DNA: estructura y replicacin

La estructura del ADN

Propiedades clave del ADN 1. Debe permitir la replicacin fiel 2. Debe de tener un contenido informativo

3. El material gentico de ser capaz de cambiar en raras ocaciones

Los bloques estructurales del ADN

Fosfato Un azcar desoxirribosa
Y cuatro bases nitrogenadas

Los bloques estructurales del ADN

Reglas de Chargaff de la composicin de las bases

1. La cantidad total de nucletidos de pirimidina ( T + C ) siempre es igual a la cantidad total de nucleotidos de purina ( A + G) 2. La cantidad de T siempre es igual a la cantidad de A, y la cantidad de C siempre es la cantidad de G.

La doble helice

La doble hlice

La doble hlice

El ADN es una doble hlice compuesta por dos cadenas de nucleotidos que se mantiene unidas por complementariedad de los apareamientos de A con T, y de G con C.

Replicacin semiconservativa
Modelo semiconservativo propuesto por Watson y Crick

Replicacin semiconservativa
El experimento de Meselson-Stahl
Su idea era permitir que las molculas parentales que tienen nucletidos de una densidad determinada se replique en un medio que contena nucletidos de densidad diferente.

Replicacin semiconservativa
El ADN se rplica desenrollando las dos cadenas de la doble hlice y construyendo una nueva cadena complementaria de cada una de las dos cadenas separadas de la doble helice original.

Horquilla de replicacin
El modelo de Watson y Crick es que durante el proceso de replicacin del ADN, se forma una cremallera u horquilla en la molecula.

Horquilla de replicacin
Esta horquilla se encuentra en el lugar en donde la doble hlice se desenrolla para exponer a las dos cadenas simples que servirn de molde para el proceso de replicacin.

ADN polimerasas
1959 Arthur Kornberg aisl la ADN polimerasa de E. coli y desmosto su actividad enzimtica in vitro.

ADN polimerasa
Esta enzima aade desoxirribonucleotidos al 3 de una cadena de nucletidos, y emplea como molde de una cadena sencilla de ADN que a quedado expuesta tras desenrollarse localmente la doble hlice.

ADN polimerasa
Se conocen 5 ADN polimerasa en E. coli; la primera enzima que purifico Kornberg se denomina polimerasa 1 o pol 1. Estas enzimas tienen 3 actividades, que parecen estar localizadas en partes diferentes de la molcula:

ADN polimerasa
1. Una actividad polimerasa, que cataliza el crecimiento de la cadena 5 a 3. 2. Una actividad exonuclesa 3 a 5 que elimina las bases mal apareadas.

3. Una activida exonucleasa 5 a 3, que degrada el ADN de doble cadena.

ADN polimerasa
Aunque la pol 1 tiene un papel en la replicacin del ADN no es la principal responsable de la sntesis del ADN, debido a que es demasiado lenta (20 nucletidos/segundo) es demasiado abundante (400 molculas/clula). Entonces se concluyo que otra polimerasa, llamada ahora pol 3, cataliza la sntesis de ADN en la horquilla de replicacin.

Visin general de la replicacin del ADN

A medida que pol 3 se mueve, la doble hlice se desenrolla continuamente por delante de la enzima para exponer fragmentos adicionales de cadena simple que actuaran como molde.

Visin general de la replicacin del ADN

Visin general de la replicacin del ADN

La pol 3 acta en la horquilla de replicacin, la zona donde la doble hlice se encuentra desenrollada. Sin embargo, debido a que la ADN polimerasa siempre aade nucletidos en el extremo 3 en crecimiento, solo una de las dos cadenas anti paralelas puede servir como molde para la replicacin en la direccin de la horquilla de replicacin.

Visin general de la replicacin del ADN

Visin general de la replicacin del ADN

En esta cadena, la sntesis puede tener lugar de manera continua en direccin de la horquilla de replicacin, de modo que la nueva cadena sintetizada sobre este molde se denomina cadena adelantada.

Visin general de la replicacin del ADN

La sntesis de el otro molde tambin tiene lugar en el extremo creciente 3, pero se realiza en direccin contraria, por que para esta cadena la direccin de sntesis 5 a 3 se aleja de la horquilla de replicacin.

Visin general de la replicacin del ADN

La naturaleza de la maquinaria de replicacin requiere que la sntesis de ambas cadenas tenga lugar en la regin de la horquilla de replicacin.

Visin general de la replicacin del ADN

Por lo tanto, la sntesis que se mueve alejndose de la horquilla en crecimiento no puede ir demasiado lejos; se debe realizar en fragmentos cortos.

Visin general de la replicacin del ADN

La polimerasa sintetiza un fragmento, luego retrocede Asia el extremo 5 del segmento, donde la horquilla en crecimiento expone un nuevo molde, y comienza el proceso de nuevo. Estos fragmentos cortos de 1000-2000 nucletidos de ADN sintetizados de nuevo se denominan fragmentos de Okazaki.

Visin general de la replicacin del ADN

Fragmentos de Okazaki.

Visin general de la replicacin del ADN

Un problema que surge en la replicacin del DNA se debe a que la ADN polimerasa puede extender la cadena, pero no iniciarla. Por lo tanto, la sntesis de la cadena adelantada y cada fragmento de Okazaki deben iniciarse con un cebador.

Visin general de la replicacin del ADN

El cebador es una cadena pequea de nucletidos, que se unen a la cadena molde para formar un fragmento de acido nucleico de doble cadena. Los cebadores se sintetizan por un conjunto de protenas llamado primosoma, cuyo componente central es la enzima llamada primasa. Que es un tipo de ARN polimerasa.

Visin general de la replicacin del ADN

En la cadena adelantada solo se necesita un cebador inicial. Sin embargo, en la cadena complementaria cada fragmento de Okazaki necesita su propio cebador.

Visin general de la replicacin del ADN

Una ADN polimerasa diferente, la pol 1, elimina los cebadores de RNA y rellena los huecos resultantes con ADN.

Visin general de la replicacin del ADN

Otra enzima, la ADN ligasa, se encarga de unir los extremos 3 del ADN de relleno al extremo 5 del fragmento de Okazaki que se encuentra aguas abajo. La cadena formada de esta manera se denomina cadena retrasada

Visin general de la replicacin del ADN

En la replicacin, se produce menos de un error por cada 1010 nucletidos insertados. La replicacin del ADN tiene lugar en la horquilla de replicacin, donde la doble cadena se desenrolla y las dos cadenas se separa.

Visin general de la replicacin del ADN

La replicacin progresa continuamente en direccin a la horquilla en la cadena adelantada. El ADN se sintetiza en pequeos fragmentos en la direccin contraria a la horquilla en la cadena retrasada. La ADN polimerasa requiere un cebador, una cadena corta de nucletidos que se encuentran en el lugar para poder iniciar la sntesis.

El replisoma: una maquina de replicacin extraordinaria

El tiempo para replicarse el cromosoma de E. coli puede ser tan breve como 40 minutos. Su genoma , que tiene cerca de 5 millones de pares de bases, debe de copiarse a una tasa de 2000 nucletidos por segundo. Como se puede mantener tanto la velocidad como la exactitud?

El replisoma: una maquina de replicacin extraordinaria

La respuesta es que el ADN polimerasa forma parte de un gran complejo nucleoproteico que coordina la actividad de replicacion.
Este complejo se denomina replisoma, y es un ejemplo de maquinaria celular.

El replisoma: una maquina de replicacin extraordinaria

Desenrollando la doble hlice

Cmo podra desenrollarse tan rpido el ADN?

Desenrollando la doble hlice

Ahora se conoce que el replisoma tiene dos clases de protenas que abren la doble hlice y previenen el superdesenrrollamiento.

Desenrollando la doble hlice

Las helicasas son enzimas que rompen los puentes de hidrogeno que mantienen unidas a las dos cadenas de la doble helice.

Desenrollando la doble hlice

Las protenas de unin de cadena sencilla estabilizan el ADN al unirse ala cadena sencilla y prevenir la formacin de dplex.

Desenrollando la doble hlice

Las topoisomerasas relajan el ADN sper enrollado produciendo ruturas en la cadena sencilla o doble de ADN, lo que permite rotar al ADN hacia una molcula mas relajada. La accin de las topoisomerasas finaliza cuando rene las cadenas de las molcula, ahora relajada, de ADN.

Desenrollando la doble hlice

Montaje del replisoma: la iniciacin de la replicacin

El montaje del replisoma es un proceso ordenado que comienza en sitios precisos del cromosoma, llamados origenes.
En la E. coli se inicia en el sitio fijo (llamado oriC) y desde hay procede hacia ambas direcciones.

Montaje del replisoma: la iniciacin de la replicacin

El primer paso en el montaje del replisoma es una unin de una protena denominada DnaA, a la secuencia especifica de 13 pares de bases, que se repiten cinco veces en el oriC, llamada caja de DnaA. Como respuesta de a la unin de la DnaA, el origen se desenrolla apartar de una regin rica en nucleotidos A y T. Recuerde que las pares de bases AT se mantienen unidos por dos puentes de H, mientras que los G-T se mantienen unidos por tres.

Montaje del replisoma: la iniciacin de la replicacin

Montaje del replisoma: la iniciacin de la replicacin

Mientras las protenas de DnaA cubren el origen, las dos helicasas (las proteinas de DnaA) se unen o se deslizan en direccin 5 a 3 para iniciar la apertura de la doble hlice en la horquilla de replicacin.

Montaje del replisoma: la iniciacin de la replicacin

La primasa y la holoenzima DNA pol 3 se incorporan a la helicasa a travs de una interaccin proteina-proteina, y comienza asi la sntesis de ADN

Telomeros y telomerasa: fin de la replicacin

La sntesis de ADN continua en la cadena adelantada hasta la misma punta del molde. Sin embargo, la sntesis de la cadena retrasada requiere de cebadores; as que, cuando el ultimo cebador se elimina, queda una punta de cadena sencilla en una de las molculas.

Telomeros y telomerasa: fin de la replicacin

Si el cromosoma hijo con esta molcula de ADN fue replicada de nuevo, la secuencia perdida de la punta de la cadena aria que el cromosoma se acortase cada cada vez mas, hasta que perdiera alguna informacin codificante esencial.

Telomeros y telomerasa: fin de la replicacin

Las clula han desarrollado un sistema especializado para prevenir esta perdida. Un componente del sistema se encarga de aadir en las puntas de los cromosomas mltiples copies de una secuencia simple no codificadora.

Telomeros y telomerasa: fin de la replicacin

Telomeros y telomerasa: fin de la replicacin

La telomerasa se alinea al extremo 3 saliente del ADN, que se extiende por accin de los dos componentes de la telomerasa. Despus de aadir unos pocos nucletidos al extremo 3 puede extenderse por su actividad polimerasa. Movimientos repetidos da le telomerasa continuan extendiendo el extremo 3.

Telomeros y telomerasa: fin de la replicacin