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Nomenclatura
la coding strand (Sense strand) del DNA ha la stessa sequenza del
mRNA
la antisense strand (Template strand) è quella che funge da
template per la sintesi del mRNA.
RNA polymerases sono enzimi che sintetizzano RNA usando DNA
come template.
Un promoter è una regione di DNA dove la RNA polimerasi si lega per
iniziare la trascrizione.
Startpoint (Startsite) si riferisce alla posizione sul DNA che
corrisponde alla prima base incorporata nel RNA
A terminator è una sequenza di DNA fa terminare la trascrizione alla
RNA polymerase.
A transcription unit è la distanza tra i siti di iniziazione e di
terminazione della RNA polymerase; può includere più di un gene.
Upstream = a monte.
Downstream = a valle.
A primary transcript è il prodotto di RNA non modificato che
corrisponde ad una unità di trascrizione.
De Leo - Fasano - Ginelli – Biologia e Genetica, II Ed. – Capitolo 4
Trascrizione
Promotore batterico II
Un putativo sito di riconoscimento del DNA può essere
definito come una sequenza ideale che rappresenta
la basi più spesso trovate in ogni posizione. Una
sequenza consenso è definita dall’allineamento di
tutti gli esempi noti così da massimizzare la loro
omologia.
Ci sono quattro caratteristiche conservate in un
promotore batterico:
Il punto di inizio (startpoint)
La sequenza –10;
La sequenza–35;
La distanza tra le sequenze–10 e –35;
L’elemento UP (qualche volta)
promotore: De sequenza
Leo - Fasano - presente
Ginelli – Biologiaae Genetica,
monteII diEd. tutti i geni,
– Capitolo 4
riconosciuta dal fattore sigma dell’RNA polimerasi, necessaria
per l’inizio della trascrizione.
La sequenza è conservata
mutazioni “down”:
diminuisce
l’efficienza del
promotore
TTGACa TAtAaT
lettera maiuscola = basi più conservate (presenti in quella posizione
rispetto al +1 in quasi tutti i casi
lettera minuscola = basi presenti in molti casi ma non sempre
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Startpoint
La sequenza -10
La sequenza -35
• Un altro esamero conservato è centrato ~35
bp a monte dello startpoint. È chiamata la
sequenza -35.
• Il consenso è TTGACA;
• in forma più dettagliata T82T84G78A65C54A45
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Elemento UP
Alcuni promotori hanno una
sequenza ricca di A-T
localizzata ancora più a
monte. E’ denominata
elemento UP. Interagisce con
la subunità α della RNA
polimerasi. La si trova
tipicamente nei promotori che
sono molto espressi, quali
quelli dei geni per rRNA.
E’ riconosciuto dal dominio C-
terminale della subunità alfa
(αCTD)
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subunità multiple
L’oloenzyme (enzima
completo) è un complesso di 5
subunità che comprende il “core
enzyme” (α α2 β β′) e il σ factor
che è competente per l’inizio
della trascrizione batterica.
RNA core polimerasi batteriche
sono ~500 kD complessi
multisubunità con la struttura
generale α2 β β ′ .
Negli eubatteri un solo tipo di RNA
polimerasi è responsabile della
sintesi di tutti i RNA (mRNA, rRNA
e tRNA)
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Legame al DNA
Il DNA binding domain del fattore sigma è
helix-turn-helix che riconosce il sito –35
Il sito –10 è riconosciuto dalla subunità
alfa. Ha amino acidi aromatici che aiutano
l’apertura del DNA
La forza di un promotore è collegata alla
affinità di legame ed alla capacità di
evadere dal promotore
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La RNA pol
ha tre passaggi
Iniziazione descrive il passaggio fino alla
sintesi del primo legame del RNA. Include
il legame della RNA polimerasi al
promotore ed il “melting” di una corta
regione di DNA in singolo filamento.
Elongazione è il passaggio nella reazione
di sintesi della macromolecola (per la
replicazione, trascrizione, o traduzione)
quando la catena nucleotidica o peptidica si
allunga per l’aggiunta della subunità.
Terminazione è il passaggio che termina
la sintesi della macromolecola bloccando
l’addizione delle subunità, e generalmente
causando la dissoluzione dell’apparato di
sintesi
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Tensione superelica- DNA
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supercoiling
La terminazione nei batteri
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Rho factor
Il fattore Rho è una proteina terminatore
che si lega al RNA nascente si muove fino a
una sequenza che è ricca in C e povera
di G che precede il sito di terminazione.
È ~275 kD esamero di Rho subunità
identiche, della famiglia delle elicasi ATP-
dipendenti che funzionano passando l’acido
nucleico nel foro dell’esamero.
I terminatori Rho-dipendenti sono la metà
dei terminatori di E. coli.
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TBP
Saddle-like
domain
DNA
BINDING
TATA BOX
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TAF5 stabilizes
TAFs interaction,
specially histone-
like ones (TAF6,
TAF9)
TAF1: Acetyl
transferase activity
Interaction with
TFIIF
TAF12 TAF8
TAF4
TAF4 TAF10 TBP
TA TAF7
TAF6 TAF11 F1
TAF5 TAF5
TAF9 TAF13TAF12 TAF11 TAF8 TAF3
TAF3
TATA BOX
TAF13 TAF10
TAF6 TAF9
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TA
F1
TA
2
F4
TA
TA
TA AF F4
F1
F8
1T1 TA
0
2
F1
TB
5
TPAF1 1
3A
TA
T
TA TAF
F1
TA
TA
TA X F1
F3
BO T
T
F6
F1 T3A
TA
AF
F9
TA
F7
5
A
F6
TA T9A
F8 F1
TA
DNA BENDING
TA
F3
0
F3
F7 TA
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TA 0
F8 F1
TA T9A
TFIID
F5 F
F8 TA TA
TA TPAF1 1 F6
TB F1 T3A
2 10 TA X F1
F1 AF A
TA T B OT
F4
TA TA
TA 2
F3F1
3TA
TA
F1 5
TA AF F4
F9 1T1 TA
TA TAF
F6
TA
HETEROTETRAMER
De Leo - Fasano - Ginelli – Biologia e Genetica, II Ed. – Capitolo 4 (RAP30)2 (RAP74) 2
DAB (RAP30)2 BINDS RNA POL II AND
TFIIB. RAP74 INTERACTS WITH
DNA. TFIIF STABILIZES THE
INTERACTION OF
HETEROTRIMER RNA POLII WITH
PROMOTER AND STIMULATES
(A, B, C SUBUNITS) ELONGATION RATE
BINDS PROMOTER TFIID TFIIF
TFIIA
REGION WITH TFIID
TFIIE
TFIIB
RN
TFIIH
A
PO
L
TFIIE MODULATES THE
II
HELICASE AND KINASE
ACTIVITIESOF TFIIH
TFIIB INTERACTS WITH BY STIMULATING CTD
DOMAIN RNA POLII
SADDLE-LIKE DOMAIN OF TBP P PHOSPHORYLATION
AND WITH BENDED DNA ON
SIDES OF TATA BOX.
TFIIH STIMULATES
TBP/TFIIB COMPLEX PROMOTER
RECRUITS RNA POLII AND MELTING AND IT
HAS KINASE
OTHER GTF ACTIVITY AGAINST
RNA POL II
PHOSPHORYLATION OF
RNA POLII CTD STIMULATES
PROMOTER MELTING AND
TRANSCRIPTION START
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Splicing
Complesso di
carico: Proteina
cargo, Ran+GTP,
Esportina1,
Procarioti
trascrizione e traduzione avvengono
contemporaneamente nel citoplasma
NLS
Eucarioti
NES
Ran+GD
P
Ran+GT
P
De Leo - Fasano - Ginelli – Biologia e Genetica, II Ed. – Capitolo 4
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translated region
UGA
termination
3’ untranslated region
polyadenylation signal
AAUAAA (A)~200 3’
poly(A) tail
• all mRNAs have a 5’ cap and all mRNAs (with the exception
of the histone mRNAs) contain a poly(A) tail
• the 5’ cap and 3’ poly(A) tail prevent mRNA degradation
• loss of the cap and poly(A) tail results in mRNA degradation
De Leo - Fasano - Ginelli – Biologia e Genetica, II Ed. – Capitolo 4
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Gli snRNA creano assieme alla coilina uno scaffold proteico (corpi di Cajal).
Questi RNA vengono da introni di mRNA (non codificanti per proteine; e.g., UHG).