16/05 Determinazione del sesso (da pag 87)

Determinazione del sesso: può esserci discrepanza tra sesso fenotipico, genotipico(XX,XY) e
gonadico(presenza di ovaie o testicoli). A volte le cose non vanno in maniera omogenea.

Ci possono essere situazioni patologiche. Chr sessualimolti difetti possono dipendere dai chr sessuali.

Il chr X é essenziale per la vita della cellula, una cellula senza di questo non vive. X
e un chr ricco di geni, e contiene anche molti geni house keeping. Y é un deserto
genico, ci sono geni che sono clusterizzati nella regione alta del braccio corto (p
terminale) e geni ripetuti nel braccio lungo. Y e ricco di eterocromatina. X- >1000
genes. Y- 330 genes, most inactive

Regioni Par1 e Par2: stanno sui telomeri del braccio corto del chr Y e X
contengono geni omologhi. X e Y non sono due chr completamente distinti tra loro
ma c’è regione di omologia tra i due par regione pseudoautosomiale.

Anche Par2 ha una parziale omologia ma par1 molto di più. Quando due chr alla
meiosi si affiancano, fanno crossing over e è possibile che succeda qualcosa.

Che forma hanno? Chr colorati con chinacrina-- il chr Y ha zona molto luminosa--
parte di eterocromatina molto compatta e quindi assorbe molto la mostarda di chinacrina che sotto la
fluorescenza emette la luminosità. X invece è caratterizzato da bandeggio.

La determinazione del sesso iniziale é la determinazione delle gonadi.

Lo sviluppo sessuale è diviso in due categorie: determinazione del sesso e differenziazione sessuale. La
determinazione del sesso nei mammiferi è geneticamente controllato e dipende dall’espressione, se un
embrione sviluppa le gonadi maschili o femminili, di alcuni geni durante lo sviluppo. La determinazione del
sesso é una decisione che l’embrione compie durante le fasi di sviluppo x decidere se la sua gonade
diventerà maschile o femminileinizialmente c’è struttura bipotente. In mammals, sex determination is
genetically controlled depending on a developmental time and gene expression.

Quindi per definire il sesso vediamo il sesso chr(come ha i chr), come è la sua gonade(istologicamente
che gonade ha) e il sesso fenotipico.

Tutto questo, l'azione dei geni, la determinazione a livello embrionale delle strutture riproduttive, dipende
da: azione dei geni, interazione tessuti nell’embrione, da interazione con altri embrioni in utero (chimera--
da due embrioni si sviluppa un unico individuo; la chimera é l ermafrodita. Se si genera tra embrione xy e
xx si può avere interazione tessuto maschile e femminile a livello gonadico. L’ermafroditismo si intende
anche della gonadeovo/ textismix di cellule xx e xy), interazione con ambiente materno(endocrine
disruptorshanno effetto dannoso nello sviluppo dell’embrione, mimano l’effetto degli ormoni e quindi
possono far sviluppare l’embrione in maniera anomala). Fetal alchol syndromealcol passa nella
plancenta ed è teratogeno.

Sex differentiation: In early embyo there are two internal duct systems: Wolffian and Mullerian. At 7 weeks,
developmental pathways activate different sets of genes. Cause undifferentiated gonads to develop as
testes or ovaries and determine the gonadal sex of embryo. Nella differenziazione sessuale si hanno due
strutture: il dotto Wolffian(male) e quello Mulleriano(female) sono precursori dei dotti deferenti nell’uomo
e nella donna delle tube , del terzo superiore della vagina e dell’utero.a 7 settimane di gestazione c’è mix di
strutture. Poi si attivano o meno pathway di differenziamento. Cosa accende lo sviluppo in un senso o in un
altro?

La determinazione del sesso secondaria é determinata da cambiamenti del fenotipo del feto aldilà delle
gonadi. Sesso gonadico si sviluppa per prima e poi sesso fenotipico.

Il sesso fenotipico paramesonefro(muller) e mesonefro(wollf)-- si sviluppa prima il wolfiano e poi il

mulleriano che si sviluppa con segnale trasmessi dal dotto wolfiano.
 La gonade bipotente in presenza
di SRY diventa testicolo, questo
manda segnali ormonali (sostanza
anti mulleriana che fa regredire la
struttura muller) e quella wolfiana
diventano i vasi deferenti. Se
questo non c’è allora avviene il
contrario. In assenza di SRY si va
verso l’ambito femminile.

Sindrome di Mayer Rokitansky

Küster Hauser di tipo 1: non hanno
lo sviluppo dei dotti mulleriani.
Sono fenotipicamente normali, non
hanno nessun segno strano, ma
non hanno il menarca. Quando
passa del tempo fanno ecografia e
emerge che non hanno l’utero.
Hanno vagina a fondo cieco con ovaie normali ma manca unione tra vagina e ovaio. Difetto di sviluppo. Le
figlie delle donne con roky tunsky sono normali.
Physiology of sex development in humans:
First / 2nd gestational week à human embryos of
the two sexes differ only for karyotypes. At week 3
specific genes lead to the differentiation of the
gonads that in turn produce hormones inducing
anatomical and psychological differences, leading
to behavioral differences that are ultimately
influenced by the social environment. At weeks 6–
7 the paramesonephric duct (Müllerian duct)
develops next to the mesonephric duct (Wolffian
duct). If testes develop (8th GW) and secrete
testosterone, the mesonephric duct differentiate
into epididymis, vas deferens, and prostate. The
Anti-Müllerian Hormone determines Müllerian duct
regression. If testes do not develop, the
mesonephric ducts degenerate, whereas the
paramesonephric duct proliferates and the
fallopian tube, uterus, and upper third of the
vagina develop.

Dalla decima settimana si sviluppano in senso

maschile o femminile a seconda se Y c’è o meno.
Quando le donne fanno ecografia se il feto e in una
certa posizione che favorisce la visione si vede già se è
maschio o femmina.

Esistono geni importanti per lo sviluppo iniziale della

gonade bipotenteSf1( recettore nucleare) gli altri
codificano per fattori di trascrizione. Delezioni in
omozigosi di uno di questi geni da degli effetti
nell’embrione di topo molto gravi sullo sviluppo della
cresta genitale della gonade bipotente. Esistono
sindromi umane correlate al malfunzionameno di questi
geni. Vedi tabella (loss of function). Nell’uomo
mutazioni loss of function da delle sindromidenys
drash Wt1( master gene dello sviluppo dell’embrione
maschile ma anche del rene. Wt(wilms
tumor1)tumore che può insorgere nella prima
infanzia e colpisce il rene-- nefroblastoma. É un tumore
a cui sono soggetti i bambini con la bekwith widelman o
sindorme wagr(wilms t1, pax6, genital urinary defect, retardation) in cui è deleto sul chr11 wt1 e anche atri
geni. Se wt1 é perso da queste sindromi caratterizzate da danni renali, non sviluppano tumore ma hanno
danni renali importanti, i maschi hanno organi genitali che non sono completamente maschili.

SRY si
trova a 40kb da par1 appena sotto al braccio corto del chr X. Si trova nel
braccio p del chr Y e vicino a par1 ci sono poi una serie di geni , nel braccio
lungo invece (non ricombina) ci sono fattori AZF-- sono geni duplicati che
riguardano la maturazione degli spermatozoi. Azf scoperto che in alcuni
casi, in alcuni uomini con azospermia totale (liquido seminale senza
spermatozoi o con pochissimi) ci sono regioni azf a b e c. Analisi con
amplificaizone pcr delle regioni e sottoregioni e una volta amplificate si fanno
correre su gel di agarosio. Nell’individuo azospermico mancano delle bande e
si riferiscono alla regione AZF B. Il 5% degli azospermici ha questa cosa. Con
tecniche di fecondazione assistita anche loro possono riprodursi perchè si
repcuperano i pochi spermatozoi e si iniettano direttamente nellgli ovociti con
la IXI. E così si sviluppa l’embrione. Ma se si è iniettato lo spermatozoo con Y
il figlio avrà delezione come il padre. Si possono prelevare singoli spermi
anche da biopsie di testicolo stesso e questi rari spermatozoi sono iniettati
nell’ovocita, si forma l embrione che viene trasferito nell’utero materno. Tutte
le delezioni Y erano
de novo é stato un
errore generato nello spermatozoo. Ora si
ereditano con la fecondazione assistita.

SRY membro di una famiglia Sox che sono

fattori trascrizionali che agiscono durante
l’embriogenesi. E’ un gene piccolo che contiene HMG box (dna binding domain), porzione N e C terminale
che stabilizzano struttura della proteina e reclutano
partner proteici di sry. E il master gene della
determinazione del sesso. Sufficiente per indurre
differenziamento testicolare, loss of function of SRY
can lead to the XY gonadal dysgenesis or Turner
syndrome with XO/XY Mosaicism.
 Il lega,e al dna con
proteina di SRY che attiva
cascata di espressione tra
cui wt1, sff1 ecc.. Se un
embrione é XX ma nell’x
c’è SRY, diventa maschio
sterile perche gli mancano
tutti i geni per la
spermatogenesi. Se un
maschio non ha SRY o Se
SRY é mutato si
sviluppa situazione simile a
turner.

Espressione dei
genianche se non c’è
SRY si attivano geni che
normalmente sono repressi
da SRY e sono wnt4 rspo1
e fosl2 e permettono
sviluppo dell’ovaio.

Uno dei geni oltre a wt1

espresso da SRY ancora
prima di wt1 e sox9 nei
maschi che hanno
mutazione di sox9 hanno una forma molto evidente di malformazione scheletrica(nanismo displasia
arpometrica). Le femmine sono
femmine tranne la displasia
campometrica. Mentre i maschi
hanno reversione del sesso--
non si sviluppano bene le
strutture maschili connesse al
testicolo. SOX9 is actually the
key element that orchestrates
and stabilizes Sertoli cell
differentiation to lock in the
testis-determining program. At
the same time, SOX9 provides
a means of blocking the
pathway of gene activity that
leads to the differentiation of
ovarian cells. Loss-of-function
mutations in human SOX9
cause autosomal male-to-
female sex reversal and a
skeletal malformation called
campomelic dysplasia (CD), thus revealing that
SOX9 is involved in bone formation and sex
determination. Duplication of SOX9 gene in an
SRY-negative female to-male sex reversal patients
demonstrated that SOX9 plays a crucial role in male
sex determination and differentiation.
Ectopically expression of Sox9 in mouse XX gonads
is sufficient to induce testis development,
suggesting that SOX9 can substitute for SRY during
the initiation of the male differentiation program.

WNT4 (Rokitansky syndrome)

Wnt4 is essential in:
- formation of Mullerian duct
- inhibition of Leydig cell precursor differentiation
- development of normal oocytes
Loss of function of Wnt4 leads to the transient upregulation of both Sox9 and Fgf9 in the absence of Sry,
indicating a genetic antagonism specifically between Fgf9 andWnt4. WNT4 signaling pathway antagonizes
testosterone synthesis in adrenocortical and Leydig cell lines and blocks male development in embryonic
ovaries.
RSPO1
- is an ovary determining gene, expressed during the early stage of gonad development à disrupted in
46,XX testicular DSD patients.
- encodes secreted proteins that activate the canonical b-catenin pathway.
RSPO1 robustly expresses in the developing ovary from 6 to 9 weeks post conception, and homozygous
mutations in RSPO1 result in a recessive syndromeidentified by complete female to-male sex reversal.

Come si nominano i
difetti del
differenziamento
sessuale Intersex,
Pseudohermaphroditism,
Hermaphroditism, Sex
reversal. DSD
disorders of sex
development--- dsd
XYl embrione doveva
essere maschile perché
il cariotipo è maschile ma
non é proprio cosi) dsd
XX stessa cosa per le
femmine. Ermafrodita
dsd ovotestis(chimera)
 evento più raro di tutti.
Sex reversal e
disgenesia gonadica--
nel primo c’è sry e nel
secondo sry si è perso.
Come succede che un maschio produce chr Y senza sry?? Noncon X con sry?

Par1 è la regione di omologia alla meiosi avviene crossing over , si appiano quelle zone, tutto il resto dei
chr va altrove perche non hanno altro in omologia, si allontanano e quindi c’è crossing over obbligatorio( se
la cellula nel maschio lo spermatocita primario ha 46 chr ogni chr con due cromatidi, e fa crosising over)--
avviene a stadio di quattro filamenti e ogni evento forma due ricombinanti e due parentali. Deve avvenire
questo crossing over altirmenti la cellula non procede, dunque nei filamenti ricombinanti si generano
filamenti che contengono un pezzo di azzurro e un pezzo di rosa ma il centromero rimane quello originario.
Siccome sry p vicino a par1, se ci sono cnv che possono dare crossing over inuguali, avviene uno
scivolamento. Si genera quindi X con sry e uno Y senza sry. Il feto che viene fecondato da chr Y senza sry
darà orgine a fenotipo turner like anche se ha geni della spermatogenesi ma non parte differenziamento in
senso maschile. La femmina é genotipicamente femmina ma fenotipicamente maschio.

Ipospadia( primo livello di non completo differenziamento in senso maschile, l’uretra si apre in posizione
diversa da quella fisiologica).
XY (Swyer syndrome) females have the following characteristics/symptoms:
• Normal female external genitalia
• Normal female internal genitalia (fallopian tubes, uterus, cervix, vagina)
• Ovaries are not present (none function streak gonads)
• Do not occur until puberty
•No breast development
• No menstrual cycle
Swyer’s Syndrome: Also called XY gonadal dysgenesis, is a rare disorder, occurring in
one in 30,000 to 80,000 births. Patients have female characteristics such as female voice, fully or
incompletely formed external genitalia, a vagina, under-developed breasts, fallopian tubes and a uterus; but
no ovaries. The disorder originates when SRY gene, which triggers formation of male organs through XY
chromosomes, mutates during the foetal stage. As a result, testosterone is not produced and the
testes is not fully formed. The testes is thus only a ‘streak gonad’, incapable of reproduction.
XX (de la Chapelle syndrome) males have the following characteristics/symptoms
• male external genitalia
• small and/or undescended testes
• Urethra opening on underside instead of tip of penis (Ipospadia)
• Usually infertile (do not produce sperm)
• Gynecomastia (development of female breast tissue in males)
Morris syndorme: insensibilita a androgeni. Nel testicolo le cellule del sertoli producono testosteroni perchè
fa in modo che si innescano eventi in modo che le strutture gonadiche diventano strutture maschili. Ma se il
testosterone non è captato dal recettore si ha questa sindrome. Viene prodotto ma non è captato. É una
mutazione del gene che codifica per l’androgen receptor che sta sul chr X. Morris’s syndrome AIS
Types
-CAIS (completely insensitive to AR gene)
-External female genitalia
-Lacking female internal organs
-PAIS (partially sensitive-varying degrees)
-External genitalia appearance on a spectrum (male to female)
-MAIS (mildly sensitive, rare)
-Impaired sperm development and/or impaired masculinization. Also called Testicular Feminization
A genetic condition where affected people have male chromosomes and male gonads with complete or
partial feminization of the external genitals
• An inherited X-linked recessive disease with a mutation in the Androgen Receptor (AR) gene resulting in:
– Functioning Y sex chromosome
– Abnormality on X sex chromosome
Androgen Receptor Gene
• AIS results from mutations in the androgen receptor gene, located on the long arm of the X chromosome
(Xq11-q12).
• The AR gene provides instructions to make the protein called androgen receptor, which allows cells to
respond to androgens, such as testosterone, and directs male sexual development.
• Androgens also regulate hair growth and sex drive
• Mutations include complete or partial gene deletions, point mutations and small insertions or deletions.
Androgen receptor mutations: over 400 AR mutations have been reported. 30% of the time, AR mutation is
a spontaneous. X linked recessive.

Nella morris le persone hanno chr e gonadi maschili ma con un completo o parziale risposta al
testosterone. Dipende dal danno genetico che hanno a livello del recettore.

Ci sono molte mutazioni spesso de novo e recessive se ci sono due chr X non si esprime quindi se c’è
mutazione in un solo allele il Klinefelter è più fortunato per esempio.

Nella meiosi maschile, i chr X e Y si appaiano in nuna regione localizzata alle estremità dei loro bracci corti e vanno
incontro a ricombinazione in quella regione.: tale regione si chiama regione Pseudoautosomica o PAR1, perché i
segmenti di questa regione, sul chr Xe sul chr Y sono identici fra loro e vanno incontro a ricombinazione omologa in
meiosi I. Un seconod segmento pseudoautosomico di dimensioni minori si trova alle estremità distali di Xq e Yq.
Il chr Y è relativamente povero di geni (meno di 100) che codificano solo per circa una ventina di proteine. E’
interessante notare che le funzioni di una grande proporzione di questi geni sono ristrette allo sviluppo e alla
funzionalità delle gonadi e dei genitali.

Embriologia del sistema riproduttivo: entro la sesta settimana di sviluppo embrionale , in entrambi i sessi, le cellule
germinali primordiali sono migrate dalla loro precedente localizzazione extraembrionale alle creste genitali, dove
sono circondate dai cordoni sessuali per formare le gonadi primitive. Fino a questo momento, la gonade in sviluppo è
bipotente, cioè potenzialemente capace di diventare ovaio o testicolo, indipendentemente dal sesso cromosomico
XX o XY. Lo sviluppo di testicolo o ovaio è determinato dall’azione coordinata di una sequenza di geni in vie
alternative finemente bilanciate che portano allo sviluppi delle ovaie quando il chr Y è assente e a quello del testicolo
quando è presente. Uno specifico gene, SRY, localizzato sul braccio corto del chr Y, contiguo alla regione Par1,
indirizza allo sviluppo della gonade bipotente in senso maschile. Al contrario , se non è presente nessuna copia del
chr Y, la gonade inizia a differenziarsi per formare un ovaio , cominciano intorno all’ottava settimana di gestazione e
continuando per molte settimane. A partire dal terzo mese, gli oogoni entrano in meiosi Ima questo processo si
ferma al dictiotene finchè molti anni più tardi avviene l’ovulazione. In presenza di un chr Y normale , si formano i
tubuli seminiferi con all’esterno le cellule del Leydig che sotto stimolo di gonadotropina corionica prodotta dalla
placenta diventano capaci di secenere androgeni. Gli spermatogoni anche attendono la pubertà per iniziare la
spermatogenesi. Dall’ispessimento mediale della cresta genitale si formano i dotti mesonefrici(wolffiani) e
paramesonefrici (mulleriani), sotto l’influenza degli ormoni prodotti da specifici tipi cellulari durante lo sviluppo delle
gonadi. La formazione dei dotti è terminata intorno al 3 mese di gestazione. Nell’embriogenesi precoce, i genitali
esterni consistono in un tubercolo genitale che, sotto l’influenza degli androgeni a partire dalla 12esima settimana di
gestazione , si trasformerà in pene. In assenza di androgeni, i genitali esterni saranno di tipo femminile, a
prescindere dal fatto che sia presente o meno un ovaio.

SRY è il principale gene determinante il testicolo. Tra i chr X e Y durante la meiosi I avviene almeno un evento di
crossing over , localizzato all’interno della regione pseudoautosomica PAR1. In rari casi la ricombinazione avviene al
di fuori di PAR1, causando insorgenza di due condizioni paradossali e rare: maschi con cariotipo 46, XX e femmine
con cariotipo 46,XY. Queste due condizioni sono associate a ricombinazione con altra regione PAR2 e PAR3.

SRY si trova nel braccio corto del chr Y appena sotto PAR1. SRY è presente nella maggior parte dei maschi 46,XX ed è
deleto o mutato nelle femmine 46,XY. L’espressione di SRY cessa man mano che aumenta SOX9(bersaglio della
proteina codificata da SRY). Tale proteina lega specifiche regione di DNA incurvandole e quindi decompattandole in
modo da permettere l’accesso di altri fattori trascrizionali in quella specifica regione cromosomica.

Geni localizzato sul chr Y nella spermatogenesi: microdelezioni in posizione specifiche di Yq sono presenti in una
proporzione significativa di uomini con alterazioni della spermatogenesi, da azoospermia non ostruttiva
(spermatozoi assenti nel liquido seminale) a grave oligospermia (<5 milioni/mL; intervallo normale è da 20 a 40
milioni/mL). Si pensava ci fossero geni di azoospermia (AZF) localizzati nel braccio lungo del chr Y. Oggi se ne
conoscono 3 (AZFa, AZFb, AZFc). Per esempio, la regione di delezione AZFc contiene diveri geni espressi solo nei
testicoli, incluse 4 copie di DAF (deleti nell’azospermia). Questi geni codificano per proteine molto simili tra loro,
espresse solo nelle cellule germinali premei otiche dei testicoli e hanno la proprietà di legare gli mRNA . Esistono ma
sono più rare delezioni de novo di AZFc. La delezione di solo due dei 4 geni DAZ è stata associata con oligospermia
più lieve. Delezioni di AZFa e AZFb sono meno comuni. Le microdelezioni di Yq non sono sindromi che e causano solo
difetti della spermatogenesi in maschi normali. Questo perché tutti i geni AZF sono espressi solo nel testicolo e in
nessn altro tessuto.

In uomini con infertilità idiopatica, dopo esclusione di aplasia bilaterale congenita dei dotti deferenti associata a
mutazione del gene CFTR, si eseguono l’esame del cariotipo e il test molecolare sul chr Y (inoltre bisogna tener conto
che la microdelezione Yq può essere trasmessa al figlio).