Trasportatori

secondary
active
transport
Cooperazione fra trasportatori
 Trasporto attivo
Trasportatori che necessitano di una fonte di energia per pompare un soluto in "salita" contro il suo
gradiente elettrochimico.
Pompe ATP-asi

421 pompe
3 "tipo P"di
ATPasi perché
ABC: F,si auto-fosforilano
tipodifferiscono
V sono durante
strutturalmente
"turbine
normalmente proteiche"
funzionano alil contrario:
dagli ciclo di di
ATPasi
pompaggio.
tipo
-usano P eil pompano
Trasferiscono
gradiente H +principalmente
Hin+ organelli
attraversocomepiccole
la molecole
lisosomi,
membrana vescicole
per
- Molte delle
attraverso
sinaptiche
guidare e pompe
le vacuoli
membrane
la sintesi ioniche
di
di ATPpiante responsabili
cellulari.
o lieviti,
dall'ADP e dalper nel determinare
acidificare
fosfato. Dove?
e mantenere
l'interno i gradienti
di questi di Na +, K +, H + e Ca2 +
organelli.
P-type ATPase

• Le cellule eucariotiche
mantengono concentrazioni molto
basse di Ca2 + libero nel citosol

• L'aumento intracellulare della

concentrazione di Ca2 + ha un
potente significato "comunicativo".

• È importante ridurre rapidamente

la concentrazione intracellulare di
Ca2 + dopo tale comunicazione.

In quale "stanza" la cellula ha molte

P-ATPase che svolgono questo
compito?
P-type ATPase
1) Nello stato non fosforilato, i due siti di
legame sono accessibili dal lato citosolico.
2) Il legame Ca2 + innesca cambiamenti
conformazionali che chiudono il passaggio
al citosol e attivano una reazione di
trasferimento del gruppo fosfato.
3) ADP si dissocia e viene sostituito con un
ATP, causando un altro cambiamento
conformazionale che apre un passaggio al
lume SR.
4) Due ioni H + e una molecola d'acqua
stabilizzano i siti vuoti di legame Ca2 + e
chiudono il passaggio.
5) L'idrolisi del legame labile fosforil-
aspartato riporta la pompa alla
conformazione iniziale e il ciclo ricomincia.
 Trasportatore ABC
• Contiene due domini ATPase
altamente conservati, sul lato
citosolico della membrana.

• Il legame ATP riunisce i due domini

ATPase e l'idrolisi ATP porta alla loro
dissociazione

• Questi movimenti dei domini citosolici

Un fenomeno correlato si verifica nel protista Plasmodium
falciparum, che causa la malaria. Più di 200 milioni di persone
sono infettate in tutto il mondo da questo parassita, che
rimane una delle principali cause di morte umana. Lo sviluppo
della resistenza ai farmaci della clorochina antimalarica ha
ostacolato il controllo della malaria. Il P. falciparum
resistente ha amplificato un gene codificante per un
trasportatore ABC che pompa la clorochina.
vengono trasmessi ai segmenti
transmembrane
• I primi trasportatori ABC eucariotici
identificati sono stati scoperti a causa
della loro capacità di pompare i
farmaci idrofobici al di fuori del citosol.
Quali ripercussioni cliniche implica?
(Video)
Altri tipi di trasporto

Proteine ​motorie:
contrazione muscolare

spostare i cromosomi alle estremità

opposte della cellula durante la mitosi

spostare gli enzimi lungo un filamento di

DNA durante la sintesi di una nuova
• L'idrolisi dell'ATP guida la
molecola di DNA transizione verso un
cambiamento
Come funzionano queste proteine? conformazionale
irreversibile

• L'intero ciclo va in una

sola direzione, facendo
avanzare continuamente
la molecola proteica verso
destra
Trasporto assonale
• Nei neuroni la maggior parte delle
proteine ​sono prodotte nel corpo
cellulare dagli mRNA.
• Assoni e terminali si trovano spesso
a grandi distanze dal corpo
cellulare.
• La diffusione passiva è troppo lenta
per rilasciare vescicole, particelle o
persino singole macromolecole su
questa grande distanza.
• I meccanismi di trasporto sono
cruciali per sostenere la funzione di
queste regioni remote.

Nel 1948 Paul Weiss dimostrò per

la prima volta il trasporto assonale
legando un nervo sciatico e
osservando le conseguenze.
 Trasporto assonale
Due domini motori a teste globulari sono legati a
una coda coiled-coil

• Chinesina -> responsabile del trasporto

assonale anterogrado veloce, del rapido
movimento dei mitocondri, dei precursori
delle vescicole secretorie e di vari
componenti delle sinapsi verso l'estremità
distale (+).
• Dineina citoplasmatica -> responsabile del
trasporto assonale retrogrado (meno).
 Trasporto assonale

1- Uno dei due domini motori, la testa globulare "in ritardo", è

strettamente legata al microtubulo e all'ATP, mentre la testa anteriore è
debolmente legata al microtubulo con ADP nel suo sito di legame.

2- Lo spostamento in avanti del dominio motore posteriore è guidato

dalla dissociazione dell'ADP e dal legame dell'ATP nella testa
principale

3- Il legame dell'ATP a questo dominio motorio fa sì che un piccolo

peptide chiamato "neck linker" cambi la sua conformazione. Questa
modifica spinge la testa posteriore in avanti, una volta staccata dal
microtubulo (associata ad ADP).

4- La molecola di chinesina è ora pronta per il passaggio successivo,

che procede con una ripetizione esatta del processo mostrato
Trasporto assonale
Trasporto assonale
Trasporto assonale: radioisotopic pulse labeling
Trasporto assonale
A. Il fronte d'onda avanza a
circa 400 mm/giorno, che
corrisponde a circa 4,5 μm /
s. L'ampio plateu di
radioattività che si "trascina"
dietro il fronte d'onda,
suggerisce la "deposizione"
di molti carichi trasportati
lungo l'assone

B. L'onda abbastanza
simmetrica di radioattività,
che avanza a una velocità
media di circa 1 mm/giorno,
400 volte più lenta del
trasporto assonale veloce.
Trasporto assonale
Trasporto assonale

Video
 Il trasporto assonale è utile nella ricerca?

HSV viene iniettato

nell'area di interesse e,
dopo diversi giorni, gli
animali vengono perfusi
ed processati per Le scimmie
immunoistochimica con sono state Dopo 4 giorni il cervello è stato sezionato e
anticorpi contro le iniettate nella immunocolorato per l'antigene virale.
proteine ​HSV. regione della Le micrografie mostrano che il virus è stato
corteccia trasportato dalla corteccia motoria primaria ai
motoria primaria neuroni di secondo ordine nei nuclei pontini e
che controlla il quindi ai neuroni di terzo ordine nella
braccio. corteccia cerebellare.
… e in clinica?

cause-correlation fallacy:
“correlation implies causation”

Table
Axonal transport in disease