Ormoni peptidici e

doping genetico

Materiale didattico a cura di Domenico Pellegrini-Giampietro

Con la collaborazione di: Elisabetta Gerace, Elisa Landucci e Tania Scartabelli
 WORLD ANTI-DOPING AGENCY
LA “Lista Proibita 2019”

SOSTANZE e METODI PROIBITI SOSTANZE e METODI PROIBITI

IN E FUORI COMPETIZIONE IN COMPETIZIONE
Sostanze proibite Comprende S1-S5 e M1-M3 e
S0. Sostanze non approvate inoltre:
S1. Agenti anabolizzanti S6. Stimolanti
S2. Ormoni peptidici, fattori di S7. Narcotici
crescita, sostanze correlate e S8. Cannabinoidi
mimetici S9. Glucocorticoidi
S3. Beta-2-agonisti
S4. Modulatori ormonali e metabolici SOSTANZE PROIBITE IN
S5. Diuretici e agenti mascheranti PARTICOLARI SPORT
Metodi proibiti P1. Beta-bloccanti
M1. Manipolazione del sangue e
componenti ematici
M2. Manipolazioni chimiche e fisiche
M3. Doping genico e cellulare
 Ormoni: definizione e caratteristiche

A differenza dei neurotrasmettitori (che vengono liberati dai terminali

presinaptici dei neuroni nello spazio sinaptico), gli ormoni sono sostanze
chimiche che vengono secrete dalle ghiandole endocrine direttamente nel
sangue

Gli ormoni raggiungono i loro organi bersaglio, anche a grande distanza dalla
sede di secrezione, attraverso la circolazione sanguigna, e ivi esplicano i
loro effetti biologici

Gli effetti biologici degli ormoni sugli organi bersaglio sono mediati da vari
tipi di recettori: accoppiati a proteine G (adrenalina), accoppiati a chinasi
(GH, EPO, IGFs, MGFs) o nucleari (steroidi sessuali e , corticosteroidi).

Gli ormoni regolano il metabolismo e l’attività di processi di importanza

fondamentale per lo sviluppo, la riproduzione e il mantenimento
dell’omeostasi dell’organismo
S2. Ormoni Peptidici, Fattori di Crescita, Sostanze Correlate e Mimetici I

1. Erythropoietins (EPO) and agents affecting erythropoiesis, including, but not

limited to:

1.1 Erythropoietin-Receptor Agonists, e.g. darbepoetins (dEPO); Erythropoietins (EPO);

EPO based constructs [EPO-Fc, methoxy polyethylene glycol-epoetin beta (CERA)];
EPO-mimetic agents and their constructs (e.g. CNTO-530, peginesatide)

1.2 Hypoxia-inducible factor (HIF) activating agents, e.g. argon; cobalt; molidustat;
daprodustat (GSK1278863); molidustat (BAY 85-3934); roxadustat (FG-4592);
vadadustat (AKB-6548); xenon.

1.3 GATA inhibitors, e.g. K-11706

1.4 TGF-beta (TGF-β) inhibitors, e.g. luspatercept; sotatercept

1.5 Innate repair receptor agonists, e.g. Asialo EPO; Carbamylated EPO (CEPO)
 S2. Ormoni Peptidici, Fattori di Crescita, Sostanze Correlate e Mimetici II
2. Peptide Hormones and their Releasing Factors

2.1 Chorionic Gonadotrophin (CG) and Luteinizing Hormone (LH) and their releasing
factors in males, e.g. buserelin, deslorelin, gonadorelin, goserelin, leuprorelin, nafarelin and
triptorelin

2.2 Corticotrophins and their releasing factors, e.g. corticorelin

2.3 Growth Hormone (GH), its fragments and releasing factors, including, but not
limited to: Growth Hormone fragments, e.g. AOD-9604 and hGH 176-191; Growth Hormone
Releasing Hormone (GHRH) and its analogues, e.g. CJC-1293, CJC-1295, sermorelin and
tesamorelin; Growth Hormone Secretagogues (GHS), e.g. lenomorelin (ghrelin) and its
mimetics, e.g. anamorelin, ipamorelin, macimorelin and tabimorelin; GH-Releasing Peptides
(GHRPs), e.g. alexamorelin, GHRP-1, GHRP-2 (pralmorelin), GHRP-3, GHRP-4, GHRP-5, GHRP-
6, and hexamorelin (hexarelin).

3. Growth Factors and Growth Factor Modulators, including, but not limited to:
Fibroblast Growth Factors (FGFs); Hepatocyte Growth Factor (HGF); Insulin-like Growth
Factor-1 (IGF-1) and its analogues; Mechano Growth Factors (MGFs); Platelet-Derived
Growth Factor (PDGF); Thymosin-β4 and its derivatives e.g. TB-500; Vascular-Endothelial
Growth Factor (VEGF).

and other growth factors or growth factor modulators affecting muscle, tendon or ligament
protein synthesis/degradation, vascularisation, energy utilization, regenerative capacity or
fibre type switching.
S2. Ormoni Peptidici, Fattori di Crescita e Sostanze Correlate

Additional prohibited growth factors (2017):

Fibroblast Growth Factors (FGFs); Hepatocyte Growth Factor (HGF); Insulin-

like Growth Factor-1 (IGF-1) and its analogues; Mechano Growth Factors
(MGFs); Platelet-Derived Growth Factor (PDGF); Vascular-Endothelial Growth
Factor (VEGF) and any other growth factor affecting muscle, tendon or
ligament protein synthesis/degradation, vascularisation, energy utilization,
regenerative capacity or fibre type switching.

L’analisi ANTIDOPING di questi ormoni è MOLTO DIFFICILE:

- sono prodotti dal nostro organismo
- la loro secrezione in genere aumenta durante l’esercizio fisico
- si usano prodotti umani o ricombinanti umani (praticamente identici)
 I sei ormoni dell’ipofisi anteriore (o adenoipofisi)

Fattori di rilascio

Corticotropina

(GH) Gonadotropine
Organi bersaglio

(LH e hCG)

(IGFs)
 Eritropoietina (EPO)

Lo stimolo principale alla produzione di EPO è

l’ipossiemia, che attiva un fattore chiamato
 O2 cellula interstiziale tubulare
del rene
HIF-1 in alcuni tipi di cellule
 HIF-1
L’EPO è prodotta principalmente dalle cellule
interstiziali peritubulari del rene, sotto il
controllo di un gene situato sul cromosoma 7 Anche:
adrenalina Chr 7
testosterone
L’EPO è una glico-proteina composta da 193
aminoacidi (di cui i primi 27 sono scissi Epo
durante la secrezione)

L’EPO viene secreta nel sangue e raggiunge il

midollo osseo, dove attiva un recettore
accoppiato a chinasi nelle cellule progenitrici
eritroidi determinandone una rapida
espansione clonale
cellula
progenitrice
HIF: hypoxia-inducible factor
eritroide
 Regolazione dell’eritropoiesi

Sq
uili
b ri o

Livelli ossigeno ematico normali

Sq
uili
Aumentata capacità bri
o
del sangue di Stimolo iniziale:
trasportare O2 Ipossia per:
 numero GR;
 disponibilità di
O2 nel sangue;
 domanda
tissutale di O2

L’aumentata Rene (e fegato in

L’eritropoietina stimola
eritropoiesi misura minore)
il midollo osseo
incrementa il rilasciano
numero dei GR eritropoietina
 L’EPO stimola le cellule progenitrici eritroidi

Midollo osseo
Staminali BFU-E CFU-E Eritroblasti Reticolociti

Globuli rossi

EPO
Cellule
produttrici
di EPO

Trasporto di
RENE O2
Sensore
di O2

BFU-E: unità formanti grandi colonie eritroidi; CFU-E: unità formanti colonie di eritrociti
 EPO e i parametri emocromocitometrici eritrocitari
Unità di
Uomo Donna misura EPO
Conta dei globuli rossi (RBC) 5,5  1.0 4,8  1.0 1012/l 
Concentrazione di emoglobina (HGB) 15,1  2,5 14,0  2,5 g/dl 
Volume corpuscolare medio (MCV) 85  8 85  8 fl 
Contenuto corpuscolare
medio di emoglobina (MCH) 29,5  2,5 29,5  2,5 pg 
Concentrazione corpuscolare
media di emoglobina (MCHC) 33  2 33  2 g/dl 
Parte corpuscolata rispetto
al sangue totale (ematocrito) (HCT) 47  7 42  5 % 

Trattamento con EPO:

globuli rossi macrocitici e ipocromici 

presenza di reticolociti 
 Patologie con ipersecrezione di eritropoietina

1. AUMENTATA SECREZIONE DI ERITROPOIETINA

- Renale: da tumore, cisti, idronefrosi, rigetto di trapianti
- Extra-renale: epatoma, feocromocitoma, emangioblastoma cerebellare
 policitemia secondaria,  Hb,  Hct

2. DIMINUITA OSSIGENAZIONE DEI TESSUTI

- Malattie polmonari croniche
- Malattie cardiovascolari (shunt dx-sin)
- Ostruzione del flusso ematico renale
- Esposizione all’altitudine
  secrezione EPO  policitemia secondaria,  Hb,  Hct
 Patologie da carenza di eritropoietina

1. ANEMIE
- anemia da insufficienza renale cronica (dializzati)
- anemia da terapie antitumorali o anti-HIV
- anemie refrattarie

2. PATOLOGIE DEL MIDOLLO OSSEO

- trapianto del midollo
- mieloma multiplo
- sindromi mielodisplastiche

SI USA EPO RICOMBINANTE UMANA (rhEPO)

- epoetina α: Epoxitin, Eprex, Globuren
- epoetina β: Neorecormon
- si sommnistra per via s.c. o e.v.
- pericolo di crisi ipertensive acute
- rischio anche di tromboembolie, convulsioni, aplasie midollari
 Rilevamento antidoping di eritropoietina

1. MISURE INDIRETTE
- conta numero di GR, ematocrito (se > 50% sospensione cautelativa per ciclisti)
- misurazione dell’Hb (limiti FIS: 18.5 g/dL e 16,5 g/dL)
- conta dei reticolociti
- ideale: profilo ematologico di ogni atleta nel tempo

2. MISURE DIRETTE
- 2002: metodo IEF+doppio WB per distinguere rhEPO da EPO endogena in urine
- è possibile individuare rhEPO anche 3 giorni dopo l’assunzione
- possibilità di falsi positivi
 Rischi cardiovascolari dell’eritropoietina

Ematocrito troppo alto (> 50%)

 Viscosità sangue
Ipertrofia ventricolare
 Pressione arteriosa

TROMBOSI
SCOMPENSO CARDIACO
ICTUS

Con esercizio fisico: emoconcentrazione

disidratazione

Alta incidenza di morti precoci in ciclisti olandesi dal 1971 al 2001 (16 morti!), di cui 12
dal 1987-1991, anni in cui è iniziato l’uso dell’EPO (Gambrell & Lombardo. Drugs and
doping: blood doping and recombinant human erythropoietin. In: Mellion, M.B. (ed.):
Sports medicine secrets. Philadelphia: Hanley & Belfus, 1994, pp. 130-3)
 S2. Ormoni Peptidici, Fattori di Crescita, Sostanze Correlate e Mimetici II
2. Peptide Hormones and their Releasing Factors

2.1 Chorionic Gonadotrophin (CG) and Luteinizing Hormone (LH) and their releasing
factors in males, e.g. buserelin, deslorelin, gonadorelin, goserelin, leuprorelin, nafarelin and
triptorelin

2.2 Corticotrophins and their releasing factors, e.g. corticorelin

2.3 Growth Hormone (GH), its fragments and releasing factors, including, but not
limited to: Growth Hormone fragments, e.g. AOD-9604 and hGH 176-191; Growth Hormone
Releasing Hormone (GHRH) and its analogues, e.g. CJC-1293, CJC-1295, sermorelin and
tesamorelin; Growth Hormone Secretagogues (GHS), e.g. lenomorelin (ghrelin) and its
mimetics, e.g. anamorelin, ipamorelin, macimorelin and tabimorelin; GH-Releasing Peptides
(GHRPs), e.g. alexamorelin, GHRP-1, GHRP-2 (pralmorelin), GHRP-3, GHRP-4, GHRP-5, GHRP-
6, and hexamorelin (hexarelin).

3. Growth Factors and Growth Factor Modulators, including, but not limited to:
Fibroblast Growth Factors (FGFs); Hepatocyte Growth Factor (HGF); Insulin-like Growth
Factor-1 (IGF-1) and its analogues; Mechano Growth Factors (MGFs); Platelet-Derived
Growth Factor (PDGF); Thymosin-β4 and its derivatives e.g. TB-500; Vascular-Endothelial
Growth Factor (VEGF).

and other growth factors or growth factor modulators affecting muscle, tendon or ligament
protein synthesis/degradation, vascularisation, energy utilization, regenerative capacity or
fibre type switching.
 Ormone della crescita (GH) o somatotropina

Polipeptide di 191 aminoacidi

Secreto dall’adenoipofisi: picco dopo 60-90 min di sonno

emivita 12-45 min
 Regolazione della secrezione di GH e IGF-1

Sonno
Esercizio fisico
Somatomedine:
SST: somatostatina GHRH: GH releasing hormone IGF-1 (somatomedina C)
FFA: free fatty acids (acidi grassi liberi) IGF-2 (somatomedina A)
IGF-1: insulin-like growth factor-1 altre: IGFBP-3, IGFBP-2, ALS, insulina
Fattori che influenzano la secrezione di GH

(Arginina e L-Dopa)

e Octreotide (analogo sintetico)

e Sermorelina (analogo sintetico)

GH Machine Growth Hormone Releasing

Formula with L-Arginine and L-Dopa
 Effetti biologici dell’ormone della crescita (GH)

1. EFFETTO SOMATOTROPO:
Stimolazione della crescita somatica in adolescenti

2. EFFETTI METABOLICI:
FASE ACUTA:  utilizzo aminoacidi e glucosio in muscolo e fegato
 metabolismo lipidico
FASE CRONICA:  lipolisi in tessuto adiposo*
  utilizzo acidi grassi

3. EFFETTI SUL SANGUE:

 acidi grassi liberi e glicemia

4. EFFETTI SUL MUSCOLO SCHELETRICO:

Effetto anabolizzante*:  sintesi proteica
BIMBI:  lunghezza e diametro fibre
ADULTI:  solo diametro

5. EFFETTI SULL’OSSO:
Allungamento in pubertà*: azione sulla cartilagine di accrescimento

* effetti mediati dalle somatomedine

 Disturbi endocrini dell’ormone della crescita (GH)

NANISMO
Ridotta secrezione di GH fin da bambini.
Si sommiistra GH fino alla fine della pubertà.

GIGANTISMO
Aumentata secrezione di GH (x tumore secernente) in pubertà/adolescenza

ACROMEGALIA:
Aumentata secrezione di GH (x tumore secernente) in età adulta:
- accrescimento tessuti molli (mani, piedi, naso, orecchie, labbra)
- ispessimento cute
- accrescimento organi interni (cuore, reni, corde vocali)
- dilatazione ossa cranio
- protrusione sopracciglia con distensione orbite oculari
- protrusione mandibola con macroglossia

INVECCHIAMENTO ?
Riduzione fisiologica della secrezione di GH:
cute sottile,  tessuto adiposo,  massa magra
? uso GH
 Uso di preparati di ormone della crescita umano (hGH)

(da cadaveri!)

(r = ricombinante, prodotta da batteri trasfettati con cDNA di hGH)

GH bovino o umano
 rischio BSE

GH ricombinanti
 prima molto cari

Uso parenterale

Uso in clinica: nanismo, AIDS, ustioni, prevenzione invecchiamento

 Uso di GH nello sport

1. Aumento massa magra (e “definizione” muscolare)

2. Diminuzione massa grassa (lipolisi)

3. Aumento altezza (in bambini e adolescenti)

Si può
misurare il
rapporto
IGF1/IGF2
 Effetti collaterali del GH nello sport
Gli atleti usano dosi di GH 10 volte superiori a quelle normali.

1) ALTERAZIONI SCHELETRICHE
- allargamento dita mani e piedi
- allargamento orbite
- protrusione della mandibola

2) ALTERAZIONI DEL SISTEMA CARDIOVASCOLARE

- cardiomegalia
- ipertensione
 scompenso cardiaco

3) DEBOLEZZA MUSCOLARE

4) ALTERAZIONI METABOLICHE
- iperglicemia (diabete)
- iperlipidemia
Maurice Tillet (1910-1955)  Shrek?
5) ALTERAZIONI CUTANEE
- ispessimento a “pelle a elefante”: impenetrabile agli aghi da siringa!
- sudorazione palmare
- seborrea

6) ALTRE
cefalea grave, artrite (sindrome del tunnel carpale), insufficienza renale, perdita
visione laterale x compressione del chiasma ottico
 S2. Ormoni Peptidici, Fattori di Crescita, Sostanze Correlate e Mimetici II
2. Peptide Hormones and their Releasing Factors

2.1 Chorionic Gonadotrophin (CG) and Luteinizing Hormone (LH) and their releasing
factors in males, e.g. buserelin, deslorelin, gonadorelin, goserelin, leuprorelin, nafarelin and
triptorelin

2.2 Corticotrophins and their releasing factors, e.g. corticorelin

2.3 Growth Hormone (GH), its fragments and releasing factors, including, but not
limited to: Growth Hormone fragments, e.g. AOD-9604 and hGH 176-191; Growth Hormone
Releasing Hormone (GHRH) and its analogues, e.g. CJC-1293, CJC-1295, sermorelin and
tesamorelin; Growth Hormone Secretagogues (GHS), e.g. lenomorelin (ghrelin) and its
mimetics, e.g. anamorelin, ipamorelin, macimorelin and tabimorelin; GH-Releasing Peptides
(GHRPs), e.g. alexamorelin, GHRP-1, GHRP-2 (pralmorelin), GHRP-3, GHRP-4, GHRP-5, GHRP-
6, and hexamorelin (hexarelin).

3. Growth Factors and Growth Factor Modulators, including, but not limited to:
Fibroblast Growth Factors (FGFs); Hepatocyte Growth Factor (HGF); Insulin-like Growth
Factor-1 (IGF-1) and its analogues; Mechano Growth Factors (MGFs); Platelet-Derived
Growth Factor (PDGF); Thymosin-β4 and its derivatives e.g. TB-500; Vascular-Endothelial
Growth Factor (VEGF).

and other growth factors or growth factor modulators affecting muscle, tendon or ligament
protein synthesis/degradation, vascularisation, energy utilization, regenerative capacity or
fibre type switching.
Ormone luteotropo (LH) o stimolante le cellule interstiziali (ICSH)

LH o ICSH

corpo luteo
cellule Leydig
(produzione
(produzione
progesterone)
testosterone)

EFFETTI DOPANTI

• Stimola cellule di Leydig a produrre testosterone e i suoi metaboliti

• Previene l’atrofia testicolare indotta da testosterone esogeno
• Uso come agente mascherante (rapporto T/E nella norma)

EFFETTI COLLATERALI

• Gli stessi degli steroidi anabolizzanti androgeni (con ginecomastia più

accentuata)
 Gonadotropina corionica umana (hCG)
Prodotta dalla placenta durante la gravidanza (test di gravidanza)

RUOLO FISIOLOGICO NELLA DONNA:

Stimola il corpo luteo a mantenere la prduzione di progesterone
durante la gravidanza (come LH)

NELL’UOMO:
Stimola le cellule interstiziali di Leydig a produrre testosterone
e i suoi metaboliti (come LH o ICSH)

USO TERAPEUTICO:
- hCG + FSH in donne sterili x stimolare ovulazione
- Raramente nei maschi x pubertà ritardata

USO NELLO SPORT:

- Previene l’atrofia testicolare indotta da testosterone esogeno
- Stimola la produzione sia di testosterone che di epitestosterone
 rapporto T/E normale
 S2. Ormoni Peptidici, Fattori di Crescita, Sostanze Correlate e Mimetici II
2. Peptide Hormones and their Releasing Factors

2.1 Chorionic Gonadotrophin (CG) and Luteinizing Hormone (LH) and their releasing
factors in males, e.g. buserelin, deslorelin, gonadorelin, goserelin, leuprorelin, nafarelin and
triptorelin

2.2 Corticotrophins and their releasing factors, e.g. corticorelin

2.3 Growth Hormone (GH), its fragments and releasing factors, including, but not
limited to: Growth Hormone fragments, e.g. AOD-9604 and hGH 176-191; Growth Hormone
Releasing Hormone (GHRH) and its analogues, e.g. CJC-1293, CJC-1295, sermorelin and
tesamorelin; Growth Hormone Secretagogues (GHS), e.g. lenomorelin (ghrelin) and its
mimetics, e.g. anamorelin, ipamorelin, macimorelin and tabimorelin; GH-Releasing Peptides
(GHRPs), e.g. alexamorelin, GHRP-1, GHRP-2 (pralmorelin), GHRP-3, GHRP-4, GHRP-5, GHRP-
6, and hexamorelin (hexarelin).

3. Growth Factors and Growth Factor Modulators, including, but not limited to:
Fibroblast Growth Factors (FGFs); Hepatocyte Growth Factor (HGF); Insulin-like Growth
Factor-1 (IGF-1) and its analogues; Mechano Growth Factors (MGFs); Platelet-Derived
Growth Factor (PDGF); Thymosin-β4 and its derivatives e.g. TB-500; Vascular-Endothelial
Growth Factor (VEGF).

and other growth factors or growth factor modulators affecting muscle, tendon or ligament
protein synthesis/degradation, vascularisation, energy utilization, regenerative capacity or
fibre type switching.
Corticotropine (ACTH e tetracosactide)

ACTH (ormone adrenocorticotropo) è un peptide di 39 aa,

stimola la corteccia surrenale a produrre glucocorticoidi

Il tetracosactide (Synacthen) è un analogo sintetico,

formato dai primi 24 aa dell’ACTH, si usa per via parenterale

Il Synacthen test si usa per valutare la funzionalità del

corticosurrene (risposta secretoria di cortisolo entro 30 min)

Il Synacthen in acuto produce effetti euforizzanti ma anche

effetti comportamentali negativi (depressione, psicosi) o gravi
reazione allergiche

L’uso cronico di corticotropine è controproducente per le

prestazioni sportive (catabolismo proteico)
 ACTH nello sport

Negli anni ’70 ai calciatori venivano somministrate alte dosi di corteccia

surrenale (Cortex). vd. inchiesta su Bruno Beatrice

Oggi gli atleti fanno uso in acuto di ACTH, per via sistemica

Stimola la corteccia surrenale a produrre corticosteroidi

Aumento rapido dei livelli ematici di corticosteroidi

 si ricercano gli effetti positivi sul tono dell’umore

L’analisi antidoping è difficile, anche perchè l’esercizio

fisico aumenta i livelli di ACTH e di corticosteroidi
 WORLD ANTI-DOPING AGENCY
LA “Lista Proibita 2019”

SOSTANZE e METODI PROIBITI SOSTANZE e METODI PROIBITI

IN E FUORI COMPETIZIONE IN COMPETIZIONE
Sostanze proibite Comprende S1-S5 e M1-M3 e
S0. Sostanze non approvate inoltre:
S1. Agenti anabolizzanti S6. Stimolanti
S2. Ormoni peptidici, fattori di S7. Narcotici
crescita, sostanze correlate e S8. Cannabinoidi
mimetici S9. Glucocorticoidi
S3. Beta-2-agonisti
S4. Modulatori ormonali e metabolici SOSTANZE PROIBITE IN
S5. Diuretici e agenti mascheranti PARTICOLARI SPORT
Metodi proibiti P1. Beta-bloccanti
M1. Manipolazione del sangue e
componenti ematici
M2. Manipolazioni chimiche e fisiche
M3. Doping genico
 La sintesi proteica

Gene

trascrizione

esone esone traduzione

TAACG introne CATTAGACTG
Gene (DNA)
ATTGC GTAATCTGAC

UAACG CAUUAGACUG mRNA primario

triplette triplette triplette
UAACGCAUUAGACUG mRNA maturo
La sintesi proteica
Il DNA complementare (cDNA)

Gene (DNA)

esone esone
TAACG introne CATTAGACTG

ATTGC GTAATCTGAC

UAACGCAUUAGACUG mRNA

ATTGCGTAATCTGAC
cDNA
TAACGCATTAGACTG
I plasmidi (vettori di espressione)
La tecnologia del DNA ricombinante
 M3. Doping genico (nel 2012)

Al fine di migliorare le prestazioni sportive, è proibito:

- il trasferimento di acidi nucleici o di sequenze di acidi nucleici;

- l'uso di cellule normali o geneticamente modificate;

- l'uso di di agenti con effetti diretti o

indiretti su meccanismi in grado di
modificare le prestazioni alterando
l'espressione genica. Per esempio,
agonisti del Peroxisome Proliferator
Activated Receptor δ (PPARδ) (e.g. GW
1516) e gli agonisti dell’asse PPARδ-
protein kinasi attivata da AMP (e.g.
AICAR) sono proibiti.
 M3. Doping genico (dal 2013)

M3. Al fine di migliorare le prestazioni sportive, è proibito:

- il trasferimento di polimeri di acidi nucleici o di analoghi degli acidi nucleici;

- l'uso di cellule normali o geneticamente modificate.

… e basta?
 M3. Doping genico e cellulare (nel 2019)

M3. Al fine di migliorare le prestazioni sportive, è proibito:

1. L’uso di polimeri di acidi nucleici o di analoghi degli acidi nucleici;

2. L’uso di agenti che modificano i geni con lo scopo di alterare sequenze del
genoma e/o la regolazione trascrizionale, post-trascrizionale o
epigenetica dell’espressione genica

3. L'uso di cellule normali o geneticamente modificate.

_________________________________________________________

Il titolo di questa categoria è stato modificato in Doping genico e cellulare per specificare che le
cellule erano già state incluse in M3.3

Le cellule staminali non sono proibite per il trattamento degli infortuni a patto che il loro usa
restauri la funzione dell’area colpita senza potenziarne la funzione.

Il termine post-trascrizionale è stato aggiunto alla lista degli esempi per definire in maniera più
completa i processi che possono essere alterati modificando i geni.
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LA “Lista Proibita 2019”

SOSTANZE e METODI PROIBITI SOSTANZE e METODI PROIBITI

IN E FUORI COMPETIZIONE IN COMPETIZIONE
Sostanze proibite Comprende S1-S5 e M1-M3 e
S0. Sostanze non approvate inoltre:
S1. Agenti anabolizzanti S6. Stimolanti
S2. Ormoni peptidici, fattori di S7. Narcotici
crescita, sostanze correlate e S8. Cannabinoidi
mimetici S9. Glucocorticoidi
S3. Beta-2-agonisti
S4. Modulatori ormonali e metabolici SOSTANZE PROIBITE IN
S5. Diuretici e agenti mascheranti PARTICOLARI SPORT
Metodi proibiti P1. Beta-bloccanti
M1. Manipolazione del sangue e
componenti ematici
M2. Manipolazioni chimiche e fisiche
M3. Doping genico e cellulare
 S4. Modulatori Ormonali e Metabolici

1. Inibitori delle aromatasi compresi, ma non limitati a: aminoglutetimide,

anastrazolo, ....., esemestano, formestano, letrozolo, testolattone.

2. Modulatori selettivi del recettore per gli estrogeni (SERMs) compresi, ma non
limitati a: raloxifene, tamoxifene, toremifene.

3. Altre sostanze anti-estrogeniche comprese, ma non limitate a: clomifene,

ciclofenil, fulvestrant.

4. Agenti che prevengono l’attivazione del recettore per l’activina IIB compresi,
ma non limitati a: inibitori della miostatina.

5. Modulatori metabolici: 5.1 Attivatori della kinasi AMP-dipendente (es. AICAR)

e agonisti del Peroxisome Proliferator Activated Receptor δ (PPARδ) (e.g.
GW 1516); 5.2 Insulina e insulino-mimetici; 5.3 Meldonio; 5.4 Trimetazidina.
 Ingegneria
Ingegneria genetica
genetica // tecniche
tecniche di
di
manipolazione
manipolazione

Segmenti specifici di DNA possono essere tagliati

e isolati

I segmenti isolati si possono ricombinare con un

vettore plasmidico

Il plasmide è trasferito in un batterio dove viene

moltiplicato

Il DNA ricombinato può essere ricombinato

ulteriormente per ottenere la molecola finale
desiderata
La molecola finale è trasferita nelle cellule o
nell’organismo
 I geni protagonisti nello sport I

 Sono state individuate 83 varianti genetiche che possono far variare

l’altezza di un adulto di più di 2 cm.
Altezza
 Es. Le varianti che inattivano il gene STC2 aumentano l’altezza delle
persone che ne sono portatrici (Rankinen et al., 2001).

 Fattore determinante è il testosterone, ormone sessuale sintetizzato nei

testicoli. Stimola la sintesi proteica, aumentando la massa muscolare.

 Importante il ruolo dell’IGF-1, fattore di crescita, codificato da un gene,

Forza fondamentale nella riparazione e crescita del muscolo.

 La miostatina è una proteina che controlla lo sviluppo muscolare,

determinando il segnale di stop.

 Es. Mutazioni del suo gene MSTN provocano un aumento della massa
muscolare (Rankinen et al., 2001).
 I geni protagonisti nello sport II

Il gene ACTN3, “gene della velocità”, si trova sul

cromosoma 11 e codifica l’actinina-3, proteina delle
fibre di tipo II, veloci (Rankinen et al., 2001).

Velocità Modifiche di questo gene rendono l’atleta più adatto

agli sprint o agli sport di endurance.

Es. Il polimorfismo 577R, presente nell’85% della

popolazione africana, aumenterebbe la performance
nello sprint (Rankinen et al., 2001).

 In base ai geni che codificano le isoforme di

Fibre muscolari miosina (MHC-I, IIa, IIx) presenti nell’organismo,
possiamo avere fibre di tipo I (bianche, a
contrazione lenta), di tipo IIa (intermedie) e le IIx
(rosse, a contrazione rapida).
 I geni dei “super poteri” I

 L’assenza del polimorfismo 577R è legato alla velocità.

Es. La variante 577XX, favorisce gli sport di endurance
(Rankinen et al., 2001).

 Es. Il gene ACE, localizzato sul cromosoma 17, ha un ruolo

importante nella regolazione della pressione arteriosa
attraverso il sistema renina- angiotensina. “La variante
Resistenza dello scalatore” è associato a ↓ di ACE favorendo
l’endurance (Rankinen et al., 2001).

 Es. La mutazione dell’EpoR, recettore dell’eritropoietina,

porta a ↑ della capacità di trasporto di ossigeno del 25-50%
(Rankinen et al., 2001).

 Il PPARδ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor) è un

fattore di trascrizione coinvolto in alcune modificazioni del
metabolismo energetico; è inoltre correlato alla formazione
di fibre lente (tipo I).
 I geni dei “super poteri” II

• Es. La mutazione del gene LRP5 rende lo

scheletro denso, con ossa pesanti e a prova
di frattura (Intini, 2017).

• Tale mutazione è definita del gene “delle

Scheletro
ossa d’acciaio”.

• La scoperta è stata fatta da scienziati della

Yale School of Medicine, analizzando il
corredo genetico di una famiglia
storicamente immune da problemi alle ossa
(Intini, 2017).
 Terapia genica

Terapia ex vivo: le cellule del paziente

vengono isolate e coltivate in vitro. Il
gene viene inserito nel genoma delle
cellule che sono infine reinserite nel
paziente.

Terapia in vivo: il gene viene iniettato in

circolo e quindi raggiunge il tessuto per
via sistemica.

Terapia in situ: il gene viene iniettato o

applicato direttamente ai tessuti.

L’inserimento del gene nelle cellule avviene tramite l’utilizzo di vettori virali
(retrovirus, adenovirus, herpesvirus) e non virali (liposomi, plasmidi).

Applicazioni cliniche: malattie genetiche monogeniche, diabete, cancro, malattie

infettive, malattie cardiovascolari.
Sperimentazioni di terapia genica

1989 I protocolli clinici di

terapia genica si trovano
per il 60% in fase I,
fattore che ci fa
comprendere l'attuale
immaturità della
disciplina.
 M3 Doping genetico

Il doping genetico è definito come l’

uso non terapeutico di cellule, geni
ed elementi genetici o della
modulazione dell'espressione
genetica, con capacità di aumentare
le prestazioni atletiche (WADA,
2008).

Verde = terapia genica

Rosso = doping genetico

Gould, 2013
 Eero Mantyranta: l’uomo “geneticamente modificato”

• Era il fondista di maggior successo degli anni sessanta.

• La sua emoglobina era superiore ai 20 g/dl (di norma è 14-16 g/dl).

• La mutazione dell’EpoR determina una policitemia

congenita (↑ globuli rossi, ↑ eritropoietina).

• Lo svantaggio può essere mortale per l’aumento

di coagulazione del sangue (ictus, infarti).

• Le cellule del midollo osseo di Mantyranta

producevano nuovi globuli rossi con
quantità superfisiologiche di EPO.

• I ricercatori hanno testato 97 membri della famiglia, scoprendone 29 con la

stessa mutazione, tra cui i due nipoti di Mantyranta, grandi campioni di sci.
 Gene therapy with EPO
Monkeys injected with a virus
carrying the gene for EPO

This example shows how

potent gene therapy can be
but it also illustrates the
current problem with the
technique, the lack of
control over the level.
Blood had to be removed
from these monkeys in order
to prevent a stroke from the
very high hematocrit level.

Zhou et al. Gene Therapy (1998) 5:665-670

Repoxygen®: terapia genica con Epo
 S2. Ormoni Peptidici, Fattori di Crescita, Sostanze Correlate e Mimetici II
2. Peptide Hormones and their Releasing Factors

2.1 Chorionic Gonadotrophin (CG) and Luteinizing Hormone (LH) and their releasing
factors in males, e.g. buserelin, deslorelin, gonadorelin, goserelin, leuprorelin, nafarelin and
triptorelin

2.2 Corticotrophins and their releasing factors, e.g. corticorelin

2.3 Growth Hormone (GH), its fragments and releasing factors, including, but not
limited to: Growth Hormone fragments, e.g. AOD-9604 and hGH 176-191; Growth Hormone
Releasing Hormone (GHRH) and its analogues, e.g. CJC-1293, CJC-1295, sermorelin and
tesamorelin; Growth Hormone Secretagogues (GHS), e.g. lenomorelin (ghrelin) and its
mimetics, e.g. anamorelin, ipamorelin, macimorelin and tabimorelin; GH-Releasing Peptides
(GHRPs), e.g. alexamorelin, GHRP-1, GHRP-2 (pralmorelin), GHRP-3, GHRP-4, GHRP-5, GHRP-
6, and hexamorelin (hexarelin).

3. Growth Factors and Growth Factor Modulators, including, but not limited to:
Fibroblast Growth Factors (FGFs); Hepatocyte Growth Factor (HGF); Insulin-like Growth
Factor-1 (IGF-1) and its analogues; Mechano Growth Factors (MGFs); Platelet-Derived
Growth Factor (PDGF); Thymosin-β4 and its derivatives e.g. TB-500; Vascular-Endothelial
Growth Factor (VEGF).

and other growth factors or growth factor modulators affecting muscle, tendon or ligament
protein synthesis/degradation, vascularisation, energy utilization, regenerative capacity or
fibre type switching.
Fibre muscolari a contrazione lenta e a contrazione veloce
 IGF-1

Nel muscolo normale i nuclei multipli delle fibre sono responsabili

della produzione di nuove proteine. Quando è necessario un
processo di riparazione, segnali chimici (IGF-1) stimolano le
cellule satelliti a proliferare e a fondersi con le fibre in modo da
contribuire con i loro nuclei al riparo delle fibre. La presenza di
un numero maggiore di nuclei e quindi di nuove miofibrille
consente di riparare il danno muscolare.
 “Super-topi” dopati geneticamente con IGF-1

L’aumento dell’espressione di IGF-1 nel muscolo scheletrico favorisce:

• un incremento del 14% della massa muscolare nei topi giovani
• un incremento del 15% della forza muscolare nei topi giovani
• un aumento del 27% della forza muscolare nei topi anziani
Test con iniezione di IGF-1 tramite virus adeno-associati


Differenza tra la
composizione delle fibre
muscolari in topi di
controllo e in topi con
IGF-1 «geneticamente
modificato».

Giacca et al., 2015

 ACTN3: Il "gene dello sprint"
variante 577R del gene ACTN3:
codifica per l’actinina-3, una proteina presente nelle fibre di tipo 2 (veloci).
•

La variante 577R dell'actinina-3 è presente nel 50% della popolazione euroasiatica e

•

nell’85% di quella africana.

La sua assenza (577XX) favorisce gli sport di endurance.
•

Gunel et al., 2014

 Approcci al doping genico

Fattori di crescita endoteliali vascolari(VEGF)

Geni che codificano per VEGF possono promuovere la

crescita di nuovi vasi sanguigni consentendo un
maggiore apporto di ossigeno ai tessuti.
Finora sono stati fatti esperimenti come terapia genica
per malattie quali ischemia cardiaca o insufficienza
arteriosa periferica (Circulation 2002; 105:2012;
Circulation 2003; 108:1933)
Human gene therapy with VEGF

Blood vessels in a
patient injected with a
virus carrying a gene
for VEGF

Before After
Baumgartner et al. Circulation (1998) 97:1114-1123
 S4. Modulatori Ormonali e Metabolici

1. Inibitori delle aromatasi compresi, ma non limitati a: aminoglutetimide,

anastrazolo, ....., esemestano, formestano, letrozolo, testolattone.

2. Modulatori selettivi del recettore per gli estrogeni (SERMs) compresi, ma non
limitati a: raloxifene, tamoxifene, toremifene.

3. Altre sostanze anti-estrogeniche comprese, ma non limitate a: clomifene,

ciclofenil, fulvestrant.

4. Agenti che prevengono l’attivazione del recettore per l’activina IIB compresi,
ma non limitati a: inibitori della miostatina.

5. Modulatori metabolici: 5.1 Attivatori della kinasi AMP-dipendente (es. AICAR)

e agonisti del Peroxisome Proliferator Activated Receptor δ (PPARδ) (e.g.
GW 1516); 5.2 Insulina e insulino-mimetici; 5.3 Meldonio; 5.4 Trimetazidina.
 Iniezione di un gene
nella fibra muscolare Fibra muscolare
Vettore

Nucleo

Un gene sintetico, all’interno un Gene

sintetico
vettore, può essere posto in un
muscolo. Il vettore trasporterà il
gene in un nucleo da dove
dirigerà la produzione di una
proteina.
Se il gene produce IGF-I o una Recettore miostatina

proteina che blocca la miostatina Bloccante miostatina

Miostatina
questo porterà a maggiore
proliferazione delle cellule
satelliti e quindi all’irrobustimento
della fibra muscolare.
Incremento della fibra fino al 40%
Approcci al doping genico
Gene della miostatina

La miostatina è una proteina regolatrice della crescita

muscolare. Appartiene alla superfamiglia dei TGF-beta

E’ responsabile del differenziamento dei muscoli

scheletrici
Ha una funzione inibitoria della proliferazione delle
cellule satelliti alle fibre muscolari. Mutazioni genetiche
(es. ceppo bovino Belgium blue bull) provocano
abnormi crescite dei muscoli
Due strade: modificare il gene che codifica la miostatina
o somministrare inibitori della miostatina (es. follistatina)

Vedi: Proc Natl Acad Sci USA 2001; 98:9306

In a case doctors described a young
boy in Berlin who seems destined for
athletic greatness.
The boy was born with a mutation that
turns off the gene for myostatin,
which in animals seems to block the
activation of muscle stem cells.
At 4-and a- half years old, the boy had
the physique of a mini-bodybuilder and
could hold out two 3-kg dumbbells with
his arms extended, his doctors
reported (New England J Med, 24
June 2004) .
Some experts suggest that the
mutation could be exploited as a
treatment for muscle wasting diseases.
Gli inibitori della miostatina sono già in vendita!!!
 S4. Modulatori Ormonali e Metabolici

1. Inibitori delle aromatasi compresi, ma non limitati a: aminoglutetimide,

anastrazolo, ....., esemestano, formestano, letrozolo, testolattone.

2. Modulatori selettivi del recettore per gli estrogeni (SERMs) compresi, ma non
limitati a: raloxifene, tamoxifene, toremifene.

3. Altre sostanze anti-estrogeniche comprese, ma non limitate a: clomifene,

ciclofenil, fulvestrant.

4. Agenti che prevengono l’attivazione del recettore per l’activina IIB compresi,
ma non limitati a: inibitori della miostatina.

5. Modulatori metabolici: 5.1 Attivatori della kinasi AMP-dipendente (es. AICAR)

e agonisti del Peroxisome Proliferator Activated Receptor δ (PPARδ) (e.g.
GW 1516); 5.2 Insulina e insulino-mimetici; 5.3 Meldonio; 5.4 Trimetazidina.
Goodyear LJ, New Engl J Med 2008, 359: 1842-1844
Cell IF = 32.41
Some natural nutrients and endogenous substances that bind or activate
PPARdelta are listed below. What are the side effects of these receptor
agonists? Vitality, strength and virility. No cancer, no heart disease,
etc.

Fish oil (yeah my favorite) -- DHA, EPA -- n-3 PUFAs

Vitamin D, Vitamin A -- heterodimer with PPARs via VDR and
RAR/RXR
Monounsaturated fatty acids (ie, olive oil)
Walnuts, Almonds (n-3 PUFAs, MUFAs)
Saturated fatty acids (our own adipose depots as burned with resistance
training/exercise; consumed)
Eicosanoids -- Prostacyclin (PGI2), carbaprostacycline (cPGI2)
Protein -- indirectly activates PPARdelta via mTOR signalling
Physical movement -- especially resistance training with weights
 “Topi maratoneti” e la “pillola dello sport”

Agonista PPARδ GW1516:  resistenza del 77%,  fibre “lente” del 38%
Agonista asse PPARδ-AMPK AICAR (p. dello sport):  percorrenza del 44% vs
controlli in topi “sedentari” trattati per 4 settimane
   Agonista recettore
PPAR-δ
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introduce the latest, most potent Drug Free performance substance to the animal
racing world*… TB-500 Synthetic Peptide. This exclusive formula is a patented
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Tβ4, a unique polypeptide of 43 amino acids was originally isolated in 1981 from
the thymus gland and is a potent mediator of cell migration and
differentiation. Tβ4 is different from other repair factors, such as growth factors, in
that it promotes endothelial and keratinocytemigration which enables it to travel
long distances through tissues.

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in virtually all human and animal cells,Thymosin Beta 4 (TB500). It is
a first-in-class drug candidate that promotes the following*:
- Endothelial (blood vessels) cell differentiation
- Angiogenesis (growth of new blood cells from pre-existing vessels)
in dermal tissues
- Keratinocyte migration
- Collagen deposition; and
- Decreases inflammation.

One of TB500 key mechanisms of action is its ability to regulate the

cell-building protein, Actin, a vital component of cell structure and
movement. Of the thousands of proteins present in cells, actin
represents up to 10% of the total proteins which therefore plays a
major role in the genetic makeup of the cell.
 Rischi ipotizzabili con il doping genico

A lungo termine
A breve-medio termine  Fibrosi
 Autoimmunità  Tumori
 Effetti avversi tipici dei fattori
 Sindrome simil-
stimolati
influenzale  Impossibilità di terapia genica
 Shock tossico
futura (immunità)

Legati alle modalità di trattamento

 Malpratica (vettore o via somministrazione inadeguati)

 Materiale contaminato (patogeni o allergeni)

 Mancanza di follow-up
 Rischi legati al doping genetico

Breve-medio termine:
autoimmunità, sindrome simil-
influenzale, shock tossico

A lungo termine: fibrosi, tumori,

effetti avversi tipici dei fattori
stimolanti

Fallahi et al., 2011