Production and characterization of a novel

acidophilic and thermostable xylanase from

Thermoascus aurantiacu

Brahian Esnaiderman Casso

Jhon Mauro Dicue Camayo
Universidad del cauca
Ing. Agroidustrial

Abril de 2018
 Introducción

La Xilanasa es una enzima de origen natural que se encuentran comúnmente en

los microbios y hongos que pueden desempeñar un papel vital en la digestión
humana
Los seres humanos no son capaces de producir esta enzima digestiva en específico
a pesar de que todos consumimos algunos alimentos de origen vegetal que
contienen este tipo de fibra,
 Introducción

Fermentación
Xilanasa acidofila
Hongo termoestable
Como objetivo detectar un hongo termófilo de muestras recolectadas de la
composición y / o aguas termales para la producción de xilanasa
 MATERIALES Y METODOS
2.1. Productos químicos, cepas y plásmidos
Escherichia coli JM109
 Construcción del método de detección en dos etapas y
aislamiento de microorganismos termófilos que
producen xilanasas

Cribado de alto rendimiento

HPLC

7 DIAS
 Identificación de cepas productoras de Xilanasa

Las suspensiones de esporas fúngicas se prepararon después del cultivo 6-d en placas de Agar de Dextrosa de la
Papa (PDA)

Esporas fúngicas 30 ◦C
 ADN genómico

5-TCCGTAGGTGAACCTGCCG-3
 Condiciones de cultivo

Se determinó la masa molecular en condiciones desnaturalizantes mediante

Se evaluo la fuente de nitrógeno , carbono, se evaluaron 4 temperaturas de fermentación

siete tipos de ph.
 Ensayos de actividad de Xilanasa

La actividad de xilanasa se determinó midiendo la liberación de azúcares reductores

 Preparación de Xilanasas purificadas parciales
El sobrenadante del cultivo se concentró 10 veces usando un membrana de
ultrafiltración con un límite de peso molecular de 10 kDa
 Electroforesis en gel de dodecilsulfato de poliacrilamida
sódica (SDS-PAGE)

Se determinó la masa molecular en condiciones desnaturalizantes mediante SDS-

PAGE y se realizó usando un sistema Mini-gel (Bio-Rad).
Efecto del PH y la temperatura en Xilanasa parcialmente
purificada actividad y estabilidad

Para determinar la estabilidad de la enzima, se incubó xilanasa purificada a varios

valores de pH (3.0-10.0) a 4 ° C durante 24 h.
 Efecto de los iones metálicos en la actividad de
Xilanasa parcialmente purificada
Se evaluó el efecto de los iones metálicos sobre la actividad xilanasa mediante

Incubación de mezclas de reacción que contienen xilano, con concentraciones de

K +, Mn2 +, Na +, Mg2 +, Fe2 +, Cu2 + 1.0 mM, Li +, Co2 +, Hg2 + y Zn2 +.
 Análisis Estadístico

Se realizó un análisis de varianza (ANOVA)

 Importancia
Este estudio proporcionó una base para la producción a mayor escala y la
aplicación de Xilanasa
 Resultados y discusiones
A I S L A M I E N T O E I D E N T I F I C A C I Ó N D E C E PA P R O D U C T O R A D E
XILANASA
Árbol filogenético de T. aurantiacus M-2
 Efecto de la fuente de carbono
Fuente de carbono proporciona energía y mantiene actividades de vida normales
Efecto de la fuente de nitrógeno
Juega un papel importante en el crecimiento celular, especialmente en producción y
secreción de enzima
Efectos de sales inorgánicas, factores nutricionales
y surfactantes en la producción de xilanasa
Hongos requieren sales inorgánicas para crecimiento celular
Factores de crecimiento agregados (0.2 g/l)
 Efecto del pH inicial del medio y la temperatura
en xinalasa producción
PH y la temperatura de fermentación son considerados factores importantes que
influyen en el transporte de nutrientes
Influencia de la temperatura
Optimización del tiempo de fermentación para la
producción de xilanasa de T. aurantiacus M-2
Purificación parcial de xilanasa del caldo de
fermentación de T. aurantiacus M-2
Influencia de la temperatura
Efecto de los iones metálicos en la actividad de xilanasa
parcialmente purificada
Especificidad del sustrato de T. aurantiacus M-2 xilanasa
 Conclusiones
En resumen, la cepa aislada, M-2, que es capaz de producir xilanasa fue
identificada como una cepa de T. aurantiacus y nombradaT. aurantiacus M-2.
 La xilanasa T. aurantiacus M-2 fue parcialmente purificado y caracterizado.
 La xilanasa purificada T. aurantiacus M-2 tiene un pH catalítico óptimo y una
temperatura de 8.0 y 50 ◦C.
 La xilanasa T. aurantiacus purificada M-2 fue estable a rangos de Ph de 3.5-10 y
temperaturas entre 30 y 75 ◦C. T. aurantiacus
Este estudio proporcionó una base para la producción a mayor escala y la
aplicación de xilanasa
Este estudio indicó que T. aurantiacus La xilanasa M-2 puede utilizar residuos
agroindustriales de bajo costo, xilano de beechwood, como sustrato para producir
xilanasa.
Nuestro estudio proporcionó una mejor comprensión de T. aurantiacus M-2
xilanasa, y pavimentó una base para grandes producción a escala y aplicación
industrial de T. aurantiacus M-2 xilanasa
 Bibliografía
Ping, L., Wang, M., Yuan, X., Cui, F., Huang, D., Sun, W., Zou, B., Huo, S., y Wang H,. (2017).
Production and characterization of a novel acidophilic and termostable xylanase from
Thermoascus aurantiacu. El sevier. 109(2018) 1270-1279
MUCHAS
GRACIAS