Universidad Veracruzana Facultad de Ciencias Qumicas.

Qu es la Cromatografa?

Es un mtodo de separacin de mezclas en sus constituyentes individuales

Tiene dos finalidades:

Purificacin Anlisis

Por qu se llama Cromatografa

KHROMATOS (Color) GRAPHOS (Escritura)

MIGUEL TSWEET (BOTANICO RUSO-1906). REALIZO LA PRIMERA CROMATOGRAFA EN COLUMNA.

Eter de petrleo Eter de petrleo Eter de petrleo

Mezcla de pigmentos vegetales CaSO4

Inicios de la Cromatografa
Es una tcnica de separacin basada en la diferente velocidad con que se mueven los solutos a travs de un medio estacionario mediante el flujo en un disolvente llamado eluente o fase mvil. F. F. Runge qumico alemn, describi el proceso de

separacin que actualmente se conoce como cromatografa en papel. El ruso Mijail Tswett corresponde el haber establecido las ventajas de la cromatografa y la adopcin parcial de la terminologa, tambin fue quien sent las bases de los principales procedimientos experimentales relativos a sta tcnica.

Inicios
A pesar de que el mtodo
Las nicas sustancias que no

cromatogrfico prometa simplificar la separacin de sustancias de mezclas complejas, no fue sino hasta finales de la dcada de los 30 y principios de los 40 cuando se empez a desarrollar la tcnica teniendo este mtodo diversas aplicaciones.

pueden ser examinadas por cromatografa son: Las insolubles Las que descomponen con el solvente o con la fase estacionaria.

Mtodos:
MTODOS CROMATOGRFICOS SIMPLES PAPEL PLACA COLUMNA INSTRUMENTALES GASES LQUIDOS

Elementos bsicos de la cromatografa

Fase estacionaria

Fija

Slida: Slica gel, almina,etc. Lquida: Solventes polares, no polares, y mixtos.

Fase mvil

Se desplaza

Lquida: Solventes polares, no polares y mixtos. Gaseosa: Gas inerte (Nitrgeno, helio, etc. )

La separacin de los compuestos

Columna Fase Mvil

Inyeccin

Migracin

Elucin

Compuestos

Proceso de las separaciones cromatogrficas

Es la distribucin de los constituyentes de una mezcla entre la fase estacionaria y la fase mvil.

Fase mvil

Fase mvil

Fase estacionaria

Por qu se separan las sustancias?

Algunas sustancias son retenidas ms fuertemente en la fase estacionaria por: Su mayor polaridad, lo que favorece su adsorcin en dicha fase. La menor solubilidad en la fase mvil.

Otras sustancias son menos retenidas, debido a: Su menor polaridad, lo que disminuye su capacidad de adsorcin en la fase estacionaria.

Su mayor solubilidad en la fase mvil

Clasificacin de la cromatografa
Esta tcnica analtica se clasifica de acuerdo a su

mecanismo de separacin en cromatografa de: Reparto Adsorcin Exclusin. Intercambio inico Cromatografa de afinidad

Cromatografa de Reparto
Usa una fase estacionaria lquida que forma una fina pelcula sobre la superficie de un soporte slido. El soluto est en equilibrio entre el lquido estacionario y la fase mvil

La fase mvil puede ser un

lquido o un gas segn sea el caso de la cromatografa; en caso de que la cromatografa sea lquido / lquido la fase mvil ser un liquido, o de un gas en cuyo caso es cromatografa gas/ lquido.

Cromatografa de reparto
El soluto se disuelve en la fase lquida con que est recubierta el soporte slido CROMATOGRAFIA DE REPARTO O PARTICIN Fase estacionaria: Lquido sostenido o adsorbido en un slido inerte. Fase mvil: Lquido (CLL) Gas (CLG)
Nota: Los lquidos de las 2 fases deben ser inmiscibles entre s.

Cromatografa de Adsorcin
Usa una fase estacionaria slida y El soluto se adsorbe sobre las

una fase mvil lquida o gaseosa

CROMATOGRAFA DE ADSORCIN
Fase estacionaria: slido. Fase mvil:

superficie de las partculas slidas, la separacin se explica con la desercin de sustancias contenidas en la fase mvil sobre un slido estacionario
Pueden ser sistemas

Lquido ( CSL) Gas (CSG)

lquido/slido y gas/slido. En cualquier fenmeno de adsorcin influyen tres variables: adsorbente, eluente y solutos .

Cromatografa de adsorcin
El trmino adsorcin en el contexto cromatogrfico se

refiere a interacciones dbiles.

Xm

Cromatografa de adsorcin
Cromatografa lquido/ slido: Cromatografa gas /slido: los

la fase estacionaria suele ser gel de slice , almina, carbn activado y polvo poliamida. Algunas veces al aplicar almina pueden ocurrir cambios qumicos, es decir, quimisorcin durante el paso del soluto por la fase estacionaria.

adsorbentes mas usados son: almina, gel de slice, carbn activado y mallas moleculares. Se realizan en columna. El material que sea utilizado como adsorbente debe presentar una estructura rgida, tamao uniforme y ser qumicamente inerte.

Cromatografa de Exclusin
La separacin est basada en los diferentes volmenes

moleculares de los solutos. El tiempo de elusin es proporcional al peso molecular de los mismos, lo que provoca ser no muy usada con compuestos de alto peso molecular. Principalmente en este proceso se emplean geles no inicos de partculas uniformes y porosos, como fase estacionaria.

Tambin llamada de filtracin por gel o de permeacin por gel.

Separa molculas por su tamao, las molculas grandes

pasan ms rpido que las pequeas, no hay una interaccin entre la fase estacionaria y el soluto, sino que la fase mvil pasa a travs de un gel poroso. Los poros pequeos dejan pasar a las molculas grandes y las molculas pequeas tardan ms tiempo en pasar a travs de la columna.

Cromatografa de exclusin molecular

Se excluyen las molculas grandes

Cromatografa de intercambio inico

En este tipo de Los iones en disolucin de

cromatografa existen aniones como: -SO3- ,o cationes como: -N(CH3)3+ . Iones covalentemente unidos a la fase estacionaria slida, que ordinariamente es una resina.

carga opuesta son atrados a la fase estacionaria por fuerzas electrostticas. La fase mvil es un lquido.

Cromatografa de intercambio inico

Los aniones mviles permanecen cerca de los cationes que estn covalentemente unidos a la fase estacionaria

Resina catinica, que solo fija aniones.

Cromatografa de Afinidad
Es la ms selectiva, emplea interacciones de molculas de

un soluto en particular y una segunda molcula que est unida covalentemente (inmovilizada) a la fase estacionaria. La molcula inmovilizada podra ser un anticuerpo unido a una protena determinada. Solo la protena que reacciona con el anticuerpo se fija en la columna.

Cromatografa de Afinidad
Todas las dems molculas se eliminan

Una clase especfica de molculas, se une a la fase estacionaria

Disolventes comnmente utilizados

Pentano Ciclohexano Dioxano Benceno ter etlico Cloroformo Cloruro de metileno Acetona Etanol Metanol Agua

POLARIDAD

Aspectos fsicos de la Cromatografa

La velocidad lineal de flujo, nos dice cuntos cm recorre

el disolvente dentro de la columna en un minuto. Cromatograma, es un grfico que representa la respuesta del detector en funcin del tiempo de elucin. Tiempo de retencin tr, de un componente es el tiempo necesario despus de la inyeccin de una mezcla en la columna hasta que ese componente llegue al detector.

Aspectos fsicos.
Volumen de retencin Vr, Coeficiente de reparto, o

el volumen de la fase mvil necesario para eluir un soluto determinado de la columna. Eluyente, fluido que entra por la columna. Eluato, fluido que sale por el extremo de la columna.(efluyente)

particin, si K es la constante de la reaccin:

S en la fase1 S en la fase 2

S 2 K S 1

Aspectos fsicos.
Coeficiente de distribucin En general, los cocientes

D, se define:
D concentracin total de la fase 2 concentracin total de la fase 1

de particin y distribucin se asocian a la fuerza de retencin de los diferentes componentes del soluto por la fase estacionaria

Aspectos fsicos.
Coeficiente de difusin, mide la velocidad a que se mueve

al azar una sustancia desde una regin de mayor concentracin a otra de menor concentracin. Altura de plato, es la constante de propocionalidad entre la varianza(s de la banda y la distancia que ha recorrido (x).Cuanto ms pequea es la altura de un plato, ms estrecha es la banda.

Eficacia de la separacin
Diferencia de tiempos de elucin de los respectivos picos,

cuanto ms distantes sean mejor. Anchura de los picos, cuanto ms anchos sean los picos, peor la separacin.

Resolucin de picos gausianos de igual rea y amplitud.

Resolucin = 0.50 Resolucin = 0.75 Seal Seal

tiempo Resolucin = 1.00

tiempo Resolucin = 1.50

Seal

tiempo

Seal

tiempo

Cromatografa lquida.
Y Cromatografa de lquidos de alta eficacia
Fase mvil, lquido a alta presin Fase estacionaria slido en columnas de un dimetro de 3

a 10 micras. Analito: lquido. Utiliza instrumentacin especializada. http://kerouac.pharm.uky.edu/ASRG/HPLC/HPLCMYTRY.H TML

Cromatografa de lquidos en columna Sentido de flujo

1

A+B

A+B

A
2

 Sentido de flujo
3

Cromatografa de lquidos en columna

A B

Cromatografa de lquidos en columna

Sentido de flujo
Tiempo

Registrador

Diafragma de inyeccin de muestra

Columna

Detector

Cromatografa gaseosa.
La cromatografa tambin se puede clasificar en cuanto al

mtodo de anlisis en cromatografa de gases: Fase mvil: gas portador (He, N2 o H2) Fase estacionaria: lquido no voltil, o un slido. Analito: gas o lquido voltil Ver:
http://www.uib.es/depart/dqu/dquo/pau/Cromatograf%92a/chrom10/chrom/GC/con cept/main.htm

Cromatografa de gases
La cromatografa de gases es un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye la fase estacionaria, de gran rea superficial, y la otra es un GAS (fase mvil) que pasa a travs o a lo largo de la fase estacionaria

Componentes de un Cromatgrafo de gases

Un suministro y una entrada de gas de acarreo Puerto de inyeccin Columna normalmente localizada en el interior de una cmara termostatizada (horno) Detector Sistema computarizado para analizar, registrar e imprimir el cromatograma

Cromatgrafo de gases

Inyeccin de la muestra
Las muestras lquidas se Los productos de

inyectan mediante una jeringa a travs de un disco de goma, en un inyector caliente. El gas portador arrastra la muestra vaporizada desde el inyector a la columna

descomposicin y los componentes no voltiles de la muestra se acumulan dentro de un tubo de vidrio. Se requieren distintos tipos de inyeccin para diferentes tipos de muestras.

Inyeccin de la muestra
Inyeccin de muestra

Fase estacionaria

Flujo de la corriente
Muy soluble / tiende a adsorberse a la fase estacionaria Poco soluble / tiende a ser eluida por la fase mvil

Inyeccin con divisin

Se utiliza cuando los analitos constituyen >0.1% de la

muestra en la columna cromatogrfica. Se introduce entre 0.2 y 2% de la muestra en la columna. La temperatura en el inyector se mantiene alta para facilitar una evaporacin rpida. El flujo del gas portador arrastra la muestra a la cmara de mezcla, donde se realiza una completa evaporacin y homogenizacin.

Puertos de inyeccin
Inyector directo vaporizante (FVI) El puerto de inyeccin vaporizante transforma de manera instantnea la muestra lquida inyectada en vapor antes de que esta sea introducida en la columna. Esto se consigue seleccionando una temperatura del inyector superior a la del punto de ebullicin del compuesto menos voltil de la muestra, a menudo alrededor de los 150oC.

Puertos de inyeccin
Inyector de split / splitless

Inyeccin con divisin Se utiliza cuando los analitos que

Jeringa Septo 102 ml/min 1 ml/min Purga del septo

Salida de la divisin Columna 1 ml/min

100 ml/min

interesan constituyen el 1 % de la muestra en la columna cromatogrfica. La temperatura del inyector se mantiene alta para facilitar una evaporacin rpida. El flujo del gas portador arrastra la muestra a la cmara de mezcla, donde se realiza una completa evaporacin y homogenizacin. Al pasar por el capilar se produce la divisin y slo pasa a la columna el 1 % de la mezcla, el resto se ventea.

Inyeccin sin divisin

Es apropiada para analizar trazas del analito que

constituyen menos del 0.01% de una muestra de alto punto de ebullicin, en disolventes de bajo punto de ebullicin. Se inyecta dentro de la gua, en un volumen de 2 microlitros de disolucin diluido en disolventes de bajo punto de ebullicin. La temperatura del inyector en la inyeccin debe ser menor 220C.

Inyeccin en columna.
Se usa con muestras que se descomponen por encima de

su punto de ebullicin. La disolucin se inyecta directamente en la columna, sin pasar por un inyector caliente. La temperatura inicial de la columna es suficientemente baja para que condensen los solutos en una banda estrecha. Para una mejor inyeccin en columna se usan jeringas de 0.25 a 0.32 mm de dimetro.

Gas portador
El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra Crear una matriz adecuada para el detector.
Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:
Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como

con la fase estacionaria) Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa Fcilmente disponible y puro Econmico Adecuado al detector a utilizar

COLUMNAS
MATERIAL DEL RECIPIENTE: Acero Inoxidable, vidrio, aluminio,

cobre, tefln. SOPORTE SOLIDO: Esferas de polmeros, esferas de vidrio, tierra de diatomeas calcinadas, (P, W, WAN, SILANIZADAS) FASE ESTACIONARIA: CGL:

Lquidos polares (Carbowax) Lquidos no polares (OV-1) Lquidos semipolares (OV-17)

CGS: Slidos (Slica Gel, Almina)

TIPOS DE COLUMNAS

Detectores:
Un detector nos indica qu sale de la columna.
Conductividad trmica Flama ionizada
Los detectores ms comunes y utilizados son:

Captura de electrones
Detector de N y P Fotomtrico de flama

Conductividad electroltica Fotoionizacin Infrarrojo Selectivo de masa Etc.

Detector de conductividad trmica.

Responde a todos los analitos, pero la conductividad

trmica no es suficientemente sensible para detectar cantidades pequeas cuando se trabaja con columnas tubulares abiertas con dimetro inferior a 0.53 mm. La conductividad trmica mide la capacidad de una sustancia para trasmitir calor de una regin caliente a una fra. Se utiliza H2 o He como gas portador para dar el menor lmite de deteccin. La sensibilidad aumenta cuando; aumenta la corriente en el filamento.

Detector de ionizacin de llama.

Lo que sale de la columna se quema en una mezcla de H2

y aire. Los cationes que se producen en la llama conducen la corriente elctrica desde la punta del quemador que acta de nodo y un colector catdico. Esta corriente elctrica es la seal que da el detector. Es sensible a otros gases son H2, He2, N2, O2, NO, CO, o sea que no es universal.

Detector de flama ionizada (FID)

Los componentes de la muestra que salen de la columna se

queman en una mezcla de hidrgeno y aire.

Los cationes que se producen en la llama conducen la

corriente elctrica desde la punta del quemador que acta de nodo y un colector catdico. Esta corriente elctrica es la seal que capta el detector.

Detector de captura electrnica.

Es sensible en particular a las molculas que contienen

halgenos, carbonilos conjugados, nitrilos, nitrocompuestos y compuestos organometlicos. Es insensible a los hidrocarburos, alcoholes y cetonas. El gas portador tiene que ser con un 5% de metano.
Contiene un istopo de Ni63 radiactivo que lanza e- y

mantiene un campo estable, al llegar la muestra es golpeada por los e- y libera ms e-, la diferencia de potencial elctrico se capta en el detector. Es insensible a los hidrocarburos, alcoholes y cetonas

Gracias y estudien!!!
El examen del 2 parcial es el prximo viernes!