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e soluzioni
(materiali biologici)
I tr (ν ) = I 0 (ν )e −α (ν ) L
Nel caso di una soluzione:
α = α 'c ⇒ =
α ε (λ ) ⋅ c dove ε (λ ) coefficiente di estinzione molare (è una funzione)
Io Itr
Molecola+
soluzione ln Itr/I’o
Foto
rilevatore
soluzione
I’o
I tr= I o ⋅ e −[ε ci +α ] L
' −α L
I o= I o ⋅ e
= > I o =⋅I o ' e −α L = I o ' e −ε ci L
> I tr =⋅
I tr
ln = −ε cL
Io'
Io
ln Itr/Io
ε1, c1
ε 2, c 2
I tr
ln − ( ε1c1 + ε 2 c2 ) L
=
Io
2 – S. Martinoia AA2017-18
Se le specie sono n:
n
I tr
ln = −∑ ε i ci L
Io i =1
I tr
ln − ( ε1 (λ1 ) c1 + ε 2 (λ1 )c2 ) L
=
Io λ1
ln I tr − ( ε1 (λ2 ) c1 + ε 2 (λ2 )c2 ) L
=
I
o λ2
Fluorescenza
Ci sono salti quantici da parte degli elettroni negli orbitali della molecola in questione
# fot.emessi
Q=
# fot.assorbiti
0 ≤ Q ≤1
Per far assorbire luce si può utilizzare 1 fotone o 2 fotoni (sono 2 fotoni inviati in
sequenza ravvicinata (100fs). Esistono molecole fluorescenti in grado di assorbire con un
3 – S. Martinoia AA2017-18
picco in una lunghezza d’onda ed emettere luce con un picco ad una lunghezza d’onda
maggiore (shift di Stokes).
In assenza di riassorbimento
−α ( λ fluo ) L
= =
I fluo QI ass QI 0 (1 − e )
λ fluo ≠ λass
λ fluo ≥ λass
In presenza di ri-assorbimento
Io Ifluo
x x+dx
I tr = I o e −ε1cx
dI tr
= −ε1cI o e −ε1cx
dx
dI tr = −ε1cI o e −ε1cx dx
4 – S. Martinoia AA2017-18
In dx il sistema ha assorbito -d I tr , quindi:
∫ Qε cI e
− ε 2 cx
=I fluo ,r 2 o ⋅ e −ε1c ( L − x ) dx
0
L
=I fluo ,r Qε 2 cI o e −ε1cL ⋅ ∫ e − (ε 2 −ε1 ) cx dx
0
− ε1cL
Qε 2 I o e
=
⇒ I fluo ,r
ε1 − ε 2
(e − ( ε 2 −ε1 ) cL
− 1)
I fluo QI 0 (1 − e −ε1cL )
=
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