Se activó la producción de ácido láctico de alta velocidad a partir de desechos de alimentos y

desechos lodo a través del control interactivo del ajuste del pH y la fermentación temperatura.

RESUMEN

El ácido láctico, una plataforma versátil molecular, podría ser bioproducida por la fermentación
sinérgica de residuos alimenticios (FW) con lodo activado residual (WAS), que era un proceso de
consumo básico y requería un mayor tiempo de fermentación de 5 días a temperatura ambiente.
Para lograr la fermentación de ácido láctico de alta velocidad en un corto tiempo con menor
consumo alcalino, se desarrolló una nueva estrategia a través de una base menos intermitente.
Además a una temperatura más alta. Los resultados indicaron que la producción de ácido láctico
de alta velocidad fue rápidamente observado a los 3 d ya sea en fermentación mesófila de alcalino
débil (25.51 g DQO / L a pH 9) o termófilo de neutro (21.01 g COD / L a pH 7), en el cual el ácido L-
láctico fue el isómero más prevalente en ambos casos. La metodología de superficie de respuesta
(RSM) verificó el efecto de interacción de alcalina el ajuste y la temperatura fueron significativos
para la producción de ácido L-láctico y total, pero no para el de D-ácido láctico. Esto se debió a la
influencia inconformista de la adición de bases y la temperatura en cada metabólico paso
fermentativo Aunque la solubilización y la etapa de hidrólisis se incrementaron con el ascenso de
el pH y la temperatura, la producción de ácido láctico solo se mejoró con la alcalinidad débil de la
fermentación mesófila, pero contrariamente suprimido en condiciones termófilas. Mientras tanto,
las estructuras comunitarias microbianas variaron significativamente de cada reactor, lo que
confirmó los efectos de interacción del ajuste del pH y la fermentación temperatura de producción
de ácido láctico.

1. Introducción

Enfrentando la escasez de combustibles fósiles próximamente, es un reciente vibrante estudio

para convertir los residuos renovables ricos en materia orgánica en versátiles productos químicos
de plataforma y combustibles alternativos mediante la fermentación anaeróbica proceso, que es
confiable para conservar la mayor parte de la energía desde la corriente de desechos hasta el
espectro del producto [1,2]. Con rápido urbanización en todo el mundo, el desperdicio de
alimentos (FW), que enriquece cantidad de carbohidratos disponibles, se produce 1,6 giga
toneladas anualmente, que se ha convertido en uno de los más desechos orgánicos [3]. La
fermentación tradicional enriquece el metano el biogás de FW se atribuye al enfoque de energía
renovable, que a menudo es problemático debido al estricto requisito de velocidad de carga y pH.
Esta vulnerabilidad es el resultado del lento crecimiento y la sensibilidad de metano que produce
archaea [4]. Cambiar el foco de metanogénesis

a producto de acidificación principalmente estable es de gran atractivo para recuperar energía

química de desechos renovables [5]. Enraizado en este sentido, el ácido láctico ha recibido mucha
atención como molecular esencial en la llamada plataforma de carboxilato concepto, que une
abundantes desechos de polisacáridos precursor del valor agregado para el portafolio de química
tradicional (como ácido acrílico, acetaldehído, pentanodiona, ácido pirúvico y otros) [6, 7].

Especialmente, el monómero puede polimerizarse en una novela ácido poliláctico plástico

biodegradable (PLA), que tiene el potencial para reemplazar los plásticos derivados de fósiles y
ejercer el impacto positivo en el medio ambiente, como se muestra en la figura S1. Varios estudios
demostraron que el ácido láctico podría obtenerse únicamente a través de la fermentación FW
utilizando un consorcio microbiano mixto indígena en termófilo condición [8,9]. Pero la mayoría de
ellos sufrieron bajo rendimiento de lactato del sustrato (solo 0,227 g de ácido láctico por inicial)
demanda química total de oxígeno del sustrato) [9]. Para mejorar la eficiencia de conservación de
energía química de Residuos, co-fermentación de FW con residuos de lodo activado (WAS), que
contiene el complejo de varios microorganismos del plantas de tratamiento de aguas residuales,
muestra ventajas en la sinergia efectos de mejorar la hidrólisis y el proceso de acidificación. Pero
hasta ahora, la principal preocupación hacia la co-fermentación de desechos orgánicos todavía se
centran en enriquecer metano biogás o mezcla de la producción de ácidos grasos volátiles (AGV)
[10,11]. Porque es todavía desafía a separar la acidogénesis de lactato de la generación de AGV,
que produjo la mezcla de mezcla de subproductos no deseados en un sistema abierto (sin
esterilización de desechos orgánicos). Ácido láctico, como intermediario de metabolización rápida
por microbios mixtos consorcio, es fácilmente ignorable en la etapa de fermentación
principalmente

[12]. Por lo tanto, entender el comportamiento metabólico del ácido láctico generación y consumo
de los cosustratos, así como la variación de su pureza óptica también es imprescindible para
regular la fermentación de las moléculas aguas abajo, que sigue siendo en gran parte desconocido
en el presente. Recientemente, se logró una acumulación estabilizada de ácido láctico en 5 d por
co-fermentación FW y WAS a través de ajuste alcalino a pH 11 a temperatura ambiente [13]. Sin
embargo, el fuerte alcalino el ajuste fue de gran costo químico básico para la operación del
proceso. Mientras tanto, se produjo una inhibición significativa de la producción de ácido láctico
también se observó durante los primeros 4 días de fermentación alcalina, que dedujo que no era
la condición intrínsecamente óptima para el láctico bacteria productora de acido En consecuencia,
todavía había un gran potencial para aumentar la tasa de producción de ácido láctico. Podría ser
así asumió que el ajuste intermitente de pH a débil alcalino o neutro la condición también podría
acelerar la tasa de producción de ácido láctico, que en el otro aspecto guarda la dosificación de
base. Normalmente, la condición ambiental siempre resultó en una menor reacción bioquímica
tasas comparadas con el proceso mesofílico y termófilo. A fin de que aumentar la tasa de
solubilización, hidrólisis y la producción de ácido láctico, adición de base intermitente a una
temperatura más alta. puede dar como resultado una alta tasa de conversión de sustrato a láctico
ácido. Sin embargo, hasta ahora, no hay ninguna referencia disponible con respecto a producción
de ácido láctico de alta velocidad a partir del FW de co-fermentación ESTABA al mismo tiempo que
regulaba el ajuste intermitente del pH y temperatura de fermentación.

Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue revelar la combinación influencia del ajuste
intermitente del pH y la temperatura de fermentación en la producción de ácido láctico de alta
velocidad y la variación de lactato pureza óptica. El efecto de interacción fue verificado por el
análisis RSM. Además, los hechos de lo que sucedió en cada paso metabólico involucrados en la
generación de lactato fueron elaborados. Entonces, lo microbiano estructuras responsables del
metabolismo del ácido láctico fueron exploradas a través de la tecnología de secuenciación
metagenómica.

2. Materiales y métodos
2.1. WAS y FW

El WAS utilizado en este estudio fue retirado de la secundaria tanque de sedimentación de una
EDAR en Shanghai, China, y se concentró estableciéndose a 4 C durante 24 h. Las principales
características de lodo concentrado fueron los siguientes: pH 6.7 ± 0.2, total suspendido sólidos
(TSS) 13,219 ± 57 mg / L, sólidos suspendidos volátiles (VSS) 9187 ± 11 mg / l, demanda total de
oxígeno químico (TCOD) 13,668 ± 75 mg / l, demanda de oxígeno químico soluble (SCOD) 62 ± 1
mg / L, proteína total 7232 ± 51 mg DQO / L y carbohidratos totales 1132 ± 62 mg COD / L. FW,
que se obtuvo de la escuela cantina, se molió a estado de suspensión y se diluyó con agua del
grifo. A menos que se indique lo contrario, las características finales fueron las siguientes: TSS
222,635 ± 2498 mg / L, VSS 221,720 ± 2497 mg / L, TCOD 176,555 ± 2448 mg / L. FW y WAS se
mezclaron a proporciones de VSS (g / g) como 6.0. Se añadió agua del grifo para diluir el sustrato
hasta una TCOD de 38,270 ± 889 mg / L.

2.2. Fermentación mesófila y termófila para ácido láctico

producción a pH diferente Los experimentos de fermentación discontinua se realizaron en 12

fermentaciones reactores. Cada reactor fue preparado con 1 L de volumen de trabajo y se agitó
mecánicamente a 120 rpm. Los sustratos fueron dividido en dos grupos, que fueron fermentados
en mesófilos (35 ± 1 C) y temperatura termófila (50 ± 1 C) a través del agua bañera. El valor de pH
en cada grupo se ajustó intermitentemente cada 6 h por hidróxido de sodio (10 M) y ácido
clorhídrico (3 M) por 7, 8, 9, 10, 11 y pH no controlados como prueba en blanco, respectivamente.
Muestras se tomaron para analizar el contenido de ácido L-láctico, ácido D-láctico, AGV, proteínas
solubles e hidratos de carbono todos los días. Para evaluar los efectos del pH y la temperatura
sobre la eficacia de la solubilización, la reducción de VSS y el grado de solubilización registrado
después del Día 1. Las actividades de las enzimas clave relevantes a hidrólisis como, a-glucosidasa
y proteasa se analizaron después

Día 2. La actividad de lactato deshidrogenasa dependiente de NAD (nLDH, la enzima responsable

de la producción de ácido láctico) fue registrado cuando se alcanzó el ácido láctico máximo.

2.3. Metodología de superficie de respuesta (RSM)

Design Expert Software (versión 8.05, Stat-Ease, Inc., EE. UU.), Un el diseño compuesto central
(CCD) se usó para evaluar la interacción efecto del pH y la temperatura en la concentración
máxima de ácido láctico total (RT), ácido L-láctico (RL) y ácido D-láctico (RD). La Tabla 1 exhibió los
rangos de los factores y niveles independientes de diseño experimental que se utilizaron en este
estudio. Para cada prueba, la mezcla de WAS y FW se preparó como se menciona anteriormente,
seguido por lotes de fermentación en consecuencia. Para comparar el

capacidad predictiva de los modelos RSM, el R-cuadrado fue utilizado por los siguientes

fórmula estadística (Ec. (1)) [14], donde SS es la suma de

cuadrado:
2.4. Análisis de estructuras microbianas de la comunidad

Los microorganismos juegan un papel importante en la fermentación WAS y FW proceso en

diferentes condiciones. Para investigar la comunidad microbiana estructura de neutro a alcalino a
diferente temperatura, muestras de reactores operados a pH 7, 9 y 11 menores de 35 años y 50 C
fueron extraídos para extracción de ADN y metagenómica procesos de secuenciación (Sangon
BioTech, Shanghai, China). Para conducir la pirosecuenciación, el ADN extraído fue amplificado por
PCR utilizando el cebador V1F (CCCTACACGACGCTCTTCCGATCTGA) GAGTTTGATCMTGGCTCAG) y
V3R (GACTGGAGTTCCTTGGCACCC GAGAATTCCAACCGCGGCKGCTGGC) en la región V1-V3.
Metagenómica la secuenciación se realizó usando el sistema Illumina MiSeq (Illumina MiSeq, EE.
UU.). La operación de detalle fue explicada en Información suplementaria. Las secuencias de
coincidencia más cercanas fueron en comparación con las secuencias de referencia en la base de
datos GenBank de BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Secuencias en bruto han sido depositado
en la base de datos de Archivo de Lectura Corta NCBI (SRA) bajo el número de acceso
SRR5080228-SRR5080233.

2.5. métodos analíticos

Se tomaron muestras fermentativas periódicamente durante cada prueba por lotes y analizados.
Las muestras disueltas se prepararon por filtración a través de un filtro de acetato de celulosa con
tamaño de poro de 0.45 lm. Los ácidos L- y D-lactato se analizaron usando una HPLC (Thermo
Scientific, Ultimate 3000) equipado con Astec CLC-D (5 lm, 15 cm? 4.6 mm) columna, y detectado
en la detección UV (254 nm), 5 mM de solución de sulfato de cobre (rango de pH de 3.0-4.7) se
usó como fase móvil a un caudal de 1,0 ml / min. Los VFA, El método de análisis TSS y VSS se
explicaron en Suplementario Información. Los análisis de SCOD, carbohidratos solubles, solubles
las proteínas eran las mismas que las descritas en publicaciones anteriores [13]. Los análisis de
proteasa y a-glucosidasa fueron de acuerdo con el método informado [15]. La actividad de n-LDH
se determinó de acuerdo con la referencia [16].

2.6. Cálculo

La actividad óptica (OA) del ácido L-láctico se definió como el enantiómero valor en exceso, y
viceversa para OA de ácido D-láctico según a las siguientes ecuaciones (Ecs. (2) y (3)) [17,18],
donde [L] y [D] fueron la concentración de L- y D-ácido láctico, respectivamente.

La reducción de VSS se calculó en función del balance de masa, quese expresa como la siguiente
ecuación (Ec. (4)), donde VSS0 = la inicial concentración.

2.7. análisis estadístico

Todas las mediciones se realizaron por triplicado. Un análisis de se utilizó la varianza para evaluar
el significado de los resultados, y p <0.05 se consideró estadísticamente significativo.
3. Resultados y discusión

3.1. Influencia del ajuste de pH intermitente en la producción de ácido láctico en condiciones

mesófilas y termófilas

3.1.1. Concentración de ácido láctico

En la literatura, la fermentación del ácido láctico del único FW era usualmente conducido
alrededor de pH 5-6 [19]. Mientras estaba en el estudio actual, prueba en blanco sin ajuste de pH
mostró la circunstancia de pH ácido alrededor de 4 ± 1 durante el período de fermentación (Fig. S2
en el suplemento material), que exhibió solo 2.67 y 2.22 g COD / L de ácido láctico de la co-
digestión de FW y WAS en mesófila y condición termófila respectivamente. Como se ve en la Fig. 1,
ajuste del pH a una condición alcalina débil aparentemente mejorada producción de ácido láctico
en comparación con estas pruebas en blanco. En mesofílico fermentación (Fig. 1a), la mayor
concentración de ácido láctico era observado a los 3 d: 18.41, 20.31 y 25.51 g DQO / L de pH 7 a 9
respectivamente, que disminuyó de 17.98 (4 d) a 12.70 (5 d) g COD / L a alcalina fuerte de pH 10 y
11. Cuando la fermentación se llevó a cabo en condiciones termófilas (Fig. 1b), la máxima
concentración de ácido láctico fue 21.01 (3 d), 20.14 (6 d), 16.24 (7 d) y 10.04 (7 d) g COD / L de pH
7 a 10 respectivamente, mientras estaba completamente inhibido a pH 11. Se podría dar a
entender que el aumento del pH socava la generación de ácido láctico a una mayor temperatura.
Parece que las condiciones óptimas para las altas tasas producción de ácido láctico en mesófilos
(0,667 g / g TCOD) y termofílico fermentación (0.549 g / g TCOD) fueron respectivamente débiles
condición base de pH 9 y neutral de pH 7 (ambos a los 3 d), que es totalmente diferente de los
resultados obtenidos a temperatura ambiente. Para la co-digestión WAS y FW a temperatura
ambiente, mayor la alcalinidad (pH 11) y el tiempo de fermentación más prolongado (5 días)
fueron ambos requerido para alcanzar la máxima producción de ácido láctico (13.11 g / L de 25 g
de sustrato COD / L) [13], mientras que para la fermentación de FW único, el pH óptimo para la
producción máxima de ácido láctico era observado a pH 8 de condiciones ambientales [19] y pH
5.5 de termófilo condición [9], respectivamente. Aunque no se usó ácido láctico observado para la
única fermentación WAS, regulación similar para el La producción de AGV también se observó que
el pH óptimo era disminuyó con el aumento de la temperatura [20].

3.1.2. Variación de isómeros de lactato

Como el ácido láctico tiene dos isómeros, es decir, el isómero L y D, es esencial para revelar la
variación de los isómeros ópticos durante la fermentación período. La Tabla 2 representa el pH
óptimo para obtener el máximo de L- y D-ácido láctico durante el mesófilo y el termófilo
fermentación. En condiciones mesofílicas, el máximo concentración de ácido L-láctico (14.84 ±
0.92 g DQO / L) a pH 10 y tiempo de fermentación 4 d; mientras está en condición termófila
concentración de ácido L-láctico (18.08 ± 0.67 g DQO / L) logrado a pH 8 y 5 d (curvas de tiempo
ver Fig. S3). Sin embargo, producción de ácido D-láctico se redujo con el aumento de la
fermentación pH (Fig. S4). Por lo tanto, el ácido D-láctico máximo (aproximadamente 10 g de DQO
/ L) tanto a pH 7 como a tiempo de fermentación 3 d en condiciones mesófilas y termófilas Se
puede calcular que el OA correspondiente de ácido L-láctico fue 65.06% y 91.20% respectivamente
en condiciones mesofílicas y termófilas, cuando se alcanzó el ácido L-láctico máximo. Mientras que
OA de ácido D-láctico se solo el 14,72% y el 2,71% incluso contaron desde el D-láctico máximo
concentración de ácido (detallado en la Fig. S5). Se puede ver que el ácido L-láctico era el isómero
dominante cuando fermentado a un pH más alto, mientras que la producción de ácido D-láctico
inhibido severamente en la fermentación alcalina. Esta observación fue de acuerdo con el hallazgo
anterior a temperatura ambiente. En conclusión, la condición óptima para la producción total de
ácido láctico, es decir, pH 9 en mesófilo y pH 7 en termófilo, era no es lo mismo que para L- y D-
ácido láctico.

3.1.3. Efecto de interacción del pH y la temperatura por RSM

Los efectos de interacción del pH y la temperatura en el máximo concentración de ácido láctico

total (RT), ácido L-láctico (RL) y D-láctico ácido (RD) fueron investigados adicionalmente por RSM.
La Tabla S1 mostró el completar la matriz de diseño, y las respuestas correspondientes de RT, RL y
RD. El resumen de ajuste recomienda los modelos cuadráticos como el apropiado, y las siguientes
regresiones matemáticas para RT RL y RD en Ecs. (6) - (8)

La significancia estadística de los modelos y sus términos fueron evaluado por ANOVA (ver Tablas
3 y S2). Se observó que todos los modelos tenían una gran importancia (valores de p <0,05). Una
relativamente alto valor de R-cuadrado (0.94181, 0.83478 y 0.87081) indicado las respuestas
experimentales coincidieron bien con lo predicho valores. Al mismo tiempo, la precisión adecuada
13.26 para RT, 8.06 para RL y 7.68 para RD fueron lo suficientemente grandes como para admitir la
aplicación de estos modelos. Además, el resultado de ANOVA reveló que AB fue un término
modelo significativo para RT y RL, que demostró que el efecto de A o B en RT y RL difiere según el
nivel de otra variable. Sin embargo, AB fue un término insignificante para RD, que significa que RD
fue influenciado independientemente por las dos variables. Los gráficos de superficie de respuesta
3D y los diagramas de contorno de RSM para las respuestas se muestran en la Fig. 2, que demostró
que el punto máximo ocurrió alrededor de pH 8-9 y 35 C para RT (Fig. 2a) y RL (Fig. 2b). Por
ejemplo, a mayor temperatura, alcalina la fermentación socavó tanto RT como RL, mientras que a
baja temperatura, fueron promovidos inversamente por el mismo alcalino condición. Observación
similar se encontró en la literatura del lenguado fermentación de residuos alimenticios con
microbiota indígena [16]. Basado en la optimización numérica de RSM, la máxima RT y RL fueron
25.79 y 15.71 g DQO / L respectivamente del pH óptimo 8.53 y 38.12 C. Regulando en tales
condiciones, la fermentación resultados para RT con 26.06 g COD / L y RL con 16.33 g COD / L se
lograron, que fueron bastante cercanos a los valores predichos.

La figura 2c muestra claramente una forma de montículo simétrica con la máxima

punto que ocurre a pH bajo. También mostró que el máximo
la concentración de ácido D-láctico disminuyó con el ascenso del pH
independientemente de la temperatura elegida. Parece que estas dos variables
fueron independientes con respecto a la concentración de ácido D-láctico,
que también fue confirmado por un término insignificante de AB en
Tablas 3 y S2.

3.2. Efecto del pH en cada paso relacionado con el metabolismo del ácido láctico bajo
condiciones mesófilas y termófilas
Vías metabólicas para la generación y el consumo de ácido láctico
participaron en cuatro pasos de co-fermentación WAS y FW: solubilización
de sustrato fermentativo a materia soluble, hidrólisis
materia soluble a monómeros fácilmente biodegradables, acidificación
para el ácido láctico y la conversión de ácido láctico en AGV. Es esencial
desentrañar aún más el efecto de interacción del pH y la temperatura en cada
paso relacionado para metabolizar el ácido láctico.
3.2.1. Paso de solubilización
La reducción de VSS y el grado de solubilización se utilizaron
para evaluar la solubilización de residuos de alimentos y lodo en corrientes
estudio, que fueron dos parámetros importantes para evaluar el
Eficiencia de digestión [21]. El efecto del pH en la reducción VSS y
el grado de solubilización en condiciones mesofílicas y termófilas
se mostraron en la figura 3a yb, lo que implicaba que la solubilización
se mejoró con el aumento del pH y la temperatura.
Durante la co-fermentación del lodo primario y secundario, solubilización
la tasa se observó mayor en termófilos que en
fermentación mesofílica [21]. Mientras tanto, las proteínas y los carbohidratos
fueron los sustratos de fermentación dominante de WAS y
FW [20]. Como se ve en la Fig. 3c yd, la concentración de soluble
proteína e hidrato de carbono fueron inicialmente 0.06 y 11.57 g COD / L
respectivamente. Después de 1 día de fermentación, ambos aumentaron evidentemente con el
incremento del pH y la temperatura. El aumento de la solubilización
se debió a la desintegración de las paredes celulares bajo
condición termo-alcalina, que provocó la fuga de intracelular
sustancias (como carbohidratos y proteínas) en el líquido.
Además, la disociación de grupos ácidos en poliméricos extracelulares
sustancias (EPS) y las repulsiones entre los negativamente
EPS cargado en condiciones alcalinas también promovió la solubilización
[22]. Por lo tanto, la etapa de solubilización se mejoró con el aumento
de pH y temperatura.
3.2.2. Paso de hidrólisis
Las hidrolasas juegan un papel importante en la hidrólisis de soluble
sustrato a mono sustrato [23]. Como se ve en la Fig. 4, el pariente
las actividades de proteasa y a-glucosidasa fueron mejoradas
con el aumento del pH de la fermentación (de ácido a alcalino) y
temperatura (desde mesófila a termófila). Fue en buena
acuerdo con las observaciones de único lodo que la proteasa
ejercido una mayor actividad en la fermentación termófila que en mesófila
condición [24]. En conclusión, alcalino fuerte y termófilo
ambiente jugó roles promocionales en la hidrólisis
escenario.
3.2.3. Generación de ácido láctico
El sustrato mono era accesible para ser utilizado para el ácido láctico
producción. En el presente estudio, el hidrato de carbono soluble era
disminuyó rápidamente en 3 d, pero la proteína todavía estaba subiendo hacia arriba
(Fig. S6), lo que implicaba que el ácido láctico se derivaba principalmente de
carbohidrato. Se observó una tendencia similar en la literatura que
la concentración de ácido láctico se incrementó con la disminución de
glucosa a partir de la fermentación de la patata [25]. Las tasas de carbohidratos solubles
la reducción y la producción total de ácido láctico variaron con el pH
y temperatura en la misma regulación que se muestra en la Tabla 4.
se puede ver que los valores máximos se lograron a pH 9 en
mesófilo y pH 7 en termófilo. La tasa productiva de láctico
el ácido se relacionó con las actividades de la enzima n-LDH. Como se muestra en
Fig. S7, cuando se observó el ácido láctico máximo, la relativamente alta
actividades de n-LDH se obtuvieron a pH 9 en mesófila y pH 7 en
termófilo, y las actividades fueron severamente inhibidas en ácido (pH
descontrolado) y alcalino fuerte (pH 10 y 11). La débil alcalalresistencia
de n-LDH se informó en la literatura [26]. Podría ser conF
incluyó que la generación de ácido láctico se mejoró a pH 9 en
mesófilo y pH 7 en termófilo.
3.2.4. El consumo de ácido láctico para los VFA
Como se ve en la Fig. 5, los AGV se produjeron principalmente después de 3 días de
fermentación, que fueron en paralelo con el consumo de ácido láctico
en la Fig. 1. Los ácidos prevalentes fueron ácido acético y propiónico en
fermentación mesofílica, mientras que los ácidos acético y n-butírico dominan
en condiciones termófilas (Fig. S8). Estudio previo demostrado
que el consumo de ácido láctico se atribuyó a la
producción de AGV [12]. Por lo tanto, la mayor parte del láctico acumulado
el ácido se consumió después de 3 días de fermentación, que ganó alta
concentración de AGV en pH 7-9 en mesófilos y pH 7-8 en
termofílico. Esto también fue similar a los estudios de producción de VFAs
de WAS y la fermentación anaeróbica de residuos de cocina [27]. En
Por el contrario, la inhibición de la producción de AGV se observó a pH
10-11, que condujo a una acumulación estable de ácido láctico en el mesófilo
condición. Esto se debió a la diferencia de adaptabilidad de la producción de VFA
bacterias en diferentes temperaturas y pH [28]. Por lo tanto,
la mejora del pH y la temperatura fue beneficiosa para
acumulación estable de ácido láctico.
3.2.5. Balance de masa de carbono de co-fermentación de WAS y residuos de alimentos
El balance de masa de carbono (Fig. S9) permite monitorear la conversión
de las principales sustancias orgánicas durante el proceso de fermentación
como proteínas solubles, carbohidratos solubles, ácido L-láctico,
D-ácido láctico, AGV y otros carbones orgánicos no medidos. El promotor
y influencias supresoras del pH y la temperatura en
los pasos metabólicos se elaboraron en la Fig. 6. Aunque la solubilización
y la hidrólisis se mejoraron con el aumento del pH y la temperatura,
la producción de ácido láctico se inhibió a una fuerte alcalinidad
especialmente en condiciones termofílicas Por ejemplo, la masa de carbono
el equilibrio indicó que el principal sustrato de carbono soluble era el carbohidrato
alrededor de 11.57 g DQO / L en la etapa inicial, que varió
significativamente durante el proceso de fermentación. El carbono soluble total
contenido aumentó con el pH y la temperatura (Fig. S9) debido a
la mejora de la solubilización. Mientras tanto, las proteínas solubles
aumentado con el pH y la temperatura ascendentes, que fueron consistentes
con la mejora de la hidrólisis en la Fig. 4. Sin embargo, una
una gran fracción de carbohidratos solubles aún permanece en el volumen
cuando el ácido láctico máximo se alcanzó a pH 11 en termófilo
condición. Por el contrario, la concentración de soluble
los carbohidratos eran mucho más bajos a pH 7-9 en mesófilos y pH 7-8 en condiciones termófilas,
donde grandes cantidades de L-láctico
ácido (7.85-14.84 g COD / L en condición mesófila y 10.79-
18,08 g COD / L en condiciones termófilas) y ácido D-láctico
(10.01-10.67 g COD / L en estado mesofílico y 3.88-10.22 g
COD / L en condiciones termófilas).

3.3. Análisis de estructuras microbianas de la comunidad

El pH y la temperatura ambientales podrían influir en las bacterias
crecimiento, lo que inevitablemente dio lugar a cambios en la comunidad y
cambio de abundancias bacterianas. Secuenciación de metagenómica a través de Illumina
Se utilizó la tecnología de genes rDNA MiSeq 16S para abordar
análisis completo de la comunidad bacteriana que afecta por las condiciones de fermentación,
pH y temperatura El análisis de rarefacción indicó que todos
las comunidades de bacterias estaban bien representadas desde la rarefacción
las curvas se acercaban a la meseta de saturación (ver Fig. S10). Como
se muestra en la Tabla S3, el número total de OTU estimadas por Chao1
estimador con muestreo infinito a una distancia del 3%, indicó que
la riqueza bacteriana exhibió el mayor pH neutro y mesófilo, como las condiciones de 35 C y pH 7.
Sin embargo, la riqueza bacteriana
disminuyó simultáneamente con el aumento de pH y temperatura.
Esto también podría ser confirmado por Shannon y las OTU enriquecidas
índice (ver Tabla S3).
Además, la estructura y composición de la comunidad
varió significativamente desde la vista del nivel de distribución del phylum
(Figuras S11 y S12). Firmicutes fue el phylum predominante en:
35 C pH 11 (97,68%), 50 C pH 7 (99,45%), 50 C pH 9 (98,31%),
50 C pH 11 (74.45%), y 35 C pH 9 (56.60%), que era dominante
en el sistema de fermentación de ácido láctico como se informó. Pertenece a
clase de Clostridia, Bacilli y Negativicutes. Los Clostridia y Bacilos
fueron las clases principales en reactores a 35 C pH 11 (97,64%), 50 C
pH 7 (99.43%), 50 C pH 9 (98.29%) y 50 C pH 11 (74.39%), que
se informó que son capaces de metabolizar una amplia gama de complejos
sustrato orgánico [23,29]. Phylum Bacteroidetes fue abundante en
las muestras 35 C pH 7 (75.02%) y pH 9 (11.78%), que jugaron
un papel sustancial en la degradación de la materia orgánica [30]. Phylum Proteobacteria,
principalmente Gammaproteobacteria, fue un microorganismo clave
involucrando en la hidrólisis de lodo y la producción de
0
20

Producción de VFAs [31], que fue abundante a 35 C pH 9 (29.06%)

y 50 C pH 11 (10,07%).
La figura 7 ilustra las distribuciones de nivel de género, que diversificaron
a 35 C pH 7-9 en comparación con aquellos en muestras alcalinas fuertes o 50 C.
En el reactor de 35 C pH 7, Bacteroides (28.03%), Prevotella
(36.02%), Veillonella (5.56%) y un_Porphyromonadaceae (3.70%)
fueron los géneros principales. Miembros Enterobacter (17.90%), Incertae
Sedis (16.61%), Clostridium (12.04%), Dysgonomonas (10.49%), Alkaliphilus
(8.22%), Veillonella (8.09%) y Streptococcus (7.24%) fueron
detectado en 35 C pH 9. Los géneros del reactor de 50 C pH 7
se relacionaron principalmente con Clostridium (52,96%), Fonticella (29,49%)
y Caloramator (15.49%), y los géneros dominantes en los 50 C
pH 9 fue un_Clostridiaceaes (92.23%). La producción de ácido láctico fue
atribuido a la abundancia de Clostridium, Dysgonomonas, Alkaliphilus,
un_Porphyromonadaceae y Streptococcus [32,33]. Particularmente,
Streptococcus genera únicamente ácido L-láctico [34]. Anterior
estudios señalaron que Bacteroides, Prevotella, Enterobacter,
Clostridium, Fonticella y Dysgonomonas estuvieron involucrados en el
degradación de sustrato orgánico complejo para la producción de AGV
[35-38] Pero Veillonella (5,56%) fue capaz de convertir el lactato
a los AGV en lugar de usar carbohidratos como sustrato [39]. Aparentemente,
Las bacterias que producen VFA podrían competir con las bacterias de ácido láctico
de sustrato fermentativo e incluso consumir lactato en sí mismo,
que estaba de acuerdo con la rápida reducción del ácido láctico
después de 3 días a pH 7 y 9 a menos de 35 C, así como pH 7 a menos de 50 C.
La fermentación alcalina fuerte (pH 11) resultó abrumadora
de Anaerobranca (37.28%), un_Clostridiaceae (31.30%), Enterococcus
(27.98%) a 35 C y Anoxybacillus (68.01%) a 50 C. En la literatura,
un_Clostridiaceae y Anaerobranca mostraron un fuerte hidrolítico
habilidades [40], lo que explica que la hidrólisis del sustrato fue mayor en
pH 11 que pH 7-9 bajo 35 C. Se informó que el enterococo
producir exclusivamente ácido L-láctico [41], que fue consistente con
un OA relativamente alto de producción de ácido L-láctico a pH 11 bajo
35 C. Anoxybacillus mostró una mayor actividad de las proteinasas especialmente
a fuerte alcalinidad en condiciones térmicas [42], que
podría ser una de las razones para la mejora de la hidrólisis bajo
50 C pH 11.

4. Conclusión
4. Conclusiones
Según este estudio, se puede ver que las condiciones óptimas
para la producción de ácido láctico de alta velocidad fueron pH 9 a 35 C
(25.51 g DQO / L) y pH 7 a 50 C (21.01 g DQO / L), que fueron
ambos obtenidos en la fermentación de 3 d durante la cofermentación WAS y FW
proceso. Más importante aún, los resultados del análisis RSM
indicó que el ácido total y L-láctico se vieron afectados por la interacción
efectos del pH y la temperatura, y el pH óptimo para el lactato
la producción disminuyó con el aumento de la temperatura. Basado
el análisis de la regulación metabólica del ácido láctico, la solubilización y
la hidrólisis se mejoró con el aumento del pH y la temperatura,
mientras que la producción de ácido láctico se inhibió a una fuerte alcalinidad.
La estructura del microorganismo mostró bacterias productoras de ácido láctico
existió principalmente en 35 C pH 9 y 50 C pH 7.

Expresiones de gratitud
Este trabajo fue apoyado por la NSF [51508084] y
[51578122]; Plan de Vela de Excelencia Científica y Tecnológica de la Juventud
de Shanghai [15YF1400800]; NSF de la provincia de Jiangsu
[BK20150434] y [BK20160431]; La investigación fundamental
Fondos para las universidades centrales y DHU Distinguido
Programa de Profesor Joven (Universidad de Donghua).
Aplicación