LE 

TECNICHE DI SEMINA 
  
 
Con il nome di semina si intende l’operazione attraverso la quale si immette un inoculo (cioè poche cellule 
vive)  di  un  campione  contente  microrganismi  a  contatto  con  terreni  di  coltura  allestiti  in  piastra  e  in 
provetta. 
L’inoculo può essere seminato: 
•  in piastra contenete terreno solido, 
•  in provetta con terreno liquido, 
•  in provetta con terreno solidificato a”becco di clarino”. 
Dopo  incubazione  in  termostato  a  37°C  per  2‐3  giorni  le  cellule  batteriche  inoculate,  invisibili  ad  occhio 
nudo, si saranno moltiplicate in modo tale da formare delle colonie visibili ad occhio nudo. 
Per  esercitarsi  con  le  tecniche  di  semina,  ad  ogni  gruppo  di  lavoro  viene  assegnata  una  coltura  batterica 
pura  (brodocoltura  starter  preparata  dall’insegnante),  cioè  costituita  da  un  unico  ceppo  microbico.  Le 
colonie cresciute saranno oggetto di caratterizzazione microbica. 
  
 
   SEMINA IN PIASTRA MEDIANTE INCLUSIONE O DIFFUSIONE 
  
 
  La tecnica di inclusione in piastra prevede dapprima di inoculare la piastra con il campione liquido 
in esame e, successivamente, di versare sopra ad esso il terreno agarizzato liquefatto e raffreddato a circa 
45°‐50°C (non superiore altrimenti l’eccessivo calore può uccidere le cellule batteriche). 
In  questo  modo  le  colonie,  dopo  incubazione  in  termostato  a  temperatura  opportuna,  crescono  e  si 
sviluppano sia all’interno che sulla superficie del terreno. 
Se  la  concentrazione  microbica  del  campione  seminato  non  è  troppo  elevata,  si  riesce  ad  ottenere  una 
buona distribuzione delle colonie, cioè le colonie crescono isolate le une dalle altre. In genere tale tecnica 
di semina viene utilizzata: 
•  per studiare la morfologia della colonia, in quanto le colonie isolate sono più facilmente osservabili, 
•  per  l’analisi  quantitativa,  in  quanto,  essendo  le  colonie  isolate  e  non  sovrapposte,  si  riescono  a 
contare (per il momento, però, questo aspetto non verrà preso in considerazione), 
•  per ottenere una coltura di partenza da cui effettuare poi successivi trapianti in altri tipi di terreni 
(anche questo aspetto, per il momento, non verrà affrontato). 
Materiale occorrente  brodocoltura starter (preparata dall’insegnante) 
terreno di coltura: AGAR TRIPTONE SOIA (ATS) sterile liquefatto 1 piastra Petri in plastica sterile 
1 pipetta monouso in plastica da 1 mL bunsen 
 
  Procedimento   
Lavorare con tecnica sterile: disinfettare il piano di lavoro con alcool denaturato, accendere il bunsen. 
Siglare la piastra. 
Agitare senza capovolgere (i tappi a molla non sono a tenuta ermetica!!!) la brodocoltura starter. 
Togliere il tappo e flambare velocemente l’imboccatura della provetta. 
Prelevare 0,5 mL (≈10 gocce) della brodocoltura starter e depositarla al centro della piastra sollevando 
leggermente il coperchio. Richiudere subito il coperchio della piastra. 
Aprire e flambare il recipiente contenente il terreno di coltura ATS liquefatto e raffreddato a 45°‐50°C e 
versarne  circa  4‐5  mm  sopra  all’inoculo  nella  piastra.  Richiudere,  flambando,  il  recipiente  contenente  il 
terreno. 
Chiudere  rapidamente  la  piastra  e  miscelare  con  leggero  movimento  rotatorio  sia  in  senso  orario  che 
antiorario, quindi lasciare la piastra ferma e chiusa in posizione orizzontale fino a quando il terreno non si è 
solidificato. 
Rovesciare la piastra e incubare in termostato a 36°C per 48 ore. 
    
 
 
 
SEMINA IN PIASTRA MEDIANTE SSTRISCIAMEN NTO 
  
 
  LLa  tecnica  di 
d strisciame ento  in  piasstra  prevede e  dapprima  di  allestiree  la  piastra  con  il  terreeno 
agarizzatto  liquefatto o  e  raffredda ato  a  45°‐500°C  (non  sup periore  altrim
menti  si  form
ma  troppa  co ondensa  den ntro 
alla  piasstra  quando  questa  vien ne  chiusa  coon  il  suo  cop
perchio),  di  lasciarlo  soliidificare  com
mpletamentee  e, 
successivvamente  di  seminare  so opra  la  sua  superficie  laa  coltura  miicrobica  in  eesame  mediante  opporttuni 
movimenti  sulla  sup perficie  del  terreno  sol idificato  (l’aansa  non  de eve  scalfire  iil  terreno,  da 
d cui  deriva  il 
termine “strisciamen nto”) dell’ansa sterile. 
Esistono o varie tecnicche di strisciamento su ppiastra (in se eguito sono rriportate duee modalità,  ma ne esisto ono 
molte  aaltre),  aventti  tutte  l’ob biettivo  com mune  di  ino oculare  il  terreno  nel  punto  di  inizio 
i con  una 
u
concentrrazione elevvata di micro organismi, chhe viene poi man mano  diluita med iante opporttuni movimeenti 
dell’ansaa (strisciameento dell’anssa), dando coosì luogo allaa formazione di colonie  batteriche cconcentrate  nel 
punto dii semina iniziale e poi ma an mano sem mpre più dilu uite e ben sep parate e isolaate le une da alle altre. 
In generale tale tecn nica di semina viene utilizzzata: 
•  pper studiare la morfologia della colonnia, in quantto le colonie isolate sonoo più facilmen nte osservab bili, 
•  pper  verificarre  la  presenza/assenza  di  microrgan nismi  in  un  campione  i ncognito  (pe er  il  momen nto, 
però, qu uesto aspetto o non verrà p preso in conssiderazione),, 
•  pper otteneree una coltura a di partenzaa da cui effe ettuare poi successivi traapianti in altri tipi di terrreni 
(anche q questo aspetto, per il mo omento, non  verrà affron ntato). 
Materialle occorrentee  brodocoltura starter  (preparata d dall’insegnannte) 
terreno di coltura: AGAR TRIPTONE SOIA (ATTS) sterile liqu uefatto 2 piaastre Petri in  plastica sterile 
1 ansa di metallo bunsen 
 
 Strisciammento a linea continua 
  
 
Sterilizzare  l’ansaa  di  metallo o  per  arroveentamento  sulla  fiamm ma  del  bunssen,  farla 
raffreddare  per  20‐‐30  secondi  all’aria,  quiindi  prelevare  un’ansata a  della  broddocoltura 
starter ee  depositarlaa, tenendo so olo leggermeente sollevatto il coperchio, in un punnto vicino 
al bordo o della prima piastra Petri con terrenoo solidificato o. 
Stando  vicino  allaa  fiamma  de el  bunsen  e  con  il  cope erchio  della  piastra  legggermente 
sollevato o, strisciare ll’inoculo disttribuendolo  avanti e indiietro da un b bordo all’altrro a linee 
continuee  e  parallelee  su  tutta  la a  superficie  del  terreno o,  senza  maai  staccare  l ’ansa.  Al 
termine,, richiudere lla piastra. 
  
Strisciammento a lineee a zig‐zag 

Sterilizzare  l’ansa  di  m
metallo  per  arroventam mento  sulla  fiamma  del  bunsen,  faarla 
p 20‐30  seecondi  all’arria,  quindi  prelevare  un ’ansata  della  brodocolttura 
raaffreddare  per 
sttarter  e    depositarla,  teenendo  solo o  leggermentte  sollevato   il  coperchio,  in  un  punto 
vicino al bordo della piast ra Petri con terreno solid dificato. 

Stando  vicino  alla  fiam
mma  del  bun nsen  e  con  il  coperchio o  della  piastrra  leggermente 
soollevato, strissciare l’inocuulo distribue endolo avantti e indietro dda un bordo all’altro a lin nee 
coontinue  e  pa arallele  fino   a  ricoprire  circa  un  terzo  della  piaastra;  sterilizzare  di  nuo
ovo 
l’aansa sulla fiaamma e raffrreddarla, ruo otare la piasttra di circa 445° e continu uare a seminare 
paartendo  dalll’estremità  ffinale  preced a ricoprire  uun  altro  terzo  della  piasttra. 
dente  fino  a 
Co ontinuare in questo moddo, sterilizzaando e raffre eddando l’annsa ogni volta che si cam mbia 
diirezione. 

Rovesciare  le piastre e iincubare in ttermostato a a 36°C per 488 ore. 
  
 
 
 
     SEMINA IN PROV VETTA CON TTERRENO A B BECCO DI CLA ARINO 
 
 
 
 
  Le  colture  sviluppate  in  provetta  con  terreno  a  becco  di  clarino  (anche  chiamato  slant  o  agar 
inclinato) vengono utilizzate in laboratorio per il mantenimento e la conservazione dei batteri aerobi che, se 
collocati  in  ambiente  refrigerato  e  in  provetta  sempre  mantenuta  sterile,  sono  in  grado  di  sopravvivere 
anche per alcuni mesi. 
La coltura su slant viene perciò utilizzata come coltura di mantenimento e di riserva del microrganismo in 
esame, dalla quale si possono periodicamente effettuare altri trapianti su terreno fresco per mantenere in 
vita i microrganismi. 
Materiale occorrente  brodocoltura starter (preparata dall’insegnante) 
terreno di coltura: AGAR TRIPTONE SOIA (ATS) sterile liquefatto 1 provetta con tappo sterile 
portaprovette 
1 ansa di metallo bunsen 
 
  Procedimento   
Lavorare con tecnica sterile: disinfettare il piano di lavoro con alcool denaturato, accendere il bunsen. 
Siglare la provetta. 
Aprire e flambare il recipiente contenente il terreno di coltura ATS liquefatto e raffreddato a 45°‐50°C e 
la  provetta,  quindi  versare  in  essa  circa  10  mL  di  terreno.  Richiudere,  flambando,  sia  il  recipiente  con  il 
terreno, sia la provetta e i rispettivi tappi di metallo. 
Lasciare  solidificare  il  terreno  su  piano  inclinato,  in  modo  tale  che  approssimativamente  2/3    del 
contenuto risulti inclinato e 1/3 cilindrico. 
Agitare senza capovolgere (i tappi a molla non sono a tenuta ermetica!!!) la brodocoltura starter. 
Togliere il tappo e flambare velocemente l’imboccatura della provetta. 
Sterilizzare l’ansa di metallo sulla fiamma del bunsen, farla raffreddare per 20‐30 secondi all’aria, quindi 
prelevare un’ansata della brodocoltura. 
Aprire rapidamente lo slant, flambare velocemente l’imboccatura, quindi depositare l’inoculo sul fondo 
della superficie inclinata del terreno e risalire verso l’alto con l’ansa strisciando a zig‐zag sulla superficie del 
terreno senza scalfirlo. 
Ripetere più volte l’inoculo in modo da ottenere un’abbondante crescita sullo slant. 
Richiudere entrambe le provette riflambando imboccature e tappi. 
Incubare in termostato a 36°C per 48 ore. 
  
 
  
   
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 SEMINA IN PROVETTA CON TERRENO LIQUIDO 
  
 
Il trapianto di una colonia da un terreno liquido ad un altro viene effettuata per preparare una coltura di 
lavoro  del  microrganismo  in  esame,  cioè  una  sospensione  batterica  adatta  ad  ogni  tipo  di  indagine 
microbiologica di identificazione. 
  Materiale occorrente  brodocoltura starter (preparata dall’insegnante) 
terreno di coltura: BRODO TRIPTONE SOIA (BTS) sterile 1 provetta con tappo sterile 
portaprovette 
1 ansa di metallo bunsen 
 
  Procedimento   
Lavorare con tecnica sterile: disinfettare il piano di lavoro con alcool denaturato, accendere il bunsen. 
Siglare la provetta. 
Aprire e flambare il recipiente contenente il terreno di coltura BTS e la provetta, quindi versare in essa 
circa  5  mL  di  terreno.  Richiudere,  flambando,  sia  il  recipiente  con  il  terreno,  sia  la  provetta  e  i  rispettivi 
tappi di metallo. 
Agitare senza capovolgere (i tappi a molla non sono a tenuta ermetica!!!) la brodocoltura starter. 
Togliere il tappo e flambare velocemente l’imboccatura della provetta. 
Sterilizzare l’ansa di metallo sulla fiamma del bunsen, farla raffreddare per 20‐30 secondi all’aria, quindi 
prelevare un’ansata della brodocoltura starter. 
Aprire rapidamente la provetta con BTS, flambare velocemente l’imboccatura, quindi immergete l’ansa 
con l’inoculo in profondità nel BTS. 
Ripetere più volte l’inoculo in modo da ottenere un’abbondante crescita nel BTS. 
Richiudere entrambe le provette riflambando imboccature e tappi. 
Incubare in termostato a 36°C per 48 ore.