Agenti DNA - Cleaving

Bleomicina A2
Indicazioni: Trattamento chemioterapico delle attività metaplastiche di alcuni
tessuti, fra i quali in particolare gli epiteli malpighiani ad alta cheratinizzazione
(melanoma del canale anale).

Dopo somministrazione endovenosa, intramuscolare, sottocutanea, la

bleomicina si concentra in misura elevata a livello cutaneo, polmonare,
renale, peritoneale e linfatico; è stato inoltre rilevato, in pazienti con
carcinoma del pene e della cervice uterina, che la concentrazione di
bleomicina è di molto maggiore nei tessuti neoplastici che nei tessuti sani
adiacenti. Bassa è, invece, la concentrazione di bleomicina nell'apparato
ematopoietico.

Studi clinici di farmacocinetica hanno evidenziato, dopo somministrazione

i.m., un t½ plasmatico di circa 2 ore e un'escrezione urinaria del 60/70% in 24
ore.

Tossicità: relativamente modesta soprattutto se si considera la sua attività

citostatica.
 Tumore ai testicoli

I tumori testicolari si dividono in due tipi: seminomi e non seminomi.

I primi sono circa la metà dei casi e consistono nella trasformazione

maligna delle cellule germinali, cioè di quelle che danno origine agli
spermatozoi; sono frequenti nella quarta decade di vita e si associano
spesso a una variante che coinvolge anche cellule non seminali (in questo
caso si parla di forme germinali miste).

Gli altri, i non seminomi, includono differenti forme, tra cui i carcinomi
embrionali, i coriocarcinomi, i teratomi e i tumori del sacco vitellino, quella
parte associata all'embrione che contiene materiale di riserva per il suo
nutrimento.

Il Protocollo BEP prevede una combinazione di bleomicina, etoposide e

cisplatino e si usa per il trattamento del tumore seminoma dei testicoli e
un raro tipo di cancro ovarico. La sopravvivenza è quasi del 100%.
Meccanismo d’azione della Bleomicina
Complessi con il rame e con il ferro
Proposed mechanisms for generation of 'activated bleomycin' in vivo.

Nella cellula, BLM-Cu++ si trasforma nel

complesso ternario BLM-Fe++-O2
che è la forma attiva

Bleomycin binds to Cu(II) tightly and the

ligands do not exchange. Intracellularly,
bleomycin–Cu(II) can be reduced to
bleomycin–Cu(I), which can react with O2
to initiate radical-mediated
transformations and DNA cleavage. In
addition, the ligands in the bleomycin–
Cu(I) complex are now able to exchange
and only this form can lose metal and bind
Fe(II). Therefore, for the 'activated
bleomycin' (bleomycin–Fe(III)–OOH) to be
generated, bleomycin–Cu(II) must be
reduced to bleomycin–Cu(I) intracellularly.
The Cu(I) must then dissociate from the
bleomycin and an Fe(II) must bind. Once
Fe(II) is bound, the chemistry to form the
activated bleomycin ensues .
 Attivazione intracellulare della BLEOMICINA
The activated bleomycin can be formed by bleomycin binding to Fe(II),
followed by oxygen binding and reduction by a reductant. This intermediate
(green box) has a half-life of several minutes at 4°C and is responsible for
initiating DNA damage.
 Both single-stranded
and double-stranded
DNA (dsDNA) cleavage
is initiated by the
activated bleomycin,
which, directly or
indirectly, removes the
4'-hydrogen atom from
C4' of the deoxyribose
moiety of a pyrimidine
3' to a guanine107

Base Propenal
La parte bitiazolica della BLM viene intercalata tra coppie di basi del DNA
La parte peptidica si dispone parallelamente all’asse del DNA
Il complesso BLM-Fe++-O2 dà origine a radicali HO. e HOO. in prossimità della
catena di desossiriboso-fosfato, determinando scissioni, preferibilmente tra
coppie G-C e A-T
Products of bleomycin-induced double-stranded DNA cleavage and a proposed model for
this process.
 Enediini
Esperamicine e Calicheamicine

Le Esperamicine e le Calichemicine sono composti enidiinici simili alla

neocarzinostatina. Posseggono un anello biciclico [7.3.1] e un trisolfuro allilico
legato mediante un ponte alla struttura 3-ene-1,5-diinica macrociclica
contenente un chetone α,β-insaturo. Un doppio legame è alla testa di ponte
del sistema biciclico.

Neocarzinostatina
Calicheamicine
 Calicheamicina γ1

The calicheamicins are a class of enediyne antibiotics derived from the bacterium
Micromonospora echinospora, with calicheamicin γ1 being the most notable. It was
isolated originally in the mid-1980s from the chalky soil, or "calichi pits", located in
Kerrville, Texas. The sample was collected by a scientist working for Lederle Labs.
It is extremely toxic to all cells and in the year 2000, a CD33 antigen-targeted
immunoconjugate N-acetyl dimethyl hydrazide calichiamicin was developed and marketed
as targeted therapy against the non-solid tumor cancer acute myeloid leukemia (AML).
Calicheamicin γ1 and the related enediyne esperamicin are the two of the most potent
antitumor agents known.
 Mechanism of Calicheamicin Triggering

S-S reduction

Michael
Addition

Bergman
Cyclization

Hydrogen
p-Phenylene Diradical Abstraction

Double-Strand DNA Breaks

 Enediyne - DNA complex

Calicheamicin-DNA binding Esperamicin DNA binding

Calicheamicins target DNA, causing strand scission. Calicheamicins bind with DNA in
the minor groove, where they then undergo a reaction analogous to the Bergman
cyclization, generating a diradical species. Like all enediynes, this diradical, 1,4-
didehydrobenzene, then abstracts hydrogen atoms from the deoxyribose (sugar)
backbone of DNA, which results in strand scission.
 Ozogamicine
Anticorpi monoclonali coniugati con calicheamicina

Gemtuzumab ozogamicin (marketed by Wyeth as Mylotarg) is a drug-linked

monoclonal antibody (an antibody-drug conjugate) that was used to treat acute
myelogenous leukemia from 2000-2010. It was withdrawn from market in June 2010
when a clinical trial showed the drug increased patient death and added no benefit
over conventional cancer therapies.

Inotuzumab ozogamicin (CMC-544) is an antibody-drug conjugate for the treatment

of cancers. It consists of the humanized monoclonal antibody inotuzumab (for CD22),
linked to a cytotoxic agent from the class of calicheamicins (which is reflected by
'ozogamicin' in the drug's name). This drug was developed by Wyeth. It is undergoing
numerous clinical trials, including two phase II trials for Non-Hodgkin lymphoma (NHL).
A phase III trial for NHL has been terminated due to 'poor enrollment'.
 Gemtuzumab ozogamicin
(Mylotarg)

• PESO MOLECOLARE:151-153 kDa

• GENTUZUMAB OZOGAMICINA è un agente chemioterapico composto da una IgG4
umana ricombinante coniugata con un antibiotico citotossico antitumorale, la
Calicheamicina (anticorpo della classe degli enediini che agisce determinando un
danneggiamento della doppia elica del DNA), isolata da fermentazione di
Micronosphora Echinospora calichensis. La porzione anticorpale del Mylotarg lega
in modo specifico l’antigene CD33, una glico proteina d’adesione acido sialico
dipendente, che si trova sulla superficie delle cellule tumorali e sulle normali
cellule immature della linea mielomonocitica, ma non sulle normali cellule
staminali ematopoietiche.

Il Mylotarg è stato ritirato dal mercato nel 2010

Mylotarg contiene sequenze di aminoacidi di cui il 98.3% di origine umana. La regione
costante e quelle di struttura contengono sequenze umane mentre le regioni
complementari derivano da un anticorpo murino che lega CD33. L’anticorpo è legato
all’N-acetyl-gamma calicheamicina con un legame bifunzionale.
 Inotuzumab ozogamicin
(CMC-544, anti-CD22 + calicheamicin, Pfizer/Wyeth + UCB S.A.)

BESPONSA® (Inotuzumab Ozogamicin) è stato approvato dall'Unione Europea per il trattamento di

pazienti adulti con leucemia linfoblastica acuta (LLA) da precursori delle cellule B recidivante o
refrattaria negativa per il cromosoma Philadelphia (Ph-) e positiva per il cromosoma Philadelphia
(Ph+).
Inotuzumab ozogamicin è
un anticorpo-farmaco
coniugato (ADC) costituito
da un anticorpo
monoclonale (mAb) diretto
verso il CD22, un antigene
presente sulle cellule
cancerose di quasi tutti i
pazienti con LLA da
precursori delle cellule B,
collegato ad un agente
citotossico8. Quando
inotuzumab ozogamicin si
lega all'antigene CD22 sulle
cellule B, viene
internalizzato nella cellula,
dove l'agente citotossico, la
calicheamicina, viene
rilasciato per distruggere la
cellula maligna9.
Inotuzumab Ozogamicin
nasce dalla collaborazione
tra Pfizer e Celltech.
 Trastuzumab emtansine
(T-DM1, anti-HER2 + DM1)

Il trastuzumab è chimicamente legato con la mertansine (DM1) (una citotossina).

E’ in fase clinica per il trattamento del tumore della mammella, specialmente in
pazienti HER2 positivi.
Mertansine is a tubulin inhibitor, meaning that it inhibits the assembly of
microtubules by binding to tubulin (at the rhizoxin binding site)
 Brentuximab vedotin
(SGN-35, anti-CD30 + auristatin, Seattle Genetics + Millennium/Takeda)

Brentuximab vedotin is investigated in relapsed and refractory Hodgkin’s lymphoma

(phase II/III) . This ADC is a chimeric IgG1 conjugated, on an average of 3 to 5 cysteinyl
residues and after mild reduction of interchain disulfide bonds, to monomethyl
auristatin E (MMAE), via a maleimidecaproyl-valyl-citrullinyl-p-aminobenzylcarbamate
linker. Upon internalization, cellular proteases cleave the bond and MMAE is released as
a chemically unmodified active drug .
 Structure of a MMAE-MAB-conjugate (brentuximab vedotin).

The linker, consisting of the amino acids valine (Val) and citrulline (Cit), is
cleaved by cathepsin inside tumour cell.

Monomethyl auristatin E is an antimitotic agent which inhibits cell division by

blocking the polymerisation of tubulin. The drug derived from peptides
occurring in marine shell-less mollusc Dolabella auricularia called dolastatins
which show potent activity in preclinical studies, both in vitro and in vivo,
against a range of lymphomas, leukemia and solid tumors.
MMAE has been tested with various monoclonal antibodies.

Targeting the protein CD30 which is found on malignant cells in anaplastic large
cell lymphoma and Hodgkin's lymphoma:

Brentuximab (cAC10): 3–5 units of MMAE per molecule targeting the

glycoprotein GPNMB which is found in aggressive melanoma, glioma, breast
cancer and other tumours:

Glembatumumab (CR011, CDX-011): investigated for the treatment of

breast cancer and melanoma