METODI STRUMENTALI IN

CHIMICA ANALITICA

Spettrometria di massa e tecniche ifenate con la spettrometria di

massa
Prof. Ilaria Palchetti,
moodle ID: metodi2021 2
 Indice

La spettrometria di massa (MS)

Sviluppo storico della strumentazione in MS
Strumentazione analitica in MS: sorgenti ioniche ed
analizzatori di massa
Spettrometria di massa Tandem
Database analitici e library
Tecniche infenate con MS per l’analisi di miscele
complesse
 MS
Metodi di Accoppiamento (hyphenated)

L’analisi di miscele complesse generalmente richiede l’accoppiamento tra le tecniche separative

e la spettrometria di massa.

 




   
 









A prescindere dal tipo di tecnica separativa, l’accoppiamento aggiunge sempre una

dimensione addizionale alla misura analitica.

4
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Metodi di Accoppiamento (hyphenated) 


 


  

La cromatografia separa i componenti di una   
   
miscela a seconda dei loro tempi di
 
ritenzione, per esempio dal punto nel tempo



i n c u i fl u i s c o n o d a u n a c o l o n n a


  



c r o m a t o g r a fi a . Q u a l s i a s i r i v e l a t o r e 





c r o m a t o g r a fi c o p r o d u c e u n g r a fi c o


 
(cromatogramma) che rappresenta il flusso di

composti che eluisce da una colonna 
cromatografica.


L’uso della spettrometria di massa offre una
terza dimensione di informazione, per 

esempio gli spettri di massa associati a




qualsiasi componente eluito.
Il cromatogramma prodotto dallo
spettrometro di massa è composto da
un’ampia serie di spettri di massa acquisiti in
sequenza. Poiché i cromatogrammi di massa
rappresentano l’abbondanza ionica in
funzione del tempo di ritenzione, questi sono
c h i a m a t i c ro m a t o g r a m m i i o n i c i ( i o n
chromatograms).
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021


Le tre dimensioni della cromatografia-spettrometria
di massa: tempo di ritenzione, intensità, e valore m/z.
Ogni composto che eluisce dalla colonna
cromatografica è caratterizzato dal suo spettro di
massa.
La somma delle intensità dei picchi di uno spettro di
massa a ogni valore di tempo di ritenzione è usato
per costruire il cromatogramma ionico.
Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer
5
 MS
Quando accoppiato ad un
cromatogramma, ogni parte dello
spettro di massa è indicato con un
nome diverso.

Uno spettro contiene tutti i punti per un

singolo valore di tempo di ritenzione RT.

La somma dei segnali di tutti gli spettri è

chiamata spettro ionico totale (TIS).

Il grafico dei segnali in uno specifico

intervallo m/z in funzione di RT è
chiamata cromatogramma ionico
estratto (EIC, XIC, RIC).

Mentre il cromatogramma ionico totale

(TIC) è la somma di tutti i segnali a tutti i
valori m/z di ciascuno spettro, il
cromatogramma del picco base (BPC) è
l'insieme contenente il segnale più EIC

intenso per ogni RT in tutti gli spettri.

Si può ricavare il cromatogramma

(traccia isotopica) prodotto da un
singolo ione di un singolo analita in un
particolare stato di carica (Isotope
Trace), ma anche i diversi segnali
prodotti da un singolo analita in un
particolare stato di carica (Isotopic
Envelope Trace).
Smith et al. BMC Bioinformatics 2014, 15(Suppl 7):S9

6
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Altre denominazione per i diversi tipi di cromatogrammi ionici

Acronimo Nome completo Spiegazione

• Cromatogramma degli ioni totali

Somma delle abbondanze ioniche o
• Cromatogramma della corrente
TIC delle intensità per spettro contro il
ionica totale
TICC tempo di ritenzione. In pratica sono
• Cromatogramma ricostituito degli
RTIC interscambiabili. E’ raccomandabile
ioni totali
RTICC l’uso del TIC invece delle altre forme più
• Cromatogramma ricostituito della
complicate.
corrente ionica totale

RIC • Cromatogramma ionico ricostruito Intensità di un segnale per dato valore

EIC • Cromatogramma ionico estratto m/z contro il tempo di ritenzione. In
(XIC) • Cromatogramma ionico estratto pratica sono interscambiabili.

Intensità di ogni picco base per

• Cromatogramma del picco base
BPC ciascuno spettro tracciato contro il
tempo di ritenzione

7
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS

L’ascissa del grafico TIC o RIC

può essere tracciata in scala di
tempo, per esempio in unità di
secondi o minuti, oppure con i
numeri di scansione. I numeri di
scansione sono utili durante il
processamento dei dati, mentre la
scala dei tempi è più adatta per
fare paragoni con altri dati di
cromatografia-MS.

Esempi di TIC e RIC individuati a

specifici m/z, ossia m/z= 167,
181, 333, e 403, ottenuti dalla
corsa GC-EC-MS di un campione
di plasma addizionato con 4-
idrossinon-2-enale (prodotto della
perossidazione lipidica). Sono
riportati i numeri di scansione.

Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

8
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Spettri di massa di alta qualità adatti
all’interpretazione o alla ricerca in
banche dati sono ottenuti solo facendo
la somma/media degli spettri e
sottraendo il rumore di fondo. In
modo particolare per i componenti a
bassa concentrazione, il valore del
rumore di fondo non deve essere
sovrastimato.

Esempi di estrazione degli spettri del

picco cromatografico numero 50 nel TIC
di un campione di plasma addizionato di
4-HNE. Nella colonna di sinistra è
riportato lo spettro di massa singolo
dalle scansioni numero 935, 936 e 937
mostra cambiamenti nelle intensità
relative; la media tra le scansioni
935-937 livella le intensità, ma lascia il
disturbo dovuto al rumore di fondo; la

sottrazione del rumore di fondo riduce il
disturbo.
Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

9
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS

Monitoraggio di ioni selezionati




Se la quantificazione è lo scopo 

principale dell’analisi, si usa
generalmente il selected ion

monitoring (SIM). In modalità SIM,
l’analizzatore funziona in modo da
acquisire alternativamente solo la massa
ionica di interesse. Quindi, l’analizzatore 

salta da un valore all’altro di m/z.



L’informazione ottenuta da una traccia
SIM è equivalente a quella ottenuta da

































 

un RIC, ma non vi sono spettri acquisiti
in SIM.
Il tempo di scansione speso per acquisire intervalli di
valori m/z che risultano diagnosticamente inutili o che
sono rumore di fondo tra un picco e l’altro, viene ridotto a
zero, mentre il tempo di rilevamento dello ione di
interesse cresce di un fattore da 10 a 100.

Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

10
1 0
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Monitoraggio di reazioni selezionate:  
SRM Single reaction monitoring

 



MRM Multiple reaction monitoring 

 
La spettrometria di massa Tandem 
aggiunge una quarta dimensione agli  


e s p e r i m e n t i d i c r o m a t o g r a fi a -


  



spettrometria di massa, in quanto


permette di acquisire selettivamente uno




spettro, rivelando la frammentazione di


u n o s p e c i fi c o i o n e g e n e r a t o d a l  

composto di interesse. L’approccio
dell’analisi in Selected Reaction
Monitoring (SRM) richiede che prima 
dell’analisi in SRM si produca uno 
schema di frammentazione delle 
sostanze in esame. Se due o più
frammentazioni di ioni vengono 

 

monitorate in un singolo ciclo,
l’esperimento prende il nome di Multiple



Reaction Monitoring (MRM).
Rappresentazione della quarta dimensione introdotta dalla
cromatografia-MS tandem.
Strumenti a triplo quadruplo sono da Il composto 3 è stato scelto per mostrare l’effetto della
preferire sia per esperimenti SRM che misurazione della frammentazione selezionata di un precursore,
per esperimenti MRM, poiché combinano 3a, definito dal suo valore m/z. Se lo strumento è dettato in
facili operazioni di massa e passaggi modo da individuare un solo ione frammentato caratteristico, 3
veloci tra diversi valori di m/z con alto b, si chiama selected reaction monitoring (SRM).
intervallo dinamico lineare. Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

11
11
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Modi di operazione discontinui

Acronimo Nome completo Spiegazione

SIM • Single Ion Monitoring In pratica usati indifferentemente, è

MIM • Multiple Ion Monitoring raccomandato il termine SIM
• Single Ion Monitoring in alta Per eliminare le inter ferenze
HR-SIM
risoluzione isobariche
• Single Reaction Monitoring SIM in modalità spettrometria di
SRM
massa tandem
MRM • Multiple Reaction Monitoring Più di una reazione per ciclo

12
1 2
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Quantificazione 1
Quantificazione Quantificazione con standard esterno

Ciascun metodo di ionizzazione mostra

un’efficienza di ionizzazione che è
dipendente dal composto. Il processo di
ionizzazione usato per far passare gli ioni
all’analizzatore è molto importante per
stabilire se uno specifico composto viene
preferito o soppresso rispetto a un altro.
Quindi per una corretta quantificazione è
necessario effettuare un’accurata
calibrazione.

Per l’analisi qualitativa sono perfette le

intensità relative del segnale, per la
quantificazione sono da preferire alcuni mezzi
per misurare le intensità assolute.


La quantificazione con standard
esterno è ottenuta realizzando una
curva di calibrazione, tracciando le
intensità misurate rispetto alla
concentrazione del composto.
Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

13
1 3
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS

Quantificazione 2 Quantificazione 3

Quantificazione con standard interno Quantificazione per diluizione isotopica

Un caso speciale di standardizzazione

Per l’uso dello standard interno, al
interna, la diluizione isotopica, prevede
campione viene aggiunto un composto a
l’impiego di isotopologhi, che
concentrazione nota che abbia simile
differiscono in massa dai composti di
efficienza di ionizzazione, per esempio
interesse non marcati. Gli isotopologhi
un isomero o omologo che eluisce a un
sono aggiunti alla miscela ad una
tempo di ritenzione vicino al campione.

concentrazione nota.

Con questi composti la ionizzazione è

virtualmente identica.

Dato l’esteso uso della diluizione isotopica

sono disponibili in commercio standard
marcati con deuterio o 13C.

14
1 4
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Valori di intensità assoluta

Diluizione isotopica

Esempio di RIC E TIC di una

quantificazione per diluizione
isotopica con standard
trideuterati di un farmaco [M+H]+
a m/z 190, e del suo metabolita
[M’+H]+ a m/z 204.
Analisi eseguita per LC-ESI-MS.

Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

15
1 5
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS

Diluizione isotopica

Esempio di tempi di ritenzione

diversi tra isotopologhi.
Normalmente la differenza è
minore della larghezza del picco
cromatografico corrispondente,
ma può essere largo a sufficienza
da richiedere la sua integrazione
i n u n a fi n e s t r a t e m p o r a l e
separata.

Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

16
1 6
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
GC-MS

La moderna GC impiega colonne capillari per

le varie applicazioni analitiche. In questo caso
il flusso di gas eluente dalla colonna è
sufficientemente piccolo (pochi mL/min) da
consentire il suo ingresso diretto nella
sorgente di ionizzazione.

Una moderna interfaccia GC-MS consiste

fondamentalmente di una linea di vetro
riscaldata (capillare) che copre la distanza
(circa 30 cm) tra il fornetto GC e la sorgente
ionica.

Oltre ai quadrupoli in GC-MS vengono

impiegati analizzatori a trappola ionica o Rappresentazione schematica di un tipico sistema
ToF.
capillare GC/MS. L’effluente da GC viene fatto passare
I sistemi ToF consentono la registrazione di nell’entrata dello spettrometro di massa dove le
spettri di massa in tempi rapidissimi.
molecole del gas vengono ionizzate, rfammentate,
analizzate e rivelate.
Se fossero usate colonne impaccate La linea di trasferimento è di solito un tubo capillare
sarebbero necessarie idonee interfacce.
riscaldato a temperature paragonabili a quelle del
forno gas-cromatografico, in modo da evitare la
ricondensazione degli analiti prima dell’ingresso nello
spettrometro.

17
1 7
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
GC-MS

18
1 8
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021

Modalità di analisi in GC-MS
A differenza degli altri rivelatori per GC
lo spettrometro di massa non fornisce
direttamente un responso (ad es.
dell’intensità di corrente in un FID) al
passaggio di un analita.
corsa cromatografica.
Analisi qualitativa in GC-MS
Durante l’eluizione cromatografica esso
acquisisce continuamente, con
un’opportuna frequenza, spettri di
massa, che vengono conservati nel
computer che gestisce lo strumento.
massa conservati in opportune banche dati consente molto
Il cromatogramma GC-MS viene
ricostruito mediante un’elaborazione di
tali spettri, che può avvenire secondo
MS
GC-MS
Total Ion Current (TIC)
Si acquisisce uno spettro di massa su ampio intervallo di rapporto
m/z (di solito da 50 a 2000) del gas effluente dalla colonna
cromatografica. Il computer somma le intensità dei picchi presenti
nello spettro di massa ottenuto ad un certo tempo durante la
L’ottenimento di spettri di massa sottesi ai picchi via via eluiti nel
cromatogramma consente di avviare ricerche in banca dati per
risalire all’identità dei composti corrispondenti. ll confronto, in
modalità automatizzata, con le centinaia di migliaia di spettri di
spesso di identificare direttamente un composto incognito

TIC o EIC.

Oppure può essere acquisito in

modalità SIM.

19
1 9
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Selective Ion Monitoring (SIM)
Quando si è interessati alla ricerca di un particolare analita (o di un loro ristretto numero)
all’interno di una miscela sottoposta a separazione GC- MS è possibile impostare
l’acquisizione MS soltanto in un ristretto intervallo di rapporti m/z (di solito 10 unità al
massimo), contenente quello dell’analita d’interesse, realizzando così un cromatogramma
di tipo SIM.

Il cromatogramma GC-MS SIM verrà dunque costruito dal computer riportando in

ordinata solo l’intensità degli ioni presenti nel piccolo intervallo di rapporti m/z esplorato.

La modalità SIM è utile soprattutto quando si vuole cercare un particolare analita

all’interno di miscele complesse, che in modalità TIC forniscono solitamente decine (o
anche centinaia) di picchi diversi.

Come abbiamo visto, poiché la scansione SIM è molto più breve di quella TIC è possibile
ricostruire un picco cromatografico con molti più punti rispetto al caso della TIC, dunque
in modo più fedele.

E’ possibile costruire un cromatogramma simile ad un tracciato SIM anche a partire da

un’acquisizione TIC, imponendo al computer di estrarre dagli spettri MS totali soltanto
l’intensità relativa allo ione con il rapporto m/z desiderato.

Il tracciato ottenuto viene definito EIC o XIC o RIC.

20
2 0
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS

Un analizzatore a trappola ionica

quadrupolare consente che i
frammenti originatisi dal processo
di ionizzazione siano di nuovo
esposti alle molecole di gas ad
alta energia, causando una
frammentazione secondaria dalla
dissociazione indotta dalla
collisione (CID).La modalità
operativa è chiamata
monitoraggio selettivo di reazione
(“Selected Reaction Monitoring,
SRM”) ed è disponibile in alcuni
strumenti GC-MS a trappola
ionica più recenti.

21
2 1
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
GC-MS
Gas Cromatografia - Spettrometria di massa

Standard GC-MS Portable GC-MS

Sorgente EI/CI

https://youtu.be/DB1FAnIXUrI
Nel modello in foto l’analizzatore è a
quadruplo https://youtu.be/kvC-LJ2vHcE
MS: radiofrequency toroidal
ion trap mass analyzer
22
2 2
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
LC-MS
LC (HPLC/UPLC) è adatta all’analisi di
analiti troppo poco volatili per essere
separati in gas-cromatografia mentre la
spettrometria di massa è applicabile
solo ad analiti volatili

I flussi di liquido tipicamente impiegati

in HPLC, se vaporizzati, corrispondono
a flussi di gas assolutamente non
gestibili dai sistemi da vuoto degli
spettrometri di massa.

Si è reso necessario sviluppare

interfacce in grado di trasferire in fase
gassosa (aerosol) la fase mobile HPLC e
gli analiti in essa disciolti e,
successivamente, trasferire parte di tale
fase gassosa, arricchita in analita,
all’interno dello spettrometro di massa.

Le più comuni interfacce sono le

sorgenti ioniche ESI, APCI, APPI,
MALDI.

23
2 3
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
LC-MS

Le modalità TIC e SIM descritte per la

t e c n i c a G C - M S p o s s o n o e s s e re
realizzate in modo del tutto analogo in
HPLC-MS.

Tuttavia, gli spettri HPLC-MS forniscono

generalmente un numero molto inferiore
di informazioni sulla struttura (e quindi
sull’identità) degli analiti, essendo la
frammentazione in sorgente (ESI o
APCI) pressoché assente.

Si accoppiano al cromatografo liquido

spettrometri di massa tandem (MS/MS)
nello spazio o nel tempo (MSn).

24
2 4
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
LC-MS-MS
MS/MS TIC

Si registra uno spettro MS in modalità

TIC, evidenziando i pesi molecolari degli
analiti eluiti sotto i vari picchi del
cromatogramma.

Si effettua una nuova corsa

cromatografica impostando l’isolamento
di uno degli ioni d’interesse (ad esempio
in trappola ionica) e la sua successiva
frammentazione: il cromatogramma viene
ricostruito dalla corrente ionica totale
relativa agli spettri MS/MS acquisiti.

L’informazione sui frammenti osservati

negli spettri MS/MS può consentire di fare
ipotesi sulla struttura dell’analita
d’interesse (esistono delle banche dati
anche per gli spettri ESI-MS/MS, sebbene
più limitate di quelle relative agli spettri EI-
MS).
Esempio: Impurezze in preparazioni farmaceutiche
Rivelazione tramite UV a serie di fotodiodi (PDA) ed ESI-
TOF possono essere combinate, frazionando l’eluente
dalla LC o se il PDA precede l’interfaccia ESI.
Il RIC (EIC) aiuta a differenziare un composto di
riferimento, in questo caso un impurezza incognita, dalle
altre e a identificare eventuali isomeri.
Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

25
2 5
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
LC-MS-MS
SRM (Selective Reaction Monitoring)

In questo caso si parte già dall’informazione sulla

f r a m m e n t a z i o n e d i u n p a r t i c o l a re i o n e .
L’acquisizione è di tipo MS/MS ma viene limitata
all’intervallo di rapporti m/z che contiene uno
specifico frammento di quello ione.

La modalità SRM può consentire anche di

visualizzare in modo separato specie isomeriche
parzialmente co-eluenti purché i corrispondenti
spettri MS/MS differiscano per almeno un
frammento.

SRM (e MRM) è preferibilmente eseguito su

strumenti a triplo quadruplo grazie allo loro facile
impostazione dell’esperimento e allo loro velocità
di cambio tra canali qualora sia previsto un
monitoraggio di reazioni multiple
umano (in questo caso il destrometorfano-
La CRM (Consecutive Reaction Monitoring) è una
modalità analoga all’SRM ma ottenuta con
un’acquisizione MS di tipo MSn, con n > 2, utile
quando la SRM non è sufficiente.
Paragone tra l’effetto del SRM e del SIM nella
rivelazione di un composto aggiunto a plasma
DEX). Il segnale corrispondente allo ione
[M+H]+ nella traccia SIM è appena rilevabile,
mentre il cromatogramma SRM ottenuto dalla
reazione [M+H]+ → [M-C8H15N]+ mostra un
background pulito e un rapporto segnale
rumore aumentato di più di 50 volte.
Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

26
2 6
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
LC-MS

Esempi di analisi di droghe illegali in acque reflue mediante LC-MS/MS e MRM. Gli esperimenti MRM sono
stati impostati per individuare ciascuna droga sulla base di una transizione caratteristica, basati sugli spettri
di frammentazione di ogni composto.
Riportati gli spettri a ioni positivi e negativi, rispettivamente.
Jürgen H. Gross, Mass Spectrometry A Textbook, Second Edition, Springer

27
2 7
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Mobilità Ionica- Spettrometria di massa (IM-MS)
La spettrometria a mobilità ionica rappresenta un
metodo efficace per separare ioni gassosi in un campo
elettrico in accordo con le loro dimensioni o meglio delle
loro sezioni d’urto.
La separazione per IMS è dovuta alla diversa velocità
dopo accelerazione dovuta ad un campo elettrico
costante, in un tubo a deriva in presenza di un gas
inerte controcorrente, tipicamente elio o azoto. La
velocità media VD di uno ione in deriva è regolata dal
numero di collisioni lievi nel percorso all’interno del
tubo di deriva. Tale numero di collisioni con specie
neutre è direttamente proporzionale alla forza del
campo elettrico, E, e alla costante K della mobilità
ionica (in cm2V-1 s-1).
v D = KE
Guida ionica ad anelli impilati ed effetto
dell’impulso in corrente continua dell'onda di
3q 2π ⎛ m + M ⎞ 1 trasporto attraverso una guida ionica ad anelli
dove K è descritta da: K= ⎜ ⎟
16N kT ⎝ mM ⎠ Ω impilati. Gli ioni di fronte all’impulso si muovono da
pila a pila propagandosi attraverso il dispositivo.
con q carica ionica, N numero correlato alla densità del Per stringere la distribuzione di energia termica è
gas tampone, k costante di Boltzman, T temperatura richiesto un gas tampone.
assoluta, m la massa del gas tampone e M la massa
degli ioni con sezione trasversale collisione Ω
28
2 8
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
Mobilità Ionica- Spettrometria di massa (IM-MS)

Strumentazione compatta e portatile Strumentazione ad alta risoluzione HR-MS

Intelli Start.
Analyte spray Lockmass spray

Ion source: STEP WAVE TRI WAVE

.
QUANTOF.

-corona discharge Stepwave ion guide Quadrupole

Trap
Ion mobility
speration
Transfer
High-field
pusher Ion
mirror
Ion detection
system

-63Ni b Helium cell

1 2 3 4 5

The device heats the samples forcing the resulting vapors Rotary pump Air-cooled turbomolecular pumps
6

into the device. In the sample chamber, the 63Ni

bombards the sample with beta emissions, ionizing it.
Dual-stage reflectron

Figure 5 Schematic of Waters Synapt G2-STM HDMS instrument. It features a Stepwave ion guide, a quadrupole, a Triwave
TWIMS, and a QuanTOF MS. (Image used with permission from Waters Corp.)
https://youtu.be/f1rhrDzSo9I Encyclopedia of Analytical Chemistry, Online © 2006–2013 John Wiley & Sons, Ltd.

29
2 9
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
MS IMAGING

L’imaging produce una matrice di spettri di

massa e a ogni pixel dell’immagine
corrisponde un ben determinato spettro di
massa.

Conceptual representation of the MALDI

MS imaging procedure on a tissue slice.
The tissue in the example contains two
defined areas, A (anterior) and P (posterior)
containing specific localized proteins A‘
and P‘, respectively. From the data array of
a raster of laser spots, each containing a
complete mass spectrum, selected ion
images can be created in which molecules Anal. Chem. 1997, 69, 23, 4751-4760
can be localized in the tissue.
30
3 0
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS

MS IMAGING

Imaging MS: principali sorgenti di ionizzazione

MALDI SIMS DESI
(Matrix assisted (Secondary Ion Emission (Desorption Electrospray
Desorption ionization) Spectrometry) Ionisation)

Low upper mass limit (around 12

Wide ion mass range Wide range of analytes
Kda)

Soft ionization technique Hard ionization method Soft ionization technique

High sensitivity and spatial Higher spatial resolution (spot Lower spatial resolution
resolution diameter > 1 μm) and lower sensitivity
Use of Matrix No Use of Matrix No Use of Matrix

High Vacuum technique High Vacuum technique Ambient conditions

31
3 1
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021
 MS
MS IMAGING






Rappresentazione del concetto

MALDI imaging. a) sezione di 


tessuto (cervello di topo); b)
campione dopo l’applicazione della
matrice mediante un robot capace di 



depositare volumi di soluzione

dell’ordine dei picolitri; c) serie 



parziale di spettri MALDI raccolti
lungo l’asse x del campione; d)   


rappresentazione ridimensionata dei
dati raccolti, dove ogni immagine
riporta i risultati ottenuti per un certo 
m/z.


.!452%-%4(/$3\6/,./\/#4/"%2\ 
 

32
3 2
Metodi Strumentali in Chimica Analitica, AA 2020-2021