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ENZIMI

Catalizzatore: sostanza che aumenta la velocità di una reazione


chimica senza esserne trasformata; non modifica l'equilibrio di una
reazione, nè la rende più termodinamicamente favorevole, ma
semplicemente fa raggiungere l’equilibrio molto più rapidamente.

1860: Pasteur osserva che la fermentazione dello zucchero in


alcol è catalizzata da “fermenti” (più tardi chiamati da Kühne
enzimi = dal greco "nel lievito"), che ipotizza siano inseparabili
dalla struttura della cellula vivente (teoria vitalistica).

1897: Buchner dimostra che gli enzimi possono funzionare anche


dopo essere stati estratti dalle cellule.

1926: Sumner isola e cristallizza l’ureasi, e postula che gli enzimi


siano proteine.
ENZIMI
2 H2 O2 Î 2 H 2 O + O2
FeCl3: accelera la reazione di 103 volte
emoglobina: accelera la reazione di 106 volte
catalasi: accelera la reazione di 109 volte
ENZIMI: PROPRIETA’ - 1
¾ elevato potere catalitico
Aumento della velocità prodotto da alcuni enzimi:

anidrasi carbonica 107


chimotripsina 107
lisozima 108
catalasi 109
trioso fosfato isomerasi 109
fumarasi 1011
β-amilasi 1011
fosfoglucomutasi 1012
succinil-CoA transferasi 1013
ureasi 1014
adenosina deaminasi 1014
fosfatasi alcalina 1017
ENZIMI: PROPRIETA’ - 2
¾ elevata specificità

a) di substrato:
9 esocinasi: fosforila glucoso, mannoso e fruttoso
9 glucocinasi: fosforila solo glucoso
9 tripsina: idrolizza solo legami Lys/Arg-X
9 trombina: idrolizza solo legami Arg-Gly
9 lattico deidrogenasi: ossida solo l'acido L-lattico
9 fumarasi:agisce sull'acido fumarico (trans) ma non
sull'acido maleico (cis)

b) di prodotto (assenza di prodotti collaterali indesiderati):

9 DNA polimerasi I: un solo errore ogni milione di basi inserite


ENZIMI: PROPRIETA’ - 3

¾ capacità di operare a valori fisiologici di pH, temperatura e


pressione

}
processo di Haber: 500°C, 300 atm
N2 + 3 H2 Î 2 NH3
batteri azoto-fissatori: 20°C, 1 atm

}
HCl 6 N o H2SO4 8 N, 120°C, 2 atm
idrolisi delle proteine
proteasi, 37°C, 1 atm
ENZIMI: PROPRIETA’ - 4
¾ possibilità di operare in sequenze coordinate
fosfoesoso
esocinasi isomerasi
glucoso glucoso-6-P fruttoso-6-P

fosfofruttocinasi

fruttoso-1,6-BP
GAP aldolasi
deidrogenasi
1,3-bifosfoglicerato GAP DAP
fosfoglicerato triosofosfosfato
cinasi isomerasi

3-fosfoglicerato
fosfoglicerato
mutasi piruvato
enolasi cinasi
2-fosfoglicerato 2-fosfoenolpiruvato piruvato

¾ possibilità di regolazione (allosterica, covalente, per induzione,


etc...)
ENZIMI: PROPRIETA’ - 5

1) proteine semplici o coniugate 2) acidi ribonucleici (ribozimi)


ENZIMI: PROPRIETA’ - 6

denaturazione Î perdita del potere catalitico

oloenzima = apoenzima + cofattore

vitamine
cofattori

ioni essenziali coenzimi

ioni attivatori ioni di metalloenzimi cosubstrati gruppi prostetici


(debolmente legati) (saldamente legati) (debolmente legati) (saldamente legati)
ENZIMI: PROPRIETA’ - 7
metallo enzima
Fe citocromo ossidasi, catalasi, perossidasi
Cu citocromo ossidasi, acido ascorbico ossidasi, lisina ossidasi, dopamina
idrossilasi
Zn anidrasi carbonica, carbossipeptidasi A, termolisina, alcol deidrogenasi
Mg esocinasi, glucoso-6-fosfatasi, piruvato cinasi
Mn arginasi, ribonucleotide reduttasi, istidina ammoniaca liasi
K piruvato cinasi
Ni ureasi
Co glutamato mutasi
Mo xantina ossidasi, dinitrogenasi
V nitrato reduttasi
Se glutatione perossidasi
ENZIMI: NOMENCLATURA - 1
Enzyme Commission (EC) of the International Union of
Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB).
http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/

Classificazione degli enzimi:

1. Ossidoriduttasi trasferimento di elettroni

2. Trasferasi trasferimento di gruppi funzionali da una molecola all'altra


3. Idrolasi idrolisi (trasferimento di gruppi funzionali sull'acqua)
4. Liasi addizione di gruppi funzionali a un doppio legame o
formazione di un doppio legame per rimozione di gruppi, o
altre rotture di legame implicanti redistribuzione di elettroni
5. Isomerasi trasferimento di gruppi all'interno della stessa molecola
6. Ligasi reazioni endoergoniche in cui due molecole sono unite tra
loro, richiedono in genere la partecipazione diretta di un
nucleoside trifosfato
ENZIMI: NOMENCLATURA - 2
1. Ossidoriduttasi: 2. Transferasi:
deidrogenasi transaldolasi, transchetolasi
ossidasi acetiltransferasi
reduttasi metiltransferasi
perossidasi glucosiltransferasi
catalasi fosfotransferasi (cinasi)
ossigenasi fosfomutasi
idrossilasi aminotransferasi (transaminasi)
ENZIMI: NOMENCLATURA - 3
3. Idrolasi: 4. Liasi:
esterasi decarbossilasi
glicosidasi aldolasi
peptidasi idratasi
fosfatasi deidratasi
tiolasi sintasi
lipasi, fosfolipasi liasi
amidasi
deaminasi
ribonucleasi
ENZIMI: NOMENCLATURA - 4
5. Isomerasi: 6. Ligasi:
racemasi sintetasi
epimerasi carbossilasi
isomerasi
mutasi (non tutte)
ENZIMI: NOMENCLATURA - 5
triosofosfato isomerasi
diidrossiacetonefosfato gliceraldeide-3-fosfato
EC 5.3.1.1 ordine di
Enzyme Commission
inserimento
classe progressivo nella
lista
sottoclasse
sotto-sottoclasse
5 = isomerasi
3 = ossidazione in una parte del substrato e riduzione in un'altra
1 = interconversione di aldosi in chetosi e viceversa
1 = primo ingresso nella sotto-sottoclasse 5.3.3 (al 2005 = 26)

• nome comune (triviale): triosofosfato isomerasi


• nome sistematico: D-gliceraldeide-3-fosfato aldoso-chetoso-
isomerasi
• altri nomi: fosfotrioso isomerasi; trioso fosfoisomerasi; trioso
fosfato mutasi; D-gliceraldeide-3-fosfato chetol-isomerasi
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 1
enzima (E) + substrato (S)

enzima-substrato (ES)

enzima-prodotto (EP)

enzima (E) + prodotto (P)


ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 2

azione di un catalizzatore inorganico:

O
S O
O O
S O
O O
O S O
O O
O O

platino
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 3

azione di un enzima (E):


substrato 2
substrato 1

prodotto

stato di transizione legame e posizionamento


dei reagenti
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 4

chimotripsina:

substrato
aminoacidi sito attivo
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 5

chimotripsina:
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 6
carbossipeptidasi A:
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 7

stato di transizione Energia di attivazione


in assenza del catalizzatore

Energia di attivazione
in presenza del catalizzatore

reagenti

Δ G°'

prodotti
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 8
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 9
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 10
stereospecificità:
substrato 1 substrato 2

substrato

sito attivo sito attivo


ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 11
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 12
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 13
ENZIMI: MECCANISMO D’AZIONE - 14
esocinasi:
ENZIMI: CINETICA - 1
Curva di Michaelis-Menten:
Vmax

v0
V0 = Vmax/2
Vmax [S]
V0 = ──────
Km + [S]

Km
[S]
ENZIMI: CINETICA - 2

ordine 0

v0

ordine 1

[S]
ENZIMI: CINETICA - 6
Valori di Km di alcuni enzimi:
Enzima Substrato Km (mM)
catalasi H2O2 25,0
esocinasi (cervello) D-glucoso 0,05
ATP 0,4
D-fruttoso 1,5
anidrasi carbonica HCO3- 9
chimotripsina acetilfenilalanil-alanina 0,15
glicil-tirosinil-glicina 108
pepsina fenilalanil-glicina 0,3
arginil-tRNA sintetasi tRNA 0,0004
arginina 0,003
ATP 0,3
piruvico carbossilasi ATP 0,06
acido piruvico 0,4
HCO3- 1
ENZIMI: CINETICA - 7
Numero di turnover (kcat) di alcuni enzimi:
Enzima Substrato kcat (molecole/sec)
catalasi H2O2 40.000.000
superossido dismutasi O2- 1.000.000
anidrasi carbonica HCO3- 400.000
acetilcolinesterasi acetilcolina 25.000
β-lattamasi benzilpenicillina 2.000
fumarasi fumarato 800
ribonucleasi RNA 100
DNA polimerasi I DNA 15
papaina peptidi 10
pepsina fenilalanil-glicina 0,5
chimotripsina acetilfenilalanil-alanina 0,14
ENZIMI: CINETICA - 8

2E

v0

Km
[S]
ENZIMI: CINETICA - 9

vmax

1 2 3 4 5 [E]
ENZIMI: CINETICA - 10
Effetto della temperatura sulla velocità:

+ enzima

vel

- enzima

temp
ENZIMI: CINETICA - 11
Effetto del pH sulla velocità:

amilasi monoamino ossidasi


pepsina
acetilcolinesterasi
attiv. lisozima
enz.

3 5 7 9 11
pH
ENZIMI: CINETICA - 12
Aminoacidi in grado di scambiare protoni (1):

+
NH 2 NH
+
NH 3 NH 2 C NH 2 C NH 2
CH2 CH2 NH NH
R R R R
Lys Arg

R R
CH2 CH2

HN NH N NH
+

His
ENZIMI: CINETICA - 13
Aminoacidi in grado di scambiare protoni (2):
_
_ COOH COO
COOH COO
CH2 CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
R R
R R
Asp Glu

_
OH O

_
CH 2SH CH 2S
R R
CH2 CH2
Cys
R R
Tyr
ENZIMI: INIBITORI - 1
substrato
prodotti

Enzima Enzima Enzima

1) Inibitori reversibili:

inibitore
competitivo inibitore non
competitivo

Enzima Enzima
ENZIMI: INIBITORI - 2
COO COO
succinato
CH 2 deidrogenasi CH

CH 2 CH

COO COO

succinato fumarato

COO
succinato
deidrogenasi
CH 2

COO

malonato
ENZIMI: INIBITORI - 3
alcol
deidrogenasi O
H3C OH H C
H
metanolo metanale
(alcol metilico) (formaldeide)

alcol
deidrogenasi O
H3C CH2 OH H3C C
H
etanolo etanale
(alcol etilico) (acetaldeide)
ENZIMI: INIBITORI - 4
S O

H N CH3
HN
N

O
N
N N
HOCH2 O
H

6-mercaptopurina H H H H

N=N=N H
- +

3'-azido-2',3'-deossitimidina
(AZT)
ENZIMI: INIBITORI - 5
_
COO

H2 N N N CH2

CH2
N H
CH2 N C N CH
N H _
O COO
OH

acido folico

_
COO

H2 N N N CH2

CH2
N H
CH2 N C N CH
N _
CH3 O COO
NH2

ametopterina (methotrexate)
ENZIMI: INIBITORI - 6
O
2) Inibitori irreversibili: C O
OH
O C CH3
HO H2C Ser E
O
H F acido acetilsalicilico PG endoperossido sintasi
N (aspirina) (attiva)

O
N
H O
C
5-fluorouracile OH
O
OH
H3C C O H2C Ser E

acido salicilico
PG endoperossido sintasi
(inattiva)
ENZIMI: INIBITORI - 7
H

Enzima CH 2OH H3C C CH 3

O
CH 3 F CH 3
Enzima CH 2O P O
H C O P O C H

O
CH 3 O CH 3
HF H3C C CH 3
diisopropilfluorofosfato
H
ENZIMI: INIBITORI - 8

Enzima CH 2SH + ICH2 C NH 2


iodoacetamide

Enzima CH 2 S CH 2 C NH 2 + HI
ENZIMI: INIBITORI - 9
ENZIMI: REGOLAZIONE - 1

- Enzimi allosterici
- Regolazione covalente
- Induzione, repressione
- Proteolisi
- Proteine regolatrici
- Isoenzimi
- Proenzimi/zimogeni
- Compartimentalizzazione
ENZIMI ALLOSTERICI - 1
ENZIMI ALLOSTERICI:

9 attività sensibile a modulatori allosterici non covalenti

9 posizione all'inizio di una via metabolica

9 attività basale più bassa degli altri enzimi della via

9 proteine spesso oligomeriche

9 cinetica sigmoide
ENZIMI ALLOSTERICI - 2
= substrato = attivatore = inibitore

C R C R

C R
ENZIMI ALLOSTERICI - 3
Effetto cooperativo:
ENZIMI ALLOSTERICI - 4

Vmax

enzima poco enzima molto


efficiente efficiente
v

[S]
ENZIMI ALLOSTERICI - 5

Vmax

+A
stato R
v
+I

stato T

[S]
ENZIMI ALLOSTERICI - 6
AA AA AA AA AA AA
AA AA AA

E1 Y E1 E1

B B B B B
B B
B B BB B

E2 E2 E2

C C
C C CC C
C C CCC
E3 E3 E3

D D DD
DD D D
D DD
E4 E4 E4

XX X X X X X X
X X X
X X X X
X X

attivazione inibizione
a feedback
ENZIMI ALLOSTERICI - 7
riboso-5-P

PRPP

5-fosforibosilammina

IMP

AMP GMP
ENZIMI: REGOLAZIONE COVALENTE - 1
NH2
N
N

O O O N N

O
O P O P O P O CH2 HO H2C Ser E
fosforilazione O O O
H H H H

OH OH
ATP

cinasi

NH2
N
N

O O N N O
O
O P O P O CH2 O P O H2C Ser E
O O O
H H H H

OH OH
ADP
ENZIMI: REGOLAZIONE COVALENTE - 2

H2 O
O

defosforilazione
O P O H2C Ser E
O

fosfatasi

HO H2C Ser E
O

O P OH

O
ENZIMI: REGOLAZIONE COVALENTE - 3
ENZIMI: REGOLAZIONE COVALENTE - 4
ENZIMI: REGOLAZIONE COVALENTE - 5
ENZIMI: REGOLAZIONE COVALENTE - 6
ENZIMI: REGOLAZIONE COVALENTE - 7
ENZIMI: ESPRESSIONE - 1
Induzione/repressione:
ENZIMI: ESPRESSIONE - 2
Induzione in E. coli: Repressione in E. coli:
ENZIMI: ESPRESSIONE - 3

enzimi costitutivi: enzimi permanentemente presenti nelle cellule

enzimi inducibili: la loro quantità aumenta dopo determinati stimoli


‰ ormoni corticosteroidi
‰ vitamina D3
‰ ridotta efficacia dei farmaci dopo terapia prolungata
ENZIMI: PROTEOLISI - 1
Degradazione proteolitica:
PROENZIMI (ZIMOGENI) - 1
PROENZIMI (ZIMOGENI) - 2
PROENZIMI (ZIMOGENI) - 3
PROENZIMI (ZIMOGENI) - 4

tripsinogeno (poco attivo)

1 245

enteropeptidasi
tripsina 1 6 Val-(Asp)4-Lys
tripsina (molto attiva)

7 245
PROENZIMI (ZIMOGENI) - 5

chimotripsinogeno (poco attivo)


1 122 136 201 245

S S S S

tripsina

π-chimotripsina (molto attiva)


15
1 122 136 201 245

S S S S

14 15
chimotripsina
147 148
α-chimotripsina (molto attiva)
13 16 146 149

1 122 136 201 245

S S S S
ENZIMI: PROTEINE REGOLATRICI - 1
calmodulina

¾ calmodulina
¾ inibitore pancreatico della tripsina
¾ serpine: α1-antitripsina (α1AT), etc.

ioni Ca++

E
ENZIMI: PROTEINE REGOLATRICI - 2
calmodulina Ca++-calmodulina legata ad una proteina bersaglio
ENZIMI: PROTEINE REGOLATRICI - 3
ENZIMI: PROTEINE REGOLATRICI - 4
ENZIMI: PROTEINE REGOLATRICI - 5
α1-antitripsina (α1AT)

serpins = serine proteinase inhibitors


ENZIMI: PROTEINE REGOLATRICI - 6
deficit di α1-antitripsina (α1AT) Î enfisema
ENZIMI: PROTEINE REGOLATRICI - 7
ENZIMI: PROTEINE REGOLATRICI - 8

enfisema
ENZIMI: COMPARTIMENTALIZZAZIONE - 1
enzimi lisosomiali
enzimi β-ossidazione
ciclo dell’acido citrico
etc.
ISOENZIMI: - 1
Isoenzimi (isozimi):
lattato deidrogenasi (LDH): H4, H3M1, H2M2, H1M3, M4
creatina cinasi (CK): BB, MM, BM
esocinasi (HK): HK-I, HK-II, HK-III, HK-IV

Isozymes of lactate dehydrogenase. (A) The rat heart LDH isozyme profile
changes in the course of development. The H isozyme is represented by
squares and the M isozyme by circles. The negative and positive numbers
denote the days before and after birth, respectively. (B) LDH isozyme
content varies by tissue.
ENZIMI: DIAGNOSTICA - 1
ENZIMI: DIAGNOSTICA - 3
Determinazione enzimatica del glucoso plasmatico:
glucoso ossidasi
D-glucoso + O2 delta-lattone dell'acido D-gluconico + H2O2

perossidasi
H2O2 + reattivo ridotto (incolore) 2 H2O + reattivo ossidato (colorato)

Determinazione enzimatica del colesterolo plasmatico:


colesterolo ossidasi
colesterolo + O2 colest-4-en-3-one + H2O2

perossidasi
H2O2 + reattivo ridotto (incolore) 2 H2O + reattivo ossidato (colorato)
GLICOLISI - 1
GLICOLISI - 2
GLICOLISI - 3
GLICOLISI - 4
NH2
N
N
6
Mg ++ HO CH 2
1) O O O N H 5
O H
N
+ 4 H 1
O P O P O P O CH2 O OH H
HO OH
O O O 3 2
H H H H
H OH

OH OH glucoso
ATP

esocinasi ++
(HK) Mg

NH2
N
N O
6
Mg ++ O P O CH 2

O O N N 5 O H
O H
H
O P O P O CH2 O + 4
OH
1
H
HO OH
O O 2
H H H H 3
H OH

OH OH
glucoso-6-fosfato
ADP
GLICOLISI - 5

glucoso + fosfato Ö glucoso-6-P ΔG°’ = +13,8 kJ/mol (+3,3 kcal/mol)

ATP + H2O Ö ADP + Pi ΔG°’ = -30,5 kJ/mol (-7,3 kcal/mol)

glucoso + ATP Ö glucoso-6-P + ADP ΔG°’ = -12,6 kJ/mol (-3 kcal/mol)


GLICOLISI - 6

2) O
O
6
O P O CH 2 6 1
fosfoesoso O CH2OH
O P O CH2
5
O H isomerasi
O H 5 2
H O
4 1 H H HO OH
OH H
HO OH ++ 3
Mg 4
3 2 OH H
H OH
fruttoso-6-fosfato
glucoso-6-fosfato

O O O
6 6 6
O P O CH 2 O P O CH 2 O P O CH 2

5 OH 5 OH H 5 OH H
O H O O H O H
4 H 1 C 4 H C1 4 H 1 C H
OH H OH OH
HO H HO OH HO OH
3 2 3 2 3 2
H OH H OH H O

glucoso-6-fosfato enediolo intermedio fruttoso-6-fosfato


GLICOLISI - 7

3) O
fosfofruttocinasi-1
O P O CH2 O CH2 OH
(PFK-1)
O
H HO OH
++
H Mg

OH H ATP ADP

fruttoso-6-fosfato

O O

O P O CH2 O CH2 O P O

O O
H H HO OH

OH H

fruttoso-1,6-bisfosfato
GLICOLISI - 8
O
C
H
H C OH O
4) CH2O P O

O O O

O P O CH 2 O CH2O P O gliceraldeide-3-fosfato
aldolasi
O O
H HO OH O
H
CH2O P O
OH H C O O
O
fruttoso-1,6-bisfosfato CH2OH
1
CH2O P O
2
C O O diidrossiacetone fosfato
3
HO C H
4
H C OH
5
H C OH O
6 P O
CH2O

O
GLICOLISI - 9
trioso fosfato O
C
CH 2 OH isomerasi H
5) H C OH O
C O O
CH 2O P O
CH 2O P O
O
O
diidrossiacetone fosfato gliceraldeide-3-fosfato

6) O + O
NAD NADH + H+
+ O P O O P O
O
C HO O O
H C
H C OH O
H C OH O
CH 2O P O
gliceraldeide-3-fosfato CH 2O P O
O deidrogenasi
O
(GAPDH)
gliceraldeide-3-fosfato 1,3-bisfosfoglicerato
GLICOLISI - 10
nicotinamide adenina dinucleotide O nicotinamide adenina dinucleotide fosfato
+
NAD NADP + O
C NH 2
C NH 2

+
O N +
O N

P O CH2 O P O CH2 O

O O
H H H
H H H H H

OH OH
OH OH
O NH2
O NH2 N
N
N
N
O N N

P O CH2 O
O N N
O
P O CH2 O H H H H

O OH O
H H H H
O P O

OH OH O
GLICOLISI - 11
H H H
O O

C NH 2 H
- C NH 2

+
N N
+ H+

H+

NAD + NADH

H
-
H
O
R C O H H+ R C
H
H
alcol primario aldeide
GLICOLISI - 12
Vit. PP (B3) - 1
Vit. PP (B3) - 2
O O

C OH C NH 2

N N

acido nicotinico nicotinamide


(niacina) (niacinamide)

fabbisogno: 20 mg/die 60 mg Trp Î 1 mg niacina


deficit Î pellagra (3 D = dermatite, diarrea, demenza)
cause: - dieta sbilanciata (ipoproteica, solo mais)
- alcolismo, malassorbimento intestinale
- terapia con isoniazide
Vit. PP (B3) - 3
Niacina Sì
pellagra

Niacina No
Vit. PP (B3) - 4

pellagra
Vit. PP (B3) - 5

pellagra
Vit. PP (B3) - 6

pellagra
Vit. PP (B3) - 7

pellagra
GLICOLISI - 13

O
O
CH2O P O
CH 2O P O
H C OH O +
H OH O
NAD NADH + H+
O C
C
H
H C OH
SH S

Cys Cys

gliceraldeide-3-fosfato gliceraldeide-3-fosfato
deidrogenasi deidrogenasi
GLICOLISI - 14
O
O
O CH 2O P O
HO P O
CH 2O H C OH O
O P O
C O
H C OH O
O
C O
S O P O

Cys O SH

Cys
gliceraldeide-3-fosfato
deidrogenasi gliceraldeide-3-fosfato
deidrogenasi
GLICOLISI - 15
7)

O
ADP ATP
O P O

O O ++ O O
C Mg C

H C OH O H C OH O

CH 2O P O CH 2O P O
fosfoglicerato
O cinasi O
(PGK) 3-fosfoglicerato
1,3-bisfosfoglicerato
GLICOLISI - 16
6) +7)
+
C
O NAD NADH + H+ O O
H C
GAPDH
H C OH O H C OH O
+ PGK
CH 2O P O CH 2O P O

O O

gliceraldeide-3-fosfato ADP + Pi ATP 3-fosfoglicerato


GLICOLISI - 17
8)

O O O O
C ++ C O
Mg
H C OH O H C O P O
CH 2O P O HO CH 2
O
fosfoglicerato
O mutasi
3-fosfoglicerato (PGM) 2-fosfoglicerato
GLICOLISI - 18
9)
H2O
O O O O
C O C O

H C O P O C O P O
HO CH 2 CH 2
O O
enolasi

2-fosfoglicerato fosfoenolpiruvato
GLICOLISI - 19
10) ADP ATP
O O O O
C O ++ C
Mg
C O P O C OH
+
CH 2 K CH 2
O
piruvato
fosfoenolpiruvato cinasi enolpiruvato
(PK)

O O
tautomerizzazione C
C O
CH 3

piruvato
Fermentazione lattica e alcolica
GLICOLISI - 20
?

+
NAD NADH + H+

gliceraldeide-3-fosfato + P i 1,3-bisfosfoglicerato
gliceraldeide-3-fosfato
deidrogenasi

+
NADH + H+ NAD
O O O O
C C
C O HO C H
CH 3 CH 3
lattato
piruvato deidrogenasi L-lattato
(LDH)
GLICOLISI ED ENERGIA
glucoso
0

ATP

HK
20
ADP

kJ/mole G6P
F6P

40 ATP 2 ATP
2 ADP
PFK-1
FBP GA3P 2PG
ADP PEP
DHAP BPG 3PG 2 ADP
60 GA3P
PK

2 ATP
Pir
Lat
80
GLICOLISI - 21

H
+ H
+

glucoso GLUT lattato- lattato-


GLICOLISI - 22
H4 H3M1 H2M2 H1M3 M4
(LDH1) (LDH2) (LDH3) (LDH4) (LDH5)

fegato ● ● ● ●

muscolo ● ● ● ●

leucociti ● ●
● ● ●

cervello ●
● ● ● ●

eritrociti ●
● ● ● ●

rene
● ● ● ● ●

cuore
● ● ● ● ●
FERMENTAZIONE ALCOLICA - 1
CO 2

O O
C
O H
C O ++ C
TPP, Mg
CH 3 CH 3
piruvato
piruvato decarbossilasi acetaldeide
H
NH2 S
O O
+
N CH2 N
CH2 CH2 O P O P O

CH3 O O
H3 C
N

tiamina pirofosfato (TPP)


FERMENTAZIONE ALCOLICA - 2

+ +
NADH + H NAD
H
O H HO C H
C
CH 3 CH 3
alcol etanolo
acetaldeide deidrogenasi
METABOLISMO DELL’ALCOL - 1
+ +
NAD NADH + H
H
alcol
deidrogenasi
HO C H O H
C
CH 3 CH 3
etanolo acetaldeide

+
NAD

disulfiram aldeide
(antabuse) deidrogenasi
citoplasma +
NADH + H
mitocondrio
O tiocinasi O OH
C S-CoA C
CH 3 CH 3

acetilCoA ATP CoA-SH acido acetico


AMP
FERMENTAZIONI - 1
DESTINO DEL GLUCOSO - 1
glucoso

glicolisi
(10 reazioni)

anaerobiosi
2 piruvato anaerobiosi

2 etanolo + 2 CO2 O2 2 lattato


aerobiosi

fermentazione alcolica fermentazione lattica


(lievito) CO2

2 acetil-CoA

O2
ciclo
dell'acido
CO2 citrico

4 CO2 + 4 H2O
DESTINO DEL GLUCOSO - 2
glucoso

glucoso-6-P pentosofosfati nucleotidi

fruttoso-6-P aminomonosaccaridi glicolipidi


glicoproteine

fruttoso-1,6-BP

GA3-P DAP glicerolo-3-fosfato lipidi


DESTINO DEL GLUCOSO - 3

1,3-bisfosfoglicerato 2,3-bisfosfoglicerato

3-fosfoglicerato serina

2-fosfoglicerato

aminoacidi aromatici
fosfoenolpiruvato
aspartato pirimidine

piruvato alanina
asparagina
METABOLISMO ESOSI - 1
METABOLISMO FRUTTOSO - 1
O

HO CH2 O CH2OH esocinasi O P O CH2 O CH2OH

++ O
H H HO OH Mg H H HO OH

ADP
OH H
ATP OH H

fruttoso fruttoso-6-fosfato

HO CH2 O CH2OH HO CH2 O CH2 O P O


fruttocinasi
O
H H HO OH ++ H H HO OH
Mg

OH H OH H
ATP ADP
fruttoso fruttoso-1-fosfato
METABOLISMO FRUTTOSO - 2
O

HO CH2 O CH2 O P O
fruttoso-1-fosfato
O aldolasi
H H HO OH

OH H

fruttoso-1-fosfato

H O
O
C H C O P O
H
H C OH H C O O
+
CH2OH CH2OH

gliceraldeide diidrossiacetone fosfato


METABOLISMO FRUTTOSO - 3

ATP ADP glicolisi


O O
C ++ C
H H
Mg
H C OH H C OH O gluconeogenesi
CH2OH trioso CH2O P O
cinasi sintesi di
O
gliceraldeide glicogeno
gliceraldeide-3-fosfato

NAD + NADH + H +
CH 2OH CH 2OH
H C OH O C O O
sintesi trigliceridi P O P O
H C O H C O
glicerolo3PDH
H O H O
glicerolo-3-fosfato diidrossiacetone-fosfato
METABOLISMO FRUTTOSO - 4
via dei polioli:

O
C CH 2OH CH 2OH
H aldoso sorbitolo
H C OH reduttasi H C OH deidrogenasi C O

HO C H HO C H HO C H

H C OH NADPH NADP + H C OH NAD + NADH H C OH


+ H+ + H+
H C OH H C OH H C OH
CH OH CH 2OH CH 2OH
2
D-glucoso glucitolo o sorbitolo D-fruttoso
METABOLISMO FRUTTOSO - 5
METABOLISMO MANNOSO - 1
O

HO CH 2 O P O CH 2
O H esocinasi O H
H O H
H (HK) H
OH OH ++ OH OH
HO OH Mg HO OH

H H H H
ATP ADP
mannoso mannoso-6-fosfato

fosfomannoso
isomerasi

O P O CH2 O CH2 OH

O
H H HO OH

OH H

fruttoso-6-fosfato
METABOLISMO GALATTOSO - 1

HO CH 2 HO CH 2
O H O H
OH galattocinasi OH
H H O
OH H ++ OH H
H OH Mg H O P O

H OH H OH O
ATP ADP
galattoso galattoso-1-fosfato
METABOLISMO GALATTOSO - 2
galattoso-1-fosfato
UDP-glucoso
galattoso-1-fosfato
uridiltransferasi
glucoso-1-fosfato
O

HO CH 2 HN

O H
OH
O
H O O N
OH H
H O P O P O CH2 O

H OH O O
H H H H

UDP-galattoso
OH OH

UDP-glucoso
+
4-epimerasi NAD O

HO CH 2 HN

O H
H
O
H O O N
OH H
HO O P O P O CH2 O

H OH O O
H H H H

UDP-glucoso
OH OH
METABOLISMO GALATTOSO - 3
galattosemia:
SINTESI LATTOSO - 1

prolactin
progesterone
GLUCOSO-6P - 1
glicogeno

Glicogenolisi Glicogenosintesi

ATP ADP P
ADP ATP
O O

Piruvato
Glicolisi
glucoso (Glc) Pi H2O Glc-6P
NADP+

NADPH

Via dei
pentoso-
fosfati

Rib-5P
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 1
O O
+ +
O P O CH 2 NADP NADPH + H O P O CH 2
O O
O H H ++ O H
H
Mg H
O
OH H OH H
HO OH HO
glucoso-6-fosfato
H OH
deidrogenasi H OH

glucoso-6-fosfato 6-fosfogluconolattone

H2 O

Fase ossidativa: lattonasi Mg


++

+
+H
+ O O
CO 2 NADPH NADP C
O H
C CH 2OH
H C OH
C O ++
H C OH Mg
HO C H
H C OH H C OH
6-fosfogluconato H C OH
H C OH O fosfopentoso H C OH O deidrogenasi H C OH O
isomerasi CH 2O P O
CH 2O P O CH O P O
2
O O
O

D-riboso-5-fosfato D-ribuloso-5-fosfato 6-fosfogluconato


VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 2
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 3
Fase non ossidativa:

glucoso-6-P ribuloso-5-P
epimerasi isomerasi

xiluloso-5-P riboso-5-P
transchetolasi TPP

gliceraldeide-3-P sedoeptuloso-7-P

transaldolasi
xiluloso-5-P eritroso-4-P fruttoso-6-P
transchetolasi TPP
fruttoso-6-P gliceraldeide-3-P piruvato

CO2 + H2O
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 3b
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 3c
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 3d
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 4
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 5
G6P NADP+ GSH H 2O 2 (ROOH)

G6PD GSSGRed GSHPx


6PG NADPH GSSG H 2O (ROH)

Glutatione ridotto (GSH, γ-glutamil-cisteinil-glicina):


H CH2SH H H
O_
CH2 C N C C N C C
O
CH2 O H O H
+
H C NH 3
_
COO
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 6
Glutatione ossidato (GSSG): _
COO
+
H C NH 3
CH2 O H O H
O_
CH2 C N C C N C C
O
H CH2 H H
S

H CH2 H H
O_
CH2 C N C C N C C
O
CH2 O H O H
+
H C NH 3
_
COO
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 7
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 8
Carenza di G6PD (favismo): distribuzione geografica

frequenze geniche
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 9
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 10
Farmaci in grado di scatenare crisi
emolitiche nei pazienti G6PD-carenti:
• antimalarici (primachina, clorochina)
• antibiotici (sulfonamidi, cloramfenicolo, nitrofurantoina)
• aspirina ed altri farmaci antiinfiammatori non steroidei (NSAID)
• sulfoni (dapsone)
• glibenclamide (ipoglicemizzante orale)
• diuretici tiazidici
• fenotiazina
• vitamina K
• naftalene
• erbicidi
• etc.

fave
VIA DEI PENTOSOFOSFATI - 11

fave
Pitagora di Samo
(571-496 a.C.)
“…κυάμων απέχεσθε…”
GLICOGENOLISI - 1
GLICOGENOLISI - 2
GLICOGENO

estremo
non riducente

CH 2OH CH 2OH CH 2OH CH 2OH

H C O H H C O H H C O H H C O H
H H H H
C OH H C C OH H C C OH H C C OH H C legame 1---> 6
OH C C O C C C C O C C alfa-glicosidico
H OH H OH H OH H HO O

CH 2OH CH 2OH CH 2OH CH 2 CH 2OH

H C O H H C O H H C O H H C O H H C O
H
H H H H H
C OH H C C OH H C C OH H C C OH H C C OH H C
OH C C O C C O C C C C O C C OH

H OH H OH H OH H OH H OH

estremo legame 1---> 4 estremo


non riducente riducente
alfa-glicosidico
GLICOGENOLISI - 3
HOCH 2 HO CH 2
O H O H
H H
H H
OH H OH H
HO O O

H OH H OH

H2O

idrolisi

HO CH 2
HOCH 2 O H
H
O H H
H
OH H
H O
OH HO
H
HO OH
H OH
H OH

glucoso
GLICOGENOLISI - 4
HO CH 2 HOCH 2
O H O H
H H
H H
OH H OH H
HO O O

H OH H OH

HO P O
fosforolisi
O

HOCH 2
O H
H
H
OH H
O
HO CH 2 HO

O H H OH
H
H O
OH H
HO O P O

H OH O

glucoso-1-fosfato
GLICOGENOLISI - 5
HO CH 2 HO CH 2 HO CH 2
O H O H O H
H H H
H H H
OH H OH H OH H
HO O O O

H OH H OH H OH

estremo non riducente (glucoso)n


O
glicogeno HO P O
fosforilasi
O

HO CH 2 HO CH 2
O H O H
H H
H H
OH H OH H
O O
HO CH 2 HO

O H H OH H OH
H
H O
(glucoso)
OH H n-1
HO O P O

H OH O

glucoso-1-fosfato
GLICOGENOLISI - 6

O H
O C

O P O H2 C OH

O
+ CH3
N
H
piridossalfosfato (PALP)
GLICOGENOLISI - 8

glicogeno

estremità glicogeno
non riducenti fosforilasi

glicogeno

glucoso-1-fosfato enzima
deramificante
GLICOGENOLISI - 9

glicogeno

enzima
deramificante

glicogeno

glicogeno glucoso
fosforilasi
GLICOGENOLISI - 10
O

HO CH 2 O P O CH 2
O H fosfoglucomutasi O H
H O H
H O H
OH H OH H
HO O P O HO OH

H OH O H OH

glucoso-1-fosfato glucoso-6-fosfato
GLUCOSIO 6 FOSFATASI NEL FEGATO
GLICOGENOSINTESI - 1

O P O CH 2 HO CH 2
O H fosfoglucomutasi O H
O H H
H H O
OH H OH H
HO OH HO O P O

H OH H OH O

glucoso-6-fosfato glucoso-1-fosfato
GLICOGENOSINTESI - 2

pirofosfatasi
inorganica
H2O 2 Pi

HO CH 2 HO CH 2
O UTP PPi O
H H H H
H O H
OH H OH H
HO O P O HO O UDP
H OH O UDPglucoso H OH
pirofosforilasi
glucoso-1-fosfato UDPglucoso
GLICOGENOSINTESI - 3 O

HN
HO CH 2
O H
H O
H O O O N
O
OH H
HO O P O + O P O P O P O CH2 O

O O O O
H OH H H H H

glucoso-1-fosfato UTP OH OH

++ UDP-glucoso pirofosforilasi
Mg
(glucoso-1-P uridiltransferasi)

HO CH 2 HN
O O
O H
H
O P O P O O
+ H O O N
OH H
O O HO O P O P O CH2 O

pirofosfato H OH O O
H H H H

UDP-glucoso OH OH
GLICOGENOSINTESI - 4
HO CH 2 HO CH 2 HO CH 2
O H O H O H
H H H
H H H
OH H OH H OH H
HO O UDP HO
O O

H OH H OH H OH

(glucoso)n
UDPglucoso

ATP ADP
glicogeno
sintasi UDP UDP UTP
nucleoside difosfato cinasi

HO CH 2 HOCH 2 HO CH 2
O H O H O H
H H H
H H H
OH H OH H OH H
HO O O O

H OH H OH H OH

(glucoso)n+1
GLICOGENOSINTESI - 5

glicogeno
estremità enzima
non riducente ramificante
GLICOGENOSINTESI - 6
glicogenina
Tyr

UDP-glucoso

UDP

7 UDP-glucoso

7 UDP
GLICOGENOSINTESI - 7

n UDP-glucoso
glicogeno
n UDP sintasi

enzima glicogeno
ramificante sintasi
GLICOGENOSINTESI - 8
REGOLAZIONE ORMONALE - 1
INSULINA - 1
recettori TyrK:
INSULINA - 2
recettori TyrK:
INSULINA - 3
recettori TyrK:
INSULINA - 4
recettore dell’insulina:
GLUCAGONE/ADRENALINA - 1

noradrenalina

glucagone
GLUCAGONE/ADRENALINA - 2
recettore “a
serpentina”:

sito legame
proteina G
GLUCAGONE/ADRENALINA - 3
recettori associati a proteine G:
GLUCAGONE/ADRENALINA - 4
recettori associati a proteine G:
GLUCAGONE/ADRENALINA - 5
adenilato ciclasi:
GLUCAGONE/ADRENALINA - 6
adenilato ciclasi:
GLUCAGONE/ADRENALINA - 7

pirofosfato NH2
NH2 N
O O N
N
N O P O P O

O O N N

O O O N N O
O CH2
O P O P O P O CH2 O
H H H H
O O O
H H H H
adenilato ciclasi O P O OH
OH OH
O cAMP
ATP
GLUCAGONE/ADRENALINA - 8
proteina cinasi A (PKA):
GLUCAGONE/ADRENALINA - 9
NH2 NH2
N N
N N

N N N
O N
H 2O
O CH2 O O
O P O CH2

H H H O
H H H H H
fosfodiesterasi

O P O OH OH OH

O
cAMP AMP
REGOLAZIONE METABOLISMO GLICOGENO - 1
adrenalina (muscolo scheletrico) insulina
glucagone (fegato)

AC
R G PDE
OH
ATP cAMP AMP fosforilasi
cinasi
inattiva
ATP Pi
P PP-1
PKA H2O
ADP
(inattiva) PKA fosforilasi
(attiva) cinasi
attiva

ADP ATP

glicogeno P P HO OH

fosforilasi a fosforilasi b
glucoso-1P (attiva) (meno attiva)
H2O Pi
glucoso glucoso-6P
PP-1
REGOLAZIONE METABOLISMO GLICOGENO - 2
REGOLAZIONE METABOLISMO GLICOGENO - 3
fosforilasi
Ca++ cinasi OH

AMP

ADP ATP

P P HO OH HO OH
glicogeno glicogeno

AMP AMP
glucoso-1P glucoso-1P
fosforilasi a fosforilasi b fosforilasi b
(attiva) (meno attiva) (più attiva)

H2O Pi
glucoso
ATP,
PP-1 glucoso-6P
REGOLAZIONE METABOLISMO GLICOGENO - 4
sintasi
fosforilasi
cinasi OH
inattiva
adrenalina ATP Pi
(muscolo PP-1 insulina
scheletrico) ADP sintasi H2O
PKA fosforilasi
cinasi
P
glucagone (attiva)
attiva
(fegato) PDE

ATP ADP
ADP ATP

HO OH P P HO OH cAMP AMP

glicogeno

glicogeno glicogeno glicogeno


sintasi a sintasi b sintasi a
(I, attiva) (D, meno attiva) (I, attiva)

Pi
H2O
UDP-glucoso PKA
(inattiva)

glucoso-1P PP-1

glucoso glucoso-6P gluconeogenesi


insulina
REGOLAZIONE METABOLISMO GLICOGENO - 5
CITOSOL

MITOCONDRI
In presenza di Ossigeno il piruvato
raggiunge la matrice mitocondriale
La decarbossilazione ossidativa del piruvato per formare
AcetlCoA è il legame tra glicolisi e ciclo di Krebs
PIRUVATO DEIDROGENASI - 1

+ NADH + H +
CoA-SH NAD
O CO2
O
C
C O
O S-CoA
TPP, lipoato, FAD C
CH 3 CH 3
piruvato
piruvato deidrogenasi acetilcoenzima A

piruvato deidrogenasi (PirDH): 1. piruvato deidrogenasi (E1)


2. diidrolipoil transacetilasi (E2)
3. diidrolipoil deidrogenasi (E3)
altre proteine: PirDH cinasi
PirDH fosfatasi
PIRUVATO DEIDROGENASI - 2
piruvato deidrogenasi (PirDH) di Escherichia Coli:

> 4,5 milioni di Da, 45 nm diametro


E. coli: E1 = 24 copie; E2 = 24 copie; E3 = 12 copie
mammiferi: E1 = 20-30 copie; E2 = 60 copie; E3 = 6 copie
TIAMINA PIROFOSFATO
H
NH2 S
O O
+
N CH2 N
CH2 CH2 O P O P O

CH3 O O
H3 C
N

tiamina pirofosfato (TPP)

H
NH2 S
+
N CH2 N
CH2 CH2 OH

CH3
H3 C
N

tiamina (vit. B1)


Vit. B1 - 1

Fabbisogno: 1,0-1,5 mg/die (maggiore se dieta ricca di glicidi)

Beriberi: deficit di vit. B1


- alimentazione sbilanciata (solo riso brillato)
- alcolismo
- malassorbimento intestinale
↑ piruvato nel sangue
Vit. B1 - 2
dolori agli beriberi
arti, “secco”
parestesie,
iporeflessia,
tremori
atrofia
muscolare,
astenia, afonia

beriberi
“umido” cardiomegalia

dispnea, sindrome encefalopatica


edemi di Wernicke-Korsakoff:
nistagmo, atassia,
amnesia, stato
confusionale
ACIDO LIPOICO - 1
O

CH2 CH2 C
CH2 CH2 O
S S
acido lipoico (lipoato)
O C O
CH2 CH2 C CH2 CH2 CH
CH2 CH2 N CH2 CH2
S S H NH
lipoamide (lipoil-lisina)

CH2 CH2
CH2 CH2
HS SH
diidrolipoato

CH2 CH2
CH2 CH2
S SH
S-acetildiidrolipoato
O C

CH3
COENZIMA A - 1
NH2
N
Coenzima A (CoA) N

H H H CH O O N N
3
HS CH CH N C CH CH N C C C CH O P O P O CH2 O
2 2 2 2 2
O O OH CH O O
3 H H H
H

beta-mercapto- acido pantotenico (vit. B5) O OH


etilammina
(cisteammina) O P O

3'-fosfo-ADP

Fabbisogno Vit. B5: 10 mg/die


COENZIMA A - 2
COENZIMA A - 3
FLAVINA ADENINA DINUCLEOTIDE - 1
O

CH3 N
NH

CH3 N N O
CH
2
H C OH
H C OH
H C OH
CH NH2
FAD 2
O N
N
O P O

O N N

O P O CH2 O

O
H H H H

OH OH
FLAVINA MONONUCLEOTIDE - 1
O

CH3 N
NH

CH3 N N O
CH
2
H C OH
H C OH
H C OH
CH
FMN 2
O

O P O

O
Vit. B2 (RIBOFLAVINA) - 1
O

CH3 N
NH

CH3 N N O
CH
2
H C OH
H C OH
H C OH
CH OH
2

riboflavina (vit. B2 )
Vit. B2 (RIBOFLAVINA) - 2

Fabbisogno: 1,5-2 mg/die


carenza Î ariboflavinosi

cause: carenze alimentari gravi


malassorbimento
alcolismo
cirrosi
sintomi:
stomatite angolare (ragadi alle commessure labiali),
alterazioni linguali (lingua scarlatta e dolente), labiali
(cheilosi), oculari (vascolarizzazione ed opacità corneale)
e cutanee (dermatite seborroica di naso e palpebre)
FAD e FMN - 1
+ _
O
e- + H H O

CH3 N CH3 N
+
NH NH

CH3 N N O CH3 N N O
R R
FAD (FMN) FADH (FMNH )
(semichinone)

+
e- + H

H O

CH3 N
NH

CH3 N N O
R
H
FADH2 (FMNH2 )
PIRUVATO DEIDROGENASI - 3
CH3―C―COO¯

E1
CO2

CH3―CH― TPP
OH

2 e¯
E2

CH3―C― lipoato
O
2 e¯

FADH2

CH3―C― CoA E3
2 e¯
O
NADH
PIRUVATO DEIDROGENASI - 4
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 1
piruvato

acetil-CoA

ossalacetato
NADH
NAD+ citrato
malato

isocitrato
fumarato NAD+
CO2
FADH2 NADH
FAD α-chetoglutarato
succinato CO2 NAD+
NADH
succinil-CoA
GTP
GDP
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 2
H2O CoA-SH COO-
O -
O C COO
CH3 C CH2
S-CoA + CH 2 HO C COO
-
acetil-CoA COO- citrato
sintasi CH 2
ossalacetato
COO-
citrato

COO- COO- COO-


H2O H2O
CH 2 CH 2 CH 2
-
HO C COO - C COO - HC COO

HCH
aconitasi C COO - aconitasi HO CH
COO- H COO-
citrato cis-aconitato isocitrato
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 3
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 4
- -
COO NADH + H + COO
NAD +
CH 2 CH 2
-
H C COO CH 2 + CO2
isocitrato
HO CH C O
deidrogenasi
- -
COO COO
isocitrato alfa-cheto-glutarato
- -
COO
NAD + NADH + H + COO
CoA-SH
CH 2 CH 2

CH 2 CH 2 + CO
2
(TPP, lipoato, FAD)
C O C O
- alfa-cheto-glutarato
COO S-CoA
deidrogenasi
alfa-cheto-glutarato succinil-CoA
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 5
- -
COO GTP CoA-SH COO
GDP + Pi
CH 2 CH 2
CH 2 CH 2
C O succinil-CoA -
COO
sintetasi
S-CoA succinato
succinil-CoA

Mg++
GTP + ADP GDP + ATP
nucleoside
difosfato
cinasi
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 6
- FADH2 -
COO FAD COO

HC H CH

HC H HC
- succinato -
COO COO
deidrogenasi
succinato fumarato

- -
COO H2 O COO

CH HO CH

HC HC H
- fumarasi -
COO COO
fumarato L-malato
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 7

- +
COO-
COO NAD + NADH + H

HO C H C O

CH 2 CH 2
- malato COO-
COO
deidrogenasi ossalacetato
L-malato
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 8
Resa energetica del ciclo di Krebs
• Da ogni molecola di AcetilCoA che entra nel ciclo:
• 3 NADH ridotti (= 9 ATP)
• 1 FADH2 ridotto (= 2 ATP)
• 1 GTP

• Dalla Decarbossilazione del piruvato ad Acetil CoA si forma 1 NADH


ridotto (=3ATP)
• Per un totale di 15 ATP da moltiplicare x2 = 30 ATP dalla
decarbossilazione del piruvato e dal ciclo di Krebs
• Nella glicolisi la resa energetica per mole di glucosio è di 2ATP e
2NADH ridotti (=6 ATP)

• TOTALE DA 1 MOLE GLUCOSO COMPLETAMENTE OSSIDATO:


38 ATP
Regolazione del ciclo di Krebs
REGOLAZIONE CICLO DI KREBS - 1

acetil-CoA

ossalacetato
3 ATP NADH
3 ADP NAD+ citrato
malato

isocitrato
fumarato NAD+ 3 ADP
CO2
NADH 3 ATP
2 ATP FADH2
2 ADP FAD α-chetoglutarato
succinato CO2 NAD+ 3 ADP
NADH 3 ATP
succinil-CoA
GTP
ATP GDP
ADP

ADP/ATP
REGOLAZIONE CICLO DI KREBS - 2

acetil-CoA
ossalacetato inibizione
NADH glicolisi
NAD+
citrato
malato sintesi
acidi
isocitrato
NAD+ grassi
fumarato CO2
FADH2 NADH
FAD
α-chetoglutarato
succinato CO2 NAD+

succinil-CoA NADH
GTP
GDP

ADP/ATP
REGOLAZIONE PIR DH - 1

piruvato
ATP, acetil-CoA,
3 ADP NAD+ NADH, acidi grassi
piruvato
3 ATP NADH deidrogenasi
AMP, CoA, NAD+,
Ca2+
acetil-CoA

PirDH poco attiva


H2O ADP
Ser-P pirDH cinasi
pirDH fosfatasi
Pi ATP
PirDH attivata
Ser
piruvato + CoA acetil-CoA
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 9
pirimidine piruvato
carbossilasi
piruvato
glucoso aspartato piruvato
asparagina deidrogenasi
acetil-CoA
fosfoenol- acidi grassi
PEPCK
piruvato (PEP) ossalacetato steroli

citrato
malato enzima purine
serina malico
glicina piruvato
cisteina fumarato glutamato

α-chetoglutarato
fenilalanina glutamina
tirosina succinil-CoA prolina
arginina
valina, isoleucina, porfirine, eme
treonina, metionina
CICLO DELL’ACIDO CITRICO - 10

CO2 ATP ADP + Pi


COO-
COO- C O
C O biotina CH 2
CH 3 COO-
piruvato
piruvato carbossilasi ossalacetato
O
BIOTINA - 1
HN NH

CH2 CH2 O
S CH2 CH2 C

O
biotina

HN NH
C O
H
CH2 CH2 N CH2 CH2
CH2 CH2 C CH2 CH2 CH
S
NH
O

biotinil-lisina (biocitina)

O O
C
N NH
O

CH2 CH2
S CH2 CH2 C

carbossibiotina
BIOTINA - 2
I grassi bruciano al fuoco dei carboidrati
RESPIRAZIONE - 1
RESPIRAZIONE - 2
RESPIRAZIONE - 3
porina:
RESPIRAZIONE - 4
RESPIRAZIONE - 5
O CH3

CH3O (CH 2 CH C CH2 ) 10 H

CH3O CH3

O
ubichinone
(coenzima Q)

OH CH3

CH3O (CH 2 CH C CH2 ) 10 H

CH3O CH3

OH
ubichinolo
RESPIRAZIONE - 6
Cys S S S Cys
Fe Fe
Cys S S S Cys 2Fe-2S

Cys S S S Cys
Fe Fe
S
Fe 4Fe-4S
S S
Fe
S
Cys
RESPIRAZIONE - 7
RESPIRAZIONE - 8
RESPIRAZIONE - 9
membrana esterna

rotenone cianuro
antimicina A
amytal azide
CO spazio intermembrana

cit. c
FMN, cit. cit. a/a3, membrana interna
Fe-S b/c1, Cu
UQ
Fe-S
Fe-S IV
I II III

matrice
1/2 O2 H2O
NADH NAD+ FADH2 FAD + 2 H+
+ H+
NADH succinato citocromo citocromo
deidrogenasi deidrogenasi riduttasi ossidasi
(complesso I) (complesso II) (complesso III) (complesso IV)
RESPIRAZIONE - 14

220 kj/mole
FOSFORILAZIONE OSSIDATIVA - 2
membrana esterna

ΔpH = 1-1,4 spazio intermembrana


4 H+ ΔΨ = 0,14-0,2 V 4 H+ 2 H+
3 H+

membrana interna cit. c


+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + IV
++++++++++

I UQ FO
III
II
----------------------------------
F1

1/2 O2 H2O
NADH NAD+ FADH2 FAD + 2 H+
+ H+ ADP ATP
+ Pi
matrice 3 H+
FOSFORILAZIONE OSSIDATIVA - 3
FOSFORILAZIONE OSSIDATIVA - 5
FOF1ATP sintasi:
FOSFORILAZIONE OSSIDATIVA - 7
FOF1ATP sintasi:
RESPIRAZIONE - 19
controllo respiratorio:

H+ H+ H+ H+
spazio
cit. c intermembrana

I UQ III IV FO
II matrice

F1
NADH FADH2
+ H+
ADP ATP
NADH/NAD ADP/ATP + Pi

FADH2/FAD
FOSFORILAZIONE OSSIDATIVA - 10
FOSFORILAZIONE OSSIDATIVA - 11
TRASLOCASI - 1
“ATP sintasoma”: lavoro cellulare
spazio intermembrana
H+ H+
H2PO4- H+ H+ ATP4-
H+ ADP3-

FO

F1
H+ H2PO4 -
ADP3-

ATP4-
matrice
H+

traslocasi del ATP sintasi traslocasi degli


fosfato (FOF1-ATPasi) adenosin nucleotidi
(simporto Pi/H+) (antiporto ADP /ATP)
TRASLOCASI - 2
spazio intermembrana
succinato,
malato o citrato o
H+ piruvato fumarato Ca2+ isocitrato

OH-
Pi , citrato,
succinato, isocitrato o acidi
matrice malato o dicarbossilici
fumarato

traslocasi del traslocasi degli uniporto del traslocasi degli


piruvato acidi calcio acidi
dicarbossilici tricarbossilici
TRASLOCASI - 3
SHUTTLES - 1
NADH
H+ NAD+
COO- COO-
CH2 CH2
C=O malato HCOH
COO- deidrogenasi COO-
ossalacetato malato
spazio intermembrana

matrice
NADH NAD+
NAD+ H+
COO- COO-
CH2 CH2
HCOH C=O
malato
COO- deidrogenasi COO-
malato ossalacetato
SHUTTLES - 2
SHUTTLES - 3
NADH
H+ NAD+

glicerolo-3-P
deidrogenasi
CH2OH citosolica CH2OH
C=O HCOH
CH2O PO3-- CH2O PO3--
glicerolo-3-P
diidrossiacetonefosfato deidrogenasi glicerolo-3-fosfato
mitocondriale

FAD FADH2 spazio intermembrana

UQ III

matrice
SHUTTLES - 4
FOSFORILAZIONE OSSIDATIVA - 9
H+
H+ O OH
H+
H+ NO2 NO2

2,4-dinitrofenolo
(DNP)
NO2 NO2

spazio intermembrana

matrice

H+
H+ O OH
H+
H+ NO2 NO2

NO2 NO2
TERMOGENESI - 1

adipocita “bianco” adipocita “bruno”


TERMOGENESI - 2

grasso “bruno” grasso “bianco” o “giallo”


TERMOGENESI - 3

grasso “bruno”
TERMOGENESI - 4
spazio intermembrana

H+ H+ H+
H+
calore

cit. c

I III IV FO
II

F1

matrice
H+
ADP ATP
+ Pi
termogenina
(UCP)
GLUCONEOGENESI - 1
Gluconeogenesi: sintesi da
precursori non saccaridici
GLUCONEOGENESI - 2
glucoso
0

ATP

HK
20
ADP

kJ/mole G6P
F6P

40 ATP 2 ATP
2 ADP
PFK-1
FBP GA3P 2PG
ADP PEP
DHAP BPG 3PG 2 ADP
60 GA3P
PK

2 ATP
Pir
Lat
80
GLUCONEOGENESI - 3

+
NAD NADH + H +

O O O O
C C

HO C H C O
CH 3 lattato CH 3
deidrogenasi
L-lattato (LDH) piruvato
GLUCONEOGENESI - 4

CO2 ATP ADP + Pi


COO-
COO- C O
C O biotina CH 2
CH 3
piruvato COO-

piruvato carbossilasi ossalacetato


O
BIOTINA - 1
HN NH

CH2 CH2 O
S CH2 CH2 C

O
biotina

HN NH
C O
H
CH2 CH2 N CH2 CH2
CH2 CH2 C CH2 CH2 CH
S
NH
O

biotinil-lisina (biocitina)

O O HCO3- + ATP + Biotinenzima → carbossibiotinenzima


C
N NH
O

CH2 CH2
S CH2 CH2 C

carbossibiotina
BIOTINA - 2

carbossibiotinenzima
GLUCONEOGENESI - 4

GTP GDP CO2


COO- - O
-
COO
C O C O -
P O
CH 2 fosfoenolpiruvato CH 2
O
COO- carbossicinasi
(PEPCK) fosfoenolpiruvato
ossalacetato

Mg++
GDP + ATP GTP + ADP
nucleoside
difosfato
cinasi
lattato GLUCONEOGENESI - 11
NAD+
LDH

NADH + H+
aminoacidi piruvato
piruvato
citosol
mitocondrio

piruvato piruvato
CO2 ciclo del CO2
citrato
pir. carb. pir. carb.

ossalacetato ossalacetato
GTP NADH + H+
CO2 PEPCK mit. MalDH mit.
fosfoenolpiruvato
GDP NAD+
fosfoenolpiruvato malato GDP
CO2 PEPCK cit.

MalDH cit.
GTP

fosfoenolpiruvato malato ossalacetato

NAD+ NADH + H+
GLUCONEOGENESI - 5

O O H2O O O
C O C O

C O P O H C O P O
CH 2 HO CH 2
O O
enolasi
fosfoenolpiruvato 2-fosfoglicerato
GLUCONEOGENESI - 6
O O O O
C O C
Mg++
H C O P O H C OH O
HO CH 2 CH 2O P O
O
fosfoglicerato
mutasi O

2-fosfoglicerato (PGM) 3-fosfoglicerato

ATP ADP O P O
O O O
C ++ O
Mg C
H C OH O H C OH O
CH 2O P O CH 2O P O
fosfoglicerato
O cinasi
O
(PGK)
3-fosfoglicerato 1,3-bisfosfoglicerato
GLUCONEOGENESI - 7
O +
NADH + H+ NAD Pi
O P O

O O
O C
C H
H C OH O
H C OH O
CH 2O P O
CH 2O P O gliceraldeide-3-fosfato
deidrogenasi O
O
(GAPDH)
1,3-bisfosfoglicerato gliceraldeide-3-fosfato

O trioso fosfato
C
H isomerasi CH 2 OH
H C OH O
C O O
CH 2O P O
CH 2O P O
O
O
gliceraldeide-3-fosfato diidrossiacetone fosfato
GLUCONEOGENESI - 8
O
C
H
H C OH O
CH 2O P O
O O
O
O P O CH 2 O CH2O P O
gliceraldeide-3-fosfato
aldolasi O O
H H HO OH

O
OH H
CH 2O P O

C O
fruttoso-1,6-bisfosfato
O
CH 2OH

diidrossiacetone fosfato
GLUCONEOGENESI - 9
O O

O P O CH2 O CH2 O P O

O O
H H HO OH

OH H

fruttoso-1,6-bisfosfato

H2O

fruttoso-1,6-
bisfosfatasi
Pi

O P O CH2 O CH2 OH

O
H H HO OH

OH H

fruttoso-6-fosfato
GLUCONEOGENESI - 10
O
O
fosfoesoso O P O CH 2
O P O CH2 O CH2OH
isomerasi O H
O H
O H
H H HO OH
OH H
Mg++ HO OH
OH H
H OH
fruttoso-6-fosfato
glucoso-6-fosfato
O

CH 2 H2O Pi CH 2OH
O P O
O H O H
O H H
H H
OH H OH H
HO OH glucoso-6-fosfatasi HO OH

H OH H OH

glucoso-6-fosfato glucoso
GLUCONEOGENESI - 12
GLUCONEOGENESI - 13
2 ATP + 2 CO2
pir. carb.
Bilancio energetico: piruvato 2 ADP + 2 Pi

ossalacetato
PEPCK
fosfoenolpiruvato 2 GTP
2 GDP +
2 CO2

2-fosfoglicerato

3-fosfoglicerato
2 ATP 2 ATP

2 ADP 2 ADP
1,3-bisfosfoglicerato
2 NADH + 2 H+ 2 NADH + 2 H+

2 NAD+ + 2 Pi 2 NAD+ + 2 Pi
gliceraldeide-3-fosfato
GLUCONEOGENESI - 14

gliceraldeide-3-fosfato

diidrossiacetonefosfato

fruttoso-1,6-bisfosfato
ADP H2O
FBPasi
ATP Pi
fruttoso-6-fosfato

G6Pasi

glucoso-6-fosfato H2O
Pi Pi
ADP glucoso-6- glucoso
fosfato
ATP GLUT7
reticolo
glucoso
endoplasmatico
glucoso
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 1
glucoso
ATP Pi
HK G6Pasi
ADP H2O
glucoso-6-fosfato

ATP, citrato, H+ AMP


fruttoso-6-fosfato Fru-2,6BP
ATP Pi
PFK-1 FBPasi
ADP H2O
citrato
AMP, ADP fruttoso-1,6-bisfosfato
Fru-2,6BP
diidrossiacetonefosfato

gliceraldeide-3-fosfato
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 2
gliceraldeide-3-fosfato
GK, PFK-1, PK
NAD+ + Pi NAD+ + P i
insulina
NADH + H+ NADH + H+
glucagone
1,3-bisfosfoglicerato
ADP Pi

ATP H2O pir. carb., PEPCK


FBPasi, G6Pasi
3-fosfoglicerato
insulina
glucagone
2-fosfoglicerato

ATP, Ala, citrato GDP +


CO2 PEPCK
acetilCoA, acidi grassi
fosfoenolpiruvato GTP
ADP ADP
PK ossalacetato
ATP
piruvato ADP + Pi
AMP
pir. carb. acetil-CoA
Fru-1,6BP ATP + CO2
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 3
glicemia a digiuno

1,4

1,2

1,0
glucocinasi
V
(U/mg) 0,8 (Km = 10 mM)
(Vmax = 1,5 U/mg)
0,6

0,4 esocinasi
(Km = 0,1 mM)
0,2 (Vmax = 0,1 U/mg)

4 8 12 16 20 24 28 32
glucoso (mM)
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 3b
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 4

adenilato cinasi
(miocinasi)
2 ADP AMP + ATP

O P O CH2 O CH2OH
O
O
H H HO O P O

O
OH H

fruttoso-2,6-bisfosfato
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 5

domain regolatore

3HN domain cinasi (PFK-2) domain fosfatasi (FBPasi-2) COO


1 32 250 470

PFK2/FBPase2 homodimer PDB


2BIF

PFK-2
domain

FBPase-2
domain
with bound
fructose-6-P
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI – 6

PFK-2 / FBPasi-2

Ser
fosfoproteina proteina
fruttoso 6-fosfato fosfatasi-1 cinasi A fruttoso 2,6-bisfosfato

Ser-P
PFK-2 / FBPasi-2
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 7
glucagone

EPATOCITA
AC
PKA
R G (inattiva)

Fru-6P R R
ATP cAMP + PPi
ATP C C
PFK-2 OH
ADP
ATP
Fru-2,6BP C
ADP R R
C
H2O PKA
FBPasi-2 P (attiva)
Pi insulina
H2O
Fru-6P PP-1
Pi

PFK-2 OH
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 9

PK poco attiva

H 2O Ser-P ADP
fosfoproteina proteina
fosfatasi-1 cinasi A
Pi ATP
Ser
PK attivata
fosfoenolpiruvato + ADP piruvato + ATP
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 10
energia ciclo dell'acido
citrico

acetil-CoA

pir. DH
CO2

piruvato
CO2
pir. carb.

ossalacetato

glucoso gluconeogenesi
REGOLAZIONE GLICOLISI/GLUCONEOGENESI - 11
insulina
glucagone

AC
R G

ATP cAMP

CREB OH
ATP
PKA
(inattiva) ADP
PKA IREB?
(attiva) CREB P

gene PEPCK CRE IRE?

CRE = cAMP response element


CREB = cAMP response element binding protein
IRE = insulin response element
IREB = insulin response element binding protein
CICLI FUTILI - 1

fruttoso-1,6-bisfosfato
ADP H2O
PFK-1 FBPasi
ATP Pi
fruttoso-6-fosfato

ATP H2O

ADP Pi
TOSSICITA’ DELL’ETANOLO - 1

NAD+ NADH + H+ NAD+ NADH + H+

CH3CH2OH CH3CHO CH3COOH


alcol DH aldeide DH
etanolo acetaldeide acetato

NAD+ NADH + H+

lattato piruvato
malato ossalacetato glicemia
glicerolo-3-P diidrossiacetonefosfato
TGemia
NEFA acetil-CoA
CICLO DI CORI - 1

glucoso
6 ADP

6 ATP
2 lattato
gluconeogenesi

glucoso
lattato
fegato
sangue

2 lattato
muscolo
glicolisi glucoso

2 ATP
2 ADP
CICLO GLUCOSO-ALANINA - 1

6 ATP 6 ADP
2 piruvato
glucoso

2 -NH2
4 ATP 2 alanina
4 ADP
glucoso
fegato alanina

urea sangue

muscolo glucoso
2 ADP
2 -NH2 2 ATP
2 alanina 2 piruvato