CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Procesos de Descontaminacin
Desinfeccin: Reduccin del nmero de microorganismos en un ambiente inanimado Esterilizacin. Eliminacion de toda forma de vida. Asepsia: Inhibicin o destruccin de mo en la superficie de un tejido vivo

SISTEMAS DE CONTROL
Segn el mecanismo de accin Microbiocidas. Alteracin de permeabilidad de membrana. Alteracin de protenas y cidos nucledos Microbiostaticos. Inhiben crecimiento Segn el mtodo de tratamiento. Fsicos: Calor, Fro, Radiacin, Filtracin, Desecacin Qumicos: Oxidantes, no oxidantes

1. Por el medio de tratamiento: Agentes fsicos

Calor Frio Radiaciones Filtracin Desecacin

2.1. El calor
Es simple, barato y efectivo. El mejor mtodo en material no termolabil. Ventaja: penetra a travs del objeto. Mecanismo: desnaturalizan las protenas. a) Calor seco. desnaturaliza por oxidacin. Se aplica en: flameado y hornos. Flameado. Paso de la pipeta o la boca del matraz por la llama del mechero. Horno. Con aire caliente requiere; 171C durante una hora, 160C durante 2 horas, o 121C durante 16 horas; los objetos de gran tamao requieren ms tiempo.

b) Calor hmedo.
Se realiza en autoclaves. Ms efectivo que calor seco (T menores) y penetra ms rpidamente. El agua hirviendo mata la mayora de las bacterias y hongos e inactiva muchos virus en pocos minutos. Las endosporas sobreviven a la ebullicin. Se esteriliza a 121C por 15 min. Procesos industriales. Pasteurizacin Esterilizacin. Tyndalizacin (fraccionada por vapor)

Parmetros termicos
La resistencia al calor vara entre los mo. Estas diferencias se expresan por: (a) Punto de muerte trmica (PMT) La temperatura ms baja requerida para matar a todos los mo de un medio lquido en 10 minutos. (b) Tiempo de muerte trmica (TMT), el menor tiempo necesario para que todas las bacterias de un caldo mueran a una temperatura determinada. (c) Tiempo de reduccin decimal (TRD o valor D) Tiempo, en min. en el que se destruye el 90% de la poblacin a una T determinada.

valor (Dt)
Definicin: Tiempo en el cual se reduce en un 90% la poblacin inicial a una T dada (disminuye un orden de magnitud)

D = t - to log No- log N

D = -1 pend.

Valores D para Salmonella sp. 775W en funcin de diferentes parmetros

Temp (C)

Condiciones Leche Leche chocolatada TSB fase log, crecido a 35C TSB fase estacionaria, crecido a 35C aw = 0.90, glicerol aw = 0.90, sacarosa

71.7 70 55 55 60 60

1.2 s 360-480 min 4.8 min 14.6 min 2.5 min 72.5 min

Ejemplo.1
Determinar el valor D116 de un m. o. que sometido a la accin del calor arroja los siguientes datos de conteo:

Tiempo (min) 5

N viables (X) 340

10
15 20

65
19 4.5

25

1.3

Calculo de logaritmos y grafica

t
5 10 15

X
340 65 19

Log X
2.5315 1.8129
log X
3 2,5 2 1,5 1 0,5

1.2787

20 25

4.5 1.3

0.6532 0.1139

0 0 5 10 15 tiempo (min) 20 25 30

Deduccion del modelo y valores estimados

Tiempo
3 2,5 2 y = -0,1199x + 3,0765 R2 = 0,9975

logX

Y.est

5
10 15

2.5315
1.8129 1.2787 0.6532 0.1139

2.477
1.8775 1.278 0.6785 0.079

log X

1,5 1 0,5 0 0 5 10 15 Tiempo (min) 20 25 30

20 25

Valor D(mtodo grfico)

. D=17.2-8.5 D116 = 8.7 minutos

Metodo analitico
D = (t1 t2) Log (Xo/Xi) Con los datos de la ltima tabla. (tiempo de 10 a 20 min) D116 = (20- 10) (1.8775- 0.6785) D116 = 8.63 minutos A la T de 116C, y en las condiciones de ensayo, la poblacin del m.o. disminuye a la decima parte cada 8.63 min.

Ejemplo 2.
El valor de D120 para un m.o es de 3 minutos, si tenemos una contaminacin inicial de 8x1012 cel/gr Qu valor de contaminacin tendr la muestra despues de un tratamiento termico a 120 por 18 min? Rpta. 8x106 cel/gr.

Usos del valor D

Despus de enlatar un alimento hay que calentarlo para eliminar el riesgo de crecimiento de esporas de Clostridium botulinum. El tratamiento por calor se lleva a cabo durante el tiempo suficiente para reducir una poblacin de 1012 esporas de C. botulinum a 100 (una espora); en consecuencia, hay muy pocas posibilidades de que las latas contengan una espora viable. El valor D para estas esporas es de 0.204 minutos, a 121 C. ( en 0.204 min baja de 1012 a 1011).
CALCULO DEL TIEMPO. Sern necesarios 12D= 12*0,204 = 2,04 min para reducir 1012 esporas hasta una espora, calentando a 121C.

Pasteurizacin
LHT, (Low hot temperature) 30 minutos a 63C HTST, (High temperature short time). 15 segundos a 72C UHT , 140C-150C durante 1 seg. Destruye patgenos (Coxiella burnetti, Mycobacterium tuberculosis) y reduce flora de deterioro Usos: leche, lcteos, jugos de fruta

Tyndalizacin
Calentamiento: 50-100 C por 30 min. Incubacin a 37C por 24 Hr. 3 das sucesivos Proceso discontinuo con perodos de incubacin intercalados Usos: esterilizacin de productos de baja resistencia trmica, cuando no existe otra opcin

Esterilizacin
Condiciones : 121C durante 15 minutos, con cargas iniciales bajas 121C durante 30 minutos, con cargas iniciales altas

2.2. Bajas temperaturas

- Refrigeracion: 0- 8 C La baja T, por si misma no mata los mo. Limita su desarrollo. Choque fro. Se somete un cultivo en crecimiento, a un enfriamiento rpido y repentino; muchos mo morirn inmediatamente. El fro es un tratamiento microbiosttico.

Congelacion (menos de 0 C) Las levaduras pueden explotar por la formacin de cristales Las bacterias, son tan pequeas que no se pueden formar cristales de hielo en su interior, por esta razn no mueren. La congelacin es ms daina cuando se realiza lentamente; los cristales de hielo que se forman y crecen, rompen la estructura celular.

2.3. Radiaciones
Baja energa

Alta energa

Dos tipos: Radiaciones - ionizantes - no ionizantes

Radiacion ionizante:
Rayos X: 0.1 40 nm (ionizante) Rayos gamma: 0.001 a 0.1 nm (ionizante)
Tienen gran poder de penetracin. Los productos se irradian en su embalaje final, evitando recontaminacin. Para tratar materiales sensibles al calor. Ejemplo: radiacin de frutas, vegetales y conservas para exportacin.

Provocan la formacin de iones. Rompen la estructura proteica y el ADN. Algunos m.o resisten RI, como: deinococos radiodurans.

Desventajas: Equipo especial, personal entrenado Reacciones no deseadas en alimentos

Radiaciones no ionizantes. EJ: UV

Caractersticas: Baja energa, sin poder penetrante Mxima eficiencia biocida a 254 nm penetra la pared celular y se absorbe en ADN y ARN, con formacin de dmeros de timina. Generacin de UV: lmpara de arco de mercurio a baja presin. No forma compuestos txicos. Como la luz solar es rica en radiacin UV, los mo han desarrollado mecanismos de fotorreactivacin para reparar los daos en el DNA por UV.

Control de microorganismos con radiaciones uv Una lmpara ultravioleta se utiliza para descontaminar la superficie del interior de una cabina de seguridad biolgica.

Tratamiento de aguas residuales

Lampara de mercurio

Microondas
Ondas de radio de alta frecuencia. (TV, radar, celulares). Los metales reflejan las microondas. Ondas de 2450 MHz, energa de 500 a 1900 Watts. Las microondas son emitidas por un tubo electrnico llamado magnetn. En el horno, estas ondas son dispersadas por un ventilador, y se reflejan en las paredes metlicas del horno. Para mejorar el calentamiento uniforme, el horno cuenta con una base giratoria. Las molculas de agua vibran con las ondas, lo que produce calentamiento. Tiempos de esterilizacin: 4 min para 1000-1100W. 5 min para 800-950W. 8 min para 500-750W.

La filtracin
Los mo, mas no virus, pueden ser eliminados por filtracin. Para materiales termolbiles y sensibles a radiaciones. Tamao del poro: 0.005-1. Se usa en farmaceutica. Se utiliza para tratar soluciones de vitaminas, antibiticos y otras sustancias, termolabiles. Desinfeccin y esterilizacin (0.22 m) Materiales: nylon, acero inoxidable, steres de celulosa

Filtros de membrana
Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) Remocin de hasta el 99.97% de partculas mayores de 0.3

La Desecacin
La desecacin, puede ser por evaporacin o sublimacin. Se usa en industria de alimentos. La liofilizacin, elimina el agua mediante sublimacin. La sublimacin evita los daos qumicos causados por el secado con calor. Sin embargo, es un mtodo caro y tiene un uso industrial limitado.

3.- METODOS QUMICOS

SEGN EL EFECTO Germicidas: matan microorganismos. Germiostticos: inhiben el crecimiento microbiano. SEGN EL TIPO DE CUERPO Desinfectantes: se utilizan sobre superficies inanimadas. Antispticos: se aplican sobre los tejidos vivos. Quimioterpicos: agentes para el tratamiento de infecciones. SEGN EL MECANISMO DE ACCION. . Agentes oxidantes . Agentes no oxidantes.

Condiciones de un buen biocida

Debe tener un amplio espectro de actividad. Efectivo a baja concentracin. Efectivo en un amplio rango de pH. Soluble en agua. Compatible con otras especies qumicas en el medio. Alta persistencia: Efectivo a travs del tiempo. Fcil de neutralizar: Poseer mecanismos desactivadores para su posterior neutralizacin. Baja toxicidad humana: Manipulacin segura por parte del operador.

Mecanismos de accin biocida

Dao o destruccin de la pared celular dando lugar a la lisis celular, o inhibicin de la sntesis de la pared celular. Ej: penicilina, lizosima. Alteracin de la permeabilidad selectiva de la membrana celular. Ej: compuestos fenlicos y detergentes.
Alteracin de la naturaleza coloidal del protoplasma. El calor coagula la protena celular y los cidos o bases desnaturalizan las protenas. Inhibicin de la actividad enzimtica. Agentes oxidantes como el cloro pueden alterar la estructura de las enzimas.

Indice de efectividad
El coeficiente fenlico, es un valor experimental que se determina a las sustancias que tienen propiedades biocida, tomando como referencia la capacidad biocida del fenol

3.1. Agentes oxidantes

Halgenos: Cloro, yodo, bromo, y derivados. Ozono Peroxido de hidrgeno. Halogenos. Son oxidantes muy fuertes. Oxidan grupos funcionales (-SH), los mas activos tambien oxidan NH2, OH, e inactivan las enzimas: El yodo, es un antiseptico: se usa como antiseptico como tintura de yodo

Halogenos: Cloro
Es electronegativo. Tendencia a captar electrones de otros compuestos. Alto potencial de oxidacin. El Cl en agua, forma acido hipocloroso: Cl2 + 2H2O -> HOCl + H3O + Cl A PH>8, el acido hipocloroso en parte se descompone en iones de hipoclorito. HOCl + H2O -> H3O+ + OCl Este se descompone en cloro y oxigeno: OCl- -> Cl- + O Acido hipocloroso, es ms reactivo que el ion hipoclorito. El cloro existente en el agua como cido hipocloroso (HOCl) o in hipoclorito(OCl-)se define como Cloro Libre Disponible.

Especiacion del cloro en funcion del pH

 La pared celular de mo patgenos est cargada negativamente. Puede ser penetrada por HOCl neutro, en lugar del Ion hipoclorito cargado negativamente. Mecanismo fundamental: Oxidacin de protenas, por interaccin con los grupos sulfhidrilo (SH) presentes en las mismas. El espectro de accin es amplio, alcanzando incluso actividad antiviral y esporicida (segn la concentracin y pH). Accin bactericida en dosis de 0,2-0,4 mg/L.
Desventaja. Forma trihalometanos, y cloraminas con materia orgnica

Hipoclorito
Se aplica como el hipoclorito de sodio (NaClO) e hipoclorito de calcio (Ca(ClO)2). ClONa + H2O ---- HONa + HOCl Funcionan igual al cloro, algo menos eficaces. Desventajas. a) Tienen efectos adversos para la piel. b) Se inactiva en presencia de materia orgnica. c) Son corrosivos para metales y otros materiales. d) Dejan fuerte olor a cloro. e) Baja estabilidad en solucin. f) En piscinas forman cloraminas, que son responsables del ataque a los tejidos de la piel, ojos (ojos enrojecidos de los nios) y pulmones y se sospecha sea carcinognico.

Dixido de cloro
ClO2 se usa en desinfeccin del agua potable (E.E.U.U). Elimina formacin de THM (trihalomethanos) del cloro. Gas explosivo, debe producirse in-situ. El ClO2 es selectivo, solo reacciona con compuestos de sulfuro reducidos, aminas secundarias y terciarias, y reactivos orgnicos reducidos. Esto permite menor dosificacin de ClO2. Capacidad de matar a esporas, virus y hongos en concentraciones bajas. No afecta gusto, olor o aspecto.

Ozono
Es inestable. Agente oxidante ms fuerte y un efectivo biocida. Se genera por descarga elctrica o irradiacin UV de aire con oxgeno 3 O2 ==== 2 O3 Su vida media es de cerca de 20 min. Dosis en agua: 0,5 ppm. Durante la oxidacin, se divide en O2 y un tomo de O, muy reactivo: O3 - > O2 + (O) La ozonizacin eleva la concentracin de oxigeno disuelto del agua.

ACCIN MICROBICIDA

Efecto bactericida ........... .. . ..

Efecto viricida Acta sobre ellas oxidando las protenas de su envoltura y modificando su estructura tridimensional. El virus no puede anclarse a ninguna clula hospedadora por no reconocer su punto de anclaje.

Agua para elaboracin de bebidas

Ventajas: No le confiere gusto ni olor al agua, ya que una vez que reaccion, el residual se inactiva en pocas horas formando nuevamente oxgeno.

Pre sedimentacin El agua del rio es captada a travs del canal de Zamacola Desarenadores: slidos gruesos, arena etc. Luego es llevada a la planta de la tomilla por medio de tuberas Pre cloracin Se acondiciona el agua cruda aplicando cloro contra las algas y para disminuir la contaminacin bacteriana.

Coagulacin En esta etapa se aplican coagulantes y floculantes, como: Sulfato de Aluminio o policloruro de aluminio, y Polielectrolitos y a veces cal.

Decantacin Los coagulos (FLOCKS) con mayor peso y volumen se van al fondo de los sedimentadores eliminndose por gravedad.

FILTRACIN Las partculas e impurezas quedan retenidas en filtros de arena.

DESINFECCIN Se echa el cloro en estado gaseoso. Dosis 1 mg/l

Perxido de hidrgeno
Oxidacin de protenas y enzimas. Se utiliza como antisptico dbil (al 3%) para la limpieza de heridas y para desinfectar el material mdico y lentes de contacto. Al echar H2O2 a las heridas se produce un burbujeo por produccin de O2, (descomposicin del H2O2), por la enzima catalasa del cuerpo. Algunos Staphilococos poseen peroxidasa y son resistentes al agua oxigenada.

3.2.- Agentes no oxidantes

En muchos casos los agentes que oxidan no son biocidas eficaces. Hay otras opciones:
Alcoholes Fenol Sales de cobre Colorantes Agentes tensioactivos

Alcoholes
Matan microorganismos porque desnaturalizan las protenas y desorganizan los lpidos de sus membranas plasmticas. No actan sobre las endosporas. El etanol y el isopropanol son utilizados como desinfectantes y antispticos clnicos.

El fenol
Desnaturaliza las protenas, y desorganiza los lpidos. En concentraciones superiores al 1 % el fenol es antibacteriano. Compuestos fenlicos: No es muy usado como desinfectante por su olor desagradable, y ser muy irritante. Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fenoles). Los fenoles clorados primero se adsorben a la pared celular. Despus se difunden a la clula donde quedan en suspensin y precipitan las protenas.

 Hexaclorofeno: compuesto fenlico presente en los jabones carblicos. Se usaba en bao neonatos para controlar infecciones de Sthaphilococcus en soluciones al 3%. En los 70 se demostr que el hexaclorofeno se absorbe en la piel. Nios que se baaban por mas de tres dias podan sufrir dao cerebral. ha sido reemplazado por la clorhexdina, menos txica para humanos.

Clorhexidina

A bajas concentraciones produce una alteracin de la permeabilidad osmtica de la membrana e inhibicin de las enzimas del espacio periplasmtico. A concentraciones altas origina precipitacin de protenas y cidos nucleicos. Su estabilidad es buena a temperatura ambiente y pH entre 5 y 8. Necesita ser protegido de la luz. Con el calor se descompone en cloroanilina.

Clorhexidina. Formas de uso

En solucin acuosa al 4% con base detergente para lavado corporal prequirrgico del paciente y lavado prequirrgico de manos. En solucin acuosa al 5% para antisepsia del campo quirrgico, sobre heridas a concentracin de 0,1-0.5% en solucin acuosa. En la higiene bucal, no suele emplearse por ser muy amarga. Es insoluble en agua, pero el gluconato de clorhexidina es muy soluble en agua y alcohol, por lo que es el producto ms utilizado.

Aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas. Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas. El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descontaminar ambientes.

Glutaraldehido

Paraformaldehido

Formaldehido

Sales de metales pesados.

Reaccionan con grupos -SH de las protenas y "envenenan las enzimas. Compuestos de plata (AgNO3 1%). Se usa en los ojos de recin nacidos. Sulfato de cobre. Para controlar el crecimiento de algas.
Pueden crear contaminacin por metal pesado. Se aplican en 1 a 2 ppm. En tanques de acero pueden corroer. No util en agua potable, por ser txicas a los humanos.

Derivados del mercurio. Se usan como cloruro mercrico y como organomercuriales

rgano-Mercuriales
Se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. El Mertiolato, el metafen y el Mercurocromo, compuestos orgnicos que contienen mercurio Son antispticos utilizados en los tratamientos de la piel y mucosas.

Colorantes
Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, verde de malaquita y verde brillante) bloquean la conversin del cido UDP-acetilmurmico en UDP-acetilmuramil-pptido.

R = HSO4- Verde Brillante R = Cl- Verde de Malaquita

Violeta de Genciana

Los tensioactivos
Tienen parte hidroflica y parte hidrofbca. Solubilizan los lpidos de la membrana celular. Sales de amonio cuaternario. (detergentes cationico (+)) Son los ms eficaces contra bacterias en gamas alcalinas de pH. Se enlazan a los sitios negativamente cargados en la pared bacteriana de la clula. Estos enlaces electrostticos causarn tensiones en la pared de la clula.

El agua muy dura hace perder propiedades. Son principalmente fungistticos, son ms activos contra bacterias gram(+) que contra gram(-). Sales de amonio ms conocidas: cloruro de cetilpiridinio (Cepacol) y cloruro de benzalconio (Zephiran). Algunas soluciones empleadas para la higiene bucal contienen sales de amonio cuaternario.

CUADRO-RESUMEN DE LOS PRINCIPALES BIOCIDAS UTILIZADOS EN EL TRATAMIENTO DE AGUAS INDUSTRIALES Produc Estructura Apariencia pH Aplicaciones to
NEWCID sal de amonio E 10 cuaternario lquido lmpido incoloro a ligeramente amarillento liquido lmpido incoloro Control de bioensuciamientos producidos por 8,0 a 9,0 algas, bacterias, hongos y levaduras en circuitos abiertos de enfriamiento de agua Tratamiento de aguas blancas de mquinas de papel 3,2 a 4,2 Control de bacterias sulfato reductoras en aguas de inyeccin en la industria petrolera min. 11,0 Control de bioensuciamientos producidos por bacterias, hongos y levaduras en circuitos abiertos de enfriamiento de agua

NEWCID glutaraldehdo E 12 mezcla de NEWCID alquil E 2100 tiocarbamatos de sodio

lquido lmpido amarillento

NEWCID sal de amonio E 2104 cuaternario

lquido lmpido incoloro a ligeramente amarillento

Control de bioensuciamientos producidos por algas, bacterias, hongos y levaduras en circuitos abiertos de enfriamiento de agua
8,0 a 9,0 Tratamiento de aguas blancas de mquinas de papel Control de bacterias sulfato reductoras en aguas de inyeccin en la industria petrolera

mezcla de NEWCID glutaraldehdo E 2110 y tensioactivos

lquido lmpido ligeramente amarillento

Control de bioensuciamientos producidos por 3,0 a 5,0 algas, bacterias, hongos y levaduras en circuitos abiertos de enfriamiento de agua

Jabones germicidas
El Jabn es un agente limpiador que se fabrica utilizando grasas vegetales, animales y aceites.

Funcin: eliminacin mecnica de mo mediante frotamiento.

JABON GERMICIDA. Contienen agentes desinfectantes antimicrobianos. Pueden presentar efectos txicos sobre tejidos vivos. Ejplo. Triclosan.

Mecanismo de accin: inhibe la sntesis de ARN. Antibacteriano y fungicida. Es poco soluble en agua, pero se disuelve en presencia de bases, por ejemplo en NaOH 1N. Soluble en disolventes orgnicos.

Triclosn

Aplicacin Industrial: Triclosn

Productos del cuidado personal, cosmticos, pasta de dientes, enjuagues bucales, desodorantes, cremas, tratamiento del cne, lociones y jabones de tocador. Como agregado en plsticos, polmeros, textiles y dispositivos mdicos de implante.

Acidos organicos
Se utilizan como conservantes para control de hongos. El cido srbico (srbalo potsico) para inhibir hongos en alimentos cidos, como el queso. El cido benzoico (benzoato sdico) es un antifngico eficaz a pH bajo. Uso en bebidas refrescantes y alimentos cidos. El propionato clcico evita crecimiento de hongos en el pan.

Esterilizantes gasesos
Se utilizan en una cmara hermtica. Ejplo. xido de etileno. Desnaturaliza protenas: los H lbiles de las protenas, como SH, -COOH o -OH, son reemplazados por grupos alquilo, como CH2CH2OH. Mata todo microorganismo y esporas. Es txico y explosivo cuando est puro, por lo que normalmente se mezcla con un gas inerte como dixido de carbono o el nitrgeno. Ventaja: es altamente penetrante.

Industrias que usan qumicos para control del desarrollo microbiano

INDUSTRIA: papel Cuero Plsticos Textiles SUSTANCIAS QUMICAS: Mercuriales orgnicos, fenlicos Metales pesados, fenlicos Detergentes catinicos Metales pesados, fenlicos CMO SE UTILIZAN: Para evitar el desarrollo de microbios durante la manufactura Existen agentes antimicrobianos en el producto final Para evitar el desarrollo de bacterias en dispersiones acuosas de plsticos Para evitar el deterioro microbiano de las telas expuestas al ambiente, por ejemplo, toldos, tiendas Para evitar deterioro de las estructuras de madera Para evitar el desarrollo de bacterias en emulsiones cortantes acuosas Para evitar el desarrollo de bacterias durante la recuperacin y almacenamiento del petrleo y de los productos de petrleo Para evitar el desarrollo de bacterias (p.ej.Legionella) en torres de enfriamiento

Madera Trabajo de metales Petrleo

Fenlicos Detergentes catinicos Mercuriales, fenlicos detergentes catinicos Cloro, fenlicos

Aire acondiciona do