Histocompatibilidad Trasplante

INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL CMN MANUEL AVILA CAMACHO PUEBLA, PUEBLA
Anticuerpos Anti-HLA en el trasplante renal: deteccin y significado
RIICG MADRID MIER EDUARDO
UN POCO DE HISTORIA
El trasplante de rganos y tejidos humanos es uno de los avance ms importantes de la medicina moderna. Alexis Carrel, 1914, implant varias de las tcnicas vasculares para trasplantes. Demostr que el autoinjerto puede sobrevivir indefinidamente Pero el aloinjerto rpidamente cesa en sus funciones Postula que el organismo elimina el tejido extrao 1933 se efectu el primer trasplante renal de humano a humano por el cirujano ucraniano Yu Yu Voronoy. Injerto nunca funcion y el receptor falleci a los pocos das de la operacin.
de-Leo-Cervantes C. Pruebas de histocompatibilidad en el Programa de Trasplantes. Rev Invest Clin 2005; 57 (2): 142-146
UN POCO DE HISTORIA
En 1940 Peter Medawar estableci las bases inmunolgicas del rechazo y tolerancia.
1952, cuando Jean Dausset describe el complejo de genes de histocompatibilidad en los humanos (HLA) Primer trasplante renal con xito absoluto, en 1954, en el Hospital Peter Bent Brigham de Boston, por Joseph Murray Trasplantar un rin entre gemelos univitelinos, documentando con esto que el sistema inmunitario era la clave para el trasplante ptimo de rganos y tejidos.
TRASPLANTE
Colocar clulas, tejidos u rganos (injerto) a un individuo (Rc) provenientes de otro individuo (Do) de la misma especie o no.
VIVO CADAVERICO
EFI. European Federation for Immunogenetics. Standards for histocompatibility testing. http://www.efiweb.eu/. ltimo acceso: mayo de 2010.
SENSIBILIZACION
Persona que experimenta eventos sensibilizantes previos. 10-30% de los pacientes en lista de espera estn sensibilizados
Paciente sensibilizado
Fuentes de sensibilizacin:
RECHAZO
La respuesta inmune del receptor frente al tejido del donante, limita el xito del trasplante.
MECANISMO DE RECHAZO
El trasplante de un rgano implica que el sistema inmunitario del receptor se enfrentar a clulas vivas con molculas HLA distintas de las suyas propias y por tanto susceptibles de ser reconocidas como extraas. Este reconocimiento puede realizarse por tres vas diferentes:
Las molculas del sistema HLA del donante, debido a su funcin de molculas presentadoras. Las molculas HLA del donante pueden ser procesadas por las APC del receptor An poco conocida es el reconocimiento por KIR, (killer Inhibitory Receptor)
El reconocimiento alognico induce la activacin de diferentes tipos celulares: Los linfocitos T colaboradores o TH1, IL-2 e IFN
Los linfocitos T colaboradores o TH2, que secretan mayoritariamente IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10
Los linfocitos T citotxicos (CTL), generalmente CD8 y tambin CD4
Y en ocasiones, los linfocitos B aloantgenos especficos que producen Ig.
OBJETIVOS
El grado de compatibilidad HLA representa un efecto positivo en el trasplante renal y en la disminucin de los episodios de rechazo. El objetivo del estudio consiste en evaluar el riesgo de prdida del injerto. Deben identificarse en el receptor los aloanticuerpos donante-especficos y determinarse las incompatibilidades HLA entre receptor y donante. El riesgo de prdida del injerto puede pronosticarse pretrasplante y postrasplante mediante el uso de diversas determinaciones inmunolgicas
PRUEBAS DE HISTOCOMPATIBILIDAD PARA TRANSPLANTE RENAL

DIAGRAMA DE FLUJO
A) Evaluacin Inmunitaria preliminar 1.- Paciente: - Tipificacin HLA Clase I y Clase II. - Tipificacin ABO / Rh. - Cross-match (anticuerpos reactivos en suero contra antgenos HLA). 2.- Donantes vivos relacionados (padres, hermanos) - Tipificacin HLA Clase I y Clase II. - Tipificacin ABO / Rh. - Cross-match (clulas de donantes c/ suero del receptor buscando anticuerpos anti - HLA).
PRUEBAS DE HISTOCOMPATIBILIDAD PARA TRANSPLANTE RENAL

DIAGRAMA DE FLUJO
B) Seleccionar donante vivo relacionado

- Compatibilidad ABO. - Mejor "match" para antgenos HLA. - Cross-match previo negativo. C) Si no existe un donante vivo relacionado, inscribir al paciente en lista de espera para rin con donante cadavrico.
Cross-match contra panel celular mensual o trimestral.
PRUEBAS DE HISTOCOMPATIBILIDAD
La histocompatibilidad (HLA) sigue siendo muy importante en el trasplante renal, ya que, el resultado del mismo se correlaciona con el numero de incompatibilidades HLA. La incompatibilidad HLA puede provocar una proliferacion y activacion de los linfocitos T CD4+ y CD8+ del receptor, con activacion concomitante de la produccion de aloanticuerpos de linfocitos B.
Esto da lugar a un rechazo celular y humoral del injerto.
Los antigenos HLA muestran un polimorfismo notable.
EFI European Federation for Immunogenetics. Standards for histocompatibility testing. http://www.efiweb.eu/ [access date January 2010]
El sistema ms conocido es el complejo principal de histocompatibilidad (MHC HLA en el hombre), cuya caracterstica fundamental es su alto grado de polimorfismo.
Antgenos del sistema ABO de los grupos sanguneos

Los antgenos de los grupos eritrocitarios humanos ABO (descubiertos por Karl Landsteiner) son antgenos potentes en los trasplantes de rganos y tejidos. Presentes en los endotelios vasculares de diversos rganos. Acs naturales llamados isoaglutininas Anti A y/o Anti B del receptor producen una lesin tisular en el rgano trasplantado, lo que conduce al rechazo. Grupo sanguneo del receptor y el donador debe ser establecido antes de realizar cualquier trasplante
Antgenos del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC)

Aquellos que al ser expresados por las clulas marcan la diferencia entre lo propio y lo extrao. Constituido por un grupo de genes que se encuentra en el brazo corto del cromosoma 6 humano, consta de 4 millones de pares de bases, habindose identificado unos 400 genes en el MHC humano (segmento 6p21.3).
La incompatibilidad es el problema principal.

El riesgo de alorechazo depende del grado de disparidad gentica entre donante y receptor con respecto a las molculas HLA.
La produccin de anticuerpos frente a molculas HLA requiere de un estimulo antignico previo.

El sistema inmune de un individuo entra en contacto con clulas procedentes de otro individuo cuya molculas HLA sean diferentes.
Clase I
HLA A, B y C.
Expresadas en casi todas las clulas nucleadas del organismo (Ausente en eritrocitos y trofoblastos). Constituyen los blancos mayores para las reacciones inmunes contra tejidos y rganos trasplantados. Presentan antgenos peptdicos a linfocitos T CD8+ induciendo apoptosis o liberacin de citotoxinas.
The British Transplantation Society. Towards standards for organ and tissue transplantation in the United Kingdom. http://www.bts.org.uk/Forms/Towards%20standards.pdf [access date January 2010]
Clase I
(Molculas MHC no Clsicas)
Limitado Polimorfismo. Baja expresin en la superficie celular. Son reconocidas por receptores NK (RNK). HLA G : expresado en trofoblasto fetal y clulas epitelio tmico. Induccin de tolerancia materno-fetal. HLA E : Actividad NK y de ciertos LT. HLA F : Se expresa en amgdalas, bazo y timo. Se unen a LIR 1 y LIR 2 e inhiben linfocitos
Clase II:
HLA-DR, HLA-DQ y HLA-DP.
Expresados constitutivamente en clulas B, clulas dendrticas y monocitos.

Unen pptidos derivados de protenas extracelulares. Presentan antgenos a Linfocitos T CD4+.
Clase III
No contiene ningun gen del HLA, pero codifica genes de importancia en la respuesta inmune:
Complemento (C2, C4 y factor B). Factor de Necrosis tumoral.
La funcin normal de los antgenos HLA propios es presentar antgenos extraos al linfocito T e iniciar de este modo la respuesta inmune. Este tipo de reconocimiento forma la base para agrupar a los linfocitos T en dos grandes subpoblaciones:
1. CD8(+) citotxicos que reconocen antgenos en asociacin con HLA clase I. 2. CD4(+) que reconocen antgenos en asociacin con HLA clase II.
TCNICAS DE DETECCIN DE ANTICUERPOS ANTI-HLA
1.- Tcnicas de tipificacin HLA

Microlinfocitotoxicidad o test NHI. Linfocitos viables (T-B) de la persona en estudio son expuestos a un panel de antisueros debidamente caracterizados en donde estn incluidos los distintos tipos de HLA. La identidad entre receptor-donador es de cero disparidades o seis antgenos iguales se habla de una alta compatibilidad. Seis disparidades o seis antgenos diferentes la compatibilidad es nula. A mayor compatibilidad es mejor tambin la sobrevida esperada del trasplante
2.-Crossmatch (XM)
Busca anticuerpos anti-HLA preformados en el suero del receptor que reaccionen con los Antgenos HLA del donante. Alto valor pronstico positivo sobre la prdida del injerto (80%) Suero del receptor + Clulas del donante
XM + : Presencia de anticuerpos en el suero del receptor dirigidos contra las clulas del donante contraindica el trasplante. XM - : Ausencia de anticuerpos en el suero del receptor dirigidos contra las clulas del donante permite el trasplante.
Amico P, Hnger G, Mayr M, Steiger J, Hopfer H, et al. Clinical relevance of pretransplant donor-specific HLA antibodies detected by single-antigen flow-beads. Transplantation 2009;87(11):1681-8
Utilidad
1. Permite conocer la probabilidad de supervivencia del injerto a largo plazo.
Supervivencia a 10 aos de los injertos HLA idnticos: 73%; Supervivencia de injertos no idnticos del 64% (una incompatibilidad) a 53% (seis incompatibilidades)
2. Permite evaluar las probabilidades de que una prueba cruzada resulte negativa, conociendo la especificidad de los anticuerpos del receptor. 4. Facilita la identificacin de aloanticuerpos donante-especficos en el postrasplante utilizando tcnicas de fase slida.
5. Hace posible evitar la repeticin de las mismas incompatibilidades de trasplantes previos o futuros
POSITIVIDAD
Causas: Transfusiones pre-injerto. Embarazos. Rechazo de un primer injerto incompatible (favorece la hiperinmunizacin con ms de 80 % de clulas de panel).
En los casos de una prueba cruzada positiva es importante descartar la presencia de autoanticuerpos no-HLA, los cuales son irrelevantes para trasplantar y se traducen como resultados falsos positivos.
Crossmatch (XM)
Variantes:
Contra panel PRA (Panel Reactive Antibodies) pre y post trasplante.
CDC, ELISA, CF, LUMINEX
Contra donante vivo (DV) pre y post trasplante.

CDC-AHG en LT y LB, CF, LUMINEX
Contra donante cadavrico (DC)

CDC-AHG en LT y LB, CF
CTS Collaborative Transplant Study. http://ctstransplant.org/protected/dataR/html_all/K-21111-0207.html Last accessed October 19, 2008.
3.- Porcentaje de reactividad de anticuerpos (%PRA).

Porcentaje de reactividad del suero del paciente frente a un panel de clulas (antgenos) Se enfrenta el suero del paciente con un panel de clulas provenientes de individuos no relacionados. El monitorear peridicamente la presencia de anticuerpos anti-HLA en los sueros de los pacientes que se encuentran en lista de espera para trasplante Indica el grado de sensibilizacin y la probabilidad que tiene de encontrarse un individuo al azar que pueda ser donante para l. Medida del grado de sensibilizacin
Pacientes bajo riesgo : PRA < 20% Pacientes elevado riesgo : PRA > 30% Pacientes hipersensibizados : PRA > 70%
Mediante la prueba PRA-CDC se obtienen tres tipos de informacin: 1. Si el receptor tiene o no tiene aloanticuerpos. 2. El porcentaje de reactividad, que permite predecir la probabilidad de una prueba cruzada linfocitaria positiva. 3. Identificar, en algunos casos, contra qu antgenos reaccionan estos aloanticuerpos. Valor pronostico, sobre la prdida del injerto en las primeras 48 h del 80%,
Citotoxicidad dependiente de C (CDC)

Reaccin antgeno-anticuerpo con fijacin de complemento y visualizacin de la reaccin con un colorante. Se pueden utilizar clulas (linfocitos T y/o B) aislados de sangre perifrica, ganglio linftico o bazo La reaccin se cuantifica segn el porcentaje de clulas muertas. Prueba cruzada pretrasplante positiva frente a clulas T contraindica el trasplante (Patel y Terasaki 1969).
De Meester J, Doxiadis II, Persijn GG, Claas FH. Renal transplantation of highly sensitised patients via prioritised renal allocation programs. Shorter waiting time and above-average graft survival. Nephron 2002 Sep; 92(1):111-9. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12187093
Diacetato de Fluorescena: colorante vital capaz de atravesar la membrana intacta de las clulas. Bromuro de etidio: se incorpora al ADN; las membranas intactas lo excluyen.

Agregado de Inmunoglobulina Humana Mayor sensibilidad
Incrementa probabilidad de unin de C
*Cantidad de anticuerpos anti-HLA menor al umbral de deteccin por mtodo estndar. *Anticuerpos no fijadores de C.

Reaccin CDC

Score de las reacciones de CDC
% cel muertas 0 10 11 20 21 -50 51 80 80 100 Unreadable Valor asignado 1 2 4 6 8 0 Interpretacin Negativo Borderline negativo Positivo dbil Positivo Positivo fuerte Sin cel, contaminacin
Tcnicas empleadas para medir y detectar estos anticuerpos circulantes tenemos: Ensayo de linfocitotoxicidad dependiente de complemento CDC Mtodos por ELISA. Ensayo basado en tcnicas de equipo fluoroanalizador (Luminex). Citometra de flujo (mtodo de eleccin por sensibilidad y especificidad).
Sensibilidad en deteccin de Anticuerpos anti-HLA

Mayor Sensibilidad
FlowPRA ELISA CDC
Menor Sensibilidad

Limitaciones:
Determinamos presencia de anticuerpos citotxicos
(fijadores de complemento: IgM e IgG)
No permite distinguir entre la presencia de anticuerpos relevantes en el trasplante (anti-HLA) y anticuerpos no relevantes en el trasplante (por ejemplo, autoanticuerpos, generalmente IgM). Para la determinacin del grado de PRA se necesita ensayar cada suero con un panel amplio de clulas (alrededor de 40), por lo que este tipo de determinaciones tiene una demora considerable

Ventajas
No se necesita utilizar equipos de difcil manejo y calibracin para la interpretacin de los resultados. En la prueba cruzada pre-trasplante es la tcnica de referencia.
ELISA
ELISA
Ventajas:
Determinacin rpida y especfica Cubren todas las especificidades No se requieren cel. viables Detecta slo IgG (se usa para screening de ac anti-HLA: IgG) Detecta Ac contra Ag de clase I y II Detecta Ac HLA especficos y Ac HLA que no unen complemento (IgG2,IgG4)
Citometra de Flujo
Reaccin antgeno-anticuerpo sobre la superficie celular visualizada mediante la utilizacin de un segundo anticuerpo marcado con un fluorocromo y el uso de un citmetro de flujo.
Es hasta cien veces ms sensibles que el mtodo de CDC en la deteccin de anticuerpos en linfocitos y adems no requiere fijacin del complemento (Stites y cols., 1997).
Citometra de Flujo
Antgeno
Superficie celular
Citometra de Flujo
Ventajas:
Mayor sensibilidad que CDC.
Permite diferenciar anticuerpos IgG de IgM
Citometra de Flujo
Limitaciones de la tcnica
Se requiere de un aparataje sofisticado y calibracin ptima del citmetro. Determinamos es la presencia de anticuerpos pero no permite distinguir entre la presencia de anticuerpos relevantes y no relevantes en el trasplante.
Elementos que pueden interferir en las determinaciones
Citotoxicidad dependiente de complemento PRA y crossmatch
Autoanticuerpos linfocitotxicos. Ms frecuentes en pacientes con enfermedades autoinmunes (lupus eritematoso sistmico; artritis reumatoide, cirrosis biliar primaria, etc.) Tratamiento reciente con suero antilinfocitario. Aloanticuerpos por fase slida
Tratamientos recientes con inmunoglobulina intravenosa. Inciden sobre el resultado y los controles, debe conocerse para la validacin del resultado. Crossmatch por citometra
Tratamientos con monoclonales humanizados. Por ejemplo anti-CD20 Tratamientos recientes con inmunoglobulina intravenosa.
Amzaga N, Crespo M, Lpez-Cobos M, Milln MA, Vias O, et al. Relevance of MICA antibodies in acute humoral rejection in renal transplant patients. Transpl Immunol 2006;17:39-42.
SIGNIFICACIN CLNICA
Estudio prospectivo. 8 aos de seguimiento. Objetivo:

Analizar influencia de HLA preformados identificados por ELISA en la sobrevida del injerto. Evaluar incidencia de rechazo mediado por anticuerpos (AMR) en pacientes con y sin desensibilizacin pre injerto.
237 trasplantes renales ABO compatibles (221 cadavricos y 16 donantes vivos). CDCXM cel T y B negativos. Screening retrospectivo con ELISA. Episodios de rechazo confirmados por biopsia.
308 pacientes trasplantados renales. CDCXM T y B negativos. Se excluyeron 2 pacientes que estaban con terapia de desensibilizacin. 69 pacientes (22%) desarrollaron CXM preoperatorio positivo. Seguimiento con CXM trimestral. Dos grupos:
I: pacientes que negativizaron XM II: pacientes que no negativizaron XM
Igual esquema de inmunosupresin: Metilprednisolona + Tacrolimus + Micofenolato mofetil. Rechazo confirmado por biopsia segn criterios Banff 97.
Estudio prospectivo, unicntrico. Diseado para determinar si la presencia de anticuerpos contra panel anti-HLA clase I y/o II son predictivos de prdida de injerto. 512 trasplantados, 91 (17.8%) con anticuerpos anti-HLA +
55 (10.7%) anti-HLA class II 20 (3.9%) anti-HLA class I 16 (3.1%) anti-HLA class I and class II
MUCHAS GRACIAS!

Histocompatibilidad Trasplante

Caricato da

Informazioni sul documento

Titolo originale

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Histocompatibilidad Trasplante

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL CMN MANUEL AVILA CAMACHO PUEBLA, PUEBLA

Anticuerpos Anti-HLA en el trasplante renal: deteccin y significado

RIICG MADRID MIER EDUARDO

Los linfocitos T citotxicos (CTL), generalmente CD8 y tambin CD4

Y en ocasiones, los linfocitos B aloantgenos especficos que producen Ig.

PRUEBAS DE HISTOCOMPATIBILIDAD PARA TRANSPLANTE RENAL

PRUEBAS DE HISTOCOMPATIBILIDAD PARA TRANSPLANTE RENAL

B) Seleccionar donante vivo relacionado

Cross-match contra panel celular mensual o trimestral.

Los antigenos HLA muestran un polimorfismo notable.

Antgenos del sistema ABO de los grupos sanguneos

Antgenos del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC)

La incompatibilidad es el problema principal.

La produccin de anticuerpos frente a molculas HLA requiere de un estimulo antignico previo.

Expresados constitutivamente en clulas B, clulas dendrticas y monocitos.

TCNICAS DE DETECCIN DE ANTICUERPOS ANTI-HLA

1.- Tcnicas de tipificacin HLA

Contra donante vivo (DV) pre y post trasplante.

Contra donante cadavrico (DC)

3.- Porcentaje de reactividad de anticuerpos (%PRA).

Citotoxicidad dependiente de C (CDC)

Citotoxicidad dependiente de C (CDC)

Citotoxicidad dependiente de C (CDC)

Incrementa probabilidad de unin de C

Citotoxicidad dependiente de C (CDC)

Citotoxicidad dependiente de C (CDC)

Sensibilidad en deteccin de Anticuerpos anti-HLA

Citotoxicidad dependiente de C (CDC)

Citotoxicidad dependiente de C (CDC)

Mayor sensibilidad que CDC.

Permite diferenciar anticuerpos IgG de IgM

Elementos que pueden interferir en las determinaciones

Citotoxicidad dependiente de complemento PRA y crossmatch

Estudio prospectivo. 8 aos de seguimiento. Objetivo:

Potrebbero piacerti anche