08/05 Genetica

Nasce bambina con fibrosi cistica con metilazione delta F 508a solo la madre era portatrice, il
padre invece era wt. Com'era possibile che questa bambina con cariotipo normale aveva CF? La
bambina aveva entrambi i chr 7 di origine materna, aveva cariotipo di 46 chr, e non aveva nulla di
origine paterna. Allora confermano la isoisomia i due chr erano uguali tra loro e uguale a uno
della madre. Si ipotizza che lo zigote aveva solo un chr materno, il padre aveva uno spermatozoo
senza chr7  ed era destinato ad abortire, ma ha riduplicato il proprio chr7 e quindi c’era omozigosi
totale del chr. Quindi si è svelato lo stato di portatore che è diventato in doppia dose nel figlio
malattia.

Quando si verifica una isodisomia (chr da uno dei genitori uguali) si possono manifestare degli
alleli recessivi e quindi manifestarsi le malattie recessive. E questo può succedere per tutti i chr.
Negli anni successivi si sono mappate delle malattie molto rare questo ha permesso di
conoscere i chr dove si potevano manifestare malattie recessive rare. La isodisomia é rara nelle
disomie uni parentali ma la cosa più incidente nel fenotipo è quando il chr coinvolto nella disomia
uniparentale (sia isodisomia  sia eterodisomia) si trova in geni di un certo tipo

La sindrome di silver russel ha due regioni in cui alterazioni causano il fenotipo: chr 11,7 quindi la
bambina aveva sia la CF sia fenotipo di silver russel. Esiste un meccanismo x cui una mal
segregazione dei chr é un salvataggio  di una anomalia che può sistemare le cose ma a volte con
effetti patogenetici. Malattie da difetti dell’imprinting: sono poche.  E riguardano pochi chr:
15,11,14,7,6,20. Solo sei chr coinvolti. Ci possono essere alterazioni genetiche o epigenetiche
diverse: anche un difetto di metilazione per esempio.

La distribuzione dell’embrione dl mosaicismo può essere diversa: presenza di linee cellulari

geneticamente distinte per esempio nei confronti del cariotipo possono essere in diverse
posizione.

 Tre casi: 

1Nella placenta ci sono alterazioni come trisomie non presenti nel feto, magari la trisomia si è
generata durante le mitosi nella placenta perchè la placenta replica molto velocemente proprio per
fornire nutrimento all’embrione, quindi nella placenta sono più permesse le trisomie. Quando si fa
diagnosi prenatale  e si studiano i villi o le cellule che vanno in apoptosi dei villi, si possono
verificare condizioni che non sono le stesse che ci sono nel feto. 

Se c’è trisomia nella placenta e non nel feto: 2 motivi: o lo zigote era trisomico e poi ha perso il chr
e ha generato una linea disomica e un altra linea resta trisomica che rimane in placenta perchè
viene selezionata negativamente nel feto. Oppure lo zigote era disomico e poi si e generata una
cellula trisomica in placenta che è andata avanti. Mosaicismo in placenta

2 mosaicismo che si trova ovunque in placenta e in feto.

3condizione rara placenta normale feto trisomico.

Quando si fa l’esame e si vede trisomia in placenta allora si fa esame di liquido amniotico per
vedere se il cariotpio è normale allora potrebbe essere disomia uniparentale.

Come si forma UPD?  La madre puà produrre ovociti con due chr e uno dei due viene perso, se
viene perso l’unico del padre si forma upd materna. Altra meccanismo: uno dei due genitori può
dare gamete nullisomico quindi lo zigote monosomico abortisce oppure prima di entrare nella
prima mitosi riduplica il chr presente duplicazione somatica che è una sorta di rescue della
monosomia. Oppure c’è complementazione gametica: un gamete con un chr in più e l’altro senza
chr. 
Come vedere se c’è difetto di derivazione parentale dei chr? Uso di microsatelliti facendo test
semplicise c’è micro satellite con numero di ripetizione diverso nei chr allora sono riconoscibili.
Sono presenti in tutti i chr.

Ci sono situazioni cromosomiche in cui oltre alla trisomia  si possono verificare condizioni per cui si
ha una
propenzione
ad avere una
disomia
uniparentale.
Ci sono
condizioni chr
nel portatore
che
favoriscono il
rischio di upd.
Una di queste
é quando un
genitore è
portarore di
robertsoniana
(traslocazione
nei

chr13,14,15,ecc) per esempio se abbiamo traslocazione tra 14 e 21 si ha problema in 14 e in 21.

Si avranno tre 14 poi problemi fenotipici quindi se si verifica il trisomic rescue e quindi si perde
un chr 14 si può verificare una disomia uniparentale del 14. Quindi una traslocazione
robertsoniana de novo ereditata se i chr coinvolti nella traslocazione uno di questi ha geni soggetti
ad imprinting allora bisogna escludere una upd.

C'è una complicazione: ci può essere a livello post zigotico un

meccanismo per cui si generano disomie uniparentali segmentali:
disomia uniparentale che riguarda solo un pezzo di quel chr. Avviene
in modo post zigotico tramite meccanismo che si chiama: Il bacio
intercromatidico. I crossing over non avvengono in mitosi ma ci
possono essere errori: una upd interstiziale può avvenire quando si
rompono in due punti a livello di cellule che entrano in mitosi che
comporta poi una duplicazione di un frammento.

E’ in crossing over somatico che

non deve esserci perchè avviene
solo alla meiosi per ma che
succede se avviene un crossing
over nella cellula in mitosi?
Il crossing over avviene tra cromatidi non fratelli . Nel crossing over somatico risulta in due chr e si
formano ricombinanti. Quando poi i cromatidi vanno ai poli opposti si genera una cellula che ha un
cromatidio normale ma anche uno che ha ricombinato quindi c’è un pezzo di cromatidio uguale
all’altro.

Nella upd che genera la sindrome di Beckwith- Wiedemann può essere segmentale. Nell upd da
trisomic rescue hanno upd, qui sarà un mosaico.

Sono un eventi che

possono accadere ed è
responsabile della
sindrome di BWS che non
si vede con analisi
cromosomica ma si sono
scambiati pezzi di chr.
Diagnosi di questa sindrome:

C’è eterogeneità clinica dovuta a

- anomalie molecolari nel mosaico: Post-zigotic origin of the diseases or lack of correlation
between the percentage of the molecular anomaly in blood cells and the clinical severity

- Differenti alterazioni epigenetiche che possono essere associate al BWS e al SRS

Dunque la diagnosi si fa misurando la metilazione che varia dai bambini affetti anche per diverse
cause che la determinano.

In condizioni normali se andiamo a misurare CpG  l’allele paterno è tutto metilato mentre quello
materno è demetilato. Quando estraiamo il dna di persona senza sindrome, e andiamo a
misurate  la metilazone:  nella BWS ho due volte l’allele materno o ho un errore nell’allele materno
che diventa ipermetilato troverò una metilazione molto più alta. Nella genetica medica che va
accoppiata alla diagnosi dei pazienti è complesso il percorso che conduce ad una diagnosi.

Sottogruppi molecolari noti: Ipermetilazione DMR1(4%, Mutazione di CDKN1C(10%), UPS paterna

(20%), duplicazione paterna (1%), traslocazione/inversione materna (1%), Ipometilazione
DMR2(50%), fattori sconosciuti(14%).

Capire la causa molecolare: importante sapere se c’è rischio di ricorrenza nella famiglia,
associazione genotipo fenotipo (i bwt  hanno rischio alto di sviluppare tumore al rene se hanno
ipermetilazione di IC1). Se c’è ipometilazione di ic1 c’è difetto di chiusura della parete addominale.

Cdkn1cgene che contolla le cicline espresso solo nell’allele materno. Mutazione loss of function
di questo gene il bambino non ha questo gene funzionante perchè l’allele paterno è silenziato.

Se l'UPD comprende sia l’ic1 sia l’ic2: nell’ic1 il padre è metilato quindi avrò due alleli metilati.
BTW:

Per studiar la metilazione si

usa  il pirosequenziamento: è
un sequenziatore. Sequenzia
piccoli pezzi e li quantifica.

Quando si vuole studiare e

quantificare la metilazione si
tratta il dna con il bisolfito di
sodio, un sale che e in grado di
modificare le citosine che non
sono metilate, le citosine
metilate restano protette e
restano citosine, quelle non
metilate diventano uracile che
poi nei cicli di amplificaizone l
uracile viene incorporato come
timina.  Se trattiamo il dna con
questo sale, tutti i siti di citosine
demetilate le leggiamo come T.
Se in un punto dell
amplificaizone ho pezzo con
tutte citosine metilate non avrò T. Se ho mix di citosine metilate e non avrò alcuni C e T. Il
pirosequenziamento é in grado di svelare i
mosaicismi: in una stessa posizione vedrà delle C
o delle T. 

Quindi si usa bisolfito, trasforma la C non metilata

in uracile che è incorportata comd timina,  quindi
estrapolo che in quel punto la metilazione era pari
al tot%.  La luciferasi viene quantificata l’emissione
di luce come un picco e avviene ogni volta che
viene attaccato un nucleotide. Si usa anche pcr
che usa primer verso allele metilato e non, ma non
è quantitativo mentre il pirosequenziamento é
quantitativo.

Si ottiene elettroferogramma dove ogni picco

corrisponde alla posizione e non e mai
esattamente il 50% e poi si fa media aritmetica.
Ipermetilazione del 75%  BWS. Ipometilazione
con

sindrome di silver russel. Disomia uniparentale che coinvolge IC1 e IC2: ipermetilaizone IC1 e
ipometilazione IC2.
 [95o percentile
significa che
solo il 5% delle
persone é più
grande di lei.]
La caratteristica dei geni impronte è che solo un allele, o materno o paterno, è espresso nel tessuto
rilevante. L’effetto di questo meccanismo sul fenotipo clinico dipende da dove è avvenuto l’evento
mutazionale , se sull’omologo materno o paterno.

Prader willi e angelman PW è una sindrome dismorfica caratterizzata da ipotonia neonatale seguita da
obesità , alimentazione compulsiva, mani e piedi piccoli, bassa statura, ipogonadismo e disabilità
intellettiva. Risulta dall’assenza o dalla mancata espressione di no o più geni impronte espressi solo sul chr
paterno. Nella maggior parte dei casi è caratterizzato da una delezione nel braccio lungo del chr 15
costituito da geni espressi solo monoallelicamente , unicamente espressi o sulla copia materna o paterna
del chr 15.

Nella PW la delezione si verifica sul chr 15 ereditato dal padre. Pertanto i genomi di questi pazienti hanno
info genetica di quella deleizone che deriva solo dalla madre. PW può anche derivare da disomia uni
parentale vedi pag 85-86-87