidi e composti fosforati che possono avere

irotinetnoC
/ ilairetaM
principale della pre-spremitura e© di ottenere una tavo- proprieta© emulsionanti, possono favorire la forma-
letta di materiale compresso di eccellente permeabilita© , zione di depositi, un imbrunimento dell'olio con il
che favorira© la successiva fase di estrazione da parte riscaldamento, un aspetto torbido ed una cattiva
del solvente. L'estrazione si effettua in un apparecchio stabilita© organolettica (mediante raffinazione con
a percolazione o ad immersione. L'efficacia del procedi- alcali)
mento di estrazione da parte del solvente e© tale che l'o-

ivittaeR
lio residuo nella farina e© generalmente inferiore all'1 ^ coloranti come la clorofilla (mediante raffinazione
per cento. con alcali), carotenoidi (mediante decolorazione),
B. Centrifugazione. ^ glicolipidi che possono formare soluzioni colloidali
con l'acqua,
La centrifugazione separa la fase oleosa da quella

itnemogrA
ilareneG
acquosa che contiene acqua, componenti solubili in ^ idrocarburi liberi, paraffina, cere e materiali
acqua e particelle solide residue. Questa operazione resinosi,
puo© essere effettuata usando: ^ metalli (Fe, Cu, Pb, Sn, Pt, Pd ecc.) che sono
^ centrifughe autopulenti a piatto o a vasca; potenti catalizzatori di ossidazione,

eifargonoM
^ super-decantatori, cioe© delle turbine orizzontali ^ pigmenti come il gossipol (nell'olio ottenuto con

ilareneG
munite di una cavita© cilindrica, che diventa legger- semi di cotone) o micotossine come le aflatossine
mente conica ad una estremita© , nella quale ruota (principalmente nell'olio di arachidi),
continuamente una vite che raschia le pareti della ^ pesticidi,
cavita© stessa. La vite e la cavita© ruotano con velo-

ehcituecamraF
^ prodotti di ossidazione (aldeidi, perossidi),
cita© diverse. Le particelle solide sono eliminate ^ proteine che provocano possibili reazioni allergi-

emroF
attraverso l'estremita© affusolata della cavita© e l'olio che,
defluisce dall'altra estremita© .
. Prima dell'estrazione si ^ sostanze insaponificabili (per es. lignine, steroli,
Estrazione mediante solvente

effettuano le seguenti fasi: i semi sono mantenuti per tocoferoli ed altre vitamine),
circa una settimana ad una temperatura inferiore a ^ idrocarburi policiclici aromatici.
eiretaM

emirP
24 ‘C per separare il guscio dai semi e per permettere . Questo procedimento
all'umidita© contenuta nei semi di raggiungere l'equili- Raffinazione mediante alcali

comprende le fasi seguenti: sgommatura, neutralizza-

brio. Poi i semi sono lavati, macinati, decorticati e zione mediante basi, lavaggio ed essiccamento.
ridotti in fiocchi. Il solvente generalmente piu© utilizzato
ehcituecamraF
inoizaraperP

e© una miscela costituita principalmente da n-esano e Sgommatura. Nel corso di questa fase della raffina-
ehcificepS

metilpentani (p.e. 65-70 ‘C) chiamata comunemente zione, per es. trattamento con acqua e/o acido fosforico
``esano''. A causa dell'elevato rischio di infiammabilita© e/o sodio cloruro, sono eliminati i fosfatidi, i composti
ed esplosivita© di questa miscela, si possono usare anche fosforati e i metalli. L'uso di questa fase dipende dalla
gas liquefatti o gas supercritici. natura dell'olio.
ehcitapoemO
inoizaraperP

Neutralizzazione con alcali. Questa fase riduce il conte-

RAFFINAZIONE nuto di acidi grassi liberi al di sotto dello 0,1 per cento;
gli acidi grassi sono trasformati in saponi insolubili nel-
La raffinazione ha come obiettivo l'eliminazione delle l'olio chiamati anche ``saponi grezzi''. Altre sostanze
impurezze e dei contaminanti dell'olio preservando il possono essere eliminate mediante adsorbimento su
piu© possibile i trigliceridi e riducendo al minimo la per- questi saponi: mucillagini, fosfatidi, prodotti di ossida-
ecidnI

dita di olio. Eé ridotto cos|© il contenuto delle sostanze zione, sostanze coloranti ecc. Sono eliminate tutte le
riportate di seguito: sostanze che diventano insolubili in olio dopo l'idrata-

617
Piante per tisane

zione. La neutralizzazione con alcali presenta l'incon- IDROGENAZIONE

veniente, se l'operazione non e© effettuata in maniera L'idrogenazione dell'olio essiccato e/o decolorato si
corretta, di saponificare una parte dell'olio neutro. effettua per mezzo di un catalizzatore (per es. Ni,
Lavaggio. Questa operazione consiste nella elimina- Pt, Pd) ad una temperatura tra 100 ‘C e 200 ‘C circa,
zione mediante l'acqua calda, dell'eccesso di sapone e sotto pressione d'idrogeno. Il catalizzatore e© eliminato
di alcali e anche di residui dei metalli, dei fosfatidi e di successivamente mediante filtrazione a 90 ‘C. L'idro-
altre impurezze. geno deve essere puro: esente da contaminanti dei cata-
Essiccamento. L'acqua residua e© eliminata sotto vuoto lizzatori, esente da acqua, a basso contenuto di ani-
prima delle altre fasi quali per es. la decolorazione. dride carbonica, di metano e di azoto. Si possono otte-
Raffinazione fisica . Questa procedura consiste in un nere delle piccole quantita© di acidi grassi trans o di
trattamento al vapore dell'olio in condizioni di vuoto polimeri.
elevato e ad una temperatura superiore a 235 ‘C. Que-
sta tecnica deve essere utilizzata per oli con un conte- PURIFICAZIONE CROMATOGRAFICA
nuto naturale basso di fosfatidi e di metalli (olio di
palma, olio di cocco, olio di oliva) o dai quali sono stati In caso di applicazioni che richiedono un grado di
eliminati i fosfatidi e i metalli pesanti mediante tratta- purezza elevato, come in particolare l'uso parenterale,
mento con acidi, usando acido fosforico concentrato e l'olio puo© essere purificato mediante un passaggio
successivo trattamento mediante adsorbimento con attraverso una colonna contenente una terra attivata.
terre decoloranti attivate (olio di girasole, olio di colza, In alcuni casi puo© essere usato un solvente per aumen-
olio di semi di soia). Questo procedimento non puo© tare l'efficienza di questa operazione. Le molecole con
essere utilizzato per gli oli sensibili al calore (olio di un'alta polarita© come le sostanze ossidate, gli acidi, gli
semi di cotone) poichë anneriscono. alcooli, i gliceridi parziali e gli steroli liberi sono preva-
Decolorazione . Il metodo di colorazione usuale consiste lentemente eliminati.
in un adsorbimento dell'olio, che e© generalmente scal- Quando l'olio e© usato per la preparazione di una forma
dato a 30 ‘C per 30 min e sotto vuoto, su terre decolo- farmaceutica per uso parenterale, i limiti riportati nella
ranti (naturali o attivate) o su carbone (attivato o non monografia per l'indice di acidita© , l'indice di perossidi
attivato). Possono essere aggiunti anche degli adsor- e il contenuto di acqua possono essere differenti.
benti di silice sintetica. Con questo metodo vengono eli-
minate sostanze che non sono state completamente
rimosse durante la raffinazione come per es. i carote- ETICHETTE
noidi e la clorofilla. L'etichetta indica:
Deodorazione . La deodorazione permette di eliminare ^ se del caso, che l'olio e© ottenuto mediante spremi-
gli odori, le sostanze volatili e i solventi di estrazione tura o estrazione,
residui; questo procedimento consiste nell'iniettare
vapore secco nell'olio mantenuto sotto vuoto e a tempe- ^ se del caso, che l'olio e© appropriato per la prepara-
ratura elevata. Le temperature variano in funzione del- zione di forme farmaceutiche per uso parenterale,
l'olio: da 200 ‘C a 235 ‘C per un periodo da 1 h e 30 ^ il nome e la concentrazione di ogni antiossidante
min fino a 3 h oppure una temperatura superiore a aggiunto.
240 ‘C per 30 min. Una delle principali reazioni secon-
darie di questa fase e© la decolorazione termica dovuta
alla distruzione dei carotenoidi quando la temperatura
e© superiore a 150 ‘C. Questa tecnica provoca una per-
dita di sostanze che possono essere distillate (acidi 1435

grassi liberi, steroli, tocoferoli, parte dell'olio raffinato)

e puo© causare una isomerizzazione cis-trans dei doppi
legami degli acidi grassi insaturi. PIANTE PER TISANE

DEPARAFFINAZIONE Plantae ad ptisanam

Questa fase consiste nell'eliminazione dei solidi e delle DEFINIZIONE
cere mediante filtrazione a bassa temperatura. Queste
sostanze solide e le cere possono modificare l'aspetto Le piante per tisane sono costituite esclusivamente da
dell'olio e causare depositi. una o piu© droghe vegetali destinate a preparazioni

618
 Preparazioni radiofarmaceutiche

inoizircserP
acquose orali ottenute per decozione, infusione o mace-

ilareneG
razione. La preparazione viene effettuata immediata- Massa media Deviazione percentuale

mente prima dell'uso.

meno di 1,5 g 15 per cento
da 1,5 g a 2,0 g inclusi 10 per cento
Le piante per tisane vengono generalmente fornite in piu© di 2,0 g 7,5 per cento

isilanA id
idoteM
quantita© non ripartite in dosi od in sacchetti.
CONSERVAZIONE
Le droghe vegetali utilizzate soddisfano alle singole Conservare al riparo dalla luce.
monografie di Farmacopea o, in mancanza di queste,

irotinetnoC
/ ilairetaM
alla monografia generale Droghe vegetali (1433).

Le raccomandazioni sulla qualita© microbiologica delle 1434

piante per tisane (5.1.4. - Categoria 4) tengono conto

ivittaeR
del metodo di preparazione prescritto (uso di acqua
bollente o non bollente). PREPARAZIONI
A BASE DI DROGHE VEGETALI

Plantae medicinales praeparatore

itnemogrA
ilareneG
IDENTIFICAZIONE DEFINIZIONE
Le preparazioni a base di droghe vegetali si ottengono
sottoponendo le droghe vegetali a trattamenti quali
L'identita© delle droghe vegetali presenti nelle piante per estrazione, distillazione, spremitura, frazionamento,
purificazione, concentrazione, fermentazione. Esse

eifargonoM
tisane e© effettuata mediante esami botanici.

ilareneG
comprendono: droghe vegetali triturate o polverizzate,
tinture, estratti, essenze, succhi spremuti ed essudati
trattati.
Le piante per tisane soddisfano alla monografia Piante
SAGGI per tisane (1435).

ehcituecamraF
Le preparazioni istantanee per tisane sono costituite da

emroF
polvere o granulati di una o piu© preparazione(i) a base
La proporzione fra droghe vegetali presenti nelle piante didiatamente
droghe vegetali destinate alla preparazione, imme-
prima dell'uso, di una soluzione per uso
per tisane viene verificata con metodi appropriati. orale.

eiretaM

emirP
Le piante per tisane in sacchetti soddisfano al saggio
seguente: 0125
inoizaraperP

ehcituecamraF

. Determinare la massa media di

ehcificepS

Uniformita© di massa

venti unita© scelte a caso come segue: pesare un singolo PREPARAZIONI

sacchetto pieno di droghe per tisana, aprirlo senza per- RADIOFARMACEUTICHE
dere alcun frammento. Svuotarlo completamente utiliz- Radiopharmaceutica
zando uno spazzolino. Pesare il sacchetto vuoto e calco-
ehcitapoemO
inoizaraperP

lare la massa del contenuto per sottrazione. Ripetere

l'operazione con i diciannove sacchetti rimasti. Salvo DEFINIZIONI
giustificate eccezioni, la massa singola di non piu© di Per gli obiettivi di questa monografia generale, le pre-
due su venti unita© puo© deviare dalla massa media del parazioni radiofarmaceutiche comprendono:
contenuto di una percentuale piu© elevata di quella indi- ^ prodotti radiofarmaceutici: ogni prodotto medici-
cata nella tabella sotto riportata e la massa del conte- nale che, quando e© pronto per l'uso, contiene uno
ecidnI

nuto di nessuna unita© puo© deviare di piu© del doppio di o piu© radionuclidi (isotopi radioattivi) incorporati
questa percentuale. a scopo medico,

619
Preparazioni radiofarmaceutiche

^ generatore di radionuclidi: ogni sistema che incor- di due fotoni gamma, ciascuno con un'energia di
pora un definito radionuclide progenitore dal quale 511 keV ed emessi generalmente a 180‘ l'uno dall'altro,
e© prodotto un radionuclide discendente che deve definita radiazione d'annichilazione.
essere rimosso mediante eluizione o mediante un Il decadimento di un radionuclide e© governato da leggi
altro metodo e usato in una preparazione radiofar- di probabilita© con un decadimento caratteristico
maceutica, costante e segue una legge esponenziale. Il tempo
^ kit per la preparazione radiofarmaceutica: ogni durante il quale una determinata quantita© di un radio-
preparazione che deve essere ricostituita e/o com- nuclide decresce fino alla meta© del suo valore iniziale
binata con dei radionuclidi nella preparazione viene chiamato periodo di dimezzamento (TÃÙÄ).
radiofarmaceutica finale, generalmente prima del Il potere penetrante di ciascuna radiazione varia consi-
suo uso, derevolmente a seconda della sua natura e della sua
energia. Le particelle alfa vengono totalmente assorbite
^ precursore radiofarmaceutico: ogni altro radionu- in uno spessore di materia compreso tra qualche micro-
clide prodotto, prima dell'uso, mediante la marca- metro e qualche decina di micrometri. Le particelle beta
tura di un'altra sostanza. vengono assorbite totalmente da uno spessore di mate-
ria variabile da alcuni millimetri a qualche centimetro.
Un nuclide e© una specie atomica caratterizzata dal I raggi gamma non sono assorbiti completamente ma
numero di protoni e neutroni contenuti nel suo nucleo solo attenuati e una diminuzione della loro intensita© di
(e di conseguenza dal suo numero atomico Z e dal suo dieci volte puo© richiedere, ad esempio, uno spessore di
numero di massa A) e anche dallo stato energetico del qualche centimetro di piombo. Piu© elevata e© la densita©
suo nucleo. Gli isotopi di un elemento sono nuclidi della sostanza che viene attraversata dalle particelle
aventi il medesimo numero atomico ma differente alfa e beta, piu© il percorso di queste radiazioni e© breve
numero di massa. I nuclidi contenenti un insieme insta- e l'attenuazione dell'intensita© dei raggi gamma e© mag-
bile di protoni e neutroni si trasformano spontanea- giore.
mente, con una probabilita© statistica costante, in altre Ogni radionuclide e© caratterizzato da un periodo di
combinazioni, stabili o instabili, di protoni e neutroni. dimezzamento invariabile, espresso in unita© di tempo,
Tali nuclidi sono detti essere radioattivi e sono chiamati e dalla natura e dall'energia della sua o delle sue radia-
radionuclidi. Il nuclide instabile iniziale viene chiamato zioni. L'energia e© espressa in elettronvolt (eV), kiloelet-
radionuclide progenitore e il nuclide risultante e© il tronvolt (keV) o in megaelettronvolt (MeV).
nuclide discendente. Generalmente il termine ``radioattivita© '' e© usato per
Il decadimento radioattivo o la trasformazione puo© descrivere il fenomeno del decadimento radioattivo e
comportare l'emissione di particelle cariche, una cat- per esprimere la quantita© fisica (attivita© ) di questo feno-
tura di elettroni (CE) ovvero una transizione isomerica meno. La radioattivita© di una preparazione e© il numero
(TI). Le particelle cariche emesse dal nucleo possono di disintegrazioni nucleari o trasformazioni nucleari
essere particelle alfa (nucleo dell'atomo di elio avente per unita© di tempo.
numero di massa 4), oppure beta (elettroni con carica Nel Sistema Internazionale (SI), le quantita© di radioat-
negativa o positiva, questi ultimi chiamati positroni). tivita© sono espresse in becquerel (Bq) che corrisponde
L'emissione da parte del nucleo di particelle cariche ad una trasformazione nucleare per secondo. La misura
puo© essere accompagnata da raggi gamma. Raggi assoluta della radioattivita© richiede un laboratorio spe-
gamma sono emessi anche nel corso di una transizione cializzato ma l'identificazione e la misura della radia-
isomerica. Queste emissioni di raggi gamma possono zione possono essere effettuate per confronto utiliz-
essere parzialmente sostituite dalla espulsione di elet- zando preparazioni di riferimento fornite da laboratori
troni conosciuti come elettroni di conversione interna. riconosciuti dall'Autorita© competente.
Questo fenomeno, similmente al processo di cattura Purezza radionuclidica . E' il rapporto, espresso in per-
degli elettroni, provoca una emissione secondaria di centuale, tra la radioattivita© del radionuclide conside-
raggi X (causata dal riordinamento degli elettroni nel- rato e la radioattivita© totale della preparazione radio-
l'atomo). Questa emissione secondaria puo© essa stessa farmaceutica. Le impurezze radionuclidiche principali
essere parzialmente sostituita dalla espulsione di elet- sono elencate, con i limiti corrispondenti, nelle singole
troni conosciuti come elettroni Auger. I radionuclidi monografie.
aventi un deficit di neutroni possono decadere emet- Purezza radiochimica . E' il rapporto, espresso in per-
tendo dei positroni: essi sono chiamati emettitori di centuale, tra la radioattivita© del radionuclide conside-
positroni. I positroni si annichiliscono al contatto con rato che e© presente nella preparazione radiofarmaceu-
gli elettroni e questo processo da© luogo ad un'emissione tica sotto la forma chimica dichiarata e la radioattivita©

620
 Preparazioni radiofarmaceutiche

inoizircserP
totale del medesimo radionuclide presente nella prepa- Bombardamento con neutroni o particelle cariche

ilareneG
razione radiofarmaceutica. Le impurezze radiochimi- La reazione nucleare e la sua probabilita© di verificarsi
che principali sono elencate, con i limiti corrispondenti, nell'unita© di tempo dipendono dalla natura e dalle pro-
nelle singole monografie. prieta© fisiche del materiale bersaglio e della natura, dal-
Purezza chimica . Nelle monografie delle preparazioni l'energia e dalla quantita© delle particelle incidenti.

isilanA id
radiofarmaceutiche la purezza chimica e© controllata La trasformazione nucleare che si verifica attraverso il

idoteM
specificando i limiti delle impurezze chimiche. bombardamento con particelle puo© essere rappresen-
Supporto ( carrier
) isotopico . Un isotopo stabile dell'ele- tata nella seguente forma:
mento considerato, presente nella preparazione radio- nucleo bersaglio (particella incidente, particella o
attiva o aggiunto ad essa, nella stessa forma chimica radiazione emessa) nucleo prodotto.

irotinetnoC
/ ilairetaM
nella quale si trova il radionuclide.
. La radioattivita© di un radionu- Esempio: 5818Fe(n, )1859Fe
c

O(p,n) F
Radioattivita© specifica

clide per unita© di massa dell'elemento o della forma chi-

mica considerata. Oltre alla reazione nucleare desiderata potrebbero veri-
Concentrazione radioattiva. La radioattivita© di un ficarsi delle trasformazioni ``parassite''. Queste sono
radionuclide per unita© di volume. influenzate dall'energia delle particelle incidenti e dalla

ivittaeR
Radioattivita© totale . La radioattivita© di un radionuclide purezza del materiale bersaglio. Alcune trasformazioni
espressa per unita© (flacone, capsula, ampolla, genera- ``parassite'' possono provocare un aumento delle impu-
tore, ecc.). rezze radionuclidiche.
. Tutti i costituenti utilizzati per la produ- Fissione nucleare

itnemogrA
ilareneG
Materie prime

zione delle preparazioni radiofarmaceutiche. Un piccolo numero di nuclidi ad alto numero atomico
Periodo di validita© . Il tempo durante il quale devono possono essere ottenuti mediante fissione e la reazione
essere soddisfatte le specifiche descritte nella monogra- piu© frequentemente usata e© la fissione dell'uranio-235
fia. Deve essere indicata chiaramente la data di sca- mediante neutroni in un reattore nucleare. Lo iodio-131,
denza e, se necessario, l'ora. il molibdeno-99 e lo xenon-133 possono essere prodotti

eifargonoM

ilareneG
mediante fissione nucleare dell'uranio-235. La loro estra-
PRODUZIONE zione da una miscela di oltre 200 radionuclidi deve essere
Una monografia di una preparazione radiofarmaceu- attentamente controllata per ridurre al minimo le impu-
tica descrive il piu© precisamente possibile il metodo rezze radionuclidiche.

ehcituecamraF
della produzione del radionuclide. Una preparazione Generatori di radionuclidi

emroF
radiofarmaceutica contiene il suo radionuclide: I sistemi generatori di radionuclide utilizzano un radio-
^ come un elemento in forma atomica o molecolare, nuclide progenitore ad emivita relativamente lunga che
per esempio [133Xe], [15O]O2, decade ad un radionuclide discendente, generalmente
^ come uno ione, per esempio [131I]ioduro, con un periodo di dimezzamento piu© breve.
[ Tc]pertecnetato,
99m Il radionuclide discendente e© separato poi dal radionu-
eiretaM

emirP
^ incluso o legato a molecole organiche mediante clide progenitore mediante un processo chimico o
chelazione, per esempio [111In]ossina,18o mediante fisico; cio© permette di utilizzare il discendente ad una
legame covalente, per esempio 2-[ F]fluoro-2- distanza considerevole dal sito di produzione dei gene-
desossi-D-glucosio. ratori malgrado il breve tempo di dimezzamento.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Esistono in pratica differenti procedimenti che permet- Materiali bersaglio

tono di produrre dei radionuclidi da usare nelle prepa- La composizione isotopica e la purezza del materialeber-
razioni radiofarmaceutiche o come preparazioni radio- saglio determinano le percentuali relative del radionu-
farmaceutiche: clide principale e delle impurezze radionuclidiche. L'uso
ehcitapoemO

^ bombardamento neutronico dei materiali bersaglio

inoizaraperP

di materiali bersaglio arricchiti isotopicamente, nei quali

(generalmente in reattori nucleari), l'abbondanza del nuclide bersaglio richiesto e© stata
^ bombardamento dei materiali bersaglio con parti- aumentata artificialmente, puo© migliorare la resa della
celle cariche (in acceleratori come i ciclotroni), produzione e la purezza del radionuclide desiderato.
^ fissione nucleare di nuclidi pesanti di materiali ber- La forma chimica, la purezza e lo stato fisico, gli additivi
saglio (generalmente dopo bombardamento con chimici cos|© come le condizioni di bombardamento e
neutroni o particelle cariche),
ecidnI

l'ambiente fisico e chimico diretto determinano lo stato

^ un generatore radionuclidico. chimico e la purezza chimica dei radionuclidi prodotti.

621
Preparazioni radiofarmaceutiche

Nel corso della produzione di radionuclidi, e in partico- I saggi per l'identita© , per la purezza chimica e per la
lare dei radionuclidi a vita breve, puo© non essere possi- determinazione quantitativa devono essere compiuti
bile determinare questi parametri di qualita© prima dei mediante procedure convalidate.
processamenti successivi e della produzione delle pre- Se i lotti dei precursori sono accettati sulla base di dati
parazioni radiofarmaceutiche. Conseguentemente ogni ottenuti da certificati di analisi, si devono definire le
lotto di materiale bersaglio deve essere esaminato prove atte a dimostrare la riproducibilita© e la consi-
mediante l'esecuzione di una prova di produzione stenza delle analisi effettuate dai fornitori e deve essere
prima di essere utilizzato abitualmente nella produ- effettuato almeno un saggio di identita© . Si raccomanda
zione del radionuclide considerato e nella fabbrica- di esaminare i materiali precursori in saggi preliminari
zione delle preparazioni radiofarmaceutiche. In questo di produzione prima del loro utilizzo abituale per la
modo si assicura che in condizioni specifiche, il bersa- fabbricazione delle preparazioni radiofarmaceutiche,
glio produce il radionuclide nella quantita© desiderata e in modo da assicurare che nelle specifiche condizioni
della qualita© specificata. di produzione, il precursore permetta di ottenere la pre-
Il materiale bersaglio allo stato gassoso, liquido o parazione radiofarmaceutica nella quantita© desiderata
solido e© contenuto in un supporto in modo da essere e della qualita© specificata.
irradiato mediante il fascio di particelle. In caso di Efficienza del sistema di produzione
bombardamento neutronico, il materiale bersaglio
e© comunemente contenuto in ampolle di quarzo o in Tutte le operazioni, dalla preparazione del bersaglio
contenitori di alluminio o di titanio ad alta purezza. alla distribuzione per l'utilizzo della preparazione
Eé necessario assicurare che non ci siano interazioni tra radiofarmaceutica finale, devono essere chiaramente
il recipiente e il suo contenuto nelle condizioni di irra- documentate includendo il loro impatto sulla purezza
diazione (temperatura, pressione, tempi). del prodotto finale e l'efficacia della procedura. Dove
Nel caso di bombardamento con particelle cariche, il possibile, si devono eseguire controlli durante la produ-
supporto per il materiale bersaglio e© generalmente zione e registrare i risultati a ciascuno stadio della pro-
costruito in alluminio o in un altro metallo appro- duzione al fine di identificare a quale livello si sia verifi-
priato, con connessioni di entrata ed uscita, un sistema cata una eventuale discrepanza rispetto al normale pro-
di raffreddamento e generalmente una finestra di cesso di produzione.
ingresso del fascio costituita da lamina sottile di a) La produzione delle preparazioni radiofarmaceuti-
metallo. La natura e lo spessore della finestra hanno che puo© fare uso di apparati meccanici e automa-
un'influenza determinante sulla reazione nucleare e tizzati usati nell'industria farmaceutica, purchë gli
possono anche influenzare la purezza radionuclidica. stessi siano adattati alla specificita© della materia
prima radioattiva e ai criteri della radioprotezione.
La procedura di produzione descrive chiaramente: b) Per le preparazioni radiofarmaceutiche contenenti
^ il materiale bersaglio, radionuclidi con emivita breve, come alcuni emetti-
^ la costruzione del supporto per il materiale bersa- tori di positroni, si usa generalmente il controllo a
glio, distanza del processo di produzione o apparecchia-
ture di radiosintesi automatizzate. Per i radionu-
^ il caricamento del materiale bersaglio nel sistema clidi con un periodo di dimezzamento brevissimo
di irradiazione, (meno di 20 min) il controllo dell'efficienza del
^ il metodo di irradiazione (di bombardamento), sistema di produzione e© un'importante accorgi-
^ la separazione del radionuclide desiderato, mento per assicurare la qualita© della preparazione
radiofarmaceutica prima del suo rilascio.
e considera tutti i possibili effetti sull'efficacia della pro- c) Ogni procedura di produzione deve essere convali-
duzione in termini di qualita© e quantita© del radionuclide data mediante produzioni di controllo prima del
prodotto. suo uso a regime nella fabbricazione delle prepara-
Lo stato chimico del radionuclide isolato puo© giocare zioni radiofarmaceutiche, per assicurare che nelle
un ruolo fondamentale nel processamento successivo. specifiche condizioni di produzione, il sistema di
produzione consenta di ottenere una preparazione
Precursori per le sintesi radiofarmaceutica nella quantita© desiderata e della
Generalmente, questi precursori non sono prodotti su qualita© specificata.
larga scala. Alcuni precursori sono sintetizzati dai d) La preparazione della dose da somministrare della
laboratori di produzione radiofarmaceutica, altri sono preparazione radiofarmaceutica finale da impie-
forniti da produttori o da laboratori specializzati. gare nella pratica di medicina nucleare comporta

622
 Preparazioni radiofarmaceutiche

inoizircserP
generalmente l'utilizzo di una frazione della radio- mento in una capsula), essa e© ricoperta con una prote-

ilareneG
attivita© totale ottenuta da preparazioni radiofar- zione costituita da un foglio adesivo di acetato di cellu-
maceutiche pronte per l'uso, generatori, kit e pre- losa o altro materiale opportuno.
cursori radioattivi. Tutte le condizioni che possono La stessa sorgente viene misurata piu© volte nelle stesse
influenzare la qualita© del prodotto (per esempio la condizioni di geometria ad intervalli corrispondenti
purezza radiochimica e la sterilita© ) devono essere

isilanA id
idoteM
chiaramente definite e devono essere adottate generalmente alla meta© di un periodo di dimezzamento
misure adatte per la protezione dalle radiazioni. e durante un tempo corrispondente a circa tre emivite.
Il corretto funzionamento dell'apparecchio deve essere
verificato utilizzando una sorgente a lunga emivita e,
IDENTIFICAZIONE se necessario, effettuate delle correzioni per tenere

irotinetnoC
/ ilairetaM
conto delle variazioni di velocita© di conteggio (vedi
Decadimento radioattivo . La radioattivita© decade in Misura della radioattivita© ).
modo esponenziale, con una costante di disintegrazione Viene costruito un grafico riportando in ascissa il
caratteristica per ciascun radionuclide. tempo e in ordinata il logaritmo del valore letto dallo
La curva di decadimento esponenziale (curva di decadi- strumento (per esempio velocita© di conteggio). Il

ivittaeR
mento) e© descritta mediante l'equazione: periodo di dimezzamento calcolato, se non diversa-
At = A0e - t k
mente indicato, non deve differire piu© del 5 per cento
At = radioattivita© al tempo t, rispetto al periodo di dimezzamento indicato in Farma-
copea.
A0 = radioattivita© al tempo t = 0,

itnemogrA
ilareneG
k = costante di disintegrazione caratteristica di ogni Determinazione della natura e dell'energia delle radia-

. La natura e l'energia delle radiazioni emesse pos-

radionuclide, zioni

sono essere determinate con diversi procedimenti, quali

e = base dei logaritmi Neperiani. la costruzione di una curva di attenuazione e l'uso della
Il periodo di dimezzamento (TÃÙÄ) e© correlato alla spettrometria. La curva di attenuazione puo© essere uti-

eifargonoM
lizzata per l'analisi delle emissioni di elettroni; la spet-

ilareneG
costante di disintegrazione ( ) dalla seguente relazione: trometria viene utilizzata
k
soprattutto per l'identifica-
T1 2 l 1n
ˆ
2 1n 2 0; 693
 †
zione delle radiazioni gamma e dei raggi X rilevabili.
=

La curva di attenuazione e© utilizzata per gli emettitori di

ehcituecamraF
Il radionuclide e© generalmente identificato mediante il soli elettroni, quando non e© disponibile uno spettrome-
suo periodo di dimezzamento o mediante la natura e tro per raggi beta oppure, per emettitori beta/gamma

emroF
l'energia della sua radiazione o mediante entrambi, quando non e© possibile disporre di uno spettrometro
come prescritto nella monografia. per raggi gamma. Questo metodo di stima dell'energia
. Il periodo di massima della radiazione beta fornisce solo un valore
dimezzamento e© misurato con un opportuno strumento approssimativo. La sorgente, convenientemente siste-
Misura del periodo di dimezzamento

mata in modo da ottenere condizioni di geometria

eiretaM

emirP
di rivelazione come la camera di ionizzazione, un con- costanti, e© posta di fronte
tatore Geiger-Mu« ller, un contatore a scintillazione tatore Geiger-Mu« ller o di alla un
sottile finestra di un con-
contatore proporzionale.
(cristallo, solido, liquido) o un rivelatore semicondut- La sorgente e© protetta come descritto sopra. Si misura
tore. La preparazione da esaminare e© usata come tale quindi la velocita© di conteggio della sorgente. Tra la
ehcituecamraF

o diluita o essiccata in una capsula dopo un'opportuna sorgente e il contatore sono posti, in successione,
inoizaraperP

ehcificepS

diluizione. La quantita© di attivita© , scelta in relazione

alle condizioni sperimentali, deve essere sufficiente- almeno sei schermi di alluminio con massa per unita© di
mente elevata per permettere di protrarre la misura tore beta puro,scelti
area crescente,
la
entro limiti tali che con un emetti-
velocita© di conteggio non e© influen-
per alcuni dei periodi di dimezzamento presunti, zata dall'aggiunta di ulteriori schermi. Questi schermi
ehcitapoemO
inoizaraperP

ma non deve essere troppo elevata per evitare una per- sono inseriti in modo tale da mantenere costanti le con-
dita dell'efficienza di conteggio, per esempio a causa dizioni geometriche. Si costruisce un grafico
della saturazione del rivelatore o del tempo morto di in ascissa la massa per unita© di area delloriportando schermo
risposta. espressa in milligrammi per centimetro quadrato e in
La sorgente radioattiva e© preparata in modo tale da ordinata il logaritmo del numero di impulsi contati per
evitare perdite di sostanza durante la manipolazione. unita© di tempo per ciascuno schermo esaminato. Si
ecidnI

Se e© liquida (soluzione), essa e© contenuta in flaconi o costruisce un grafico nelle stesse condizioni per una
contenitori sigillati. Se e© solida (residuo da essicca- preparazione standardizzata. I coefficienti di assorbi-

623
Preparazioni radiofarmaceutiche

mento di massa sono calcolati con riferimento alle parti l'efficienza in funzione dell'energia dei raggi gamma e
mediane delle curve che risultano praticamente rettili- dei raggi X mediante una serie di sorgenti calibrate di
nee. vari radionuclidi.
Il coefficiente di assorbimento di massa m, espresso in Lo spettro di emissione di un radionuclide che emette
centimetri quadrati per milligrammo, dipende dall'e- raggi gamma e raggi X e© unico per quel nuclide ed e©
nergia dello spettro energetico della radiazione beta, caratterizzato dalle energie e dal numero dei fotoni di
dalla natura e dalle proprieta© fisiche dello schermo. energie prodotte nella transizione da un livello di ener-
Esso permette cos|© di identificare gli emettitori beta ed gia ben determinato ad un altro. Questa proprieta© con-
e© calcolato usando l'equazione: tribuisce all'identificazione dei radionuclidi presenti in
1nA1 1nA2 una sorgente e alla determinazione quantitativa di cia-
mˆ
ÿ

m2 m1 scuno. Questo permette di valutare il grado di impu-

ÿ
rezza radionuclidica mediante la rivelazione di picchi
m1 = massa per unita© di area dello schermo piu© leggero, estranei a quelli previsti.
Eé possibile definire la curva di decadimento della radio-
m2 = massa per unita© di area dello schermo piu© pesante, attivita© usando la spettrometria gamma, poichë i picchi
m1 e m2 sono compresi nella parte rettilinea della cos|© ottenuti diminuiscono di ampiezza in funzione del
curva, periodo di dimezzamento. Se in una sorgente e© presente
A1 = velocita© di conteggio per la massa per unita© di area un'impurezza radioattiva con un differente periodo di
m1, dimezzamento, e© facile rilevare quest'ultima mediante
A2 = velocita© di conteggio per la massa per unita© di area l'identificazione del picco o dei picchi caratteristici la
m2. cui ampiezza decresce con un periodo differente da
Il coefficiente di assorbimento di massa m cos|© calco- quello atteso per il radionuclide in esame. L'accerta-
lato non deve differire per piu© del 10 per cento dal coef- mento del periodo di dimezzamento corrispondente ai
ficiente ottenuto in identiche condizioni utilizzando picchi aggiunti mediante misure ripetute del campione
una preparazione di riferimento dello stesso radio- contribuisce all'identificazione dell'impurezza.
nuclide. La Tabella delle caratteristiche fisiche dei radionuclidi
Il percorso della particella beta e© un ulteriore parame- menzionati nella Farmacopea (5.7) riassume le caratteri-
tro che puo© essere usato per la determinazione dell'e- stiche fisiche generalmente riconosciute di quei radio-
nergia beta. Esso si ottiene dal grafico descritto sopra nuclidi che fanno parte dei preparati che sono oggetto
e rappresenta la massa per unita© di area corrispondente di monografie della Farmacopea. Inoltre, la Tabella
all'intersezione delle estrapolazioni della parte rettili- specifica le caratteristiche fisiche delle principali impu-
nea discendente della curva di assorbimento e della rezze potenziali dei radionuclidi menzionati nelle
linea orizzontale della radioattivita© di fondo. monografie.
Per ``probabilita© di una transizione'' si intende la proba-
I contatori a scintillazione liquida possono essere usati bilita© che un nucleo, in uno stato di energia, si trasformi
per ottenere uno spettro delle radiazioni di emettitori secondo la transizione considerata. I termini ``intensita© ''
a e - (vedere il paragrafo Misura della radioattivita© ).
b
e ``abbondanza'' sono frequentemente usati al posto di
La spettrometria gamma e© usata per identificare i radio- ``probabilita© ''.
nuclidi mediante la misura dell'energia e dell'intensita© Per ``probabilita© di emissione'' si intende la probabilita©
delle loro emissioni gamma e X. che un atomo di un radionuclide dia origine all'emis-
Il rivelatore piu© indicato per la spettrometria dei raggi sione delle particelle o della radiazione considerate.
gamma e dei raggi X e© il rivelatore semiconduttore al Indipendentemente dal significato, la probabilita© e© nor-
germanio. Sono anche usati rivelatori a scintillazione a malmente riferita a 100 disintegrazioni.
ioduro di sodio attivato con tallio ma hanno una risolu-
zione energetica molto minore. MISURA DELLA RADIOATTIVITAé
Il sistema di rivelazione deve essere calibrato usando
sorgenti di riferimento poichë l'efficienza di rivelazione La radioattivita© di una preparazione e© riferita ad una
e© funzione sia dell'energia dei raggi gamma e dei rag- data e, se necessario, ad una ora (minuto o secondo)
gi X, sia della forma della sorgente e della distanza determinata.
della sorgente dal rivelatore. L'efficienza di rivelazione La misura assoluta della radioattivita© di un determinato
puo© essere misurata impiegando una sorgente calibrata campione puo© essere effettuata solo se e© conosciuto lo
del radionuclide che deve essere misurato o, per un schema del decadimento del radionuclide, ma in pratica
lavoro piu© generale, puo© essere costruito un grafico del- sono necessarie molte correzioni per ottenere risultati

624
 Preparazioni radiofarmaceutiche

inoizircserP
accurati. Per questa ragione e© comune effettuare le Se il tempo di una misura singola, tm, non e© cos|© breve

ilareneG
misure con l'ausilio di una sorgente di riferimento pri- da essere trascurabile rispetto al periodo di dimezza-
maria. Gli standard primari possono non essere dispo- mento, TÃÙÄ, deve essere preso in considerazione il deca-
nibili per i radionuclidi a vita breve, per esempio emetti- dimento durante questo tempo di misurazione. Dopo
tori di positroni. Gli strumenti di misurazione sono cali- aver corretto le letture dello strumento (velocita© di con-
brati usando standard adatti per gli specifici teggio, corrente di ionizzazione, ecc.) per il fondo e, se

isilanA id
idoteM
radionuclidi. Gli standard sono disponibili presso i necessario, per perdite dovute a effetti elettronici, la
laboratori riconosciuti dall'Autorita© competente. Il con- correzione di decadimento durante il tempo di misura-
tatore Geiger-Mu« ller e© soprattutto utilizzato per rivelare zione e© :
gli emettitori beta e beta/gamma; il contatore a scintil-
R tTm11n2

irotinetnoC
lazione o quello a semiconduttore sono utilizzati per la

/ ilairetaM
misura delle radiazioni gamma; emettitori beta a bassa Rcorr ˆ  2
=

energia richiedono un contatore a scintillazione liquida. 1 exp tTm1n2
ÿ ÿ

Per il rilevamento e la misura di emettitori alfa sono 1

=2

richiesti apparecchi e tecniche specializzate. Eé essenziale

per effettuare un confronto esatto tra le sorgenti radio- Rcorr = valore letto tenendo conto della correzione

ivittaeR
attive operare in condizioni analoghe di misurazione all'inizio della singola misura,
per i campioni e per gli standard. R = valore letto prima della correzione per il deca-
Gli emettitori beta a bassa energia possono essere misu- dimento, ma gia© corretto per il fondo, ecc.
rati con un contatore a scintillazione liquida. Il cam-
pione e© sciolto in una soluzione contenente uno o piu© I risultati delle determinazioni della radioattivita© pre-

itnemogrA
ilareneG
spesso due sostanze organiche fluorescenti (scintillatori sentano delle variazioni che derivano principalmente
primario e secondario) che convertono parte dell'ener- dalla natura della trasformazione nucleare. Deve essere
gia di disintegrazione in fotoni di luce che sono rivelati registrato un numero sufficiente di impulsi per poter
mediante un fotomoltiplicatore e convertiti in impulsi tener conto delle variazioni del numero di trasforma-
elettrici. Quando si usa un contatore a scintillazione zioni per unita© di tempo. La deviazione standard e© data

eifargonoM

ilareneG
liquida, le misure comparative devono essere dalla radice quadrata degli impulsi; sono dunque neces-
corrette dagli effetti di smorzamento della luce. Le sari almeno 10000 impulsi per ottenere una deviazione
misure dirette devono essere effettuate, se possibile, in standard che non sia superiore all'1 per cento (inter-
condizioni simili (per esempio volumi e tipo delle solu- vallo di confidenza: 1 sigma).

ehcituecamraF
zioni) per la sorgente da misurare e per la sorgente di Tutte le indicazioni della quantita© di radioattivita©
riferimento.

emroF
devono essere accompagnate dall'indicazione della
Tutte le misure di radioattivita© devono essere corrette data e, se necessario, dell'ora in cui e© stata effettuata la
sottraendo il fondo dovuto alla radioattivita© dell'am- misura. Questa indicazione della quantita© di radioatti-
biente e ai segnali spuri generati nell'apparecchio. vita© deve essere fatta considerando il fuso orario di rife-
Con determinati apparecchi, quando le misure vengono rimento (GMT, CET). La quantita© di radioattivita© a

eiretaM

emirP
effettuate con livelli di radioattivita© elevata, puo© essere tempi diversi puo© essere calcolata mediante l'equazione
necessario apportare anche la correzione per le perdite esponenziale di decadimento o mediante tabelle.
da coincidenza dovute al tempo morto del rivelatore e La radioattivita© di una soluzione e© espressa per unita©
del relativo sistema elettronico. Per un sistema di con- di volume, in modo da ottenere la concentrazione
ehcituecamraF

teggio con un determinato tempo morto dopo ciascun

inoizaraperP

ehcificepS

impulso, la correzione e© :
s
radioattiva.
N 1 NNobs
ˆ
PUREZZA RADIONUCLIDICA
ÿ obs s
ehcitapoemO
inoizaraperP

N = il valore vero dei conteggi al secondo, Nella maggioranza dei casi, per poter indicare la purezza
Nobs = il valore osservato dei conteggi al secondo, radionuclidica di una preparazione radiofarmaceutica,
occorre conoscere l'identita© di ogni radionuclide pre-
s = il tempo morto in secondi. sente e la sua radioattivita© . La metodica piu© conveniente
In alcuni apparecchi questa correzione viene eseguita per lo studio della purezza radionuclidica e© la spettrome-
automaticamente. Le correzioni per perdite da coinci- tria gamma. Tale metodica pero© non e© universalmente
ecidnI

denza devono essere fatte prima della correzione per la utilizzabile in quanto normalmente le impurezze di alfa
radiazione di fondo. e beta emettitori non sono rivelate e, quando sono impie-

625
Preparazioni radiofarmaceutiche

gati rivelatori al sodio ioduro, i picchi dovuti alle impu- In linea di principio qualsiasi metodica di separazione
rezze degli emettitori gamma sono spesso mascherati analitica puo© essere impiegata nella determinazione
dallo spettro del radionuclide principale. della purezza radiochimica. Per esempio, le monografie
Le singole monografie stabiliscono la purezza radionu- dei prodotti radiofarmaceutici possono prevedere la
clidica necessaria (per esempio, lo spettro dei raggi cromatografia su carta (2.2.26), la cromatografia su
gamma non deve differire in maniera significativa da strato sottile (2.2.27), l'elettroforesi (2.2.31), la cromato-
quello di una preparazione standardizzata) e possono grafia di esclusione (2.2.30), la gas cromatografia
eventualmente precisare i limiti delle impurezze radio- (2.2.28) e la cromatografia liquida (2.2.29). Nelle mono-
nuclidiche specifiche (per esempio, cobalto-60 nel grafie e© riportata la descrizione tecnica di questi metodi
cobalto-57). Per quanto queste specificazioni siano analitici. Devono essere infine prese precauzioni parti-
necessarie, esse non possono da sole garantire che la colari per la protezione dalle radiazioni.
purezza radionuclidica di una preparazione sia suffi- In ambito ospedaliero sono maggiormente usate la cro-
ciente da permettere che questa sia usata nell'uomo. matografia su carta e la cromatografia su strato sottile.
Per tale ragione il produttore deve analizzare scrupolo- Nella cromatografia su carta e in quella su strato sot-
samente il prodotto in particolare deve ricercare le tile, il volume specificato nella monografia viene depo-
impurezze a vita lunga nelle preparazioni di radionu- sitato sulla linea di partenza, come prescritto nei
clidi a vita breve dopo un tempo opportuno di decadi- metodi generali per la cromatografia. E' preferibile
mento. In questo modo il produttore puo© ottenere non diluire la preparazione in esame ma e© importante
le informazioni sulla qualita© dei metodi di fabbrica- evitare la deposizione di una quantita© di radioattivita©
zione e l'efficacia delle procedure di controllo che effet- tale che si abbiano delle perdite di conteggio per coinci-
tua. Nel caso in cui devono essere identificati e/o diffe- denza al momento della misura della radioattivita© . In
renziati due o piu© radionuclidi emettitori di positroni, considerazione delle piccolissime quantita© di materiale
come per13 esempio la impurezza di 18F nelle prepara- radioattivo utilizzato, e© possibile aggiungere un sup-
zioni di N, oltre alla spettrometria gamma deve essere porto isotopico, se previsto nella specifica monografia.
effettuata la determinazione del periodo di dimez- Dopo l'eluizione, il supporto cromatografico e© seccato
zamento. e la posizione delle aree radioattive puo© essere rivelata
A causa delle differenze nei periodi di dimezzamento sia mediante autoradiografia, sia mediante misurazione
dei differenti radionuclidi eventualmente presenti, la della radioattivita© lungo tutto il supporto cromatogra-
purezza radionuclidica della preparazione radiofarma- fico usando appropriati contatori muniti di collima-
ceutica cambia con il tempo. I requisiti di purezza tore, oppure suddividendolo in strisce ed effettuando il
radionuclidica devono essere soddisfatti per tutto il conteggio di ciascuna porzione. La posizione delle aree
periodo di validita© . Quando il periodo di dimezzamento radioattive ne permette l'identificazione chimica
del radionuclide presente nella preparazione e© breve mediante il confronto con il cromatogramma ottenuto
puo© essere difficile effettuare questi saggi prima dell'au- con soluzioni della medesima sostanza chimica (non
torizzazione al rilascio per l'uso del lotto. In questo radioattiva) e rivelato usando un metodo di rivelazione
caso il saggio rappresenta un controllo della qualita© di adatto.
produzione. La misura della radioattivita© puo© essere effettuata
mediante integrazione della curva ottenuta utilizzando
un registratore automatico o attraverso un contatore
PUREZZA RADIOCHIMICA digitale. Il rapporto delle aree dei picchi presenti nella
La determinazione della purezza radiochimica richiede curva fornisce il rapporto della concentrazione radioat-
la separazione delle differenti specie chimiche conte- tiva delle sostanze chimiche. Quando i supporti croma-
nenti il radionuclide e la misurazione della percentuale tografici vengono suddivisi in porzioni, i rapporti delle
di radioattivita© associata alla sostanza chimica dichia- quantita© radioattive misurate per ciascuna porzione
rata. Le impurezze radiochimiche possono derivare da: forniscono il rapporto delle concentrazioni delle specie
chimiche radioattive presenti.
^ produzione del radionuclide,
^ procedure chimiche successive, RADIOATTIVITAé SPECIFICA
^ separazione preparativa incompleta,
^ cambiamenti chimici durante la conservazione. La radioattivita© specifica e© generalmente calcolata
tenendo conto della concentrazione radioattiva (radio-
I requisiti di purezza radiochimica devono essere soddi- attivita© per unita© di volume) e della concentrazione
sfatti per tutto il periodo di validita© . della sostanza chimica considerata, dopo aver verifi-

626
 Preparazioni radiofarmaceutiche

inoizircserP
cato che la radioattivita© e© attribuibile al solo radionu- al momento dell'iniezione o nel corso del successivo

ilareneG
clide considerato (purezza radionuclidica) e alla sola dosaggio della radioattivita© del tessuto) sono esclusi
specie chimica considerata (purezza radiochimica). dal saggio.
La radioattivita© specifica varia con il tempo. Tutte le Immediatamente dopo l'iniezione ciascun animale e©
indicazioni della radioattivita© specifica devono essere posto in una gabbia separata che permette di racco-

isilanA id
accompagnate dalla data e, se necessario, dall'ora. I

idoteM
requisiti di radioattivita© specifica devono essere soddi- gliere gli escreti e di evitare la contaminazione della
sfatti per tutto il periodo di validita© . superficie del corpo dell'animale.
Trascorso il periodo di tempo specificato dall'inie-
PUREZZA CHIMICA zione, gli animali sono sacrificati con un metodo

irotinetnoC
/ ilairetaM
appropriato e poi dissezionati. La determinazione
La purezza chimica viene valutata mediante la determi- della radioattivita© si effettua negli organi e tessuti sele-
nazione quantitativa delle singole impurezze chimiche zionati usando uno strumento adatto come descritto
specificate nella monografia. altrove in questa monografia. La distribuzione fisiolo-
gica e© poi calcolata ed espressa in termini di percen-
tuale della radioattivita© che si trova in ciascuno degli

ivittaeR
PUREZZA ENANTIOMERICA organi o dei tessuti selezionati. Per questo scopo la
Se del caso, deve essere verificata la purezza enantio- radioattivita© in un organo puo© essere correlata alla
merica. radioattivita© iniettata da calcolarsi come differenza
dalla quantita© di radioattivita© misurata nella siringa
prima e dopo l'iniezione. Per alcune preparazioni

itnemogrA
ilareneG
DISTRIBUZIONE FISIOLOGICA radiofarmaceutiche puo© essere appropriato determi-
Un saggio della distribuzione fisiologica e© prescritto, se nare il rapporto della radioattivita© in campioni pesati
necessario, per alcune preparazioni radiofarmaceuti- di tessuti selezionati (radioattivita© /massa).
che. La distribuzione della radioattivita© osservata in Perchë la preparazione soddisfi ai requisiti del saggio la

eifargonoM
determinati organi, tessuti o altri distretti del corpo di distribuzione della radioattivita© in almeno due dei tre

ilareneG
una specie animale appropriata (di solito ratti o topi) animali deve essere conforme a tutti i criteri specificati.
puo© dare un'indicazione efficace della distribuzione
attesa nell'uomo e quindi dell'idoneita© nei confronti
dello scopo previsto. STERILITAé

ehcituecamraF
La singola monografia descrive i dettagli per l'esecu-

emroF
zione del saggio ed i requisiti di distribuzione fisiolo- Le preparazioni radiofarmaceutiche destinate alla som-
gica a cui deve rispondere la preparazione radiofarma- ministrazione parenterale devono essere preparate in
ceutica. Una distribuzione fisiologica conforme ai condizioni tali da escludere ogni contaminazione batte-
requisiti assicurera© che la distribuzione dei composti rica e da garantirne la sterilita© . Il saggio per la sterilita©
radioattivi e© appropriata alla finalita© prevista nel- si effettua come descritto nel capitolo Sterilita© (2.6.1).
eiretaM
l'uomo e che la sua distribuzione nelle aree non bersa-

emirP
Particolari difficolta© possono presentarsi con alcune
glio sara© limitata. preparazioni radiofarmaceutiche a causa del breve
In generale, il saggio si effettua come descritto di periodo di dimezzamento dei radionuclidi, della riparti-
seguito. zione in lotti di piccole dimensioni e dei rischi di irradia-
ehcituecamraF

zione. Pertanto non e© sempre possibile attendere il risul-

inoizaraperP

Iniettare la preparazione in esame, per via endovenosa,

ehcificepS

a tre animali. In caso di necessita© nella monografia tato dei saggi di sterilita© prima di autorizzare il rilascio
sono specificati le specie, il sesso, il ceppo, il peso e/o e l'uso del lotto. In tali casi il metodo migliore per pro-
l'eta© degli animali. La soluzione iniettata e© la prepara- cedere e© rappresentato dal rilascio parametrico (5.1.1)
zione radiofarmaceutica per uso umano. Qualora del prodotto purchë sia fabbricato con un procedimento
ehcitapoemO

completamente convalidato. Nel caso di produzione

inoizaraperP

necessario, i prodotti sono ricostituiti secondo le istru-

zioni del produttore. In alcuni casi puo© essere necessa- asettica, il saggio della sterilita© deve essere effettuato
ria la diluizione immediatamente prima dell'iniezione. come un controllo di qualita© della produzione.
La somministrazione si effettua generalmente per via Se la dimensione di un lotto della preparazione radio-
endovenosa nella vena caudale. In casi particolari pos- farmaceutica e© limitata ad uno o pochi campioni (per
sono essere usate altre vene come la safena, la femorale, esempio una preparazione radiofarmaceutica terapeu-
ecidnI

la giugulare o le vene peniene. Gli animali che tica o con periodo di dimezzamento molto breve), non
mostrano evidenza di travaso dell'iniezione (osservato puo© essere applicato il campionamento del lotto per il

627
Prodotti aventi il rischio di trasmettere gli agenti delle encefalopatie spongiformi animali

saggio di sterilita© . Se la preparazione radiofarmaceu- ETICHETTE

tica e© sterilizzata mediante filtrazione e/o trattata aset- L'etichetta delle preparazioni radiofarmaceutiche sod-
ticamente (5.1.1) la convalida del processo e© critica. disfa alla pertinente legislazione nazionale ed Europea.
Se il periodo di dimezzamento del radionuclide e© bre- L'etichetta sul recipiente primario indica:
vissimo (per esempio meno di 20 min), la somministra-
zione della preparazione radiofarmaceutica al paziente ^ il nome della preparazione e/o il suo riferimento,
e© generalmente ``in linea'' con un sistema di produzione ^ il nome del produttore,
convalidato. ^ un numero di identificazione,
Per ragioni di sicurezza (alto livello di radioattivita© ) ^ per le preparazioni liquide e gassose: la radioatti-
non e© possibile usare per le preparazioni radiofarma- vita© totale nel recipiente, o la concentrazione
ceutiche, le quantita© richieste nel saggio di sterilita© radioattiva per millilitro alla data e, se necessario,
(2.6.1). Al fine di ridurre i rischi di irradiazione per il all'ora indicate, e il volume del liquido nel conte-
personale si deve utilizzare di preferenza il metodo di nitore,
filtrazione su membrana. ^ per le preparazioni solide (come le preparazioni
Nonostante le prescrizioni relative all'uso di sostanze liofilizzate): la radioattivita© totale alla data e, se
antimicrobiche nelle Preparazioni parenterali (0520) la necessario, all'ora indicate. La preparazione e© con-
loro aggiunta alle preparazioni radiofarmaceutiche in siderata come una preparazione liquida dopo la
flaconi multidose, a meno che non sia prescritto nella ricostituzione con la soluzione appropriata,
monografia, non e© obbligatoria.
^ per le capsule: la radioattivita© di ciascuna capsula
alla data e, se necessario, all'ora indicate, ed il
ENDOTOSSINE BATTERICHE - PIROGENI numero di capsule nel recipiente.
Per alcune preparazioni radiofarmaceutiche e© pre- L'etichetta puo© essere adattata in alcuni casi (per esem-
scritto un saggio per le endotossine batteriche. Il saggio pio per le preparazioni radiofarmaceutiche che conten-
e© effettuato come descritto nel metodo generale gono radionuclidi a vita breve).
(2.6.14), tenendo conto delle precauzioni necessarie per Inoltre, l'etichetta sulla confezione esterna indica:
limitare i rischi di irradiazione per il personale che ^ la via di somministrazione,
effettua il saggio. ^ il periodo di validita© o la data di scadenza,
Il limite per le endotossine batteriche e© indicato nella
specifica monografia. ^ il nome e la concentrazione degli agenti antimicro-
Quando la preparazione radiofarmaceutica per le sue bici aggiunti,
caratteristiche provoca un'interferenza, mediante inibi- ^ qualora appropriato, qualsiasi condizione partico-
zione o attivazione, e non e© possibile eliminare il fat- lare di conservazione.
tore/i interferente/i, il saggio dei pirogeni (2.6.8) puo©
essere richiesto specificamente.
Qualche volta e© difficile effettuare questi saggi prima
del rilascio del lotto per l'uso se il periodo di dimezza- 1438

mento del radionuclide presente nella preparazione e©

breve. In questo caso il saggio rappresenta un controllo
della qualita© della produzione.
PRODOTTI AVENTI IL RISCHIO

CONSERVAZIONE DI TRASMETTERE GLI AGENTI

Conservare in recipienti ermeticamente chiusi, in un DELLE ENCEFALOPATIE

posto sufficientemente schermato per evitare l'irradia- SPONGIFORMI ANIMALI

zione del personale da emissioni primarie o secondarie, Producta cum possibili transmissione vectorium
e che sia conforme alla normativa internazionale e enkephalopathiarum spongiformium animalium
nazionale per la conservazione delle sostanze radioat-
tive. Durante la conservazione i recipienti possono DEFINIZIONE
diventare scuri in seguito alle radiazioni emesse. Tale
imbrunimento non comporta necessariamente un'alte- I prodotti con il rischio di trasmettere gli agenti delle
razione della preparazione. encefalopatie spongiformi animali sono quelli che deri-
Le preparazioni radiofarmaceutiche devono essere uti- vano da tessuti o secrezioni di animali suscettibili alle
lizzate a breve scadenza e la fine del periodo di validita© encefalopatie spongiformi trasmissibili ad eccezione di
deve essere chiaramente indicato. quegli animali che sono suscettibili solo per via speri-

628
 Prodotti allergenici

inoizircserP
mentale. Questa monografia si applica a tutte le mente e/o mediante adsorbimento su differenti sup-

ilareneG
sostanze o preparazioni ottenute da questi animali ed porti (per esempio, idrossido di alluminio, fosfato di
a tutte le sostanze o preparazioni per le quali i prodotti calcio o tirosina).
ottenuti da tali animali sono stati utilizzati come Questa monografia non riguarda i prodotti chimici che
sostanze attive, eccipienti oppure sono stati utilizzati vengono impiegati unicamente per la diagnosi della der-
durante la produzione, per esempio come materiali

isilanA id
matite da contatto, i prodotti sintetizzati chimicamente,

idoteM
grezzi, materie prime o reattivi. gli allergeni derivati dalla tecnologia del DNA ricombi-
nante në riguarda i prodotti finiti prescritti individual-
PRODUZIONE mente per il singolo paziente. Non riguarda necessaria-
mente i prodotti allergenici per uso veterinario.

irotinetnoC
La produzione soddisfa al capitolo Minimizzazione del

/ ilairetaM
rischio di trasmettere gli agenti delle encefalopatie
spongiformi animali tramite prodotti medicinali (5.2.8). PRODUZIONE
I prodotti allergenici derivano da un'ampia varieta© di
materiali di partenza allergenici. Sono spesso preparati

ivittaeR
come soluzioni madre di prodotti, destinate ad essere
1063
ulteriormente diluite o concentrate prima dell'uso. Pos-
sono essere trattati per modificare o ridurre l'attivita©
allergenica o rimanere non modificati.

itnemogrA
ilareneG
PRODOTTI ALLERGENICI

Producta allergenica MATERIALI DI PARTENZA

I materiali di partenza per la preparazione dei prodotti
DEFINIZIONE allergenici sono per la maggior parte pollini, muffe,
acari, epiteli animali, veleni di imenotteri e alcuni

eifargonoM
I prodotti allergenici sono preparazioni farmaceutiche

ilareneG
derivate da estratti di materiali di partenza presenti in alimenti.
natura e contenenti allergeni, definiti come sostanze Sono identificati dalla loro origine, natura, metodo di
che inducono e/o provocano malattie allergiche (da raccolta o produzione e pretrattamento, e sono conser-
ipersensibilita© ). Le componenti allergeniche sono di vati in determinate condizioni che riducono al minimo

ehcituecamraF
solito di natura proteica. I prodotti allergenici vengono il deterioramento.

emroF
impiegati per la diagnosi in vivo o il trattamento delle La raccolta o la produzione, cos|© come il trattamento
malattie allergiche (da ipersensibilita© ) attribuite ai dei materiali di partenza sono tali da assicurare una
rispettivi allergeni. composizione qualitativa e quantitativa uniforme per
I prodotti allergenici sono disponibili come prodotti quanto possibile da un lotto all'altro.
finiti, come preparazioni madri in forma essiccata,

eiretaM
. Potenziali contaminanti chimici, quali pesticidi

emirP
soluzioni o sospensioni destinate ad essere ulterior- Pollini

mente concentrate o diluite prima dell'uso o come pre- e metalli pesanti, devono essere ridotti al minimo. I pol-
parazioni finali in soluzioni, sospensioni o liofilizzate. lini contengono non piu© dell'1 per cento di pollini estra-
I prodotti allergenici destinati alla somministrazione nei come determinato mediante esame microscopico. I
pollini contengono non piu© dell'1 per cento di spore di
ehcituecamraF

parenterale, bronchiale e congiuntivale sono sterili.

inoizaraperP

ehcificepS

Per uso diagnostico, i prodotti allergenici sono general- muffe come determinato mediante esame microscopico.
mente preparati come estratti non modificati in una . Contaminanti biologicamente attivi
soluzione al 50 per cento V/V di glicerolo per cutirea-
Acari e muffe

quali le micotossine nelle muffe devono essere ridotti

zioni (``skin-prick testing''). Per la diagnosi per via al minimo e ogni eventuale presenza deve essere moti-
ehcitapoemO
inoizaraperP

intradermica o per i saggi di provocazione per via vata. Deve essere posta attenzione a ridurre al minimo
nasale, oculare o bronchiale, adatte soluzioni diluite di la presenza di qualsiasi costituente allergenico dei ter-
prodotti allergenici possono essere preparate mediante reni usati per la coltivazione di acari e muffe come
diluizione di estratti acquosi o glicerinati, o mediante materiali di partenza. L'uso di terreni di coltura che
ricostituzione immediatamente prima dell'uso di contengono sostanze di origine umana o animale deve
estratti liofilizzati non modificati. essere motivato e, quando richiesti, tali terreni devono
ecidnI

Per immunoterapia, i prodotti allergenici possono essere essere trattati in modo da assicurare l'inattivazione o
o estratti non modificati o estratti modificati chimica- l'eliminazione di possibili agenti di malattie trasmissibili.

629
Prodotti allergenici

Epiteli animali . Gli epiteli animali devono essere otte- niche e della disponibilita© di reattivi adatti, cos|© come
nuti da animali sani selezionati per evitare possibili dell'impiego destinato, la IHRP puo© essere caratterizzata
agenti di malattie trasmissibili. a differenti livelli. La IHRP caratterizzata viene usata
come riferimento nel controllo di lotto degli estratti aller-
PROCESSO DI PRODUZIONE genici nativi o dei prodotti allergenici intermedi e, se
possibile, nel controllo di lotto delle preparazioni aller-
I prodotti allergenici sono generalmente ottenuti per geniche finali.
estrazione e possono essere purificati dai materiali di La Preparazione di Riferimento Interna (IHRP) viene
partenza utilizzando metodi appropriati per i quali sia caratterizzata mediante determinazione del contenuto
stata dimostrata la capacita© di conservare le proprieta©
biologiche delle componenti allergeniche. I prodotti inmetodi proteine e mediante un profilo proteico impiegando
pertinenti (quali isoelettrofocalizzazione, elet-
allergenici sono prodotti in condizioni studiate per troforesi in gel di poliacrilammide, immunoelettrofo-
ridurre al minimo la crescita microbica e la degrada- resi o profilo delle masse molecolari). Le componenti
zione enzimatica. allergeniche possono essere individuate mediante
Una procedura di purificazione, se del caso, e© condotta metodi appropriati (per esempio ``immunoblotting'' o
in modo da ridurre al minimo il contenuto di qualsiasi radio-immunoelettroforesi crociata). La caratterizza-
potenziale componente irritante a bassa massa moleco- zione delle componenti allergeniche puo© includere l'i-
lare e/o altre componenti non-allergeniche. dentificazione degli allergeni principali basata su tecni-
I prodotti allergenici possono contenere un appropriato che sierologiche o tecniche diverse impiegando sieri
conservante antimicrobico. La natura e la concentra- individuali o miscele di sieri da pazienti allergici, o anti-
zione del conservante antimicrobico devono essere corpi policlonali o monoclonali allergene-specifici.
giustificati. Quando sono disponibili sostanze di riferimento per i
Il processo di produzione comprende varie fasi. singoli allergeni puo© essere effettuata la determinazione
Gli estratti allergenici nativi sono ottenuti dopo separa- del loro contenuto. I singoli allergeni vengono identifi-
cati in accordo con la nomenclatura stabilita a livello
zione dal materiale di partenza estratto.
I sono ottenuti dall'ulte- internazionale, ogni volta che cio© sia possibile.
riore trattamento o modificazione degli estratti allerge- Ove possibile, l'attivita© biologica della IHRP viene
prodotti allergenici intermedi

determinata
nici nativi. La modificazione puo© essere realizzata cutanei, ed espressa mediante tecniche in vivo quali i saggi
mediante processi chimici (coniugazione chimica) o caso contrario, per alcuni in unita© di attivita© biologica. In
processi fisici (adsorbimento fisico su differenti sup- puo© essere determinata mediante estratti, l'attivita© biologica
porti, per esempio idrossido di alluminio, fosfato di cal- immunologici (per esempio, quelliappropriati
basati
dosaggi
sulla inibi-
cio o tirosina). Possono essere anche modificati zione della capacita© di legame di immunoglobuline
mediante inclusione in veicoli come liposomi o micro- specifiche) o mediante tecniche quantitative per unaE
sfere, o mediante l'aggiunta di altri agenti biologica- singola componente maggiore.
mente attivi per aumentare l'efficacia o la sicurezza. I
prodotti allergenici intermedi possono essere liofilizzati.
Le preparazioni allergeniche madri consistono di pro- IDENTIFICAZIONE
dotti in soluzione o sospensione che non saranno ulte-
riormente trattate e/o modificate, e sono pronte per la L'identita© viene confermata nella fase intermedia o
diluizione o la ripartizione nei contenitori definitivi. altra fase adatta mediante confronto con la IHRP
impiegando la determinazione del profilo proteico con
PREPARAZIONE DI RIFERIMENTO INTERNA
metodi appropriati (per esempio, isoelettrofocalizza-
zione, elettroforesi su gel di poliacrilammide con sodio
Una appropriata preparazione rappresentativa viene dodecilsolfato o immunoelettroforesi).
selezionata come Preparazione di Riferimento Interna
(``In-House Reference Preparation'', IHRP), caratteriz- SAGGI
zata e usata per verificare la riproducibilita© dei lotti.
La IHRP viene conservata in aliquote appropriate in Vari saggi biochimici ed immunologici sono stati svilup-
condizioni che ne assicurino la stabilita© , generalmente pati allo scopo di caratterizzare qualitativamente e quan-
liofilizzata. titativamente gli allergeni. Tuttavia, alcuni metodi, in
Caratterizzazione della Preparazione di Riferimentoparticolare quelli per la determinazione dell'attivita© aller-
Interna . A seconda della natura del materiale di partenza genica e del profilo allergenico, non sono al momento
allergenico, della conoscenza delle componenti allerge- applicabili a tutti i prodotti. Questo in quanto mancano

630
 Prodotti di fermentazione

inoizircserP
le conoscenze riguardanti le componenti allergeniche o . L'attivita© e© compresa tra il

ilareneG
Attivita© allergenica totale

perchë non sono disponibili i reattivi richiesti. Di conse- 50 per cento e il 200 per cento della quantita© dichiarata
guenza, i prodotti allergenici sono stati classificati in come valutato mediante inibizione della capacita© di
diverse categorie i cui saggi hanno requisiti specifici in legame di immunoglobuline E specifiche o un adatto
accordo con la qualita© e l'uso destinato. metodo equivalente in vitro.

isilanA id
Quando possibile i seguenti saggi vengono applicati alle . Dal 50 per cento al 200 per cento della

idoteM
preparazioni finali. In caso contrario, essi devono essere
Singoli allergeni

quantita© dichiarata, determinata mediante un metodo

svolti sugli estratti il piu© tardi possibile nel processo di adatto.
produzione, per esempio, nella fase immediatamente pre-
cedente la fase del processo (modificazione, diluizione,
CONSERVAZIONE

irotinetnoC
ecc.) che rende non piu© fattibile il saggio sulla prepara-

/ ilairetaM
zione finale. I prodotti allergenici adsorbiti non devono essere con-
Acqua (2.5.12). Non piu© del 5 per cento per i prodotti gelati.
liofilizzati.
Sterilita© (2.6.1). I prodotti allergenici destinati alla som- ETICHETTE
ministrazione per via parenterale, bronchiale e con-

ivittaeR
giuntivale soddisfano al saggio per la sterilita© . L'etichetta indica:
Contenuto in proteine . Dall'80 per cento al 120 per ^ l'attivita© biologica e/o il contenuto proteico e/o la
cento del contenuto dichiarato di un dato lotto. Se l'at- concentrazione di estrazione,
tivita© biologica puo© essere determinata allora il saggio ^ la via di somministrazione e l'uso destinato,

itnemogrA
ilareneG
per il contenuto proteico puo© essere omesso. ^ le condizioni di conservazione,
Profilo proteico . La composizione proteica determinata ^ se del caso, il nome e la quantita© del conservante
con un metodo appropriato corrisponde a quella della antimicrobico aggiunto,
IHRP.
^ per preparazioni liofilizzate:

eifargonoM
(2.6.9). I prodotti allergenici ottenuti

ilareneG
Tossicita© anormale

da muffe e destinati alla somministrazione parenterale ^ il nome, la composizione e il volume del liquido
(eccetto lo ``skin prick test'') soddisfano al saggio della da aggiungere per la ricostituzione,
tossicita© anormale per sierimmuni e vaccini per uso ^ il periodo di tempo entro il quale la preparazione
umano. deve essere usata dopo la ricostituzione,

ehcituecamraF
Possono essere applicati differenti saggi aggiuntivi, ^ se del caso, che la preparazione e© sterile,

emroF
alcuni con selettivita© crescente, in funzione del prodotto ^ se del caso, il nome e la quantita© dell'adsorbente.
allergenico in esame, ma in ogni caso, per prodotti aller-
genici destinati all'uso terapeutico, un saggio convalidato
in grado di misurare l'attivita© biologica (attivita© allerge-
nica totale, determinazione dei singoli allergeni o ogni

eiretaM
1468

emirP
altro saggio giustificato) deve essere applicato.
Alluminio (2.5.13). Non meno dell'80 per cento e non
piu© del 120 per cento della quantita© dichiarata ma in
ogni caso non piu© di 1,25 mg per dose umana, a meno
ehcituecamraF

PRODOTTI DI FERMENTAZIONE
inoizaraperP

che diversamente giustificato e autorizzato, quando

ehcificepS

l'idrossido di alluminio o il fosfato di alluminio Producta ab fermentatione

vengono usati come adsorbenti. Questa monografia si applica ai prodotti indiretti dell'e-
(2.5.14). Non meno dell'80 per cento e non piu© spressione genetica ottenuti mediante fermentazione.
Calcio

del 120 per cento della quantita© dichiarata quando il Non si applica:
ehcitapoemO
inoizaraperP

fosfato di calcio viene usato come adsorbente. ^ alle monografie della Farmacopea relative a vaccini
per uso umano o per uso veterinario;
Profilo antigenico . Gli antigeni vengono identificati per ^ ai prodotti ottenuti mediante linee cellulari continue
mezzo di tecniche adatte impiegando anticorpi animali di origine umana o animale;
antigene-specifici. ^ ai prodotti diretti dell'espressione genetica che si
Profilo allergenico . Le componenti allergeniche princi- ottengono dalla trascrizione e dalla traduzione degli
ecidnI

pali vengono identificate per mezzo di tecniche adatte acidi nucleici in proteine, con o senza modifica post-
impiegando anticorpi umani allergene-specifici. traduzione;

631
Prodotti di fermentazione

^ ai prodotti ottenuti per semi-sintesi a partire da un goli recipienti al fine della conservazione. Si devono
prodotto di fermentazione e ai prodotti ottenuti dimostrare la vitalita© e la produttivita© delle cellule nelle
mediante trasformazione biocatalitica; condizioni di conservazione selezionate e la loro ido-
^ ai terreni concentrati interi o ai prodotti grezzi di fer- neita© ad iniziare un processo di produzione soddisfa-
mentazione. cente dopo la conservazione stessa.
Questa monografia, da© i requisiti generali per lo sviluppo La propagazione della banca di cellule primarie puo©
e la produzione di prodotti di fermentazione. Questi requi- essere realizzata mediante un sistema di lotto di
siti possono non essere necessariamente completi per uno semenza utilizzando una banca di cellule di lavoro.
specifico caso; pertanto requisiti complementari o addi- La banca cellulare di lavoro e© una sospensione omoge-
zionali a quelli indicati possono essere imposti in una sin- nea o un liofilizzato di materiale cellulare ottenuto
gola monografia o dall'autorita© competente. dalla banca cellulare primaria, ripartita in volumi
uguali in singoli recipienti ai fini della conservazione
DEFINIZIONE (per es. in azoto liquido).
La produzione puo© essere realizzata attraverso coltura
Nell'ambito di questa monografia, i prodotti di fermen- per lotti o continua e puo© essere conclusa in condizioni
tazione sono definiti come sostanze farmaceutiche, definite.
attive o inattive, prodotte mediante fermentazione con- Tutti i recipienti in una banca cellulare sono conservati
trollata come prodotti indiretti dell'espressione gene- in condizioni uguali. Una volta prelevati dalla fase di
tica. Si tratta di metaboliti primari o secondari di conservazione i singoli flaconi, le singole fiale o supporti
microrganismi come batteri, lieviti, funghi, microalghe di colture non sono reintrodotti nella banca cellulare.
modificati e non modificati mediante le procedure tra-
dizionali o mediante la tecnologia del DNA ricombi-
nante (rDNA). Questi metaboliti comprendono vita- PROCESSI CHE UTILIZZANO CRESCITA
mine, aminoacidi, antibiotici, alcaloidi e polisaccaridi. PER STADI IN COLTURE
Essi possono essere ottenuti mediante processi di fer-
mentazione per lotto o continua, seguita da procedure Il contenuto di un recipiente della banca di cellule di
come l'estrazione, la concentrazione, la purificazione e lavoro e© utilizzato, se necessario dopo risospensione,
l'isolamento. per preparare un inoculo in un terreno di coltura
appropriato. Dopo un appropriato periodo di crescita,
le colture sono usate per iniziare il processo di fermen-
PRODUZIONE tazione, se necessario dopo una pre-coltura in un pre-
La produzione e© basata su un processo che e© stato con- fermentatore. Le condizioni da usare in ciascuna fase
validato e che si e© dimostrato appropriato. Il grado di del processo sono definite e devono essere realizzate in
ciascun ciclo produttivo.
convalida dipende dalla natura critica della fase di pro-
duzione considerata.
CONTROLLO DEI CAMBIAMENTI
CARATTERIZZAZIONE DEL MICRORGANI- Se il processo di produzione e© oggetto di una modifica
SMO PRODUTTORE che implica un cambiamento significativo del profilo
La storia del microrganismo utilizzato per la produ- delle impurezze del prodotto, le fasi critiche associate a
zione deve essere documentata. Il microrganismo deve questo cambiamento del profilo delle impurezze sono
essere caratterizzato in maniera appropriata. Questa oggetto di una riconvalida.
caratterizzazione puo© comprendere la determinazione Se il microrganismo utilizzato nella produzione subisce
del fenotipo del microrganismo, i metodi macroscopici una modifica che provoca un cambiamento significa-
e microscopici e i saggi biochimici e, se appropriata, la tivo del profilo delle impurezze del prodotto, le fasi cri-
determinazione del genotipo del microrganismo e i tiche del processo di produzione associato con questo
saggi di genetica molecolare. cambiamento, in particolare la procedura per la purifi-
cazione e l'isolamento, sono oggetto di una riconvalida.
PROCESSI CHE UTILIZZANO UN SISTEMA La riconvalida prevede la dimostrazione che le nuove
impurezze presenti nel prodotto in seguito alla modifica
DI LOTTO DI SEMENZA apportata siano adeguatamente controllate dalla pro-
La banca cellulare primaria e© una sospensione omoge- cedure di saggio. Se necessario sono introdotti dei saggi
nea o un liofilizzato delle cellule iniziali ripartite in sin- complementari o alternativi con dei limiti appropriati.

632
 Prodotti ottenuti con la tecnologia del DNA ricombinante

inoizircserP
Se la modifica del processo o del microrganismo pro- TRATTAMENTI SUCCESSIVI ALLA FER-

ilareneG
voca un aumento del livello di un'impurezza gia© pre- MENTAZIONE
sente, deve essere stabilita l'accettabilita© di questo
aumento. Alla fine della fermentazione, il microrganismo produt-
tore e© inattivato o eliminato. Ulteriori trattamenti sono
Quando una banca di cellule primarie e© sostituita, le applicati per ridurre a un livello accettabile i residui ori-

isilanA id
fasi critiche del processo di produzione devono essere

idoteM
ginati dal terreno di coltura e per assicurare che il pro-
riconvalidate per dimostrare che la qualita© e l'innocuita© dotto desiderato sia ottenuto con una qualita© costante.
del prodotto non sono influenzate negativamente. Si Il processo di purificazione impiegato (per esempio
deve prestare particolare attenzione ai possibili cam- trattamento con carbone attivato, ultrafiltrazione,
biamenti nel profilo delle impurezze del prodotto, se

irotinetnoC
estrazione con solvente) deve dimostrare di ridurre al

/ ilairetaM
nel processo e© stato introdotto un microrganismo minimo o di eliminare:
nuovo o modificato.
ö residui che derivano dal microrganismo produt-
tore, i terreni di coltura, i substrati e i precursori,
MATERIE PRIME ö i prodotti indesiderati della trasformazione dei
substrati e dei precursori.

ivittaeR
Le materie prime utilizzate nella fermentazione e/o nei
trattamenti successivi devono essere di qualita© appro- Se necessario sono effettuati saggi appropriati sia come
priata per l'uso previsto per esse. Le materie prime controlli durante il processo sia sul prodotto di fermen-
devono essere analizzate per assicurare che esse soddi- tazione isolato.
sfino alle specifiche scritte. I livelli di contaminazione

itnemogrA
ilareneG
dei terreni di coltura e dell'aria utilizzata per l'areazione
devono essere ridotti a un livello adeguatamente basso IDENTIFICAZIONE, SAGGI E DOSAGGIO
al fine di assicurare che se si verifica una contamina- I requisiti che il prodotto deve soddisfare durante il
zione microbiologica questa non influenzera© la qualita© , periodo di validita© , cos|© come i metodi di saggio speci-
la purezza e l'innocuita© del prodotto. L'aggiunta di

eifargonoM
fici, sono riportati nella singola monografia.

ilareneG
componenti come elementi nutritivi, precursori e sub-
strati durante la fermentazione deve essere effettuata
in maniera asettica. CONSERVAZIONE
Vedere le specifiche monografie.

ehcituecamraF
CONTROLLI DURANTE IL PROCESSO

emroF
I controlli durante il processo sono effettuati per assicu- ETICHETTE
rare la consistenza delle condizioni durante la fermen- Vedere le specifiche monografie.
tazione e i successivi trattamenti e la consistenza della
qualita© del prodotto isolato. Si deve verificare con par-

eiretaM

emirP
ticolare attenzione che qualsiasi contaminazione micro-
bica che puo© influenzare negativamente la qualita© , la
purezza e l'innocuita© del prodotto sia rivelata mediante 0784

i controlli che vengono effettuati.

ehcituecamraF
inoizaraperP

Le condizioni di produzione possono essere controllate,

ehcificepS

come appropriato, mediante idonee procedure per

esempio per controllare e verificare: PRODOTTI OTTENUTI CON LA
TECNOLOGIA DEL DNA RICOMBINANTE
^ temperatura,
Producta ab ADN recombinante
ehcitapoemO
inoizaraperP

^ pH,
^ entita© di areazione, Questa monografia da© i requisiti generali per lo sviluppo e
la produzione di prodotti ottenuti con la tecnologia del
^ entita© di agitazione, DNA ricombinante (rDNA). Questi requisiti possono
^ pressione, non essere necessariamente completi per uno specifico
caso; pertanto requisiti complementari o addizionali a
ecidnI

e per controllare la concentrazione del prodotto quelli indicati possono essere imposti in una singola
richiesto. monografia o dall'autorita© competente. La monografia

633
Prodotti ottenuti con la tecnologia del DNA ricombinante

non si applica agli organismi viventi modificati da utiliz- e ai livelli uguali o superiori al normale livello di
zare direttamente sull'uomo o sull'animale come, per raddoppiamento della popolazione per una fer-
esempio, i vaccini vivi. mentazione completa. In alcuni sistemi, per esem-
pio, quando copie multiple del gene sono inserite
DEFINIZIONE nel genoma di una linea cellulare continua, puo©
non essere appropriato analizzare la sequenza del
I prodotti della tecnologia del rDNA sono ottenuti gene clonato a livello della produzione. In questi
mediante una modificazione genetica nella quale il casi, puo© essere utile procedere con l'analisi
DNA che codifica per il prodotto richiesto e© introdotto, mediante ``Southern blot'' del DNA cellulare totale
di solito utilizzando un plasmide o un vettore virale, in o analizzare la sequenza dell'RNA messaggero
un microrganismo o in una linea cellulare idonea, dove (mRNA), prestando un'attenzione particolare alla
questo DNA e© espresso e tradotto in proteina. Il caratterizzazione della proteina espressa;
prodotto desiderato e© successivamente recuperato iii. costruzione, caratteristiche genetiche e struttura
mediante estrazione e purificazione. La cellula o il del vettore di espressione nella sua totalita© .
microrganismo che non contengono ancora il vettore
sono definiti come cellula ospite e l'associazione stabile Caratterizzazione del sistema ospite-vettore, compreso:
dei due, usata nel processo di produzione, e© definita
sistema ospite-vettore. i. meccanismo di trasferimento del vettore nelle cel-
lule ospiti;
PRODUZIONE ii. numero di copie, stato fisico e stabilita© del vettore
all'interno della cellula ospite;
La produzione e© basata su un sistema di lotto di semenza iii. mezzi utilizzati per promuovere e controllare
convalidato che utilizza una combinazione ospite-vet- l'espressione.
tore, dimostratasi idonea ed approvata dall'Autorita©
competente. Il sistema di lotto di semenza si avvale di
una banca cellulare primaria e di una banca cellulare di SISTEMA DI BANCA CELLULARE
lavoro, ottenute dal lotto di semenza primario della
combinazione ospite-vettore. Si deve stabilire una La banca cellulare primaria e© una sospensione omo-
descrizione dettagliata delle fasi di coltura, estrazione e genea delle cellule originali gia© trasformate per intro-
purificazione e la definizione del lotto di produzione. duzione del vettore di espressione contenente il gene
La determinazione dell'idoneita© della combinazione desiderato,
singoli per
ripartita in volumi uguali in recipienti
la conservazione (per esempio in azoto
ospite-vettore e la convalida del sistema di lotto di liquido). In alcuni casi, puo© essere necessario stabilire
semenza comprendono i seguenti elementi. banche cellulari primarie separate per il vettore di
espressione e per le cellule ospiti.
CLONAGGIO ED ESPRESSIONE La banca cellulare di lavoro e© una sospensione omoge-
L'idoneita© del sistema ospite-vettore, in particolare per nea del materiale cellulare derivato dalla o dalle banche
quello che riguarda la purezza microbiologica, si dimo- cellulari primarie per un numero limitato di passaggi,
stra mediante i punti seguenti: ripartita in volumi uguali in recipienti singoli per la
Caratterizzazione della cellula ospite per quanto riguarda conservazione (per esempio in azoto liquido).
l'origine, il fenotipo, il genotipo, e dei terreni di coltura In entrambe queste banche cellulari, tutti i recipienti
cellulare. sono trattati in maniera identica durante la conserva-
Documentazione della strategia di clonaggio del gene e zione ed una volta usciti dal luogo di conservazione essi
caratterizzazione del vettore ricombinante, incluso: non sono reintrodotti nella riserva cellulare.
i. origine e caratterizzazione del gene; La banca cellulare puo© essere utilizzata per la produ-
ii. analisi della sequenza nucleotidica del gene clonato zione con un numero definito di passaggi oppure per la
e delle zone di controllo contigue del vettore di produzione in coltura continua.
espressione. Le sequenze clonate sono limitate al
minimo e tutte le principali sequenze espresse sono Produzione con un numero definito di passaggi
chiaramente identificate e confermate a livello Questo metodo di coltura e© definito da un numero limi-
dell'RNA. tato di passaggi o di raddoppi di popolazione che non
La sequenza del DNA del gene clonato e© confer- deve essere superato nel corso della produzione. Si deve
mata generalmente allo stadio di lotto di semenza indicare il numero massimo di raddoppi del numero di

634
 Prodotti ottenuti con la tecnologia del DNA ricombinante

inoizircserP
cellule o di livelli di passaggio durante i quali il pro-

ilareneG
CONVALIDA DEL PROCESSO DI PRODUZIONE
cesso di produzione abitualmente soddisfa ai criteri
descritti piu© avanti. Estrazione e purificazione

Si deve convalidare per ciascuna fase della procedura di

Produzione in coltura continua estrazione e purificazione la capacita© di eliminare e/o
Con questo metodo di coltura il numero di passaggi o inattivare le sostanze contaminanti derivate dalla cel-

isilanA id
idoteM
di raddoppi di popolazione non e© limitato all'inizio lula ospite o dal terreno di coltura, in particolare parti-
della produzione. I criteri della raccolta e della fine celle virali, proteine, acidi nucleici e sostanze aggiunte.
della produzione devono essere definiti dal produttore. Gli studi di convalida sono effettuati per dimostrare
Eé necessario esercitare un controllo per tutta la durata che il processo di produzione soddisfa abitualmente ai
della coltura; la frequenza richiesta e il tipo di controlli criteri seguenti:

irotinetnoC
/ ilairetaM
necessari dipendono dalla natura del sistema di produ- ^ esclusione di agenti estranei dal prodotto. Con-
zione e del prodotto. viene effettuare, per esempio, degli studi sui virus
Eé necessario disporre di informazioni sull'integrita© che possiedono le caratteristiche chimico-fisiche
molecolare del gene espresso e sulle caratteristiche appropriate e stabilire il potere di capacita© di ridu-
fenotipiche e genotipiche della cellula ospite dopo la zione di questi contaminanti di ciascuna fase prin-

ivittaeR
coltivazione a lungo termine. L'accettazione delle rac- cipale della purificazione;
colte per il successivo trattamento deve essere chiara- ^ eliminazione adeguata dal prodotto dei contami-
mente vincolata al piano di controllo adottato ed e© nanti derivati dal vettore, dalla cellula ospite, dal
richiesta una definizione chiara del ``lotto'' prodotto terreno di coltura e dai reattivi. Il potere di ridu-
destinato al successivo trattamento. zione nei riguardi del DNA deve essere stabilito

itnemogrA
ilareneG
con il metodo della contaminazione intenzionale.
CONVALIDA DELLE BANCHE CELLULARI La riduzione delle proteine di origine animale puo©
essere determinata mediante metodi immunochi-
La convalida delle banche cellulari comprende i punti mici;
seguenti: ^ mantenimento, nei limiti stabiliti, della resa di pro-

eifargonoM

ilareneG
i. stabilita© , dimostrata misurando la vitalita© cellulare duzione della coltura;
e la conservazione del vettore nelle cellule; ^ stabilita© adeguata di ciascun intermedio di pro-
ii. identita© delle cellule mediante i caratteri fenotipici; duzione e/o di fabbricazione, quando durante
iii. se del caso, la dimostrazione che le banche cellulari il processo e© prevista una fase di conservazione

ehcituecamraF
sono esenti da agenti estranei potenzialmente intermedia.

emroF
oncogeni o infettivi (virus, batteri, funghi o mico- Caratterizzazione della sostanza

plasmi). Un'attenzione particolare deve essere pre- L'identita© , la purezza, l'attivita© biologica e la stabilita©
stata ai virus che possono comunemente contami- della soluzione madre finale di prodotto sono inizial-
nare le specie dalle quali deriva la linea cellulare. mente stabilite mediante la realizzazione di un numero
Alcune linee cellulari contengono dei virus endo- rilevante di saggi chimici, fisici, immunochimici e bio-
eiretaM

emirP
geni, per esempio retrovirus, che possono non logici. Prima dell'immissione in commercio del pro-
essere rapidamente eliminati. Si devono effettuare dotto, il fabbricante sottopone a saggio ciascun lotto
dei saggi per evidenziare l'espressione di questi per verificare l'identita© e la purezza ed effettua un
organismi, nelle differenti condizioni note come dosaggio appropriato.
ehcituecamraF
inoizaraperP

favorevoli a provocare la loro induzione;

ehcificepS

iv. per le cellule di mammiferi, disponibilita© di infor-

Riproducibilita© della produzione

mazioni dettagliate sul potenziale oncogeno della Effettuare saggi appropriati per dimostrare la riprodu-
banca cellulare. cibilita© della produzione e della purificazione. Questi
saggi comprendono, in particolare, saggi di caratteriz-
zazione, controlli in corso di produzione e saggi sui pro-
ehcitapoemO
inoizaraperP

CONTROLLO DELLE CELLULE dotti finiti, come per esempio:

L'origine, la forma, la conservazione, l'uso e la stabilita© COMPOSIZIONE IN AMMINOACIDI.
alla frequenza di utilizzazione prevista, devono essere Analisi parziale della sequenza degli amminoacidi. I dati
documentati in modo esauriente per tutte le banche cel- della sequenza permettono di confermare che l'estre-
lulari nelle condizioni di conservazione e di recupero mita© N-terminale della proteina e© stata correttamente
ecidnI

della coltura. Le nuove banche cellulari devono essere prodotta e che gli amminoacidi C-terminali non sono
completamente convalidate. scomparsi.

635
Prodotti ottenuti con la tecnologia del DNA ricombinante

Mappa peptidica. La mappa peptidica per segmenta- geni proteici derivati dalla cellula ospite. Poichë que-
zione chimica o enzimatica del prodotto proteico e l'a- ste preparazioni sono miscele di proteine non ben
nalisi con un metodo appropriato, come l'elettroforesi definite, si prepara e si calibra una preparazione di
bidimensionale su gel, l'elettroforesi capillare o la cro- riferimento mediante un appropriato metodo di
matografia liquida, deve dimostrare che non vi sono determinazione delle proteine. Questa preparazione
differenze significative tra la proteina in esame e la pre- e© conservata in modo idoneo ad un uso per un tempo
parazione di riferimento. La mappa peptidica puo© prolungato.
essere anche usata per dimostrare che i legami disolfuro ^ Antisieri. Gli antisieri contengono anticorpi ad alta
sono corretti. avidita© di legame, capaci di riconoscere il maggior
DETERMINAZIONEDELLAMASSAMOLECOLARE. numero di proteine differenti nella miscela di anti-
geni e che non danno reazione crociata con il pro-
Conservazione del gene clonato. La quantita© minima in dotto.
percentuale delle cellule contenenti il vettore o il gene ^ DNA derivato dalla cellula ospite e dal vettore. Il DNA
clonato dopo coltura e© approvata dall'Autorita© compe- residuo si rivela mediante analisi per ibridazione,
tente. usando tecniche analitiche indipendenti dalla
Proteine totali. Determinare la resa in proteine. sequenza e di appropriata sensibilita© o mediante altre
Purezza chimica. La purezza del prodotto proteico e© tecniche analitiche di sensibilita© adeguata.
analizzata per confronto con una preparazione di riferi- .
mento mediante un metodo appropriato come la cro- Analisi per ibridazione

matografia liquida, l'elettroforesi capillare o l'elettrofo- Il DNA del campione in esame e© denaturato in modo
resi su gel di poliacrilammide e sodio dodecilsolfato. da ottenere un DNA a singola elica, immobilizzato su
Proteine derivate dalla cellula ospite. Le proteine deri- nitrocellulosa o un altro filtro appropriato e ibridato
vate dalla cellula ospite sono rivelate mediante metodi con del DNA marcato (sonde di DNA) preparato a par-
immunochimici usando, per esempio, antisieri policlo- tire dal sistema ospite-vettore usato nella fabbricazione.
nali diretti contro i componenti proteici del sistema Gli approcci sperimentali possibili sono numerosi, ma
ospite-vettore utilizzato per la fabbricazione del pro- i metodi per misurare il DNA del sistema ospite-vettore
dotto, salvo prescrizione diversa. Si possono utilizzare soddisfano i criteri seguenti:
le procedure seguenti: dosaggi per competizione in fase ^ Sonde di DNA. Il DNA purificato e© ottenuto dal
liquida (per esempio dosaggio immunoradiologico), sistema ospite-vettore coltivato nelle stesse condi-
dosaggi per legame diretto in fase liquida e dosaggi per zioni di quelle utilizzate nel processo di fabbrica-
legame diretto usando antigeni immobilizzati su mem- zione. Il DNA cromosomico dell'ospite e il DNA del
brane di nitrocellulosa o simili (per esempio dosaggio vettore possono essere preparati separatamente e
per ``dot-blot'' immunologico, ``Western blots''). I usati come sonde.
requisiti generali per la convalida delle procedure dei ^ Taratura e standardizzazione. Dati quantitativi sono
dosaggi immunologici sono riportati nel capitolo ottenuti per confronto con le risposte ottenute
Metodi immunochimici (2.7.1). Inoltre i metodi di dosag- usando le preparazioni di riferimento. Le sonde del
gio immunologico dei contaminanti associati alle cel- DNA cromosomico e le sonde del DNA del vettore
lule ospiti soddisfano ai criteri seguenti: sono usate rispettivamente con delle preparazioni di
^ Preparazioni di antigeni. Si producono antisieri riferimento di DNA cromosomico e di DNA del vet-
diretti contro una preparazione di antigeni derivante tore. Le preparazioni di riferimento sono tarate
dall'organismo ospite, nel quale e© stato inserito il vet- mediante misurazioni spettroscopiche e conservate
tore usato nel processo di fabbricazione, mancante in modo idoneo ad un uso per un tempo prolungato.
del gene specifico che codifica per il prodotto. Questa ^ Condizioni di ibridazione. Le condizioni di ibrida-
cellula ospite e© coltivata e le proteine si estraggono zione sono tali da assicurare un'ibridazione specifica
usando condizioni identiche a quelle usate per la col- tra le sonde e le preparazioni di riferimento del
tura e la estrazione durante il processo di fabbrica- DNA, e le sostanze medicamentose non devono
zione. Eé inoltre possibile usare, per la preparazione interferire con l'ibridazione alla concentrazione
degli antisieri, preparazioni di antigeni parzialmente usata.
purificate mediante applicazione di alcune fasi della
purificazione del processo di fabbricazione. Tecniche indipendenti dalla sequenza

^ Taratura e standardizzazione. Dati quantitativi si Le procedure appropriate comprendono: la rivelazione

ottengono per confronto con le curve dose-risposta dei residui di citosina solfonata nel DNA a singola elica
ricavate usando preparazioni di riferimento di anti- (con immobilizzazione del DNA su filtro, derivatizza-

636
 Sierimmuni per uso umano

inoizircserP
zione in situ delle citosine, poi rivelazione e analisi essere trattati con penicillina. Le globuline contenenti

ilareneG
quantitativa usando un anticorpo diretto nei confronti le sostanze immunizzanti possono essere ottenute dal
del gruppo solfonato); la rivelazione del DNA a singola siero mediante trattamento enzimatico e precipitazione
elica usando un frammento di DNA a singola elica frazionata o mediante altri metodi chimici o fisici.
legato ad una proteina e ad un anticorpo per questa Un conservante antimicrobico idoneo puo© essere
proteina. Në l'una në l'altra procedura richiede l'uso di

isilanA id
aggiunto ed e© invariabilmente aggiunto se le prepara-

idoteM
DNA specifico dell'ospite o del vettore come dosaggio zioni sono distribuite in contenitori multidose. I pro-
di riferimento. Tuttavia il metodo usato deve essere dotti finali sterili sono distribuiti asetticamente in reci-
convalidato per assicurare il parallelismo con il DNA pienti sterili che sono poi chiusi in modo da escludere
di riferimento usato, la linearita© della risposta e la non qualsiasi contaminazione.

irotinetnoC
interferenza della sostanza medicamentosa e degli ecci-

/ ilairetaM
pienti della formulazione alle diluizioni usate nel I prodotti possono essere liofilizzati mediante una pro-
dosaggio. cedura che riduce il contenuto di acqua del prodotto
finito a non piu© dell'1,0 per cento m/m.
IDENTIFICAZIONE, SAGGI E DOSAGGIO I sierimmuni preparati mediante trattamento enzima-
tico e precipitazione frazionata hanno la massima sta-

ivittaeR
I requisiti che il prodotto finale (materia prima o forma bilita© a pH circa 6. Il metodo di preparazione dei sie-
farmaceutica) deve soddisfare durante il periodo di rimmuni e© tale che i prodotti perdono non piu© del
validita© , come pure i saggi specifici, sono indicati nelle 5 per cento della loro attivita© per anno a questo pH
singole monografie. quando sono conservati a 20 ‘C e non piu© del 20 per
cento per anno quando sono conservati a 37 ‘C.

itnemogrA
ilareneG
CONSERVAZIONE Il metodo di produzione e© convalidato per dimostrare
Vedere le singole monografie. che il prodotto, se saggiato, soddisferebbe al saggio per
la tossicita© anormale per sierimmuni e vaccini per uso
umano (2.6.9).

eifargonoM
ETICHETTE

ilareneG
Vedere le singole monografie. CARATTERI
I sierimmuni sono liquidi, quasi incolori o di un giallo

ehcituecamraF
molto debole e privi di torbidita© . I sierimmuni liofiliz-
zati sono costituiti da polveri o agglomerati bianchi o

emroF
0084

giallo pallidi, molto solubili in acqua con la quale for-

mano soluzioni incolori o giallo pallide che hanno gli
stessi caratteri delle corrispondenti preparazioni
SIERIMMUNI PER USO UMANO liquide.

eiretaM

emirP
Immunosera ad usum humanum
SAGGI
DEFINIZIONE
I sierimmuni per uso umano sono preparazioni purifi- Iallerequisiti seguenti si riferiscono ai sierimmuni liquidi e
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

cate contenenti immunoglobuline ottenute dal siero di preparazioni liofilizzate ricostituite.

animali immunizzati. Le immunoglobuline hanno il
potere di neutralizzare specificamente i veleni o le tos- 6,0 e(2.2.3).
pH

7,0.
Il pH della preparazione e© compreso tra
sine formate da batteri o di combinarsi specificamente
ehcitapoemO
inoizaraperP

con batteri, virus o altri antigeni. . Quando sono esaminati mediante

Proteine estranee

saggi di precipitazione con antisieri specifici, i sierim-

PRODUZIONE muni devono dimostrare di contenere esclusivamente
delle proteine della specie animale dichiarata.
I sierimmuni sono ottenuti da animali sani immunizzati
mediante inoculazione di appropriate tossine o tos- . Non piu© di 170 g/l. Effettuare la deter-
Proteine totali
ecidnI

soidi, veleni, sospensioni di microrganismi o altri anti- minazione dell'azoto dopo mineralizzazione con acido
geni. Durante l'immunizzazione gli animali non devono solforico (2.5.9) e moltiplicare il risultato per 6,25.

637
Sierimmuni per uso veterinario

Albumine . Salvo indicazione diversa nella monografia,

l'esame per elettroforesi deve rivelare solo tracce di 0030

albumine.
Fenolo (2.5.15). Quando i sierimmuni contengono
fenolo, la concentrazione non e© superiore a 2,5 g/l. SIERIMMUNI PER USO VETERINARIO

Sterilita© (2.6.1). I sierimmuni soddisfano al saggio di Immunosera ad usum veterinarium

sterilita© .
DEFINIZIONE
ATTIVITAé BIOLOGICA I sierimmuni per uso veterinario sono preparazioni
Effettuare un dosaggio biologico come indicato nella contenenti immunoglobuline che hanno il potere di
monografia ed esprimere il risultato in Unita© Interna- neutralizzare specificamente le tossine formate o di
zionali per millilitro, se del caso. combinarsi specificamente con l'antigene usato per la
loro preparazione. Essi possono essere grezzi o purifi-
CONSERVAZIONE cati.
Conservare ad una temperatura di 5 þ 3 ‘C. I sierim- PRODUZIONE
muni liquidi non devono essere congelati.
Data di scadenza. La data di scadenza e© calcolata dall'i- I sierimmuni sono ottenuti dal siero di animali sani
nizio del saggio per l'Attivita© biologica. Si applica ai immunizzati mediante inoculazione di tossine o tos-
sierimmuni conservati nelle condizioni prescritte. soidi, veleni di serpenti, virus, sospensioni di microrga-
nismi o altri antigeni idonei. Se una penicillina e© usata
durante l'immunizzazione, gli animali non devono
ETICHETTE essere salassati fino ad 8 giorni dopo l'ultima sommini-
L'etichetta indica: strazione. Uno o piu© conservanti antimicrobici idonei
possono essere aggiunti e essi sono invariabilmente
^ il nome della preparazione, aggiunti se le preparazioni sono distribuite in recipienti
^ il numero di Unita© Internazionali per millilitro, se del multidose.
caso, Per i sierimmuni purificati, le globuline contenenti le
^ il numero di lotto o altro riferimento, sostanze immunizzanti possono essere ottenute dal sie-
^ la via di somministrazione, rimmune grezzo mediante trattamento enzimatico e
^ le condizioni di conservazione, precipitazione frazionata o mediante altri metodi chi-
^ la data di scadenza, ad eccezione dei recipienti da mici pH
o fisici. I sierimmuni purificati sono stabili circa a
6.
1 ml o meno che sono confezionati singolarmente,
in cui la data di scadenza puo© essere omessa dal-
l'etichetta del recipiente purchë la confezione e CARATTERI
l'etichetta della confezione indichino che il recipiente
deve essere mantenuto nella confezione fino al I sierimmuni sono liquidi con un colore diverso a
momento dell'uso, seconda del metodo di preparazione. Essi sono distri-
^ il nome delle specie animali di origine, buiti asetticamente in recipienti sterili che sono poi
^ il nome e la quantita© di qualsiasi conservante antimi- chiusi. Quando essi sono liofilizzati sono costituiti da
agglomerati o polveri solubili in acqua.
crobico o altra sostanza aggiunta al sierimmune,
^ la dichiarazione di qualsiasi sostanza che puo©
causare una qualsiasi reazione avversa ed ogni SAGGI
controindicazione all'uso del prodotto, I requisiti seguenti si riferiscono ai sierimmuni liquidi e
^ per i sierimmuni liofilizzati: alle preparazioni liofilizzate ricostituite.
^ il nome o la composizione e il volume del liquido (2.2.3).Il pH dei sierimmuni grezzi e© compreso tra
da aggiungere per la ricostituzione,
pH

7,0 e 8,0. Il pH dei sierimmuni purificati e© compreso

^ che il sierimmune deve essere utilizzato immedia- tra 6,0 e 7,0.
tamente dopo la ricostituzione, Proteine estranee . Quando sono esaminati mediante
^ il nome e l'indirizzo del produttore. saggi di precipitazione con antisieri specifici, i sierim-

638
 Sostanze per uso farmaceutico

inoizircserP
muni devono dimostrare di essere costituiti esclusiva- ^ le condizioni di conservazione,

ilareneG
mente delle proteine delle specie animali usate per la ^ la data di scadenza,
preparazione. ^ le specie animali alle quali il sierimmune e© desti-
Albumine . I sierimmuni purificati soddisfano al saggio nato,
per le albumine. Salvo indicazione diversa nella mono- ^ il nome delle specie animali di origine,

isilanA id
idoteM
grafia, l'esame per elettroforesi dei sierimmuni purifi- ^ il nome e la quantita© di qualsiasi conservante anti-
cati deve rivelare solo tracce di albumine. microbico o altra sostanza aggiunta al sierimmune,
Proteine totali . Non piu© di 170 g/l. Effettuare la deter- ^ la dichiarazione di qualsiasi sostanza che puo© cau-
minazione dell'azoto dopo mineralizzazione con acido sare una reazione avversa,

irotinetnoC
solforico (2.5.9) e moltiplicare il risultato per 6,25.

/ ilairetaM
^ qualsiasi controindicazione all'uso del prodotto,
Fenolo (2.5.15). Quando i sierimmuni contengono ^ per i sierimmuni liofilizzati:
fenolo, la concentrazione non e© superiore a 5 g/l. ^ il nome o la composizione e il volume del liquido
(2.6.1). I sierimmuni soddisfano al saggio di da aggiungere per la ricostituzione,
^ che il sierimmune deve essere utilizzato imme-
Sterilita©

sterilita© . Quando il volume di liquido nel recipiente e©

ivittaeR
superiore a 100 ml, e© usato, se possibile, il metodo della diatamente dopo la ricostituzione,
filtrazione su membrana. Se e© usato questo metodo, ^ le dosi raccomandate per le diverse specie,
incubare i terreni di coltura per non meno di 14 giorni. ^ il nome e l'indirizzo del produttore.
Quando il metodo della filtrazione su membrana non e©
applicabile, puo© essere usato il metodo di inoculazione

itnemogrA
ilareneG
diretta.
Quando il volume di liquido in ciascun contenitore e© 2034

uguale o superiore a 20 ml, il volume minimo da usare

per ciascun terreno di coltura e© il 10 per cento dei conte-
nuti o 5 ml, quale dei due e© inferiore.

eifargonoM

ilareneG
Il numero appropriato di unita© da saggiare (2.6.1) e© l'1per SOSTANZE PER USO FARMACEUTICO
cento del lotto con un minimo di 4 ed un massimo di 10. Corpora ad usum pharmaceuticum
ATTIVITAé BIOLOGICA I requisiti in questa monografia sono da considerare

ehcituecamraF
insieme con le specifiche monografie sulle sostanze pre-

emroF
Effettuare il dosaggio biologico descritto nella mono- senti nella Farmacopea. L'autorita© competente puo© deci-
grafia ed esprimere il risultato in Unita© Internazionali dere di applicare la monografia ad altre sostanze.
per millilitro quando esse esistono.
DEFINIZIONE
CONSERVAZIONE
eiretaM

emirP
Le sostanze per uso farmaceutico sono sostanze organi-
Conservare protetto dalla luce, ad una temperatura che o inorganiche, utilizzate come sostanze attive o
di 5 3 ‘C. I sierimmuni liquidi non devono essere
6
eccipienti per la produzione di prodotti medicinali per
congelati. uso umano o veterinario. Possono essere ottenute da
ehcituecamraF
inoizaraperP

Data di scadenza. La data di scadenza e© calcolata dal-

fonti naturali o prodotte per estrazione da materie
ehcificepS

l'inizio del saggio per l'Attivita© biologica. Si applica ai

prime, per fermentazione o per sintesi.
sierimmuni conservati nelle condizioni prescritte. Le sostanze per uso farmaceutico possono essere utiliz-
zate come tali o in una formulazione, come materie
ETICHETTE prime per la preparazione di prodotti medicinali. In
ehcitapoemO
inoizaraperP

funzione del tipo di formulazione alcune sostanze pos-

L'etichetta indica: sono essere usate sia come sostanze attive che come
^ il nome della preparazione, eccipienti. Le sostanze solide possono essere compat-
^ l'indicazione ``per uso veterinario'', tate, rivestite, granulate, polverizzate fino ad una certa
finezza o possono essere sottoposte ad altri trattamenti.
^ se del caso, il numero di Unita© Internazionali per Il trattamento che prevede l'aggiunta di eccipienti e© per-
millilitro,
ecidnI

messo solo se specificamente indicato nella Definizione

^ il numero di lotto o altro riferimento, della singola monografia.

639
Sostanze per uso farmaceutico

Sostanza per uso farmaceutico di qualita© speciale. Salvo Le sostanze polverizzate possono essere trattate in
indicazione diversa o limitazione specifica nelle singole modo da ottenere un certo grado di finezza (2.9.12).
monografie, una sostanza per uso farmaceutico e© desti- Le sostanze compattate sono trattate in modo da
nata all'uso umano e veterinario, ed e© di qualita© appro- aumentare la dimensione delle particelle o da ottenere
priata per la produzione di tutte le forme farmaceutiche particelle di una forma specifica e/o da ottenere una
nelle quali puo© essere utilizzata. sostanza con una maggiore densita© .
Polimorfismo. Le singole monografie generalmente non Le sostanze attive rivestite consistono di particelle della
specificano forme cristalline o amorfe, a meno che non sostanza attiva rivestite con uno o piu© eccipienti appro-
sia influenzata la biodisponibilita© . Tutte le forme di priati.
una sostanza per uso farmaceutico soddisfano ai requi-
siti della monografia, se non diversamente indicato. Le sostanze attive granulate sono particelle con una
dimensione e/o una forma specifica prodotte a partire
PRODUZIONE dalla sostanza attiva mediante granulazione diretta
oppure con l'uso di uno o piu© eccipienti appropriati.
Le sostanze per uso farmaceutico sono prodotte Se le sostanze sono trattate con eccipienti, questi soddi-
mediante procedure destinate ad assicurare una qualita© sfano ai requisiti della loro monografia o, qualora non
riproducibile, e soddisfano ai requisiti della singola esista tale monografia, alle specifiche approvate.
monografia o alle specifiche approvate.
Che sia o no specificamente indicato nella singola
monografia che la sostanza per uso farmaceutico: CARATTERI
^ e© una proteina ricombinante o un'altra sostanza Le indicazioni che figurano nei Caratteri (per es. indi-
ottenuta come un prodotto diretto del gene in cazioni circa la solubilita© o una temperatura di decom-
seguito a modificazione genetica, se del caso, la posizione) non devono essere interpretate in senso
sostanza soddisfa anche ai requisiti della monogra- stretto, e non costituiscono specifiche. Esse sono ripor-
fia generale sui Prodotti ottenuti con la tecnologia tate come informazione.
del DNA ricombinante (0784);
^ e© ottenuta da animali suscettibili alle encefalopatie questoQuando una sostanza puo© presentare polimorfismo,
puo© essere segnalato nei Caratteri al fine di atti-
spongiformi trasmissibili diverse dall'infezione spe- rare l'attenzione
rimentale, se del caso, la sostanza soddisfa anche stica di cui si devedell'utilizzatore su questa caratteri-
ai requisiti della monografia generale sui Prodotti di una preparazione.tener conto durante la formulazione
aventi il rischio di trasmettere gli agenti delle encefa-
lopatie spongiformi animali (1483);
^ e© una sostanza ottenuta mediante un processo di IDENTIFICAZIONE
fermentazione, in cui i microrganismi interessati
siano o no modificati mediante procedimenti tradi- Nel caso in cui sotto Identificazione una singola
zionali o mediante la tecnologia del DNA ricombi- monografia contenga Prima identificazione e Seconda
nante (rDNA), se del caso, la sostanza soddisfa ai identificazione, il saggio o i saggi che costituiscono la
requisiti della monografia generale Prodotti di fer- Seconda identificazione possono essere usati al posto
mentazione (1468). del saggio o dei saggi della Prima identificazione a
Se durante la produzione sono utilizzati solventi, essi condizione
sostanza sia
che possa essere dimostrato che la
completamente ascrivibile a un lotto cer-
devono essere di qualita© appropriata. Inoltre, si devono tificato come conforme a tutte le specifiche della
considerare la loro tossicita© e il loro livello residuo monografia.
(5.4). Se durante la produzione e© usata acqua, essa deve
essere di qualita© appropriata.
Se le sostanze sono prodotte o trattate per ottenere una SAGGI
certa forma o qualita© , quella forma specifica o qualita©
della sostanza soddisfa ai requisiti della monografia. Polimorfismo . Se la natura di una forma cristallina o
Possono essere descritti alcuni saggi correlati con la amorfa impone restrizioni al suo uso nelle prepara-
funzionalita© per il controllo di proprieta© che possono zioni, viene identificata la natura della forma specifica
influenzare l'idoneita© della sostanza e conseguente- cristallina o amorfa, la sua morfologia e© adeguata-
mente le proprieta© delle forme farmaceutiche preparate mente controllata e la sua identita© e© riportata in eti-
da essa. chetta.

640
 Sostanze per uso farmaceutico

inoizircserP
. Le impurezze organiche presenti pirogeni sulla base di un appropriato saggio di conva-

ilareneG
Sostanze correlate

nelle sostanze attive ad un livello superiore allo 0,1 per lida tra il saggio per le endotossine batteriche e quello
cento devono essere qualificate e, se possibile, identifi- dei pirogeni.
cate a meno che la dose giornaliera della sostanza . Il controllo di proprieta© parti-
attiva superi 2 g ed in questo caso la soglia per la quali-
Proprieta© supplementari

colari (per es. le caratteristiche fisiche, le proprieta© cor-

ficazione e© abbassata allo 0,05 per cento. Le impurezze

isilanA id
relate con la funzionalita© ) puo© essere necessario per

idoteM
tossiche o farmacologicamente attive inferiori allo 0,1 alcuni procedimenti di fabbricazione o per alcune for-
per cento possono essere controllate mediante un sag- mulazioni. Qualita© particolari di una sostanza (come
gio separato. Le impurezze che non sono qualificate sostanza sterile, esente da endotossine, apirogena ecc.)
non devono superare lo 0,1 per cento. Per le sostanze possono essere ottenute per la produzione di prepara-

irotinetnoC
attive destinate esclusivamente ad essere utilizzate nei

/ ilairetaM
zioni per uso parenterale o di altre forme farmaceuti-
prodotti medicinali per uso veterinario, si applica una che, e i requisiti appropriati possono essere specificati
soglia di qualificazione dello 0,5 per cento. L'esistenza nella singola monografia.
di queste impurezze deve essere riportata a partire da
un contenuto dello 0,1 per cento in poi, mentre la loro
identificazione e© richiesta a partire da un contenuto DOSAGGIO

ivittaeR
dello 0,2 per cento. Questi requisiti non si applicano
ai prodotti biologici e biotecnologici, ai peptidi, agli Se non diversamente giustificato ed autorizzato, il
oligonucleotidi, ai prodotti radiofarmaceutici, ai pro- titolo delle sostanze per uso farmaceutico viene deter-
dotti di fermentazione e ai prodotti semisintetici deri- minato mediante metodi appropriati.
vati da questi, o ai prodotti grezzi di origine animale o

itnemogrA
ilareneG
vegetale. ETICHETTE
Solventi residui . Il contenuto di solventi residui e© limi- In generale, l'etichetta e© disciplinata da accordi interna-
tato secondo i principi definiti nel capitolo generale zionali e da regolamenti sovranazionali e nazionali. Le
(5.4), usando il metodo generale (2.4.24) o altri metodi indicazioni che figurano sotto la voce Etichette non

eifargonoM
appropriati.

ilareneG
sono dunque complete e, inoltre, sono obbligatorie ai
(2.6.1). Le sostanze per uso farmaceutico desti- fini della Farmacopea solo le specifiche necessarie a
Sterilita©

nate alla preparazione di forme farmaceutiche sterili dimostrare la conformita© o meno ai requisiti della
senza un ulteriore appropriato procedimento di steriliz- monografia. Tutte le altre informazioni sono indicate a

ehcituecamraF
zazione, o presentate come sostanze sterili, soddisfano titolo di raccomandazione. Quando nella Farmacopea
e© usato il termine ``etichetta'', le indicazioni possono

emroF
al saggio di sterilita© . apparire sul contenitore, sulla confezione o su un
(2.6.14). Le sostanze per uso far- foglietto che accompagna la confezione, come deciso
Endotossine batteriche

maceutico presentate come sostanze esenti da endotos- dall'autorita© competente.

sine batteriche soddisfano al saggio per le endotossine Se del caso, l'etichetta prevede le indicazioni che la
sostanza e© :
eiretaM
batteriche. Il limite e il metodo di saggio da utilizzare

emirP
(se non si applica il metodo di gelificazione A) sono ^ destinata ad un uso specifico,
indicati nella specifica monografia. Il limite e© calcolato ^ di una forma cristallina distinta,
secondo le Linee guida del Saggio per le Endotossine bat-
teriche (2.6.14), a meno che un limite inferiore sia giusti- ^ di uno specifico grado di finezza,
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

ficato dai risultati ottenuti con i lotti di produzione, o ^ compattata,

sia richiesto dall'autorita© competente. Se e© prescritto ^ rivestita,
un saggio per le endotossine batteriche, non e© richiesto
un saggio per i pirogeni. ^ granulata,
^ sterile,
ehcitapoemO
inoizaraperP

(2.6.8). Le sostanze per uso farmaceutico per le

^ esente da endotossine batteriche,
Pirogeni

quali e© giustificato l'utilizzo del saggio per i pirogeni

invece del saggio per le endotossine batteriche e che ^ esente da pirogeni,
sono presentate come sostanze esenti da pirogeni, sod- ^ contenente agenti di scorrimento.
disfano al saggio per i pirogeni. Il limite e il metodo di
saggio da utilizzare sono indicati nella specifica mono- Se del caso, l'etichetta riporta il grado di idratazione, la
ecidnI

grafia o approvati dall'autorita© competente. Il saggio natura di ogni conservante antimicrobico, antiossi-
per le endotossine batteriche puo© sostituire quello per i dante o altro eccipiente aggiunti. Quando la sostanza

641
Tinture

attiva e© stata lavorata con aggiunta di eccipienti, l'eti- viene separato dal solvente di estrazione e, se necessa-
chetta riporta gli eccipienti utilizzati e il contenuto rio, pressato. In questo caso i due liquidi vengono
della sostanza attiva e degli eccipienti. riuniti.
Produzione da . La tintura viene preparata
estratti

disciogliendo o diluendo un estratto in alcool di appro-

priata concentrazione. Il contenuto di alcool e dei costi-
0792 tuenti o, se del caso, il contenuto di alcool e di residuo
secco corrispondono a quelli delle tinture ottenute per
percolazione o per macerazione.
Correzione dei costituenti . Se necessario la correzione
TINTURE del contenuto dei costituenti, puo© essere effettuata sia
Tincturae per aggiunta del solvente di estrazione di titolo appro-
priato, sia per aggiunta di un'altra tintura ottenuta
dalla materia prima vegetale od animale utilizzata per
DEFINIZIONE la preparazione.
Le tinture sono preparazioni liquide ottenute general-
mente da materie prime vegetali o animali essiccate. SAGGI
In alcuni casi, le materie da estrarre possono essere sot-
toposte ad un trattamento preliminare, come ad esem- ai limiti prescritti(2.2.5).
Densita© relativa

nella
Se del caso, la tintura soddisfa
monografia.
pio l'inattivazione degli enzimi, la triturazione o la
sgrassatura. Contenuto di (2.9.10). Soddisfa al valore
etanolo

Le tinture si preparano per macerazione, per percola- prescritto.

zione o per mezzo di altri procedimenti convalidati, Metanolo e 2-propanolo (2.9.11). Salvo diversa indica-
utilizzando alcool di appropriata concentrazione. zione, non piu© dello 0,05 per cento V/V di metanolo e
Le tinture possono essere preparate anche discio- non piu© dello 0,05 per cento V/V di 2-propanolo.
gliendo o diluendo estratti in alcool di appropriata con- Residuo secco. Se del caso, le tinture soddisfano ai limiti
centrazione. prescritti nella monografia. Pesare rapidamente 2,00 g
Le tinture sono ottenute generalmente usando una o 2,0 ml di tintura in una capsula a fondo piatto di circa
parte di droga e dieci parti di solvente di estrazione o 50 mm di diametro e 30 mm di altezza. Evaporare a
una parte di droga e cinque parti di solvente di estra- secco a b.m. ed essiccare in stufa a 100-105 ‘C per 3 h.
zione. Le tinture sono generalmente limpide. Lasciate Lasciar raffreddare in essiccatore su anidride fosforica
a riposo, possono formare un leggero deposito; cio© e© R e pesare. Calcolare il risultato in per cento m/m o in
accettabile a condizione che la composizione della tin- grammi per litro.
tura non risulti modificata in maniera significativa.
CONSERVAZIONE
PRODUZIONE Conservare al riparo dalla luce.
Produzione per percolazione . Ridurre, se necessario, le
materie da estrarre in pezzi di grandezza appropriata. ETICHETTE
Mescolare uniformemente con una parte del solvente
di estrazione prescritto e lasciare a riposo per un tempo L'etichetta indica:
appropriato. Trasferire la miscela in un percolatore e ^ la materia prima vegetale od animale utilizzata,
lasciare che il percolato fluisca lentamente assicuran- ^ se del caso, che e© stata impiegata materia prima vege-
dosi che le materie da estrarre siano sempre coperte tale od animale fresca,
dal restante solvente di estrazione. Il residuo puo© essere
pressato ed il liquido ottenuto riunito al percolato. ^ la concentrazione dell'alcool utilizzato per la prepa-
. Salvo indicazione contra- razione,
^ la concentrazione dell'alcool nella tintura finale,
Produzione per macerazione

ria, ridurre le materie da estrarre in pezzi di grandezza

appropriata, mescolare uniformemente con il solvente ^ il contenuto in principio attivo e/o il rapporto tra il
di estrazione prescritto e lasciare a riposo, in un reci- materiale di partenza ed il solvente di estrazione o
piente chiuso, per un tempo appropriato. Il residuo tra il materiale di partenza e la tintura finale.

642
 Vaccini per uso umano

inoizircserP
Le anatossine possono essere liquide o liofilizzate. Esse

ilareneG
0153
possono essere purificate ed adsorbite. Le anatossine
adsorbite sono sospensioni di particelle bianche o grigie
disperse in liquidi incolori o giallo pallido e possono
formare un sedimento sul fondo del recipiente.

isilanA id
VACCINI PER USO UMANO
I sono preparati da virus coltivati in ani-

idoteM
vaccini virali

Vaccina ad usum humanum mali, in uova embrionate, in colture cellulari appro-

priate o in tessuti idonei o mediante coltura di cellule
Un vaccino in associazione, per il quale non esiste modificate mediante ingegneria genetica. I vaccini
una monografia che tratta di una particolare combina- virali sono liquidi che differiscono per l'opacita© a

irotinetnoC
/ ilairetaM
zione, soddisfa alle monografie di ciascun singolo compo- seconda del tipo di preparazione o possono essere liofi-
nente, con le eventuali modifiche approvate dall'autorita© lizzati. Le preparazioni liquide e le preparazioni liofiliz-
competente. zate dopo la ricostituzione possono essere colorate se
nei terreni di coltura e© stato usato un indicatore di pH
come il rosso fenolo.
DEFINIZIONE

ivittaeR
I vaccini per uso umano sono preparazioni contenenti PRODUZIONE
sostanze antigeniche capaci di indurre una immunita© . I requisiti per la produzione com-
attiva e specifica nell'uomo nei confronti di un agente Disposizioni generali

presi i controlli durante il processo sono indicati nelle

infettante o di una tossina o di un antigene elaborato singole monografie. In casi giustificati ed autorizzati

itnemogrA
ilareneG
da esso. Deve essere dimostrato che essi hanno un'atti- alcuni saggi possono essere omessi quando si puo© dimo-
vita© immunogena accettabile nell'uomo secondo la strare, per esempio mediante studi di convalida, che il
scheda di somministrazione prevista. processo di produzione soddisfa al saggio in maniera
I vaccini per uso umano possono contenere: organismi riproducibile.
inattivati mediante mezzi chimici o fisici che manten-

eifargonoM
Salvo eccezione giustificata ed autorizzata, i vaccini

ilareneG
gono appropriate proprieta© immunogene; organismi sono prodotti usando un sistema di lotto di semenza. I
vivi che sono normalmente non virulenti o che sono metodi di preparazione sono concepiti in modo da
stati trattati per attenuare la loro virulenza ma manten- mantenere adeguate proprieta© immunogene, per ren-
gono adeguate proprieta© immunogene; antigeni estratti dere la preparazione innocua e per prevenire la conta-

ehcituecamraF
da organismi o secreti da essi oppure ottenuti mediante minazione da parte di agenti estranei.
la tecnologia del DNA ricombinante; gli antigeni pos-

emroF
sono essere usati nel loro stato nativo o possono essere Salvo eccezione giustificata ed autorizzata, nella produ-
detossificati mediante mezzi chimici o fisici e possono zione di un lotto finale di vaccino, il numero di passaggi
essere aggregati, polimerizzati o coniugati ad un sup- di un virus o il numero di sottocolture di un batterio a
porto per aumentare la loro immunogenicita© . partire dal lotto di semenza primario non deve essere
superiore a quello usato per la produzione del vaccino

eiretaM
La terminologia usata nelle monografie sui vaccini per

emirP
che ha dimostrato, negli studi clinici, di essere soddisfa-
uso umano e© definita nel capitolo 5.2.1. cente rispetto all'innocuita© e all'efficacia.
Ivaccini batterici sono sospensioni con diverso grado di I vaccini devono essere il piu© possibile esenti da ingre-
opacita© in liquidi incolori o quasi incolori o possono dienti noti per causare reazioni tossiche, allergiche o
ehcituecamraF

essere liofilizzati. La concentrazione dei batteri vivi o

inoizaraperP

altre reazioni indesiderate nell'uomo. Possono essere

ehcificepS

inattivati e© espressa in termini di Unita© Internazionali incorporati additivi appropriati come stabilizzanti ed
di Opacita© o, se del caso, e© determinata mediante conta adiuvanti. La penicillina e la streptomicina non si
cellulare diretta o, per i batteri vivi, mediante la conta usano in nessuno stadio della produzione e non si
vitale. aggiungono al prodotto finale; tuttavia i lotti di
ehcitapoemO
inoizaraperP

Le sono preparate dalle tossine semenza primari preparati con terreni di coltura conte-
nenti penicillina o streptomicina, quando giustificato
anatossine batteriche

diminuendo la loro tossicita© ad un livello non rilevabile

oppure eliminandola completamente mediante proce- ed autorizzato, possono essere usati per la produzione.
dure chimiche o fisiche senza distruggere la loro pro- Substrati per la propagazione . I substrati per la propa-
prieta© immunogena. Le anatossine sono ottenute da gazione soddisfano ai pertinenti requisiti della Farma-
ceppi selezionati di microrganismi. Il metodo di produ- copea (5.2.2, 5.2.3) o in mancanza di questi requisiti a
ecidnI

zione deve essere tale che l'anatossina non si converta quelli dell'autorita© competente. La lavorazione delle
di nuovo in tossina. banche cellulari e delle colture cellulari successive si

643
Vaccini per uso umano

effettua in condizioni asettiche in un'area dove non Intermedi . Se del caso, si deve valutare la stabilita© degli
sono manipolate altre cellule. Il siero e la tripsina usate intermedi in determinate condizioni di conservazione e
nella preparazione delle sospensioni cellulari devono stabilire il periodo di validita© .
essere esenti da agenti estranei. . La sospensione madre finale
Lotti di semenza . Il ceppo di batteri o di virus usato nel Sospensione madre finale

si prepara mescolando, in condizioni asettiche, gli

lotto di semenza primario si identifica mediante docu- ingredienti del vaccino.
mentazione storica che comprende le informazioni sul-
l'origine del ceppo e la sua manipolazione successiva. Adsorbenti. I vaccini possono essere adsorbiti su allumi-
Nessun microrganismo diverso dal ceppo di semenza nio idrossido, alluminio fosfato, calcio fosfato o altri
deve essere presente nel lotto di semenza. adsorbenti appropriati; gli adsorbenti sono preparati
. I terreni di coltura sono il piu© possi- in condizioni particolari che conferiscono loro una
forma fisica e le proprieta© adsorbenti appropriate.
Terreni di coltura

bile esenti da ingredienti noti per causare reazioni tossi-

che, allergiche o altre reazioni indesiderate nell'uomo; Conservanti antimicrobici. Un conservante antimicro-
se la presenza di questi ingredienti e© necessaria, si deve bico appropriato puo© essere aggiunto in un vaccino ste-
dimostrare che la quantita© presente nel lotto finale e© rile ed inattivato, ed esso e© sempre aggiunto se queste
ridotta ad un livello tale da rendere innocuo il prodotto. preparazioni sono distribuite in recipienti multidose,
Un siero animale (ma non umano) approvato puo© salvo indicazione diversa. Se si usa un conservante anti-
essere usato nel terreno di crescita delle colture cellulari microbico, esso deve aver dimostrato di non danneg-
ma il terreno usato per il mantenimento della crescita giare l'innocuita© e l'efficacia del vaccino. Nel corso
durante la moltiplicazione virale non deve contenere il degli studi di sviluppo, deve essere dimostrata all'auto-
siero, salvo indicazione diversa. I terreni di coltura cel- rita© competente l'efficacia del conservante antimicro-
lulare possono contenere un indicatore di pH come il bico durante tutto il periodo di validita© . L'efficacia del
rosso fenolo e gli antibiotici approvati alla minima con- conservante antimicrobico viene valutata come
centrazione efficace benchë sia preferibile avere, descritto nel capitolo 5.1.3. Se non sono soddisfatti i cri-
durante la produzione, un terreno di coltura esente da teri A e B, in casi giustificati possono essere applicati
antibiotici. ai vaccini per uso umano i criteri seguenti: batteri, nes-
Propagazione e raccolta . Le colture di semenza sono sun aumento a 24 h e a 7 giorni; riduzione di 3 log a 14
propagate e raccolte in condizioni definite. La purezza giorni, nessun aumento a 28 giorni; funghi, nessun
della raccolta si verifica mediante saggi appropriati aumento a 14 giorni e a 28 giorni.
come definito nella monografia. . Per i vaccini per somministrazione paren-
Cellule di controllo . Per i vaccini prodotti in colture cel- Lotto finale

terale, il lotto e© preparato mediante ripartizione aset-

lulari, si mantengono delle cellule di controllo e si sot- tica della sospensione madre finale in recipienti sterili
topongono a saggio come prescritto. Inoltre per fornire ermeticamente chiusi che dopo liofilizzazione, se del
un controllo valido, queste cellule devono essere mante- caso, sono chiusi in modo da escludere qualsiasi conta-
nute in condizioni che sono rigorosamente identiche a minazione. Per i vaccini da somministrare per via non
quelle usate per la produzione delle colture cellulari, parenterale, il lotto finale e© preparato distribuendo in
compreso l'uso degli stessi lotti di terreni di coltura e i appropriate condizioni la sospensione madre finale in
cambiamenti dei terreni. recipienti sterili, ermeticamente chiusi.
. Per i vaccini vivi prodotti su uova, le
Stabilita© . Si deve dimostrare, mediante studi di conva-
Uova di controllo

uova sono incubate e sottoposte a saggio come pre-

scritto nella monografia. lida, la conservazione dell'attivita© biologica del lotto
. Se del caso, si applica una procedura di finale durante tutto il periodo di validita© ; si valuta la
Purificazione

purificazione convalidata. diminuzione di attivita© biologica nelle condizioni

. I vaccini inattivati sono prodotti usando di conservazione raccomandate ed un'eccessiva dimi-
Inattivazione

un processo di inattivazione convalidato, di cui sia stata nuzione, anche entro i limiti di una attivita© biolo-
dimostrata l'efficacia e la riproducibilita© . Se sono stati gica accettabile, puo© indicare che il vaccino non e©
riscontrati contaminanti potenziali di una raccolta, per accettabile.
esempio nei vaccini prodotti in uova provenienti da Grado di adsorbimento. Durante la fase di sviluppo di
allevamenti sani non EOPS, il processo di inattivazione un vaccino adsorbito, si valuta il grado di adsorbimento
deve essere anche convalidato rispetto ai potenziali come parte del controllo di riproducibilita© . Una speci-
contaminanti. Si effettua un saggio per verificare l'inat- fica del grado di adsorbimento per il rilascio del lotto
tivazione il piu© presto possibile dopo il processo di inat- si stabilisce sulla base dei risultati ottenuti per i lotti
tivazione, salvo eccezione giustificata ed autorizzata. usati nei saggi clinici. A partire dai dati di stabilita© rica-

644
 Vaccini per uso veterinario

inoizircserP
vati dal vaccino si deve dimostrare che alla fine del ^ il nome di qualsiasi costituente che puo© causare

ilareneG
periodo di validita© il grado di adsorbimento non sara© reazioni avverse e qualsiasi controindicazione
inferiore a quello dei lotti usati nei saggi clinici. all'uso del vaccino,
^ per i vaccini liofilizzati:
SAGGI

isilanA id
^ il nome o la composizione e il volume del

idoteM
I vaccini soddisfano ai saggi prescritti nella specifica liquido da aggiungere per la ricostituzione,
monografia compresi, se del caso, quelli descritti di
seguito. ^ il periodo di tempo entro il quale il vaccino
(2.5.13). Non piu© di 1,25 mg di alluminio (Al) deve essere usato dopo la ricostituzione.

irotinetnoC
/ ilairetaM
Alluminio

per dose umana singola, salvo indicazione diversa, se

nel vaccino e© stato usato un adsorbente a base di allu-
minio.
Calcio (2.5.14). Non piu© di 1,3 mg di calcio (Ca) per 0062

dose umana singola, salvo indicazione diversa, se nel

ivittaeR
vaccino e© stato usato un adsorbente a base di calcio.
Formaldeide (2.4.18). Non piu© di 0,2 g/l di formaldeide
libera e© presente nel prodotto finale, salvo indicazione VACCINI PER USO VETERINARIO
diversa, se la formaldeide e© stata usata nella produzione Vaccina ad usum veterinarium
del vaccino.

itnemogrA
ilareneG
Fenolo (2.5.15). Non piu© di 2,5 g/l di fenolo e© presente
nel prodotto finale, salvo indicazione diversa, se il Nel caso di vaccini in associazione, per ciascun compo-
fenolo e© stato usato nella produzione del vaccino. nente che e© oggetto di una monografia della Farmacopea,
(2.5.12). Per i vaccini liofilizzati, non piu© del leponente
prescrizioni di tale monografia si applicano a quel com-
specifico con le modifiche, dove necessario, come

eifargonoM
Acqua

3,0 per cento m/m, salvo indicazione diversa.

ilareneG
indicato di seguito (vedi Saggi (Innocuita© ); Valutazione
dell'innocuita© dei vaccini per uso veterinario (5.2.6);
CONSERVAZIONE Valutazione dell'efficacia dei vaccini per uso veterinario
Conservare protetti dalla luce. Salvo indicazione (5.2.7)).

ehcituecamraF
diversa nella monografia, la temperatura di conserva-

emroF
zione e© 5 3 ‘C; i vaccini liquidi adsorbiti non devono
DEFINIZIONE
6

essere congelati.
Data di scadenza. Salvo indicazione diversa, la data di I vaccini per uso veterinario sono preparazioni conte-
scadenza si calcola a partire dall'inizio del saggio di nenti sostanze antigeniche e sono somministrate allo
attivita© ; questo si applica ai vaccini conservati nelle scopo di indurre un'immunita© specifica e attiva nei con-
eiretaM

emirP
condizioni prescritte. fronti di malattie provocate da batteri, tossine, virus e
parassiti. I vaccini, vivi o inattivati, conferiscono
ETICHETTE un'immunita© attiva che puo© essere trasferita passiva-
ehcituecamraF

mente attraverso gli anticorpi materni nei confronti

inoizaraperP

ehcificepS

L'etichetta indica: degli immunogeni contenuti nel vaccino e talvolta

^ il nome della preparazione, anche nei confronti di organismi correlati antigenica-
^ un riferimento che identifica il lotto finale, mente. I vaccini possono contenere microrganismi, vivi
^ la dose umana raccomandata e la via di sommini- oprodotte inattivati, parassiti o frazioni antigeniche o sostanze
da questi organismi e resi innocui pur conser-
ehcitapoemO
inoizaraperP

strazione, vando, tutte o in parte, le loro proprieta© antigeniche; i

^ le condizioni di conservazione, vaccini possono anche contenere combinazioni di que-
^ la data di scadenza, sti costituenti. Adiuvanti idonei possono essere incor-
^ il nome e la quantita© di qualsiasi conservante anti- poratidei
al fine di aumentare le proprieta© immunizzanti
vaccini.
microbico,
ecidnI

^ il nome di qualsiasi antibiotico, adiuvante, aroma- La terminologia usata nelle monografie dei vaccini per
tizzante o stabilizzante presente nel vaccino, uso veterinario e© definita nel capitolo 5.2.1.

645
Vaccini per uso veterinario

VACCINI BATTERICI E ANATOSSINE BATTERICHE VACCINI A BASE DI VETTORI

I vaccini batterici e le anatossine batteriche sono prepa- I vaccini a base di vettori sono preparazioni liquide o
rati da colture allestite su idonei terreni solidi o liquidi, liofilizzate di uno o piu© tipi di microrganismi vivi (bat-
o mediante altri mezzi idonei; i requisiti di questa teri o virus) non patogeni o di bassa patogenicita© per
sezione non si applicano ai vaccini batterici preparati la specie bersaglio e nei quali sono stati inseriti uno o
in colture cellulari o in animali vivi. Il ceppo di batterio piu© geni che codificano per gli antigeni che stimolano
usato puo© essere stato modificato mediante ingegneria una risposta immunitaria protettiva nei confronti di
genetica. L'identita© , il potere antigenico e la purezza di altri microrganismi.
ciascuna coltura batterica usata deve essere accurata-
mente controllata.
I vaccini batterici contengono batteri vivi o inattivati o PRODUZIONE
loro componenti antigeniche; sono preparazioni liquide I metodi di preparazione, che possono variare secondo
di diverso grado di opacita© o possono essere liofilizzati. il tipo di vaccino, devono essere tali da conservare l'i-
Le anatossine batteriche sono preparate da tossine la dentita© e l'immunogenicita© dell'antigene e da assicurare
cui tossicita© e© stata ridotta ad un livello bassissimo o l'assenza di contaminazione da parte di agenti estranei.
completamente eliminata mediante mezzi fisici o chi-
mici, pur conservando un adeguato potere immuniz- Le sostanze di origine animale usate nella produzione
zante. Le tossine sono ottenute da ceppi selezionati di dei vaccini per uso veterinario soddisfano ai requisiti
specifici microrganismi coltivati su terreni idonei o descritti nel capitolo 5.2.5. Altre sostanze usate nella
sono ottenute mediante altri mezzi idonei, per esempio, preparazione dei vaccini per uso veterinario soddisfano
per sintesi chimica. ai requisiti della Farmacopea (se esiste una monografia
Le anatossine possono essere: pertinente) e sono preparate in maniera tale da evitare
^ liquide, la contaminazione del vaccino con microrganismi vivi
^ precipitate con allume o altri agenti idonei, o tossine.
^ purificate e/o adsorbite su fosfato di alluminio,
idrossido di alluminio, fosfato di calcio o su altre SUBSTRATI PER LA PRODUZIONE
sostanze adsorbenti prescritte nella monografia. Le colture cellulari usate nella produzione dei vaccini
Le anatossine batteriche sono liquidi limpidi o legger- per uso veterinario soddisfano ai requisiti descritti nel
mente opalescenti. Le anatossine adsorbite sono capitolo 5.2.4.
sospensioni o emulsioni. Alcune anatossine possono Nel caso in cui una monografia faccia riferimento ad
essere liofilizzate. allevamenti di polli esenti da microrganismi patogeni
Salvo diversa indicazione, le prescrizioni e i requisiti di specificati (EOPS), questi allevamenti soddisfano ai
seguito indicati per i vaccini batterici si applicano requisiti descritti nel capitolo Allevamenti di polli esenti
ugualmente ai vaccini batterici, alle anatossine batteri- da patogeni specificati per la produzione e il controllo di
che e ai prodotti contenenti una combinazione di cellule qualita© dei vaccini (5.2.2).
batteriche ed anatossine.
Per la produzione dei vaccini inattivati, nel caso in cui i
VACCINI VIRALI
microrganismi vaccinali sono coltivati in uova embrio-
nate di gallina, questi embrioni provengono da alleva-
I vaccini virali sono preparati mediante crescita in col- menti EOPS (5.2.2) o da allevamenti non EOPS ma sani
ture cellulari appropriate (5.2.4), in tessuti, microrgani- ed esenti da certi agenti e dai loro anticorpi, cos|© come
smi, uova embrionate di gallina o, nel caso in cui non specificato nella singola monografia. Puo© essere neces-
sia possibile alcuna alternativa, in animali vivi o sario dimostrare che il processo di inattivazione sia effi-
mediante altri mezzi idonei. Il ceppo di virus usato cace nei confronti di potenziali contaminanti specifi-
puo© essere stato modificato mediante ingegneria gene- cati. Per la produzione di un lotto di semenza primario
tica. I vaccini virali sono preparazioni liquide o liofiliz- e per tutti i passaggi di un microrganismo fino al lotto
zate di uno o piu© virus o di subunita© virali o di peptidi. di semenza di lavoro, sono usate uova provenienti da
I vaccini virali vivi sono preparati da virus di virulenza allevamenti EOPS (5.2.2).
attenuata o di virulenza naturalmente bassa per la spe- Nel caso sia inevitabile l'uso di animali o di tessuti ani-
cie bersaglio. mali nella produzione dei vaccini per uso veterinario,
I vaccini virali inattivati sono trattati mediante proce- questi animali devono essere esenti da patogeni specifi-
dure convalidate per l'inattivazione del virus e possono cati, in relazione alla specie animale di origine e alla
essere purificati e concentrati. specie animale cui ë destinato il vaccino.

646
 Vaccini per uso veterinario

inoizircserP

ilareneG
TERRENI DI COLTURA LOTTI DI SEMENZA VIRALI
Si deve registrare almeno la composizione qualitativa Requisiti generali . I virus usati per la produzione del
dei terreni usati per la preparazione della coltura di vaccino sono manipolati secondo un sistema di lotto di
semenza e per la produzione. Il grado di purezza di cia- semenza. Ciascun lotto di semenza primario e© control-
scun componente deve essere specificato. Nel caso in lato come descritto di seguito. Si deve registrare l'ori-

isilanA id
cui i terreni o i componenti siano individuati con mar- gine, la data di isolamento, la cronologia dei passaggi

idoteM
chi di proprieta© , questi sono indicati ed e© registrata (comprese le procedure di purificazione e caratterizza-
una descrizione appropriata. I componenti derivati da zione) e le condizioni di conservazione di ciascun lotto
animali sono specificati rispetto alla specie di origine e di semenza. A ciascun lotto di semenza primario e© asse-
al Paese di origine e devono soddisfare ai requisiti gnato un codice specifico che ne permette l'identifica-

irotinetnoC
zione. La produzione del vaccino di solito non deve

/ ilairetaM
descritti nel capitolo 5.2.5. I processi di preparazione
dei terreni usati, compresi i procedimenti di sterilizza- essere effettuata usando un virus che abbia sub|©to piu©
zione, sono documentati. di cinque passaggi dal lotto di semenza primario. Salvo
L'aggiunta di antibiotici durante il processo di produ- diversa indicazione, nei saggi sul lotto di semenza pri-
zione e© generalmente limitata ai fluidi delle colture cel- mario descritti di seguito i microrganismi usati non
lulari e ad altri terreni, agli inoculi iniettati nelle uova devono aver sub|©to piu© di cinque passaggi dal lotto di

ivittaeR
e a materiali ottenuti dalla cute o da altri tessuti. semenza primario.
Nel caso in cui un lotto di semenza primario sia otte-
nuto a partire da una semenza cellulare primaria persi-
LOTTI DI SEMENZA BATTERICA stentemente infetta, i saggi di seguito riportati devono
. Sono indicati il genere e la specie (e essere effettuati su un appropriato volume di virus otte-

itnemogrA
ilareneG
nuto da cellule distrutte della semenza cellulare prima-
Requisiti generali

le varieta© , se del caso) dei batteri usati nel vaccino. Se

possibile, i batteri usati nella produzione sono manipo- ria. Nel caso in cui saggi pertinenti eseguiti su cellule
lati secondo un sistema di lotto di semenza. Ciascun distrutte siano stati effettuati allo scopo di convalidare
lotto di semenza primario e© controllato come descritto l'idoneita© della semenza cellulare primaria, non e©
di seguito. Di ciascun lotto di semenza primario si deve necessario ripetere questi saggi.

eifargonoM

ilareneG
registrare l'origine, la data di isolamento, la cronologia Propagazione . Il lotto di semenza primario e tutti i suc-
dei passaggi (comprese le procedure di purificazione e cessivi passaggi sono propagati su cellule, su uova
caratterizzazione) e le condizioni di conservazione. A embrionate o in animali che hanno dimostrato di essere
ciascun lotto di semenza primario e© assegnato un idonei per la produzione del vaccino (vedi sopra) e, ove

ehcituecamraF
codice specifico che ne permette l'identificazione. possibile, usando sostanze di origine animale che soddi-
. E' specificato il numero minimo e mas- sfano ai requisiti prescritti nel capitolo 5.2.5.

emroF
. Si deve usare un metodo appropriato
Propagazione

simo di sottocolture di ciascun lotto di semenza prima- Identificazione

rio prima della fase di produzione. Sono documentati i per identificare il ceppo vaccinale e per distinguerlo, il
metodi usati per la preparazione delle colture di piu© possibile, dai ceppi correlati.
semenza, la preparazione delle sospensioni per la Contaminazione batterica e fungina . Il lotto di semenza
semina, le tecniche di inoculazione delle semenze, il primario soddisfa al saggio di sterilita© (2.6.1).
eiretaM

emirP
titolo e la concentrazione degli inoculi e i terreni di col- Micoplasmi (2.6.7). Il lotto di semenza primario soddi-
tura usati. Si deve dimostrare che le caratteristiche del sfa al saggio dei micoplasmi.
materiale di semenza (per esempio la dissociazione o . Allestire una serie di prepara-
l'antigenicita© ) non siano modificate da queste sottocol-
Assenza di virus estranei

zioni di anticorpi monoclonali o policlonali contenenti

ehcituecamraF
inoizaraperP

ture. Sono documentate le condizioni di conservazione

ehcificepS

elevati livelli di anticorpi neutralizzanti il virus del lotto

di ciascun lotto di semenza. di semenza, usando un antigene che non deriva da
Identita© e purezza . Ciascun lotto di semenza primario alcun passaggio del virus isolato da cui e© stato prepa-
deve contenere esclusivamente la specie e il ceppo di rato il lotto di semenza primario. Ciascun lotto di siero
batterio indicato. Si registra una breve descrizione del e© mantenuto a 56 ‘C per 30 min per inattivare il com-
ehcitapoemO
inoizaraperP

metodo di identificazione di ciascun ceppo mediante le plemento. Ciascun lotto deve essere esente da anticorpi
caratteristiche biochimiche, sierologiche e morfologi- nei confronti di potenziali contaminanti del virus della
che distinguendo il piu© possibile dai ceppi correlati e si semenza e da effetti non specifici inibenti la capacita©
indica anche il metodo per la determinazione della dei virus di infettare e moltiplicarsi nelle cellule (o nelle
purezza del ceppo. Se il lotto di semenza primario con- uova, se del caso). Se un tale siero non puo© essere otte-
tiene organismi vivi diversi dalle specie e dai ceppi indi- nuto, si possono usare altri metodi per rimuovere o
ecidnI

cati, il lotto non e© ritenuto idoneo per la produzione neutralizzare specificamente il virus della semenza
del vaccino. virale.

647
Vaccini per uso veterinario

Usando una quantita© minima di anticorpo monoclo- zioni di produzione, i microrganismi possono essere
nale o policlonale, trattare un campione del lotto di fisicamente protetti nei confronti delle sostanze inatti-
semenza primario in modo tale da neutralizzare quanto vanti.
piu© possibile o rimuovere il virus vaccinale. La miscela . E' necessario dimostrare che
finale virus-siero dovrebbe contenere, se possibile,
Cinetica di inattivazione

l'agente inattivante e il processo di inattivazione, nelle

almeno il contenuto di dieci dosi di vaccino in 0,1 ml condizioni di produzione, sono in grado di inattivare i
per i vaccini aviari, e in 1 ml per gli altri vaccini. Questa microrganismi vaccinali. E' opportuno stabilire ade-
miscela e© sottoposta al saggio per verificare l'assenza guati dati relativi alla cinetica di inattivazione. Gene-
di agenti estranei come descritto di seguito. ralmente, il tempo richiesto per l'inattivazione non
Per i vaccini aviari, effettuare il saggio per evidenziare i dovrebbe essere superiore al 67 per cento della durata
virus estranei usando uova embrionate (2.6.3), il saggio del processo di inattivazione.
per il virus della leucosi (2.6.4), il saggio per i virus Aziridine . Se come agente inattivante si usa un compo-
estranei usando colture cellulari (2.6.5) e il saggio per sto derivato dall'aziridina si deve dimostrare che alla
gli agenti estranei usando i pulcini (2.6.6). fine del processo di inattivazione non vi siano residui
Per gli altri vaccini, inoculare la miscela in colture di dell'agente inattivante. Questo puo© essere ottenuto
almeno 70 cm del tipo di cellule richiesto. Le colture
2 mediante neutralizzazione dell'agente inattivante con
possono essere inoculate ad un qualsiasi stadio di cre- tiosolfato e la messa in evidenza del tiosolfato residuo
scita appropriato fino al 70 per cento di confluenza. Si nella raccolta inattivata alla fine del processo di inatti-
deve mantenere come controllo almeno un monostrato vazione.
di ciascun tipo. Le colture devono essere controllate Formaldeide . Se la formaldeide e© usata come agente
giornalmente per una settimana. Alla fine di questo inattivante, deve essere effettuato un saggio per eviden-
periodo le colture sono congelate e scongelate per tre ziare la formaldeide libera come descritto nella sezione
volte, sottoposte a centrifugazione per rimuovere i Saggi.
detriti cellulari e di nuovo inoculate nello stesso tipo di . Quando sono usati altri metodi
cellule precedentemente usate. Questa operazione e©
Altri agenti inattivanti

di inattivazione, devono essere effettuati appropriati

ripetuta per due volte. Il passaggio finale deve produrre saggi per dimostrare che l'agente inattivante sia stato
una quantita© sufficiente di cellule su appropriati sup- rimosso o ridotto ad un livello residuo accettabile.
porti per effettuare i saggi descritti di seguito. . Effettuare un saggio per
Gli agenti citopatici ed emoadsorbenti sono controllati
Controllo dell'inattivazione

dimostrare la completa inattivazione immediatamente

usando i metodi descritti nelle principali sezioni rela- dopo il processo di inattivazione e, se possibile, dopo
tive al controllo delle colture cellulari (5.2.4) e sono neutralizzazione o rimozione dell'agente inattivante.
usate tecniche come l'immunofluorescenza per la Se il vaccino contiene un adiuvante che rende impossi-
messa in evidenza di contaminanti specifici per i saggi bile effettuare un saggio per dimostrare l'inattivazione
sulle colture cellulari. Il lotto di semenza primario e© sul lotto finito, si deve effettuare anche un saggio di
inoculato in: inattivazione durante la produzione sulla miscela di
^ cellule primarie della specie di origine del virus; antigeni, immediatamente prima dell'aggiunta dell'a-
^ cellule sensibili ai virus patogeni per le specie cui ë diuvante, invece che sul lotto.
destinato il vaccino; (a) Vaccini batterici. Il saggio prescelto deve essere
^ cellule sensibili ai pestivirus. appropriato al batterio vaccinale usato e deve consi-
stere di almeno due passaggi sul terreno di produzione
Se risulta che il lotto di semenza primario contiene o, se per la produzione ë usato un terreno solido, su un
microrganismi vivi diversi dal virus della specie e del idoneo terreno liquido o sul terreno previsto nella spe-
ceppo dichiarato o antigeni virali estranei, esso non e© cifica monografia. Il prodotto soddisfa al saggio se si
idoneo per la produzione del vaccino. dimostra l'assenza di qualsiasi microrganismo vivo.
(b) Anatossine batteriche. Effettuare un saggio per
INATTIVAZIONE dimostrare la detossificazione immediatamente dopo
la produzione dell'anatossina e, se possibile, la neutra-
I vaccini inattivati sono sottoposti ad un processo di lizzazione o la rimozione dell'agente inattivante. Il sag-
inattivazione convalidato. Il controllo della cinetica di gio prescelto deve essere appropriato alla tossina o alle
inattivazione descritto di seguito si effettua una sola tossine presenti e deve essere il piu© sensibile tra quelli a
volta per un dato processo di inattivazione. La restante disposizione. Nel caso in cui vi sia il rischio di recupero
parte di questa sezione si applica a ciascun ciclo di pro- della tossicita© , si effettua un ulteriore saggio all'ultimo
duzione. Quando si effettuano i saggi di inattivazione, stadio del processo di produzione durante il quale la
e© essenziale considerare la possibilita© che in certe condi- sensibilita© del saggio non e© compromessa.

648
 Vaccini per uso veterinario

inoizircserP
(c) Vaccini virali. Il saggio prescelto deve essere appro- dotto, essi possono essere aggiunti nel diluente per i

ilareneG
priato al virus vaccinale usato e deve consistere di prodotti liofilizzati dispensati in dose multipla. Per le
almeno due passaggi su cellule, uova embrionate o, nel preparazioni liquide a dose unica l'aggiunta dei conser-
caso in cui non sia disponibile alcun altro metodo sensi- vanti antimicrobici non ë generalmente ammessa, ma
bile, in animali. La quantita© dei campioni di cellule, puo© essere accettabile, per esempio, nei casi in cui lo
uova o animali deve essere sufficiente ad assicurare stesso vaccino sia ripartito in recipienti a dose unica e

isilanA id
idoteM
l'appropriata sensibilita© del saggio. Per i saggi su col- multidose. Per le preparazioni liquide multidose si
ture cellulari, inoculare 1,0 ml della raccolta inattivata valuta la necessita© dell'efficacia del conservante antimi-
in un monostrato della coltura cellulare di almeno 150 crobico, considerando la possibilita© di contaminazione
cm2. Il prodotto soddisfa al saggio se si dimostra l'as- durante l'uso del prodotto e il periodo massimo racco-
senza di qualsiasi virus vivo o di altri microrganismi. mandato per l'uso dopo l'apertura del recipiente. Nel

irotinetnoC
/ ilairetaM
corso degli studi di sviluppo l'efficacia del conservante
SCELTA DELLA COMPOSIZIONE DEL VACCINO E antimicrobico durante tutto il periodo di validita© deve
SCELTA DEL CEPPO VACCINALE essere dimostrata all'autorita© competente. L'efficacia
del conservante antimicrobico viene valutata come
Per la scelta della composizione del vaccino e del ceppo descritto nel capitolo 5.1.3; per una preparazione multi-
vaccinale, le caratteristiche importanti che devono dose, sono prelevati ulteriori campioni per controllare

ivittaeR
essere valutate comprendono l'innocuita© , l'efficacia e l'effetto del conservante antimicrobico nel corso del
la stabilita© . Requisiti generali per la valutazione dell'in- periodo massimo d'uso dopo l'apertura del recipiente.
nocuita© e dell'efficacia sono riportati nel capitolo Valu- Se non sono soddisfatti i criteri A e B, in casi giustificati
tazione dell'innocuita© dei vaccini veterinari (5.2.6), e nel si applicano i seguenti criteri ai vaccini per uso veteri-
capitolo Valutazione dell'efficacia dei vaccini veterinari

itnemogrA
nario: batteri, nessun aumento a 24 h e a 7 giorni, ridu-

ilareneG
(5.2.7). Questi requisiti possono essere formulati in zione di 3 log a 14 giorni, nessun aumento a 28 giorni;
maniera piu© esplicita o integrati da requisiti di specifi- funghi, nessun aumento a 14 giorni e a 28 giorni.
che monografie. Non e© consentita l'aggiunta di antibiotici come conser-
Il periodo di validita© proposto e© giustificato dai risultati vanti antimicrobici.

eifargonoM
degli studi di stabilita© . I dati ad essa relativi si otten-

ilareneG
gono dai risultati delle titolazioni virali, delle conte bat- Per i vaccini inattivati, nei casi in cui le sostanze acces-
teriche o dei saggi di attivita© effettuati, ad intervalli sorie possono interferire con un saggio di inattivazione,
regolari, fino a tre mesi oltre la data di scadenza su quest'ultimo si effettua durante la preparazione della
almeno tre lotti di vaccino rappresentativi e consecutivi sospensione madre finale del vaccino, dopo che i diffe-

ehcituecamraF
mantenuti nelle condizioni di conservazione raccoman- renti lotti di antigene sono stati mescolati ma prima
date e, a seconda del caso, dai risultati ottenuti dagli dell'aggiunta delle sostanze accessorie; il saggio per la

emroF
studi sul contenuto di umidita© (per prodotti liofilizzati), verifica del processo di inattivazione puo© essere quindi
dai saggi fisici sugli adiuvanti, dai saggi chimici sulle omesso sulla sospensione madre finale del vaccino e
sostanze come i componenti degli adiuvanti, i conser- sul lotto di vaccino.
vanti e il pH. Alcuni saggi possono essere effettuati solo sulla sospen-

eiretaM
Se possibile, si effettuano studi sulla stabilita© del vac- sione madre finale del vaccino piuttosto che sul lotto o

emirP
cino ricostituito, utilizzando il prodotto ricostituito sui lotti preparati da esso; questi saggi comprendono
secondo le raccomandazioni proposte. quelli per i conservanti antimicrobici, la formaldeide
libera, l'innocuita© e la determinazione dell'attivita© bio-
ehcituecamraF

logica dei vaccini inattivati.

inoizaraperP

SOSPENSIONE MADRE FINALE DEL VACCINO

ehcificepS

La sospensione madre finale del vaccino si prepara

mescolando uno o piu© lotti di antigene che soddisfano LOTTO
a tutti i principali requisiti, con tutte le sostanze ausilia-
rie come adiuvanti, stabilizzanti, conservanti antimi- Salvo diversa indicazione nella monografia, la sospen-
ehcitapoemO
inoizaraperP

crobici e diluenti. sione madre finale del vaccino e© ripartita asetticamente

. I conservanti antimicrobici in recipienti sterili, con chiusura inviolabile, che sono
Conservanti antimicrobici

vengono usati per prevenire i danni e gli effetti collate- chiusi in modo da escludere qualsiasi contaminazione.
rali causati dalla contaminazione microbica che puo© Saggi fisici. Un vaccino contenente un adiuvante oleoso
verificarsi durante l'uso di un vaccino. I conservanti e© sottoposto al saggio per la determinazione della visco-
antimicrobici non sono aggiunti ai prodotti liofilizzati sita© mediante un metodo appropriato; la viscosita© deve
ecidnI

ma, se giustificato, considerando il periodo massimo essere compresa nei limiti stabiliti per il prodotto. Si
raccomandato per l'uso dopo la ricostituzione del pro- deve dimostrare la stabilita© dell'emulsione.

649
Vaccini per uso veterinario

Saggi chimici . Si deve dimostrare, effettuando dei saggi data. Per i vaccini associati, il saggio puo© essere effet-
appropriati, che la concentrazione di sostanze, come tuato sui componenti separati quando la formulazione
per esempio l'alluminio e i conservanti, e© compresa nei del vaccino lo permette; se questo non ë possibile, puo©
limiti stabiliti per il prodotto. essere necessario ridurre il previsto numero di dosi di
. Misurare il pH dei prodotti liquidi e dei diluenti e un vaccino vivo da usare nel saggio se l'inoculazione di
dieci dosi potrebbe comportare la somministrazione di
pH

dimostrare se questo e© compreso nei limiti stabiliti per

il prodotto. una quantita© troppo elevata di un componente inatti-
(2.5.12). Se del caso, controllare il processo di lio- vato del vaccino. Gli animali sono tenuti in osserva-
Acqua

filizzazione mediante la determinazione del contenuto zione per il periodo piu© lungo indicato nelle specifiche
di acqua e dimostrare che e© compreso nei limiti stabiliti monografie. Non si deve verificare alcuna reazione
per il prodotto. anormale locale o generale.
Solo un lotto finale che soddisfa a ciascuno dei requisiti
riportati nelle sezioni Identificazione, Saggi e Dosaggio CONSERVAZIONE
descritte di seguito e nelle principali singole monografie
puo© essere rilasciato per l'uso. In accordo con l'autorita© Conservare al riparo dalla luce e ad una temperatura di
competente alcuni dei saggi su lotto possono essere 5 þ 3 ‘C, salvo diversa indicazione nella monografia.
omessi nel caso in cui i saggi effettuati durante la pro- Le preparazioni liquide non devono essere congelate,
duzione forniscano garanzie uguali o superiori circa l'i- salvo diversa indicazione.
doneita© del lotto o se sono stati effettuati saggi alterna-
tivi convalidati rispetto al metodo della Farmacopea. ETICHETTE
SAGGI L'etichetta indica:
^ che la preparazione ë per uso veterinario,
Le singole monografie riportano anche i saggi che devono ^ il volume della preparazione e il numero delle dosi
essere effettuati su ciascun particolare vaccino. nel recipiente,
Formaldeide (2.4.18; usare il Metodo B se e© stato ^ la via di somministrazione,
aggiunto sodio metabisolfito per neutralizzare l'eccesso
di formaldeide). Nel caso in cui la formaldeide sia stata ^ il tipo o i tipi di batteri o di virus usati e per i vac-
usata nella preparazione, la concentrazione di formal- cini vivi il numero minimo di batteri vivi o il titolo
deide libera non e© superiore a 0,5 g/l, a meno che non virale minimo,
sia stata dimostrata l'innocuita© di una quantita© supe- ^ se del caso, per i vaccini inattivati l'attivita© biolo-
riore. gica minima espressa in Unita© Internazionali,
Fenolo (2.5.15). Se il vaccino contiene fenolo, la concen- ^ se del caso, il nome e la quantita© del conservante
trazione non e© superiore a 5 g/l. antimicrobico o di qualsiasi altra sostanza
Sterilita© (2.6.1). Quando prescritto nella monografia, i aggiunta al vaccino,
vaccini soddisfano al saggio di sterilita© . Se il volume di ^ il nome di qualsiasi sostanza che puo© causare rea-
liquido nel recipiente e© superiore a 100 ml usare, ove zioni indesiderate,
possibile, il metodo della filtrazione su membrana. Nel
caso in cui questo metodo non possa essere usato, si ^ per i vaccini liofilizzati:
puo© usare il metodo della inoculazione diretta. ^ il nome o la composizione e il volume del
Se il volume di liquido in ciascun recipiente e© uguale o liquido da aggiungere per la ricostituzione,
superiore a 20 ml, il volume minimo da usare per cia- ^ il periodo entro il quale il vaccino deve essere
scun terreno di coltura corrisponde al 10 per cento del utilizzato dopo la ricostituzione,
contenuto o a 5 ml, quale dei due e© inferiore. ^ per i vaccini con un adiuvante oleoso l'avvertenza
Il numero appropriato di campioni da sottoporre a sag- che se il vaccino e© accidentalmente iniettato nel-
gio (2.6.1) corrisponde all'1 per cento del lotto, da un l'uomo ë necessario un immediato intervento del
minimo di quattro ad un massimo di dieci. medico,
Micoplasmi (2.6.7). Quando prescritto in una monogra- ^ le specie animali alle quali il vaccino ë destinato,
fia, il vaccino soddisfa al saggio dei micoplasmi. ^ le indicazioni per l'uso del vaccino,
. Generalmente, somministrare due dosi di
^ le istruzioni per l'uso,
Innocuita©

vaccino inattivato e/o dieci dosi di un vaccino vivo,

attraverso una delle vie di somministrazione raccoman- ^ le dosi raccomandate per le diverse specie animali.

650
 Forme farmaceutiche

inoizircserP

ilareneG
isilanA id
Glossario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 653 Preparazioni nasali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 675

idoteM
Capsule . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 654 Preparazioni oftalmiche . . . . . . . . . . . . . . . . . . 677
Compresse . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 656 Preparazioni oromucosali . . . . . . . . . . . . . . . . 680
Gomme da masticare medicate . . . . . . . . . . . . 660 Preparazioni parenterali . . . . . . . . . . . . . . . . . 684
Granulati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 660 Preparazioni per inalazione . . . . . . . . . . . . . . . 687

irotinetnoC
/ ilairetaM
Preparazioni liquide per uso orale . . . . . . . . . . 662 Preparazioni per irrigazione . . . . . . . . . . . . . . 692
Polveri per uso orale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 664 Preparazioni rettali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 693
Bastoncini . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 665 Preparazioni vaginali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 695
Cerotti transdermici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 666 Tamponi medicati . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 698
Preparazioni liquide per applicazione cutanea 667 Dispositivi intraruminali . . . . . . . . . . . . . . . . . 698
Polveri per applicazione cutanea . . . . . . . . . . . 668 Premiscele per alimenti medicati per uso

ivittaeR
Preparazioni semisolide per applicazione veterinario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 699
cutanea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 668 Preparazioni intramammarie per uso vete-
Schiume medicate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 671 rinario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 699
Preparazioni auricolari . . . . . . . . . . . . . . . . . . 672 Preparazioni liquide veterinarie per applica-

itnemogrA
Preparazioni farmaceutiche pressurizzate . . . . 674 zione cutanea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 700

ilareneG
eifargonoM

ilareneG
ehcituecamraF
emroF
eiretaM

emirP
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS
ehcitapoemO
inoizaraperP
ecidnI
 Glossario

inoizircserP

ilareneG
Base
1502

Una base e© il vettore, costituito da uno o piu© eccipienti,

per la/e sostanze attive in preparazioni semi-solide e
GLOSSARIO solide.

isilanA id
idoteM
Il testo introduttivo che segue fornisce definizioni e/o
spiegazioni di termini che si possono trovare nelle mono-
grafie generali sulle forme farmaceutiche, o che possono
Forme farmaceutiche a rilascio convenzionale

essere in queste usati senza che vengano in quel contesto Le forme farmaceutiche a rilascio convenzionale sono
definiti. Se importante, viene fatto riferimento ad altri preparazioni che mostrano un rilascio della/e sostanze

irotinetnoC
/ ilairetaM
termini equivalenti che si possono trovare in altre pubbli- attive non deliberatamente modificato per mezzo di un
cazioni o contesti. progetto particolare di formulazione e/o metodo di
Questo glossario viene dato per informazione. produzione. Nel caso di una forma farmaceutica solida,
l'andamento di dissoluzione del principio attivo
dipende essenzialmente dalle sue proprieta© intrinseche.

ivittaeR
Termini standard Termine equivalente: forma farmaceutica a rilascio
Termini di riferimento per descrivere la forma farma- immediato.
ceutica di un prodotto medicinale, le vie di sommini-
strazione e i contenitori usati. Tali termini sono stati
stabiliti dalla Commissione della Farmacopea Europea

itnemogrA
Forme farmaceutiche a rilascio modificato

ilareneG
e sono forniti in una pubblicazione a parte sui termini Le forme farmaceutiche a rilascio modificato sono pre-
standard. parazioni in cui la velocita© e/o il sito di rilascio del/dei
principi attivi sono differenti da quella di una forma
farmaceutica convenzionale somministrata per la stessa

eifargonoM
Sostanza attiva
via. Questa deliberata modificazione si ottiene con uno

ilareneG
La sostanza attiva e© qualunque componente di una pre- speciale progetto di formulazione e/o metodo di produ-
parazione medicinale destinato a conferirle attivita© far- zione. Le forme farmaceutiche a rilascio modificato
macologica o altro effetto diretto di diagnosi, tratta- comprendono le forme a rilascio prolungato, a rilascio
mento o prevenzione di malattie oppure ad agire farma- ritardato e a rilascio ripetuto.

ehcituecamraF
cologicamente sulla struttura o sulle funzioni del corpo

emroF
umano o animale. Un preparato medicinale puo© conte-
nere piu© di un principio attivo. Termini equivalenti: com- Forme farmaceutiche a rilascio prolungato

ponente attivo, farmaco, sostanza medicinale.

Le forme farmaceutiche a rilascio prolungato sono
forme di dosaggio a rilascio modificato che mostrano

eiretaM
un rilascio della/e sostanze attive piu© lento di quello di

emirP
Eccipiente

Un eccipiente e© qualunque componente, diverso dal/dai una forma di dosaggio convenzionale somministrata
principio/i attivo/i presente in una preparazione medi- verso stessa
per la via. Il rilascio prolungato si ottiene attra-
cinale o usato nella produzione della preparazione. metodo di produzione.progetto
uno speciale di formulazione e/o
La funzione di un eccipiente e© quella di operare come dosaggio a rilascio protratto. equivalente: forma di
Termine
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

il vettore (veicolo o base) o come un componente del

vettore del/i principio/i attivo/i e, in questo modo, con-
tribuire alle caratteristiche del prodotto, come stabilita© ,
profilo biofarmaceutico, aspetto e gradimento da parte Forme farmaceutiche a rilascio ritardato
ehcitapoemO
inoizaraperP

del paziente e di facilitare l'allestimento della prepara- Le forme farmaceutiche a rilascio ritardato sono forme
zione. Di norma, nella formulazione di una prepara- di dosaggio a rilascio modificato che mostrano un rila-
zione medicinale, si usa piu© di un eccipiente. scio della/e sostanze attive che e© ritardato. Il rilascio
ritardato si ottiene con uno speciale progetto di formu-
lazione e/o metodo di produzione. Le forme di dosag-
Veicolo
gio a rilascio ritardato comprendono preparazioni
ecidnI

Un veicolo e© il vettore, costituito da uno o piu© eccipienti, gastroresistenti come definite nelle monografie generali
per la/le sostanze attive in una preparazione liquida. sulle forme farmaceutiche solide per uso orale.

653
Capsule

Forme farmaceutiche a rilascio ripetuto

0016

Le forme farmaceutiche a rilascio ripetuto sono forme

di dosaggio a rilascio modificato che mostrano un rila-
scio sequenziale ripetuto del/dei principi attivi. Il rila-
scio ripetuto si ottiene con uno speciale progetto di for- CAPSULE
mulazione e/o metodo di produzione.
Capsulae
Parenterali a largo volume Le specifiche di questa monografia non si applicano
Infusioni e iniettabili forniti in contenitori con un con- necessariamente
destinate ad un
a preparazioni presentate come capsule
uso diverso dalla somministrazione orale.
tenuto nominale di piu© di 100 ml. Le specifiche per tali preparazioni si possono trovare,
quando appropriato, in altre monografie generali, per
Parenterali a piccolo volume esempio Preparazioni rettali (1145) e Preparazioni vagi-
Infusioni e iniettabili forniti in contenitori con un con- nali (1164).
tenuto nominale di 100 ml o meno.
In questo capitolo sono presentate le seguenti monografie DEFINIZIONE
sulle forme farmaceutiche raggruppate in base all'uso Le capsule sono preparazioni solide con involucri duri
orale, uso cutaneo, usi specifici ed uso veterinario. o molli di varie forme e capacita© , contenenti usual-
Capsule (0016) mente una dose unica di principio attivo. Sono desti-
Compresse (0478) nate alla somministrazione orale.
Gomme da masticare medicate (1239) Gli involucri delle capsule sono fatti di gelatina o altre
sostanze, la cui consistenza puo© essere regolata per
Granulati (0499) aggiunta di sostanze come glicerolo o sorbitolo.
Preparazioni liquide per uso orale (0672) Possono essere aggiunti eccipienti come tensioattivi,
Polveri per uso orale (1165) cariche opache, conservanti antimicrobici, dolcificanti,
Bastoncini (1154) coloranti autorizzati dalla competente autorita© e aro-
Cerotti transdermici (1011) matizzanti. Le capsule possono avere sulla superficie
delle marcature.
Preparazioni liquide per applicazione cutanea (0927) I contenuti delle capsule possono essere di consistenza
Polveri per applicazione cutanea (1166) solida, liquida o pastosa; consistono di uno o piu© prin-
Preparazioni semisolide per applicazione cutanea (0132) cipi attivi con o senza eccipienti come solventi, diluenti,
Schiume medicate (1105) lubrificanti e disaggreganti. I contenuti non devono
Preparazioni auricolari (0652) causare alterazione dell'involucro. Questo, tuttavia,
viene attaccato dai fluidi digestivi cos|© che siano liberati
Preparazioni farmaceutiche pressurizzate (0523) i contenuti.
Preparazioni nasali (0676) Se del caso, i contenitori per capsule soddisfano alle
Preparazioni oftalmiche (1163) specifiche dei Materiali usati nella fabbricazione di
Preparazioni oromucosali (1807) contenitori (3.1. e sottosezioni) e Contenitori (3.2. e sot-
Preparazioni parenterali (0520) tosezioni).
Preparazioni per inalazione (0671) Si possono distinguere varie categorie di capsule:
Preparazioni per irrigazione (1116) ^ capsule rigide,
Preparazioni rettali (1145) ^ capsule molli,
Preparazioni vaginali (1164) ^ capsule a rilascio modificato,
Tamponi medicati (1155) ^ capsule gastroresistenti,
Dispositivi intraruminali (1228) ^ cialdini.
Premiscele per mangimi medicati per uso veterinario
(1037) PRODUZIONE
Preparazioni intramammarie per uso veterinario (0945) Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
Preparazioni liquide veterinarie per applicazione cutanea zione e nella distribuzione delle capsule, si adottano
(1808) misure atte ad assicurare la loro qualita© microbiolo-

654
 Capsule

inoizircserP
gica; raccomandazioni al riguardo sono fornite nel Utilizzare come liquido acqua R. Se giustificato ed

ilareneG
testo Requisiti microbiologici delle preparazioni farma- autorizzato, puo© essere usato come mezzo liquido acido
ceutiche (5.1.4). cloridrico 0,1 M oppure succo gastrico artificiale R.
Se le capsule galleggiano sulla superficie dell'acqua, si
puo© aggiungere un disco. Se non diversamente giustifi-
SAGGI cato e autorizzato, azionare l'apparecchio per 30 min

isilanA id
idoteM
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non e© diversamente ed
al
esaminare lo stato delle capsule. Queste soddisfano
saggio se tutte e sei sono disaggregate.
prescritto o giustificato e autorizzato, le capsule con
un contenuto in principio attivo inferiore a 2 mg o infe-
riore al 2 per cento della massa totale soddisfano al sag-
gio B per l'uniformita© di contenuto di preparazioni a

irotinetnoC
/ ilairetaM
dose unica. Se la preparazione ha piu© di un principio
attivo, la specifica si applica solo a quei principi che
corrispondono alle condizioni sopracitate. Capsule molli
Uniformita© di massa (2.9.5). Le capsule soddisfano al
saggio per l'uniformita© di massa di preparazioni a dose
unica. Se per tutti i principi attivi e© prescritto il saggio DEFINIZIONE

ivittaeR
per l'uniformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita©
di massa non e© richiesto. Le capsule molli hanno involucri piu© spessi di quelli
. Puo© essere effettuato un saggio idoneo a delle capsule dure. Gli involucri sono costituiti da
dimostrare l'appropriato rilascio del o dei principi un'unica parte e hanno diverse forme.
Dissoluzione

itnemogrA
attivi, per esempio uno dei saggi descritti al Saggio di

ilareneG
dissoluzione per le forme farmaceutiche solide (2.9.3).
Se e© prescritto un saggio di dissoluzione, puo© non essere PRODUZIONE
richiesto un saggio di disaggregazione. Le capsule molli sono generalmente formate, riempite,
saldate in un'unica operazione, ma per uso estempora-

eifargonoM
CONSERVAZIONE

ilareneG
neo l'involucro puo© essere preformato. Il materiale del-
Conservare a temperatura non superiore ai 30 ‘C. l'involucro puo© contenere un principio attivo.
Sostanze liquide possono essere introdotte diretta-
ETICHETTE mente; i solidi sono generalmente disciolti o dispersi in

ehcituecamraF
L'etichetta indica il nome di ogni antimicrobico un veicolo adatto a dare una soluzione o una disper-

emroF
aggiunto. sione di consistenza pastosa.
Si puo© avere parziale migrazione dei costituenti dal
contenuto della capsula all'involucro e viceversa, a
Capsule rigide causa della natura dei materiali e delle superfici di con-
tatto.
eiretaM

emirP
DEFINIZIONE
Le capsule rigide hanno involucri costituiti da due SAGGI
sezioni cilindriche preformate, un'estremita© delle quali
ehcituecamraF

. Le capsule molli soddisfano al saggio

inoizaraperP

ehcificepS

e© arrotondata e chiusa, l'altra e© aperta. Disaggregazione

per la disaggregazione di compresse e capsule (2.9.1).

Utilizzare come liquido acqua R. Se giustificato ed
PRODUZIONE autorizzato, puo© essere usato come mezzo liquido acido
Il o i principi attivi, usualmente allo stato solido (pol- cloridrico 0,1 M oppure succo gastrico artificiale R.
vere o granulati), sono introdotti in una delle sezioni Aggiungere un disco in ogni tubo. Sostanze medicinali
ehcitapoemO
inoizaraperP

che e© poi chiusa facendo scivolare l'altra sezione sopra liquide dispensate in capsule molli possono attaccare il
di essa. La sicurezza della chiusura puo© essere raffor- disco; in questi casi, e quando autorizzato, il disco puo©
zata con mezzi idonei. essere omesso. Se non diversamente giustificato e auto-
rizzato, azionare l'apparecchio per 30 min ed esaminare
SAGGI lo stato delle capsule. Se queste non soddisfano al sag-
gio perchë aderiscono ai dischi, ripetere il saggio su
ecidnI

Disaggregazione . Le capsule rigide soddisfano al saggio altre sei capsule omettendo i dischi. Le capsule soddi-
per la disaggregazione di compresse e capsule (2.9.1). sfano al saggio se tutte e sei sono disaggregate.

655
Compresse

Capsule a rilascio modificato pancreas polvere R per 100 ml di soluzione tampone).

Aggiungere un disco in ogni tubo, azionare l'apparec-
chio per 60 min ed esaminare lo stato delle capsule.
DEFINIZIONE Se queste non soddisfano al saggio perchë aderiscono
Le capsule a rilascio modificato sono capsule rigide o ai dischi, ripetere il saggio su altre sei capsule trala-
molli in cui i contenuti o l'involucro o entrambi conten- sciando i dischi. Soddisfano al saggio se tutte e sei sono
gono eccipienti speciali oppure sono preparate con pro- disaggregate.
cedimento particolare che modifichi la velocita© , il sito . Per capsule preparate da granuli o parti-
o il tempo al quale vengono rilasciati il o i principi
Dissoluzione

celle gia© ricoperte con rivestimento gastroresistente,

attivi. si effettua un saggio adatto a dimostrare l'appropriato
Le capsule a rilascio modificato includono le capsule a rilascio del o dei principi attivi, per esempio il saggio
rilascio prolungato e le capsule a rilascio ritardato. descritto al Saggio di dissoluzione per le forme farmaceu-
tiche solide (2.9.3).
PRODUZIONE
Si effettua un saggio adatto a dimostrare l'appropriato
rilascio del o dei principi attivi.
Cialdini
Capsule gastroresistenti DEFINIZIONE
I cialdini sono preparazioni solide costituite da un invo-
DEFINIZIONE lucro duro contenente una dose unica di uno o piu© prin-
cipi attivi. L'involucro del cialdino e© fatto di pane
Le capsule gastroresistenti sono capsule a rilascio ritar- azzimo usualmente di farina di frumento e consiste di
dato preparate in modo da resistere al fluido gastrico due sezioni cilindriche appiattite preformate.
ed a rilasciare il o i loro principi attivi nel fluido intesti-
Prima della somministrazione, i cialdini sono immersi
nale. Sono usualmente preparate riempiendo le capsule in acqua per pochi secondi, posti sulla lingua e inghiot-
con granulati o con particelle provviste di un rivesti- titi con un sorso d'acqua.
mento gastro-resistente o, in certi casi, ricoprendo le
capsule rigide o molli con un rivestimento gastroresi-
stente (capsule enteriche). ETICHETTE
L'etichetta fissa il metodo di somministrazione dei cial-
PRODUZIONE dini.
Per capsule riempite con granuli o con particelle rico-
perte con un rivestimento gastroresistente, si effettua
un saggio adatto a dimostrare l'appropriato rilascio
del o dei principi attivi. 0478

SAGGI
Disaggregazione . Per capsule con involucro gastroresi-
stente effettuare il saggio di disaggregazione (2.9.1) con COMPRESSE

le seguenti modifiche. Utilizzare come liquido acido clo- Compressae

ridrico 0,1 M e azionare l'apparecchio per 2 h o altro
tempo similare che possa essere autorizzato, senza i Le specifiche di questa monografia non si applicano
dischi. Esaminare lo stato delle capsule. Il tempo di necessariamente a preparazioni presentate come com-
resistenza al mezzo acido varia secondo la formula- presse destinate ad uso diverso dalla somministrazione
zione delle capsule in esame. Normalmente e© di 2-3 h orale. Le specifiche per tali preparazioni si possono tro-
ma, anche con deviazioni autorizzate, non puo© essere vare, quando appropriato, in altre monografie generali,
inferiore ad 1 h. Nessuna capsula mostra segni di disag- per esempio: Preparazioni rettali (1145), Preparazioni
gregazione o di rottura che permettano fuoriuscita dei vaginali (1164) e Preparazioni oromucosali (1807).
contenuti. Sostituire l'acido con tampone fosfato solu- Questa monografia non si applica a tavolette, liofilizzati,
zione a pH 6,8 R. Quando giustificato ed autorizzato paste o gomme per uso orale. Se giustificato e autoriz-
puo© essere usata una soluzione tampone a pH 6,8 addi- zato, le specifiche di questa monografia non si applicano
zionata di pancreas in polvere (per esempio, 0,35 g di alle compresse per uso veterinario.

656
 Compresse

inoizircserP
DEFINIZIONE delle forme farmaceutiche a dose unica (2.9.6) o al saggio

ilareneG
Le compresse sono preparazioni solide contenenti cia- per l'Uniformita© di massa delle forme farmaceutiche a
scuna una dose unica di uno o piu© principi attivi e otte- dose unica (2.9.5), secondo il caso.
nute usualmente per compressione di volumi uniformi Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
di particelle. Sono destinate alla somministrazione zione e nella distribuzione delle compresse si adottano
opportune misure atte ad assicurare la loro qualita©

isilanA id
orale. Alcune vengono inghiottite intere, alcune dopo

idoteM
essere state masticate, altre sono disciolte o disperse in microbiologica; raccomandazioni al riguardo sono for-
acqua prima della somministrazione e altre ancora nite nel testo Requisiti microbiologici delle preparazioni
sono tenute in bocca, dove viene liberato il principio farmaceutiche (5.1.4).
attivo.

irotinetnoC
SAGGI

/ ilairetaM
Le particelle sono formate da uno o piu© componenti
attivi con o senza eccipienti come diluenti, leganti, (2.9.6). Se non diversamente
disaggreganti, sostanze atte a favorire lo scorrimento, Uniformita© di contenuto

prescritto o giustificato e autorizzato, le compresse con

lubrificanti, sostanze in grado di modificare il compor- un contenuto in principio attivo inferiore a 2 mg o infe-
tamento della preparazione nel tubo digerente, colo- riore al 2 per cento della massa totale soddisfano al sag-
ranti autorizzati e aromatizzanti. gio A per l'uniformita© di contenuto per le preparazioni

ivittaeR
Le compresse sono di norma cilindri solidi regolari, con a dose unica. Se la preparazione ha piu© di un principio
le superfici di base piane o convesse e con i bordi che attivo, la specifica si applica solo a quei principi che
possono essere smussati. Possono avere linee o segni di rispondono alle condizioni sopracitate.
rottura e possono portare un simbolo o altri marchi. Se non diversamente giustificato e autorizzato, le com-
Possono essere rivestite. presse rivestite, diverse da quelle rivestite con film,

itnemogrA
ilareneG
Quando richiesto, i contenitori per compresse soddi- soddisfano al saggio A per l'Uniformita© di contenuto
sfano alle specifiche dei Materiali usati nella fabbrica- delle forme farmaceutiche a dose unica (2.9.6.),
zione di contenitori (3.1. e sottosezioni) e Contenitori indipendentemente dal loro contenuto in principi
(3.2. e sottosezioni). attivi.
Si possono distinguere varie categorie di compresse per (2.9.5). Le compresse non rivestite

eifargonoM

ilareneG
uso orale:
Uniformita© di massa

e, se non diversamente giustificato e autorizzato, le

^ compresse non rivestite, compresse rivestite con film soddisfano al saggio per
^ compresse rivestite, l'uniformita© di massa di preparazioni in dose unica.
^ compresse effervescenti, Se per tutti i principi attivi e© prescritto il saggio per l'u-

ehcituecamraF
^ compresse solubili, niformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita© di
massa non e© richiesto.

emroF
^ compresse dispersibili, . Puo© essere effettuato un idoneo saggio
^ compresse orodispersibili, Dissoluzione

atto a dimostrare l'appropriato rilascio del o dei prin-

^ compresse a rilascio modificato, cipi attivi, per esempio uno dei saggi descritti al Saggio
^ compresse gastroresistenti, di dissoluzione per le forme farmaceutiche solide (2.9.3).
^ compresse da utilizzare nella cavita© buccale. Se e© prescritto un saggio di dissoluzione, puo© non essere
eiretaM

emirP
richiesto un saggio di disaggregazione.
PRODUZIONE
Le compresse sono preparate usualmente per compres- Compresse non rivestite
ehcituecamraF

sione di volumi uniformi di particelle o di aggregati di

inoizaraperP

ehcificepS

particelle ottenuti per granulazione. Nella produzione

di compresse si adottano opportune misure atte ad assi- DEFINIZIONE
curare che abbiano sufficiente resistenza meccanica
per evitare sbriciolamenti o rotture nelle manipolazioni Le compresse non rivestite comprendono compresse a
o trattamenti successivi. Questo puo© essere dimostrato singolo strato, risultanti da una singola compressione
ehcitapoemO
inoizaraperP

per mezzo dei saggi Friabilita© delle compresse non rive- di particelle e compresse multistrato costituite da strati
stite (2.9.7) e Resistenza alla rottura delle compresse concentrici o paralleli ottenuti per successiva compres-
(2.9.8). Le compresse masticabili sono preparate in sione di particelle di differente composizione. Gli ecci-
modo da assicurare che vengano facilmente rotte masti- pienti usati non sono specificamente intesi a modificare
cando. Per compresse delle quali e© autorizzata la suddi- il rilascio del principio attivo nei fluidi digestivi.
visione, viene dimostrato in modo esauriente alla com- Le compresse non rivestite sono conformi alla defini-
ecidnI

petente autorita© che le parti ottenute per suddivisione zione generale di compresse. Una sezione, esaminata
soddisfano o al saggio A per l'Uniformita© di contenuto mediante una lente, mostra o una struttura relativa-

657
Compresse

mente uniforme (compresse monostrato) o una strut- disaggregata, ripetere il saggio su altre sei compresse,
tura stratificata (compresse multistrato) ma nessun sostituendo l'acqua R con acido cloridrico 0,1 M.
segno di rivestimento. Le compresse soddisfano al saggio se tutte e sei sono
disaggregate nel mezzo acido.
SAGGI Le compresse rivestite con film soddisfano al saggio di
. Le compresse non rivestite soddi- disaggregazione prescritto per le compresse non rive-
sfano al saggio per la disaggregazione di compresse e stite, con la differenza che, se non e© diversamente giusti-
Disaggregazione

capsule (2.9.1). Utilizzare come liquido acqua R. ficato e autorizzato, si aziona l'apparecchio per 30 min.
Mettere un disco in ciascun tubo. Se non diversamente Se le compresse rivestite o rivestite con film non soddi-
giustificato e autorizzato, azionare l'apparecchio per sfano al saggio per l'aderenza ai dischi, ripetere il sag-
15 min, ed esaminare lo stato delle compresse. gio su altre sei compresse, senza i dischi. Le compresse
Se le compresse non soddisfano al saggio a causa del- soddisfano al saggio se tutte e sei sono disaggregate.
l'aderenza al disco, ripetere il saggio su altre sei com- Le compresse rivestite masticabili non devono soddisfare
presse senza i dischi. Le compresse soddisfano al saggio al saggio.
se tutte e sei sono disaggregate.
Le compresse masticabili non devono soddisfare al
saggio.
Compresse effervescenti
Compresse rivestite
DEFINIZIONE
DEFINIZIONE Le compresse effervescenti sono compresse non rive-
Le compresse rivestite sono compresse ricoperte con stite contenenti generalmente sostanze acide e carbo-
uno o piu© strati di miscele di varie sostanze come resine nati o bicarbonati che reagiscono rapidamente in pre-
naturali o sintetiche, gomme, gelatina, cariche inattive senza di acqua sviluppando anidride carbonica. Sono
e insolubili, zuccheri, plastificanti, polioli, cere, colo- destinate ad essere disciolte o disperse in acqua prima
ranti autorizzati e talvolta aromatizzanti e principi della somministrazione.
attivi. Le sostanze usate come rivestimento sono di
norma applicate come soluzione o sospensione in con-
dizioni in cui si abbia evaporazione del veicolo. SAGGI
Quando il rivestimento e© costituito da uno strato poli- . Porre una compressa in un recipiente
merico molto sottile, le compresse sono dette com- Disaggregazione

contenente 200 ml di acqua R a 15-25 ‘C: si svolgono

presse rivestite con film. numerose bolle di gas. Quando cessa l'effervescenza
Le compresse rivestite hanno una superficie liscia che e© intorno alla compressa o ai suoi frammenti, la com-
spesso colorata e puo© essere lucidata; una sezione, esa- pressa e© disaggregata, essendo o dispersa o disciolta
minata mediante una lente, mostra un nucleo circon- nell'acqua, cos|© che non rimangono agglomerati di par-
dato da uno o piu© strati continui con differente strut- ticelle. Ripetere l'operazione su altre cinque compresse.
tura. Se non diversamente giustificato e autorizzato, le com-
presse soddisfano al saggio se ciascuna delle sei com-
PRODUZIONE presse utilizzate disaggrega nella maniera prescritta
Se giustificato, l'uniformita© di massa o l'uniformita© di entro 5 min.
contenuto di compresse rivestite, diverse da quelle rive-
stite con film, puo© essere assicurata per mezzo del con-
trollo dei nuclei.
Compresse solubili
SAGGI
Disaggregazione . Le compresse rivestite, ma non quelle DEFINIZIONE
rivestite con film, soddisfano al saggio per la disaggre-
gazione di compresse e capsule (2.9.1). Utilizzare come Le compresse solubili sono compresse non rivestite o
liquido acqua R. Mettere un disco in ciascun tubo. rivestite con film. Sono destinate ad essere disciolte in
Azionare l'apparecchio per 60 min, se non diversa- acqua prima della somministrazione. La soluzione otte-
mente giustificato e autorizzato, ed esaminare lo stato nuta puo© essere leggermente opalescente a causa degli
delle compresse. Se qualcuna delle compresse non e© additivi utilizzati nella produzione delle compresse.

658
 Compresse

inoizircserP
SAGGI Le compresse a rilascio modificato comprendono com-

ilareneG
Disaggregazione. Le compresse solubili disaggregano presse
scio
a rilascio prolungato, a rilascio ritardato, a rila-
pulsatile.
entro 3 min quando sono sottoposte al saggio per la
disaggregazione delle compresse e delle capsule (2.9.1)
ma usando acqua R a 15-25 ‘C. PRODUZIONE

isilanA id
Si effettua un saggio opportuno per dimostrare l'appro-

idoteM
priato rilascio del o dei principi attivi.
Compresse dispersibili
Compresse gastroresistenti

irotinetnoC
/ ilairetaM
DEFINIZIONE
Le compresse dispersibili sono compresse non rivestite DEFINIZIONE
o rivestite con film destinate ad essere disperse in acqua Le compresse gastroresistenti sono compresse a rilascio
prima della somministrazione dando una dispersione ritardato preparate per resistere al fluido gastrico e rila-
omogenea. sciare il o i loro principi attivi nel fluido intestinale.

ivittaeR
Sono preparate rivestendo le compresse con una
SAGGI sostanza gastroresistente (compresse a rivestimento
. Le compresse dispersibili disaggre- enterico) o da granuli o particelle gia© ricoperti con un
Disaggregazione

gano entro 3 min quando sono sottoposte al saggio per rivestimento gastroresistente.
Le compresse ricoperte con un rivestimento gastroresi-

itnemogrA
la disaggregazione delle compresse e delle capsule

ilareneG
(2.9.1) ma usando acqua R a 15-25 ‘C. stente sono conformi alla definizione di compresse rive-
Finezza della . Porre due compresse in
dispersione
stite.
100 ml di acqua R e agitare finchë sono completamente
disperse. Si ottiene una dispersione omogenea, che PRODUZIONE

eifargonoM
passa attraverso un setaccio con apertura nominale Per le compresse preparate da granuli o particelle gia©

ilareneG
delle maglie di 710 mm. ricoperte con rivestimento gastroresistente, si effettua
un saggio adatto a dimostrare l'appropriato rilascio
del o dei principi attivi.
Compresse orodispersibili

ehcituecamraF
SAGGI

emroF
DEFINIZIONE Disaggregazione . Per le compresse ricoperte con un
Le compresse orodispersibili sono compresse non rive- rivestimento gastroresistente si effettua il saggio per la
disaggregazione (2.9.1) con le modifiche seguenti. Usare
stite destinate ad essere poste nella bocca dove si acido cloridrico 0,1 M come liquido; azionare l'apparec-
disperdono rapidamente prima di essere inghiottite. chio per 2 h, o altro tempo simile che sia autorizzato,
eiretaM

emirP
senza i dischi e controllare lo stato delle compresse.
SAGGI Il tempo di resistenza al mezzo acido varia secondo la
Le compresse orodispersibili disag- formulazione delle compresse in esame. Normalmente
Disaggregazione.

gregano entro 3 min quando vengono sottoposte al sag- e© di 2-3 h ma, anche con le deroghe autorizzate, non e©
ehcituecamraF

inferiore a 1 h. Nessuna compressa mostra segni sia di

inoizaraperP

gio per la disaggregazione di compresse e capsule

ehcificepS

(2.9.1). disaggregazione (a parte frammenti di rivestimento)

che di rotture che permetterebbero la fuoriuscita dei
contenuti. Sostituire l'acido con tampone fosfato solu-
zione a pH 6,8 R e aggiungere un disco in ciascun tubo.
Compresse a rilascio modificato Azionare l'apparecchio per 60 min ed esaminare lo
ehcitapoemO
inoizaraperP

stato delle compresse. Se le compresse non soddisfano

DEFINIZIONE al saggio a causa dell'aderenza ai dischi, ripetere il sag-
gio su altre sei compresse omettendo i dischi. Le com-
Le compresse a rilascio modificato sono compresse presse soddisfano al saggio se tutte e sei sono disaggre-
rivestite o non, contenenti eccipienti speciali o prepa- gate.
rate con procedimenti speciali che, separatamente o Dissoluzione . Per compresse preparate da granuli o par-
ecidnI

insieme, sono studiati per modificare la velocita© , il sito ticelle gia© rivestite con una sostanza gastroresistente, si
o il tempo al quale il o i principi attivi sono rilasciati. effettua un saggio adatto a dimostrare l'appropriato

659
Granulati

rilascio del/dei principi attivi, per esempio il saggio Le gomme da masticare medicate, se necessario, pos-
descritto al Saggio di dissoluzione per le forme farmaceu- sono essere ricoperte ad esempio per proteggerle dal-
tiche solide (2.9.3). l'umidita© e dalla luce.
Se non diversamente giustificato ed autorizzato, viene
effettuato un saggio idoneo a dimostrare l'appropriato
rilascio del o dei principi attivi.
Compresse da utilizzare nella cavita© buccale Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
zione e nella distribuzione delle gomme da masticare
medicate, si adottano misure atte ad assicurare la loro
DEFINIZIONE qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo
Le compresse da utilizzare nella cavita© buccale sono, di sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre-
norma, compresse non rivestite. Sono formulate in parazioni farmaceutiche (5.1.4).
modo da dare un rilascio lento e azione locale del o dei
principi attivi o il rilascio e assorbimento in una zona SAGGI
definita della bocca. Soddisfano alle specifiche della (2.9.6). Se non diversamente
manografia Preparazioni oromucosali (1807). Uniformita© di contenuto

prescritto o giustificato e autorizzato, le gomme da

masticare medicate con un contenuto in principio
attivo inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per cento della
massa totale soddisfano al saggio A per l'uniformita© di
1239 contenuto delle forme farmaceutiche a dose unica.
Se la preparazione contiene piu© di un principio attivo,
la specifica si applica solo a quei principi attivi che cor-
rispondono alle condizioni sopracitate.
GOMME DA MASTICARE MEDICATE Uniformita© di massa (2.9.5). Le gomme da masticare
Masticabilis cummis medicata medicate non rivestite e, se non diversamente giustifi-
cato ed autorizzato, le gomme da masticare medicate
DEFINIZIONE rivestite soddisfano al saggio per l'uniformita© di massa
delle preparazioni a dose unica. Se per tutti i principi
Le gomme da masticare medicate sono preparazioni attivi e© prescritto il saggio per l'uniformita© di conte-
solide a dose unica con una base costituita essenzial- nuto, il saggio per l'uniformita© di massa non e© richiesto.
mente da gomma, destinate ad essere masticate ma
non inghiottite. CONSERVAZIONE
Contengono uno o piu© principi attivi che vengono rila- Conservare le gomme da masticare medicate non rive-
sciati con la masticazione. Dopo dissoluzione o disper- stite protette dall'umidita© e dalla luce.
sione dei principi attivi nella saliva, le gomme da masti-
care sono destinate:
^ al trattamento locale di affezioni della cavita© buc-
cale,
^ all'azione sistemica dopo assorbimento attraverso 0499

la mucosa buccale o attraverso il tratto gastrointe-

stinale.
GRANULATI
PRODUZIONE Granulata
Le gomme da masticare medicate sono prodotte con Le specifiche per i granulati da usare per la preparazione
una base di gomma da masticare insapore costituita da di soluzioni o sospensioni orali sono date nella monogra-
elastomeri naturali o sintetici. Esse possono contenere fia Preparazioni liquide per uso orale (0672). Se giustifi-
altri eccipienti come agenti di riempimento, emollienti, cato ed autorizzato, le specifiche della presente monogra-
edulcoranti, aromatizzanti, stabilizzanti, plastificanti e fia non si applicano ai granulati per uso veterinario.
sostanze coloranti autorizzate.
Le gomme da masticare medicate sono prodotte per DEFINIZIONE
compressione o rammollimento o fusione delle basi di
gomma e successiva aggiunta di altre sostanze. I granulati sono preparazioni solide costituite da aggre-
In questo ultimo caso, le gomme da masticare sono gati solidi, secchi, di particelle di polvere, sufficiente-
trattate ulteriormente per ottenere l'aspetto desiderato. mente resistenti a manipolazioni energiche. Sono desti-

660
 Granulati

inoizircserP
nati alla somministrazione orale. Possono essere deglu- Granulati effervescenti

ilareneG
titi come tali, masticati oppure disciolti o dispersi in
acqua o in altro liquido adatto prima di essere sommi-
nistrati. DEFINIZIONE
I granulati contengono uno o piu© principi attivi con o I granulati effervescenti sono granulati non rivestiti
senza eccipienti e, se necessario, coloranti autorizzati o contenenti generalmente sostanze acide e carbonati o

isilanA id
idoteM
sostanze aromatizzanti. bicarbonati che reagiscono rapidamente in presenza di
I granulati sono presentati come preparazioni a dose acqua sviluppando anidride carbonica. Sono preparati
unica o multidose. Ciascuna dose di una preparazione per essere disciolti o dispersi in acqua prima della som-
multidose viene dispensata per mezzo di un misurino ministrazione.

irotinetnoC
atto a prelevare la quantita© prescritta. Per i granulati a

/ ilairetaM
dose unica, ogni dose e© racchiusa in un contenitore SAGGI
individuale, per esempio un sacchetto, una cartina o . Porre una dose di granulato efferve-
un flaconcino. Disaggregazione

scente in un recipiente contenente 200 ml di acqua R a

Se del caso, i contenitori per granulati soddisfano alle 15-25 ‘C: si sviluppano numerose bolle di gas. Quando
specifiche per i Materiali usati nella fabbricazione di cessa l'effervescenza intorno ai singoli granuli, questi si

ivittaeR
contenitori (3.1 e sottosezioni) e Contenitori (3.2. e sotto- sono disaggregati, essendo disciolti oppure dispersi nel-
sezioni). l'acqua. Ripetere l'operazione su altre cinque dosi.
Si possono distinguere varie categorie di granulati: La preparazione soddisfa al saggio se ciascuna delle
^ granulati effervescenti, sei dosi utilizzate disaggrega entro 5 min.
^ granulati rivestiti,

itnemogrA
ilareneG
^ granulati a rilascio modificato, CONSERVAZIONE
^ granulati gastroresistenti. Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
PRODUZIONE

eifargonoM

ilareneG
Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
zione e nella distribuzione di granulati si adottano
Granulati rivestiti
opportune misure atte ad assicurare la loro qualita©
microbiologica; raccomandazioni al riguardo sono for- DEFINIZIONE

ehcituecamraF
nite nel testo Requisiti microbiologici delle preparazioni I granulati rivestiti sono generalmente preparazioni
farmaceutiche (5.1.4).

emroF
multidose costituite da granuli rivestiti da uno o piu©
strati di miscele di vari eccipienti.
SAGGI
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non e© diversamente PRODUZIONE
prescritto o giustificato e autorizzato, i granulati a dose Le sostanze usate per il rivestimento sono di norma
eiretaM

emirP
unica con un contenuto in principio attivo inferiore a applicate come soluzione o sospensione in condizioni
2 mg o inferiore al 2 per cento della massa totale soddi- che favoriscono l'evaporazione del solvente.
sfano al saggio B per l'uniformita© di contenuto di pre-
parazioni a dose unica. Se la preparazione ha piu© di un SAGGI
ehcituecamraF

principio attivo, la specifica si applica solo a quei prin-

inoizaraperP

ehcificepS

cipi che corrispondono alle condizioni sopracitate. Dissoluzione . Puo© essere effettuato un saggio idoneo a
(2.9.5). I granulati a dose unica, dimostrare l'appropriato rilascio del o dei principi
attivi, per esempio uno dei saggi descritti al Saggio di
Uniformita© di massa

con eccezione dei granulati rivestiti, soddisfano al sag-

gio per l'uniformita© di massa di preparazioni a dose dissoluzione per le forme farmaceutiche solide (2.9.3).
unica. Se per tutti i principi attivi e© prescritto il saggio
ehcitapoemO
inoizaraperP

per l'uniformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita©

di massa non e© richiesto.
Granulati a rilascio modificato
CONSERVAZIONE
Se la preparazione contiene componenti volatili o se i DEFINIZIONE
ecidnI

contenuti devono essere particolarmente protetti, con- I granulati a rilascio modificato sono granulati rivestiti
servare in un recipiente ermeticamente chiuso. o non rivestiti, preparati con eccipienti speciali o con

661
Preparazioni liquide per uso orale

procedimenti speciali che, separatamente o insieme, Alcune preparazioni liquide per uso orale sono ottenute
sono studiati per modificare la velocita© , il sito o il per diluizione di preparazioni liquide concentrate o da
tempo al quale il o i principi attivi sono rilasciati. polveri o granulati per la preparazione di soluzioni o
I granulati a rilascio modificato comprendono granu- sospensioni orali oppure di gocce orali o sciroppi, uti-
lati a rilascio prolungato e granulati a rilascio ritardato. lizzando un veicolo adatto.
Il veicolo per ogni preparazione per uso orale e© scelto in
PRODUZIONE funzione della natura del o dei principi attivi e per dare
caratteristiche organolettiche adatte all'uso previsto
Si effettua un saggio adatto a dimostrare l'appropriato della preparazione.
rilascio del o dei principi attivi. Le preparazioni liquide per uso orale possono conte-
nere adatti antimicrobici, antiossidanti e altri eccipienti
come sostanze disperdenti, sospendenti, addensanti,
Granulati gastroresistenti emulsionanti, tamponanti, bagnanti, solubilizzanti,
stabilizzanti, aromatizzanti, dolcificanti e coloranti
autorizzati dall'autorita© competente.
DEFINIZIONE Le emulsioni possono presentare segni di separazione
I granulati gastroresistenti sono granulati a rilascio di fase ma sono facilmente ricostituite per agitazione.
ritardato preparati in modo che resistano al fluido Le sospensioni possono presentare un sedimento che si
gastrico e rilascino il o i principi attivi nel fluido intesti- disperde facilmente dopo agitazione, per dare una
nale. Queste proprieta© si ottengono ricoprendo i granu- sospensione che rimane sufficientemente stabile da per-
lati con una sostanza gastroresistente (granulati a rive- mettere il rilascio della dose corretta.
stimento enterico) o con altri idonei mezzi. Se del caso, i contenitori per preparazioni liquide per
uso orale soddisfano alle specifiche dei Materiali usati
PRODUZIONE per la fabbricazione di contenitori (3.1. e sottosezioni) e
Si effettua un saggio adatto a dimostrare l'appropriato Contenitori (3.2. e sottosezioni).
rilascio del o dei principi attivi o componenti. Si possono distinguere parecchie categorie di prepara-
zioni:
SAGGI ^ soluzioni, emulsioni e sospensioni orali,
^ polveri e granulati per soluzioni e sospensioni
Dissoluzione . Effettuare un saggio adatto a dimostrare orali,
l'appropriato rilascio del o dei principi attivi, per esem- ^ gocce per uso orale,
pio il saggio descritto al Saggio di dissoluzione per le ^ polveri per gocce orali,
forme farmaceutiche solide (2.9.3).
^ sciroppi,
^ polveri e granulati per sciroppi.
0672 PRODUZIONE
Durante lo sviluppo di una preparazione per uso orale,
la cui formulazione contenga un antimicrobico, dovra©
essere dimostrata in modo esauriente all'autorita© com-
PREPARAZIONI LIQUIDE
petente l'efficacia del conservante scelto. Un idoneo
PER USO ORALE
metodo con i criteri per la valutazione delle proprieta©
Praeparationes liquidae perorales conservanti della formulazione e© riportato nel testo
Se giustificato ed autorizzato, le specifiche di questa Efficacia della conservazione antimicrobica (5.1.3).
monografia non si applicano a preparazioni liquide per Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
uso orale destinate all'uso veterinario. zione e nella distribuzione di preparazioni liquide per
uso orale, si adottano opportune misure atte ad assicu-
rare la loro qualita© microbiologica; raccomandazioni
DEFINIZIONE al riguardo sono fornite nel testo Requisiti microbiolo-
Le preparazioni liquide per uso orale sono general- gici delle preparazioni farmaceutiche (5.1.4).
mente soluzioni, emulsioni o sospensioni che conten- Nella produzione di preparazioni liquide per uso orale
gono uno o piu© principi attivi in un veicolo adatto; pos- contenenti particelle disperse, sono prese misure atte
sono tuttavia essere costituiti da principi attivi liquidi ad assicurare una idonea e controllata dimensione delle
usati come tali (liquidi orali). particelle in relazione all'uso previsto.

662
 Preparazioni liquide per uso orale

inoizircserP
SAGGI Polveri e granulati per soluzioni

ilareneG
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non e© diversamente e sospensioni orali
prescritto o giustificato e autorizzato, le preparazioni
liquide a dose unica costituite da sospensioni soddi- DEFINIZIONE
sfano al saggio seguente. Dopo agitazione, vuotare cia-

isilanA id
Le polveri e i granulati per la preparazione di soluzioni

idoteM
scun contenitore il piu© quantitativamente possibile ed o sospensioni per uso orale generalmente corrispon-
effettuare il saggio sui singoli contenuti. Questi soddi- dono alle definizioni date nelle monografie Polveri per
sfano al saggio B per l'uniformita© di contenuto delle uso orale (1165) e Granulati (0499), rispettivamente.
preparazioni a dose unica. Possono contenere eccipienti, in particolare per facili-
. Le preparazioni a dose unica che

irotinetnoC
tare la dispersione o la dissoluzione e per prevenire la

/ ilairetaM
Uniformita© di massa

siano soluzioni o emulsioni soddisfano al saggio sedimentazione.

seguente: pesare singolarmente il contenuto di venti Dopo dissoluzione o sospensione, soddisfano alle spe-
contenitori, vuotati il piu© quantitativamente possibile, cifiche per le soluzioni o per le sospensioni orali.
e determinare la massa media. Non piu© di due delle
masse singole deviano piu© del 10 per cento dalla massa
media e nessuna piu© del 20 per cento. SAGGI

ivittaeR
. In un adatto Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non e© diversamente
prescritto o giustificato e autorizzato, le polveri a dose
Dose e uniformita© di dose di gocce orali

cilindro graduato introdurre, col contagocce, il numero

di gocce usualmente prescritto per una dose, o intro- unica e i granulati a dose unica con un contenuto in
durre col misuratore la quantita© usualmente prescritta. principio attivo inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per

itnemogrA
cento della massa totale soddisfano al saggio B per

ilareneG
La velocita© di gocciolamento non supera due gocce al
secondo. Pesare il liquido, ripetere l'aggiunta, pesare di l'uniformita© di contenuto delle preparazioni a dose
nuovo e andare avanti ripetendo l'aggiunta e la pesata unica. Se la preparazione ha piu© di un principio attivo,
fino ad ottenere un totale di dieci masse. Nessuna la specifica si applica solo a quei principi che corrispon-
massa singola devia piu© del 10 per cento dalla massa dono alle condizioni sopracitate.

eifargonoM
media. Il totale delle dieci masse non differisce piu© del (2.9.5). Le polveri e i granulati a

ilareneG
Uniformita© di massa

15 per cento dalla massa nominale di dieci dosi. dose unica soddisfano al saggio per l'uniformita© di
Se necessario, misurare il volume totale di dieci dosi. massa di preparazioni a dose unica. Se per tutti i prin-
Il volume non differisce piu© del 15 per cento dal volume cipi attivi e© prescritto il saggio per l'uniformita© di
nominale di dieci dosi. contenuto, il saggio per l'uniformita© di massa non e©

ehcituecamraF
(2.9.28). Le preparazioni richiesto.

emroF
Massa o volume rilasciabile

liquide per uso orale fornite in contenitori a dose unica,

soddisfano al saggio. ETICHETTE
L'etichetta indica:
ETICHETTE ^ il metodo di preparazione della soluzione o sospen-
sione,
eiretaM

emirP
L'etichetta indica il nome di ogni conservante antimi- ^ le condizioni e la durata di conservazione dopo la
crobico aggiunto. preparazione. ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Gocce orali
Soluzioni, emulsioni e sospensioni orali
DEFINIZIONE
DEFINIZIONE Le gocce orali sono soluzioni, emulsioni o sospensioni
ehcitapoemO
inoizaraperP

che vengono somministrate in piccoli volumi, come le

Le soluzioni, emulsioni e sospensioni orali sono fornite gocce, per mezzo di un adatto dispositivo.
in contenitori unidose o multidose. Ciascuna dose da
un contenitore multidose e© somministrata per mezzo di ETICHETTE
un dispositivo adatto a misurare il volume prescritto.
Il dispositivo e© in genere un cucchiaio o una tazza per L'etichetta indica il numero di gocce per millilitro di
ecidnI

volumi di 5 ml o multipli oppure una siringa orale per preparazione o per grammo di preparazione, se la dose
altri volumi. e© misurata in gocce.

663
Polveri per uso orale

Polveri per gocce orali Polveri e granulati per sciroppi

DEFINIZIONE DEFINIZIONE
Le polveri per la preparazione di gocce orali general- Le polveri e i granulati per sciroppi generalmente corri-
mente corrispondono alla definizione di Polveri per uso spondono alle definizioni delle monografie Polveri per
orale (1165). Possono contenere eccipienti per facilitare uso orale (1165) o Granulati (0499). Possono contenere
la dissoluzione o sospensione nel liquido prescritto o eccipienti per facilitare la dissoluzione. Dopo dissolu-
per prevenire la sedimentazione. zione, soddisfano alle specifiche per gli sciroppi.
Dopo dissoluzione o sospensione corrispondono alle
specifiche per le gocce orali. SAGGI
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non diversamente
SAGGI prescritto o giustificato e autorizzato, le polveri e i gra-
nulati in dose unica per sciroppi con un contenuto in
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non diversamente principio attivo inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per
prescritto o giustificato e autorizzato, le polveri a dose cento della massa totale soddisfano al saggio B per
unica per gocce orali con un contenuto in principio l'uniformita© di contenuto delle preparazioni a dose
attivo inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per cento della unica. Se la preparazione ha piu© di un principio attivo,
massa totale soddisfano al saggio B per l'uniformita© di la specifica si applica solo a quei principi che corrispon-
contenuto delle preparazioni a dose unica. Se la prepa- dono alle condizioni sopracitate.
razione ha piu© di un principio attivo, la specifica si (2.9.5). Le polveri e i granulati a
applica solo a quei principi che corrispondono alle con- Uniformita© di massa

dose unica per sciroppi soddisfano al saggio per l'uni-

dizioni sopracitate. formita© di massa di preparazioni a dose unica.
Uniformita© di massa (2.9.5). Le polveri a dose unica per Se per tutti i principi attivi e© prescritto il saggio per l'u-
gocce orali soddisfano al saggio per l'uniformita© di niformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita© di
massa di preparazioni a dose unica. Se per tutti i prin- massa non e© richiesto.
cipi attivi e© prescritto il saggio per l'uniformita© di
contenuto, il saggio per l'uniformita© di massa non e©
richiesto.
1165

Sciroppi POLVERI PER USO ORALE

Pulveres perorales
DEFINIZIONE
Le specifiche per le polveri da usare per la preparazione
Gli sciroppi sono preparazioni acquose caratterizzate di soluzioni o sospensioni orali sono date nella monogra-
da gusto dolce e viscosita© elevata. Possono contenere fia Preparazioni liquide per uso orale (0672). Se giustifi-
saccarosio ad una concentrazione di almeno il 45 per cato ed autorizzato, le specifiche di questa monografia
cento m/m. Il gusto dolce puo© essere ottenuto anche non si applicano alle polveri per uso orale destinate all'uso
usando altri polioli o dolcificanti. Generalmente gli sci- veterinario.
roppi contengono sostanze aromatiche o aromatiz-
zanti. Ciascuna dose da un contenitore multidose viene
somministrata per mezzo di un dispositivo adatto a DEFINIZIONE
misurare il volume prescritto. Il dispositivo e© usual-
Le polveri per uso orale sono preparazioni costituite da
mente un cucchiaio o una tazza per volumi di 5 ml oparticelle solide, non aggregate, asciutte e di vari gradi
multipli. di finezza. Contengono uno o piu© principi attivi, con o
senza eccipienti e, se necessario, coloranti autorizzati e
ETICHETTE aromatizzanti. Sono generalmente somministrate in o
con acqua o altro liquido adatto. Possono anche essere
L'etichetta indica il nome e la concentrazione del ingerite direttamente. Sono presentate come polveri a
poliolo o del dolcificante. dose unica o multidose.

664
 Bastoncini

inoizircserP
Se del caso, i contenitori per le polveri per uso orale CONSERVAZIONE

ilareneG
soddisfano alle specifiche dei Materiali usati nella fab- Conservare in un recipiente ermeticamente chiuso.
bricazione di contenitori (3.1. e sottosezioni) e Conteni-
tori (3.2. e sottosezioni).
Le polveri orali multidose richiedono la fornitura di un
misurino in grado di dare la quantita© prescritta. Ogni

isilanA id
idoteM
dose di una polvere a dose unica e© racchiusa in un con- 1154

tenitore singolo, per esempio un sacchetto, una cartina

o un flaconcino.

irotinetnoC
PRODUZIONE
BASTONCINI

/ ilairetaM
Styli
Nella produzione di polveri per uso orale, si adottano Ulteriori specifiche per i Bastoncini si possono trovare, se
misure atte a garantire una dimensione particellare necessario, in altre monografie generali, per esempio
adatta all'uso previsto. nella monografia Preparazioni nasali (0676).
Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
zione e nella distribuzione delle polveri per uso orale,

ivittaeR
si adottano opportune misure atte ad assicurare la loro DEFINIZIONE
qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo I bastoncini sono preparazioni solide destinate all'ap-
sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre- plicazione locale. Sono di forma cilindrica o conica e
parazioni farmaceutiche (5.1.4). sono costituiti da uno o piu© principi attivi soli o

itnemogrA
disciolti o dispersi in un eccipiente adatto che puo©

ilareneG
SAGGI disciogliersi o fondere alla temperatura corporea.
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non e© diversamente Idevono
bastoncini uretrali e quelli da introdurre nelle ferite
essere sterili.
prescritto o giustificato e autorizzato, le polveri orali a
dose unica con un contenuto in principio attivo infe-

eifargonoM
riore a 2 mg o inferiore al 2 per cento della massa totale PRODUZIONE

ilareneG
soddisfano al saggio B per l'uniformita© di contenuto Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
per le preparazioni a dose unica. Se la preparazione ha zione e nella distribuzione dei bastoncini si adottano
piu© di un principio attivo, la specifica si applica solo a misure atte ad assicurare la loro qualita© microbiolo-
quei principi che corrispondono alle condizioni sopra- gica; raccomandazioni su questo aspetto sono date nel

ehcituecamraF
citate. testo Requisiti microbiologici delle preparazioni farma-

emroF
Uniformita© di massa (2.9.5). Le polveri orali a dose ceutiche (5.1.4).
unica soddisfano al saggio per l'uniformita© di massa di I bastoncini uretrali e altri bastoncini sterili sono pre-
preparazioni a dose unica. Se per tutti i principi attivi parati utilizzando materiali e metodi adatti ad assicu-
e© prescritto il saggio per l'uniformita© di contenuto, il rare la sterilita© e ad evitare l'introduzione di contami-
saggio per l'uniformita© di massa non e© richiesto. nanti e la crescita di microrganismi; raccomandazioni
eiretaM

emirP
su questo aspetto sono date nel testo Metodi di prepara-
CONSERVAZIONE zione di prodotti sterili (5.1.1).
Nella preparazione dei bastoncini ci si preoccupa di
Se la preparazione contiene componenti volatili, con- assicurare che la preparazione soddisfi un saggio per
ehcituecamraF

servare in un recipiente ermeticamente chiuso.

inoizaraperP

l'uniformita© di massa o, se necessario, per l'uniformita©

ehcificepS

di contenuto.
Polveri effervescenti SAGGI
(2.6.1). I bastoncini uretrali e quelli da intro-
ehcitapoemO
inoizaraperP

Sterilita©

DEFINIZIONE durre nelle ferite, soddisfano al saggio di sterilita© .

Le polveri effervescenti si presentano come polveri a ETICHETTE
dose unica o multidose e generalmente contengono
sostanze acide e carbonati o bicarbonati che reagiscono L'etichetta indica:
rapidamente in presenza di acqua liberando anidride ^ la quantita© del o dei principi attivi per bastoncino,
ecidnI

carbonica. Sono preparate per essere disciolte o ^ per i bastoncini uretrali e per quelli da introdurre
disperse in acqua prima della somministrazione. nelle ferite, che sono sterili.

665
Cerotti transdermici

o metallico. Quando si toglie, questa non deve staccare

1011
la preparazione (matrice o serbatoio) o lo strato ade-
sivo dal cerotto.
I cerotti transdermici sono di norma confezionati sin-
CEROTTI TRANSDERMICI golarmente in sacchetti sigillati.
Emplastra transcutanea
PRODUZIONE
DEFINIZIONE Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
zione e nella distribuzione di cerotti transdermici si
I cerotti transdermici sono preparazioni farmaceutiche adottano opportune misure atte ad assicurare la loro
flessibili di varie dimensioni, contenenti uno o piu© prin- qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo
cipi attivi, da applicare sulla pelle integra per rilasciare sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre-
il o i principi attivi alla circolazione sistemica, dopo parazioni farmaceutiche (5.1.4).
aver attraversato la barriera cutanea.
Sono costituiti normalmente da una protezione esterna SAGGI
che serve da supporto ad una preparazione contenente
il o i principi attivi. La loro superficie di rilascio e© pro- (2.9.6). Se non e© diversamente
tetta da una copertura che viene rimossa prima di Uniformita© di contenuto

prescritto o giustificato e autorizzato, i cerotti transder-

applicare il cerotto alla pelle. mici soddisfano al saggio C per l'uniformita© di conte-
La protezione esterna e© un foglio impermeabile al o ai nuto per le forme farmaceutiche a dose unica.
principi attivi e normalmente impermeabile all'acqua, . Puo© essere richiesto un saggio idoneo a
con funzione di sostegno e di protezione per la prepara- Dissoluzione

dimostrare l'appropriato rilascio del o dei principi

zione. Puo© avere le stesse dimensioni oppure essere piu© attivi, per esempio uno dei saggi descritti al Saggio di
larga del cerotto. In quest'ultimo caso, la parte del dissoluzione per i cerotti transdermici (2.9.4). Si possono
foglio che sporge e© coperta con sostanze adesive per usare il metodo dell'apparecchio a disco, il metodo
pressione che assicurano l'adesione del cerotto alla della cella o il metodo del cilindro rotante, secondo
pelle. l'opportunita© , in funzione della composizione, delle
La preparazione contiene il o i principi attivi insieme dimensioni e forma del cerotto.
con eccipienti come stabilizzanti, solubilizzanti o
sostanze destinate a modificare la velocita© di rilascio o Puo© essere utilizzata una membrana. Essa puo© essere di
ad aumentare l'assorbimento transdermico. Puo© trat- vari materiali come cellulosa porosa inerte o siliconi e
tarsi di una matrice monostrato o multistrato solida o non deve influenzare la cinetica di rilascio del o dei
semisolida e in questo caso sono la composizione e la principi attivi dal cerotto. Inoltre, non deve contenere
struttura della matrice che regolano la diffusione del o sostanze che possono interferire con la sua efficacia
dei principi attivi alla pelle. La matrice puo© contenere (ad esempio grasso). La membrana puo© essere trattata
adesivi a pressione che assicurano l'adesione della pre- in modo opportuno prima della prova, per esempio
parazione alla pelle. La preparazione puo© anche essere mantenendola per 24 h nel mezzo da usare per il saggio.
costituita da un serbatoio semisolido, un lato del quale Si applica la membrana sopra la superficie di rilascio
e© costituito da una membrana che puo© controllare il del cerotto, evitando la formazione di bolle d'aria.
rilascio e la diffusione del o dei principi attivi dalla pre- Le condizioni del saggio e le specifiche devono essere
parazione. Le sostanze adesive per pressione possono, autorizzate dall'autorita© competente.
in questo caso, essere applicate ad alcune o a tutte le
parti della membrana, o solamente intorno al bordo
della membrana a livello della copertura esterna. CONSERVAZIONE
Il cerotto transdermico, quando viene applicato alla
pelle asciutta, pulita e integra, aderisce saldamente per Se non e© diversamente indicato, conservare a tempera-
lieve pressione della mano o delle dita e puo© essere stac- tura ambiente.
cato senza provocare danno apprezzabile alla pelle o
distacco della preparazione dalla protezione esterna. ETICHETTE
Il cerotto non deve essere irritante o sensibilizzante per
la pelle, anche dopo ripetute applicazioni. L'etichetta indica, se del caso, la quantita© totale del o
La copertura protettiva della superficie di rilascio gene- dei principi attivi per cerotto, la dose rilasciata
ralmente e© costituita da un foglio di materiale plastico nell'unita© di tempo e l'area della superficie di rilascio.

666
 Preparazioni liquide per applicazione cutanea

inoizircserP
vante scelto. Un idoneo metodo con i criteri per la valu-

ilareneG
0927
tazione delle proprieta© conservanti della formulazione
e© riportato nel testo Efficacia della conservazione anti-
microbica (5.1.3).
Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-

isilanA id
PREPARAZIONI LIQUIDE PER
zione e nella distribuzione di preparazioni liquide per

idoteM
APPLICAZIONE CUTANEA

Praeparationes liquidae ad usum dermicum applicazione cutanea, si adottano opportune misure

atte ad assicurare la loro qualita© microbiologica; racco-
Se giustificato ed autorizzato, le specifiche di questa mandazioni al riguardo sono fornite nel testo Requisiti
monografia non si applicano alle preparazioni liquide microbiologici delle preparazioni farmaceutiche (5.1.4).

irotinetnoC
/ ilairetaM
per applicazione cutanea destinate all'uso sistemico e Le preparazioni liquide per applicazione cutanea sterili
veterinario. si preparano utilizzando materiali e metodi in grado di
assicurare sterilita© e di evitare l'introduzione di conta-
DEFINIZIONE minanti e la crescita di microrganismi; raccomanda-
zioni al riguardo sono fornite nel testo Metodi di prepa-
Le preparazioni liquide per applicazione cutanea sono razione di prodotti sterili (5.1.1).

ivittaeR
preparazioni di diversa viscosita© da applicare sulla cute Nella produzione di preparazioni liquide per applica-
(incluso il cuoio capelluto) o sulle unghie allo scopo di zione cutanea contenenti particelle disperse, sono prese
ottenere un effetto locale o un'attivita© transdermica. misure atte ad assicurare una idonea e controllata
Sono soluzioni, emulsioni o sospensioni che possono dimensione delle particelle in relazione all'uso previsto.

itnemogrA
contenere uno o piu© principi attivi in un adatto veicolo.

ilareneG
Possono contenere idonei antimicrobici, antiossidanti
e altri eccipienti, quali stabilizzanti, emulsionanti e SAGGI
addensanti. (2.9.28). Le preparazioni
Le emulsioni possono presentare segni di separazione
Massa o volume rilasciabili

liquide per applicazione cutanea fornite in contenitori

eifargonoM
di fase, ma sono facilmente ricostituite per agitazione.

ilareneG
a dose singola soddisfano al saggio.
Le sospensioni possono presentare un sedimento che si (2.6.1). Quando l'etichetta indica che la prepa-
disperde facilmente dopo agitazione per dare una Sterilita©

razione e© sterile, questa soddisfa al saggio di sterilita© .

sospensione che e© sufficientemente stabile da permet-
tere la somministrazione di una preparazione omoge-

ehcituecamraF
nea. CONSERVAZIONE

emroF
Se del caso, i contenitori per preparazioni liquide per Se la preparazione e© sterile, conservare in un recipiente
applicazione cutanea soddisfano alle specifiche dei sterile, ermeticamente chiuso, con chiusura inviolabile.
Materiali usati nella fabbricazione di contenitori (3.1. e
sottosezioni) e Contenitori (3.2. e sottosezioni).
Quando le preparazioni liquide per applicazione cuta- ETICHETTE
eiretaM

emirP
nea sono confezionate in recipienti pressurizzati, i con- L'etichetta indica:
tenitori soddisfano alle specifiche della monografia ^ il nome di ogni antimicrobico aggiunto,
Preparazioni farmaceutiche pressurizzate (0523).
Le preparazioni destinate specificatamente all'applica- ^ se del caso, che la preparazione e© sterile.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

zione su cute gravemente lesa sono sterili.

Si possono distinguere varie categorie di liquidi per
applicazione cutanea: Shampoo
^ shampoo,
ehcitapoemO
inoizaraperP

^ schiume cutanee. DEFINIZIONE

Gli shampoo sono preparazioni liquide o, talora, semi-
PRODUZIONE solide destinate all'applicazione sul cuoio capelluto e
Durante la fase di sviluppo di una preparazione liquida al successivo risciacquo con acqua. Se agitati con acqua
per applicazione cutanea, la cui formulazione contenga generalmente producono schiuma.
ecidnI

un antimicrobico, deve essere dimostrata in modo esau- Consistono in emulsioni, sospensioni o soluzioni; nor-
riente all'autorita© competente l'efficacia del conser- malmente contengono tensioattivi.

667
Preparazioni semisolide per applicazione cutanea

Schiume cutanee adottano opportune misure atte ad assicurare la loro

qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo
sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre-
DEFINIZIONE parazioni farmaceutiche (5.1.4).
Le schiume cutanee soddisfano alle specifiche della Le polveri per applicazione cutanea sterili si preparano
usando materiali e metodi atti ad assicurare la sterilita©
monografia Schiume medicate (1105). ed evitare l'introduzione di contaminanti e la crescita
di microrganismi; raccomandazioni al riguardo sono
fornite nel testo Metodi di preparazione di prodotti sterili
(5.1.1).
1166

SAGGI
Finezza . Se prescritto, la finezza di una polvere si deter-
mina per setacciatura (2.9.12) o con altro metodo
POLVERI PER APPLICAZIONE
appropriato.
(2.9.6). Se non e© diversamente
CUTANEA

Pulveres ad usum dermicum

Uniformita© di contenuto

prescritto o giustificato e autorizzato, le polveri per

Se giustificato e autorizzato, le specifiche di questa mono- applicazione cutanea a dose unica con un contenuto in
grafia non si applicano a polveri per applicazione cutanea principio attivo inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per
destinate all'uso veterinario. cento della massa totale soddisfano al saggio B per
l'uniformita© di contenuto per le preparazioni a dose
unica. Se la preparazione ha piu© di un principio attivo,
DEFINIZIONE la specifica si applica a quei principi attivi che corri-
spondono alle condizioni sopra citate.
Le polveri per applicazione cutanea sono preparazioni Uniformita© di massa (2.9.5). Le polveri per applicazione
costituite da particelle solide, non aggregate, secche, di cutanea a dose unica soddisfano al saggio per l'unifor-
vari gradi di finezza. Contengono uno o piu© principi mita© di massa delle preparazioni a dose unica.
attivi, con o senza eccipienti e, se necessario, coloranti Se per tutti i principi attivi e© prescritto il saggio per l'u-
autorizzati dall'autorita© competente. niformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita© di
Le polveri per applicazione cutanea si presentano come massa non e© richiesto.
polveri a dose unica o come multidose; sono prive di Sterilita©(2.6.1). Quando l'etichetta indica che la prepa-
granulosita© . Le polveri indicate specificamente per razione e© sterile, questa soddisfa al saggio di sterilita© .
l'uso su larghe ferite aperte o su cute gravemente lesa
sono sterili. ETICHETTE
Le polveri per applicazione cutanea multidose possono L'etichetta indica:
essere dispensate in contenitori spargitalco, in conteni- ^ che la preparazione e© per uso esterno,
tori dotati di un sistema spruzzatore meccanico o in ^ se del caso, che la preparazione e© sterile.
contenitori pressurizzati.
Le polveri dispensate in contenitori pressurizzati soddi-
sfano alle specifiche delle Preparazioni farmaceutiche
pressurizzate (0523).
Se del caso, i contenitori per polveri soddisfano alle 0132

specifiche dei Materiali usati nella fabbricazione di con-

tenitori (3.1. e sottosezioni) e Contenitori (3.2. e sottose-
zioni). PREPARAZIONI SEMISOLIDE
PER APPLICAZIONE CUTANEA

PRODUZIONE Unguenta
Nella produzione di polveri per applicazione cutanea, si Le specifiche di questa monografia si applicano a tutte le
adottano misure atte ad assicurare una dimensione par- preparazioni semisolide per applicazione cutanea. Se del
ticellare compatibile con l'uso previsto. Nella produ- caso, ulteriori specifiche per preparazioni semisolide da
zione, nel confezionamento, nella conservazione e nella applicare a superfici particolari o mucose si possono tro-
distribuzione delle polveri per applicazione cutanea, si vare in altre monografie generali, per esempio: Prepara-

668
 Preparazioni semisolide per applicazione cutanea

inoizircserP
zioni auricolari (0652), Preparazioni oftalmiche (1163), zione antimicrobica (5.1.3). Nella produzione, nel confe-

ilareneG
Preparazioni nasali (0676), Preparazioni rettali (1145) e zionamento, nella conservazione e nella distribuzione
Preparazioni vaginali (1164). delle preparazioni semisolide per applicazione cutanea
si adottano opportune misure atte ad assicurare la loro
DEFINIZIONE qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo
sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre-

isilanA id
idoteM
Le preparazioni semisolide per applicazione cutanea parazioni farmaceutiche (5.1.4).
sono destinate al rilascio locale o transdermico di prin- Le preparazioni sterili si preparano utilizzando mate-
cipi attivi, oppure hanno azione emolliente o protettiva. riali e metodi in grado di assicurare la sterilita© e di evi-
Hanno aspetto omogeneo. tare l'introduzione di contaminanti e la crescita di

irotinetnoC
/ ilairetaM
Le preparazioni semisolide per applicazione cutanea microrganismi; raccomandazioni al riguardo sono for-
sono costituite da una base semplice o composta in nite nel testo Metodi di preparazione di prodotti sterili
cui, usualmente, sono disciolti o dispersi uno o piu© (5.1.1).
principi attivi. Secondo la sua composizione, la base Nella produzione di preparazioni semisolide per appli-
puo© influenzare l'azione della preparazione. cazione cutanea, si adottano opportune misure atte ad
Le basi possono essere costituite di sostanze naturali o assicurare che siano soddisfatte le proprieta© reologiche

ivittaeR
sintetiche e possono essere sistemi ad una fase o multi- fissate. Se del caso, si possono effetture i seguenti saggi
fase. Secondo la natura della base, la preparazione puo© non obbligatori: misura della consistenza per penetro-
avere carattere idrofilo o idrofobo (lipofilo), puo© conte- metria (2.9.9), viscosita© (viscosita© apparente) (2.2.10) e
nere additivi adatti come antimicrobici, antiossidanti, un saggio adatto a dimostrare l'appropriato rilascio

itnemogrA
stabilizzanti, emulsionanti, addensanti e sostanze che del/dei principi attivi.

ilareneG
aumentano l'assorbimento. Nella produzione di preparazioni semisolide per appli-
Le preparazioni destinate all'uso su larghe ferite aperte cazione cutenea che contengono principi attivi che non
o su pelle gravemente danneggiata sono sterili. sono disciolti nella base (per esempio emulsioni o
Se del caso, i contenitori per preparazioni semisolide sospensioni) si adottano misure in grado di assicurare

eifargonoM
per applicazione cutanea soddisfano alle specifiche per un'appropriata omogeneita© della preparazione che

ilareneG
Materiali usati nella fabbricazione di contenitori (3.1 e viene rilasciata.
sottosezioni) e Contenitori (3.2 e sottosezioni). Nella produzione di preparazioni semisolide per appli-
Si possono distinguere varie categorie di preparazioni cazione
sono
cutanea che contengono particelle disperse,
prese misure atte ad assicurare una idonea e con-
semisolide per applicazione cutanea:

ehcituecamraF
^ unguenti, trollata dimensione delle particelle in relazione all'uso

emroF
previsto.
^ creme,
^ geli, SAGGI
^ paste,
^ cataplasmi, Massa o volume rilasciabile (2.9.28). Le preparazioni
semisolide per applicazione cutanea fornite in conteni-
eiretaM

emirP
^ impiastri medicati. tori a dose unica devono soddisfare a questo saggio.
Secondo la loro struttura, ungenti, creme e geli general- (2.6.1). Quando l'etichetta indica che la prepa-
mente hanno un comportamento viscoelastico ed un razione e© sterile, questa soddisfa al saggio di sterilita© .
Sterilita©

carattere non-newtoniano, per esempio un flusso di

ehcituecamraF
inoizaraperP

tipo plastico, pseudoplastico o tissotropico ad alte velo- CONSERVAZIONE

ehcificepS

cita© di taglio. Le paste spesso mostrano un flusso dila-

tante. Se la preparazione contiene acqua o altri ingredienti
volatili, conservare in un recipiente ermeticamente
PRODUZIONE chiuso. Se la preparazione e© sterile, conservare in un
ehcitapoemO
inoizaraperP

recipiente sterile, ermeticamente chiuso, con chiusura

Durante lo sviluppo di una preparazione semisolida per inviolabile.
applicazione cutanea la cui formulazione contenga un
antimicrobico, dovra© essere dimostrato in modo esau- ETICHETTE
riente all'autorita© competente l'efficacia del conser- L'etichetta indica:
vante scelto. Un idoneo saggio insieme con i criteri per
la valutazione delle proprieta© conservanti della formu- ^ il nome di ogni antimicrobico aggiunto,
ecidnI

lazione sono riportati nel testo Efficacia della conserva- ^ se del caso, che la preparazione e© sterile.

669
Preparazioni semisolide per applicazione cutanea

Unguenti fati di alcoli grassi, polisorbati e acidi grassi poliossidri-

lati ed esteri di acidi grassi associati, se necessario, con
emulsionanti acqua-in-olio (A/O).
DEFINIZIONE
Un unguento e© costituito da una base monofasica in cui
possono essere disperse sostanze solide o liquide. Gel
Unguenti idrofobi
Gli unguenti idrofobi (lipofili) possono assorbire solo DEFINIZIONE
piccole quantita© di acqua. Tipiche sostanze usate per la I gel sono costituiti da liquidi gelificati per mezzo di
loro formulazione sono paraffine solide, semisolide e opportuni gelificanti.
liquide, oli vegetali, grassi animali, gliceridi sintetici,
cere e polialchilsilossani liquidi.
Geli idrofobi
I gel idrofobi (oleogel) sono preparazioni le cui basi
Unguenti che emulsionano acqua usualmente sono costituite da paraffina liquida con
Gli unguenti che emulsionano acqua possono assorbire polietilene od oli grassi gelificati con silice colloidale o
maggiori quantita© di acqua e formare percio© emulsioni saponi di alluminio o di zinco.
acqua-in-olio (A/O) oppure emulsioni olio-in-acqua
(O/A) secondo la natura dell'emulsione: a questo scopo
si possono usare agenti tensioattivi A/O come alcooli Geli idrofili
della lana, esteri del sorbitano, monogliceridi e alcooli I gel idrofili (idrogel) sono preparazioni le cui basi soli-
grassi oppure emulsionanti O/A come solfati di alcooli tamente contengono acqua, glicerolo o glicole propile-
grassi, polisorbati, macrogol cetostearil esteri o esteri nico, gelificati con adatte sostanze come amido, deri-
di acidi grassi con magrogol. Le loro basi sono quelle vati della cellulosa, polimeri carbossivinilici e silicati
degli unguenti idrofobi. di magnesio-alluminio.

Unguenti idrofili
Gli unguenti idrofili sono preparazioni che hanno basi
Paste
miscibili con l'acqua. Le basi usualmente sono miscele DEFINIZIONE
di macrogol (polietilenglicoli) liquidi e solidi. Possono Le paste sono preparazioni semisolide per applicazioni
contenere appropriate quantita© di acqua. cutanee che contengono, finemente dispersi nella base,
solidi in grandi proporzioni.
Creme
DEFINIZIONE Cataplasmi
Le creme sono preparazioni multifase costituite da una DEFINIZIONE
fase lipofila e da una fase acquosa. I cataplasmi consistono di una base idrofila, che trat-
tiene il calore, in cui sono dispersi principi attivi solidi
o liquidi. Sono usualmente spalmati in strato spesso su
Creme idrofobe una tela adatta e scaldati prima dell'applicazione alla
Le creme idrofobe hanno come fase continua la fase pelle.
lipofila. Contengono emulsionanti acqua-in-olio
(A/O) come alcoli della lana, esteri del sorbitano e
monogliceridi. Impiastri medicati
Creme idrofile DEFINIZIONE
Le creme idrofile hanno come fase continua la fase Gli impiastri medicati sono preparazioni flessibili che
acquosa. Contengono emulsionanti olio-in-acqua contengono uno o piu© principi attivi. Sono destinati ad
(O/A) come saponi di sodio o di trietanolammina, sol- essere applicati alla pelle. Sono preparati per mante-

670
 Schiume medicate

inoizircserP
nere i principi attivi in stretto contatto con la pelle cos|© Le schiume medicate destinate ad essere impiegate su

ilareneG
che possano essere assorbiti lentamente oppure agire pelle gravemente lesa e su ferite aperte, sono sterili.
come protettivi o cheratolitici. Le schiume medicate confezionate in contenitori pres-
Gli impiastri medicati sono costituiti da una base ade- surizzati soddisfano alle specifiche della monografia
siva, che puo© essere colorata, contenente uno o piu© Preparazioni farmaceutiche pressurizzate (0523).
principi attivi, spalmata come strato uniforme su un

isilanA id
idoteM
appropriato supporto fatto di prodotti naturali o sinte- PRODUZIONE
tici. Non e© irritante o sensibilizzante per la pelle. Lo
strato adesivo e© coperto con un adatto rivestimento Le schiume medicate sterili si preparano usando mate-
protettivo che si toglie prima di applicare l'impiastro riali e metodi che assicurano la sterilita© ed evitano la
alla pelle. Quando si toglie, il rivestimento protettivo contaminazione e la crescita di microrganismi; racco-

irotinetnoC
/ ilairetaM
non deve staccare la preparazione dello strato esterno mandazioni al riguardo sono fornite nel testo Metodi
di sostegno. Gli impiastri medicati sono presentati in di preparazione di prodotti sterili (5.1.1).
una varieta© di misure adatte al loro uso previsto oppure
in fogli piu© grandi da tagliare prima dell'uso. Aderi- SAGGI
scono saldamente alla pelle applicando una lieve pres- . Mantenere il contenitore
sione e possono essere tolti senza causare danno

ivittaeR
Densita© relativa della schiuma

apprezzabile alla pelle o il distacco della preparazione a circa 25 ‘C per almeno 24 h. Avendo cura di non farne
dallo strato esterno di supporto. aumentare la temperatura, inserire nel tasto erogatore
un tubo rigido lungo da 70 mm a 100 mm con un dia-
metro interno di circa 1 mm. Agitare il contenitore per
SAGGI rendere omogenea la fase liquida del suo contenuto ed

itnemogrA
ilareneG
Puo© essere necessario un saggio adatto a erogare da 5 ml a 10 ml di schiuma a perdere.
Tarare un contenitore a fondo piatto avente un volume
Dissoluzione.

dimostrare l'appropriato rilascio dei principi attivi, per

esempio uno dei saggi descritti nel Saggio di dissolu- di circa 60 ml e un'altezza di circa 35 mm. Porre all'an-
zione per i cerotti transdermici (2.9.4). golo del contenitore l'estremita© del tubo rigido colle-
gato al tasto erogatore, premere il tasto e riempire uni-

eifargonoM
formemente il contenitore aiutandosi con un movi-

ilareneG
mento circolare. Dopo che la schiuma si e©
completamente espansa, la si livella rimuovendone l'ec-
1105
cesso con una lamina. Pesare e quindi determinare la
massa di un uguale volume di acqua R riempiendo con

ehcituecamraF
acqua R lo stesso contenitore.

emroF
La densita© relativa della schiuma e© equivalente al rap-
SCHIUME MEDICATE
porto:
Musci medicati m/e
Ulteriori specifiche per le schiume medicate si possono m = massa del campione in esame, in grammi,
trovare, se del caso, in altre monografie generali, per e = massa di un uguale volume di acqua R, in

eiretaM
grammi.

emirP
esempio: Preparazioni rettali (1145), Preparazioni vagi-
nali (1164) e Preparazioni liquide per applicazione cuta- Effettuare tre misurazioni. Nessuno dei singoli valori
nea (0927). presenta uno scarto maggiore del 20 per cento rispetto
al valore medio.
ehcituecamraF

. L'apparecchio (vedi Figura

inoizaraperP

DEFINIZIONE
ehcificepS

Durata dell'espansione

1105.-1) e© costituito da una buretta da 50 ml, con un

Le schiume medicate sono preparazioni costituite da diametro interno di 15 mm e una graduazione di
grandi volumi di gas disperso in un liquido general- 0,1 ml, provvista di un rubinetto con un foro di 4 mm
mente contenente uno o piu© principi attivi, un tensioat- di diametro. La tacca corrispondente a 30 ml e© posta
tivo che assicuri la loro formazione e vari altri ecci- ad almeno 210 mm dall'asse del rubinetto. L'estremita©
ehcitapoemO
inoizaraperP

pienti. Sono di solito destinate ad essere applicate sulla inferiore della buretta e© collegata per mezzo di un tubo
cute o sulle mucose. di plastica, lungo non piu© di 50 mm e con un diametro
Le schiume medicate si formano generalmente al interno di 4 mm, al contenitore che eroga la schiuma
momento della somministrazione da una preparazione provvisto di un tasto erogatore adattato per questo col-
liquida contenuta in un contenitore pressurizzato. legamento. Mantenere il contenitore a circa 25 ‘C per
Il contenitore e© dotato di un dispositivo costituito da almeno 24 h. Agitare il contenitore, avendo cura di
ecidnI

una valvola e da un tasto a pressione, adatto per l'ero- non farne aumentare la temperatura, per rendere omo-
gazione della schiuma. genea la fase liquida del suo contenuto, erogare da

671
Preparazioni auricolari

5 ml a 10 ml di schiuma a perdere. Collegare il tasto Contengono, di solito, uno o piu© principi attivi in un
erogatore all'uscita della buretta. Premere il tasto e veicolo adatto. Possono contenere eccipienti, per esem-
introdurre circa 30 ml di schiuma con una singola ero- pio per regolare la tonicita© o la viscosita© , per regolare
gazione. Chiudere il rubinetto e contemporaneamente o stabilizzare il pH, per aumentare la solubilita© dei
avviare il cronometro e leggere il volume occupato principi attivi, per stabilizzare la preparazione oppure
dalla schiuma nella buretta. Effettuare la lettura ogni per assicurare adeguate proprieta© antimicrobiche.
10 s fino a quando si raggiunge il volume massimo. Gli eccipienti non influenzano negativamente l'azione
Effettuare tre misurazioni. Nessuno dei tempi necessari farmacologica della preparazione e, alle concentrazioni
per raggiungere il volume massimo e© superiore a 5 min. d'uso, non causano tossicita© o irritazione locale ecces-
Sterilita©(2.6.1). Quando l'etichetta indica che la prepa- siva.
razione e© sterile, questa soddisfa al saggio di sterilita© .Le preparazioni da applicare all'orecchio leso, special-
mente se il timpano e© perforato oppure prima di un
ETICHETTE intervento chirurgico, sono sterili, prive di antimicro-
bici e confezionate a dose unica.
L'etichetta indica, se del caso, che la preparazione e© ste- Le preparazioni auricolari sono fornite in contenitori
rile. multidose o a dose singola dotati, se necessario, di un
adatto dispositivo di somministrazione che puo© essere
studiato per evitare l'introduzione di contaminanti.
Se non diversamente giustificato e autorizzato, le pre-
parazioni auricolari acquose confezionate in conteni-
tori multidose contengono un adatto antimicrobico in
concentrazione appropriata, a meno che la prepara-
zione non abbia di per së adeguate proprieta© antimicro-
biche.
Se del caso, i contenitori per preparazioni auricolari
soddisfano alle specifiche dei Materiali usati nella fab-
bricazione di contenitori (3.1 e sottosezioni) e Contenitori
(3.2 e sottosezioni).
Si possono distinguere varie categorie di preparazioni
auricolari:
^ gocce e spray auricolari,
^ preparazioni auricolari semisolide,
^ polveri auricolari,
Figura 1105.-1. Apparecchio per la determinazione ^ lavaggi auricolari,
della durata dell'espansione ^ tamponi auricolari.
PRODUZIONE
Durante lo sviluppo di una preparazione auricolare, la
cui formulazione contenga un antimicrobico, dovra©
0652

essere dimostrata in modo esauriente all'autorita© com-

petente l'efficacia del conservante scelto. Un idoneo
metodo insieme con i criteri per la valutazione delle
proprieta© conservanti della formulazione sono riportati
PREPARAZIONI AURICOLARI

Auricularia nel testo Efficacia della conservazione antimicrobica

(5.1.3).
DEFINIZIONE Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
zione e nella distribuzione di preparazioni auricolari si
Le preparazioni auricolari sono preparazioni liquide, adottano opportune misure atte ad assicurare la loro
semisolide o solide da instillare, spruzzare, insufflare, qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo
applicare nel meato uditivo oppure da usare come sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre-
lavaggio dell'orecchio. parazioni farmaceutiche (5.1.4).

672
 Preparazioni auricolari

inoizircserP
Le preparazioni auricolari sterili si preparano utiliz- Gocce e spray auricolari

ilareneG
zando materiali e metodi in grado di assicurare ste-
rilita© e di evitare l'introduzione di contaminanti e la
crescita di microrganismi; raccomandazioni al riguardo DEFINIZIONE
sono fornite nel testo Metodi di preparazione di prodotti Gocce e spray auricolari sono soluzioni, emulsioni o
sterili (5.1.1).

isilanA id
sospensioni di uno o piu© principi attivi in liquidi adatti

idoteM
Nella produzione di preparazioni auricolari che conten- per essere applicati nel meato uditivo senza esercitare
gono particelle disperse, sono prese misure atte ad assi- pressione dannosa sul timpano (per esempio, acqua,
curare una idonea e controllata dimensione delle parti- glicoli od oli grassi). Possono essere posti nel meato
celle in relazione all'uso previsto. uditivo anche per mezzo di un tampone impregnato

irotinetnoC
con il liquido.

/ ilairetaM
Le emulsioni possono mostrare segni di separazione di
fase, ma sono facilmente ridisperse per agitazione.
SAGGI Le sospensioni possono avere un sedimento che viene
con facilita© nuovamente disperso per agitazione per
(2.9.6). Se non diversamente dare una sospensione stabile abbastanza da consentire

ivittaeR
Uniformita© di contenuto

prescritto o giustificato e autorizzato, le preparazioni la dispensazione della corretta dose.

auricolari a dose unica con un contenuto in principio Le gocce auricolari sono generalmente fornite in conte-
attivo inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per cento della nitori multidose di vetro o di adatto materiale plastico
massa totale soddisfano al saggio B per l'uniformita© di dotati di un contagocce incorporato o con tappo a vite
contenuto di preparazioni a dose unica. Se la prepara- di materiali opportuni provvisto di un contagocce con

itnemogrA
ilareneG
zione contiene piu© di un principio attivo, la specifica si pompetta in gomma o plastica. In alternativa, questo
applica solo a quei principi che corrispondono alle con- sistema viene fornito separatamente. Gli spray sono
dizioni sopracitate. generalmente forniti in contenitori multidose dotati di
un opportuno applicatore. Quando gli spray sono for-
(2.9.5). Le preparazioni auricolari niti in contenitori pressurizzati, questi soddisfano alle

eifargonoM
Uniformita© di massa

a dose unica soddisfano al saggio per l'uniformita© di

ilareneG
specifiche della monografia Preparazioni farmaceutiche
massa delle preparazioni a dose unica. Se e© prescritto pressurizzate (0523).
per tutti i principi attivi il saggio per l'uniformita© di
contenuto, il saggio per l'uniformita© di massa non e©
richiesto. Preparazioni auricolari semisolide

ehcituecamraF
emroF
Sterilita©(2.6.1). Quando l'etichetta indica che la prepa-
razione e© sterile, questa soddisfa al saggio di sterilita© . DEFINIZIONE
Le preparazioni auricolari semisolide si applicano al
CONSERVAZIONE meato uditivo esterno, se necessario per mezzo di un
tampone impregnato con la preparazione.
eiretaM

emirP
Se la preparazione e© sterile, conservare in un recipiente Le preparazioni auricolari semisolide soddisfano alle
sterile, ermeticamente chiuso, con chiusura inviolabile. applicazionedella
specifiche monografia Preparazioni semisolide per
cutanea (0132). ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

ETICHETTE Sono fornite in contenitori dotati di opportuno

applicatore.
L'etichetta indica:
ehcitapoemO

^ il nome di ogni antimicrobico aggiunto, Polveri auricolari

inoizaraperP

^ se del caso, che la preparazione e© sterile,

^ per contenitori multidose, il periodo dopo l'aper- DEFINIZIONE
tura del contenitore dopo il quale i contenuti non Le polveri auricolari soddisfano ai requisiti della
devono essere usati. Se non diversamente giustifi- monografia Polveri per applicazione cutanea (1166).
ecidnI

cato e autorizzato, questo periodo non deve supe- Sono fornite in contenitori provvisti di un dispositivo
rare 4 settimane. adatto per applicazione o insufflazione.

673
Preparazioni farmaceutiche pressurizzate

Lavaggi auricolari spruzzo liquido o semisolido, come una schiuma.

La pressione per il rilascio e© prodotta da adatti propel-
lenti.
DEFINIZIONE Le preparazioni sono costituite da una soluzione, una
I lavaggi auricolari sono preparazioni destinate alla emulsione o una sospensione e sono destinate all'appli-
pulizia del meato uditivo esterno. Solitamente sono cazione locale sulla pelle o sulle mucose di diversi ori-
soluzioni acquose con un pH entro i limiti fisiologici. fizi del corpo o all'inalazione. Possono anche essere
Se sono destinati ad applicazioni a parti offese o prima usati opportuni eccipienti, per esempio solventi, solubi-
di un intervento chirurgico sono sterili. lizzanti, emulsionanti, sospendenti e lubrificanti per la
valvola, per prevenire l'intasamento.
SAGGI Propellenti. I propellenti sono o gas liquefatti sotto
pressione o gas compressi o liquidi a basso punto di
Massa o volume rilasciabile (2.9.28) I lavaggi auricolari ebollizione. Gas liquefatti sono, per esempio, idrocar-
forniti in contenitori a dose unica soddisfano a questo buri fluorurati e idrocarburi a bassa massa molecolare
saggio. (come propano e butano). Gas compressi sono, per
esempio, anidride carbonica, azoto e azoto protossido.
Miscele di questi propellenti possono essere usate per
Tamponi auricolari ottenere proprieta© ottimali di soluzione e caratteristiche
auspicabili di pressione, rilascio e spruzzo.
DEFINIZIONE Contenitori. I contenitori sono ermetici e resistenti alla
pressione interna e possono essere di metallo, di vetro,
I tamponi auricolari sono destinati ad essere introdotti di plastica o combinazioni di questi materiali; sono
nel meato uditivo esterno. Soddisfano alle specifiche compatibili con i loro contenuti. I contenitori di vetro
della monografia Tamponi medicati (1155). sono protetti con un rivestimento in plastica.
Dispositivo nebulizzatore. La valvola tiene il contenitore
ermeticamente chiuso quando non si usa e regola il rila-
scio dei contenuti durante l'utilizzazione. Le caratteri-
0523
stiche dello spruzzo sono influenzate dal tipo di dispo-
sitivo nebulizzatore, in particolare dalle dimensioni,
dal numero e dalla posizione degli orifizi. Alcune val-
vole consentono una erogazione continua, altre (val-
PREPARAZIONI FARMACEUTICHE vole dosatrici) scaricano una quantita© definita di pro-
PRESSURIZZATE dotto per ogni attivazione della valvola.
Praeparationes pharmaceuticae I diversi materiali delle valvole sono compatibili con i
in vasis cum pressu contenuti con i quali vengono a contatto.
Ulteriori specifiche per le preparazioni presentate in con- Specifiche per preparazioni farmaceutiche pressurizzate .
tenitori pressurizzati si possono trovare in altre monogra- Le preparazioni pressurizzate sono fornite di un dispo-
fie generali, per esempio: Preparazioni per inalazione sitivo di rilascio idoneo per l'applicazione prevista.
(0671), Preparazioni liquide per applicazione cutanea Specifiche particolari possono essere necessarie per la
(0927), Polveri per applicazione cutanea (1166), Prepa- scelta dei propellenti, per la dimensione delle particelle
razioni nasali (0676) e Preparazioni auricolari (0652). e per la dose unica erogata dalle valvole dosatrici.
DEFINIZIONE ETICHETTE
Le preparazioni farmaceutiche pressurizzate sono pre-
sentate in contenitori speciali sotto pressione di un gas L'etichetta indica:
e contengono uno o piu© principi attivi. Le preparazioni ^ il metodo di uso,
vengono rilasciate dal contenitore, per attivazione di ^ qualunque precauzione sia necessario prendere,
una valvola adatta, nella forma di un aerosol (disper-
sione in un gas di particelle solide o liquide di dimen- ^ per contenitori con valvola dosatrice, la quantita© di
sioni appropriate all'uso previsto) oppure di uno principio attivo nell'erogazione unitaria.

674
 Preparazioni nasali

inoizircserP
Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-

ilareneG
0676
zione e nella distribuzione di preparazioni nasali, si
adottano opportune misure atte ad assicurare la loro
qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo
sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre-
parazioni farmaceutiche (5.1.4).

isilanA id
PREPARAZIONI NASALI

idoteM
Nasalia Le preparazioni nasali sterili si preparano usando
materiali e metodi che assicurano la sterilita© ed evitano
la contaminazione e la crescita di microrganismi; rac-
DEFINIZIONE comandazioni al riguardo sono fornite nel testo Metodi

irotinetnoC
/ ilairetaM
di preparazione di prodotti sterili (5.1.1).
Le preparazioni nasali sono preparazioni liquide, semi- Nella produzione di preparazioni nasali contenenti par-
solide o solide da somministrare nelle cavita© nasali per ticelle disperse, sono prese misure atte ad assicurare
ottenere un effetto sistemico o locale. Contengono uno una idonea e controllata dimensione delle particelle in
o piu© principi attivi. Le preparazioni nasali sono, per relazione all'uso previsto.
quanto possibile, non irritanti e non esercitano alcun

ivittaeR
effetto indesiderato sulle funzioni della mucosa nasale
e delle sue ciglia. Le preparazioni nasali acquose sono SAGGI
generalmente isotoniche e possono contenere ecci-
pienti, per esempio per correggere la viscosita© della pre- Sterilita©(2.6.1). Quando l'etichetta indica che la prepa-
parazione, per correggere o stabilizzare il pH, per razione e© sterile, questa soddisfa al saggio di sterilita© .

itnemogrA
ilareneG
aumentare la solubilita© del principio attivo o per stabi-
lizzare la preparazione. CONSERVAZIONE
Le preparazioni nasali sono fornite in contenitori mul-
tidose o a dose unica, muniti, se necessario, di un appo- Se la preparazione e© sterile, conservare in un recipiente
sito dispositivo di somministrazione costruito in modo sterile, ermeticamente chiuso, con chiusura inviolabile.

eifargonoM

ilareneG
da evitare l'introduzione di contaminanti.
Se non diversamente giustificato ed autorizzato, le pre- ETICHETTE
parazioni nasali acquose confezionate in contenitori
multidose contengono un adatto antimicrobico in con- L'etichetta indica:

ehcituecamraF
centrazione appropriata, a meno che la preparazione ^ il nome di ogni antimicrobico aggiunto,
non abbia di per së adeguate proprieta© antimicrobiche.

emroF
^ se del caso, che la preparazione e© sterile.
Se del caso, i contenitori soddisfano alle specifiche di
Materiali usati nella fabbricazione di contenitori (3.1. e
sottosezioni) e Contenitori (3.2. e sottosezioni) Gocce nasali e spray nasali liquidi
Si possono distinguere varie categorie di preparazioni

eiretaM

emirP
nasali:
^ gocce nasali e spray nasali liquidi, DEFINIZIONE
^ polveri nasali, Le gocce nasali e gli spray nasali liquidi sono soluzioni,
ehcituecamraF

^ preparazioni semisolide nasali, emulsioni o sospensioni da instillare o nebulizzare nelle

inoizaraperP

ehcificepS

^ lavaggi nasali, cavita© nasali.

^ bastoncini nasali. Le emulsioni possono presentare segni di separazione
di fase, ma sono facilmente ricostituite per agitazione.
Le sospensioni possono presentare un sedimento che si
PRODUZIONE
ehcitapoemO

disperde facilmente dopo agitazione per dare una

inoizaraperP

Durante lo sviluppo di una preparazione nasale, la cui sospensione che rimane sufficientemente stabile da per-
formulazione contenga un antimicrobico, deve essere mettere la somministrazione di una dose corretta.
dimostrata in modo esauriente all'autorita© competente Le gocce nasali sono generalmente confezionate in reci-
l'efficacia del conservante scelto. Un idoneo metodo pienti multidose muniti di un adatto applicatore.
con i relativi criteri per la valutazione delle proprieta© Gli spray nasali liquidi sono confezionati in contenitori
ecidnI

conservanti della formulazione e© riportato nel testo dotati di nebulizzatore o in contenitori pressurizzati
Efficacia della conservazione antimicrobica (5.1.3). forniti di un idoneo dispositivo di somministrazione,

675
Preparazioni nasali

con o senza valvola dosatrice, che soddisfano alle speci- Ripetere la procedura per altri nove contenitori.
fiche della monografia Preparazioni farmaceutiche pres- Se non diversamente giustificato ed autorizzato, la pre-
surizzate (0523). parazione soddisfa al saggio se non piu© di uno dei sin-
Le dimensioni delle goccioline dello spray sono tali da goli contenuti e© fuori dei limiti compresi tra il 75 per
permettere la loro deposizione nella cavita© nasale. cento e il 125 per cento e nessuno e© fuori dei limiti com-
presi tra il 65 per cento e il 135 per cento del contenuto
SAGGI medio.
Se due o tre singoli contenuti sono fuori dei limiti dal
Se non e© diversamente prescritto o giustificato ed auto- 75 per cento al 125 per cento, ma sono compresi nell'in-
rizzato, le gocce nasali confezionate in contenitori a tervallo dal 65 per cento al 135 per cento, ripetere il sag-
dose unica e le singole dosi di spray nasali dispensate gio su altri 20 contenitori. La preparazione soddisfa al
con valvola dosatrice destinate ad azione sistemica, saggio se non piu© di tre dei 30 singoli contenuti sono
soddisfano ai saggi seguenti. fuori dei limiti compresi tra il 75 per cento e il 125 per
Uniformita© di massa . Le gocce nasali in forma di solu- cento e nessuno e© fuori dei limiti compresi tra il 65 per
zione soddisfano al saggio seguente: pesare singolar- cento e il 135 per cento del contenuto medio.
mente il contenuto di dieci contenitori vuotati il piu©
quantitativamente possibile e determinare la massa
media. Non piu© di due delle singole masse possono pre-
sentare uno scarto superiore al 10 per cento rispetto Polveri nasali
alla massa media e nessuna uno scarto maggiore del
20 per cento. DEFINIZIONE
Gli spray nasali costituiti da soluzioni erogate con val-
vola dosatrice soddisfano al saggio seguente: erogare Le polveri nasali sono polveri da insufflare nelle cavita©
una volta a perdere. Aspettare per non meno di 5 s ed nasali per mezzo di un opportuno dispositivo.
erogare di nuovo a perdere. Ripetere questa procedura Le polveri nasali sono conformi alle specifiche della
altre tre volte. Determinare la massa del contenitore, monografia Polveri per applicazione cutanea (1166).
erogare una volta a perdere e ripesare il contenitore. Le dimensioni delle particelle sono tali da permettere la
Calcolare la differenza tra le due masse. Ripetere que- loro deposizione nella cavita© nasale e vengono verifi-
sta procedura per altri nove contenitori. Essi soddi- cate con adeguati metodi di determinazione delle
sfano al saggio se non piu© di due dei singoli valori pre- dimensioni particellari.
sentano uno scarto superiore al 25 per cento rispetto
alla massa media e nessuna uno scarto maggiore del
35 per cento. Preparazioni nasali semisolide
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Le gocce nasali in
forma di sospensione o di emulsione soddisfano al sag-
gio seguente: vuotare il piu© quantitativamente possibile DEFINIZIONE
ciascun contenitore ed effettuare il saggio sui singoli
contenuti. Soddisfano al saggio B di uniformita© di con- Le preparazioni nasali semisolide soddisfano alle speci-
tenuto. fiche della monografia Preparazioni semisolide per
Uniformita© di dose erogata . Gli spray nasali con valvola applicazione cutanea (0132).
dosatrice costituiti da sospensioni o emulsioni soddi- I contenitori sono adattati per rilasciare il prodotto al
sfano al saggio seguente: utilizzare un apparecchio in sito di applicazione.
grado di raccogliere quantitativamente la dose rila-
sciata dall'erogatore del sistema di nebulizzazione.
Agitare un contenitore per 5 s ed erogare una volta a
perdere. Aspettare per non meno di 5 s, agitare per altri
Lavaggi nasali
5 s ed erogare di nuovo a perdere. Ripetere questa pro-
cedura altre tre volte. Dopo 2 s scaricare una dose della DEFINIZIONE
preparazione nel recipiente di raccolta azionando il
dispositivo di nebulizzazione. Raccogliere il liquido I lavaggi nasali sono generalmente soluzioni acquose
contenuto nel recipiente di raccolta mediante risciacqui isotoniche destinate alla pulizia delle cavita© nasali.
successivi e determinare il contenuto in principio attivo I lavaggi nasali destinati ad essere applicati su ferite o
nei liquidi riuniti. prima di un intervento chirurgico sono sterili.

676
 Preparazioni oftalmiche

inoizircserP
SAGGI di microrganismi; raccomandazioni al riguardo sono

ilareneG
Massa o volume rilasciabile(2.9.28). I lavaggi nasali for- fornite
(5.1.1).
nel testo Metodi di preparazione di prodotti sterili
niti in contenitori a dose unica soddisfano al saggio.
Nella produzione di preparazioni oftalmiche contenenti
particelle disperse, sono prese misure atte ad assicurare

isilanA id
idoteM
Bastoncini nasali una idonea e controllata dimensione delle particelle in
relazione all'uso previsto.
DEFINIZIONE

irotinetnoC
/ ilairetaM
I bastoncini nasali soddisfano alla monografia Baston- SAGGI
cini (1154).
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non altrimenti pre-
scritto o giustificato e autorizzato le preparazioni oftal-
miche con un contenuto in principio attivo inferiore a

ivittaeR
1163 2 mg o inferiore al 2 per cento della massa totale soddi-
sfano al saggio B per l'uniformita© di contenuto di pre-
parazioni a dose unica. Se la preparazione contiene piu©
di un principio attivo, la specifica si applica solo a quei
principi che corrispondono alle condizioni sopracitate.

itnemogrA
PREPARAZIONI OFTALMICHE

ilareneG
Ophthalmica Uniformita© di massa (2.9.5). Le preparazioni oftalmiche
in dose singola soddisfano al saggio per l'uniformita© di
DEFINIZIONE massa di preparazioni a dose singola. Se per tutti i prin-
Le preparazioni oftalmiche sono preparazioni liquide, cipi attivi e© prescritto il saggio per l'uniformita© di con-

eifargonoM
tenuto, il saggio per l'uniformita© di massa non e©

ilareneG
semisolide o solide da applicare sul bulbo oculare e/o richiesto.
sulla congiuntiva o da introdurre nel sacco congiunti-
vale. (2.6.1). Le preparazioni oftalmiche soddisfano
Se del caso, i contenitori soddisfano alle specifiche per i
Sterilita©

al saggio di sterilita© , cos|© come gli applicatori che ven-

ehcituecamraF
Materiali usati nella fabbricazione di contenitori (3.1 e gono forniti separatamente. Si preleva l'applicatore dal
sottosezioni) e Contenitori (3.2 e sottosezioni).

emroF
suo imballaggio il piu© asetticamente possibile e lo si tra-
Si possono distinguere varie categorie di preparazioni sferisce in un tubo contenente il terreno di coltura, cos|©
oftalmiche: che sia completamente immerso. Si pone in incubazione
^ colliri, e si interpretano i risultati come descritto al saggio di
^ bagni oculari, sterilita© .

eiretaM

emirP
^ polveri per colliri e per bagni oculari, (2.9.28). Le preparazioni
^ preparazioni oftalmiche semisolide,
Massa o volume rilasciabile

oftalmiche liquide e semisolide fornite in contenitori a

^ inserti oftalmici. dose singola soddisfano a questo saggio.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

PRODUZIONE CONSERVAZIONE
Durante lo sviluppo di una preparazione oftalmica, la
cui formulazione contenga un antimicrobico, deve Se non altrimenti prescritto, conservare in un recipiente
ehcitapoemO
inoizaraperP

essere dimostrata, in modo esauriente, all'autorita© com- sterile, ermeticamente chiuso, con chiusura inviolabile.
petente l'efficacia del conservante scelto. Un idoneo
metodo con i criteri per la valutazione delle proprieta©
conservanti della formulazione e© riportato nel testo
Efficacia della conservazione antimicrobica (5.1.3). ETICHETTE
Le preparazioni oftalmiche si preparano utilizzando
ecidnI

materiali e metodi in grado di assicurare la sterilita© e L'etichetta indica il nome di ogni antimicrobico
di evitare l'introduzione di contaminanti e la crescita aggiunto.

677
Preparazioni oftalmiche

Colliri celle piu© grandi di 25 mm. Queste particelle piu© grandi

possono poi essere misurate a forte ingrandimento
(per es. da 200 a 500 ). In 10 g di principio attivo
2 2 l

DEFINIZIONE solido, non piu© di venti particelle hanno una dimen-

sione massima maggiore di 25 mm e non piu© di due di
I colliri sono soluzioni acquose od oleose oppure queste hanno una dimensione massima maggiore di
sospensioni sterili, di uno o piu© principi attivi, da instil- 50 mm. Nessuna delle particelle ha una dimensione
lare nell'occhio. massima maggiore di 90 mm.
I colliri possono contenere eccipienti, per esempio per
regolare la tonicita© o la viscosita© della preparazione,
per aggiustare o stabilizzare il pH, per aumentare la ETICHETTE
solubilita© del principio attivo o per stabilizzare la pre- L'etichetta indica:
parazione. Queste sostanze non devono influire negati-
vamente sull'azione farmacologica desiderata o, alla ^ se del caso, il nome di ogni antimicrobico aggiunto,
concentrazione usata, dar luogo ad eccessiva irritazione ^ per i contenitori multidose, il periodo dopo l'aper-
locale. tura del contenitore dopo il quale i contenuti non
Le preparazioni acquose fornite in contenitori multi- devono essere usati. Se non diversamente giustifi-
dose contengono, in opportuna concentrazione, un cato e autorizzato, questo periodo non supera le
adatto antimicrobico a meno che la preparazione stessa 4 settimane.
abbia sufficienti proprieta© antimicrobiche. Gli antimi-
crobici scelti devono essere compatibili con gli altri
componenti della preparazione e devono rimanere effi-
caci per tutto il periodo di tempo durante il quale i col-
liri vengono usati. Bagni oculari
Se i colliri sono formulati senza antimicrobico, vengono
forniti, quando e© possibile, in contenitori a dose unica.
I colliri destinati all'uso in interventi chirurgici non DEFINIZIONE
contengono antimicrobici e vengono forniti in conteni-
tori a dose unica. I bagni oculari sono soluzioni acquose sterili destinati a
I colliri costituiti da una soluzione, esaminati in adatte lavare o bagnare gli occhi, o per impacchi.
condizioni di visibilita© , sono praticamente limpidi e Possono contenere eccipienti, per esempio per regolare
privi di particelle. la tonicita© o la viscosita© della preparazione o per aggiu-
Le sospensioni possono mostrare un sedimento, facil- stare o stabilizzare il pH. Queste sostanze non influen-
mente disperso per agitazione per dare una sospensione zano negativamente l'azione prevista o, alle concentra-
sufficientemente stabile per consentire l'applicazione zioni usate, non causano irritazione locale.
della corretta dose. I bagni oculari forniti in contenitori multidose conten-
Le preparazioni multidose sono fornite in contenitori gono, in opportuna concentrazione, un adatto antimi-
che consentono di somministrare in successione gocce crobico a meno che la preparazione stessa abbia suffi-
della preparazione. Se non diversamente giustificato e cienti proprieta© antimicrobiche. L'antimicrobico scelto
autorizzato, i contenitori contengono al massimo e© compatibile con gli altri componenti della prepara-
10 ml della preparazione. zione e mantiene la sua efficacia per tutto il periodo
durante il quale i bagni oculari vengono usati.
SAGGI Se i bagni oculari sono formulati senza antimicrobico,
vengono forniti in contenitori a dose unica. I bagni ocu-
Dimensione delle particelle . Se non altrimenti giustifi- lari destinati all'uso in interventi chirurgici o in tratta-
cato e autorizzato, i colliri costituiti da una sospensione menti di pronto soccorso non contengono antimicrobici
soddisfano al saggio seguente: introdurre una quantita© e vengono forniti in contenitori a dose unica.
opportuna della sospensione in una cella di conteggio I bagni oculari, esaminati in adatte condizioni di visibi-
o con una micropipetta su un portaoggetti, secondo il lita© , sono praticamente limpidi e privi di particelle.
caso, ed esaminare al microscopio un'area corrispon-
dente a 10 g di fase solida. Per motivi pratici, si racco- Se non diversamente giustificato ed autorizzato, i con-
l

manda di osservare prima l'intero campione a basso tenitori per preparazioni multidose non contengono
ingrandimento (per es. 50 ) e di identificare le parti- piu© di 200 ml di soluzione oftalmica.
2

678
 Preparazioni oftalmiche

inoizircserP
ETICHETTE Preparazioni oftalmiche semisolide

ilareneG
L'etichetta indica:
DEFINIZIONE
^ se del caso, che i contenuti si devono utilizzare una Le preparazioni oftalmiche semisolide sono unguenti,
sola volta,

isilanA id
idoteM
creme o gel sterili destinati all'applicazione sulla con-
^ per preparazioni multidose, il periodo dopo l'aper- giuntiva. Contengono uno o piu© principi attivi disciolti
tura del contenitore dopo il quale i contenuti non o dispersi in una base adatta; hanno un aspetto omoge-
devono essere usati. Se non diversamente giustifi- neo.
cato ed autorizzato, questo periodo non supera le Le preparazioni oftalmiche semisolide soddisfano alle

irotinetnoC
/ ilairetaM
4 settimane. specifiche della monografia Preparazioni semisolide per
applicazione cutanea (0132). La base non deve essere
irritante per la congiuntiva.
Le preparazioni oftalmiche semisolide sono confezio-
Polveri per colliri e per bagni oculari nate in piccoli tubi flessibili, sterili, dotati di una can-

ivittaeR
nula e con un contenuto della preparazione non supe-
riore a 5 g. I tubi devono essere ben chiusi per evitare
la contaminazione microbica. Le preparazioni oftalmi-
DEFINIZIONE che semisolide possono essere confezionate anche in
adatti contenitori a dose unica. I contenitori o i bec-

itnemogrA
ilareneG
Le polveri per la preparazione di colliri e di bagni ocu- cucci dei tubi sono di forma tale da facilitare la sommi-
lari sono fornite in forma sterile, secca, per essere nistrazione senza contaminazione. I tubi sono a chiu-
disciolte o sospese in un adatto veicolo liquido al sura inviolabile.
momento della somministrazione. Possono contenere
eccipienti per facilitare la dissoluzione o la dispersione, SAGGI

eifargonoM

ilareneG
per evitare la sedimentazione, per correggere la toni-
cita© , per correggere o stabilizzare il pH o per stabiliz- Dimensione delle particelle . Le preparazioni oftalmiche
zare la preparazione. semisolide che contengono particelle solide disperse
soddisfano al saggio seguente: stendere delicatamente

ehcituecamraF
Dopo dissoluzione o sospensione nel liquido prescritto, in strato sottile una quantita© della preparazione corri-
soddisfano alle specifiche per colliri o per bagni oculari, spondente ad almeno 10 g di principio attivo solido.

emroF
l

secondo il caso. Osservare al microscopio l'intera area del campione.

Per motivi pratici, si raccomanda di osservare prima
l'intero campione ad un basso ingrandimento
SAGGI (per es. 50 ) e di identificare le particelle piu© grandi
2

di 25 mm. Queste particelle piu© grandi possono poi

eiretaM

emirP
essere misurate ad ingrandimento maggiore (per es. da
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non diversamente 200 a 500 ). Per ogni campione di 10 g di princi-
2 2 l
prescritto o giustificato e autorizzato, le polveri a dose pio attivo solido, non piu© di venti particelle hanno una
unica per colliri e per bagni oculari con un contenuto dimensione massima maggiore di 25 mm e non piu© di
ehcituecamraF
inoizaraperP

in principio attivo inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per due di queste hanno una dimensione massima maggiore
ehcificepS

cento della massa totale soddisfano al saggio B per di 50 mm. Nessuna delle particelle ha una dimensione
l'uniformita© di contenuto di preparazioni a dose unica. massima maggiore di 90 mm.
Se la preparazione contiene piu© di un principio attivo,
la specifica si applica solo a quei principi che corrispon-
ehcitapoemO
inoizaraperP

dono alle condizioni sopracitate. Inserti oftalmici

Uniformita© di massa (2.9.5). Le polveri per colliri e per
bagni oculari a dose unica soddisfano al saggio per l'u- DEFINIZIONE
niformita© di massa di preparazioni a dose unica. Se per
tutti i principi attivi e© prescritto il saggio per Gli inserti oftalmici sono preparazioni sterili, solide o
ecidnI

l'uniformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita© di semisolide, di forma e dimensione adatte, destinate ad
massa non e© richiesto. essere inserite nel sacco congiuntivale per ottenere un

679
Preparazioni oromucosali

effetto sull'occhio. Generalmente sono costituiti da un essere progettate per essere applicate in una specifica
serbatoio di principio attivo inserito in una matrice o parte entro la cavita© orale come le gomme (prepara-
circondato da una membrana che controlla la velocita© zioni gengivali) oppure nella gola (preparazioni orofa-
di cessione. Il principio attivo, che e© piu© o meno solubile ringee). Le preparazioni destinate ad un effetto siste-
nei fluidi fisiologici, viene rilasciato in un determinato mico sono progettate per essere assorbite soprattutto a
periodo di tempo. uno o piu© siti della mucosa buccale (per es. prepara-
Gli inserti oftalmici sono confezionati singolarmente in zioni sublinguali). Le preparazioni mucoadesive sono
contenitori sterili. destinate ad essere trattenute nella cavita© buccale per
adesione all'epitelio mucosale e possono modificare
l'assorbimento sistemico del farmaco al sito di applica-
PRODUZIONE zione. Per molte preparazioni oromucosali e© verosimile
Nella produzione di inserti oftalmici si devono adottare che una parte delle sostanze attive sara© deglutita e
opportune misure atte ad assicurare un appropriato potra© essere assorbita nel tratto gastrointestinale.
processo di dissoluzione. Le preparazioni oromucosali possono contenere oppor-
tuni conservanti antimicrobici e altri eccipienti come
SAGGI sostanze disperdenti, sospendenti, addensanti, emulsio-
nanti, tamponanti, bagnanti, solubilizzanti, stabiliz-
(2.9.6). Gli inserti oftalmici zanti, aromatizzanti e dolcificanti. Le preparazioni
solide possono inoltre contenere agenti che favoriscono
Uniformita© di contenuto

soddisfano, se del caso, al saggio A per l'uniformita© di

contenuto. lo scorrimento, lubrificanti ed eccipienti in grado di
modificare il rilascio del/dei principi attivi.
ETICHETTE Se del caso, i contenitori per le preparazioni oromuco-
sali soddisfano alle specifiche per Materiali usati nella
L'etichetta indica: fabbricazione di contenitori (3.1 e sottosezioni) e Conte-
^ se del caso, la quantita© totale di principio attivo per nitori (3.2 e sottosezioni).
inserto, Si possono distinguere parecchie categorie di prepara-
^ se del caso, la dose rilasciata per unita© di tempo. zioni per uso oromucosale:
^ gargarismi,
^ collutori,
^ gengivari,
1807
^ soluzioni e sospensioni oromucosali,
^ preparazioni oromucosali semi-solide (compresi
per esempio gel gengivale, pasta gengivale, gel oro-
PREPARAZIONI OROMUCOSALI mucosale, pasta oromucosale),
Praeparationes buccales ^ gocce oromucosali, spray oromucosali e sublin-
guali (inclusi gli spray orofaringei),
Le specifiche di questa monografia non si applicano a pre- ^ pastiglie e paste,
parazioni dentali e neppure a preparazioni come Com- ^ tavolette,
presse masticabili (0478), Gomme da masticare medicate ^ compresse sublinguali e buccali,
(1239), liofilizzati per uso orale o altre preparazioni
solide o semi-solide destinate ad essere masticate o ^ capsule oromucosali,
disperse nella saliva prima di essere inghiottite. Se giusti- ^ preparazioni mucoadesive.
ficato e autorizzato, le specifiche di questa monografia
non si applicano a preparazioni per uso veterinario. PRODUZIONE
DEFINIZIONE Durante lo sviluppo di una preparazione oromucosale
che contenga un antimicrobico, l'efficacia del conser-
Le preparazioni oromucosali sono preparazioni solide, vante scelto deve essere dimostrata in modo esauriente
semi-solide o liquide, contenenti una o piu© sostanze all'autorita© competente. Un idoneo metodo con i criteri
attive, destinate alla somministrazione alla cavita© orale per la valutazione delle proprieta© conservanti della for-
e/o alla gola per ottenere un effetto locale o sistemico. mulazione e© riportato nel testo Efficacia della conserva-
Le preparazioni destinate ad un effetto locale possono zione antimicrobica (5.1.3).

680
 Preparazioni oromucosali

inoizircserP
Nella fabbricazione, nel confezionamento, nella conser- Collutori

ilareneG
vazione e nella distribuzione delle preparazioni oromu-
cosali, si adottano opportune misure atte ad assicurare
la loro qualita© microbiologica; raccomandazioni al DEFINIZIONE
riguardo sono fornite nel testo Requisiti microbiologici
delle preparazioni farmaceutiche (5.1.4). I collutori sono soluzioni acquose destinate a venire a

isilanA id
idoteM
Nella fabbricazione di preparazioni oromucosali contatto con la membrana mucosa della cavita© orale,
liquide e semi-solide contenenti particelle disperse, usualmente dopo diluizione con acqua. Non devono
sono prese misure atte ad assicurare una idonea e con- essere inghiottiti. Sono dispensati come soluzioni
trollata dimensione delle particelle in relazione all'uso pronte all'uso o soluzioni concentrate da diluire. Pos-
sono essere preparati anche da polveri o compresse da

irotinetnoC
/ ilairetaM
previsto. disciogliere in acqua prima dell'uso.
I collutori possono contenere eccipienti per aggiustare
SAGGI il pH che, per quanto possibile, e© neutro.
(2.9.6). Se non e© diversamente

ivittaeR
Uniformita© di contenuto

prescritto o giustificato e autorizzato, le preparazioni a Gengivari

dose unica con un contenuto in principio attivo infe-
riore a 2 mg o inferiore al 2 per cento della massa totale
soddisfano al saggio A (forme farmaceutiche ottenute DEFINIZIONE
per compressione o con stampi) o al saggio B (capsule)

itnemogrA
ilareneG
per l'uniformita© di contenuto per le forme farmaceuti- Le soluzioni gengivali sono destinate ad essere sommi-
che a dose unica. Se la preparazione contiene piu© di un nistrate alle gengive per mezzo di un opportuno appli-
principio attivo, la specifica si applica solo a quei prin- catore.
cipi attivi che corrispondono alle condizioni sopra
citate.

eifargonoM

ilareneG
(2.9.5). Le preparazioni solide a
Soluzioni e sospensioni oromucosali
Uniformita© di massa

dose unica soddisfano al saggio per l'uniformita© di

massa. Se per tutti i principi attivi e© prescritto il saggio
per l'uniformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita©

ehcituecamraF
di massa non e© richiesto. DEFINIZIONE

emroF
Le soluzioni e sospensioni oromucosali sono prepara-
ETICHETTE zioni liquide destinate ad essere somministrate alla
cavita© buccale per mezzo di un adatto applicatore.
L'etichetta indica il nome di ogni conservante antimi- Le sospensioni oromucosali possono mostrare un sedi-
crobico aggiunto. mento facilmente ridispersibile per agitazione a ridare
eiretaM

emirP
una sospensione che rimane sufficientemente stabile da
permettere la somministrazione di una corretta dose.
Gargarismi
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Preparazioni oromucosali semi-solide

DEFINIZIONE
DEFINIZIONE
ehcitapoemO

I gargarismi sono soluzioni acquose destinate ad essere

inoizaraperP

gargarizzate per ottenere un effetto locale. Non devono Le preparazioni oromucosali semi-solide sono geli idro-
essere inghiottiti. Vengono dispensati come soluzioni fili o paste destinate all'applicazione alla cavita© orale o
pronte all'uso o soluzioni concentrate da diluire. ad una parte specifica della cavita© orale come le gengive
Possono essere preparati anche da polveri o compresse (gel gengivale, pasta gengivale). Possono essere dispen-
da disciogliere in acqua prima dell'uso. sate come preparazioni a dose unica.
ecidnI

Possono contenere eccipienti per aggiustare il pH che, Soddisfano alle specifiche della monografia su Prepara-
per quanto possibile, e© neutro. zioni semi-solide per applicazione cutanea (0132).

681
Preparazioni oromucosali

Gocce oromucosali, spray oromucosali due delle masse singole deviano di piu© del 25 per cento
e sublinguali dal valore medio e nessuna si scosta di piu© del 35 per
cento.
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Le gocce oromucosali
DEFINIZIONE costituite da sospensioni o da emulsioni soddisfano al
seguente saggio: vuotare ciascun contenitore il piu©
Le gocce oromucosali, gli spray oromucosali e sublin- completamente possibile ed effettuare il saggio sul con-
guali sono soluzioni, emulsioni o sospensioni destinate tenuto singolo. Soddisfano al saggio B per l'uniformita©
ad avere effetto locale e sistemico. Sono applicati per di contenuto.
instillazione o nebulizzazione nella cavita© orale o su . Gli spray oromucosali con
una parte specifica della cavita© orale come nebulizza- Uniformita© di dose rilasciata

valvola dosatrice e gli spray sublinguali costituiti da

zione sotto la lingua (spray sublinguale) o nella gola sospensioni o da emulsioni soddisfano al seguente sag-
(spray orofaringeo). gio: utilizzare un apparecchio che possa raccogliere
Le emulsioni possono mostrare segno di separazione di quantitativamente la dose rilasciata dall'attuatore del
fase, ma sono facilmente ridisperse per agitazione. Le sistema di nebulizzazione.
sospensioni possono mostrare un sedimento che viene
facilmente ridisperso per agitazione a dare una sospen- Agitare un contenitore per 5 s e scaricare una volta a
sione che rimane sufficientemente stabile da permettere perdere. Aspettare per non meno di 5 s, agitare per 5 s
la somministrazione di una corretta dose. e scaricare di nuovo a perdere. Ripetere questo procedi-
Gli spray oromucosali liquidi sono dispensati in conte- mento per altre 3 volte. Dopo 2 s, scaricare una dose
nitori con sistemi nebulizzatori oppure in contenitori di spray oromucosale con dosatore nel recipiente di rac-
pressurizzati muniti di opportuno adattatore e con o colta, attivando il dispositivo di nebulizzazione. Racco-
senza una valvola dosatrice, che soddisfano alle specifi- gliere i contenuti del recipiente collettore con successivi
che della monografia su Preparazioni farmaceutiche risciacqui. Determinare il contenuto in principio attivo
pressurizzate (0523). nei risciacqui riuniti.
La dimensione delle goccioline dello spruzzo e© tale da Ripetere il procedimento per altri 9 contenitori.
localizzare il loro depositarsi nella cavita© orale o nella Se non diversamente giustificato e autorizzato, la pre-
gola, come previsto. parazione soddisfa al saggio se non piu© di uno dei sin-
goli contenuti e© fuori dai limiti dal 75 al 125 per cento
e nessuno e© fuori dai limiti dal 65 al 135 per cento del
SAGGI contenuto medio.
Se non diversamente prescritto o giustificato e autoriz- Se 2 o 3 contenuti singoli sono fuori dai limiti del 75-
zato, le gocce oromucosali dispensate in contenitori a 125 per cento ma entro i limiti del 65-135 per cento,
dose unica, le dosi uniche rilasciate dagli spray oromu- ripetere il saggio con altri 20 contenitori. La prepara-
cosali e gli spray sublinguali destinati all'azione siste- zione soddisfa al saggio se non piu© di 3 contenuti sin-
mica soddisfano ai saggi seguenti: goli, dei 30 contenitori, sono fuori dai limiti del 75-125
. Le gocce oromucosali che sono per cento e nessuno fuori dai limiti del 65-135 per cento
Uniformita© di massa

costituite da una soluzione soddisfano al seguente sag- del contenuto medio.

gio: determinare le masse singole di 10 contenitori vuo-
tati il piu© completamente possibile e calcolare la massa
media. Non piu© di due delle masse singole deviano di Pastiglie e paste
piu© del 10 per cento dalla massa media e nessuna devia
piu© del 20 per cento.
Gli spray oromucosali con valvola dosatrice e gli spray DEFINIZIONE
sublinguali costituiti da soluzioni soddisfano al
seguente saggio: scaricare una volta a perdere. Aspet- Le pastiglie e le paste sono preparazioni solide, a dose
tare non meno di 5 s e scaricare di nuovo a perdere. unica destinate ad essere succhiate per ottenere, di
Ripetere per altre 3 volte. Pesare la massa del conteni- solito, un effetto locale nella cavita© buccale e nella gola.
tore, scaricare una volta a perdere e determinare la Contengono una o piu© sostanze attive, usualmente in
massa rimanente del contenitore. Calcolare la diffe- una base aromatizzata e dolcificata, e sono destinate a
renza fra le due masse. Ripetere il procedimento per disciogliersi o disaggregarsi lentamente nella bocca
altri 9 contenitori. Soddisfano al saggio se non piu© di quando vengono succhiate.

682
 Preparazioni oromucosali

inoizircserP
Le pastiglie sono saccaroliti solidi preparati con senza sgretolarsi e rompersi. Questo si puo© dimostrare

ilareneG
stampi. Le paste sono gomme morbide, elastiche prepa- esaminando la Friabilita© delle compresse non rivestite
rate con stampi da miscele contenenti polimeri naturali (2.9.7) e la Resistenza alla rottura delle compresse (2.9.8).
o sintetici e dolcificanti.
SAGGI

isilanA id
idoteM
. Se non diversamente giustificato e auto-
Tavolette Dissoluzione

rizzato, si effettua un saggio adatto a dimostrare l'ap-

propriato rilascio del/dei farmaci.

irotinetnoC
DEFINIZIONE

/ ilairetaM
Le tavolette sono preparazioni solide a dose unica, Capsule oromucosali
destinate ad essere succhiate per ottenere un effetto
locale o sistemico. Sono preparate per compressione e
sono spesso di forma romboidale.
DEFINIZIONE

ivittaeR
PRODUZIONE Le capsule oromucosali sono capsule molli da masti-
care o succhiare.
Nella fabbricazione di tavolette sono prese misure atte
ad assicurare che abbiano una resistenza meccanica

itnemogrA
ilareneG
adatta a resistere alle manipolazioni senza sgretolarsi
o rompersi. Questo si puo© dimostrare esaminando la
Friabilita© delle compresse non rivestite (2.9.7) e la Resi-
Preparazioni mucoadesive
stenza alla rottura (2.9.8).

eifargonoM
DEFINIZIONE

ilareneG
SAGGI Le preparazioni mucoadesive contengono una o piu©
. Per tavolette destinate a produrre un sostanze attive destinate all'assorbimento sistemico
effetto sistemico, si effettua un saggio adatto a dimo- prolungato.la Possono
attraverso mucosa buccale in un periodo di tempo
Dissoluzione

ehcituecamraF
strare l'appropriato rilascio del/dei farmaci. essere fornite come compresse
buccali mucoadesive o come cerotti buccali o altre pre-

emroF
parazioni mucoadesive solide o semi-solide.
Le compresse buccali mucoadesive si preparano per
Compresse sublinguali e buccali compressione a compresse mono- o multi-strato.
Usualmente contengono polimeri idrofili che a contatto

eiretaM
con la saliva danno un idrogel flessibile che aderisce

emirP
DEFINIZIONE alla mucosa buccale.
Le compresse sublinguali e buccali sono preparazioni PRODUZIONE
ehcituecamraF

solide, a dose unica, da applicare sotto la lingua o alla

inoizaraperP

ehcificepS

cavita© buccale, rispettivamente, per ottenere un effetto Nella fabbricazione di compresse buccali mucoadesive
sistemico. Sono preparate per compressione di miscele sono prese misure atte ad assicurare che abbiano una
di polveri o granulati in compresse di forma adatta per forza meccanica adatta a resistere alla manipolazione
l'uso previsto. senza sgretolarsi e rompersi. Questo si puo© dimostrare
ehcitapoemO
inoizaraperP

Le compresse sublinguali e buccali corrispondono alla esaminando la Friabilita© delle compresse non rivestite
definizione generale di compresse. (2.9.7) e la Resistenza alla rottura delle compresse (2.9.8).

PRODUZIONE SAGGI
Nella fabbricazione di compresse sublinguali e buccali . Se non diversamente giustificato e auto-
Dissoluzione
ecidnI

sono prese misure atte ad assicurare che abbiano una rizzato, si effettua un saggio adatto a dimostrare l'ap-
forza meccanica adatta a resistere alle manipolazioni propriato rilascio del/dei farmaci.

683
Preparazioni parenterali

passaggio di un ago con il minor distacco possibile di

0520
particelle. Le chiusure per contenitori multidose sono
sufficientemente elastiche da garantire che il foro si
richiuda quando si toglie l'ago.
PREPARAZIONI PARENTERALI Si possono distinguere varie categorie di preparazioni
parenterali:
Parenteralia ^ preparazioni iniettabili,
Le specifiche di questa monografia non si applicano ^ infusioni,
necessariamente a prodotti derivati da sangue umano, a ^ concentrati per preparazioni iniettabili o infusioni,
preparazioni immunologiche o a preparazioni radiofar- ^ polveri per preparazioni iniettabili o infusioni,
maceutiche. Particolari specifiche possono riguardare
preparazioni per uso veterinario, secondo la specie ani- ^ impianti.
male cui e© destinata la preparazione.
PRODUZIONE
DEFINIZIONE Durante lo sviluppo di una preparazione parenterale, la
Le preparazioni parenterali sono preparazioni sterili cui formulazione contenga un antimicrobico, deve
destinate alla somministrazione per iniezione, infusione essere dimostrata in modo esauriente all'autorita© com-
o impianto nel corpo umano o animale. petente l'efficacia del conservante scelto. Un idoneo
metodo di saggio con criteri per la valutazione delle
Le preparazioni parenterali possono richiedere l'uso di proprieta© conservanti della formulazione e© riportato
eccipienti, per esempio per renderle isotoniche con il nel testo Efficacia della conservazione antimicrobica
sangue, per regolarne il pH, per aumentare la solubi- (5.1.3).
lita© , per prevenire l'alterazione dei principi attivi o per Le preparazioni parenterali si preparano utilizzando
dotarle di adeguate proprieta© antimicrobiche ma materiali e metodi in grado di assicurare la sterilita© e
gli eccipienti non devono influenzare negativamente di evitare l'introduzione di contaminanti e la crescita
l'azione medicamentosa della preparazione o, alle con- di microrganismi; raccomandazioni al riguardo sono
centrazioni usate, causare effetti tossici o irritazione fornite nel testo Metodi di preparazione di prodotti sterili
locale indesiderata. (5.1.1).
I contenitori per preparazioni parenterali sono fatti, L'acqua usata nella produzione di preparazioni paren-
per quanto e© possibile, con materiali sufficientemente terali soddisfa alle specifiche dell'acqua per iniezioni,
trasparenti per permettere l'ispezione visiva dei conte- stabilite nella monografia Acqua per preparazioni iniet-
nuti, eccetto per gli impianti e in altri casi giustificati e tabili (0169).
autorizzati.
Se del caso, i contenitori per preparazioni parenterali SAGGI
soddisfano alle specifiche dei Materiali usati nella fab-
bricazione di contenitori (3.1 e sottosezioni) e Contenitori
(3.2 e sottosezioni).
Contaminazione particellare: particelle non visibili

(2.9.19). Per preparazioni per uso umano, le soluzioni

Le preparazioni parenterali sono fornite in contenitori per infusione o i preparati iniettabili forniti in conteni-
di vetro (3.2.1) o in altri contenitori come contenitori tori con contenuto nominale maggiore di 100 ml soddi-
in plastica (3.2.2, 3.2.2.1 e 3.2.9) e siringhe pre-riempite. sfano al saggio.
La tenuta del contenitore e© assicurata con opportuni Per preparazioni per uso veterinario, quando fornite in
accorgimenti. Le chiusure garantiscono l'ermeticita© , contenitori con un contenuto nominale di piu© di
impediscono l'accesso di microrganismi e altri contami- 100 ml e quando il contenuto sia equivalente ad una
nanti e di norma consentono il prelievo di una parte o dose di piu© di 1,4 ml per chilogrammo di massa corpo-
di tutto il contenuto senza rimuoverle. I materiali pla- rea, le soluzioni per infusione o per preparati iniettabili
stici o elastomeri (3.2.9) di cui e© fatta la chiusura, sono soddisfano al saggio per contaminazione particellare:
sufficientemente compatti ed elastici da permettere il particelle non visibili.

684
 Preparazioni parenterali

inoizircserP
Prodotti per i quali l'etichetta indica che il prodotto terale in un contenitore multidose, sono indicate le pre-

ilareneG
deve essere usato con un filtro finale sono esenti da que- cauzioni da prendere per la sua somministrazione ed in
ste specifiche. particolare per la sua conservazione tra prelievi succes-
Sterilita©(2.6.1). Le preparazioni parenterali soddisfano sivi.
al saggio di sterilita© . Antimicrobici. Le preparazioni acquose che vengono

isilanA id
idoteM
preparate usando condizioni asettiche e che non pos-
sono essere sterilizzate al termine del procedimento
CONSERVAZIONE possono contenere un adatto antimicrobico in concen-
Conservare in un recipiente sterile, ermeticamente trazione appropriata. Non viene aggiunto alcun antimi-

irotinetnoC
crobico quando:

/ ilairetaM
chiuso, con chiusura inviolabile.
^ il volume da iniettare in una dose unica supera i
15 ml, se non diversamente giustificato,
ETICHETTE
^ la preparazione e© destinata alla somministrazione
L'etichetta indica: per vie dove, per ragioni mediche, non e© accettabile

ivittaeR
^ il nome e la concentrazione di ogni antimicrobico un antimicrobico, quali quella intracisternale, epi-
aggiunto, durale, intratecale o mediante qualsiasi altra via
che dia accesso al liquido cerebrospinale, o intra-
^ se del caso, che la soluzione e© da usarsi in unione o retro-oculare.

itnemogrA
con un filtro finale,

ilareneG
^ se del caso, che la preparazione e© priva di endotos- Tali preparazioni vengono presentate in contenitori a
sine batteriche o che e© apirogena. dose unica.

eifargonoM
PRODUZIONE

ilareneG
Preparazioni iniettabili
Nella produzione di preparazioni iniettabili contenenti
particelle disperse, sono prese misure atte ad assicurare
controllate ed idonee dimensioni delle particelle in rela-

ehcituecamraF
DEFINIZIONE zione all'uso previsto.

emroF
Le preparazioni iniettabili sono soluzioni, emulsioni o Preparazioni a dose unica. Il volume della preparazione
sospensioni sterili. Sono preparate disciogliendo, emul- iniettabile in un contenitore a dose unica e© sufficiente a
sionando o sospendendo il o i principi attivi e qualun- permettere il prelievo e la somministrazione della dose
que altro eccipiente aggiunto in Acqua per preparazioni nominale con una tecnica usuale.

eiretaM
iniettabili (0169), in un adatto liquido non acquoso ste-

emirP
rile o in una miscela di questi veicoli.
Le soluzioni per preparazioni iniettabili, esaminate in SAGGI
condizioni di luce adatta, sono limpide e praticamente
ehcituecamraF
inoizaraperP

prive di particelle. (2.9.6). Se non diversamente

ehcificepS

Uniformita© di contenuto

Le emulsioni per preparazioni iniettabili non mostrano prescritto o giustificato ed autorizzato, le sospensioni
segni di separazione di fase. Le sospensioni per prepa- per iniezioni a dose unica con un contenuto in principio
razioni iniettabili possono presentare un sedimento che attivo inferiore a 2 mg o al 2 per cento della massa
e© facilmente disperso all'agitazione per dare una totale, soddisfano al saggio A per l'uniformita© di conte-
ehcitapoemO
inoizaraperP

sospensione che rimane sufficientemente stabile per nuto per le preparazioni a dose unica. Se la prepara-
permettere di prelevare la corretta dose. zione ha piu© di un principio attivo, la specifica si
Preparazioni multidose. Le iniezioni acquose multidose applica solo a quei principi attivi che rispondono alle
contengono un adatto antimicrobico ad una concentra- condizioni di cui sopra.
zione appropriata eccetto quando la preparazione ha Endotossine batteriche-pirogeni . Viene effettuato un sag-
ecidnI

di per së adeguate proprieta© antimicrobiche. Quando e© gio per le endotossine (2.6.14) o, dove giustificato e auto-
necessario presentare una preparazione per uso paren- rizzato, il saggio per i pirogeni (2.6.8).

685
Preparazioni parenterali

Preparazioni per uso umano: quando il volume da iniet- SAGGI

tare in una dose unica e© di 15 ml o piu© , la preparazione
soddisfa al saggio per le endotossine batteriche (2.6.14) Endotossine batteriche-pirogeni . Soddisfano al saggio
o al saggio per i pirogeni (2.6.8). per le endotossine batteriche (2.6.14) o, se giustificato e
autorizzato, al saggio per i pirogeni (2.6.8). Per quest'ul-
Preparazioni per uso veterinario: quando il volume da timo saggio, iniettare 10 ml per chilogrammo di massa
iniettare in una dose unica e© di 15 ml o piu© ed e© equiva- corporea in ciascun coniglio, se non diversamente giu-
lente ad una dose di 0,2 ml o piu© per chilogrammo di stificato e autorizzato.
massa corporea, la preparazione soddisfa al saggio per
le endotossine batteriche (2.6.14) o al saggio per i piro-
geni (2.6.8), rispettivamente.
Concentrati per preparazioni iniettabili
Qualsiasi preparazione: dove l'etichetta indica che la
preparazione e© priva di endotossine batteriche o apiro-
o infusioni
gena, rispettivamente, la preparazione soddisfa al sag-
gio per le endotossine batteriche (2.6.14) o al saggio
per i pirogeni (2.6.8), secondo il caso. DEFINIZIONE
I concentrati per preparazioni iniettabili o infusioni
sono soluzioni sterili destinate a preparazioni iniettabili
o infusione dopo diluizione. Vengono diluiti a un
Infusioni volume prescritto con un dato liquido prima della som-
ministrazione. Dopo diluizione, soddisfano alle specifi-
che per preparazioni iniettabili o infusioni .
DEFINIZIONE
SAGGI
Le infusioni sono soluzioni acquose o emulsioni, con
acqua come fase continua, sterili; esse vengono general- . Soddisfano alle specifi-
Endotossine batteriche-pirogeni

mente rese isotoniche con il sangue. Sono principal- che stabilite per le preparazioni iniettabili o per le infu-
mente destinate alla somministrazione in grande sioni, dopo diluizione ad un appropriato volume.
volume. Le infusioni non contengono alcun antimicro-
bico aggiunto.
Le soluzioni per infusione, esaminate in condizioni Polveri per preparazioni iniettabili
adatte di visibilita© , sono limpide e praticamente esenti o infusioni
da particelle.
Le emulsioni per infusione non mostrano alcuna evi-
denza di separazione di fase. DEFINIZIONE
Le polveri per preparazioni iniettabili o infusioni sono
PRODUZIONE sostanze solide, sterili, ripartite nei loro contenitori
finali e che, quando vengono agitate con il volume pre-
Nella produzione di infusioni contenenti particelle scritto di un dato liquido sterile, danno luogo rapida-
disperse sono prese misure atte ad assicurare idonee e mente o a soluzioni limpide e praticamente prive di par-
controllate dimensioni delle particelle in relazione ticelle o a sospensioni uniformi. Dopo dissoluzione o
all'uso previsto. sospensione, esse soddisfano alle specifiche per le inie-
zioni o per le infusioni.
Il volume dell'infusione nel contenitore e© sufficiente a I prodotti liofilizzati per uso parenterale sono conside-
permettere il prelievo e la somministrazione della dose rati come polveri per preparazioni iniettabili o infu-
nominale operando normalmente (2.9.17). sioni.

686
 Preparazioni per inalazione

inoizircserP
PRODUZIONE

ilareneG
0671

L'uniformita© di contenuto e l'uniformita© di massa di

prodotti liofilizzati per uso parenterale sono assicurate
dal controllo in produzione della quantita© di soluzione

isilanA id
prima della liofilizzazione.

idoteM
PREPARAZIONI PER INALAZIONE

Inhalanda
SAGGI DEFINIZIONE

irotinetnoC
/ ilairetaM
(2.9.6). Se non diversamente Le preparazioni per inalazione sono preparazioni
liquide o solide da somministrare come vapore o aero-
Uniformita© di contenuto

prescritto o giustificato e autorizzato, le polveri per pre- sol al polmone per ottenere un effetto locale o siste-
parazioni iniettabili o infusioni con un contenuto in mico. Contengono uno o piu© principi attivi che possono
principio attivo inferiore a 2 mg o al 2 per cento della essere disciolti o dispersi in un adatto veicolo.
massa totale o con una massa unitaria uguale o infe-

ivittaeR
riore a 40 mg soddisfano al saggio A per l'uniformita© Le preparazioni per inalazione possono, secondo il tipo
di contenuto di preparazioni a dose unica. Se la prepa- di preparazione, contenere propellenti, co-solventi,
razione contiene piu© di un principio attivo, la specifica diluenti, antimicrobici, solubilizzanti, stabilizzanti,
si applica solo a quelli che corrispondono alle condi- ecc. Questi eccipienti non influiscono negativamente
sulle funzioni della mucosa dell'apparato respiratorio

itnemogrA
zioni di cui sopra.

ilareneG
o delle sue ciglia.
Uniformita© di massa (2.9.5). Polveri per preparazioni Le preparazioni per inalazione sono fornite in conteni-
iniettabili o infusioni, soddisfano al saggio per l'unifor- tori multidose o a dose unica. Quando sono forniti in
mita© di massa di preparazioni a dose unica. Se per tutti contenitori pressurizzati, soddisfano alle specifiche
i principi attivi e© prescritto il saggio per l'uniformita© di

eifargonoM
della monografia Preparazioni farmaceutiche pressuriz-

ilareneG
contenuto, il saggio per l'uniformita© di massa non e© zate (0523).
richiesto. Le preparazioni da somministrare come aerosol
. Soddisfano alle specifi- (dispersioni di particelle solide o liquide in un gas) ven-
gono somministrate con uno dei dispositivi seguenti:

ehcituecamraF
Endotossine batteriche-pirogeni

che fissate per preparazioni iniettabili o per infusioni,

dopo dissoluzione o sospensione in un adatto volume ^ nebulizzatore,

emroF
di liquido. ^ inalatore dosatore pressurizzato,
^ inalatore di polvere.
ETICHETTE
eiretaM
PRODUZIONE
emirP
L'etichetta indica le istruzioni per l'allestimento di pre- Durante lo sviluppo di una preparazione per inalazione
parazioni iniettabili e di infusioni. la cui formulazione contenga un antimicrobico, deve
essere dimostrata in modo esauriente all'autorita© com-
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

petente l'efficacia del conservante scelto. Un idoneo

metodo con criteri per la valutazione delle proprieta©
Impianti conservanti della formulazione e© riportato nel testo
Efficacia della conservazione antimicrobica (5.1.3).
ehcitapoemO

Le dimensioni delle particelle di aerosol da inalare sono

inoizaraperP

controllate in modo che una frazione significativa si

DEFINIZIONE depositi nel polmone. Le caratteristiche di granulome-
tria di preparazioni per inalazione si determinano con
Gli impianti sono preparazioni solide, sterili, di dimen- il metodo per la Valutazione aerodinamica delle parti-
sione e forma adatte per l'impianto e il rilascio del/dei celle fini (2.9.18).
ecidnI

principi attivi per un periodo di tempo prolungato. Nello stabilire l'uniformita© della dose erogata, i produt-
Ciascuna dose viene fornita in un contenitore sterile. tori possono sostituire metodi alternativi che compren-

687
Preparazioni per inalazione

dano piu© di un inalatore. Tali metodi dovrebbero assi- B. Preparazioni liquide per nebulizzazione

curare la conformita© di tutti gli inalatori alle specifiche

della Farmacopea. DEFINIZIONE
Gli inalatori dosatori pressurizzati vengono controllati Le preparazioni liquide per inalazione destinate ad
per le perdite. Tutti gli inalatori sono controllati per la essere trasformate in aerosol per mezzo di nebulizzatori
contaminazione particellare estranea. operanti in continuo o di nebulizzatori dosatori sono
soluzioni acquose, sospensioni o emulsioni. Si possono
usare adatti co-solventi o solubilizzanti per aumentare
ETICHETTE la solubilita© dei principi attivi.
Per preparazioni con dosatore, l'etichetta indica: Le preparazioni liquide per nebulizzazione in forma
concentrata, da usare in nebulizzatori operanti in conti-
^ la dose erogata, ad eccezione delle preparazioni per nuo, prima dell'uso vengono diluite al volume fissato
le quali la dose e© stata fissata come dose misurata con il liquido prescritto. I liquidi per nebulizzazione si
o come dose predispensata, possono preparare anche da polveri.
^ se del caso, il numero di attivazioni del dispositivo Il pH delle preparazioni liquide da usare con nebulizza-
necessarie per fornire la dose minima raccoman- tori operanti in continuo non e© inferiore a 3 e non supe-
data, riore a 8,5.
^ il numero di attivazioni per inalatore. Le sospensioni e le emulsioni sono facilmente dispersi-
bili per agitazione e rimangono sufficientemente stabili
L'etichetta indica, se del caso, il nome di ogni antimi- da consentire il rilascio della dose corretta.
crobico aggiunto. Le preparazioni acquose per nebulizzazione fornite in
contenitori multidose possono contenere un adatto
antimicrobico in concentrazioni opportune, eccetto il
caso in cui la preparazione stessa abbia adeguate pro-
Preparazioni liquide per inalazione prieta© antimicrobiche.
I nebulizzatori che operano in continuo sono dispositivi
Si possono distinguere tre categorie di preparazioni che trasformano i liquidi in aerosol per mezzo di gas
liquide per inalazione: compressi, di ultrasuoni o altri metodi. Essi consentono
A. preparazioni destinate ad essere vaporizzate, di inalare la dose ad una opportuna velocita© e forni-
scono particelle di dimensioni che assicurano il deposi-
B. preparazioni liquide per nebulizzazione, tarsi della preparazione nei polmoni.
C. preparazioni pressurizzate con dosatore per inala- I nebulizzatori dosatori sono dispositivi che trasfor-
zione. mano i liquidi in aerosol per mezzo di gas compressi,
ultrasuoni o altri metodi. Il volume di liquido da nebu-
Le preparazioni liquide per inalazione sono soluzioni o lizzare viene dosato cos|© che la dose di aerosol puo©
dispersioni. essere inalata con un respiro.
Le dispersioni sono facilmente dispersibili per agita-
zione e rimangono sufficientemente stabili da permet-
tere il rilascio della dose corretta. Possono essere usati
adatti eccipienti. C. Preparazioni pressurizzate con dosatore per inala-

zione

DEFINIZIONE
A. Preparazioni destinate ad essere vaporizzate
Le preparazioni pressurizzate con dosatore per inala-
zione sono soluzioni, sospensioni o emulsioni fornite
DEFINIZIONE in speciali contenitori dotati di una valvola dosatrice e
che sono tenute sotto pressione con adatti propellenti
Le preparazioni destinate ad essere vaporizzate sono o adatte miscele di propellenti liquefatti che possono
soluzioni, dispersioni o preparazioni solide. Usual- assolvere anche il compito di solventi. Possono essere
mente si aggiungono ad acqua calda e si inala il vapore aggiunti opportuni co-solventi, solubilizzanti e stabiliz-
che si forma. zanti.

688
 Preparazioni per inalazione

inoizircserP
La dose erogata e© quella rilasciata dall'inalatore al gazioni che costituisce la dose minima raccomandata.

ilareneG
paziente. Per alcune preparazioni la dose e© stata stabi- Raccogliere quantitativamente i contenuti dell'apparec-
lita come una dose misurata, che si determina aggiun- chio e determinare la quantita© di principio attivo.
gendo la quantita© depositata entro il dispositivo alla Ripetere l'operazione per altre due dosi.
dose erogata. Puo© essere determinata anche diretta- Scaricare il sistema a perdere, aspettare non meno di 5 s
mente.

isilanA id
idoteM
fra le attivazioni finchë rimangono (n/2) 1 eroga-
‡

zioni, dove n e© il numero di erogazioni fissato in eti-

SAGGI chetta. Raccogliere quattro dosi usando il procedi-
mento sopra descritto.
. I contenitori di norma si Scaricare il sistema a perdere, aspettando non meno di

irotinetnoC
/ ilairetaM
Uniformita© di dose rilasciata

usano capovolti. Per i contenitori che si usano in posi- 5 s fra le attivazioni, finchë rimangono tre dosi. Racco-
zione diritta si applica un saggio equivalente, usando gliere queste tre dosi con il procedimento sopra
metodi che assicurino la raccolta dell'intera dose ero- descritto.
gata. In tutti i casi preparare l'inalatore secondo le Per preparazioni che contengono piu© di un principio
istruzioni per il paziente. attivo, effettuare il saggio per l'uniformita© di dose rila-

ivittaeR
L'apparecchio per la raccolta della dose deve essere in sciata per ogni principio attivo.
grado di raccogliere quantitativamente la dose erogata. Se non diversamente giustificato e autorizzato, la pre-
Si possono usare il seguente apparecchio e procedi- parazione soddisfa al saggio se nove su dieci risultati
mento. sono compresi tra il 75 per cento e il 125 per cento del
valore medio e tutti sono compresi tra il 65 e il 135 per

itnemogrA
ilareneG
L'apparecchio (Figura 0671.-1) e© costituito da una base cento. Se due o tre valori sono fuori dei limiti compresi
porta-filtro con un porta-filtro a rete, come una rete di tra il 75 e il 125 per cento, ripetere il saggio per altri
acciaio inossidabile, un tubo di raccolta che e© graffato due inalatori. Non piu© di tre dei trenta valori sono fuori
o avvitato alla base porta-filtro e un adattatore per il dei limiti compresi tra il 75 e il 125 per cento e nessuno
boccaglio per assicurare una chiusura ermetica fra il dei valori e© situato fuori dei limiti compresi tra il 65 e

eifargonoM
tubo di raccolta e il boccaglio. Usare un adattatore per

ilareneG
il boccaglio che assicuri che la parte anteriore del boc- il 135 per cento.
caglio inalatore sia a livello con la faccia anteriore del Dose di particelle fini . Usando un apparecchio e il pro-
tubo di raccolta del campione. Il raccordo col vuoto e© cedimento descritti nel testo Valutazione aerodinamica
collegato ad un sistema che comprende una pompa da di particelle fini (2.9.18 - apparecchiatura C o D), calco-

ehcituecamraF
vuoto e un regolatore di flusso. La pompa e© regolata in lare la dose di particelle fini.

emroF
modo da aspirare aria attraverso tutto il sistema, com- Numero di erogazioni per inalatore . Prendere un inala-
preso il filtro e l'inalatore in esame, a 28,3 1,5 litri al
6 tore e scaricare i contenuti a perdere, attivando la val-
minuto. L'aria deve essere continuamente aspirata vola ad intervalli di non meno di 5 s. Il numero totale
attraverso l'apparecchio, per evitare perdita di princi- di dosi cos|© rilasciate dall'inalatore non e© inferiore al
pio attivo nell'atmosfera. La base porta-filtro e© predi- numero riportato in etichetta. (Questo saggio puo©
eiretaM

emirP
sposta per dischi filtranti del diametro di 25 mm. essere combinato con il saggio per l'uniformita© di dose
Il disco filtrante e altri materiali usati nella costruzione rilasciata).
dell'apparecchio devono essere compatibili con il prin-
cipio attivo e con i solventi che sono usati per estrarre
Polveri per inalazione
ehcituecamraF

il principio attivo dal filtro. Una estremita© del tubo di

inoizaraperP

ehcificepS

raccolta e© predisposta per tenere strettamente il disco

filtrante contro la base porta-filtro. Quando l'apparec-
chio e© montato, i giunti fra le varie parti sono a tenuta DEFINIZIONE
ermetica, cos|© che quando si fa il vuoto alla base del fil- Le polveri per inalazione sono presentate come polveri
ehcitapoemO

tro, tutta l'aria aspirata attraverso il tubo di raccolta

inoizaraperP

passi attraverso l'inalatore. a dose unica o polveri multidose. Per facilitare il loro
uso, i principi attivi possono essere combinati con un
Se non altrimenti prescritto nelle istruzioni al paziente, adatto veicolo. Si somministrano generalmente per
agitare l'inalatore per 5 s e scaricare una volta a per- mezzo di inalatori di polvere secca. Nei sistemi pre-
dere. Fissare l'inalatore capovolto nell'apparecchio, dosati, l'inalatore e© caricato con polveri predistribuite
abbassando la valvola per un tempo sufficiente ad assi- in capsule o altre forme farmaceutiche adatte. Per
ecidnI

curare uno scarico completo. Ripetere questa opera- sistemi a serbatoio, la dose e© prodotta da una unita©
zione finchë e© stato ottenuto il numero di ero- dosatrice dentro l'inalatore.

689
Preparazioni per inalazione

La dose rilasciata e© la dose rilasciata dall'inalatore. Per

alcune preparazioni, la dose e© stata stabilita come dose
misurata o come dose predispensata. La dose misurata
si determina aggiungendo la quantita© depositata entro
il sistema alla dose erogata. Puo© anche essere determi-
nata direttamente.

SAGGI
Figura 0671.-2. Apparecchio adatto a misurare l'unifor-
Uniformita© della dose rilasciata . In tutti i casi, prepa- mita© della dose rilasciata per inalatori di polveri.
rare l'inalatore come indicato nelle istruzioni per il
paziente. L'apparecchio per raccogliere la dose deve Se non diversamente stabilito, determinare la velocita©
essere in grado di raccogliere quantitativamente la dose di flusso e la durata del saggio utilizzando il tubo per
erogata. Un apparecchio per raccogliere la dose simile raccogliere la dose, il sistema a flusso collegato, un
a quello descritto per la valutazione degli inalatori pres- adatto misuratore di pressione e un adatto misuratore
surizzati con dosatore puo© essere usato purchë le volumetrico di flusso, regolato per il flusso che lascia il
dimensioni del tubo e del filtro possano consentire la misuratore, secondo il procedimento seguente.
velocita© di flusso determinata. Un tubo adatto e© Preparare l'inalatore per l'uso e connetterlo con l'en-
riportato in Figura 0671.-1. Connettere il tubo ad un trata dell'apparecchio utilizzando un adattatore per il
sistema di flusso secondo lo schema specificato in boccaglio per assicurare una chiusura ermetica.
Figura 0671.-2 e in Tabella 0671.-1. Usare un adattatore che assicuri che la parte anteriore
del boccaglio inalatore sia a livello con la faccia ante-
riore del tubo di raccolta del campione. Connettere
una apertura di un manometro al punto di lettura della
pressione relativa, P1, in Figura 0671.-2, e lasciare che
l'altra sia aperta all'atmosfera. Attivare la pompa,
aprire la valvola a due vie e regolare la valvola di con-
trollo del flusso finchë la caduta di pressione attraverso
l'inalatore e© 4,0 kPa (40,8 cm H2O) come indicato dal
manometro. Staccare l'inalatore dall'adattatore per il
boccaglio e, senza toccare la valvola di controllo del
flusso, connettere un misuratore di flusso all'entrata
dell'apparecchio di campionamento. Se la velocita© di
flusso supera i 100 litri al minuto, regolare la valvola
di controllo del flusso per ottenere una velocita© di flusso
di 100 5 litri al minuto. Notare la velocita© volume-
6

trica del flusso d'aria e definirla come velocita© di flusso

del saggio, Q, in litri al minuto. Definire la durata del
saggio di flusso, T, in secondi cos|© che sia aspirato attra-
verso l'inalatore un volume di 4 litri d'aria.
Assicurarsi che si abbia il flusso critico nella valvola di
controllo del flusso, con il procedimento seguente. Con
l'inalatore a posto e la velocita© di flusso del saggio Q,
misurare la pressione assoluta su entrambi i lati della
valvola di controllo (punti di lettura della pressione P2
e P3 in Figura 0671.-2). Un rapporto P3 /P2 0,5 

Figura 0671.-1. Apparecchio raccoglitore di dose per indica il flusso critico. Se non viene indicato flusso cri-
preparazioni pressurizzate con dosatore. tico, regolare la pompa ad una maggiore potenza e
Dimensioni in millimetri misurare di nuovo la velocita© di flusso del saggio.

690
 Preparazioni per inalazione

inoizircserP
Tabella 0671.-1. Specificazioni dell'apparecchio descritto in Figura 0671.-2.

ilareneG
Codice Articolo Descrizione

A Tubo di raccolta del cam- Idoneo a raccogliere quantitativamente la dose erogata, per esempio

isilanA id
Tubo di raccolta della dose simile a quello descritto in Figura 0671.-1

idoteM
pione con dimensioni Ò int. 34,85 mm per 12 cm di lunghezza (per es. pro-
dotto numero XX40 047 00, Millipore Corporation, Bedford, MA
01732 con tubo di uscita modificato, Ò int. 8 mm, adattato con un


prodotto Gelman numero 61631) o equivalente.

irotinetnoC
/ ilairetaM
B Filtro Filtro di 47 mm, per es. Filtro di fibre di vetro A/E (Gelman Sciences,
Ann Arbor, MI 48106), o equivalente.

ivittaeR
C Raccordo Ò int. 8 mm, per es. un breve collegamento metallico con branca a


basso diametro a P3.

D Tubo da vuoto Ò int. 8 0,5 mm 50 10 cm di lunghezza, per es. tubo in silicone

itnemogrA
ilareneG
6 2 6

con Ò est. di 14 mm e Ò int. di 8 mm.

E Valvola solenoide a due vie Orifizio che offra resistenza minima al flusso d'aria con Ò int. 8 mm e


un tempo massimo di risposta di 100 ms (per es., tipo 256-A08, Bu« rkert

eifargonoM
GmbH, D-74653 Ingelfingen) o equivalente.

ilareneG
F Pompa da vuoto La pompa deve essere capace di aspirare la richiesta velocita© di flusso
attraverso l'apparecchio montato con l'inalatore di polvere secca nell'a-

ehcituecamraF
dattatore del boccaglio (per es. prodotto tipo 1023, 1423 o 2565, Gast

emroF
Manufacturing Inc., Benton Harbor, MI 49022) o equivalente. Connet-
tere la pompa alla valvola solenoide usando un tubo da vuoto corto
e/o largo ( 10 mm Ò int.) e raccordi per rendere minimi i requisiti di


capacita© della pompa.

eiretaM

emirP
G Timer Un timer capace di regolare la valvola solenoide per il periodo di tempo
richiesto (per es. Tipo G814, RS Components International, Corby,
NN17 9RS, UK), o equivalente. ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

P1 Rubinetto per la pressione 2,2 mm Ò int., 3,1 mm Ò est. allineato con la superficie interna del tubo
di raccolta del campione centrato e senza bavature, 59 mm dalla sua
entrata.
ehcitapoemO
inoizaraperP

P1, P2, P3 Misure di pressione Pressione relativa all'atmosfera (P1) o pressione assoluta (P2 e P3).

H Valvola di controllo del Valvola regolatrice aggiustabile con massimo Cv 1, (per es. Tipo 8


flusso FV12LNSS, Parker Hannifin plc., Barnstaple, EX31 1NP, UK) o equi-
valente.
ecidnI

691
Preparazioni per irrigazione

Sistemi predispensati. Preparare l'inalatore come indi- sci scaricati. Il numero totale di dosi rilasciate non e©
cato nelle istruzioni al paziente e connetterlo con l'ap- inferiore al numero stabilito in etichetta. (Questo sag-
parecchio usando un adattatore che assicuri una buona gio puo© essere combinato con il saggio per l'uniformita©
chiusura. Aspirare aria attraverso l'inalatore usando le di dose rilasciata).
condizioni predeterminate. Ripetere il procedimento
finchë e© stato raccolto il numero di erogazioni che costi-
tuisce la dose minima raccomandata. Raccogliere
quantitativamente i contenuti dell'apparecchio e deter- 1116
minare la quantita© di principio attivo.
Ripetere il procedimento per ulteriori nove dosi.
Sistemi serbatoio. Preparare l'inalatore come indicato
nelle istruzioni al paziente e connetterlo con l'apparec- PREPARAZIONI PER IRRIGAZIONE

chio usando un adattatore che assicuri una buona chiu- Praeparationes ad irrigationem
sura. Aspirare aria attraverso l'inalatore usando le con-
dizioni predeterminate. Ripetere il procedimento finchë DEFINIZIONE
e© stato raccolto il numero di erogazioni che costituisce
la dose minima raccomandata. Raccogliere quantitati- Le preparazioni per irrigazione sono preparazioni
vamente i contenuti dell'apparecchio e determinare la acquose sterili di grande volume destinate ad essere
quantita© di principio attivo. impiegate per l'irrigazione di cavita© corporee, ferite e
Ripetere il procedimento per ulteriori due dosi. superfici, ad esempio durante interventi chirurgici.
Scaricare il sistema a perdere finchë rimangono Le preparazioni per irrigazione sono costituite da solu-
(n/2) 1 erogazioni, dove n e© il numero di erogazioni zioni preparate disciogliendo uno o piu© principi attivi,
‡

fissate in etichetta. Se necessario, fare riposare l'inala- elettroliti o sostanze osmoticamente attive in acqua
tore per scaricare le cariche elettrostatiche. Raccogliere conforme alle specifiche riportate nella monografia
quattro dosi col procedimento descritto sopra. Acqua per preparazioni iniettabili (0169) oppure sono
costituite esclusivamente da tale acqua. In quest'ultimo
Scaricare il sistema a perdere finchë rimangono tre caso, la preparazione puo© essere definita in etichetta
dosi. Se necessario fare riposare l'inalatore per scari- come acqua per irrigazione. Le soluzioni per irriga-
care le cariche elettrostatiche. Raccogliere tre dosi zione generalmente sono rese isotoniche con il sangue.
usando il procedimento descritto sopra. Esaminate in adeguate condizioni di visibilita© , le prepa-
Per preparazioni contenenti piu© di un principio attivo, razioni per irrigazione sono limpide e praticamente
effettuare il saggio per l'uniformita© di dose erogata per esenti da particelle.
ciascun principio attivo. Le preparazioni per irrigazione sono fornite in conteni-
La preparazione soddisfa al saggio se nove dei dieci tori a dose unica. I contenitori e le chiusure sono con-
risultati sono compresi fra il 75 per cento e il 125 per formi alle specifiche riportate per i contenitori per le
cento del valore medio e tutti sono compresi tra il 65 e preparazioni per uso parenterale (3.2.1 e 3.2.2) ma l'a-
il 135 per cento. Se due o tre valori sono fuori dei limiti pertura del contenitore per la somministrazione non e©
compresi tra il 75 e il 125 per cento, ripetere il saggio adattabile ai dispositivi utilizzati per la somministra-
per altri due inalatori. Non piu© di tre dei trenta valori zione endovenosa e non consente che la preparazione
sono fuori dei limiti compresi tra il 75 e il 125 per cento per irrigazione sia somministrata con tali dispositivi.
e nessuno dei valori e© situato fuori dei limiti compresi
tra il 65 e il 135 per cento. PRODUZIONE
In casi giustificati e autorizzati, questi limiti possono Le preparazioni per irrigazione si preparano usando
essere allargati, ma nessun valore deve essere maggiore materiali e metodi che assicurano la sterilita© ed evitano
del 150 per cento o inferiore al 50 per cento del valore la contaminazione e la crescita di microrganismi; rac-
medio. comandazioni al riguardo sono fornite nel testo Metodi
Dose di particelle fini . Usando l'apparecchio e il proce- di preparazione di prodotti sterili (5.1.1).
dimento descritti nel testo Valutazione aerodinamica di
particelle fini (2.9.18 - apparecchiatura C o D), calcolare
la dose di particele fini. SAGGI
Numero di erogazioni per inalatore per inalatori multi- Massa o volume rilasciabile(2.9.28). Le preparazioni
dose. Scaricare le dosi dall'inalatore ad una predetermi- per irrigazioni fornite in contenitori a dose singola sod-
nata velocita© di flusso, finchë e© vuoto. Registrare i rila- disfano al saggio.

692
 Preparazioni rettali

inoizircserP
(2.6.1). Le preparazioni per irrigazione soddi- PRODUZIONE

ilareneG
Sterilita©

sfano al saggio di sterilita© .

Durante lo sviluppo di una preparazione rettale, la cui
(2.6.14). Non piu© di 0,5 U.I. di
Endotossine batteriche

endotossine per millilitro. formulazione contenga un antimicrobico, deve essere

dimostrata, in modo esauriente, all'autorita© compe-
(2.6.8). Le preparazioni per le quali non puo©
tente l'efficacia del conservante scelto. Un idoneo

isilanA id
Pirogeni

idoteM
essere effettuato un saggio convalidato per le endotos- metodo con i criteri per la valutazione delle proprieta©
sine batteriche, soddisfano al saggio dei pirogeni. conservanti della formulazione e© riportato nel testo
Se non diversamente giustificato e autorizzato, iniettare
Efficacia della conservazione antimicrobica (5.1.3).
10 ml di preparazione per chilogrammo di massa dei Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva-
conigli.

irotinetnoC
zione e nella distribuzione delle preparazioni rettali, si

/ ilairetaM
adottano opportune misure atte ad assicurare la loro
ETICHETTE qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo
sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre-
L'etichetta indica: parazioni farmaceutiche (5.1.4).
^ che la preparazione non deve essere usata per inie- Nella produzione di preparazioni rettali semisolide e

ivittaeR
zione, liquide contenenti particelle disperse, sono prese misure
^ che la preparazione deve essere usata in una sola atte ad assicurare una idonea e controllata dimensione
volta e che ogni parte non utilizzata della stessa delle particelle in relazione all'uso previsto.
deve essere scartata.

itnemogrA
ilareneG
SAGGI
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non e© diversamente
1145
prescritto o giustificato ed autorizzato, le preparazioni
a dose unica con un contenuto in principio attivo infe-

eifargonoM

ilareneG
riore a 2 mg o al 2 per cento della massa totale soddi-
sfano al saggio A (compresse) o al saggio B (supposte,
PREPARAZIONI RETTALI capsule rettali) per l'uniformita© di contenuto di prepa-
Rectalia razioni a dose unica. Se la preparazione ha piu© di un

ehcituecamraF
principio attivo, la specifica si applica solo a quei prin-
cipi attivi che corrispondono alle condizioni di cui

emroF
DEFINIZIONE sopra.
Le preparazioni rettali sono preparazioni destinate Uniformita© di massa (2.9.5). Le preparazioni solide a
all'uso rettale allo scopo di ottenere un effetto sistemico dose unica soddisfano al saggio per l'uniformita© di
o locale, oppure possono essere destinate a fini diagno- massa. Se per tutti i principi attivi e© prescritto il saggio

eiretaM
stici. per l'uniformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita©

emirP
Se del caso, i contenitori per le preparazioni rettali sod- di massa non e© richiesto.
disfano alle specifiche per i Materiali usati nella fabbri- Massa o volume rilasciabile (2.9.28). Le preparazioni
cazione di contenitori (3.1. e sottosezioni) e Contenitori rettali liquide e semisolide fornite in contenitori a dose
ehcituecamraF

(3.2. e sottosezioni). unica soddisfano al saggio.

inoizaraperP

ehcificepS

Si possono distinguere varie categorie di preparazioni . Puo© essere effettuato un saggio idoneo a
rettali:
Dissoluzione

dimostrare l'appropriato rilascio del o dei principi attivi

^ supposte, da preparazioni solide a dose unica, per esempio il sag-
^ capsule rettali, gio di dissoluzione per supposte e capsule molli (2.9.3).
ehcitapoemO
inoizaraperP

^ soluzioni, emulsioni e sospensioni rettali, Se e© prescritto un saggio di dissoluzione, puo© non essere
^ polveri e compresse per soluzioni e sospensioni ret- richiesto un saggio di disaggregazione.
tali,
^ preparazioni semisolide rettali, ETICHETTE
^ schiume rettali,
ecidnI

L'etichetta indica il nome di ogni antimicrobico

^ tamponi rettali. aggiunto.

693
Preparazioni rettali

Supposte Capsule rettali

DEFINIZIONE DEFINIZIONE
Le capsule rettali sono preparazioni solide a dose unica
Le supposte sono preparazioni solide a dose unica. generalmente simili alle capsule molli descritte nella
La forma, il volume e la consistenza delle supposte monografia Capsule (0016) tranne per il fatto che pos-
sono adatti alla somministrazione rettale. sono avere un rivestimento lubrificante. Hanno forma
allungata, sono lisce e di aspetto uniforme.
Le supposte contengono uno o piu© principi attivi
dispersi o disciolti in una adatta base che puo© essere
solubile, dispersibile in acqua o che puo© fondere alla PRODUZIONE
temperatura corporea. Eccipienti quali diluenti, adsor- Si effettua un saggio idoneo a dimostrare l'appropriato
benti, tensioattivi, lubrificanti, conservanti antimicro- rilascio del o dei principi attivi dalle capsule rettali
bici e coloranti, autorizzati dall'autorita© competente, destinate al rilascio modificato oppure ad un'azione
possono essere aggiunti se necessario. locale prolungata.

PRODUZIONE SAGGI
. Se non sono destinate al rilascio
Le supposte sono preparate per compressione o per
Disaggregazione

modificato del principio attivo o ad un'azione locale

fusione. Se necessario, il o i principi attivi vengono dap- prolungata, soddisfano al saggio Disaggregazione delle
prima macinati e setacciati attraverso un setaccio supposte e degli ovuli (2.9.2). Se non diversamente giusti-
appropriato. La preparazione per fusione prevede che ficato ed autorizzato, esaminare lo stato delle capsule
la massa medicamentosa, sufficientemente liquefatta dopo 30 min.
per riscaldamento, sia colata in appositi stampi e
quindi lasciata solidificare per raffreddamento. Soluzioni, emulsioni e sospensioni
Per questo processo sono disponibili diversi eccipienti
quali grassi solidi, macrogol, burro di cacao e varie rettali
miscele a consistenza gelatinosa costituite, per esempio,
da gelatina, acqua e glicerolo. Se del caso, si effettua la
determinazione del punto di rammollimento di suppo- DEFINIZIONE
ste lipofile (2.9.22) e/o la determinazione della resi- Le soluzioni, le emulsioni e le sospensioni rettali sono
stenza alla rottura di supposte (2.9.24). preparazioni liquide destinate all'uso rettale allo scopo
Si effettua un saggio idoneo a dimostrare l'appropriato di ottenere un effetto locale o sistemico, oppure pos-
rilascio del o dei principi attivi da supposte destinate sono essere usate a fini diagnostici.
al rilascio modificato oppure ad un'azione locale pro- Sono preparazioni fornite in contenitori a dose unica e
lungata. contengono uno o piu© principi attivi disciolti o dispersi
in acqua, glicerolo, macrogol o altri adatti solventi.
Nella produzione di supposte contenenti particelle Le emulsioni possono evidenziare una separazione di
disperse, sono prese misure adatte ad assicurare una fase ma sono facilmente ridisperse per agitazione.
idonea e controllata dimensione delle particelle. Le sospensioni possono presentare un sedimento che si
disperde facilmente dopo agitazione per dare una
sospensione che rimane sufficientemente stabile da per-
SAGGI mettere la somministrazione di una corretta dose.
Le soluzioni, le emulsioni e le sospensioni rettali pos-
Disaggregazione . Se non sono destinate al rilascio sono contenere eccipienti, ad esempio per regolare la
modificato del principio attivo o ad un'azione locale viscosita© della preparazione, aggiustare o stabilizzare il
prolungata, soddisfano al saggio Disaggregazione delle pH, aumentare la solubilita© del o dei principi attivi o
supposte e degli ovuli (2.9.2). Se non diversamente giusti- stabilizzare la preparazione. Queste sostanze non
ficato ed autorizzato, esaminare le supposte costituite influenzano negativamente l'azione terapeutica previ-
da un eccipiente grasso dopo 30 min e quelle costituite sta o, alle concentrazioni impiegate, non hanno azione
da un eccipiente idrosolubile dopo 60 min. irritante a livello locale.

694
 Preparazioni vaginali

inoizircserP
Le soluzioni, le emulsioni e le sospensioni rettali sono Schiume rettali

ilareneG
confezionate in recipienti di volume compreso tra
2,5 ml e 2000 ml. Il contenitore e© tale da consentire la
somministrazione rettale o e© dotato di un adatto appli- DEFINIZIONE
catore.
Le schiume rettali soddisfano alle specifiche della

isilanA id
idoteM
monografia Schiume medicate (1105).
Polveri e compresse per soluzioni Tamponi rettali
e sospensioni rettali

irotinetnoC
/ ilairetaM
DEFINIZIONE DEFINIZIONE
Le polveri e le compresse per la preparazione di solu- I tamponi rettali sono preparazioni solide a dose unica
zioni o sospensioni rettali sono preparazioni a dose destinate ad essere introdotte nella parte inferiore del
retto per un limitato periodo di tempo.

ivittaeR
unica da disciogliere o disperdere in acqua al momento
della somministrazione. Possono contenere eccipienti Soddisfano alle specifiche della monografia Tamponi
per facilitare la dissoluzione o la dispersione o per pre- medicati (1155).
venire l'aggregazione delle particelle.
Dopo dissoluzione o sospensione, soddisfano alle spe-

itnemogrA
ilareneG
cifiche per le soluzioni o le sospensioni rettali, rispetti-
vamente. 1164

SAGGI

eifargonoM

ilareneG
Disaggregazione . Le compresse per soluzioni o sospen- PREPARAZIONI VAGINALI

sioni rettali si disaggregano entro 3 min quando ven- Vaginalia

gono esaminate secondo il saggio di disaggregazione
delle compresse e delle capsule (2.9.1) ma utilizzando

ehcituecamraF
acqua R a temperature comprese tra 15 ‘C e 25 ‘C. DEFINIZIONE

emroF
Le preparazioni vaginali sono preparazioni liquide,
ETICHETTE semisolide o solide destinate alla somministrazione in
vagina, generalmente per ottenere un effetto locale.
L'etichetta indica: Contengono, in una base opportuna, uno o piu© principi
^ il metodo di preparazione della soluzione o della attivi.
eiretaM

emirP
sospensione rettale, Se del caso, i contenitori per preparazioni vaginali sod-
^ le condizioni e il periodo di conservazione della disfano
cazione
alle specifiche dei Materiali usati per la fabbri-
di contenitori (3.1 e sottosezioni) e Contenitori
soluzione o sospensione dopo ricostituzione. (3.2 e sottosezioni).
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Si possono distinguere diverse categorie di preparazioni

Preparazioni semisolide rettali vaginali:
^ ovuli,
DEFINIZIONE ^ compresse vaginali,
ehcitapoemO
inoizaraperP

Le preparazioni semisolide rettali sono unguenti, creme ^ capsule vaginali,

o geli. Spesso sono confezionate come preparazioni a ^ soluzioni, emulsioni e sospensioni vaginali,
dose unica in contenitori dotati di un adatto applica- ^ compresse per soluzioni e sospensioni vaginali,
tore. ^ preparazioni vaginali semisolide,
Le preparazioni semisolide rettali soddisfano alle speci- ^ schiume vaginali,
ecidnI

fiche della monografia Preparazioni semisolide per

applicazione cutanea (0132). ^ tamponi vaginali medicati.

695
Preparazioni vaginali

PRODUZIONE particelle del o dei principi attivi. Se necessario, i prin-

Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva- cipi attivi sono prima macinati e setacciati attraverso
zione e nella distribuzione di preparazioni vaginali, si adatto setaccio.
adottano opportune misure atte ad assicurare la loro Quando e© preparata per fusione, la massa medicata,
qualita© microbiologica; raccomandazioni al riguardo sufficientemente liquefatta per riscaldamento, viene
sono fornite nel testo Requisiti microbiologici delle pre- versata in adatti stampi, dove solidifica per raffredda-
parazioni farmaceutiche (5.1.4). mento. Per questo procedimento sono disponibili molti
eccipienti come grassi solidi, macrogol, burro di cacao
e varie miscele gelatinose costituite, per esempio, di
SAGGI gelatina, acqua e glicerolo.
Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non e© diversamente Si effettua un saggio idoneo a dimostrare l'appropriato
prescritto o giustificato e autorizzato, le preparazioni rilascio del o dei principi attivi da ovuli destinati a rila-
solide a dose unica con un contenuto in principio attivo scio modificato oppure ad azione locale prolungata.
inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per cento della massa Se del caso, si fa la determinazione della resistenza alla
totale soddisfano al saggio A (compresse vaginali) o al rottura di ovuli (2.9.24).
saggio B (ovuli, capsule vaginali) per l'uniformita© di
contenuto delle preparazioni a dose unica. Se la prepa- SAGGI
razione ha piu© di un principio attivo, la specifica si
applica solo a quei componenti che corrispondono alle Disaggregazione . Se non sono destinati ad azione locale
condizioni di cui sopra. prolungata, soddisfano al saggio Disaggregazione delle
(2.9.5). Le preparazioni vaginali supposte e degli ovuli (2.9.2). Se non diversamente giusti-
Uniformita© di massa

solide a dose unica soddisfano al saggio per l'unifor- ficato ed autorizzato, esaminare lo stato degli ovuli
mita© di massa di preparazioni a dose unica. Se per tutti dopo 60 min.
i principi attivi e© prescritto il saggio per l'uniformita© di
contenuto, il saggio per l'uniformita© di massa non e© Compresse vaginali
richiesto.
Massa o volume rilasciabile (2.9.28). Le preparazioni DEFINIZIONE
vaginali liquide e semisolide fornite in contenitori a Le compresse vaginali sono preparazioni solide a dose
dose unica soddisfano al saggio. unica. Generalmente sono conformi alle definizioni di
Dissoluzione . Puo© essere effettuato un saggio idoneo a compresse non rivestite o rivestite con film, riportate
dimostrare l'appropriato rilascio del o dei principi attivi nella monografia Compresse (0478).
da preparazioni solide a dose unica, per esempio uno
dei saggi descritti nel testo Saggio di dissoluzione per le
forme farmaceutiche solide (2.9.3). PRODUZIONE
Se e© prescritto un saggio di dissoluzione, puo© non essere Si effettua un saggio opportuno per dimostrare l'appro-
richiesto un saggio di disaggregazione. priato rilascio del o dei principi attivi da compresse
vaginali destinate ad azione locale prolungata.
Ovuli
SAGGI
DEFINIZIONE Disaggregazione . Se non sono destinate ad azione
Gli ovuli sono preparazioni solide a dose unica. Hanno locale prolungata, soddisfano al saggio di disaggrega-
forme diverse, di solito ovoidale, con volume e consi- zione delle supposte e degli ovuli (metodo specifico per
stenza idonei all'inserimento nella vagina. Contengono compresse vaginali (2.9.2)). Se non diversamente giusti-
uno o piu© principi attivi dispersi o disciolti in una base ficato e autorizzato, esaminare lo stato delle compresse
adatta che puo© essere solubile o dispersibile in acqua o dopo 30 min.
puo© fondere a temperatura corporea. Se necessario,
possono essere addizionati eccipienti come diluenti, Capsule vaginali
assorbenti, tensioattivi, lubrificanti, antimicrobici e
coloranti autorizzati dall'autorita© competente. DEFINIZIONE
PRODUZIONE Le capsule vaginali sono preparazioni solide a dose
unica. Generalmente sono simili alle capsule molli, dif-
Gli ovuli sono usualmente preparati per fusione. Se del ferendone solo nella forma e nella dimensione.
caso, nella produzione di ovuli sono prese misure atte Le capsule vaginali hanno forme diverse, generalmente
ad assicurare una idonea e controllata dimensione delle ovoidale; sono lisce e di aspetto uniforme.

696
 Preparazioni vaginali

inoizircserP
PRODUZIONE somministrazione. Possono contenere eccipienti per

ilareneG
Si effettua un saggio idoneo a dimostrare l'appropriato facilitare la dissoluzione o dispersione o per prevenire
rilascio del o dei principi attivi dalle capsule vaginali la sedimentazione.
destinate ad un'azione locale prolungata. A parte il saggio di disaggregazione, le compresse per
soluzioni o sospensioni vaginali corrispondono alla
definizione di Compresse (0478).

isilanA id
idoteM
SAGGI Dopo dissoluzione o dispersione soddisfano alle speci-
Disaggregazione . Se non sono destinate ad azione fiche per soluzioni o sospensioni vaginali, secondo il
locale prolungata, soddisfano al saggio Disaggrega- caso.
zione delle supposte e degli ovuli (2.9.2). Se non diversa-

irotinetnoC
mente giustificato e autorizzato, esaminare lo stato SAGGI

/ ilairetaM
delle capsule dopo 30 min.
Disaggregazione . Le compresse per soluzioni o sospen-
sioni vaginali disaggregano entro 3 min quando si effet-
Soluzioni, emulsioni e sospensioni tua il saggio per la disaggregazione di compresse e
capsule (2.9.1), ma usando acqua R a temperatura com-
vaginali presa tra 15 ‘C e 25 ‘C.

ivittaeR
DEFINIZIONE ETICHETTE
Le soluzioni, le emulsioni e sospensioni vaginali sono L'etichetta indica:
preparazioni liquide destinate ad esercitare un effetto ^ il metodo di preparazione della soluzione o sospen-

itnemogrA
ilareneG
locale, per irrigazione o per scopi diagnostici. Possono sione vaginale,
contenere eccipienti, per esempio per regolare la visco- ^ le condizioni e la durata di conservazione della
sita© della preparazione, per regolare o stabilizzare il soluzione o sospensione dopo costituzione.
pH, per aumentare la solubilita© del o dei principi attivi
o per stabilizzare la preparazione. Gli eccipienti non
Preparazioni vaginali semisolide

eifargonoM
influenzano negativamente l'azione farmacologica pre-

ilareneG
vista o, alle concentrazioni usate, non causano irrita-
zione locale. DEFINIZIONE
Le emulsioni vaginali possono evidenziare separazione
di fase ma si ridisperdono facilmente per agitazione. Le preparazioni vaginali semisolide sono pomate,

ehcituecamraF
Le sospensioni vaginali possono mostrare un sedi- creme o geli.

emroF
mento che e© facilmente ridisperso per agitazione, a dare Sono spesso fornite in contenitori a dose singola.
una sospensione che rimane sufficientemente stabile Il contenitore e© dotato di adatto applicatore.
per consentire il rilascio di una preparazione omoge- Le preparazioni vaginali semisolide soddisfano alle
nea. specifiche della monografia Preparazioni semisolide per
Sono fornite in contenitori a dose singola. Il conteni- applicazione cutanea (0132).

eiretaM
tore e© adattato a rilasciare la preparazione nella vagina

emirP
oppure e© accompagnato da un adatto applicatore. Schiume vaginali
PRODUZIONE DEFINIZIONE
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Nella produzione di sospensioni vaginali si prendono Le schiume vaginali soddisfano alle specifiche della
misure atte a garantire una adatta e controllata dimen- monografia Schiume medicate (1105).
sione delle particelle, in relazione all'uso previsto.
Tamponi vaginali medicati
ehcitapoemO

Compresse per soluzioni e sospensioni

inoizaraperP

vaginali DEFINIZIONE
I tamponi vaginali medicati sono preparazioni solide, a
DEFINIZIONE dose unica, destinate ad essere inserite nella vagina per
Le compresse destinate alla preparazione di soluzioni e un periodo di tempo limitato.
ecidnI

sospensioni vaginali sono preparazioni a dose unica I tamponi vaginali medicati soddisfano alle specifiche
che sono disciolte o disperse in acqua al momento della della monografia Tamponi medicati (1155).

697
Dispositivi intraruminali

gettati per essere trattenuti nel rumine al fine di rila-

1155
sciare il o i principi attivi in una maniera continua
o pulsatile. Il periodo di rilascio del o dei principi attivi
puo© variare da giorni a settimane in funzione della
natura della formulazione e/o del dispositivo di
TAMPONI MEDICATI
rilascio.
Tamponae medicatae I dispositivi intraruminali possono essere somministrati
Ulteriori specifiche per i tamponi medicati si possono tro- usando un'idonea pistola in grado di rilasciare mate-
vare in altre monografie generali, per esempio: Prepara- riali di forma sferica. Alcuni dispositivi intraruminali
zioni rettali (1145), Preparazioni vaginali (1164) e Pre- sono destinati a galleggiare sulla superficie del fluido
parazioni auricolari (0652). ruminale mentre altri sono destinati a rimanere sul
fondo del rumine o del reticolo. Ciascun dispositivo ha
DEFINIZIONE una densita© adatta per il suo scopo.
I tamponi medicati sono preparazioni solide a dose
unica, da inserire nelle cavita© del corpo per un limitato PRODUZIONE
periodo di tempo. Sono costituiti da un materiale
adatto come cellulosa, collagene o silicone impregnato Per un rilascio continuo, il dispositivo intraruminale e©
con uno o piu© principi attivi. predisposto per il rilascio del o dei principi attivi ad
una velocita© definita per un periodo stabilito di tempo.
PRODUZIONE Cio© puo© essere realizzato mediante erosione, corro-
sione,
Nella produzione, nel confezionamento, nella conserva- adatto mezzo diffusione, pressione osmotica o ogni altro
zione e distribuzione dei tamponi medicati si adottano chimico, fisico o chimico-fisico.
opportune misure atte ad assicurare la loro qualita© Per un rilascio pulsatile, il dispositivo intraruminale e©
microbiologica; raccomandazioni al riguardo sono for- progettato per il rilascio di una quantita© specifica del o
nite nel testo Requisiti microbiologici delle preparazioni dei principi attivi ad uno o a piu© tempi intermedi stabi-
farmaceutiche (5.1.4). liti. Cio© puo© essere realizzato mediante corrosione degli
elementi metallici del dispositivo intraruminale ad
ETICHETTE opera dei fluidi ruminali, con conseguente rilascio
L'etichetta indica la quantita© del o dei principi attivi per sequenziale
mente sotto
delle unita© costituenti che sono general-
forma di compresse.
tampone.
Nella produzione dei dispositivi intraruminali si adot-
tano misure atte ad assicurare un appropriato rilascio
dei principi attivi.
1228
Nella produzione, confezionamento, conservazione e
distribuzione dei dispositivi intraruminali, si adottano
misure atte ad assicurare la loro qualita© microbiolo-
DISPOSITIVI INTRARUMINALI gica; raccomandazioni al riguardo sono fornite nel
Praeparationes intraruminales testo Requisiti microbiologici delle preparazioni farma-
ceutiche (5.1.4).
Le specifiche di questa monografia non si applicano alle
preparazioni (talvolta note come boli) quali grosse com-
presse convenzionali, capsule o forme farmaceutiche otte- SAGGI
nute per fusione che danno un rilascio immediato o pro-
lungato di principio/i attivo/i. Tali preparazioni soddi- Uniformita© di contenuto (2.9.6). Se non diversamente
sfano alle pertinenti parti delle monografie Compresse giustificato e autorizzato, le unita© (compresse) costi-
(0478) o Capsule (0016). tuenti i dispositivi intraruminali con un contenuto in
principio attivo inferiore a 2 mg o inferiore al 2 per
DEFINIZIONE cento della massa totale soddisfano al saggio A per l'u-
niformita© di contenuto delle preparazioni a dose unica.
I dispositivi intraruminali sono preparazioni solide Se la preparazione contiene piu© di un principio attivo,
contenenti uno o piu© principi attivi. Sono destinati alla la specifica si applica solo a quei principi attivi che cor-
somministrazione per via orale ai ruminanti e sono pro- rispondono alle condizioni sopracitate.

698
 Preparazioni intramammarie per uso veterinario

inoizircserP
(2.9.5). Se non diversamente giusti- PRODUZIONE

ilareneG
Uniformita© di massa

ficato e autorizzato, le unita© costituenti i dispositivi

intraruminali soddisfano al saggio per l'uniformita© di Un principio attivo destinato ad essere
massa. Se per tutti i principi attivi e© prescritto il saggio
Principio attivo.

incorporato in una miscela medicata soddisfa alle spe-

per l'uniformita© di contenuto, il saggio per l'uniformita© cifiche della pertinente monografia della Farmacopea
di massa non e© richiesto.

isilanA id
Europea, se non diversamente giustificato e autorizzato

idoteM
per premiscele gia© esistenti.
ETICHETTE
SAGGI

irotinetnoC
L'etichetta indica:

/ ilairetaM
^ per i dispositivi a rilascio continuo, la dose rila- Perdita all'essiccamento (2.2.32). Se non diversamente
sciata per unita© di tempo, giustificato e autorizzato, per premiscele sottoforma di
granulato o di polvere, massimo 15,0 per cento, deter-
^ per i dispositivi a rilascio pulsatile, la dose rila- minata su 3,000 g per essiccamento in stufa a 100-
sciata a tempi stabiliti. 105 ‘C per 2 h.

ivittaeR
ETICHETTE

itnemogrA
L'etichetta indica:

ilareneG
1037

^ la specie animale alla quale e© destinata la miscela,

^ le istruzioni per la preparazione degli alimenti
medicati dalla premiscela e dagli alimenti di base,

eifargonoM
PREMISCELE PER MANGIMI

ilareneG
MEDICATI PER USO VETERINARIO
^ se del caso, il tempo che deve intercorrere fra la
Praeadmixta ad alimenta medicata sospensione della somministrazione della premi-
ad usum veterinarium scela diluita e la macellazione dell'animale per l'ali-
mentazione umana.

ehcituecamraF
DEFINIZIONE

emroF
^ se del caso, se la premiscela e© adatta o no ad essere
incorporata in alimenti liquidi come latte e zuppa.
Le premiscele per alimenti medicati per uso veterinario
sono miscele di uno o piu© principi attivi, di norma in
appropriati eccipienti, preparate per facilitare la som-

eiretaM
ministrazione di principi attivi agli animali. Vengono

emirP
usate esclusivamente nella preparazione di mangimi 0945

medicati, per semplice miscelazione con altre sostanze.

Si presentano sotto forma di granulati, polveri, prepa-
ehcituecamraF
inoizaraperP

razioni semisolide o liquide. Utilizzate come polveri o

ehcificepS

granulati sono facilmente scorrevoli ed omogenee; PREPARAZIONI INTRAMAMMARIE

qualsiasi aggregato si sbriciola durante la normale PER USO VETERINARIO

manipolazione. In forma liquida, sono soluzioni o Praeparationes intramammariae

sospensioni omogenee che possono essere ottenute da ad usum veterinarium
ehcitapoemO
inoizaraperP

geli tissotropici o da liquidi strutturati. La dimensione

delle particelle ed altre caratteristiche sono tali da
garantire una uniforme distribuzione del/dei principi DEFINIZIONE
attivi nell'alimento finale. Se non diversamente giustifi-
cato e autorizzato, le istruzioni per l'uso stabiliscono Le preparazioni intramammarie per uso veterinario
che la concentrazione di una premiscela in forma di sono preparazioni sterili da introdurre nella ghiandola
ecidnI

polvere o di granulato sia almeno 0,5 per cento del mammaria attraverso il canale del capezzolo. Esistono
mangime medicato. due categorie principali: quelle destinate alla sommini-

699
Preparazioni liquide veterinarie per applicazione cutanea

strazione ad animali in lattazione e quelle destinate alla SAGGI

somministrazione ad animali alla fine della lattazione
o ad animali non in lattazione, per il trattamento o la Massa o volume . Spremere la maggiore
rilasciabile

prevenzione di infezioni. quantita© possibile del contenuto di 10 contenitori,

secondo le indicazioni riportate in etichetta. La massa
Le preparazioni intramammarie per uso veterinario o il volume medio ottenuto non differiscono piu© del
sono soluzioni, emulsioni, sospensioni o preparazioni 10 per cento dalla massa o dal volume nominali.
semisolide che contengono uno o piu© principi attivi in (2.6.1). Le preparazioni intramammarie per
un veicolo appropriato. Possono contenere eccipienti Sterilita©

uso veterinario soddisfano al saggio di sterilita© , effet-

quali stabilizzanti, emulsionanti, sospendenti ed adden- tuato con la tecnica della filtrazione su membrana o, in
santi. Le sospensioni possono presentare un sedimento casi giustificati, con inoculazione diretta del mezzo di
che si disperde facilmente per agitazione. Le emulsioni coltura. Spremere il contenuto di dieci contenitori e
possono presentare segni di separazione di fase, ma mescolare accuratamente. Per ciascun mezzo di coltura
sono facilmente ricostituite per agitazione. utilizzare 0,5-1 g (oppure, secondo il caso, 0,5-1 ml)
Se non diversamente giustificato ed autorizzato, le pre- prelevati dal campione miscelato.
parazioni intramammarie per uso veterinario sono con-
fezionate in contenitori a dose unica per l'introduzione CONSERVAZIONE
in un solo canale del capezzolo di un animale.
Se confezionate in recipienti multidose, le preparazioni Conservare in un recipiente sterile, ermeticamente
acquose contengono un adatto antimicrobico in con- chiuso, con chiusura inviolabile.
centrazione appropriata, a meno che la preparazione
non abbia di per së adeguate proprieta© antimicrobiche. ETICHETTE
Si devono prendere precauzioni per la somministra-
zione e per la conservazione tra una somministrazione L'etichetta indica:
e la successiva. ^ il nome del o dei principi attivi e la massa oppure il
Se del caso, i contenitori per le preparazioni intramam- numero di Unita© Internazionali del o dei principi
marie per uso veterinario soddisfano alle specifiche attivi che e© possibile estrarre dal contenitore con
dei Materiali usati nella fabbricazione di contenitori tecnica usuale,
(3.1 e sottosezioni) e Contenitori (3.2. e sottosezioni) ^ se la preparazione e© destinata ad animali in latta-
zione o non in lattazione,
^ nel caso di contenitori multidose, il nome di ogni
PRODUZIONE antimicrobico aggiunto.
Durante la fase di sviluppo di una preparazione intra-
mammaria per uso veterinario, la cui formulazione
contenga un antimicrobico, deve essere dimostrata in
modo esauriente all'autorita© competente l'efficacia del 1808

conservante scelto. Un idoneo metodo con i criteri per

la valutazione delle proprieta© conservanti della formu-
lazione e© riportato nel testo Efficacia della conserva-
zione antimicrobica (5.1.3). PREPARAZIONI LIQUIDE
VETERINARIE PER APPLICAZIONE
Le preparazioni intramammarie per uso veterinario si CUTANEA
preparano utilizzando materiali e metodi in grado di Praeparationes liquidae veterinariae
assicurare sterilita© e di evitare l'introduzione di conta- ad usum dermicum
minanti e la crescita di microrganismi; raccomanda-
zioni al riguardo sono fornite nel testo Metodi di prepa-
razione di prodotti sterili (5.1.1). Se non diversamente giustificato e autorizzato, le prepa-
razioni liquide veterinarie per applicazione cutanea soddi-
Nella produzione di preparazioni intramammarie per sfano alle specifiche della monografia Preparazioni
uso veterinario contenenti particelle disperse, sono liquide per applicazione cutanea (0927). Oltre a queste
prese misure atte ad assicurare una idonea e controllata specifiche, alle preparazioni liquide veterinarie per appli-
dimensione delle particelle in relazione all'uso previsto. cazione cutanea si applicano le seguenti disposizioni.

700
 Preparazioni liquide veterinarie per applicazione cutanea

inoizircserP
DEFINIZIONE usare prima e dopo la mungitura sono differenti nella

ilareneG
Le preparazioni liquide veterinarie per applicazione formulazione. Di solito contengono emollienti per
cutanea sono preparazioni liquide destinate ad essere favorire l'idratazione della pelle, per ammorbidire e
applicate alla pelle per ottenere un effetto locale e/o consentire il rimarginarsi di lesioni che altrimenti
sistemico. Sono soluzioni, sospensioni o emulsioni che potrebbero accogliere batteri.

isilanA id
possono contenere una o piu© sostanze attive in un vei-

idoteM
colo adatto. Possono essere presentate come concen-
trati nella forma di polveri bagnabili, paste, soluzioni
o sospensioni che vengono utilizzate per preparare
Lavaggi per mammella
sospensioni o emulsioni diluite di principi attivi. Pos-
DEFINIZIONE

irotinetnoC
sono contenere conservanti antimicrobici adatti, anti-

/ ilairetaM
ossidanti e altri eccipienti come stabilizzanti, emulsio- I lavaggi per mammelle contengono una o piu© sostanze
nanti e addensanti. attive disinfettanti, usualmente sotto forma di soluzioni
Si possono distinguere parecchie categorie di prepara- che vengono spruzzate sulla mammella e sui capezzoli
zioni liquide veterinarie per applicazione cutanea: di un animale per rimuovere fango e contaminazione
^ bagni disinfettanti concentrati, fecale prima di applicare i bagni o gli spray per capez-

ivittaeR
^ bagni disinfettanti per capezzolo, zolo. I lavaggi per mammella sono di solito preparati
^ lavaggi per mammella, per diluizione o di preparazioni concentrate o di bagni
^ preparazioni per applicazioni locali, per capezzolo pronti all'uso o di spray per capezzolo.
^ preparazioni per toccature,
^ schiume per applicazione cutanea (vedi Prepara-

itnemogrA
ilareneG
zioni liquide per applicazione cutanea (0927)), Preparazioni per applicazioni locali
^ shampoo (vedi Preparazioni liquide per applica-
zione cutanea (0927)),
^ spray, DEFINIZIONE

eifargonoM
^ spray per capezzolo. Le preparazioni per applicazioni locali contengono una

ilareneG
o piu© sostanze attive per la prevenzione e il trattamento
di infestazioni ectoparassitiche e/o endoparassitiche di
Bagni disinfettanti concentrati animali. Sono applicate in volumi usualmente superiori
a 5 ml versandole lungo la spina dorsale dell'animale.

ehcituecamraF
DEFINIZIONE

emroF
I bagni concentrati sono preparazioni che contengono Preparazioni per toccature
una o piu© sostanze attive, usualmente sotto forma di
polveri bagnabili, paste, soluzioni o sospensioni che
vengono utilizzate per preparare soluzioni, sospensioni DEFINIZIONE

eiretaM
o emulsioni diluite di principi attivi. Le preparazioni

emirP
diluite sono applicate per immersione completa dell'a- Le preparazioni per toccature contengono uno o piu©
nimale. principi attivi per la prevenzione e il trattamento di
infestazioni ectoparassitiche e/o endoparassitiche di
animali. Sono applicate, in volumi che usualmente sono
ehcituecamraF
inoizaraperP

Bagni per capezzolo inferiori a 10 ml, a una piccola area sulla testa o sul
ehcificepS

dorso, secondo il caso, dell'animale.

DEFINIZIONE
I bagni disinfettanti per capezzolo contengono una o
ehcitapoemO

Spray
inoizaraperP

piu© sostanze attive disinfettanti, usualmente sotto

forma di soluzioni in cui i capezzoli di un animale sono
immersi prima e, se necessario, dopo la mungitura per DEFINIZIONE
ridurre sulla superficie il numero di microrganismi
patogeni. I bagni per capezzolo possono essere forniti/ Gli spray contengono una o piu© sostanze attive desti-
presentati come preparazioni pronte all'uso oppure nate ad essere applicate esternamente per scopi tera-
ecidnI

possono essere preparati per diluizione di bagni per peutici o profilattici. Sono dispensati sotto forma di
capezzolo concentrati. Spesso bagni per capezzolo da aerosol per attivazione di una valvola appropriata o

701
Preparazioni liquide veterinarie per applicazione cutanea

per mezzo di un adatto sistema di atomizzazione che

puo© essere parte integrante del contenitore oppure
Spray per capezzolo
viene fornito separatamente.
Gli spray possono essere forniti in contenitori pressu- DEFINIZIONE
rizzati (vedi Preparazioni farmaceutiche pressurizzate Gli spray per capezzolo contengono una o piu© sostanze
(0523)). In questo caso, usualmente gli spray consi- attive disinfettanti, usualmente sotto forma di soluzioni
stono di una o piu© sostanze attive in un adatto veicoloche vengono spruzzate sopra i capezzoli di un animale
tenuto sotto pressione con adatti propellenti o adatte prima e, se necessario, dopo la mungitura per ridurre
miscele di propellenti. Se sono presentati in altro modo,
la popolazione di microrganismi patogeni sulla superfi-
gli spray sono forniti in contenitori ben chiusi. cie. Possono essere forniti/presentati come prepara-
zioni pronte all'uso o possono essere preparati per
PRODUZIONE diluizione di spray per capezzolo concentrati. Gli spray
da usare prima e dopo la mungitura spesso differiscono
Durante lo sviluppo e la fabbricazione di uno spray, si nella formulazione. Di solito contengono emollienti
prendono misure adatte ad assicurare che il prodotto per favorire l'idratazione della pelle, per ammorbidirla
finito consenta una velocita© e un andamento di spruzzo e consentire la guarigione di lesioni che altrimenti
definiti. potrebbero accogliere batteri.

702
 Materie prime

inoizircserP

ilareneG
A G

isilanA id
idoteM
Acido deidrocolico ............................................. 705 Genziana estratto fluido ..................................... 750
Acqua altamente depurata.................................. 706
Acqua depurata.................................................. 707
Acqua per diluizione delle soluzioni concentrate I

irotinetnoC
/ ilairetaM
per emodialisi ................................................. 708
Acqua per preparazioni iniettabili....................... 710 Idraste................................................................ 750
Adrenalina ......................................................... 712 Idrocortisone sodio succinato ............................. 752
Aminofenazone .................................................. 713 Ipecacuana estratto fluido .................................. 753
Aminosidina solfato ........................................... 713 Ippocastano ....................................................... 754

ivittaeR
Antazolina solfato.............................................. 715
Arancia amara essenza ....................................... 716
Arancia dolce essenza......................................... 718 M
Argento proteinato............................................. 720 Magnesio acetato ............................................... 756
Atracurio besilato............................................... 720

itnemogrA
ilareneG
Attapulgite attivata ............................................ 723 Malva foglia....................................................... 756
Mandarino essenza............................................. 757
B Mefenesina.........................................................
Merbromina .......................................................
759
759

eifargonoM
Belladonna estratto fluido titolato ...................... 724

ilareneG
Benzoino del Laos .............................................. 726 Mercurio ossido giallo........................................ 760
Bergamotto essenza............................................ 727 Metimazolo........................................................ 761
Bromosolfoftaleina sodica .................................. 729 Mirtillo nero estratto idroalcoolico secco titolato 762

ehcituecamraF
C N

emroF
Camomilla estratto idroalcoolico secco titolato .. 730 Niaouli essenza................................................... 764
Capsico .............................................................. 731 Nimorazolo........................................................ 766
Carciofo estratto idroalcoolico secco titolato...... 733
Cardo mariano................................................... 734 Nitroglicerina..................................................... 767
eiretaM

emirP
Cascara estratto acquoso secco........................... 736
Cascara estratto secco ........................................
China estratto fluido...........................................
738
739
O
Octatropina metilbromuro.................................. 768
ehcituecamraF

Clofenotano ....................................................... 741

inoizaraperP

ehcificepS

Cresolo............................................................... 742 Oppio polvere titolata......................................... 769

D P
ehcitapoemO
inoizaraperP

Disinfettanti per uso umano o veterinario (anti-

settici)............................................................. 742 Pentetrazolo ....................................................... 770
Pino silvestre essenza.......................................... 770
F Potassio aspartato acido..................................... 773
Ferro ossido giallo.............................................. 746 Potassio iodato................................................... 773
Ferro ossido rosso .............................................. 747 Pralidossima metilsolfato ................................... 774
ecidnI

Finocchio dolce essenza...................................... 748 Proguanile cloridrato.......................................... 775

 R T
Rabarbaro estratto fluido ................................... 775 Tiamfenicolo glicinato cloridrato........................ 786
Rabarbaro estratto secco.................................... 776 Tossina difterica per uso diagnostico .................. 788
Ratania tintura................................................... 778
Trementina essenza medicinale........................... 789
S
Sobrerolo ...........................................................
Sodio aminosalicilato .........................................
778
779
V
Sodio indigotindisolfonato.................................. 781 Vaccino tifoideo per uso orale............................. 791
Sodio stearato .................................................... 781 Vaccino vivo da brucella abortus per uso veteri-
Sodio stibogluconato.......................................... 782 nario............................................................... 791
Sulfadimetoxina ................................................. 783 Valeriana estratto idroalcoolico secco................. 792
Sulfametopirazina .............................................. 784 Vaselina bianca................................................... 793
Suramina sodica................................................. 785
 Acido deidrocolico

inoizircserP
C. Disciogliere 20 mg circa in 1 ml di alcool R.

ilareneG
ACIDO DEIDROCOLICO
Aggiungere 5 gocce di una soluzione di dinitroben-
Acidum dehydrocholicum zene R all'1 per cento m/V in alcool R e 10 gocce
di sodio idrossido soluzione diluita R: la soluzione
sviluppa, entro 1 min, una colorazione da violetta
a rosso-violetta.

isilanA id
idoteM
SAGGI
. Disciogliere 0,500 g in una

irotinetnoC
/ ilairetaM
Aspetto della soluzione

miscela di 3,5 ml di acqua R e 1,5 ml di sodio idrossido

soluzione diluita R: la soluzione e© limpida (2.2.1) e non
C24H34O5 Mr 402,5 piu© intensamente colorata della soluzione di riferi-
mento G1 (Metodo I, 2.2.2).
. A 0,500 g aggiungere 50 ml di

ivittaeR
Acidita© e alcalinita©

DEFINIZIONE acqua R, agitare per 5 min e filtrare. A 10 ml del filtrato

aggiungere una goccia di blu bromofenolo soluzione R.
L'acido deidrocolico contiene non meno del 99,0 per Il liquido assume una colorazione blu-violetta e vira al
cento e non piu© dell'equivalente del 101,0 per cento di giallo-verde o al giallo per aggiunta di 0,5 ml di acido

itnemogrA
acido 3,7,12-trioxo-5 -colan-24-oico, calcolato con cloridrico 0,01 M.

ilareneG
b

riferimento alla sostanza essiccata. Potere rotatorio specifico (2.2.7). Preparare una solu-
zione al 2 per cento m/V della sostanza in esame in
diossano R. Il potere rotatorio specifico e© compreso tra
CARATTERI + 29,0‘ e + 32,5‘.

eifargonoM

ilareneG
Polvere soffice, bianca, praticamente insolubile in Bario . Bollire 2,0 g della sostanza in esame con 100 ml di
acqua, solubile in acido acetico glaciale, in alcool con acqua R per 2 min, aggiungere 2 ml di acido cloridrico R
lieve opalescenza e in cloroformio, moderatamente e bollire ancora per 2 min. Raffreddare, filtrare e lavare
solubile in etere. Si scioglie nelle soluzioni di idrossidi il filtro con acqua R fino ad ottenere 100 ml di filtrato.

ehcituecamraF
e carbonati alcalini. A 10 ml del filtrato aggiungere 1 ml di acido solforico

emroF
diluito R: non si produce torbidita© .
Fonde tra 233 ‘C e 242 ‘C o tra 237 ‘C e 242 ‘C se (2.3.1). A 5,0 g aggiungere 50 ml di acqua R.
impiegato per preparazioni parenterali. L'intervallo Cloruri

Agitare per 5 min e filtrare. 15 ml del filtrato soddi-

tra l'inizio e il termine della fusione non deve essere sfano al saggio limite per i cloruri (100 ppm).
comunque superiore a 3 ‘C.

eiretaM
(2.4.13). A 2,0 g aggiungere 100 ml di acqua R,

emirP
Solfati

agitare per 5 min e filtrare. A 25 ml della soluzione

IDENTIFICAZIONE aggiungere 1 ml di acido cloridrico diluito R, scaldare a
b.m. per 5 min, raffreddare e filtrare. Lavare il residuo
ehcituecamraF

con 10 ml di acqua R, riunire le acque di lavaggio al fil-

inoizaraperP

Prima identificazione: A.
ehcificepS

trato limpido e diluire la soluzione a 50 ml con acqua R.

Seconda identificazione: B, C. La soluzione soddisfa al saggio limite per i solfati
(0,045 per cento). Preparare la soluzione di riferimento
A. Esaminare mediante spettrofotometria di assorbi- utilizzando 0,50 ml di acido solforico 0,005 M.
mento infrarosso (2.2.24), in confronto con lo spet-
ehcitapoemO
inoizaraperP

tro ottenuto con acido deidrocolico SCR. Metalli pesanti (2.4.8). Calcinare 1 g della sostanza in
esame e riprendere il residuo con 1 ml di acido nitrico
B. Disciogliere 5 mg circa in una miscela di 1 ml di diluito R. Evaporare a secco, aggiungere al residuo
acido solforico R e una goccia di formaldeide R e 1 ml di acido cloridrico diluito R e 19 ml di acqua R ed
lasciare a riposo per 5 min. Aggiungere cauta- eventualmente filtrare. 12 ml della soluzione soddisfano
mente 5 ml di acqua R: la soluzione presenta una al saggio limite B per i metalli pesanti. Preparare la
ecidnI

colorazione gialla e una fluorescenza blu-verda- soluzione di riferimento utilizzando la soluzione stan-
stra. dard di piombo (Pb 1 ppm) R.

705
Acqua altamente depurata

Perdita all'essiccamento (2.2.32). Non superiore all'1,0 per Adatti limiti di attenzione e di intervento sono fissati
cento determinata su 1,0 g per essiccamento in stufa in modo da rivelare tendenze sfavorevoli. In condizioni
a 100-105 ‘C per 2 h. normali, un limite di intervento appropriato e© una
Ceneri solforiche (2.4.14). Non superiori allo 0,2 per conta totale dei microrganismi aerobi vivi (2.6.12) di
cento, determinate su 1,0 g. 10 microrganismi per 100 ml, determinata mediante fil-
trazione su membrana, usando il terreno agarizzato B
DETERMINAZIONE QUANTITATIVA ed almeno 200 ml di acqua altamente depurata.
Si tengono sotto controllo anche la conduttivita© (2.2.38)
Disciogliere 0,500 g in una miscela di 40 ml di alcool R, (non piu© di 1,1mS cm-1 a 20 ‘C), e il carbonio organico
1
neutralizzato alla fenolftaleina R, e 20 ml di acqua R. totale (2.2.44) (non piu© di 0,5 mg/l).
Aggiungere ancora una goccia di fenolftaleina soluzio- Per assicurare all'acqua la qualita© appropriata, si
ne R e titolare con sodio idrossido 0,1 M. devono utilizzare procedure convalidate e si effettuano
1 ml di sodio idrossido 0,1 M equivale a 40,25 mg di il monitoraggio in linea della conduttivita© elettrica e
C24H34O5. un regolare monitoraggio della crescita microbica.
L'acqua altamente depurata e© stoccata e distribuita in
CONSERVAZIONE condizioni designate a prevenire la crescita di microrga-
Conservare in un recipiente ben chiuso, protetto dalla nismi e ad evitare ogni altro tipo di contaminazione.
luce.
CARATTERI
Liquido limpido, incolore, inodore ed insapore.
1927
SAGGI
Alluminio (2.4.17). Non piu© di 10 mg/l, se destinata alla
produzione di soluzioni per dialisi.
ACQUA ALTAMENTE DEPURATA Soluzione in esame. A 400 ml aggiungere 10 ml di tam-
Aqua valde purificata pone acetato soluzione a pH 6,0 R e 100 ml di acqua
distillata R.
H2O Mr 18,02 Soluzione di riferimento. Mescolare 2 ml di soluzione
standard di alluminio (Al 2 ppm) R, 10 ml di tampone
acetato soluzione a pH 6,0 R e 98 ml di acqua distilla-
ta R.
DEFINIZIONE Prova in bianco. Mescolare 10 ml di tampone acetato
L'acqua altamente depurata e© destinata alla prepara- soluzione a pH 6,0 R e 100 ml di acqua distillata R.
zione di prodotti medicinali nei quali e© necessaria acqua Nitrati . Non piu© di 0,2 ppm. Introdurre 5 ml in una pro-
di alta qualita© biologica, ad eccezione di quelli per cui vetta immersa in acqua ghiacciata, aggiungere 0,4 ml
deve essere impiegata Acqua per preparazioni iniettabili di una soluzione (100 g/l) di potassio cloruro R, 0,1 ml
(0169). di difenilammina soluzione R e, goccia a goccia sotto
agitazione, 5 ml di acido solforico esente da azoto R.
PRODUZIONE Trasferire la provetta in un b.m. a 50 ‘C. Dopo 15 min,
l'eventuale colorazione blu della soluzione non deve
L'acqua altamente depurata si prepara a partire da essere piu© intensa di quella di una soluzione di riferi-
aqua conforme alla normativa prevista, dall'autorita© mento preparata contemporaneamente e nello stesso
competente, per l'acqua destinata al consumo umano. modo utilizzando una miscela di 4,5 ml di acqua esente
I metodi di produzione attuali prevedono per esempio da nitrato R e 0,5 ml di soluzione standard di nitrato
una doppia osmosi inversa associata ad altre tecniche (NO3 2 ppm) R.
appropriate come l'ultrafiltrazione e la deionizzazione. Metalli pesanti (2.4.8). Non piu© di 0,1 ppm. Scaldare
La corretta gestione e manutenzione del sistema sono 200 ml in una capsula di vetro a b.m. fino a quando il
fondamentali. volume si riduce a 20 ml. 12 ml della soluzione concen-
Durante la produzione e la successiva conservazione trata soddisfano al saggio limite A per i metalli pesanti.
devono essere adottate appropriate misure per assicu- Preparare lo standard utilizzando la soluzione standard
rare che la conta totale dei microrganismi aerobi vivi di piombo (Pb 1 ppm) R.
sia tenuta adeguatamente sotto controllo e monitorata. Endotossine batteriche (2.6.14). Inferiori a 0,25 U.I./ml.

706
 Acqua depurata

inoizircserP
CARATTERI

ilareneG
0008

Liquido limpido, incolore, inodore e insapore.

SAGGI

isilanA id
idoteM
ACQUA DEPURATA

Aqua purificata Nitrati. Porre 5 ml in un provetta immersa in ac-

qua ghiacciata, aggiungere 0,4 ml di una soluzione
H2O Mr 18,02 (100 g/l) di potassio cloruro R, 0,1 ml di difenilammina
soluzione R e, goccia a goccia sotto agitazione, 5 ml

irotinetnoC
/ ilairetaM
di acido solforico esente da azoto R. Trasferire la pro-
vetta in un b.m. a 50 ‘C. Dopo 15 min, qualsiasi colore
DEFINIZIONE blu della soluzione non e© piu© intenso di quello di una
soluzione di riferimento preparata contemporanea-
L'acqua depurata e© acqua per la preparazione di medi- mente e nello stesso modo utilizzando una miscela di
4,5 ml di acqua esente da nitrato R e 0,5 ml di soluzione

ivittaeR
cinali diversi da quelli che devono essere sterili ed api- standard di nitrato (NO3 2 ppm) R (0,2 ppm).
rogeni, salvo eccezione giustificata ed autorizzata.
Metalli pesanti (2.4.8). Scaldare 200 ml in una capsula
Acqua depurata in grande volume di vetro a b.m. fino a quando il volume si riduce a
20 ml. 12 ml della soluzione concentrata soddisfano al

itnemogrA
ilareneG
saggio limite A per i metalli pesanti (0,1 ppm). Prepa-
rare lo standard utilizzando la soluzione standard di
PRODUZIONE piombo (Pb 1 ppm) R.
L'acqua depurata in grande volume si prepara mediante Alluminio (2.4.17). Se viene usata nella produzione di

eifargonoM
distillazione, scambio ionico o qualsiasi altro metodo soluzioni per dialisi, soddisfa al saggio per l'alluminio.

ilareneG
adeguato, a partire da acqua conforme alla normativa A 400 ml aggiungere 10 ml di una tampone acetato solu-
prevista, dall'autorita© competente, per l'acqua destinata zione a pH 6,0 R e 100 ml di acqua distillata R. La solu-
al consumo umano. zione soddisfa al saggio limite per l'alluminio (10 mg/l).
Durante la produzione e la successiva conservazione Usare come soluzione di riferimento una miscela di

ehcituecamraF
devono essere adottate appropriate misure per assicu- 2 ml di soluzione standard di alluminio (Al 2 ppm) R,
10 ml di tampone acetato soluzione a pH 6,0 R e 98 ml

emroF
rare che la conta totale dei microrganismi aerobi vivi di acqua distillata R. Per preparare il bianco, usare una
sia adeguatamente controllata e monitorata. Precau- miscela di 10 ml di una tampone acetato soluzione a
zioni appropriate e limiti di azione sono fissati in modo pH 6,0 R e di 100 ml di acqua distillata R.
da rivelare tendenze sfavorevoli. In condizioni normali,
un limite di azione appropriato e© una conta totale dei (2.6.14). Se destinata alla produ-
eiretaM

emirP
Endotossine batteriche

microrganismi aerobi vivi (2.6.12) di 100 microrganismi zione di soluzioni per dialisi senza un'ulteriore appro-
per 100 ml, determinata mediante filtrazione su mem- priata procedura di rimozione delle endotossine batteri-
brana, usando il terreno agarizzato B. La grandezza che, non piu© di 0,25 U.I. di endotossine per millilitro.
del campione in esame dipende dal risultato presunto.
ehcituecamraF
inoizaraperP

ehcificepS

Effettuare inoltre il saggio per il carbonio organico ETICHETTE

totale (2.2.44) con un limite di 0,5 mg/l o alternativa-
mente il seguente saggio per le sostanze ossidabili: a L'etichetta indica, se del caso, che la sostanza e© idonea
100 ml aggiungere 10 ml di acido solforico diluito R per la preparazione di soluzione per dialisi.
e 0,1 ml di potassio permanganato 0,02 M e bollire per
ehcitapoemO
inoizaraperP

5 min. La soluzione rimane leggermente rosa.

Si controlla anche la conduttivita© (2.2.38): non piu© di Acqua depurata ripartita in contenitori
4,3 mS cm-1 a 20 ‘C.
1
L'acqua depurata ripartita in contenitori e© acqua depu-
L'acqua depurata in grande volume e© conservata e rata in grande volume che e© stata distribuita e conser-
distribuita in condizioni designate a prevenire la cre- vata in contenitori, in condizioni tali da assicurare la
ecidnI

scita di microrganismi e ad evitare ogni altra contami- qualita© microbiologica richiesta. E' esente da ogni altra
nazione. sostanza aggiunta.

707
Acqua per diluizione delle soluzioni concentrate per emodialisi

CARATTERI 1167

Liquido limpido, incolore, inodore ed insapore.

SAGGI ACQUA PER DILUIZIONE

Soddisfa ai saggi descritti nella sezione Acqua depurata DELLE SOLUZIONI CONCENTRATE

in grande volume e agli ulteriori saggi seguenti. PER EMODIALISI

Acidita© o alcalinita©. A 10 ml di soluzione, bollita di Aqua ad dilutionem solutionium concentratarum

recente e raffreddata in un pallone di vetro borosilicato, ad haemodialysim
aggiungere 0,05 ml di rosso metile soluzione R. La solu-
zione non e© di colore rosso. La seguente monografia viene inclusa solo per informa-
A 10 ml aggiungere 0,1 ml di blu bromotimolo soluzio- zione.
ne R1. La soluzione non e© di colore azzurro. I metodi analitici descritti ed i limiti proposti servono per
Sostanze ossidabili . A 100 ml aggiungere 10 ml di acido convalidare il procedimento con cui si ottiene l'acqua.
solforico diluito R. e 0,1 ml di potassio permanga-
nato 0,02 M e bollire per 5 min. La soluzione rimane
rosa pallido. DEFINIZIONE
Cloruri . A 10 ml aggiungere 1 ml di acido nitrico dilui- L'acqua per diluizione delle soluzioni concentrate per
to R e 0,2 ml di argento nitrato soluzione R2. L'aspetto emodialisi e© ottenuta dall'acqua potabile per distilla-
della soluzione non deve cambiare per almeno 15 min. zione, per osmosi inversa, per scambio ionico o con un
Solfati . A 10 ml aggiungere 0,1 ml di acido cloridrico altro procedimento appropriato. Le condizioni di pre-
diluito R e 0,1 ml di bario cloruro soluzione R1. L'aspetto parazione, trasferimento e conservazione sono tali da
della soluzione non deve cambiare per almeno 1 h. minimizzare il rischio di contaminazione microbica e
Ammonio . A 20 ml aggiungere 1 ml di potassio tetraio- chimica.
domercurato soluzione alcalina R. Esaminare dopo Quando non e© disponibile l'acqua ottenuta con uno dei
5 min la soluzione lungo l'asse verticale della provetta. metodi sopra descritti, puo© essere usata l'acqua potabile
La soluzione non e© piu© intensamente colorata di una per le dialisi a domicilio.
soluzione standard preparata contemporaneamente
aggiungendo 1 ml di potassio tetraiodomercurato solu- Poichë la composizione chimica dell'acqua potabile
zione alcalina R a una miscela di 4 ml di soluzione stan- cambia considerevolmente da una localita© all'altra,
dard di ammonio (NH4 1 ppm) R e 16 ml di acqua esente occorre tenerne conto al fine di procedere all'aggiusta-
da ammonio R (0,2 ppm). mento del contenuto di ioni, in modo che la composi-
. A 100 ml aggiungere 2 ml di una zione finale nella soluzione diluita corrisponda all'uso
Calcio e magnesio

tampone ammonio cloruro soluzione a pH 10,0 R, 50 mg previsto.

di nero mordente 11 miscela composta R e 0,5 ml di sodio Bisogna porre attenzione anche alla possibile presenza
edetato 0,01 M. Si sviluppa una colorazione blu netta. di residui provenienti dal trattamento dell'acqua (per
. Evaporare a secco 100 ml a esempio, clorammine) e di idrocarburi alogenati
Residuo all'evaporazione

b.m. e seccare in stufa a 100-105 ‘C. Il residuo pesa volatili.

non piu© di 1 mg (0,001 per cento). Per il controllo della qualita© dell'acqua per diluizione
. Conta totale dei microrga- delle soluzioni concentrate per emodialisi, i seguenti
metodi possono essere usati per determinare la compo-
Contaminazione microbica

nismi aerobi vivi (2.6.12): non piu© di 102 microrganismi

per millilitro, determinata mediante filtrazione su sizione chimica e/o rivelare la presenza di possibili
membrana, usando terreno agarizzato B. contaminanti ed e© raccomandato di rispettare i limiti
indicati.
ETICHETTE
CARATTERI
L'etichetta indica, se del caso, che la sostanza e© idonea
per la preparazione di soluzioni per dialisi. Liquido limpido, incolore, insapore.

708
 Acqua per diluizione delle soluzioni concentrate per emodialisi

inoizircserP
SAGGI (2.4.13). Diluire 3 ml dell'acqua in esame a 15 ml

ilareneG
Solfati

con acqua distillata R. La soluzione soddisfa al saggio

Acidita© o alcalinita© . Aggiungere 0,05 ml di rosso metile limite per i solfati (50 ppm).
soluzione R a 10 ml dell'acqua in esame bollita di Alluminio (2.4.17). Aggiungere a 400 ml dell'acqua in
recente e raffreddata in un pallone di vetro borosilicato. esame 10 ml di tampone acetato soluzione a pH 6,0 R e
La soluzione non deve virare al rosso. Aggiungere 100 ml di acqua R. La soluzione soddisfa al saggio

isilanA id
idoteM
0,1 ml di blu bromotimolo soluzione R1 a 10 ml dell'ac- limite per l'alluminio (10 g/l). Usare come soluzione
l

qua in esame. La soluzione non vira al blu. di riferimento una miscela di 2 ml di soluzione standard
. Aggiungere a 100 ml dell'acqua in di alluminio (Al 2 ppm) R, 10 ml di tampone acetato solu-
Sostanze ossidabili

esame 10 ml di acido solforico diluito R e 0,1 ml di potas- zione a pH 6,0 R e 98 ml di acqua R. Per preparare il
bianco usare una miscela di 10 ml di tampone acetato

irotinetnoC
/ ilairetaM
sio permanganato 0,02 M e bollire per 5 min. La solu- soluzione a pH 6,0 R e 100 ml di acqua R.
zione rimane rosa pallido. Ammonio . Aggiungere 1 ml di potassio tetraiodomercu-
Cloro totale . In una provetta da 125 ml
disponibile rato soluzione alcalina R a 20 ml dell'acqua in esame,
(A), porre successivamente 5 ml di tampone soluzione a in una provetta trasparente con fondo piatto. Lasciare
pH6,5R,5 ml di dietilfenilendiamminasolfatosoluzione R a riposo per 5 min. La soluzione non deve essere piu©

ivittaeR
e 1 g di potassio ioduro R. In una seconda provetta intensamente colorata di una soluzione di riferimento,
da 125 ml (B), porre successivamente 5 ml di tampone preparata contemporaneamente e nelle stesse condi-
soluzioneapH6,5R e 5 ml di dietilfenilendiamminasolfato zioni usando una miscela di 4 ml di soluzione standard
soluzione R. Aggiungere, il piu© simultaneamente possi- di ammonio (NH4 1 ppm) R e 16 ml di acqua esente da
bile, 100 ml di acqua in esame alla provetta A e una ammonio R (0,2 ppm). Esaminare le soluzioni lungo gli

itnemogrA
soluzione di riferimento preparata nel modo seguente assi verticali della provetta.

ilareneG
alla provetta B: aggiungere ad 1 ml di una soluzione . Non piu© di 2 ppm di Ca, determinato mediante
10 mg/l) di potassio iodato R, 1 g di potassio ioduro R ed
Calcio

spettrometria di assorbimento atomico (Metodo I,2.2.23).

1 ml di acido solforico diluito R e diluire a 100 ml con Soluzione in esame. Usare l'acqua in esame.
acqua R. La miscela ottenuta con l'acqua in esame non Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-

eifargonoM
deve essere piu© intensamente colorata di quella ottenuta

ilareneG
con la soluzione di riferimento (0,1 ppm). mento (da 1 ppm a 5 ppm) usando una soluzione stan-
dard di calcio (Ca 400 ppm) R.
Cloruri (2.4.4). Diluire 1 ml dell'acqua in esame a 15 ml Misurare l'assorbanza a 422,7 nm usando una lampada
con acqua R. La soluzione soddisfa al saggio limite per a catodo cavo al calcio come sorgente di radiazione ed
i cloruri (50 ppm). una fiamma ossidante aria-acetilene.

ehcituecamraF
. Non piu© di 2 ppm di Mg, determinato

emroF
Fluoruri . Aggiungere a 50 ml dell'acqua in esame, Magnesio

mediante spettrometria di assorbimento atomico

mescolando dopo ogni addizione, 10 ml di tampone suc- (Metodo I, 2.2.23).
cinato soluzione a pH 4,6 R, 10 ml di acido amminometi-
lalizarindiacetico soluzione R, 5 ml di una soluzione Soluzione in esame. Diluire 10 ml dell'acqua in esame a
(0,4 g/l) di lantanio nitrato R e 20 ml di acetone R. 100 ml con acqua distillata R.
Diluire a 100 ml con acqua R. Lasciare a riposo al buio Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
eiretaM

emirP
per 1 h. La soluzione non e© piu© intensamente colorata mento (da 0,1 ppm a 0,5 ppm) usando una soluzione
di una soluzione di riferimento, preparata contempora- standard di magnesio (Mg 100 ppm) R.
neamente e nelle stesse condizioni usando una miscela Misurare l'assorbanza a 285,2 nm usando una lampada
di 1 ml di soluzione standard di fluoruro (F 10 ppm) R e a catodo cavo al magnesio come sorgente di radiazione
ehcituecamraF
inoizaraperP

49 ml di acqua R (0,2 ppm).

ehcificepS

ed una fiamma ossidante aria-acetilene.

. Diluire 2 ml dell'acqua in esame a 100 ml con Mercurio . Non piu© di 0,001 ppm di Hg, determinato
mediante spettrometria di assorbimento atomico
Nitrati

acqua esente da nitrato R. Porre 5 ml di questa diluizione

in una provetta immersa in acqua ghiacciata, aggiungere (Metodo I, 2.2.23).
0,4 ml di una soluzione (100 g/l) di potassio cloruro R e Soluzione in esame. Aggiungere 5 ml di acido nitrico R
ehcitapoemO
inoizaraperP

0,1ml di difenilammina soluzione R e quindi, goccia a goc- per litro di acqua in esame. In un pallone di vetro
cia ed agitando, 5 ml di acido solforico R. Scaldare la pro- borosilicato da 50 ml con tappo a smeriglio, porre
vetta ab.m. a 50 ‘C. Lasciare a riposo per15 min. La solu- 20 ml dell'acqua in esame, aggiungere 1 ml di acido
zione non deve essere piu© intensamente colorata in blu di nitrico diluito R ed agitare. Aggiungere 0,3 ml di acqua
una soluzione di riferimento, preparata contemporanea- di bromo R1. Tappare il pallone, agitare e scaldare il
mente e nelle stesse condizioni usando una miscela di pallone tappato a 45 ‘C per 4 h. Lasciar raffreddare.
ecidnI

0,1 ml di soluzione standard di nitrato (NO3 2 ppm) R e Se la soluzione non vira al giallo aggiungere 0,3 ml di
4,9 ml di acqua esente da nitrato R (2 ppm). acqua di bromo R1 e scaldare nuovamente a 45 ‘C

709
Acqua per preparazioni iniettabili

per 4 h. Aggiungere 0,5 ml di una soluzione (10 g/l) di Sodio . Non piu© di 50 ppm di Na, determinato
idrossilammina cloridrato R preparata di recente. mediante spettrometria di emissione atomica (Metodo
Agitare. Lasciar riposare per 20 min. I, 2.2.22).
Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- Soluzione in esame. Usare l'acqua in esame. Se il conte-
mento trattando, come descritto per l'acqua in esame, nuto di sodio e© superiore a 10 mg per litro, diluire con
soluzioni preparate di recente (da 0,0005 a 0,002 ppm acqua distillata R, fino ad ottenere una concentrazione
di mercurio) ottenute per diluizione della soluzione adatta per l'apparecchio usato.
standard di mercurio (Hg 1000 ppm) R, con una solu- Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
zione al 5 per cento V/V di acido nitrico diluito R. mento (0, 2,5, 5,0, 7,5, e 10 ppm) usando la soluzione
Aggiungere ad un volume di soluzione adatto all'appa- standard di sodio (Na 200 ppm) R.
recchio in uso, una quantita© di stagno(-oso) cloruro Misurare l'intensita© dell'emissione a 589 nm.
soluzione R2 equivalente ad 1/5 di questo volume.
Adattare immediatamente il dispositivo per ottenere il Zinco . Non piu© di 0,1 ppm di Zn, determinato mediante
mercurio sotto forma di vapore. Aspettare 20 s e far spettrometria di assorbimento atomico (Metodo I,
passare, attraverso il dispositivo, una corrente di azo- 2.2.23). Usare materiali di prelievo e attrezzature anali-
to R come gas di trasporto. tiche esenti da zinco e che non cedono zinco nelle con-
Misurare l'assorbanza a 253,7 nm usando una lampada dizioni di utilizzazione.
a catodo cavo al mercurio o una lampada a scarica e Soluzione in esame. Usare l'acqua in esame.
,come dispositivo di atomizzazione, un sistema senza Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi-
fiamma che permette di ottenere il mercurio sotto mento (da 0,05 ppm a 0,15 ppm di zinco) usando una
forma di vapori freddi. soluzione standard di zinco (Zn 100 ppm) R.
(2.4.8). Scaldare a b.m. 200 ml dell'ac-
Misurare l'assorbanza a 213,9 nm usando una lampada
Metalli pesanti

qua in esame, in una capsula di vetro, fino a ridurre il

volume a 20 ml. 12 ml della soluzione soddisfano al sag- a catodo cavo allo zinco come sorgente di radiazione
gio limite A per i metalli pesanti (0,1 ppm). Preparare ed una fiamma ossidante aria-acetilene.
la soluzione di riferimento usando la soluzione standard . Non piu© di 102 microrgani-
di piombo (Pb 1 ppm) R.
Contaminazione microbica

smi aerobi vivi (2.6.12) per millilitro, determinata

Potassio . Non piu© di 2 ppm di K, determinato mediante mediante conta su piastra.
spettrometria di emissione atomica (Metodo I, 2.2.22). Endotossine batteriche (2.6.14). Non piu© di 0,25 U.I. di
Soluzione in esame (a). Diluire 50,0 ml dell'acqua in endotossine per millilitro.
esame a 100 ml con acqua distillata R. Effettuare una
determinazione usando questa soluzione. Se il conte-
nuto di potassio e© superiore a 0,75 mg per litro, diluire
ulteriormente l'acqua in esame con acqua distillata R.
Soluzione in esame (b). Prelevare 50,0 ml dell'acqua in 0169

esame o, se necessario, dell'acqua in esame diluita come

descritto nella preparazione della soluzione in esame
(a). Aggiungere 1,25 ml di soluzione standard di potassio
(K 20 ppm) R e diluire a 100,0 ml con acqua distillata R. ACQUA

Soluzioni di riferimento. Preparare le soluzioni di riferi- PER PREPARAZIONI INIETTABILI

mento (0, 0,25, 0,50, 0,75 e 1 ppm) usando la soluzione Aqua ad iniectabilia
standard di potassio (K 20 ppm) R.
Misurare l'intensita© dell'emissione a 766,5 nm. H2O Mr 18,02
Calcolare il contenuto di potassio nell'acqua in esame,
in parti per milione, mediante la formula seguente:
DEFINIZIONE
n 0,5
q 1x
L'acqua per preparazioni iniettabili e© acqua per la pre-
n2 ^ n1 parazione di medicinali per somministrazione parente-
q = fattore di diluizione usato per la preparazione
rale. L'acqua e© usata come veicolo (acqua per prepara-
della soluzione in esame (a), zioni iniettabili in grande volume) e per la dissoluzione
o la diluizione di sostanze o preparazioni per sommini-
n1 = valore misurato per la soluzione in esame (a), strazione parenterale (acqua sterilizzata per prepara-
n2 = valore misurato per la soluzione in esame (b). zioni iniettabili).

710
 Acqua per preparazioni iniettabili

inoizircserP
Acqua per preparazioni iniettabili (2.6.14). Non piu© di 0,25 U.I. di

ilareneG
Endotossine batteriche

in grande volume endotossine per millilitro.

PRODUZIONE
Acqua sterilizzata per preparazioni iniettabili

isilanA id
L'acqua per preparazioni iniettabili in grande volume si

idoteM
ottiene dall'acqua che soddisfa ai regolamenti sull'ac-
qua per il consumo umano indicati dall'Autorita© com- L'acqua sterilizzata per preparazioni iniettabili e© acqua
petente o dall'acqua purificata per distillazione in un per preparazioni iniettabili in grande volume che e© stata
apparecchio le cui parti a contatto con l'acqua sono di distribuita in appositi contenitori, chiusi e sterilizzati

irotinetnoC
/ ilairetaM
vetro neutro, quarzo o metallo idoneo e che e© munito al calore in condizioni tali da assicurare che il prodotto
di un dispositivo che impedisce il trascinamento delle soddisfi ancora al saggio delle endotossine batteriche.