• QUI

La superfamiglia delle chemochine

nomenclature
New Old Cell type Receptors
 Chemokine biological activities

Chemotaxis-related
Leukocyte recruitment:
1 leukocyte adhesion (CX3CL1)
2 integrin activation Amplification of immune responses (innate and specific)
3 leukocyte guidance in tissues
Chemotaxis-unrelated
- Modulation of angiogenesis and fibrosis
- Modulation of differentiation and proliferation of hematopoietic precursors
- Role in ontogeny (CNS and vasculature)
- Control of cell survival
- Phagocyte activation and T cell costimulation
- Gene expression regulation
LAD: Leukocyte-adesion deficiency;
LAD-1: assenza di LFA-1, MAC-1;
LAD-2: assenza di fucosiltransferasi essenziale per sintesi di sLex
(Glutamic acid-Leucine-Arginine; 'ELR' motif)
before the first cysteine
Regulation at the level of chemokine production
CX3CL1
CCL16 CCL2 CCL3
CCL4
CCL14 CCL5 CCL7
CCL17
CCL15 CCL8
CCL19 CCL11 CCL13
CXCL12 CCL20
CCL1 CCL23
CCL18 CCL22
CCL3L1
XCL2 CCL28
CCL21 CCL24
CCL25
(lymphocytes and DC
XCL1 CXCL1 CCL26
in lymphoid organs) CXCL1
CXCL2 CXCL3
CXCL5
CXCL5
CCL27 CXCL8 CXCL7
(cutaneous sites) CXCL13 CXCL8
CXCL9
CXCL9 CXCL10
CXCL10
CXCL11
CXCL11

Constitutive Inducible
Normal leukocyte traffick Inflammation and immunity
(modified form Mantovani et al. Immunol Today, 1999)
Chemokine-Chemokine Receptor Interaction

Interazione chemochina/recettore

Gi (non Gq)
aumento intracellulare di calcio CC signaling

acido arachidonico
attivazione di enzimi (fosfolipasi, proteine chinasi)
{ MAPK, fosfolipasi A2 (cPLA2)
Ruolo dei fattori chemiotattici nel reclutamento leucocitario
Attivazione integrinica

eg. LFA-1, Mac-1

ICAM-1
Codice del reclutamento leucocitario
Il sistema delle chemochine

(CXCR7)
The chemokine system

Neutrophil recruitment:
CXCR1 & CXCR2

Type 1 inflammation:
CXCR3 & CX3CR1

Monocyte recruitment:
CCR1, CCR2 & CCR5

Type 2 inflammation:
CCR3 & CCR4

Inflammatory

Omeostatic

Inflammatory
&
omeostatic
 Network citochinico nella risposta infiammatoria
HPAA: Citochine Ipofisi ACTH surrene glucocorticoidi
asse ipotalamo-ipofisi-surrene

Classificazione funzionale citochine: a) emopoietiche, b) dell’immunità specifica;

c) infiammatorie primarie; d) anti-infiammatorie o immunosoppressive; e) infiammatorie secondarie (chemochine)
Activation and differentiation of T lymphocytes

(L-selectin)
Il sistema di IL-1 (IL-1α e IL-1β) ICE: IL-1 converting enzyme

Agisce su cellule sistema immunitario e ipotalamo (IL-6-PGE2-effetto pirogeno). Anoressia e astenia

sono segni dell’infiammazione sistemica. Glucocorticoidi antagonizzano effetti di IL-1

Promuove sintesi prostacicline e NO-vasodilatazione

Induce cascata procoagulante (induce TF e attività procoagulante). Promuove fase acuta via IL-6.
Inibisce contrattitilà cardiaca e catabolismo proteico
 Decoy chemokine receptors

Duffy antigen receptor for chemokines
human malarial parasites
Plasmodium vivax and
Plasmodium knowlesi.
“filter structures”, such as placenta Pulmonary sarcoidosis,
and lymphatic afferent vessels. Breast cancer
Trophoblasts: cells forming the outer layer
of a blastocyst, which provide nutrients to
the embryo and develop into a large part of
the placenta.
 CHEMOCHINE E TUMORI

Mechanism of TAM’s recruitment by solid tumors

Richmond A.
Nat. Rev. Immunol. 2002

CXCRs
NF-kB
Cancer Research 2007
Gut 2010
Involvement of the chemokine receptors on the metastasis formation

Source: N Engl J Med, Murphy P.M.,

Vol. 345, 2001
CXCL12 TCA-3

CXCL1
CXCL2
CXCL3
CXCL8

CXCL9
CXCL10
CXCL11

CCL5, CCL5
RANTES CCL18 CCL9/10
CCL11,
CCL114
eotaxin
CCL15
CCL16
CCL2,
MCP-1
Nature Reviews Drug discovery
Cellule e tessuti del sistema
immunitario
 Innate immunity Adaptive immunity

Specificity For structures shared by classes of For structural detail of microbial molecules
microbes (antigens); may recognize nonmicrobial
("pathogen-associated molecular antigens
patterns")

Receptors Encoded in germline; limited diversity Encoded by genes produced by somatic

("pattern recombination of gene segments; greater
recognition receptors") diversity

Distribution of Nonclonal: identical receptors on all Clonal: clones of lymphocytes with

receptors cells of the same lineage distinct specificities express different
receptors

Discrimination Yes; host cells are not recognized or Yes; based on selection againstself-reactive
between self and they may lymphocytes; maybe imperfect (giving rise
nonself express molecules that prevent innate toautoimmunity)
immune reactions
Classi di “Pattern Recognition Receptors”

RIG-I-like receptor (RLR)

IFN-dependent-
TRIF-IRF3
Properties of pattern recognition receptors (innate immunity)
Pattern recognition receptors (innate immunity)

TLRs fMLPR CD206 CD36

Adaptive immunity (B cells)
Adaptive Immunity (B + T cells)
Figure 2-1 Cellular locations of pattern recognition molecules of the innate immune system. Some pattern recognition molecules of the TLR family, such as TLRs 2, 4,
and 5, are expressed on the cell surface, where they may bind extracellular pathogen-associated molecular patterns. Other TLRs are expressed on endosomal
membranes, such as TLRs 3, 7, 8, and 9, all of which can recognize nucleic acids of microbes that have been phagocytosed by cells. Cells also contain cytoplasmic
sensors of microbial infection (discussed later in the chapter), including the NLR family of proteins, which recognize bacterial peptidoglycans, and a subset of CARD
family of proteins, which bind viral RNA.
 Figure 2-2 Mammalian TLRs: specificities, basic signaling mechanisms, and cellular responses. Ligands for TLRs are shown together with dimers of the TLRs that
specially bind them. Note that some TLRs are expressed in endosomes and some on the cell surface (see Fig. 2-7). The basic steps in TLR signaling, illustrated only for
TLR3 and TLR4, are applicable to all TLRs. Further details about the signaling pathways are described in Box 2-1.
Components Principal Functions
Barriers
Epithelial layers Prevent microbial entry

Defensins/cathelicidin Microbial killing

Intraepithelial lymphocytes Microbial killing

Circulating effector cells

Neutrophils Early phagocytosis and killing of microbes

Macrophages Efficient phagocytosis and killing of microbes, secretion of cytokines that stimulate inflammation

NK cells Lysis of infected cells, activation of macrophages

Circulating effector proteins

Complement Killing of microbes, opsonization of microbes, activation of leukocytes

Mannose-binding lectin Opsonization of microbes, activation of complement (lectin pathway)

(collectin)

C-reactive protein (pentraxin) Opsonization of microbes, activation of complement

Cytokines
TNF, IL-1, chemokines Inflammation

IFN-α, -β Resistance to viral infection

IFN-γ Macrophage activation

IL-12 IFN-γ production by NK cells and T cells

IL-15 Proliferation of NK cells

IL-10, TGF-β Control of inflammation

Defensins are small cysteine-rich cationic
proteins found in both vertebrates and
invertebrates. They have also been
reported in plants. They are active against
bacteria, fungi and many enveloped and
nonenveloped viruses. They consist of 18-
45 amino acids including six (in
vertebrates) to 8 conserved cysteine
residues. Cells of the immune system
contain these peptides to assist in killing
phagocytized bacteria, for example in
neutrophil granulocytes and almost all
epithelial cells. Most defensins function
by binding to the microbial cell
membrane, and, once embedded, forming
pore-like membrane defects that allow
efflux of essential ions and nutrients.
Cellule dell’immunità innata
55-70%

1-4%

0,1-1%

2-8%

20-30%
 Ematopiesi

Durante lo sviluppo fetale l’emopoiesi si svolge dapprima nel

sacco vitellino, successivamente nel fegato e nella milza, e infine
nelle ossa. La maggior parte delle cellule è incapace di ulteriore
divisione e, avendo vita relativamente breve, è rimpiazzata
continuamente da nuovi elementi provenienti dal midollo osseo. I
globuli rossi, i globuli bianchi e le piastrine derivano da un’unica
cellula staminale emopoietica pluripotente
B Menu F
EFFECTOR CELLS OF ADAPTIVE IMMUNITY

-T cells (Antigen specific)

Strict requirement of Antigen expression
-B cells (antibodies)

EFFECTOR CELLS OF INNATE IMMUNITY

-NK cells
-Macrophages No requirement of Antigen expression
-Neutrofili
Neutrofilo
 Neutrofilo (polimorfonucleati: nuclei multilobati)
Svolgono 4 funzioni fondamentali
-fagocitosi professionale potenziata da recettori per il complemento (CR) e per anticorpi (di classe
G->FcγR) *
-digestione dei patogeni attraverso il rilascio di radicali liberi e sostanze ossidanti (respiratory
burst) contenute nei cosiddeti granuli primari
-rilascio di fattori chemotattici e di mediatori infiammatori contenuti nei cosiddeti granuli
secondari
-rimozione (o induzione) di danni tissutali attraverso il rilascio di gelatinasi (digerisce il connettivo)
contenuta nei cosiddeti granuli terziari

contenuto contenuto
granuli granuli
primari secondari
azzurrofili: (Enzymes:
lysozime,
Enzymes and
collagenase,
microbicidal
Elastase)
substancies
(defensins, contenuto
cathelicidin)
Granuli
Terziari:
Collagenasi
Gelatinasi

G-CSF
grow factor
 Meccanismi battericidi: i granuli
I granuli primari (azzurrofili)
Sono primariamente coinvolti nello
sviluppo di attività antibatterica in
sede fagolisosomale, cui forniscono
molecole ad attività antibatterica
diretta, proteine cationiche e
molecole coinvolte nella generazione
di ROI (mieloperossidasi).
ipoclorito
I granuli secondari Svolgono
primariamente attività antibatterica
in sede extracellulare.

Le vescicole di secrezione
trasferiscono in membrana proteine
ad attività recettoriale.
Witko-Sarsat et al. Neutrophils: molecules,
functions and pathophysiological aspects.
Laboratory Investigation 80: 617-53, 2000.

Attività microbicida Attività batteriostatica Attività catabolica Attività recettoriali

Mieloperossidasi Lattoferrina Collagenasi Recettore peptidi formilati
Azzurrocidina Proteina legante B12 Gelatinasi Recettori di IL-8
Defensine Elastasi Recettore di laminina
Catelicidine Istaminasi Reterrore di vitronectina
Lisozima β-glucuronidasi CR1 (CD35)
Proteinasi 3 α-mannosidasi CR3 (CD11b/CD18)
Catepsina G β-glicerofosfatasi Fcγ-RIII (CD16)
BPI
 Reclutamento e attivazione
dei granulociti neutrofili

PMN circolanti

Agenti chemiotattici
(fMLP, IL-8, C5a)

PMN reclutati

Attivatori
(PAMPs, IL-1, TNF)

PMN infiammatori

Fagocitosi e attività Rilascio di citochine

antimicrobica

“multistep navigation model”

Dopo avere aderito ad endotelio infiammato nella sede di infiammazione, i PMN extravasano e
rispondono a successive combinazioni si agenti chemiotattici. L’aumento delle capacità adesive e le
prime fasi di invasione tissutale sono indotte da agenti chemiotattici derivati dalla cascata
complementare (C5a) e dall’attivazione della cascata dell’arachidonato (PAF). Nel tessuto PMN
rispondono ad agenti chemiotattici prodotti da cellule stromali (chemochine), e sono localizzati in
prossimità dell’agente patogeno da agenti chemiotattici derivati dal patogeno stesso (formilpeptidi). La
direzione del movimento è determinata sia dal gradiente dello stimolo che da meccanismi di
desensitizzazione recettoriale eterologa.
Funzioni granulocitarie
La fagocitosi

Interazione e fagocitosi di uno streptococco

da parte di un granulocita neutrofilo

Neutrofili (in verde) impegnati nella fagocitosi

di particelle di lattice opsonizzate (in rosso)
Le tappe della fagocitosi
1) Riconoscimento
Alcuni componenti sierici facilitano la fagocitosi e
sono globalmente indicati quali “opsonine”. Alcune
frazioni complementari (C3b) e classi anticorpali
(IgG1 e IgG3) svolgono nell’uomo questa funzione
interagendo con specifici recettori cellulari (IgG1-
IgG3=FcgR; C3b=C3bR) che attivano il processo di
fagocitosi

2) Ingestione
Pseudopodi cellulari avvolgono la particella da
ingerire, fino ad includerla in un vacuolo di
neoformazione (fagosoma)

3) Uccisione
Il fagosoma si fonde con un numero variabile di
lisosomi dando il fagolisosoma e il patogeno è
esposto all’azione di un largo pannello di enzimi litici.
La fagocitosi porta alla produzione di metaboliti
reattivi dell’ossigeno che esplicano azione
battericida. Fagociti attivati da citochine
proinfiammatorie esprimono una forma inducibile di
monossido di azoto sintetasi caratterizzata dalla
capacità di produrre grandi quantità di monossido di
azoto, dotato anche esso di attività battericida.

4) Digestione
Degradazione nel fagolisosoma di macromolecole di
origine esogena ad opera di varie attività
enzimatiche. Nel caso di macrofagi segue la
presentazione antigenica nel contesto MHC classe II
e l’avvio di una risposta specifica
Meccanismi di “escape” della fagocitosi

1) Riconoscimento
Alcuni batteri operano meccanismi di “masking” e
prevengono in questo modo la fagocitosi ad opera
2
di PMN (ex: Yersinia enterocolitica, Salmonella
spp., Listeria spp.)

2) Ingestione
Legato al blocco del meccanismi di formazione
del vacuolo di fagocitosi (ex: group A streptococci).

3 3) Uccisione
Molti agenti patogeni bloccano la generazione di
ROI

4) Digestione
Determinato dal blocco della maturazione del
fagosoma
4

Allen LA. Mechanisms of pathogenesis: evasion killing by

polymorphonuclear leukocytes.
Microbes and infection 5: 1329-35, 2003.
Fagocitosi e distruzione intracellulare dei microbi
 Filmato fagocitosi
• Qui
 Funzioni dei macrofagi
• Immunità innata:
• Fagocitosi dei microbi e loro distruzione
• Produzione di citochine e chemochine
• Secrezione di enzimi e fattori di crescita (es.: fattore di crescita piastrinico), che stimolano crescita
di endotelio e fibroblasti, contribuendo a riparazione dei tessuti
• Produzione di IFNα (attività antivirale)

• Immunità specifica:
• Presentazione dell’antigene ai linfociti T
 Morfologia dei fagociti mononucleati

Monocytes are 10 to 15 μm in diameter, and they have bean-shaped nuclei and finely granular cytoplasm
containing lysosomes, phagocytic vacuoles, and cytoskeletal filaments

A. Light micrograph of a monocyte in a peripheral blood smear.

B. Electron micrograph of a peripheral blood monocyte.
C. Electron micrograph of an activated tissue macrophage showing numerous
phagocytic vacuoles and cytoplasmic organelles.
 Maturazione dei fagociti mononucleati

Monocytes are 10 to 15 μm in diameter, and they have bean-shaped nuclei and finely granular cytoplasm containing
lysosomes, phagocytic vacuoles, and cytoskeletal filaments.

Once they enter tissues, monocytes cells mature and become macrophages. Macrophages may assume different morphologic
forms after activation by external stimuli, such as microbes. Some develop abundant cytoplasm and are called epithelioid
cells because of their resemblance to epithelial cells of the skin.

Activated macrophages can fuse to form multinucleate giant cells.

Macrophages in different tissues have been given special names to designate specific locations. For instance, in the central
nervous system, they are called microglial cells; when lining the vascular sinusoids of the liver, they are called Kupffer
cells; in pulmonary airways, they are called alveolar macrophages; and multinucleate phagocytes in bone are called
osteoclasts.
Tumour cells co-opt macrophage functions

Macrophages aid in the invasion of

epithelial cells during morphogenesis
(left) and are co-opted by tumor cells
during metastasis (right). Multiphoton
image at the bottom left: epithelial
cells (blue) of a terminal end bud in
a mouse mammary gland during
normal glandular development. The
bud is surrounded by macrophages
(red) that precede the invasion of the
fat pad by the epithelial cells.
Multiphoton image at the bottom
right: tumor-associated macrophages
(red) and tumor cells (green) at an
invasive edge in a mouse mammary
tumor.

Condeelis J and Pollard JW Cell 2006

Macrophage lineages
Marcatori Macrofagici
Differentiation and distribution of mononuclear phagocytes. Distinct subpopulation of circulating
Monocytes ate thought to give rise to resident tisue macrophages, DC and osteoclasts compared
With cells recruited by an inflammatory or immunologic stimulus. Further, heterogeneity arises
from microenvironmental stimuli such as cytokines and microbial products
Funzioni dei macrofagi

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 POLARIZATION OF MACROPHAGE FUNCTION:
A SIMPLIFIED VIEW
M1 M2
Th2 RESPONSES;
Th1 RESPONSES TYPE II INFLAMMATION; ALLERGY;
FUNCTIONS TYPE I INFLAMMATION; DTH KILLING AND ENCAPSULATION OF PARASYTES;
KILLING OF INTRACELLULAR PARASYTES MATRIX DEPOSITION AND REMODELLING;
TUMOR RESISTANCE TUMOR PROMOTION

TGFβ
IL-23 IL-1 IL-10
IL-12high TNF Decoy IL-1RII
IL-10low IL-6 IL-1ra
RNI
ROI Polyamine

SR
MHCII
Arg MR
iNOS MHCII

LPS IFNγ or TNF

IL-4 and IL-13 CSF-1 IL-10
immune
complexes
+ IL-1/LPS
 M1 M2
TNFα
IL-12
CXCL9
CXCL10
CXCL11
IL-10
CCL2
CCL17
CCL22
Arginase I

M1(early) M2 (late)

Myc. Tub.
 Polarizzazione macrofagica

Membrane receptors
SR-A
SR-B
CD163
MR
TLR2, TLR4
CD14
Fcγ-RI, II, III (CD16, CD32, CD64)
Fcε-RII (CD23)
CD80, CD86
Cytokines
IL-12
IL-23
M1 IL-10
IL-10
M2
(IFNγ-LPS/TNF) TNFα (IL-4/IL-13/IL-10/IC+LPS)
IL-1
IL-1 ra
IL-6
Microbicidal activity type I IFN Scavenging activity
Immuno-stimulatory functions IL-1 RI Tissue repair
decoy IL-1 RII
Tumour cytotoxicity Effector molecules Angiogenesis
RNI
polyamines
Immuno-suppression
ROI

IFNγ / LPS IL-10 IL-4 / IL-13 IL-4 / IL-13 / IL-10 IC+LPS

 Chemokine repertoires of polarized
mononuclear phagocytes

M1 Th1
M2 Th2
Polarized immune response (M1/Th1 vs M2/Th2) in disease

Protozoa infections:
Trypanosoma cruzi (IFNγ) Helminth infections:
Leishmania (IFNγ, iNOS) Taenia crassiceps
Toxoplasma Gondii (IFNγ) Schistosoma Mansoni

Allergy MO
M2/
M1/Th2
Th1 Sepsi
atopic dermatitis

Viruses Chronic inflammation

(HIV, CMV)

Cancer Autoimmune diseases

Qui
 Funzioni delle cellule NK

Le cellule NK sono una popolazione di linfociti

già pronta ad uccidere; hanno infatti granuli
citoplasmatici comprendenti perforina e
Granzyme A e B. La perforina è simile al C9 del
complemento; esiste in due forme: attiva
(idrofobica) e inattiva (idrofila). Essa polimerizza
formando pori acquosi sulla cellula da uccidere.
Le molecole più importanti sono granzyme A e B
che inducono apoptosi (morte programmata simil
suicidio) nella cellula stessa. La lisi della cellula
bersaglio sia essa tumore o infettata da virus
avviene grazie a 2 meccanismi: una lisi osmotica
dovuta ai pori, ma soprattutto per il fatto che
attraverso questi pori vengono introdotti nel
bersaglio granzyme A e B inducenti apoptosi, in
modi differenti:
─ A: causa grossolani tagli al DNA
─ B attiva le vie classiche dell'apoptosi (cascata
delle caspasi).

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© 2005 Elsevier
Le cellule NK e i linfociti T hanno recettori complementari
Activating and inhibitory receptors
of NK cells.
A. Activating receptors of NK cells
recognize ligands on target cells and
activate protein tyrosine kinase
(PTK), whose activity is inhibited by
inhibitory receptors that recognize
class I MHC molecules and activate
protein tyrosine phosphatase (PTP).
NK cells do not efficiently kill class I
MHC-expressing healthy cells.

B. If a virus infection or other stress

inhibits class I MHC expression on
infected cells, and induces expression
of additional activating ligands, the
NK cell inhibitory receptor is not
engaged and the activating receptor
functions unopposed to trigger
responses of NK cells, such as killing
of target cells and cytokine secretion.
Il CD16: un recettore attivatorio che promuove ADCC

Le cellule NK esprimono il CD16, un recettore per la regione Fc delle IgG (v. Struttura
degli anticorpi, più avanti), e possono utilizzare questo recettore per mediare un altro tipo
di lisi cellulare che non presenta restrizione MHC. La citotossicità cellulo-mediata
anticorpo-dipendente (Ab-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity, ADCC) dipende dalla
presenza di Ac che riconoscono una cellula bersaglio (la sua specificità è pertanto dovuta
alla specificità dell'Ac). In seguito al legame con il suo Ag, la regione Fc dell'Ac viene
esposta e si lega poi al suo recettore sulla cellula NK per formare un ponte molecolare.
Una volta formato il ponte, alla cellula bersaglio viene trasmesso un segnale litico ancora
non del tutto compreso, il quale ne determina la morte.
EFFECTOR CELLS OF INNATE IMMUNITY
 LE CELLULE NK POSSONO MEDIARE LA
CITOTOSSICITA’ ANTICORPO DIPENDENTE (ADCC)
 Lez 8
• Adaptive (specific) immunity