Proto - Oncogene

Oncogene è ciò
Un gene il cui
che risulta dal
prodotto ha la
proto-oncogene
capacità di
dopo insulto
indurre
genetico e il cui
trasformazione
prodotto ha la
cellulare a
capacità
seguito di insulti
trasformante
genetici
 Tumour Suppressor Genes

1) The gene’s normal function is to regulate cell division.

To lose gene activity both alleles need to be mutated

2) The first mutation may be inherited or somatic

3) the second mutation will often be a gross event leading

to loss of heterozygosity in the surronding area (deletion)

es: retinoblastoma gene (13q14)

 Retinoblastoma Gene (13q14)
both copies of gene as to be inactivated

somatic mutation heredity

first allele inactivation

somatic mutation

second allele inactivation

p53 Mutant Mice Develop Cancer
Mutazione dominante negativa

Una mutazione il cui prodotto

interferisce con il prodotto del gene

normale nella stessa cellula

 REPAIR GENES

• BER Base Excision Repair

• NER Nucleotide Excision Repair

• MMR Mismatch Repair (HNPCC)

Checkpoints Genes

Sistema cellulare di protezione dall’instabilità

genomica e della tossicità derivata dal danno al
DNA
 Types of genes wich may mutate to cause cancer

food

viruses Tumour suppressor genes

proto-oncogenes
chemical
DNA repair genes

checkpoint genes

tobacco smoke radiation

 Proteomica

Caratterizzazione della neoplasia attarverso le

sue proteine
( elettroforesi bidimensionale: gradienti di pH +
peso molecolare - spettrometria di massa )
Dogma Della Biologia

DNA

RNA Proteine
Microarray showing genes
distinguishing ALL from AML.
The 50 genes most highly
correlated with the ALL-AML
class distinction are shown. Each
row corresponds to a gene, with
the columns corresponding to
expression levels in different
samples. Expression levels for
each gene are normalized across
the samples such that the mean is
0 and the SD is 1. expression
levels greater than the mean are
shaded in red, and those below
the mean are shaded in blue. The
scales indicated SDs above or
below the mean.
 Epigenetica:

( Espressione Genica )

Metilazione
De-acetilazione
RNA interferents
Epigenetica:Metilazione Methylation Specific PCR (MSP)

‘‘U’’ Primer:
Trattamento con Sodio Bisulfito
NH2
* *O * DNA NON metilato:
CACATTACCACTAAC
N Deaminazione NH 5’…. GUGTAATGGUGATUG ….3’
ATG

5’- O Promoter DNA

exon 1 metilato:
exon 2 exon 3 -3’
N N O
H H CACATTACCACTAAC

* CpG Island:
CITOSINA
Sequenze diURACILE 5’…. GCGTAATGGCGATCG
DNA di 200-2000 basi con una più….3’
alta frequenza di CG ‘‘M’’ rispetto
Primer: al resto del
NH2
genoma. NH2 DNA NON metilato:
CH3 CH3 CGCATTACCGCTAGC
N Circa 30000 nelNgenoma, il 50-60% è localizzato
Deaminazione
all’interno dei promotori5’….
genici.
GUGTAATGGUGATUG ….3’
N O N O
H La metilazione
H del DNA
promotore
metilato: a livello delle
5-metilcitosina CpG è associata
5-metilcitosina
CGCATTACCGCTAGC
a silenziamento trascrizionale
e deacetilazione degli istoni.
5’…. GCGTAATGGCGATCG ….3’
 Copia inattiva Copia attiva
del gene (“imprinted”) del gene

• acetilazione istonica
• acetilazione istonica • metilazione
• metilazione

attività deacetilasica repressione della trascrizione

attività acetilasica attivazione della trascrizione
 INIBITORI

Azacitidina, Decitabina, Zebularina

Acido Valproico, Tricostatina A,

SAHA, Fenil-butirrato, MGCD0103

Substrati non-Istonici
Fattori di trascrizione
Bartel DP, Cell 2004;116:281-297
HEMATOPOIESIS
HEMATOPOIESIS
After withdrawal of the needle, apply firm pressure for one
or two minutes at the puncture site to prevent any bleeding
and then cover the wound with a small sterile dressing
Bone Marrow Aspiration
Bone Marrow Aspiration
Details of the Jamshidi bone marrow biopsy needle
(Reproduced from a New Biopsy Needle for Bone Marrow by
Jamshidi, K et al., Scand. J. Haemat.,8, 69-71, 1971)
HEMATOPOIESIS
HEMATOPOIESIS
HEMATOPOIESIS
HEMATOPOIESIS
• MALATTIE GENETICHE con
INSUFFICIENZA MIDOLLARE

• SINDROMI MIELODISPLASTICHE
CLASSIFICATION OF THE INHERITED
BONE MARROW FAILURE
SYNDROMES
• Pancytopenias: Fanconi anemia
Dyskeratosis congenita
Shwachman-Diamond syndrome
Reticular dysgenesis
Familial aplastic anemia
(autosomal and X-linked forms)
Myelodysplasia
Non-hematologic syndromes
(Down’s, Dubowitz’s)
 Physical Findings Associated with Fanconi Anemia

Insufficienza Midollare Leucemia Acuta Mieloide

Complementation Groups of Fanconi Anemia (FA)
 Riparo del DNA
Meccanismo Lesione del DNA Sistemi Enzimatici

Riparazione diretta O6alchilguanina Alchiltransferasi

(si appaia con T
anziché C)

Escissione di basi 1-13 basi con danni Glicosidasi +

(BER) (es.alchilate) endonucleasi +
polimerasi + ligasi

Escissioni di Dimeri di timina, 30 enzimi

nucleotidi (NER) addotti voluminosi
(“bulky”)
Mismatch repair Appaiamenti non MSH1-6, MLH/PMS1-
(MMR) corretti 16
Double strand Rotture nei 2 filamenti BLM,BRCA1-2, sistemi
break repair di ricombinazione
(DSBR)
Cross-link repair Legami crociati tra i FANC A-D, BRCA2
2filamenti
HEMATOPOIESIS
HEMATOPOIESIS
CLASSIFICATION OF THE INHERITED
BONE MARROW FAILURE
SYNDROMES
• Pancytopenias: Fanconi anemia
Dyskeratosis congenita
Shwachman-Diamond syndrome
Reticular dysgenesis
Familial aplastic anemia
(autosomal and X-linked forms)
Myelodysplasia
Non-hematologic syndromes
(Down’s, Dubowitz’s)
Clinical Features Associated with Dyskeratosis Congenita
TELOMERES

TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG

E. Blackburn, J. Szostak, C. Greider

TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG
TTAGGG TTAGGG TTAGGG
TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG
• MALATTIE GENETICHE con
INSUFFICIENZA MIDOLLARE

• SINDROMI MIELODISPLASTICHE
 SINDROMI MIELODISPLASTICHE (MDS)
• MDS in Malattie Congenite
• MDS “De Novo”
• MDS Secondarie
- A. Fanconi
- S. di Shwachman
- Discheratosi Congenita
- S. di Noonan
- Benzene
- Agenti Alchilanti
- Inibitori Topoisomerasi II
- Tossici ambientali (metalli, solventi, pesticidi)
- Altri chemioterapici
- Radiazioni
 Gruppo eterogeneo di
disordini caratterizzati da:

 Emopoiesi displastica e inefficace

 Citopenia periferica di una o più linee

 Rischio di progressione verso una

leucemia acuta mieloide

 Sangue Periferico

• Mono-
citopenia
• Bi-
• Pan-

Midollo
% di blasti
Anomalie citogenetiche
 Sindrome 5q-
• M:F 1:9

• Anemia macrocitica MCV >100 fl

• Piastrine normali o aumentate

• Blasti midollari < 5%

• Midollo iper - normo - cellulare

 del(5)(q)
LSI CSF1R (5q31)/LSI D5S721:D5S23 (5p15)
Ribosome biogenesis

Mohamedali A and Mufti G.J. Br J Haematol. 2009 Jan;144(2):157-68. Epub 2008 Nov 7
N Engl J Med. 2006 Oct 5;355(14):1456-65
 Copia inattiva Copia attiva
del gene (“imprinted”) del gene

• acetilazione istonica
• acetilazione istonica • metilazione
• metilazione

attività deacetilasica repressione della trascrizione

attività acetilasica attivazione della trascrizione
IPERMETILAZIONE e PROGRESSIONE

30 AML
• Diagnosi: 23-83% met
• Recidiva: 47-93% met
• Livelli aumentati di met in 25 pz
alla recidiva (cariotipi stabili)
• su 9008 geni autosomici 8.3%
met alla DG vs 10.3% alla REC

Kroeger et al, Blood 2008

 IPERMETILAZIONE e PROGNOSI
p15 (CDKN2B) TSP-1
1.00 p=0.01

0.75
Non-metilato (n=85)

0.50

0.25

Metilato (n=6)
0.00
0 50 100 150

Lubbert et al, Leukemia 2003 Voso, Greco, Scardocci et al, unpublished

L’ ipermetilazione e’ associata a prognosi sfavorevole

 INIBITORI

Azacitidina, Decitabina, Zebularina

Acido Valproico, Tricostatina A,

SAHA, Fenil-butirrato, MGCD0103

Substrati non-Istonici
Fattori di trascrizione
 RISULTATI DELLO STUDIO CLINICO
AZA PH GL 2003CL001 (AZACITIDINA vs CCR)

1.0 Log-Rank p=0.0001

0.9 HR = 0.58 [95% CI: 0.43, 0.77]
Proportion Surviving

0.8 Deaths: AZA = 82, CCR = 113

0.7
0.6 50.8%
0.5 24.4 months
0.4 15 months 26.2%
0.3 AZA
0.2 CCR
0.1
0.0
0 5 10 15 20 25 30 35 40

Time (months) from Randomization

Fenaux P., et al. ASH 2007
 SINDROMI MIELODISPLASTICHE (MDS)
• MDS in Malattie Congenite
• MDS “De Novo”
• MDS Secondarie
- A. Fanconi
- S. di Shwachman
- Discheratosi Congenita
- S. di Noonan
- Benzene
- Agenti Alchilanti
- Inibitori Topoisomerasi II
- Tossici ambientali (metalli, solventi, pesticidi)
- Altri chemioterapici
- Radiazioni