Corregir lo indicado

CROMATOGRAFIA EN HPLC
Cátedra de Química Analítica

Alumnos:
Ferreyra, Anaclara
Sansberro, Romina
Rodas, Araceli
Vallejos, Alejandro

Profesor:
Ing. Macarena Echeverríía

29 DE JUNIO DE 2017
 Trabajo Práctico. Laboratorio HPLC

Teniendo en cuenta lo realizado en el laboratorio

1) Explique la finalidad del uso del HPLC en el caso analizado.

En este caso, se utiliza la cromatografía HPLC para determinar la concentración de furfural

en las muestras. Se puede utilizar el método cromatográfico para esta determinación ya
que, mediante el estudio de papers de otros investigadores y la manipulación de las
condiciones de trabajo, se sabe cuál es el tiempo de retención del analito, por lo que se
sabe cuál es el pico que se debe analizar en el cromatograma.

2) Indique los valores que se utilizaron, en el caso estudiado, para las siguientes
condiciones de análisis:
- Composición de la fase móvil: Acetonitrilo 17,5% v/v
- Flujo de la fase móvil: 1 ml/min
- Temperatura de análisis: 40°C
- Longitud de onda del detector: 278 nm

3) ¿Qué podría ocurrir al cambiar, por ejemplo, la composición de la fase móvil?

Si se varía la composición de la fase móvil lo que podría ocurrir es que cambie el
momento (tiempo de retención) en el que aparece el pico del analito que se está
investigando, con lo cual se tendría una incertidumbre de si es o no lo que yo estoy
buscando (porque el equipo no lo reconoce como furfural en este caso). En un caso
comentado en la clase, se varió la dilución de la fase móvil, con lo cual se tuvo que
realizar una nueva curva de calibración y cargar nuevamente características y datos que
correspondían a la nueva dilución de la fase en cuestión.

4) A partir del cromatograma obtenido indique:

- Tiempo de retención del analito: 4,395 min
- Tiempo muerto: 1,1 min
- Tiempo de retención corregido: ′ = −= 4,395 − 1,1 = 3,295

- Factor de retención del analito: ′ =

−
=
3,295
= 2,995

1,1
 5) Esquematice las partes fundamentales que componen a un cromatógrafo
HPLC indicando el recorrido de la fase móvil.

FURFURAL

No es Furfural! Es la fase Móvil

(Acetonitrilo-Agua 17,5%)

DETECTOR

HORNO

COLUMNA

BOMBA BUCLE: Controla el flujo de fase

móvil que ingresa a la columna.
RESIDUO

La fase móvil, junto con la muestra a analizar, pasan por el horno antes de pasar por la columna. Ojo!

Las flechas rojas indican el camino que sigue la fase móvil en todo el proceso cromatográfico.