See

discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.net/publication/200042092

La fijacin biolgica del nitrgeno en la caa de

azcar.

Chapter January 2004

CITATIONS READS

3 924

4 authors:

Eduardo Ortega Loiret F.G

University of Havana University of Havana
52 PUBLICATIONS 546 CITATIONS 19 PUBLICATIONS 119 CITATIONS

SEE PROFILE SEE PROFILE

Patricia Ortega-Rodes Rosa Rods

University of Havana University of Havana
21 PUBLICATIONS 108 CITATIONS 29 PUBLICATIONS 487 CITATIONS

SEE PROFILE SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

Abiotic stress physilogy; Root phenotyping; Mineral nutrition. Plants: Rice, Common bean, Jatropha
curcas, Totora (S. californicus) View project

1st Workshop Brazil-Cuba: SUSTAINABLE DEVELOPMENT IN SEMI-ARID REGIONS View project

All content following this page was uploaded by Eduardo Ortega on 09 June 2015.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

La fijacin biolgica del nitrgeno en la caa de azcar.
Eduardo Ortega, Loiret Fernndez, Patricia Ortega-Rods, y Rosa Rods.
Laboratorio de Fisiologa Vegetal, Facultad de Biologa, Universidad de la Habana.
(eortega@fq.uh.cu)

Introduccin
El nitrgeno es un elemento esencial para la vida de las plantas por su participacin en vitales procesos
metablicos y en las bases de la herencia al formar parte del ADN y el ARN. En la naturaleza tiene un
ciclo muy amplio. Se encuentra en alta concentracin en la atmsfera terrestre, pero no es utilizable
directamente de esta por la mayora de los organismos de la Tierra.
La fijacin biolgica del nitrgeno (FBN) se conoce desde hace mucho tiempo. Ya los Romanos
utilizaron la rotacin de leguminosas cada cuatro aos con cultivos no fijadores de nitrgeno. En 1813
Humphrey Davy observ que las leguminosas parecen preparar el terreno para el trigo y especul
que el nitrgeno provena de la atmsfera. En 1838 Boussingault hizo una serie de experimentos que
demostraron que las leguminosas tenan mayores niveles de nitrgeno que los cereales y concluy que
la atmsfera era la fuente de ese nitrgeno. En 1948 el nico sistema fijador de nitrgeno ampliamente
aceptado era el de la simbiosis entre leguminosas y las bacterias del gnero Rhizobium
(Recomendamos la lectura del artculo The Natural History of Nitrogen Fixation por Raymond et al.
Mol Biol Evol. 2004; 21: 541-554)
El proceso de la FBN ocurre solamente en organismos procariontes, sin que esto quiera decir que todos
los procariontes tengan la capacidad de fijar nitrgeno del aire.
Adems de las formas biolgicas, existen otras formas de fijacin del nitrgeno.
El nitrgeno es una sustancia muy inerte. La poca capacidad de reaccin de la molcula de nitrgeno se
debe a que los dos tomos que la forman se encuentran enlazados por un triple enlace covalente que le
da una gran estabilidad. Por esa causa ni las plantas ni los animales tienen posibilidad de utilizar la
molcula de dinitrgeno en su metabolismo, aunque viven sumergidos en una atmsfera que contiene
casi el 80 por ciento de N2.
En la produccin industrial de fertilizantes nitrogenados se emplea un proceso en el cual se utilizan
grandes cantidades de energa para romper el triple enlace covalente y hacer que los tomos de
nitrgeno puedan reaccionar; se denomina Proceso Habert-Boch. En 1909 Haber descubri que era
posible producir amoniaco a partir de dinitrgeno e hidrgeno (N2 + H2) a una temperatura de 600 oC y
a una presin de 175 barios, utilizando osmio como catalizador (Modak, 2002). A partir de esos
resultados se estableci un mtodo industrial que se ha mejorado con los aos, pero que se basa en la
utilizacin de altas temperaturas y presiones para la produccin de amoniaco a partir de dinitrgeno del
aire e hidrgeno. Se pudiera pensar que siendo la materia prima (el aire) tan fcilmente accesible, la
produccin de fertilizantes nitrogenados a partir de esta materia prima sera tambin barata; sin
embargo, esto no es as. La produccin de fertilizantes nitrogenados esta limitada por los grandes
consumos de combustible necesarios para el establecimiento de las altas temperaturas y presiones
necesarias para la produccin industrial. En el ao 2003 la produccin de fertilizante nitrogenado
alcanz altos costos. Esto se debi a que el costo del gas combustible utilizado en la produccin de
fertilizantes nitrogenados representa entre el 70 y el 80 % del costo total (Ratcliff, 2003). El Profesor
Sawyer (Sawyer, 2003) de la Universidad Estatal de Iowa plantea que para la produccin de una
tonelada de amoniaco anhidro se necesitan 33.5 MMBtu (millones de unidades mtricas trmicas
britnicas). En los ltimos 15-20 aos el precio promedio de un MMBtu fue de 2.20 US dlares, pero
ese precio increment hasta llegar a 5.00 US dlares por MMBtu, y en algn momento alcanz los
19.00 US dlares. Se calcula que a 5.00 US dlares el MMBtu, el costo de produccin de una tonelada
de amonaco anhidro llega a ser de 200 US dlares.
Despus de fijado e incorporado en forma de fertilizantes, el nitrgeno entra en el ambiente terrestre en
formas utilizables por las plantas. La Figura 1 muestra las reacciones que ocurren y las vas en las que
se mueve el nitrgeno despus que pasa a estar a disposicin de las plantas.

Figura 1 Transformaciones que sufre el nitrgeno durante los procesos de fijacin (biolgica o
industrial) y aparicin como fertilizantes, su reciclado en la agricultura y los destinos que puede
alcanzar.

Las bacterias fijadoras de nitrgeno poseen una enzima denominada Nitrogenasa que cataliza, a
temperatura y presin ambiental, el proceso de ruptura del triple enlace covalente de la molcula de
dinitrgeno y la reaccin con hidrgeno para la sntesis biolgica de amonio (NH4+). El amonio es una
forma reducida de nitrgeno utilizada en el metabolismo de los seres vivos, entre ellos las plantas.
El amoniaco (NH3) en solucin acuosa se encuentra en equilibrio con el amonio (NH4+)
La enzima Nitrogenasa le permite a las bacterias fijadoras de nitrgeno obtener el nitrgeno necesario
para su metabolismo a partir del aire.
Figura 2. Enzima Nitrogenasa en la fijacin biolgica de nitrgeno. La enzima tiene dos fracciones
proteicas, una Fe-protena y una Mo-Fe-protena. Observe en la ecuacin que esta enzima cataliza a
temperatura y presin ambiental la conversin de N2 en NH3 con poder reductor proveniente del
NADH, energa proveniente del ATP y protones.

Existen distintos tipo de Fijacin Biolgica de Nitrgeno:

Fijacin de Nitrgeno en vida libre. Es la que ocurre por microorganismos que viven libremente en el
suelo, sin estar asociados con ninguna planta. Los gneros ms conocidos son Azospirillum,
Azotobacter, Beijerinckia, Derxia, Pseudomonas y Clostridium. En promedio se estima que fijan de 3 a
100 kg N ha-1 ao-1 . Las cianobacterias en forma libre fijan nitrgeno hasta en 90 kg N ha-1 ao-1 y son
muy tiles en cultivos de zonas inundadas como el arroz, siendo Anabaena, Nostoc, Gloecapsa,
Oscillatoria los gneros de cianobacterias encontrados con ms frecuencia (Rodrguez-Mendoza, 1995)
Fijacin de Nitrgeno asociativa. Es la que ocurre por microorganismos que se encuentran asociados
a los tejidos de las plantas, en especial asociados a las races, o se encuentran en el interior de los
tejidos, pero que no ocupan ninguna estructura especial de la planta. En este caso se enmarca tambin
por distintos autores (por ejemplo Ramirez-Gama y Luna-Millan, 1995) la fijacin realizada por
endfitos. En este tipo de fijacin de nitrgeno se encuentran las realizadas en especies de gramneas
como la caa de azcar, el arroz, maz, trigo y otras. Entre las especies ms destacadas estn
Gluconacetobacter diazotrophicus, Azospirillum brasilense, Azospirillum lipoferum, Azospirillum
amazonense, Herbaspirillum seropedicae, Herbaspirillum rubrisubalbicans, etc. Por su relevancia en
el caso de la caa de azcar y otras gramneas, consideraremos ms adelante la fijacin de nitrgeno
realizada por bacterias endfitas en estos cultivos.
Fijacin Simbitica de Nitrgeno. Es la que ocurre por bacterias fijadoras de nitrgeno que viven en
estructuras especficas de las plantas; las bacterias simbiticas toman compuestos carbonados del
metabolismo vegetal y le aportan a las plantas compuestos nitrogenados. Diferentes especies de plantas
leguminosas y no leguminosas son capaces de albergar bacterias fijadoras de nitrgeno en estructuras
especializadas. En el caso de las leguminosas como los frijoles comunes y la soya, las bacterias
fijadoras de nitrgeno de los gneros Rhizobium y Bradyrhizobium se alojan en ndulos que se forman
en las races. En las clulas infestadas de los ndulos se alojan las bacterias fijadoras de nitrgeno;
toman cidos orgnicos de las plantas y entregan a estas compuestos nitrogenados como los ureidos y
las amidas de reserva. Este tipo de fijacin de nitrgeno es muy eficiente al recibir las plantas los
compuestos nitrogenados directamente de los microorganismos nitro-fijadores que viven en simbiosis
con estas. La fijacin simbitica de nitrgeno se aprovecha comercialmente en la agricultura. En pases
como Argentina y Brasil se aplican biofertilizantes, con cepas de Rhizobium fijadoras de nitrgeno, a
enormes reas donde se cultiva comercialmente la soya para granos.
En angiospermas maderables los actinomicetos del gnero Frankia participan en la fijacin de
nitrgeno.
Otro tipo de fijacin simbitica de nitrgeno es la que ocurre entre el helecho de agua Azolla y las
cianobacterias fijadoras de nitrgeno del gnero Anabaena. En algunos pases se enriquecen los suelos
para el cultivo del arroz sembrando Azolla inoculada con Anabaena en los terrenos anegados (Ver
Figura 3). En la asociacin Azolla-Anabaena se pueden fijar hasta 0.5 kg de N2 atmosfrico por
hectarea por da (Taiz y Zeiger, 1998)

Figura 3. Campos de arroz con Azolla intercalada en VietNam. La Azolla es un helecho acutico que
realiza simbiosis con la bacteria verde - azl fijadora de nitrgeno Anabaena. La incorporacin de la
Azolla al suelo representa un enriquecimiento del mismo con nitrgeno.

Fijacin de Nitrgeno por bacterias endfitas. El estudio de este tipo de FBN se trat junto con la
fijacin de nitrgeno que realizan las bacterias que viven en asociacin con las races de las plantas.
Esto se debi a que al realizar los aislamientos de microorganismos fijadores de nitrgeno de las races
y otros rganos de plantas que crecen en el campo es muy difcil distinguir si los microorganismos
aislados provienen del suelo remanentes en los intersticios externos de los tejidos, o si provienen de
estructuras del interior de los rganos que se utilizan para el aislamiento. En la caa de azcar se han
reportado endfitos de los gneros Gluconacetobacter, Azospirillum, Herbaspirillum y muy
recientemente el gnero Pantoea en plantas cubanas de caa de azcar (Ver ms adelante).
En la gramnea denominada Kallar grass, Reinhold Hurek y col. (1986) han aislado grandes
cantidades de microorganismos endfitos del gnero Azoarcus. Tambin han sido encontradas especies
de Azoarcus fijadoras de nitrgeno como endfitos del arroz (Oryza sativa) de la variedad IR36.
Adems de esto, se han encontrado cepas fijadoras de nitrgeno de la especie Serratia marcescens
colonizando de manera endfita los tejidos de las plantas de arroz (Gyaneshwar y col., 2001)
Especies del gnero Klebsiella con capacidad para fijar nitrgeno han sido aislados de la savia
apoplstica de plantas de maz por Triplett y col (1996).
La nutricin nitrogenada de la caa de azcar y la participacin de microorganismos fijadores
de nitrgeno en su nutricin.
La extraccin de nutrientes por el cultivo de la caa de azcar es considerable. La relacin K:N:P que
se alcanza en los tejidos oscila entre 6,4:2,9:1 en el momento de mxima extraccin, hasta 7,5:2,8:1 en
el momento de la cosecha, segn han reportado autores como Rods en 1982 y Arzola y col en 1987, y
que recogen Ortega y col. (1999).
Las aplicaciones de fertilizantes en Cuba en el perodo de 1951 hasta 1960 eran relativamente pobres,
con un consumo de unas 80 mil toneladas aplicados fundamentalmente en el occidente del pas
(Cuellar-Ayala y col. 2003). En la dcada de los aos 80 del pasado siglo, Cuba consumi un promedio
anual de 300 mil toneladas de nitrgeno como fertilizantes qumicos (IFADATA, 2003), y en esos
momentos los terrenos sembrados con caa de azcar representaban el 50 por ciento de la superficie
cultivable cubana (FAO, 2003). En la dcada del 1980 Cuba aplic la alta cifra de 4,12 kg de nutrientes
activos por tonelada de caa producida, lo que nos situ en valores por encima de los aplicados en los
pases desarrollados (Cuellar-Ayala y col. 2003).

Figura 4. Campos de caa de azcar con buen desarrollo, producto de buenas labores agrcolas unido
a una adecuada nutricin. Foto tomada en la EPICA Jovellanos, Provincia de Matanzas.

Todas estas aplicaciones de fertilizantes tienen un costo econmico y un costo ambiental alto. Se
calcula que la fertilizacin representa entre el 15 y el 25 por ciento del costo de la produccin de caa
de azcar (Cuellar-Ayala y col., 2003). Por otro lado, las altas aplicaciones de fertilizantes, heredado de
las polticas de la Revolucin Verde nacidas en la dcada de 1970 en el mundo, han provocado serios
daos al medio ambiente en pases desarrollados, enriqueciendo no solamente los suelos con cantidades
excesivas de nutrientes, sino provocando afectaciones en los terrenos y las aguas por el proceso de la
eutrofizacin. Una aplicacin racional de fertilizantes no es nocivo, lo nocivo es el abuso en el uso de
la fertilizacin. La contaminacin de los terrenos y las aguas con nitratos representan un peligro
potencial para la salud y el medio ambiente. (Ver Ortega y Rods, 1998 Revista ATAC).
Una solucin potencial a los altos costos econmicos de la fertilizacin nitrogenada de las reas de
caa de azcar y para paliar la escasez de fertilizantes que podamos tener en determinados momentos
se puede hacer uso de los biofertilizantes.
De ms de 3.37 millones de litros de preparados de Azotobacter aplicados en la agricultura caera
cubana en el ao 1993, ha ocurrido un descenso grande de la utilizacin. En el ao 2000 solo se
aplicaron 45 mil litros de Azotobacter en las reas caeras del pas. Quizs un exceso de expectativas y
un empleo no del todo adecuado de las potencialidades de la fijacin biolgica del nitrgeno en la caa
de azcar, hiciera que decreciera en nuestro pas las esperanzas en la biofertilizacin.
Pensamos que se debe hacer un uso eficiente de las potencialidades de la fijacin de nitrgeno por
organismos endfitos, estudiar profundamente la interaccin entre las plantas de caa y los endfitos
fijadores de nitrgeno, formar a los tcnicos de la agroindustria y solo despus tratar de aprovechar las
potencialidades reales que brinda la fijacin biolgica del nitrgeno.
Un momento muy importante para el estudio de las bacterias endfitas fijadoras de nitrgeno fue el
descubrimiento del Gluconacetobacter diazotrophicus en la caa de azcar. Este microorganismo se
nombr originalmente Saccharobacter nitrocaptans por sus descubridores Cavalcante y Dobereiner en
1988, ms tarde se renombr como Acetobacter diazotrophicus y finalmente se ha denominado
Gluconacetobacter diazotrophicus (Yamada y col. 1997).
Aos despus del primer reporte del aislamiento de Gluconacetobacter diazotrophicus a partir de los
tejidos de races y tallos de caa de azcar, Dong y col. (1994) demostraron, al estudiar las variedades
cubanas de caa ML 3-18 y Ja 60-5, que la savia del apoplasto del entrenudo de los tallos es el lugar
donde se aloja este microorganismo fijador de nitrgeno en la caa de azcar. El apoplasto de los
entrenudos del tallo esta lleno de savia con un pH de 5.5 y altos contenidos de azcares, segn el estado
del crecimiento de las plantas. El espacio apoplstico esta formado por el conjunto de los espacios
intercelulares y los espacios que quedan en las paredes de las clulas del tejido.

Figura 5. Microfotografa de un corte transversal del parnquima de entrenudos del tallo de la caa
de azcar de la variedad Ja 60-5. Se muestran los espacios intercelulares en el tejido, lleno de savia
antes (A) de la centrifugacin y (B) vaco despus de la centrifugacin. El tejido se ha congelado para
realizar la microfotografa, obsrvese la estructura del lquido congelado dentro de las clulas y en los
espacios intercelulares. Al centrifugar se puede colectar la savia apoplstica que se puede utilizar
para el aislamiento de los microorganismos endfitos que se encuentran en la savia apopltica. (Segn
Dong y col., 1994).

Otros autores (James y col, 2001) han planteado que G. diazotrophicus se aloja en los elementos del
xilema, as como en el parnquima xilemtico de las plantas de caa de azcar. Estos diferentes
resultados han provocado una controversia en la literatura internacional sin que hasta el momento
exista un consenso sobre las estructuras de las plantas de caa donde se alojan los endfitos fijadores
de nitrgeno.
El estudio de la distribucin de Gluconacetobacter diazotrophicus en las distintas partes del tallo de la
caa de azcar, realizado en la variedad Ja 60-5, indic que los tejidos de los entrenudos del pice del
tallo son los que albergan mayores poblaciones de este microorganismo. La distribucin de estas
bacterias, parece estar ms relacionado con la concentracin de glucosa que con la concentracin de
sacarosa en el tallo (Ver Fig 6). Otros aspectos relacionados con la composicin de los jugos de la caa,
pueden ser importantes para determinar la distribucin de diferentes cepas de G. diazotrophicus y otros
endfitos fijadores de nitrgeno y la distribucin de las poblaciones de estos organismos. En la
actualidad desarrollamos investigaciones para determinar la relacin entre los componentes del jugo y
la presencia de estos microorganismos en las plantas.

Figura 6. Comparacin de (A) la concentracin de azcares totales, (B) la concentracin de Glucosa,

(C) la poblacin de Gluconacetobacter diazotrophicus y (D) la actividad de la enzima nitrogenasa en
la savia apoplstica del pice, el medio y la base del tallo de la caa de azcar de la variedad Ja 60-5.
(Segn Ortega y col., 1999)

Muy recientemente se han detectado (Ortega-Rods, 2004) diferentes cepas de G. diazotrophicus en

diferentes variedades y distribuidas en distintos rganos de la planta como los tallos y las races. Una
de las cepas (T2) es capaz de alcanzar grandes valores de fijacin de nitrgeno, lo que la hace un
candidato importante para el proceso de inoculacin de plantaciones que no posean o posean cepas de
bajo nivel de fijacin. Otro hallazgo interesante de esta autora es que existe una variabilidad gentica
entre cepas aisladas de diferentes variedades y de diferentes rganos y organismos no detectada
anteriormente; y que difiere de la proclamada homogeneidad entre las cepas de G. diazotrophicus
aisladas hasta antes de su trabajo en diferentes partes del mundo caero.
Como se conoce, los tallos de caa de azcar que se emplean como semilla para la plantacin de este
cultivo, deben recibir un tratamiento hidrotrmico para eliminar las bacterias causantes de la
enfermedad conocida como Raquitismo de los Retoos. Esta enfermedad es responsable de grandes
prdidas en la cosecha de la caa y provocan serias afectaciones econmicas al cultivo.
Ortega y col., 2001 encontraron, al comparar la poblacin de microorganismos y la actividad
nitrogenasa de aislados de cultivos de G. diazotrophicus provenientes de tallos sometidos o no al
tratamiento hidrotrmico, que ese tratamiento disminuye las poblaciones y la actividad de la enzima
nitrogenasa, pero no las elimina (Figura 7). Adems, la menor afectacin producto del tratamiento, se
encontr en los entrenudos del tercio apical del tallo de la caa. Este hallazgo tiene valor prctico por
que es muy necesario controlar la enfermedad y a la vez es muy adecuado que la actividad de los
organismos beneficiosos para la nutricin nitrogenada no se afecte.
Figura 7. Efecto del tratamiento hidrotrmico (dado a los tallos para eliminar la enfermedad
Raquitismo de los Retoos) sobre la actividad nitrogenasa de cultivos obtenidos de tres partes del tallo
de la caa de azcar, variedad. ML 3-18. (Segn Ortega y col., 2001)

En los estudios cubanos sobre microorganismos fijadores de nitrgeno de la caa de azcar, un

resultado muy novedoso ha sido el descubrimiento de una nueva especie de endfita fijadora de
nitrgeno por Loiret y col., (2004). Estos autores descubrieron por primera vez, que la caa de azcar
alberga una especie endfita del gnero Pantoea, aspecto no informado antes por ningn investigador
en el mundo. Esta especie tiene una capacidad fijadora de nitrgeno que es 15 veces superior a la que
tiene la cepa tipo de Gluconacetobacter diazotrophicus PAL-5 (Figura 8).

Figura 8 Actividad nitrogenasa, medida por reduccin del acetileno a etileno y por la produccin de
H2 en la cepa tipo de PAL-5 y la cepa autctona T2 de Gluconacetobacter diazotrophicus, as como
por la cepa 9C del nuevo endfito Pantoea sp. (Segn Loiret y col., 2004)
La Figura 9 muestra la microfotografa de las cepas autctonas de G. diazotrophicus (T2) y Pantoea
(9C) aisladas de caa cubanas de la variedad ML3-18.

Figura 9. Microfotografa al microscopio electrnico de transmisin a) Aislado T2 de

Gluconacetobacter diazotrophicus b) Aislado 9C de Pantoea sp. Ambos microorganismos tienen forma
de bacilo. Ntese los flagelos en ambos organismos, los cuales le permiten moverse en el medio en el
cual se encuentren creciendo. (Segn Loiret y col., 2004)

Adicionalmente a la capacidad de fijar nitrgeno, la cepa cubana de Pantoea sp. tiene una capacidad
significativa de producir hidrgeno, lo que la hace especialmente interesante y atractiva para pensar en
la produccin de energa a partir de los derivados de la industria azucarera. El hidrgeno como
combustible es adecuado desde el punto de vista del medio ambiente; su combustin genera una
energa limpia ya que el residuo que queda es agua.
Las potencialidades del estudio de los endfitos de la caa de azcar son considerables. Pudiera
pensarse en aplicar tcnicas biotecnolgicas para el aprovechamiento de la fijacin de nitrgeno que
estos realizan, e intentar suplir, aunque fuera parcialmente, las necesidades de nutrientes nitrogenados
del cultivo. Algo ms novedoso, pero a tomar en consideracin, es la idea de aprovechar la capacidad
productora de hidrgeno de algunas de estas cepas para la produccin biotecnolgica de un
combustible limpio a partir de los productos o subproductos de la industria azucarera.
La Fijacin Biolgica de Nitrgeno en caa de azcar tiene altas potencialidades; slo se necesita
trabajar fuerte y seriamente para dominarla y aprovecharla en la prctica .

Referencias

Cavalcante, V.A. y Dbereiner, J. (1988) A new acid-tolerant nitrogen-fixing bacterium associated

with sugarcane. Plant and Soil 108: 23-31
Cuellar-Ayala, I.A, de Len-Ortiz, M.E., Gmez-Ruiz, A., Pin-Gmez, D., Villegas-Delgado, R. y
Santana-Aguilar, I. (2003) Caa de azcar. Paradigma de sostenibilidad. Editorial Publinica. La
Habana. 175 pag.
Dong, Z., Canny, M.J., McCully, M.E., Roboredo, M.R., Fernndez-Cabadilla, C., Ortega, E. y Rods,
R. 1994. A nitrogen-fixing endophyte of sugarcane stems. A new role for the apoplast. Plant
Physiology. 105: 1139-1147.
FAO (2003) Fertilizer use by crop in Cuba. Roma. Food and Agriculture Organization of the United
Nations.
 Gyaneshwar, P., James, E. K., Mathan, N., Reddy, P. M., Reinhold-Hurek, B., Ladha, J. K. (2001).
Endophytic colonization of rice by a diazotrophic strain of Serratia marcescens. Journal of
Bacteriology 183: 2634-2645
IFADATA (2003) International Fertilizer Industry Association. Statistics on line. URL:
www.fertilizer.org/ifa/statistics/ifadata/dataline.asp
James, E.K., Olivares, F.L., de Oliveira, A.L., Bueno dos Reis Junior, F., L.G. da Silva, y Reis, V.M..
(2001) Further observations on the interaction between sugar cane and Gluconacetobacter
diazotrophicus under laboratory and greenhouse conditions. Journal of Experimental Botany
52:747-760
Loiret, F.G, Ortega, E., Kleiner, D., Ortega-Rods, P., Rods, R., y Dong, Z. (2004) A putative new
endophytic nitrogen.fixing bacterium Pantoea sp. from sugarcane. Journal of Applied
Microbiology (en prensa)
Modak, J.M. (2002) Haber Process for Ammonia Synthesis. Resonance. Journal of Science Education
(India) 7: 69-77 URL: (http://www.ias.ac.in/resonance/Sept2002/pdf/Sept2002p69-77.pdf)
Ortega, E. y Rods, R. (1998) Nutricin nitrogenada, biofertilizacin, salud y medio ambiente. Revista
ATAC No 2 pag 34-38
Ortega, E., Rods, R., Heydrich, M., McCully, M.E, y Canny J.C. (1999) Fijacin de nitrgeno en la
caa de azcar: actualidad y perspectivas. En:Biodiversidad y biotecnologa de la caa de
azcar. Eds Arencibia, A.D y Cornide, M.T. Elfos Scientieae. La Habana pp153-163
Ortega, E., Rods, R., de la Fuente, E, y Loiret, F.G. (2001) Does the routine heat treatment of
sugarcane stem pieces for xylem pathogen control affect the nitrogenase activity of an N2 fixing
endophyte in the cane?. Australian Journal of Plant Physiology 28:907-912.
Ortega-Rods, P. (2004) Tesis de Maestra; Mencin Fisiologa Vegetal. Facultad de Biologa.
Universidad de la Habana. La Habana, Cuba.
Palus, J.A., Borneman, J., Ludeen, P.W., and Triplett E.W. (1996) A diazotrophic bacteria endophyte
isolated from stems of Zea maiz L. and Zea luxurians Iltis and Doebley. Plant and Soil 186:
135-142
Ramirez-Gama R y Luna-Millan B. (1995) Simbiosis asociativas. En: Agromicrobiologa. Elemento
til en la agricultura sustentable. Eds. Ferrera-Cerrato R y Prez-Moreno J. Colegio de
Postgraduados en Ciencias Agrcolas. Montecillo. Estado de Mxico. Pag. 143-165
Ratcliff C. (2003) Enough is Enough. Grounds Maintenance Magazine
Raymond J, Siefert JL, Staples CR, Blankenship RE. (2004) The natural history of nitrogen fixation.
Molecular Biology and Evolution 21: 541-554.
Reinhold, B., Hurek, T., Niemann, E.G. y Fendrik, I. (1986) Close association of Azospirillum and
diazotrophic rods with different root zones of Kallar grass. Applied and . Environmental.
Microbiology 52:520526.
Rodrguez-Mendoza N. (1995) Microorganismos libres fijadores de nitrgeno. En: Agromicrobiologa.
Elemento til en la agricultura sustentable. Eds. Ferrera-Cerrato R y Prez-Moreno J. Colegio
de Postgraduados en Ciencias Agrcolas. Montecillo. Estado de Mxico. Pag. 105-126
Sawyer J.E. (2003) Natural gas prices impact nitrogen fertilizer costs . Soil Fertility. Integrated Crop
Management. Iowa State University URL: (http://www.ipm.iastate.edu/ipm/icm/2003/4-14-
2003/natgasn.html)
Taiz, L. y Zeiger, E. (1998) Plant Physiology. Segunda Edicin. Sinauer Associates, Inc., Publishers.
Suderland, Massachusettss. 762 pags.
Yamada, Y., Hoshino, K.I y Ishikawa, T (1997) The phylogeny of acetic acid bacteria based on the
partial sequences of 16S Ribosomal RNA: The elevation of the Subgenus Gluconoacetobacter
to the generic level. BioscienceBiotechnology and Biochemistry 61:1244-1251.

View publication stats