Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
= 0 [] +
= 0 +
Soluzione esatta trovata solo nel 2010!
Trucco di M&M: metodo delle velocit iniziali
Trucco di M&M: metodo delle velocit iniziali
Ricorda qualcosa?
Modello di M&M
Ipotesi: equilibrio kcat<<kf, kr
Pre-SS
(ms) SS
= 0 +
= 0 +
[S] e [ES] variano alla stessa velocit?
Consideriamo le variazioni relative, per vedere se sono dello stesso ordine nellunit di tempo.
Dividiamo per la massima concentrazione possibile ([S]0 e [E]0, rispettivamente)
/ 0 1
= 0
0
/ 0 1
= 0 +
0
Ipotesi: eccesso di substrato (realistica) 0 0
/ 0 / 0
Nella fase pre-SS (pochi ms, prima delle nostre osservazioni),
[ES] cresce rapidamente, mentre [S][S]0.
= 0 0 + + 0 =0
0 0 0
= = 0
+ + +
0 + 0
0 0
= = 0 =
+ + 0
+ 0
0
=
+ 0
Costante di Michaelis
+
M= = +
Numero di turnover
= 0 = = numero di turnover
0
0
= 0 = 0 0
+ 0
(costante di specificit) rappresenta lefficienza enzimatica.
Al massimo pu essere limitata dalla diffusione. In questo caso, se il substrato una
piccola molecola, ha un valore 108 -109 M-1s-1.
0
= = 0
+ 0
0
Linearizzazioni =
+ 0
0
Linearizzazioni =
+ 0
0
= 1
+ 0
= =
+ 0 0
1
=
0
Lanidrasi carbonica (CA), localizzata negli
eritrociti, un enzima contenente zinco avente
il ruolo di catalizzare reversibilmente
lidratazione dellanidride carbonica:
CO2+ H2O H2CO3
La CA attiva anche come esterasi verso diversi
substrati, tra cui lacetato di p-nitrofenile (PNFA)
Ricorda qualcosa???
- R (403 nm) =
R P 1 1
= 0 M cm
A
P (403 nm) =
= 18500 M 1cm 1
(Clin. Chem. 1980 26: 724)