Idrolisi stereoselettiva di esteri fosforici

In confronto con le idrolisi degli esteri, vi sono molti meno esempi

esempi di
idrolisi stereoselettive di esteri fosforici

Un esempio riguarda la risoluzione della rac-

rac-treonina utilizzando la
fosfatasi acida

Dopo separazione, lenantiomero

lenantiomero D pu essere defosforilato utilizzando
una fosfatasi basica aspecifica

Idrolisi stereoselettiva di carbocicli analoghi di nucleotidi con attivit

antivirale utilizzando 5-
5-ribonucleotide fosfoidrolasi di veleno di serpente

Anche in questo caso lenantiomero

lenantiomero non accetto viene idrolizzato dopo
separazione utilizzando una fosfatasi alcalina non specifica
 Formazione di esteri fosforici

La sintesi enzimatica di esteri fosforici utilizza enzimi della classe

delle transferasi,
transferasi, le chinasi, che catalizzano il trasferimento di
gruppi fosfati da donatori quali lATP. LATP e gli altri donatori di
fosfato non possono essere utilizzati in quantit stechiometriche
stechiometriche n
possono essere sostituiti da donatori artificiali.

Devono quindi essere riciclati in maniera efficiente

Riciclo dell ATP

Tutte le chinasi richiedono nucleosidi trifosfati (in particolare ATP)

come cofattore.
cofattore. Nelle bio-
bio-trasformazioni,
trasformazioni, in cui si usa lenzima isolato,
il riciclo del cofattore non pu avvenire. Lutilizzo di ATP stechiometrico
sconsigliabile non solo per motivi economici ma anche termodinamici.
termodinamici.
Per cui lATP viene utilizzato in quantitativi catalitici e viene
viene rigenerato
per mezzo di un sistema ausiliario grazie a un secondo enzima e un
donatore di fosfato economico.
 Riciclo di ATP con piruvato chinasi

Lutilizzo del fosfoenol piruvato (PEP) /piruvato

/piruvato chinasi il metodo pi utile
per rigenerare nucleosil trifosfati.
trifosfati. PEP stabile allidrolisi ed un agente
fosforilante pi forte dellATP.
Controindicazioni sono la non facile sintesi del PEP e il fatto che la piruvato
chinasi viene inibita da elevate concentrazioni di piruvato

Riciclo di ATP da AMP e ADP

(sistema di interconvesione adenosina-
adenosina-AMP,
AMP, ADP, ATP)

Alcune reazioni
generano AMP o
adenosia anzich
ADP. Lutilizzo di
opportuni enzimi
(adenosine chinasi e
adenilate chinasi)
rende possibile il
riciclo anche in
questo caso
 Sintesi enzimatica di mimetici di ATP carbociclici

Lutilizzo di carba-
carba-ATP rende il sistema meno prono allidrolisi
del legame emi-
emi-aminalico del nucleoside e viene ugualmente
riconosciuto dalla adenilato e piruvato chinasi.

Fosforilazione stereoselettiva con glicerol chinasi

di precursori sintetici di fosfolipidi

Lenzima in grado di
accettare gruppi X molto
diversi.
Tra la funzione OH e
NH2 viene fosforilata al
pi nucleofolo atomo di
azoto
 Modello di substrato per la glicerol chinasi

Modello ottenuto analizzando 50 diversi substrati

Idrolisi di epossidi

Epossidi chirali e dioli vicinali, utilizzati come esteri solfonici o

sulfinici,
sulfinici, sono utilizzati in modo estensivo come intermedi ad alto
valore aggiunto per la sintesi di composti bio-bio-attivi per la loro abilit
di reagire con nucleofili.

X
R'
MeC(OMe)3 R" K2 CO3
MeCOX OP 73 MeOH
OH
R' R'
R" R"
O
OH
OP
MeC(OMe)3 R' K2 CO3
MeCOX R" MeOH
X 74
 OH O
O S O NaIO4 O S O
SOCl2 RuCl3
R" R" R"
R' R' R'
CCl4 MeCN
OH O O
68 H2 O 69

OSO 3- OH
Nu- H3 O+
R" R"
R' 70
R'
O Nu Nu
O S O
R"
R' OSO 3-
Nu
O R"
R' R" 71
69 R'
- - Nu
Nu Nu Nu
Nu-

Sintesi di epossidi enantiopuri

Ossidazione asimmetrica di alcoli allilici (epossidazione di Sharpless)

Ossidazione asimmetrica di alcheni non funzionalizzati

Idrolisi stereoselettiva di epossidi (risoluzione cinetica)

Idrolisi biocatalizzata
 Epossido Idrolasi
Le epossido idrolasi giocano un ruolo chiave nel metabolismo degli
xenobiotici nelleliminazione degli epossidi che sono potenti
elettrofili e quindi hanno un effetto tossico, carcinogeno e
teratogeno.
teratogeno.

Epossido (ossirani
(ossirani)) eteri ciclici

Reattivi a causa della tensione di anello

 Cicli a tre atomi - ciclopropano

Processo stereospecifico,
stereospecifico, SN2, inversione di configurazione
 Controllo regiochimico della reazione
Sostituzione alla posizione meno sostituita

Minor ingombro sterico,

sterico, reazione pi veloce

Apertura di anello nucleofila,

nucleofila, acido catalizzata

opposta regiochimica
 Controllo della regiochimica della sostituzione

pH 7

pH 3.8

La maggior parte dei processi di idrolisi di epossidi degli

organismi superiori avviene negli organi che sono responsabili
della detossificazione degli xenobiotici.
xenobiotici.

Meccanismo enzimatico

Il meccanismo stato elucidato per la epossido idrolasi microsomiale

1. Un carbossilato (aspartato)
aspartato) porta un attacco nucleofilo allepossido
formando un intermedio idrossi-
idrossi-estere (intermedio acil-
acil-enzima
invertito delle reazioni delle serine-
serine-idrolasi).
idrolasi).
2. Concomitante trasferimento di protone da una treonina allalcolato
allalcolato..
3. Idrolisi dellidrossi estere da parte dellacqua, coadiuvata da
unistidina
unistidina

Il meccanismo proposto ha importanti conseguenze sul decorso stereochimico:

stereochimico:

1. Lattacco nucleofilo dellossigeno pu coinvolgere gli stereocentri presenti

nelle molecole, in contrasto con le idrolisi degli esteri.
2. In epossidi mono-
mono-sostituiti,
sostituiti, lattacco ai due diversi atomi di carbonio porta
ad ottenere ritenzione (attacco alla posizione non sostituita) o inversione
(attacco allo stereocentro). Generalmente si osserva ritenzione.
ritenzione.

Se non vi un totale controllo della regiochimica del processo, non pu

essere utilizzato il Rapporto Enantiomerico (E)
 Epossido Idrolasi Epatica
Sino ad oggi sono stati caratterizzati due epossido idrolasi da tessuti
epatici: un enzima microsomiale (MEH) e uno citosolico (CEH). Per
lidrolisi di epossidi non naturali il MEH ha mostrato maggiore attivit
e selettivit.
Si non vi un totale controllo della regiochimica del processo, non pu
essere utilizzato il Rapporto Enantiomerico (E)

Modello di substrato per la MEH

Epossidi particolarmente
sensibili alle condizioni
acide o basiche (stireni
ossidi) non sopravvivono
alle condizioni di reazione
e quindi non possono
essere utilizzati.

Risoluzione di epossidi racemi con MEH

La posizione meno sostituita dellepossido R viene attaccata

preferenzialmente.
preferenzialmente. La natura del gruppo R ha una notevole influenza
sulla selettivit del processo.
 Risoluzione di epossidi cis racemi con MEH

Vi controllo totale regio e stereochimico dellattacco allo stereocentro 2S

Idrolisi di epossidi meso con MEH

Attacco preferenziale allo stereocentro S

Risoluzione cinetica con MEH di epossidi, aziridine e tiirani

Sebbene si sia studiata in modo abbastanza estensivo la reattivit

reattivit delle
idrolasi epatiche anche per chiarire i meccanismi di detossificazione
degli organismi, non possono essere prodotti in quantitativi significativi,
significativi,
al contrario delle epossido idrolasi microbiche.
 Epossido idrolasi microbiche

Lutilizzo di microorganismi che posseggono epossido idrolasi a scopi

preparativi abbastanza recente. Nella maggior parte delle sintesi
sintesi si
utilizzano preparazioni di cellule intere o estratti, contenenti quindi un
gran numero di altri enzimi, sebbene siano state isolate e
caratterizzate diverse epossido idrolasi.
idrolasi.
I dati ottenuti indicano che le stereoselezioni delle idrolasi ottenute da
differenti organismi possono essere correlate con diversi tipi didi
substrati:

Lieviti rossi (Rhodotorula o Rhodosporidium sp.)

Cellule fungine (Aspergillus o Beauveria sp.)
Batteri (Actinomycetes quali Rhodococcus e Norcadia sp.)
sp.)

Epossido idrolasi microbiche, risoluzione di epossidi monosostituiti

Buoni risultati solo con EH di lieviti rossi, vengono idrolizzati

idrolizzati
preferenzialmente gli epossidi R al carbonio meno sostituito
 Epossido idrolasi microbiche, risoluzione di stireni

Epossido idrolasi microbiche, risoluzione di epossidi 1,1-

1,1-disostituiti
Epossido idrolasi microbiche, risoluzione di epossidi 1,2-
1,2-disostituiti

Epossido idrolasi microbiche, risoluzione di epossidi 1,1,2-

1,1,2-trisostituiti
Epossido idrolasi microbiche, sintesi stereoconvergente

Epossido idrolasi microbiche, sintesi stereoconvergente

uso combinato di bio e chemo catalizzatori

> 90%
Epossido idrolasi microbiche, sintesi stereoconvergente
Attacco ai soli stereocentri S

resa quantitativa,
ee=97%

Aminolisi ed azidolisi enzimatica (MEH)

Uso di nucleofili diversi da H2O