IBRIDAZIONE

IBRIDAZIONE
DNA
DNA // DNA
DNA
 DENATURAZIONE
DENATURAZIONE
AL
AL CALORE
CALORE

DNA
DNA aa doppia
doppia
elica
elica DNA
DNA aa singola
singola
elica
elica
 DNA A SINGOLO
FILAMENTO

ASSORBANZA A 260 nm
1,2

1,1

DNA
1,0
DENATURATO Tm =92,6 °C
0,9
DNA A
DOPPIA ELICA
0,8
80 85 90 95 100
TEMPERATURA

DNA
DNA LENTO
LENTO DNA
DNA
denaturato RAFFREDDAMENTO
RAFFREDDAMENTO rinaturato
denaturato rinaturato
IBRIDAZIONE
IBRIDAZIONE SU
SU FILTRO
FILTRO
1_LISI E
RILASCIO
DNA,
DNA FISSAZIONE

TRASFERITO SU FILTRO

MICRORGANISMO
COLTIVATO

2_DENATURAZIONE

4_AGGIUNTA SONDA
6_LAVAGGIO MARCATA

3_PREIBRIDAZIONE
5_IBRIDAZIONE
 DOT
DOT BLOT
BLOT

Applicazione di DNA Denaturazione

su filtro del DNA

Ibridazione e
lavaggi

Rivelazione
 DNA
IBRIDAZIONE
IBRIDAZIONE SOUTHERN
SOUTHERN
DIGESTIONE CON ENZIMI
DI RESTRIZIONE

Frammenti di
Bande di DNA Tampone restrizione
Gel ELETTROFORESI SU GEL DI
AGAROSIO
Filtro
Gel con i frammenti di
Materiale FLUSSO DEL
TAMPONE restrizione separati in
assorbente
base alle dimensioni

FLUSSO DI TAMPONE Gel

CHE TRASFERISCE IL
DNA SUL FILTRO DI Filtro
NITROCELLULOSA

IBRIDAZIONE CON SONDE

DI DNA MARCATO E
AUTORADIOGRAFIA Filtro di
Autoradiografia nitrocellulosa con i
che mostra il frammenti di DNA
DNA ibridato disposti come sul gel
DNA
DNA denaturato
denaturato DNA denaturato
DNA denaturato

Trasferimento
Trasferimento su
su Trasferimento su
Trasferimento su
FILTRO
FILTRO DI
DI NITROCELLULOSA
NITROCELLULOSA FILTRO DI
FILTRO DI NITROCELLULOSA
NITROCELLULOSA

Aggiunta
Aggiunta della
della Aggiunta della
Aggiunta della
SONDA
SONDA MARCATA:
MARCATA: SONDA MARCATA:
SONDA MARCATA:
DNA
DNA AA SINGOLO
SINGOLO FILAMENTO
FILAMENTO RNA
RNA

Lavaggio
Lavaggio Lavaggio
Lavaggio

Rivelazione
Rivelazione Rivelazione
Rivelazione