UNIVERSITA DEGLI STUDI DI FIRENZE

SCUOLA DI SCIENZE DELLA SALUTE UMANA

Corso di laurea magistrale in Medicina e Chirurgia (classe LM-41)

STUDIO DEI GENOTIPI APOE NELLA COREA DI HUNTINGTON: CORRELATI GENOTIPO-FENOTIPO

Relatore Prof. Sandro Sorbi Correlatore Prof.ssa Silvia Piacentini

Tesi di Fernanda Fortunato

La Malattia di Huntington (MH) una patologia autosomica dominante del SNC che rientra nel gruppo delle malattie rare
Prevalenza nella popolazione mondiale: 5-10/100.000
pi elevata in alcune zone (Venezuela, Scozia, Tasmania) Et media di esordio: 35-44 aa forma ad esordio precoce: variante di Westphal forme ad esordio tardivo

Durata media di malattia: 15 aa

movimenti coreo-distonici
Triade clinica:

disturbi comportamentali

deterioramento cognitivo ingravescente

GENETICA NELLA MH
Nel 1993 stato identificato il gene responsabile della malattia, denominato Interesting Transcript 15 (IT15), localizzato sul braccio corto del cromosoma 4, codificante per una proteina chiamata Huntingtina (HTT)

GENETICA NELLA MH
Lalterazione genetica consiste nella espansione patologica della tripletta CAG allinterno del gene IT15

Allele
normale normale suscettibile di mutazione patologico a ridotta penetranza

(CAG)n 26 27-35 36-39 40

Fenotipo normale normale normale/MH MH Alleli intermedi

patologico

(ACMG/ASHG, Am J Hum Genet, 1998)

Anticipazione genica: esordio pi precoce della malattia nelle successive generazioni Penetranza incompleta:il soggetto, portatore di unespansione patologica, non presenta una sintomatologia conclamata: et di esordio pi avanzata e caratteristiche fenotipiche pi sfumate.

GENETICA E CLINICA DELLA MH

IL NUMERO DI TRIPLETTE ALLINTERNO DEL GENE IT15

BASE GENETICA DELLA MH: DIAGNOSI DI CERTEZZA DELLA MALATTIA E CORRELATO NEGATIVAMENTE CON LETA DI ESORDIO DELLA MH

NON CONSENTE UNA REALE PREVISIONE DELLETA DI ESORDIO DELLA MALATTIA E DELLE CARATTERISTICHE FENOTIPICHE (Langbehn et al, Clin Genet., 2004)

GENI MODIFICATORI- ET DESORDIO DELLA MH

GRIK2, GRIN2A, GRIN2B

UCHL1 TCERG1, TP53

MTHFR
MAP3K5, MAP2K6

APOE

APOE
codifica per lApolipoproteinaE il gene mappa sul cromosoma 19 3 varianti alleliche: 2, 3,4

Gene ampiamente studiato in molte malattie neurodegenerative: malattia di Alzheimer esordio pi precoce ed evoluzione pi rapida di malattia nei soggetti che presentano 4 (Corder et al.,Science, 1993) demenza fronto-temporale il genotipo 3/4 appare sovraespresso nei soggetti con malattia (Seripa et al., Arch. Neurol, 2011) malattia di Huntington esordio pi tardivo di malattia nei soggetti con genotipo 3/4
(Panas et al., J.Neurol., 1999)

SCOPO DELLO STUDIO

Confermare la relazione inversa tra il numero di triplette CAG e let di esordio della MH nei pazienti del nostro campione

Analizzare il ruolo dei polimorfismi del gene ApoE su: -et esordio MH -sintomo di esordio MH -sviluppo di disturbi comportamentali

-comparsa di deterioramento cognitivo

RECLUTAMENTO DEI PAZIENTI

Il nostro studio stato condotto su un campione di 42 pazienti portatori del gene mutato HD, seguiti regolarmente nellambulatorio per i disturbi del movimento del Dipartimento di Neuroscienze, Psicologia, Area del Farmaco e Salute del Bambino dellUniversit degli Studi di Firenze e arruolati nello studio REGISTRY/EUROHD.

REGISTRY/EUROHD
studio osservazionale multinazionale e multicentrico raccolta di dati clinici e genetici di soggetti affetti in un unico DATABASE EUROPEO

nel nostro centro lo studio attivo dal 2005

vengono seguiti regolarmente 78 soggetti di cui: 53 affetti con manifestazioni cliniche evidenti 8 soggetti presintomatici con test genetici positivi 7 soggetti con test genetico negativo 9 soggetti a rischio che non hanno effettuato il test genetico 1 controllo, cio soggetti senza familiarit per MH

MATERIALI E METODI-VALUTAZIONE CLINICA

42 PAZIENTI HD :21 M; 21 F
UNIFIED HUNTINGTON DISEASE RATING SCALE (UHDRS) (Huntington Study Group, 1996): -valutazione anamnestica -valutazione motoria

-valutazione cognitiva ( Test di fluenza verbale, Simbol digit modalities test, Stroop interference test)
-valutazione comportamentale

-valutazione funzionale functional assesment scale (FAS) indipendent scale (IS) total functional capacity (TFC)

MATERIALI E METODI-ANALISI GENETICA

DNA genomico
Determinazione numero di triplette PCR Analisi polimorfismi del gene ApoE

Analisi dei microsatelliti

Analisi di restrizione enzimatica

Elettroforesi su gel di Agarosio per determinazione genotipi ApoE

RISULTATI
CORRELAZIONE ETA DI ESORDIO/CAGn
80
Paziente Et d'esordio CAG n Paziente Et d'esordio CAG n

70

1
2 3 4

41
38 50 56 74 60

46
47 43 41 47 50

22
23 24 25 26 27

36
69 50 58 54 29

44
47 44 41 43 54

60
Et d'esordio

5 6

53
65 33 30 66 67 28 44

47
44 49 49 44 46 50 47

28
29 30 31 32 33 34 35

35
37 55 29 53 49 55 45

50
50 38 49 45 43 47 50

50

8 9 10 11 12 13 14

CAG n Lineare (CAG n)

40

30

15
16 17 18 19

63
68 62 68 30

47
48 47 49 47

36
37 38 39 40

76
39 40 47 67 37 47

43
53 47 47 41

20 35

20 21

40

53 39

45

47 50

50

41

55

60

55 47

Numero di Triplette

42

(analisi ANOVA, F=12,03 p=0.001 R2=0.23)

RISULTATI
DISTRIBUZIONE DEI GENOTIPI APOE
Paziente Genotipo ApoE
3/3 3/3 2/3 3/3

Paziente

Genotipo ApoE
4/4 3/3 3/3 3/3

1 2 3 4

22 23 24 25

5
6 7 8 9

3/3
3/3 3/3 3/3 3/4

26
27 28 29 30

3/3
3/3 3/3 3/4 3/3

10
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

3/4
3/3 3/4 2/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/4 3/4 3/3 3/3

31
32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42

3/3
3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/3 3/4 3/3 3/3 3/4 3/3

RISULTATI
APOE ED ETA DI ESORDIO DELLA MH
Sia il genotipo 3/4 (Panas, J Neurol, 1999) che il genotipo 2/3 (Kehoe, Med Genet, 1999) sembrano influenzare let di esordio della MH.

Genotipo ApoE

ETA DI ESORDIO (MediaSD)

ETA' DI ESORDIO
(MediaSD) (n= numero di pazienti) GENOTIPO APOE 2/3 3/3 3/4 4/4 Maschi Nessun paziente Femmine 3915,6 n=2

(n=numero di pazienti)

3/3
3/4

52,712,8 n=31 42,815,7 n= 8

52,311,4 n=15 53,413,8 n=16 39,514 n=6 Nessun paziente 52,521,9 n=2 36 n=1

(ANOVA-ANALISI DELLA VARIANZA p=0.07 F=3.47)

RISULTATI
APOE E SINTOMO DI ESORDIO DELLA MH (1)
22 pazienti esordio motorio 13 pazienti esordio psichiatrico 7 pazienti esordio composto

Il nostro campione riflette i dati della letteratura: esordio motorio quello pi frequente
(Saft et al.,J Neurol Neurosurg Psychiatry 2004)

RISULTATI
APOE E SINTOMO DI ESORDIO DELLA MH (2)
ANALISI DEI FATTORI GENETICI RESPONSABILI DI QUESTA VARIABILITA
genotipi ApoE ed et e sintomo di esordio correlazione genotipi ApoE e sintomo di esordio
SINTOMO DI ESORDIO, ET DI ESORDIO (MEDIA SD) (N =NUMERO DI PAZIENTI) GENOTIPO medio di triplette e sintomo di esordio numero MOTORIO PSICHIATRICO COMPOSTO APOE 3/3 DI ESORDIO n=16 SINTOMO Numero di triplette (mediaSD) n=9 n=6 (n= numero di pazienti) 55,610,5 47,4 13,6 53,715,3 n=5

3/4 MOTORIO

46,43,2

n=2 38,5 2,1

n=1 30 nessun paziente

4718,9 n=22 nessun paziente

2/3 PSICHIATRICO 4/4 COMPOSTO

47,5 4,3 n=2

n=13

3915,6 nessun paziente

n=1 36

46,33,2 n=7

nessun paziente

I pazienti con esordio psichiatrico presentano un esordio di malattia pi precoce rispetto ai soggetti con esordio motorio, in linea con i dati della letteratura (Leroi et al., Can J Psichiatry ,1998;Paulsen, Neurology, 2001)

RISULTATI
MH E SINTOMI COMPORTAMENTALI

frequentemente associati nei pazienti del nostro campione si osservano in 37 pazienti su 42 (88,1%)

RISULTATI
APOE E SINTOMI COMPORTAMENTALI
ETA DI COMPARSA (MEDIA SD) (N =NUMERO DI PAZIENTI)
COMP. OSSESSIVO COMP. AGGRESSIVO

APOE

DEPRESSIONE

APATIA

IRRITABILITA

PSICOSI

3/3 3/4

56,412,9 n=19 4313,4 n=6 3915,6 n=2 49 n=1

57,313,4 n=22 54,316,5 n=4 45 n=1 49 n=1

56,714 n=16 n=5 53 n=1 49 n=1

60,8 12,4 n=11 n=2 47 n=1 49 n=1

56,915,6 n=14 55,520,1 n=4 348,5 n=2 49 n=1

628,3 n=4 34 n=1

46,413,8 49

2/3

----------

4/4

-----------

tendenza ad una comparsa pi precoce dei sintomi nei pazienti con genotipo 3/4

RISULTATI
APOE E DETERIORAMENTO COGNITIVO
22 pazienti su 42

54,8% dei pazienti con genotipo 3/3 37,5% dei pazienti con genotipo 3/4 50% dei pazienti con genotipo 2/3

I pazienti con genotipo 3/4 presentano meno frequentemente deterioramento cognitivo

DISCUSSIONE (1)
Nel nostro studio:
et di esordio della malattia:

relazione inversa fra numero di triplette CAG ed et di esordio della malattia et di esordio di malattia pi precoce nei soggetti con genotipo 3/4
sintomo di esordio della malattia:

variabilit sintomatologica che riflette i dati della letteratura nei pazienti con esordio psichiatrico, comparsa di malattia pi precoce rispetto ai soggetti con esordio motorio

DISCUSSIONE (2)
disturbi comportamentali:

frequentemente osservati nei pazienti del nostro campione comparsa pi precoce nei pazienti con genotipo 3/4
deterioramento cognitivo:

i pazienti con deterioramento cognitivo meno frequentemente presentano un genotipo 3/4

CONCLUSIONI
Al fine di comprendere meglio i fattori che potrebbero influenzare let di esordio e la clinica della MH si rendono necessarie ulteriori indagini genetiche e di biologia molecolare Ampliare le dimensioni dei campioni studiati Analizzare altri polimorfismi genetici Comprendere il meccanismo patogenetico con cui i geni modificatori influenzano il fenotipo NUOVE STRATEGIE TERAPEUTICHE COMPRENSIONE DEL MILIEU GENETICO

Grazie per lattenzione